Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Механизмы иммобилизации ферментов на эмали зубов и их действия в полости рта

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Механизмы иммобилизации ферментов на эмали зубов и их действия в полости рта"

На правах рукописи УДК 612.051.1:612.31.

РГб од

-с *. ; .с

ЖИТКОВ МИХАИЛ ЮРЬЕВИЧ

МЕХАНИЗМЫ ИММОБИЛИЗАЦИИ ФЕРМЕНТОВ НА ЭМАЛИ ЗУБОВ И ИХ ДЕЙСТВИЯ В ПОЛОСТИ РТА

(03.00.04 -Биохимия)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2000

Работа выполнена в Центральном научно-исследовательском институте стоматологии МЗ РФ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор В.К.Леонтьев Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Ю.А.Петрович доктор медицинских наук А.Г.Колесник

Ведущее учреждение: Институт питания РАМН

диссертационного совета Д.074.05.10 при Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова по адресу: 119 881, Москва, Б.Пироговская ул., 2-6

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова по адресу: Москва, Зубовская пл.,1

Автореферат разослан "_"__2000 г.

Защита состоится:

часов на заседании

Ученый секретарь диссертационного совета: Кандидат медицинских наук, доцент А.Ю.Миронов

р 6 61, ЦО

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Кариес зубов является одной из основных проблем в стоматологии. Уменьшить заболеваемость кариесом, а также лечить его - значит содействовать здоровью полости рта и зубов, важному элементу здоровья вообще.

Согласно современным воззрениям, увеличение содержания и снижение растворимости минерального вещества эмали, апатита, повышает устойчивость зубов к кариесу (Яковлева В.И. с соавт., 1995).

Ключевым ферментом в процессах минерализации является щелочная фосфатаза (МсСотЬ К.В. с соавт., 1979). В функционировании ряда биологически активных соединений большое значение имеет их способность к адсорбции на неорганическом веществе костей и зубов - апатите. Щелочная фосфатаза способна к иммобилизации на поверхности эмали (Леонтьев В.К, с соавт., 1992; МсСотЬ К.В. с соавт., 1979) и, возможно, в костной ткани (Асфандияров Р.И. с соавт., 1983), однако механизм и биологическое значение этого явления неизвестны. Решение этой проблемы позволит лучше понять природу процессов минерализации тканей и будет способствовать совершенствованию методов борьбы как с кариесом, так и с заболеваниями костной ткани.

Цель работы. Изучение механизмов иммобилизации щелочной фосфатазы на эмали зубов и возможностей его использования для профилактики и лечения кариеса зубов.

Задачи исследования.

1. Получение количественных данных о скорости взаимодействия с апатитом и мелом щелочной фосфатазы, общего белка и альфа-амилазы из смешанной слюны и сыворотки крови.

2. Изучение некоторых свойств щелочной фосфатазы, иммобилизованной на апатите и эмали зубов: константы Михаэлиса, чувствительности к ингибиторам.

3. Установление возможного механизма взаимодействия щелочной фосфатазы с апатитом.

4. Определение влияния иммобилизованной щелочной фосфатазы на скорость реминерализации поверхности апатита.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное количественное исследование кинетики адсорбции на апатите и карбонате кальция щелочной фосфатазы и альфа-амилазы из слюны и сыворотки крови, показавшее, что быстрее всего происходит адсорбция щелочной фосфатазы на апатите. Установлено, что по скорости взаимодействия с апатитом щелочная фосфатаза сыворотки однородна, а фермент слюны может быть разделен на две фракции: "быструю" и "медленную". Предложен механизм иммобилизации щелочной фосфатазы на апатите путем двухстадийной последовательной реакции,

определены константы скоростей некоторых стадий для ферментов слюны и сыворотки крови. Обнаружено, что продукты первой и второй стадий взаимодействия фосфатазы с апатитом различаются по величине константы Михаэлиса, что дает возможность определять иммобилизованный на апатите фермент в присутствие неиммобилизованного.

Обнаружен неизвестный ранее механизм биологической минерализации под действием иммобилизованной щелочной фосфатазы - ферментативная минерализация.

