Механизмы участия токоферола в адаптивных преобразованиях на холоде

Колосова, Наталия Гориславовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Механизмы участия токоферола в адаптивных преобразованиях на холоде
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Механизмы участия токоферола в адаптивных преобразованиях на холоде"

На правах рукописи

Р Г Б ОД

КОЛОСОВА НАТАЛИЯ ГОРИСЛАВОВНА ~ 1 ФЕЗ 201

МЕХАНИЗМЫ УЧАСТИЯ ТОКОФЕРОЛА В АДАПТИВНЫХ ПРЕОБРАЗОВАНИЯХ НА ХОЛОДЕ

03.00.13 - физиология человека и животных 03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Новосибирск 2000

Работа выполнена в НИИ физиологии и в НИИ биохимии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Научные консультанты:

доктор биологических наук Гнлинский М. А., академик РАМН, профессор Панин Л. Е.

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Мошкин М. П.

Доктор медицинсих наук, профессор Маянская Н. Н.

Доктор биологических наук Обут Т. А.

Ведущая организация - Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М.Сеченова РАН, Санкт-Петербург.

Защита состоится "_" _ в_час. на

заседании диссертационного совета Д 0001.14.01 при Институте физиологии СО РАМН (630117, г. Новосибирск, ул. Акад. Тимакова, 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института физио-

логии СО РАМН.

Автореферат

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологичесских наук

щ-ме^!0

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Приспособление человека и животных к температурным условиям окружающей среды - одна из важнейших проблем экологической физиологии. Её решение возможно только на основе глубокого понимания естественных механизмов резистентности к охлаждению, среди которых -адаптивные преобразования физико-химических характеристик мембран, в том числе - необходимое в условиях воздействия низких температур повышение устойчивости липидов мембран к повреждающему действию кислородных радикалов.

Биологические мембраны теплокровных, в нормальных условиях не встречающиеся с температурными сдвигами, реагируют на снижение температуры так же, как и клетки пойкило-термов - повышением непредельности липидов мембран (Крепе, 1981; Kuroshima, 1986). Такие изменения на фоне происходящей на холоде интенсификации окислительных процессов и связанного с этим усиления генерации активированных форм кислорода (АФК: О^, Н2О2, НО-, NO-) существенно повышают вероятность активации процессов перекисного окисления липидов (ПОД) (Куликов и др., 1988; Buzadzic, 1992-1998; Baija de Quiroga,1992).

ях организма (Бурлакова, 1975-1998; Аврова, 1999; Suzuki et al., 1997). Постулирован свободнорадикальный механизм регуляции клеточного метаболизма мембранами, согласно которому в систему регуляции ПОЛ входят такие важнейшие свойства биологических мембран, как жирнокислотный состав, вязкость липидов, проницаемость, трансмембранные потенциалы (Бурлакова, 1975-1998; Пынзарь, Пальмина, 1998; O'Brrein, 1987) -параметры, составляющие основу адаптивных перестроек на холоде (Хочачка, Сомеро, 1988). Изменяя их, ПОЛ опосредованно участвует в регуляции функций мембран: активности мембраносвязанных ферментов, состояния рецепторного аппарата клетки. Однако если механизму превращения ПОЛ в патогенетическое звено стресса уделяется большое внимание, вопрос о значимости для организма адаптивных, физиологических колебаний активности этих процессов разработан в меньшей степени, а проблема их связи с эффективностью терморе-гуляторных преобразований на холоде ранее не поднималась.

Холод традиционно рассматривается как прооксидантный фактор (Ломакина, Шугалей, 1980; Семенюк и др., 1983; Куликов и др., 1988; Kawabata, Hata, 1993; Borodin et al., 1997; Теплый и др., 1997; Эмирбеков, 1998). Однако даже при действии экстремально низких температур одновременно с усилением ПОЛ происходит и активация факторов антиокси-дантной защиты (Куликов и др., 1980; Capel et al., 1983; Buzadzic et al., 1992; 1997, 1998; Spasic et al., 1993; Kovacs et al., 1996; Эмирбеков и др., 1998). Механизм реализации такой активации окончательно не выяснен, но, как правило, его связывают с повышением генерации АФК и накоплением продуктов ПОЛ (Бурлакова и др., 1975; Владимиров и др., 1991; Меньшикова, Зенков, 1994). Если для изолированных клеток такой механизм очевиден, то, как показывает анализ литературы, на уровне организма прослеживается мобилизующий эффект неспецифической адаптивной реакции.

В природных адаптациях к холоду важную роль играет основной жирорастворимый антиоксидант - витамин Е, наиболее активным компонентом которого является а-токоферол (ТФ). Его содержание у обитающих в холодных условиях видов и популяций животных высоко и растет с увеличением непредельности липидов мембран (Калабухов, 1969; Лхременко, 1999). На сегодня очевидно, что роль ТФ в организме не ограничивается предупреждением активации свободнорадикаль-ных процессов. Модулируя физико-химические характеристики

мембран, он может влиять на чувствительность клеток к регу-ляторным воздействиям и метаболический ответ на них (Бур-лакова, 1975-1998). Показано влияние ТФ на генетический аппарат (Fazzio et al., 1997; Okamoto et al., 1998), на процессы пролиферации (Murelli, 1989) и дифферецировки (Sohal et al., 1988), участие в функциях митохондрий (Infante, 1999), синтезе арахидоновой кислоты и простагландинов, в метаболизме нуклеиновых кислот, белков, липидов, продукции половых гормонов и др. (Thakur, Srivastava, 1996; Brigelius-Flone, 1999). ТФ обладает и свойствами, позволяющими ему оказывать непосредственное влияние на процесс теплообразования в митохондриях, предотвращая вызываемое различными факторами разобщение окисления и фосфорилирования (Донченко, 1983; 1988; Куница и др., 1993; Scholz et al., 1994; Lass et al., 1998) -основной источник дополнительной теплопродукции на холоде. Как подчеркивает Е.Б.Бурлакова (1998), один из ведущих специалистов в области исследования антиоксидантов, проявления биологической активности ТФ настолько разнообразны, что до сих пор окончательно не выяснены механизмы его участия в метаболизме клетки и тем более - организма.

Подобно другим антиоксидантам, ТФ рассматривают как протектор центрального действия, ограничивающий развитие стресс-реакции (Петрова и др., 1985; Меерсон, 1986; Меерсон, Пшенникова, 1988; Барабой и др., 1992). Есть свидетельства влияния ТФ на центральные регуляторные системы, на процессы обучения, памяти, когнитивную деятельность мозга (Tripathi et al.,1996;Yehuda et al., 1996). Одним из наименее ясных оказался вопрос, связанный с подавлением антиоксидан-тами адренокортикальной реакции при воздействии физических стрессоров, когда мобилизационные эффекты неспецифической адаптивной реакции обеспечивают сохранение гомео-стаза в острой фазе воздействия и формирование долговременных механизмов адаптации. Между устойчивостью к холоду, эффективностью адаптивных преобразований при длительном его воздействии и стресс-реактивностью существует тесная связь (Мошкин, 1992). Предупреждая метаболическую реакцию на холод (Калабухов, 1964), ТФ, по данным одних авторов, повышает устойчивость к холоду (Белогубова, Курочкина, 1974; Куликов, 1988), по данным других - не изменяет её (Обухова, 1998).

Знание механизмов включения ТФ в адаптивные преобразования на холоде наряду с фундаментальным значением имеет и

прикладное: использование антиоксидантов, в том числе ТФ, в коррекции и профилактике дезадаптивных состояний, сопровождающихся активацией ПОЛ, широко распространено в практике современной медицины.

В связи с этим целью работы явился анализ роли токоферола в регуляции активности ПОЛ и в адаптивных перестройках структуры и функций мембран на холоде, их связи с эффективностью терморегуляторных преобразований и активностью коры надпочечников. В соответствии с этой целью были поставлены следующие задачи:

1. Сопоставить изменения процессов ПОЛ и содержания токоферола в тканях организма при длительной и ускоренной адаптации к холоду с эффективностью терморегуляторных преобразований.

2. На модели длительной адаптации к холоду выяснить, существует ли связь между изменениями активности ПОЛ, содержания токоферола и адаптивными преобразованиями структуры и функций мембран митохондрий и микросом печени.

3. Установить зависимость активации реакций ПОЛ от выраженности адренокортикальной реакции и эффективности формирования адаптивных навыков при действии холода.

4. Изучить участие гормонов - адреналина и глюкокорти- -коидов - в мобилизации токоферола в организме.

5. Исследовать влияние токоферола на состояние и реактивность коры надпочечников в норме и при действии холода.

6. По изменению содержания гликогена и активности тиро-зинаминотрансферазы выяснить возможную роль токоферола в изменении метаболической реакции клеток печени на глюко-кортикоиды в условиях длительного воздействия холода.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Оперативное перераспределение токоферола с преимущественным его накоплением в органах, вовлеченных в процесс адаптации, происходит с участием адреналина и глюкокорти-коидов, обеспечивает эффективность срочной реакции на холод и адаптивных преобразований при длительной и ускоренной адаптации.

2. При длительном воздействии холода избирательное накопление токоферола в митохондриях и микросомах клеток печени сопровождает усиление их функциональной активности:

активацию микросомальной монооксигеназной системы и повышение энергизации митохондрий.

3. Токоферол дозозависимо влияет на состояние коры надпочечников, увеличивает её функциональные резервы. Его предварительный прием сокращает фазу повышенной секреции глюкокортикоидов на начальном этапе воздействия, поддерживая повышенную чувствительность надпочечников к АКТГ на протяжении всего периода пребывания животных на холоде. Подобно длительной адаптации к холоду, токоферол модифицирует реакцию печени на глюкокортикоиды, сокращая период реализации метаболического ответа - активации тирозинаминотрансферазы и накопления гликогена.

4. Глюкокортикоиды оказывают постоянное модулирующее влияние на уровень продуктов ПОЛ в тканях организма за счет прямых и опосредованных факторами антиоксидантной защиты эффектов, которое усиливается в условиях напряжения адаптивных механизмов на холоде. Результатом успешных преобразований метаболизма становится формирование отрицательной связи между уровнями глюкокортикоидов и продуктов ПОД в крови.

Научная новизна исследования

Впервые установлено существование в организме механизмов оперативного перераспределения ТФ с его преимущественным накоплением в вовлеченных в адаптивную реакцию органах. Показано, что первоначальная реакция на холод характеризуется снижением содержания продуктов ПОЛ в тканях и мобилизацией факторов антиоксидантной защиты - перераспределением эндогенных запасов ТФ и активацией НАДФН-зависимых ферментов - глутатионпероксидазы и глута-тионредуктазы, которая реализуется механизмами неспецифической адаптивной реакции и происходит с участием основных адаптивных гормонов - адреналина и глюкокортикоидов. Она не отменяется снижением активности ПОЛ в тканях в результате дополнительного приема ТФ.

животных показал, что накопление продуктов ПОЛ не отражает выраженность стресс-реакции, но появление отрицательной корреляционной связи между уровнями кортикостерона и продуктов ПОЛ в крови является признаком эффективных адаптивных преобразований.

Получены новые данные о том, что обеспеченность токоферолом существенно влияет на способность организма поддерживать температуру тела при длительном воздействии и эффективность формирования адаптивных навыков при ускоренной адаптации к холоду. ТФ вовлечен в срочные адаптивные преобразования организма на холоде: его содержание в БЖТ возрастает с первых часов долговременной и в результате ускоренной адаптации к холоду. При ускоренной адаптации эффективность формирования терморегуляторных навыков зависит от содержания ТФ в мозге и надпочечниках животных.

Получены новые факты, показывающие, что при длительном воздействии холода колебания активности ПОЛ играют роль фактора модуляции вязкости липидов мембран митохондрий, но не микросом печени, вязкость которых определяется белковой компонентой. Результатом длительной адаптации становится снижение вязкости липидов мембран митохондрий и содержания в них продуктов ПОЛ. Впервые обнаружена возможность разнонаправленных изменений содержания ТФ в различных структурах клетки. Установлено, что рост содержания ТФ в микросомах печени на 10-15 сутки длительного воздействия холода сопровождает активацию монооксигеназной системы и усиление детоксикационной функции печени, а накопление его в митохондриях через 5-7 недель коррелирует с увеличением энергизации (ростом дыхательного контроля и повышением трансмембранного потенциала).

Получены новые данные о зависимости изменений трансмембранных электрических потенциалов (ДТ) тимоцитов, лейкоцитов крови, митохондрий печени, дыхательного контроля в митохондрях печени от изменений температуры тела животных при длительном воздействии холода. При ускоренной адаптации к холоду снижение ЛЧ' тимоцитов регистрируется как следовый эффект первого охлаждения и отменяется диа-5епамом, препятствующим формированию терморегуляторных яавыков.

Установлено, что в условиях дополнительного включения ТФ з рацион накопление его в тканях животных на холоде выше, тем в условиях температурного комфорта. ТФ предупреждает

снижение температуры тела животных при действии умеренного холода и усиливает эффект длительной адаптации к нему (7 недель при +5°С), повышая выживаемость при остром охлаждении (-27°С). Прием витамина в условиях температурного комфорта на выживаемость при экстремально низких температурах не влияет.

Получены новые данные о влиянии ТФ на гипофизарно-надпочечниковую систему. Установлено, что непродолжительный прием антиоксиданта (1-7 дней) повышает концентрацию кортикостерона в плазме крови, не изменяя секрецию гормона надпочечниками. В результате при холодовом воздействии ТФ сокращает стадию активации коры надпочечников, сохраняя их повышенную способность синтезировать стероиды в ответ на АКТГ. Длительный прием ТФ (49 дней) снижает синтез кортикостерона надпочечниками контрольных и пребывающих на холоде крыс при неизменном уровне гормона в крови и повышенной чувствительности к АКТГ. Установлено, что ТФ, подобно длительной адаптации к холоду, модифицирует реакцию печени на глюкокортикоиды, ускоряя реализацию метаболического ответа - повышение запасов гликогена и активацию тирозинаминотрансферазы. Впервые проведено исследование ТФ во фракциях хроматина и ядерном матриксе и обнаружена максимальная его концентрация в транскрипционно активном хроматине

Научно-практическая ценность работы

Настоящая работа вносит вклад в понимание механизмов участия ТФ в адаптивных преобразованиях организма на холоде. Проведенные комплексные исследования продемонстрировали, что эффекты ТФ не ограничиваются предотвращением активации свободнорадикальных процессов, а существенно влияют на адаптивные преобразования функций - на уровне мембран, органов, организма.

Полученные результаты могут быть полезны при разработке способов использования ТФ и других антиоксидантов в качестве стресс-протекторов при острых воздействиях экстремально низких температур, в том числе - в клинической практике при использовании гипотермии. Установлено, что потребность организма в ТФ на холоде возрастает. Прием ТФ в условиях воздействия умеренно низких температур повышает эффективность терморегуляторных преобразований, в том числе - при

остром охлаждении, однако длительный предварительный приём антиоксиданта в условиях температурного комфорта в случае воздействия экстремально низких температур оказывается не эффективным. Данные о способности ТФ повышать уровень циркулирующих стероидов следует учитывать при использовании ТФ в качестве стресс-протектора.

Результаты исследований, выявившие сильную корреляционную связь между изменениями температуры тела животных, дыхательного контроля и А1У митохондрий печени, с одной стороны, и изменениями ДЧ* тимоцитов и лейкоцитов крови, с другой, позволяют рекомендовать использование этих клеток для контроля адаптивных преобразований энергетических процессов на холоде. Разработанная модификация метода оценки трансмембранного электрического потенциала - ДЧ* митохондрий печени - с помощью флуоресцентного зонда-катиона ДСМ, которая позволила при исследовании адаптивных преобразований энергетических процессов на холоде выявить сопряженные с другими функциональными характеристиками митохондрий изменения показателя, может быть рекомендована как достаточно чувствительйый и нетоксичный способ оценки Д^Р митохондрий.

Апробакия работы

Материалы диссертации представлены и доложены: на Всесоюзной конференции "Адаптация человека к различным географическим, климатическим и производственным условиям", Владивосток, 1978; 4, 7 и 8 Международных конгрессах по приполярной медицине: Новосибирск, 1978; США, 1986; Канада 1990; на Всесоюзных симпозиумах "Биологические проблемы Севера": Петрозаводск, 1976; Кировск, 1979; Магадан, 1983; Якутск, 1986; 6 Всесоюзной конференции по экологической физиологии, Сыктывкар, 1982; 3 Всесоюзной конференции "Адаптация человека в различных климато-географи-ческих условиях", Ашхабад, 1982; "Важнейшие теоретические и практические проблемы терморегуляции", Новосибирск, 1982; Всесоюзном симпозиуме по физиологическим проблемам адаптации, Таллин, 1984; на 2 - 4 Всесоюзных конференциях "Биоантиоксидант", Москва, 1986, 1989, 1992; 4 Всесоюзной конференции "Адаптация человека к климато-географическим условиям и первичная профилактика", Новосибирск, 1986; школе-семинаре «Надежность биологических систем», Чернигов,

1985; 4 Всесоюзной конференции по патологии клетки, Москва, 1987; Всесоюзной конференции "Биохимия -медицине", Ленинград, 1988; 5 Всесоюзном симпозииуме "Экодого-физиологические проблемы адаптации", Москва, 1988; 4 Всесоюзном съезде патофизиологов, Кишинев, 1989; X Всесоюзном симпозиуме "Структура и функции клеточного ядра", Гродно, 1990; Всесоюзной конференции памяти А.Д.Слонима "Система терморегуляции при адаптации организма к факторам среды", Новосибирск, 1990; Организационном Международном конгрессе по патологической физиологии, Москва, 1991; Республиканском симпозиуме "Монооксигеназная система. Теоретические и прикладные аспекты", Ташкент, 1992; 5 Европейской конференции ISSX, Франция, 1993; III Всемирном конгрессе международного общества для адаптивной медицины, Япония, 1993; 7 Всероссийском симпозиуме "Эколого-физиологические проблемы адаптации", Москва, 1994; 7th biennial Scientific meeting of the International Society for Free Radical Research, Австралия, 1994; 7 Всероссийском симпозиуме "Эколого-физиоло-гические проблемы адаптации", Москва, 1994; 2 (1995) и 3 (1997) съездах физиологов Сибири и Дальнего Востока, Новосибирск; 1 Российском Конгрессе по патофизиологии с международным участием, Москва, 1996; First Regional Meeting on Medical Sciences: "The roles of free radicals in health and disease" Jerusalem and Amman, 1998; Международной конференции "Oxygen Radicals", Ярославль, 1998; Международной конференции "Рецепция и внутриклеточная сигнализация", Пущино, 1998; Всероссийском съезде физиологов, Ростов-на-Дону, 1998; Europien Meeting Sosiety for free radical research, Германия, 1999.

По теме диссертации опубликовано 83 работы, она изложена на 272 стр., содержит 33 таблицы, 43 рисунка, список литературы включает 469 источников, в том числе 298 иностранных.

Считаю своим приятным долгом выразить искреннюю благодарность за плодотворную совместную работу коллегам, сотрудникам институтов СО РАМН П. Е. Влощинскому, О. А. Громовой, А. Р. Колпакову, В. Ю. Куликову, В. Г. Селятицкой, И. Г. Шабалиной, Ю. П. Шорину.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Животные. Эксперименты выполнены на крысах-самцах популяции Вистар, их основная часть получена из вивария Института цитологии и генетики СО РАН или из Питомника АМН Столбовая. Масса животных - 180-250 г. Крыс содержали на стандартном сбалансированном рационе, воду и корм животные получали без ограничения.

Длительную адаптацию к холоду исследовали в модели Харта (Hart, Jansky, 1963). Животных содержали в индивидуальных металлических клетках: опытных - при температуре + (5 ± 1)°С, контрольных - при +(24±1)°С. Режим освещения - 12 час свет: 12 час темнота. При исследовании влияния ТФ на изучаемые параметры в корм животных добавлялся 5 % а-ТФ ацетат в масле по 4 мг на крысу, контрольным животным - соответствующее количество подсолнечного масла. В экспериментах для выделения микросом использовали животных после 18-часового голодания, для выделения митохондрий - "сытых" -взятых в опыт через 4 часа после отнятия кормушки (Панов, 1992). Температуру тела измеряли в прямой кишке электротермометром ТПЭН-1 в одно и то же время суток (утром). Забивались животные декапитацией в 10-11 часов.

При исследовании ускоренной адаптации к холоду животных содержали в пластиковых клетках группами по 8-10 особей при комнатной температуре и естественном освещении. На холод (+1-+2°С, циркуляция воздуха 0,5 м/сек) животных высаживали в ограничивающих подвижность пластиковых пеналах с большим количеством терморегуляторных отверстий на 1.5 часа. Показателем приобретения адаптивных тер-морегулятоных навыков служило изменение холодовой устойчивости - величины спада температуры тела при повторном охлаждении через 48 часов (Гилинский, 1990).

Методики исследования. Продукты ПОЛ определяли следующими методами: диеновые конъюгаты и триенкетоны по УФ-спектрам липидных экстрактов (Колосова, 1988), флюоресцирующие продукты - основания Шиффа - по (Fletcher et al., 1973), реагирующие с 2-тиобарбитуровой кислотой продукты (Steinbrecher, 1990). Содержание ТФ определяли флюориметри-чески методом Teylor и соавт. (1976), белок - по Лоури (Lowry et al., 1951).

Тимоциты выделяли согласно (Коношенко, Мохова, 1983). Стандартными методами дифференциального центрифугиро-

вания выделяли митохондрии (Weinbach, 1961), микросомы (Tata, 1969) и ядра (Blobel, Potter, 1966) клеток печени. Оценку функционального состояния микросом печени проводили совместно с А.Р.Колпаковым и О.А.Громовой, определяя цито-хромы Р-450 и b5 (Omura, Sato, 1964), активность НАДФН-оксидазы (Hrycay et al., 1975) и НАДФН-цитохром с (Р-450) ре-дуктазы (Hrycay et al., 1975), функционального состояния митохондрий - совместно с А.Р.Колпаковым и И.Г.Шабалиной. Условия инкубации митохондрий: 125 мМ КС1; 20 мМ трис-НС1 (рН 7,4); 5 мМ КН2Р04; 1 мМ MgC12. В качестве субстрата использовали сукцинат (10 мМ) с добавлением ротенона (2 мкг на мг белка митохондрий). С помощью флуоресцентного зонда ДСМ (4-(п-диметиламиностирил)-1-метилпиридиния, "Zonde", Латвия) Д1? тимоцитов, лейкоцитов (Добрецов, 1989) и митохондрий (Колосова, Колпаков, 1991) печени. Вязкость липидов мембран определяли, используя пару флуоресцентных зондов -пирен ("Sigma", Германия) и ДСП-12 (4-(п-диметилами-ностирил)-1-додецилпиридиния, "Zonde", Латвия). О состоянии белок-липидных взаимодействий судили, регистрируя перенос энергии с остатков триптофана мембранных белков на пирен, локализованный в липидах (Добрецов, 1989). Хроматин и ядерный матрикс выделен по (Gottesfield et al., 1976) А.П.Кузьменко (НИИ биохимии). Цитохромы Р-450 и bs определяли методом Omura и Sato (1964). Активность глутатионредуктазы и глута-тионпероксидазы - по (Ланкин, Гуревич, 1976), СОД - по окислению адреналина в адренохром (Fridovich, 1975), восстановленный глутатион - методом Кау и Murfitt (1960). В сыворотке крови определяли концентрацию кортикостерона хрома-тографически (Santos-Mentes et al., 1995): колонка 250 мм, Nucleosil Сi8 5 мкм, стандарт - кортикостерон (Sigma). Определение продуцируемых надпочечниками in vitro стероидов проведено В.Г.Селятицкой, кортикостероиды разделяли методом тонкослойной хроматографии и определяли количественно (Angélico et al., 1965). Измерения флуоресценции выполнены на спектрофлуориметре MPF-4 Hitachi (Япония), спектрофото-метрические - на спектрофотометре Hitachi-556 (Япония). При статистической обработке данных использовали: программу "Статистика для Windows", применяя дисперсионный, корреляционный анализ, а также t-критерий Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Токоферол в длительная адаптация к холоду

В адаптивных реакциях организма ТФ участвует прежде всего как универсальный антиоксидант и стабилизатор биологических мембран, предотвращающий чрезмерную активацию ПОД. Содержание продуктов ПОЛ в различных тканях животных исследовали в динамике длительного воздействия холода. Основным критерием при выборе сроков наблюдений служили изменения температуры ядра тела животных. На холоде отчетливо выделяются два периода её снижения, которые приходятся в основном на 1-3 сут и на 8-10 сут воздействия. В период с 8 по 14 сут наряду с максимальным снижением температуры, регистрировали отдельные случаи гибели животных (до 5-7%), что позволило рассматривать его как критический. Небольшие колебания температуры наблюдались и в другие сроки, но они не были постоянны, а через 30 дней воздействия холода температура всегда возвращалась к контрольным значениям. Показателем эффективности адаптивных преобразований терморегуляции служила способность животных удерживать температуру тела при контрольном охлаждении при -27°С, которая через 49 дней возрастала: её снижение за 1,5 часа составляло 1,9 ± 0,17°, в то время как у контрольных оно равнялось 5,3±0,85°, выживаемость при таком охлаждении возрастала с 3,2 ± 0,4 до 6,6 ± 0,9 часов (р<0,01).

Воздействие умеренного холода не приводило к генерализованной, захватывающей все органы активации ПОЛ. Изменения содержания продуктов ПОЛ в тканях животных не совпадали ни по времени, ни по направлению (рис. 1).

В первые часы воздействия преобладала тенденция к снижению уровня продуктов ПОЛ на фоне перераспределения эндогенных запасов ТФ (рис. 3), активировались исследованные в печени антиоксидантные ферменты - НАДФН-зависимые глу-татионпероксидаза и глутатионредуктаза. Активация глутати-онредуктазы не предотвращала, однако, снижения восстановленного глутатиона через 5 час, а также через 1 и 10 сут (рис. 2), в то время как у адаптированных к холоду крыс (49 сут) его содержание возвращалось к исходному несмотря на снижение активности фермента. С 1 по 15 сут отмечены периоды повышения содержания продуктов ПОЛ в отдельных органах, связанные с адаптивными преобразованиями функций и напря-

жением метаболизма. Так, в БЖТ активация ПОЛ через сутки происходила на фоне роста содержания ТФ, увеличения массы органа - в 1,33 раза за 24 час, а, значит, и усиления пролиферации и синтеза - процессов, связанных с расходом энергетических ресурсов. Повышение в 2 раза продуктов ПОД в надпочечниках через сутки совпадало с максимальным ростом продукции стероидов и снижением их функциональных резервов - отсутствием ответа на АКТГ (рис.10). В митохондриях печени активация ПОЛ регистрировалась только через сутки (р<0,01), в то время как в микросомах печени значимых изменений не выявлено. С 15 сут пребывания на холоде содержание продуктов ПОЛ в тканях стабилизировалось на исходном или пониженном уровне (рис. 1).

