Механизмы токсического действия фторацетата и экспериментальная терапия острых отравлений

Гончаров, Николай Васильевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Механизмы токсического действия фторацетата и экспериментальная терапия острых отравлений
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Механизмы токсического действия фторацетата и экспериментальная терапия острых отравлений"

На правах рукописи

ГОНЧАРОВ Николай Васильевич

МЕХАНИЗМЫ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ФТОРАЦЕТАТА И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ТЕРАПИЯ ОСТРЫХ ОТРАВЛЕНИЙ

03 00 04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

г. Пушимо 2008 г.

003446943

Работа выполнена в лаборатории общей токсикологии и гигиенического нормирования НИИ гигиены, профпатологии и экологии человека Федерального медико-биологического агентства

Научные консультанты. доктор биологических наук, профессор

Зинченко Валерий Петрович

доктор медицинских наук Радилов Андрей Станиславович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Маевский Евгений Ильич

доктор биологических наук, профессор Завьялова Наталья Васильевна

доктор биологических наук Морозов Владимир Игоревич

Ведущая организация: НИИ физико-химической биологии

им А Н Белозерского МГУ

Защита состоится 02 октября 2008 г в 14 00 часов на заседании Диссертационного совета

Д 002 038 01 при Институте биофизики клетки РАН

по адресу 142290, Московская обл , гПущино, ул Институтская, д 3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биофизики клетки РАН

Автореферат разослан сентября 2008 г

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат биологических наук

Т.И. Смолихина

Посвящаю podumetsLM

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Несмотря на высокий уровень знаний о молекулярных основах жизнедеятельности клеток, существует большой разрыв в понимании взаимосвязи между первичным биохимическим действием вещества и конечным физиологическим ответом организма С этим связана проблема физиолого-биохимической диагностики и направленного поиска эффективной терапии в медицине и токсикологии К высокотоксичным соединениям, для которых имеющиеся средства диагностики и терапии недостаточно эффективны, относятся фторорганические соединения Эти соединения привлекли к себе пристальное внимание в 1940-х годах, когда среди большого класса биологически инертных веществ была выявлена группа соединений с общей формулой CH2FCOOR, объединенных названием «фторацетат» (ФА) Действие ФА проявляется не сразу, но спустя латентный период, составляющий для человека и других млекопитающих от получаса до нескольких часов, даже при отравлении летальными дозами Наиболее известным представителем ФА является фторацетат натрия (ФАН) Это соединение использовалось в ряде стран для контроля численности популяций некоторых позвоночных Уровень ФА в некоторых австралийских растениях достигает 5 г/кг сухого веса и при однократном или повторном употреблении домашними животными служит причиной их гибели Кроме того, существует ряд фторсодержащих соединений, метаболизм которых в организме протекает с образованием ФА в качестве промежуточного продукта это противоопухолевые препараты (5-фторурацил и изомеры фторэтилнитрозомочевины), К-(2-фторэтил)-производные наркотических анальгетиков нормеперидина и норметазоцина, пестициды (1,3-дифтор -2-пропанол и фторацетамид, ФАА), 1-(ди)гало-2-фторэтаны и фторэтанол [Reifenrath et al, 1980, Tisdale, Brennan, 1985, Feldwick et al, 1998 и др ] В промышленных регионах ФА можно обнаружить в составе капель дождя и тумана [Rompp et al, 2001] Актуальность проблемы существенно возросла в связи с возникновением новой опасности - международного терроризма [Holstege et al, 2007] Физико-химические особенности, отсутствие вкусовых или обонятельных признаков наличия вещества, отставленное проявление токсичности, схожесть клинических признаков отравления с рядом естественных недомоганий, - все это обусловливает повышенный интерес к всестороннему изучению физиолого-биохимических механизмов действия ФА и поиску эффективных средств терапии интоксикаций

Механизм токсического действия ФА широко известен под названием "летальный синтез" [Peters, 1952], суть которого заключается в превращении в клетках организма нетоксичного самого по себе ФА в токсичный фторцитрат (ФЦ), ингибирующий аконитазу и работу цикла Кребса Собственно токсикантом является 4-гидрокси-транс-аконитат, дериват фторцитрата, не

содержащий фтора [Kent et al, 1985], а ФЦ получил название «суицидный субстрат» [Clark 1991] В результате блокады аконитазы происходит накопление цитрата в органах и тканя организма, истощаются энергетические запасы, отмечен внутриклеточный дисбаланс ионов осмотический дисбаланс Изучению механизма токсического действия и поиску средств терапи было посвящено большое количество работ [Chenoweth, 1949, Rammel et al, 1985 и др ] Однак существующие пробелы в понимании взаимосвязи между молекулярными первопричинами ответом целого организма не позволяет исследователям разработать эффективные средств терапии Выявленные признаки интоксикации недостаточно проанализированы с точки зрени биохимической адаптации к токсическому воздействию, не предложены альтернативны подходы к терапии с учетом метаболических особенностей различных тканей и органов, поэтом до сих пор не удалось в полной мере подавить метаболизм ФА, ускорить его выведение и организма, нейтрализовать вызываемые им изменения Этиловый спирт, предложенный еще 1940-х годах, но главным образом симптоматическая терапия являются на сегодняшний ден единственно приемлемыми средствами медицинской помощи [Proudfoot et al, 2006]

Кроме того, решение данной проблемы имеет важное теоретическое и прикладное значени для разработки новых антигипоксантов, поскольку для токсического действия ФА, многи других ядов и критических состояний характерно отсутствие строгой специфики и особенности патогенеза во многом связаны с развитием тканевой гипоксии

Цель и задачи исследования

Цель настоящей работы заключалась в комплексном изучении биохимических физиологических, клинико-токсикологических механизмов действия фторацетата и разработк эффективного средства терапии острых отравлений фторацетатом Для достижения данной цел были поставлены и решены следующие задачи

1) Исследовать клинические признаки острого отравления, физиологические i морфофункциональные особенности действия фторацетата на примере фторацетата натрия I фторацетамида

2) Исследовать биохимические особенности действия фторацетата на митохондрии клетки и организм экспериментальных животных, исследовать взаимодействи энергопродуцирующих и сигнальных систем при воздействии фторацетата

3) Теоретически и экспериментально обосновать принципы биохимическои адаптацш клеток и тканей при действии фторацетата, определить основные направления для разработм эффективной терапии острых отравлений фторацетатом

4) Разработать терапию острых отравлений фторацетатом и в экспериментах на животны продемонстрировать ее эффективность

Положеиия диссертации, выносимые на защиту

1 Острая интоксикация фторацетатом сопровождается развитием комплекса клинических, морфофизиологических и биохимических показателей, свидетельствующих о первичном и преимущественном поражении нервной системы экспериментальных животных

2 Биохимическая адаптация при интоксикации фторацетатом состоит в перестройке метаболических путей и утилизации альтернативных энергетических субстратов с целью поддержания биологического окисления, биохимическая адаптация отражает сопряжение внутриклеточной сигнализации и биологического окисления

3 Фнзиолого-биохимической основой острого токсического действия фторацетата является разобщение процессов внутриклеточной сигнализации и биологического окисления, что выражается в необратимом снижении уровня восстановленных пиридиновых нуклеотидов, подавлении дыхания митохондрий, нарушении баланса внутриклеточного кальция, потере чувствительности или гибели клеток-мишеней

4 Основные направления для фармакологической коррекции при острой интоксикации фторацетатом конкуренция за коэнзим А, конкуренция за митохондриальную аконитазу, активация альтернативных метаболических путей, утилизация накапливающегося цитрата

5 Комплекс веществ, включающий в себя искусственный акцептор электронов, источник восстановительных эквивалентов, донор окиси азота и источник ацетатных групп обладает высоким терапевтическим эффектом при использовании в ранние сроки острой интоксикации фторацетатом и способствует коррекции ряда биохимических и физиологических показателей у экспериментальных животных

Научная новизна

С использованием ФАН, ФАА и ФЦ впервые проведено комплексное изучение физиолого-биохимических, морфофункциональных, клеточных и субклеточных (митохондриальных) механизмов действия ФА и его токсического метаболита ФЦ Предложено теоретическое объяснение и экспериментальное обоснование динамики ряда биохимических показателей в органах и тканях животных при воздействии ФА Изложены представления о сопряжении и разобщении процессов внутриклеточной сигнализации и биологического окисления Впервые использована методология изучения кинетических параметров агрегации тромбоцитов для определения характера интоксикации, механизма действия и апробации средств терапии Обнаружено явление гиперчувствительности тромбоцитов с последующим переходом клеток в рефрактерное (нечувствительное) состояние Предложена концепция причинно-следственных связей на молекулярно-клеточном уровне при блокаде цикла Кребса на уровне митохондриальной аконитазы Обоснованы принципы биохимической адаптации и фармакологической коррекции при острой интоксикации фторацетатом Разработан и

теоретически обоснован эффективный терапевтический комплекс «Метис» введенный в ранни сроки интоксикации ФА, этот комплекс спасает от гибели экспериментальных животных коэффициентом эффективности до 4,3 (по ЛД50) В экспериментальную токсикологию I фармакологию введен метод биохимической коррекции, основанный на принципе управляемой и целевого воздействия на ход метаболических процессов

Теоретическое и практическое значение работы

Проведенные исследования расширяют представления о механизмах нарушения гомеостаз< при острой интоксикации ФА и позволяют лучше понять взаимосвязь специфических \ неспецифических проявлений интоксикации Знание биохимических механизмов, лежащих основе адаптации клеток и тканей при воздействии токсического агента, дает возможност эффективно скорректировать нарушенный гомеостаз Разработанные и теоретическ! обоснованные средства терапии острых отравлений ФА углубляют наши знания взаимодействии сигнальных и энергопродуцирующих систем, о путях биохимическо адаптации, о биохимической основе физиологических ритмов Новый терапевтический комплек после проведения доклинических испытаний в кратчайшие сроки может быть внедрен клиническую практику, поскольку его компоненты отличаются дешевизной и доступностью Использование методологии малоуглового светорассеяния для изучения морфофункциональны характеристик клеток крови свидетельствует о высокой ее эффективности для определени характера интоксикации, а также для разработки средств терапии, что является нссомненныр. вкладом в методическое обеспечение физиолого-биохимических и токсиколого фармакологических исследований Проанализирована не только научная литература по разньт аспектам действия ФА, но также проведен анализ ряда смежных областей биохимии и клеточно! биологии Полученные в работе практические результаты и теоретические обобщения могу быть использованы в лекционных курсах по биохимии, токсикологии и фармакологии

Апробация работы

Результаты исследований доложены на конференции «Кровообращение в условия высокогорной и экспериментальной гипоксии» (Фрунзе, 1986), II Всесоюзной конфсренцш «Биоантиоксидант» (Черноголовка, 1986), Всероссийской конференции «Проблемь стандартизации в здравоохранении» (Москва, 2001), научно-практической конференции посвященной 40-летию НИИГПЭЧ (Санкт-Петербург, 2002), Международном симпозиуме п антитерроризму (Волгоград, 2002), на международных конференциях «Рецепция внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2003, 2005, 2007), международном симпозиум «Медицинские и биологические проблемы, связанные с уничтожением химического оружия) (Волгоград, 2003), 2-м съезде токсикологов России (Москва, 2003), Российской научно конференции «Медицинские аспекты радиационной и химической безопасности» (Санкт

Петербург, 2004), на 8-м и 9-м международных симпозиумах по защите от химического и биологического оружия (Гетеборг, 2004, 2007), 3-м Всемирном конгрессе по химическому, биологическому и радиационному терроризму (Дубровник, 2005), I съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005), Обществе токсикологов США (Сан-Диего, 2006, Шарлотт, 2007), на Питтсбургской конференции (Орландо, 2006), 16-й Северной конференции по судебной медицине (Турку, 2006), 3-й Международной научно-практической конференции «Новые технологии создания инновационных лекарств» (Химки, 2006), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 45-летию НИИГПЭЧ (Санкт-Петербург, 2007), на конференции, посвященной 50-летию Института цитологии РАН (Санкт-Петербург, 2007), 10-й международной конференции по химическому разоружению (Брюссель, 2007), на обзорной конференции программы BII Госдепартамента США (Пущино, 2007)

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 352 страницах машинописного текста, содержит 90 таблиц и 168 рисунков Состоит пз введения, обзора литературы, описания методов исследования, 6 экспериментальных разделов с дополнительным анализом литературы, обсуждением и частными выводами, заключения и общих выводов Библиография включает 72 отечественных и 687 зарубежных источников

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Лабораторные животные и общие токсикологические методы Для экспериментальных исследований использовали крыс, кроликов и мышей Содержание экспериментальных животных соответствовало «Санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)», утвержденных МЗ СССР 06 07 73 г и Приказом МЗ СССР №755 от 12 08 77 г Параметры токсичности оценивали методом пробит-анализа [Беленький, 1959, Finney, 1980] Для оценки влияния ФА на потребление кислорода применяли аппарат Миропольского Определение парциального давления кислорода и рН крови проводили методом Аструпа [Andersen et al, 1960] Ориентировочно-исследовательскую активность животных изучали по методике «открытое поле» [Буреш и др , 1991] Электрофизиологические исследования Электрофизиологические исследования ЭКГ и параметров внешнего дыхания проведены при техническом и научном содействии д б н С В Кузнецова, руководителя лаборатории развития нервной деятельности животных в онтогенезе Института эволюционной физиологии и биохимии им И M Сеченова РАН У животных осуществляли одновременную регистрацию ЭКГ и частоты дыхательных движений (ЧДД) Расчет частотно-временных показателей ЭКГ и ЧДД проводили с применением специально разработанных в среде LabView оригинальных программ и пакета анализа данных Origin 7 Спектральный анализ ЭКГ осуществляли по алгоритму быстрого преобразования Фурье

с использованием окна Уолша (Welch) Для оценки вагосимпатического баланса проводили анализ вариабельности сердечного ритма (ВСР)

Трансмиссионная электронная микроскопия. Морфологические исследования проведены при техническом и научном содействии Н М Парамоновой, научного сотрудника института физиологии им И П Павлова РАН Изготавливали полутонкие (1 мкм) срезы на ультратоме LKB V (Швеция) Морфологический анализ ткани с микрофотосъемкой выполняли н фотомикроскопе фирмы «OPTON» (ФРГ) Ультратонкие срезы толщиной 40-60 нм наносили на сеточки и окрашивали методом тройного контрастирования по Рейнолдсу [Уикли, 1975] Просмотр и фотосъемку производили на электронных микроскопах JEM 100СХ и Hitachi-300 Для морфологического анализа использовали фотографические отпечатки электронограмм с увеличением на негативах от 3000 до 100000 Химическая идентификация фторацетамида и фторацетата натрия, определени фторацетата в плате крови, гомогенатах органов и моче животных. Фторацетат натри (ФАН) и фторацетамид (ФАА) были синтезированы в НИИ ГПЭЧ ФМБА России ХимическиГ анализ проведен под руководством к х н Е И Савельевой, ведущего научного сотрудник НИИГПЭЧ В режиме статического парофазного анализа установлено, что препарат ФАА состоит из двух компонентов собственно фторацетамида (около 95%) и о-ксилола (не более 5%) Данные элементного анализа показали, что препарат ФАН содержит не менее 98% фторацетат натрия В биологических тканях и жидкостях ФА определяли в виде этилового эфира методо твердофазной микроэкстракции в сочетании с газовой хроматографией - масс-спектрометрие" (ГХМС) в режиме мониторинга избранных ионов с использованием 2-х внутренних стандартов четыреххлористого углерода (RT 5,1 мин) и толуола (RT 7,4 мин)

Определение аминокислот в плазме крови и органах методом газовой хроматографии. Дл

исследования динамики свободных аминокислот в биологических тканях была использован классическая двухстадийная процедура, основанная на последовательном N(0,S) изобутоксикарбонилировании аминогрупп изобутилхлорформиатом и метилировашн карбоксильных групп диазометаном Анализ проводили по процедуре, описанной в работ Matsumura et al [1996] с использованием ряда модификаций

Потенциометрическое определение фторид-иона в тканях животных Метод представляв собой модификацию известного метода с использованием электродной системы, состоящей и измерительного селективного фторидного электрода типа 3F-VI и вспомогательног хлорсеребряного электрода типа ЭВЛ-1М [Новиков и др , 1990, Hall et al, 1972] Потенциа фторидного электрода измеряли высокоомным ионометром типа ЭВ-74

Определение питрит-иопа в плазме и органах животных осуществлялос спектрофотометричсским методом с помощью реактива Грисса при длине волны 532 нм [Бабко ДР, 1974]

Изучеиие функциональных характеристик митохондрий. Изучение действия ФЦ проводили на изолированных митохондриях, полученных из клеток печени крыс по методу Schneider [1948] Дыхательные характеристики изолированных митохондрий определяли, используя полярографический метод регистрации концентрации кислорода в водных растворах [Франк и др , 1973] Для изучения состояния пиридиновых нуклеотидов (ПН) исследовали флуоресценцию NAD(P)H с использованием спектрофлуориметра Hitachi F4000 при длине волны возбуждения 340 нМ и длине волны испускания 460 нМ

Выделение и культивирование зндотелиальных клеток кровеносных сосудов Разработка методов выделения, культивирования и защиты зндотелиальных клеток кровеносных сосудов человека и животных проводилась с участием автора в 1980-е годы в лаборатории молекулярной и клеточной кардиологии ВКНЦ АМН СССР, Москва [Гончаров, Алдашев, 1986, Музыкантов и др, 1986, Гончаров и др, 1987] В рамках исследований токсического действия ФА и ФЦ для выделения клеток эндотелия аорты использовали крыс линии Wistar массой 200-250 г Все эксперименты проводились на клетках между пассажами 3 и 6

Выделение кардиомиоцитов. Кардиомкоциты выделяли из крыс линии Wistar массой 150-180 грамм с коллагеназой в растворе, содержащем соли и глюкозу [Powel et al, 1980] Суспензию кардиомиоцитов помещали в чашку Петри, покрытую коллагеном и через 60 минут смывали неприкрепившиеся клетки Прикрепившиеся клетки использовали для экспериментов Измерение цитозозьного кальция {Ca2+J, и митохоидриалыюго потенциала (АЧ"-т■) методом конфокальной лазерной сканирующей микроскопии Для измерения [Са2+], клетки эндотелия или кардиомноциты инкубировали 40 минут при 37°С с 5мкМ Fluo4-AM и 0,005% Pluromc в HBSS Для одновременного измерения [Ca2*], и ДЧ'-m в последние 15 минут инкубации к клеткам добавляли 20 нМ TMRM - флуоресцентный зонд на ДЧ'-гп Клетки отмывали и чашку Петри помещали на предметный столик лазерного сканирующего конфокального микроскопа LSM 510 Carl Zeiss Измерения проводили с помощью воздушноиммерсионного объектива Zeiss PlanNeofluar х20 и водоиммерсионного объектива Zeiss PlanNeofluar хбЗ Для возбуждения флуоресценции Fluo4 использовали аргоновый лазер с длинной волны 488 нм и регистрировали флуоресценцию с использованием запирающего фильтра ВР500-550 нм Для регистрации изменений митохондриального потенциала использовали гелий/неоновый лазер 543 нм и регистрировали с использованием пропускающего фильтра LP560 нм Обработку и анализ изображения проводили с использованием программ Kinetic Imaging software (Liverpool, UK) и OrigmPro 7 0

Изолирование и исследование клеток асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ). Клетки АКЭ выделяли на 7-й или 8-й день после внутрибрюшинной трансплантации мышам NMRI/BALB [Arslan et al, 1985] Клетки (20-50 млн/мл) инкубировали с 2 мкМ зонда Indo-1АМ и 0,005% Pluromc Для изучения изменений [Са:+] в цитоплазме клетки в

концентрации 5x106/мл помещали в термостатируемую (28°С) кювету спектрофлуориметра с магнитной мешалкой в растворе Хэнкса Длина волны возбуждения 365 нм, эмиссию измеряли при длинах волн 405/490 нм Флуоресценцию эндогенного NAD(P)H измеряли при длине волны возбуждения 365 нм и эмиссии 465 нм Са2+-чувствительный краситель хлортетрациклин использовали для регистрации изменений [Са2+] в эндоплазматическом ретикулуме, длины возбуждения и эмиссии 405 и 530 нм, соответственно Выделение макрофагов и исследования окислительного взрыва Для изучения влияния ФАН на NADPH-оксидазную систему были использованы перитонеальные макрофаги мышей [Гамалей и др, 1988, 1995] Активацию окислительного взрыва осуществляли хемотаксическим пептидом fMLP Динамику окислительного взрыва фиксировали с одиночных клеток с помощью флуоресцирующего зонда DCF Запись сигнала передается на компьютер через АЦП L-154 с помощью оригинальных программ MGraph и ROMan Исследование внутриклеточной концентрации ионов Са2* в тромбоцитах. Исследование внутриклеточной концентрации ионов Са2+ в тромбоцитах кролика в норме и при действии фактора активации тромбоцитов (ФАТ) проводили с помощью красителя квин-2АМ [Авдонин, Алтухова, 1985] на спектрофлуориметре Aminco SLM-8000 Метод оценки функциональной активности тромбоцитов. Функциональную активность тромбоцитов исследовали методом малоуглового светорассеяния, позволяющим оценить все стадии трансформации тромбоцитов [Деркачев и др, 1998, Mindukshev et al, 2005а, 2005b] Методология малоуглового светорассеяния разрабатывалась в институтах РАН (ИЭФБ им И М Сеченова, Санкт-Петербург, ИБК, Пущино) и ФМБА России (НИИ ГПЭЧ) с участием автора Регистрациию малоуглового светорассеяния проводили на приборах «Лайт-Скан» или «ЛаСка-2К» (НПФ «Люмекс», Санкт-Петербург) Регистрация интенсивности светорассеяния осуществляется фотодиодами, сигналы регистрируются в программе "Etongue" и обрабатываются методами вариационной статистики с использованием программы MS Excel 97 Исследование апоптоза пейтрофилов, лимфоцитов и тимоцитов Исследование апоптоза проведено при техническом и научном содействии дбн М Г Винокурова в институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН Нейтрофилы и лимфоциты выделяли ir периферической крови здоровых доноров с помощью метода дифференциального центрифугирования на 2-слойном градиенте фиколла-верографина (1,119 и 1,077) Тимоциты получали из крыс линии Wistar Для регистрации апоптоза использовали флуоресцентный зон Hoechst-33258 [Afanasyev et al, 1993] Рисунки оформлены в программе Sigma Plot Изучение эндотелий-зависимой релаксации кровеносных сосудов Работа проведена при техническом и научном содействии д б н П В Авдонина, руководителя лаборатории физиологии Института биологии развития им И К Кольцова РАН Были использованы активаторы Arg вазопрессин, 5-гидрокситриптамин, карбохолин, артеренол, ангиотензин II Для эксперименто

была собрана установка с тензодатчиками "Mmebea Со Ltd", микроманипуляторами "Narishiga", усилителем, самописцами Эксперименты проводили на изолированных колечках, вырезанных из грудного отдела аорты крыс-самцов линии Wistar весом 200-300 г Измерение силы сокращения при действии вазоактивных гормонов и нейротрансмиттеров в изометрическом режиме по методу Мульвани [Mulvany, Halpern, 1977, Angus et al, 1988]

Методы лабораторной и клинической биохимии В таблице 1 представлен реестр методов клинической биохимии, использованных в наших экспериментах

Таблица 1 Биохимические показатели и методы их определения

Биохимические показатели Объект Единицы измерения Методы

Лактат кровь мМ Hohorst, 1965, Прохорова, 1982

ткань мкмоль/г

Пируват кровь мМ Bucheretal, 1965, Прохорова, 1982

ткань мкмоль/г

Глутамат ткань мкмоль/г Bemt, Bergmeyer, 1963, Прохорова, 1982

Глутатион восст ткань мг% Patterson, Lazarow, 1955, Прохорова, 1982

Цитрат кровь мкм оль/мл Natelson etal, 1948

ткань мкмоль/г

Гликоген ткань мг/г Loetal, 1970

Глюкоза кровь мМ Tnnder, 1969, Биотест «REANAL»

ткань мг%

Триглицериды кровь мМ McGowan etal, 1983, Биотест «АБРИС+»

Свободные жирные кислоты (СЖК) кровь мкМ Novak M, 1965

Белок ткань мкг/мл Bradford, 1976

Креатинкиназа (КФ 2 7 3 2) ткань мкм/мин мг белка Szaszetal, 1976, Биотест ««Ольвекс Диагностикум»

Глутаматдегидрогеназа (ГлДГ, КФ 1 4 1 3) ткань мкмоль/мин/мг белка Fneden, 1965, Прохорова, 1982

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ, КФ 1 1 1 27 ткань мкмоль/мин/мг белка Weisshaar et al, 1975, Прохорова, 1982

кровь ммоль/мин/л

Сукцинатдегидрогеназа (СДГ, КФ 1 3 99 1) ткань нмоль/мин/мг белка Arrigom, Singer, 1962, Прохорова, 1982

Глюкозо-6-фосфат дегидрогеназа (Г6ФДГ, КФ 1 1 1 49) ткань нмоль/мин/мг белка Zaheer et al, 1967, Прохорова, 1982

Малатдегидрогеназа (МДГ, КФ 1 1 1 37) ткань нмоль/мин/мг белка Noyes etal, 1974, Прохорова, 1982

Аланинаминотрансфе-раза (АлТ, КФ 2 6 1 2 ) ткань нмоль/мин/мг белка Bellamy, Leonard, 1964, Прохорова, 1982

кровь мкмоль/л/сек Bergmeyer et al, 1978, Биотест «Ольвекс Диагностикум»

Аспартатаминотрансфе-раза (АсТ, КФ 2 6 1 1 ) ткань нмоль/мин/мг белка Bergmeyer et al, 1978, Биотест «Ольвекс Диагностикум»

- 10-

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Клииико-токсиыологические и физиологические исследования действия ФАА и ФАН

Для крыс после однократного воздействия ФАА в дозе ЛД50 и выше латентный период составляет 45-75 мин, затем наблюдается значительное снижение двигательной активности, прекращение потребления корма и воды, отмечается сначала учащенное дыхание, затем более редкое, крысы собираются в группы Через 2-4 часа после отравления эта стадия сменяется резким возбуждением продолжительностью 4-5 секунд, переходящим, как правило, в клонико-тонические судороги Достоверное снижение температуры тела отмечено уже через 1 час после отравления и достигало минимальных значений через 6 ч или 1 сутки, в зависимости от дозы Через 8 часов наблюдается некоторое уменьшение, а через сутки происходит уже двукратное снижение потребления кислорода Токсичность ФАН выше по сравнению с токсичностью ФАА в 9-10 раз для крыс и в 3 раза для кроликов Принципиальных отличий в симптомах отравления животных равноэффективными дозами ФАН и ФАА нет, однако при интоксикации ФАН гибель животных наступает раньше и в более сжатые сроки Различия объясняются особенностями метаболизма ФАА, которому необходимо пройти стадию дезамидирования [Tecle, Casida, 1989]

Электрофизиологические исследования показали, что в первые часы интоксикации ФАА происходит увеличение амплитуд всех компонентов ЭКГ Особенно значимо растет амплитуда зубцов Р и R У части животных наблюдается смещение сегмента ST ниже изолинии и снижение амплитуды зубца Т, что свидетельствует о развитии ишемических нарушений У отравленных крыс происходит замедление проводимости увеличиваются длительности всех зубцов и интервалов ЭКГ Наблюдается прогрессирующее снижение ЧСС, достигающее наибольшей степени к 24 ч и сохраняющееся на низком уровне вплоть до 7-го дня Падение амплитуд предсердного и желудочкового комплекса ЭКГ, наступающее через 3-24 часа, может быть связано с нарушением энергетического метаболизма сердца Значительное снижение систолического показателя через 24 часа после отравления также свидетельствует о нарушении сократительной способности миокарда Вместе с тем, наличие практически всех описанных нарушений ЭКГ соответствует симптомам при поражении ЦНС, а также при гипотермии [Stewart et al, 1970, Mallet, 2002] Анализ вариабельности сердечного ритма (ВСР) свидетельствует об общем увеличении мощности спектра у крыс в течение 3 часов после введения ФАА или ФАН Наблюдается тенденция постепенного смещения ведущей роли в регуляции деятельности сердечно-сосудистой системы к парасимпатической системе Имеется кратковременный период, когда в регуляции сердечной деятельности возрастает роль гуморально-метаболических факторов Мы выявили многообразный и отчасти противоречивый характер изменений спектра дыхательных движений у крыс при интоксикации ФА это возрастание амплитуды основного дыхательного ритма, вспышки дыхательной тахиаритмии, наличие двух разноамплитудных дыхательных компонентов, «развал» дыхания, «размыв»

- Ii -

спектра ЧДД, возникновение высокоамплитудных судорожных вдохов, возникающих в довольно правильном декасскундном ритме Отметим, что практически все эти отклонения наблюдаются при различных травмах головного мозга [Угрюмов, 1974] Пестрая картина дыхательных расстройств при интоксикации ФА обусловлена, по-видимому, наложением факторов центрального происхождения (подавление функционального состояния глии ретротрапезоидного ядра, повышение кислотности межклеточного пространства, активация диафрагмального нерва, снижение порога чувствительности к СО2) и влиянием на периферический кровоток и функциональную активность дыхательных мышц [Johnson, Reíd, 1988, Erhchman et al , 1998, Holleran et al, 2001] При интоксикации ФА кроликов мы не обнаружили у них значимых патологических нарушений формы ЭКГ Отмечено постепенное и устойчивое снижение ЧДД Развитие патологии дыхания может служить главной причиной гибели животных Амплитудная модуляция ЭКГ, навязанная ритмом дыхания, обусловлена усилением вагусных влияний на сердце Анализ ВСР свидетельствует о развитии у кроликов неустойчивого равновесия вагосимпатического баланса В целом, если доля парасимпатических влияний в общей мощности спектра имела тенденцию к относительному росту, то симпатические влияния были более лабильны и их колебания обусловили маятникообразный характер вагосимпатического баланса

Биохимические исследования животных при интоксикации ФАА и ФАН

Максимальное повышение ФА отмечено в плазме и мозге животных через 1 час после отравления Уровень фторид-иона в крови крыс увеличивается в два раза в течение 1 часа и держится примерно на одном уровне до 6 часа, а через сутки снижается до уровня контроля Концентрация цитрата в плазме крови и органах начинает повышаться уже через час (рис 1) Наиболее значительное повышение цитрата выявлено через сутки после отравления в почках и в сердце (в 12 и 10 раз, соответственно), но при этом в сердце наблюдается максимальный абсолютный уровень цитрата (6,3 мкмоль/г) Далее по степени прироста цитрата следуют мозг, печень и плазма Мы не обнаружили отклонений в уровне глюкозы в плазме крови во все сроки исследований, тогда как в печени, почках, сердце и мозге уровень глюкозы достоверно повышается При этом уровень гликогена печени, сердца и мозга достоверно снижается Уровень триглицеридов плазмы крови снижается, а концентрация СЖК повышается в первые часы после отравления, с последующим значительным снижением через сутки и особенно 3 суток Отметим две фазы повышения глюкозы в печени первое повышение через час происходит при отсутствии изменений гликогена, но при некотором повышении уровня СЖК в плазме крови Это очевидно отражает первичную реакцию клеток печени на снижение обмена и потребности в глюкозе, а также свидетельствует об ингибирующем влиянии СЖК на транспорт и фосфорилирование глюкозы [Boden et al, 1994] Вторая фаза повышения глюкозы наблюдается на фоне значительного снижения гликогена, что может быть связано с его повышенной утилизацией в

- 12- I

пентозном цикле, по сравнению с глюкозой [Magnusson et al., 1988]. Кроме того, в печени1

повышается активность ГлДГ, наряду с повышением активности трансаминаз, что1

свидетельствует об усилении использования глутамата и других аминокислот в качестве1

альтернативного энергетического источника. Повышение активности ЛДГ в печени через сутки и1

3 суток после отравления, возможно, отражает снятие неконкурентного ингибирования ЛДГ|

пируватом [Van Noorden et al., 1989], что может свидетельствовать о повышенном использовании;

пирувата в трансаминазной реакции; это предположение подтверждается синхронным|

повышением активности АлТ в печени. В то же время, достоверное повышение активности МДг|

в печени через 3 суток сопряжено, по-видимому, с предшествующим повышением активности!

АсТ и малат/аспартатного шунта. j

Рис. 1. Динамика , цитрата в плазме i крови и органах крыс [ при интоксикации J ФАА, 1/2ЛД50. j 1

Обращает на себя внимание факт значительного снижения уровня глутамата в сердце' отравленных крыс во все сроки исследования, начиная с первого часа. Также в первые часьг{ интоксикации значительно повышается активность АсТ. Такая компенсаторная реакция, очевидно, не может поддерживать уровень макроэргов: креатинфосфат сердца снижается в1 первые часы. Но уже через сутки уровень креатинфосфата не отличается от уровня контроля,

при этом структура компенсаторных реакций в сердце меняется: активность АсТ у отравленных'

крыс снижается до уровня контроля, в то время как существенное повышение активности ГлДГ в> сердце через 1 и 3 суток после отравления свидетельствует о включении этого метаболического!

пути в ответ на энергетическую блокаду. Уровень лактата в сердце достоверно снижается, но, по сравнению с глутаматом, в меньшей степени и в более поздние сроки. Синхронно с повышением' глюкозы снижается уровень гликогена в сердце к шестому часу, через сутки достигая минимума, | а через 3 суток остается достоверно ниже уровня контроля. Динамика энергетических субстратов в сердце крыс свидетельствует о том, что при блокаде гликолиза цитратом лактат компенсирует глюкозу и способствует удержанию гликогена, но при повышении потребности в лактате и

к 1 з брад

Пп-ззтла

ЕЙ

K|1 3|6 Р4

П&^ЕНЬ

[3-

К P4F2

Почки

К 1 3 6 Э»|72

Сердце

К 1 3 6Щ!7 Мее г

epeot, ч

пирувате для нужд окислительного метаболизма, а также при активизации симпатической стимуляции сердца уровень гликогена снижается

Из биохимических показателей мозга наиболее значительные изменения, помимо цитрата, отмечены в динамике глюкозы уровень глюкозы нарастает уже в первые часы после отравления (1-6 часов), но снижается до уровня контроля через сутки Отметим достоверное снижение гликогена через 3 суток, а также снижение лактата через 3 часа и 3 суток Динамика лактата в мозге крысы обусловлена, очевидно, снижением его синтеза из субстратов глиального ЦТК вследствие блокады последнего [Hassel et al, 1995b], снижением уровня NAD(P)H и/или повышенной утилизацией лактата нейронами при взаимодействии циклов лактата-аланина и глутамата-глутамина [Waagepetersen et al, 2000, Bäk et al, 2006] Уровень восстановленного глутатиона в мозге повышается на 20% через 3 суток, что совпадает по времени с понижением уровня гликогена и обусловлено повышенной утилизацией гликогена в астроглии для синтеза NADPH [Rahman et al, 2000]

Данные биохимического анализа подтверждают описание клинической картины интоксикация ФАН протекает интенсивнее и в более сжатые сроки, по сравнению с ФАА Так, уровень лактата в сердце снижается на 38% через 3 часа (против 25% через 6 часов при интоксикации ФАА), уровень глюкозы повышается в 2 раза через 3 часа (против 67% через 6 часов) Отметим более выраженное снижение (почти в 2 раза) триглицеридов в плазме через 1-6 часов после отравления Максимум цитрата в крови и органах приходится на 6 часов (против 24 ч при интоксикации ФАА), хотя относительные изменения менее выражены Снижение уровня мочевины в плазме может свидетельствовать об относительной слабости отравления, при котором почки сохраняют функциональную активность, в то время как синтез мочевины снижен из-за повышенной утилизации глутамина/глутамата тканями с нейтрализацией ацидоза аммиаком О сохранении функциональной активности почек свидетельствует нормальный уровень креатинина Можно было бы с уверенностью утверждать, что сердце крыс является первичной и главной мишенью при отравлении ФАН, если судить исключительно по масштабу наблюдаемых изменений Однако лишь уровень цитрата в сердце достоверно меняется через час, тогда как достоверные изменения других исследованных нами биохимических параметров начинаются с 3 часов после отравления Но уровень цитрата и в других органах и даже в плазме крови повышается также через час При этом через час в плазме достоверно меняется уровень триглицеридов и мочевины, в печени - гликоген, АлТ и ГлДГ, в мозге - гликоген

Определение аминокислот в плазме крови и гомогенатах органов животных позволило выявить интересную динамику Отметим однонаправленность изменений уровня исследуемых аминокислот в плазме крови кроликов - уменьшение через 3 часа и восстановление (частичное или полное) через сутки после отравления Особенно выражена динамика глутамина и глутамата не обнаружено даже следовых количеств глутамина через 3 часа, но через сутки его

уровень в плазме кроликов восстанавливается, снижение глутамата в 3,5 раза через 3 часа, но даже через сутки уровень глутамата у кроликов остается пониженным почти в 2 раза Уровень других аминокислот снижается в 2-3 раза и восстанавливается через сутки после отравления Значительное снижение уровня аминокислот через 3 часа после отравления можно объяснить незначительным распадом белка скелетных мышц, что подтверждается отсутствием снижения веса тела кроликов и снижением уровня тирозина в плазме крови (тирозин ни синтезируется, ни утилизируется в скелетных мышцах, поэтому является индикатором распада белка [Chang, Goldberg, 1978]) При этом очевидно имеет место энергетическии дефицит других тканей и внутренних органов У крыс динамика уровня аминокислот плазмы не столь однозначна Но что характерно в плазме крыс через 3 часа также не определяется глутамин, через сутки его уровень восстанавливается, но снижается уровень глутамата Уровень других аминокислот через 3 часа либо не меняется (аспартат, глугамат, тирозин), либо повышается (аланин, лейцин, лизин) Известно, что разветвленные аминокислоты стимулируют производство аланина и глутамина в скелетных мышцах за счет передачи аминогрупп в реакциях трансаминирования с а-кетоглутаратом (КГ) Глюкоза - основной источник пирувата в синтезе аланина, а также ингибитор распада белка и утилизации разветвленных аминокислот [Chang, Goldberg, 1978] Повышенный уровень лейцина, тирозина и глюкозы свидетельствует об умеренном распаде белка в мышцах в первые часы интоксикации, а резкое снижение уровня глутамина в плазме означает о его утилизацию эндотелием сосудов, почками, другими тканями и органами

Максимальное снижение уровня нитрита совпадает с максимальным снижением уровня глутамина в плазме крови крыс и кроликов Мы не располагаем данными о динамике аргинина -главном источнике окиси азота - в органах и тканях экспериментальных животных при интоксикации ФА Но важно заметить, что аргинин может восполнять субстраты цикла Кребса через глутамат Усиленный катаболизм аминокислот вообще и аргинина в частности ведет к дефициту субстрата для NO-синтазы (NOS) Кроме того, для синтеза 1 молекулы N0 требуется 1,5 молекулы NADPH [Bian, Murad, 2003], дефицит которого предполагается Наконец, синтез аргинина в цикле мочевины требует больших энергетических затрат (4 высокоэнергетические фосфатные связи на 1 молекулу мочевины) и глутамат для синтеза N-ацетилглутамата В связи с этим отметим отсутствие достоверных изменений уровня мочевины в плазме кроликов, и даже достоверное снижение в плазме крыс через 1 и 3 часа после отравления Однако при отравлении сублетальными дозами происходит восстановление уровня аминокислот и, очевидно, NADPH (последний может нарастать за счет утилизации глюкозы через пентозный шунт и/или цитрата через цитоплазматическую аконитазу и изоцитратдегидрогеназу) В результате адаптационной перестройки метаболических путей снижение уровня нитрит иона в плазме крови сменяется его повышением у кроликов раньше (и у них более ранняя утилизация большинства аминокислот), у крыс позже (более поздняя утилизация аминокислот, отличных от глутамина)

- 15В мозге крыс снижается через 3 ч, но повышается через сутки уровень аминокислот глутаминовой группы глутамата, глутамина и аспартата (рис.2). Такая же динамика у лейцина, менее выраженная у лизина и тирозина. Однако уровень аланина в мозге стабильно нарастает через 3 ч (в 2 раза) и через сутки (в 6 раз). Это объясняется преимущественным переаминированием глутамата в нейронах через АлТ. Отсюда уменьшение аспартата, глутаминаза нейронов способствует уменьшению глутамина. Уровень лактата в мозге крыс при интоксикации ФАН понижается на 23% через 3 часа и на 37% через 6 часов, через сутки восстанавливается до уровня контроля. Это означает снижение гликолиза и уровня NAD(P)H в астроцитах, повышение утилизации лактата и пирувата в нейронах, а также снижение образования пирувата из аланина вследствие снижения уровня КГ в астроцитах (но не в нейронах!). В мозге крыс и кроликов наблюдается некоторое повышение уровня КГ, что также свидетельствует о переаминировании глутамата с пируватом и генерации аланина в нейронах. Существует к другой источник аланина - скелетные мышцы, однако транспорт аланина из сосудов в паренхиму мозга в норме незначителен [Oldendorf, Szabo, 1976; Smith, 2000]; данных об активизации систем транспорта глюкогенных аминокислот при нарушении утилизации глюкозы клетками мозга мы не обнаружили, хотя принципиальная возможность стимуляции глюконеогенеза в клетках мозга была показана [Bliattacharya, Datta, 1993]. Уровень аспартата в мозге крыс через сутки увеличивается в 3,7 раза, при этом несколько повышается уровень малата и снижается уровень КГ. В условиях энергетического дефицита и токсического поражения астроцитов это означает повышение утилизации глутамата в нейронах на энергетические нужды, при этом аспартат, вероятно, высвобождается и может быть активно захвачен астроиитами, где он накапливается вследствие дефицита КГ и отсутствия митохондриального аспартат/глутаматного обменника [Erecinska et al., 1993; Bender et al., 1997; Xu et al., 2007].