Практическая ценность. Результаты исследования механизмов регуляции иммобилизации щелочной фосфатазы и ее активности открывают перспективы в разработке новых направлений в профилактике и лечении кариеса зубов, оптимизации процессов заживления повреждений костей и биоинтеграции имплантатов, а также лечения заболеваний костной системы. Разработанные методы определения активности иммобилизованных ферментов позволяют расширить возможности изучения биохимических аспектов жизнедеятельности минерализованных тканей, в первую очередь механизмов кариесрезисгентности.

Апробация работы. По материалам работы опубликовано 4 научных статьи.

Апробация диссертационной работы проведена 21.03.2000 на совместном заседании сотрудников отделения кариесологии и эндодонтии, научно-поликлинического, профилактики, общей патологии, функциональной

диагностики Центрального научно-исследовательского института стоматологии.

Положения, выносимые на защиту.

1. В минерализованных тканях может происходить иммобилизация щелочной фосфатазы путем избирательной хемосорбции на апатите, составляющая особенность ее взаимодействия с этими тканями.

2. Иммобилизованная щелочная фосфатаза увеличивает скорость процессов реминерализации поверхности апатита под действием ионов кальция и фосфата

3. Особенностью функционирования иммобилизованной щелочной фосфатазы является непосредственное включения фосфата из органических соединений в состав апатита.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 172 страницах машинописного текста, построена по традиционному плану, содержит 11 таблиц и 7 рисунков. Список литературы содержит 264 наименования, в том числе 118 иностранных работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Сыворотка крови человека была получена от 33 практически здоровых доноров - пациентов ЦНИИС. Материал до исследования сохраняли при -15°С.

Слюну собирали у пациентов и персонала отделения профилактики ЦНИИС, всего 33 человека. Забор проводили без стимуляции утром натощак до чистки зубов в соответствии с указаниями (Сунцов В.Г., 1972; КаЫт 2.11. А., УаакоЬ Н.В., 1991; Коопиящкаелу 8. с соавт., 1993). Отделения осадка не проводили. Материал использовали в течение 0,5-1 часа после отбора, сохраняя при комнатной температуре.

Зубы, удаленные по ортодонтическим показаниям в хирургическом отделении ЦНИИС (всего 6 зубов), сохраняли при -15 °С. После промывки водой и удаления мягких тканей их покрывали акрилатным полимером "Протакрил-М", оставляя на эмали окно диаметром 3 мм.

Гидроксиапатит получали из лаборатории тонкого неорганического синтеза МХТИ им. Д.И.Менделеева в виде порошка и блоков. Блоки в виде дисков диаметром 11 мм и толщиной 3 мм покрывали полимером "Протакрил-М", оставляя свободной одну из поверхностей.

В работе использовали порошок мела (кальцит) производства фирмы БтйИкНпе ВеасЬет.

Определение общего белка проводили биуретовым методом. Щелочную фосфатазу определяли по скорости гидролиза п-нитрофенилфосфата наборами реактивов и по методике фирмы ЛАХЕМА. Иммобилизованный фермент определяли по разработанным нами методикам с использованием тех же

наборов реактивов. Активность альфа-амилазы измеряли методом с хромогенным субстратом наборами реактивов и по методике этой же фирмы.

Для получения кинетических кривых взаимодействия компонентов биожидкостей с порошками мела и апатита к пробам жидкости, проинкубированным при выбранной для исследования температуре, добавляли порошок сорбента из расчета 80 г/л. После инкубации при этой же температуре сорбент удаляли центрифугированием 10 мин при 3000 об/мин и измеряли содержание в супернатанте общего белка, альфа-амилазы и щелочной фосфатазы. В осадке сорбента определяли активность иммобилизованной щелочной фосфатазы.

Кинетику взаимодействия щелочной фосфатазы слюны с гидроксилапагитом исследовали также путем измерения активности и константы Михаэлиса фермента на поверхности блоков апатита после их инкубации в слюне при 37°С.

Для изучения влияние ингибиторов на активность щелочной фосфатазы, их растворяли в буферном растворе из наборов реактивов для определения фермента. Эти растворы использовали при определении активности по стандартной методике в качестве буфера.

Для определения скорости реминерализации блоки апатита обрабатывали 15 минут 0,1М ацетатным буфером, затем инкубировали 70 минут в слюне при 37°С. Реминерализацию поверхности апатита, покрытой искусственной

пелликулой, проводили 19ч при 37°С в растворах, приготовленных на 0,05М трис-малеатном буфере рН7,0, содержащем 0,5ммоль/л хлорида магния, Дополнительно вводили: в раствор "Са" - хлорид кальция (1ммоль/л), в раствор "Р" - дигидрофосфат калия (5ммоль/л), в раствор "Са-Р" хлорид кальция (1ммоль/л) и дигидрофосфат калия (5ммоль/л), в раствор "Са-ГФ" хлорид кальция (1ммоль/л) и глицерофосфат натрия (5ммоль/л). Состав поверхности апатита контролировали с помощью модифицированного нами метода кислотной биопсии (Леонтьев В.К., Дистель В.А., 1975). Содержание кальция в биоптате определяли методом с ГБОА наборами реактивов фирмы ЛАХЕМА, содержание фосфора - молибдат-ванадатным методом наборами реактивов этой же фирмы.

Статистическую обработку материала проводили согласно указаниям (УрбахВ.Ю, 1975).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При сравнении приведенных в таблице 1 констант скоростей адсорбции компонентов биожидкостсй на гидроксилапатите и меле можно заключить, что гидроксиапатит быстрее всего взаимодействует со щелочной фосфатазой слюны и сыворотки крови. Альфа-амилаза сорбируется существенно медленнее. Общий белок сыворотки сорбируется также медленно, в отличие от

белка слюны. Карбонат кальция является плохим сорбентом для щелочной фосфатазы и общего белка, как в слюне, так и в сыворотке.

Кинетика взаимодействия с гидроксилапатитом альфа-амилазы и сывороточных общего белка и щелочной фосфатазы соответствует первому порядку (Рисунок 1). Для общего белка слюны наблюдаются отклонения кинетики, вызваннью наличием в слюне нескольких типов белков, с разными скоростями взаимодействия с апатитом (Рисунок 2). Сходный вид кинетической кривой для фосфатазы указывает на возможную неоднородность фермента. При электрофоретическом разделении щелочной фосфатазы слюны было обнаружено, что после взаимодействия с апатитом в течение 30 минут, 2 наиболее подвижных фракции фермента перестали выявляться. Это подтверждает неоднородность фермента по скорости взаимодействия с апатитом. Фракция, названная нами "медленной", сорбируется с такой же скоростью, что и сывороточный фермент. "Быстрая" фракция отличается более высокой скоростью взаимодействия с апатитом и значительной электрофоретической подвижностью.

Значения энергии активации адсорбции щелочной фосфатазы на апатите -121,3 кДж/моль для сывороточного и 130,3 кДж/моль для слюнного фермента. Это указывает, что скорость адсорбции определяется скоростью химического взаимодействия фермента с апатитом, а не диффузии, поскольку в последнем случае энергия активации не превосходит 50 кДж/моль (Стромберг А.Г., Семченко Д.П, 1988).

и

Активность щелочной фосфатазы в процессе иммобилизации на гидроксилапатите изменяется сложным образом: рост активности сменяется падением, а затем повторным более медленным ростом. Такие изменения характерны для иммобилизации ферментов по механизму последовательной двухстадийной реакции. На первой стадии происходит адсорбция фермента без существенного изменения его каталитических свойств. На второй - происходит переход фермента в конформащпо, более прочно связанную с сорбентом, часто более стабильную, но менее активную (Полторак О.М., Пряхин А.Н., 1983). Для проверки применимости такого механизма для описания взаимодействия щелочной фосфатазы с апатитом, мы исследовали изменения константы Михаэлиса у фермента слюны в процессе его иммобилизации на апатите. Через 15 минут после начала осаждения фермента, константа Михаэлиса иммобилизованной щелочной фосфатазы была такой же, как и у растворенной в слюне (2,19±1,07 и 1,86±0,33 ммоль/л соответственно, р<0,05). Через 70 минут она повысилась до 4,73±2,60 ммоль/л (р<0,05). Эта величина близка (р<0,05) к константе Михаэлиса щелочной фосфатазы, иммобилизованной на эмали зубов (3,33±2,82 ммоль/л). Таким образом, в процессе иммобилизации щелочной фосфатазы слюны на апатите происходит изменение каталитических свойств фермента, согласующееся с постулируемым механизмом. При этом константа Михаэлиса фосфатазы слюны, адсорбированной на гидроксилапатите, приближается к константе щелочной фосфатазы,

иммобилизованной на эмали, указывая на близость и, возможно, идентичность этих ферментов.

Отсутствие значимых различий между иммобилизованной и неиммобилизованной щелочной фосфатазой по чувствительности к ингибиторам (таблица 2) указывает, что взаимодействующие с ними аллостерические центры молекулы фермента удалены от участков, взаимодействующих с апатитом. Изученные нами соединения взаимодействуют главным образом с гидрофобными и гидрофильными отрицательно заряженными участками полипептидной цепи фермента (Барсагян В.О., 1981, McComb R.B. с соавт., 1979). Поэтому их участие во взаимодействии с поверхностью апатита менее вероятно, чем несущих положительный заряд.

Изучение процессов реминерализации поверхности гидроксилапатита, покрытой искусственной пелликулой, показало следующее. В ходе реминерализации, как и следовало ожидать, происходит повышение скоростей выхода в биоптат кальция и фосфора и отношения этих скоростей (или численно равного ему отношения концентраций кальция и фосфора в биоптате), снизившихся при деминерализации. Наиболее высокие скорости выхода в биоптат кальция и фосфора и отношение Са/Р после реминерализации наблюдались в растворе "Са-ГФ", содержащем кальций и глицерофосфат. Эти величины становились почти такими же, как у интактной поверхности гидроксилапатита, указывая на высокую скорость реминерализации. Раствор

"Ca", содержащий только кальций, оказался наименее эффективным. Один только неорганический фосфат (в растворе «Р») действовал примерно так же, как и в сочетании с кальцием (в растворе «Са-Р»),

Специфический ингибитор щелочной фосфатазы, левамизол, не изменял характер реминерализации в растворе "Ca" (Таблица 3), из чего можно заключить, что в присутствии только ионов кальция иммобилизованная щелочная фосфатаза на реминерализацшо не влияет. Об этом же говорят и низкие коэффициенты корреляции с активностью фермента всех трех параметров биоптата в этом растворе (Таблица 4). Введение левамизола в раствор "Са-ГФ" приводит к снижению значений параметров биоптата и, следовательно, скорости ремииерализации, до тех же величин, что и в растворе "Ca". Очевидно, реминерализующее действие глицерофосфата опосредовано активностью иммобилизованной щелочной фосфатазы. В то же время, неферментативный гидролиз глицерофосфата и активность иных, кроме щелочной фосфатазы ферментов, не оказывают заметного влияния. Об этом же свидетельствуют и высокие положительные коэффициенты корреляции всех параметров биоптата с активностью иммобилизованной щелочной фосфатазы (Таблица 4).

В средах, содержащих неорганический фосфат, ведение левамизола приводит к резкому снижению скорости выхода фосфора в биоптат и, следовательно, включения фосфора в апатит (Таблица 3). Содержание кальция в биоптате изменяется слабо, поэтому отношение Са/Р возрастает. Вероятно,

иммобилизованный фермент ускоряет включение фосфата. На скорость включения кальция его влияние слабее и требует для своего проявления наличия соединений фосфора, происходит своего рода "увлечение" кальция в апатит вместе с фосфором.

В растворе "Са-Р", содержащем кальций и фосфат, корреляции между активностью иммобилизованной щелочной фосфатазы и составом биоптата выражены слабо (Таблица 4). Возможно, это связано с тем, что в этой системе скорость неферментативной, чистой физико-химической реминерализации может быть достаточно велика.

В растворе "Р", содержащем только фосфат, наблюдаются высокие положительные корреляции с активностью иммобилизованного фермента для скоростей выхода в биоптат и кальция и фосфора. Для отношения этих величин такая зависимость отсутствует. В то же время, но Т-критершо Стьюдента только скорость выхода фосфора достоверно снижается (р<0,01) от добавления левамизола.

Наблюдаются некоторые расхождения между результатами корреляционного анализа и анализа влияния левамизола — сравнительно высокие значения коэффициентов корреляции не всегда подтверждаются высокой достоверностью влияния ипгибирования щелочной фосфатазы и наоборот. Их можно объяснить как наличием нелинейных зависимостей (в этом случае коэффициент линейной корреляции дает заниженную оценку силы

связи), так и отклонениями распределений изучаемых величин от нормального (в этом случае критерий Стыодента занижает значимость различий).

Полученные результаты определенно указывают на иммобилизованную щелочную фосфатазу, как фермент, играющий важную роль в процессах реминерализации. Однако, механизм его действия сложен и зависит, в первую очередь, от концентрации и химической природы присутствующих в растворе соединений фосфора.

Таблица 1. Константы скорости взаимодействия компонентов биожидкостей с апатитом и мелом,

Сорбент: Мел Гидроксиапатит

Биожидкость: Компонент Слюна Сыворотка крови Слюна Сыворотка крови

Общий белок 14,4±34,1|} О.ОЗ^.бО4 18,3^:33,5° (после 30 мин сорбции) 3^,0"

Альфа-амилаза 4,2±3,31) 4,2±3,61)

Щелочная фосфатаза 7,0±9,51) 7,(№19,0° 435±49 (быстрая фракция) 104±1602) (медленная фракция) 68,6±18,92>

Примечание: величины с одинаковыми индексами различаются незначимо, р<0,01

Таблица 2. Активность щелочной фосфатазы слюны в присутствие ингибиторов в смешанной слюне, в слюне после частичной адсорбции

фермента и в адсорбированном на апатите состоянии (в % от контрольного значения без ингибитора), М+ш; р—0.01

Название вещества Концентрация, ммодь/л Слюна, до адсорбции Слюна, после адсорбции Адсорбированный фермент

Ь-аснарагиновая кислота 10 59,81-33,2 83,5±36,6 70,4+57,8

Ь-ГИСТИДИП 10 22,8+11,1 32,5±18,0 41,6+28,4

Кадаверин 10 62,8±33,8 62,0+32,0 81,5+53,4

Ь-лизин 10 54,5±19,9 53,5±30,5 57,2+45,4

БЬ-орнитин 10 74,3±43,3 66,0±33,4 48,8±41,5

Сегнетова соль 16 88,0+39,3 104,3±30,8 86,4±45,7

Ь-триптофан 5 67,6+25,7 82,5±22,6 93,8±31,7

Левамизол 0,7 52+12 — 58±12

Примечание: различия между величинами в каждой строке незначимы (р>0,1).

Таблица 3. Различия в составе биоптата поверхности апатита после реминерализации

Реминсрализующий раствор Чисю шмереаш Параметр в % от значения для раствора "Са", М+т; р=0,1

Скорость выхода кальция Скорость выхода фосфора Опюшенж Са/1

Реминерализация без левамизола

Раствор Са (1мМ Са) 14 100 100 100

Раствор Р (5мМ Р04) 10 137±37 123±22 108+12

Реминдмлизующий раствор Чпою измерений Параметр в % от значения для раствора "Са", М±т; р~0,1

Скорость выхода кальция Скорость выхода фосфора Отопкние СМ

Раствор Са-Р (1 мМ Са; 5ММГ04) 10 117+7 107+18 117±23

Раствор Са-ГФ (1 мМ Са; 5 мМ ГФ) 11 152±24 118±24 137±32

Реминерализация в присутствие 5 ммоль/л левамизола

Раствор Са (1мМ Са) 7 I06±18 99+29 108+27

Раствор Р(5мМР04) 6 99+62 64+17** 153±71

Раствор Са-Р (1 мМ Са; 5мМР04) 5 143+74 73±22* 185±66*

Раствор Са-ГФ (1 мМ Са; 5 мМ ГФ) 7 100+11"* 98+8 96+17

Примечание: уровень достоверности изменений, вызванных левамизолом:

*р<0,05, **р<0,01 (по Т-критерию Стьюдента).

Таблица 4. Коэффициенты корреляции абсолютных значений параметров биоптата после реминерализации с активностью иммобилизованной щелочной фосфатазы

Реминерализующий раствор Число измерений Параметр биоптата

Скорость выхода кальция Скорость выхода фосфора Отнятие кажцшУфосфср

"Са" 19 0,056 0,115 -0,173

"Р" 14 0,519* 0,562* -0,080

"Са-Р" 13 0,053 0,143 -0,237

"Са-ГФ" 16 0,766" 0,445* 0,373*

Общий коэффициент по всем растворам

62 0,383** 0,129 0,010

Примечание: * - уровень значимости коэффициента р<0,05 ** - уровень значимости коэффициента р<0,01

2 2,5 3 Время, ч

Рис.1. Кинетические кривые адсорбции на апатите общего белка (Ряд 1), альфа-амилазы (Ряд 2) и щелочной фосфатазы (Ряд 3) из сыворотки крови

0,8 1 Время, ч

1,2

1,4

; ♦ Ряд1 | О— Ряд2 ¡-^г-РядЗ

1,6

Рис. 2. Кинетические кривые адсорбции на апатите общего белка (Ряд 1), альфа-амилазы (Ряд 2) и щелочной фосфатазы (Ряд 3) из смешанной слюны

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что белки слюны и сыворотки крови по-разному адсорбируются мелом и апатитом. С мелом все константы скоростей взаимодействия имеют порядок 10"6 с'1. С апатитом альфа-амилаза и сывороточный общий белок взаимодействуют так же медленно, как и с мелом. В слюне часть белка реагирует с заметно более высокой скоростью. Щелочные фосфатазы и слюны и сыворотки крови сорбируются апатитом с константами скорости выше 10"5 с"1. Это позволяет говорить об избирательности адсорбции по отношению к щелочной фосфатазе.

2. Значения энергии активации адсорбции щелочной фосфатазы на апатите (121,3 кДж/моль для сывороточной и 130,3 кДж/моль для слюнной) указывают на химическую адсорбцию фермента, а также на то, что лимитирующей стадией является скорость химического взаимодействия, а не диффузия.

3. По скорости взаимодействия с апатитом щелочная фосфатаза сыворотки крови однородна, а слюнной фермент можно разделить на две фракции: "быструю" И "медленную". "Быстрая" фракция, кроме почти в четыре раза более высокой скорости адсорбции на апатите, отличается большей электрофоретической подвижностью.

4. Форма кинетических кривых активности иммобилизованной на апатите щелочной фосфатазы указывает па протекание иммобилизации в две стадии. На первой стадии взаимодействие фермента с апатитом не приводит к изменению константы Михаэлиса по сравнению с растворенным ферментом. Вторая стадия сопровождается увеличением константы Михаэлиса (от 2,19±1,07 до 4,73±2,60 ммоль/л).

5. Близость значений константы Михаэлиса щелочной фосфатазы слюны, иммобилизованной на апатите (4,73±2,60 ммоль/л), и щелочной фосфатазы, иммобилизованной на эмали зубов(3,33^2,82 ммоль/л), позволяет предполагать идентичность этих ферментов.

6. Отсутствие заметного влияния иммобилизации на чувствительность щелочной фосфатазы к ингибиторам, взаимодействующим с гидрофобными и анионными участками полипептидной цепи, указывает, что более вероятно участие в иммобилизации положительно заряженных участков макромолекулы фермента.

7. Положительная корреляция между активностью щелочной фосфатазы в искусственной пелликуле на поверхности блоков апатита и скоростью реминерализации этой поверхности, указывает на ускорение реминерализации под действием иммобилизованного фермента. Об этом говорит также снижение скорости и изменение характера реминерализации

при введении в ремииерализующие среды ингибитора щелочной фосфатазы

- левамизола

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется ввести в практику научных исследований разработанные нами методики определения активности и константы Михаэлиса иммобилизованной щелочной фосфатазы.

2. Обнаруженное явление ферментативной реминерализации, то есть ускорения процессов реминерализации под действием иммобилизованной щелочной фосфатазы, открывает возможность разработки новых направлений в профилактике и лечении кариеса зубов.

3. Рекомендуется дальнейшее изучение свойств иммобилизованной на эмали зубов щелочной фосфатазы с целью разработки композиций средств гигиены полости рта, использующих ремиперализующее действие этого фермента

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Житков М.Ю., Персиц М.М. Влияние гидроксиапатита на активность щелочной фосфатазы ротовой жидкости и сыворотки крови // Вопросы организации и экономики в стоматологии. - Екатеринбург. -1994. - С. 124127.

2. Житков М.Ю. Метод выявления ферментов слюны, иммобилизованных на поверхности эмали // 2-й Симпозиум "Неинвазивные методы диагностики". Тезисы докладов и стендовых сообщений. - М. - 1995. —С.50-51.

3. Житков М.Ю., Леонтьев В.К. Возможные механизмы иммобилизации щелочной фосфатазы и а-амидазы на эмали зубов // Стоматология. - 1997. -Т.76. - №6. - С.9-12.

4. Житков М.Ю. Влияние иммобилизованной щелочной фосфатазы слюны на процессы реминерализации // Стоматология. - 1999. -Т.78. - №5. - С. 12-15.