мышцы

легкие

плазма

-20 0 20 40

Продукты ПОЛ, в % к контролю

Pua 1. Изменения содержания продуктов ПОЛ в тканях крыс при длитель ном воздействии холода.

Восстановленный Активность Активность

глутатион глутатионпероксидазы глутатионредуктазы

Продолжительность воздействия

Рис. 2. Содержание восстановленного глугатиона и активность глутатионза-шсимых ферментов в печени крыс при длительном воздействии холода.

Зачиная с первых часов воздействия холода, в тканях животах наблюдались изменения содержания ТФ, которые, как и вменения активности ПОЛ, не совпадали по времени и направлению (рис. 3). Через 2 час ТФ снижался в надпочечниках I эпидидимальном жире, через 5 час - продолжал снижаться в шидидимальном жире, но нормализовался в надпочечниках и £ачинал расти в БЖТ (р = 0,05). Через сутки его содержание в юлыпинстве тканей нормализовалось и только в эпидидималь-гом жире оставалось сниженным. Для надпочечников это оз-гачало рост содержания витамина по сравнению с зарегистрированным через 5 часов воздействия в 1,4 раза (р <0,001), в ЗЖТ его было уже на 39% больше, чем в контроле. Через 5 сут "Ф был повышен в сердце (на 40%) и в тимусе (на 62%), прореживалась очевидная тенденция его роста в надпочечниках, >днако достоверным увеличение становилось только на 10 су-•ки. Через 5-15 сут содержание ТФ восстанавливалось или по-¡ышалось относительно исходного уровня в большинстве тка-гей (рис. 3). Выживание в условиях постоянного воздействия :олода возможно только в случае успешной реализации специа-

|Эпидимальный жир ШШ& Легкие Плазма

НН Тимус I I Сердце ЯН1 Печень БЖТ ■■ Надпочечники

-40 -20

80 100 120

0 20 40 Токоферол,в % к контролю

Рис. 3. Содержание токоферла в тканях крыс при длительном воздействии холода

лизированных механизмов адаптации и перехода на долговременную программу,связанную с наработкой новых структур. На 8-10 сут несмотря на снижение температуры тела приходился период усиления анаболических процессов - после задержки в первую неделю пребывания на холоде масса тела животных увеличивалась (р<0,03). Параллельно шло накопление ТФ, которое в целом по тканям было максимальным на 10-15 сутки (рис. 3) и несколько снижалось к концу периода наблюдений, когда в температурный гомеостаз существенно возрастает вклад изоляционной компоненты (Колпаков, 1996). До конца наблюдений содержание ТФ оставалось повышенным в БЖТ, надпочечниках и митохондриях печени.

Наряду с неравномерным ростом содержания ТФ в отдельных органах при длительном воздействии холода были выявлены периоды его избирательного накопления в отдельных структурах клеток печении: динамика изменений содержания

токоферола в ткани печени и в выделенных из неё митохондриях и микросомах оказалась различной (рис. 4).

Митохондрии Микросомы

Гомогенат

0,0 0,5 1,0 10 20 30 40 50 Продолжительность воздействия, сут

Рис. 4. Изменения содержания ТФ в печени (гомогенат) и в выделенных из неё митохондриях и микросомах в динамике воздействия холода.

Характер изменений ТФ в тканях животных свидетельствует об активном его включении в адаптивные преобразования на холоде. Поскольку в организме животных ТФ не синтезируется, источником его увеличения или восстановления после существенного снижения в первые сутки пребывания на холоде мог-ш быть только эндогенные запасы. Около 92% общего количества ТФ в организме связано с печенью, скелетными мышцами и жировой тканью (ВргпеЬое а!., 1986).

В течение 1 сут пребывания на холоде содержание ТФ в эпидидимальном жире снижалось на 20-37%, свидетельствуя о гом, что одним из его источников служила жировая ткань, □.ругим источником срочной мобилизации ТФ могла быть мышечная ткань: в скелетных мышцах благодаря их значительной массе сосредоточена значительная часть ТФ организма (В^гпеЬое е1 а1., 1986). В течение первых суток достоверных изменений ТФ в мышцах не обнаружено, но можно отметить устойчивую тенденцию к снижению, составившему через сутки в бедренной мышце около 10% (р = 0,06). Факт увеличения ГФ прежде всего в БЖТ говорит о его перераспределении в

пользу органа, специализирующегося на выработке тепла. Факт накопления антиоксиданта в тканях животных при длительном пребывании на холоде позволил поставить вопрос об изменении способности организма усваивать ТФ.

Таким образом, в первые часы воздействия холода, в период срочной адаптации, мобилизация систем антиоксидантной защиты - увеличение активности антиоксидантных ферментов и перераспределение эндогенных запасов ТФ - по времени опережали накопление продуктов ПОЛ. Если это так, то возникает вопрос о механизмах, ответственных за реализацию этих процессов.

Токоферол и структурно-функциональные перестройки биологических мембран при длительном действия холода

Биологические мембраны - структуры, в первую очередь отвечающие приспособительной реакцией на изменения внешней среды (Крепе, 1982), через которые реализуется в условиях целого организма адаптивный или повреждающий эффект любого фактора. Митохондрии и микросомы, в процессе нормальной жизнедеятельности являющиеся источниками АФК, в условиях интенсификации окислительных процессов, увеличения на холоде вклада липидов в энергетический метаболизм (Панин, 1983) сами могут становиться их мишенью. И ТФ, и продукты ПОЛ способны влиять на структурно-функциональные характеристики внутренней мембраны митохондрий, в том числе - её эффективную протонную проводимость, играющую решающую роль в рефляции сопряженности окисления и фос-форилирования, разобщение которого - основной источник дополнительной теплопродукции на холоде (Скулачев,1989). Холод влияет и на процессы микросомального окисления, его эффект зависит от продолжительности и жесткости воздействия (Семенюк и др., 1983; Куликов и др., 1988; ДШвиуата а1.,1988; Колпаков, 1996). Исследования показали, что несмотря на отсутствие колебаний содержания продуктов ПОЛ, изменения структурно-функциональных характеристик микро-сом печени на холоде оказались тесно связанными с содержанием в них ТФ. Изменениями содержания ТФ сопровождались и адаптивные перестройки митохондрий, однако динамика их была иной.

I0,30

-§0,25]

1,0,20] &

о а

t20,15j

1,2 1,0

Jo,8-¡g

-0,4

—Цитохром P-450

~7~Цитохром Ь5 £

0 5 10 15 50 0 5 10 15 50 0 5 10 15 50 Продолжительность воздействия, сутки

Рис. 5. Изменения вязкости липидов мембран микросом и содержания в них ТФ и цитохромов Р-450 и Ь5 при длительном воздействии холода.

В микросомах рост содержания ТФ (рис. 5) к 10-15 сут происходил параллельно с повышением содержания цитохромов bs, Р-450 (г = +0,73, р = 0,06), а также активности ферментов - НАДФ Н-цитохром с (Р-450)редуктазы и НАДФН-оксидазы. Такие изменения свидетельствовали об активации процессов биотрансформации в печени, что подтвердило сопоставление полученных результатов с данными проведенных параллельно А.Р.Колпаковым и М.А. Колпаковым исследований скорости элиминации лекарственных препаратов (Колпаков и др., 1994). Как показали расчеты, активация их метаболизма в организме крыс сопровождалась ростом содержания ТФ в печени: коэффициент корреляции между скоростью полувыведения антипирина и содержанием ТФ достигал +0,9 (р = 0,008), что может рассматриваться как свидетельство существования функциональной связи между показателями (Kolosova et al., 1999). Подтверждения влияния ТФ на процесс биотрансформации ксенобиотиков появились и в литературе. По данным Chen (1998) и Lii (1998), ТФ, изменяя фосфолипидный состав мембран, активирует ферменты, а также приводит к существенному увеличению абсолютного содержания цитохрома Р-450 в микросомах печени крыс - т.е. не являясь субстратом, выступает в роли индуктора монооксигеназной системы. Однако механизмы такого эффекта на сегодня не ясны.

Вязкость липидов микросомальных мембран изменялась на холоде однонаправленно с содержанием в них цитохромов и ТФ (рис. 5), а её рост через 15 сут определялся увеличением доли белков в мембранах, прежде всего - цитохромов. В этом убеждает положительная корреляционная связь между вязкостью липидов и белок-липидных взаимодействий - долей белков, не контактирующих с липидами (г = +0,78, р = 0,023). В митохондриальных мембранах связь между показателями имела противоположный знак (г = -0,71, р = 0,034), что косвенно свидетельствует о различии причин, определявших её изменения.

Непосредственных связей между активностью ПОЛ и адаптивными изменениями функций мембран митохондрий печени выявить не удалось, но они могли быть опосредованы влиянием на структурные характеристики мембран. Несмотря на то, что рост содержания продуктов ПОЛ в митохондриях наблюдался только через сутки воздействия холода (рис. б), колебания активности ПОЛ явились фактором, модулирующим вязкость липидов их мембран (г = + 0,65, р < 0,05). В то же время прослеживалась зависимость функционального состояния митохондрий от содержания в них ТФ. Через 5 час воздействия холода происходило одновременное снижение ЛЧ7*, и содержания ТФ, но не изменялся уровень продуктов ПОЛ (рис. 6). Только через сутки воздействия холода наблюдалось одновременное сниже ние ДЧ'м, дыхательного контроля митохондрий и повышение содержания продуктов ПОЛ, однако содержание ТФ в митохондриях печени крыс при этом не отличалось от исходного. Существуют доказательства того, что не продукты ПОЛ, а происходящая в результате его активации агрегация белков ведет к формированию неспецифических пор и снижению энерги-зации митохондрий (Втс1оИ, 1988; Тгитрег еХ. а1., 1989). В период с 5 по 15 сут пребывания животных на холоде в мембранах митохондрий печени регистрировались изменения белок-липидных взаимодействий, которые могли быть следствием агрегации белков, но активации ПОЛ в эти сроки не наблюдалось, а вязкость липидов мембран к 5 суткам снижалась (рис.6). В этой ситуации причиной роста доли белков, не контактирующих с липидами, могло быть и увеличение содержания в мембранах поверхностных белков. Жигачевой и Моховой (1976; 1978) показано, что к 9 суткам пребывания на холоде в митохондриях печени крыс существенно повышается количество цитохромов а и (с+а). По данных авторов, дополнительное

Белок-липидные взаимодействия Вязкость липидов мембран

220 215 210 205 2 200 ' 195 190 185 180

О 1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55

Трансмембранный погенциалг '>°1

10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Продукты ПОЛ

10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 1 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50

Продолжительность воздействия, сутки

Рис. 6. Изменения физико-химических характеристик мембран митохондрий печени крыс при длительном воздействии холода

охлаждение животных ведет к тому, что часть сорбированного на внешней поверхности внутренней мембраны митохондрий фонда цитохрома с освобождается в межмембранное пространство. Этот эффект сопровождается активацией внешнего пути окисления: НАДН - цитохром Ы. Он относится к категориям быстрых терморегуляторных реакций адаптированных к холоду крыс на резкое снижение температуры и позволяет рассеивать тепло, минуя стадию генерации и рассеивания протонного потенциала (Скулачев, 1989). Выше отмечалось (рис.5), что к 10 суткам возрастает и содержание цитохрома Анализ данных позволяет предположить, что выявленные изменения белок-липидных взаимодействий могли быть следствием повышения поверхностного пула цитохрома с и косвенным признаком "готовности" митохондрий печени к активации внешнего пути окисления.

Через 5 суток содержание продуктов ПОЛ и ТФ, а также значения ДЧ/М и дыхательного контроля, были такими, как у контрольных животных, но фосфорилирующая активность митохондрий снижалась. На 10 сутки, в период максимального падения температуры тела животных (на 1,4 ± 0,3°С), скорость

потребления кислорода митохондриями в активном и отрегулированном состояниях (МС-4 и МС-3 по Чансу) возрастала, дыхательный контроль и ДЧ^ снижались, однако одновременно увеличивалась фосфорилирующая активность. Накопления продуктов ПОЛ не происходило, вязкость липидов мембран митохондрий оставалась сниженной. Именно на этот срок приходились существенная активация микросомальной моноокси-геназной системы и повышение содержания ТФ в печени, в то время как непосредственно в митохондриях оно не отличалось от контрольного (рис. 4). Фактором стабилизации свободнора-дикальных процессов в этот период становилось, на наш взгляд, само терморегуляторное разобщение, активную роль в котором в митохондриях печени на холоде играет АТФ-АДФ-антипортер (Шабалина и др., 1995; Panin et al., 1996). В период максимального снижения температуры тела животных на 10 сутки пребывания на холоде он функционировал как ионная пора - усиливал диссипацию энергии, косвенно способствуя при этом снижению генерации АФК (Скулачев, 1995; Papa, Skulachev, 1997).

Таким образом, только через сутки воздействия холода изменение функциональной активности митохондрий печени могло быть связано с накоплением продуктов ПОЛ. Данных, указывающих на участие продуктов ПОЛ в адаптивном разобщении, регистрируемом на 10 сутки пребывания крыс на холоде, не получено. Повышение энергизации митохондрий печени к концу срока пребывания на холоде сопровождался снижением в них продуктов ПОЛ, вязкости липидов мембран и происходил на фоне увеличения содержания ТФ. Вклад печени в термогенез снижайся, но основная функция митохондрий -способность синтезировать макроэрги - усиливалась. Дыхательный контроль и ДФм печени адаптированных крыс возрастали, что позволяло поддерживать содержание АТФ и общий пул адениннуклеотидов на уровне контроля, но, как показали расчеты фосфатного потенциала и "энергетического заряда" печени, полностью не компенсировало возросшие на холоде энергетические затраты организма (Панин и др., 1995; Колпаков, 1996).

Учитывая закономерности внутриклеточного распределения (Rajram et al., 1973; Feingold, Colby, 1992), можно предположить, что на 10 сут происходило повышение содержания ТФ в ядрах клеток печени. В ядрах ТФ, взаимодействуя со специфически связывающим ТФ белком, активно связывается с хрома-

гином (Капралов и др., 1994). Как показали наши исследования, преимущественное накопление ТФ происходит в транс-крипдионно активном хроматине. Такие результаты хорошо согласуются с известной способностью ТФ влиять на транскрипционную активность хроматина, повышать активность ядерной РНК-полимеразы (Губский, Левицкий, 1991; Guarnieri et al., 1980; Петрова и др., 1994; Капралов и др., 1994) и усиливать таким образом синтетические процессы.

Токоферол и ускоренная адаптация к холоду

Модели ускоренной адаптации к холоду, в которых используются дробные экспозиции (LeBlanc, 1967), к природным условиям ближе, чем длительное непрерывное воздействие низких температур. В условиях ограничения подвижности рост холодовой устойчивости животных происходит уже в результате однократного охлаждения при плюсовых температурах (Швецова, 1977; Talan et al., 1984; Гилинский, 1994), но четкие сдвиги наблюдаются не сразу, а через два-три дня после тренинга (Пастухов, 1971; Гилинский, 1994). Полуторачасовое воздействие - время, достаточное для изменений активности ПОЛ и физико-химических характеристик мембран и в случае иммобилизации животных (Голиков, 1987; Liu et al., 1996), и при действии холода. Предстояло выяснить, приводит ли оно, подобно непрерывному охлаждению, к перераспределению эндогенных запасов ТФ и если такие изменения происходят, оценить их связь с эффективностью формирования адаптивных навыков и индивидуальной стресс-реактивностью. Поскольку ускоренную адаптацию связывают в основном с изменениями центральных механизмов регуляции, а продукты ПОЛ ряд авторов рассматривает как "нейрохимические корреляты стресса" (Гуляева, 1989; Левшина, Гуляева, 1991), особое внимание уделялось оценке ПОЛ в мозге животных.

Способность животных поддерживать температуру тела в результате первого охлаждения возрастала: при повторном воздействии через 48 час её потери снижались в 2,4 раза (с 3,51 ± 0.62° до 1,44 ± 0.28°, р< 0.03). И первое, и повторное охлаждения приводили к активации гипофизарно-надпочечниковой системы, кортикостерон в крови повышался, соответственно, с 0.16±0.03 до 0.79Ю.06 и 0,68±0.06 мкг/ мл (р < 0,001).

Содержание ТФ после первого воздействия возрастало в надпочечниках в 1,5 раза (р = 0,047), а после повторного - в 2

1 - контроль, 2-1-е охлаждение, 3 - 2-е охлаждение.

Рис. 7. Содержание ТФ в тканях крыс при ускоренной адаптации к холоду.

раза в сыворотке крови (р = 0,001) и на 25% - в БЖТ (р 0,039), в мозге достоверных изменений не выявлено (рис.7 Содержание продуктов ПОЛ в мозге после первого воздействи оставалось таким, как в контроле, а после повторного при сл сутствии изменений первичных продуктов - диеновых конък гатов - содержание конечных - оснований Шиффа снижалос (р=0,045). В надпочечниках и БЖТ концентрация продукте ПОЛ не менялась, и только в сыворотке крови после первог охлаждения возрастала на 18% (р=0,042), но значимо не отл! чалась от контрольной после второго.

Таким образом, ускоренная адаптация к холоду сопровоя далась выраженной активацией механизмов неспецифическс го напряжения, однако чрезмерной активации процессов ПО в тканях животных, как и при адаптации к длительному во: действию холода, не происходило. Отсутствие активации пр< цессов ПОЛ на фоне повышенного уровня кортикостерона крови при повторном воздействии холода, на первый взгля, снимает вопрос о связи между этими показателями: изм! нения содержания продуктов ПОЛ при действии холода не о* ражают выраженность стресс-реакции. Между тем анализ да] ных показал, что такая связь есть, но ее характер существен! изменяется при повторном охлаждении. Слабая у контрольнь

крыс отрицательная корреляция между содержанием кортико-стерона и продуктов ПОЛ в сыворотке крови (г = - 0,34, р = 0,462) несколько возрастала после первой экспозиции (г = -0,454, р =0,259), а после второй - приближалась к единице (г = -0,961, р = 0,001), т.е. была на уровне функциональной связи. После повторной экспозиции возникала также отрицательная связь между кортикостерояом сыворотки и содержанием продуктов ПОЛ (диеновых конъюгатов и оснований Шиффа) в полушариях головного мозга (р <0,05). В то же время связь между содержанием кортикосгерона в крови и продуктов ПОЛ в тканях с показателем качества адаптивных перестроек - падением температуры тела при охлаждении - отсутствовала. При первой экспозиции потеря температуры зависела только от массы тела животных (г = - 0.9, р = 0.03). При повторной экспозиции эта связь утрачивалась, но эффективней поддерживали температуру тела животные с более высоким содержанием ТФ в надпочечниках (г = - 0.8, р = 0.03) и в мозге (в правом полушарии - г = - 0.9, р = 0.002, в левом - г = - 0.8, р = 0.016).

Появление обратной связи между снижением температуры тела и содержанием ТФ в надпочечниках могло быть обусловлено его влиянием на состояние и реактивность коры надпочечников. ТФ мог определенным образом повлиять и на центральные механизмы формирования терморегуляционного следа. При ускоренной адаптации этот процесс во многом схож с формированием памяти в моделях с односеансовым обучением. Известно, что ТФ улучшает сохранение следа памяти, способен вызывать длительную потенциацию мозга и тем самым облегчать обучение (Клименко и др., 1987; Yehuda et al., 1996; Stoll et al., 1996; Nilova, Polezhaeva, 1996). Эти факты, а также возникновение других новых корреляционных связей могут рассматриваться как проявления формирования адаптивных навыков и оптимизации ответа организма на стрессор-ное воздействие. Одной из причин появления отрицательной связи между уровнем продуктов ПОЛ и кортикостерона в крови животных при повторном охлаждении могла быть способность соединений стероидной природы проявлять антиокси-дантные свойства (Goodman, 1996), стабилизировать структуру мембран. Однако при первой экспозиции на холоде повышение кортикостерона было не менее существенным, чем при второй. Это позволило предположить, что связь между концен-

трацией продуктов ПОЛ и гормона в большей степени обусловлена его влиянием на системы антиоксидантной защиты.

Физико-химические характеристика мембран тимоцитов при ускоренной адаптации к колоду

Преобразования структуры мембран и биоэнергетических процессов при ускоренной адаптации к холоду оценивали, измеряя вязкость липидов мембран и трансмембранный потенциал тимоцитов (Avyr) - сумму потенциалов на плазматической и митохондриальных мембранах. Являясь индикатором функционального состояния митохондрий, Ац/Т чутко реагирует на изменения окружающей среды (Rottenberg, Wu, 1998; da Silva et al.,1998). При длительном воздействии холода его значения коррелируют с Ду митохондрий печени (г = +0,66, р = 0,029) и лейкоцитов крови животных (г = +0,88, р = 0,000), отражая общую направленность изменений энергетических процессов.

Холод не влиял на содержание ТФ в тимоцитах, но вязкость липидов мембран и после первого, и после повторного охлаждений была повышена (~ в 1,5 раза), а Дц/Т - снижен (с - 210 ± 3 до -191 ± 4 и -194 ± 4 мв, соответственно, р < 0,01). Повторная экспозиция, в отличие от первой, активировала ПОЛ в тимоцитах, повышая содержание диеновых конъюгатов в 1,6 раз. Между их содержанием и Л\|/т возникала отрицательная связь (г = - 0.82, р = 0.04). При длительной адаптации к холоду обусловленных активацией ПОЛ изменений А\|/т не наблюдалось -накопление продуктов ПОЛ сопровождалось компенсаторным ростом содержания в тимоцитах токоферола. Появление такой связи при ускоренной адаптации могло быть свидетельством участия продуктов ПОЛ в терморегуляторном разобщении, однако если при длительной адаптации к холоду изменения Дц/Т коррелировали с изменениями температуры тела, то при ускоренной адаптации прямая связь между значениями Av)>т, температуры тела и её потерей при охлаждении отсутствовала. В то же время Лут после повторного охлаждения был ниже у животных, менее эффективно поддерживавших температурный гомеостаз при первом контакте с холодом (г = -0,76, р = 0,05). Это дает основание предполагать, что не накопление продуктов ПОЛ ведет к снижению потенциала, а низкое энергетическое состояние клеток становится причиной недостаточности антиоксидантных механизмов, усиления генерации

АФК (Papa, Skulacheev, 1997) и, как следствие, активации сво-боднорадикальных процессов.

Повышение эффективности разобщения окисления и фос-форилирования при повторном воздействии холода - необходимое условие адаптивных терморегуляторных преобразований (Хаскин, 1975; Скулачев, 1989). Снижение Дц/Т тимоцитов регистрировалось и через 48 час, т.е. перед повторным охлаждением и может рассматриваться как маркер структурно-функционального следа, формирующегося в результате первого воздействия. В пользу такого предположения свидетельствуют результаты специального эксперимента, в котором первое охлаждение животных проводилось на фоне диазепама, который снижает потери тепла при первом охлаждении (Luz, Griggio, 1988), но препятствует формированию адаптивных навыков (Гилинский, 1992-1998). Такой эффект бензодиазепинов связывают с угнетением развития симптомов стресса (Shaheen, 1993), в первую очередь, - за счет их воздействия на центральные бензодиазепиновые рецепторы (Woods, Williams, 1996). Как показали наши исследования, определенную роль в этом могли играть и периферические эффекты. Под влиянием диазепама мембраны тимоцитов приобретали свойства, характерные для животных, прошедших длительную адаптацию к холоду: повышенную текучесть мембран и, главное, сниженный Д*РТ - результат разобщения процессов окисления и фос-форилирования, опосредованного взаимодействием с локализованными в митохондриях периферическими бензодиазепино-выми рецепторами (Marchetti et al., 1996). Такие изменения давали животным преимущества при первом предъявлении холода, но отменяли регистрируемый через 48 часов его следовый эффект - снижение ЛТт.

Снижение вязкости липидов мембран митохондрий печени и тимоцитов в первые часы воздействия холода на животных в модели Харта, в основе которого лежит увеличение непредельности липидов мембран - универсальная реакция на холод. Повышение вязкости через сутки при длительной адаптации, а при ускоренной адаптации в условиях ограничения подвижности животных - уже через полтора часа, очевидно, явилось следствием происходившего с участием ПОЛ снижения непредельности липидов и косвенно свидетельствует о недостаточности антиоксидантных механизмов. Такая реакция также является компенсаторным механизмом срочной пластической адаптации мембран, направленным на повышение их устойчи-

вости к окислению (Бурлакова и др., 1975; Тюрин и др.,-1998; Аврова, 1999), однако она не специфична и противоположна специализированной реакции на холод.

Анализ связи между показателями активности ПОЛ и уровнем глюкокортикоидов в крови людей в экстремальных ситуациях, связанных с воздействием холода

Выясняя, не является ли появление отрицательной связи между уровнем продуктов ПОЛ и кортикостерона в крови при ускоренной адаптации к холоду частным случаем, мы проанализировали результаты обследования людей в экстремальных ситуациях, связанных с воздействием холода. Как пример непродолжительного воздействия взят заплыв в холодной воде спортсменов - членов Ассоциации зимнего марафонского плавания. Более длительного - результаты 3-х месячного трансарктического перехода (СССР - Северный полюс - Канада, 1-е контрольное обследование - в Москве), участники которого подвергались исключительно суровым смешанным - непрерывным Холодовым, мышечным и психологическим нагрузкам. И третий - сезонные изменения содержания продуктов ПОЛ и глюкокортикоидов в крови жителей Заполярья. Суточные ритмы содержания продуктов ПОЛ и их сезонные изменения подробно описаны ранее (Колосова, 1981), однако некоторые факты нашли своё объяснение лишь в свете экспериментальных исследований последних лет.