□ контроль 0 3 часа Q 24 часа

¿L

Алании Лейцин Аспартэт Глутамат Глутамин Лизин Тирозин

Рис. 2. Динамика уровня некоторых аминокислот в мозге крыс при

интоксикации ФАН, 1/2ЛД50

-16В почках крыс снижается уровень всех исследованных аминокислот, за исключением глутамина Динамика уровня глутамина и глутамата в почках свидетельствует о характерной для ацидоза неспецифической адаптации, когда почкам удается компенсировать физиологические изменения биохимической перестройкой за счет захвата значительного количества глутамина из системного кровообращения В печени уровень глутамина также не меняется, что объясняется усилением захвата глутамина при кратковременном голодании и стабильным синтезом этой аминокислоты перивенозными гепатоцитами в условиях голодания и метаболического ацидоза [Watford, 2000]

Влияние ФА/ФЦ па биоэнергетические и сигнальные процессы митохондрий (MX) и клеток

Действие токсического метаболита ФА - фторцитрата (ФЦ) мы изучали на митохондриях печени крысы (рис 3) Скорость защелачивания среды при добавлении АДФ существенно ниже в присутствии ФЦ, что свидетельствует об угнетении синтеза АТФ Амплитуда защелачивания также уменьшена, что может быть обусловлено неполным синтезом АТФ, дополнительным трансмембранным перераспределением ионов Н+ или изменением константы связывания АДФ в присутствии ФЦ ФЦ вызывает выход Са2+ из митохондрий, что соответствует наблюдаемому угнетению эндогенного потребления кислорода Добавление субстратов окисления вызывает реаккумуляцию Са2+ в митохондрии В присутствии ФЦ митохондрии только частично поглощают добавленный Са2+, после чего начинается его спонтанный выход Это может быть связано с влиянием ФЦ либо на систему потребления кислорода, либо с непосредственным влиянием на систему Н+/Са2+ обмена Для разрешения этой альтернативы была измерена скорость выхода Са2+ из MX путем электронейтрального 2Н+/Са2+ обмена в присутствии ингибитора электрогенного транспорта Са2+ рутениевого красного ФЦ активирует электронейтральный выход Са2' при Kia=10 мкМ Это действие может быть связано с изменением состояния пиридиновых нуклеотидов (ПН), регулирующих активность Н+/Са2+ обмена [Lemnger et al, 1978] Таким образом, ФЦ оказывает влияние как на систему переноса электронов, так и на трансмембранный перенос ионов в митохондриях клеток печени

Наблюдаемые эффекты при воздействии ФАН развивались при гораздо более высоких концентрациях (от 4 мМ) по сравнению с ФЦ и в значительной степени зависели от субстратов дыхания Время окислительного фосфорилирования (ОФ) и уровень окисления NADH линейно увеличиваются при увеличении концентрации ФАН в среде инкубации, если в качестве субстрата служит пируват (рис 4) При использовании в качестве субстратов дыхания сукцината, но особенно глутамата, ФАН не оказывал влияния на ОФ митохондрий в таких высоких концентрациях как 8 мМ (рис 5А) и даже 16 мМ Кроме того, эффект ФА при использовании пирувата можно предотвратить инкубацией MX с циклоспорином А, ингибитором митохондриальной транзиторной поры (рис 5В) Это означает, что при воздействии ФАН

возможно развитие митоптоза и апопточа, открытие поры имеет обратимый характер, и предотвращение окисления и/или утечки NAD11 из MX возвращает их в нормальное функциональное состояние.

ЕС50 (рМ) V3 17 Vea 6.3 Vcccp з.з

УЗ

Vea

Vcccp ^

i-1-1—1-1—'-1—1-1-'-1—'—

8,5 -6.0 -5,5 -5.0 -4.5 -4,0 -3,5

Log [FC, M|

< -0-Z О ■—* о o> ■В-

эП

»4

/ 1

s id

'fini MM

Рис.3. Ингибирование дыхания митохондрий печени фторцитратом. Субстрат окисления -пируват. Зависимости скоростей дыхания активированного АДФ (V3), транспортом кальция (Vea) и щюгонофором СССР (Vcccp) от концентрации фторцитрата (FC)._

Рис. 4. Влияние фторацетата (ФА) на окислительное фосфорилирование (кружки) и редокс-состояние ПН (квадраты) при использовании пирувата в качестве дыхательного субстрата.

1001

глутамат

FA8 тМ

ADP FCCP

пируват

0 2 4 6 8 10 12 время,нин

I Б В

время, мин

Рис.5. Влияние ФАН (РА) на редокс-состояние ПН и окислительное фосфорилирование МХ печени крысы с глутаматом в качестве дыхательного субстрата (А) и предотвращение эффекта циклоспорином А (СвА) в случае использования пирувата (В). Добавки: (А) - 8 мМ ФАН (точки); непрерывная кривая - контрольный эксперимент; АДФ - 120 мкМ; РССР - 1 мкМ. (В) - 10 мМ ФАН; штрихи - без СэА. непрерывная линия - с 1 мкМ СзА._

Эксперименты на МХ давали основания предполагать, что действие ФА на клетки будет в первую очередь связано с действием на мембранный потенциал МХ, уровень ЫЛО(Р)Н и баланс внутриклеточного Са2+ Измерения флуоресценции ЫАО(Р)11 в контрольных клетках АКЭ и клетках, инкубированных с ФАН, показали медленное снижение флуоресценция под действием ФАН Ингибирование ОФ олигомицином лишь незначительно восстанавливает в них КАО(Р)Н по сравнению с контрольными клетками, что свидетельствует о предшествующем ингибировании ОФ и уменьшении мембранного потенциала МХ Введение небольшого количества РССР (5 нМ) приводит к частичному окислению NAD(P)H, при этом относительный уровень окисления выше в присутствии ФАН, что также указывает на предшествующее ингибирование дыхательной цепи МХ Полное окисление митохондриального НЛВ(Р)Н при действии РССР с последующим восстановлением с помощью ротенона выявило общее уменьшение пула митохондриального КАБ(Р)Н в клетках, инкубированных с ФАН Это свидетельствует об окислении или утечке ПН из МХ, изменении в балансе митохондриального и цитозольного ЫАО(Р)Н По сравнению с контрольными клетками, исходный уровень [Са2+], был несколько выше в клетках, инкубированных с 10 мМ ФАН Уровень плато после импульсного подъема Са2+ также повышен ФАН, вероятно, приводит к истощению внутриклеточных Са2+-депо и активации входа внеклеточного Са2+ через депо-зависимые каналы Существование других кальциевых каналов, таких как ТЫРУ5 и ТЯРУб [НоеЫегор еГ а1,2003, уап с1е ОгааГ е( а1, 2006], которые остаются инактивированными при увеличении [Са2+], и, наоборот, активируются при понижении [Са2+]„ побудило нас к измерениям уровня кальция в ретикулярных структурах клетки с помощью хлортетрациклина (ХТ) Измерив [Са2+] в ЭР, можно получить информацию об активности Р2У и(или) 1Рз-рецепторов (по скорости уменьшения флуоресценции ХТ), о количестве Са2+, выходящего из ЭР (по амплитуде понижения сигнала), а также о скорости и времени возвращения кальция в ЭР (по скорости увеличения сигнала к исходному уровню) ФЦ не действует на скорость выхода Са2' из ЭР (рис 6), то, система передачи сигнала от Р2У-рецептора через О-белок не ингибируется в клетках АКЭ при действии ФЦ Однако ФЦ незначительно увеличивает амплитуду выхода Са2+ и скорость его закачки обратно в ЭР Следует отметить довольно большой период обратного входа кальция в ЭР (8-10 мин) Это свидетельствует о том, что после мобилизации внутриклеточного Са2+ и его выхода из ЭР в цитозоль Са-АТФаза плазматической мембраны быстро выкачивает ионы кальция из клеток, значительно уменьшая [Са2+]„ при которой ионы кальция транспортируются обратно в ЭР Ранее было показано [гтсЬепко е( а1, 2001], что скорость обратного транспорта Са2+ в ЭР после его мобилизации зависит от активности кальциевых каналов плазматической мембраны Т о , наши данные свидетельствуют о том, что ФА (или ФЦ) индуцирует вход Са2+ в клетки АКЭ через депо-зависимые каналы

А j? 1.0- af 3" X 1 ф & 0,5J 1 0.0- Т 7 л/^ 3 Б 55 3 5 50 я) « 45 д | a '8 3 5 о | 30 и У /

180 360 540 720 900 Время, с о 20 40 60 80 100 [ФЦ]. мкМ

Рис.6. Изменения [Са2г] в эндоплазматическом ретикулуме клеток АКЭ в ответ на действие АТФ (4,5 мкМ) в присутствии ФЦ, полученные с помощью хлортетрациклина. А: I - контроль, 2 - на фоне 10 мкМ ФЦ, 3 — на фоне 20 мкМ ФЦ; Б - зависимость скорости обратного входа Са2+ в ЭР от концентрации ФЦ; повышение скорости возврата Са2+ при действии ФЦ имеет дозозависимый характер.

В экспериментах с эндотелиальными клетками в культуре мы показали, что ФА в милимолярных концентрациях вызывает медленное падение мембранного потенциала MX и рост [Са"+]|. Снижение мембранного потенциала в присутствии нитроэфира DNPG (донор N0) значительно меньше, чем в его отсутствии, что свидетельствует о проявлении защитных свойств N0 к действию ФА на эндотелий. В то же время, ФА вызывает увеличение базальной [Ca2t]j и стимуляцию функциональной активности кардиомиоцитов: наблюдается появление кальциевых волн, распространяющихся по поверхности саркоплазматического ретикулума, или же значительное усиление уже существующих волн и скорость их распространения. Одновременно наблюдали медленное увеличение мембранного потенциала MX. Вероятно, повышение [Ca2+]j обусловливает его транспорт в MX с последующим ингибированием протонной АТФазы, что приводит к увеличению мембранного потенциала. Механизм этого явления объясняется действием Са2+-зависимого белка, ингибирующего Н4-АТФазу [Hubbard, McIIugh, 1996; Евтодиенко и др., 2000].

Морфофункциональные признаки интоксикации фторацетатом

Наиболее остро на воздействие ФАН в коре головного мозга (сенсомоторная область) отреагировала система кровеносных капилляров: за 3 часа произошло повреждение гематоэнцефалического барьера, особенно клеточных элементов сосудистой стенки (рис.7); через сутки развилось нарушение микроциркуляции крови в виде капилляростаза и агрегации клеточных элементов крови (сладжи эритроцитов, адгезия тромбоцитов на стенках капилляров) (рис.8). Это свидетельствует об изменениях системного характера (гиповолемия) и (или) непосредственное воздействие ФА на те клетки крови, активность которых зависит от

Рис.7. Кора головного мозга крыс, 3 ч после введения ФАН, 'АЛДбО. Видны нарушения ГЭБ, поражен эндотелий микрососуда. х7000

Рис.8. Кора головного мозга крыс, 24 ч после введения ФАН, !/2ЛД50. Сладжи эритроцитов в просвете капилляра. Нейрон контактирует с капилляром.х8000_

окислительного метаболизма MX (напр., тромбоциты). Предполагается развитие диапедеза, воспалительных реакций вокруг поврежденных участков капиллярной сети, ишемия мозга. Периваскулярная разновидность астроглии, составная часть ГЭБ, остро реагирует на состояние сосудистой стенки отеком ножек своих отростков (рис.7). Ранняя реакция нейронов на ФА не однозначна. Через 3 часа в некоторых нейронах активизировались синтетические процессы, о чем свидетельствует гиперплазия органелл и нарастание гиперхромности цитоплазмы. Другие подверглись протеолизу собственных лизосомальных ферментов, в результате в нормохромных клетках образовались очаговые просветления матрикса. Через сутки часть гиперхромных клеток в результате частичного восстановления трофики вернулись в нормальное состояние, благодаря образованию прямых контактов нейронов с сосудистой стенкой (рис.8). Среди субклеточных структур более выражено реагировали на интоксикацию ФА митохондрии. Через 3 ч отмечены патологические изменения синаптических специализаций, особенно в пресинаптических терминалях. Через 24 ч отмечено снижение числа синапсов и морфологические признаки нарушения проводимости нервных импульсов. Можно предположить реорганизацию синапсов и образование щелевых контактов, дублирующих несостоятельные синаптические контакты в качестве компенсаторной меры как эволюционно более ранние и энергетически более выгодные, хотя и менее специфичные - т.н. прямая трансмиссия [Connors, Long, 2004; Meier, Dermietzel, 2006]. Такое взаимодействие обеспечивает синхронизацию пороговой чувствительности и спайковой активности между кластерами нейронов, что имеет функциональное значение как в норме, так и в патологии, обусловливая соответствующие физиологические ритмы мозга при судорогах и эпилептогенезе [Perez-Velazquez, Carlen, 2000].

Морфологические свидетельства поражения ГЭБ и нарушения мозгового кровообращения, полученные нами данные о влиянии ФА на мембранный потенциал и динамику кальция в эндотелиалькых клетках в культуре и о снижении нитрит-иона у животных в первые часы после отравления, а также данные других исследователей о нарушении сократимости сосудов при интоксикации ФА [Cremer-Lacuara et al., 1980; Johnson, Reid, 1988 и др.] давали основания предположить ослабление эндотелий-зависимых функций. Мы исследовали эндотелий-зависимую релаксацию сосудов аорты крыс при интоксикации ФАН. Однако все использованные вещества оказывали качественно одинаковое воздействие на сократимость изолированной аорты контрольных и экспериментальных животных и через 3 часа, и через сутки после отравления. Очевидно, поражение эндотелия при интоксикации ФА11 носит вторичный характер и является реакцией на системные нарушения метаболизма.

Рис.9. Изменения кинетических параметров агрегации тромбоцитов крыс при

Для оценки кинетических параметров агрегации тромбоцитов в опытах с ФАН in vitro тромбоциты крыс преинкубировали с 0,1-10 мМ ФАН в течение 1-5 минут. Агрегацию тромбоцитов инициировали с помощью АДФ в диапазоне концентраций 10-100 нМ. Рассчитаны среднеэффективные концентрации АДФ для клеток, проинкубированных с ФАН в концентрации 10 мМ (ЕС;» = 25,24 нМ) и 5 мМ (ЕС5ц = 35,13 нМ). Величины ЕС ¡о характеризуют статус тромбоцитов, проинкубированных с ФАН, как гиперчувствительный к АДФ. Затем была проведена оценка кинетических параметров агрегации тромбоцитов крыс при интоксикации ФАН (рис.9). После получения плазмы отравленных животных часто наблюдалась спонтанная агрегация тромбоцитов, что соответствует данным о переходе тромбоцитов в гиперчувствительное состояние. Однако клетки, избежавшие агрегации, демонстрировали чрезвычайно высокий уровень десенситизации, или рефрактерность. В некоторых экспериментах АДФ не мог индуцировать агрегацию тромбоцитов в сверхвысоких (нефизиологических) концентрациях порядка 10 мкМ. Исследование динамики [Ca2+]i в тромбоцитах кролика при

интоксикации ФАА показало, что потеря чувствительности связана со снижением мобилизации кальция и объясняется уменьшением количества и/или снижением аффинности рецепторов

В опытах m vivo и m vitro мы исследовали клетки иммунной системы Тимус у животных через 18 часов после введения ФАН заметно уменьшен, выявлено значительное уменьшение общего количества тимоцитов и увеличение уровня апоптоза в свежевыделенных тимоцитах ФАН также вызывает ускорение апоптоза контрольных и дексаметазон-обработанных лимфоцитов человека Однако ФАН m vitro ингибировал спонтанный апоптоз нейтрофилов Кроме того, ФАН практически не влиял на продукцию АФК перитонеальных макрофагов m vit) о Можно предположить, что ингибирующее действие ФАН на апоптоз нейтрофилов реализуется с участием АФК В то же время, усиление апоптоза и угнетение активности клеток иммунной системы является, по-видимому, неспецифической реакцией на интоксикацию ФА и отражает общее снижение и перераспределение энергетических ресурсов организма при действии токсических веществ или стресса [Куценко, 2004, Мамучишвили, 2006]

Разработка терапии острых отравлений ФА и проверка ее эффективности Представления о сопряжении и разобщении сигнализации и биологического окисления

Анализируя научную литературу и проводя собственные эксперименты, мы убедились в том, что существует теоретическая и практическая основа для разработки эффективной терапии Прежде всего, мы предлагаем рассматривать метаболизм клетки как сопряжение сигнальных и окислительно-восстановительных процессов Вообще под метаболизмом подразумевают обмен веществ, или совокупность катаболических и анаболических процессов, а понятие сопряжения обычно используется применительно к взаимосвязи дыхания и окислительного фосфорилирования Мы полагаем, что и анаболические, и катаболическис процессы в норме есть результат согласованного взаимодействия (сопряжения) информационных процессов (сигнализация) и процессов производства/потребления/диссипации энергии (биологическое окисление, частным случаем которого является дыхание) И катаболические, и анаболические процессы могут быть разобщены Данное определение метаболизма помогает понять биологический смысл процессов, происходящих при интоксикации ФА, сформулировать концепцию причинно-следственных связей, принципы биохимической адаптации и фармакологической коррекции Первичное снижение уровня NAD(P)H приводит к угнетению митохондриального дыхания в клетках-мишенях, повышению [Са2+], и повышению чувствительности клеток к активаторам, биологический смысл первой фазы интоксикации состоит в мобилизации альтернативных метаболических путей для поддержания дыхания клеток, и это возможно благодаря сопряжению сигнализацт и биологического окисления Дефицит альтернативных субстратов и/или чрезмерное повышение уровня цитрата приводят к разобщению сигнальных и окислительных процессов дальнейшее снижение уровня

ппридиновых нуклеотидов, подавчение аэробного дыхания, ингибирование гликолиза, хелатирование ионов кальция, десепитизацию клеток или их гибель, биологический смысл второй фаш ответа - снижение потребности клеток и тканей в энергии Функциональная специфика первичных мишеней обусловливает динамику физиолого-биохимических реакций на уровне организма Интегральная характеристика метаболизма как информационно-энергетического состояния - это редокс-потенциал клетки Составляющие редокс-потенциала -это пиридиновые нуклеотиды, мембранный потенциал, макроэргические соединения и тепловая (энтропийная) компонента Клетка, будучи открытой и неравновесной системой, существует благодаря сбалансированным во времени потокам вещества (источники восстановительных эквивалентов и акцепторы электронов), энергии (производство АТФ и обязательно тепла как важнейшего источника порядка в неравновесных условиях) и информации (сигнальные молекулы, ионы) Такое разделение в известной степени условно, эти потоки взаимосвязаны и взаимообусловлены так, АТФ может служить источником энергии, а может выступать в качестве сигнальной молекулы, тепловая энергия может служить показателем эффективности функционирования митохондрий, а может рассматриваться как информационная (негэнтропийная) составляющая, обеспечивающая протекание биохимических процессов с оптимальной скоростью Необходимо различать митохондриальные и цитоплазматические источники редокс-потенциала это метаболические реакции, которые сбалансированы между собой, внеклеточными и внутриклеточными сигналами, в частности динамическими изменениями концентрации ионов кальция Снижение уровня ЫАБН в митохондриях обусловливает снижение уровня АТФ, что, в свою очередь, обусловливает адаптационное повышение [Са2г], (за счет снижения активности Са-АТФаз и депозависимого входа Са2+) с целью активации митохондриальных дегидрогеназ (ИЦДГ, КГДГ, ПДГ) Если дегидроненазы не активируются (нет субстратов или заблокирован путь утилизации продуктов), происходит генерация ИАОРН в цитоплазме и активация NADPH- и (или) Са-зависимых цитоплазматических процессов, например, генерация N0 и (или) супероксид-аниона для «уборки» кальция в ретикулум посредством активации гуанилатциклазы или для «мягкого» разобщения дыхательной цепи и сброса восстановительных эквивалентов на 3-й участок дыхательной цепи, при этом МАОРН может быть использован для синтеза глутатиона, который бы модулировал уровень АФК Такое переключение биохимических процессов может принять неуправляемый, несбалансированный характер и привести к десенситизации или гибели клетки -это результат разобщения сигнализации и биологического окисления Задача фармакологической коррекции состоит в поддержке сопряженного состояния сигнальных и окислительно-восстановительных процессов, в осуществлении сбалансированного переключения на альтернативные метаболические пути

Табл 2 Оценка эффективности терапии острых отравлений крыс

Терапия Коэффициент эффективности (ЛД5о + леч / ЛД™ без леч )

Этанол, п=42 1,6

Метис-1, п=48 2,5

Метис-2, п=92 3,3

Метис-4, п=39 4,3

Мы исследовали ряд физиологических и биохимических показателей при интоксикации ФАА и ФАН с применением терапии У крыс, получавших терапию, отмечено улучшение динамики температуры тела и потребления кислорода, вес тела не уменьшается Лечебный эффект комплексов проявляется в изменении динамики цитрата в мозге, почках и крови, коррекции параметров агрегации тромбоцитов Результаты сравнительного анализа содержания

ФА в гомогенатах органов, плазме крови и моче крыс при интоксикации без применения и с применением терапии показали, что комплексы «Метис» обусловливают значительное повышение уровня ФА (в 1,5-2 раза) в плазме крови и снижение этого уровня в 2 раза в ткани мозга крыс в первые часы после отравления, что свидетельствует о замедлении утилизации ФА в организме и прежде всего в клетках мозга При этом следует отметить незначительное изменение динамики цитрата и ФА в сердце крыс по сравнению с мозгом при использовании комплексов «Метис», что является еще одним свидетельством первичности поражения и определяющей роли нервной системы в патогенезе интоксикации ФА

ВЫВОДЫ

1 В основе патогенеза острой интоксикации фторацетатом у исследованных животных лежит поражение нервной системы В связи с этим в выявлении факта интоксикации фторацетатом ключевую роль играют следующие клинические и морфофизиологические характеристики у крыс это снижение двигательной активности с периодами гиперактивации и судорогами, отказ от корма и воды, снижение температуры тела, ишемические поражения мозга и миокарда, развитие дисфункции дыхательной системы, возникновение вегетативного дисбаланса с постепенным усилением влияния парасимпатической нервной системы

2 Биохимические признаки интоксикации фторацетатом отражают метаболизм фторацетата, снижение интенсивности аэробного дыхания, переориентацию путей метаболизма клеток и утилизацию альтернативных энергетических субстратов Наиболее ранние и выраженные изменения биохимических показателей отмечены в головном мозге отравленных крыс это повышение концентрации фторацетата, фторид-иона, цитрата, аланина, глюкозы, снижение уровней гликогена, лактата, глутамата, глутамина, лейцина В периферической крови наиболее выражены в первые часы интоксикации следующие отклонения полное отсутствие глутамина, снижение уровня нитрит-иона, повышение концентраций фторацетата и цитрата

3 На уровне изолированных клеток и митохондрий фторацетат или его метаболит фторцитрат подавляют сопряженное и разобщенное дыхание митохондрий, снижают уровень восстановленных пиридиновых нуклеотидов, способствуют повышению базального и индуцированного уровня цитоплазматического кальция, изменению мембранного потенциала митохондрий В свою очередь, эти изменения могут стать причиной изменения чувствительности и функциональной активности клеток, влиять на развитие апоптоза и способствовать нарушению микроциркуляции

4 Сформулирована концепция причинно-следственных связей при воздействии фторацетата на клетки, которая основана на понимании метаболизма клетки как сопряженного взаимодействия сигнальных и окислительно-восстановительных процессов Согласно предложенной концепции, первичные метаболические изменения носят адаптационный характер

и отражают сопряжение внутриклеточной сигнализации и биологического окисления Необратимое снижение редокс-потенциала клеток, десенситизация клеток или их гибель обусловлены разобщением сигнализации и биологического окисления Задача фармакологической коррекции состоит в поддержке сопряжения сигнальных и окислительно-восстановительных процессов, в осуществлении сбалансированного переключения на альтернативные метаболические пути

5 Проведенный анализ метаболических сдвигов позволил определить основные направления для разработки эффективной терапии при острой интоксикации фторацетатом ингибирование взаимодействия фторацетата с коэнзимом А, ингибирование взаимодействия фторцитрата с аконитазой, восстановления протока в цикле Кребса дистальнее аконитазы и утилизация накапливающегося цитрата В соответствии с этим, были разработаны комплексы серии «Метис», в состав которых входят метиленовый синий, глутамат, нитроэфир и этанол Наибольшая терапевтическая эффективность показана для комплекса «Метис-4» - коэффициент эффективности 4,3 по ЛД50 Комплексы серии «Метис» нормализуют дыхание, температуру, вес тела и физическую активность животных, снижают утилизацию фторацетата и уровень цитрата в мозге крыс

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ

В реферируемых журналах

Музыкантов В Р , Сахаров Д В , Домогатский С П , Гончаров Н В , Данилов С М , Смирнов В Н Защита зндотелиальных клеток от цитотоксического действия перекиси водорода посредством иммуноэритроцитов // Доклады АН СССР - 1986 - т 288 - №3 - с 748-750

Гончаров Н.В , Сахаров И Ю, Данилов С М , Саканделидзе О Г Использование коллагеназы из гепатопанкреаса камчатского краба для выделения и культивирования зндотелиальных клеток крупных сосудов человека // Бюлл экспер биол мед - 1987- Т 103 -№9 - с 376-378

V R Muzykantov, D V Sakharov, S Р Domogatsky, N.V.Goncharov, S M Damlov Directed targeting of lmmunoerythrocytes provides local protection of endothelial cells from damage by hydrogen peroxide //Amer J Pathol - 1987-V 128 - №2-p 276-285

V R Muzykantov, D V Sakharov, V V Simtsyn, S P Domogatsky, N.V Goncharov, S M Damlov Specific killing of human endothelial cells by antibody-conjugated glucose oxidase // Analytical Biochemistry - 1988 - V 169 - P 383-389

Григорян Г Ю , Мирзапоязова Т Ю , Никашин А В , Гончаров Н В , Данилов С М Идентификация и характеристика ß-адренергических рецепторов в мембранах культивируемых клеток эндотелия легочной артерии человека // Проблемы эндокринологии - 1989 - Т 35 - №4 -212-216

Зерниченко А Н, Гончаров Н.В. Мотивационный процесс, структура личности и трансформация энергии потребностей //Вопросы психологии -1989 -№2 - с 73-81

Сергеенко Н Г , Глашкина Л М , Гончаров Н В. О механизме токсического действия Т-2 токсина // Гигиена и санитария - 1992 - №5-6 - с 45-47

Теплова В В , Евтодиенко Ю В , Холмухамедов Э Л , Сергеенко Н Г, Гончаров Н.В. Влияние фторцитрата на потребление кислорода и транспорт Са2+ в митохондриях клеток печени // Цитология - 1992 - т 34 - №11/12 - с 69-73

Кузнецов С В, Гончаров Н.В, Глашкина Л М Изменение параметров функционирования сердечно-сосудистой и дыхательной систем у крыс разного возраста под

воздействием малых доз ингибитора холинэстераз фосфакола // Ж-л эволюционной биохимии и физиологии -2005 -т41 -№2 -с 160-167

Гончаров Н.В, Кузнецов А В, Радилов А С Современные представления о токсикологии фторацетата //Токсикологический вестник - 2005 -№5 - с 31-44

Goncharov N V., Jenkins R О, Radilov A S Toxicology of fluoroacetate a review, with possible directions for therapy research Hi Appl Toxicol -2006 -V26 -#2 -P 148-161

Mmdukshev I V, Jahatspanian I E , Goncharov N.V , Jenkins R О , Krivchenko A I A new method for studying platelets, based upon the low-angle light scattering technique 1 Theoretical and experimental foundations of the method //Spectroscopy Int J -2005 -V19 -#5-6 -P 235-246

Mmdukshev IV, EE Ermolaeva, E V Vivulanets, E Yu Shabanova, N N Petnshchev, N V Goncharov, R О Jenkins, A I Krivchenko A new method for studying platelets, based upon the low-angle light scattering technique 2 Application of the method in experimental toxicology and clinical pathology //Spectroscopy Int J -2005 -V19 -#5-6 -P 247-257

Mmdukshev I V , Goncharov N.V., Shabanova E Yu , Ermolaeva E E , Mironova M О, Radilov A S , Jenkins R О , Krivchenko A I A new method for studying platelets, based upon the low-angle light scattering technique 3 Aggregation hypersensitivity of platelets (ADP agonist) and search for corrective agents // Spectroscopy Int J - 2006 - V 20 - #2 - P 57-66

Zmchenko V P , Lee V V, Berezhnov A V, Mmdukshev I V, Jenkins R О , Goncharov N V Application of a low-angle light scattering technique to cell volume and cell signaling studies on Ehrlich ascite tumor cells //Spectroscopy Int J -2006 - V 20 - #2 -P 45-55

Goncharov N , A Kuznetsov, L Glashkina, A Radilov Fluoroacetate Search for effective therapy//The Toxicologist -2006 -V90 -#1 -p479

Koryagina N L , Savelieva E I, Khlebnikova N S , Goncharov N V, Jenkins R О, Radilov A S Determination of fluoroacetic acid m water and biological samples by GC-FID and GC-MS in combination with solid-phase microextraction //Analytical Bioanalytical Chemistry -2006 -V386 -#5 -P 1395-400

Цимбал Ф A , Цимбал M В, Субботина С H , Гончаров Н.В , Глашкина J1 М Исследование порога чувствительности метода пупиллометрии при интоксикации фосфорорганическими соединениями // Токсикологический Вестник - 2007 - №1 - с 26-29

Корягина НЛ, Савельева ЕII, Гончаров НВ, Хлебникова НС, Радилов АС Применение метода газовой хроматографии с ионизационно-пламенным и масс-селективным детектированием для определения содержания фторацетата натрия в воде и биомедицинских пробах // Токсикологический Вестник - 2007 - №1 - с 29-35

Kuznetsov S V , Jenkins R О , Goncharov N V Electrophysiological study of infant and adult rats under acute intoxication with fluoroacetamide // J Appl Toxicol - 2007 - V 27 - #6 - P 538550

Mmdukshev IV, V V Knvoshlyk, E E Ermolaeva, IA Dobrylko, E V Senchenkov, N V Goncharov, R О Jenkins and A I Krivchenko Necrotic and apoptotic volume changes of red blood cells investigated by low-angle light scattering technique // Spectroscopy Int J -2007 -V21 -#2 -P 105-120

Zmchenko V P, N.V. Goncharov, V V Teplova, V A Kasymov, О I Petrova, A V Berezhnov, E V Senchenkov, IV Mmdukshev, R О Jenkins, A S Radilov Polarographic and spectroscopic studies of the effects of fluoroacetate/fluorocitrate on cells and mitochondria // Spectroscopy Int J -2007 -V21 - #2 - P 121-134

Goncharov N., A Kuznetsov, L Glashkina, A Radilov New therapy to treating acute intoxications with fluoroacetate and other poisons // The Toxicologist - 2007 - V 96 -#1 - P 208

Mmdukshev I, N. Goncharov, E Ermolaeva, I Dobrylko, E Senchenkova, M Mironova, R Jenkins, A Radilov, A Krivchenko A new method for studying platelets, based upon the low-angle light scattering technique, and its application in experimental toxicology // The Toxicologist - 2007 -V96 -#1 -P437

Радилов А С , Нагорный С В , Рембовский В Р , Ермолаева Е Е , Савельева Е И , Гончаров Н.В , Корягина Н Л , Цибульская Е А , Хлебникова Н С , Цимбал Ф А Токсиколого-гигиеническая оценка опасности отходов бывших предприятий по производству и использованию отравляющих веществ // Рос хим журнал - 2007 - т LI - JMs2 - с 77-82

Зинченко В П, Н.В. Гончаров, В В Теплова, В А Касымов, О И Петрова, А В Бережнов, Е В Сенченков, И В Миндукшев, Р О Дженкине, А С Радилов Изучение взаимосвязи внутриклеточных сигнальных и метаболических путей при ингибировании митохондриальной аконитазы фторацетатом//Цитология - 2007 — Т49 -№12 -с 1023-1031

Материалы научных конференций

Никашин А В , Мирзапоязова Т 10 , Гончаров Н.В , Данилов С M , Григорян Г Ю Гормональная регуляция уровня циклических нуклеотидов в культуре пассируемого эндотелия легочной артерии и пупочной вены человека // Тез конф «Кровообращение в условиях высокогорной и экспериментальной гипоксии» - 1986 - г Фрунзе - с 124-125

Музыкантов В Р, Сахаров Д В , Домогатский С П , Гончаров H В , Данилов С M Применение коньюгатов каталазы и глюкозооксидазы с антителами для иммуно-селективного воздействия на эндотелиапьные клетки в культуре // Тез II Всесоюз Конференции «Биоантиоксидант» - 1986 -Черноголовка - с 139

Гончаров Н.В , Глашкина JI M , Кузнецов А В , Радилов А С Новые антидоты или универсальные антигипоксанты? // Проблемы стандартизации в здравоохранении - 2001 - Xsl -С 141

Гончаров H В , Миндукшев И В , Радилов А С , Кузнецов А В , Добрылко И А Влияние малых доз VX на тромбоцитарное звено гемостаза крыс в хроническом эксперименте // Медицинские аспекты радиационной и химической безопасности Материалы Российской научной конференции - BMA, СПб - 2001 - С 281-284

Гончаров H В , Сергеенко H Г , Кузнецов А В , Глашкина JI M Фторацетаты механизм токсического действия и разработка терапии острых отравлений // Труды научно-практической конференции, посвященной 40-летию НИИ ГПЭЧ - СПб, 2002 -с 165-174

Гончаров H В , Глашкина JI M , Кузнецов А В , Радилов А С Токсическое действие фторацетатов и разработка эффективных средств терапии // Материалы международного симпозиума по антитерроризму - Волгоград, 2002 г, с 49-51

Goncharov N.V, Radilov A S , Mindukshev I V , Yermolayeva Ye Ye , Kuznetsov S V , Glashkma L M , Dobrylko I A , Kuznetsov A V Effects of RVX Low Dose Chronic Exposure on Rat Platelet Aggregation and Physiology of Nerve Fibres II In Economy, Logistic, and Ecology in Armed Forces III International Scientific Conference m Brno, 2003 P 63-70

Гончаров H.B , Глашкина Л M , Кузнецов А В , Радилов А С Действие фторацетата на кальциевый баланс и сигнальное сопряжение в тромбоцитах // В сб «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» Труды международной конференции - Пущино, 16-18 июня 2003 - С 54-56

Гончаров Н.В , JI M Глашкина, А В Кузнецов, А С Радилов Токсическое действие фторацетатов и разработка эффективных средств терапии // 2-й съезд токсикологов России Москва, 10-13 ноября 2003 г Тезисы докладов С 330-331

Goncharov N., A Radilov, Е Ermolaeva, L Glashkma, I Mindukshev, S Kuznetsov, A Khatkevich, P Avdonin, and A Kuznetsov On pathogenesis of delayed effects of RVX and other organopliosphates low-dose chronic exposure // Proceedings of the 8th International Symposium on Protection against Chemical and Biological Warfare Agents (including bioterronsm) Gothenburg, Sweden 2-6 June 2004 P 32

Гончаров H.B , А С Радилов, E E Ермолаева, Л M Глашкина, A H Хаткевич, П В Авдонин, И В Миндукшев, С В Кузнецов, И А Гамалей, К M Кирпичникова, А В Кузнецов Экспериментальное изучение патогенеза при хроническом действии малых доз фосфорорганических соединений // Медицинские аспекты радиационной и химической безопасности Материалы Российской научной конференции - BMA, СПб - 2004 - С 32

Гончаров H В , Л M Глашкина, В П Зинченко, В В Теплова, С В Кузнецов, А В Кузнецов, А С Радилов Фторацетат биоэнергетика, сигнализация и терапия острых отравлений // Международная конференция «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» 6-9 июня 2005 -Пущино - С 235-237

Глашкина Л M , Н.В.Гончаров, Е И Савельева, H Л Корягина, Т А Кузнецова, А И Николаев, M О Миронова, А С Радилов Биохимические механизмы адаптации при блокаде

цикла Кребса фторацетатом // Научные труды I съезда физиологов СНГ - Под ред Р И Сепиашвили - т 1 - М Медицина-Здоровье, 2005 - с 12

Гончаров Н В , С В Кузнецов, В П Зинченко, В В Теплова, Л М Глашкина, Е Е Ермолаева, М О Миронова, А В Кузнецов, А С Радилов Механизмы развития тканевой гипоксии при действии фторацетата и поиск эффективных антигипоксантов // Научные труды I съезда физиологов СНГ - Под ред Р И Сепиашвили - т 1 - М Медицина-Здоровье, 2005 - с 171

Radilov А, N. Goncharov, L Glashkina, A Kuznetsov, Е Ermolaeva, М Mironova Fluoroacetate New Therapy for Old Poison // CBMTS Industry IV The Third World Congress on Chemical, Biological and Radiological Terrorism - Dubrovnic, Croatia, 17-23 September 2005 #58, p 40-41

Savelicva E, N Goncharov, N Koryagina, A Radilov New Method for Fluoroacetate Identification and Quantitative Determination in Biological Samples // Pittcon-2006, Orlando, 12-17 March 2006 - 1520-13P

