Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Кровосберегающие технологии получения биологически активных веществ из донорской крови

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Козлов, Альберт Анатольевич

Список сокращений.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.1. Введение.

1.2. Актуальность проблемы.

1.3. Цель исследования.

1.4. Задачи исследования.

1.5. Научная новизна и практическое значение исследования.

1.6. Внедрение в практику.

1.7. Положения, выносимые на защиту.

1.8. Публикации.

1.9. Объем и структура диссертации.

2. ПРЕДСТАВЛЕНИЕ О КРОВИ КАК ИСТОЧНИКЕ ШИРОКОГО СПЕКТРА ЛЕЧЕБНЫХ И ДИАГНОСТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

4. ГЛАВА 1. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ВЫСОКООЧИЩЕННОГО КОНЦЕНТРИРОВАННОГО РАСТВОРА ГЕМОГЛОБИНА - ОСНОВЫ КРОВЕЗАМЕНИТЕЛЯ-ПЕРЕНОСЧИКА КИСЛОРОДА.

4.1.Технологические особенности выделения высокоочищенного концентрированного раствора гемоглобина.

Стадия I. Отделение от эритроцитов остатков плазмы и сопутствующих форменных элементов.

Стадия II. Гемолиз эритроцитов.

Стадия III. Отделение стромальных компонентов.

Стадия IV. Концентрирование раствора гемоглобина и коррекция его электролитного состава.

4.2. Состав и количество примесей в растворах гемоглобина.

4.3. Макромолекулярные, физико-химические, биохимические, функциональные и биологические характеристики гемоглобина.

4.4. Раствор высокоочищеннного гемоглобина - основа кровезаменителя -переносчика кислорода.

5. ГЛАВА И. ВЫДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ КОМПОНЕНТОВ ИЗ МЕМБРАНЫ ЭРИТРОЦИТОВ.

5.1. Разработка технологии выделения из мембраны эритроцитов коагуляционно активных фосфолипидных компонентов.

5.2. Изучение состава и свойств выделенных фосфолипидов.

6. ГЛАВА III. РАЗРАБОТКА АЛЬТЕРНАТИВНОЙ ТЕХНОЛОГИИ ПЕРЕРАБОТКИ ПЛАЗМЫ.

6.1. Разработка метода разделения плазмы на концентрат белков и депротеинизированный раствор.

6.2. Изучение состава и биологических свойств ультрафильтрата плазмы.

6.3. Возможности использования безбелкового ультрафильтрата плазмы крови в медицинской практике.

7. ГЛАВА IV. РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ ГЕМОГЛОБИНОМЕТРИИ И КОАГУЛОМЕТРИИ НА ОСНОВЕ ПРОДУКТОВ ПЕРЕРАБОТКИ ДОНОРСКОЙ КРОВИ.

7.1. Раствор высокоочищенного гемоглобина для медицинской диагностики.

7.2. Диагностические наборы реактивов на основе фосфолипидов мембраны эритроцитов.

7.3. Тест-системы на основе коагуляционно-активных компонентов плазмы.

8. ГЛАВА V. РАЗРАБОТКА ОБЩЕЙ СХЕМЫ КОМПЛЕКСНОЙ ПЕРЕРАБОТКИ КРОВИ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Кровосберегающие технологии получения биологически активных веществ из донорской крови"

Кровь человека представляет собой сложнейшую жизнеобеспечивающую систему организма, богатейшую панель соединений белкового, липидного, углеводного происхождения и смешанных форм, которые до настоящего времени используются недостаточно полно. Современная гематология и трансфузиоло-гия, перейдя от переливания цельной крови к компонентной терапии, предполагает в настоящее время сокращение инфузий препаратов крови и смещение в сторону кровесберегающих технологий. Определенный риск передачи инфекций при гемотрансфузиях привел к разработке «Европейской конвенции по правам человека и биомедицине», которую в апреле 1997 г. подписали представители 21 страны. Совет Европы, в частности, обратил внимание на целесообразность «оптимального использования крови в соответствии с принципами ее сбережения, как редкого и ценного вещества, с которым нельзя обращаться расточительно или неосмотрительно» (47).

Другой стороной и составной частью современной концепции кровесберегающих технологий является необходимость создания такой индустрии переработки крови, по возможности безотходной, при которой из крови, ввиду ее чрезвычайной ценности, уникальности и дефицитности, можно было бы извлечь максимально возможное число важнейших для современной медицины лекарственных и диагностических средств.

В данной работе приведены результаты исследований по получению и внедрению в практику отечественного здравоохранения широкого спектра новых лечебных препаратов и диагностических реагентов из продуктов переработки крови: кровезаменителя-переносчика кислорода, фосфолипидного компонента из стром эритроцитов, безбелкового ультрафильтрата плазмы крови как возможного препарата с широким спектром лечебного действия, реагентов и тест-систем для гемоглобинометрии и коагулометрии.

1.2. Актуальность проблемы

В нашей стране производится весьма ограниченное количество биологически активных веществ из плазмы крови (альбумин, гамма-глобулины, криоп-реципитат и некоторые другие). Вопрос утилизации безбелковой составляющей плазмы даже не ставился. Отсутствует вообще какая-либо система переработки клеток крови, в том числе превысивших сроки хранения, хотя именно в данном случае открываются широкие возможности выделения не только белковых, но и липидных компонентов. Важнейшее значение в настоящее время имеет вопрос незамедлительного создания собственного отечественного производства диагностических средств для гематологических исследований по причине практического отсутствия в самой России соответствующих технологий, сосредоточенных в свое время (до распада СССР) в странах СЭВ и в бывших республиках Прибалтики.

Кровь - это настолько уникальное и ценное сырье, что в условиях невозможности значительного расширения донорства, любая попытка увеличения номенклатуры выделяемых веществ и тем самым повышения коэффициента полезного использования единицы объема исходного материала является, безусловно, современной и актуальной.

1.3. Цель исследования

Разработка современных технологий производства биологически активных веществ из донорской крови для увеличения эффективности использования ее основных компонентов в медицине.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Козлов, Альберт Анатольевич

10. ВЫВОДЫ

1. Разработана концепция комплексной переработки крови, основанная на новых кровесберегающих технологиях получения высокоочшценного концентрированного раствора гемоглобина, безбелковой составляющей плазмы крови, фосфолипидного компонента из стром эритроцитов.

2. Разработан непрерывный процесс получения высокоочшценного концентрированного раствора гемоглобина. По совокупности свойств раствор пригоден для создания моделей кровезаменителя-переносчика кислорода и тест-систем для гемоглобинометрии (2 авторских свидетельства на изобретение).

3. Создана пилотная устновка с общей скоростью материального потока 1,0-1,2 л/мин и организовано серийное производство высокоочшценного раствора гемоглобина.

4. Для обеспечения биологической безопасности гемоглобина его раствор не должен содержать: общих липидов - более 0,5±0,1 мг/г Нв, фосфолипидов-более - 20,4±0,2 мкг/г НЬ, негемоглобиновых белков - более 5,0±2,0 мг/г Нв, в том числе мембранных белков - более 10"3 мг/мл.

5. Для подтверждения нативности выделенного гемоглобина и его функциональной полноценности раствор должен соответствовать контрольным требованиям по следующим показателям:

- содержание метгемоглобина - 0,5±0,2%;

- средневесовая молекулярная масса (М\у-10"3) - 64,5 Дальтон;

- кислородная емкость - 1,25±0,05 об. % 02 /г НЬ;

- сродство к кислороду (1§Р5о) - 0,78±0,05.

6. Разработана технология получения суммарных фосфолипидов из стро-молипидной массы, остающейся после выделения гемоглобина (патент РФ). Показана возможность использования данного продукта (авторское название -эрилид) в качестве фосфолипидной матрицы для коагулологического тестирования.

7. Разработана простая и эффективная технология разделения плазмы на концентрат белков и безбелковую составляющую (90% от общего объема), содержащую до 60 низкомолекулярных физиологически активных соединений, в том числе сбалансированные ионы, аминокислоты, витамины, низкомолекулярные гормоны (авторское свидетельство на изобретение). Показана возможность использования безбелковой составляющей плазмы в качестве заменителя камерной глазной жидкости в офтальмохирургии.

8. Разработана и утверждена МЗ РФ вся необходимая панель реагентов для количественного определения содержания гемоглобина в крови в соответствии с рекомендациями Всемирной организации здравоохранения. По заказу МЗ РФ разработан национальный стандарт гемиглобинцианида - Государственный стандартный образец.

9. На основе фосфолипидного реагента из стром эритроцитов, аналога кефалина, были составлены диагностические наборы реагентов для исследования активированного частичного тромбопластинового времени, кефалинового и каолинового времени, наборы реагентов для определения активности VIII и IX факторов свертывания крови.

10. Разработана технология получения лиофильно высушенных реагентов для коагулологического тестирования: тромбопластина, нормальной плазмы и тромбина с удельной активностью до 100 ME/мл. На основе этих реагентов составлены диагностические наборы, позволяющие проводить практически полный скрининг недостаточности системы коагуляции: тест-системы для определения тромбинового времени, протромбинового времени, содержания фибриногена, антитромбина III.

11. Разработана необходимая нормативная документация на вышеуказанные диагностические наборы реагентов технические условия, инструкции по применению, карты технического уровня, патентные формуляры, регламенты получения. Вся документация утверждена в установленном порядке в МЗ РФ, что позволило организовать на базе Гематологического научного центра произ

127 водство указанных диагностических наборов реагентов для гемоглобинометрии и коагулометрии.

9. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Донорская кровь является важнейшей жизнеобеспечивающей системой организма человека и единственной средой, которую можно в значительном количестве получать, исследовать, перерабатывать и использовать в диагностических и лечебных целях.

Недостаточно рациональное и бережливое отношение ко всему многообразию входяпщх в состав крови белковых, липидных и других компонентов приводит к тому, что значительная часть ценнейших биологических соединений теряется при поверхностной, не глубокой переработке и, естественно, не используется. Зачастую производители компонентов и препаратов крови решают чисто локальные задачи по выделению отдельных целевых продуктов, не задумываясь, сколько и чего уходит в балластную фракцию и что еще можно было бы попутно получить. Отсутствует комплексный подход к переработке крови и ее основных компонентов.

Можно предположить, что в будущем, исходя из высокой самоценности заготавливаемой крови или ее компонентов и невозможности значительного расширения донорства, применяемые технологии будут основаны на комплексной переработке крови и принципе безотходности, когда из единицы объема исходного материала будет выделятся максимально возможное количество лечебных препаратов и диагностических средств, что можно будет сделать путем внедрения глубокой переработки крови на одном предприятии или путем кооперации.

Важность и масштабность проблемы, необходимость решения целого комплекса задач научного, аналитического, технологического плана, включая этические и юридические вопросы, служит основанием для формирования нового научного направления по разработке комплексной безотходной технологии переработки крови с одновременным выделением всего доступного реестра необходимых для медицины препаратов и диагностических реагентов. Задача автора заключалась также и в том, чтобы привлечь внимание исследователей к решению этой благородной задачи.

Не претендуя на всеобъемлющее решение этой проблемы, автором предложена концепция комплексной переработки крови, согласно которой на практическом материале показана возможность в рамках единой технологической схемы единовременного выделения целого ряда полупродуктов, препаратов и реагентов для гемоглобинометрического и коагулометрического тестирования.

В рамках предложенной схемы комплексной переработки крови предусматривается возможность выделения из эритроцитной массы, в том числе и превысившей срок годности, высокоочшценного, концентрированного и функционально полноценного гемоглобина. С этой целью была разработана технология выделения ВКГ и на основе проведенных исследований создана пилотная установка непрерывного действия с общей скоростью материального потока 1,0-1,2 л/мин. По совокупности макромолекулярных, физико-химических, биохимических и биологических свойств выделяемый ВКГ является основой для разработки принципиально нового препарата - кровезаменителя - переносчика кислорода, а приготовленный из него раствор гемиглобинцианида соответствует всем высоким требованиям, предъявляемым Международным комитетом по стандартизации в гематологии ВОЗ к стандарту для гемоглобинометрии.

На основе ВКГ была разработана вся необходимая панель реактивов для отечественной гемоглобинометрии, включающая калибровочный раствор гемиглобинцианида, трансформирующий реагент, контрольные растворы гемоглобина, Государственный стандартный образец гемиглобинцианида, раствор гемоглобина-калибратора для альтернативных методов определения гемоглобина.

Наличие полного набора качественных и недорогих реагентов для гемоглобинометрии упрощает тестирование и позволяет получать достоверные и воспроизводимые результаты в любой диагностической лаборатории. Все реактивы производятся в рамках специально созданного НПО «РЕНАМ», широко применяются по всей стране и высоко оцениваются специалистами клинико-диагностической службы.

Из отходов производства гемоглобина - стромальной массы - выделены суммарные фосфолипиды, способные заменить импортные кефалины в качестве матрицы для коагулологического тестирования. На основе выделенного продукта - эрилида разработаны и внедрены в медицинскую практику наборы реактивов для определения АЧТВ, активности VIII и IX факторов свертывания крови.

Предложена оригинальная методика исходного разделения плазмы на концентрат белков и депротеинизированный ультрафильтрат, каждый из которых может найти свое применение в медицине. Очень перспективным, на взгляд автора, может оказаться возможность выделения белковых препаратов из концентрата плазмы, что может быть использовано при современных хрома-тографических методах фракционирования.

Безбелковый ультрафильтрат плазмы крови может быть использован в качестве инфузионного сбалансированного раствора, заменителя камерной глазной жидкости для офтальмохирургии, компонента коллоидных кровезаменителей и питательных сред, как обогащенная аминокислотами и электролитами среда для возмещения потерь при плазмаферезах, как раствор для промывания аппаратов искусственного кровообращения и др.

Из плазмы, в том числе и превысившей сроки хранения, хроматографиче-ски выделен высокоактивный тромбин (до 100 ME/мл), на основе которого сформированы и внедрены в медицинскую практику наборы реактивов для определения тромбинового времени, содержания фибриногена и активности антитромбина III. Сама плазма в виде пулированной, лиофилизированной формы, аттестованной по основным параметрам гемостаза, служит контрольным материалом для коагулологического тестирования.

Проведенные исследования являются основанием для проведения дальнейших разработок по выделению новых препаратов и диагностических реагентов в развитие представленной концепции комплексной переработки крови.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Козлов, Альберт Анатольевич, Москва

1. Авторское свидетельство № 3991181, 1976.

2. Ажигирова М.А. Макромолекуляриые основы направленной модификации гемоглобина для создания искусственного переносчика кислорода. Автореф. дисс. докт. биол. наук., М. 1994 г.

3. Андрушко И. А. и соавт. Адреналин, мембраны и свертываемость крови. В сб.: Физиологическая роль медиаторов. Казань, 1972, 8-9.

4. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. М., 1980

5. Баркаган З.С. Унифицированная методика одностадийного количественного определения факторов VIII и IX. Часть I. Гематология и трансфузиология, 1991,4,33-35.

6. Воробьева Г.С. Получение, консервирование, клиническое применение отмытых эритроцитов в целях профилактики посттрансфузионных реакций и осложнений. Диссерт. канд., М. 1967.

7. Выговская Я.И. О тромбопластическом и антигепариновом факторах эритроцитов. В кн. : Теоретические и клинические вопросы проблемы свертывания крови. Саратов, 1968, 228-234.

8. Генинг Т.П., Кожер И.И., Жумадилов Ж.Ш. Использование форменных элементов крови для направленной доставки химиотерапевтических и диагностических препаратов в очаг поражения (обзор). Антибиотики и химиотерапия, 1988, т. 33, №11, с.867-871.

9. Гительзон И.И., Гомзякова Н.В., Спиров В.В. К теории механизма гемолиза. Труды 12 Межд. Конгр. по перелив, крови, М., 1972, 143.

10. Государственная Фармакопея СССР, XI изд. Вып.2. М.1990

11. Добровольский А.Б., Косырев А.Б. Протромбиновый тест: методика выполнения и клиническое значение. П Информационный бюлл. Ассоциации медицинской Лабораторной Диагностики, М., 1995, 34-38.13.3аривчацкийМ.Ф. Основы трансфузиологии. Пермь, 1995.

12. Иванов К.П. Физиологические основы клинического использования кислородпереносящих кровезаменителей. Гематология и трансфузиология, 1989,1,42-47.

13. Иванов Ю.Г. Модификация спектрофотометрического метода определения кислородно-диссоционных кривых гемоглобина. Бюлл. Экспер. биол., 1975,11,122-123.

14. Иванов Ю.Г., Морозова Г.М., Ефремова Л.К., Козлов A.A. Изучение функциональных свойств моделей кровезаменителя-переносчика кислорода на основе модифицированного гемоглобина. Сборник Переносчики кислорода, М. 1979, 88-92.

15. Караманова Е.И., Максудханов Г.У. Солкосерил в комплексном лечении острой пневмонии. Клинич. Мед. 1986, 64, 36-37.

16. Козлицкий А.П. Внутриартериальные инфузии солкосерила при лечении об-литерирующих поражений периферических артерий в поликлинике. Вестн. Хир., 1982, 129, 120-123.

17. Козлов A.A. Эрилид новый реагент для коагулогического тестирования. Новое в трансфузиологии, 1993, 3, с. 44-45.

18. Козлов A.A., Берковский А.Л и соавт. Исследование состава и свойств раствора гемоглобина, полученного гипотоническим гемолизом эритроцитов. В мат. 56 научной сессии ЦНИИГПК. М., 1984, с. 27-29.

19. Козлов A.A., Берковский A.JI. Технологические аспекты выделения гемоглобина из эритроцитов крови.Тезисы докладов III Всесоюзной научно-технической конференции.М., 1987, с.52.

20. Козлов A.A., Лившиц А.Б., Берковский А.Л., Крылова В.Е. Анализ негемо-глобиновых белковых примесей в растворах очищенного гемоглобина. В мат. 57 научной сессии ЦНИИГПК. М.,1985, с. 65-66.

21. А.А.Козлов, Т.М.Простакова, А.Л.Берковский, Н.Д.Качалова. Новые реактивы для анализа свертывающей системы крови. В мат. научно-практической конференции: "Клиническая лабораторная диагностика состояние и перспективы". Санкт-Петербург, 1996, с. 196-197.

22. А.А.Козлов, А.Л.Берковский, Т.М.Простакова. Контроль качества в гемо-глобинометрии. В мат. научно-практической конференции: "Клиническая лабораторная диагностика состояние и перспективы". Санкт-Петербург, 1996, с. 69-70.

23. А.А.Козлов, А.Л.Берковский, Т.М.Простакова. Обеспечение достоверности клинических лабораторных исследований гемоглобина. Новое в трансфу-зиологии, 1996,14, с. 48-50.

24. А.А.Козлов. Возможности комплексной переработки крови. Проблемы гематологии и переливания крови, 1997, № 1

25. А.А.Козлов. Новые аспекты комплексной переработки крови. Новое в трансфузиологии, 1997, № 1.

26. А.А.Козлов, А.Л.Берковский, Т.М.Простакова, Н.Д.Качалова. Проблема качества в коагулометрии. Тезисы конф. «Трансфузиология и служба крови», 17-19 ноября 1998 г., с. 196

27. А.А.Козлов. Реагенты для медицинской лабораторной диагностики на основе продуктов переработки крови: гемиглобинцианид. Лабораторная медицина. 1998, № 1, с. 44-49.

28. А.А.Козлов, Т.М.Простакова, Н.Д.Качалова. Типичные ошибки проведения ряда лабораторных тестов при исследовании системы гемостаза. Лаборатория. Журнал для врачей, 1998, № 10, сЛ5-16.

29. Колмен Р.У. Нарушения реакций образования тромбина, 1988.

30. КолонинаИ.Р., Литвиненко Ю.А., Соколов A.B. Экспериментальная оценка эффективности модифицированного полигемоглобина на модели предельной гемодилюции. Бюл. экспер. биол.и мед., 1991, № 5, с.449-560.

31. Краснов М.М., Каспаров A.A., Юдина Ю.В., Оганесянц В.А. Опыт применения солкосерила в лечении заболеваний роговицы. Вестн. Офтальм., 1982, 4, 64-67.

32. Кулаков Т.П., Кухарчук В.В., Коновалов Г.А., Барсуков Ю.Ф., Семавин И.Е., Ведерников А.Ю. Методика плазмафереза у больных с наследственной ги-перхолестеринемией. Терапевтический Архив, 1985, т. 57, № 7, с. 107-108.

33. Кушаковский М.С. Клинические формы повреждения гемоглобина, 1968.

34. Лившиц А.Б., Берковский А.Л., Крылова В.Е., Соколов A.B., Козлов A.A. Белковые примеси в очищенных растворах гемоглобина. Гематология и трансфузиология, 1992, 4, 35-37.

35. Литвиненко Ю.А., Колонина И.Р., Соколов A.B., Горбунова H.A. Изучение эффективности искусственного переносчика кислорода на основе гемоглобина при замещении кровопотери у собак. Гематология и трансфузиология, 1991, т. 8, с. 16-18

36. Логунова Н.С., Егорова В.А., Сейц И.Ф. Метод выделения метаболически активных лейкоцитов и тромбоцитов из крови человека. Актуальн. вопр. ге-матол. иперел. крови, 1963,14,15-22.

37. ЛукашоваИ.В., Ковалев Л.И., Ефимочкин A.C., Шишкин С.С. Изучение белков лимфоцитов человека с помощью двумерного электрофореза. Биохимия, 1994, т. 59, вып.5, с. 663-674.

38. Лычев В.Г. Гравиметрический метод определения фибриногена по Р. А.Рутберг. В кн. Диагностика и лечение диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови. М., 1993, с. 75.

39. Лычев В.Г. Определение содержания фибриногена в плазме крови по В.А.Белицеру и соавт. В кн. Диагностика и лечение диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови. М., 1993, с. 76-77.

40. Медди Э. М Биохимическое исследование мембран., 1979.

41. Международный симпозиум по сожосерилу. М., 1986.

42. Мельникова В.Н. К методике приготовления взвеси отмытых эритроцитов для переливания по дифференцированным показаниям. Вопр. гематол. кон-серв. крови и тканей, 1961, 12, 253-258.

43. Методы сбережения крови в хирургии. Первый балтийский симпозиум.; Рига, апрель 1997 г.

44. Морозова В.Т., Андреева Н.А Лабораторная диагностика нарушений гемостаза. М., 1997.

45. Мосс Г.С., Гаулд С.Э., Сегал Л.Р., Сегал Л.Х., Розен А. Л. Проблема создания заменителя эритроцитов. Клиническая трансфузиология и профилактика по-сттрансфузионного гепатита, М., 1984, с. 103-112.

46. Мураппсо В.В., ЧегемоваП.М. Солкосерил в лечении язвенной болезни. Сов. Мед. 1979, 2, 97-99.5106 унификации клинических лабораторных методов исследования. Приказ МЗ СССР № 960 от 15 октября 1974 г.

47. Опарин А.Г. Патогенетическое обоснование применения солкосерила при язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки. Клин. Мед., 1985, 63, 87-90.

48. Петров Р.В., Хаитов Р.М., Манько В.М., Кожинова Е.В. Методические материалы по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию иммуномодулирующего действия фармакологических средств. М. 1984

49. Платэ H.A., Николайчик В.В., Чунов В.В. Новый подход к фракционированию бежов плазмы и получению высокоочшценных препаратов крови. Гематология и трансфузиология, 1993, т.38, № 6, с. 10-13

50. Полищук P.C. Опыт применения эритроцитов, отмытых плазмозамещающим раствором ЦОЛИПК № 8. Пробл. гемат. и перел. крови, 1964,11, 39-43.

51. Ракитянская A.A., Хомич E.H., Гилевский E.H. Эритрофосфатид реагент для коагулологических исследований. Лаб. дело, 1982, №1, с.32-34.

52. Розенберг Г.Я. Перспективы и пути развития проблемы кровезаменителей. В кн.: Труды XII Международного конгресса по переливанию крови. М., 1972, с. 227-231.

53. Сакович М.Н., Броновец И.Н., Уласевич Т.Л., Сосновский А.Г. Лечение сол-косерилом больных язвенной болезнью. В кн.:Регуляторно-приспособительные механизмы в норме и патологии. Л. 1986, 94-95.

54. Селиванов Е.А., Данилова Т.Н. Современное состояние службы крови России и преспективы ее развития. Новое в трансфузиологии, 1996, вып. 16, с. 516.

55. Сербинова Т. А. Получение свободной от гемоглобина мембраны эритроцитов и изменение ее структуры при повреждающих воздействиях и хранении консервированной крови. Диссерт. канд., М. 1980.

56. Федоров С.Н., Козлов A.A. и соавт. Способ получения влагозамещающего раствора. Авт. свид. № 1522484 от 15.07.1989.

57. Федорова Л.И., Лорие Ю.И. Методика получения и клиническое применение отмытых эритроцитов. Проблемы гематол.и перел. крови, 1963, 10, 50-53.

58. Шабалин В.Н., Мельникова В.Н., Литманович К.Ю., Пахомов Ю.Н., Научно-практические аспекты рационального использования эритроцитов., Гематология и трансфузиология, 1987, т. XXXII, N 3, с.9-13.

59. Шабалин В.Н., Селиванов Е.А., Холодный Г.А., Ерофеев И.А., Перспективы совершенствования организации производственной деятельности учреждений службы крови РСФСР., Гематология и трансфузиология, 1987, t.XXXII, № 3, с. 3-9.

60. Шишкин С.С. Проблема построения каталога мембранных белков эритроцитов человека. Вопросы медицинской химии, 1989, № 6, с. 2-13.

61. Allain J-P. New, potentially important viruses in the blood. VI Regional European congress of the International Society of Blood Transfusion. Израиль, 9-13 мая, 1999 г., с. 31.

62. Aster R.H. Infusible Platelet Membranes (IPMs) for the Control of Bleeding in Thrombocytopenic Patients. The Compendium. A selection of Short Topic Presentations. American Accociation of Blood Banks, 1997.

63. Amberson W.R., Jennings J.J., Rhode C.N. Clinical experience with hemoglobin saline solutions. J. Appl. Physiol. 1949, v.l, p.459.

64. Baker S. L., Dodds E.C. Obstruction of the renal tubules during the excretion of Hemoglobin. Br. J. Exp. Pathol., 1925,6, 247-260.

65. Bauer D., Locker A. Solcoseryl as a powerful radioprotective compound. Nucl. Med., 1974,13, 258-266.

66. Biggs R. Human Blood Coagulation, Haemostasis and Thrombosis. 1976.

67. Binnie C. G., Lord S.T. The Fibrinigen Sequences That Interact with Thrombin. Blood, 1993,81,3186-3192.

68. Bjorling H. Plasma Fractionation Methods used in Sweden. In Proceedings of the American National Red Cross Symposium, Washington, 1971. The Development of Plasma Derivatives for Clinical Use. Vox Sang. 1972, v. 23, N1-2.

69. Blajchman M.A., Lee D.H. The thrombocytopenic rabbit bleeding time model to evaluate the in vivo hemostatic efficacy of platelets and platelet substitutes. Transf. Med. Rev., 1997, v. 11, p.95-105.

70. Blajchman M.A. Novel platelet products and substitutes. VI Regional European congress of the International Society of Blood Transfusion. Израиль, 9-13 мая, 1999 г., с. 8-9.

71. Blauhut В., Kramar Н., Vinazzer Н., Bergmann Н. Substitution of antithrombin III in shock and DIC: a randomized study. Thromb. Res., 1985, 39, 81-89.

72. Bolin R., Smith d., Moore G., Boswell G., Devenuto F. Hematologic effects of hemoglobin solutions in animals. Advances in blood substitute research, 1983, p. 117-126.

73. Brandt J.L., Frank N.R., Lichtman U.C. The effect of hemoglobin solutions on renal function in man. Blood, 1951, v. 6, p. 1152

74. Broekhuyse R.M. Improved lipid extraction of erythrocytes. Clin. Chim. Acta,1974, v.51, N3, p. 341-343.

75. Cathelicidins: a novel protein family with a common proregion and a variable C-terminal antimicrobial domain. FEBS LETT., 1995, v. 374, N 1, p. 1-5.

76. Charlesworth D., Harris P.L., Palmer M.K. Intra-arterial infusion of solcoseryl: a clinical trial of a method of treatment for pre-gangrene of lower limb. Br. J. Surg.,1975, 62, 337-339.

77. Clauss A. Gerinnungsphysiologische Schnellmethode zur Bestimmung des Fibrinogens. AetaHaemat., 1957,17, 237-246.8 5. Cooper R.A. Lipids of human red cell membrane: normal composition and variability in disease. Semin. Hematol.,1970, v.7, N3, p.296-322

78. Dacie J.V., Lewis S.M. Estimation of Haemoglobin Concentration. In: Practical Haematology, 1995, 50-54.

79. Dacie J.V., Lewis S.M. Investigation of haemostasis. Activated partial thromboplastin time. In: Practical Haematology, 1995, 308-309.

80. Dacie J.V., Lewis S.M. Investigation of haemostasis. Prothrombin time. In: Practical Haematology, 1995, 307-308.

81. Dacie J.V., Lewis S.M. Investigation of haemostasis. Thrombin time. In: Practical Haematology, 1995, 309-310.

82. DeAngeles D.A., Scott A.M., Mc Grath A.M. et al. Resuscitation from hemorrhagic shock with diaspirin cross-linked hemoglobin, blood or hetastarch. Trauma, 1997, 42, 406-414.

83. Deutsch H.F.The development of Plasma Derivatives for Clinical Use. Vox Sanguinis, 1972, v. 23, N 1, p.147-150.

84. Dietz N.M., Joyner M.J.,Warner M.A. Blood substitutes: fluids, drugs, or miracle solutions? Anesth. Analg., 1996, v. 82, p. 390-405.

85. Dodge J.T., Mitchell C., HanahanD.J. Arch. Biochem. 1963,100,119.

86. Dzik S. Basic concepts and function of cytokines. VI Regional European congress of the International Society of Blood Transfusion. Израиль, 9-13 мая, 1999 г., с. 62.

87. Elevyn А.К., Malloy Н.Т. J.Biol. Chem., 1938,126, 655.

88. Familial Antithrombin III Deficiency. Lancet, 1983,7,1021-1022.

89. FeolaM., Simoni J., Canizaro P.C. Mechanisms of toxicity of polymerized hemoglobin solutions. Biomaterials, artificial cells and artificial organs. 1987,15,387.

90. Feola M., Simoni J., Canizaro P.C., Tran R., Raschbaum G., Behal F.J. Toxicity of polymerised hemoglobin solutions. Surgery, gynecology, obstetrics, 1988, v. 166, p. 211-222

91. Fernandes P.M., Lundblad J.L. Pasteurized therapeutically active protein compositions. US PAT 4,623,717, 18.XI.86.

92. Fischer M. Therapie von Blurungen bie hepatogener Hamostasestorung.

93. XXVII Hamburger Symp. 1984 Leber, Blutgerinnung und Hamostase, 53-70.

94. Fratantoni J.C. Points to consider in the safety evaluation of hemoglobin-based oxygen carriers. Transfusion, 1991, 31, p. 369-371.

95. Gantz T. Biosynthesis of defensins and other antimicrobial peptides., Ciba Found. Symp., 1994,v.l86, p.62-71.

96. Gautheron P., Dumont E., Renaud S. Clotting activity of platelet phospholipids in rat and man. Thromb. et Diath. Haemorrh., 1974, 32, 382-390.

97. Haemiglobin Cyanide Reference Preparation. International Committee for Standardisation in Haematology. WHO Technical Report 384,1967, p. 14.

98. Haemiglobin Cyanide Standard Preparation. Biological Substances, International Standards and Referance Reagents. 1990, p.23.

99. Hamilton P.B. et al. Renal effects of hemoglobin infusions in dogs in hemorrhagic shock.J.Exp. Med. 1947,v.86, p.477.

100. Hawkins P.L, et al. Preparation of prothrombin time reagents from recombinant human tissue factor and purified natural and synthetic phospholipids. WO 93/07492, 15.04.93.

101. Hermans J. et al. A collaborative Calibration Study of Reference Materials for Thromboplastins. Thromb. Haemostas., 1983, 50, 712-717.

102. Hudson B.G. et al. Chemical studies of erythrocyte membrane glycoproteins from several species. Comp. Biochem. and Physiol., 1975, B. 51, N 1, p. 127-135

103. Hughes G.S., Antal E.J., Locker P.K. et al. Physiology and pharmacokinetics of a novel hemoglobin-based oxygen carrier in humans. Crit. Care Med., 1996,24, 756-764.

104. Hussey C.V., Kaser M.M. Erythrocytic a clotting factor from erythrocytes: its action and purification. Fed. Proc., 1956, v. 15, N 1, p. 279.

105. International Committee for Standardisation in Haematology:

106. Recommendations for Haemoglobinometry in Human Blood. British Journal of Haematology, 1967, v 13, suppl. 71-75.

107. Ito R., Nishiraki H., Uchiyama T. ,Tokoro Y., Tosaka K. Action of tissue respiration stimulating agent solcoseryl on experimental gastric ulcer, myocardial injury and organ weight of foetus. Arzneim. Forsch., 1972, 22,1510-1518.

108. Jaeger K.H., Leybold K, Mittenzwei H., Staudinger H., Waldstatten L. Die Forderung der Zellatmung durch einen Blutextrakt. Arzneim.-Forsch., 1965,15, 750-754.

109. Jaeger K.H., Mittenzweix H. Tussue cell stimulation blood extracts. US Pat.N 3973001, 3.08.76.

110. Jones J.A. Red blood cell substitutes: current status. Brit. J. Anaesth., 1995, v. 74, p.697-703

111. Kirkwood T.B.L. Calibration of Reference Thromboplastins and Standardisation of the Prothrombin Time Ratio. Thromb. Haemostas., 1983,49, 238-244.

112. Kiss J. Oxygen Carriers and Viral Inactivation of Blood Components. The Compendium. A selection of Short Topic Presentations. American Accociation of Blood Banks, 1997.

113. Knezevic V., Krstic R. Our experience in oral anticoagulant therapy treatment. VI Regional European congress of the International Society of Blood Transfusion. Израиль, 9-13 мая, 1999 г., с. 122.

114. Kramlova М. et al. Fast protein liquid chromatography of pyridoxalated and glutaraldehyde-treated human haemoglobin. J. Chromatogr., 1982, 249,403-404.

115. Kumar R.Recombinant hemoglobins as blood substitutes: a biotechnology perspective. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1995, v. 208, p. 150-158.

116. Laurell С. B. Analyt. Biochem., 1966, v. 15, N 1, p. 45.

117. Levin J. Red blood substitutes. Progress in Red Blood Substitutes. The compendium. A Selection of Shot Topic Presentations. American Association of Blood Banks, 1997 .

118. Lewis S.M. Standardisation and Harmonization of the Blood Count: the Role of International Committee for Standardisation in Haematology. Europe Journal of Haematology, 1990, v45, suppl. 53.

119. Loeliger E.A. et al. Questions and answers in prothrombin time standardisation in oral anticoagulant control. Thromb. Haemost, 1985, 60, 515-517.

120. Loeliger E.A. Laboratory Control, Optimal Therapeutic Ranges and Therapeutic Quality Control in Oral Anticoagulation. Acta Haematol. 1985, 74, 125-131.

121. Mammen E.F., Мониторинг терапии пероральными антикоагулянтами. Лаборатория, 1997, № 7, с. 10-12.

122. Mann К. G. The tissue pathway to thrombin: the coagulation explosion. In: Lectures. XHIth meeting of the international society of haematology. Istanbul, 1995,162-168.

123. Marchesi S.L., Steers E., Marchesi V.J.,Tillach J.W., Physical and chemical properties of a protein isolated from red cell membranes. Biochemistry (Wash.), 1970, v. 9, N 1, p. 50-57.

124. Marcus A. J., Safter L.B.,Ullman H.L. Function of platelet membranes. In: The circulating platelet. 1971,241-258.

125. Marinetti G., Crain R. Topology of amino-phosholipids in the red cell membrane. J. Supramol. Struct., 1978, 8,191-213.

126. Moss G.S., Woskin R.D., Rosen A.L., Levin H., Palani C.K. Transport of oxygen and carbon dioxide by hemoglobin-saline solution in the red cell-free primate. Surg. Gynecol. Obstet., 1976,142,357-362.

127. Odling-Smee G.W., Wilson B.G.Haemoglobin as a blood substitute.Blood Substitutes. Preparation, Physiology and Medical Applications. Ed. Lowe K.C., 1988, p.71-86

128. Poole J. Antigens on band 3 and glycophorin A. VI Regional European congress of the International Society of Blood Transfusion. Израиль, 9-13 мая, 1999 г., с. 16-17.

129. Proha Z., Brodniewicz Т. Therapeutic grade Thrombin produced by Chromatography. US Pat. 5,506,127,9.04.96.

130. Quik A.J. Hemorragic diseases and thrombosis. Philadelphia: Lea and Fabigar; 1966.

131. Rabiner S.F. Heibert J.R., Lopas D.H., FriedmanL.H. Evaluation of stroma-free hemoglobin solution for use as a plasma expander. J. Exp. Med. 1967, v. 126, N 6 p.l 127-1141

132. Rossi-Fanelli A. et al. Biochim. Biophys.Acta, 1958, 30, 608.

133. Sandberg H. Platelet factor 3. The link between platelets and plasma coagulation. ActaUniw. Upsai. Abstr. Uppsala Diss. Fac. Sei, 1979, N 514, p. 19

134. Savitsky J.D. et al. A clinical safety trial of stroma-free hemoglobin. Clin. Pharmacol. Ther. 1978, v.23, p.73-80

135. Schinoda T. Biochim.Biophys.Acta, 1965, 97, 382.

136. Sehgal L.R., Rosen A.L., Noud G. et al. Large volume preparation of peri-doxylated haemoglobin with high P50. J.Surg. Res., 1981, 30, 14-20.

137. Smahel J. Effect of a deproteinized blood extract on the recovery of blood circulation in an ischaemic skin lesion. Br. J.Exp. Path., 1982, v. 63, p. 177-183.

138. Sniderman A.D.et al. The adipsin-ASP pathway and regulation of adipocyte function., Ann. Med., 1994, v.26, N 6, p. 388-393.

139. Solorzano C.C.et al. A matrix metalloproteinase inhibitor prevents processing of tumor necrosis factor alpha (TNF alpha) and abrogates endotoxin-induced lethality. Schock, 1997, v. 7, p. 427-431.

140. Somogyi E., Sotonyi P., Nemes A. The effect of a deproteinized blood extract on the myocardial changes developing during experimentally induced intermittent hypoxia. Arzneim. Forsch., 1979,29,1376-1381.

141. Stackelberg M. Das Arzneimittelgesetz wurde in der Bundes-republik Deutschland zum zweiten Mal geändert. Die Ellipse, 1986, 9, 99-107.

142. Swaim W.R. Prothrombin Time Reporting and the International Normalized Ratio System. Improvements are needed. Am. J. Clin. Path. 1993, 99, 653-655.

143. Thaler E. Antithrombin-III-Konzentrate: Klinische Anwendung. Hamostase-ologie, 1982, 3,128-136.

144. Thaler E., Lechner К. Antithrombin-III Deficiency and Thromboembolism. Clin. Haematol. 1981, 10, 369-390.

145. Туе R.W. Preparation of stroma-free, non-heme protein free hemoglobin. US Pat N4,473,494, 25.09.84.

146. Valentine W.N., Paglia D.E. Partial purification of some red cell enzymes utilizing hemoglobin precipitation by zink salts. J. Lab. Clin. Med., 1983,101, 617.

147. Vickers J.D., Lee D.H., Blajchman M.A. Binding of thrombospheres to chymotrypsin-treated rabbit platelets decreases phosphatidylinositol 4,5-biphoshate (PIP2), Thromb. Haemost., 1997, (Suppl.), p. 481.

148. Vinasser H. Antithrombin III, Biochemie, Diagnostik und Therapy. Die Ellipse, 1985, 6,1-7.

149. White C.T., 38. White C.T. et al.Toxicity of human hemoglobin solution infused into rabbits. J. Lab. Clin. Med., 1986, v.108, p.121-131.

150. White S.H. et al., Structure, function and membrane integration of defensins., Curr. Opin. Struct. Biol., 1995, v.5, N 4, p. 521-527.

151. Winslow R.M. Blood substitutes. Science & Medicine, 1997, v. 4, p. 54-63.

152. Winslow R.M. Artificial oxygen carriers. VI Regional European congress of the International Society of Blood Transfusion. Израиль, 9-13 мая, 1999 г., с. 49

153. Woodhams B.J. et al. Calibrator for Prothrombin Time Assay. WO 95/30154, 09.11.95.