Сопоставление масштабов изменения уровня продуктов ПОЛ привело к вполне ожидаемому выводу - степень активации ПОЛ зависит от жесткости воздействия. Наиболее существенным накопление продуктов ПОЛ было у участников трансарктического перехода на первых этапах, когда они продвигались по пересеченной местности при температуре дс - 47°С в период полярной ночи (рис. 8). Но даже такие суровые испытания повышали уровень продуктов ПОЛ в эритроцита? обследованных в 2,5, в плазме крови - в 1,5 раза, а к концз трехмесячного перехода на фоне смягчения температурной режима содержание продуктов ПОЛ в плазме и эритроцита: возвращалось к предпоходному уровню, демонстрируя исклю чительные компенсаторные возможности систем антиокси дантной защиты организма. Проявлением напряжения антиок сидантных механизмов явились возвращение уровня ТФ ] плазме крови к исходному и существенная (к концу похода 1 1,9 раз, р<0,001) активация СОД в эритроцитах, косвенно сви

детельствующая об усиленной генерации АФК. Стабилизация ПОЛ регистрировалась на фоне существенного роста концентрации кортизола в крови, который на начальных этапах перехода, несмотря на повышенную экскрецию метаболитов гормона (Тигранян, 1990), достоверно не отличался от контрольного уровня. При анализе результатов обращал на себя внимание факт напряжения в системе антиоксидантной защиты обследованных уже через несколько дней после перелета в Заполярье, за 12 дней до начала йохода: содержание ТФ в плазме возрастало в 1,7, в эритроцитах - в 1,6 раза (р<0,001), в то время как показатели активности ПОД не изменялись.

_Продукты ПОЛ, плазма

I I Токоферол, плазма

Продукты ПОЛ, эритроциты НИ Токоферол, эритроциты

Диксон 1 этап 2 этап Северный Канада

полюс

Рис. 8. Содержание продуктов ПОЛ и токоферола в плазме крови и эритро-датах участников трансарктического перехода (в плазме - МДА, в эритроцитах флюоресцирующие продукты ПОЛ - основания Шиффа). Результаты приведены ) % к зарегистрированным во время предварительного обследования в Моск-»е.

Километровый заплыв в воде с температурой +10°С повыпал концентрацию ТФ (р<0,01), но не влиял на содержание тродуктов ПОЛ и кортизола в крови пловцов-членов ассоциа-даи зимнего плавания, однако приводил к появлению достоверной отрицательной связи между этими показателями (г = -0,79, р = 0.012). В то же время и в состоянии покоя, и после :аплыва концентрация кортизола в крови была ниже у спорт-:менов с более высоким уровнем ТФ в крови (г = - 0,6, р = ),025 и г = - 0,72, р = 0,022, соответственно)

Холод оказался значимым фактором и для жителей Заполняя, однако разница между среднесуточными уровнями со-

держания продуктов ПОЛ в эритроцитах работающих на открытом воздухе и в закрытом помещении людей составляла всего 12% (р<0,05), была близка амплитуде суточного ритма и регистрировалась только в холодные периоды года. Среднесуточные уровни продуктов ПОЛ в эритроцитах были ниже у людей с более высокой концентрацией глюкокортикоидов в крови (осенью: г = - 0,60, р < 0,01 для работающих на открытом воздухе и г = -0,88, р <0,001 - для работающих в помещении; зимой, соответственно, г = - 0,45, р < 0,05 и г = -0,73, р < 0,01).

Связь между показателями подтвердили исследования на животных, в которых суточный ритм глюкокортикоидов модифицировали инверсией светового режима или введением экзогенных гормонов в различное время суток. У животных увеличение интенсивности процессов ПОЛ в печени и эритроцитах свойственно фазам повышения метаболизма и совпадает с подъемом двигательной активности. Инверсия светового режима, а также внешние вмешательства в ритм глюкокортикоидов без изменения освещенности сами по себе вызывают модификации ритма активности ПОЛ и антиокислительной активности липидов (Колосова и др., 1983). Как показал анализ данных об уровнях и амплитудно-фазовых отношениях между ритмами глюкокортикоидов, продуктов ПОЛ и антиокислительной активности, глюкокортикоиды выступают в роли модуляторов суточных колебаний ПОЛ и суммарной антиокислительной активности липидов, в значительной степени определяющейся ТФ-ом. Действие гормонов может быть как прямым, поскольку сами они обладают антиоксидантными свойствами (Гукасов и др., 1974), так и опосредованным их метаболическими эффектами. Появление отрицательной связи между показателями активности коры надпочечников и уровнем ПОЛ в тканях человека и животных в условиях воздействия холода свидетельствует об усилении роли глюкокортикоидов в регуляции ПОЛ в условиях напряжения метаболизма. Анализу природы этой связи посвящен следующий раздел работы.

Влияние глюкокортикоидов и адреналина на содержание токоферола и активность ПОЛ в тканях крыс

Процессы ПОЛ и антиоксидантные системы рассматриваются как локальные стресс-реализующие и стресс-лимитирующие системы (Малышев, Манухина, 1998). Ключевая роль в стабили-

зации ПОЛ, как правило, отводится авторегуляторным механизмам, согласно которым повышенный расход антиоксидан-тов при интенсификации ПОЛ становится причиной перераспределения их в организме. Наши исследования показали, что мобилизация факторов антиоксидантной защиты реализуется обычными механизмами неспецифической адаптационной реакции и происходит с участием гормонов - адреналина и глю-кокортикоидов. Их эффекты не отменяются ТФ, включение которого в рацион животных существенно повышает его содержание в тканях и снижает в них активность ПОЛ.

( I До введения адреналина

| Через час после введения адреналина (0,1 мг.кг) 20} 18 16

Контроль + Токоферол

701 60 50 403020 10 0

- контроль НВ - адреналин

I I - + токоферол Т

-+ токоферол + адреналин

Контроль + Токоферол

Рис. 9. Влияние адреналина (0,1 мг/кг за час внутримышечно) на содержание ТФ в плазме крови (а) и в печени (б), активность глутатионредуктазы и

глутатионпероксидазы в печени (в) контрольных и получавших ТФ (по 4 мг 7 дней) крыс.

Активность Активность

глугатионредухтазы глутатаонпероксвдазы

Как показали исследования, введение адреналина (0,1 мг/кг) через час приводит к росту содержания ТФ в печени контрольных крыс - в 1,8, получавших ТФ - в 1,6 раза, в плазме крови, соответственно - в 1,5 и 1,3 раза (рис. 9). Уже сам прием ТФ повышал активность глутатионпероксидазы, что, однако, не отменяло её прироста в ответ на введение гормона. При отсут-

ствии значимых изменений в содержании восстановленного глутатиона и у опытных, и у контрольных животных повышалась активность глутат и о н реду ктазы в печени и крови, глута-тионпероксидазы - в печени (в крови не исследовалась).

Таблица 1.

Изменения содержания Т4> в тканях контрольных в получавших ТФ (7 дней по 4 мг) крыс в ответ на введение дексаметазона (IOO мг/кг)

Время после введения дексаметазона животным

Ткань контрольным получавшим токоферол

0 3 час 5 час 0 3 час 5 час

Печень 13,8 ± 0,9 21,7±0,29* 26,0 ± 1* 35 ±3,1« 49 ±3,2" 72 ±10'*

Надпочечники 166 ± 16 182 ± 18 176 ± 21 210 ±13' 232 ±26» 245 ±19»

Плазма крови 6,2 ± 0,3 10,4 ± 2,0* 13,0 ± 1,7» 12,2 ± 1,4« 14,3 ± 0,6« 16,1± 0,6

ВЖТ 57 ± 6 - 40 ±3,1 * 87 ± 8» - 65 ± 6' *

Эпиди-дималь-ный жир 65 ± 3 52 ± 5* 69 ±5 51 ± 0,3*

Достоверны: * - отличия между контрольными и получавшими ТФ крысами; * - изменения в ответ на ведение гормона.

Введение синтетического аналога глюкокортикоидов - дексаметазона также вызывало изменения содержания ТФ в тканях животных, которые были однонаправленными у контрольных и получавших ТФ крыс (табл. 1). Его содержание увеличивалось в печени и плазме крови, но снижалось в ВЖТ и эпидидимальном жире, достоверно не изменилось - в надпочечниках. Введение гормона вызывало рост содержания продуктов ПОЛ в печени, однако увеличение ТФ опережало его. У получавших ТФ крыс показатели изменялись одновременно, но и при максимальном накоплении - через 3 часа - содержание продуктов ПОЛ достигало лишь исходного для контрольных животных уровня.

Очевидно, перераспределение ТФ происходит параллельно с одним из первичных эффектов адаптивных гормонов - усилением их жиромобилизующего эффекта и формированием в печени транспортной формы эндогенного жира - липопротеидоЕ (Панин, 1983). С ними связана большая часть циркулирующего пула ТФ, концентрация которого зависит также от содержани? ТФ-транспортирующего белка (Arita et al., 1995; Hentati et al. 1996). Факт перераспределения ТФ в ответ на введение дексаметазона подтвердился в работе Feingold и соавт. (1999), пс данным которых эффект гормона не зависит от АКТГ.

Опыты на адреналэктомированных животных (билатеральную адреналэктомию и ложную операцию контрольным крысам производили за 8 сут до исследования) показали, что действие кортикостероидов на ПОЛ и физико-химические характеристики мембран может быть опосредовано и их влиянием на ферментативные факторы антиоксидантной защиты. Адреналэктомия снижала активность глутатионредуктазы - в 2 раза (р<0,001) и глутатионпероксидазы на 15% (р<0,05). Включение ТФ в рацион животных в послеоперационный период не только предупреждало вызываемые адреналэктомией накопление продуктов ПОЛ, снижение активности глутатионпероксидазы, нарушения структуры мембран, но восстанавливало и даже повышало, по сравнению с ложнооперированным контролем, стресс-устойчивость животных. Такой результат, на наш взгляд, может рассматриваться и как свидетельство того, что активация ПОЛ и нарушение структурно-функциональных характеристик мембран - важное патогенетическое звено адрена-лэктомии, и как доказательство участия гормонов коры надпочечников в регуляции активности ферментативных факторов антиоксидантной защиты. Повышение ТФ-ом активности глутатионпероксидазы у контрольных крыс и восстановление её -у адреналэктомированных, возможно, обусловлено установленной Ы и соавт. (1996) способностью ТФ стабилизировать мРНК глутатионпероксидазы.

Таким образом, глюкокортикоиды и адреналин влияют на активность ферментативных факторов антиоксидантной защиты и способны вызывать перераспределение ТФ между тканями организма. Направленность изменений содержания ТФ свидетельствует о его мобилизации из жировой ткани, в том числе - из БЖТ.

Влияние дополнительного приема токоферола на процесс длительной адаптации к колоду

Эффекты антиоксидантов связывают прежде всего с предупреждением выхода из-под контроля свободнорадикальных процессов. Закономерен вопрос, каков механизм их действия в условиях стресса, благодаря мобилизации собственных систем антиоксидантной защиты не приводящего к чрезмерной активации ПОЛ. Поскольку антиоксиданты тормозят стресс-реакцию, достаточность которой - необходимое условие эффективного преобразования терморегуляции на холоде (Мошкин,

1992), особое внимание было уделено влиянию ТФ на состояние и реактивность коры надпочечников.

Опытные животные начинали получать ТФ с кормом за 7 дней до начала воздействия холода (по 4 мг в сутки) и получали его затем на всем протяжении эксперимента. К моменту помещения на холод содержание ТФ в тканях опытных крыс увеличивалось: в печени - в 2,5 раза, в плазме крови - в 2, в БЖТ - в 1,5 и в надпочечниках - в 1,3 раза (р<0,001). Содержание продуктов ПОЛ в тканях снижалось, а устойчивость ли-пидов к индуцированному in vitro аскорбат-зависимому ПОЛ (исследовали печень) существенно росла, что проявлялось на холоде - в тканях опытных крыс, в отличие от контрольных, повышения продуктов ПОЛ не было. Сниженная ТФ-ом скорость индуцированного ПОЛ в гомогенатах печени, через 5 -24 часа воздействия холода снижалась еще в 1,5 раза и была уже в 24 раза ниже соответствующего контроля. Через 49 суток содержание продуктов ПОЛ (диеновых конъюгатов и МДА) в печени опытных крыс было ниже и по сравнению с охлаждавшимся контролем, и по сравнению с крысами, получавшими ТФ в тепле. Содержание ТФ, соответственно повышалось. Важно отметить, что если у крыс, получавших ТФ 49 дней в условиях температурного комфорта, содержание его превышало исходный уровень в 1,3, (р<0,01) то на холоде - в два раза, что подтвердило наше предположение о том, что на холоде способность усваивать ТФ из корма возрастает (р<0,001).

Длительное воздействие умеренного холода (49 сут при +5°С) повысило в этом опыте выживаемость контрольных крыс при остром охлаждении (-27°С) в 1,8 раз (р < 0,01). Прием ТФ на протяжении всего пребывания на холоде существенно повышал выживаемость - она возрастала в 3,3 по сравнению с интакт-ным контролем и в 2,9 раза (р<0,001) - по сравнению с животными, получавшими ТФ в условиях температурного комфорта. Выживаемость животных, получавших ТФ в условиях температурного . комфорта, не менялась. Такой результат, на первый взгляд, представляется противоречивым: накопление ТФ в тканях животных на холоде росло и на обычном, и на обогащенном витамином рационе.

Одной из причин отсутствия эффекта могла быть способность ТФ препятствовать терморегуляторному разобщению окисления и фосфорилирования. Действительно, прием ТФ в тепле (7 дней по 4 мг) не влиял на функциональное состояние

митохондрий печени, но в случае воздействия умеренного холода (24 час при + 5°С) предупреждал снижение дыхательного контроля и АЧ\,, предотвращая одновременно и снижение температуры тела животных. Наряду с этим ТФ предупреждал увеличение вязкости лип идо в мембран и содержания продуктов ПОЛ. Прием ТФ вдвое повышал его содержание в митохондриях, но на холоде оно ещё росло и через сутки было уже в 3,3 раза выше (р<0,001), чем в митохондриях охлаждавшегося контроля. Отсутствие разобщения окисления и фосфорилиро-вания в митохондриях печени опытных крыс могло быть обусловлено уменьшением вклада печени в теплопродукцию. Однако ТФ предотвращал снижение ДЧ* и в тимоцитах животных.

Существует несколько механизмов, по которым ТФ может препятствовать разобщению. Конечным звеном в цепи терморегуляционного ответа, ведущего к разобщению на холоде, служат жирные кислоты (Скулачев, 1969). ТФ способен ограничивать их эффект, образуя с ними комплексы (Ерин и др., 1983; Мткоу ^ а1., 1989). Предварительный прием ТФ вдвое (р<0,001) повышал концентрацию НЭЖК в крови животных, но в условиях температурного комфорта на сопряженность процесса окисления и фосфорилирования не влиял. Действие антиоксид антов в хроническом и остром стрессе аналогично действию р-адреноблокаторов, обладающих свойством тормозить развитие химического термогенеза (Меерсон, 1993). Изменяя физико-химические характеристики плазматических мембран, ТФ может дозозависимо влиять на количество и аффинитет ¡3-адренорецепторов (ЬоеэЬе^ С. et а1., 1989), на активность аде-нилатциклазы, фосфодиэстеразы и фосфолипаз (Мальцева и др., 1995), предупреждая таким образом разобщающий эффект катехоламинов. И, наконец, взаимодействуя с АФК и пе-роксирадикалами, ТФ предотвращает их возможное влияние на сопряженность процессов окисления и фосфорилирования.

В то же время и при ускоренной, и при длительной адаптации к холоду ТФ накапливался в БЖТ, митохондрии которой обладают повышенной способностью к разобщению. Возможно, и в БЖТ реализуется обнаруженный нами в клетках печени феномен избирательного накопления ТФ в различных структурах клетки. В БЖТ адаптированных к холоду животных разобщение обеспечивается в основном термогенином, однако описанная ОоиЬегп (1991) динамика изменений А1Р митохондрий БЖТ при длительном воздействии холода совпадает с зарегистрированными нами изменениями АТ митохондрий печени,

тимодитов и лейкоцитов крови. Как показали расчеты, независимо от механизмов разобщения, на сопряженность процессов окисления и фосфорилирования, в том числе - в клетках, не способных внести заметный вклад в повышение теплопродукции на холоде, влияют изменения температуры тела животных (табл. 2).

Таблица 2.

Показатели, с которыми коррелируют изменения температуры тела содержавшихся на обычном рационе крыс прн длительном воздействии холода

Показатель г Р

Токоферол митохондрий печени +0.67 0.049

Дыхательный контроль митохондрий печени + 0.91 0.001

ЛЧ' митохондрий печени + 0.78 0.013

ЛЧ' лейкоцитов крови + 0.80 0.010

Л1? тимоцитов + 0.60 0.064

Таким образом, изменяя структурно-функциональные характеристики мембран, ТФ может влиять на процесс теплопродукции в митохондриях. Предупреждение ТФ-ом терморегуля-торного разобщения и повышения потребления кислорода (Калабухов, 1964) предполагает включение в адаптивную реакцию иных механизмов, достаточных для поддержания температуры тела при действии умеренно низких температур, но не влияющих на адаптивные возможности организма животных при остром охлаждении. На уровне организма одним из наиболее важных эффектов ТФ, способных существенно изменять реакцию организма на холод, связан с его влиянием на адрено-реактивность животных.

Токоферол н адренокортикадьная реакция на холод

Исследования показали, что ТФ оказывает влияние на состояние гипофизарно-надпочечниковой системы и в условиях температурного комфорта, причем характер его влияния существенно зависит от длительности применения антиоксидан-та. Однократная внутрибрюшинная инъекция а-ТФ ацетата (75 мг/кг) приводила к повышению концентрации кортико-стерона в крови в два раза (р<0,001). Добавление ТФ в корм животных в течение 7 дней (по 4 мг) повышало ее в 1,5 раза (с 0,091 ± 0,007 до 0,14 ± 0,012, р = 0,002), а у крыс, получавших антиоксидант в течение 49 дней, отличия в содержании гормона в крови, по сравнению с контролем, отсутствовали. Прием ТФ в течение 7 дней не изменял синтез стероидов надпочечни-

ками, а также их реакцию на АКТГ. Прием витамина в течение 49 дней отчетливо снижал синтез глюкокортикоидов (кор-тикосгерона и дезоксикортикостерона). При этом в ответ на АКТГ наблюдался выраженный прирост продукции этих гормонов, что свидетельствует о функциональном, или регулятор-ном, характере торможения фонового стероидогенеза. Дозоза-висимое влияние ТФ на состояние коры надпочечников, повышение под действием витамина уровня глюкокортикоидов заставляет по-новому посмотреть на механизмы его эффектов. Животные, у которых ТФ повысел концентрацию глюкокортикоидов в крови и функциональные резервы надпочечников, по существу напоминают повторно стрессируемых, и уже поэтому их реакция на стресс должна меняться. Очевидно, что если важнейший фактор, определяющий характер адренокорти-кальной реакции на вторичный стрессор - величина интервала между двумя воздействиями (Подвигина, 1998), то для эффектов ТФ принципиальным является фактор дозы и длительности применения антиоксиданта.

Рис. 10. Содержание кортикостерона в крови контрольных и получавших ТФ (по 4 мг, начало приема - за 7 дней) крыс при длительном воздействии холода (+ 5°С).

ТФ (по 4 мг в течение 7 дней перед воздействием) существенно изменил гормональный ответ подопытных животных на холод. Период активации коры надпочечников сокращался,

однако максимальный подъем уровня кортикостерона в крови регистрировался уже через 2 час, когда его содержание в крови получавших ТФ крыс было даже несколько выше, чем у контрольных (рис. 10). Через 5 час показатель снижался до исходных значений и оставался таким же и через 24 час пребывания на холоде. Через 49 суток уровень кортикостерона в крови опытных животных становился таким, как у контрольных крыс - интактных и получавших ТФ 49 дней в условиях температурного комфорта, но ниже, чем перед началом воздействия, когда он возрастал в результате 7-дневного приема витамина.

г«

10-

I | Контроль (без АКТГ) ГР1 Контроль + АКТГ

Токоферол (без АКТГ) Токоферол + АКТГ

2 часа 5 час 24 час

Продолжительность воздействия

49 сут

Рис. 11. Продукция кортикостерона срезами надпочечников контрольных и получавших ТФ крыс и её изменения при внесении в среду инкубации АКТГ. Инкубация - 2 часа при 37°С в бикарбоиатном буфере Кребса-Рингера с 200 М1% глюкозы, насыщенном смесью 95% Ог и 5% СОг. Добавка АКТГ - б ЕД на г ткани.

Через 2 час воздействия холода продукция стероидов надпочечниками контрольных и опытных крыс не отличалась от исходных значений. Через 5 час синтез дезоксикортикостерона и кортикостерона возрастал у контрольных и опытных животных практически до одного уровня. Но при добавлении в среду инкубации АКТГ надпочечники получавших ТФ крыс давали

достоверный прирост продукции кортикостерона, в то время как в контроле его не было. Через 24 час пребывания на холоде у контрольных животных продукция кортикостерона, как и его концентрация в крови, оставалась повышенной, в то время как у опытных крыс возвращалась к исходным значениям (рис. 10, 11). Через 49 сут пребывания на холоде, несмотря на повышенное содержание кортикостерона в крови контрольных животных, его продукция не только не была увеличена, но и имела тенденцию к снижению. Продукция дезоксикортикостерона также снижалась, а реакция на АКТГ отсутствовала. Такие изменения свидетельствуют о торможении ранних, АКТГ-зависимых этапов биосинтеза стероидов у адаптированных к холоду крыс. У адаптированных на фоне ТФ животных синтез кортикостерона надпочечниками был снижен, но, в отличие от адаптированного к холоду контроля, реакция на АКТГ была хорошо выражена.

Таким образом, ТФ увеличивает чувствительность надпочечников к АКТГ, но сокращает время повышенной секреции глю-кокортикоидов. Необходимое на холоде повышение энерготрат, усиление метаболизма обеспечивается у получающих ТФ животных более низким, по сравнению с контролем, уровнем циркулирующих стероидов. Такая ситуация возможна при условии изменения под влиянием ТФ чувствительности клеток органов-мишеней к гормональным воздействиям.

Вдняние токоферола на метаболическую реакцию печени крыс на глкжокортнкоиды

Изменение чувствительности периферических тканей к гормональным воздействиям - один из механизмов, лежащих в основе адаптивных перестроек метаболизма на холоде (LeBlank, 1969; Шорин и др., 1980; Okano et al., 1993; Habara, Kuroshima, 1987). Как показали наши исследования, ТФ изменяет реакцию печени на глюкокортикоиды в том же направлении, что и длительная адаптация к холоду: ускоряет реализацию метаболического ответа. Объектом служили адаптированные к холоду (49 сут) и получавшие ТФ (7 дней по 4 мг) крысы. Через 0,5-5 час после внутрибрюшинного введения им дек-саметазона (100 мкг/кг) исследовали хорошо известные эффекты глюкокортикоидов - их способность к повышению в печени запасов гликогена и к активации тирозинаминотрансферазы (TAT). В печени адаптированных к холоду животных базальная активность TAT оказалось достоверно выше (1,02 ± 0,05 и 0,82± 0,03 мкмоль х ч'1 х мг белка1, соответственно), а содержание

гликогена - ниже, чем у контрольных животных (р<0,001). В ответ на введение дексаметазона активность TAT у контрольных животных повышалась через 5 час в 6 раз, в то время как у адаптированных к холоду крыс она увеличивалась только в 4 раза, но этот уровень активности достигался уже через 3 час после инъекции гормона (рис. 12а). Также через 3 час в печени адаптированных крыс достигало максимального значения и содержание гликогена (рис. 126). Результаты позволяют предполагать, что метаболическая реакция печени адаптированных к холоду животных реализуется в более ранний период после введения гормона.

Включение ТФ в рацион не меняло активность TAT и содержание гликогена в печени животных, однако динамика их изменений в ответ на введение гормона отличалась и напоминала характерную для адаптированных к холоду крыс (рис. 13а). Максимальных значений показатели также достигали через 3 часа: активность TAT у получавших ТФ крыс повышалась в 6,7 раз, у контрольных - в 3,6, а через 5 час она возрастала в печени контрольных животных в 5,2, а опытных - в 7,5 раза. Содержание гликогена в печени опытных крыс уже через 3 час было таким, как у контрольных через 5 час после введения гормона, оставаясь и через 5 час более высоким, чем у контрольных животных (рис. 136).

Время после введения гормона, час

Рис. 12. Изменения активности ТАТ (а) и содержания гликогена (б) в печени контрольных и адаптированных к холоду (7 недель) крыс в ответ на введение дексаметазона (100 мг /кг).

—□— Контроль —а—Токоферол

-т—*—1—•—1—»—I—'—I—>—1—• 3 —I—•—I—•—I—■—I—«—I—»—г

012345 012345

Время после введения гормона, час

Рис. 13. Изменения активности TAT (а) и содержания гликогена (б) в печени контрольных и получавших токоферол (7 дней по 4 мг) крыс в ответ на введение дексаметазона (100 мг /кг).