Goncharov N , Glashkina L , Kuznetsova T , Ermolaeva E , Mironova M , Paramonova N , Kuznetsov S , Shabanova E , Vinokurov M , Avdonin P, Mindukshev I, Radilov A Fluoroacetate Physiological, Biochemical and Morphological Signs of Intoxication m Laboratory Experiments // 16lh Nordic Conference on Forensic Medicine, Turku, 15-17 June 2006 Proceedings, Abst 018, p 22

Savelyeva E , Koryagina N , Goncharov N , Radilov A A New Sensitive Method for Fluoroacetate Identification in Animal Tissues // 16lh Nordic Conference on Forensic Medicine, Turku, 15-17 June 2006 Proceedings, Abstract 019, p 22

Гончаров H В., А В Кузнецов, Л M Глашкина, А С Радилов Разработка новой неспецифической терапии для лечения острых отравлений фторацетатами и другими ядами // 3-я Международная научно-практическая конференция «Новые технологии создания инновационных лекарств От достижений «постгеномной эры» к национальным фармацевтическим брендам» 01 12 2006, Химки Сборник трудов, с 12

Гончаров Н.В , Зинченко В П , Теплова В В , Миндукшев И В , Винокуров М Г, Авдонин П В , Петрова О И , Бережное А В , Глашкина Л М , Радилов А С О механизмах адаптации клеток и тканей при ингибировании митохондриальной аконитазы фторацетатом // Материалы Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация», Пущино, 5-7 июня 2007 г, с 291-295

Goncharov N.V., Jenkins R О, Radilov A S Fundamental and Applied Research on Fluoroacetate // Proceedings BII Program Review conference - Pushchmo - 20-22 Oct 2007 - P 17

Mindukshev IV , Krivoshlyk V V , Ermolaeva E E, Jenkins R О, Goncharov N.V. Low-Angle Light Scattering Technique in Clinical Pathology and Experimental Toxicology // Proceedings BII Program Review conference - Pushchmo - 20-22 Oct 2007 - P 24-25

Авторские свидетельства и права

Смирнов М Д , Самохин Г П , Данилов Ю Н , Данилов С М , Алликметс Е Ю , Мартынов А В, Гончаров Н.В. Способ выделения клеток эндотелия из суспензии клеток животного происхождения// Авторское свидетельство №1341771 от 01 06 1987

Рудин А В , Данилов С М , Попов Н В , Гончаров Н В , Мартынов А В , Домогатский С П Штамм гибридных культивируемых клеток мыши Mus musculus, используемый для получения моноклональных антител к поверхности эндотелиальных клеток пупочной вены человека // Авторское свидетельство №1362746 от 01 09 1987

Goncharov N.V., Kuznetsov А V , Glashkina L М , Radilov A S Compositions and methods for treating intoxications // PCT 23 03 2007 - Steptoe & Johnson LLP (USA), Ref 14940 0006 -Gorodissky & Partners (Russia), Ref 2420-300868RU/031

Лицензия ЛР № 020593 от 07 08 97

Подписано в печать 30 07 2008 Формат 60x84/16 Печать цифровая Уел печ л 2 Уч -изд л 2 Тираж 100 Заказ 3227Ь

Отпечатано с готового оригинал-макета, предоставленного автором, в Цифровом типографском центре Издательства Политехнического университета 195251, Санкт-Петербург, Политехническая ул , 29 Тел (812)550-40-14 Тел/факс (812)297-57-76

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Гончаров, Николай Васильевич

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ТОКСИКОЛОГИЯ ФТОР АЦЕТАТА И НЕКОТОРЫЕ АСПЕКТЫ

СОВРЕМЕННОЙ БИОХИМИИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Введение в токсикологию фторацетата

1.2. Аконитаза и молекулярный механизм токсического действия ФА

1.3. Вещества, метаболизм которых связан с образованием ФА

1.4. Токсикокинетика и механизм детоксикации ФА

1.5. Токсикодинамика, клиника и патоморфология при отравлении ФА

1.6. Физиолого-биохимические механизмы действия ФА

1.7. Роль глутамата и глутамина в метаболизме млекопитающих

1.8. Некоторые аспекты биохимии мозга и действие фторацетата на клетки нервной системы

1.9. Терморегуляция и термогенез

1.10. Гонадотоксическое и эмбриотоксическое действие ФА

1.11. Терапия при интоксикации ФА

1.12. Обзор литературы: Резюме

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Токсикологические характеристики фторацетамида и фторацетата натрия в острых экспериментах с лабораторными животными

3.2. Исследование токсикокинетики фторацетата

3.3. Исследование токсикодинамики при интоксикации фторацетатом

3.3.1. Электрофизиологические исследования при интоксикации ФАА и ФАН

3.3.2. Биохимические признаки интоксикации ФАА и ФАН

3.3.3. Морфологические особенности токсикодинамики крыс при остром отравлении ФАН в дозе /4ЛД

3.3.4. Изучение особенностей гемодинамики при интоксикации ФА: Эндотелий-зависимая релаксация сосудов крыс

3.4. Исследование ФАН и ФЦ на изолированных клетках и митохондриях

3.4.1. Действие ФАН и ФЦ на изолированные митохондрии

3.4.2. Изучение действия ФА на эндотелиальные клетки и кардиомиоциты

3.4.3. Действие ФА на клетки асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ)

3.4.4. Оценка функционального состояния макрофагов

3.4.5. Действие ФАН на развитие апоптоза клеток иммунной системы

3.4.6. Оценка кинетических параметров агрегации тромбоцитов методом малоуглового светорассеяния

3.4.7. Динамика [Са ] в тромбоцитах кролика при интоксикации ФАА

3.5. Разработка эффективных средств терапии при остром отравлении лабораторных животных ФАН

3.5.1. Выбор и апробация веществ - компонентов потенциальной терапии

3.5.2. Принципы формирование терапевтического комплекса МЕТИС и проверка его эффективности при остром отравлении ФАН

3.6. Эксперименты по токсикокинетике и токсикодинамике при интоксикации ФАН с применением препаратов серии МЕТИС

3.6.1. Определение фторацетата в плазме крови, гомогенатах органов и моче крыс при интоксикации ФАН

3.6.2. Тестирование комплекса МЕТИС при интоксикации ФАН в модельных экспериментах in vivo

3.6.3. Влияние ФА на процессы ацетилпрования у крыс '

3.6.4. Физиологические и биохимические показатели крыс при острой интоксикации ФАА с использованием экспериментальной терапии

3.6.5. Физиологическое исследование ЭКГ, параметров внешнего дыхания и температуры крыс при острой интоксикации ФАН с использованием экспериментальной терапии

3.6.6. Биохимические показатели в органах и плазме крови крыс при интоксикации ФАН и применении лечебных препаратов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Механизмы токсического действия фторацетата и экспериментальная терапия острых отравлений"

Актуальность проблемы

Уровень ФА в некоторых австралийских растениях достигает 5 г/кг сухого веса [Hall, 1972] и при однократном или повторном употреблении домашними животными служит причиной их гибели, вызывая порой ощутимый экономический ущерб [McCosker, 1989; Minnaar et al., 2000]. Существует ряд фторсодержащих соединений, метаболизм которых в организме протекает с образованием ФА в качестве промежуточного продукта: это противоопухолевые препараты (5-фторурацил и изомеры фторэтилнитрозомочевины), N-(2-фторэтил)-производные наркотических анальгетиков нормеперидина и норметазоцина, пестициды (1,3-дифтор-2-пропанол и фторацетамид, ФАА), 1-(ди)гало-2-фторэтаны и фторэтанол [Reifenrath et al., 1980; Tisdale, Brennan, 1985; Feldwick et al., 1998 и др.]. В промышленных регионах ФА можно обнаружить в составе капель дождя и тумана [Rompp et al., 2001]. Актуальность проблем токсичности и терапии отравлений ФА существенно возросла в связи с возникновением новой опасности — международного терроризма [Holstege et al., 2007]. Физико-химические особенности, отсутствие вкусовых или обонятельных признаков наличия вещества, отставленное проявление токсичности, схожесть клинических признаков отравления с рядом естественных недомоганий, — все это обусловливает повышенный интерес к всестороннему изучению механизмов действия ФА и поиску эффективных средств терапии интоксикаций.

Механизм токсического действия ФА широко известен под названием "летальный синтез" [Peters, 1952; Peters, Wakelin, 1953], суть которого заключается в превращении в клетках организма нетоксичного самого по себе ФА в токсичный фторцитрат (ФЦ), ингибирующий аконитазу и работу цикла Кребса. Собственно токсикантом является 4-гидрокси-транс-аконитат, дериват фторцитрата, не содержащий фтора [Kent et al., 1985], а ФЦ получил название «суицидный субстрат» [Clarke, 1991]. В результате блокады аконитазы происходит накопление цитрата в органах и тканях организма, истощаются энергетические запасы, отмечен внутриклеточный дисбаланс ионов и осмотический дисбаланс.

Изучению клинической картины отравления ФА, исследованию механизма токсического действия, а также поиску средств терапии отравлений было посвящено большое количество работ [Chenoweth, 1949; Rammel et al., 1985 и др.]. Несмотря на то, что было исследовано распределение ФА в организме и его действие на отдельные ферментные комплексы, существуют пробелы в понимании молекулярных и клеточных механизмов действия ФА, в понимании взаимосвязи между молекулярными первопричинами и ответом целого организма, и это не позволяет исследователям разработать эффективные средства терапии острой интоксикации ФА. Выявленные признаки отравления недостаточно проанализированы с точки зрения биохимических механизмов адаптации к токсическому воздействию, не предложены альтернативные подходы к терапии с учетом метаболических особенностей различных тканей и органов, поэтому до сих пор не удалось в полной мере подавить метаболизм ФА, ускорить его выведение из организма, нейтрализовать вызываемые им изменения. Этиловый спирт, предложенный около 60 лет назад, но главным образом симптоматическая "терапия являются на сегодняшний день единственно приемлемыми средствами медицинской помощи [Dormán, 1990; Proudfoot et al., 2006].

Необходимо также отметить, что при интоксикации ФА, другими ядами, при возникновении критических состояний различного генеза отсутствует строгая специфика патогенеза, поскольку главной причиной токсического эффекта и - в конечном счете - гибели организма является тканевая гипоксия. Поэтому изучение механизмов биохимической адаптации к токсическому действию ФА, установление критических звеньев, определяющих динамику и исход интоксикации, разработка научно обоснованных и эффективных средств терапии острых отравлений ФА является актуальной проблемой, имеющей важное теоретическое и прикладное значение для успешной диагностики и терапии отравлений другими ядами; это также может повысить эффективность терапии критических состояний путем разработки новых антигипоксантов.

Цель и задачи исследования л.

Цель настоящей работы заключалась в комплексном изучении биохимических, физиологических, клинико-токсикологических механизмов действия фторацетата и разработке эффективного средства терапии острых отравлений фторацетатом. Для достижения данной цели были поставлены и решены следующие задачи:

1) Исследовать клинические признаки острого отравления, физиологические и морфофункциональные особенности действия фторацетата на примере фторацетата натрия (ФАН) и фторацетамида (ФАА).

2) Исследовать биохимические особенности действия фторацетата на митохондрии, клетки и организм экспериментальных животных, исследовать взаимодействие энергопродуцирующих и сигнальных систем при воздействии фторацетата.

3) Теоретически и экспериментально обосновать принципы биохимической адаптации клеток и тканей при действии фторацетата; определить основные направления для разработки эффективной терапии острых отравлений фторацетатом.

4) Разработать терапию острых отравлений фторацетатом и в экспериментах на животных продемонстрировать ее эффективность.

Положения диссертации, выносимые на защиту

1. Острая интоксикация фторацетатом сопровождается развитием комплекса клинических, морфофизиологических и биохимических показателей, свидетельствующих о первичном и преимущественном поражении нервной системы экспериментальных животных.

2. Биохимическая адаптация при интоксикации фторацетатом состоит в перестройке метаболических путей и утилизации альтернативных энергетических субстратов с целью поддержания биологического окисления; биохимическая адаптация отражает сопряжение внутриклеточной сигнализации и биологического окисления.

3. Физиолого-биохимической основой острого токсического действия фторацетата является разобщение процессов внутриклеточной сигнализации и биологического окисления, что выражается в необратимом снижении уровня восстановленных пиридиновых нуклеотидов, подавлении дыхания митохондрий, нарушении баланса внутриклеточного кальция, потере чувствительности или гибели клеток.

4. Основные направления для фармакологической коррекции при острой интоксикации фторацетатом: конкуренция за коэнзим А, конкуренция за митохондриальную аконитазу, активация альтернативных метаболических путей, утилизация накапливающегося цитрата.

5. Комплекс веществ, включающий в себя искусственный акцептор электронов, источник восстановительных эквивалентов, донор окиси азота и источник ацетатных групп обладает высоким терапевтическим эффектом при использовании в ранние сроки острой интоксикации фторацетатом и способствует коррекции ряда биохимических и физиологических показателей у экспериментальных животных.

Научная новизна

С использованием ФАН, ФАА и ФЦ впервые проведено комплексное изучение физиолого-биохимических, морфофункциональных, клеточных и субклеточных (митохондриальных) механизмов действия ФА и его токсического метаболита ФЦ. Предложено теоретическое объяснение и экспериментальное обоснование динамики ряда биохимических показателей в органах и тканях животных при "воздействии ФА. Изложены представления о сопряжении и разобщении процессов внутриклеточной сигнализации и биологического окисления. Впервые использована методология изучения кинетических параметров агрегации тромбоцитов для определения характера интоксикации, механизма действия и апробации средств терапии. Обнаружено явление гиперчувствительности тромбоцитов с последующим переходом клеток в рефрактерное (нечувствительное) состояние. Предложена концепция причинно-следственных связей на молекулярно-клеточном уровне при блокаде цикла Кребса на уровне митохондриальной аконитазы. Обоснованы принципы биохимической адаптации и фармакологической коррекции при острой интоксикации фторацетатом. Разработан и теоретически, обоснован эффективный терапевтический комплекс «Метис»: введенный в ранние сроки интоксикации ФА, этот комплекс спасает от гибели экспериментальных животных с коэффициентом эффективности до 4,3 (по ЛД50). В~ экспериментальную" токсикологию и~фармакологию введён метод биохимической коррекции, основанный на принципе управляемого и целевого воздействия на ход метаболических процессов.

Теоретическое и практическое значение работы

Проведенные исследования расширяют представления о механизмах нарушения гомеостаза при острой интоксикации ФА и позволяют лучше понять взаимосвязь специфических и неспецифических проявлений интоксикации. Знание биохимических механизмов, лежащих в основе адаптации клеток и тканей при воздействии токсического агента, дает возможность эффективно скорректировать нарушенный гомеостаз. Разработанные и теоретически обоснованные средства терапии острых отравлений ФА углубляют наши знания о взаимодействии сигнальных и энергопродуцирующих систем, о путях биохимической адаптации, о биохимической основе физиологических ритмов. Новый терапевтический комплекс после проведения доклинических испытаний в кратчайшие сроки может быть внедрен в клиническую практику, поскольку его компоненты отличаются дешевизной и доступностью. Использование методологии малоуглового светорассеяния для изучения морфофункциональных характеристик клеток крови свидетельствует о высокой ее эффективности для определения характера интоксикации, а также для разработки средств терапии, что является несомненным вкладом в методическое обеспечение физиолого-биохимических и токсиколого-фармакологических исследований. Проанализирована не только научная литература по разным аспектам действия ФА, но также проведен анализ ряда смежных областей биохимии и клеточной биологии. Полученные в работе практические результаты и теоретические обобщения могут быть использованы в лекционных курсах по биохимии, токсикологии и фармакологии.

Апробация работы

Результаты исследований доложены: на конференции «Кровообращение в условиях высокогорной и экспериментальной гипоксии» (Фрунзе, 1986), II Всесоюзной конференции «Биоантиоксидант» (Черноголовка. 1986), Всероссийской конференции «Проблемы стандартизации в здравоохранении» (Москва, 2001), научно-практической конференции, посвященной 40-летию НИИГПЭЧ (Санкт-Петербург, 2002), Международном симпозиуме по антитерроризму (Волгоград, 2002), на международных конференциях «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2003, 2005, 2007), международном симпозиуме «Медицинские и биологические проблемы, связанные с уничтожением химического оружия» (Волгоград, 2003), 2-м съезде токсикологов России (Москва, 2003), Российской научной конференции «Медицинские аспекты радиационной и химической безопасности» (Санкт---

Петербург, 2004), на 8-м и 9-м международных симпозиумах по защите от химического и биологического оружия (Гетеборг, 2004, 2007), 3-м Всемирном конгрессе по химическому, биологическому и радиационному терроризму (Дубровник, 2005), I съезде физиологов СНГ (Сочи, 2005), Обществе токсикологов США (Сан-Диего, 2006; Шарлотт, 2007), на Питтсбургской конференции (Орландо, 2006), 16-й Северной конференции по судебной медицине (Турку, 2006), 3-й Международной научно-практической конференции «Новые технологии создания инновационных лекарств» (Химки, 2006), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 45-летию НИИГПЭЧ (Санкт-Петербург, 2007), на конференции, посвященной 50-летию Института цитологии РАН (Санкт-Петербург, 2007), 10-й международной конференции по химическому разоружению (Брюссель, 2007), на обзорной конференции программы ВИ Госдепартамента США (Пущино, 2007).

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 352 страницах машинописного текста, содержит 90 таблиц и 168 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, 6 экспериментальных разделов с дополнительным анализом литературы, обсуждением и частными выводами, заключения и общих выводов. Библиография включает 72 отечественных и 687 зарубежных источников.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гончаров, Николай Васильевич

ВЫВОДЫ

1. В основе патогенеза острой интоксикации фторацетатом у исследованных животных лежит поражение нервной системы. В связи с этим в выявлении факта интоксикации фторацетатом ключевую роль играют следующие клинические и морфофизиологические характеристики: у крыс это снижение двигательной активности с периодами гиперакгивации и судорогами, отказ от корма и воды, снижение температуры тела, ишемические поражения мозга и миокарда, развитие дисфункции дыхательной системы, возникновение вегетативного дисбаланса с постепенным усилением влияния парасимпатической нервной системы.

2. Биохимические признаки интоксикации фторацетатом отражают метаболизм фторацетата, снижение интенсивности аэробного дыхания, переориентацию путей метаболизма клеток и утилизацию альтернативных энергетических субстратов. Наиболее ранние и выраженные изменения биохимических показателей отмечены в головном мозге отравленных крыс: это повышение концентрации фторацетата, фторид-иона, цитрата, аланина, глюкозы, снижение уровней гликогена, лактата, глутамата, глутамина,'лейцина. В периферической крови наиболее выражены в первые часы интоксикации следующие отклонения: полное отсутствие глутамина, снижение уровня нитрит-иона, повышение концентраций фторацетата и цитрата.

3. На уровне изолированных клеток и митохондрий фторацетат или его метаболит фторцитрат подавляют сопряженное и разобщенное дыхание митохондрий, снижают уровень восстановленных пиридиновых нуклеотидов, способствуют повышению базального и индуцированного уровня цитоплазматического кальция, изменению мембранного потенциала митохондрий. В свою очередь, эти изменения могут стать причиной изменения чувствительности и функциональной активности клеток, влиять на развитие апоптоза и способствовать нарушению микроциркуляции.

4. Сформулирована концепция причинно-следственных связей при воздействии фторацетата на клетки, которая основана на понимании метаболизма клетки как сопряженного взаимодействия сигнальных и окислительно-восстановительных процессов. Согласно предложенной концепции, первичные метаболические изменения носят адаптационный характер и отражают сопряжение внутриклеточной сигнализации и биологического окисления. Необратимое снижение редокс-потенциала клеток, десенситизация клеток или их гибель обусловлены разобщением сигнализации и биологического окисления. Задача фармакологической коррекции состоит в поддержке сопряжения сигнальных и окислительно-восстановительных процессов, в осуществлении сбалансированного переключения на альтернативные метаболические пути.

5. Проведенный анализ метаболических сдвигов позволил определить основные направления для разработки эффективной терапии при острой интоксикации фторацетатом: ингибирование взаимодействия фторацетата с коэнзимом А, ингибирование взаимодействия фторцитрата с аконитазой, восстановление протока в цикле Кребса дистальнее аконитазы и утилизация накапливающегося цитрата. В соответствии с этим, были разработаны комплексы серии «Метис», в состав которых входят: метиленовый синий, глутамат, нитроэфир и этанол. Наибольшая терапевтическая эффективность показана для комплекса «Метис-4» - коэффициент эффективности 4,3 по ЛД50. Комплексы серии «Метис» нормализуют дыхание, температуру, вес тела и физическую активность животных, снижают утилизацию фторацетата и уровень цитрата в мозге крыс.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ В реферируемых журналах и монографиях

Музыкантов В.Р., Сахаров Д.В., Домогатский С.П., Гончаров Н.В., Данилов С.М., Смирнов В.Н. Защита эндотелиальных клеток от цитотокеичеекого действия перекиси водорода посредством иммуноэритроцитов // Доклады АН СССР - 1986 - т.288 - №3 - с.748-750.

Гончаров Н.В., Алдашев А.А. Условия выделения и выращивания эндотелиальных клеток легочной артерии человека in vitro // В сб. «Вопросы профилактики и лечения основных сердечно-сосудистых заболеваний в условиях Киргизии». - 1986 - г.Фрунзе. - с.49-51.

Гончаров Н.В., Сахаров И.Ю., Данилов С.М., Саканделидзе О.Г. Использование коллагеназы из гепатопанкреаса камчатского краба для вьщеления и культивирования эндотелиальных клеток крупных сосудов человека. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 1987.- Т. 103.- №9.- с.376-378.

Muzykantov V.R., D.V.Sakharov, S.P.Domogatsky, N.V.Goncharov, S.M.Danilov. Directed targeting of immunoerythrocytes provides local protection of endothelial cells from damage by hydrogen peroxide. // American Journal of Pathology. - 1987.- V.128.- №2.- p.276-285.

Muzykantov V.R., D.V.Sakharov, V.V.Sinitsyn, S.P.Domogatsky, N.V.Goncharov, S.M.Danilov. Specific killing of human endothelial cells by antibody-conjugated glucose oxidase. // Analytical Biochemistry.- 1988.- V.169.- P.383-389.

Григорян Г.Ю., Мирзапоязова Т.Ю., Никашин A.B., Гончаров Н.В., Данилов С.М. Идентификация и характеристика p-адренергических рецепторов в мембранах культивируемых клеток эндотелия легочной артерии человека // Проблемы эндокринологии. - 1989. - Т.35. - №4. - 212-216.

Зерниченко А.Н., Гончаров Н.В. Мотивационный процесс, структура личности и трансформация энергии потребностей. // Вопросы психологии. — 1989. - №2. - с.73-81.

Сергеенко Н.Г., Глашкина Л.М., Гончаров Н.В. О механизме токсического действия Т-2 токсина // Гигиена и санитария. - 1992. — №5-6.- с.45-47.

Теплова В.В., Евтодиенко Ю.В., Холмухамедов Э.Л., Сергеенко Н.Г., Гончаров Н.В. Влияние фторцитрата на потребление кислорода и транспорт Са2+ в митохондриях клеток печени // Цитология. - 1992,- т.34.- №11/12.- с.69-73.

Кузнецов С.В., Гончаров Н.В., Глашкина Л.М. Изменение параметров функционирования сердечно-сосудистой и дыхательной систем у крыс разного возраста под воздействием малых доз ингибитора холинэстераз фосфакола // Ж-л эволюционной биохимии и физиологии. -2005. - т.41. - №2. - с. 160-167.

Гончаров Н.В., Кузнецов А.В., Радилов А.С. Современные представления о токсикологии фторацетата. // Токсикологический вестник - 2005. - №5. - с.31-44.

Goncharov N.V., Jenkins R.O., Radilov A.S. Toxicology of fluoroacetate: a review, with possible directions for therapy research. // J. Appl. Toxicol. - 2006. - V.26. - #2. - P. 148-161.

Mindukshev I.V., Jahatspanian I.E., Goncharov N.V., Jenkins R.O., KrivchenkoA.I. A new method for studying platelets, based upon the low-angle light scattering technique. I. Theoretical and experimental foundations of the method. // Spectroscopy Int. J. -2005. -V.19. - #5-6. - P.235-246.

Mindukshev I.V., Ermolaeva E.E., Vivulanets E.V., Shabanova E.Yu., Petrishchev N.N., Goncharov N.V., Jenkins R.O., Krivchenko A.I. A new method for studying platelets, based upon the low-angle light scattering technique. 2. Application of the method in experimental toxicology and clinical pathology. // Spectroscopy Int. J. - 2005. - V.19. - #5-6. - P.247-257.

Mindukshev I.V., Goncharov N.V., Shabanova E.Yu., Ermolaeva E.E., Mironova M.O., Radilov A.S., Jenkins R.O., Krivchenko A.I. A new method for studying platelets, based upon the low-angle light scattering technique. 3. Aggregation hypersensitivity of platelets (ADP agonist) and search for corrective agents. // Spectroscopy Int. J. - 2006. - V.20. - #2. - P.57-66.

Zinchenko V.P., Lee V.V., Berezhnov A.V., Mindukshev I.V., Jenkins R.O., Goncharov N.V. Application of a low-angle light scattering technique to cell volume and cell signaling studies on Ehrlich ascite tumor cells. // Spectroscopy Int. J. - 2006. - V.20. - #2. - P.45-55.

Goncharov N., A. Kuznetsov, L. Glashkina, A. Radilov. Fluoroacetate: Search for effective therapy // The Toxicologist. -2006. - V.90. - #1. - p.479.

Koryagina N.L., Savelieva E.I., Khlebnikova N.S., Goncharov N.V., Jenkins R.O., Radilov A.S. Determination of fluoroacetic acid in water and biological samples by GC-FID and GC-MS in combination with solid-phase microextraction. // Anal. Bioanal. Chem. — 2006. — V.386. - #5. — P. 1395-400.

Goncharov N., Radilov A., Mindukshev I., Kuznetsov S., Yermolayeva Ye., Glashkina L., Shkayeva I., Dobrylko I., Kuznetsov A. New understanding on pathogenesis of delayed effects of RVX low-dose chronic exposure. // In: Ecological Risks Associated with the Destruction of Chemical Weapons (Eds - V.M.Kolodkin and W.Ruck). - 2006 - Springer. - P.297-303.

Цимбал Ф.А., Цимбал M.B., Субботина C.H., Гончаров Н.В., Глашкина JI.M. Исследование порога чувствительности метода пупиллометрии при интоксикации фосфорорганическими ---- соединениями // Токсикологический Вестник - 2007 - №1 - с.26-29.

Корягина H.JL, Савельева Е.И., Гончаров Н.В., Хлебникова Н.С., Радилов А.С. Применение метода газовой хроматографии с ионизационно-пламенным и масс-селективным детектированием для определения содержания фторацетата натрия в воде и биомедицинских пробах // Токсикологический Вестник - 2007 - №1 - с.29-35.

Kuznetsov S.V., Jenkins R.O., Goncharov N.V. Electrophysiological study of infant and adult rats under acute intoxication with fluoroacetamide // J. Appl. Toxicol. - 2007. - V.27. - #6. - P.538-550.

Mindukshev I.V., V.V.Krivoshlyk, E.E.Ermolaeva, I.A.Dobrylko, E.V.Senchenkov, N.V. Goncharov, R.O. Jenkins and A.I.Krivchenko. Necrotic and apoptotic volume changes of red blood cells investigated by low-angle light scattering technique // Spectroscopy Int. J. - 2007. - V.21. -#2. — P.105-120.

Zinchenko V.P., N.V. Goncharov, V.V. Teplova, V.A. Kasymov, O.I. Petrova, A.V. Berezhnov, E.V. Senchenkov, I.V. Mindukshev, R.O. Jenkins, A.S. Radilov. Polarographic and spectroscopic studies of the effects of fluoroacetate/fluorocitrate on cells and mitochondria // Spectroscopy Int. J. -2007.-V.21. -#2.-P.121-134:

Goncharov N., A. Kuznetsov, L. Glashkina, A. Radilov. New therapy to treating acute intoxications with fluoroacetate and other poisons // The Toxicologist. - 2007. - V.96. -#1 - P.208.

Mindukshev I., N. Goncharov, E. Ermolaeva, I. Dobrylko, E. Senchenkova, M. Mironova, R. Jenkins, A. Radilov, A. Krivchenko. A new method for studying platelets, based upon the low-angle light scattering technique, and its application in experimental toxicology // The Toxicologist. -2007.-V.96.-#1.-P.437.

Радилов A.C., Нагорный C.B., Рембовский B.P., Ермолаева Е.Е., Савельева Е.И., Гончаров Н.В., Корягина H.JL, Цибульская Е.А., Хлебникова Н.С., Цимбал Ф.А. Токсиколого-гигиеническая оценка опасности отходов бывших предприятий по производству и использованию отравляющих веществ // Рос. хим. журнал. - 2007. - T.LI. - №2.- с.77-82.

Сергеенко Н.Г., Гончаров Н.В., Глашкина JI.M. Влияние магнитного поля на функциональное состояние клеток иммунной системы. // В сб. «Токсиколого-гигиенические аспекты обеспечения безопасности при контакте с азотсодержащими ксенобиотиками» (Ред. проф. В.Р.Рембовский). - СПб. -2007. -с.53-56.

Гончаров Н.В., Кузнецов А.В., Глашкина JI.M., Меньшиков Н.М., Кондрашов В.А., Радилов

A.С. Разработка нового средства экспериментальной терапии при остром отравлении крыс этиленгликолем и цианидом. // В сб. «Токсиколого-гигиенические аспекты обеспечения безопасности при контакте с азотсодержащими ксенобиотиками» (Ред. проф.

B.Р.Рембовский). - СПб. -2007. -с.63-65.

Зинченко В.П., Н.В. Гончаров, В.В. Теплова, В.А. Касымов, О.И. Петрова, А.В. Бережнов, Е.В. Сенченков, И.В. Миндукшев, R.O. Jenkins, А.С. Радилов. Изучение взаимосвязи внутриклеточных сигнальных и метаболических путей при ингибировании митохондриальной аконитазы фторацетатом // Цитология - 2007. — Т.49. - №12. — с.1041-1050.

Авторские свидетельства и права

Смирнов М.Д., Самохин Г.П., Данилов Ю.Н., Данилов С.М., Алликметс Е.Ю., Мартынов A.B., Гончаров Н.В. Способ выделения клеток эндотелия из суспензии клеток животного происхождения // Авторское свидетельство №1341771 от 01.06.1987.

Рудин A.B., Данилов С.М., Попов Н.В., Гончаров Н.В., Мартынов A.B., Домогатский С.П. Штамм гибридных культивируемых клеток мыши Mus musculus, используемый для получения моноклональных антител к поверхности эндотелиальных клеток пупочной вены человека // Авторское свидетельство №1362746 от 01.09.1987.

Goncharov N.V., Kuznetsov A.V., Glashkina L.M., Radilov A.S. Compositions and methods for treating intoxications // PCT 23.03.2007 - Steptoe & Johnson LLP (USA), Ref. 14940.0006 -Gorodissky & Partners (Russia), Ref. 2420-300868RU/031

Материалы научно-практических конференций

Никашин A.B., Мирзапоязова Т.Ю., Гончаров Н.В., Данилов С.М., Григорян Г.Ю. Гормональная регуляция уровня циклических нуклеотидов в культуре пассируемого эндотелия легочной артерии и пупочной вены человека. // Тез. конф. «Кровообращение в условиях высокогорной и экспериментальной гипоксии». - 1986. — г.Фрунзе - с. 124-125.

Сахаров Д.В., Домогатский С.П, Гончаров Н.В., Данилов С.М., Музыкантов В.Р. Направленная доставка иммуноэритроцитов как возможный способ локальной протекции эндотелия от повреждения перекисью водорода. // Тез. II Всесоюз. Конференции «Биоантиоксидант». - 1986. — Черноголовка - с. 127-128.

Музыкантов В.Р., Сахаров Д.В., Домогатский С.П., Гончаров Н.В., Данилов С.М. Применение коньюгатов каталазы и глюкозооксидазы с антителами для иммуно-селективного воздействия на эндотелиальные клетки в культуре. // Тез. II Всесоюз. Конференции «Биоантиоксидант». - 1986. -Черноголовка. - с. 139.

Гончаров Н.В., Глашкина JI.M., Кузнецов A.B., Радилов A.C. Новые антидоты или универсальные антигипоксанты? // Проблемы стандартизации в здравоохранении. — 2001.-№1. - С.141.

Гончаров Н.В., Миндукшев И.В., Радилов A.C., Кузнецов A.B., Добрылко H.A. Влияние малых доз VX на тромбоцитарное звено гемостаза крыс в хроническом эксперименте. // Медицинские аспекты радиационной и химической безопасности. Материалы Российской научной конференции.- BMA, СПб.- 2001.- С.281-284.

Гончаров Н.В., Ермолаева Е.Е. Радилов A.C., Кузнецов A.B., Миндукшев И.В. Использование метода лазерного сканирования тромбоцитов с целью диагностики отравлений фосфорорганическими веществами (типа Vx). // Военная профилактическая медицина. Проблемы и перспективы. - Материалы 1-го съезда врачей медико-профилактического профиля вооружённых сил Российской Федерации. - С-Петербург. - 2002 г.-С.470-471.

Гончаров Н.В., Сергеенко Н.Г., Кузнецов A.B., Глашкина JI.M. Фторацетаты: механизм токсического действия и разработка терапии острых отравлений. // Труды научно-практической конференции, посвященной 40-летию НИИ ГПЭЧ. - СПб, 2002. - с. 165-174.

Гончаров Н.В., Глашкина Л.М., Кузнецов A.B., Радилов A.C. Токсическое действие фторацетатов и разработка эффективных средств терапии // Материалы международного симпозиума по антитерроризму.- Волгоград, 2002 г., с.49-51.

Гончаров Н.В., Радилов A.C., Кузнецов A.B., Миндукшев И.В, Добрылко И.А. Оценка хронического воздействия фосфорорганических отравляющих веществ (типа Vx) на функциональное состояние тромбоцитов. // Труды научно-практической конференции, посвященной 40-летию НИИ ГПЭЧ ФУ Медбиоэкстрем, НИИ ГПЭЧ.- СПб.- 2002.- С.209-215.

Goncharov N.V., Radilov A.S., Mindukshev I.V., Yermolayeva Ye.Ye., Kuznetsov S.V., Glashkina L.M., Dobrylko I.A., Kuznetsov A.V. Effects of RVX Low Dose Chronic Exposure on Rat Platelet Aggregation and Physiology of Nerve Fibres. // In: Economy, Logistic, and Ecology in Armed Forces III. International Scientific Conference in Brno, 2003. P.63-70.

Гончаров Н.В., Глашкина JI.M., Кузнецов A.B., Радилов A.C. Действие фторацетата на кальциевый баланс и сигнальное сопряжение в тромбоцитах. // В сб.: «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». Труды международной конференции. — Пущино, 16-18 июня2003.-С. 54-56.

Ермолаева Е.Е., Добрылко H.A., Гончаров Н.В., Миндукшев И.В., Радилов A.C. Исследование кинетики агрегации тромбоцитов в токсикологическом эксперименте. // В сб.: «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». Труды международной конференции. -Пущино, 16-18 июня 2003. - С. 63-65.

Гончаров Н.В., Радилов A.C., Миндукшев И.В., Кузнецов C.B., Ермолаева Е.Е., Глашкина Л.М., Шкаева И.Е., Добрылко И.А., Кузнецов A.B. О механизме развития отдаленных последствий при хронической интоксикации малыми дозами VX // В сб. «Медицинские и биологические проблемы, связанные с уничтожением химического оружия. Труды международного симпозиума». — Волгоград, 26-28 августа 2003 г. - С.206-207.

Глашкина Л.М., А.В.Кузнецов, Н.В.Гончаров. Экспериментальная разработка методических подходов к оценке повреждающего действия химических веществ на легкие. // 2-й съезд токсикологов России. Москва, 10-13 ноября 2003 г. Тезисы докладов. С.76-77.

Ермолаева Е.Е., Н.В.Гончаров, А.С.Радилов, А.В.Кузнецов, И.А.Добрылко, И.В.Миндукшев. Оценка воздействия фосфорорганических отравляющих веществ на состояние гемостаза. // 2-й съезд токсикологов России. Москва, 10-13 ноября 2003 г. Тезисы докладов. С.102-103.

Гончаров Н.В., Л.М.Глашкина, А.В.Кузнецов, А.С.Радилов. Токсическое действие фторацетатов и разработка эффективных средств терапии. // 2-й съезд токсикологов России. Москва, 10-13 ноября 2003 г. Тезисы докладов. С.330-331.

Goncharov N., A. Radilov, Е. Ermolaeva, L. Glashkina, I. Mindukshev, S. Kuznetsov, A. Khatkevich, P. Avdonin, and A. Kuznetsov. On pathogenesis of delayed effects of RVX and other organophosphates low-dose chronic exposure // Proceedings of the 8th International Symposium on Protection against Chemical and Biological Warfare Agents (including bioterrorism) Gothenburg, Sweden 2-6 June 2004. P.32.

Гончаров H.B., А.С.Радилов, Е.Е.Ермолаева, Л.М.Глашкина, А.Н.Хаткевич, П.В.Авдонин, И.В.Миндукшев, С.В.Кузнецов, И.А.Гамалей, К.М.Кирпичникова, А.В.Кузнецов. Экспериментальное изучение патогенеза при хроническом действии малых доз фосфорорганических соединений // Медицинские аспекты радиационной и химической безопасности. Материалы Российской научной конференции.- BMA, СПб.- 2004.- С.32.

Гончаров Н.В., Л.М.Глашкина, В.П.Зинченко, В.В.Теплова, С.В.Кузнецов, А.В.Кузнецов, А.С.Радилов. Фторацетат: биоэнергетика, сигнализация и терапия острых отравлений. // Международная конференция «Рецепция и внутриклеточная сигнализация» 6-9 июня 2005 -Пущино. - С.235-237

Глашкина Л.М., Н.В.Гончаров, Е.И.Савельева, Н.Л.Корягина, Т.А.Кузнецова, А.И.Николаев, М.О.Миронова, А.С.Радилов. Биохимические механизмы адаптации при блокаде цикла Кребса фторацетатом // Научные труды I съезда физиологов СНГ.- Под ред.Р.И.Сеппашвили,- т.1.- М:Медицина-Здоровье, 2005.- 220 с. (№23, с. 12)

Гончаров Н.В., С.В.Кузнецов, В.П.Зинченко, В.В.Теплова, Л.М.Глашкина, Е.Е.Ермолаева, М.О.Миронова, А.В.Кузнецов, А.С.Радилов. Механизмы развития тканевой гипоксии при действии фторацетата и поиск эффективных антигипоксантов. // Научные труды I съезда физиологов СНГ.- Под ред.Р.И.Сепиашвили.- т.1.- М:Медицина-Здоровье, 2005.- 220 с. (№468, с.171)

Radilov A., N.Goncharov, L.Glashkina, A. Kuznetsov, E.Ermolaeva, M.Mironova. Fluoroacetate: New Therapy for Old Poison. // CBMTS Industry IV. The Third World Congress on Chemical, Biological and Radiological Terrorism. — Dubrovnic, Croatia, 17-23 September 2005. #58, p.40-41.

Savelieva E., N. Goncharov, N. Koryagina, A. Radilov. New Method for Fluoroacetate Identification and Quantitative Determination in Biological Samples. // Pittcon-2006, Orlando, 1217 March 2006.- 1520-13P.

Goncharov N., Glashkina L., Kuznetsova Т., Ermolaeva E., Mironova M., Paramonova N. Kuznetsov S., Shabanova E., Vinokurov M., Avdonin P., Mindukshev I., Radilov A. Fluoroacetate: Physiological, Biochemical and Morphological Signs of Intoxication in Laboratory Experiments II 16th Nordic Conference on Forensic Medicine, Turku, 15-17 June 2006. Proceedings, Abstract 018, p.22.

Savelyeva E., Koryagina N., Goncharov N., Radilov A. A New Sensitive Method for Fluoroacetate Identification in Animal Tissues. // 16th Nordic Conference on Forensic Medicine, Turku, 15-17 June 2006. Proceedings, Abstract 019, p.22.

Гончаров H.B., A.B. Кузнецов, Л.М. Глашкина, А.С.Радилов. Разработка новой неспецифической терапии для лечения острых отравлений фторацетатами и другими ядами // 3-я Международная научно-практическая конференция «Новые технологии создания инновационных лекарств. От достижений «постгеномной эры» к национальным фармацевтическим брендам». 01.12.2006, Химки. Сборник трудов, с. 12.

Миндукшев И.В., Н.В. Гончаров, В.В. Кривошлык, Е.Е. Ермолаева, Е.Ю. Сенченкова, И.А. Добрылко, В.В. Гарнюк, А.С. Радилов, А.И. Кривченко. Применение метода малоуглового светорассеяния для изучения тромбоцитов и других клеток крови: новые возможности в экспериментальной токсикологии и фармакологии // 3-я Международная научно-практическая конференция «Новые технологии создания инновационных лекарств. От достижений «постгеномной эры» к национальным фармацевтическим брендам». 01.12.2006, г.Химки. Сборник трудов, с.28.

Ермолаева Е.Е., Радилов А.С., Нагорный С.В., Рембовский В.Р., Савельева Е.И., Гончаров Н.В., Корягина Н.Л., Цибульская Е.А., Тидген В.П., Хлебникова Н.С., Меньшиков Н.М., Глашкина Л.Н., Кузнецова Т.А., Сенченков Е.В., Шкаева И.Е., Кудина Л.Н. Подходы к токсиколого-гигиенической оценке опасности отходов и материалов, в прошлом контактировавших с отравляющими веществами. // «Актуальные проблемы химической безопасности в Российской Федерации». Сборник трудов Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 45-летию ФГУП «НИИГПЭЧ» ФМБА России 1516 февраля 2007 г. - СПб. - С. 104-107.

Е.Е. Ermolaeva, A.S. Radilov, S.V. Nagorny, N.V. Goncharov, V.R. Rembovskiy. Toxicological and Sanitary Assessment of Hazardous Wastes and Materials Exposed to Toxic Chemical Compounds // 10th International Chemical Weapons Demilitarisation Conference (CWD 2007). -14-18th May 2007, Brussels. - P.24.

Гончаров Н.В., Зинченко В.П., Теплова В.В., Миндукшев И.В., Винокуров М.Г., Авдонин П.В., Петрова О.И., Бережнов А.В., Глашкина JI.M., Радилов А.С. О механизмах адаптации клеток и тканей при ингибировании митохондриальной аконитазы фторацетатом // Материалы Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация», Пущино, 5-7 июня 2007 г., с.291-295.

Суханова И.Ф., Кожевникова JI.M., Гончаров Н.В., Ермолаева Е.Е., Попов Е.Г., Авдонин П.В. Исследование роли сАМФ-связывающих белков Ерас в регуляции сократимости кровеносных сосудов и сердца и в подавлении агрегации тромбоцитов. // Материалы Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация», Пущино, 5-7 июня 2007 г., с.40-43.

Миндукшев И.В., Кривошлык В.В., Гончаров Н.В., Кривченко А.И. Аномалии морфологии эритроцитов обусловлены типом их гибели: апоптозом или некрозом. // Материалы Международной конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация», Пущино, 5-7 июня 2007 г., с.68-71.

Goncharov N.V., Jenkins R.O., Radilov A.S. Fundamental and Applied Research on Fluoroacetate. // Proceedings of the BII Program Review conference. - Pushchino. - 20-22 Oct 2007. - P. 17.

Mindukshev I.V., Krivoshlyk V.V., Ermolaeva E.E., Jenkins R.O., Goncharov N.V. Low-Angle Light Scattering Technique in Clinical Pathology and Experimental Toxicology. // Proceedings of the BII Program Review conference. - Pushchino. - 20-22 Oct 2007. — P.24-25.

Savelieva E.I., Koryagina N.L., Goncharov N.V., Radilov A.S. Method for Fluoroacetate Identification in Animal Tissues // Proceedings of the BII Program Review conference. — Pushchino. - 20-22 Oct 2007. -P.27.

Глава 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Появление первых научных статей, посвященных токсикологии ФА, датируется 40-ми годами 20 века. Многолетняя история изучения ФА связана с открытиями не только в области токсикологии (новый тип токсического действия - летальный синтез), но также в других областях биологических наук. Расшифрована структура аконитазы, выявлено функциональное взаимодействие нейронов и астроцитов, показана возможность переключения метаболических путей, что важно для понимания механизмов возникновения критических состояний, гипоксических и постгипоксических осложнений. Тем не менее, приходится с сожалением констатировать, что наличие огромного экспериментального и теоретического материала не помогло решить самую важную для токсикологии проблему эффективной терапии. Этанол в качестве антидота был предложен еще в 1940-е годы и с тех пор для медицинской практики ничего более эффективного разработано не было. Очевидно, причина такого положения дел заключается в разобщенности исследований токсикологов, химиков, биохимиков и физиологов. Проведенный нами анализ научной литературы показал, что взаимоотношения сигнальных и метаболических путей клеток в норме и патологии остаются неясными. Ингибирование м-аконитазы приводит к ингибированию цикла Кребса, снижению пиридиновых нуклеотидов, накоплению цитрата, нарушению внутриклеточной сигнализации, деэнсргизации и гибели клеток, однако в разных клетках и тканях организма это происходит в неодинаковой степени, поэтому сложно предсказать первичную реакцию клеток разного типа и тем более организма. Это является главной причиной того, что до сих пор не решена главная задача токсикологических исследований - разработка терапии острых отравлений ФА. Поэтому среди задач настоящего исследования было обобщение и теоретический анализ литературных данных, наряду с комплексными экспериментальными исследованиями с применением методов токсикологии, физиологии, биохимии, биофизики, химии и фармакологии.

В наших экспериментах показано, что токсичность ФАН по сравнению с токсичностью ФАА почти на порядок более высокая для крыс и в 3 раза более высокая для кроликов. Принципиальных отличий в клинической картине при отравлении животных равноэффективными дозами ФАН и ФАА нет, однако при воздействии ФАН симптомы отравления появляются несколько раньше, а гибель крыс и кроликов наступает в более сжатые сроки, чем при воздействии ФАА. Введение ФАА и ФАН крысам в сублетальных дозах приводит к отказу от корма и воды, следствием чего является снижение массы тела у животных. Восстановление потребления корма наблюдается на 3 и 7 сутки при отравлении ФАА в дозах '/гЛДЗО и ЛД50, соответственно, тогда как при отравлении ФАН в дозе 1/2ЛД50 мы не наблюдали полного восстановления в потреблении корма: через 3 суток потребление корма лишь достигало плато ниже уровня контроля примерно на 30%. В отличие от крыс, у кроликов не было существенных изменений в динамике массы тела при интоксикации ФАН. ФАА и ФАН вызывают прогрессирующее угнетение большинства параметров поведенческих реакций. У крыс и кроликов наблюдалось постепенное снижение температуры тела и снижение потребления кислорода. При отравлении ФАА в дозе ЛД50 минимальное значение ректальной температуры у выживших крыс зафиксировано на вторые сутки, а при отравлении ФАН в равноэффективной дозе максимальное снижение температуры наблюдалось уже через 6 часов. У кроликов при отравлении ФАН в дозе ЛД50 максимально снижение температуры всего на 1 градус наблюдалось также через 6 часов, а снижение температуры ниже 38° через 3 часа является прогностическим признаком смертельного исхода. В общем и целом, отравление ФА приводит к вегетативному дисбалансу и постепенному смещению ведущей роли в регуляции деятельности сердечнососудистой системы к парасимпатической системе. Несмотря на ряд различий в динамике показателей ЭКГ и дыхания крыс после введения ФАА и ФАН, основные тенденции изменения физиологических параметров при интоксикации совпадают. Введение ФАН крысам приводит к выраженному нарушению нормальных физиологических механизмов регуляции сердечного ритма и ритма дыхания. Однако через час после отравления ФАН мы наблюдали усиление парасимпатических влияний, сопровождающееся учащением дыхания и парадоксальным ростом ЧСС. В последующие часы, на фоне усиления гуморально-метаболических факторов и симпатических влияний при падении доли парасимпатических может наблюдаться устойчивое снижение ЧСС и рост ЧДД, т.е. имеет место расхождение между вагосимпатическим балансом и результирующими физиологическими показателями. Этим фактам трудно дать объяснение, если рассматривать происходящие изменения как - исключительно патогенетические, но если предположить первичное адаптивное усиление функций миокарда под действием нарастающих концентраций аденозина, катехоламинов и СЖК, данные противоречия окажутся не столь острыми.

Развивающаяся при интоксикации ФА брадикардия, более позднее и менее выраженное повышение ЧДД сохраняются у крыс на протяжении всего срока обследования. Совокупность признаков, отмечаемых при анализе ЭКГ крыс, свидетельствует о развитии у них синдрома диффузных изменений миокарда. Анализ ЭКГ кроликов не выявил значимых нарушений электрической активности сердца при отравлении ФАН в дозе 'АЛД50, что не позволяет связать гибель животных с нарушениями сердечной деятельности. При интоксикации кроликов ФАН происходит устойчивое снижение ЧДД, сопровождающееся замедлением фазы выдоха и нарушением ритма дыхания. Максимальный эффект достигается на 2-5-е сутки интоксикации и может служить причиной гибели животного. В целом полученные в проведенном исследовании результаты согласуются с данными других исследователей. Так, наиболее типичными признаками отравления ФА считаются изменение сегмента ST, зубца Т, удлинение интервала QT, развитие аритмий [Williamson, 1967]. Вместе с тем, следует отметить, что наличие описанных нарушений ЭКГ соответствует симптомам, свойственным больным с поражениями центральной нервной системы [Угрюмов, 1974; Подлесов, Фролов, 2007; Stewart et al., 1970]. Кроме того, наблюдаемое увеличение амплитуды зубца R, изменение сегмента ST, зубца Т, интервала QT отмечают не только при развитии ишемии миокарда, но и при гипотермии, развитие которой также связано с поражением ЦНС, в частности гипоталамуса [Тимофеев, 2005; Mallet, 2002].

Мы выявили многообразный и отчасти противоречивый характер изменений спектра дыхательных движений у крыс при интоксикации ФА: это возрастание амплитуды основного дыхательного ритма, вспышки дыхательной тахиаритмии (чередующиеся периоды дыхательных комплексов различного частотного диапазона), наличие двух разноамплитудных дыхательных компонентов (рассогласование сокращений диафрагмальных и межреберных мышц), «развал» дыхания (вместо регулярного цикла следуют асинхронные разноамплитудные и разночастотные сокращения дыхательных мышц), «размыв» спектра ЧДД (преходящее плавное учащение правильного дыхательного ритма, когда основной частотный компонент спектрограммы смещается в более высокочастотную область), возникновение высокоамплитудных судорожных вдохов, возникающих в довольно правильном декасекундном ритме. Интересно отметить, что практически все эти отклонения наблюдаются при различных травмах головного мозга [Угрюмов, 1974]. Пестрая картина дыхательных расстройств при интоксикации ФА обусловлена, по-видимому, наложением факторов центрального происхождения (подавление

--------функционального состояния глии рстротрапезоидного ядра, повышение кислотности межклеточного пространства, активация диафрагмального нерва, снижение порога чувствительности к СО2) и влиянием на периферический кровоток и функциональную активность дыхательных мышц [Johnson, Reid, 1988; Erlichman et al., 1998; Hulsmann et al., 2000; Holleranetal., 2001].

Ранее было показано, что в первые часы после введения ФА изменения системных, легочных и коронарных гемодинамических параметров не опосредованы автономной нервной системой и адренергическими нейромедиаторами [Liang, 1977]. Это частично согласуется с нашими результатами (имеется кратковременный период, когда в регуляции сердечной деятельности возрастает роль гуморально-метаболических факторов), но не соответствует более поздним срокам обследования. Происходящие изменения могут быть обусловлены постепенным истощением депо катехоламинов вследствие нарушения работы центральных катехоламинергичееких систем и нарушением Са2+-зависимой секреции катехоламинов надпочечниками в условиях энергетического дефицита [Rubin, 1970]. Кроме < того, нарастание парасимпатической регуляции не обязательно должно быть связано с центральными механизмами. Увеличение тонуса парасимпатической нервной системы может быть вызвано либо стимуляцией вагуса, либо прямым воздействием на мускариновые рецепторы соответствующих агонистов. В связи с этим представляет интерес метаболизм эндотелиальных клеток, которые обладают всеми атрибутами автономной холинергической регуляции: помимо наличия мускариновых рецепторов, в эндотелии показано существование никотиновых рецепторов [Hsu et al., 2005], активность холинацетилтрансферазы и везикулярной системы переноса ацетилхолина [Kirkpatrick et al., 2001, 2003] и даже активность ацетилхолинэстеразы [Carvalho et al., 2005; Santos et al., 2007]. Можно предположить вариант естественной утилизации эндотелиальными клетками накапливающегося цитрата, когда цитоплазматическая АТФ-зависимая цитратлиаза расщепляет цитрат с образованием ацетил-КоА, который — при наличии холина - идет на образование холинергического медиатора ацетилхолина, как это происходит в холинергических нервных окончаниях [Szutowicz, Lysiak, 1980].

Химический анализ при интоксикации крыс ФАН в дозе 2 мг/кг выявил максимальные концентрации ФА через 1 час после отравления: в плазме 2,2 мкг/мл, в мозге 1,89 мкг/г и в 3-4 раза меньше в почках, печени и сердце (от 0,64 до 0,50 мкг/г). Через 3 часа распределение по органам становится более равномерным за счет того, что максимальные концентрации ФА в плазме и мозге снижаются более чем в 2 раза, а минимальные концентрации в органах снижаются ненамного или даже повышаются (в сердце). Через 24 часа снижение концентрации ФА наблюдается во всех исследуемых тканях, за исключением сердца, где уровень ФА соответствует уровню 1-го часа. Через 72 часа ФА в плазме не обнаружен, а органы животных в эти сроки мы не исследовали. ФА не определяется во всех органах кроликов, за исключением почек через 3 часа после введения ФАН в дозе 1/2ЛД50. В плазме кроликов через 1 час выявлено максимальное количество ФА. Через 3 часа в плазме обнаруживается значительно меньше ФА, а через 6 и 24 часа — не обнаруживается совсем.

При отравлении крыс ФАА мы не обнаружили достоверных различий концентрации фторид-иона в плазме. Что касается обследованных органов, фторид-ион в максимальной степени выявлен в сердце через 24 часа и в печени через 3 суток после отравления. Концентрация фторид-иона в плазме кроликов нарастает через 24 часа, но остается повышенной на протяжении 5 суток. Концентрация фторид-иона в плазме крови крыс при интоксикации ФАН увеличивается в два раза в течение 1 часа и держится примерно на одном уровне до 6 час. К 24 час уровень содержания фторида в плазме снижается до фоновой.

Низкая фоновая концентрация фторид-иона в мозге крыс значительно возрастает, достигая почти 10-кратного превышения контрольного уровня через 3-24 часа, после чего медленно снижается, не достигая исходного значения в течение всего времени наблюдения. Отсутствие дефторирующей активности в мозге, с одной стороны, и столь значительное нарастание фторид иона в мозге, с другой стороны, трудно объяснимо. Учитывая значительное накопление ФА в мозге крыс, можно предположить, что повышение фторид-иона обусловлено взаимодействием образующегося в астроцитах ФЦ с м-аконитазой астроцитов.

При интоксикации ФАН концентрация фторид-иона в плазме кроликов нарастает до максимума через 6 часов и снижается до уровня контроля через 48 часов, в печени кроликов концентрация фторид-иона нарастает также через б часов. Один из экспериментов состоял из двух серий, результаты между которыми по фториду и некоторым другим биохимическим показателям принципиально отличались, поэтому мы сочли целесообразным представить часть данных раздельно по группам 1 и 2. При исследовании сердца и плазмы кроликов через 3, б и 24 часа после отравления ФАН была обнаружена следующая закономерность: в первой группе уровень фторид-иона в сердце достоверно повышался через 3 и 6 часов, затем несколько снижался через 24 часа. Сравнение биохимических показателей сердца кроликов выявило достоверное снижение глюкозы в сердце через 3 и 6 часов после отравления при неизменном уровне лактата и, что еще более существенно, при неизменном уровне цитрата. Во второй группе уровень фторид-иона в сердце существенно не менялся, в плазме наблюдалась лишь тенденция к увеличению фторида через 3 часа, уровень глюкозы в сердце повышался более чем в 2 раза через 6 часов при снижении лактата почти в 3 раза через 3 и б часов после отравления и, наконец, цитрат в сердце стабильно увеличивался до двукратного превышения уровня контроля через сутки. Эти данные позволяют предположить связь между утилизацией глюкозы по пентозофосфатному пути с образованием NADPH, последующим восстановлением глутатиона и активацией глутатион-зависимой дефторазы. С другой стороны, слабая утилизация глюкозы не позволяет обеспечить детоксикацию фторацетата, приводит к повышению утилизации лактата в качестве энергетического субстрата, и, в конечном счете, обусловливает повышение цитрата. Имеется ли связь биохимической динамики первой группы с повышенным фоновым уровнем фторид-иона в плазме — вопрос, требующий специального исследования.

Биохимический анализ показал, что концентрация цитрата в плазме крови и органах крыс начинает повышаться уже через час после отравления ФАА или ФАН. Наиболее значительное повышение концентрации цитрата выявлено в почках и сердце (до 12х), далее по степени накопления цитрата следуют мозг, печень и плазма крови (до 4х). Повышение уровня цитрата в тканях кроликов менее значительные: максимальное повышение цитрата (в 2 раза) у кроликов наблюдалось в мозге через 3 часа и сердце через сутки, в крови цитрат повышается на 25% через 6 часов.

Мы не обнаружили отклонений в уровне глюкозы в плазме крови во все сроки исследований после отравления крыс ФАН и ФАА в дозе 'ЛЛД50, но в печени наблюдается повышение уровня глюкозы почти в 3 раза, в сердце - в 2 раза, в мозге - в 2-3 раза. В отличие от цитрата, уровень глюкозы нарастает уже в первые часы после отравления (1-6 часов), но снижается до уровня контроля через сутки. Таким образом, локальное нарушение утилизации глюкозы в органах не отражается на системном уровне глюкозы, который, следовательно, не может служить надежным критерием интоксикации ФА и степени тяжести тканевой гипоксии. Другой источник углеводов, гликоген, резко сокращается в печени и мозге крыс в первые часы после отравления, но восстанавливается через сутки. Несмотря на большую разницу в концентрации гликогена в этих органах (~20х), относительное уменьшение концентрации гликогена почти совпадает - в 2 раза. У кроликов отмечено уменьшение гликогена примерно на 30% только в печени.

Уровень лактата достоверно снижается при интоксикации ФАН в сердце и мозге крыс через 3 и 6 часов, в печени через 3 часа, и лишь в почках уровень лактата, в отличие от глутамата, не меняется. В плазме крови крыс уровень лактата снижался в первые часы после отравления, но резко возрастал после клоиико-тонических судорог. У кроликов наблюдается достоверное повышение лактата в крови в 1,5 раза, что связано с периодическим двигательным возбуждением и активацией мышечной дрожи в ответ на снижение температуры тела. В сердце кроликов динамика лактата коррелировала с динамикой глюкозы: в случае утилизации глюкозы и уменьшения ее уровня, уровень лактата не

--снижался, но повышение уровня глюкозы связано с резким снижением уровня лактата (в 3 раза через 3-6 часов).

Уровень триглицеридов в плазме крыс значительно снижен (почти в 2 раза) через 1-6 часов после отравления, что объясняется резким снижением потребления пищи вследствие угнетения ЦНС. Возможно также, что снижение уровня ТГ обусловлено усилением активности липопротеинлипазы эндотелия за счет инсулина, выброс которого, в свою очередь, может усиливаться в результате повышения уровня глюкозы в тканях и нарастающего доминирования парасимпатической регуляции при интоксикации ФА. Об этом также свидетельствует некоторое повышение уровня СЖК в плазме крови крыс и кроликов в первые часы после отравления, но на уровень СЖК также влияет катехоламиновая активизация жировой ткани. В более поздние сроки (у крыс — через сутки, у кроликов — через 6 часов) отмечено достоверное снижение СЖК в плазме крови животных, свидетельствуя об усиленном использовании СЖК в качестве энергетического субстрата — утилизация, очевидно, неполная, но важно получение восстановительных эквивалентов в реакциях КоА-зависимого окисления жирных кислот: благодаря ацил-КоА-дегидрогеназной (~1,5АТФ) и оксиацил-КоА-дегидрогеназной (~2,5АТФ) реакциям окисление одного пальмитоилыюго остатка дает 4x7=28 молекул АТФ [Кольман, Рем, 2000].

Мы выявили значительное снижение уровня глутамата в органах отравленных крыс во все сроки исследования, начиная с первых часов. Данные ГХ-анализа также свидетельствуют о снижении глутамата и практически полном отсутствии глутамина в плазме крыс через 3 часа после отравления ФАН. Повышение активности ГлДГ в сердце через сутки и 3 суток после отравления ФАН свидетельствует о включении одного из альтернативных метаболических путей в качестве компенсаторной реакции сердца на энергетическую блокаду. Активность ГлДГ повышается также в печени, наряду с повышением активности аминотрансфераз и МДГ, что также свидетельствует об усилении использования глутамата и других аминокислот в качестве альтернативного энергетического источника в организме крыс. У кроликов выявлено раннее повышение активности ГлДГ в мозге и снижение глутамата в сердце через сутки после отравления.

Особого внимания заслуживает исследование динамики некоторых аминокислот в мозге крыс. Обнаружено значительное снижение через 3 часа, но не менее значительное повышение через сутки после отравления концентрации аминокислот глутаминовой группы - глутамата, глутамина и аспартата. Такая же динамика у лейцина, менее выраженная - у лизина и тирозина. Однако уровень аланина стабильно нарастает через 3 часа (в 2 раза) и через сутки (в 6 раз). Это объясняется переаминированием глутамата в нейронах через АлТ и пируват, в результате чего генерируется аланин. Отсюда уменьшение аспартата, глутаминаза эндотелия и нейронов способствует уменьшению глутамина (возможно также и образование глюкозамина с помощью Ь-глутамип:0-фруктозо-6-фосфат трансаминазы). Уровень лактата в мозге крыс понижается через 3-6 часов, но через сутки восстанавливается до уровня контроля. Это свидетельствует о снижении гликолиза и уровня ЫАОН в астроцитах, а также о снижении образования пирувата из аланина вследствие снижения уровня КГ в астроцитах. В мозге крыс и кроликов наблюдается некоторое повышение уровня КГ, что объясняется либо активностью ц-аконитазы и цИЦДГ, либо переаминированием глутамата с пируватом, что вызвает накопление аланина и КГ в нейронах. Повышение уровня аминокислот в органах свидетельствует об ослаблении синтеза и усилении распада белков, а также об уменьшении обмена внутриклеточных аминокислот с внеклеточной средой.

Масштаб изменений глутамата и цитрата в почках по величине сопоставим с изменениями этих субстратов в сердце. Утилизация глутамина и глутамата, по-видимому, позволяет сохранять функциональную активность почек, несмотря на повышение уровня цитрата и снижение активности ряда ферментов. Об этом свидетельствует нормальный уровень креатинина в плазме крови. Глутамат и глутамин служат для выведения аммиака почками и одновременной нейтрализации метаболического ацидоза. Подтверждением этому может служить достоверное снижение уровня мочевины в плазме, хотя, с другой стороны, это может также свидетельствовать о нарушении синтеза мочевины в печени вследствие энергетического дефицита.

Исследуя динамику показателей сердца крыс, можно было бы утверждать, что этот орган является первичной и главной мишенью при отравлении ФАН, если судить по масштабу наблюдаемых биохимических и электрофизиологических изменений. Однако уверенности в том, что сердце — первичная и главная мишень, нет по той причине, что лишь уровень цитрата достоверно меняется через час, тогда как достоверные изменения других измеряемых биохимических параметров начинаются с 3 часов после отравления. Но уровень цитрата и в других органах и даже в плазме крови повышается также через час. При этом через час в плазме достоверно меняется уровень триглицеридов и мочевины, в печени — уровень гликогена, активность АлТ и ГлДГ, в мозге - уровень гликогена. Несмотря на большую разницу в абсолютном количестве гликогена в печени и мозге, относительные изменения в процентном выражении аналогичны. Эти данные, наряду с данными об угнетении ЦНС (поведенческие и физиологические реакции, снижение внутренней' температуры тела) могут свидетельствовать о ведущей роли ЦНС в патогенезе отравления крыс. Более того, данные электрофизиологических исследований кроликов, наряду с биохимическими данными (раннее повышение цитрата в мозге, активация ГлДГ), также свидетельствуют о ведущей роли ЦНС кроликов в патогенезе интоксикации фторацетатом, - что не-соответствует общепринятой классификации [Chenoweth, Gilman, 1946], согласно которой кролики относятся-к группе «сердечников», но свидетельствуют в пользу новых взглядов на развитие патогенеза при острой интоксикации ФА у разных видов животных [Sherley, 2004], согласно которым поражение ЦНС является первопричиной других наблюдаемых изменений.

Морфологические исследования головного мозга крыс (сенсомоторная область) после интоксикации ФАН показали, что наиболее остро на воздействие ФА в коре отреагировала система кровеносных капилляров: в течение 3 часов произошло повреждение гематоэнцефалического барьера, особенно клеточных элементов сосудистой стенки; затем нарушается микроциркуляция (капилляростаз), происходит агрегация клеточных элементов крови (сладжи эритроцитов, тромбообразование). Периваскулярная разновидность астроглии реагирует на состояние сосудистой стенки отеком отростков. Ранняя реакция нейронов на

ФА неоднозначна. Через 3 часа одни нейроны активизировали синтетические процессы, о чем свидетельствует гиперплазия органелл (нарастание гиперхромности цитоплазмы). Другие под действием гипоксии подверглись протеолизу собственных лизосомальных ферментов, в результате в нормохромных клетках образовались очаговые просветления матрикса. К 3 часам после введения ФА наиболее ранимой частью нейронов оказались отростки, включая миелинизированные, особенно их дистальные участки. Были обнаружены синцитиальные «пласты», сформированные резко отечными, оптически пустыми профилями отростков, которые трудно дифференцировать (возможно - и нейронов, и глиальных клеток), тесно прилежащих друг к другу и контактирующих с помощью щелевых контактов. Отмечены патологические изменения синаптических специализаций, особенно в пресинаптических терминалях. Среди субклеточных структур раньше и более выражено реагировали на интоксикацию ФАН митохондрии.

Исследование динамики нитрит-иона позволяет предполагать, что при интоксикации животных ФАА или ФАН имеют место сдвиги окислительно-восстановительного баланса, очевидно адаптационного характера, связанные с изменением активности NO-синтаз, цикла мочевины, пентозофосфатного шунта и (или) других источников NADPH, изменением аминокислотного баланса. Эти сдвиги неспецифичны, имеют фазовый характер, неодинаковы для разных видов животных и для разных источников фторацетата. Первичное снижение уровня нитритов может свидетельствовать о снижении уровня аргинина, глутамата, NADPH. Вторичное повышение уровня нитритов может быть связано с повышением уровня цитрата и переориентацией внутриклеточного метаболизма на прямое окисление глюкозы и (или) окисление цитрата через ц-аконитазу и цИЦДГ. В наших экспериментах максимальное снижение уровня нитрита совпадает с максимальным снижением уровня глутамина в плазме крови крыс и кроликов. Полученные нами данные о резком снижении нитрит-иона у животных через 3 часа после отравления ФАН позволяли предположить ослабление функции эндотелия в этот период интоксикации. Выявленные морфологические изменения микрососудов мозга и данные литературы [Rist et al., 1996] давали основания считать эндотелий сосудов одной из первичных мишеней ФА. Однако исследование эндотелий-зависимой релаксации показало, что воздействие ФАН не влияет на сократительные свойства изолированной аорты крыс юг через 3 часа, ни через сутки после отравления. Это не соответствует нашим предположениям о том, что эндотелий является одной из первичных мишеней при интоксикации ФА, но позволяет предположить ослабление функции других источников окиси азота в этот период интоксикации (например, в крови это могут быть тромбоциты) и вторичное ослабление функций эндотелия микрососудов в результате развивающейся ишемии. В экспериментах с тромбоцитами in vitro и ex vivo нами было описано явление гиперчувствительности клеток при воздействии ФА, которое сменяется на практически полную потерю чувствительности к активатору АДФ - т.н. рефрактерное состояние. Исследование динамики

С а в цитозоле тромбоцитов кролика при интоксикации ФАА показало, что потеря чувствительности связана со снижением мобилизации кальция и объясняется уменьшением количества и (или) снижением аффинности рецепторов. Показано, что аномальный статус тромбоцитов можно корректировать двумя различными путями: 1) применением доноров NO, эффекты которых связаны с активацией эндотелиальной циклооксигеназу и синтезом простациклина, а также с прямым, воздействием на ГЦ тромбоцитов и цГМФ-зависимым фосфорилированием [Salvemini et al., 1996]; 2) применением альтернативных энергетических субстратов (в наших экспериментах — глутамат). Однако если бы глутамат служил лишь в качестве метаболического субстрата, то функциональные эффекты были бы вызваны более высокими концентрациями глутамата, а их действие не было бы столь значительным. Действительно, было показано существование ионотропных NMDA рецепторов на тромбоцитах [Jamieson et al., 1992], которые, однако, не были идентичны своим нейрональным аналогам [Raulli et al., 1994]. Идентичность ионотропных NMDA рецепторов означала бы синергизм в действии, АДФ и глутамата, тогда как мы наблюдали отчетливый антагонизм. Действие на NMDA рецепторы тромбоцитов приводит к повышению цАМФ [Franconi et al., 1996]. Антиагрегационные свойства глутаматных рецепторов тромбоцитов также могут быть связаны с ингибированием образования тромбоксана Вг из арахидоновой кислоты [Franconi et al., 1998]. На основании полученных нами данных, а также данных литературы, можно сделать вывод о том, что наблюдаемая при интоксикации ФАН ишемия, усугубляющая интоксикацию, в определенной степени обусловлена снижением уровня глутамата в крови и органах животных, не только как альтернативного метаболического субстрата, но как сигнальной молекулы и естественного антиагреганта. Кроме того, снижение уровня глутамина практически до нуля вносит, по-видимому, сугубо энергетический вклад в нарушение агрегационных свойств тромбоцитов: тромбоциты обладают выраженной глутаминазной активностью, а образующийся глутамат вступает в ЦТК митохондрий тромбоцитов либо посредством митохондриальной ГлДГ, либо через АсТ, 65% которой находится в MX тромбоцитов [Sahai, 1983; Vasta et al., 1995]. Проникновение глутамина в тромбоциты осуществляется благодаря Na -зависимой ASC системе и

Na+ -независимой L системе для захвата диполярных аминокислот.

Эксперименты in vitro с митохондриями (MX) печени крысы, клетками асцитной карциномы Эрлиха (АКЭ) и кардиомиоцитами при действии ФА или ФЦ показали, что ФА вызывает эффекты в концентрациях на 3 порядка более высоких по сравнению с ФЦ, а в экспериментах с MX эти эффекты зависят от дыхательных субстратов: с пируватом в качестве дыхательного субстрата ФА вызывает медленное окисление и(или) утечку пиридиновых нуклеотидов (ПН) и ингибирование сопряженного и особенно разобщенного дыхания. Окисление ПН предотвращается циклоспорином А. Исследования уровня ПН и динамики [Са2+] в клетках АКЭ при активации АТФ также выявили утечку ПН из митохондрий, которая приводит к смещению баланса митохондриального и цитозольного NAD(P)H при воздействии ФА. Кроме того, при действии на клетки ФА выявлено повышение [Са2+] в цитозоле , которое объясняется активацией Са2+-каналов плазматической мембраны; этот механизм может иметь влияние на увеличение амплитуды и скорости кальциевых волн в кардиомиоцитах при действии ФА, повышение функциональной активности кардиомиоцитов.

Тимус у животных через 18 часов после введения ФАН заметно уменьшен, выявлено значительное уменьшение общего количества тимоцитов и увеличение уровня апоптоза в свежевыделенных тимоцитах. ФАН также вызывает ускорение апоптоза контрольных и дексаметазон-обработанных лимфоцитов человека. Однако ФАН in vitro ингибирует спонтанный апоптоз нейтрофилов. В связи с этим необходимо отметить, что дексаметазон, в противоположность его действию на лимфоциты, также оказывает ингибирующее действие на апоптоз нейтрофилов, индуцированный АФК [Ruiz et al., 2002]. Ранее было показано, что глюкокортикоиды индуцируют апоптоз лимфоидных клеток в синергизме с протеинкиназой А (РКА). Гибель клеток под действием глюкокортикоидов сопровождается повышением внутриклеточного цАМФ. Агенты, стимулирующие ПКА или повышающие внутриклеточный уровень цАМФ, вызывают гибель клеток, сходную с действием глюкокортикоидов [Gruol, Altschmied, 1993]. Протеинкиназа С (РКС), напротив, блокирует летальный эффект глюкокортикоидов. Добавление форболового эфира, стимулирующего РКС, предотвращает гибель тимоцитов под действием дексаметазона [Forbes et al., 1992]. Предполагают, что этот антагонизм между РКА- и РКС-сигнальными путями играет ключевую роль в позитивной/негативной селекции Т-клеток в тимусе [McConkey et al., 1993]. Глюкокортикоид-индуцированный апоптоз в тимоцитах сопровождается также резким повышением уровня внутриклеточных АФК. Возможно, оксидантный стресс является медиатором апоптозной гибели клеток под действием глюкокортикоидов, так как введение антиоксидантов в среду культивирования [Slater et al., 1995], а также культивирование тимоцитов в бескислородной атмосфере [Stefanelli et al., 1995] блокирует эффект глюкокортикоидов.

В наших экспериментах функциональная активность макрофагов была подвержена действию ФАН лишь in vitro в концентрациях порядка 50 мМ и при длительности воздействия 2 суток, что в принципе подтверждает точку зрения Cifarelli et al. [1979] и соответствует представлениям о макрофагах как о клетках, практически не подверженных действию ФАН и обладающих высоким потенциалом восстановления функциональной активности. Более того, мы полагаем, что макрофаги могут быть даже активированы при интоксикации ФАН in vivo: повышение функциональной активности может быть обусловлено повышением цитрата в окружающих тканаях и активацией пентозофосфатного пути окисления глюкозы, а также развитием апоптоза других, более чувствительных к ФА клеток-м и шеней.

Нейтрофилы являются полностью дифференцированными короткоживущими клетками. Время их циркуляции в крови (в отличие от лимфоцитов) составляет около 10 часов, затем они мигрируют в ткани, где подвергаются спонтанному апоптозу в течение 1-2 дней и фагоцитируются тканевыми макрофагами [Squier et al., 1995]. В механизме активации спонтанного апоптоза нейтрофилов основной вклад вносят рецепторы, входящие в состав суперсемейства TNF-рецепторов [Маянский и др., 1999]. Активные формы кислорода (АФК) играют важную роль в функционировании нейтрофилов, однако данные о роли АФК в регуляции апоптоза этих клеток весьма противоречивы. Имеются сведения о том, что активация окислительного взрыва нейтрофилов и развитие воспалительного процесса сопряжено с ингибированием спонтанного апоптоза этих клеток [Ward et al., 1999; Arruda et al., 2004]; в свою очередь, это связывают с ингибированием каспаз [Fadeel et al., 1998]. Однако в других исследованиях показано, что праймирование окислительного взрыва нейтрофилов индуцирует апоптоз [Levitt et al., 2003], а ингибирование продукции АФК не оказывает влияния на С095-индуцируемое ускорение апоптоза этих клеток [Fadeel et al., 1998]. Следует отметить, что АФК участвуют в кластеризации CD95 рецепторов, но это также связано с резким снижением уровня восстановленного глутатиона в «постаревших» нейтрофилах [Scheel-Toellner et al., 2004]. Кроме того, в регуляции спонтанного апоптоза нейтрофилов важную роль отводят р38 митогенактивируемой протеинкиназе (р38МАРК). Ее активность коррелирует с увеличением продукции АФК нейтрофилами при активации этих клеток под действием различных факторов [Detmers et al., 1998]. Дексаметазон оказывает ингибирующее действие на апоптоз нейтрофилов, индуцированный АФК [Ruiz et al., 2002].

В наших экспериментах показано, что ФАН оказывает неоднозначное воздействие на клетки и органы иммунной системы: ускорение апоптоза лимфоцитов in vitro и тимоцитов in vivo, наряду с незначительным ингибирующим действием на функциональную активность макрофагов и подавлением апоптоза нейтрофилов in vitro. Можно предположить, что ингибирующее действие ФАН на апоптоз нейтрофилов реализуется с участием механизмов регуляции апоптоза, включающих АФК. В то же время, усиление апоптоза и угнетение активности клеток иммунной системы является, по-видимому, неспецифической реакцией на интоксикацию ФА и отражает общее снижение и перераспределение энергетических ресурсов организма при действии токсических веществ или стресса [Куценко, 2004; Мамучишвили, 2006].

Одна из главных задач наших исследований - разработка эффективной терапии острых отравлений ФА. Анализируя научную литературу и проводя собственные эксперименты, мы убедились в том, что существует теоретическая и практическая основа для разработки эффективной терапии. Прежде всего, мы предлагаем рассматривать метаболизм клетки как сопряжение сигнальных и окислительно-восстановительных процессов. Вообще под метаболизмом подразумевают обмен веществ, или совокупность катаболических и анаболических процессов, а понятие сопряжения обычно используется применительно к взаимосвязи дыхания и окислительного фосфорилирования. Мы полагаем, что и анаболические, и катаболические процессы в норме есть результат согласованного взаимодействия (сопряжения) информационных процессов (сигнализация) и процессов производства/потребления/диссипации энергии (биологическое окисление, частным случаем которого является дыхание). И катаболические, и анаболические процессы могут быть разобщены. Данное определение метаболизма связано с идеями французского физиолога Лабори [1970] и с представлениями о диссипативных структурах [Пригожин, Стенгерс, 1986]; оно помогает понять биологический смысл процессов, происходящих при интоксикации ФА, сформулировать концепцию причинно-следственных связей, принципы биохимической адаптации и фармакологической коррекции.

Первичное сниэюение уровня ЫАО(Р)Н приводит к угнетению митохондриального дыхания в клетках-мишенях, повышению [Са ], и повышению чувствительности клеток к — активаторам; биологический смысл первой фазы интоксикации состоит в мобилизации альтернативных метаболических путей для поддержания дыхания клеток, и это возмоэюно благодаря сопряжению сигнализации и биологического окисления. Дефицит альтернативных субстратов и/или чрезмерное повышение уровня цитрата приводят к разобщению сигнальных и окислительных процессов: дальнейшее сниэюение уровня пиридиновых нуклеотидов, подавление аэробного дыхания, ингибирование гликолиза, хелатирование нонов кальция, десенситизацию клеток или их гибель; биологический смысл второй фазы ответа -сниэюение потребности клеток и тканей в энергии.

Функциональная специфика первичных мишеней обусловливает динамику физиолого-биохимических реакций на уровне организма (рис.4.1). Поскольку астроциты являются одной из главных мишеней ФА, многие реакции организма обусловлены нарушением трофики и сигнализации нейронов. Одним из важнейших центров регуляции деятельности мозга и всего организма является гипоталамус, который регулирует быстрый ответ автономной нервной системы и более поздние ответы эндокринной системы, пищевые рефлексы, адаптивную поведенческую реакцию, дрожь. Первичное повышение ГАМК вследствие снижения способности астроцитов захватывать глутамат и ГАМК из синаптической щели способствует снижению двигательной активности животных: это означает снижение адаптивной поведенческой реакции (генерация конвекционального тепла снижается). В результате повышается роль двух других составляющих термогенеза - дрожи и недрожательного термогенеза (НДТ). Однако первичное повышение уровня глутамата в межсинаптической щели (по причине ослабления функции астроцитов) и избыток аммония (глутаминаза эндотелия и особенно нейронов генерирует аммиак, который не в состоянии утилизировать астроциты в силу необходимости АТФ для ГС и необходимости утилизации глутамата в ЦТК через ГлДГ, что дополнительно генерирует аммиак) синергично действуют на NMDA-рецепторы, в результате чего происходит понижение заданного уровня (set point) терморегуляции: центр заднего гипоталамуса перестает контролировать теплопродукцию (дрожь возникает слишком поздно, когда температура тела снижается на несколько градусов, либо не возникает вовсе); двигательные центры переднего гипоталамуса перестают контролировать теплоотдачу (сужение периферических сосудов также наступает поздно), что усиливает снижение внутренней температуры тела. В этой ситуации приоритетное значение обретает НДТ, но для работы этого механизма генерации тепла необходимы источники восстановительных эквивалентов» и функционирование путей их передачи на дыхательную цепь MX. Однако ингибирование дыхания MX, особенно разобщенного, приводит к уменьшению не только АТФ, но и теплопродукции в дыхательной цепи MX. Более того, отказ от потребления пищи и воды означает подавление активности центра голода в гипоталамусе и пищевых рефлексов, являющихся частью адаптивного поведения.

Снижение потребления глюкозы клетками мозга обусловливает вспышки активности симпатоадреналовой системы и выбросу катехоламинов в кровь, что приводит к активизации фосфорилазы и усилению распада гликогена (печень, мышцы, мозг); кроме того, катехоламины и глюкагон усиливают активность гормончувствительной липазы адипоцитов, что приводит к расщеплению ТГ в жировой ткани и выходу СЖК в кровь. Положительный инотропный эффект катехоламинов, повышенный вход ионов кальция в кардиомиоциты и повышенный уровень аденозина вследствие распада АТФ в кардиомиоцитах приводит к временному усилению коронарного кровотока и сократительной способности сердца [Liang, 1977]. Затем, вследствие нарушения работы центральных катехоламинергических систем и нарушения Са2+-зависимой секреции катехоламинов надпочечниками в условиях энергетического дефицита и нарастающего уровня цитрата происходит постепенное истощение депо катехоламинов. Реакцией на вспышки симпатической активности является устойчивое нарастание парасимпатической регуляции, в результате нарушается вагосимпатический баланс с уменьшением соотношения LF/HF, снижается ЧСС, наблюдаются расстройства дыхания, снижается температура и общий уровень обменных процессов. Возрастание гуморально-метаболических влияний в первые часы интоксикации, но особенно нарастание парасимпатической регуляции связано, вероятно, с активностью эндотелия сосудов, который обладает всеми атрибутами автономной холинергической регуляции. Эндотелий имеет не только мускариновые, но и никотиновые рецепторы [Hsu et al., 2005], в нем обнаружена активность ацетилхолинэстеразы [Carvalho et al., 2005; Santos et al., 2007], а главное - система синтеза ацетилхолина (холинацетилтрансфераза) и везикулярная система транспорта ацетилхолина из клеток [Kirkpatrick et al., 2001, 2003]. Один из возможных вариантов естественной утилизации эндотелиальными клетками накапливающегося цитрата - расщепление цитрата цитоплазматической цитратлиазой с образованием ацетил-КоА, который - при наличии холина - идет на образование ацетилхолина. Парасимпатический t медиатор ацетилхолин, воздействуя на бета-клетки поджелудочной железы, способствует выбросу инсулина, т.е. возникает порочный круг: поджелудочная железа реагирует на повышенный уровень глюкозы и ацетилхолина, а ЦНС реагирует на кажущийся недостаток глюкозы при фактическом ее избытке. Тем не менее, повышенный выброс инсулина способствует утилизации глюкозы в других тканях (главным образом в мышцах). Инсулин также индуцирует активность липопротеинлипазы эндотелия и расщепление ТГ, поступающих из печени и кишечника в виде липопротеиновых комплексов. Первичное нарастание уровня СЖК сменяется* его снижением, очевидно, вследствие КоА-зависимого окисления жирных кислот (ацил-КоА-дегидрогеназа и оксиацил-КоА-дегидрогеназа). Наконец, действие инсулина и глюкозы на нейроны центра насыщения гипоталамуса - одна из возможных причин отказа от приема пищи [Brüning et al., 2000].

По данным литературы, повышенное содержание ГАМК в различных отделах головного мозга в начальный период времени после воздействия ФА сменяется снижением уровня ГАМК, что совпадает с началом клонико-тонических судорог [Westergaard et al.,

04- "JA

1995]. Повышается уровень цитрата, который хелатирует ионы Ca и Zn , усиливая аффинность NMDA-рецепторов , что в совокупности с повышенными уровнями глутамата и аммония обусловливает синергизм действия на NMDA-рецепторы и способствует развитию судорог. Первичная гиперчувствительность тромбоцитов создает предпосылки для локальной ишемии, прежде всего головного мозга (в мозге отсутствует детоксикация ФА и происходит конкуренция за глутамин/глутамат). Ишемия головного мозга обусловливает повышение [Са2+] в эндотелии микрососудов, активацию NOS и увеличение проницаемости

ГЭБ. Гемодинамические нарушения, обусловленные значительным снижением объема циркулирующей крови за счет увеличения проницаемости сосудистой стенки, циркуляторных нарушений в различных сосудистых бассейнах, особенно головного мозга, -также одна из причин генерализованных судорог.

Нарушения ЭКГ, снижение^ ЧСС, расстройства дыхания/

Первичное нарастание уровня СЖК сменяе!ся его снижением вследс!впе КоАоависимого окисления жирных кислот

Первичное усиление"4 активности сердца^

Истощение депо катехоламинов, усиление влияния парасимпатической регуляции

Активазация фосфорилагы и усиление распада гликогена: усиление активности липагы адипоцптов. расщепление ТГ в жировой ткани и выходу СЖК в кровь

В кардиомиоцитах: снижение AT» и повышение зденошна. повышение цитрата, ингибирование гликолиза, окисление СЖК и лактата

Снижение уровня восстановленных пмрцдиновых нуклеоищов, ингибирование дыхания MX

Блокада аконитазы и цикла Кребса

Снижение потребления глюко>ы клетками мо>га обусловливает вспышки активности симпатоадреналовой системы

Повышение цитрата, ингибирование гликолша в астроцигах

Уменьшение Са-емкости MX. снижение активности Са-АТФа>

Снижение способности астроцитов захватывать глутамат и ГАМК и) синаптической щели

Гиперчувствительность тромбоцитов создает предпосылки для локальной

Уменьшение синтеза АТФ и теплопродукции в дыхательной цепи MX

Первичное повышение ГАМК снижает двигательную активность, генерация конвекщюнального тепла снижается

Первичное повышение уровня глутамата и аммония, действие на IIMDA-рецепторы -понижение заданного уровня терморегуляции

Ишемия головного мо>га обусловливает повышение Са в эндотелии микрососудов, активацию HOS и увеличение проницаемости ГЭБ снижение ОЦК

Снижение температуры) V

Компенсаторная утилигация глутамина: глутамина>а эндотелия и нейронов и ГлДГ эндотелия и астроцитов генерируют аммиак

Снижение ГАМК вследствие дефицита глутамата N !

Цитрат хелатирует С усиливая аффинност ÏIMDA-рецепторов и Zn. к

Рис. 4.1. Схема патогенеза острой интоксикации ФА у крыс. В прямоугольниках обозначены биохимические события (связаны прямыми линиями), в овалах - физиологические проявления (связь показана изогнутым пунктиром).

Судороги — одно из отчетливых физиологических проявлений наступающего рассогласования, разобщения процессов внутриклеточной сигнализации и аэробного дыхания. Сопряжение сигнализации и дыхания проявляется в ритмическом взаимодействии метаболических процессов. В основе физиологических ритмов лежат биохимические процессы, имеющие определенную пространственно-временную организацию, которая, в свою очередь, предполагает согласованное взаимодействие клеток разного типа. Так, одной из причин нарушения нормального дыхательного ритма при интоксикации ФА может быть нарушение деятельности нейронного аппарата дыхательного центра, но подавление ритмической активности нейронов является следствием тормозного действия ФА на цикл Кребса астроцитов, а не нейронов [Hulsmann et al., 2000]. Описанные нами феномены возникновения сердечных и дыхательных тахиаритмий при интоксикации ФА отражают воспроизведение декасекундного ритма, характерного для незрелых или находящихся в паранормальном состоянии возбудимых структур, не свойственных деятельности нормально функционирующих структур. Ранее высказывалось предположение, что возникновение такого рода эндогенной ритмической активности при разнличных неблагоприятных воздействиях связано с уровнем активности пентозофосфатного цикла [Кузнецов, 1999, 2002]. В связи с этим возникает ряд вопросов: в каких клетках? только ли пентозофосфатного цикла? что является триггером, регулирующим активность ключевых ферментов тех или иных метаболических путей? наконец, какова судьба или роль генерируемых в пентозофосфатном или других путях пиридиновых нуклеотидов? В нейронах ПФП действительно играет важную роль в защите от окислительного и травматического стресса [Ben-Yoseph et al., 1994; García-Nogales et al., 2003; Bartnik et al., 2005]. Однако отметим, что хотя в норме активность NADPH-генерирующих ферментов ПФП астроцитов (Г6ФДГ и б-фосфоглкжонат-ДГ) в 2-3 раза превышает активность этих ферментов в мозге крыс, но при этом активность цИЦДГ, другого пути генерации NADPH в астроцитах, столь же высока [Rust et al., 1991]. Ранее указывалось на то, что исследования, сфокусированные на пентозном цикле как единственном источнике NADPH, нуждаются в переоценке с учетом метаболической активности и субстратной специфичности той или иной ткани [Winkler et al., 1986]. NADP-зависимая цИЦДГ, наряду с малик-ферментом и никотинамиднуклеотидтрансгидрогеназой участвуют в регенерации NADPH, необходимого для восстановления глутатион-дисульфида в митохондриях мозга [Vogel et al., 1999], но как было показано в экспериментах с нейронами сетчатки, цИЦДГ обеспечивает более чем семикратное производство NADPH по сравнению с малик-ферментом [Winkler et al., 1986]. Были получены прямые доказательства связи между активностью цИЦДГ и редокс-состоянием клеток, что также позволяет предполагать важную роль этого фермента в механизмах защиты [Lee et al., 2002c, 2004]. Нам интересен этот метаболический путь, прежде всего, потому, что при острой интоксикации ФА нарастает уровень цитрата, и очень важно относиться к этому факту как к составному элементу биохимической адаптации, не «ломать» складывающуюся метаболическую систему, например, путем химической нейтрализации или добавлением экзогенного кальция, но найти способ утилизации цитрата как метаболического субстрата, пытаться извлечь выгоду из сложившейся ситуации. Терапия осуществляется путем направления метаболизма клетки, а не нарушения его [Лабори, 1970]. Если это, конечно, терапия, а не профилактика или то, что называется «preconditioning».

Более 40 лет назад было показано, что ФЦ, образующийся в MX, не оказывет действия на ц-аконитазу, и накапливающийся цитрат может перемещаться из MX в цитозоль с последующей утилизацией посредством ц-аконитазы и иИЦДГ [Max, Purvis, 1965; Buffa et al., 1972]. В астроглии и микроглии активность ИЦДГ примерно поровну распределена между цитозолем и MX, тогда как в нейронах и олигодендроцитах около 75% активности ИЦДГ приходится на цитозольную фракцию [Minich et al., 2003]. В доступной литературе мы не обнаружили данных о соотношении митохондриальной и цитоплазматической аконитаз в клетках нервной системы. Однако в клетках печени имеет место близкое соотношение митохондриальной и цитоплазматической ИЦДГ [Рахманова, Попова, 2006], при этом активность ц-аконитазы печени составляет около 65% активности аконитаз печени [Konstantinova, Russanov, 1996]. В сердце крыс обнаружено аналогичное распределение м- и ц-аконитаз: 35% и 65%, соответственно [Medvedeva et al., 2002]. Существует мнение, что пространственное и функциональное разделение м- и ц-аконитаз позволяет не только регулировать содержание железа в клетке, но фактически контролировать баланс катаболических и анаболических процессов [Tong, Rouault, 2007]. Этот альтернативный — метаболический путь утилизации цитрата и синтеза NADPH в нейронах и других клетках в случае ингибирования м-аконитазы может выполнять адаптивные функции: образующийся NADPH не нуждается в окислении в дыхательной цепи, но может быть полезен для таких NADPH-зависимых процессов, как анаболические реакции и генерация тепла, восстановление глутатиона и синтез NO, модуляция тонуса сосудов посредством генерации АФК [Winkler et al., 1986; Bobyleva et al., 1993; Lee, Yu, 2002; Gupte, Wolin, 2006]. Но это уже другая проблема - пути использования генерируемого NADPH. Один из возможных и важнейших механизмов утилизации пиридиновых нуклеотидов — генерация тепла посредством дрожи и недрожательного термогенеза. Повышение активности NADPH-синтезирующих ферментов и путей (малик-фермент, ц-аконитаза + цИЦДГ), а также ферментов глицерофосфатного шунта (цГФДГ и мГФДГ) сопровождается повышенным термогенезом и снижением метаболической эффективности в результате перегидрирования цитозольного NADPH и митохондриального FADH2, что приводит к диссипации энергии в виде тепла [Bobyleva et al., 1993]. Была показана возможность использования NADPH вместе или даже вместо NADH в цГФДГ-реакции в качестве восстанавливающего кофактора [Bobyleva et al., 1993; Fahien et al., 1999]. При этом активность ПФП не имеет, по-видимому, принципиального значения для генерации NADPH; скорее, ПФП в большей степени необходим как альтернативный источник глицеральдегид-3-фосфата (а, значит, ДОАФ и глицерофосфата) в случае блокады гликолиза дистальнее гексокиназы или глюкозофосфатизомеразы. Особенно если учитывать, что скелетных мышцах активность Г6ФДГ крайне мала и составляет лишь 2% от уровня активности этого фермента в селезенке [Диксон, Уэбб, 1982]. В скелетных мышцах (и даже в мозге) глицерофосфатный шунт гораздо более важен, чем малат-аспартатный шунт, который играет ведущую роль по переносу восстановительных эквивалентов в MX сердца, печени и почек [Диксон, Уэбб, 1982; Ленинджер, 1985]. Однако если роль этого пути переброски восстановительных эквивалентов из цитоплазмы в митохондрии мышц вполне понятна, то в клетках мозга уровень активности и функциональное назначение глицерофосфатного челнока противоречивы и служат предметом дискуссий. Активность глицерофосфатного шунта в мозге объясняют не его ролью в термогенезе, но необходимостью глицерол-3-фосфата в качестве субстрата для синтеза фосфолипидов миелина в клетках олигодендроглии [Adler, Klucznik, 1982; Nguyen et al., 2003]. Имеются данные, согласно которым в нейронах и астроцитах активность ГФДГ намного ниже, чем в олигодендроцитах [Rust et al., 1991; Nguyen et al., 2003]. Однако есть и другие данные, согласно которым глицерофосфатный шунт имеет первостепенное значение в астроцитах, учитывая отсутствие малат-аспартатного челнока в этих клетках [Waagepetersen et al., 2001; McKenna et al., 2006], а также принимая во внимание повышенный уровень мРНК цГФДГ в астроцитах и нейронах после судорог, при воздействии морфина, индометацина и других препаратов [Link et al., 2000].

В нейронах малат-аспартатный шунт считается наиболее важным путем переноса восстановительных эквивалентов в митохондрии [Осадчая, 1999; McKenna et al. 2006]. Глутаматная нейротоксичность (наблюдаемая также при интоксикации ФА) снижает активность обоих митохондриальных шунтов, малат-аспартатного и глицерофосфатного, обусловливает выход цитохрома с и активизацию альтернативных механизмов окисления цитоплазматического NADH: через НАОН-Ь5-оксидоредуктазу внешней митохондриальной мембраны, NADH-оксидоредуктазу плазматической мембраны и ЛДГ (с повышением лактата). Однако эти механизмы не обеспечивают полного окисления NADH, уровень которого постепенно повышается, свидетельствуя о прогрессирущем повреждении клеток [Atlante et al., 1999]. Важно подчеркнуть возможность адаптационного переключения метаболических путей на альтернативные пути биологического окисления. Трансмембранный перенос электронов — не конечный или побочный результат патологического процесса в клетке, это попытка перейти на другой уровень редокс-состояния со своими регуляторными особенностями: этот процесс может привести к изменению цитоплазматического рН, стимуляции протеинкиназ и может иметь прямое отношение к стимуляции клеточного роста внешними, непроникающими в клетку окислителями или кислородом [Crane et al., 1991]. Стимуляция роста окислителями сопровождается такими связанными с клеточным ростом сигналами как защелачивание цитозоля и мобилизация внутриклеточного кальция. Оксидаза плазматической мембраны представляет собой новый тип регуляции передачи сигнала в клетки. Возможно, редокс-состояние хинона оксидазы регулирует активность тирозин-киназы посредством генерации перекиси водорода или редокс-индуцированными изменениями конформации [Crane et al., 1994]. Плазматическая мембрана содержит все компоненты для электронного транспорта: цитохромы Ь, флавин, железо, хиноны [Audi et al., 2000]. NADH-оксидоредуктазная активность плазматической мембраны ингибируется капсаицином и ингибиторами энергетического метаболизма; МАО(Р)Н-оксидазная активность стимулируется капсаицином и не реагирует на метаболические ингибиторы [Berridge, Tan, 2000; Tan, Berridge, 2004]. Изучение трансмембранного переноса электронов (а именно, NADH-оксидоредуктазной составляющей данного переноса) привело к открытию независимого от MX потребления кислорода с извлечением при этом энергии на пути гликолиза [Herst, Berridge, 2007].

Мы обозначили несколько основных направлений для биохимического воздействия при острой интоксикации ФА и предложили соответствующие препараты с целью разработки эффективной терапии: 1) конкурентное ингибирование взаимодействия ФА с коэнзимом А; 2) конкурентное ингибирование взаимодействия ФЦ с аконитазой; 3) восстановление работы ЦТК дистальнее м-аконитазы; 4) утилизация накапливающегося цитрата. «Метис» - кодированное название комбинаций нескольких веществ, среди которых: метиленовый синий (МС), глутамат, нитроэфир и этанол. Выбор веществ был обусловлен собственными экспериментальными данными наряду с глубоким анализом биохимической и токсикологической литературы. Учитывался плейотропный характер действия компонентов, который позволяет, помимо решения «магистральных» задач, параллельно решать другие задачи «вспомогательного» характера: этанол - источник ацетата и NADH, пенетрант, влияет на аффинность NMDA и ГАМК рецепторов в ЦНС [Lovinger et al., 1989; Santhakumar et al., 2007], способствует перераспределению метаболической нагрузки между мозгом, печенью и мышцами; глутамат - источник КГ, субстрат для глутаминсинтазы и N-ацетилглутаматсинтазы (наряду с фторацетатом?), индуцирует цикл мочевины в печени, способствуя тем самым утилизации аммиака аминокислот, в том числе самого глутамата; это естественный антиагрегант вследствие особого механизма воздействия на NMDA-рецепторы тромбоцитов, что приводит к повышению уровня сАМФ и снижению синтеза тромбоксана В2 [Jamieson et al., 1992; Franconi et al., 1996, 1998]; глутамат препятствует утилизации ГАМК в астроцитах благодаря отрицательной обратной связи в ГАМК-трансаминазной реакции, а, значит, способствует повышению концентрации ГАМК в соответствующих синаптических образованиях; нитроэфиры - источники N0, также способствуют окислению NADPH и смещению» равновесия в NADPH-генерирующих реакциях (цИЦДГ, малик-фермент); N0 обратимо ингибирует ЦХО и NOS, модулируя тканевое дыхание и потребление кислорода [Brown, Borutaite, 1999]; MC — искусственный акцептор электронов, смещает равновесие NAD(P)H-reHepHpyioi4HX реакций, модулирует действие NO, препятствует образованию супероксид-аниона и пероксинитрита, разобщитель дыхательной цепи MX. Одна из главных задач, стоявших перед нами при разработке комплексов серии «Метис» - усилить не только митохондриальное дыхание (при этом усиление разобщенного дыхания, возможно, более важно, чем сопряженного, поскольку оно является источником НДТ), но также усилить немитохондриальное дыхание. Изучение ацетилирования при интоксикации ФА подтвердило данные о том, что фторацетил-КоА взаимодействует не только с оксалоацетатом, но может участвовать и в других ферментативных процессах ацетилирования при детоксикации чужеродных соединений и при образовании естественных продуктов обмена [Marcus, Elliott, 1956; Powell, Beevers, 1968]. Использование двух разных субстратов, амидопирина и изониазида, позволяет нам предполагать взаимодействии MC с монооксигеназами и другими NADPH-зависимыми ферментами. Степень усиления и баланс различных путей биологического окисления требует отдельного изучения.

Вещества и условия их применения были протестированы на экспериментальных животных. Варианты комплекса Метис представляют собой различные комбинации указанных соединений с максимальным коэффициентом эффективности 4,3. Мы оценивали эффективность лечебных средств по ряду физиологических и биохимических показателей при интоксикации ФАА и ФАН. У животных при интоксикации с применением комплексов Метис отмечено отсутствие изменений со стороны температуры тела и потребления кислорода в течение всего периода наблюдения, вес тела не уменьшается. Наблюдается нормализация липидного и углеводного обменов. Лечебный эффект комплексов Метис проявляется в изменении динамики цитрата в мозге, почках и крови, коррекции параметров агрегации тромбоцитов, что свидетельствует о высокой значимости этих клеток, органов и тканей в реализации летального исхода при интоксикации ФАН. Терапевтический комплекс Метис-1 оказывает благоприятное воздействие на параметры сердечной деятельности крыс, но несколько усиливает расстройства системы дыхания крыс. Комплекс Метис-2 оказывает неоднозначное действие на параметры электрической активности сердца, но у отравленных животных купируется развитие синусовой аритмии и происходит стабилизация ритма дыхания. Оба лечебных комплекса вызывают у контрольных (без введения ФА) крыс фармакодинамические изменения, аналогичные тем, что мы наблюдали при лечении отравленных животных. Максимально выраженные отклонения от нормы происходят через 3 часа после введения препаратов. Степень уменьшения ЧДД хорошо коррелирует с терапевтической эффективностью препаратов. Отмечено влияние лечебных комплексов и их компонентов на кинетические параметры агрегации тромбоцитов.

Результаты сравнительного анализа содержания ФА в гомогенатах органов, плазме крови и моче крыс при интоксикации без применения и с применением терапии показали, что применение комплексов Метис-1 и Метис-2 обусловливает повышение ФА (в 1,5-2 раза) в плазме крови и снижение в 2 раза в мозге крыс в первые часы после отравления, что свидетельствует о замедлении утилизации ФА в организме и, прежде всего, в клетках мозга. Однако уровень ФА повышен в сердце, печени и почках крыс в случае применения Метис-2 через 1 и 3 часа после отравления. Эти данные, а также измерение ФА в моче крыс позволило сделать следующие заключения о специфике действия терапевтических комплексов на токсикокинетику ФА: Метис-1 снижает утилизацию ФА тканями и органами крыс и одновременно усиливает выведение ФА с мочой; эффект комплекса Мстис-2 связан, главным образом, с перераспределением его метаболизма: происходит замедление метаболизма ФА в клетках мозга, определяющих токсикодинамику, и усиление утилизации и (или) детоксикации ФА и продуктов его «активности» в других органах и тканях крыс.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Гончаров, Николай Васильевич, Санкт-Петербург

1. Русскоязычная литература

2. Авдонин П.В., Алтухова И.П. Блокирование активатором протеинкиназы С форболовым эфиром рецепторзависимых кальциевых каналов тромбоцитов // Биохимия. 1985. - Т.50. -С.1235-1240.

3. Авдонин П.В., Ткачук В.А. Рецепторы и внутриклеточный кальций. // М.: Наука, 1994. — 288с.

4. Аничков C.B. Нейрофармакология. // Л.: Медицина. 1982. — 384 с.

5. Бабко А.К., Пилипенко А.Т. Фотометрический анализ. Методы определения неметаллов // М., «Химия». 1974.- 360 с.

6. Баевский P.M., Кириллов О.И., Клецкин С.З. Математический анализ сердечного ритма при стрессе // М., Наука. 1984. - 222 с.

7. Беленький M.JI. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. // Рига, 1959. 114 с.

8. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. // М.: Высшая школа, 1991. 399 с.

9. Гаврилов O.K., Козинец Г.Н., Черняк Н.Б. Клетки костного мозга и периферической крови. // М.: Медицина, 1985.-288 с.

10. Гамалей И.А., Каулин А.Б., Кирпичникова K.M. Применение диацетата флуоресцеина для исследования активации макрофагов // Цитология. 1988. - Т.30. - №12. - С.1426-1431.

11. Гамалей И.А., Березкина Е.В., Ковалева З.В., Игнатова Т.Н. Кинетика выхода родамина 123 из клеток с множественной лекарственной устойчивостью при действиии ингибиторов энергетического метаболизма// Цитология. 1995. - Т.37. - №1-2. - С.118-125.

12. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции. // М.: Мир, 1997. — 624 с.

13. Гончаров Н.В., Алдашев A.A. Условия выделения и выращивания эндотелиальных клеток легочной артерии человека in vitro // В сб. «Вопросы профилактики и лечения основных сердечно-сосудистых заболеваний в условиях Киргизии». — Фрунзе — 1986. с.49-51.

14. Деркачев Э.Ф., Миндукшев И.В., Кривченко А.И., Крашенинников A.A. Способ исследования активации и агрегации тромбоцитов // Патент RU 2108579 С1 6 G01 N33/49. ----- 1998. Б.И. № 10(11). - С.298.

15. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. // 1982,- М., «Мир». 1118 с.

16. Дощицин B.JL Клинический анализ электрокардиограммы. // М.: Медицина. 1982. - 203 с.

17. Ещенко Н.Д. Энергетический обмен в головном мозге. // В кн. «Биохимия мозга». Ред.Ашмарин ИП. и др. Изд. СпбГУ. - 1999. - С.124-168.

18. Зерниченко А.Н., Гончаров Н.В. Мотивационный процесс, структура личности и трансформация энергии потребностей. // Вопросы психологии. — 1989. №2. - с.73-81.

19. Зиновьев Ю.В., Козлов С.А., Киселев E.H. Стимуляция скорости потребления лактата в печени при длительном полном алиментарном голодании как фактор увеличения резистентности к гипоксической гипоксии // Пат. физиол. экспер. тер. 1986 - Т.З — С.54-56.

20. Караджов Ю.С., Кудзина Л.Ю., Зинченко В.П. Влияние ионов Са2+ на трансмембранный электрический потенциал, синтез и гидролиз АТР в митохондриях мозга // Биофизика 1988. - Т.ЗЗ. - №1. — С.77-82.

21. Касымов В.А., Зинченко В.П. Регуляция образования активных форм кислорода ионами Са2+ в митохондриях мозга крысы. // В сб. Материалы конференции «Рецепция и внутриклеточная сигнализация». Пущино (16-18 июня 2003). - Изд. ОНТИ ПНЦ РАН. -С.242-244.

22. Кольман Я., Рем К.Г. Наглядная биохимия. (Пер. с нем.) // М.: Мир 2000. — 469 с.

23. Кузнецов C.B. Причины гибели животных при отравлении перекисью водорода // Бюл. экспер. биол. и мед. 1993. - Т. 116. - №6. - С.596-598.

24. Кузнецов С.В Н-холинергическая активация периодической деятельности возбудимых структур в раннем постнатальном онтогенезе // Журн.эвол.биохим. и физиол. 1995. - Т.31. -№2. -С. 190-199.

25. Кузнецов C.B. К вопросу о природе и источниках древних ритмов возбуждения // Журн. эвол. биохим. и физиол. 1999. - Т.35. - №5. - С.349-357.

26. Кузнецов C.B. Парадоксальный сердечный ритм у крысят как возможный аналог синдрома •слабости синусового узла// Журн. эвол. биохим. и физиол. 2002. - Т.38. - №4. - С.354-364.

27. Куценко С.А. Основы токсикологии // СПб. Фолиант. - 2004. - 715 с.

28. Лабори A. (Laborit H.). Регуляция обменных процессов // М.: Медицина. 1970. - 249 с.

29. Лавут Л.М. Как достичь идеального веса и сохранить его. // М.: ЭКСМО 2004. - 160 с.

30. Ленинджер А. Биохимия. // М.: "Мир".- 1976.- 960 с.

31. Ленинджер А. Основы биохимии // М.: Мир. 1985. - 1056 с. (В 3-х томах).

32. Лудович Р., Лос К. Острые отравления. М.: Медицина, 1983. - 559 с.

33. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. — М.: Медицина, 1982. —367 с.

34. Маянский А.Н., Маянский H.A., Заславская М.И. и др. Апоптоз нейтрофилов // Иммунология. 1999. - Т.6. - С. 11-20.

35. Мак-Мюррей У. Обмен веществ у человека. — М.: Мир, 1980 368 с.

36. Мамучишвили И. Взаимосвязь стресс-индуцируемых нарушений в нейрогуморальнойсистеме и системе энергообеспечения у подростков // Дис.докт. мед. наук. — Тбилиси:1. ТГМУ.-2006.-197 с.

37. Машковский М.Д. Лекарственные средства. // М., «Медицина».- 1986.- Т.2.- 576 с. Мецлер Д. Биохимия. // М., "Мир".- 1980.- Т.2.- 606 с.

38. Миндукшев И.В. Исследование кинетики активации и агрегации тромбоцитов методом малоуглового светорассеяния. //Дис. канд. биол. наук. СПб.: СпбГУ, 1996. — 103 с.

39. Миронов A.A., Я.Ю. Комиссарчик, В.А. Миронов. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. // Санкт-Петербург. Наука. - 1994. -400 с.

40. Музыкантов В.Р., Сахаров Д.В., Домогатский С.П., Гончаров Н.В., Данилов С.М., Смирнов В.Н. Защита эндотелиальных клеток от цитотоксического действия перекиси водорода посредством иммуноэритроцитов // Доклады АН СССР. 1986. - Т.288. - №3.- с.748-750

41. Мусил Я., Новакова О., Кунц К. Современная биохимия в схемах. // М.: Мир. — 1984. — 216с.

42. Новиков Ю.В., Ласточкина К.О., Болдина З.Н. Методы исследования качества воды водоемов. М., «Медицина» 1990.- 400 с.

43. Новожилова А.П., Плужников H.H., Новиков B.C. и др. Программированная клеточная гибель. // СПб: "Наука" 1996. - 276 с.

44. Осадчая Л.М. Свободные аминокислоты нервной системы. // В кн. «Биохимия мозга». (Ред. Ашмарин И.П. и др.) Изд. СпбГУ. - 1999. - С.29-56.

45. Парк Д.В. Биохимия чужеродных соединений // М.: Медицина. 1973. - 288 с.

46. Подлесов A.M., Фролов A.A. Дифференциальная диагностика синкопальных состояний // http://www.cardiosite.ru/clinical-lectures/article.asp?id=852 2007.

47. Попов Т.А., Леоненко О.Б. Метод оценки активности оксидаз печени // Гигиена и санитария.1977. — №9. — С.23-26.

48. Пригожин И., Стенгерс И. Порядок из хаоса. // М., Прогресс. 1986. - 432 с.

49. Прохорова М.И. (ред.). Методы биохимических исследований // Учебное пособие. Л. Изд. Ленинградского ун-та. 1982. - 272 с.

50. Рахманова Т.И., Попова Т.Н. Регуляция метаболизма 2-оксоглутарата под действием NADP-изоцитратдегидрогеназы и аспартатаминотрансферазы в печени крысы. // Биохимия. 2006.- Т.71. №2. - С.266-274.

51. Саакян И.Р. Переаминирование контролирует процесс сукцинатзависимого поглощения Са2+ в митохондриях и гомогенатах сердца и печени экспериментальных животных // В сб.: Рецепция и внутриклеточная сигнализация. Пущино. - 2003. - С. 270 -272.

52. Сакаев М.Р. Изучение влияния некоторых синаптотропных веществ на тромбоцитаррную активность // Дис. канд. биол. наук. СПб.: СПбХФА, 2000. - 114 с.

53. Скулачев В.П. Энергетические механизмы внутриклеточного дыхания. // М.: Наука. 1971.— 23 с.

54. Стерки П. (ред.) Основы физиологии (пер. с англ.) // М.: Мир. 1984. — 556 с.

55. Сытинский И.А., Копелевич В.М., Никитина З.С., Полевой Л.Г. Алкогольная интоксикация и система гамма-аминомасляной кислоты головного мозга при действии пантогама и фенибута // Фарм. токсикол. 1986 - №2 - с.79-82.

56. Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы. Вводный курс: Пер. с англ. М.: Мир. - 1989. - 656 с.

57. Тимофеев H.H. Гипобиоз и криобиоз. Настоящее, прошлое и будущее. // М.:"Информ-Знание".-2005. -256 с.

58. Ткачук В.А. Мембранные рецепторы и внутриклеточный кальций // Биол. мембраны. 1999. -Т. 16. - №2. -С.212-229.

59. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. Основы биохимии: В 3-х томах. // Т.1. Пер. с англ. — М.: Мир. 1981. — 534 с.

60. Угрюмов В.М. (ред.). Тяжелая закрытая травма черепа и головного мозга // Л., Медицина -1974.

61. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих // М.: Мир. 1975. - 324 с.

62. Франк Г.М., Кондрашова М.Н., Мохова E.H., Ротенберг Ю.С. (ред.). Руководство по изучению биологического окисления полярографическим методом. // М.: Наука. 1973. — 221с.

63. Франке 3. Химия отравляющих веществ. // М.: Химия. 1973. - 387 с.

64. Хашен Р., Шейх Д. Очерки по патологической биохимии. // М.: Медицина. 1981. - 253 с.

65. Чазов Е.И. (ред.). Руководство по кардиологии (в 4 т.). Т.2. Методы исследования сердечнососудистой системы. // М.: Медицина. 1982. - 624 с.

66. Шарова И.В., Векшин Н.Л. О природе ротенон-нечувствительного окисления NADH в суспензии митохондрий. // В сб. «Митохондрии, клетки и активные формы кислорода». Материалы междунар. конфер. Пущино, 2000.- С. 163-166.

67. Ярилин A.A. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. — 1996. — Т.6. — С.10-23.1. Англоязычная литература

68. Abcouwer S.F., Lukascewicz G.C., Ryan U.S., Souba W.W. Molecular regulation of lung endothelial glutamine synthetase expression. // Surgery. 1995b. - V.118. - #2. - P.325-34.

69. Abcouwer SF, Lukaszewicz GC, Souba WW. Glucocorticoids regulate glutamine synthetase expression in lung epithelial cells. // Am J Physiol.- 1996.- V.270.- No.l.- Pt 1,- P.L141-151.

70. Adler A.J., Klucznik K.M. Glycerol phosphate dehydrogenase in developing chick retina and brain. //J. Neurochem. 1982. - V.38. - #4. -P.909-15.

71. Aeschlimann С., Cerny Т., Kupfer A. Inhibition of (mono)amine oxidase activity and prevention of ifosfamide encephalopathy by methylene blue. // Drug Metab. Dispos. 1996. — V.24. - #12. -P.1336-1339.

72. Afanasyev V.N., Korol B.A., Matylevich N.P., Pechatnikov V.A., Umansky S.R. The use of flow cytometry for the investigation of cell death // Cytometry. 1993. - V.14. - P.603-609.

73. Akselrod S., Gordon D., Ubel F.A. Power spectrum analysis of heart rate fluctuation: a quantative probe of beat-to-beat cardiovascular control // Science. 1981. - V.213.- №10. - P.220-222.

74. A Hero ft R., Jones J.S.L. Fluoroacetamide poisoning. Part I. Toxicity in dairy cattle: clinical history and preliminary investigations // Vet. Record. - 1969 - V.84 - #16 - P.399-402.

75. Allcroft R., Salt T.J., Peters R.A., Shorthouse M. Fluoroacetamide poisoning. Part II. Toxicity in dairy cattle: confirmation of diagnosis. // Vet. Rec. - 1969 - V.84 - P.403-409.

76. Al-Mehdi A.B., Zhao G., Dodia C., Tozawa K., Costa K„ Muzykantov V., Ross C., Blecha F., Dinauer M., Fisher A.B. Endothelial NADPH oxidase as the source of oxidants in lungs exposed to ischemia or high K+. // Circ. Res. 1998. - V.83. - #7. - P.730-737.

77. Amato A., Barbour В., Szatkowski M., Attwell D. Counter-transport of potassium by the glutamate uptake earner in glial cells isolated from the tiger salamander retina. // J. Physiol. 1994. - V.479. -Pt.3.-371-380.

78. Andersen O.S., Engel K., Jorgensen K., Astrup P. A micro method for determination of pH, carbon dioxide tension, base excess and standard bicarbonate in capillary blood // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1960. - V.12. - P.172-176.

79. Angus J.A., Broughton A., Mulvany M.J. Role of alpha-adrenoceptors in constrictor responses of rat, guinea-pig and rabbit small arteries to neural activation // J. Physiol. (Lond.). 1988. - V.403. -P.495-510.

80. Annison E.F., Hill K.J., Lindsay D.B., Peters R.A. Fluoroacetate poisoning in sheep. // J. Comp. Pathol. -1960 V.70 - P.145-155.

81. Aplin T.E.H. Poison plants of Western Australila: The toxic species of Gastrolobiiim and Oxylobium. II West. Aust. Dept. Agric. Bull. 1971. -No.3772. - P.l-66.

82. Arellano M., Malet-Martino M., Martino R. and Gires P. The anti-cancer drug 5-fluorouracil is metabolized by the isolated perfused rat liver and in rats into highly toxic fluoroacetate. // Br. J. Cancer. 1998 - V.77 - No.l - P.79-86.

83. Arena I.M. Poisoning. Toxicology symptoms - treatments. // Illinois: Publisher Springfield, 1970. -714 pp.

84. Arrigoni O., Singer T.P. Limitations of the phenazine methosulphate assay for succinic and related dehydrogenases II Nature. 1962.- V.193.- P. 1256-1258.

85. Arriza J.L., Fairman W.A., Wadiche J.I., Murdoch G.H., Kavanaugh M.P., Amara S.G. Functional comparisons of three glutamate transporter subtypes cloned from human motor cortex. // J. Neurosci. 1994. - V. 14. - #9. -P.5559-5569.

86. Arroyo A., Navarro F., Gomez-Diaz C., Crane F.L., Alcain F.J., Navas P., Villalba J.M. Interactions between ascorbyl free radical and coenzyme Q at the plasma membrane. // J. Bioenerg. Biomembr.- 2000 V.32. - #2.-P.199-210.

87. Arruda M.A., Rossi A.G., de Freitas M.S., Barja-Fidalgo C., Grafa-Souza A.V. Heme inhibits human neutrophil apoptosis: involvement of phosphoinositide 3-kinase, MAPK, and NF-kappaB. // J. Immunol. -2004. V. 173. - #3.-P.2023-30.

88. Arslan P., Divirgilio F., Betzame M., Tsien R., Pozzan T. Cytosolic Ca2+ homeostasis in Ehrlich and Yoshida carcinomas // J. Biol. Chem. 1985. - V.260. - P.2719-2727.

89. Attwell D., Barbour B., Szatkowski M. Nonvesicular release of neurotransmitter. // Neuron 1993.- V.ll. #3. -P.401-407.

90. Audi S.H., Olson L.E., Bongard R.D., Roerig D.L., Schulte M.L., Dawson C.A. Toluidine blue O and methylene blue as endothelial redox probes in the intact lung. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2000 - V.278. - #1. - P.H137-H150.

91. Aulerich R.J., Ringer R.R., Safronoff J. Primary and secondary toxicity of warfarin, sodium monofluoroacetate, methyl parathion in mink // Arch. Environ. Contam. Toxicol.- 1987,- V.16.-No.3.- P.357-366.

92. Aumeerally N, Allen G, Sawynok J. Glutamate-evoked release of adenosine and regulation of peripheral nociception. //Neuroscience. 2004. - V.127. - #1. - P.1-11.

93. Babij P., Hundal H.S., Rennie M.J., and Watt P.W. Effects of corticosteroids on glutamine transport in rat skeletal muscle (Abstract). // J. Physiol. Lond.- 1986.- V.347.- P.35P.

94. Bak L.K., Schousboe A., Waagepetersen H.S. The glutamate/GABA-glutamine cycle: aspects of transport, neurotransmitter homeostasis and ammonia transfer // J. Neurochem. — 2006 — V.98. #3. - P.641-653.

95. Bak L.K., Sickmann H.M., Schousboe A., Waagepetersen H.S. Activity of the lactate-alanine shuttle is independent of glutamate-glutamine cycle activity in cerebellar neuronal-astrocytic cultures // J. Neurosci. Res. 2005. - V.79. - #1-2. - P.88-96.

96. Ball P., Mandell L., Niki Y., Tillotson G. Comparative tolerability of the newer fluoroquinolone antibacterials. // Drug Saf. 1999. - V.21. - #5. - P.407-421.

97. Baranano D.E., Snyder S.H. Neural roles for heme oxygenase: contrasts to nitric oxide synthase. // Proc. Natl. Acad. Sci. US A.-2001.-V.98. -#20.-P. 10996-11002.

98. Barbe C., De Crescenzo V., Diemont F., Bonnet P. Possible role of nitric oxide and arachidonic acid pathways in hypoxia-induced contraction of rabbit coronary artery rings. // Arch. Physiol. Biochem. 2001. - V. 109. - # 1. - P.24-31.

99. Barnes J.E. Georgina poisoning of cattle in the Northern Territory // Aust. Vet. J. 1958 - V.34 -P.281-290.

100. Bartnik B.L., Sutton R.L., Fukushima M., Harris N.G., Hovda D.A., Lee S.M. Upregulation of pentose phosphate pathway and preservation of tricarboxylic acid cycle flux after experimental brain injury. // J. Neurotrauma. 2005. - V.22. - #10. - P.1052-65.

101. Baunister D.W., O'Neil T.E. Control of gluconeogenesis in chick (Galium domesticus) isolated hepatocytes // Int. J. Biochem. 1981 - V.13 -P.437-444.

102. Baverel G., Martin G. and Michoudet C. Glutamine synthesis from aspartate in guinea-pig renal cortex. // Biochem. J. 1990.- V.268.- No.2.- P.437-442.

103. Beaulnes A.J.C., Panisset J., Brodeur E., et al. Arrhythmias in isolated atria and ventricles and in the intact animal antiarrhythmic effects of some biological polypeptides. // Circul. Res., Suppl. -1964-V.15 -P.210-214.

104. Beghetti M., Sparling C., Cox P.N., Stephens D., Adatia I. Inhaled NO inhibits platelet aggregation and elevates plasma but not intraplatelet cGMP in healthy human volunteers. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2003. - V.285. - #2. - P.H637-H642.

105. Bellamy D., Leonard R.A. The effect of Cortisol on the activity of glutamate-pyruvate transaminase and the formation of glycogen and urea in starved rats. // Biochem. J. 1964.- V.93.- #2.- P.331-336.

106. Benjamin A.M., Verjee Z.H. Control of aerobic glycolysis in the brain in vitro. // Neurochem. Res. 1980 - V.5 - No.9 - P.921-934.

107. Ben-Yoseph O., Boxer P.A., Ross B.D. Oxidative stress in the central nervous system: monitoring the metabolic response using the pentose phosphate pathway. // Dev. Neurosci. — 1994. — V.16. -#5-6. -P.328-36.

108. Bergmeyer H.U., Schelbe P., Wahiefeld A.W. Optimization of Methods for Aspartate Aminotransferase and Alanine Aminotransferase // Clin. Chem. 1978.- V.24.- #1.- P.58-73.

109. Berk M., Plein H., Csizmadia T. Supersensitive platelet glutamate receptors as a possible peripheral marker in schizophrenia. // Int. Clin. Psychopharmacol. 1999. - V.14. - #2. - P. 119-22.

110. Berk M., Plein H., Ferreira D. Platelet glutamate receptor supersensitivity in major depressive disorder. // Clin. Neuropharmacol. 2001. - V.24. - #3. - P. 129-32.

111. Berne R.M., Blackmon J.R., Gardner T.H. Hypoxemia and coronary blood flow. // J. Clin. Invest. -1957.- V.36.- P.l 101-1106.

112. Benit E., and Bergmeyer H.U. L-Glutamate-Detennination with Glutamic Dehydrogenase. // In: Methods of Enzymatic Analysis (H.U.Bergmeyer, ed.) 1963. - New York: Academic Press -P.384-388.

113. Berridge M.V., Tan A.S. Cell-surface NAD(P)H-oxidase: relationship to trans-plasma membrane NADH-oxidoreductase and a potential source of circulating NADH-oxidase. // Antioxid. Redox Signal. 2000 - V.2. - #2. - P.277-288.

114. Beyhl F.E. Interaction of organic dyes with hepatic microsomal drug-metabolizing monooxygenases in vitro. // Experientia. — 1981. V.37. - #9. - P.943-945.

115. Bgin E., Egyed M., Shlosberg A. Biological-biochemical method for the diagnosis of fluoroacetamide poisoning. II. Certain enzymes and electrolytes. // Fluoride — 1972 V.5 - P. 136144.

116. Bhattacharya S.B. and Datta A.G. Is brain a gluconeogenic organ? // Molecular and Cellular Biochemistry. 1993. - V.125. - #1. - P.51-57.

117. Bian K. and Murad F. Nitric Oxide (NO) Biogeneration, Regulation, and Relevance to Human Diseases // Frontiers in Bioscience. - 2003. - V.8. - P.264-278.

118. Billups B, Attwell D. Modulation of non-vesicular glutamate release by pH. // Nature 1996. -V.379. - #6561. — P.171-174

119. Blei A.T., Olafsson S., Therrien G., Butterworth R.F. Ammonia-induced brain edema and intracranial hypertension in rats after portacaval anastomosis // Hepatology 1994. — V.19. - #6. — P. 1437- 1444.

120. Bobyleva V., Kneer N., Bellei M., Battelli D., Lardy H.A. Concerning the mechanism of increased thermogenesis in rats treated with dehydroepiandrosterone // J. Bioenerg. Biomembr. 1993.- V.25. -#3.-P.313-321.

121. Bobyleva-Guarriero V., Dina R., Lauriola P., Masini A. Effect of fluoroacetate on glucose synthesis in rat liver // Fluoride 1983 - V. 16 - P. 117-129.

122. Bobyleva-Guarriero V., Hughes P.E., Lardy H.A. Effect of fluoroacetate on hepatic gluconeogenesis // Fluoride 1984 - V.l 7 - #2 - P.94-104.

123. Bode JG, Peters-Regehr T, Kubitz R, Haussinger D. Expression of glutamine synthetase in macrophages. // J Histochem Cytochem.- 2000.- V.48.- No.3.- P.415-422.

124. Boden G., Chen X., Ruiz J., White J.V., Rossetti L. Mechanisms of fatty acid-induced inhibition of glucose uptake // J. Clin. Invest. 1994. - V.93. - #6. - P.2438-2446.

125. Bongard R.D., Merker M.P., Shundo R., Okamoto Y., Roerig D.L., Linehan J.H., Dawson C.A. Reduction of thiazine dyes by bovine pulmonary arterial endothelial cells in culture. // Am. J. Physiol. 1995. - V.269. - #1. - Pt 1. -P.L78-L84.

126. Boquist L., Boquist S. and Ericsson I. Structural beta-cell changes and transient hyperglycemia in mice treated with compounds inducing inhibited citric acid cycle enzyme activity. // Diabetes. -1988. V.37. - No.l. - P.89-98.

127. Bosakowski T. and Levin A.A. Serum citrate as a peripheral indicator of fluoroacetate and fluorocitrate toxicity in rats and dogs. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1986.- V.85.- No.3.- P.428-436.

128. Bouvier M., Szatkowski M., Amato A., Attwell D. The glial cell glutamate uptake carrier countertransports pH-changing anions. // Nature. 1992. - V.360. - #6403. - P.471-4.

129. Bowman R.H. Inhibition of citrate metabolism by sodium fluoroacetate in the perfused rat heart and the effect on phosphofructokinase activity and glucose utilisation // Biochem. J. — 1964 V.93 -No.2 - P.13c-15c.

130. Bradford M. A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding // Anal. Biochem. 1976. - V.72. - P.248-254.

131. Brand M.D., Evans S.M., Mendes-Morao J. and Chappell J.B. Fluorocitrate inhibition of of aconitate hydratase and the tricarboxylate carrier of rat liver mitochondria. // Biochem. J. — 1973 -V.l34-No.l -P.217-224.

132. Braverman Y. Experiments on direct and secondary poisoning by fluoroacetamide (1081) in wildlife and domestic carnivores. // J. Wildl. Dis. 1979.- V.15.-No.2.- P.319-325.

133. Brockmann J.L., McDowell A.V., Leeds W.G. Fatal poisoning with sodium monofluoroacetate. Report of case. // J. Amer. Med. Assoc. 1955 - V.l 59 - #15 - P. 1529-1532.

134. Brooks K.J., Hargreaves I.P., Bates T.E. Nitric-oxide-induced inhibition of mitochondrial complexes following aglycaemic hypoxia in neonatal cortical rat brain slices. // Dev Neurosci.2000 V.22 - No.5-6 - P.359-365.

135. Brosnan J.T., Vinay P., Gougoux A., Halperin M.L. Renal ammonia production and its implications for acid-base balance. // Häussinger D. eds. pH Homeostasis-Mechanism and Control.-Academic Press New York, NY.- 1988.- P.281-304 .

136. Brosnan J.T., Brosnan M.E. Hepatic glutaminase a special role in urea synthesis? // Nutrition -2002. - V.18. - No.6.- P.455-457.

137. Brown G.C., Borutaite V. Nitric oxide, cytochrome c and mitochondria. // Biochem. Soc. Symp. -1999. V.66. - P.17-25.

138. Brüning J.C., Gautam D., Burks DJ., Gillette J., M. Schubert, Orban P.C., Klein R., Krone W., Müller-Wieland D., Kahn C.R. Role of Brain Insulin Receptor in Control of Body Weight and Reproduction // Science 2000. - V.289. - #5487. - P.2122-2125.

139. Bryla J. Inhibitors of mitochondrial anion transport. // Pharmacol. Ther. 1980 - V. 10 - #2 - P.351 -397.

140. Buch W.B., Osweiler G.D., Wan Geldes G.A. Fluoroacetate and fluoroacetamide. // In: Clinical and diagnostical veterinary toxicology. Iowa: Kendall/Hunt, 1976. — 144 p.

141. Bucher T., R. Czok, W. Lamprecht, and E. Latzko. Pyruvate. // In: Methods of Enzymatic Analysis. (H.U. Bergmeyer, ed.) 1965. - Academic Press Inc., New York. — P.253-259.

142. Buffa P., Peters R.A. The in vivo formation of citrate induced by fluoroacetate poisoning and its significance // J.Physiol. 1950 - V.l 10 - P.488-500.

143. Buffa P., Muscatello U., Godina G., Barasa A. Mitochondrial modifications associated with the biochemical lesion caused by fluoroacetate // In: Third Eur. Regional Conference on Electron Microscopy. Prague, 1964-vol.B-P.125-126.

144. Buffa P., Guarriero-Bobyleva V. and Pasquali-Ronchetti J. Biochemical effects of fluoroacetate poisoning in rat liver // In: Carbone-Fluorine Compounds.- Amsterdam: Associated Scientific Compounds, 1972 -P.303-330.

145. Buffa P., Guarriero-Bobyleva V. and Costa-Tiozzo R. Metabolic effects of fluoroacetate poisoning in animals. // Fluoride 1973 - V.6 - No.4 - P.224-247.

146. Burande M.D., Goyal R.K., Verma S.C. Studies on the mechanism of cardiotonic effects of sodium fluoroacetate and dobulamine. // Ind. J. Exp. Biol. 1983 - V.21 - #3 -P.150-152.

147. Burch H.B., Narins R.G., Chu C., Fagioli S., Choi S., McCarthy W., Lowry O.H. Distribution along the rat nephron of three enzymes of gluconeogenesis in acidosis and starvation. // Am. J. Physiol. — 1978. V.235. - #3. - P.F246-53.

148. Burgess G.M., Godfrey P.P., McKinney J.S., Berridge M.J., Irvine R.F., Putney J.W. The second messenger linking receptor activation to internal Ca release in liver. // Nature. 1984 - V.309. -#5963. - P.63-66.

149. Burrows G.E. Methylene blue: effects and disposition in sheep. // J. Vet. Pharmacol. Ther. 1984. - V.7. - #3. -P.225-231.

150. Bush W.B., Osweiler G.D., and Van Gelder G.A. Fluoroacetate and fluoroacetamide. // In: "Clin, and Diagnostic Veterinary Toxicology." Ed. Vonn Gelder G.A., Iowa: 1976. - P.233-237.

151. Caldovic L., Tuchman M. N-Acetylglutamate and its changing role through evolution // Biochem. J. 2003. - V.372. - P.279—290

152. Cao D.H., Strolin B.M, Dostert P. Age-related changes in glutamine synthetase activity of rat brain, liver and heart. // Gerontology.- 1985.- V.31.- No.2.- P.95-100.

153. Carrell H.L., Glusker J.P., Villafranca J.J., Mildvan A.S., Dummel R.J. and Kun E. Fluorocitrate inhibition of aconitase: relative configuration of inhibitory isomer by x-ray crystallography. // Science.- 1970.- V.170.- No.965.- P.1412-1414.

154. Carter P, and Welbourne T.C. Glutamate transport asymmetry in renal glutamine metabolism. // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 1998.- V.274.- P.E877-E884.

155. Carvalho F.A., Gra9a L.M., Martins-Silva J., Saldanha C. Biochemical characterization of human umbilical vein endothelial cell membrane bound acetylcholinesterase. // FEBS J. 2005. - V.272. -#21. -P.5584-94.

156. Castro L.A., Robalinho R.L., Cayota A., Meneghini R., Radi R. Nitric oxide and peroxynitrite-dependent aconitase inactivation and iron-regulatory protein-1 activation in mammalian fibroblasts. // Arch. Biochem. Biophys. 1998. - V.359. - P.215-224.

157. Cauwels A., Brouckaert P. Critical role for small and large conductance calcium-dependent potassium channels in endotoximia and TNF toxicity // Shock. — 2007. Epub ahead of print.

158. Cerutti C., Gustin M.P., Paultre C.Z. et al. Autonomic nervous system and cardiovascular variability in rats: a spectral analysis approach // Am. J. Physiol. 1991. - V.261. - №4(2). -P.H867-H875.

159. Chandler J.E., Harrison C.M., Canal A.M. Spermatozoal methylene blue reduction: an indicator of mitochondrial function and its correlation with motility. // Theriogenology. 2000. - V.54. - #2. -P.261-271.

160. Chang T.W., Goldberg A.L. The origin of alanine produced in skeletal muscle // J. Biol. Chem. — 1978a. V.253. - P.3677-3684.

161. Chang T.W., Goldberg A.L. The metabolic fates of amino acids and the formation of glutamine in skeletal muscle. // J. Biol. Chem. 1978b. - V.253. - P.3685-3695.

162. Chenoweth M.B., Gilman A. Studies on the pharmacology of fluoroacetate. 1. Species response to fluoroacetate. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1946 - V.87 - No.l - P.90-103.

163. Chenoweth M.B. Monofluoroacetic acid arid related compounds // J. Pharmacol. Exp. Ther. — 1949 V.97 - #4 - P.383-424.

164. Cheung PY, Danial H, Jong J, Schulz R. Thiols protect the inhibition of myocardial aconitase by peroxynitrite. // Arch Biochem Biophys. 1998 V.350.- #1.- P. 104-8.

165. Chi C.H., Chen K.W., Chan S.H., Wu M.H. and Huang J.J. Clinical presentation and prognostic factors in sodium monofluoroacetate intoxication. // J. Toxicol. Clin. Toxicol. 1996.- V.34.-No.6.- P.707-712.

166. Chi C.H., Lin T.K. and Chen K.W. Hemodynamic abnormalities in sodium monofluoroacetate intoxication. // Hum. Exp. Toxicol. 1999.- V.18.- No.6.- P.351-353.

167. Choi YB, Lipton SA. Redox modulation of the NMDA receptor. // Cell. Mol. Life Sci. 2000 -V.57. - #11. —P.1535-1541.

168. Chung H.M. Acute renal failure caused by acute monofluoroacetate poisoning. // Vet. Hum. Toxicol. 1984 V.26 - Suppl. 2 - P.29-32.

169. Cifarelli A., Pepe G., Paradisi F. and Piccolo D. The influence of some metabolic inhibitors on phagocytic activity of mouse macrophages in vitro. // Res. Exp. Med. (Berl).- 1979.- V.174.- No.2.-P. 197-204.

170. Clark R.S.B., Kochanek P.M., Obrist W.D., Wong H.R., Billiar T.R., Wisniewski S.R., Marion D.W. Cerebrospinal fluid and plasma nitrite and nitrate concentrations after head injury in humans // Critical Care Medicine. 1996. - V.24. - #7. - P.1243-1251.

171. Clarke D.D. Fluoroacetate and fluorocitrate: mechanism of action. // Neurochem. Res. — 1991.-V.16.- No.9.- 1055-1058.

172. Clarke D.D., Nicklas W.J., Berl S. Tricarboxylic acid cycle metabolism in brain. // Biochem. J.-1970.- V.120.- No.2.- P.345-351.

173. Clowes G.H.A., Jr., Randall H.T., and Cha A.C.J. Amino acid and energy metabolism in septic and traumatized patients. // J. Parenter. Enteral Nutr.- 1980.- V.4.- P. 195-205.

174. Coates E.L., Li A., Nattie E.E. Widespread sites of brain stem ventilatory chemorcceptors. // J. Appl. Physiol. 1993 - V.75.- P.5-14.

175. Cole B.T., Engel F.L., Fredericks J. Sodium fluoroacetate diabetes: correlations between glicemia, ketonemia and tissue citrate levels // Endocrinology 1955 - V.56 - No.6 - P.675-683.

176. Collard CD, Park KA, Montalto MC, Alapati S, Buras JA, Stahl GL, Colgan SP. Neutrophil-derived glutamate regulates vascular endothelial barrier function. // J. Biol. Chem. — 2002. V.277. - #17. -P.14801-14811.

177. Connelly C.A., Ellenberger H.H., and Feldman J.L. Respiratory activity in the retrotrapezoid nucleus in the cat. // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 1990,- V.258.- P.L33-L44.

178. Connors B.W., Long M.A. Electrical synapses in the mammalian brain. // Annu. Rev. Neurosci. -2004. V.27. -P.393-418.1 7

179. Cooper A.J., McDonald J.M., Gelbard A.S. et al. The metabolic fate of N-labeled ammonia in rat brain//J. Biol. Chem.- 1979.-Vol.254.-No.l2.-P.4982-4992.

180. Cooper C.E. Nitric oxide and iron proteins. // Biochim. Biophys. Acta. 1999. - V. 1411. - #2-3. -P.290-309.

181. Corsi A., Granata A.L. Differential toxicity of fluoroacetate to heart, kidney and brain mitochondria of the living rat // Biochem. Pharmacol. 1967 - V.16 - P.1083-1089.

182. Crane F.L., Sun I.L., Barr R., Low H. Electron and proton transport across the plasma membrane. // J. Bioenerg. Biomembr. 1991 - V.23. - #5. -P.773-803.

183. Crane F.L., Sun I.L., Crowe R.A., Alcain F.J., Low H. Coenzyme Q10, plasma membrane oxidase and growth control. // Mol. Aspects Med. 1994 - V.15 Suppl. - P.sl-11.

184. Cremer-Lacuara M.G., Lacuara J.L., Fiol de Cuneo M. and Ruiz R.D. Substrate supply and function of isolated venous smooth muscle under anoxia and metabolic inhibition. // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1980.- V.58.- No.6.- P.723-730.

185. Curthoys N.P. Role of Mitochondrial Glutaminase in Rat Renal Glutamine Metabolism // J. Nutr. -2001.- V.131.- P.2491S-2495S.

186. Curthoys N.P., Lowry O.H. The distribution of glutaminase isoenzymes in the various structures of the nephron in normal, acidotic and alkalotic rat kidney. // J. Biol. Chem. 1973. - V.248. - P.162-168.

187. Curthoys N.P., Watford M. Regulation of glutaminase activity and glutamine metabolism. // Annu. — Rev. Nutr.- 1995.-V.15.-P. 133-59.

188. Daffonchio A., Franzelli C., Radaelli F. et al. Sympathectomy and Cardiovascular Spectral Components in Conscious Normotensive Rats // Hypertension. 1995. - V.25. - №6. - P.1287-1293.

189. Danilov S.M., Allikmets E., Martynov A. Stimulation of cultured human vascular endothelial cell proliferation by growth factors from human brain, heparin and thrombine // J. Cell Biol. — 1984.-V.99. -P.274.

190. Da Prada M., Cesura A.M., Launay J.M., Richards J.G. Platelets as a model for neurones? // Experientia. 1988. - V.44. - №2. - P.l 15-126.

191. Dawson C.A., Audi S.H., Bongard R.D., Okamoto Y., Olson L., Merker M.P. Transport and reaction at endothelial plasmalemma: distinguishing intra- from extracellular events. // Ann. Biomed. Eng. 2000 - V.28. - #8. -P. 1010-1018.

192. Deitmer J.W. Evidence of glial control of extracellular pH in the leech central nervous system. // Glia 1992 - V.5 - P.43-47.

193. Deitmer J.W., and Rose C.R. pH regulation and proton signaling by glial cells. // Prog. Neurobiol. -1996.- V.48.-P.73-103.

194. Deleuze C., Duvoid A., Hussy N. Properties and glial origin of osmotic-dependent release of taurine from the rat supraoptic nucleus. // J. Physiol. 1998 - V.507 - Pt.2 - P.463-471.

195. Demirbilek S, Sizanli E., Karadag N., Karaman A., Bayraktar N., Turkmen E., Ersoy M.O. The effects of methylene blue on lung injury in septic rats. // Eur. Surg. Res. 2006. - V.38. - #1. — P.35-41.

196. Dennis S.C., Clark J.B. The regulation of glutamate metabolism by tricarboxylic acid-cycle activity in rat brain mitochondria // Biochem. J. 1978. - V. 172. - #1. - P.155-162.

197. Denton R.M., Ilalestrap A.P. Regulation of pyruvate metabolism in mammalian tissues. // Essays Biochem. 1979. - V.15. -P.37-77.

198. De Oliveira M.M. Chromatographic isolation of monofluoroacetic acid from Palicourea marcgravii. II Experientia. 1963. - V.19.- No.2.- P.586-587.

199. De-Oliveira R.W., Guimaraes F.S. Anxiolytic effect of methylene blue microinjected into the dorsal periaqueductal gray matter. // Braz. J. Med. Biol. Res. 1999. - V.32. - #12. - P. 1529-1532.

200. Depre C., Veitch K., Hue L. Role of fructose 2,6-bisphosphate in the control of glycolysis. Stimulation of glycogen synthesis by lactate in the isolated working rat heart // Acta Cardiol. -1993.-V.48.-#1.-P.147-164.

201. De SaiTO A., De Sarro G. Adverse reactions to fluoroquinolones, an overview on mechanistic aspects. // Curr. Med. Chem. 2001. - V.8. - #4. - P.371-384.

202. Desmoulin F., Gilard V., Malet-Martino M., Martino R. Metabolism of capecitabine, an oral fluorouracil prodrug: (19)F NMR studies in animal models and human urine. // Drug Metab Dispos. 2002,- V.30.- No.l 1,- P.1221-1229.

203. Dickson A.J., Langslow D.R. Gluconeogenesis in isolated chicken hepatocytes // Biochem. Soc. Trans. 1977 - V.5 - P.983-986.

204. Dickson A J., Langslow D.R. Hepatic gluconeogenesis in chickens // Mol. Cell. Biochem. — 1978 — V.22 — P.167-181.

205. Dohi T. and Murad F. Effects of pyruvate and other metabolites on cyclic GMP levels in incubations of rat hepatocytes and kidney cortex. // Biochim. Biophys. Acta. 1981.- V.673.-No.l.- P. 14-25.

206. Dormán D.C. Toxicology of selected pesticides, drugs, and chemicals. Anticoagulant, cholecalciferol, and bromethalin-based rodenticides. // Vet. Clin. North. Am. Small Anim. Pract. — 1990,- V.20.- No.2.- P.339-352.

207. DosSantos R.A., Alladda A., Eto K., Kadowaki T., Silva J.E. Evidence for a compensated thermogenic defect in transgenic mice lacking the mitochondrial glycerol-3-phosphate dehydrogenase gene. // Endocrinology. 2003. - V.144. - #12. - P.5469-5479.

208. Dreisbach R.H. Handbook of poisoning: prevention, diagnosis, and treatment, 10th ed. // California: Lange Medical Publications, 1980. 578 p.

209. Du X.L., Edelstein D., Dimmeler S., Cubby Ju Q., Sui C., Brownlee M. Hyperglycemia inhibits endothelial nitric oxide synthase activity by posttranslational modification at the Akt site. // J. Clin. Invest. -2001. -V.108. #9. -P.1341-1348.

210. Eanes R.Z., Skilleter D.N., Kun E. Inactivation of the trycarboxylate carrier of liver mitochondria by (-)erythrofluorocitrate // Biochim. Biophys. Res. Commun. 1972 - V.46 - #4 - P. 1618-1622.

211. Eanes R.Z. and Kun E. Inhibition of liver aconitase isoenzymes by (-)-erythrofluorocitrate. // Mol. Pharmacol. 1974.- V.lO.-No.l.- P.130-139.

212. Eason C.T., Gooneratne R., Fitzgerald H., Wright G. and Frampton C. Persistence of sodium monofluoroacetate in livestock animals and risk to humans. // Hum. Exp. Toxicol. 1994.- V.13.-No.2.- 119-122.

213. Eason C.T., Turck P. A 90-day toxicological evaluation of Compound 1080 (sodium monofluoroacetate) in Sprague-Dawley rats. // Toxicol Sci. 2002.- V.69.- No.2.- P.439-447

214. Eastland W.G., Beason S.L. Effect of ambient temperature on the 1080 LD50 of raccons.// Wild. Soc. Bull.- 1986.- V.14.- No.3.- P.234-235.

215. Egekeze J.O., Oehme F.W. Inorganic and organic fluoride concentrations in tissues after the oral administration of sodium monofluoroacetate (Compound 1080) to rats. // Toxicology 1979a -V.15-No.l -P.43-53.

216. Egekeze J.O., Oehme F.W. Sodium monofluoroacetate (SMFA, compound 1080): a literature review. // Vet. Hum. Toxicol. 1979b -V.21 - N0.6. - P.411-416.

217. Egyed M., Brisk Y. Experimental fluoroacetamide poisoning in mice, rats and sheep // Refuah Vet. — 1965 V.22 - P.274-278.

218. Egyed M., Shupe J. Experimental acute fluoroacetamide poisoning in sheep and dogs. I. Symptomatology and pathology. // Fluoride 1971 - V.4 - P.129-136.

219. Egyed M.N., Miller G.W. Experimental acute fluoroacetamide poisoning in guinea pig and sheep. II. Biochemistry. // Fluoride 1971 - V.4 - P. 137-142.

220. Egyed M.N. Experimental acute fluoroacetamide poisoning in sheep. III. Therapy. // Ref. Vet. — 1971 V.28 - #2 - P.70-73.

221. Egyed M.N. Clinical, pathological, diagnostic and therapeutic aspects of fluoroacetate research in animals // Fluoride 1973 - V.6 - #11 - P.215-223.

222. Egyed M.N., Shlosberg A. Diagnosis of field cases of sodium fluoroacetate and fluoroacetamide poisoning in animals // Ref. Vet. 1973 - V.30 - #3/4 - P. 112-115.

223. Egyed M.N., Shlosberg A. The efficiency of acetamide in the prevention and treatment of fluoroacetamide poisoning in chickens. // Fluoride 1977 - V.10 — P.34-37.

224. Egyed M.N., Schultz R.A. The efficacy of acetamide for the treatment of experimental Dichapetalum cymosum (gifblaar) poisoning in sheep // Onderstepoort J. Vet. Res. 1986 - V.53 -No.4-P.231-234.

225. Elliott W.B., Phillips A.H. Effect of fluoroacetate on glucose metabolism in vivo // Arch. Biochem. Biophys. 1954 - V.49 - P.389-395.

226. Else P.L., Hulbert A.J. Comparison of the "mammal machine" and the "reptile machine:" energy production. // Am. J. Physiol. 1981. - V.240. - R3-R9.

227. Endemann G., P.G.Goetz, J. Edmond and H. Brunengraber. Lipogenesis from ketone bodies in the isolated perfused rat liver. Evidence for the cytosolic activation of acetoacetate // J. Biol. Chem. -1982. V.257. - #7. - P.3434-3440.

228. Engel F.L., Hewson K., Cole B.T. Carbohydrate and ketone body metabolism in the sodium fluoroacetate poisoned rats. "SPA" diabets // J. Amer. Phys. 1954 - V. 179 - No.2 - P.325-332.

229. Erecinska M., Nelson D., Nissim I., Daikhin Y., Yudkoff M. Cerebral alanine transport and alanine aminotransferase reaction: alanine as a source of neuronal glutamate. // J. Neurochem. — 1994. -V.62. #5. — P.1953-1964.

230. Erecinska M., Silver I.A. Metabolism and role of glutamate in mammalian brain // Prog. Neurobiol. 1990. - V.35. - P.245—296.

231. Erlanson-Albertsson C. The role of uncoupling proteins in the regulation of metabolism // Acta Physiol. Scand. 2003. - 178. - P.405^112.

232. Erlichman J.S., and Leiter J.C. Comparative aspects of central CO2 chemoreception. // Respir. Physiol. 1997. - V.110. - P.177-185.

233. Erlichman J.S., Li A., and Nattie E.E. Ventilatory effects of glial dysfunction in a rat brain stem chemoreceptor region. // J. Appl. Physiol. 1998 - V.85 - P. 1599-1604.

234. Evtodienko Y.V., Azarashvili T.S., Teplova V.V., Odinokova I.V., Saris N. Regulation of oxidative phosphorylation in the inner membrane of rat liver mitochondria by calcium ions // Biochemistry (Moscow). 2000. - V.65. - #9. - P.1023-30.

235. Fadeel B., Ahlin A., Henter J.I., Orrenius S., Hampton M.B. Involvement of caspases in neutrophil apoptosis: regulation by reactive oxygen species. // Blood. 1998. - V.92. - No.12. - P.4808-4818.

236. Fairhurst A.S., Smith R.E., Gal B.M. The effects of fluorocompounds on oxidative phosphorylation. // Biochem. Pharmacol. -1958.— V.I.- P.273-279.

237. Fanshier D.W., Gottwald L.K., Kun E. Studies on specific enzyme inhibitors. VI. Characterization and mechanism of action of the enzyme-inhibitory isomer of monofluorocitrate. // J.Biol.Chem.-1964. V.239. - No.2. - P.425-434.

238. Farkas A., Batey A.J., Coker S.J. How to measure electrocardiographic QT interval in the anaesthetized rabbit//J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 2004. - V.50. - #3. - P. 175-185.

239. Feelisch M., Brands F., Kelm M. Human endothelial cells bioactivate organic nitrates to nitric oxide: implications for the reinforcement of endothelial defence mechanisms. // Eur. J. Clin. Invest.- 1995. V.25. - #10. -P.737-745.

240. Feelisch M. The use of nitric oxide donors in pharmacological studies. // Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1998. - V.358. - #1. -P.l 13-122.

241. Fillebeen C., Caltagirone A., Martelli A., Moulis J.M., Pantopoulos K. IRP1 Ser-711 is a phosphorylation site, critical for regulation of RNA-binding and aconitase activities. // Biochem. J.- 2005. V.388. - Pt 1. - P.143-150.

242. Finney D.J. Probit analysis. // Cambridge: University Press. 1980. - 333 p.

243. Fisher A.B., Al-Mehdi A.B., Wei Z., Song C., Manevich Y. Lung ischemia: endothelial cell signaling by reactive oxygen species. A progress report. // Adv. Exp. Med. Biol. 2003. - V.510. -P.343-347.

244. Fonnum F., Johnsen A. and Hassel B. Use of fluorocitrate and fluoroacetate in the study of brain metabolism. // Glia. 1997.- V.21.- No.l.- P. 106-113.

245. Fonnum F., Fykse E.M., and Roseth S. Uptake of glutamate into synaptic vesicles. // Prog. Brain Res. 1998.-V. 116,- P. 87-101.

246. Forbes I.J., Zalewski P.D., Giannakis C., Cowled P.A. Induction of apoptosis in chronic lymphocytic leukemia cells and its prevention by phorbol ester. // Exp. Cell. Res. — 1992. V.198. -#2. — P.367-372.

247. Fox R.E., Hopkins I.B., Cabacungan E.B., Tildon J.T. The role of glutamine as an energy source in the developing rat lung. // J. Nutr. 1996. - V.126. - #4 (Suppl) - P.l 131S-6S.

248. Franconi F., Miceli M., De Montis M.G., Crisafi E.L., Bennardini F., Tagliamonte A. NMDA receptors play an anti-aggregating role in human platelets. // Thromb. Haemost. 1996. - V.76. -#1. -P.84-7.

249. Franconi F., Miceli M., Alberti L., Seghieri G., De Montis M.G., Tagliamonte A. Further insights into the anti-aggregating activity of NMDA in human platelets. // Br. J. Pharmacol. 1998. -Y.124. - #1. - P.35-40.

250. Frick G.P., Lowenstein J.M., Studies of 5'-nucleotidase in the perfused rat heart, including measurements of the enzymes in perfused skeletal muscle and liver. // J. Biol. Chem. 1976.-V.251.- P.6372-6378.

251. Frieden C. Glutamate Dehydrogenase. VI. Survey of purine nucleotide and other effects on the enzyme from various sources // J. Biol. Chem. 1965.- V.240.- No.5.- P.2028-2035.

252. Friedhoff LT, Sonenberg M. The membrane potential of human platelets. // Blood. 1983 - V.61. -#1. — P.180-185.

253. Frojmovic M.M., Milton J.G. Human platelet size, shape, and related functions in health and disease // Physiolog. Rev. 1982. - V.62. - №1. - P. 185 -261.

254. Fu X., M.Kimura, M.Iga, S.Yamaguchi. Gas chromatographic-mass spectrometric screening for organic acidemias using dried urine filter paper: determination of a-ketoacids // J. Chromatogr. B, 2001.- V.758. -P.87-94.

255. Gajdusek D.C., Lutheer G. Fluoroacetate poisoning. A review and report of a case. // Am. J. Dis. Child. 1950 - V.79 - P.310-320.

256. Gal E.M., Drewes P.A., Taylor N.P. Metabolism of fluoroacetic acid-2-14C in the intact rat.// Arch. Biochem. Biophys.- 1961.- V.93.- No.l.- P. 1-14.

257. Gal EM. Carbon fluorine compounds. Ciba Foundation Symposia. 1972 - Elsevier, New York. -P.77-93- Gamaley I.A., Klyubin I.V. Roles of reactive oxygen species: signaling and regulation of cellular functions. // Int. Rev. Cytol. 1999 - V.188. - P.203-255.

258. Gammie J. Sodium fluoroacetate poisoning in a cat // Can. Veter. J. 1980 — V.21 - #2 - P.64.

259. Gangloff S.P., Marguet D., Lauquin G.J. Molecular cloning of the yeast mitochondrial aconitase gene (ACOl) and evidence of a synergistic regulation of expression by glucose plus glutamate. // Mol. Cell. Biol. 1990,-V. 10.-P.3551-3561.

260. Garcia-Nogales P., Almeida A., Bolanos J.P. Peroxynitrite protects neurons against nitric oxidemediated apoptosis. A key role for glucose-6-phosphate dehydrogenase activity in neuroprotection. // J. Biol. Chem. 2003. - V.278. - #2. - P.864-74.

261. Gardner P.R., Nguyen D.D. and White C.W. Aconitase is a sensitive and critical target of oxygen poisoning in cultured mammalian cells and in rat lungs. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1994.-V.91.- No.25.- 12248-12252.

262. Gardner P.R., Costantino G., Szabó C., Salzman A.L. Nitric oxide sensitivity of the aconitases. // J. Biol. Chem. 1997. - V.272. - V.40. -P.25071-25076.

263. Gardner P.R., Martin L.A., Hall D., Gardner A.M. Dioxygen-dependent metabolism of nitric oxide in mammalian cells. // Free Radie. Biol. Med. 2001. - V.31. - #2. - P. 191-204.

264. Gavvron O. and Mahajan K. P. a-Methyl-cis-aconitic acid, cis-aconitase substrate. II. Substrate properties and aconitase mechanism. // Biochemistry. 1966. - V.5. - No.7. - P.2343-2350.

265. Giller S., Blank I., Bergmann E.D. Studies of organic fluoride compounds. 1. The influence of acetamide on fluoroacetate poisoning. // Nederlandse Academic van Wetenschappen. — 1953 -S.54.-P.423-426.

266. Giller S. The influence of acetamide on citrate accumulation after fluoroacetate poisoning // Biochem. J. 1956 - V.63 - P. 182-187.

267. Godoy H.M., Cignoli E.V., Castro J.A. Effect of fluoroacetate poisoning in the glycogen content of rat heart and skeletal muscle // Life Sciences 1968 - V.7 - No. 16 - P.847-854.

268. Goldberg A.L., Chang T. W. Regulation and significance of amino acid metabolism in skeletal muscle. // Federation Proc.- 1978.- V.37.- P.2301-2307.

269. Goldstein L. Relation of glutamate to ammonia production in the rat kidney. // Am. J. Physiol. -1966.-V.210.-P.661-666.

270. Goldstein L. Interorgan glutamine relationships. // Federation Proc. 1986.- V.45.- P.2176-2179.

271. Goodman M.N., Lowenstein J.M. The purine nucleotide cycle. Studies of ammonia production by skeletal muscle in situ and in perfused preparations. // J. Biol. Chem. 1977.- V.252.- P.5054-5060.

272. Gooneratne S.R., Eason C.T., Dickson C.J., Fitzgerald H. and Wright G. Persistence of sodium monofluoroacetate in rabbits and risk to non-target species. // Hum. Exp. Toxicol.- 1995.- V.14.-No.2.- P.212-216.

273. Gordon C.J. Temperature regulation in laboratory rodents. // New York: Cambridge University Press.-1993.-278 pp.

274. Gosselin R.E., Hodge H.C., Smith R.P., Cleason M.N. Clinical toxicology of commercial products. // Baltimore: Williams and Wilkins, 1976. 164 p.

275. Gregg K., Hamdorf B., Henderson K., Kopecny J., and Wong C. Genetically Modified Ruminal Bacteria Protect Sheep from Fluoroacetate Poisoning. // Applied and Environmental Microbiology.-1998,- V.64.- No.9.- P. 3496-3498.

276. Grossmann M., Dobrev D., Himmel H.M., Ravens U., Kirch W. Ascorbic acid-induced modulation of venous tone in humans. // Hypertension. 2001. - V.37. - #3. - P.949-954.

277. Gruer M.J., Artymiuk P.J., Guest J.R. The aconitase family: three structural variations on a common theme. // Trends Biochem. Sci. 1997. - V.22. - P.3-6.

278. Gruol D.J., Altschmied J. Synergistic induction of apoptosis with glucocorticoids and 3',5'-cyclic adenosine monophosphate reveals agonist activity by RU 486. // Mol. Endocrinol. 1993. - V.7. -#1. — P.104-113.

279. Gupte S.A., Wolin M.S. Hypoxia promotes relaxation of bovine coronary arteries through lowering cytosolic NADPH. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2006. - V.290. - P.H2228-2238.

280. Haddy F.J., Scott J.B. Metabolic factors in peripheral circulatory regulation. // Fed. Proc. 1975.-V.34.- P.2006-2011.

281. Hagan E.G., Ramsey L.L., Woodard C. Adsorbtion, distribution and excretion of sodium fluoroacetate in rats //J. Pharmmacol. Exp. Ther. 1950 - V.99 - P.432-437.

282. Hall L.L., Smith F.A., De Lopez O.H., Gardner D.E. Direct Potentiometric Determination of Total Ionic Fluoride in Biological Fluids // Clin. Chem.- 1972.- V.18.- #12,- P.1455-1458

283. Hall R.J. The distribution of organic fluorine in some toxic tropical plants. // New Phytol. 1972.-V.71.- P.855-871.

284. Hankard R.G., Haymond M.W., and Darmaun D. Role of glutamine as a glucose precursor in fasting humans. // Diabetes.- 1997.- V.46.- P. 1535-1541.

285. Hansford R. Role of calcium in respiratory control. // Med. Sci. Sports Exerc. 1994. — V.26. - #1. -44-51.

286. Harrison J.W.E., Ambrus J.L., Ambrus C.M., Rees E.W., et al. Acute poisoning with sodium fluoroacetate (compound 1080). // J. Amer. Med. Assoc. 1952 - V. 149 - #17 - P. 1520-1522.

287. Hassel B, Paulsen RE, Johnsen A, Fonnum F. Selective inhibition of glial cell metabolism in vivo by fluorocitrate. // Brain Res. 1992. - V.576. - #1. - P. 120-124.

288. Hassel B., Sonnewald U., Unsgard G., and Fonnum F. NMR spectroscopy of cultured astrocytes: effects of glutamine and the gliotoxin fluorocitrate. // J. Neurochem. 1994 - V.62.- P.2187-2194.

289. Hassel B., Sonnewald U., Fonnum F. Glial-neuronal interactions as studied by cerebral metabolism of 2-13C.acetate and [l-13C]glucose: an ex vivo 13C NMR spectroscopic study. // J. Neurochem. -1995a. V.64. - #6. - P.2773-2782.

290. Hassel B., Westergaard N., Schousboe A., Fonnum F. Metabolic differences between primary cultures of astrocytes and neurons from cerebellum and cerebral cortex. Effects of fluorocitrate. // Neurochem. Res. 1995b. -V.20. - #4. -P.413-420.

291. Hassel B., Bachelard H., Jones P., Fonnum F. and Sonnewald U. Trafficking of amino acids between neurons and glia in vivo. Effects of inhibition of glial metabolism by fluoroacetate. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1997.- V.17.- No.l 1.- P. 1230-1238.

292. Hassel B. Carboxylation and anaplerosis in neurons and glia. // Mol. Neurobiol. 2000. — V.22. -#1-3. — P.21-40.

293. Hassel B. Pyruvate carboxylation in neurons. // J. Neurosci. Res. 2001. - V.66. - #5. - P.755-62.

294. Haussinger D. Nitrogen metabolism in liver: structural and functional organization and physiological relevance. // Biochem. J. 1990. - V.267. - P.281 -290.

295. Hawkins R., DeJoseph M.R., Hawkins P.A. Regional brain glutamate transport in rats at normal and raised concentrations of circulating glutamate // Cell Tissue Res. 1995 - V.281 - P.207-214.

296. Hawkins R.A., O'Kane R.L., Simpson I. A., Vina J.R. Structure of the blood-brain barrier and its role in the transport of amino acids // J. Nutr. 2006. - V.136. - (1 Suppl) - P.218S-226S.

297. Hayes W.J. Clinical handbook on economic poisons. Atlanta, Georgia: Public Health Service, 1963.-144 p.

298. Hayes W.J., Jr. Toxicology of pesticides. Baltimore: Williams and Wilkins Company, 1975. -580 p.

299. Hayes W.J., Jr. Pesticides studies in man. — Baltimore/London: Waverly Press, 1982. 672 p.

300. Hearn C.E.D. A review of agricultural pesticide incidents in man in England and Wales, 1952-1971 // Br. J. Ind. Med. 1973 - V.30 - P.253-258.

301. Heitzer T., Ollmann I., Koke K., Meinertz T., Munzel T. Platelet glycoprotein Ilb/IIIa rcceptor blockade improves vascular nitric oxide bioavailability in patients with coronary artery disease. // Circulation.-2003. -V. 108. #5.-P.536-541.

302. Helander A., Cronholm T., Tottmar O. Inhibition of aldehyde dehydrogenases by methylene blue. // Biochem. Pharmacol. 1993. - V.46. - #12. -P.2135-2138.

303. Herst P.M., Berridge M.V. Cell surface oxygen consumption: a major contributor to cellular oxygen consumption in glycolytic cancer cell lines. // Biochim. Biophys. Acta. 2007. -V. 1767. -#2. -P.170-177.

304. Herst P.M., Tan A.S., Scarlett D.J., Berridge M.V. Cell surface oxygen consumption by mitochondrial gene knockout cells. // Biochim. Biophys. Acta. 2004. - V. 1656. - #2-3. - P.79-87.

305. Hoenderop J.G., Voets T., Hoefs S., Weidema F., Prenen J., Nilius B., Bindels R.J. Homo- and heterotetrameric architecture of the epithelial Ca2+-channels TRPV5 and TRPV6. EMBO J. 2003. - V.22. — P.776-785.t

306. Hohorst H. J. L-(+)-lactate. Determination with lactic dehydrogenase and DPN. // In: Methods of Enzymatic Analysis. (H.U.Bergmeyer, ed.) 1965. - Academic Press - New York. - P.266-270.

307. Holleran J., Babbie M., Erlichman J.S. Ventilatory effects of impaired glial function in a brain stem chemoreceptor region in the conscious rat. // J. Appl. Physiol. 2001 - V.90.- #4.- P. 1539-47.

308. Holstege C.P., Bechtel L.K., Reilly T.H., Wispelwey B.P., Dobmeier S.G. Unusual but potential agents of terrorists. // Emerg. Med. Clin. North. Am. 2007. - V.25. - #2. - P.549-566.

309. Hornfeldt C.S. and Larson A.A. Seizures induced by fluoroacetic acid and fluorocitric acid may involve chelation of divalent cations in the spinal cord. // Eur. J. Pharmacol. — 1990.- V.179.- No.3.-P.307-313.

310. Hosoi R., Okada M., Hatazawa J., Gee A., Inoue O. Effect of astrocytic energy metabolism depressant on 14C-acetate uptake in intact rat brain // Cereb. Blood Flow Metab. 2004 - V.24. -#2. — P.188-190.

311. Hsu S.H., Tsou T.C., Chiu S.J., Chao J.I. Inhibition of alpha7-nicotinic acetylcholine receptor expression by arsenite in the vascular endothelial cells. // Toxicol Lett. 2005. - V.159. - #1. -P.47-59

312. Huang T.Y., Pang X.Q., Ch'ang H.L. Prophylactic effect of reserpine in cardiac failure caused by monofluoroacetic acid derivatives. // Acta Pharm. Toxicol. 1980 - V.47 - P.78-80.

313. Hubbard M.J., McHugh N.J. Mitochondrial ATP synthase F-l-beta-subunit is a calcium-binding protein// FEBS Letters 1996. - V.391. - #3. -P.323-329.

314. Hughey R.P., Rankin B.B., Curthoys N.P. Acute acidosis and renal arteriovenous differences of glutamine in normal and adrenalectomized rats // Am. J. Physiol. 1980. - V.238. - P.F199-F204.

315. Hulsmann S., Oku Y., Zhang W. and Richter D.W. Metabolic coupling between glia and neurons is necessary for maintaining respiratory activity in transverse medullary slices of neonatal mouse. // Eur. J. Neurosci. 2000.- V.12.- No.3.- P.856-862.

316. Hulsmann S., Straub H., Richter D.W., Speckmann E.J. Blockade of astrocyte metabolism causes delayed excitation as revealed by voltage-sensitive dyes in mouse brainstem slices. // Exp. Brain Res.-2003,- V.150.-NO.1.- P.l 17-121

317. Hundal H.S., Babij P., Watt P.W., Ward M.R., and Rennie M.J. Glutamine transport and metabolism in denervated rat skeletal muscle. // Am. J. Physiol.- 1990.- 259 (Endocrinol. Metab. 22).- P.E148-E154.

318. Huszti Z., Prast H., Tran M.H., Fischer H. and Philippu A. Glial cells participate in histamine inactivation in vivo. //Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. — 1998.- V.357.- No.l.- P.49-53.

319. Hutchens J.O., Wagner H., Podolsky B., and McMagon T. The effect of ethanol and various metabolites on fluoroacetate poisoning. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1949 - V.95 - #1 - P.62-69.

320. Jablonski MM, Iannaccone A. Targeted disruption of Muller cell metabolism induces photoreceptor dysmorphogenesis. // Glia. 2000 V.32 - #2 - P. 192-204.

321. Jensen M.S., Nyborg N.C., Thomsen E.S. Various nitric oxide donors protect chick embryonic neurons from cyanide-induced apoptosis. // Toxicol. Sci. -2000. V.58. - #1. -P.127-134.

322. Ji Z., Aas J.-E., Laake J., Walberg F., and Ottersen O.P. An electron microscopic, immunogold analysis of glutamate and glutamine in terminals of rat spinocerebellar fibers. // J. Comp. Neurol.-1991.-V.307.- V.296-310.

323. Johannessen C.U., Qu H., Sonnewald U., Hassel B., Fonnum F. Estimation of aspartate synthesis in GABAergic neurons in mice by 13 C NMR spectroscopy. // Neuroreport. 2001. - V. 12. - #17. -P.3729-32.

324. Johnson R.L. (Jr.). Reid M.B. Effects of metabolic blockade on distribution of blood flow to respiratory muscles. // J. Appl. Physiol. 1988. - V.64.- No.l.- P. 174-80.

325. Juckett M., Zheng Y., Yuan H., Pastor T., Antholine W., Weber M., Vercellotti G. Heme and the endothelium. Effects of nitric oxide on catalytic iron and heme degradation by heme oxygenase. // J. Biol. Chem. 1998. - V.273. - #36. -P.23388-23397.

326. Kaloyianni M., and Freedland R.A. Contribution of several amino acids and lactate to gluconeogenesis in hepatocytes isolated from rats fed various diets. // J. Nutr.- 1990.- V.120.-P. 116-122.

327. Kanai Y., Hediger M.A. Primary structure and functional characterization of a high-affinity glutainate transporter. // Nature. 1992. - V.360. - #6403. - P.467-471.

328. Kanai Y., Nussberger S., Romero M.F., Boron W.F., Hebert S.C., Hediger M.A. Electrogenic properties of the epithelial and neural high-affinity glutamate transporter. // J. Biol. Chem. 1995. -V.270. - P. 16561-16568.

329. Kanamori K., Ross B.D., Kondrat R.W. Rate of Glutamate Synthesis from Leucine in Rat Brain Measured In Vivo by 15N NMR // J. Neurochem. 1998. - V.70. - #3 - P.1304 - 1315.

330. Kane M.T. and Buckley N.J. The effects of inhibitors of energy metabolism on the growth of one-cell rabbit ova to blastocysts in vitro. // J. Reprod. Fertil. 1977.- V.9.- No.2.- P.261-266.

331. Kaplan R.S., Mayor J.A., Johnston N., Oliveira D.L. Purification and Characterization of the Reconstitutively Active Tricarboxylate Transporter from Rat Liver Mitochondria. // J. Biol. Chem. 1990 - V.265 - N22 - P.13379-13365.

332. Karam J.H., Grodsky G.M. Insulin content of pancreas after sodium fluoroacetate-induced hyperglycemia. // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1962.- V.109.- P.451-453.

333. Keller D.A., Roe D.C. and Lieder P.H. Fluoroacetate-mediated toxicity of fluorinated ethanes. // Fundam. Appl. Toxicol. 1996,- V.30.- No.2.- P.213-219.

334. Keyser D.O. and Pellmar T.C. Synaptic transmission in the hippocampus: critical role for glial cells. // Glia. 1994,- V.10.- No.4.- P.237-243.

335. Keyser D.O. and Pellmar T.C. Regional differences in glial cell modulation of synaptic transmission. // Hippocampus. 1997.- V.7.- No.l.- P.73-77.

336. Khodorov B. Glutamate-induced deregulation of calcium homeostasis and mitochondrial dysfunction in mammalian central neurons. // Prog. Biophys. Mol. Biol. 2004. - V.86. - #2. — P.279-351

337. Kimura M., T.Yamamoto, S.Yamaguchi. Automated metabolic profiling and interpretation of GC/MS data for organic acidemia screening: a personal computer-based system // Tohocu J. Exp. Med. -1999.- V.188.- P.317-334.

338. King D.R., Twigg L.E. and Gardner J.L. Tolerance to sodium monofluoroacetate in dasyurids from Western Australia. //Aust. Wildl. Res. 1989. - V.16. - P. 131-140.

339. Kirkpatrick C.J, Bittinger F., Unger R.E., Kriegsmann J., Kilbinger H., Wessler I. The nonneuronal cholinergic system in the endothelium: evidence and possible pathobiological significance. //Jpn. J. Pharmacol. -2001. -V.85. #1. -P.24-28. '

340. Kirkpatrick C.J., Bittinger F., Nozadze K., Wessler I. Expression and function of the non-neuronal cholinergic system in endothelial cells. // Life Sci. 2003. - V.72. - #.18-19. - P.2111-6.

341. Kirov M.Y., Evgenov O.V., Bjertnaes L.J. Combination of intravenously infused methylene blue and inhaled nitric oxide ameliorates endotoxin-induced lung injury in awake sheep. // Crit. Care Med. 2003. - V.31. - # 1. - P. 179-186.

342. Kirsten E., Sharma M.L., Kun E. Molecular Toxicity of (-)-erythro-fluorocitrate: Selective inhibition of citrate transport in mitochondria and the binding of fluorocitrate to mitochondrial proteins. // Mol.Pharmacol. 1978. -V. 14. —#1 - P. 172-184.

343. Kitano T., Nisimaru N., Shibata E., Iwasaka H., Noguchi T., Yamada K. Lactate utilization as an energy substrate in ischemic preconditioned rat brain slices // Life Sci. 2002 - V.72 - #4-5 -P.557-564.

344. Kitano T., Nisimaru N., Shibata E., Iwasaka H., Noguchi T., Yokoi I. Monocarboxylates and glucose utilization as energy substrates in rat brain slices under selective glial poisoning—a 31P NMR study // Mol. Cell. Biochem. 2003 - V.244 - #1-2 - P.77-81.

345. Klingenberg M. Localization of the glycerol-phosphate dehydrogenase in the outer phase of the mitochondrial inner membrane. // Eur. J. Biochem. 1970. - V.13. - P.247-252.

346. Koenig H, Patel A. Biochemical basis for fluorouracil neurotoxicity. The role of Krebs cycle inhibition by fluoroacetate // Arch Neurol. 1970 - V.23 -No.2 - P. 155-60.

347. Koeppen A.H., Riley K.M. Effect of free malonate on the utilization of glutamate by rat brain mitochondria // J. Neurochem. 1987. - V.48. - #5. - P.1509-1515.

348. Konstantinova S.G., Russanov E.M. Aconitase activity in rat liver. // Comp. Biochem. Physiol. B: Biochem. Mol. Biol. 1996. - V.113. -No.l. - P.125-130.

349. Kovacevic Z., McGivan J.D. Mitochondrial metabolism of glutamine and glutamate and its physiological significance. // Physiol. Rev. 1983. - V.63. - P.547-605.

350. Koza R.A., Kozak U.C., Brown L.J., Leiter E.H., MacDonald M.J., Kozak L.P. Sequence and tissue-dependent RNA expression of mouse FAD-linked glycerol-3-phosphate dehydrogenase. // Arch. Biochem. Biophys. 1996. - V.336. - P.97-104.

351. Krizbai I.A., Deli M.A., Pestenacz A., Siklos L., Szabo C.A., Andras I., Joo F. Expression of glutamate receptors on cultured cerebral endothelial cells. // J. Neurosci. Res. 1998. - V.54. - #6. — P.814-819.

352. Kumura E., Kosaka H., Shiga T., Yoshimine T., Hayakawa T. Elevation of plasma nitric oxide end products during focal cerebral ischemia and reperfusion in the rat // J. Cereb. Blood Flow Metab. — 1994.-V.14. -#3.-P.487-491.

353. Kun E. Mechanism of action of fluoro analogs of citric acid cycle compounds: an essay on biochemical tissue specificity. // In: "Citric Acid Cycle, Control and Compartmentation. J.M.Lowenstein, editor. Marcel Dekker, Inc., New York. 1969 - P.297-339

354. Kuyper A.C., Mattill H.A. Some aspects of citric acid metabolism // J. Biol. Chem. 1933. -V.103. - #1. -P.51-60.

355. Kvamme, E, Svenneby G, and Torgner IA. Glutaminases. In: Glutamine and Glutamate in Mammals, edited by Kvamme E. Boca Raton, Florida: CRC, 1988, p. 53-67.

356. Kvamme, E, Torgner I A, and Roberg B. Evidence indicating that pig renal phosphate-dependent glutaminase has a functionally predominant external localization in the inner mitochondrial membrane. // J Biol Chem 1991a.- V.266.- P.12185-12192.

357. Kvamme, E, Roberg B, and Torgner IA. Effects of mitochondrial swelling and calcium on phosphate-activated glutaminase in pig renal mitochondria. // Eur J Biochem.- 1991b.- V.197.-P.675-680.

358. Kvamme E, Roberg B, Torgner IA. Phosphate-activated glutaminase and mitochondrial glutamine transport in the brain. // Neurochem. Res. 2000.- V.25. - #9-10. - P.1407-19.

359. Noue K.F., Schoolwerth A.C. Metabolite transport in mitochondria. // Ami. Rev. Biochem.-1979.- V.48.- P.871-922.

360. Ma J.Y., Zhao Z.Q. The involvement of glia in long-term plasticity in the spinal dorsal horn of the rat. // Neuroreport. 2002 - V.13-#14-P.1781-1784.

361. Magistretti P.J., Sorg O., Martin J.L. Regulation of glycogen mcrabolism in astrocytes: physiological, pharmacological, and pathological aspects. // In: Astrocytes: pharmacology and function (Murphy S. ed.) 1993. - San Diego: Academic. - pp.243-265.

362. Magnusson I., Chandramouli V., Schumann W.C., Kumaran K., Wahren J., Landau B.R. Pentose Pathway in Human Liver // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1988 - V.85. - #13. - P.4682-4685.

363. Mallet M.L. Pathophysiology of accidental hypothermia. // Q. J. Med. 2002. - V.95. - P.775-785.

364. Manevich Y., Al-Mehdi A., Muzykantov V., Fisher A.B. Oxidative burst and NO generation as initial response to ischemia in flow-adapted endothelial cells. // Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 2001. - V.280. - #5. - P.H2126-H2135.

365. Marais J.S.C. Monofluoroacetic acid, the toxic principle of "Gifblaar", Dichapetalum cymosum (Hook) // J. Vet. Sci. Anim. Ind. 1944 - V.20 - P.67-73.

366. Marcus A., Elliott W.B. Enzymatic reactions of fluoroacetate and fluoroacetyl coenzyme A. // J. Biol. Chem. 1956. - V.218. - #2. - P.823-830.

367. Martins-Pinge M.C., Araujo G.C., Lopes O.U. Nitric oxide-dependent guanylyl cyclase participates in the glutamatergic neurotransmission within the rostral ventrolateral medulla of awake rats. // Hypertension. 1999. - V.34. - #4. -Pt.2. -P.748-751.

368. Matheson B.K., Adams J.L., Zou J., Patel R., Franklin R.B. Effect of metabolic inhibitors on ATP and citrate content in PC3 prostate cancer cells. // Prostate. 2007. - V.67. - #11.-P. 1211-1218.

369. Matsubara I., Kamiya J. and Imai S. Cardiotoxic effects of 5-fluorouracil in the guinea pig. // Jpn. J. Pharmacol. 1980.- V.30.- No.6.- P.871-9.

370. Matsumoto K., Lo E.H., Pierce A.R., Halpern E.F., Newcomb R. Secondary elevation of extracellular neurotransmitter amino acids in the reperfusion phase following focal cerebral ischemia. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1996. - V. 16. - #1. - P. 114-124.

371. Matsumura S., Kataoka H., Makita M. Determination of amino acids in human serum by capillary gas chromatography // J. Chromatogr. B Biomed. Appl. 1996. - V.681. - #2. - P.375-380.

372. Matsuno T., Satoh T., and Suzuki H. Prominent glutamine oxidation activity in mitochondria of avian transplantable hepatoma induced by MC-29 virus. // J. Cell. Physiol.- 1986a.- V.128.- P.397-401.

373. Matsuno T., Satoh T., Suzuki H. The pathway of glutamate oxidation in avian transplantable hepatoma induced by MC-29 virus. // Comp. Biochem. Physiol.- 1986b.- V.85B.- P.393-396.

374. Matsuno T. Bioenergetics of tumor cells: glutamine metabolism in tumor cell mitochondria // Int. J. Biochem. 1987. - V.19.- No.4.- P.303-307.

375. Max S.R. Glucocorticoid-mediated induction of glutamine synthetase in skeletal muscle. // Med. Sci. Sports Exerc. 1990.- V.22.- P.325-330.

376. Max S.R., Purvis J.L. Energy-linked incorporation of citrate into rat liver mitochondria // Biochem Biophys Res Commun. 1965 - V.21 - P.587-594.

377. Max S.R., Mill J., Mearow K., Konagaya M., Konagaya Y., Thomas .T.W., Banner C., and Vitkovi L. Dexamethasone regulates glutamine synthetase expression in rat skeletal muscles. // Am. J. Physiol.- 1988,- V.255.- (Endocrinol. Metab. 18).- P.E397-E402.

378. Maytnert E.W., Kaji H.K. On the relationship of brain y-aminobutyric acid to convulsions // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1962. - Vol.137.- P. 114-121.

379. McConkey D.J., Orrenius S., Okret S., Jondal M. Cyclic AMP potentiates glucocorticoid-induced endogenous endonuclease activation in thymocytes // FASEB J. 1993. - V.7. - P.580-585.

380. McCormack J., Halestrap A., Denton R. Role of calcium ions in regulation of mammalian intramitochondrial metabolism. // Physiol. Rev. 1990. - V.70. - P.391-425.

381. McCosker T. Ruminal detoxification of fluoroacetate. // Agric. Sci. New Ser.- 1989.- V.2.- P.46-47.

382. McCulloch A.I., Bottrill F.E., Randall M.D., Hiley C.R. Characterization and modulation of EDHF-mediated relaxations in the rat isolated superior mesenteric arterial bed. // Br. J. Pharmacol. 1997. — V.120. — P.1431-1438.

383. McEwan T. Isolation and identification of the toxic principle of Gastrolobium grandiflorum. // Qld. J. Agric. Sci. 1964. - V.21. - P. 1-14.

384. McGowan M.W., Artiss J.D., Strandbergh D.R., Zak B. A peroxidase-coupled method for the colorimetric determination of serum triglycerides // Clinical Chemistry. 1983.- V.29.- P.538-542.

385. McGrath-Morrow S.A., Stahl J. Inhibition of glutamine synthetase in a549 cells during hyperoxia. // Am J Respir Cell Mol Biol. 2002.- V.27.- No.l.- P.99-106.

386. McTaggart D.R. Poisoning due to sodium fluoroacetate ("1080"). // Med. J. Austr.-1970 V.2 -No. 14 - P.641-642.

387. Mead R.J., Oliver A.J., King D.R. Metabolism and defluorination of fluoroacetate in the brush-tailed possum (Trichosurus vulpecula). //Aust. J. Biol. Sci. 1979. - V.32. - P. 15-26.

388. Meade D., Chess C., Welbourne T.C. Glutamate transport and cellular glutamine metabolism: regulation in LLC-PK1 and LLC-PK1-F+ cell lines. //Am. J. Physiol. Cell. Physiol.- 1998.- V.274.-P.C1616-C1624.

389. Medina M.A. Glutamine and Cancer. // Journal of Nutrition.- 2001.- V.131.- P.2539S-2542S.

390. Medvedeva L.V., Popova T.N., Artiukhov V.G., Matasova L.V. Catalytic properties of cytoplasmic and mitochondrial aconitate hydratase from rat cardiomyocytes. // Izv. Akad. Nauk Ser. Biol. 2002.- #5. - P.528-533.

391. Meier C., Dermietzel R. Electrical synapses—gap junctions in the brain. // Results Probl. Cell. Differ. 2006. - V.43. - P.99-128.

392. Meijer A.J., Lamers W.H., Chamuleau R.A.F.M. Nitrogen metabolism and ornithine cycle function. // Physiol. Rev.- 1990.- V.70.- P.701-748.

393. Meininger C.J., Wu G. L-glutamine inhibits nitric oxide synthesis in bovine venular endothelial cells. //J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997. - V.281. - #1. -P.448-453.

394. Mcnezes S., Teixeira P. Lethal interaction between heat and methylene blue in Escherichia coli. // Int. J. Hyperthermia. 1992. - V.8. - #5. - P.689-699.

395. Menon K.I., Feldwick M.G., Noakes P.S., Mead RJ. The mode of toxic action of the pesticide gliftor: the metabolism of 1,3-difluoroacetone to (-)-erythro-fluorocitrate. // J. Biochem. Mol. Toxicol. 2001.- V.15.- #1,- P.47-54

396. Merker M.P., Olson L.E., Bongard R.D., Patel M.K., Linehan J.H., Dawson C.A. Ascorbate-mediated transplasma membrane electron transport in pulmonary arterial endothelial cells. // Am. J. Physiol. 1998. - V.274. - #5. - Pt 1. - P.L685-L693.

397. Meyron-Holtz E.G., Ghosh M.C., Iwai K. et al. Genetic ablations of iron regulatory proteins 1 and 2 reveal why iron regulatory protein 2 dominates iron homeostasis. // EMBO J. 2004a. — V.23. — P.3 86-395.

398. Meyron-Holtz E.G., Ghosh M.C., Rouault T.A. Mammalian tissue oxygen levels modulate iron-regulatory protein activities in vivo. // Science . 2004b. - V.306. - P.2087-2090.

399. Miller A.L., Kiney C.A., Cordry D.H., Staton D.M. Interaction between glucose and ketone body use by developing brain // Dev. Brain Res. 1982 - V.256 - #4 - P.443-450.

400. Miller KE, Richards BA, Kriebel RM. Glutamine-, glutamine synthetase-, glutamate dehydrogenase- and pyruvate carboxylase-immunoreactivities in the rat dorsal root ganglion and peripheral neive. // Brain Res.- 2002.- V.945.- No.2.- P.202-211.

401. Milligan ED, Twining C, Chacur M, Biedenkapp J, O'Connor K, Poole S, Tracey K, Martin D, Maier SF, Watkins LR. Spinal glia and proinflammatory cytokines mediate mirror-image neuropathic pain in rats // J Neurosci. 2003 - V.23 - #3 - 1026-1040.

402. Mindukshev I.V., Krivoshlyk V.V., Ermolaeva E.E. et al. Necrotic and apoptotic volume changes of red blood cells investigated by low-angle light scattering technique // Spectroscopy Int. J. 2007. -V.21. - #2. - P. 105-120.

403. Minich T., Yokota S., Dringen R. Cytosolic and mitochondrial isoforms of NADP+-dependent isocitrate dehydrogenases are expressed in cultured rat neuions, astrocytes, oligodendrocytes and microglial cells. // J. Neurochem. 2003. - V.86. - P.605-614.

404. Minnaar PP, McCrindle RI, Naude TW, Botha CJ. Investigation of biological samples for monofluoroacetate and Dichapetalum cymosum poisoning in southern Africa. // Onderstepoort J Vet Res. 2000 - V.67 - #1 - P.27-30.

405. Misustova J., Hosek B. and Kautska J. Characterization of the protective effect of radioprotective substances by means of long-term changes in oxygen consumption. // Strahlentherapie. 1980.-V.156.- No. 11,- P.790-794.

406. Modin A., Björne H., Herulf M., Alving K., Weitzberg E., Lundberg J.O.N. Nitrite-derived nitric oxide: a possible mediator of 'acidic-metabolic' vasodilation // Acta Physiologica Scandinavica 2001. -V. 171. #1. -P.9-16.

407. Modzelewska B., Kostrzewska A. The influence of methylene blue on the spontaneous contractity of the non-pregnant human myometrium and on the myometrial response to DEA/NO. // Cell. Mol. Biol. Lett. 2005. - V. 10. - #3. - P.389-400.

408. Mohazzab-H K.M., Kaminski P.M., Agarwal R., Wolin M.S. Potential role of a membrane-bound NADH oxidoreductase in nitric oxide release and arterial relaxation to nitroprusside. // Circ Res. -1999. V.84. - #2. - P.220-228.

409. MollicaM.P., Lionetti L., Crescenzo R., Tasso R., Barletta A., Liverini G., Iossa S. Cold exposure differently influences mitochondrial energy efficiency in rat liver and skeletal muscle. // FEBS Lett. 2005. - V.579. - #9. - P. 1978-1982.

410. Mongin A. A., Nedvetsky P.I., Fedorovich S.V. Depolarization of isolated brain nerve endings by nitric oxide donors: membrane mechanisms. // Biochemistry (Mosc). 1998. - V.63. - #6. - P.662-670.

411. Montoya C.M.A., Lopez M.G. Treatment of sodium fluoroacetate intoxication. // Rev. Med. Inst. Mex. Seguero Soc. 1983 - V.21 - #1 - P. 125-128.

412. Morrison J.F., Peters R.A. Biochemistry of fluoroacetate poisoning: the effect of fluorocitrate on purified aconitase. // Biochem. J. 1954. -V. 58. - P. 473-479.

413. Moshage H., Kok B., Huizenga J.R., Jansen P.L.M. Nitrite and Nitrate Determinations in Plasma: A Critical Evaluation // Clin. Chera. 1995. - V.41. - #6. - P.892-896.

414. Motterlini R., Foresti R., Intaglietta M., Winslow R.M. NO-mediated activation of heme oxygenase: endogenous cytoprotection against oxidative stress to endothelium. // Am. J. Physiol. — 1996a. -V.270. #1. - Pt.2. - P.H107-H114.

415. Motterlini R., Foresti R., Bassi R., Calabrese V., Clark J.E., Green C.J. Endothelial heme oxygenase-1 induction by hypoxia. Modulation by inducible nitric-oxide synthase and S-nitrosothiols. //J. Biol. Chem. -2000. V.275. - #18. -P.13613-13620.

416. Mu X., Welbourne T. Response of LLC-PK1-F+ cells to metabolic acidosis. // Am. J. Physiol. Cell Physiol. 1996. - V.270.- P.C920-C925.

417. Muir D., Berl S., Clarke D.D. Acetate and fluoroacetate as possible markers for glial metabolism in vivo // Brain Res. 1986. - V.380. - No.2.- P.336-340.

418. Muller T. Supravital uptake of methylene blue by dendritic cells within stratified squamous epithelia: a light and electron microscope study. // Biotech. Histochem. — 1996. — V.71. #2. - P.96-101.

419. Mulvany M.J., Halpern W. Contractile properties of small arterial resistance vessels in spontaneously hypertensive and normotensive rats // Circ. Res. 1977. - V.41. - #1. — P. 19-26.

420. Murad F., Arnold W.P., Mittal C.K., Braughler J.M. Properties and regulation of guanylate cyclase and some proposed functions for cyclic GMP. // Adv. Cyclic Nucleotide Res. 1979. - V.ll. -P. 175-204.

421. Natelson S., Pincus J.B., and Lugovoy J.K. Microestimation of citric acid. A new colorimetric reaction for pentabromoacetone // J. Biol. Chem. 1948.- V.175.- P.745-750.

422. Nattie E.E., Fung M.L., Li A., and St. John W.M. Responses of respiratory modulated and tonic units in the retrotrapezoid nucleus to CO2. // Respir Physiol. 1993 - V.94 - P.35-50.

423. Nguyen N.H., Brathe A., Hassel B. Neuronal uptake and metabolism of glycerol and the neuronal expression of mitochondrial glycerol-3-phosphate dehydrogenase. // J. Neurochem. — 2003. V.85. - #4. -P.831-42.

424. Newcomb R., Sun X., Taylor L., Curthoys N., Giffard R.G. Increased Production of Extracellular Glutamate by the Mitochondrial Glutaminase following Neuronal Death. // J. Biol. Chem. 1997. -V.272. - No.17. - P.l 1276-11282.

425. Newsholme E.A., Crabtree B., Ardawi M.S. Glutamine metabolism in lymphocytes: its biochemical, physiological and clinical importance. // Q. J. Ex.p Physiol. 1985. - V.70.- #4.-P.473-489.

426. Nissim, I, Sahai A, Sandler R, and Tannen RL. The intensity of acidosis differentially alters the pathways of ammoniagenesis in LLC-PK1 cells. // Kidney Int.- 1994.- V.45.- P.1014-1019.

427. Norenberg M.D., Martinez-Hernandez A. Fine structural localization of glutamine synthetase in astrocytes of rat brain. // Brain Res. 1979.- V.161.- No.2.- P.303-310.

428. Norris W.R. Sodium fluoroacetate. // IPCSINTOX Databank. 2001. - Poison Information Monograph 494.

429. Novak M. Colorimetric ultramicro method for the determination of free fatty acids // J. Lipid Res.-1965.-V. 6.- P. 431-433.

430. Noyes B.E., Glatthaar B.E., Garavelli J.S., Bradshaw R.A. Structural and functional similarities between mitochondrial malate dehydrogenase and L-3-hydroxyacyl Co A dehydrogenase // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1974. - V.71.- #4,- P.1334-1338.

431. Nubel T., Ricquier D. Respiration under control of uncoupling proteins: Clinical perspective. // Horm. Res. 2006. - V.65. - #6. - P.300-310.

432. Nwude N., Parsons L.E. and Adaudi A.O. Acute toxicity of the leaves and extracts of Dichapetalum barteri (Engl.) in mice, rabbits and goats. // Toxicology. 1977 - V.7 - No.l - P.23-29.

433. Odessey R., Khairallah E.A., and Goldberg A.L. Origin and possible significance of alanine production by muscle. //J. Biol. Chem.- 1974.- V.249.- P.229-238.

434. Oerlichs P.B., McEwan T. Isolation of the toxic principle of Acacia georginae. II Nature (Lond.) -1961.- V.190.- P.808-809.

435. O'Hagan D, Schaffrath C, Cobb SL, Hamilton JT, Murphy CD. Biochemistry: biosynthesis of an organofluorine molecule. // Nature 2002 - V.416 - #6878 - P.279.

436. Olalla L, Gutierrez A, Campos JA, Khan ZU. Alonso FJ, Segura JA, Marquez J, Aledo JC. Nuclear localization of L-type glutaminase in mammalian brain. // J Biol Chem.- 2002.- V.277.- No.41.-P.3 8939-3 8944.

437. Olson L.E., Merker M.P., Patel M.K., Bongard R.D., Daum J.M., Johns R.A., Dawson C.A. Cyanide increases reduction but decreases sequestration of methylene blue by endothelial cells. // Ann. Biomed. Eng. 2000. - V.28. - #1. - P.85-93.

438. Omara F. and Sisodia C.S. Evaluation of potential antidotes for sodium fluoroacetate in mice. // Vet. Hum. Toxicol. 1990. - V. 32. - No. 5. - P.427-431.

439. Opic L.H. Metabolic response during impending myocardial infarction. I. Relevance of studies of glucose and fatty acid metabolism in animals. // Circulation.- 1972.- V.45.- P.483-490

440. Ord MC, Stocken LA. Sex differences in effect of radiation and fluoroacetate poisoning on liver metabolism // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1953 - V.83 - P.695-697.

441. Orkand R.K., Opava S. Glial function in homeostasis of the neuronal microenvironment. // News Physiol. Sci. 1994 - V.9 - P.265-267.

442. Palmieri F., Quagliariello E., Klingenberger M. Kinetics and specificity of the oxoglutarate carrier in rat-liver mitochondria. // Eur J Biochem. 1972. - V.29. - #3. - P.408-16.

443. Palmieri F., Indiveri C., Bisaccia F., Kramer R. Functional properties of purified and reconstituted mitochondrial metabolite carriers. // J. Bioenerg. Biomembr. 1993. - V.25. - #5. - P.525-35.

444. Pan M, Wasa M, Ryan U, Souba W. Inhibition of pulmonary microvascular endothelial glutamine transport by glucocorticoids and endotoxin. // JPEN J Parenter Enteral Nutr.- 1995.- V.19.- N0.6.-P.477-481.

445. Pantopoulos K. Iron metabolism and the IRE/IRP regulatory system: an update. // Ann. NY Acad. Sci. 2004. - V. 1012. - P. 1-13.

446. Pardridge W.M., Oldendorf W.H. Transport of metabolic substrates through the blood-brain barrier. // J. Neurochem. 1977. - V.28. - #1. - P.5-12.

447. Parekh A.B., Penner R. Store-operated calcium influx. // Physiol. Rev. 1997. - V.77. - P.901-930.

448. Parekh A.B., Putney J.W. (Jr). Store-operated calcium channels. // Physiol. Rev. 2005. - V.85. -P.757-810.

449. Park L.C., Albers D.S., Xu H., Lindsay J.G., Beal M.F. and Gibson G.E. Mitochondrial impairment in the cerebellum of the patients with progressive supranuclear palsy. // J. Neurosci. Res. — 2001.-V.66.- No.5.- P.1028-1034.

450. Parkin P.J., McGiven A.R. and Bailey R.R. Chronic sodium monofluoroacetate (compound 1080) intoxication in a rabbiter. // N. Z. Med. J. 1977.- V.85.- No.581.- P.93-96.

451. Patel A., Koenig H. The neurochemical effects of fluorocitrate. // Neurology 1968 - V.18 - #3 -P.296.

452. Patocka J., Struneck A. Organofluorine compounds in nature. XXVth ISFR Conference Abstract // Fluoride 2002 - V.35 - #4 - P.255-256.

453. Patterson J.W., Lazarow A. Determination of glutathione // Methods Biochem Anal. 1955.- V.2.-P.259-278.

454. Pattison F.L.M. Toxic alifatic fluorine compounds. Amsterdam; London; New-York; Princeton: Elsevier Publishing Company, 1959. - 227 p.

455. Paulsen R.E., Contestabile A., Vildani L., Fonnum F. An in vivo model for studing function of brain tissue temporarily devoid of glial cell metabolism: the use of fluorocitrate // J. Neurochem.-1987,- V.48.- No.5.- P.1377-1385.

456. Pcarce R.A., Stornetta R.L., and Guyenet P. Retrotrapezoid nucleus in the rat. // Neurosci. Lett. -1998. V.101.- P.138-142.

457. Pearson D.L., Dawling S., Walsh W.F., Haines J.L., Christman B.W., Bazyk A., Scott N., Summar M.L. Neonatal Pulmonary Hypertension. //N. Engl. J. Med. -2001. -V.344. P. 1832-1838.

458. Pellerin L., Magistretti P.J. Glutamate uptake into astrocytes stimulates aerobic glycolysis: A mechanism coupling neuronal activity to glucose utilization // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. -V.91. -P.10625-10629.

459. Perez G.A., Frindt G. The effect of fluorocitrate on urinary calcium and citrate excretion // Experimentia 1977 - V.33 - No.6 - P.741-742.

460. Perez Velazquez J.L., Carlen P.L. Gap junctions, synchrony and seizures. // Trends Neurosci. -2000. V.23. - #2. - P.68-74.

461. Persson P.B., Stauss H., Chung O. et al. Spectrum analysis of sympathetic nerve activity and blood pressure in conscious rats // Am. J. Physiol. 1992. - V.283. - №5(2). - P.H1348-H1355.

462. Peter C., Hongwan D., Kupfer A., Lauterburg B.H. Pharmacokinetics and organ distribution of intravenous and oral methylene blue. // Eur. J. Clin. Pharmacol. — 2000. — V.56. #3. — P.247-250.

463. Peters R.A. Lethal synthesis. // Pros. R. Soc. (Lond.) 1952. - V.139. - P.143-175.

464. Peters R.A., Wakelin R.W. Fluoroacetate poisoning: Comparison of syntetic fluorocitric acid with theenzymically synthesizedfluorotricarboxylic acid. //Nature. — 1953. V. 171.-P. 1111-1112.

465. Peters R.A. Experiments upon the biochemistry of the synthesis of fluoroacetate in the Australian Georginae and their significance // Res. Roum. Biochim. 1967 - V.4 - #2 - P.79-91.

466. Peters R.A. Some metabolic aspects of fluoroacetate especially related to fluorocitrate. // In: "Carbon Fluorine Compounds". A Ciba Foundation Symposium. Associated Scientific Pub. Amsterdam. 1972 - P.55-70.

467. Peters R., Shorthouse M., Ward P.F., McDowell E.M. Observations upon the metabolism of fluorocitrate in rats. // Proc R Soc (Lond) B Biol Sci. 1972 - V. 182 - #66 - P. 1 -8.

468. Peters R.A., Spencer H. and Bidstrup P.L. Subacute fluoroacetate poisoning. // J. Occup. Med. -1981.-V.23.- 2.- P.112-113.

469. Plaitakis A., Zaganas I. Regulation of human glutamate dehydrogenases: implications for glutamate, ammonia and energy metabolism in brain // J. Neurosci. Res. 2001. - V.66. -#5. — P.899-908.

470. Poitry-Yamate C., Tsacopoulos M. // Glial (Miiller) cells take up and phosphorylate 3H.2-deoxy-D-glucose in mammalian retina. // Neurosci. Lett. 1991. - V. 122. - №2. - P.241-244.

471. Polte T., Abate A., Dennery P.A., Schroder H. Heme oxygenase-1 is a cGMP-inducible endothelial protein and mediates the cytoprotective action of nitric oxide. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. -2000. V.20. - #5. - P. 1209-1215.

472. Polte T., Oberle S., Schroder H. The nitric oxide donor SIN-1 protects endothelial cells from tumor necrosis factor-alpha-mediated cytotoxicity: possible role for cyclic GMP and heme oxygenase. // J. Mol. Cell. Cardiol. 1997 - V.29. - #12. - P.3305-10.

473. Potter V.R., Busch H. Citric acid content of normal and tumor tissue in vivo following injection of fluoroacetate // Cancer Res. 1950 - V. 10 - P.353-356.

474. Pow D.V., Robinson S.R. Glutamate in some retinal neurons is derived solely from glia. // Neuroscience. 1994. - V.60. - #2. - P.355-366.

475. Powell G.L., Beevers II. Fluoroacetyl-CoA as a substrate for malate synthase. // Biochim. Biophys. Acta. 1968. - V. 151. - #3. - P.708-710.

476. Powell T., Terrar D.A., Twist V.W. Electrical properties of individual cells isolated from adult rat ventricular myocardium// J. Physiol. 1980. - V.302. - P.131-153.

477. Prasanna C.Y., Ramakrishnan S. Effect of acetaldehyde on carbohydrate metabolism in rat brain // Ind. J. Biochem. Biophys. -1984.- V.21.- No.2.- P.121-123.

478. Preisig P.A., Alpern R.J. Chronic metabolic acidosis causes adaptation in the apical membrane Na/H antiporter and basolateral Na(HCC>3)3 symporter in the rat proximal convoluted tubule. // J. Clin. Investig.- 1988.- V.82.- P.1445-1453.

479. Price M.T., Olney J.W., Lowry O.H., Buchsbaum S. Uptake of exogenous glutamate and aspartate by circumventricular organs but not other regions of brain // J. Neurochem. — 1981. — V.36. -P. 1774-1780.

480. Pridmore S.A. Fluoroacetate poisoning: nine years later // Med. J. Austr. 1978 - V.2. - No.6,-P.269-270.

481. Proudfoot A.T., Bradberry S.M., Vale J.A. Sodium fluoroacetate poisoning. // Toxicol. Rev. — 2006. V.25. - #4. -P.213-219.

482. Quin J.I., Clark R. Studies on the action of potassium monofluoroacetate (CII2FOOK), Dichapetalum cymosum (Hook) Engl. toxin on animals // J. Vet. Sci. Animal Ind. 1947 - V.22 -P.77-90.

483. Raable W.A. Ammonia and disinhibition in cat motor cortex by ammonium acetate, monofluoroacetate and insulin-induced hypoglycemia. // Brain Res. 1981. - V.210. - No.1-2. -P.311-322

484. Raable W., Lin S. Ammonia intoxication and hyperpolarizing postsynaptic inhibition // Exp. Neurol: 1983 - V.82 - No.3 -P.711-715.

485. Raable W., Lin S. Ammonia, postsynaptic inhibition and CNS-energy state // Brain Res. 1984 -V.303 -No.l — P.67-76.

486. Rahman B, Kussmaul L, Hamprecht B, Dringen R. Glycogen is mobilized during the disposal of peroxides by cultured astroglial cells from rat brain // Neurosci Lett. 2000 - V.290. - #3". - P. 169172.

487. Ralevic V., Burnstock J. Receptors for purines and pyrimidines // Pharmacol. Rev. 1998. - V.50. -№3. -P.415-492.

488. Rammel C.G., Hoogenboom I.L., Julian A.F. Treatment of 1080 poisoning in dogs with glycerol monoacetate. //N. Z. Vet. J. 1985.- V.33.- No.9.- 149-150.

489. Ramsay R.R., Dunford C., Gillman P.K. Methylene blue and serotonin toxicity: inhibition of monoamine oxidase A (MAO A) confirms a theoretical prediction. // Br. J. Pharmacol. 2007. Epub ahead of print.

490. Ransom B. Glial modulation of neural excitability mediated by extracellular pH: a hypothesis. // Prog. Brain Res. 1992. - V.94 - P.37-46.

491. Ransom B. Gap junctions. In: Neuroglia, edited by Kettenmann I I. and Ransom B.R. New York: Oxford University Press. 1995. - P.299-319.

492. Reenila I., Tuomainen P., Soinila S., Mannisto P.T. Increase of catechol-O-methyltransferase activity in rat brain microglia after intrastriatal infusion of fluorocitrate, a glial toxin. // Neurosci. Lett. 1997-V.230-#3-P.155-8.

493. Regev-Rudzki N., Karniely S., Ben-Haim N.N., Pines O. Yeast aconitase in two locations and two metabolic pathways: seeing small amounts is believing. // Mol. Biol. Cell. 2005. - V.16. -P.4163-4171.

494. Rego A.C., Santos M.S., Oliveira C.R. Glutamate-mediated inhibition of oxidative phosphorylation in cultured retinal cells. // Neurochem. Int. 2000. - V.36. - #2. - P.159-166.

495. Reichelt H. What is fluoroacetate diabetes?. [Article in German]. // Z. Gesamte Inn. Med. 1979.-V.34.-N0.15.- P.401-404.

496. Reifenrath W.G., Roche E.B., Al-Turk W.A. and Johnson H.L. Synthesis and biological activity of fluoroalkylamine derivatives of narcotic analgesics. // J. Med. Chem. 1980.- V.23.- No.9.- P.985-990.

497. Reigart J.R., Brueggman J.L., Pharm D., Keil J.E. Sodium fluoroacetate poisoning. // Am. J. Diseas. Children 1975 - V. 129 - #9 - P. 1124-1126.

498. Remenyi G., Szasz R., Friese P., Dale G. Role of Mitochondrial Permeability Transition Pore in Coated-Platelet Formation. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2005. - V.25. - P.467-471.

499. Rezzani R., Rodella L., Corsetti G., Bianchi R. Does methylene blue protect the kidney tissues from damage induced by Ciclosporin A treatment? // Nephron. 2001 - V.89. - #3. - P.329-336.

500. Riedel W., Maulik G. Fever: an integrated response of the central nervous system to oxidative stress. // Mol. Cell. Biochem. 1999. - V.196. - #1-2. -P.125-132.

501. Riedel W., Lang U., Oetjen U., Schlapp U., Shibata M. Inhibition of oxygen radical formation by methylene blue, aspirin, or alpha-lipoic acid, prevents bacterial-lipopolysaccharide-induced fever. // Mol. Cell. Biochem. -2003. -247. #1-2. - P.83-94.

502. Rist R.J., Romero I.A., Chan M.W., Abbott N.J. Effects of energy deprivation induced by fluorocitrate in immortalised rat brain microvessel endothelial cells. // Brain Res. 1996.- V.730.-#1-2. - P.87-94.

503. Roberg B., Torgner I.A., and Kvamme E. Inhibition of glutamine transport in rat brain mitochondria by some amino acids and tricarboxylic acid cycle intermediates. //Neurochem. Res.- 1999.- V.24.-P.811-816.

504. Robinson M.M., McBryant S.J., Tsukamoto T., Rojas C., Ferraris D.V., Hamilton S.K., Hansen J.C., Curthoys N.P. Novel mechanism of inhibition of rat kidney-type glutaminase by BPTES. // Biochem J. 2007 V.406. - #3. - P.407-414.

505. Robinson RF, Griffith JR, Wolowich WR, Nahata MC. Intoxication with sodium monofluoroacetate (compound 1080). // Yet Hum Toxicol. 2002 V.44.- #2.- P.93-95.

506. Robinson W.H. Acute toxicity of sodium monofluoroacetate to cattle // J. Wildl. Manag. 1970 -V.34 - #3 - P.647-648.

507. Romero M.F., and Boron W.F. Electrogenic Na+/HCOi" cotransporters: cloning and physiology. // Annu Rev. Physiol. 1999 - V.61 - P.699-723.

508. Rompp A., Klemm O., Fricke W., Frank H. Haloacetates in fog and rain. // Environ. Sci. Technol. -2001. V.35. - #7. - P.1294-8.

509. Rosenberg P.A., Li Y., Ali S., Altiok N., Back S.A., Volpe J.J. Intracellular redox state determines whether nitric oxide is toxic or protective to rat oligodendrocytes in culture. // J. Neurochem. -1999. V.73. - #2. - P.476-484.

510. Roy (Shapira) A., Taitelman U., Bursztein S. Evaluation of the role of ionized calcium in sodium fluoroacetate ("1080") poisoning. // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1980 -V.56 -No.2 -P.216-220.

511. Roy (Shapira) A., Raikhlin E.B., Taitelman U., Hazani A. Acute poisoning due to fluoroacetate and fluoroacetamide. //Harefuah. 1982 - Y.102 - #12 -P.523-524, 551.

512. Rubin R.P. The role of energy metabolism in calcium-evoked secretion from the adrenal medulla // J. Physiol. 1970. - V.206. - #1. -P.181-192.

513. Ruiz L.M., Bedoya G., Salazar J. Garcia D.O., Patino P.J. Dexamethasone Inhibits Apoptosis of Human Neutrophils Induced by Reactive Oxygen Species // Inflammation. 2002. - V.26. - #5. -P.215-222.

514. Ryle PR, Chakraborty J, Thomson AD. The effect of methylene blue on the hepatocellular redox state and liver lipid content during chronic ethanol feeding in the rat. // Biochem J.- 1985.- V.232.-No.3.- P.877-882.

515. Sahai S. Glutaminase in human platelets. // Clin. Chim. Acta. 1983. - V.127. - #2. - P.197-203.

516. Saito T. Glucose-supported oxidative metabolism and evoked potentials are sensitive to fluoroacetate, an inhibitor of glial tricarboxylic acid cycle in the olfactory cortex slice. // Brain Res. 1990.- V.535.- No.2. - P.205-213.

517. Saitou E. Studies of the effects of fluoroacetate on ameloblasts in rat incisor. // Bull. Tokyo Med. Dent. Univ. 1984,-V.31.- No.l.-P.33-50.

518. Salvemini D., Currie M.G., Mollace V. Nitric oxide-mediated cyclooxygenase activation. A key event in the antiplatelet effects of nitrovasodilators. // J. Clin. Invest. 1996. - V.97. - #11. — P.2562-2568.

519. Santhakumar V., Wallner M., Otis T.S. Ethanol acts directly on extrasynaptic subtypes of GABAA receptors to increase tonic inhibition. // Alcohol. 2007. - V.41. - #3. - P.211-21.

520. Sastrasinh S., Sastrasinh M. Glutamine transport in submitochondrial particles // Am. J. Physiol. -1989. V.257.- P.F1050-F1058.

521. Scheel-Toellner D., Wang K., Assi L.K. et al. Clustering of death receptors in lipid rafts initiates neutrophil spontaneous apoptosis. // Biochem. Soc. Trans. — 2004. — V.32. P.679-681

522. Schoolwerth A.C., LaNoue K.F. Transport of metabolic substrates in renal mitochondria. // Annu. Rev. Physiol. 1985.- V.47.- P. 143-171.

523. Schousboe A., Sonnewald U., Waagepetersen H.S. Differential roles of alanine in GABAergic and glutamatergic neurons // Neurochem Int. 2003 - V.43. - #4-5. - P.311-315.

524. Schrock H., Chu C.J., Goldstein L. Glutamine release from hindlimb and uptake by kidney in the acutely acidotic rat. // Biochem. J. 1980. - V.188. - P.557-560.

525. Schultz R.A., Coetzer J.A., Kellerman T.S., Naude T.W. Observations on the clinical, cardiac and histopathological effects of fluoroacetate in sheep // Onderstepoort. J. Vet. Res. 1982 - V.49 -No.4 - P.237-245.

526. Schurr A., Payne R.S., Miller J.J., Rigor B.M. Glia are the main source of lactate utilized by neurons for recovery of function posthypoxia. // Brain Res. 1997 - V.774 - #1-2 - P.221-224.

527. Seshagiri P.B. and Bavister B.D. Glucose and phosphate inhibit respiration and oxidative metabolism in cultured hamster eight-cell embryos: evidence for the "crabtree effect". // Mol. Reprod. Dev. 1991.- V.30.- No.2. - P.105-111.

528. Shapiro R.A., Morehouse R.F., and Curthoys N.P. Inhibition by glutamate of phosphate-dependent glutaminase of rat kidney. // Biochem J. 1982.- V.207.- P.561-566.

529. Shapiro R. A simpler origin for life. // Sci. Amer. 2007. - V.296. - #6. - P.46-53.

530. Sherley M. The traditional categories of fluoroacetate poisoning signs and symptoms belie substantial underlying similarities. // Toxicol. Lett. 2004. - V. 151. - P.399-406.

531. Shinoda K., Mitsumori K., Uneyama C. and Uehara M. Induction and inhibition of testicular germ cell apoptosis by fluoroacetate in rats. // Arch. Toxicol. 2000.- V.74.- No.l.- P.33-39.

532. Siess W. Molecular mechanisms of platelet activation. // Physiol. Rev. 1989. - V.69. - №1. - P.58 -178.

533. Siess W., Grundberg B., Luber K. Functional relationship between cyclic AMP-dependent protein phosphorylation and platelet inhibition // Mechanisms of platelet activation and control. New York: Plenum Press, 1993. - P.229-235.

534. Simonnet H., Gauthier C. and Pellet M.V. Effect of monofluoroacetate on renal H+ excretion in the rat. //Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. 1979.- V.239. - No.l. - P. 148-154.

535. Simonyan R.A., Jimenez M., Ceddia R.B., Giacobino J.P., Muzzin P., Skulachev V.P. Cold-induced changes in the energy coupling and the UCP3 level in rodent skeletal muscles. // Biochim. Biophys. Acta. 2001. - V. 1505. - #2-3. - P.271-279.

536. Simonyan R.A., Skulachev V.P. Thermoregulatory uncoupling in heart muscle mitochondria: involvement of the ATP/ADP antiporter and uncoupling protein. // FEBS Lett. 1998. — V.436. -#1. -P.81-84.

537. Skulachev V.P. Uncoupling: new approaches to an old problem of bioenergetics. // Biochim. Biophys. Acta. 1998. - V.1363. - #2. -P.100-124.

538. Slater A.F., Nobel C.S., Maellaro E., Bustamante J, Kimland M, and Orrenius S. Nitrone spin traps and a nitroxide antioxidant inhibit a common pathway of thymocyte apoptosis. // Biochem. J. — 1995. V.306. - #3. -P.771-778.

539. Smith J.C., Morison D.F., Ellenberger H.H., Otto M.R., and Feldman J.L. Brain stem projections to the major respiratory neuron populations in the medulla of the cat. // J. Comp. Neurol. 1989.-V.281. - P.69-96.

540. Smith Q.R. Transport of Glutamate and Other Amino Acids at the Blood-Brain Barrier // J. Nutrition. 2000. - V.130. - #4,- P.1016S-1022S.

541. Soiefer A.I., Kostyniak P.T. Purification of a fluoroacetate specific defluorinase from mouse liver cytosol // J. Biol. Chem. 1984. - V.259. - No. 17. - P. 10787-10792.

542. Song P, Zhao ZQ. The involvement of glial cells in the development of morphine tolerance // Neurosci Res. 2001 - V.39 - #3 -P.281-286.

543. Spoerke D.G., Smolinske S.C., Wruk K.M., Rumack B.H. Infrequently used antidotes: indications and availability // Vet.Hum.Toxicol.- 1986,- V.28.- No.l.- P.69-75.

544. Squier M.K., Sehnert A.J., Cohen J.J. Apoptosis in leukocytes // J. Leukocyte Biol. 1995. -V.57. - #1. - P.2-10.

545. Squires E.J., Hall D.E., Brosnan J.T. Arterovenous differences for amino acids and lactate across kidneys of normal and acidic rats. // Biochem. J.- 1976.- V.160.- P.125-128.

546. Stadtman E.R. The net enzymatic synthesis of acetyl coenzyme A. // J. Biol. Chem. 1952. — V.196. - #2. - P.535-546.

547. Stahlmann R., Lode H. Fluoroquinolones in the elderly: safety considerations. // Drugs Aging. -2003. V.20. - #4. - P.289-302.

548. Steinberg G.K., Saleh J., Kunis D. Delayed treatment with dextromethorphan and dextrorphan reduces cerebral damage after transient focal ischemia. // Neurosci Lett. — 1988. V.89 - #2 -P.193-197.

549. Steinberg G.K., Saleh J., Kunis D., DeLaPaz R., Zarnegar R. Protective effect of N-methyl-D-aspartate antagonists after focal cerebral ischemia in rabbits. // Stroke 1989 - V.20 - #9 - P. 12471252.

550. Stewart G.G., Abbs E.T., Roberts D.J. Biochemical effects of fluoroacetate administration in rat brain, heart and blood// Biochem. Pharmacol. 1970 - V.19 - No.6 - P.1861-1866.

551. Stringer J.L., Aribi A.M. Effects of glial toxins on extracellular acidification in the hippocampal CA1 region in vivo. // Epilepsy Res.- 2003,- V.54.- No.2-3.- P.163-170.

552. Suarez I., Bodega G., Fernandez B. Glutamine synthetase in brain: effect of ammonia. // Neurochem. Int. 2002,- V.41.- No.2-3.- P.123-142.

553. Sullivan J.L., Smith F.A. and Garman R.H. Effects of fluoroacetate on the testis of the rat. // J. Reprod. Fertil. 1979.- V.56.- No.l.- P.201-207.

554. Sun I.L., Sun E.E., Crane F.L., Morre D.J., Lindgren A., Low H. Requirement for coenzyme Q in plasma membrane electron transport. // Proc. Natl.Acad. Sci. USA. 1992. - V.89. - #23. -P.l 1126-11130.

555. Sun P., Borowitz J.L., Kanthasamy A.G., Kane M.D., Gunasekar P.G., Isom G.E. Antagonism of cyanide toxicity by isosorbide dinitrate: possible role of nitric oxide. // Toxicology. 1995 - V.104. -#1-3.-P.105-111.

556. Swanson R.A. and Graham S.H. Fluorocitrate and fluoroacetate effects on astrocyte metabolism in vitro. // Brain Res. 1994. - V. 664. - No. 1-2. - P.94-100.

557. Szasz G., Gruber W., Bemt E. Creatine kinase in serum: 1. Determination of optimum reaction conditions // Clinical Chemistry. 1976. - V.22.- P.650-656.

558. Szerb J.C., Issekutz B. Increase in the stimulation-induced overflow of glutamate by fluoroacetate, a selective inhibitor of the glial tricarboxylic cycle. // Brain Res. -1987.- V.410.- No.l.- P.l 16-120.

559. Szerb J.C., O'Regan P.A. Increase in the stimulation-induced overflow of excitatory amino acids from hippocampal slices: interaction between low glucose concentration and fluoroacetate. // Neurosci. Lett. 1988.- V.86.- No.2.- 207-212.

560. Szerb J.C., Redondo I.M. Astrocytes and the entry of circulating ammonia into the brain: effect of fluoroacetate. // Metab. Brain Dis. 1993.- V.8.- No.4.- P.217-34.

561. Szutowicz A., Lysiak W. Regional and subcellular distribution of ATP-citrate lyase and other enzymes of acetyl-CoA metabolism in rat brain. // J. Ncurochem. 1980. - V.35. - #4. - P.775-85.

562. Tabrizi S.J., Schapira A.H. Secondary abnormalities of mitochondrial DNA associated with neurodegeneration. // Biochem. Soc. Symp. 1999. - V.66. - P.99-110.

563. Taitelman U., Roy (Shapira) A., Raikhlin-Eisenkraft B. and Hoffer E. The effect of monoacetin and calcium chloride on acid-base balance and survival in experimental sodium fluoroacetate poisoning // Arch. Toxicol. Suppl. 1983a - V.6 - P.222-227.

564. Taitelman U., Roy (Shapira) A. and Hoffer E. Fluoroacetamide poisoning in man: the role of ionized calcium // Arch. Toxicol. Suppl. 1983b - V.6 - P.228-231.

565. Tan A.S., Berridge M.V. Distinct trans-plasma membrane redox pathways reduce cell-impermeable dyes in HeLa cells. // Redox Rep. 2004. - V.9. - #6. - P.302-306.

566. Tannen R.L. Renal ammonia production and excretion // In: Handbook of Renal Physiology. Bethesda, MD: Am. Physiol. Soc. 1992 - Sect.8. - V.I - Chapt.23. - p.1017-1059.

567. Taylor W.M., D'Costa M., Angel A. and Halperin M.L. Insulin-like effects of fluoroacetate on lipolysis and lipogenesis in adipose tissue. // Can. J. Biochem. — 1977.- V.55.- No.9 P.982-987.

568. Tecle B. and Casida J.E. Enzymatic defluorination and metabolism of fluoroacetate, fluoroacetamide, fluoroethanol, and (-)-erythro-fluorocitrate in rats and mice examined by 19F and 13C NMR. // Chem. Res. Toxicol. 1989.- V.2.- No.6.- P.429-435.

569. Teixeira P., Menezes S. Methylene blue sensitizes E. coli cells to X-rays. // Int. J. Radiat. Biol. -1996. V.69. - #3. - P.345-350.

570. Temple W.A., Edwards J.R. Toxie ducks — 1080 residues in game birds: an exercise in applied toxicology. //Vet. Hum. Toxicol. 1985 - V.27 - #1 -P.20-22.

571. Teplova V.V., Zinchenko V.P., Evtodienko Yu.V. The Role of membrane-bound calcium in inhibition of oxidative phosphorylation in Ehrlich ascites tumor cells // Studia Biophysica 1985. -V. 109. - P.65-72.

572. Thorstensen K., Romslo I. Uptake of iron from transferrin by isolated rat hepatocytes. A redox-mediated plasma membrane process? // J. Biol. Chem. 1988. - V.263. - #18. - P.8844-8850.

573. Thorstensen K., Aisen P. Release of iron from diferric transferrin in the presence of rat liver plasma membranes: no evidence of a plasma membrane diferric transferrin reductase. // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - V.1052. - #1. -P.29-35.

574. Tisdale M.J., Brennan R.A. Role of fluroacetate in the toxicity of 2-fluroethylnitrosoureas. // Biochem. Pharmacol. 1985. - V.34. - No.l8.-P.3323-3327.

575. Tong W.-H., Rouault T.A. Metabolic regulation of citrate and iron by aconitases: role of iron-sulfur cluster biogenesis. // BioMetals 2007. - V.20. - #3-4. - P.549-564.

576. Tourtelotte W.W. Coon J.M. Synergistic effect of sodium acetate and ethanole in antagonizing sodium fluoroacetate poisoning in mice. // Feder. Proceed.- 1949. V.8.- P.339-350.

577. Trabes J., Rason N. and Avrahami E. Computed tomography demonstration of brain damage due to acute sodium monofluoroacetate poisoning. // J. Toxicol. Clin. Toxicol. 1983 - V.20 - No.l -P.85-92.

578. Trinder P. Determination of glucose in blood using glucose oxidase with an alternative oxygen acceptor // Ann. Clin. Biochem. 1969.- V.6. - P.24-25.

579. Tsacopoulos M., Evequoz-Mercier V., Perrottet P., Buchner E. Honeybee retinal glial cells transform glucose and supply the neurons with metabolic substrate. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1988. V.85. -№22 - P.8727-8731.

580. Tsacopoulos M., Magistretti P.J. Metabolic Coupling between Glia and Neurons // J. Neuroscience 1996.-V.76.-#3.-P.877-885. ~~ -

581. Tsacopoulos M. Metabolic signaling between neurons and glial cells: a short review. // J. Physiol. Paris.- 2002.- V.96.- No.3-4. P.283-288.

582. Turner A.J., Whittle S.R. Biochemical dissection of the gamma-aminobutyrate synapse // Biochem. J. 1983 - V.209 -P.29-41.

583. Twigg L.E., Mead R.J. and King D.R. Metabolism of fluoroacetate in the skink (Tiliqua rugosa) and the rat (Rattus norvégiens). // Aust. J. Biol. Res. -1986. V.39 - No.l - P. 1-15.

584. Twigg L.E. and King D.R. Tolerance to sodium fluoroacetate in some Australian birds. // Aust. Wildl. Res. 1989. - V.16. P. 49-62.

585. Ulugol A., Dost T., Dokmeci D., Akpolat M., Karadag C.H., Dokmeci I. Involvement of NMD A receptors and nitric oxide in the thermoregulatory effect of morphine in mice. // J. Neural. Transm. -2000. V.107. - #5. - P.515-521.

586. Ulvik R., Romslo I. Studies on the mobilization of iron from ferritin by isolated rat liver mitochondria. // Biochim. Biophys. Acta. 1979. - V.588. - #2. - P.256-271.

587. Van Abel M., Hoenderop J.G., Bindels RJ. The epithelial calcium channels TRPV5 and TRPV6: regulation and implications for disease. // Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 2005. — V.371. -P.295-306,

588. Van de Graaf S.F., Chang Q., Mensenkamp A.R., Hoenderop J.G., Bindels RJ. Direct interaction with Rablla targets the epithelial Ca2+ channels TRPV5 and TRPV6 to the plasma membrane. // Mol. Cell Biol. 2006. - V.26. -P.3-12.

589. Van den Pol A.N., Wuarin J.P., Dudek F.E. Glutamate, the dominant excitatory transmitter in neuroendocrine regulation. // Science 1990. - V.250. - #4985. - P.1276-1278.

590. Van Noorden C.J.F. and Vogels I.M.C. Cytophotometric analysis of reaction rates of succinate and lactate dehydrogenase activity in rat liver, heart muscle and tracheal epithelium // Histochem. J. -1989.-V.21, #9-10.-P.575-583.

591. Vasta V., Meacci E., Farnararo M., Bruni P. Glutamine transport and enzymatic activities involved in glutaminolysis in human platelets. // Biochim. Biophys. Acta. 1995. - V.1243. - #1. —P.43-8.

592. Vernadakis, A. Glia-neuron intercommunications and synaptic plasticity. // Prog. Neurobiol. — 1996 -V.49-P. 185-214.

593. Vickery B., Vickery M.L. and Ashu J.T. Analysis of plants for fluoroacetic acid. // Phytochem. -1973.- V.12.- P.145-147.

594. Villafranca J.J. and Platus E. Fluorocitrate inhibition of aconitase. Reversibility of the inactivation. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1973,- V.55.- No.4.- P. 1197-1207.

595. Visarius T.M., Stucki J.W., Lauterburg B.H. Stimulation of respiration by methylene blue in rat livermitochondfiaT//FEBS Lett.-1997. V:412r^#l. -P.157-160.-----

596. Visarius T.M., Stucki J.W., Lauterburg B.H. Inhibition and stimulation of long-chain fatty acid oxidation by chloroacetaldehyde and methylene blue in rats. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999. -V.289. - #2. - P.820-824.

597. Vogel R, Wiesinger H, Hamprecht B, Dringen R. The regeneration of reduced glutathione in rat forebrain mitochondria identifies metabolic pathways providing the NADPH required. // Neurosci Lett. 1999 V.275 - #2 - P.97-100.

598. Waagepetersen H.S., Sonnewald U., Larsson O.M., Schousboe A. A Possible Role of Alanine for Ammonia Transfer Between Astrocytes and Glutamatergic Neurons // J. Neurochem. — 2000. -V.75. P.471—479.

599. Waagepetersen H.S., Qu H., Schousboe A., Sonnewald U. Elucidation of the quantitative significance of pyruvate carboxylation in cultured cerebellar neurons and astrocytes. // J. Neurosci. Res. -2001. V.66. - #5. -P.763-70.

600. Wang II., Shah V., Lanks K.W. Use of oxidizing dyes in combination with 2-cyanocinnamic acid to enhance hyperthermic cytotoxicity in L929 cells. // Cancer Res. 1987. — V.47. - #13. — P.3341-3343.

601. Wang S.L., Rice S.A., Serra M.T. and Gross B. Purification and identification of rat hepatic cytosolic enzymes responsible for defluorination of methoxyflurane and fluoroacetate. // Drug Metab. Dispos. 1986.- V.14. No.4. -P.392-398.

602. Waniewski R.A. and Martin D.L. Preferential utilization of acetate by astrocytes is attributable to transport. // J. Neurosci. 1998,- V.18.- No.14.- P.5225-33.

603. Ward C., I. Dransfield, E.R. Chilvers, C. Haslett, A.G. Rossi. Pharmacological manipulation of granulocyte apoptosis: potential therapeutic targets. // Trends Pharmacol. Sci. 1999. - V.20. -P.503-509.

604. Watford M. Functional glycerol kinase activity and the possibility of a major role for glyceroneogenesis in mammalian skeletal muscle. // Nutr. Rev. 2000. - V.58. - #5. - P. 145-148.

605. Watt J.M., Breyer-Brandwijk M.G. The medicinal and poisonous plants of Southern and Eastern Africa. Edinburgh/London: E. and S. Livingstone, 1962. - 378 p.

606. Weisshaar D., Gossrau E., Faderl B. Normal ranges of alpha-HBDH, LDH, AP, and LAP as measured with substrate-optimated test charges. [Article in German] // Med. Welt. 1975. - V.26. -#9. - P.387-392.

607. Welbourne T., Nissim I. Regulation of mitochondrial glutamine/glutamate metabolism by glutamate transport: studies with 15N. //Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 2001,- V.280.-N.5.- P.C1151-C1159

608. Westergaard N., Sonnewald U., Unsgard G., Peng L., Hertz L., and Schousboe A. Uptake, release and metabolism of citrate in neurons and astrocytes in primary cultures. // J. Neurochem. -1994 -V.62 P.1727-1733.

609. Westergaard N., Banke T., Wahl P., Sonnewald U., and Schousboe A. Citrate modulates the regulation of Zn2+ of NMD A receptor mediated channel current neurotransmitter release. // Proc. NatlrAcad. Sci. USA7- 1995 V.92-P.3367-3370.----------------------

610. Whitten J.W., Murray C.R. The chemistry and pathology of Georgina river poisoning // Aust. Vet. J. 1963 - V.39 - P.168-173.

611. Wiedemann P., Szinicz L., and Weger N. Biochemical aspccts of fluoroacetate poisoning in isolated rat kidney tubules: reversibility of inhibition of gluconeogenesis by a-ketoglutarate. // Arch. Toxicol. Suppl. 1983 - V.6 - P.232-237.

612. Williamson J.R. Glycolytic control mechanisms. II. Kinetics of intermediate changes during the aerobic-anoxic transition in perfused rat heart. // J. Biol. Chem.- 1966.- V.241.- P.5026-5036.

613. Williamson J.R. Glycolytic control mechanisms. III. Effects of iodoacetamide and fluoroacetate on glucose metabolism in the perfused rat heart // J. Biol. Chem. 1967 - V.242 - No. 19 - P.4476-4485.

614. Willoughby J.O., Mackenzie L., Broberg M., Thoren A.E., Medvedev A., Sims N.R., Nilsson M. Fluorocitrate-mediated astroglial dysfunction causes seizures // J. Neurosci. Res. 2003 - V.74. -#1.-P.160-166.

615. Winkler B.S., De Santis N., Solomon F. Multiple NADPH-producing pathways control glutathione (GSH) content in retina. // Exp. Eye Res. 1986. - V.43. -P.829-847.

616. Wollemann M., Feuer G. Formation of fluoroacetyl-coenzyme A and fluoroacetylcholine from fluoroacetic acid and fluorocitric acid in brain extracts. [Article in German] // Acta Physiol. Hung. -1957.-V.il. -#2.-P.165-172.

617. Wright P.A., Knepper M. A. Glutamate dehydrogenase activities in microdissected rat nephron segments: effects of acid-base loading. // Am. J. Physiol. 1990a. - V.259. - P.F53-F59.

618. Wright P.A., Knepper M.A. Phosphate-dependent glutaminase activity in rat renal cortical and medullary tubule segments. // Am. J. Physiol.- 1990b.- V.259.- P.F961-F970.

619. Wu G., Morris S.M. Arginine metabolism : nitric oxide and beyond // Biochem. J. 1998. - V.336. — P.1-17.

620. Wu G., Haynes T.E., Li H., Meininger C.J. Glutamine metabolism in endothelial cells: ornithine synthesis from glutamine via pyrroline-5-carboxylate synthase. // Comp. Biochem. Physiol. A: Mol. Integr. Physiol. -2000. -V. 126. #1. - P. 115-123.

621. Wu G., Haynes T.E., Li H., Yan W., Meininger C.J. Glutamine metabolism to glucosamine is necessary for glutamine inhibition of endothelial nitric oxide synthesis // Biochem. J. 2001. -V.353. - P.245-252.

622. Xiang J., Ennis S.R., Abdelkarim G.E., Fujisawa M., Kawai N., Keep R.F. Glutamine transport at the blood-brain and blood-cerebrospinal fluid barriers // Neurochem Int. 2003 - V.43. - #4-5. -P.279-88.

623. Xiong Z.Q., Stringer J.L. Astrocytic regulation of the recovery of extracellular potassium after seizures in vivo. // Eur. J. Neurosci. 1999 - V.l 1.- #5.- P. 1677-84.

624. Yamada K., Senzaki K., Komori Y., Nikai T., Sugihara H., Nabeshima T. Changes in extracellular nitrite and nitrate levels after inhibition of glial metabolism with fluorocitrate. // Brain Res. 1997 -V.l62 - #(1-2) - P.72-8.

625. Yamaguchi M., Hatefi Y. Energy-transducing nicotinamide nucleotide transhydrogenase. Nucleotide binding properties of the purified enzyme and proteolytic fragments // J. Biol. Chem. -1993. V.268. - #24.-P.17871-17877./

626. Yang Z., Ming X.F. Endothelial arginase: a new target in atherosclerosis. // Curr Hypertens Rep. — 2006. V.8. - #1. — P.54-59.

627. Ye Z.C., Sontheimer H. Modulation of glial glutamate transport through cell interactions with the extracellular matrix. // Int. J. Dev. Neurosci. 2002. - V.20. - #3-5. - P.209-17.

628. Yeh K.H. and Cheng A.L. Acute confusion induced by a high-dose infusion of 5-fluorouracil and folinic acid. // J. Formos. Med. Assoc. 1994.- V.93.-No.8.- P.721-723.

629. Yu H.L., Giammarco R., Goldstein M.B., Stinebaugh D.J. and Halperin M.L. Stimulation of ammonia production and excretion in the rabbit by inorganic phosphate. Study of control mechanisms. // J. Clin. Invest. 1976. - V.58.- No.3.- P.557-564.

630. Yudkoff M., Daikhin Y., Nissim I., Lazarow A., Nissim I. Brain amino acid metabolism and ketosis // J. Neurosci. Res. 2001. - V.66. - #2. - P.272-281.

631. Zaheer N., Tewari K.K., Krishnan P.S. Mitochondrial forms of glucose 6-phosphate dehydrogenase and 6-phosphogluconic acid dehydrogenase in rat liver // Arch. Biochem. Biophys. 1967.-V. 120. -#l.-P.22-34.

632. Zeevalk GD, Nicklas WJ. Contribution of glial metabolism to neuronal damage caused by partial inhibition of energy metabolism in retina. // Exp Eye Res. 1997.- V.65.- #3.- P.397-405.

633. Zheng X.F., Kwan C.Y., Daniel E.E. beta-Adrenoceptor activates endothelium-dependent release of nitric oxide in rat aorta. // Zhongguo Yao Li Xue Bao. 1995. - V.16. - #5. - P.385-390.

634. Zhou J., Kauffman F.C., Ballow C.H., Thurman R.G. Inhibition of mixed-function oxidation in perfused rat liver by fluoroacetate treatment // Biochem. Pharmacol. 1984 - V.33 - #2 — P.319-323.

635. Zieve L., Lyftogt C. and Draves K. Toxicity of a fatty acid and ammonia: interactions with hypoglycemia and Krebs cycle inhibition. // J. Lab. Clin. Med. 1983.- V.101.- No76.-T.930-939.

Информация о работе

Гончаров, Николай Васильевич
доктора биологических наук
Санкт-Петербург, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Механизмы токсического действия фторацетата и экспериментальная терапия острых отравлений - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы