Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Метаболизм нитратов ротовой жидкости человека

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Комарова, Валерия Ивановна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Состав и структура нитратредуцирующего комплекса ферментов.

1.1 .Локализация ферментов в ротовой жидкости

1.2. Особенности NADH нитратредуктазы (КФ 1.6.6.1.)

1.2.1. Первичная структура апофермента.

1.2.2. Простетическая группа и кофакторы

1.2.3. Организация транспорта электронов и ионов при денитрификации.

1.3. Особенности нитритредуктазы (КФ 1.6.6.4).

Глава 2. Энзиматические характеристики нитратредуцирующего комплекса ферментов.^

2.1. Биохимический состав ротовой жидкости.

2.1.1. Ферментный состав слюны.2J

2.1.2. Нитратредуцирующие ферменты ротовой жидкости человека.

2.2. Нитратредуктаза (КФ. 1.6.6.1).

2.3. Нитритредуктаза (КФ 1.6.6.4).

Глава 3. Материалы и методы.

3.1. Забор материала и особенности обследуемого контингента.

3.2. Определение содержания нитритов в ротовой жидкости.

3.3. Определение содержания аммиака в слюне.

3.4. Определение активности ферментов нитратредуктазного комплекса.

3.4.1. Определение активности нитратредуктазного комплекса (HP) ротовой жидкости.

3.4.2. Определение активности нитритредуктазного комплекса (НИР) ротовой жидкости.

3.5. Применение ингибиторов.

3.6. Определение хлорогеновой кислоты.

3.7. Статистические методы обработки данных.

Глава 4. Результаты исследований и их обсуждение.

4.1. Концентрация нитрита в ротовой жидкости.

4.2. Концентрация аммиака в ротовой жидкости.

4.3. Биохимические особенности нитратредуктазы ^ ротовой жидкости человека.

4.4. Восстановление нитритов ротовой жидкостью человека.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Метаболизм нитратов ротовой жидкости человека"

Процессы биотрансформации нитратного азота в окружающей среде изучены достаточно тщательно. Биологическая роль их в глобальном круговороте азота в природе общеизвестна. При этом в современном естествознании исследования этой интересной научной проблемы выполнены исключительно на таких объектах как почва и растения. Было бы интересно найти место человека и животных в глобальном процессе утилизации нитратов.

Общепринято, что организм животного не способен восстанавливать нитраты, поскольку ткани животных не содержат нитрат- и нитрит восстанавливающих ферментов. Это справедливо лишь в отношении организма животного в чистом виде. Реально же организм человека и любого животного следует рассматривать как комплексную систему «макроорганизм + микроорганизмы, населяющие организм хозяина». В ходе микробной трансформации исходный субстрат превращается через каскад биохимических реакций в продукт, обладающий той или иной биологической или фармакологической активностью.

Нитраты, являясь типичными ксенобиотиками, вовлекаются микрофлорой человека в метаболические процессы, в ходе которых восстанавливаются сначала до аниона нитрита, а затем до катиона аммония, через образование ряда промежуточных продуктов:

2с 2е 2ё 2с

NO:^NOS HNO^NH ОН^ ДЯ? ч^' у----------нитратредуктаза нитритредуктаза

Масса поступающих с пищей и водой нитратов может быть достаточно значительна (Дерягина и др., 1993). Поэтому продукты метаболизма нитратов в организме могут заметно влиять на физиологию организма в целом.

Выделяют первичную токсичность собственно нитрат-иона; вторичную, связанную с образованием нитрит-иона, и третичную, обусловленную образованием из нитритов и аминов нитрозаминов. Кроме того, одним из конечных продуктов метаболизма нитратов в организме является NO, роль которого в качестве «клеточного гормона» активно изучается.

Трансформация нитратов в пищеварительном тракте начинается в ротовой полости. Эти превращения изучены мало. Хотя именно ферментативной активностью ротовой жидкости объясняется присутствие ксенобиотиков в ротовой полости человека.

Протекающие в полости рта воспалительные процессы оказывают влияние на определяемый уровень нитритов и нитратредуктазную активность.

Цель исследования.

Целью настоящей работы является исследование метаболизма экзогенных нитратов и нитритов в ротовой полости, а также изучение биохимических и кинетических свойств ферментов, участвующих в метаболизме нитратного азота.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

1. Подобрать оптимальную методику определения нитрита в ротовой жидкости и изучить биохимические характеристики реакций восстановления нитратов и нитритов в смешанной слюне;

2. Оценить масштабы и пути метаболизма нитратов в ротовой полости, уровень нитритного фона и активность нитратредуцирующего комплекса в смешанной слюне;

3. Рассмотреть влияние различных факторов на скорость метаболизма нитратов (температура, рН, ионная сила, концентрация субстрата, ингибиторы);

4. Исследовать влияние различных факторов и антибактериальных препаратов, в частности антибиотиков на скорости процессов метаболизма азота;

5. Выявить область применения величин нитратредуктазной активности ротовой жидкости для характеристики статуса полости рта.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Комарова, Валерия Ивановна

выводы

1. Как следствие метаболических превращений нитратов, осуществляемых микробами ротовой жидкости, в последней обнаруживается уровень нитритов, который колеблется от полного отсутствия до 0,4 ммоль/л, и аммиака (от 0 до 4,5 ммоль/л). Восстановление нитратов ротовой жидкостью идет со скоростью 2,13 нмоль/мин. Скорость восстановления нитритов составляет 0,07 нмоль/мин.

2. Ферментативный комплекс восстановления нитратов и нитритов имеет рН-оптимум в нейтральной области (рН 6,9 - 7,1) и температурный оптимум 40-45°С.

3. Нитратредуктазный комплекс ротовой жидкости обладает следующим сродством к субстратам: кажущиеся константы Михаэлиса для исследуемых ферментов ротовой жидкости составили

• для нитратредуктазы Кт= 3,93±0,43 ммоль/л;

• для нитритредуктазы Кт= 0,92±0,05 ммоль/л.

4. Антибиотики, использующиеся в медицинской практике, тормозят восстановление нитратов в ротовой жидкости в концентрациях от 2,5-10"4 г/л (ци-пролет) до 60 г/л (линкомицин). Антиоксиданты растительного происхождения (хлорогеновая кислота) и продукты, их содержащие, вызывают торможение восстановления нитратов в ротовой жидкости в концентрациях, превышающих 2,5-10"4 г/л.

5. Активность нитратредуцирующего комплекса достоверно изменяется (р<0,05) при кариозном поражении полости рта. Отмечена отрицательная корреляция (г = - 0,6) между активностью нитратредуктазы и индексом интенсивности кариозного процесса (КПУ). Обоснована возможность разработки прогностического теста развития кариеса, основанного на определении активности нитратредуктазы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В заключение следует остановиться на физиологической роли исследуемых ферментных систем. Их роль в окружающей среде (почве, растениях, почвенных микроорганизмах) общеизвестна: азот неорганических соединений используется для синтеза органических молекул. Кроме того, для анаэробных микроорганизмов имеет место нитратное дыхание (N03" служит конечным акцептором электронов). Организмы животных характеризуются неспособностью к реакциям восстановления нитратного азота. Однако, это справедливо лишь при рассмотрении животного без населяющей его микрофлоры.

Данная работа показывает, что анаэробные микроорганизмы, населяющие ротовую полость, способны утилизировать поступающие с пищей нитраты.

Для человека это может иметь следующее значение: а) ограничение роста патогенной флоры ротовой полости; б) частичное усвоение минерального азота (нитратов); в) противодействие смещению рН в кислую область, вероятно, за счёт молочнокислого брожения; г) образующиеся в процессе восстановления нитратов интермедиаты (нитриты, нитроксилы, оксид азота), всасываясь через слизистую, оказывают влияние на макроорганизм.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Комарова, Валерия Ивановна, Волгоград

1. Бандман A.JL, Волкова Н.В. и др. Вредные химические вещества. Неорганические соединения V-V1.I групп: Справ, изд. — Д.: Химия, 1989. — 592 с.

2. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений.— Киев: Наукова думка, 1976.— 260 с.

3. Биохимия полости рта./Ред. В.И. Закревский. Волгоград: Перемена. — 1996.60 с.

4. Боровский Е.В. Леонтьев В.К. Биология полости рта. — М.: Медицина. — 1991. —320 с.

5. Вавилова Т.П., Петрович Ю.А. Определение активности нитратредуктазы в смешанной слюне//Вопросы мед. химии.— 1991. — №2. — С.69-71.

6. Вавилова Т.П., Петрович Ю.А., Барер Г.М., Толмачева И.И. Нитратредук-тазная активность жидкостей полости рта при пародонтите// Стоматология.1989. —№1. —С.24-25.

7. Варфоломеев С.Д., Гуревич Г.К. Биокинетика: Практический Курс. — М.: ФАИР-ПРЕСС, 1999. — 720 с.

8. Герасимович А.И., Матвеева Я.И. Математическая статистика. — Минск, Вышейшая школа, 1978. — 193 с.

9. Григорьев И.В., Чиркин А.А. Роль биохимического исследования слюны в диагностике заболеваний/ЛСлиническая лабораторная диагностика. — 1998.6. —С. 18-20.

10. Ю.Громов Б.В., Павленко Г.В. Экология бактерий. — Л.: Издательство Ленинградского университета, 1989. — 248 с.

11. П.Дерягина В.П. Жукова Г.Ф. Хотимченко С.А. Содержание в продуктах питания нитратов и нитритов и оценка их поступления с суточным рацио-ном//Вопросы питания. — 1993. — №4. — С.47-52.

12. Досон Р., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. Справочник биохимика. — М.: Мир, 1991. —544 с.13Дубинин Н.П., Пашин Ю.В. Мутагенез и окружающая среда. — М.: Наука, 1978. — 128 с.

13. Еремин Ю.Н., Точарина М.Г. Влияние нитритов на состояние щитовидной железы при йодной недостаточности и качественно различном пита-нии//Вопросы питания. — 1981. — №5. — С.60-62.

14. Зайчик В.Е., Багиров Ш.Т. Содержание химических элементов в смешанной нестимулированной слюне здорового человека//Стоматология.— 1991.— №1.— С.14-17.

15. Зайчик В.Е., Багиров Ш.Т. Содержание химических элементов при заболеваниях пародонта//Стоматология.— 1994.— №1.— С.8-11.

16. Ивницкий Д.М., Ситдыков Р.А., Плескановская С.А. Электрохимический метод определения пероксидазы в слюне//Лабораторное дело.— 1991.— №3.— С.31-34.

17. Измайлов С.Ф. Азотный обмен в растениях. — М.: Наука, 1986.— 320 с.

18. Ключник М.О., Батурина М.В., Галаев Ю.В. Амилаза слюны у студен-тов//Актуальные вопросы стоматологии.—Сб. научных трудов ВМА, том XXXXXV, вып. 1. — Волгоград, 1999. — С.37.

19. Комарова В.И. Определение нитратредуктазной активности смешанной слюны//Научный вестник. Зоотехния. Вып.1. — Волгоград: ВГСХА, 1999.— С. 123-124.

20. Комарова В.И. Храмов В.А. Определение активности нитритредуктазы в смешанной слюне человека//Клиническая лабораторная диагностика — 1999. —№11. — С.36.

21. Корн Г., Корн Т. Справочник по математике (для научных работников и инженеров). — М.: Наука, 1973. — 823 с.

22. Корниш-Боуден Э. Основы ферментативной кинетики. — М.: Мир, 1979. — 280с.

23. Кретович B.JI. Биохимия растений — М.: Высшая школа, 1980. — 445 с.

24. Крупянко В.И. Векторный метод представления ферментативных реакций. М.: Наука, 1990. — 144 с.

25. Кузин Ф.А. Кандидатская диссертация. — М.: Ось-89, 1997. — 208 с.

26. Курносов М.Н. Определение нитритов в слюне//Лабораторное дело. — 1991.—№3.—С.34-37.

27. Лукиных Л.М. Зеленова Е.Г. Присада Т.В. Салина Е.В. Диагностическая ценность показателя естественной колонизации буккального эпителия при стоматологических исследованиях// Клиническая лабораторная диагностика.— 1999.—№11. —С.37.

28. Остроумов С.А. Телитченко М.М. Введение в проблемы биохимической экологии: Биотехнология, сельское хозяйство, охрана среды. — М.: Наука, 1990. —288 с.

29. Плисс Г.Б. Фролов А .Г. Натрия нитрат как возможный промотор канцерогенеза мочевого пузыря у крыс//Вопросы онкологии. — 1991. — №2. — С.203-206.

30. Профилактика стоматологических заболеваний. Под. ред. Кузьминой Э.М.— М., 1997. —С. 42-43.

31. Романов А.Е., Царев В.Н., Руднева Е.В. Антибактериальная терапия в комплексном лечении пародонтита//Стоматология. — 1996. — №1. — С.23.

32. Роома М. Я. Изучение содержания нитритов в слюне.//Гигиена и санитария.— 1991.—№6. —С.76-78.

33. Роома МЛ. Хейнла Ю.Я. Пярн Х.М. Канн Э.М. Выделение нитратов со слюной и мочой и нитритов со слюной у больных хроническим гастритом и язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки//Вопросы онкологии. — 1991. — №4. — С.465-470.

34. Рубенчик Б.Л. Роль пищевых факторов в эндогенном синтезе канцерогенных 1\-нитрозосоединений//Вопросы питания. — 1977. — №3. — С.68-75.

35. Семенов Н.В. Биохимические компоненты и константы жидких сред и тканей человека. —М.: Медицина, 1971. — 140 с.

36. Славин М.Б. Методы системного анализа в медицинских исследованиях. — М.: Медицина, 1989. — 304 с.

37. Сорокин Д.Ю. Нитрификация в тканях млекопитающих//Успехи совр. биологии. — 1991. —вып. 2. — С.201-206.

38. Тарас М. Дж. Азот//Колориметрические (фотометрические) методы определения неметаллов. —М.: Иностранная литература.— 1963. — С. 126-135.

39. Уэбб Л. Ингибиторы ферментов метаболизма. Общие положения и принципы торможения. -— М.: Мир, 1966. — 725 с.

40. Храмов В.А. Нитратредуктазная активность слюны человека//Вопросы питания,— 1992,—№5. —С. 15.

41. Храмов В.А. Определение азота в биологических объектах с помощью реакции Бертло//Лабораторное дело. — 1965. — №7. — С. 396-399.

42. Храмов В.А. О кинетике уреазной реакции в условиях интактных бактериальных клеток.// Украинский биохимический журнал. — 1967. — №1. — С.88-91.

43. Храмов В.А. Простой метод определения активности орнитиндекарбоксила-зы в смешанной слюне человека//Клиническая лабораторная диагностика.— 1997,—№4.—С.14-15.

44. Храмов В.А. Утилизация аминокислот и мочевины ротовой жидкостью че-ловека//Стоматология. — 1997. — №6. — С. 13-15.

45. Храмов В.А., Комарова В.И. Способ определения хлорогеновой кислоты в растительных объектах//Гигиена и санитария.— 1999.— № 9.—С. 71.

46. Храмов В.А., Комарова В.И., Темкин Э.С. Антибиотики как ингибиторы нитратредуктазы ротовой жидкости человека//Стоматология. — 2000.— №2.— С.4-5.

47. Чистов В.Б., Петрович Ю.А. Естественная реактивность организма, лейкоцитарный индекс интоксикации и щелочная фосфатаза слюны в ранней диагностике воспалительных осложнений переломов нижней челюсти/Стоматология,— 1991.— №3.— С. 19-21.

48. Шараев П.Н., Гумиярова Г.Х., Козьмин Ф.Г. Определение активности сиа-лидазы в сыворотке крови и слюне//Клиническая лабораторная диагностика.— 1993№6.— С. 15-16.

49. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. — М.: Издательство ГРАНТЪ, 1998. — 250 с.

50. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология: современное состояние и перспективы//Антибиотики и химиотерапия.— 1996. — С. 10-12.

51. Шлегель Г. Общая микробиология. — М.: Мир, 1987. — 567с.

52. Airoldi L., Galli A., Mercato F., Vago F., Fanelli R. Salivaiy nitrate, nitrite and N-nitrosocompounds in patient with cancer of the upper aerodigestive tract//Eur. J. Cancer Rev. — 1997. — Vol. 6(4). — pp. 351-369.

53. Alberghina F. On enzyme inhibition by oxidized chlorogenic acid//Life Sciencec, 1964. —Vol.3.—pp. 49-54.

54. Arglebe C. Biochemistry of Human Saliva//Sialadenosis and Sialadenitis. — Adv. in Oto. Rhino. Laryngology. — 1981. — Vol.26. — pp. 97-210.

55. Atsumi Т., Ueha T. Nitrate reduction in human saliva. Reciprocal action of oral microorganisms on nitrate reduction by Veillonella in vitro//Josai Shika Daigaku Kiyo.— 1978. — Vol. 7. —№1. — pp.33-38.

56. Azuma K., Ippoushi K., Nakayama M., Ito H., Higashio H., Terao J. Absorption of chlorogenic acid and caffeic acid in rats after oral administration//!. Agric. Food Chem. — 2000. — Vol. 48(11). — pp. 5496-5500.

57. Badawi A.F., Hosny G., el-Hadary M., Mostafa M.H. Salivary nitrate, nitrite and nitrate reductase activity in relation to risk of oral cancer in Egypt//Dis. Markers. — 1998. —Vol. 14. —№2,—pp. 91-97.

58. Baijal M., Sane P.V. Arginine residue(s) at the active site(s) of the nitrate reductase complex from Amaranthus/ZPhytochemistry. — 1988. — Vol. 27. — pp. 1969-1972.

59. Barber M.J., Trimboli A.J., Nomikos S., Smith E.T. Direct electrochemistry of the flavin domain of assimilatory nitrate reductase: effects of NAD+ and NAD+ ana-logs//Arch. Biochem. Biophys. — 1997. — Vol. 345(1). — pp. 88-96.

60. Bartholomew В., Hill M. J. The pharmacology of Dietary Nitrate and the origin of urinary nitrate//Fd. Chem. Toxic. — 1984. — Vol. 22(10). — pp. 789-795.

61. Bartsch H., Hietanen E., Malaveille C. Carcinogenic nitrosoamines: free radical aspects of their action// Free Radical Biology &Medicine. — 1989. — Vol. 7. — pp. 637-644.

62. Ben- Aryeh H., Fisher M., Laufer D. Composition of whole unstimulated saliva of healthy children: changes with age//Archs. Oral Biol, — Vol. 35(11). — pp. 929931.

63. Bories P.N, Scherman E., Dziedzic L. Analysis of nitrite and nitrate in biological fluids by capillary electrophoresis//Clin. Biochem. — 1999. — Vol. 32(1). — pp. 9-14.

64. Calmels S. Biochemical studies on the catalysis of nitrozation by bacte-ria//Carcinogenesis. — 1987. — Vol. 8(8). — pp. 1085-1088.

65. Calmels S., Ohshima H., Bartsch H. Characterization of bacterial cytochrome cd(l)-nitrite reductase as one enzyme responsible for catalysis of nitrozation of secondary amines// Carcinogenesis. — 1996. — Vol. 17(3). — pp. 533-536.

66. Calmels S. Nitrosamine formation by denitrifying and non-denitrifying bacteria: implication of nitrite reductase and nitrate reductase in nitrozation catalysis//J. Gen. Microbiol. — 1988. — №134. — pp. 221-226.

67. Cammack R., Jackson R.H., Cornish-Bowden A., Cole J.A. Electron-spin-resonance studies of the NADH-dependent nitrite reductase from Escherichia coli К12ИBiochem. J. — 1982. — Vol. 207. — pp. 333-339.

68. Campbell W., Kinghorn R. Functional domains of assimilatory nitrate reductases and nitrite reductases//Trends in Biochem. Sciences. — 1990. — Vol. 15(8). — pp.315-319.

69. Chaney A.L., Marbach F.P. Modified reagents for determination of urea and am-monia//Clin. Chem.— 1962. —Vol. 8. —p. 130.

70. Cole J. Nitrate reduction to ammonia by enteric bacteria: redundancy, or a strategy for survival during oxygen starvation//FEMS Microbiol. Lett. — 1996. — Vol. 136(1). —pp. 1-11.

71. Coogan M.M., Motlekar H.B. Salivary and plaque acids in caries active and caries free subjects//J.Dent.Assoc. S. Afr. — 1996. — Vol. 51(12). — pp. 823-827.

72. Craske A., Ferguson S.J. The respiratory nitrate reductase from Paracoccus deni-trificans. Molecular characterisation and kinetic properties//Eur. J. Biochem. — 1986. —Vol. 158(2).—pp. 429-436.

73. Crawford N., Campbell W. Fertile Fields//The Plant/Cell. — 1990. — Vol. 2. — pp. 829-835.77.de Saint-BIanquat G. Toxicologic and nutritional aspects of nitrates and ni-trites//Ann. Nut. Aliment. — 1980,— Vol. 34(5-6). — pp. 827-864.

74. Deng M., Moureaux Т., Caboche M. Tungstate, a molybdate analog inactivating nitrate reductase, deregulates the expression of the nitrate reductase structural gene//Plant Physiol. — 1989. — Vol. 91. — pp. 304-309.

75. Deng M., Moureaux Т., Lamaze T. Diurnal and circadian fluctuation of malate levels and its close relationship to nitrate reductase activity in tobacco leaves//Plant Science — 1989. — Vol. 65. —pp. 191-197.

76. Dibdin G.H., Dawes C. Mathematical model of the influence of salivary urea on the pH of fasted dental plaque and on the changes occurring during a cariogenic challenge//Caries Res. — 1998. — Vol. 32(1). — pp. 70-74.

77. Dougall H.T., Smith L., Duncan C., Benjamin N. The effect of amoxycillin on salivary nitrite concentration: an important mechanism of adverse reactions?//Br. J. Clin Pharmacol. — 1995. — Vol. 39(4). — pp. 460-462.

78. Duncan C., Dougall H., Johnston P., Green S., Brogan R., Leifert C., Smith L., Golden M., Benjamin N. Chemical generation of nitric oxide in the mouth from the enterosalivary circulation of dietary nitrate//Nat. Med. — 1995. — Vol. 1(6).pp. 546-551.

79. Eisenbrand G., Spiegelhalder В., Preussmann R. Nitrate and nitrite in saliva// Oncology. — 1980. — Vol. 37(4). — pp.227-231.

80. Ferguson S.J. Denitrification and its control//Antonie Van Leeuwenhoek. — 1994.1. Vol. 66(1-3).— pp.89-110.

81. Ferguson S.J. Denitrification: a question of the control and organization of electron and ion transport//Trends in Biochem. Sciences. — 1987. — Vol. 12(9). — pp.354-357.

82. Forman D. Are nitrates a significant risk factor in human cancer?//Cancer Surveys. — 1989. — Vol. 8(2). — pp.443-458.

83. Friedman M., Jurgens H.S. Effect of pH on the stability of plant phenolic compounds//!. Agric. Food Chem. — 2000. — Vol. 48(6).— pp. 2101 -2110.

84. Gibborns R. Bacterial adhesion to oral tissues: a model for infectious diseases//J. of Dent. Res. — 1989. — №5. — pp. 750-760.

85. Granli Т., Dahl R., Brodin P., Bockman O.C. Nitrate and nitrite concentration in human saliva: variations with salivary flow-rate//Fd. Chem. Toxic. — 1989. — Vol. 27(10). —pp. 675-680.

86. Hirneth H., Classen H. G. Inhibition of nitrate-induced increase of plasma nitrite & methemoglobinemia in rats by simulataneous feeding of ascorbic acid or toco-pherol//Arzneim. Forsch. — 1984. — Vol. 34(9). — pp. 988-991.

87. Hotchkiss J. Nitrate, nitrite balance, and de novo synthesis of nitrate//American J. Clin. Nutr. — 1988.—Vol. 47. —pp. 161-164.

88. Howard W.D., Solomonson L.P. Kinetic mechanism of assimilatory NADH: — nitrate reductase from ChlorellalfJ. Biol. Chem. — 1981. — Vol. 256. — pp. 12725-12730.

89. Howard W.D., Solomonson L.P. Quaternary structure of assimilatory NADH: nitrate reductase from Chlorellalll. Biol. Chem. — 1982. — Vol. 257. — pp. 10243-10250.

90. Huizenga J. R., Vissink A., Kuipers E. J., Gips С. H. Helicobacter pylori and ammonia concentrations of whole, parotid and submandibular/sublingual saliva// Clin. Oral Investig. — 1999. — Vol. 99(2). — pp. 84-87.

91. Jackson R.H., Cole J.A., Cornish-Bowden A. The steady-state kinetics of the NADH-dependent nitrite reductase from Escherichia coli К 12. Nitrite and hydro-xylamine reduction//Biochem. J. — 1981. — Vol. 199. —pp. 171-178.

92. Jackson R.H., Cornish-Bowden A., Cole J.A. Prosthetic groups of the NADH-dependent nitrite reductase from Escherichia coli iC72//Biochem. J. — 1981. — Vol. 193, —pp. 861-867.

93. Jetschmann K., Solomonson L.P., Vennesland B. Activation of nitrate reductase by oxidation//Biochim. Biophys. Acta. — 1972. — Vol. 275. — pp. 276-278.

94. Jiang Y., Satoh K., Kusama K., Watanabe S., Sakagami H. Interaction between chlorogenic acid and antioxidants//Anticancer Res. — 2000. — Vol. 20(4). —pp. 2473-2476 .

95. Kargul В., Yarat A., Tanboga I., Emekli N. Salivary protein and some inorganic element levels in healthy children and their relationship to caries//J.Marmar. Univ. Dent. Fac. — 1994. — Vol. 2(1). —pp. 434-440.

96. Kay C. J., Barber M. J. Assimilatory nitrate reductase from Chlorella. Effect of ionic strength and pH on catalytic activity//J. Biol. Chem. — 1986. — Vol. 261.pp. 14125-14129.

97. Kay C.J., Barber M.J. EPR and kinetic analysis of the interaction of halides and phosphate with nitrate reductase//Biochem. — 1989. — Vol. 28(14). — pp. 5750-5758.

98. Ketsawatsakul U., Whiteman M., Halliwell B. A reevaluation of the peroxyni-trite scavenging activity of some dietary phenolics//Biochem. Biophys. Res. Commun. — 2000. — Vol. 279(2). — pp. 692-699.

99. Knight Т., Forman D., Oshima H., Bartsch H. Endogenous nitrosation of 1-proline by dietary-derived nitrate//Nitrition and Cancer. — 1989. — №15. — pp. 195-203.

100. Kono Y., Shibata H., Kodama Y., Sawa Y. The suppression of the N-nitrosating reaction by chlorogenic acid//Biochem. J. — 1995. — Vol. 312(3). — pp. 947-953.

101. Kupp L., Rosen S., Beck F., Fives-Taylor P. Interrelationship between Streptococcus sanguis and S. mutans in dental caries development in gnotobiotic rats//Gnotobiol. its Applic. — Leiden, 1987.

102. Larhia D., Blum A. Role of vitamin E as nitrite scavenger and N-nitrosamine inhibitor: a review//Int. J. of Vitamin Nutrition Res. — 1989. — №59 — pp.430

103. Macfarlane T.W. Changes in oral flora in disease//Europ. J. Chemothert. Anti-biot. — 1982. — Vol. 2. — pp.760-768.

104. Mahan J.R., Sherman T.D., Funkhouser A.E. Activation energies of reaction catalyzed by the nitrate reductase from Clorella vulgaris//Plant Cell. Physiol. — 1988. —Vol. 29(4). —pp. 735-737.

105. Markel E., Nyakas C., Ormai S. Nitrate induced changes in sensoromotor development and learning behavior in rats//Acta Physiologica Hungarica. — 1989. — Vol. 74 (I). — pp. 69-79.

106. McKnight G.M., Duncan C.W., Leifert C., Golden M.H. Dietary nitrate in man: friend or foe?//Br. J. Nutr. — 1999. — Vol. 81(5). — pp.349-358.

107. McKnight G.M., Smith L.M., Drummond R.S., Duncan C.W., Golden M., Benjamin N. Chemical synthesis of nitric oxide in the stomach from dietary nitrate in humans//Gut. — 1997. — Vol. 40(2). — pp. 211 -214.

108. Muller E. Die Michaelis-konstante de Urease in vivo und einige Zellphysiolo-gishe Perspektiven/ZProtoplasma. — 1963. — Vol. 57(1-4). — p.611.

109. Murdia U.S., Mehta F.J., Bhide S.V. Nitrate reductase activity and nitrite levels in the saliva of habitual users of various tobacco products//Food. Chem. Toxicol. — 1982. — Vol. 20(3). — pp. 269-271.

110. Paganga G., Miller N., Rice-Evans C.A. The polyphenolic content of fruit and vegetables and their antioxidant activities. What does a serving constitute?//Free Radic. Res. — 1999. — Vol. 30(2). — pp. 153-162.

111. Page L., Griffiths L., Cole J.A. Different physiological roles of two independent pathways for nitrite reduction to ammonia by enteric bacteria//Arch. Microbiol. — 1990. — Vol. 154(4). — pp. 349-354.

112. Payne W.J., Liu M.Y., Bursakov S.A., Le Gall J. Microbial and plant metabolism of NO//Biofactors. — 1997. — Vol. 6(1). — pp. 47-52.

113. Phizackerley P.J., Al-Dabbagh S.A. The estimation of nitrate and nitrite in saliva and urine//Anal Biochem. — 1983. — Vol. 131(1). — pp. 242-245.

114. Rzepecki L.M., Tatsuhiko Nagafiichi, Waite J. H.//Arch. Biochem Biophys. — 1991, —Vol. 285(1). —pp. 17-26.

115. Sakomoto K., Konishi K. Antitumor effect of normal intestinal microflora of Ehrlich ascites tumor//Jpn. J. Canser Rev. (Gann). — 1988. — Vol. 79. — pp. 158-165.

116. Schneider N.G., Jacob P.3rd., Nilsson F., Leischow S.J., Benowitz N.L., Olm-stead R. E. Saliva continue levels as a function of collection method//Addiction.1997. —Vol. 92(3). —pp. 347-351.

117. Schuster C., Schmidt S., Mohr H. Effect of nitrate, ammonium, light and a plastidic factor on the appearance of multiple forms of nitrate reductase in mustard {Sinapis alba L.) cotyledons//Planta. — 1989. — Vol. 177. — pp. 74-83.

118. Sengupta S., Shaila M.S., Rao G.R. Purification and characterization of assimi-latory nitrite reductase from Candida w^VzV/Biochem. J. — 1996. — Vol. 317(1).pp. 147-155.

119. Shapiro K.B., Hotchkiss J.H., Roe D.A. Quantitative relationship between oral nitrate-reducing activity and the endogenous formation of N-nitrosoamino acids in humans//Food. Chem. Toxicol. — 1991. — Vol. 29(11). — pp.751-755.

120. Siu D.C., Henshall A. Ion chromatographic determination of nitrate and nitrite in meat products//J. Chromatogr. A. — 1998. — Vol. 804(1-2). — pp. 157-160.

121. Sizer I.W. Activation energy of urea hydrolysis catalyzed by soy bean urease// J. Biol. Chem. — 1940. — Vol. 132. — p.209.

122. Solomonson L.P., Barber M.J., Robbins A.P., Oaks A. Functional domains of assimilatory NADHrnitrate reductase from ChlorellallJ. Biol. Chem. — 1986. — Vol. 261,—pp. 11290-11294.

123. Solomonson L.P., McCreery M.J. Radiation inactivation of assimilatory NADH: nitrate reductase from Chlorella. Catalytic and physical sizes of functional units//J. Biol. Chem. — 1986. — Vol. 261. — pp. 806-810.

124. Srianujata S., Tangbanleukal L., Bunyaratvej S., Valyasevi A. Nitrate and nitrite in saliva and urine of inhabitants of areas of low and high incidence of cholangiocarcinoma in Thailand//IARC Sci. Publ. — 1984. — Vol. 57. — pp. 921-927.

125. Stich H.F. Teas and tea components as inhibitors of carcinogen formation in model systems and man//Prev. Med. — 1992. — Vol. 21(3). — pp. 377-384.

126. Stich H.F., Chan P.K., Rosin M.P. Inhibitory effects of phenolics, teas and saliva on the formation of mutagenic nitrosation products of salted fish//Int. J. Cancer—1982. —Vol. 30(6). — pp.719-724.

127. Talon R., Walter D., Chartier S., Barriere C., Montel M.C. Effect of nitrate and incubation conditions on the production of catalase and nitrate reductase by staphylococci//Int. J. Food Microbiol. — 1999. — Vol. 52(1-2). — pp. 47-56.

128. Tenovuo J. Antimicrobial function of human saliva- how important is it for oral health?//Adv. Dent. Res. — 1995. — Vol. 9(3). — pp. 198-207.

129. Tenovuo J. The biochemistry of nitrates, nitrites, nitrosamines and other potential carcinogens in human saliva//J. Oral Pathol. — 1986. — Vol. 15(6). — pp. 303-307.

130. Toi C.S., Cleaton-Jones P.E., Daya N.P. Mutans streptococci and other caries-associated acidogenic bacteria in five-year-old children in South Africa//Oral Microbiol. Immunol. — 1999. — Vol. 14(4). — pp. 238-243.

131. Tradel L., St. Amand L., Barreil M. et al. Bacteriology of oral cavity of BALB/c mice//Canad. J.Microbiol. — 1986. — Vol. 32(8). — pp. 148-154.

132. Trimboli A.J., Barber M.J. Assimilatory nitrate reductase: reduction and inhibition by NADH/NAD+ analogs//Arch. Biochem. Biophys. — 1994. — Vol. 315(1). —pp. 48-53.

133. Van Maanen J.M., van Geel A.A., Kleinjans J.C. Modulation of nitrate-nitrite conversion in the oral cavity//Cancer Detect. Prev. — 1996. — Vol. 20(6). — pp. 590-596.

134. Yamaoka K., Kato M., Kamihara T. Activation by monovalent cations of dis-similatory nitrate reductase in the cells of Pseudomonas denitrificansl I Biochem. Int. — 1988. — Vol. 16(5). — pp. 829-833.

135. Yoshino M. Murakami K. Interaction of Iron with Polyphenolic Compounds:

136. Application to Antioxidant Characterization//Anal. Biochem. — 1998 — Vol. 257(1). — pp. 40-44.

137. Ziebarth D., Spiegelhalder В., Bartsch H. N-nitrosation of medicinal drugs catalysed by bacteria from human saliva and gastro-intestinal tract, including Helicobacter /Ty/onV/Carcinogenesis.— 1997. —Vol. 18(2). — pp.383-389.

138. РОССИЙСКАЯ ГОСДАР"? f BEMH^j ^бЛйОТЕЙ^1. ЧЬ^-'С.с• < ■ v