Ранее нами показано, что синтетический антиоксидант ио-нол ещё в большей степени, чем ТФ усиливает гормональную индукцию TAT. Наряду с этим, он, как и ТФ, повышает уровень кортикостерона в крови, не изменяя базовый уровень активности фермента (Шорин, Колосова и др., 1980; Селятиц-кая и др., 1986). Такие результаты могли бы означать, что ан-тиоксиданты снижают чувствительность печени к действию кортикостероидов. Однако индукция TAT под действием дексаметазона не только не падает, но даже возрастает, что позволяет предполагать, что антиоксиданты изменяют не чувствительность ткани к гормонам, а либо соотношение активной и неактивной форм кортикостероидов в крови, либо скорость их метаболизма в печени. Есть аргументы в пользу того и другого предположения. Известно, что НЭЖК, меняя в зависимости от своей непредельности физико-химические свойства белков, модулируют связывание глюкокортикоидов со специфическими белками-носителями в плазме и рецепторами в тканях (Коггева, Безуглов, 1998). ТФ, как и адаптация к холоду, повышает непредельность мембранных липидов и липидов липо-протеидов сыворотки крови (Jacob, Burn, 1996), влияет на концентрацию НЭЖК в крови. ТФ мог изменить и скорость метаболизма стероидов в печени - он увеличивает в ней содержание цитохрома Р-450 (Chen, 1998; Lii, 1998), а при длительном воздействии холода, как показано выше, активация монооксигеназной системы, метаболизирующей стероиды, со-

провождается накоплением ТФ в микросомах. Нельзя исключить и возможность непосредственного влияния ТФ на взаимодействие глюкокортикоидов с генетическим аппаратом. Ранее мы регистрировали более значительное, по сравнению с контролем, увеличение матричной активности хроматина в клетках печени получавших ТФ крыс в ответ на введение дексаме-тазона (Колосова, Куликов, 1989). Прием ТФ (7 дней) повышает содержание ТФ как в печени крыс, так и в выделенной из неё ядерной фракции. Факт более высокого содержания ТФ в транскрипционно активном хроматине, по сравнению с его неактивной фракцией (соответственно, 7,2 ± 0,67 и 2,7 ± 0,31 маг /мг белка или 12,1 ± 1,00 и 1,8 ± 0,09 маг / мг ДНК), а также данные Окатов (1998) о влиянии ТФ на экспрессию генов глюкокортикоидами, позволяют ставить вопрос о возможной связи между изменением метаболической реакции клеток печени на глюкокортикоиды и содержанием ТФ во фракциях хроматина.

* * *

Подводя итог, следует подчеркнуть, что установленные нами закономерности изменения процессов ПОД при длительной и ускоренной адаптации к холоду не универсальны. Известно, что достаточно уменьшить количество корма или изменить его качественный состав - и картина адаптации к холоду окажется совсем иной (Шепелев, 1978; КигавЫта, УаЪа1а, 1984). Исследования показали, что фактором, способным существенно изменить реакцию организма на холод, является ТФ. Мобилизация и повышенный расход антиоксиданта характерны для ранних стадий адаптационного процесса, а максимальное его накопление происходит в период активного формирования специализированных механизмов адаптации. Назначая анти-оксиданты в качестве адаптогенов, их предполагаемый эффект связывают, как правило, с необходимостью предупреждения чрезмерной активации ПОЛ. Длительное включение ТФ в рацион существенно повышает устойчивость липидов к перекисно-му окислению, но не влияет на выживаемость при действии экстремально низких температур - он эффективней, когда его применяют одновременно с действием фактора адаптации -холода. Эффекты ТФ не ограничиваются предотвращением активации свободнорадикальных процессов, а существенно влияют на адаптивные преобразования функций - на уровне мембран, органов, организма.

выводы

1. Обеспеченность токоферолом влияет на способность организма поддерживать температуру тела при длительном воздействии и эффективность формирования адаптивных навыков при ускоренной адаптации к холоду. Токоферол вовлечен в срочные адаптивные преобразования на холоде: его содержание возрастает в БЖГ и надпочечниках при долговременной и в результате ускоренной адаптации к холоду. При ускоренной адаптации формирование следа повышенной холодовой устойчивости зависит от содержания токоферола в мозге и надпочечниках животных.

2. Первоначальная реакция на холод характеризуется мобилизацией антиоксидантных механизмов: перераспределением эндогенных запасов токоферола между тканями и активацией ферментов - глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы, которая снижает уровень продуктов ПОЛ или предупреждает их накопление. Установлено, что периоды активации ПОЛ в отдельных тканях животных наблюдаются до 15 суток непрерывного воздействия холода, не совпадают по времени и связаны с адаптивными преобразованиями функций.

3. Результатом длительной адаптации (4-7 недель) к холоду становится стабилизация ПОЛ на исходном или пониженном уровне на фоне роста содержания токоферола в тканях. Способность организма накапливать токоферол на холоде возрастает: при включении дополнительного токоферола в рацион его содержание в тканях животных в условиях воздействия низких температур возрастает в большей степени, чем в условиях температурного комфорта.

4. Колебания активности ПОЛ играют роль фактора модуляции вязкости липидов мембран при действии холода. Результатом длительного воздействия холода становится снижение вязкости липидов мембран митохондрий печени и тимоцитов в на фоне стабилизации ПОЛ на исходном или пониженном уровне. При ускоренной адаптации вязкость липидов мембран тимоцитов повышается, демонстрируя неспецифический характер адаптивных преобразований.

5. При длительном воздействии холода изменения содержания токоферола в митохондриях и микросомах печени животных не совпадают по времени и направленности. Установлено, что рост содержания ТФ в микросомах печени на 10-15 сутки длительного воздействия холода сопровождает активацию мо-

нооксигеназной системы и усиление детоксикационной функции печени, а накопление его в митохондриях через 5-7 недель коррелирует с увеличением энергизации - ростом дыхательного контроля и повышением трансмембранного электрического потенциала (ДТ).

6. При длительной адаптации к холоду выявлены фазовые изменения ДЧ/ тимоцитов, лейкоцитов крови и митохондрий печени, а также дыхательного контроля митохондрий, обусловленные изменениями температуры тела животных. При ускоренной адаптации снижение А*? тимоцитов регистрируется как " следовый эффект первого охлаждения и отменяется диазепамом, препятствующим формированию следа повышенной холодовой устойчивости.

7. Включение токоферола в рацион (7 дней по 4 мг) не изменяет функциональное состояние митохондрий печени в условиях температурного комфорта, но предупреждает терморегуля-торное разобщение митохондрий при действии умеренного холода, предотвращая одновременно снижение температуры тела животных. Токоферол усиливает эффект длительной адаптации к холоду (7 недель при +5°С), повышая способность животных удерживать температуру и выживаемость при остром охлаждении (-27°С), в то время как прием витамина в условиях температурного комфорта на выживаемость при экстремально низких температурах не влияет.

8. Токоферол дозозависимо влияет на адренокортикальную реакцию организма. Непродолжительный (1-7-дневный) его прием повышает концентрацию кортикостерона в плазме крови, не изменяя секрецию гормона надпочечниками. В результате при действии холода токоферол сокращает стадию активации коры надпочечников, сохраняя их повышенную способность синтезировать стероиды в ответ на АКТГ. Длительный прием токоферола (49 дней) снижает синтез кортикостерона надпочечниками контрольных и пребывающих на холоде крыс при неизменном уровне гормона в крови и повышенной чувствительности надпочечников к АКТГ.

9. Токоферол, подобно длительной адаптации к холоду, модифицирует реакцию печени на глюкокортикоиды, ускоряя реализацию метаболического ответа - повышение запасов гликогена и активацию тирозинаминотрансферазы.

10. Адреналин и глюкокортикоиды участвуют в стрессорной мобилизации факторов антиоксидантной защиты. Их введение приводит к перераспределению токоферола в организме, ад-

реналин активирует также ферменты антиоксидантной защиты - глутатионредуктазу и глутатионпероксидазу. Эти эффекты не зависят от фоновой активности процессов ПОЛ в тканях и содержания в них токоферола, так как предварительное включение токоферола в рацион не изменяет реакцию на введение гормонов.

11. При обследовании людей и в опытах на животных установлено, что глюкокортикоиды оказывают модулирующее влияние на уровень продуктов ПОЛ в тканях организма за счет прямых и опосредованных факторами антиоксидантной защиты эффектов. Их роль в регуляции ПОЛ возрастает в условиях напряжения адаптивных механизмов, в случае адекватной реакции организма на действующий фактор формируется отрицательная связь между уровнями глюкокортикоидов и продуктов ПОЛ в крови.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Казначеев В.П., Куликов В.Ю., Колосова Н.Г., Бураева Л.Б. Некоторые биофизические механизмы адаптации человека в регионах Крайнего Севера / / Вестник АМН СССР. -1979. - N 6. - С. 3-11.

2. Шорин Ю.П., Колосова Н.Г., Селятицкая В.Г., Папафилова О.В., Куликов В.Ю. Состояние нейроэндокринной системы животных при воздействии фармакологических доз про- и антиоксидантов //В кн.: Клинические и экспериментальные аспекты общей патологии. - Новосибирск. -1980. -С.83-89.

3. Колосова Н..Г., Шорин Ю.П., Куликов В.Ю. Эндокринно-метаболичес-кие перестройки при адаптации в Заполярье //В кн. ¡Современные проблемы общей патологии в аспекте адаптации. - Новосибирск. - 1980. - С. 12-19.

4. Колосова Н.Г., Шорин Ю.П., Куликов В.Ю. Реакции перекисного окисления липидов в печени и легких крыс при долговременной адаптации к холоду. // Бюл. эксп. биол. - 1981. - Na 4. - С. 436-437.

5. Семенюк A.B., Куликов В.Ю., Колесникова Л.И., Колосова Н.Г., Ситни-кова Д.В., Салгашпс Р.И. Роль перекисного окисления липидов в регуляции активности микросомальных монооксигеназ печени гомойотермных животных при холодовом воздействии // Бюл. эксп. биол. - 1983. - т. 97. - № 1,- с. 37-39.

6. Колосова Н.Г., Мельников В.Н. Шорин Ю.П. Хаснулин В.И Роль свего-периодики и суточного ритма глюкокортикоидов в синхронизации колебаний свободнорадикального окисления липидов у крыс // Бюл. эксп. биол. -1983.-N 3,- С. 99 - 100.

7. Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. Влияние адреналина на реакции перкис-ного окисления липидов у интактных и получавших токоферол крыс / / Бюл. Сибирск. отдел. АМН СССР. - 1985,- N 6,- С. 29-31.

8. Шорин Ю.П. Селятицкая В.Г. Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. Влияние а-токоферола на реакцию надпочечников при холодовом стрессе // Бюл. эксп. биол,- 1985.- N б,- С. 669 - 670.

9. Ким Л.Б., Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. Функция внешнего дыхания, показатели красной крови и проницаемость капилляров у жителей Крайнего Севера // В кн.: Клинические аспекты полярной медицины. - М.: Медицина. -1986.- С.58-87.

10. Шорин Ю.П., Селятицкая В.Г., Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. О механизмах адаптогенного эффекта токоферола при длительном действии холода // Физиол. журнал. - 1986,- Г. 32. - В. 2. - С. 184 - 188.

11. Шишкина Л.Н., Колосова Н.Г., Маяиский Д.Н. .Изучение альвеолярных макрофагов с помощью флуоресцентных зондов // Бюл. зксп. биол. - 1986. - N 9.-С. 319-321.

12. Селятицкая В.Г., Колосова Н.Г., Герлиц И.А., Куликов В.Ю., Шорин Ю.П. Изучение роли реакций перекисного окисления липидов в изменении чувствительности печени к глюкокортикоидам при холодовой адаптации // Физиол. журнал. -1986 - Т.32.- В. б,- С. 533 - 537.

13. Колосова Н.Г., Шорин Ю.П., Селятицкая В.Г., Куликов В.Ю. Механизм повышения надежности организма с помощью антиоксидаятов. - В кн: Надежность и гомеостаз биологических систем // Киев. - Наукова думка. - 1987. - С. 162 - 168.

14. Колосова Н.Г., Матаев Р.Н., Куликов В.Ю. Влияние а-тохоферола на физико-химические свойства мембран клеток печени адреналэктомированных крыс // Бюл. зксп. биол. - 1987. - N 7. - С. 108 - 110.

15. Колосова Н.Г., Куликов В.Ю., Матаев Р.Н. Гормоноподобные эффекты токоферола // Тез.2 Всес.конференции "Биоантиоксндант". - Черноголовка. -1986. - Т.2. - С. 220.

16. Матаев Р.Н., Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. Действие гормонов коры надпочечников на распределение токоферола в организме // Тез.2 Всес. конференции "Биоантиоксидант". - Черноголовка. -1986. - Т.2. - С. 126 - 127.

17. Колосова Н.Г., Селятицкая В.Г., Куликов В.Ю., Шорин Ю.П. О механизме антистрессорного эффекта токоферола при действии холода // В сб. : Механизмы адаптации растений и животных к экстремальным факторам среды. - Ростов-на-Дону. - 1987. - С. 61 - 62

18. Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. Механизмы защитных эффектов токоферола // Тез. докл. 4 Всес. съезда патофизиологов. - Т.2. Кишинев. - 1989. -С.67.

19. Колосова Н.Г., Ким A.B., Куликов В.Ю. Микрометод УФ-спектрофо-тометрии диеновых конъюгатов //Лабораторное дело. - 1988. - N 9. - С. 73 - 74.

20. Колосова Н.Г., Шишкина Л.Н. Характеристики мембран и функциональной активности фагоцитирую пак альвеолярных макрофагов / / Бюл. эксп. биол. -1989.-N 1. - С. 71 - 74.

21. Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. Влияние дексаметазона на распределение токоферола в организме// Бюл. Сибирск. отдел. АМН СССР. - 1989. - С. 93 -95.

22. Колосова Н.Г., Кузьменко А.П., Панин Л.Е. Исследование содержания токоферола во фракциях хроматина и ядерном матриксе клеток печени / / Тез. докл. X Всес. симп. "Структура и функции клеточного ядра". - Гродно. - 1990. -С. 140.

23. Колосова Н.Г., Душкин М.И., Долгов A.B., Панин Л.Е. Влияние токоферола на функциональные резервы фагоцитов // Бюл. эксп. биол. -1991. - N 6. - С. 591-592.

24. Колосова Н.Г., Колпаков А.Р. Измерение трансмембранного электрического потенциала митохондрий с помощью флуоресцентного зонда ДСМ // Биофизика. - 1991. - Т. 36. - № 5. - С. 802-804.

25. Панин Л.Е., Кузьменко Д.И., Колпаков А.Р., Добронравова О.В., Колосова Н.Г. Влияние апопротеинов липопротеинов очень низкой плотности на катионную проницаемость и потенциал внутренней мембраны митохондрий // Биол. мембраны. - 1991,- Т. 8.- N 7,- С. 743 - 748.

26. Панин Л.Е., Колпаков А.Р., Колосова Н.Г., Добронравова О.В. Функции митохондрий печени в динамике холодовой адаптации //В кн.: Проблемы терморегуляции и температурной адаптации. - Новосибирск. - 1992.- С. 74-82.

27. Panin L.E., Kolpakov A.R., Kolosova N.G., Nekrasova M.F., Kunitsin V.G. Comparison of Biocemistry Observation on Sjviet //Canada Transpolar Ski Trek and Chember Simulation // Medicine and Sport Sience. - Basel . - 1992. - V.33. -P. 743-748.

28. Колпаков A.P., Колосова Н.Г., Влошинский П.Е. Механизмы адаптации человека и животных к холоду // Вестник РАМН. - 1993. - N 8. - С. 29 - 31.

29. Salganik R.I., Shabalina I.G., Solovyova N.A., Kolosova N.G., Solovyov V.N., Kolpakov A.R.// Impairment of respiratory functions in mitochondria of rats with an inherited hyperproduction of free radicals // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1994. - V. 205. - N 1. - P. 180-185.

30. Салганик Р.И., Шабалина И.Г., Соловьева H.A., Колосова Н.Г., Соловьев В.Н. Физико-химические свойства мембран и функциональное состояние митохондрий печени крыс с врожденно повышенной способностью к радикалообра-зованию // Бюл. эксп. биол. - 1995. - N 6. - С. 628-631.

31. Колосова Н.Г., Колпаков А.Р., Панин Л.Е. Содержание токоферола и продуктов перекисного окисления липидов в тканях крыс Вистар в динамике адаптации к холоду // Вопросы мед. химии - 1995. - N б. - С. 31- 37.

32. Колосова Н.Г., Колпаков А.Р., Добронравова О.В. Изменения содержания, структуры и заряда липопротеидов крови при адаптации к холоду //Биофизика.-1995.-Т. 40. - № 2. -С. 422-427.

33. Колосова Н.Г., Колпаков А.Р., Шабалина И.Г., Панин Л.Е. Трансмембранный потенциал и физико-химическое состояние мембран тимоцитов и митохондрий печени при адаптации к холоду // Биол. мембр. - 1995. - N 6. - С. 609-615.

34. Шабалина И.Г., Колосова Н.Г., Гришанова А.Ю., Соловьева Н.А., Соловьев В Н., Салганик Р.И. Активность окислительного фосфорилирования, FOFl-АТФ- азы и содержание цитохромов митохондрий печени крыс с врожденным повышением способности радшсалообразования // Биохимия. -1995. -Т. 60. - N 12. - С. 2045-2052.

35. Колосова Н.Г., Шабалина И.Г., Соловьева Н.А., Салганик Р.И. Содержание токоферола и продуктов перекисного окисления липидов в тканях крыс с наследственной способностью к гиперпродукции свободных радикалов // Бюл. эксп. биол. - 1996. - N 3. - С.ЗЗ 1-334 .

36. Панин А.Е., Шабалина И.Г., Колпаков А.Р., Колосова Н.Г., Соловьев В.Н. Энергетическое состояние печени крыс в динамике адаптации к холоду // Биохимия,- 1995. - N 3. - С. 323-329.

37. Kolosova N.G., Kolpakov A.R., Shabalina I.G., Panin L.E. Transmembrane electric potential and phisico-chemical states of thymocyte and liver mitochondrial membranes in cold-acclimated rats // Membr. and Cell Biol.-1996. -V. 9. - N6.- P. 641-648.

38. Panin L.E., Kuzmenko D.I., Kolpakov A.R., Dobronravova O.V., Kolosova N.G. Influence of apoproteins of serum lipoproteins on bioenergetic functions of liver mitochondria // Physico-Chemical Biol, and Medicine. - 1995. - V.2. - N 1. P.27-35.

39. Panin L.E., Shabalina I.G., Kolpakov A.R., Kolosova N.G., Solovyov V.N. Effect of the long-term cold exposure on energetics of rat liver mitochondria / / Phisico-Chemical Biol, and Med. - 1996. - V.2 , No. 1, P. 27-35.

40. Колосова Н.Г., Колпаков A.P., Шабалина И.Г., Панин Л.Е. Трансмембранный потенциал лейкоцитов как показатель направленности адаптивных

перестроек биоэнергетических процессов при действии холода / / Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы. - Тез. докл. I российского конгресса по патофизиологии. - М. - 1996. - С. 226.

41. Панин Д.Е., Поляков Л.М., Колосова Н.Г., Русских Г.С., Потеряева О.Н. Распределение токоферола и апопротеин-А-1-имунореактивности в хроматине печени крыс / / Биол. мембраны. - 1997. - Т. 14. - Na 5. - С. 511-519.

42. Колосова Н.Г., Петракова Г.М., Гилинский М.А. //Влияние диазепама на трансмембранный потенциал и физико-химическое состояние мембран ти-моцитов крыс в условиях холодового воздействия // Бюл. эксп. биол. - 1998,-№ 3. - С.'16-20.

43. Колпаков А.Р., Влощинский П.Е., Симонова Т.Г., Останина A.C., Колосова И.Е., Колосова Н.Г., Филатова Т.Г., Розуменко А.Ю., Третьякова Т.А. Метаболические реакции организма на действие комплекса факторов автономного лыжного похода / / Бюл. Сибирск. отдел. РАМН. - 1998. - N 3. - С. 32 - 36.

44. Шалбуева Н.И., Шабалина И.Г, Колосова Н.Г. Модуляция действия пальмитоил-КоА на окислительное фосфорилярование митохондрий печени крыс апопротеинами сывороточных липопротеинов высокой плотности / / Бюл. Сибирск. отдел. РАМН. - 1998. - N 3. - С. 16 - 20.

45. Гилинский М.А., Колосова Н.Г., Петракова Г.М. Влияние стресса и стресс-протективных факторов на холодовую устойчивость и эффективность адаптации крыс к холоду / / Вестник РАМН. - 1998. - № 10. - С. 22-25.

46. Panin L.E., Polyakov L.M., Kolosova N.G., Russkikh G.S., Poteryaeva O.N. Distribution of tocopherol and apolipoprotein A-I immunoreactivity in rat liver chromatin \\ Membr. Cell Biol. - 1998. - V. - N 11. - P. 631-640.

47. Kolosova N.G., Kolpakov M.A., Kolpakov A.R.,Gromova O.A. Effect of со. * acclimation on the rat liver mitochondrias and microsome: гго1 content and functions // European Meeting Society for free radical research, Berlin. -1999. - P. 363.

48. Колосова H.Г., Петракова Г.М., Гилинский М.А. Кортикостерон и процессы перекисного окисления липидов при двукратном воздействии холода // Бюл. эксп. биол. -1999,- Т. 127. - № 3.-С.261-264.

Список сокращений

АКТГ - адренокортикотропный гормон АФК - активированные формы кислорода АТФ - аденозин-5'трифосфорная кислота БЖТ - бурая жировая ткань

НЭЖК - неэстерифицированные жирные кислоты ПОЛ - перекисное окисление липидов TAT - тирозинаминотрансфераза ТФ - токоферол

ЛТ - трансмембранный электрический потенциал

Заказ 171. Тираж 100. Печ. л. 2,0. Формат 60x84/16. Бумага офсетная №1.

Типография СО РАМН, 630117, Новосибирск, ул. Ак. Тимакова, 9. 1999 г.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Колосова, Наталия Гориславовна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Генерация активных форм кислорода и процессы перекисного окисления липидов как модификаторы структурно-функционального состояния биологических мембран.

1.2.Процессы перекисного окисления липидов и факторы антиоксидантной защиты при стрессе и адаптации.

1.2.1.Являются ли процессы ПОЛ коррелятами стресса?.

1.2.2.Механизмы активации антиоксидантных систем при неблагоприятных воздействиях среды.

1.3 .Механизмы защитных эффектов токоферола.

1.3.1.Токоферол как универсальный антиоксидант и регулятор функций биологических мембран.

1.3.2.Влияние токоферола на состояние генетического аппарата.

1.3.3.Антиоксиданты и центральные механизмы регуляции.

1.3.4. Токоферол и нейроэндокринные механизмы регуляции.

1.3.5. Токоферол и некоторые показатели активности системы мононуклеарных фагоцитов.

1.3.6.Токоферол и реакция организма на холод.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Животные и методы воздействия на них.

2.1.1.Длительная адаптация к холоду.

2.1.2.Ускоренная адаптация к холоду.

2.2. Методики исследования.

2.2.1.Определение продуктов ПОЛ и токоферола.

2.2.2.Выделение и полярографические исследования митохондрий печени.

2.2.2.Измерение трансмембранных электрических потенциалов тимоцитов, лейкоцитов и митохондий печени.

2.2.4.Определение вязкости липидов мембран и состояния в них белок-липидных взаимодействий.

2.2.5.Получение тимоцитов и лейкоцитов крови.

2.2.6.Выделение микросом и оценка их функционального состояния.

2.2.7.Содержание восстановленного глутатиона, активность НАДФН-зависимых глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы.

2.2.8. Исследования кортикостероидов.

2.2.9.Выделение ядер, фракций хроматина и ядерного матриксаиз печени.

2.3 .Реактивы.

2.4.Статистическая обработка результатов.

Глава 3. Токоферол в процессах длительной адаптации к холоду.

3.1 .Температура тела животных.*.

3.2.Содержание кортикостерона в плазме крови животных.

3.3. Изменения массы тела, бурой жировой ткани и тимуса животных.

3.4.Активность перекисного окисления липидов и факторы антиоксидантной защиты при длительном воздействии холода.

3.4.¡.Содержание продуктов ПОЛ в тканях.

3.4.2. С о держание токоферола в тканях животных.

3.4.3.Показатели активности глутатионзависимых факторов антиоксидантной защиты.

3.5. Токоферол и структурно-функциональные перестройки мембран при длительном воздействии холода.

3.5.1. Структурно-функциональное состояние микросом печени при длительном воздействии холода.

3.5.2. Функциональные характеристики митохондрий при длительном воздействии холода.

3.5.3.Физико-химическое состояние мембран митохондрий печени.

3.5.4.0бсуждение раздела 3.5.

3.6.Трансмембранный потенциал и физико-химические характеристики мембран тимоцитов и лейкоцитов как маркеры адаптивных перестроек при действии холода.

3.6.1.Сравнение изменений трансмембранных потенциалов тимоцитов, лейкоцитов и митохондрий печени в различные сроки пребывания на холоде.

3.6.2.Исследование физико-химических характеристик мембран тимоцитов.

Резюме главы 3.

Глава 4. Токоферол и процессы перекисного окисления липидов при ускоренной адаптации к холоду.

4.1.Температура тела животных и содержание кортикостерона в крови крыс при ускоренной адаптации к холоду.

4.2. Токоферол и процессы перекисного окисления липидов в мозге и периферических тканях крыс при ускоренной адаптации к холоду.

4.3. Структурно-функциональные характеристики мембран тимоцитов крыс при ускоренной адаптации к холоду.

4.4.Анализ связи между активностью коры надпочечников, эффективностью формирования адаптивных навыков и показателями активности процессов ПОЛ при ускоренной адаптации к холоду.

4.5. Токоферол, активность ПОЛ и физико-химические характеристики мембран тимоцитов при действии холода в условиях воздействия на бензодиазепинэргическую систему.

4.5.1. Влияние диазепама на состояние процессов ПОЛ в мозге и прериферических тканях крыс в условиях воздействия холода.

4.5.2.Влияние диазепама на структурно-функциональные характеристики мембран тимоцитов в условиях воздействия холода.

Резюме главы 4.

Глава 5. Исследование участия кортикостероидов и адреналина в регуляции процессов ПОЛ.

5.1. Анализ связи между показателями активности ПОЛ и уровнем глюкокортикоидов в крови людей в экстремальных ситуациях, связанных с воздействием холода.

5.1.1.Обследование пловцов - участников соревнований Ассоциации зимнего плавания.

5.1.2. Обследования участников трансарктического перехода.

5.1.3. Связь между суточными и сезонными колебаниями уровней продуктов ПОЛ и глюкокортикоидов у жителей Заполярья.

5.2. Исследование роли глюкокортикоидов и адреналина в стрессорной мобилизации факторов антиоксидантной защиты.

5.2.1. Влияние адреналина на содержание продуктов ПОЛ и токоферола в тканях контрольных и получавших токоферол крыс.

5.2.2. Влияние дексаметазона на содержание продуктов ПОЛ и токоферола в тканях контрольных и получавших токоферол крыс.

5.2.3. Активация ПОЛ как одна из причин нарушений структуры мембран и снижения стресс-устойчивости при адреналэктомии и их коррекция с помощью токоферола.

Резюме главы 5.!.

Глава 6. Исследование некоторых механизмов влияния токоферола на процесс адаптации к холоду.

6.1. Влияние токоферола на устойчивость контрольных и адаптированных к холоду крыс к острому охлаждению.

6.2. Влияние токоферола на активность перекисного окисления липидов и некоторые физико-химические характеристики мембран крыс в условиях длительного воздействия холода.

6.3. Влияние токоферола на структурно-функциональное состояние мембран митохондрий печени и тимоцитов крыс при действии холода.

6.4. Влияние токоферола на адренокортикальную реакцию при действии холода.

6.5. Влияние токоферола на метаболическую реакцию печени крыс на глюкокортикоиды.

6.6. Распределение токоферола по фракциям хроматина в ядрах клеток печени крыс.

Резюме главы 6.

Птва 7. Обсуждение.

7.1. Токоферол, перекисное окисление липидов и адаптивные перестройки структурно-функциональных характеристик мембран при действии холода

7.2. Возможные пути влияния токоферола на терморегуляторную функцию.

7.3. Влияние токоферола на состояние и реактивность коры надпочечников.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы участия токоферола в адаптивных преобразованиях на холоде"

Актуальность проблемы. Приспособление человека и животных к температурным условиям окружающей среды - одна из важнейших проблем экологической физиологии. Её решение возможно только на основе глубокого понимания естественных механизмов резистентности к охлаждению, среди которых - адаптивные преобразования физико-химических характеристик мембран, в том числе - необходимее в условиях воздействия низких температур повышение устойчивости липидов мембран к повреждающему действию кислородных радикалов.

Биологические мембраны теплокровных, в нормальных условиях не встречающиеся с температурными сдвигами, реагируют на снижение температуры так же, как и клетки пойкилотермов - повышением непредельности липидов мембран (Крепе, 1981; Kuroshima, 1986). Такие изменения на фоне происходящей на холоде интенсификации окислительных процессов и связанного с этим усиления л генерации активированных форм кислорода (АФК: О-, Н202, НО, N0) существенно повышают вероятность активации процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Куликов и др., 1988; Buzadzic, 1992-1998; Barja de Quiroga,1992).

Активации ПОЛ на сегодня отводится роль одного из фундаментальных молекулярных механизмов патогенеза (Владимиров, Арчаков, 1972; Меерсон, 1981, 1986; Vladimirov, 1986; Floyd, 1997 и др.). Её рассматривают как неизменный атрибут и основное патогенетическое звено стресса (Меерсон, 1981,1986; Kretzschmar, 1993; Liu et al., 1996; Reinheckel et al.,1997), а продукты ПОЛ - как его корреляты (Гуляева, 1988-1991) и даже первичные медиаторы (Брехман и др., 1974, Барабой и др., 1992). Нормализацию уровня продуктов ПОЛ активно используют в качестве необходимого и достаточного критерия эффективности адаптивных преобразований (Гуляева и др., 1988; Барабой и др.,1992; Эмирбеков и др., 1998; Толстухина и др.,1999 и др.). Вместе с тем накапливается все больше фактов, свидетельствующих о том, что увеличение продуктов ПОЛ не всегда отражает развитие деструктивных изменений, так же как и слабая активация ПОЛ не всегда свидетельствует о защищенности мембранных структур (Сазонтова, Архипенко, 1997; Mataix et al., 1998). Являясь одним из естественных механизмов модификации липидного состава клеточных мембран, процессы ПОЛ участвуют в срочных адаптивных реакциях организма (Бурлакова, 1975-1998; Аврова, 1999; Suzuki et al.,1997). Постулирован свободнорадикальный механизм регуляции клеточного метаболизма мембранами, согласно которому в систему регуляции ПОЛ входят такие важнейшие свойства биологических мембран, как жирнокислотный состав, вязкость липидов, проницаемость, трансмембранные потенциалы (Бурлакова,1975-1998; Пынзарь, Пальмина,1998; 0'Brrein,1987) параметры, составляющие основу адаптивных .перестроек на холоде (Хочачка, Сомеро,1988). Изменяя их, ПОЛ опосредованно участвует в регуляции функций мембран: активности мембраносвязанных ферментов, состояния рецепторного аппарата клетки. Однако если механизму превращения ПОЛ в патогенетическое звено стресса уделяется большое внимание, вопрос о значимости для организма адаптивных, физиологических колебаний активности этих процессов разработан в меньшей степени, а проблема их связи с эффективностью терморегуляторных преобразований на холоде ранее не поднималась.

Холод традиционно рассматривается как прооксидантный фактор (Ломакина, Шугалей, 1980; Семенюк и др., 1983; Куликов и др.,1988; Kawabata, Hata,1993; Borodin et al.,1997; Теплый и др.,1997; Эмирбеков, 1998). Однако даже при действии экстремально низких температур одновременно с усилением ПОЛ происходит и активация факторов антиоксидантной защиты (Куликов и др., 1980; Capel et al.,1983; Buzadzic et al.,1992; 1997, 1998; Spasic et al., 1993; Kovacs et al., 1996; Эмирбеков и др.,1998). Механизм реализации такой активации окончательно не выяснен, но, как правило, его связывают с повышением генерации АФК и накоплением продуктов ПОЛ (Бурлакова и др., 1975; Владимиров и др., 1991; Меньшикова, Зенков, 1994). Если для изолированных клеток такой механизм очевиден, то, как показывает анализ литературы, на уровне организма прослеживается мобилизующий эффект неспецифической адаптивной реакции.

В природных адаптациях к холоду важную роль играет основной жирорастворимый антиоксидант - витамин Е, наиболее активным компонентом которого является а-токоферол. Его содержание у обитающих в холодных условиях видов и популяций животных высоко и растет с' увеличением непредельности липидов мембран (Калабухов, 1969; Ахременко, 1999). На сегодня очевидно, что роль токоферола в организме не .ограничивается предупреждением активации свободнорадикальных процессов. Модулируя физико-химические характеристики мембран, он может влиять на чувствительность клеток к регуляторным воздействиям и метаболический ответ на них (Бурлакова, 19751998). Показано влияние токоферола на генетический аппарат (Fazzio et al., 1997; Okamoto et al.,1998), на процессы пролиферации (Murelli,1989) и дифферецировки (Sohal et al., 1988), участие в функциях митохондрий (Infante, 1999), синтезе арахидоновой кислоты и простагландинов, в метаболизме нуклеиновых кислот, белков, липидов, продукции половых гормонов и др. (Thakur, Srivastava, 1996; Brigelius-Flone,1999). Токоферол обладает и свойствами, позволяющими ему оказывать непосредственное влияние на ' процесс теплообразования в митохондриях, предотвращая вызываемое различными факторами разобщение окисления и фосфорилирования (Донченко, 1983; 1988; Куница и др.,1993; Scholz et al., 1994; Lass et al., 1998) - основной источник дополнительной теплопродукции на холоде. Как подчеркивает Е.Б.Бурлакова (1998), один из ведущих специалистов в области исследования антиоксидантов, проявления биологической активности токоферола настолько разнообразны, что до сих пор окончательно не выяснены механизмы его участия в метаболизме клетки и тем более - организма.

Подобно другим антиоксидантам, токоферол рассматривают как протектор центрального действия, ограничивающий развитие стресс-реакции (Петрова и др.,1985; Меерсон, 1986; Меерсон, Пшенникова, 1988; Барабой и др.,1992). Есть свидетельства влияния токоферола на центральные регуляторные системы, на процессы обучения, памяти, когнитивную деятельность мозга (Tripathi et al.,1996;Yehuda et al., 1996). Одним из наименее ясных оказался вопрос, связанный с подавлением антиоксидантами адренокортикальной реакции при воздействии физических стрессоров, когда мобилизационные эффекты неспецифической адаптивной реакции обеспечивают сохранение гомеостаза в острой фазе воздействия и формирование долговременных механизмов адаптации. Между устойчивостью к холоду, эффективностью адаптивных преобразований при длительном его воздействии и стресс-реактивностью существует тесная связь (Мошкин, 1992). Предупреждая метаболическую. реакцию на холод (Калабухов, 1964), токоферол, по данным одних авторов, повышает устойчивость к холоду (Белогубова, Курочкина, 1974; Куликов, 1988), по данным других - не изменяет её (Обухова, 1998).

Знание механизмов включения токоферола в адаптивные преобразования на холоде наряду с фундаментальным значением имеет и прикладное: использование антиоксидантов, в том числе токоферол, в коррекции и профилактике дезадаптивных состояний, сопровождающихся активацией ПОЛ, широко распространено в практике современной медицины.

3. Установить зависимость активации реакций ПОЛ от выраженности адренокортикальной реакции и эффективности формирования, адаптивных навыков при действии холода.

4. Изучить участие гормонов - адреналина и глюкокортикоидов - в мобилизации токоферола в организме.

5. .Исследовать влияние токоферола на состояние и реактивность коры надпочечников в норме и при действии холода.

6. По изменению содержания гликогена и активности тирозинаминотрансферазы выяснить возможную роль токоферола в изменении метаболической реакции клеток печени на глюкокортикоиды в условиях длительного воздействия холода.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Оперативное перераспределение токоферола с преимущественным его накоплением в органах, вовлеченных в процесс адаптации, происходит с участием адреналина и глюкокортикоидов, обеспечивает эффективность срочной реакции на холод и адаптивных преобразований при длительной и ускоренной адаптации.

2. При длительном воздействии холода избирательное накопление токоферола в митохондриях и микросомах клеток печени сопровождает усиление их функциональной активности: активацию микросомальной монооксигеназной системы и повышение энергизации митохондрий.

3. Токоферол дозозависимо влияет на состояние коры надпочечников, увеличивает её функциональные резервы. Его предварительный прием сокращает фазу повышенной секреции глюкокортикоидов на начальном этапе воздействия, поддерживая повышенную чувствительность надпочечников к АКТГ на протяжении всего периода пребывания животных на холоде. Подобно длительной адаптации к холоду, токоферол модифицирует реакцию печени на глюкокортикоиды, сокращая период реализации метаболического ответа -активации тирозинаминотрансферазы и накопления гликогена.

Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ НИИ биохимии СО РАМН (тема: "Изучить роль адениннуклеотидтранслоказы и сывороточных липопротеинов в регуляции энергетического обмена в печени при адаптации к холоду", № гос. регистрации

01.9.10 049382) и в НИИ физиологии СО РАМН (тема: "Роль стресса и привыкания в механизмах прямой и перекрестной адаптации к холоду", № гос. регистрации 01.9.40 0 03122).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые установлено существование в организме механизмов оперативного перераспределения токоферола с его преимущественным накоплением в вовлеченных в адаптивную реакцию органах. Показано, что первоначальная реакция на холод характеризуется снижением содержания продуктов ПОЛ в тканях и мобилизацией факторов антиоксидантной защиты - перераспределением эндогенных запасов токоферола и активацией НАДФН-зависимых ферментов -глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы, которая реализуется механизмами неспецифической адаптивной реакции и происходит с участием основных адаптивных гормонов - адреналина и глюкокортикоидов. Она не отменяется снижением активности ПОЛ в тканях в результате дополнительного приема токоферола.

Установлено, что периоды активации процессов ПОЛ при длительном воздействии умеренно низких температур в тех или иных органах не совпадают по времени, наблюдаются в переходный период адаптивных преобразований и связаны с напряжением метаболизма. Анализ результатов обследования людей в условиях воздействия холода и ускоренной адаптации животных показал, что накопление продуктов ПОЛ не отражает выраженность стресс-реакции, но появление отрицательной корреляционной связи между уровнями кортикостерона и продуктов ПОЛ в крови является признаком эффективных адаптивных преобразований.

Получены новые данные о том, что обеспеченность токоферолом существенно влияет на способность организма поддерживать температуру тела при длительном воздействии и эффективность формирования адаптивных' навыков при ускоренной адаптации к холоду. Токоферол вовлечен в срочные адаптивные преобразования организма на холоде: его содержание в БЖТ. возрастает с первых часов долговременной и в результате ускоренной адаптации к холоду. При ускоренной адаптации эффективность формирования терморегуляторных навыков зависит от содержания токоферола в мозге и надпочечниках животных.

Получены новые факты, показывающие, что при длительном воздействии холода колебания активности ПОЛ играют роль фактора модуляции вязкости липидов мембран митохондрий, но не микросом печени, вязкость которых определяется белковой компонентой. Результатом длительной адаптации становится снижение вязкости липидов мембран митохондрий и содержания в них продуктов ПОЛ. Впервые обнаружена возможность разнонаправленных изменений содержания токоферола в различных структурах клетки. Установлено, что рост содержания токоферола в микросомах печени на 10-15 сутки длительного воздействия холода сопровождает активацию монооксигеназной системы и усиление детоксикационной функции печени, а накопление его в митохондриях через 5-7 недель коррелирует с увеличением энергазации (ростом дыхательного контроля, и повышением трансмембранного потенциала).

Получены новые данные о зависимости изменений трансмембранных электрических потенциалов (ДТ) тимоцитов, лейкоцитов крови, митохондрий печени, дыхательного контроля в митохондрях печени от изменений температуры тела животных при длительном воздействии холода. При ускоренной адаптации к холоду снижение Д^Р тимоцитов регистрируется как следовый эффект первого охлаждения и отменяется диазепамом, препятствующим формированию терморегуляторных навыков.

Установлено, что в условиях дополнительного включения токоферола в рацион накопление его в тканях животных на холоде выше, чем в условиях температурного комфорта. Токоферол предупреждает снижение температуры тела животных при действии умеренного холода и усиливает эффект длительной адаптации к нему (7 недель при +5°С), повышая выживаемость при остром охлаждении (-27°С). Прием витамина в условиях температурного комфорта на выживаемость при экстремально низких температурах не влияет.

Получены новые данные о влиянии токоферола на гипофизарно-надпочечниковую систему. Установлено, что непродолжительный прием антиоксиданта (1-7 дней) повышает концентрацию кортикостерона в плазме крови, не изменяя секрецию гормона надпочечниками. В результате цри холодовом воздействии токоферол сокращает стадию активации коры надпочечников, сохраняя их повышенную способность синтезировать стероиды в ответ на АКТГ. Длительный прием токоферола (49 дней) снижает синтез кортикостерона надпочечниками контрольных и пребывающих на холоде крыс при неизменном уровне гормона в крови и повышенной чувствительности к АКТГ. Установлено, что токоферол, подобно длительной адаптации к холоду, модифицирует реакцию печени на глюкокортикоиды, ускоряя реализацию метаболического ответа -повышение запасов гликогена и активацию тирозинаминотрансферазы. Впервые проведено исследование токоферола во фракциях хроматина и ядерном матриксе и обнаружена максимальная его концентрация в транскрипционно активном хроматине

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Настоящая работа вносит вклад в понимание механизмов участия токоферола в адаптивных преобразованиях организма на холоде. Проведенные комплексные исследования продемонстрировали, что эффекты токоферола не ограничиваются предотвращением активации свободнорадикальных процессов, а существенно влияют на адаптивные преобразования функций - на уровне мембран, органов, организма.

Полученные результаты могут быть полезны при разработке способов использования токоферола и других антиоксидантов в качестве стресс-протекторов при острых воздействиях экстремально низких температур, в том числе - в клинической практике при использовании гипотермии. Установлено, что потребность организма в токофероле на холоде возрастает. Его прием в условиях воздействия умеренно низких температур повышает эффективность терморегуляторных преобразований, в том числе - при остром охлаждении, однако длительный предварительный приём антиоксиданта в условиях температурного комфорта в случае воздействия экстремально низких температур оказывается не эффективным. Данные о способности токоферола повышать уровень циркулирующих стероидов следует учитывать при использовании токоферола в качестве стресс-протектора.

Результаты исследований, выявившие сильную корреляционную связь между изменениями температуры тела животных, дыхательного контроля и Л^ митохондрий печени, с одной стороны, и изменениями ДЧ' тимоцитов и лейкоцитов крови, с другой, позволяют рекомендовать использование этих клеток для контроля адаптивных преобразований энергетических процессов на холоде. Разработанная модификация метода оценки трансмембранного электирческого потенциала - ДЧ' митохондрий печени с помощью флюоресцентного зонда-катиона ДСМ, которая позволила при исследовании адаптивных преобразований энергетических процессов на холоде выявить сопряженные с другими функциональными характеристиками митохондрий изменения показателя, может быть рекомендована как достаточно чувствительный и нетоксичный способ оценки ДЧ' митохондрий.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Материалы диссертации представлены и доложены: на Всесоюзной конференции "Адаптация человека к различным географическим, климатическим и производственным условиям", Владивосток, 1978; 4, 7 и 8 Международных конгрессах по приполярной медицине: Новосибирск, 1978; США,1986; Канада 1990; на Всесоюзных симпозиумах "Биологические проблемы Севера": Петрозаводск, 1976; Кировск, 1979; Магадан, 1983; Якутск, 1986; 6 Всесоюзной конференции по экологической физиологии, Сыктывкар, 1982; 3 Всесоюзной конференции "Адаптация человека в различных климато-географических условиях", Ашхабад, 1982; "Важнейшие теоретические и практические проблемы терморегуляции", Новосибирск, 1982; Всесоюзном симпозиуме по физиологическим проблемам адаптации, Таллин, 1984; на 2-4 Всесоюзных конференциях "Биоантиоксидант", Москва, 1986, 1989, 1992; 4 Всесоюзной конференции "Адаптация человека к климато-географическим условиям и первичная профилактика", Новосибирск,1986; школе-семинаре Надежность биологических систем, Чернигов, 1985; 4 Всесоюзной конференции по патологии клетки, Москва, 1987; Всесоюзной конференции "Биохимия -медицине", Ленинград, 1988; 5 Всесоюзном симпозиуме "Эколого-физиологические проблемы адаптации", Москва, 1988; 4 Всесоюзном съезде патофизиологов,

Кишинев, 1989; X Всесоюзном симпозиуме "Структура и функции клеточного ядра", Гродно, 1990; Всесоюзной конференции памяти А.Д.Слонима "Система терморегуляции при адаптации организма к факторам среды", Новосибирск, 1990; Организационном Международном конгрессе по патологической физиологии, Москва, 1991; Республиканском симпозиуме "Монооксигеназная система. Теоретические и прикладные аспекты", Ташкент, 1992; 5 Европейской конференции ISSX, Франция, 1993; III Всемирном конгрессе международного общества адаптивной медицины, Япония, 1993; 7 Всероссийском симпозиуме "Эколого-физиологические проблемы адаптации",. Москва, 1994; 7th biennial Scientific meeting of the International Society for Free Radical Research, Австралия, 1994; 7 Всероссийском симпозиуме "Эколого-физиологические проблемы адаптации", Москва,' 1994; 2 (1995) и 3 (1997) съездах физиологов Сибири и Дальнего Востока, Новосибирск; 1 Российском Конгрессе по патофизиологии с международным участием, Москва, 1996; Airst. Regional Meeting on Medical Sciences: "The roles of free radicals in health and disease" Jerusalem and Amman, 1998; Международной конференции "Oxygen Radicals", Ярославль, 1998; Международной конференции "Рецепция и внутриклеточная сигнализация", Пущино, 1998; Всероссийском съезде физиологов, Ростов-на-Дону, 1998; Europien Meeting Sosiety for free radical research, Германия, 1999.

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано более 80 работ, в том числе 41 статья.

Считаю своим долгом выразить искреннюю благодарность за участие в проведении совместных экспериментов коллегам, сотрудникам СО РАМН П.Е.Влощинскому, О.А.Громовой, А.Р.Колпакову, В.Г.Селятицкой, И.Г.Шабалиной.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Колосова, Наталия Гориславовна

ВЫВОДЫ

1. Обеспеченность токоферолом влияет на способность организма поддерживать температуру тела при длительном воздействии и эффективность формирования адаптивных навыков при ускоренной адаптации к холоду. Токоферол вовлечен в срочные адаптивные преобразования на холоде: его содержание возрастает в БЖТ и надпочечниках при долговременной и в результате ускоренной адаптации к холоду. При ускоренной адаптации эффективность формирования терморегуляторных навыков зависит от содержания токоферола в мозге и надпочечниках животных.

2. Первоначальная реакция на холод . характеризуется мобилизацией антиоксидантных механизмов: активацией ферментов - глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы и перераспределением эндогенных запасов токоферола между тканями, которая снижает уровень продуктов ПОЛ или предупреждает их накопление. Установлено, что периоды активации ПОЛ в отдельных тканях животных наблюдаются до 15 суток непрерывного воздействия холода, не совпадают по времени и связаны с адаптивными преобразованиями метаболизма.

4. При длительном воздействии холода изменения содержания токоферола в митохондриях и микросомах печени животных не совпадают по времени и направленности. Установлено, что рост содержания Т.Ф в микросомах печени на 10-15 сутки длительного воздействия холода сопровождает активацию монооксигеназной системы и усиление детоксикационной функции печени, а накопление его в митохондриях через 5-7 недель коррелирует с увеличением энергизации - ростом дыхательного контроля и повышением трансмембранного электрического потенциала (Л^).

5. При длительной адаптации к холоду выявлены фазовые изменения Д^Р тимоцитов, лейкоцитов крови и митохондрий печени, а также дыхательного контроля митохондрий, обусловленные изменениями температуры тела животных. При ускоренной адаптации снижение ЛЧР тимоцитов регистрируется как следовый эффект первого охлаждения и отменяется диазепамом, препятствующим формированию терморегуляторных навыков.

6. Колебания активности ПОЛ играют роль фактора модуляции вязкости липидов мембран при действии холода. Результатом длительной адаптации становится снижение вязкости липидов мембран митохондрий, а также тимоцитов животных. При ускоренной адаптации вязкость липидов мембран тимоцитов и содержание продуктов ПОЛ в них повышается.

7. Включение токоферола в рацион (7 дней по 4 мг) не изменяет функциональное состояние митохондрий печени в условиях температурного комфорта, но предупреждает терморегуляторное разобщение митохондрий при действии умеренного холода, предотвращая одновременно снижение температуры тела животных. Токоферол усиливает эффект длительной адаптации к холоду (7 недель при +5°С), повышая способность животных удерживать температуру и выживаемость при остром охлаждении (-27°С), в то время как прием витамина в условиях температурного комфорта на выживаемость при экстремально низких температурах не влияет.

В результате при действии холода токоферол сокращает стадию активации коры надпочечников, сохраняя их повышенную способность синтезировать стероиды в ответ на АКТГ. Длительный прием токоферола (49 дней) снижает синтез кортикостерона надпочечниками контрольных и пребывающих на холоде крыс при неизменном уровне гормона в крови и повышенной чувствительности надпочечников к АКТГ.

9. Токоферол, подобно длительной адаптации к холоду, модифицирует реакцию печени на глюкокортикоиды, ускоряя реализацию метаболического ответа -повышение запасов гликогена и активацию тирозинаминотрансферазы. ,

10. Адреналин и глюкокортикоиды участвуют в стрессорной мобилизации факторов антиоксидантной защиты. Их введение приводит к. перераспределению токоферола в организме, адреналин активирует также ферменты антиоксидантной защиты - глутатионредуктазу и глутатионпероксидазу. Эти эффекты не зависят от фоновой активности процессов ПОЛ в тканях и содержания в них токоферола, так как предварительное включение токоферола в рацион не изменяет реакцию на введение гормонов.

11. При обследовании людей и в опытах на животных установлено, что глюкокортикоиды оказывают модулирующее влияние на уровень продуктов ПОЛ в тканях организма за счет прямых и опосредованных факторами антиоксидантной защиты эффектов. Их роль в регуляции ПОЛ возрастает в условиях напряжения адаптивных механизмов, в случае адекватной реакции органйзма на действующий фактор формируется отрицательная связь между уровнями глюкокортикоидов и продуктов ПОЛ в крови.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Колосова, Наталия Гориславовна, Новосибирск

1. Александровский Ю.А., Поюровский М.В., Незнамов Г.Г. Неврозы и перекисное окисление липидов. М.: Наука 1991. - 325 с.

2. Але.сенко A.B. Функциональная роль сфингозина в индукции пролиферации и гибели клеток // Биохимия. -1998. Т. 63, вып. 1.- С. 75-82.

3. Алесенко A.B., Пальмина Н.П. Рс»ль липидов в функциональной активности и биосинтезе ДНК в нормальных и опухолевых клетках //В кн.: Биоантиоксислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука. -1982. -С. 84-99.

4. Андрейчик Н.И., Круглова Е.Г., Новоселова В.П. механизм противовоспалительной активности антиоксидантов при легочном туберкулезе // Проблемы туберкулеза. 1994. - № 2. - С. 49-53.

5. Архипенко Ю.В., Белкина Л.М., Сазонтова Т.Г. Зависимость свободнорадикального ответа ткани от режима адаптации к гипоксии // Тез. I Российского конгр. патофиз.-М.-1996.-С. 221.

6. Архипенко Ю.В., Джапаридзе Л.М., Гуткин Д.В. Сравнитльная оценка влияния недостаточности витамина Е на перекисное окисление и транспорт Са++ в сердечной и скелетной мышцах // Вопр. мед. химии. 1987. - Т. 33. - № 3. - С. 122-127.

7. Архипенко Ю.В., Шимкович М.В. Участие перекисного окисления липидов в регрессии гипертрофированного сердца // Бюл. экспер. биол. -1989. -Т. 108,- № 11.- 556-568.

8. Ахременко А.К. Зимняя спячка и гипобиотические состояния у млекопитающих экстраконтинентального климата// Автореферат докт. дис. М.- 1999. - 36 с.

9. Ю.Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин В.Г., Кудряшов Ю.Б. Перекисное окисление и стресс // С.-Пб.: Наука. 1992. - 148 с.

10. П.Баренбойм Г.М., Маленков А.Г. биологически активные вещества. Новые принципы поиска // М. : Наука. 1986. - 364 с.

11. Белогубова Е.Г., Курочкина Н.И. Токофероловая зависимость процесса холодовой адаптации у крыс // Тез. докл. IV симпоз. "Биологические проблемы Севера". Вып.1. - Якутск, 1974. - С. 177-179.

12. Белоконева О.С., Зайцев C.B. Роль мембранных липидов в регуляции функционирования рецепторов нейромедиаторо© // Биохимия. 1993. - Т. 58. - № П.-С. 1685-1708.

13. Н.Белоусова Г.П., Кузьмина Г.И., Пшедецкая А.Д., и др. Двигательные механизмы защиты организма от холода / JL: Из-во ЛГУ. -1988. 188 с.

14. Бокеева Л.Е., Брустовецкий H.H. Межмитохондриальные септированные контакты в клетках печени суслика Citellus undulatus при зимней спячке // Биол. мембр. -1993. -Т. 10. № 1. - С. 36-43.

15. Большаков В.Н. Пути приспособления мелких млекопитающих к горным условиям // М.: Наука. 1972. - 200 с.

16. Брехман А.И., Голотин В.Г., Дардымов И.В. Метаболиты, образующиеся при стрессе (стрессины) // Проблемы общей патологии. Новосибирск. - 1974. - Т. 1. - С. 74.

17. Бурлакова Е.Б., Архипова Г.В., Голощапов А.Н., Молочкина Е.М., Хохлов А.П. Мембранные липиды как переносчики информации // В кн.: Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука. -1982. - С. 74-83.

18. Бурлакова Е.Б., Гвачария В.О., Глущенко H.H., Дюпин А. Роль микровязкости липидной фазы мембран в регуляции ферментативной активности глюкозо-6-фосфотазы при модификации микросом in vivo и in vitro // Биохимия. 1980. - T.45.-№3.-С. 387-391.

19. Бурлакова Е.Б., Греченко Т.Н., Соколов E.H., Терехова С.Ф. Влияние ингибиторов свободнорадикального окисления липидов на электрическую активность изолированных медленных нейронов // Биофиз. 1986. -Т. 31, в. 5. -С. 921-923.

20. Бурлакова Е.Б., Губарева А.Е., Архипова Г.В., Рогинский В.А. Модуляция перекисного окисления липидов биогенными аминами в модельных системах // Вопр. мед. химии.-1992а.-Т. 38. № 2.- С.17-20.

21. Бурлакова Е.Б., Кайран Ч.Б., Молочкина Е.М., Хохлов А.П. Изменения липидов наружной мембраны митохондрий печени мышей и кинетические параметры мембраносвязанной моноаминоксидазы in vivo и in vitro // Вопр. мед. химии. -1984.-Т. 30.- № 1,-С. 66-72.

22. Бурлакова Е.Б., Крашаков С.А., Храпова Н.Г. Роль токоферолов в пероксидном окислении липидов биомембран // Биологич. мембр.-1998. Т. 15. - № 2. - С. 137167.

23. Бурлакова Е.Б., Крашков С.А., Храпова Н.Г. Кинетические особенности токоферолов как антиоксидантов. Черноголовка,-19926,- 56 с.

24. Бурлакова Е.Б., Кухтина E.H., Сарычева И.К., Храпова Н.Г., Аристархова С.А. Влияние латеральной подвижности токоферола на реакции свободнорадикального окисления в липидых // Биохимия. 1982. - Т. 47. № 6.- С. 987-992.

25. Бурлакова Е.Б.,Алесенко A.B., Пальмина Н.П., Молочкина Е.М., Храпова Н.Г. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте // М.: Наука. -1975.-221 с.

26. Владимиров Ю.А. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов // Патол. физиол. и экспер. мед. -1989. № 4. -С. 7-19.

27. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты // Вестник РАМН. -1998,-№7. С. 43-51. /

28. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И., Козлов A.B., Осипов А.Н., Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах // Итоги науки и техники, серия Биофизика. -1991.- Т.29.- С. 1-252.

29. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов биологических мембран / М.: Наука. 1972. - 252 с.

30. Гизатуллина 3.3., Гагельганс А.И., Мохова E.H., Орынбаева З.С. Влияние тиреоидных гормонов на энергетику тимоцитов //Биолог. Мембр. 1992. -Т. 9. - № 10-11. -С.1161-1163.

31. Гизатуллина 3.3., Сукачева O.A., Гагельганс А.И. Дозозависимый характер влияния гидрокортизона на энергетический метаболизм // Биохимия. 1996. - Т. 61.-№3.-С. 445-450.

32. Гилинский М.А. Механизмы эмоциогенной регуляции адаптационных процессов. Роль миндалевидного комлекса мозга // Докторская диссертация. -Новосибирск. -1994. 290 с.

33. Гилинский М.А., Колосова Н.Г., Петракова Г.М. Влияние стресса и стресс-протективных факторов на холодовую устойчивость и эффективность адаптации крыс к холоду II Вестник РАМН. 1998. - № 10. - С. 22-25.

34. Голиков П.П., Давыдов Б.В., Матвеев C.B. Механизмы активации перекисного окисления липидов и мобилизации эндогенного антиоксиданта альфа-токоферола при стрессе // Вопр. мед. химии. 1987. - Т. 33. - № 1. - С. 47-50.

35. Голубев А.Г. Катехоламины, стероиды и старение нервной и эндокринной систем // Успехи совр. биол. 1989. - Т. 108. - № 3 (6). - С. 414 - 428.

36. Гончаренко E.H., Кудряшов Ю.Б. Гипотеза эндогенного фона радиорезистентности / М.: Из-во МГУ. 1980. -176 с.

37. Горбань E.H. Влияние антиоксиданта дибунола на функцию коры .надпочечников и аденогипофиза взрослых и старых крыс // Бюл. экспер. биол.1985.-№ 12. С. 643-644.

38. Громов Л.А., Середи П.И., Сыроватская Л.П., Овинова Г.В., Филоненко М.А Свободнорадикальный механизмы ^ токсических нарушений памяти и способы лечения // Патол. физиол. и экспер. терапия. 1993. - N 4. - С. 24-26.

39. Гукасов В.М., Сергеев П.В., Сейфулла Р.Д., Владимиров Ю.А. Об антиоксидантиом действии стероидных гормонов на перекисное окисление липидов мембран митохондрий in vivo и in vitro // Бюл. эксп. биол. 1974. - № 11. -С. 54.

40. Гуляева Н.В. Ингибирование процессов свободорадикального окисления липидов в механизмах срочной и длительной адаптации к стрессу // Биол. науки.- 1989.-№4.-С. 5-14.

41. Гуляева Н"В., Левшина И.П., Обидин А.Б. Показатели свободнорадикального окисления липидов и антирадикальной защиты мозга нейрохимические корреляты развития общего адаптационного синдрома // Журн. высш. нервн. деят. - 1988,- Т. 38, в 4. - С. 731-737.

42. Гуляева Н.В., Левшина И.П., Обидин А.Б. Стадия ингибирования свободнорадикального окисления липидов предшествует стадии его активации при стрессе // Докл. АН СССР. 1988. -Т. 300. - №. 3. - С. 748-752.

43. Гуляева Н.В., Степаничев М.Ю. биохимические корреляты индивидуально-типологических особенностей поведения крыс // Журн. высш. нервн. деят.- 1997.Т. 27.-N4.-С. 462-469.

44. Гурин В.Н. Обмен липидов при гипотермии, гипертермии и лихорадке / Минск.- 1986.- 298 с.

45. Гурин В.Н. Симпатическая нервная система и регуляция температуры тела у эндотермных животных //Успехи физиол. наук. 1989. - N. 20. - № 2. - С. 3-25.

46. Давиташвили Н.Г., Прилипко Л.Л. Механизм стабилизации синаптосом токоферолом // Биохимия. -1986. Т.51. - № 3. - С. 472-477.

47. Дегтярев И.А., Бузуков A.A., Леонова Е.Ю., Зайков Г.Е. // Хим. фарм. журн. -1989.-№4. -С. 398-403.

48. Демин О.В., Вестерхофф Х.В., Холокенко Б.Н. Математическое моделирование процессов генерации супероксида del комплексом митохондрий // Биохимия. -1998. -Т. 63. № 6. - С. 755-772.

49. Дмитриев Л.Ф., Довлетшииа Л.Н., Иванов И.И., Рубин А.Б. Взаимосвязь окислительного фосфорилирования и перекисного окисления липидов // Биол. мембр. 1985. -Т. 2. - № 8. -С. 795-799.

50. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и . липопротеинов / М. : Наука. 1989. - 277 с.

51. Донченко Г.В. Биохимия убихинона (Q). Киев: Наукова думка. 1988. - 240 с.

52. Донченко Г.В. Витамин Е и процессы биологического окисления //В кн.: Витамины VIII.- 1975. Киев: Наукова думка. - С. 43-60. .

53. Донченко Г.В., Петрова Г.В., Капралов A.A. Влияние а-токоферола и ядерного токоферолсвязывающего белка на активность ДНК-полимеразы в изолированных ядрах и ядерном матриксе // Укр. биохим. журн.-1996. -Т.68(6). С.18-23.

54. Евстигнеева Р.П., Волков И.М., Чудинова В.В. Витамин Е как универсальный антиоксидант и стабилизатор биологических мембран // Биол. мембраны. 1998. -Т. 15,-№2.-С. 119-136.

55. Ерин А.Н., Спирин М.М., Табидзе Л.В., Каган В.Е. Образование комплексов а-токоферола с жирными кислотами. Возможный механизм стабилизации биомембран витамином Е //Биохимия. -1983. -Т. 48. № 11. - С. 1855-1861.

56. Жигачева И.В., Каплан Е.Я. Жирнокислотн'ый состав и энергетика митохондрий печени при введении антиоксидантов ионолового ряда // Биохим. 1985. - Т. 50. -№ 10.-С. 1582-1586.

57. Жигачева И.В., Мохова Е,Н., Скулачев В.П. Активация внешнего пути свободного окисления в митохондриях печени при охлаждении крыс // ДАН СССР. 1976. - Т. 227. - № 2. - С. 493-496.

58. Жигачева И.В., Мохова E.H. Концентрация цитохрома в печени на разных стадиях адаптации к холоду // Биофиз. 1978. - Т. 23. - № 2. - С. 285-289.

59. Журавлев А.Н. Развитие идей Б.Н.Тарусова о роли цепных процессов в биологии // В кн.: Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: - Наука. -1982. -С. 3-36.

60. Ибраимова Г.И. Следовые эффекты после гипоксических и гипотермических стимулов // Очерки по экологической физиологии. Новосиб. - Из-во СО РАМН. -1999.-С. 164-173.

61. Каган В.Е., Орлов О.Н., Прилипко Л.Л. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов / Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР. Серия Биофизика. -1986. - Т. 18. - 136 с.

62. Каган В.Е., Смирнов A.B., Савов В.М., Горкин В.З. Перекисное окисление липидов митохондриальных мембран, индуцированное ферментативным дезаминированием биогенных аминов // Вопр. мед. химии. 1984. - № 1. - С. 112119.

63. Казначеев В.П., Шорин Ю.П. Роль эндокринных факторов в процессах адаптации к экстремальным условиям высоких широт // Вестн. АМН СССР. -1980.-№ 7.-С. 76-85.

64. Калабухов Н.И. Влияние витаминов Е (токоферол) и С (аскорбиновой кислоты) на грызунов, впадающих в спячку // Бюлл. Моск. о-ва исп. природы. Сер. биол. 1964. -Т.69. N 4.- С.15-28.

65. Калабухов Н.И. Периодические (сезонные и годичные) изменения в организме грызунов // Л.: Наука. -1969.- 248 с.

66. Калабухов Н.И. Спячка млекопитающих как сочетание энергетического баланса организма и естественного отбора // В сб.: Эволюционные- аспекты гипобиоза и зимней спячки. Л.: Наука. - 1986. - С. 6 - 17.

67. Капралов A.A., Донченко Г.В., Петрова Г.В. Токоферол-связывающие белки хроматина // Украин. биохим. журнал. 1994. - Т. 66. - № 1. - С.83-9.

68. Кашкаров К.П., Васильева Е.В., Рууге Э.К. Генерация супероксидных радикалов дыхательной цепью митохондрий изолированных кардиомиоцитов // Биохимия. -.1994. -Т. 59,-№6.-С. 813-818.

69. Керимов P.E., Голощапов А.Н., Бурлакова Е.Б., Джафаров А.И. Эффектфункциональных групп молекул токоферола на вязкость митохондриальных липидов//Бюл. эксп. биол. 1987.-Т. 103. -№ 5. - С. 612-615.

70. Клименко JI.JI., Коломина JI.H., Фомин В.Р. Связь параметров перекисного окисления липидов с уровнем постоянного потенциала головного мозга крыс // Биофиз. -1987. -Т. 32. № 4. -С. 689-690.

71. Когтева Г.С., Безуглов В.В. Неэстерифицированные жирные кислоты как эндогенные биорегуляторы // Биохимия. -1998.-Т. 63. № 1.- С. 6-15.

72. Колесниченко JI.C. Влияние эмоционально-болевого стресса, гипоксии и адаптации на активность ферментов метаболизма глутатиона// Вопр." мед. химии.1994.-№5.-С. 10-12.

73. Колесниченко JI.C., Манторова Н.С., Шапиро Л.А., Ольховский И.А., Барон A.B., Кулинский В.И. Влияние эмоционального стресса на активность ферментов метаболизма глутатиона // Вопр. мед. химии. 1987. Т. 33. - N 3. С. 85-88.

74. Колосова Н.Г., Душкин М.И., Долгов A.B., Панин Л.Е. Влияние токоферола на функциональные резервы фагоцитов // Бюлл. эксперим. биол. 1991. N 6. С. 591592.

75. Колосова Н.Г., Колпаков А.Р. Измерение трансмембранного электрического потенциала митохондрий с помощью флуоресцентного зонда ДСМ // Биофизика. 1991. - Т. 36. - № 5. -с. 802-804.

76. Колосова Н.Г., Колпаков А.Р., Добронравова О.В. Изменения содержания, структуры и заряда липопротеидов крови при адаптации к холоду // Биофизика,1995.-Т. 40. № 2.-С. 422-427.

77. Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. Влияние адреналина на реакции перекисного окисления липидов у интактных и получавших токоферол крыс //Бюлл. Сибирского отделения АМН СССР.-1985.- N 6. -С.29 31.

78. Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. Механизмы защитных эффектов токоферола // Всб.: Нарушение механизмов регуляции и их коррекция. М.: 1989. - Тез. докл. 4 Всес. съезда патофизиологов. - Кишинев. - 1989. - Т.2.М. 1989.С.67.

79. Колосова Н.Г., Матаев Р.Н., Куликов В.Ю. Гормоноподобные эффекты токоферола // Тез.2 Всес. конференции Биоантиоксидант. Черноголовка. - 1986. - Т.2. - С. 22.

80. Колосова Н.Г., Шорин Ю.П., Куликов В.Ю. Реакции перекисного окисления липидов в печени и легких крыс при долговременной адаптации к холоду // Бюл. .экспер. биол.- 1981. № 4. - С.436-437.

81. Колосова Н.Г., Шорин Ю.П., Селятицкая В.Г., Куликов В.Ю. Механизм повышения надежности организма с помощью антиоксидантов биологи // В кн.: Надежность и гомеостаз биологических систем. Киев: Наукова думка. - 1987. -С. 162- 168.

82. Колосова Н.Г., Куликов В.Ю., Колесникова Л.И. Реакции перекисного окисления липидов при перелете животных в Заполярье // Тез. докл. 4 Между нар. симп. по приполярной медицине. Новосибирск. - 1978. - Т. 1.- С. 129-130.

83. Колпаков А.Р., Колпаков М.А., Панин Л.Е. Фармакокинетика антипирина и изониозида у крыс в динамике адаптации к холоду // Бюлл. эксперим. Биологии. -1994. Т. 118.-№ 9. - С. 279-280.

84. Кондрашова М.Н., Григоренко Е.В., Бабский А.М., Хазанов В.А. Гомеостазирование физиологических функций на уровне митохондрий // В кн.: Молекулярные механизмы клеточного гомеостаза. Новосибирск: Наука. - 1987. - С. 40-64.

85. Коношенко Г .И., Мохова E.H. Характеристика митохондрий тимоцитов // Биохимия.-1983.-Т. 48.-№ 4. с. 652-656.

86. Косников В.В. Методы измерения трансмембранных электрических потенциалов в клетке // Укр. биохим. журн. 1990. - Т. 62. - № 1. - С. 3-16.

87. Коста Э., Тарабукки М. Эндорфины // М.: Мир. -1981. 387 с.

88. Краковский М.Э. Активность узловых окислительно-востановительных ферментов у кроликов с разными типологическими особенностями // Журн. высш. нервн. деят. -1987.- Т.37. N 3. - С. 457-463.

89. Краковский М.Э., Каменецкая Ц.Л. ОсЬбенности некоторых биохимических процессов в печени крыс с различными типами поведения в открытом поле // Журн. высш. нервн. деят., 1989. - Т.39.- 3. -С. 506-511.

90. Крепе Е.И. Липиды клеточных мембран // Л.: Наука. 1981. - 339 с.

91. Куликов В.Ю. Северная экология и проблемы адаптации человека // В кн.: Медико-экологические аспекты адаптации жителей тропиков в Арктике (по материалам советско-индийской экспедиции). Ч. I. - Новосибирск. - 1994. - с. 924.

92. Куликов В.Ю., Семенюк A.B., Колесникова Л.И. Перекисное окисление липидов и холодовой фактор // Новосибирск. Наука. - 1988. - 192 с. ЮО.Куница Н.И., Кузьменко И.В., Алексеев С.М., Захарова Е.И., Донченко Г.В.

93. Участие токоферола и его аналогов в процессах перекисного окисления липидов и транспорта электоронов в митохондриях печени in vivo //Биохимия. 1993. - Т. 58, в. 11.-С. 1709-1713.

94. Ю2.Левшина И.П., Гуляева Н.В. Зависимость влияния острого стресса на латерализацию продуктов перекисного окисления липидов в мозге от типологических особенностей поведения крыс // Бюл. экспер. биол. 1991. - Т.- .2. С. 568-569.

95. ЮЗ.Либе М.Л., Богданова Е.Д, Розенберг А.Е., Прилипко Л.Л. Связывание ЗН-серотонина, ЗН-диазепама и перекисное окисление липидов в мембранах мозга // Бюл. экспер. биол. -1981. № 11. - С. 552-554.

96. Ломакина Л.В. Влияние низкой температуры на перекисное окисление липидов и интенсивность протеолиза в тканях мозга и печени крыс // Укр. биох. журнал. -1980. Т. 52. - № з. - С. 305-306.

97. Юб.Львова С.П., Горбунова Т.Ф., Абаева Е.М. Влияние гипотермии и даларгина на перекисное окисление липидов в тканях крыс // Вопр. мед. химии. -1993. Т. 39. -№ 3. - С.21-24.

98. Ю7.Малышев И.Ю., Манухина Е.Б. Стресс, адаптация и оксид азота // Биохимия. -1998. Т. 63.-№ 7.-С. 992-1006.

99. Мальцева Е.Л., Бурлакова Е.Б. Различие в ответе мембран клеток мозга и печени на действие in vivo и in vitro антиоксиданта и жирной кислоты (по изменению активности циклаз и вязкости) //Биол. мембраны. -1986,- Т.З. № 8. -С. 773-780.

100. Ш.Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование // М.: Мир. 1987. - 332 с.

101. Маркин A.A., Журавлева O.A. Перекисное окисление липидов и состояние системы антиоксидантной защиты у крыс после 14-дневного полета на космическом корабле "Космос-2044" \\ Авиокосм. эколог, мед. 1993. - Т. 27. - № 1. - С. 47-50.

102. ПЗ.Меерсон Ф.З. Адаптационная медицина: мехнизмы и защитные эффекты адаптации. М. - 1993. - 298.

103. П.Меньшикова Е.Б., Зенков Н.К., Шергин С.М. Биохимия окислительного стресса// Новосибирск. 1994. - 203 с.

104. Мертвецов Н.П., Зеленин С.М., Морозов И.В., Мишин В.П., Чесноков В.Н., Вишнивецкий С.Н. Структура и гормональная регуляция экспресии гена тирозинаминотрансферазы у млекопитающих //Пробл. эндокринол. 1990. - Т. 36,-№4.-С. 42-51.

105. Молодавкин Г.М., Поюровский М.В. Влияние антиоксиданта дибунола в комбинации с феназепамом на поведение крыс в конфликтных ситуациях // Бюл. экспер. биол. 1985.-Т. 100.-№ 7.-С. 36-38.

106. Маянский Д.Н., Воронина Н.П. Изменение функционального состояния макрофагов после дозированной физической нагрузки // Пат. физиол. и эксп. терапия. 1989. - № 3. - С. 56-59.

107. Нейфах Е.А. Активация глюкозой НАДФ-зависимого перекисного окисления липидов, сопряженная с поглощением клетками токоферола // Тез. II Всесоюзн. конф. "Биоантиоксидант". 1986. - Т. И. - С. 215.

108. Николаев В.И., Денисенко Н.П., Николаева Р.В. Изменение перекисного окисления липидов в зависимости от длительности электрической стимуляции дорзомедиального ядра гипоталамуса // Вопр. мед. хим. 1995. -Т. 41. - № 6. - С. 33-36.

109. Никушин E.B. Перекисное окисление липидов в центральной нервной системе в норме и патологии // Нейрохимия. 1989 - Т. 8. - № 1. - С. 124-145.

110. Новгородов С.А., Грузь Т.И., Кушнарев Ю.Е. и др. Механизм индукции неспецифической проницаемости внутренней мембраны митохондрий гидроперикисями // Биолог, мембр. -1990. Т.7. -N 9. - С. 945-950.

111. Пальмина Н.П., Мальцева Е.Л., Курнакова Н.В., Бурлакова Е.Б. Влияние а-токоферола в широком спектре концентраций (Ю-2 . ю-17м) на активность протеинкиназы С. Связь с пролиферацией и опухолевым ростом // Биохимия. -1994. -Т. 59. №. 2. - С.1 93-200.

112. Панин Л.Е. Энергетические аспекты адаптации / Л.: Медицина. 1978. - 191 с.

113. Панин Л.Е. Биохимические механизмы стресса // Новосибирск: Наука. 1983. -234 с.

114. Панин Л.Е., Колпаков А.Р., Потеряева О.Н., Добронравова О.В. Влияние длительного охлаждения на содержание апопротеинов А-1, В и Е в сыворотке крови крыс // Росс, физиол. журн. 1999. - Т. 85. - № 2. - С. 263-267.

115. Панин Л.Е., Поляков Л.М., Кузьменко А.П., Потеряева О.Н., Скрыль Г.Щ. Обнаружение апопротеин A-1-иммунореактивности в хроматине ядер гепатоцитов крыс // Биохимия.-1992,- Т. 57.- N 6.- С. 826-831.

116. Панин Л.Е., Усынин И.Ф., Трубицина О.М., Харьковский A.B., Соколова М.В., Останина Л.С. Роль гепатоцитов, купферовских и эндотелиальных клеток печени в обмене липопротеидов крови // Биохимия.- 1994.- Т. 59.- N 3.- С. 353359.

117. З.Панов A.B. Регуляция специфической и неспецифической ионных проводимостей митохондрий переносчиком адениннуклеотидов // Биохимия. -1992.-Т. 57.-№ 4.-С. 483-493.

118. Панов A.B., Филлипова С.Н., Ляхович В.В. Механизм нефосфорилирующего влияния АДФ на митохондриальные функции // Биохимия. -1979. Т. 44. - С. 1738-1746.

119. Паранич A.B. Сезонные изменения содержания витамина Е в организме белых крыс разного возраста // Физиол. журн. 1984. - Т. - 30. - № 2. - С. 217-222.

120. Пастухов Ю.Ф. Некоторые особенности длительной и ускоренной адаптации к холоду // Тр. Северо-Восточного комплексн. и-та Дальневост. центра АН СССР. -Магадан. 1971. - Вып. 42. - С. 110-138.

121. Пастухов Ю.Ф. Несократительный термогенез и симпатическая регуляция теплопродукции при адаптации организма к холоду // Экологическая физиология животных. Ч. 3. Руководство по физиологии. Л.: Наука, 1982. - С. 84-92.

122. Пастухов Ю.Ф. Физиология адаптации к холоду. Сравнительные и методологические аспекты // В кн.: Проблемы терморегуляции и температурной адаптации. Новосиб. - 1992. - С. 158-172.

123. Пастухов Ю.Ф., Хаскин В.В. Адренергический контроль термогенеза при экспериментальной и природной адаптации к холоду //Успехи физиол. наук. -1979.-Т. 10.-№ 1.-С. 121-142.

124. НО.Петрова В.А., Малышев В.В., Манухин Б.Н., Меерсон Ф.З. Ограничение стрессорной активации адренергической и • гипофизарно-надпочечниковой системы токоферолом //Вопр. мед. химии. 1985. - Т. 31. - № 6. - С. 115-118.

125. Плецитный К.Д. Витамин Е: иммунокоррегирующий эффект у больных бронхиальной астмой // Вопр. мед. химии. 1995. - Т. 41. - № 4. - С.33-36.

126. Подвигин А.Н., Воронин А.Ю., Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., Колосова Н.Г. Влияние токоферола на функциональную активность альвеолярных макрофагов //В сб.: Механизмы повреждения и регуляции восстановительных процессов. -Новосибирск. 1988. - С. 11 - 12.

127. НЗ.Подвигина Т.Т. Закономерности реагирования гипофизарноадренокортикальной системы на повторные стрессорные раздражители // Успехи физиол. наук.-1998. Т. 29. - № 1. - С. 11-22.

128. Проссер Л., Браун Ф. Сравнительная физиология животных. М.: Мир. 1967. -766 с.

129. Протасова Т.Н. Гормональная регуляция активности ферментов. М.: Медицина.-1975. - 239 с.

130. Сазонтова Т.Г., Архипенко Ю.В. Механизмы кардиопротекторного действия пролиненасыщенных жирных кислот класса п-3 // Пат. физиол. эксперим. терапия. 1997. - № 2. - С. 41-46.

131. Саркисова К.Ю. Связь между типом поведения, особенностями окислительного метаболизма мозга и устойчивостью к патогенным воздействиям // Автореф. докт. дисс. М. - 1997. -36 с.

132. Скакун Н.П., Высоцкий И.Ю. Сезонные особенности желчеобразования и перекисного окисления липидов у белых крыс //Физиол. журн. 1988. - Т. 34. - № 2. - С. 89-94.

133. Скулачев В.П. Нефосфорилирующее дыхание как механизм,предотвращающий образование активных форм кислорода // Молекул, биол. -1995. -Т. 29. -В. 6. С. 1199-1209.

134. Скулачев В.П. Трансформация энергии в биомембранах // М.:Наука. 1981.199 с.

135. Скулачев В.П. Энергетика биологическуих мембран. М.: Наука.- 1989. 556 с.

136. Слоним А.Д. Физиология терморегуляции. М.: Наука. 1981. - С. 378 - 440.

137. Сокирченко И.А., Шкурупий В.А. Влияние а-токоферола на структурную организацию печени крыс // Бюл. экспер. биол. 1989. - Рук. ДеПон. ВИНИТИ 06.06.89, № 3720-В89. - 11 с.

138. Тарусов Б.Н. Авторегуляторная роль антиоксидантов при адаптации организма к факторам внешней среды // Биофизика. 1970. -Т. 15. - № 2. - С. 324334.

139. Теплый Д.Л., Горст H.A., Нестеров Ю.В. Активность суфрактанта и перекисное окисление липидов при воздействии холодом и после введения -токоферола // Росс, физиол. журн. 1997. - Т. 83. - № 10. - С. 63-67.

140. Терновой В.А., Шиницина В.В., Яковлев В.М. Изменения содержания холестерина и фосфолипидов различных типов в тканях крыс при холодовой акклимации//Журн. эволюц. биох. и физиол. -1989. Т. 25. - N 1. - С. 15-19.

141. Тигранян P.A. Гормонально-метаболический . статус организма при экстремальных воздействиях. М.: Наука, 1990. 288 с.

142. Толстухина Т.И., Ракицкая В.В., Флеров М.А. Перекисное окисление липидов в гиппокампе крыс после введения кортизола в условиях стресса // Россиск. физиол. журнал. -1999. Т. 85. - №3.- С. 436-441.

143. Тюрин В.А., Тюрина Ю.Ю., Соколова Т.В., Ардуни А. Участие пальмитиновой кислоты в репарации мембран синаптосом при окислительном стрессе. Роль пальмитоилкарнитина в механизме адаптации // Журн. эволюц. биох. и физиол.-1998.-Т. 34.-№1.-С. 3-10.

144. Усков Ф.Н. К вопросу о противосудорожной активности а-токоферола // Фармакология и токсикология. -1965. -Т. 28. № 4. - С. 422-424.

145. Федотова И.Б., Семехина А.Ф., Архипова Г.В., Бурлакова Е.Б. Возможность коррекции некоторых комплексных поведенческие реакции у крыс линии КМ с помощью антиоксидантов // Журн. высш. нервн. деят. -1990. Т. 40. - № 2. - С. 318-325.

146. Хаскин В.В. Основные изменения энергетики теплообразования при адатации к холоду // В кн.: Физиология терморегуляции. Д.: Наука. - 1984. - С. 243-266.

147. Храпова Н.Г. Биохимия липидов и её роль в обмене веществ. М.: Наука, 1981. -С. 147-154.

148. Шабалина И.Г., Колпаков А.Р., Соловьев В.Н., Панов A.B., Панин JI.E. Роль переносчика адениннуклеотидов в регуляции энергетического состояния и проницаемости митохондрий печени крыс при действии холода // Биохимия. -1995. Т. 60. - № 3. - С. 317-322.

149. Швецова Е.И. Следовые эффекты длительных и кратковременных охлаждений и их значение в адаптации к холоду // Физиол. журн. СССР. 1977. - Т. 83. - № 11.-С. 1715-1720.

150. Якименко М.А. Длительная адаптация организма человека и животных к холоду // В кн.: Физиология терморегуляции. JL: Наука, 1984. - С. 223-236.

151. Яхнина Д.Н. Патобиохимические аспекты защитного действия а-токоферола при гипоксии // Автореф. докт. дисс. М.- 1980. - 42 с.

152. Adachi К., Miki М., Tamai Н., Tokuda М., Mino М. Adipose tissues and vitamin E // J. Nutr. Sei. Vitaminol. (Tokyo). 1990. - V. 36. - N 4. - P. 327-237.

153. Ahmed S.P., Ahmad M., Ahmed S.I., Najam R., Khurshid S.J. Effect of some psychoactive drugs on stress induced alteration in plasma corticosterone level // JPMA J. Pak. Med. Assoc. 1995,- V. 45. N 6. - P. 153-155.

154. Ahmed S.S., Napoli K.L., Strobel H.W. Oxygen radical formation duringcytochrome P450-catalyzed cyclosporine metabolism in rat and human liver microsomes at varying hydrogen ion concentrations // Mol. Cell Biochem. -1995. V. 151(2). P.131-140.

155. Akerboom T.P., Sies H. Assay of glutathione, glutathione disulphide, and glutathione mixed disulphides in biological samples // Methods Enzymol. 1981. - V. 77.-P. 373-382.

156. Andreev A.Yu., Bondareva T.O., Dedukhova V.N., Mokhova E.N., Skulachev V.P., Volkov N.I. Carboxyatractylate inhibits the uncoupling effect of free fatty acids // FABS Lett. -1988. -V. 226. N 2. -P. 265-269. •

157. Angelico R., Cavina Y., D'Anton A., Giocoli Y. Fractionation and determination of the lipid and steroid // J. Chromatogr. 1965. - V.l 8. - P.57.

158. Arai H. Molecular mechanism of vitamin E transport in the Body // Nippon Rinsho. -1999. V. 57. - N10. - P.2276-2283.

159. Arita M., Sato Y., Miyata A., Tanabe T., Takahashi E., Kayden H.J., Arai H, Inoue K. Human alpha-tocopherol transfer protein: cDNA cloning, expression and chromosomal localization // Biochem. J . 1995. - V.306. - N 2. - P. 437-43.

160. Azhar S., Cao L., Reaven E. Alteration of the adrenal antioxidant defense system during aging in rats // J. Clin Invest. 1995. - V.96. - N 3. - P. 1414-1424.

161. Azzi A., Boscoboinik D., Fazzio A., Marilley D., Maroni P., Ozer N.K., Spycher S., Tasinato A. RRR-alpha-tocopherol regulation of gene transcription in response to the cell oxidant status // Z. Ernahrungswiss. 1998. - V. 37. - N 1. - P.21-28.

162. Baba A., Lee E., Ohta A., Aatsuno T., Iwata H. Activation of adenilate cyclase of ratbrain by lipid peroxidation // J. Biol. Chem. -1981. -V. 256. N 8. -P. 3679-3684.

163. Bahr V., Mobius K., Redmann A., Oelkers W. Ascorbate and alpha-tocopherol depletion inhibit aldosterone stimulation by sodium deficiency in the guinea pig // Endocr. Res. 1996. - V. 22. - N 4. - P. 595-600.

164. Bains J.S., Shaw C.A. Neurodegenerative disorders in humans: the role of glutathione in oxidative stress-mediated neuronal death // Brain Res. Rev. 1997. -V.25. - N 3. - P.335-358.

165. Bakker H.D., Scholte H.R., Jeneson J.A. Vitamin E in a mitochondrial myopathy with proliferating mitochondria //Lancet. 1993. - V. 342 (8864). - P.175-176.

166. Banerjee P. Role of lipids in receptor mediated signal transduction // Indian J. Biochem. Biophys. 1993. - V. 30. - N 6. - P. 358-369.

167. Bangur C.S., Howland J.L., Katyare S.S. Thyroid hormone treatment alters phospholipid composition and membrane fluidity of rat brain mitochondria // Biochem. J. -1995. -V. 305, Part 1. P. 29-32.

168. Baoutina A., Dean R.T., Jessup W. Alpha-tocopherol supplementation of macrophages does not influence their ability to oxidize LDL // J. Lipid Res. 1998. -V.39. -N. 1. P.114-130.

169. Barja de Quiroga G. Brown fat thermogenesis and exercise: two examples of physiological oxidative stress? // Free Radic. Biol. Med. 1992. - V.13. - N 4. - P.325-340.

170. Barja de Quiroga G., Lopez-Torres M., Perez-Campo R., Abelenda M., Paz Nava M., Puerta M.L. Effect of cold acclimation on GSH, antioxidant enzymes and lipid peroxidation in brown adipose tissue // Biochem. J. 1991. -V. 277. - N 1. - P.289-292.

171. Barja G., Cadenas S., Rojas C. Effect of dietary vitamin E levels on fatty acid profiles and nonenzymatic lipid peroxidation in the guinea pig liver // Lipids -. -V. 31. -N 9.- P. 963-970.

172. Bartus R.T. Short-term memory in the rhesus monkey: effects of dopamine blockade via acute haloperidol administration // Pharmacol. Biochem. Behav. -1978. V.9. - N.3. - P.353-357.

173. Baxter J.D., Forshman P.H. Tissue effects of glucocorticoids // Amer. J. Med. -1972. -V.53. N 5. - P.573-589.

174. Bindoli A.L. Lipid peroxidation in mitohondria // Free Radic. Biol. Med. 1988. -V.5.-N 1. - P.247- 261.

175. Bjorneboe A., Hagen B., Kveseth N., Drevon C. Transport and distribution of a-tocopherol in limph, serum and liver cells in rats // Biochim. Biophys. Acta: Mol. Cell Res. 1986. -V. 889 (CI6). - N 3. - P. 310-315.

176. BlobeI G., Potter V.R. Nuclei from rat liver: isolation method that combines purity with high Yield // Science. 1966. -V. 154 (757). - P. 1662-1665.

177. Borodin A., Dorovskih V.A., Tselyuko S.S. Low temperature as a pro-oxidant factor: prolonged cold exposure activates lipid peroxidation in rat tissues //J. Circumpolar health. 1997. -V. 56. -N 1-2. - P.49-53.

178. Boscoboinik D.O., Chatelain E., Bartoli G.M, Stauble B., Azzi A. Inhibition of protein kinase C activity and vascular smooth muscle cell growth by d-alpha-tocopherol // Biochim. Biophys. Acta. 1994. - V. 1224. - N 3. P.418-426.

179. Bosterling B., Trudell J.R., Trevor A.J., Bendix M. Lipid-protein interactions as determinants of activation or inhibition by cytochrome b5 of cytochrome P-450-mediated oxidations // J. Biol. Chem. 1982. - V.257. - N 8. - 4375-4380.

180. Brigelius-Flone R., Traber M.G. Vitamin E: function and metabolism // FASEB J. -1999.-V.13.-N 10 . P.l 145-1155.

181. Buck R., Gorse J. Lipids in the cell nucleus // Postepy Hig. Med. Dosw. 1997. -V.51. - N 3. - P.319-328.

182. Bunting J., Phan T., Kamali E., Dowber R. Fluorescent cationic probes of mitohondria. Metrics and mechanism of interection // Biophis. J. 1989. - V. 56. - P. 979-993.

183. Burbenskaya N.M., Nartsissov Y.R., Tsofina L.M., Komissarova I.A. Theuncoupling effect of some psychotropic drugs on oxidative phosphorylation in rat liver mitochondria // Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. - V.45. - N 2. - P. 261- 268.

184. Burgin R., Weizman R., Gavish M. Repeated swim stress and peripheral-type benzodiazepine receptors //Neuropsychobiol.-1996.-V.33.- N 1.- P. 28-31.

185. Burgin R., Weizman R., Gavish M. Repeated swim stress and peripheral-type Repeated swim stress and peripheral-type benzodiazepine receptors // Neuropsychobiology. 1996. - V. 33. -N 1. - P. 28-31.

186. Burlakova Ye.B., Pal'mina N.P., Mal'tseva Ye.L. Membrane Lipid Oxidation III // Ed. Vigo-Pelfrey C. Boca Ration: CRC Press, 1991. - P.209-239.

187. Capel I., Dorrel H., Smollwood A. The influence of cold-restraint stress on some components of the antioxidant defenence system in the tissues of rats of various ages // J. Toxicol. And Environ. Health. 1983. -V. 11. - P.425-436.

188. Carayon P., Portier M., Dussossoy D. et al. Involvement of peripheral benzodiazepine receptors in the protection of hematopoietic cells against oxygen radical .damage // Blood. 1996.- V. 87.- N 8.- P. 3170-3178.

189. Cardoso SM, Pereira C, Oliveira R Mitochondrial function is differentially affected upon oxidative stress // Free Radic. Biol. Med. 1999. - V. 26(1-2). - P.3-13.

190. Chan W. Cellular interactions of vitamin E cytokines and growth factors // Nutr.

191. Research. 1996. - V. 16. - №: 3. - P. 427-434.

192. Chance B., Wilims G.R. Respiratory enzymes in oxidativ phosphorylation. III.The stady-state //J. Biol.Chem. 1955. - V.217. - P.411-418.

193. Chen H.W., Lii C.K., Sung W.C., Ko Y.J. Effect of vitamin E on rat hepatic cytochrome P-450 activity // Nutr. Cancer. 1998. - V. 31. - N. 3. - P. 178-83.

194. Chow C.K., Ibrahim W., Wei Z., Chan A.C. Vitamin E regulates mitochondrial hydrogen peroxide generation // Free Radic. Biol. Med. 1999. - V. 27(5-6). - P. 580587.

195. Chugh Y., Saha N., Sankaranarayanan A., Sharma P.L. Possible mechanism of haloperidol-induced enhancement of memory retrieval // Methods Find Exp. Clin. Pharmacol. 1991.- V. - 13. - N 3. - P. 161-164.

196. Cohen A.J., Bartlik B. Ginkgo biloba for antidepressant-induced sexual dysfunction // J. Sex Marital Ther. 1998. - V. 24. - N 2. - P.139-143.

197. Constantinescu A., Maguire J.J., Packer L. Interactions between ubiquinones and vitamins in membranes and cells //Mol. Aspects Med . -1994. -V. 15. P. S57-S65.

198. Daniels W.M.L., Vanresburg S.J., Vanzyl J.M. Free radical scevengering effects of melatonin and serotonin: Possible mechanism // Neuroprot. -1996. -V. 7. N 10. - P. 1593-1596.

199. Das S., Patnaik B.K. Effect of age and partial water deprivation on lipid peroxidation in the brain of male garden lizard // Comparative Biochemistry and

200. Physiology B Biochemistry & Molecular Biology. - 1996. - V. 114.- N. - 4. - P. 361365.

201. Deliconstantinos G., Villiotou V., Stavrides J.C. Modulation of particulate nitric oxide synthase activity and peroxynitrite synthesis in cholester enriched endothelial cell membranes // Biochemical Pharmacology. 1995. - V. 49. - N 11. - P. 1589-1600.

202. Diamondstone T.Y. Assey of tyrosine transaminase activity by conversion of p-hydroxyphenilpyruvate to p-hydroxybensaldehyde // Anal. Biochem. 1966. - V.16. -N 3. - P.395-401.

203. Diplock A.T. Will the 'good fairies' please prove to us that vitamin E lessens human degenerative disease? // Free Radic. Res. 1997. - V.26. - N 6. P. 565-583.

204. Dobashi K., Pahan K., Chahal A., Singh I. Modulation of endogenous antioxidant enzymes by nitric oxide in rat C6 glial cells // J. Neurochem. 1997. - V. 68.- N 5. -P.1896-1903.

205. Duncombe W.G. The colorimetric micro-determination of non-esterified fatty acids in plasma // Clin. Chim.Acta. 1969. -V. 9. - N 2. - P. 122-125.

206. Dutta-Roy A.K. Molecular mechanism of cellular uptake and intracellular translocation of alpha-tocopherol: role of tocopherol-binding proteins // Food Chem.

207. Toxicol. 1999. - V. 37(9-10). - P. 967-971.

208. Eggleton P., Gargan R., Fisher D. Rapid method for the isoletion of neutrophils in high yield without the use of dextran or density gradient polymers // J. Immunol. Methods. 1989.-V. 121.-P. 105-113.

209. Engelke M., Bojarski P., Diehl H.A., Kubicki A. Protein-dependent reduction of the pyrene excimer formation in membranes // J. Membr. Biol.- 1996. V.153. - N 2. -P.117-123.

210. Esposito L.A., Melov S., Panov A., Cottrell B.A., Wallace D.C. Mitochondrial disease in mouse results in increased oxidative stress // Proc. Nat. Acad. Sci. U- S A . -1999. V.96. - N 9. - P.4820-4825.

211. Fazzio A., Marilley D., Azzi A. The effect of alpha-tocopherol and beta-tocopherol on proliferation, protein kinase C activity and gene expression in different cell lines // Biochem. Mol. Biol. Int. 1997. - V.41. - N 1. - P. 93-101.

212. Feingold I.B., Colby H.D. Sex differences in adrenal and hepatic alpha-tocopherol concentrations in rats // Pharmacology. 1992. - V.44. - N 2. - P. 113-116.

213. Feingold I.B., Longhurst P.A., Colby H.D. Effects of adrenocorticotropic hormone and dexamethasone on adrenal and hepatic alpha-tocopherol concentrations // Free Radic. Biol. 1999. - V.26. - N 5-6. - P.633-638.

214. Feingold I.B., Longhurst P.A., Colby H.D.Regulation of adrenal and hepatic alpha-tocopherol content by androgens and estrogens // Biochim. Biophys. Acta. 1993. -V.l 176. - N 1. - P.192-196.

215. Fletcher B.L., Dilard C.J., Tappel A.L. Measurement of fluorescent lipid peroxidation prodacts in biological sistems and tissues. Analit. Biohem. - 1973. - V. 52.-N 1.-P. 1-9.

216. Flohe L. Glutation: chemical, biohemical and medical aspects. Pt A: Coenzymes and cofactors/ Eds Dolphin D. Et al. N.Y.: J. Wiley and sons. 1989. - V. 3. - P. 643-679.

217. Florian V., Schonfeld P. Alteration of the ADP/ATP translocase isoform pattern improves ATPexpenditure in developing rat liver mitochondria // FEBS Lett. 1998. -V. 433.-N3.-P. 261-264.

218. Floyd R.A. The effect of peroxides and free radicals on body tissues // J. Am. Dent

219. Assoc.- 1997.-V. 128. P.37S-40S.

220. Forsmarkandree P., Lee C.P., Dallner G., Ernster L. Lipid peroxidation and changes in the ubiquinone content and the respiratory chain enzymes of submitochondrial particles // Free Radical Biology and Medicine. 1997. - V. 22. - N 3. - P. 391-400.

221. Fredriks W.M., Bosh K.S. Localization of superoxide dismutase axtivity in rat tissues // Free Radic. Biol. Med. -1997. V. 22. - № 1-2. r P. 241 - 248.

222. Fridovich I. Superoxide dismutases //Ann. Rev. Biochem. 1975. - V. 44. - P. 147159.

223. Gironcalle J., Zvizinski C.W., Shmid H.H.O. Peroxidaitiv damage to cardiac mitochondria.2. Immunoglobulin analisis of modifaied adenin nukleotide translocase // Arch. Biochem. Biophys. 1994. - V. 315. - P. 1-7.

224. Girotti A.W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effector action in biological systems // J. Lipid Res. 1998. - V.39. - N 8. - P. 1529-42.

225. Qoebei g ? Dietrich M., Jarry H., Wuttke W. Indirect evidence to suggest that prolactin mediates the adrenal action of haloperidol to stimulate aldosterone and corticosterone secretion in rats // Endocrinology. 1992. - V. 130. - N 2. - P. 914-919.

226. Goncalves T.M., Fernandes L., Olivera C.R. Influence of membrane lipid peroxidation on neurotransmitter relise // J. Neurochem. -1989. -V.52. -N 1. -P. 204.

227. Goodman Y., Bruce A.J., Cheng B., Mattson M.P. Estrogens attenuate and corticosterone exacerbates excitotoxicity, oxidative injury, and amyloid beta-peptide toxicity in hippocampal neurons // Pharmazie. 1996. - V. 51. - N 1. - P. 51-53.

228. Gordon C.J., Rowsey P.J. Poisons and fever // Clin. Exp. Pharmacol Physiol. 1998. - V. 25. - N 2. - P.145-149.

229. Gorgani M.N., Pour-Rahimi F., Meisami E. Arrhenius plots of membrane-bound enzymes of mitochondria and microsomes in the brain cortex of developing and old rats//Mech. Ageing Dev. 1986. - V.35. - N1. - P.l-15.

230. Gottesfeld J.M., Bagi G., Berg B., Bonner J. Sequence composition of the template-active fraction of rat liver Chromatin // Biochemistry. 1976. - V. 15. - N 11. - P. 2472-2483.

231. Goubern M., Capey M.F., Portet R. Time-course variations of effective proton conductance and GDP binding in brawn adipose tissue mitochondria of rats prolonged cold exposure // Comp. Biochem. Physiol. 1991. - V. 100b. -N 4. -P. 727-732.

232. Green D.R., Reed J.C. Mitochondria and apoptosis // Science. 1998. - V. 281(5381). -P.1309-1312.

233. Grimble R.F. Effect of antioxidative vitamins on immune function with clinical applications // Int. J. Vitam. Nutr. Res. 1997. - V.67. - N 5. - P. 312-320.

234. Gromov L.A., Portniagina V.A., Sereda P.I., Bobkova L.S. Pharmacologic analysis of the free radical mechanism of poisoning-induced memory disorders // Exp. Neurol. -1994. V. 125. - N1. - P. 15-21.

235. Gudz T., Eriksson O., Kushnareva Y., Saris N.E., Novgorodov S. Effect of butylhydroxytoluene and related compounds on permeability of the inner mitochondrial membrane // Arch. Biochem. Biophys. 1997. - V. 342. - N 1. - P.143-156.

236. Habara Y, Kuroshima A Enhanced formation of cyclic AMP after cold acclimation in the rat//Jpn. J Physiol. 1987. - V.37. - N 6. - P. 1051-1056.

237. Halgberg F. Chronobiological glossary // Intern. J. Chronobiol. 1973. - V. 2. - N 1. -P.31-63.

238. Hart J.S. Insulative and metabolic adaptation to cold in vertebrates // Symp. Soc.Exp. Biol.-V. 18,-P.31-48.

239. Hart J.S., Jansky L. Thermogenesis due to exposure and cold in warm- and cold-acclimated rats //Can. J. Biochem. Physiol. -1963.- V.41.- P.629-636.

240. Hatanaka Y., Fujii J., Fukutomi T., Watanabe T., Che W., Sanada Y., Igarashi Y.,

241. Taniguchi N. Reactive oxygen species enhances the induction of inducible nitric oxide synthase by sphingomyelinase in RAW264.7 cells // Biochim. Biophys. Acta. 1998. -V.1393. - N 1. - P. 203-210.

242. Hazel J.R. Adaptation to temperature: phospholipid synthesis in hepatocytes of rainbow trout //Am. J. Physiol 1990.-V. 258.-N 6, Pt. 2. - P. R1495-501.

243. Hening B., Chow C.K. Lipid peroxidation and endotelial cell injury: Implications in aterosklerosis. review // Free Radical. Biol. Med. -1988. -V. 4. -P. 99-105.

244. Hermesh O., Kalderon B., Bar-Tana J. Mitochondria uncoupling by a long chain fatty acyl analogue //J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - N 7. - P. 3937-3942.

245. Herox O. Physiological adjustments responsible for metabolic cold adaptation and posible deleterious consequences // Rev. Can. Biol. -1974. V. 33. - N 3. -P. 209-222.

246. Hidalgo J., Gasull T., Garcia A., Blanquez A., Armario A. Role of glucocorticoids and catecholamines on hepatic thiobarbituric acid reactants in basal and stress conditions in the rat // Horm. Metab. Res. 1991. - V.23. - N 3. - P.104-109.

247. Hilbert J., Mohsenin V. Adaptation of lung antioxidants to cigarette smoking in humans//Chest.- 1996. V.l 10.-N 4. - P. 916-920.

248. Hirahara F. Trend of vitamin E // Nippon Rinsho. 1999. - V.57. -N 10. - P. 22362241.

249. Hochgraf E., Mokady S., Cogan U.Dietary oxidized linoleic acid modifies lipid composition of rat liver microsomes and increases their fluidity // J. Nutr. 1997. -V.127.-N5.-P. 681-686.

250. Hollander D., Dadufalza V. Lymphatic and portal absorption of vitamin E in aging rats//Dig. Dis. Sci. 1989. - V.34. - N 5. - P.768-772.

251. Hrycay E.G., Jonen H.G., Lu A.Y.Y., Levin W. Reconstitution of the reduced nicotinamide adenine dinucleotide-peroxidase activities from solubilised components of rat liver // Arch. Biochem. Biophys. -1975. -V. 166. P. 145-151:

252. Jansky L. Nonshivering thermogenesis //Ed. Jansky L. Prague: Academia, 1971. -• P.159-172.

253. Jezek P., Engstova H., Zackova M., Vercesi A.E., Costa A.D., Arruda P., Garlid K.D. Fatty acid cycling mechanism and mitochondrial uncoupling proteins // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - V. 1365.-N 1-2. - P.319-327.

254. Jezek P., Garlid K.D. Mammalian mitochondrial uncoupling proteins // Int. J.

255. Biochem. Cell. Biol. 1998. - V. 30. - N11. - P.l 163-1168.

256. Joseph-Liauzun E., Delmas P., Shire D., Ferrara P. Topological analysis of the peripheral benzodiazepine receptor in yeast mitochondrial membranes supports a flve-transmembrane structure // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273. - N 4. - P. 2146-2152.

257. Kagan V.E., Serbinova E.A, Stoyanovsky D.A., Khwaja S., Packer L. Assay of ubiquinones and ubiquinols as antioxidants Oxygen Radicals in Biological Systems, Pt D / Series: Methods in Enzymology. 1994. - V. 234. - P. 343-354.

258. Kalabukhov N.I. Effect of vitamin E (tocopherol) and vitamin C (ascorbic acid) on hibernating rodents // Fed. Proc. Transl. Suppl. 1965. - V. 24. - N 5. - P. 851-857.

259. Kanno T., Utsumi T., Takehara Y., Ide A., Akiyama J., Yoshioka T., Horton A.A., Utsumi K. Inhibition of neutrophil-superoxide generation by alpha-tocopherol and coenzyme Q // Source Free Rad. Research . 1996. - V. 24. - N 4. - P. 281-289.

260. Kanter M. Free radicals, exercise and antioxidant supplementation // Proc. Nutr. Soc. 1998.-V.57.-N 1.-P.9-13.

261. Kawabata A., Hata T. Possible involvement of oxygen-derived free radicals in .abnormal hemostasis induced by SART stress (repeated cold stress) in laboratory animals //Thromb. Res. 1993. - V. 72. -N 4. - P.321-331.

262. Kawasaki T. Antioxidant function of coenzyme Q // J. Nutr. Sci. Vitaminol. (Tokyo). 1992. - Spec No. - P.552-555.

263. Kim J.D., McCarter R.J., Yu B.P. Influence of age, exercise, and dietary restriction on oxidative stress in rats // Aging (Milano). 1996. - V. 8. - N 2. - P.123-129.

264. Korshunov S.S., Korkina O.V., Ruuge E.K., Skulachev V.P., Starkov A.A. Fatty acids as natural uncouplers preventing generation of O^. and H2O2 by mitochondria in the resting state //FEBS Lett.-1998. V.435. -N 2-3. - P.215-218.

265. Korshunov S.S., Skulachev V.P., Starkov A.A. High protonic potential actuates a mechanism of production of reactive oxygen species in mitochondria // FEBS Lett. -1997. -V. 416. -N 1.-P.15-18.

266. Kovacs P., Juranek I., Stankovicova T., Svec P. Lipid peroxidation during acute stress//Pharmazie. 1996 - V. 51-N 1. - P. 51-53.

267. Kowaltowski A.J., Vercesi A.E. Mitochondrial damage induced by conditions of oxidative stress // Free Radic. Biol. Med.- 1999. V. 26. - N 3-4. - P. 463-71.

268. Kreinhoff U., Elmadfa I., Salomon F., Weidler B. Antioxidant status after surgical stress \\ Infusionstherapie. 1990. - V. 17. - N 5. - P.261-267.

269. Kretzschmar M., Muller D. Aging, training and exercise. A review of effects on plasma glutathione and lipid peroxides // Sports Med. 1993. - V. 15. - N 3. - P. 196209.

270. Krueger K.E. Molecular and functional properties of mitochondrial benzodiazepine receptors // Biomembranes. 1995. - V. 1241.-P. 3-11.

271. Kuroshima A., Doi K., Yahata T. Impruved cold tolerance and its mechanism in cold-acclimatid rats by high fat diet feeding // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1977. - V. 55.-N4.-P. 943-950.

272. Kuroshima A., Haraba Y., Uehara A., Murazumi K., Yahata T., Ohno T. Cross • adaptation betveen stress and cold in rars // Pflugers Arch. 1984. - V. 402. - P.402-408.

273. Lande M.B., Donovan J.M., Zeidel M.L. The relationship between membrane fluidity and permeabilities to water, solutes, ammonia, and protons // J. General Physiol. 1995. -V. 106. - N 1. - P. 67-84.

274. Lass A., Sohal R.S. Electron transport-linked ubiquinone-dependent recycling of alpha-tocopherol inhibits autooxidation of mitochondrial membranes // Arch. Biochem. Biophys. 1998. - V. 352. - N 2. - P.229-236.

275. Laval J. Role of DNA repair enzymes in the cellular resistance to oxidative stress // Pathol. Biol. (Paris). 1996. - V.44. - N 1. - P.14-24.

276. LeBlanc J. Adaptation to cold in three hours //Amer. J Physiol. 1967, - V. 212. - P. 530-541.

277. LeBlanc J. Stress and interstress adaptation // Federat. Proc. 1969. - 28. -V. 28. - N 3. - P. 996-1000.

278. Leeuwenbrugh C., Ji L.L. Glutathione depletion in rasted and exercised mice: biochemical consequence and adaptation // Archives Bioch. Biophys. 1995. - V. 316. -N2.-P. 941-949.

279. Lester D.S. In vitro linoleic acid activation of protein kinase C // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - V. 1054. - N 3. - P. 297-303.

280. Lester D.S., Bramham C.R. Persistent, membrane-associated protein kinase C: from model membranes to synaptic long-term potentiation // Cell. Signal. 1993. - V. 5. - N 6.-P. 695-708 .

281. Li R.K., Cowan, Mickle D.A.G., Weisel R.D., Burton G.W. Effect of vitamin E on human glutathione peroxidase (GSH-Pxl) expression in cardiomyocytes // Free Rad. Biol. Med. -1996. V. 21. - N 4. - P. 419-426. .

282. Lii C.K., Sung W.C., Ko Y.J., Chen H.W. alpha-Tocopherol acetate supplementation enhances rat hepatic cytochrome PROD activity in the presence of phenobarbital induction // Nutr. Cancer. 1998. - V.32. - N 1. - P.37-42.

283. Lipid Peroxides in Biology and Medicine /Ed. Yagi K. N.Y.: Acad. Press. 1982. -355 p.

284. Liu J., Wang X, Shigenaga M.K., Yeo H.C., Mori A., Ames B.N. Immobilization stress causes oxidative damage to lipid, protein, and DNA in the brain-of rats // FASEB J. 1996. - V.10 (13). - P.1532-1538.

285. Liverini G., Goglia F., Lanni A., Iossa S., Barletta A. Elevated hepatic mitochondrialoxidatiove capacities in cold exposured rats //Comp.Biochem. Physiol. -B: Comp. Biochem. 1990. - V. 97. - N.2. - P. 327-331.

286. Lowry O.N., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein mezurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. - V. 193. - N 1. -P. 265-275.

287. Lucas D.T., Szweda L.I. Cardiac reperfusion injury: aging, lipid peroxidation, and mitochondrial dysfunction // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1998. V. 95. - N 2. -P.510-514.

288. Luz J., Griggio M.A. The effect of benzodiazepine on the increase of oxygen consumption in cold exposed rats // Comp. Biochem. Physiol. 1988. - V. 90. - N 1. -P. 151-153.

289. Maes M., Weeckx S., Wauters A., Neels H., Scharpe S., Verkerk R., Demedts P., Desnyder R. Biological variability in serum vitamin E concentrations: relation to serum lipids// Clin. Chem. 1996. - V.42. - N 11. - P. 1824-1831.

290. Mak I.T., Shrago E., Elson C.E. Modification of liver mitochondrial lipids and adenin nucleotide translocase and oxidativ phosphorilation by cold adaptation // Biochem. Biophys. Acta. 1983. - V.722. -N. 2. -P.302-309.

291. Marchetti P., Hirsch T., Zamzami N., Castedo M., De.caudin D., Susin S.A., Masse B., Kroemer G. Mitochondrial permeability transition triggers lymphocyte apoptosis // J. Immunol. 1996,-V. 157.-N 11.-P. 4830-4836.

292. Marin R.H., Arce A., Martijena I.D. Recruitment of peripheral-type benzodiazepine membranes receptors after acute stress in chick forebrain: Action of Triton X-100 // Neurochemistry International. 1996. - V.28. - N 4. - P. 425-429.

293. Marmunti M., Catala A. Non-enzymatic lipid peroxidation of rat liver nuclei and chromatin fractions // Int. J. Biochem. Cell Biol. 1998. - V.9. -.P.967-972.

294. Mataix J., Quiles J.L., Huertas J.R., Battino M., Manas M. Tissue specificinteractions of exercise, dietary fatty acids, and vitamin E in lipid peroxidation // Free Radic. Biol. Med. 1998. - V.24. - N 4. - P. 511-521.

295. Maurer I., Moller H.J. Inhibition of complex I by neuroleptics in normal human brain cortex parallels the extrapyramidal toxicity of neuroleptics // Mol. Cell Biochem. -1997 -V. 174. N 1-2. - P. 255-259.

296. Medvedev A.E., Gorkin V.Z. Endogenous stimulation of lipid peroxidation in brain increases proteolytic inactivation of mitochondrial monoamine oxidases // Int. J. Dev. Neurosci.- 1994. V. 12. - N 2. - P.151-155.

297. Medvedev A., Kirkel A., Kamyshanskaya N., Gorkin V. Lipid peroxidation affects catalytic properties of rat liver mitochondrial monoamine oxidases and their sensitivity to proteolysis // Int. Biochem. 1993. - V. 25. - N 12. - P.1791-1799.

298. Mennini T., Ceci A., Caccia S., Garattini S., Masturzo P., Salmona M. Diazepam increases membrane fluidity of rat hippocampus synaptosomes // FEBS Lett. 1984. -V. 23. - N 173. - N 1. - P. 255-258.

299. Meydani M., Meisler J.G. A closer look at vitamin E. Can this antioxidant prevent chronic diseases? // Postgrad. Med. 1997. - V.102. - N 2. - P.199-201.

300. Meydani S.N., Santos M.S., Wu D., Hayek M.G. Antioxidant modulation of cytokines and their biologic function in the aged // Z. Ernahrungswiss. 1998. - V.37. -N 1.-P. 35-42.

301. Miura T., Muraoka S., Ogiso T. Inhibition of lipid peroxidation by estradiol and 2-hydroxyestradiol // Steroids. -1996. -V. 61. N 6 .- P. 379-383 .

302. Miura T., Muraoka S.,Ogiso T. Inhibition of lipid peroxidation by estradiol and 2

303. Hydroxyestradiol //Steroids. -1996. -V.61. N 6. - P. 379-383.

304. Mori Y., Hatamochi A., Takeda K., Ueki H. Effects of tretinoin tocoferil on gene expression of the extracellular matrix components in human dermal fibroblasts in vitro // J. Dermatol. Sci. 1994. - V. 8. - N 3. - P. 233-238.

305. Murray C.A., Lynch M.A. Dietary supplementation with vitamin E reverses the age-related deficit in long term potentiation in dentate gyrus // J. Biol. Chem. 1998. - V. 273.-N20.-P. 12161-8.

306. Nagashima T., Ohinata H., Kuroshima A. Involvement of nitric oxide in oradrenaline-induced increase in blood flow through brown adipose tissue // Life Sci. -1994.- V. 54. N1. - P.17-25.

307. Naito J., Hartung E., Schramm E., Inselmann G. Heat stress produces an early phase of protection against oxidative damage in human muscle // Acta Anaesthesiol. Scand. -1999,-V. 43.-N. 1.-P. 77-81.

308. Nakamura H., Takada S., Shimabuku R., Matsio T., ObaraH. Effect of vitamin E on the response of lung antioxidant enzymes in young rats exposed to hyperoxia // Kobe J.Med Sci. 1987. -V. 33.- P.53-63.

309. Negre-Salvayre A., Hirtz C., Carrera G., Cazenave R., Troly M., Salvayre R., Penicaud L., Casteilla L. A role for uncoupling protein-2 as a regulator of mitochondrial hydrogen peroxide generation // FASEB J. 1997. - V. 11. - N 10. - P. 809-815.

310. Neuzil J., Svensson I., Weber T., Weber C., Brunk U.T. alpha-tocopheryl succinate-induced apoptosis in Jurkat T cells involves caspase-3 activation and both lisosomsl and mitochondrial destabilisation // FABS Lett. -1999. V. 445. -N 2-3. - P. 295-300.

311. Nilova N.S., Polezhaeva L.N. Peroxidative oxidation of lipids in slices of olfactory cortex of the rat brain during long-term potentiation // Neurosci. Behav. Physiol. -1996.-V. 26. N 1. - P. 14-23.

312. Noack H., Kube U, Augustin W Relations between tocopherol depletion andcoenzyme Q during lipid peroxidation in rat liver mitochondria // Free Radic. Res. -1994.-V. 20. -N6. -P. 375-386.

313. Pandit M., Pramanik M., Banerjee A. Antistress activity of P-GABA in experimental animals // Indian J. Exp. Biol. 1996. - V.34. - N.l. - P.37-40.

314. Panin L.E., Shabalina I.G., Kolpakov A.R., Kolosova N.G., Solovyov V.N. Effect of the long-term cold exposure on energetics of rat liver mitochondria // Phisico-Chemical Biol.and Med. 1996. - V.2. - N 1. - P. 27-35.

315. Panin L.E., Kuzmenko D.I., Kolpakov A.R., Dobronravova O.V., Kolosova N.G. Influence of apoproteins of serum lipoproteins on bioenergetic functions of liver mitochondria // Physico-Chemical Biol, and Medicine. 1995. - V.2. - N 1. P.27-.35.

316. Papa S., Skulachev V.P. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and agig. Molec. Cell. Biochem. - 1997. - V. 174. - P.305-319.

317. Patnaik R.N. Localization of alpha-tocopherol in hepatic chromatin from rats maintained on a tocopherol-deficient diet // Int. J. Biochem. 1981. - V. 13. - N 10. -P.1087-1094.

318. Patnaik R.N., Nair P.P. Binding of D-alpha-tocopherol to rat liver nuclear components // Experientia. 1975. - V. 31. - N 9. - P.1023-1024.

319. Patnaik R.N., Nair P.P. Studies on the binding of d-alpha-tocopherol to rat liver nuclei // Arch. Biochem. Biophys. 1977. - V.178. - N 2. - P. 333-341.

320. Patton J.F., Platner W.S.Cold acclimation and thyroid effect on liver fatty acids // Amer. J. Physiol. 1970. - V. 218. - P. 1417-1422.

321. Perillo M.A., Garcia D.A., Arce A. Partitioning of 1,4-benzodiazepines into natural membranes // Mol. Membr. Biol. 1995. - V. 12., N 2. P. 217-224.

322. Petrovic V.M., Gudz T., Saicic Z. Selectiv effect of noradrenaline on superoxide dismutase activity in brown adipose tissue and liver of rat // Experimentia. -1981. V. 37.-N l.-P. 14.

323. Polla B.S., Kantengwa S., Francois D. Mitochondria are selective targets for the protective effects of heat shock against oxidative injury // Proc. National Acad. Sciences of USA. 1996. - V. 93. - N 13. - P. 6458-6463.

324. Popova N.K., Naumenko E.V., Lobacheva II., Maslova L.N. Serotonin in different kinds of stress // Progr. In: Neuroendocrinology. Ed. Parvez H., Parves S., Gupta D. -Utrecht: VNU Sci. Press. - 1985. - P. 235-260.

325. Pryor W.A. Free radical reactions in reactions in biology: Initiation of lipid autoxidation by ozone and nitrogen dioxide // Environ. Health Perspect. -1976. -V. 16. -N l.-P. 180-181.

326. Raber J., Bast A. Changes in receptor response by the effect of disease on membrane fluidity // Med. Hypotheses. 1989. - V. 28. - N 3. - P.169-171.

327. Rafael J., Nicholls D.G. Mitochondrial membrane potential monitored in situ within isolated guinea pig brown adipocytes by a styryl pyridinium fluorescent indicator // FEBS Let. 1984. -V. 170. - N1. - P. 181-185.

328. Rauen U., Polzar B., Stephan H., Mannherz H.G., de Groot H. Cold-inducedapoptosis in cultured hepatocytes and liver endothelial cells: mediation by reactive oxygen species//FASEB J. 1999.- V. 13. -N 1. - P.l55-168.

329. Reddy K.V., Kumar T.C., Prasad M., Reddanna P. Pulmonary lipid peroxidation and antioxidant defenses during exhaustive physical exercise: the role of vitamin E and selenium // Nutrition. 1998. - V. 14. - N 5. - P. 448-451.

330. Reed H.L., Silverman E.D., Shakir K.M.M., Dons R., Burman K.D., O'Brain J.T. Changes in serumtriiodtironin (T3) kinetiks after prolonged Antarctic residence: the polar T3 syndrome // J. Clin. Endocrinol. Netab. 1990. -V. 70. -N 4. - P. 965-974.

331. Rego A.C., Oliveira C.R.Influence of lipid peroxidation on 3H.ketanserin binding to 5-HT2 prefrontal cortex receptors // Neurochem. Int. 1995. - V. 27. - N 6. - P. 489496.

332. Reinheckel T., Wiswedel I., Augustin W. Short-term impairment of energy production in isolated rat liver mitochondria by hypoxia/reoxygenation: involvement of oxidative protein modification // Biochem. J. 1997. - V. 328 ( Pt. 1). - P. 205-210.

333. Richter C., Gogvadze V., Laffranchee R. Et al. //Biochim. Et biophys. Acta. 1995. -V. 1271.-P. 67-74.

334. Rottenberg H., Wu S.Quantitative assay by flow cytometry of the mitochondrial membrane potential in intact cells // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - V. 1404. - N 3. - P.393-404.

335. Rouser C.Y., Scott W.H., Griffith O.W. et al. Glutathione effect on lipid peroxidation and phagocytizing peritoneal macrophages // J. Biol. Chem. 1982. - V. 5. -N4.-P. 2002-2008.

336. Rubbo H., Darleyusmar V., Freeman B.A. Nitric oxide regulation of tissue free radical injury // Chemical. Research, in Toxicology. 1996. - V. 9. - N 5. - P. 809820.

337. Ryter S.W., Tyrrell R.M. Singlet molecular oxygen ((1)02): a possible effector of eukaryotic gene expression // Free Radic. Biol. Med. 1998. - V. 24. - N 9. - P. 15201534.

338. Scholz R.W., Saini A.K., Reddy P.C., Reddy C.C. Dietary vitamin E and selenium effects on resistance to oxidative stress in rat liver mitochondria // Biochem. Mol. Biol. Int. 1994. - V. 34. - N 6. - P. 1215-1225.

339. Scholz RW, Saini AK, Reddy PC, Reddy CC Dietary vitamin E and selenium effects on resistance to oxidative stress in rat liver mitochondria. // Biochem. Mol. Biol. Int. -1994. V. 34. - N 6. - P. 1215-1225.

340. Seifter S., Dayton S., Novic B. The estimation of glycogen with the antron reagent //

341. Arch. Biochem. 1950. -V. 17. - N 2. - P. 217-222.

342. Sen C.K., Atalay M., Agren J., Laaksonen D.E., Roy S., Hanninen O. Fish oil and vitamin E supplementation in oxidative stress at rest and after physical exercise // J. Appl. Physiol. 1997. - V. 83. - N 1. - P. 189-195.

343. Sigounas G., Anagnostou A., Steiner M. dl-alpha-tocopherol induces apoptosis in erythroleukemia, prostate, and breast cancer cells // Nutr. Cancer. 1997. - V. 28. - N 1. -P. 30-35.

344. Simonyan R.A., Skulachev V.P. Thermoregulatory uncoupling in heart muscle . mitochondria: involvement of the ATP/ADP antiporter and uncoupling protein // FEBS1.tt. 1998. - V.436. - N 1. - P. 81-84.

345. Skulachev V.P. Membrane-linked systems preventing superoxide formation // Biosci. Rep. 1997. -V. 17. - N 3. - P. 347-366.

346. Skulachev V.P. Uncoupling: new approaches to an old problem of bioenergetics // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - V.1363. - N 2. - P. 100-124.

347. Slater A.F., Nobel C.S., Orrenius S. The role of intracellular oxidants in apoptosis // Biochim. Biophys. Acta. 1995. - V. 1271. -N 1. - P. 59-62.

348. Sohal R.S., Svensson I., Sohal B.N., Bruk U.T. Superoxide anion radical produktion ' in different animal species // Mechanisms of Aging and Devel. 1989. -V. 49. - P. 129135.

349. Suzuki Y.J., Forman H.L., Sevanian A. Oxidanys as stimulators ofsignaltransduction//Free Radical. Biol. Med. 1997. -V. 22. -N 1. - P. 269-285.

350. Talan M.I., Engel B.T., Whitaker J.R. Age related decline in cold tolerance can be retarded by brain stimulation // Physiol. And Benav. 1984. -V. 33. - N 6. - P. 969-973.

351. Taniguchi H., Imai Y., Sato R. // Protein-protein and lipid-protein interactions in a reconstituted cytochrome P-450 dependent microsomal monooxygenase // Biochemistry 1987.-V. 26(22). P.7084-7090.

352. Tappel A.L. Biological antioxidant protection against lipid peroxidation damage // Am. J. Clin. Nutr. 1970.-V. 23.-N8. -P. 1137-1139.

353. Tata J.R. Preperation and propeties of microsomal fraction from animal eels // Subcellular Component // Eds Burnie G.D., Fox S.M. London. - Butterworth. -1969. -P. 83-107.

354. Teylor S.L., Lamden M., Tappel A.L.Seneitive fluorometric method for tissue tocopherol analisis // Lipids. -1976. V.l 1. - N 7. - P. 530-538.

355. Toleikis P.M., Godin D.V. Alteration of antioxidant status following sympathectomy: differential effects of modified plasma levels of adrenaline and noradrenaline // Mol. Cell. Biochem. 1995. - V. 152. - N 1. - P. 39-49.

356. Tomas S., Gebiski J., Dean R. Radical initiated a-tocopherol depletion and lipid peroxidation in mitochondrial membranes // Bioch. Biophys. Acta. 1989. - V. 1002. -P. 189-197.

357. Traber M.G. Utilization of vitamin E // Biofactors. 1999. - V.10 (2-3). - P. 115-20.

358. Traber M.G., Arai H. Molecular mechanisms of vitamin E transport // Annu. Rev. Nutr.- 1999.- V.19.-P.343-355.

359. Tretter L., Adamvizi V. Early events in free radical-mediated damage of isolated nerve terminals: Effects of peroxides on membrane potential and intracellular Na+ and Ca+ concentrations Source // J. Neurochemistry. -1996. -V.66. -N 5. P. 2057-2066.

360. Tripathi Y.B., Chaurasia S., Tripathi E., Upadhyay A., Dubey G.P. Bacopa monniera Linn, as an antioxidant: mechanism of action. Learning and brain membrane fluidity // Indian J. Exp. Biol. -1996. V.34. - N 6. - P.523-526.

361. Trumper L., Noack H., Augustin W. Verhalten des glutathionsystems under

362. Fe2/ascorbat-induzirter peroxidation von rattenlebermitochondrien // Wiss. Z. Humbolt-Univ. Berlin. 1989. -V. 38. - № 1. - P. 64-68.

363. Tyurina Y.Y., Tyurin V.A., Avrova N.F. Ganglioside GM1 protects cAMP 3'5': phosphodiesterase from inactivation caused by lipid peroxidation in brain synaptosomes of rats // Mol. Chem. Neuropathol. 1993 . -V. 19. -N 3. - P. 205-217.

364. Vedder H., Anthes N., Stumm G., Würz C., Behl C., Krieg J.C. Estrogen hormones reduce lipid peroxidation in cells and tissues of the central nervous system // J. Neurochem.- 1999.-V.72. N 6. - P. 2531-2538.

365. Vladimirov Yu.A., Olenev V.l., Suslova T.B., Cheremisina Z.P. Lipid peroxidation in mitochondrial membrane // Adv. Lipid. Res. 1980. - V. 17. - P. 173-249.

366. Vladimirov Yu.A. Free radical peroxidation in biomembranes: mechanism, regulation and biological consequences // In: Free radicals, aging and degenerative disease. N.Y. - London: Alan r. Lissinc. - 1986. - P. 141-195.

367. Walther F.J., David-Cu R., Mehta E.I., et al. Higher lung antioxidant enzyme activity persists after single dose of corticosteroids in preterm lambs // Am. J. Physiol. -1996,-V. 271,-N2, Pt 1.-P.L187-L191.

368. Wang J.F., Spitzer J.J. Alcohol-induced thymocyte apoptosis is accompanied by impaired mitochondrial function // Alcohol. 1997. - V. 14. - N 1. - P. 99-105 .

369. Wang J.F., Jerrells T.R., Spitzer J.J. Decreased production of reactive oxygen intermediates is an early event during in vitro apoptosis of rat thymocytes // Free Radic. Biol. Med. 1996. - V.20. - N 4. - P. 533-542.

370. Wei Q., Yeung M., Jurma O.P., Andersen J.K. Genetic elevation of monoamineoxidase levels in dopaminergic PC 12 cells results in increased free radical damage and sensitivity to MPTP // J. Neuroscience Research. 1996. -V. 46. N 6. - P. 666-673.

371. Wei Y.H. Oxidative stress and mitochondrial.DNA mutations in human aging // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1998. - V. 217. -N 1. - P. 53-63.

372. Weinbach E.C. A procedure for isolating stable mitochondria from rat liver and kindey//Anal. Biochem.-1961. V.2.-N 4.-P. 335-343.

373. White A.C., Maloney E.K., Boustani M.R., Hassoun P.M., Fanburg B.L. Nitric oxide increases cellular glutathione levels in rat lung fibroblasts // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1995.- V. 13.-N 4.-P. 442-448.

374. Whiting K.P., Brain P.F., Restall C J. Steroid hormone.induced effects on membrane fluidity // Biochem. Soc. Trans. 1995. - V. 23. - N 3. P. 438S.

375. Woods M.J., Williams D.C. Multiple forms and locations for the peripheral-type benzodiazepine receptor // Biochem. Pharmacol. 1996. - V. 52. - N 12. - P. 18051814.

376. Wortwein G., Stackman R.W., Walsh T.J. Vitamin E prevents the place learning deficit and the cholinergic hypofunction induced by AF64A // Brain Res. 1993. - V. 604.-N 1-2.-P. 173-179.

377. Xie Z., Sastry B.R. Induction of hippocampal long-term potentiation by alpha-tocopherol//Brain Res. 1993,- V. 604.-N 1-2. - P. 173-179.

378. Yang N.J., Desai I.Glutathione peroxidase and vitamin E interreletionsip // In: Tocopherol, oxigen and biomembranes. Norton-Holland Biomed. Press. 1978. -P.233244.

379. Yehuda S., Brandys Y., Blumenfeld A., Mostofsky D.I. Essential fatty acid preparation reduces cholesterol and fatty acids in rat cortex // Int. J. Neurosci. 1996. -.V. 86.-N 3-4.-P. 249-256.

380. Ying W. Deleterious network hypothesis of aging // Med. Hypotheses. 1997. - V. 48. -N 2. - P.143-148.

381. Zakim D., Kavecansky J., Scarlata S. Are membrane enzymes regulated by the viscosity of the membrane environment? //Biochemistry. 1992. - V. 31(46). -P.11589-11594.

382. Zilz A., Li H., Castello R., Papadopoulos V., Widmaier E.P. Developmental expression of the peripheral-type benzodiazepine receptor and the advent of steroidogenesis in rat adrenal glands // Endocrinology. 1999. - V. 140. - N 2. - P. 859864 .

383. Zorov D.B.Mitochondrial damage as a source of diseases and aging: a strategy of how to fight these // Biochim. Biophys. Acta. 1996. - V.1275. - N 1-2. - P. 10-15.

Информация о работе

Колосова, Наталия Гориславовна
доктора биологических наук
Новосибирск, 2000
ВАК 03.00.13

Диссертация

Механизмы участия токоферола в адаптивных преобразованиях на холоде - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно