Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Криоконсервация семян дикорастущих растений Приморского края
ВАК РФ 03.00.32, Биологические ресурсы
Автореферат диссертации по теме "Криоконсервация семян дикорастущих растений Приморского края"
На правах рукописи
Нестерова Светлана Владимировна
КРИОКОНСЕРВАЦИЯ СЕМЯН ДИКОРАСТУЩИХ РАСТЕНИЙ ПРИМОРСКОГО КРАЯ
03.00.32 - биологические ресурсы
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Владивосток - 2004
Работа выполнена в лаборатории флоры Дальнего Востока Ботанического сада-института Дальневосточного отделения Российской академии наук.
Научный руководитель - доктор биологических наук Ольга Викторовна Храпко
Официальные оппоненты: доктор биологических наук П.С. Зориков кандидат биологических наук С.В. Волкова
Ведущее учреждение: Центральный Сибирский ботанический сад
Сибирского отделения Российской академии наук.
Защита состоится ^^октября 2004 г. на заседании диссертационного совета Д 005. 005. 02. при Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН.
Отзывы на автореферат диссертации в двух экземплярах, с заверенными подписями, просим направлять по адресу: 690022, г. Владивосток, пр. 100-лет Владивостоку, 159, Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, диссертационный совет Д 005.005. 02.
Телефон (4232) 31-07-19. Факс (4232) 31-40-50.
С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Тихоокеанского института
биоорганической химии ДВО РАН.
Автореферат разослан Г сентября 2004 г.
Ученый секретарь диссертационного совета к.х.н., с.н.с.
НА Командрова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. В настоящее время проблема сохранения биоразнообразия приобрела большое значение и признана одной из ключевых. Биологические ресурсы являются основой для поддержания экологических условий существования и экономического развития человеческого общества. Согласно международной Конвенции о биологическом разнообразии, принятой и открытой для подписания 5 июня 1992 г. на конференции ООН в Рио-де-Жанейро, фиторесурсы государств, присоединившихся к Конвенции, объявлены национальной собственностью. В связи с интенсивными темпами деградации флоры под влиянием антропогенных факторов и техногенных катастроф объектами пристального внимания становятся как редкие виды, так и полезные растения (лекарственные, декоративные, и др.), численность которых резко уменьшается.
Одна из главных задач ботанических садов - это сохранение генетического разнообразия растительного мира своих регионов (Стратегия ботанических садов ..., 1994). Согласно Конвенции о биологическом разнообразии (1995), охрана растений может осуществляться как в форме in situ, т.е. в местах обитания видов в пределах экосистем, так и в форме ex situ, т.е. путем создания и поддержания условий, необходимых для сохранения компонентов биологического разнообразия за пределами естественной среды обитания видов.
Перспективный способ охраны ex situ - это создание генных банков, где сосредотачиваются органы и части растений (пыльца, семена и пр.), несущие генетическую информацию. Эффективность хранения геномов повышается с использованием технологии глубокого замораживания в жидком азоте (-196°С), или криоконсервации.
Во флоре Приморского края 149 редких и исчезающих видов (Харкевич, Качура, 1981). Многие лекарственные, декоративные, пищевые и другие ценные растения в результате массовых заготовок могут перейти в категорию редких. Традиционные способы охраны in situ (заповедники) не способны обеспечить сохранения генофонда дикорастущих видов. В данной ситуации вполне реальным представляется долговременное хранение семян в банках.
До настоящего времени метод криоконсервации семян видов флоры Приморского края не применялся, и не изучалась толерантность семян к замораживанию в жидком азоте, что и определило выбор темы диссертационной работы.
Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы - изучить биологические особенности и толерантность семян к замораживанию при температуре жидкого азота (-196°С) и оценить возможность применения криоконсервации как метода долговременного хранения.
При этом предстояло решить следующие задачи:
1. Изучить биологические особенности се
I библиотека I
! ^jts^m
2. Изучить влияние положительных температур хранения на жизнеспособность семян.
3. Изучить реакцию семян на замораживание при температуре жидкого азота и проанализировать влияние различных режимов охлаждения на всхожесть семян.
4. Изучить и проанализировать влияние глубокого замораживания семян на рост и развитие растений, на их репродуктивную способность и всхожесть семян в первом поколении.
5. Разработать научно обоснованные рекомендации по хранению семян.
Научная новизна. Разработаны методы преодоления покоя семян 4 видов. Для 11 видов лесных травянистых многолетников впервые установлены стадия развития зародыша в зрелом семени и период его полной дифференциации, тип покоя семян и условия прорастания. Для семян ортодоксального и рекальцитрантного типа определены сроки хранения в лабораторных условиях. Впервые оценка возможности криоконсервации семян осуществлена на основе комплексного подхода, который включает замораживание семян с разной скоростью, изучение всхожести деконсервированного материала, выращивание растений из размороженных семян и получение семенного потомства в первом поколении. Проведены сравнительные исследования роста и развития растений, выращенных из семян после хранения в жидком азоте, и разработаны методические основы оценки влияния замораживания на сохранение генетической стабильности семян дикорастущих кустарников.
Практическая ценность. Материалы изучения биологических особенностей семян, сроков хранения и условий продления их жизнеспособности в полном объеме учтены при подготовке коллективной монографии «Размножение редких видов растений Приморского края» (Воронкова, Нестерова, Журавлев, 2000). Информация о типах покоя и особенностях прорастания семян может использоваться в решении вопросов интродукции и реинтродукции редких и полезных видов. Полученные данные об изменении всхожести семян при хранении могут быть использованы для подбора оптимальных способов и условий хранения. Результаты изучения влияния криообработки на всхожесть размороженных семян, рост и развитие растений могут быть основой создания криобанка зародышевой плазмы в первую очередь редких и исчезающих дальневосточных растений.
Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на всесоюзных совещаниях «Консервация генетических ресурсов» (г. Пущино, 1991, 1994, 1998, 2002). Во Владивостоке на расширенных заседаниях Ученого совета Ботанического сада-института ДВО РАН (1995, 1998, 2001, 2003), 49-х Комаровских чтениях (1996), Международной конференции «Леса и лесообразовательный процесс на Дальнем Востоке» (1999), на заседаниии «Круглого стола» IV Дальневосточной конференции по заповедному делу (1999), II международной научной конференции «Растения в муссонном климате» (2000).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 27 работ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, приложения, списка литературы, содержащего 244 наименования, в том числе 73 источника на иностранных языках. Работа изложена на 150 страницах машинописного текста, включает 25 таблиц и 27 рисунков.
Благодарности. За помощь в проведении экспериментов по замораживанию семян в жидком азоте автор выражает благодарность сотрудникам лаборатории криоконсервации генетических ресурсов Института биофизики клетки РАН (г. Пущино), особенно ст.н.с. С. Г. Яшиной.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ГЛАВА 1. Материал и методика исследований
Наше внимание привлекли редкие виды, требующие охраны, и полезные растения флоры Приморского края. Среди 56 видов (4 деревянистых, 13 кустарниковых, 32 травянистых и 7 лиан), относящихся к 19 семействам и 40 родам, 30 видов рекомендованы к охране. Лекарственными свойствами обладают 28 видов, декоративными - 38, 7 - являются медоносами, также есть кормовые и пищевые растения.
Материалом для исследований послужили плоды и семена, собранные в период с 1987 по 2002 г. в районах Приморского края, на п/о-ве Муравьева-Амурского, на коллекционном участке Ботанического сада-института ДВО РАН, в дендрарии Горнотаежной станции им. В.Л. Комарова ДВО РАН.
Изучение биологических особенностей семян проводилось с применением общепринятых методик исследования строения (Методические указания ..., 1980, Артюшенко, Федорова, 1986;' Артюшенко, 1990), определения всхожести (Скрипчинский, 1963,1987; Фирсова, 1969) и влажности (Международные правила ..., 1969).
Семена, находящиеся в состоянии покоя, скарифицировали концентрированной серной кислотой или стратифицировали при +5°С (Николаева и др., 1985). Проращивали: (1) при +(19-22)°С в лабораторном помещении; (2) сначала в холодильной камере при +(8-10)°С в течение 5,10,15 суток, затем при +(19-22)°С до конца опыта.
Применяли два варианта хранения семян при положительной температуре:
(1) неконтролируемый режим - семена в бумажных пакетах хранили в лаборатории;
(2) контролируемый режим - воздушно-сухие семена герметично упаковывали и хранили в холодильнике при +5°С (Лихачев, 1987).
Медленное замораживание в жидком азоте проводили в открытой спиртовой бане, которую охлаждали со скоростью 1,0°С/мин до -50°С, затем криопробирки с семенами переносили в сосуд с азотом.
Быстрое замораживание осуществляли при непосредственном погружении пробирок в жидкий азот. Косточки Armeniaca mandshurica и видов Cerasus погружали в азот в марлевых мешочках, применяли только быстрое замораживание. Время экспозиции в жидком азоте -
24 часа, 30 дней, 3 года. Размораживание проводили на воздухе при +(19-22'С). Контрольные семена хранили в лабораторных условиях.
Проростки высаживали в гряды на питомнике. В каждом варианте опыта и контроле наблюдали за ростом и развитием 20-25 растений. Периодизацию онтогенеза и выделение возрастных состояний растений проводили по общепринятым методикам (Работнов, 1947, 1950; Ценопопуляции растений ..., 1976; Баранова, 1999).
Биометрические исследования всходов лиан проводили через 40 дней от начала прорастания.
В течение всего периода роста и развития кустарников наблюдали за изменением высоты растений. У генеративных особей проводили морфометрические исследования как ассимилирующих, так и репродуктивных органов, изучали массу и всхожесть полученных семян. Для исследования размеров ассимилирующих и репродуктивных органов поступали следующим образом: в средней наиболее развитой части кроны каждого экземпляра собирали по 10-15 листьев, цветков и плодов. Из полученного количества методом случайной выборки отбирали 50 листьев и по 25 цветков и плодов. Из всех собранных плодов извлекали семена, и методом случайной выборки отбирали 25 шт. для измерений и три повторности по 100 семян для взвешивания и проверки всхожести.
В процессе роста и развития травянистых видов измеряли высоту растений и учитывали число побегов. У генеративных особей для биометрических исследований в наиболее облиственной части стебля отбирали 50 листьев, в средней части соцветия измеряли диаметр
25 цветков. Осенью собирали плоды, измеряли 25 шт. Методом случайной выборки отбирали необходимое количество семян для изучения размеров, массы 1000 шт. и всхожести.
Математическую обработку полученных данных выполняли по общепринятым методам биологической статистики (Зайцев, 1990). Для каждого параметра вычисляли среднюю арифметическую и ее ошибку (М±т), минимальный и максимальный предел (lim), коэффициент вариации (V). Результаты анализировали с применением критерия Стьюдента (t). Степень варьирования исследованных параметров оценивали по 6-ти балльной шкале (Зайцев, 1984).
ГЛАВА 2. Биологические особенности семян дикорастущих видов флоры Приморского края
Основная функция семян - размножение и расселение вида. Однако единицей размножения и расселения могут быть не только семена, как таковые, но и невскрывающиеся плоды (желуди Quercus dentata), плодики (орешки Adonis amurensis), части плода (косточки Cerasus sargentii), т. е. неделимые образования, содержащие зачаток будущего растения (Левина, 1987). В дальнейшем, говоря о семенах, мы будем иметь в виду все семенные зачатки, представляющие собой посевной материал.
Изучение внешнего строения семян показало, что размеры семян, масса 1000 штук, их форма, поверхность, окраска, строение рубчика, выросты на поверхности видоспецифичны. Величины, характеризующие размеры и массу семян, могут изменяться в зависимости от года сбора и местообитания вида.
Семена Lespedeza cyrtobotrya, собранные в разные годы (1988 и 1995) в Хасанском районе Приморского края на мысе Мраморном, отличались размерами и массой (5,8 г и 6,1 г соответственно). Непостоянство этих же показателей за ряд лет отмечено для семян Lespedeza tomentosa, собранных в том же районе на п-ве Гамова в бухте Теляковского. В 1985 г. были собраны самые мелкие семена этого вида (1,72 мм дл., 1,20 мм шир.), в 1992 г. -наиболее крупные (1,96 мм дл., 1,35 мм шир.). По нашим наблюдениям, изменяются линейно-весовые параметры семян, собранных с растений на коллекционном участке Ботанического сада-института ДВО РАН. Так, размеры семян Thermopsis lupinoides в период сбора с 1981 по 1995 г. варьировали в пределах: длина 3,9-4,4 мм, ширина 2,8-3,2 мм, масса 1000 шт. 8,9-12,9 г. В разные годы размерами и массой 1000 шт. отличались семена Aristolochia manshuriensis, Celastrusflagellaris, С. orbiculata, Rhododendron mucronulatum.
Отмечена внутривидовая изменчивость линейных размеров семян Lilium pensylvanicum, собранных в Чугуевском районе в одно и тоже время в разных эколого-ценотических условиях обитания вида (табл. 1), различие достоверно.
Таблица 1
Размеры семян Lilium pensylvanicum, собранных в различных местообитаниях вида
Размеры семян, мм Окрестности села Бреевка Юго-западный слон горы Снежной Коэффициент Стьюдента, t
Длина 9.92±0.12* 8,5-10,8 8.96±0.15 7,7-10,2 4,88ф*
Ширина 7.65±0.09 7,0-8,5 6.89±0.12 5,8-8,0 5,11
Примечание. * - в числителе средняя арифметическая с ошибкой (М±т), в знаменателе минимум - максимум (lim.) признака; ** - разница достоверна на 95% уровне при t> 2,01, п=25.
Особенности морфологического строения семян могут быть причиной задержки прорастания. Так, многие виды Fabaceae Приморского края имеют семена с твердой водонепроницаемой кожурой, что обуславливает экзогенный физический покой.
Проращивая семена 13 видов дикорастущих бобовых без обработки, мы обнаружили, что у некоторых видов {Astragalus uliginosus, Glycyrrhizapallidiflora, Trifolium lupinaster) доля твердых семян в образце может превышать 90 % и лишь 2-3 % прорастают за 1,5-2 месяца. Семена отдельных видов {Hedysarum ussuriense) при более длительном проращивании постепенно выходят из состояния покоя, и свыше 90 % прорастают через 5 месяцев.
После обработки концентрированной серной кислотой семена Astragalus membranaceus, видов Lespedeza, Oxytropis chancaensis и других бобовых в лабораторных условиях начинают активно прорастать уже через 1-2 дня, и за 3-4 дня прорастает от 50 % до 100 % семян. Исследования показали, что в некоторых случаях для устранения физического покоя недостаточно однократной обработки серной кислотой, и у ряда видов {Glycyrrhiza pallidiflora, Astragalus uliginosus) более 60-80 % семян остаются твердыми. Дополнительная обработка позволяет у одних видов снизить долю твердых семян {Glycyrrhiza pallidiflora), у других - полностью устранить твердосемянность {Oxytropis chancaensis, Lespedeza davurica).
При изучении прорастания семян Thermopsis lupinoides было обнаружено, что семена имеют комбинированный покой, для преодоления которого следует сочетать обработку серной кислотой (для устранения экзогенного физического покоя) с последующей стратификацией при +(8-10)°С (для снятия физиологического покоя).
Зрелые семена многих видов не прорастают, т.к. имеют маленький зародыш, рост и окончательная дифференциация которого на осевую часть и семядоли происходит после диссеминации, в/на почве, в течение определенного периода времени. Установлено, что, несмотря на различную продолжительность периода доразвития от 40-50 {Asarum sieboldii) до 115-120 дней {Epimedium macrosepalum), дифференциация зародышей происходит в летне-осенний период. Семена, характеризующиеся морфологическим типом эндогенного покоя - Б {Anemonoides amurensis, Asarum sieboldii, Enemion raddeanum, Hepatica asiatica), прорастают, как только завершится процесс доразвития зародыша, в конце лета - начале осени. Для семян с простым неглубоким морфофизиологическим типом эндогенного покоя -Б-В1 {Adonis amurensis, Arsenjeviaglabrata, Caltha sylvestris и др.) обязательным условием
прорастания является наличие периода естественной холодной стратификации (зимние температуры). Начало прорастания наблюдается весной следующего года.
В результате изучения прорастания семян Atragene ochotensis, установлено, что после созревания семена находятся в неглубоком сложном морфофизиологическом покое (BB-Bj).
Под контролем физиологического механизма торможения находится не только доразвитие
зародыша, но и прорастание. Нарушение покоя происходит под влиянием холодной стратификации при +5°С.
Семена Cerasus sargentii и Microcerasus humilis характеризуются комбинированным покоем - А2-В2 (сильным экзогенным и промежуточным физиологическим). Для его преодоления необходима холодная стратификация при +5°С.
Семена)ряда изученных нами видов (Deutzia glabrata, Bergenia pacifica, Filifolium sibiricum, Lilium buschianum, Pinus densiflora, Rhododendron schlippenbachii, Saxifraga serotina, Weigelapraecox и др.) не имеют периода покоя и легко прорастают в лабораторных условиях.
Установлено, что влажность семян (Caltha silvestris, Enemion raddeanum, Hylomecon vernalis и др. видов), созревающих в конце весны - начале лета, составляет от 50 до 70 %. Зрелые семена этих растений имеют недифференцированный зародыш, и необходимым условием его внутрисеменного роста является высокая влажность семян (активно протекают процессы метаболизма и запасные вещества расходуются в конструктивных целях).
Семена, созревающие в конце лета и осенью, постепенно высыхают до воздушно-сухого
состояния, при этом они теряют свободную воду. Свежесобранные семена (Cerasus sargentii, Celastrus orbiculata и др.) с влажностью более 20-30 % подсыхают до 7-9 % и в таком состоянии переживают отрицательные температуры зимнего периода.
Проведенные нами исследования показали, что всхожесть семян одного и того же вида может изменяться как на межпопуляционном, так и на внутрипопуляционном уровне.
В разные годы между популяциями in situ всхожесть семян по процентному показателю отличалась не более чем на 20 % у Aristolochia manshuriensis, Lespedeza tomentosa, Lilium buschianum и других видов Lilium, Philadelphus tenuifolius. У Deutzia amurensis, Weigela praecox это различие составило около 30 %. Всхожесть семян Lilium buschianum, L. callosum, собранных в один и тот же год в разных местообитаниях, отличалась только на 3-4 %, тогда как у Platycodon grandiflorus — на 60 %.
Всхожесть семян Pinus densiflora, Rhododendron aureum, Weigelapraecox и других видов, собранных в пределах одной популяции в разные годы, а также всхожесть семян, собранных в коллекции Ботанического сада-института ДВО РАН (например, виды Celastrus и Rhododendron), отличалась более чем на 20 %.
Таким образом, исследования показали, что семена редких и полезных видов флоры Приморского края разнообразны по морфологическим и биологическим особенностям. Изменчивость внешнего и внутреннего строения и внутривидовая неоднородность семян по глубине покоя, всхожести, уровню влажности при созревании имеют большое значение для адаптации вида к условиям произрастания и его выживаемости в ценозе..
ГЛАВА 3. Хранение семян дикорастущих видов флоры Приморского края
Семена многих дикорастущих видов при достижении равновесной влажности не теряют способности к прорастанию и сохраняют всхожесть при хранении в лабораторных условиях, что позволяет отнести их к ортодоксальному типу (Roberts, 1973). Согласно нашим данным, 3-4 года хранятся семена Deutzia amurensis, Platycodon grandiflorus, Celastrus Jlagellaris, С orbiculata, Weigela praecox, Philadelphustenuifolius, Bergenia pacifica, Liliumbuschianum, L. cernuum, L. pumilum, Rhododendron mucronulatum, Rh. mucronulatum subsp. sichotense. Семена Filifolium sibiricum и Pinus densiflora могут храниться в лаборатории до 7 лет.
Семена дальневосточных видов Fabaceae способны прорастать после длительного хранения. Через 16 лет после сбора всхожесть семян Thermopsis lupinoides составила более 60 %, спустя 10 лет проросло более 90 % семян Lespedeza tomentosa. Семена других видов остались всхожими после хранения в лаборатории на протяжении от 6 до 14 лет (рис. 1).
Для некоторых видов необходимым условием сохранения всхожести при хранении является высокая влажность семян. Снижение последней приводит к быстрой потере всхожести, такие семена относятся к рекальцитрантному типу (Roberts, 1973). Влажность свежесобранных семян Quercus dentata составляет 50 %, и осенние посевы дают хороший результат - всхожесть 78 %. При хранении в условиях лаборатории происходит снижение влажности, но при уровне 35 % всхожесть еще сохраняется и составляет 64 %. Дальнейшее снижение влажности до 25 % приводит к гибели семян, и желуди не прорастают. Подобная зависимость известна для семян Q. robus L. (Мамонов и др., 1986), которые сразу после сбора имеют влажность 80 %, потеря всхожести наблюдается при снижении влажности до 40 % и ниже.
У лесных травянистых многолетников отмечена зависимость изменения всхожести свежесобранных семян от снижения их влажности, которая составляет - 50-70 %. При хранении в первые 10 дней наблюдается резкая потеря влаги, спустя еще 10 дней влажность семян приходит в равновесие с влажностью окружающего воздуха и колеблется в пределах от 11 до 15 %. Одновременно с обезвоживанием семена быстро теряют всхожесть. Всхожесть семян Anemonoides amurensis в первый месяц хранения в лаборатории снижается более чем в два раза - с 84 до 35 %, через 2 месяца после сбора семена этого вида теряют способность к прорастанию (рис. 2). За два месяца полностью теряют всхожесть семена Eranthis stellata.
Период хранения, дней
Рис. 2. Изменение влажности и всхожести семян Anemonoides amurensis при хранении в
лабораторных условиях.
Собранные в первых числах июня, семена Hepatica asiatica становятся невсхожими в середине августа. В течение месяца сохраняют довольно высокую всхожесть (более 80 %) семена Asarum sieboldii, но через три месяца после сбора теряют жизнеспособность. Свежесобранные семена Plagiorhegma dubia имеют всхожесть 90 %, после четырех месяцев хранения в лабораторных условиях всхожесть составляет 10 %.
Низкая влажность семян и низкая температура позволяют продлить период хранения семян. Наши исследования всхожести семян с равновесной влажностью ' fi—10 % (ортодоксальный тип), хранившихся при +5°С в герметичной упаковке, показали, что после 11 лет остались всхожими от 88 до 95 % семян Lilium buschianum и L.pumilum, тогда как при хранении в лабораторных условия спустя 2 года оставалось 20-30 % жизнеспособных семян. За 10,5-11 лет всхожесть Bergeniapacifica, Rhododendron mucronulatum, Deutzia amurensis снизилась на 10-14 %, а при хранении в лаборатории через 4 года семена этих видов не прорастали. Спустя 10,5-11 лет на 3-7 % изменилась всхожесть семян Dioscorea nipponica, Hypericumattenuatum, Weigela praecox, на 12 % - Pinusdensiflora. Семена Filifoliumsibiricum, Platycodon grandiflorus, хранившиеся 6,5-7,5 лет, потеряли не более 10 % всхожести. Практически не изменилась за 5 лет всхожесть семян Deutzia glabrata и составила 96 %.
ГЛАВА 4. Влияние глубокого замораживания на всхожесть семян дикорастущих видов флоры Приморского края
Исследована толерантность семян 38 представителей флоры Приморского края к замораживанию при температуре -196°С (54 образца, относящихся к 23 родам, 14 семействам - это 3 вида деревьев, 13 - кустарников, 6 - лиан, 16 - травянистых растений).
Образцы семян 26 видов (13 семейств) были извлечены для проверки через 24 часа, вторую часть образцов (семена 10 видов) оставили и хранили еще 3 года. Результаты изучения лабораторной всхожести семян после 24 часов хранения в жидком азоте показали неоднозначную реакцию семян на криовоздействие (табл. 2).
Независимо от скорости замораживания наблюдалось достоверное повышение всхожести семян Ampelopsis japonica и видов Celastrus на 15-20 %. В контроле и в опыте стратифицированные семена A. japonica (+5°C) начинали прорастать одновременно, одинаков был и период прорастания, однако, в эксперименте проросло больше семян. Размороженные семена Celastrus flagellaris начинали прорастать на два дня раньше по сравнению с контролем, на третий день наблюдений, когда было отмечено начало прорастания семян в контроле, доля проросших семян в эксперименте составила 35-47 % и только 8 % - в контроле (рис. 3 А). В опыте семена Celastrus orbiculata проросли на 7 дней раньше, чем в контроле (рис. 3 Б), за 8 дней наблюдений проросло 35-39 % размороженных семян, тогда как в контроле - 10 %.
Независимо от скорости замораживания отмечено достоверное снижение всхожести семян Aristolochia manshuriensis (образец хранили только 24 часа) и Filifolium sibiricum, т. е. семена этих видов отрицательно реагировали как на медленное, так и на быстрое замораживание. Снижение всхожести было значительным - на 56—61 % у Aristolochia manshuriensis и на 33-38 % у Filifolium sibiricum.
Всхожесть размороженных семян 12 видов сохранилась на уровне близком к контролю. Семена Bergeniapacifica, Deutzia glabrata, Rhododendron mucronulatum, Rh. schlippenbachii, Lilium buschianum, Weigela praecox и других видов не реагировали на замораживание в жидком азоте, и их всхожесть не изменялась (табл. 2).
У 9 видов растений наблюдалось повышение или снижение всхожести семян только в одном из вариантов эксперимента (табл. 2). Достоверное изменение всхожести подтвердилось после статистической обработки полученных результатов, т. е. семена реагировали на определенную скорость замораживания. Размороженные и контрольные семена Cerasus sargentii начинали прорастать одновременно, но всхожесть семян в эксперименте оказалась ниже на 10 %. На медленное замораживание семена Parthenocissus tricuspidata отреагировали снижением всхожести, тогда как после быстрого всхожесть
Таблица 2
Влияние разных вариантов скорости замораживания на всхожесть семян после 24 часов хранения в жидком азоте
Вид Всхожесть, % Коэффициент Стьюдента, t
К | МЗ | БЗ КЛ43 I К/БЗ
Всхожесть повышается
Ampelopsis japonica 13±2 28±2 31±3 5,98* 6,95*
Celastrus ßagellaris 67±2 87±1 87±1 9,64* 9,64*
С. orbiculata 51±3 72±3 69±5 4,47* 3,07*
Всхожесть снижается
Aristolochia manshuriensis 84±1 23±2 28±2 26,40* 23,47*
Filifolium sibiricutn 76±3 38±4 43±4 7,62* 6,31*
Всхожесть не изменяется |
Bergenia pacifica 95±1 97±1 94±2 ! 1,81 0,41
Deutzia amurensis 94±1 93±1 92±1 0,56 1,48
D. glabrata 99±1 99±1 98±1 0,32 0,27
Dioscorea nipponica 65±1 - 67±2 - 0,82
Lilium buschianum 92±4 90±1 92±5 0,49 0,10
L. cernuum 94±1 93±2 94±2 0,68 0,17
L. pensylvanicum 90±3 88±4 73±5 0,41 2,75
Philadelphia tenuifolius 85±1 86±1 88±1 0,73 1,56
Platycodon grandiflorus 97±0 95±1 94±1 2,12 2,18
Rhododendron mucronulatum 91±2 96±3 92±3 1,47 0,40
Rh. schlippenbachii 91±1 90±1 94±1 0,75 1,29
Weigela praecox 59±3 64±6 57±2 0,81 0,59
' Всхожесть изменяется в зависимости от скорости замораживания
Armeniaca mandshurica 64±1 - 8±0 - 44,36*
Cerasus sargentii 61±1 - 51±2 - 4,90*
Microcerasus humiiis 76±2 - 40±2 - 13,62*
Lespedeza cyrtobotrya 96±2 84±4 33±5 2,59 10,94*
Lilium pumilum 74±1 73±1 63±1 0,85 6,43*
Parthenocissus tricuspidata 86±2 39±2 89±1 18,64* 1,02
Rhododendron aureum 43±2 43±1 53±2 0,17 4,63*
Rh. fauriei 49±2 26±1 47±1 11,06* 0,82
Rh mucronulatum subsp. sichotense 85±1 87±1 72±1 1,60 8,72*
Примечание. К - контроль, МЗ - медленное замораживание, БЗ - быстрое замораживание;
прочерк означает отсутствие данных; * - разница достоверна на 95% уровне при 1> 2,78 (п=3).
14 А
Дни наблюдений Б
Дни наблюдений .
Рис. 3. Влияние условий криоконсервации на всхожесть и период прорастания семян: А — Celastrus flagellar is, Б - Celastrus orbiculata.
осталась на уровне контроля. Отмечено, что в варианте быстрого замораживания и контроле за 10 дней проросло более 80 % семян, а в варианте медленного замораживания - 38 %. Быстрое замораживание положительно повлияло на всхожесть семян Rhododendron aureum, но вызвало достоверное снижение всхожести семян Rhododendronm mucronulatum subsp. sichotense на 13 %, Liliumpumilum на 11 %, Lespedeza cyrtobotrya на 61 %.
При исследовании особенностей прорастания семян 10 видов сем. Fabaceae после 24 часов хранения в жидком азоте не было отмечено отрицательного влияния криоконсервации на всхожесть. Всхожесть либо повышалась (Astragalus membranaceus, Lespedeza davurica), либо оставалась на уровне контроля (Lespedeza bicolor, Glycyrrhizapallidiflora и др.).
При исследовании всхожести семян бобовых в зависимости от вида и скорости замораживания нами отмечено появление от 1 % до 79 % проростков с аномалиями развития. Только проростки Trifolium lupinaster не имели повреждений. В контроле проростки всех изученных видов развивались без отклонений. После медленного замораживания максимальное число проростков с повреждениями появилось у Glycyrrhiza pallidiflora (70 %) и Lespedeza tomentosa (79 % ), после быстрого у L. cyrtobortrya и L tomentosa (по 78 %). У всех видов Lespedeza отмечено развитие аномальных проростков, причем, в обоих вариантах опыта минимальная доля аномалий наблюдалось у L juncea (2-5 %). Повреждения свидетельствуют о том, что испытанные скорости замораживания семян являются стрессовой ситуацией, в результате чего повреждаются семядоли, кончик зародышевого корешка и гипокотиль.
После 30 дней хранения (семена 8 видов) при -196°С отмечено достоверное снижение всхожести только у Celastrus orbiculata. Мы полагаем, что всхожесть снизилась из-за плохого качества семян. Семена были мелкие и имели низкую всхожесть - 30 %, что, по-видимому, отрицательно отразилось на их всхожести после размораживания (21 %). Подобные результаты были получены при замораживании семян Leucanthemum vulgare Lam. (Тихонова и др., 1990). Хранение в течение 30 дней не оказало влияния на всхожесть семян других 7 видов (например, Hedysarum usuriense, Pinus densiflora, видов Rhododendron).
Семена 10 видов флоры Приморского края, замороженные с разной скоростью, хранили в азоте три года, причем, долговременное хранение было продолжением эксперимента по замораживанию и хранению семян в течение 24 часов. Поэтому при исследовании всхожести после длительной криоконсервации для сравнения использовали данные, полученные при изучении прорастания семян после кратковременного хранения в азоте.
Долговременное хранение привело к снижению всхожести размороженных семян Aristolochia manshuriensis более чем на 50 %, но не вызвало изменения всхожести семян Dioscorea nipponica (образцы хранились 3 года) (табл. 3). У Filifolium sibiricum в варианте быстрого замораживания наблюдалось дальнейшее достоверное снижение всхожести семян еще на 19 %. Всхожесть семян Lilium pensylvanicum после трех лет хранения достоверно не изменилась по сравнению с кратковременным хранением. У Lilium pumilum было отмечено существенное снижение всхожести после 24 часов хранения в жидком азоте только в варианте быстрого замораживания, а после 3 лет всхожесть достоверно снизилась в обоих вариантах опыта. Анализ всхожести семян представителей родов Bergenia, Philadelphus, Platycodon, Weigela не подтвердил ее достоверного изменения после трех лет хранения. Несмотря на отмеченное выше снижение всхожести, семена 10 видов перенесли долговременное хранение в жидком азоте.
Таблица 3
Всхожесть семян разных сроков хранения в жидком азоте
Вид g a ч x g rt | Всхожесть, % Коэффициент
u à n i X о s 1 8-1 « 1 Сроки хранения Стьюдента, t
«a (9 ■ Ci 24 часа 3 года 24 часа/3 года
Aristolochia manshuriensis 83±1 БЗ - 29±2 -
Dioscorea nipponica 57±2 БЗ - 54±3 -
Bergenia paciflca 95±I M3 97±1 97±1 0,0
БЗ 94±2 95±1 0,67
Filifolium sibiricum 76±3 M3 38±4 33±1 1,36
БЗ 43±4 24±3 4,02*
Lilium buschianum 92±4 M3 90±1 88±2. 1,16
БЗ 92±5 86±1 1,04
L pensylvanicum 90±3 M3 88±4 85±1 0,76
БЗ 73±5 69±2 0,74
L. pumilum • 74±1 M3 73±1 36±3 10,58*
БЗ 63±1 49±2 5,12*
Philadelphus tenuifolius 85±1 M3 86±1 89±2 1,41
БЗ 88±1 90±1 1,32
Platycodon grandiflorus 97±0 M3 95±1 9б±2 0,46
БЗ j 94±1 95±2 0,38
Weigela praecox 59±3 M3 64±6 68±2 0,59
БЗ 57±2 64±3 1,95
Примечание. БЗ - быстрое замораживание, МЗ - медленное замораживание;* - разница.
достоверна на 95% уровне при t > 2,78 (п=3); прочерк означает отсутствие данных.
ГЛАВА 5. Морфолого-биологические особенности растений, выращенных из семян после их замораживания и хранения в жидком азоте
Для объективной оценки влияния глубокого замораживания на сохранение генетической стабильности растительного организма проводились наблюдения за развитием растений, выращиваемых из деконсервированных семян.
Результаты сравнительного изучения всходов лиан Ampelopsis japonica, Celastrus flagellaris, C. orbiculata, Parthenocissus tricuspidata, Aristolochia manshuriensis показали идентичность развития сеянцев в обоих вариантах эксперимента и контроле. Глубокое замораживание не оказало влияния на изменчивость морфологических признаков всходов. Прошедшие полный цикл развития особи С. flagellaris и С. orbiculata, выращенные из
размороженных семян, не отличались от контрольных по продолжительности прегенеративного периода. Криообработка не повлияла на репродуктивную способность генеративных растений и всхожесть семян в первом поколении.
Многолетние наблюдения, проводимые за ростом Philadelphia tenuifolius показали, что в возрасте двух лет высота сеянцев в варианте быстрого замораживания (24,9 см) была достоверно меньше таковой у контрольных растений (33,6 см), t=3,48, что превышает t=2,01 при n=25, Р=95 %. Через год сеянцы достигли высоты 59,6 см и 65,5 см соответственно, различие опыта с контролем сгладилось (t=l,70) и в дальнейшем не выявлялось. Анализ биометрических показателей развития зрелых генеративных особей в эксперименте не подтвердил достоверности отличий с контрольными экземплярами. Семена, собранные с растений, выращенных в обоих вариантах эксперимента и контроле, достоверно не отличались по размерно-весовым характеристикам и всхожести.
Наблюдения за ростом и развитием Rhododendron mucronulatum показали, что прегенеративный этап через 4-5 лет заканчивался, и растения начинали цвести. Морфометрическое изучение вегетативных и репродуктивных органов генеративных особей и последующий анализ полученных результатов показали, что в первый год плодоношения особи, выращенные из семян, подвергнутых криовоздействию в варианте быстрого замораживания, были близки к контрольным экземплярам по всем изученных параметрам. Растения, выращенные в варианте медленного замораживания, от контрольных достоверно отличались по ширине листа и длине семян (табл. 4). Однако всхожесть семян не отличалась от контрольного значении. Отмеченные нами различия с увеличением возраста генеративных особей исчезли (t=l,69 для ширины листа и t=l,51 для длины семян). Криообработка семян Rh mucronulatum не оказала влияния на изменчивость вегетативных и репродуктивных органов генеративных особей и качество полученных семян.
У особей Rhododendron schlippenbachii, выращенных из размороженных семян и контрольных, прегенеративный этап развития закончился через 6-7 лет. Наблюдения за ростом и развитием растений, морфологическими особенностями вегетативных и репродуктивных органов и анализ полученных данных не показали достоверных отличий генеративных особей в каждом варианте опыта от контрольных экземпляров. Глубокое замораживание не оказало влияния на размеры и качество полученных семян. Как в контроле, так и в опыте, при массе 1000 шт. равной 0,43-0,45 г прорастало около 90 % семян.
Многолетние наблюдения за ростом показали, что растения Weigela praecox, выращиваемые из семян в обоих вариантах опыта, по высоте были близки растениям в контроле. Продолжительность прегенеративного периода развития составила 3-4 года, в пятилетнем возрасте цвели 100% особей. Анализ метрических характеристик
Таблица 4
Характеристика генеративных растений Rhododendron mucronulatum, выращенных из семян, прошедших криообработку
Параметры Контроль Быстрое замораживание Медленное замораживание Коэффициент Стьюдента, t*
М±ш lim V,% М±т lim V,% М±т lim V,% Табл. К/БЗ К/МЗ
Высота растений, см 74,0±1,39 64,0-88,0 8,4 75,9±1,47 68,0-90,0 8,7 77,6±U1 70,0-92,0 7,5 2,02 0,94 1,86
Ö длина, см 5,1±0,11 3,7-6,5 15,5 5,3±0,10 4,0-6,6 14,0 5,3±0,12 3,9-6,9 16,0 1,98 1,28 0,72
ширина, см 2,1±0,03 1,6-2,4 11,4 2,1±0,04 1,7-2,7 14,6 2,2±0,04 1,7-2,5 11,8 1,98 1,05 2,11*
Диаметр венчика цветка, мм 43,3±0,55 39,0-48,0 6,3 42,2±0,37 40,0-45,0 4,4 43,9±0,43 39,0-46,0 4,8 2,01 1,68 0,86
g длина, мм 13,5±0,42 9,5-16,0 15,9 13,0±0,34 10,0-15,0 13,1 14,0±0,42 10,2-16,6 15,0 2,01 0,86 .0,83
È ширина, мм 4,3±0,10 3,3-5,0 11,6 4,2±0,11 3,1-5,0 13,3 4,1±0.12 3,2-5,1 14,9 2,01 0,42 0,68
длина, мм 1,2±0,03 1.0-1,5 13,9 1,2±0,03 .1,0-1,4 11,3 1,3±0,02 1,1-1,5 9,6 2,01 0,63 2,04*
« s о ширина, мм 0,5±0,01 0,4-0,6 14,3 0,5±0,01 0,5-0,7 11,6 0,5±0,01 0,4-0,6 9,9 2,01 1,92 1,82
Я u (J масса 1000 шт., г 0,10±0,001 0,095-0,10 2,0 0,09±0,001 0,09-0,097 3,3 0,10±0,001 0,097-0,10 2,0 2,78 1,74 0,88
всхожесть, % 91,3±2,03 88,0-96,0 3,8 89,7±2,03 86,0-93,0 3,9 92,7±1,76 90,0-96,0 3,3 2,78 0,58 0,50
Примечание. К - контроль, БЗ - быстрое замораживание, МЗ - медленное замораживание; * - разница достоверна на 95 % уровне 0 вычисленное > I табличного).
ассимилирующих и репродуктивных органов генеративных особей не показал достоверных различий между опытными и контрольными растениями. Всхожесть семян, собранных в обоих вариантах опыта, не отличалась от всхожести семян, полученных в контроле.
Согласно нашим многолетним наблюдениям, генеративные особи Lilium buschianum и L pumilum, выращенные из размороженных семян в каждом варианте эксперимента, не отличались по темпам роста и развития от контрольных растений. Ни один из испытанных вариантов скорости замораживания семян не оказал влияния на изменчивость вегетативных и генеративных органов, репродуктивную способность растений, качество их семян. Отмеченные нами метрические различия некоторых параметров (размеры и масса семян) между опытом и контролем имели временный характер и исчезали с возрастом растений.
Наблюдения за ростом и развитием Platycodon grandiflorus, проводимые в течение нескольких лет, позволили отметить, что в обоих вариантах эксперимента выращиваемые растения по средним значениям высоты (n=20) были близки к контрольным. Прегенеративный период длился 1-2 года, причем и в контроле, и в каждом варианте опыта в двухлетнем возрасте цвели 75-80 % особей. Высота цветущих побегов не превышала 22-23 см, на одно растение приходилось 1-2 побега, 1-2 цветка. Далее из года в год увеличивались высота, число побегов и цветков, диаметр венчика, размеры листьев, и не было различий между опытными и контрольными растениями. Необходимо заметить, что семена, собранные с трехлетних растений в варианте медленного замораживания, были длиннее семян в контроле (t=2,15, что превышало t=2,01, при n=25, Р=95 %). С увеличением возраста растений это различие не приняло характер тенденции. Ни в одном из вариантов опыта не было отмечено влияния криообработки на изменчивость вегетативных и репродуктивных органов, на качество семян в первом поколении.
В двух- и трехлетнем возрасте, выращенные из размороженных и контрольных семян особи Bergenia pacifica, начали плодоносить. Глубокое замораживание не оказало влияния на развитие их генеративных органов и репродуктивную способность: размеры, масса 1000 шт. и всхожесть семян (88 %-91 %), полученных в обоих вариантах эксперимента, были идентичны таковым в контроле.
После криовоздействия семена Filifolium sibiricum показали значительное снижение всхожести (табл. 2). Тем не менее, мы получили растения, которые, пройдя полный цикл развития, дали жизнеспособные семенное потомство. Этот факт говорит о том, что, метод криоконсервации можно использовать для хранения семян, отрицательно реагирующих на замораживание. Подобные результаты были получены при замораживании в жидком азоте семян Arachis hypogaea L. Несмотря на то, что после 1 месяца хранения всхожесть снизилась с 75 % до 25 %, наблюдалось нормальное развитие всходов (Matsushima et al., 1987).
ВЫВОДЫ
1. Изучение биологических особенностей семян дикорастущих видов Приморского края позволило выявить внутривидовое разнообразие структурных особенностей семян, наличие периода покоя, его тип, способы преодоления или отсутствие затрудненного прорастания, показатель влажности при созревании, изменчивость всхожести в пределах одной популяции и на межпопуляционном уровне.
2. Сроки хранения семян ортодоксального типа в условиях лаборатории ограничиваются в среднем 3-4 годами {Bergenia pacifica, Lilium buschianum и др.), у отдельных видов всхожесть сохраняется до 7 лет {Pinus densiflora, Filifolium sibiricum). Герметизация и хранение при температуре +5°С позволяют увеличить период жизнеспособности семян до 10,5-11 лет. Хранение в лабораторных условиях семян рекальцитрантного типа {Adonis amurensis, Plagiorhegma dubia и др.) в течение 2-5 месяцев после сбора приводит к полной потере всхожести. Такие семена во влажном состоянии можно хранить 7-8 месяцев при +5°С (Quercus dentata).
3. Криоконсервация семян с равновесной влажностью (5,4-10,4 %) 38 дикорастущих видов флоры Приморского края в течение 24 часов, 30 дней и 3 лет не вызывает полной потери всхожести. Криоустойчивость семян исследованных видов неоднозначна: у ряда видов независимо от скорости охлаждения лабораторная всхожесть размороженных семян либо повышается {Celastrus jlagellaris, Astragalus uluginosus и др.), либо снижается (например, Filifolium sibiricum), при этом может изменяться динамика прорастания. Выявлена группа видов {Bergenia pacifica, Deutzia amurensis, Lespedeza tomentosa и др.), у которых всхожесть семян и динамика прорастания остаются без изменений.
4. Замораживание в жидком азоте не оказывает влияния на период холодной стратификации семян изученных видов, характеризующихся физиологическим (например, Ampelopsisjaponica) или комбинированным (например, Cerasus sargentii) типом покоя.
5. В зависимости от вида и скорости охлаждения твердосемянность изученных представителей сем. 'Fabaceae после однократного замораживания снижается от 2 % до 100 %. Для семян некоторых видов бобовых испытанные скорости замораживания являются стрессовой ситуацией, в результате чего развивается от 1 % {Astragalus membranaceus) до 79 % {Lespedeza cyrtobortrya, L tomentosa) аномальных проростков с повреждениями семядолей, зародышевого корешка и гипокотиля, причем медленное замораживание приводит как к снижению, так и к увеличению доли поврежденных проростков.
6. Ни один из испытанных вариантов глубокого замораживания семян не оказал влияния на развитие всходов, рост растений, продолжительность прегенеративного периода, на
изменчивость морфологических признаков ассимилирующих и репродуктивных органов генеративных особей, на репродуктивную способность выращенных растений и качество семян в первом поколении.
7. Проведенные исследования показывают, что. криоконсервация семян - это перспективный метод долговременного хранения. При организации криобанка генофонд вида должен быть, представлен генетически разнородным материалом, собранным в различных природных популяциях.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. В лабораторных условиях 3-4 года сохраняют всхожесть семена многих древесно-кустарниковых и травянистых видов (Deutzia amurensis, Celastrus flagellaris, C. orbiculata, Platycodon grandiflorus, Weigela praecox, Philadelphus tenuifolius, Filifolium sibiricum, Bergenia pacifica, виды Lilium, Rhododendron, Pinus.densiflora др.). Для хранения лучше использовать тщательно очищенные неповрежденные семена со всхожестью 85-100 %.
Период хранения семян можно продлить до 10-11 лет. Для этого воздушно-сухие семена помещают в герметично закрытую емкость (стеклянные пробирки с резиновыми пробками или другой тип контейнеров), заполняя по возможности весь объем, и хранят при +5°С или более низкой температуре (до -20°С). Можно использовать бытовой холодильник.
2. Семена многих видов сем. Fabaceae (Medicago lupulina, Trifolium lupinaster, Lathyrus japonica, L. davidii, Thermopsis lupinoides, Glycyrrhiza pallidiflora, Oxytropis chancaensis все
виды Lespedeza, Astragalus) можно 6-14 лет (и больше) хранить в лабораторных условиях.
3. Хранение желудей Quercus dentata следует организовать так, чтобы они не снижали влажность и не подвергались воздействию повышенной температуры воздуха. Свежесобранные неповрежденные желуди помещают во влажный матерчатый мешок и плотно заворачивают в целлофановую пленку. Влажная ткань препятствует конденсации влаги на внутренней стороне пленки. Хранят при температуре +(5-8)°С до весны следующего года в бытовом холодильнике. Чтобы не скапливались излишки углекислоты, один раз в два месяца проводят кратковременную разгерметизацию упаковки.
4. Не рекомендуется более 2 месяцев хранить в лабораторных условиях семена Anemonoides amurensis, Eranthis stellata, Hepatica asiatica. He более 4 месяцев можно хранить семена Adonis amurensis, Asarum sieboldii, Plagiorhegma dubia. Для практических целей лучше использовать свежесобранные семена или семена, хранившиеся не более 2-3 недель (Anemonoides amurensis, Eranthis stellata, Hepatica asiatica, Hylomecon vernalis) или 4-5 недель (Adonis amurensis, Asarum sieboldii, Plagiorhegma dubia, Arsenjevia glabrata).
5. Семена дикорастущих видов флоры Приморского края, сохраняющие способность к прорастанию в воздушно сухом состоянии (ортодоксальный тип), можно хранить в жидком азоте при температуре -196°С. Замораживанию подвергают семена, предварительно высушенные до 11-13 % влажности (но не более 15 %), которые упаковывают в пластиковые или стеклянные контейнеры с плотными крышками и погружают в сосуд с азотом.
6. Семена дикорастущих видов Fabaceae (виды Astragalus, Lespedeza, Glycyrrhiza pallidiflora, Trifolium lupinaster, Oxytropis chancaensis) перед проращиванием предварительно замачивают в концентрированной серной кислоте на 30 мин, а затем промывают большим количеством воды. Если часть семян остаются твердыми, обработку необходимо повторить.
Для преодоления покоя семян Thermopsis lupinoides следует сочетать обработку концентрированной серной кислотой с последующей стратификацией при +(8-10)°С в течение 10-15 дней, после чего семена проращивают при комнатной температуре.
7. Семена Cerasus sargentii и Microcerasus humilis перед посевом необходимо стратифицировать при температуре +5°С в течение 3 месяцев. Семена Atragene ochotensis при такой же температуре выдерживают 30 дней.
ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ СЛЕДУЮЩИЕ РАБОТЫ
1. Нестерова СВ. Изучение прорастания и изменения жизнеспособности семян некоторых травянистых растений // Охрана, обогащение, воспроизводство и использование растительных ресурсов: Тез. докл. Всесоюз. науч. совещ. - Ставрополь, 1990. - С. 178 - 180.
2. Стародубцев В.Н., Нестерова СВ. Печеночница азиатская - Hepatica asiatica Nakai // Биология редких сосудистых растений советского Дальнего Востока. - Владивосток: ДВО АН СССР, 1990. С. - 87 - 93.
3. Нестерова СВ. Изменение жизнеспособности семян некоторых декоративных растений при длительном хранении // Репродуктивная биология интродуцированных растений: Тез. докл. IX Всесоюз. совещ. по семеноведению интродуцентов. - Умань, 1991. -С. 145.
4. Нестерова СВ. Прорастание семян и ранние этапы онтогенеза некоторых редких растений Приморского края // Флора и фауна Приморского края и сопредельных регионов: Тез. конф. - Уссурийск, 1991. - С. 70 - 73.
5. Стародубцев В.Н., Нестерова С.В. Арсеньевия гладкая - Arsenjevia glabrata Starodub. // Биологические особенности сосудистых растений советского Дальнего Востока. -Владивосток: ДВО АН СССР, 1991. - С. 87 - 95.
6. Нестерова СВ. Особенности семенного размножения и перспективы сохранения и восстановления генофонда кирказона маньчжурского // VII Арсеньевские чтения: Сб. науч. тр. - Уссурийск, 1993. - С. 96 - 98.
7. Нестерова С.В. Хранение и жизнеспособность желудей дуба зубчатого // Особенности развития и прорастания семян интродуцентов: Тез. докл. X совещ. по семеноведению интродуцентов. - М., 1994. - С. 24.
8. Нестерова С.В., Яшина С.Г. Криоконсервация семян некоторых редких и декоративных растений Дальнего Востока // Биофизика живой клетки. - Т. 6: Криоконсервация генетических ресурсов в проблеме сохранения биоразнообразия. -Пущино, 1994. - С. 91 - 93.
9. Voroncova N., Nesterova S., Zhuravlev Yu. Conditions for seeds germination in the rare and endangered species of South Far East of Russia // Collection of abstracts XVIII Pacific Science Congress. June 5-12, - 1995, Beijing, China. - P. 319.
10. Воронкова Н.М., Нестерова СВ., Холина А.Б. К биологии прорастания семян некоторых редких и исчезающих видов Приморья // Биологическое разнообразие. Интродукция растений: Материалы науч. конф. (12-15 дек. 1995 г., Санкт-Петербург). -СПб., 1995.-С 199-200.
11. Нестерова С.В., Хоменко А.В. Некоторые итоги изучения реакции семян на замораживание в жидком азоте // Биологическое разнообразие. Интродукция растений.. Материалы науч. конф. (12-15 дек. 1995 г., Санкт-Петербург). - СПб., 1995. - С. 219 - 220.
12. Воронкова Н.М., Нестерова СВ., Журавлев Ю.Н. Прорастание семян. некоторых редких и исчезающих видов Приморского края // Раст. ресурсы. - 1996. - Т. 32, вып. 3. -С.51-60.
13. Холина А.Б., Нестерова СВ., Воронкова Н.М. Особенности прорастания семян дальневосточных леспедец // Тр. Первой Всерос. конф. по ботан. ресурсоведению. - СПб., 1996.-С. 84-85.
14. Нестерова СВ., Холина А.Б, Воронкова Н.М. Температурный фактор в прорастании семян некоторых видов сем. Fabaceae II Флора и растительность Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Второй рос. конф. - Красноярск, 1996. - С. 270 - 271.
15. Nesterova S. Seed cryogenic characteristics and conservation possibility of woody plant genofond // Cedar Broadleared Forests of Far East. Proc. of Intern. Conf. - Khabarovsk, 1996. -P. 215.
16. Воронкова Н.М., Бурундукова О.Л., Журавлев Ю.Н., Нестерова СВ., Абанькина М.Н. Структурно-функциональные особенности некоторых редких и исчезающих видов растений // Комаров, чтения. - Владивосток, 1997. - Вып. 44. - С 72 - 88.
17. Нестерова СВ.,. Холина А.Б., Воронков АА. Всхожесть семян некоторых представителей семейства бобовых после длительного хранения // Животный и растительный мир Дальнего Востока: (Сб. науч. тр.). - Уссурийск, 1997.-Вып. 3. - С. 207-210.
18. Нестерова СВ., Холина А.Б, Воронкова Н.М. Жизнеспособность семян и развитие однолетних особей двух видов рода Lespedeza Michx. Дальнего Востока России // Раст. ресурсы. - 1998. - Т. 34, вып. 2. - С. 40 - 47.
19. Нестерова СВ. Влияние глубокого замораживания семян редких видов рода Lilium L. на их способность к прорастанию // Цветоводство сегодня и завтра: (генофонд, его сохранение и обогащение): Тез. докл. III Междунар. конф. - М., 1998. - С. 194 - 195.
20. Нестерова СВ. Долговременное хранение семян дикорастущих растений Приморского края // Биологическое разнообразие. Интродукция растений. Материалы II-Междунар. науч. конф. (20-23 апр. 1999 г. Санкт-Пебтербург). - СПб., 1999. - С 363 - 365.
21. Холина А.Б., Нестерова СВ., Воронкова Н.М. Биология прорастания семян Thermopsis lupinoides (L) Link. // Раст. ресурсы. - 1999. - Т. 35, вып. 3. - С 43 - 50.
22. Нестерова СВ. Криоконсервация семян дикорастущих растений в ботаническом саду ДВО РАН: перспективы, проблемы, некоторые итоги // Криоконсервация генетических ресурсов. Материалы XV рабочего совещ. (Пущино, 13-15 окт. 1998 г.). - Пущино, 1998. -С. 212-215.
23. Воронкова Н.М., Нестерова СВ., Прилуцкий А.Н., Холина А.Б. К вопросу о семенном размножении редких для Приморья видов древесных растений // Леса и лесообразовательный процесс на Дальнем Востоке. Материалы междунар. конф. (посвящ. 90-летию со дня рождения Колесникова Б.П., Владивосток; 23-25 апр., 1999 г.) -Владивосток, 1999. - С 81 - 83.
24. Воронкова Н.М., Нестерова СВ., Журавлев Ю.Н. Размножение редких видов растений Приморского края. - Владивосток: Дальнаука, 2000. - 145 с.
25. Нестерова СВ., Яшина С.Г. Повреждающее воздействие сверхнизких температур на проростки видов семейства Fabaceae II Растения муссонного климата: Тез. II Междунар. конф. - Владивосток: Дальнаука, 2000. - С. 131 - 132.
26. Нестерова СВ., Пшенникова Л.М., Коханова И.М. Морфолого-биологические особенности семян некоторых растений Дальнего Востока России // Интродукционные центры Дальнего Востока России: Итоги исследований. Материалы Первой отчет. сес. регион. Совета ботан. садов Дал. Востока, 10-11 окт. 2001 г., г. Владивосток. - Владивосток: -Дальнаука, 2002. - С. 90 - 101.
27. Нестерова С. В. Устойчивость семян дикорастущих видов флоры Приморского края к замораживанию в жидком азоте // Растения в муссонном климате. III: Материалы III междунар. конф. - Владивосток: БСИ ДВО РАН, 2003. - С. 268 - 273.
»1618?
Подписано в печать 06.09.2004 г. Формат 60x90/16.
Уч.-изд. л. 1. Тираж 100. Заказ 5197. Отпечатано в копировальном центре ЗАО «Фартоп» Владивосток, ул. Алеутская, 28.
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Нестерова, Светлана Владимировна
Введение.3
Глава 1. Материал и методика исследований.8
Глава 2. Биологические особенности семян дикорастущих видов флоры Приморского края.18^
2.1. Структурные особенности семян.
2.1.1. Внешнее строение.20
2.1.2. Внутреннее строение.25
2.2. Особенности прорастания семян.27
2.3. Влажность семян.36
2.4. Всхожесть семян.38^
Глава 3. Хранение семян дикорастущих видов флоры Приморского края.42
3.1. Хранение в лабораторных условиях.
3.1.1. Хранение семян ортодоксального типа.45
3.1.2. Хранение семян рекальцитрантного типа.49
3.2. Хранение при низкой положительной температуре.52
Глава 4. Влияние глубокого замораживания на всхожесть семян дикорастущих видов флоры Приморского края.55
4.1. Хранение семян в жидком азоте в течение 24 часов.
4.1.1. Реакция семян различных видов классов однодрльных и двудольных.5 8
4.1.2. Реакция семян видов сем. Fabaceae.72
4.2. Хранение семян в жидком азоте в течение 30 дней.84
4.3. Хранение семян в жидком азоте в течение 3 лет.87
Глава 5. Морфолого-биологические особенности растений, выращенных из семян после их замораживания и хранения в жидком азоте.91
5.1. Лианы.92
5.2. Кустарники.99
5.3. Травянистые растения.112
Выводы.123
Введение Диссертация по биологии, на тему "Криоконсервация семян дикорастущих растений Приморского края"
В настоящее время проблема сохранения биологического разнообразия приобрела большое значение и признана одной из ключевых. Биологические ресурсы являются основой для поддержания экологических условий существования и экономического развития человеческого общества. Согласно международной Конвенции о биологическом разнообразии (1995), принятой и подписанной 5 июня 1992 г. на Конференции ООН по окружающей среде и развитию в Рио-де-Жанейро, фиторесурсы государств, присоединившихся к конвенции, объявлены национальной собственностью. В связи с интенсивными темпами деградации флоры под влиянием антропогенных факторов и техногенных катастроф объектами пристального внимания становятся редкие и исчезающие виды, эндемики, полезные дикорастущие растения (например, лекарственные, декоративные), численность которых резко уменьшается.
Одна из главных задач ботанических садов - это сохранение генетического разнообразия растительного мира своих регионов (Стратегия ботанических садов ., 1994). Согласно Конвенции о биологическом разнообразии (1995), охрана растений может осуществляться как в форме in situ, т.е. в местах обитания видов в пределах экосистем или естественной среде, так и в форме ex situ, т.е. путем создания и поддержания условий, необходимых для сохранения компонентов биоразнообразия за пределами экосистем и популяций видов. Деятельность ботанических садов должна быть направлена на сохранение живых образцов (коллекции растений), семян, пыльцы, вегетативных частей побегов, культуры тканей и клеток (Международная программа ., 2000). Хранение генетического материала природной флоры в виде семян является одним из самых распространенных, практичных и эффективных способов охраны ex situ (Hawkes, 1990). За последние 30 лет организации и институты, занимающиеся изучением растительных ресурсов, накопили огромный опыт в этой области. Семена являются удобным средством рационального хранения разнообразия растений, и создание генных банков имеет свои преимущества: образцы семян занимают незначительный объем, требуют небольшого ухода и остаются жизнеспособными в течение долгого времени. Во многих ботанических садах мира созданы банки семян местных видов растений. По последним подсчетам BGCI (Международный совет ботанических садов по охране растений) более чем в 200 садах налажено долговременное хранение семян (Международная программа ., 2000). Международным институтом генетических ресурсов растений (IPGRI) рекомендованы режимы хранения -4°С и -18°С, влажность ортодоксальных семян 7-8 % (Laliberte, 1997). Международным советом ботанических садов по охране растений для хранения семян предлагаются низкие положительные температуры +5°С и неглубокое замораживание - до -20°С (Botanic gardens ., 1987). Температурные режимы, рекомендованные международными организациями для банков семян, замедляя процессы метаболизма, продлевают жизнь семян, но не обеспечивают их длительного хранения, со временем может происходить снижение жизнеспособности, приводя к потере ценного генетического материала. В настоящее время наиболее долговременное сохранение геномов возможно в криобанках, где в замороженном состоянии при температуре жидкого азота (-196°С) в виде семян или других органов хранится информация о структурном и функциональном разнообразии растений. Изучение возможности криоконсервации семян дикорастущих видов началось сравнительно недавно - в начале 80-х годов XX века, но уже очевидно, что это перспективный способ сохранения генетических ресурсов растительного мира (Stanwood, 1985; Тихонова, 1999 а).
Во флоре Приморского края насчитывается 149 редких и исчезающих растений (Харкевич, Качура, 1981), из них 78 внесено в Красную книгу РСФСР (1988). Многие местные виды обладают полезными свойствами (лекарственные, декоративные, пищевые, медоносные, кормовые и др.).
Массовые заготовки и систематический сбор таких растений в их естественных местообитаниях наносят значительный ущерб природным популяциям, и виды, которые кажутся благополучными, могут перейти в категорию редких. По данным С.С. Харкевича (1997), в 6 заповедниках Приморского края сосредоточено более 1800 видов флоры, однако почти 800 еще не обеспечены этой формой охраны. Таким образом, традиционные способы охраны in situ не могут обеспечить сохранение биоразнообразия дикорастущих растений. В данной ситуации вполне реальным представляется долговременное хранение семян в банках, при создании которых необходимо учитывать все характерные особенности семян, обращая внимание на качество консервируемого материала. Изучение биологии прорастания и применение определенных методов проращивания семян позволит получить растения, которые, пройдя полный цикл развития, дадут полноценное потомство. До настоящего времени метод криоконсервации семян видов флоры Приморского края не применялся, и не изучалась толерантность семян к замораживанию в жидком азоте, что и определило выбор темы диссертационной работы.
Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы - изучить биологические особенности и толерантность семян к замораживанию при температуре жидкого азота (-196°С) и оценить возможность применения криоконсервации как метода долговременного хранения.
В соответствие с поставленной целью нам предстояло решить следующие задачи:
1. Изучить биологические особенности семян.
2. Изучить влияние положительных температур хранения на жизнеспособность семян.
3. Изучить реакцию семян на замораживание при температуре жидкого азота и проанализировать влияние различных режимов охлаждения на всхожесть семян.
4. Изучить и проанализировать влияние глубокого замораживания семян на рост и развитие растений, на их репродуктивную способность и всхожесть семян в первом поколении.
5. Разработать научно обоснованные рекомендации по хранению семян.
Научная новизна. Разработаны методы преодоления покоя семян 4 видов.
Для 11 видов лесных травянистых многолетников впервые установлены стадия развития зародыша в зрелом семени и период его полной дифференциации, тип покоя семян и температурные условия прорастания. Для семян ортодоксального и рекальцитрантного типа определены сроки хранения в лабораторных условиях. Впервые оценка возможности криоконсервации семян осуществлена на основе комплексного подхода, который включает замораживание семян с разной скоростью, изучение всхожести деконсервированного материала, выращивание растений из размороженных семян и получение семенного потомства в первом поколении. Впервые проведены сравнительные исследования роста и развития растений, выращенных из семян после хранения в жидком азоте, и разработаны методические основы оценки влияния глубокого замораживания на сохранение генетической стабильности семян дикорастущих кустарников.
Практическая ценность. Материалы изучения биологических особенностей семян, сроков хранения в лаборатории и условий продления их жизнеспособности в полном объеме были учтены при подготовке коллективной монографии «Размножение редких видов растений Приморского края» (Воронкова, Нестерова, Журавлев, 2000). Информация о типах покоя семян и особенностях их прорастания может быть использована при решении вопросов интродукции и реинтродукции редких и полезных видов. Полученные данные об изменении всхожести при хранении могут быть рекомендованы для подбора оптимальных способов и условий хранения семян. Результаты изучения влияния криообработки на всхожесть деконсервированных семян, рост и развитие растений могут служить основой создания криобанка зародышевой плазмы, в первую очередь редких и исчезающих дальневосточных растений.
Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на всесоюзных совещаниях «Консервация генетических ресурсов» (г. Пущино, 1991, 1994, 1998, 2002), расширенном заседании Ученого совета Ботанического сада-института ДВО РАН (1995, 1998, 2001, 2003), 49-х Комаровских чтениях (г. Владивосток, 1996), Международной конференции «Леса и лесообразовательный процесс на Дальнем Востоке» (г. Владивосток, 1999), на заседании «Круглого стола» IV Дальневосточной конференции по заповедному делу (г. Владивосток, 1999), II международной научной конференции «Растения в муссонном климате» (г. Владивосток, 2000).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 27 работ.
Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, приложения, списка литературы, содержащего 244 наименования, в том числе 73 источника на иностранных языках. Работа изложена на 150 страницах машинописного текста, включает 25 таблиц и 27 рисунков.
Заключение Диссертация по теме "Биологические ресурсы", Нестерова, Светлана Владимировна
123 ВЫВОДЫ
1. Изучение биологических особенностей семян дикорастущих видов Приморского края позволило выявить внутривидовое разнообразие структурных особенностей семян, наличие периода покоя, его тип, способы преодоления или отсутствие затрудненного прорастания, уровень влажности при созревании семян, изменчивость всхожести в пределах одной популяции и на межпопуляционном уровне.
2. Сроки хранения семян ортодоксального типа в условиях лаборатории ограничиваются в среднем 3-4 годами {Bergenia pacifica, Lilium buschianum и др.), у отдельных видов всхожесть сохраняется до 7 лет {Pinus densiflora, Filifolium sibiricum). Герметизация и хранение при +5°С позволяют увеличить период жизнеспособности семян до 10,5-11 лет. Хранение в лабораторных условиях семян рекальцитрантного типа {Adonis amurensis, Plagiorhegma dubia и др.) в течение 2-5 месяцев после сбора приводит к полной потере всхожести. Такие семена во влажном состоянии можно хранить 7-8 месяцев при +5°С (iQuercus dentata).
3. Криоконсервация семян с равновесной влажностью (от 5,4 % до 10,4 %) 38 видов дикорастущих растений Приморского края в течение 24 часов, 30 дней и 3 лет не вызывает полной потери всхожести. Криоустойчивость семян исследованных видов неоднозначна: у ряда видов независимо от скорости охлаждения лабораторная всхожесть размороженных семян либо повышается (например, Celastrus flagellaris, Astragalus uluginosus), либо снижается (например, Filifolium sibiricum), при этом может изменяться динамика прорастания. Выявлена группа видов {Bergenia pacifica, Deutzia amurensis, Lespedeza tomentosa и др.), у которых всхожесть семян и динамика прорастания остаются без изменений.
4. Замораживание в жидком азоте не оказывает влияния на период холодной стратификации семян изученных видов, характеризующихся физиологическим (например, Ampelopsis japonica) или комбинированным (например, Cerasus sargentii) типом покоя.
5. В зависимости от вида и скорости охлаждения твердосемянность изученных представителей сем. Fabaceae после однократного замораживания снижается от 2 % до 100 %. Для семян некоторых видов бобовых испытанные скорости замораживания являются стрессовой ситуацией, в результате чего развивается от 1 % (Astragalus membranaceus) до 79 % (Lespedeza cyrtobortrya, L. tomentosa) аномальных проростков с повреждениями семядолей, зародышевого корешка и гипокотиля, причем медленное замораживание приводит как к снижению, так и к увеличению доли поврежденных проростков.
6. Ни один из испытанных вариантов глубокого замораживания семян не оказал влияния на развитие всходов, рост растений, продолжительность прегенеративного периода, на изменчивость морфологических признаков ассимилирующих и репродуктивных органов генеративных особей, на репродуктивную способность выращенных растений и качество семян в первом поколении.
7. Проведенные исследования показывают, что криоконсервация семян -это перспективный метод долговременного хранения. При организации криобанка генофонд вида должен быть представлен генетически разнородным материалом, собранным в различных природных популяциях.
125
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Нестерова, Светлана Владимировна, Владивосток
1. Андриянова Е.А., Беркутенко А.Н. Биология прорастания семян некоторых видов Дальнего Востока России // Раст. ресурсы. 1999. - Т. 35, вып. 1.-С. 46-52.
2. Андриянова Е.А., Беркутенко А.Н. Особенности прорастания семян некоторых видов флоры Дальнего Востока России // Флора и климатические условия Северной Пацифики. Магадан: ИБПС ДВО РАН, 2001. - С. 165 - 172.
3. Артюшенко З.П., Федоров Ал.А. Атлас по описательной морфологии высших растений. Плод. Л.: Наука, 1986. - 392 с.
4. Артюшенко З.П. Атлас по описательной морфологии высших растений. Семя. Л.: Наука, 1990. - 204 с.
5. Банник Э.В., Яшина С.Г. Сохранение редких и исчезающих видов дикорастущих растений для реконструкции фитоценозов // Биценозы окрестностей Пущина: Сб. науч. тр. Пущино, 1990. - С. 130 - 142.
6. Баранова А.Е. Криоконсервация лекарственных растений и ее последействие // Современные проблемы генетики, биотехнологии и селекции растений: Тез. Междунар. конф. молод, ученых. Харьков, 2001. - С. 133 - 134.
7. Баранова А.Е., Тихонова В.Л. Сохранение генофонда лекарственных растений в банках семян // Современные проблемы генетики, биотехнологии и селекции растений: Тез. Междунар. конф. молод, ученых. Харьков, 2001. -С. 134- 135.
8. Баранова М.В. Луковичные растения семейства лилейных (география, биоморфологический анализ, выращивание). СПб.: Наука, 1999. - 229 с.
9. Барыльникова А.Д. Всхожесть семян среднеазиатских видов рода Astragalus L. в связи с длительностью хранения их в лаборатории. Сообщ. 1. //
10. Интродукция и акклиматизация растений. Ташкент, 1980. - Вып. 18. - С. 49 -54.
11. Барыльникова А.Д. Всхожесть семян среднеазиатских видов рода Astragalus L. в связи с длительностью хранения их в лаборатории. Сообщ. 2. // Интродукция и акклиматизация растений. Ташкент, 1984а. - Вып. 19. -С. 60-64.
12. Барыльникова А.Д. Хранение семян обменного фонда в Ботаническом саду АН УзССР // Проблемы развития семеноведения и семеноводства интродуцентов. М., 19846. - С. 81 - 85.
13. Биологические особенности сосудистых растений советского Дальнего Востока. Владивосток: ДВО АН СССР, 1991. - 164 с.
14. Биология редких сосудистых растений советского Дальнего Востока. -Владивосток: ДВО АН СССР, 1990. 164 с.
15. Большаков J1.H. Некоторые сведения о пересылке, хранении и всхожести семян чозении толокнянколистной // Бюл. Гл. ботан. сада. 1988. - Вып. 150. -С. 69-72.
16. Буч Т.Г. Сравнительные исследования биологических особенностей семян мать-и-мачехи, тополя и ивы // Бюл. Гл. ботан. сада. 1961. - Вып. 41. -С. 66-73.
17. Васильченко И.Т. Всходы деревьев и кустарников: (Определитель). -М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1960. 302 с.
18. Викторов В.П., Тихонова В.Л. Влияние продолжительности хранения семян видов рода Campanula L. на их жизнеспособность // Науч. тр. Моск. пед. гос. ун-та им. В.И. Ленина. Сер. Естеств. науки. 1994. - Ч. I. - С. 164-171.
19. Викторов В.П., Тихонова В.Л. Влияние криоконсервации семян видов рода колокольчик на морфобиологические особенности растений // Актуальные вопросы экологической морфологии растений. Межвуз. сб. науч. тр. -М.: "Прометей", 1995. С. 83 - 92.
20. Воронкова Н.М., Бурундукова О.Л., Журавлев Ю.Н., Нестерова С.В., Абанькина М.Н. Структурно-функциональные особенности некоторых редких и исчезающих видов растений // Комаров, чтения. Владивосток: Дальнаука, 1997.-Вып. 44.-С. 72-88.
21. Воронкова Н.М., Нестерова С.В., Журавлев Ю.Н. Прорастание семян некоторых редких и исчезающих видов Приморского края // Раст. ресурсы. -1996. Т. 32, вып. 3. - С. 51 - 59.
22. Воронкова Н.М., Нестерова С.В., Журавлев Ю.Н. Размножение редких видов растений Приморского края. Владивосток: Дальнаука, 2000. - 145 с.
23. Воронкова Н.М., Холина А.Б., Журавлев Ю.Н. Морфобиологическая характеристика и реакция на криоконсервацию семян некоторых видов флоры Курильских островов // Раст. ресурсы. 2000. - Т. 36, вып. 4. - С. 40 - 46.
24. Воронкова Н.М., Холина А.Б., Якубов В.В. Влияние глубокого замораживания на прорастание семян некоторых видов флоры Дальнего Востока России // Раст. ресурсы. 2003. - Т. 39, вып. - С. 476 - 487.
25. ГОСТ 13056-75. Семена деревьев и кустарников. Методы определения всхожести // Семена деревьев и кустарников. Правила отбора образцов и методы определения посевных качеств семян. М., 1977. - С. 77 - 113.
26. Грушвицкий И.В. Роль недоразвития зародыша в эволюции цветковых растений. М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1961. - 46 с. - (Комаров, чтения / АН СССР. Ботан. ин-т им. В.Л. Комарова; Вып. 14).
27. Гурзенков Н.Н. Кариологическая характеристика некоторых эндемов флоры Приморья и Приамурья // Комаров, чтения. Владивосток, 1969. - Вып. 15.-С. 73-85.
28. Гурзенков Н.Н. Эндемы флоры Приморья и Приамурья (системат. обзор, экол.-геогр. и кариол. характеристика): Автореферат дис. . канд. биол. наук / АН СССР Дальневост. фил. им. В.Л. Комарова. Биол.-почв. ин-т. -Владивосток, 1967. 22 с.
29. Далецкая Т.В., Полякова Е.Н. Влияние криоконсервации на прорастание семян и некоторые стадии метаболизма // Биофизика живой клетки. Пущино, 1994. - Т. 6: Криоконсервация генетических ресурсов в проблеме сохранения биоразнообразия. - С. 81 - 85.
30. Двораковская В.М. Температурные условия прорастания семян дальневосточных растений из сем. Liliaceae II Бюл. Гл. ботан. сада. 1977. -Вып. 105.-С. 108-110.
31. Заборовский Е.П. Плоды и семена древесных и кустарниковых пород. -М.: Гослесбумиздат, 1962. 303 с.
32. Зайцев В.А., Левкина Л.В., Мавлянова Р.Ф. Влияние сверхнизкой температуры на посевные качества семян редьки и морфологические признаки растений // Науч.-техн. бюл. / ВНИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова. -1993а.-Вып. 232.-С. 58-61.
33. Зайцев В.А., Левкина Л.В., Мавлянова Р.Ф. Влияние сверхнизкотемпературной обработки семян моркови на их посевные качества и морфологические признаки растений // Науч.-техн. бюл. / ВНИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова. 19936. - Вып. 232. - С. 61 - 66.
34. Зайцев Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике: Справоч. пособие. М.: Наука, 1984. - 424 с.
35. Зайцев Г.Н. Математика в экспериментальной ботанике. М.: Наука, 1990.-294 с.
36. Зауер Э.М. Опыт хранения желудей монгольского дуба (Quercus mongolica Fischer) в зиму 1929-1930 года // Информ. бюл. / Дальневост. науч.-исслед. ин-т леса. 1931. - № 1. - С. 67 - 71.
37. Злобина Э.С. Влияние температуры стратификации и проращивания на всхожесть семян черемухи виргинской и снежноягодника белого // Биология семян интродуцированныхрастений. -М.: Наука, 1985.-С. 107-111.
38. Иванова И.А. К вопросу о доразвитии зародыша в зрелых семенах некоторых растений // Материалы Всесоюз. симп. по эмбриологии растений. -Киев: Наук, думка, 1968. С. 73 - 76.
39. Иванова И.А. Морфо-анатомические структуры и прорастание семян // Проблемы развития семеноведения и семеноводства интродуцентов. М., 1984. - С. 65 - 72.
40. Илли И.Э. Жизнеспособность семян // Физиология семян. М.: Наука, 1982.-С. 102-124.
41. Кожевникова З.В. Анатомия и некоторые особенности прорастания семян видов можжевельника советского Дальнего Востока // Бюл. Гл. ботан. сада. -1986.-Вып. 141.-С. 99- 107.
42. Кожевникова З.В. Видовой состав, биологические основы и приемы размножения можжевельников природной флоры советского Дальнего Востока. Препр. / АН СССР Дальневост. отд-ние. Ботан. сад. - Владивосток: ДВО АН СССР, 1988.-41 с.
43. Комарова Т.А. Семенное возобновление растений на свежих гарях (леса южного Сихотэ-Алиня). Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1986. - 224 с.
44. Комир З.В., Милыпина Н.Н., Новиков А.Н. Криоконсервация семян интродуцированных растений природной флоры // Вопросы обогащения генофонда в семеноведении интродуцентов: Тез. докл. VIII Всесоюз. совещ. (58 апр. 1987). М., 1987. - С. 55 - 56.
45. Конвенция о биологическом разнообразии. Текст и прил. UNEP/CBD, 1995.-34 с.
46. Кондратовиче Р.Я., Симановича Л.Б. Всхожесть семян видов и гибридов рододендрона при длительном хранении // Вопросы обогащения генофонда в семеноведении интродуцентов: Тез. докл. VIII Всесоюз. совещ. (5-8 апр. 1987). -М., 1987.-С. 57-58.
47. Короткова В.И. Салтыкова А.А. Влияние сроков хранения на всхожесть семян представителей различных семейств // Комплексное изучение полезных растений Сибири. Новосибирск: Наука, 1974. - С. 7 - 16.
48. Костенко К.А., Пшенникова Л.М. Изучение семян некоторых лиан Приморского края // Теоретические и методические вопросы изучения семян интродуцированных растений. Баку, 1981. - С. 78 - 79.
49. Красная книга РСФСР. Растения. М.: Росагропромиздат, 1988. - 590 с.
50. Красная книга СССР. Т.2. М.: Лесн. пром-сть, 1984. - 480 с.
51. Крастс И.В., Хохлов A.M. Устройство для программируемогозамораживания биообъектов: А. с. 1195157 СССР, МКИ4 F 25 D 3/10 // Открытия. Изобретения. 1985. - № 44. - С. 178.
52. Кречетова Н.В., Емлевская А.Г., Сенчукова Г.В., Штейникова В.И. Семена и плоды деревьев и кустарников Дальнего Востока. М.: Лесн. пром-сть, 1972. - 80 с.
53. Кречетова Н.В., Крестова О.Ф., Любич Е.С., Новосельцева А.И., Собинов A.M., Шахова Е.А. Справочник по лесосеменному делу. М.: Лесн. пром-сть, 1978.-335 с.
54. Крокер В., Бартон Л. Физиология семян. -М.: Изд-во иностр. лит., 1955.400 с.
55. Куренцова Г.Э. Реликтовые растения Приморья. Л.: Наука, 1968. - 72 с. Лавренов В.К., Лавренова Г.В. Полная энциклопедия лекарственных растений: В 2-х т. - СПб.: «Издательский дом "Нева"»; М.: «Олма-Пресс», 1999. -Т. 1.-734 е.; Т. 2.-814 с.
56. Мамонов Н.И., Погорелова Р.Ф., Спахова А.С. Хранение семян основных лесообразующих пород. М.: Агропромиздат, 1986. - 78 с.
57. Мануильский В.Д. Формирование криорезистентности и устойчивости растений к низким температурам. Киев: Наук, думка, 1992. - 186 с.
58. Международная программа ботанических садов по охране растений. -М., 2000. 57 с.
59. Международные правила определения качества семян. М.: Колос, 1969. -182 с.
60. Мельникова Т.М. К биологии прорастания семян некоторых видов зверобоя // Бюл. Гл. ботан. сада. 1969. - Вып. 73. - С. 87 - 90.
61. Мельникова Т.М. О прорастании семян термопсиса очередноцветкового // Бюл. Гл. ботан. сада. 1975. - Вып. 96. - С. 47 - 52.
62. Мельникова Т.М. О прорастании семян термопсиса ланцетного // Бюл. Гл. ботан. сада. 1977. - Вып. 104. - С. 45 - 49.
63. Методические указания по семеноведению интродуцентов. М.: Наука, 1980.-64 с.
64. Минин Д.Д. Хранение и подготовка к посеву семян древесных и кустарниковых пород. М.: Сельхозиздат, 1962. - 120 с.
65. Миронова J1.H. Семенное и вегетативное размножение дикорастущих ирисов Приморья // Ботанические исследования на Дальнем Востоке. -Владивосток: ДВГУ, 1980. С. 60 - 68.
66. Молодкин В.Ю. Влияние сверхнизкотемпературной обработки на твердосемянность бобовых трав // Науч.-техн. бюл. / ВНИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова. 1985. - Вып. 152. - С. 60 - 64.
67. Молодкин В.Ю. Методы консервации семян культурных растений при низких и сверхнизких температурах: Автореф. дис. . канд. с.-х. наук / ВАСХНИЛ. Всесоюз. НИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова. Л., 1987. 18 с.
68. Некрасов В.И. Влияние географических условий на формирование покоя семян // Биология семян интродуцированных растений. М.: Наука, 1985. -С. 81-84.
69. Нестеренко В.Г. О всхожести семян при хранении их в лабораторных условиях // Бюл. Гл. ботан. сада. 1960. - Вып. 36. - С. 99 - 103.
70. Нестерова С.В. Изучение прорастания и изменения жизнеспособности семян некоторых травянистых растений // Охрана, обогащение, воспроизводство и использование растительных ресурсов: Тез. докл. Всесоюз. науч. совещ. Ставрополь, 1990. - С. 178 - 180.
71. Нестерова С.В. Изменение жизнеспособности семян некоторых декоративных растений при длительном хранении // Репродуктивная биология интродуцированных растений: Тез. докл. IX Всесоюз. совещ. по семеноведению интродуцентов. Умань, 1991. - С. 145.
72. Нестерова С.В. Прорастание семян и ранние этапы онтогенеза некоторых редких растений Приморского края // Флора и фауна Приморского края и сопредельных регионов: Тез. конф. Уссурийск, 1991. - С. 70 - 73.
73. Нестерова С.В. Особенности семенного размножения и перспективы сохранения и восстановления генофонда кирказона маньчжурского // VII Арсеньевские чтения: Сб. науч. тр. Уссурийск: УГПИ, 1993. - С. 96 - 98.
74. Нестерова С.В. Хранение и жизнеспособность желудей дуба зубчатого // Особенности развития и прорастания семян интродуцентов: Тез. докл. X совещ. по семеноведению интродуцентов. М., 1994. - С. 24.
75. Нестерова С.В. Влияние глубокого замораживания семян редких видов рода Lilium L. на их способность к прорастанию // Цветоводство сегодня и завтра: (генофонд, его сохранение и обогащение): Тез. докл. III Междунар. конф. М., 1998а. - С. 194 - 195.
76. Нестерова С.В. Криоконсервация семян дикорастущих растений в Ботаническом саду ДВО РАН: перспективы, проблемы, некоторые итоги // Консервация генетических ресурсов: Материалы XV рабочего совещ. (Пущино, 13-15 окт. 1998 г.).-Пущино, 19986. С. 212 - 215.
77. Нестерова С.В. Долговременное хранение семян дикорастущих растений Приморского края // Биологическое разнообразие. Интродукция растений. Материалы II Междунар. науч. конф. (20-23 апр., 1999г., Санкт-Петербург). -СПб., 1999.-С. 363-365.
78. Востока, 10-11 окт. 2001 г., г. Владивосток. Владивосток: Дальнаука, 2002. -С. 90-101.
79. Нестерова С.В., Холина А.Б, Воронков А.А. Всхожесть семян некоторых представителей семейства бобовых после длительного хранения // Животный и растительный мир Дальнего Востока: (Сб. науч. тр.). Уссурийск, 1997. -Вып. 3. - С. 207-210.
80. Нестерова С.В., Холина А.Б., Воронкова Н.М. Температурный фактор в прорастании семян некоторых видов сем. Fabaceae II Флора и растительность Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Второй рос. конф. Красноярск, 1996. -С. 270-271.
81. Нестерова С.В., Холина А.Б., Воронкова Н.М. Жизнеспособность семян и развитие однолетних особей двух видов рода Lespedeza Michx. Дальнего Востока России // Раст. ресурсы. 1998. - Т. 34, вып. 2. - С.40 - 47.
82. Нестерова С.В., Хоменко А.В. Некоторые итоги изучения реакции семян на замораживание в жидком азоте // Биологическое разнообразие. Интродукция растений: Материалы науч. конф. (12-15 дек. 1995 г., Санкт-Петербург). -СПб., 1995.-С. 219-220.
83. Нестерова С.В., Яшина С.Г. Криоконсервация семян некоторых редких и декоративных растений флоры Дальнего Востока // Биофизика живой клетки. -Т. 6: Криоконсервация генетических ресурсов в проблеме сохранения биоразнообразия. Пущино, 1994. - С. 91 - 93.
84. Нестерова С.В., Яшина С.Г. Повреждающее воздействие сверхнизких температур на проростки видов семейства Fabaceae // Растения муссонного климата: Тез. II Междунар. конф. Владивосток: Дальнаука, 2000. -С. 130 - 132.
85. Николаева М.Г. Физиология глубокого покоя семян. Д.: Наука, 1967.206 с.
86. Николаева М.Г. Ускоренное проращивание покоящихся семян древесных растений: Стратификация, гормоны. Д.: Наука, 1979. - 80 с.
87. Николаева М.Г. Покой семян и факторы, его контролирующие // Физиология и биохимия покоя и прорастания семян. М.: Колос, 1982. -С. 72 - 94.
88. Николаева М.Г., Воробьева Н.С. Биология семян ясеня обыкновенного (Fraxinus excelsior L.) различного географического происхождения // Ботан. журн. 1978. - Т. 63, № 8. - С. 1155 - 1167.
89. Николаева М.Г., Грушвицкий И.В., Богданова В.М. Условия прорастания семян дальневосточных видов сем. аралиевых и роль гиббереллина в нарушении их покоя // Ботан. журн. 1972. - Т. 57, № 9. - С. 1082 - 1096.
90. Николаева М.Г., Лянгузова И.В., Поздова Л.М. Биология семян. -СПб., 1999.-232 с.
91. Николаева М.Г., Разумова М.В., Гладкова В.Н. Справочник по проращиванию покоящихся семян. Л.: Наука, 1985. - 347 с.
92. Новикова Е.В. Морфологическая изменчивость семян Dioscorea nipponica Makino // Растения муссонного климата: Тез. II Междунар. конф. -Владивосток: Дальнаука, 2000. С. 142 - 143.
93. Овчаров К.Е. Физиологические основы всхожести семян. М.: Наука, 1969.-280 с.
94. Пасько О.А, Волькович З.С. Биологическое и техническое долголетие семян цветочных растений // Бюл. Гл. ботан. сада. 1993. - Вып. 167. -С. 120- 123.
95. Перечень объектов растительного и животного мира, занесенных в Красную книгу Приморского края. Владивосток: Апостроф, 2002. - 48 с.
96. Пидотти О.А. Влияние сроков хранения семян травянистых многолетников на всхожесть // Интродукция растений и зеленое строительство. М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1952. - С. 361 - 367.
97. Попова О.Н., Коданева Р.П., Шершунова В.И. Эффективный прием предпосевной обработки семян горошка мышиного // Селекция и семеноводство. 1984. - № 2. - С. 38.
98. Попцов А.В. О влиянии климатических условий на биологию прорастания семян // Бюл. Гл. ботан. сада. 1962. - Вып. 46. - С. 58 - 69.
99. Попцов А.В. Биология твердосемянности. М.: Наука, 1976. - 157 с.
100. Попцов А.В., Некрасов В.И., Иванова И.А. Очерки по семеноведению. -М.: Наука, 1981.-112 с.
101. Прогунков В.В. Ресурсы медоносных растений юга Дальнего Востока. -Владивосток: Изд-во Дальневост ун-та, 1988. 225 с.
102. Пшенникова JI.M. Внутривидовая изменчивость двукрылаток дальневосточных видов кленов // Бюл. Гл. ботан. сада. 1989. - Вып. 154. -С. 39-45.
103. Работнов В.А. Определение возраста и длительности жизни у многолетних травянистых растений // Успехи современной биологии. 1947. -Т. 24, вып. 4.-С. 133- 149.
104. Работнов В.А. Жизненный цикл многолетних травянистых растений в луговых ценозах // Тр. Ботан. ин-та АН СССР. Сер. 3, Геоботаника. 1950. -Вып. 6. - С. 7 - 204.
105. Ракова М.В. Особенности покоя семян дикорастущих бобовых // Биологические основы семеноведения и семеноводства интродуцентов. -Новосибирск, 1974. С. 228 - 229.
106. Рысина Г.П. Ранние этапы онтогенеза лесных травянистых растений Подмосковья. М.: Наука, 1973. - 216 с.
107. Скрипка М.А. Дикорастущие многолетние декоративные травянистые растения юга Дальнего Востока для зеленого строительства. Владивосток: Прим. кн. изд-во, 1960. - 36 с.
108. Скрипчинский В.В. Прорастание семян некоторых дикорастущих декоративых растений в естественных условиях // Бюл. Гл. ботан. сада. 1963. -Вып. 50.-С. 78-82.
109. Скрипчинский В.В. Диагностический метод определения прорастания семян в условиях близких к естественным // Вопросы обогащения генофонда всеменоведении интродуцентов: Тез. докл. VIII Всесоюз. совещ. (5-8 апр. 1987). -М., 1987.-С. 119-120.
110. Слизик Л.Н. Практические рекомендации по размножению древесных лиан Приморья // Редкие и исчезающие древесные растения юга Дальнего Востока. Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1978. - С. 113 - 117.
111. Слизик Л.Н., Чащухина А.А. Особенности режимов прорастания семян деревянистых лиан Приморья // Интродукция древесных растений в Приморье. Владивосток: ДВНЦ АН СССР, 1979. - С. 26 - 40.
112. Смирнов И.А. Длительное хранение семян растений дикорастущей флоры (задачи и методы) // Вопросы обогащения генофонда в семеноведении интродуцентов: Тез. докл. VIII Всесоюз. совещ. (5-8 апр. 1987). М., 1987. -С. 122- 123.
113. Смирнова Н.Г., Пшенникова Л.М. Рентгенографический анализ семян кленов юга Дальнего Востока // Биология семян интродуцированных растений. -М.: Наука, 1985. С. 35 - 38.
114. Сосудистые растения советского Дальнего Востока: В 8 т. Л.: Наука, 1985-1996.-Т. 1-8.
115. Стародубцев В.Н., Нестерова С.В. Печеночница азиатская Hepatica asiatica Nakai // Биология редких сосудистых растений советского Дальнего Востока. - Владивосток: ДВО АН СССР, 1990. - С. 87 - 93.
116. Стародубцев В.Н., Нестерова С.В. Арсеньевия гладкая Arsenjevia glabrata Starodub. // Биологические особенности сосудистых растений советского Дальнего Востока. - Владивосток: ДВО АН СССР, 1991. -С. 87-95.
117. Стенвуд Р.С., Бэсс JI.H. Сохранение зародышевой плазмы путем глубокого охлаждения семян // Холодостойкость растений. М.: Колос, 1983. -С. 280-287.
118. Стешенко А.П. Биология свежесобранных семян у растений высокогорного Памира // Ботан. журн. 1963. - Т. 48, № 7. - С. 965 - 977.
119. Сторчак JI.H. Срок хранения всхожести у семян вьющихся растений // Бюл. Гл. ботан. сада. 1948. - Вып. 1. - С. 66 - 68.
120. Стратегия ботанических садов по охране растений. М., 1994. - 62 с.
121. Стрибуль Т.Ф., Лесив Т.К. Влияние криовоздействий на семена овощных культур // Криобиология. 1990. - № 2. - С. 39-43.
122. Стрибуль Т.Ф., Тымчук Н.Ф. Влияние низкотемпературных воздействий на всхожесть и продуктивные свойства семян сои // Проблемы криобиологии. -1992.-№4.-С. 42-45.
123. Тихонова В.Л. Стратегия мобилизации и сохранения генофонда редких и исчезающих видов растений. Пущино, 1985. - 34 с.
124. Тихонова В.Л. Пути долговременного сохранения жизнеспособности семян охраняемых видов растений // Вопросы охраны и рационального использования растительного мира: Сб. науч. тр. М., 1988. - С. 28 - 35.
125. Тихонова В.Л. Сохранение генофонда растений в банках зародышевой плазмы // Генетические коллекции растений Новосибирск, 1995. - Вып. 3. -С. 37-57.
126. Тихонова В.Л. Долговременное хранение семян // Физиология растений. -1999а. Т. 46, № 3. - С. 467 - 476.
127. Тихонова В.Л. Криоконсервация семян сем. Caprifoliaceae II Репродуктивная биология редких исчезающих видов растений: Тез. докл.
128. Всерос. науч. конф. (21-24 июня 1999 г., Сыктывкар). Сыктывкар, 19996. -С. 115-117.
129. Тихонова B.JI. Сохранение генофонда дикорастущих растений в банках семян // Аграрная Россия. 2001. - № 2. - С. 28 - 31.
130. Тихонова В.Л., Баранова А.Е. Возможности долговременного сохранения генофонда лекарственных растений в банках семян // Роль ботанических садов в сохранении биоразнообразия: Материалы междунар. конф. Ростов н/Д: Изд-во Рост, ун-та, 2002. - С. 290 - 293.
131. Тихонова В.Д., Беловодова Н.Н., Яшина С.Г. Криоконсервация семян -микробиотиков // Бюл. Гл. ботан. сада. 1997а. - Вып. 175. - С. 91 - 95.
132. Тихонова В.Л., Викторов В.П., Разумова С.Г., Поздова Л.М. Внутривидовая изменчивость семян Campanula latifolia L. в природных популяциях Подмосковья и в культуре // Раст. ресурсы. 1989а. - Т. 25, вып. 1. -С. 61-67.
133. Тихонова В.Л., Ильина Л.В., Макеева И.Ю., Яшина С.Г. Влияние низких и сверхнизких температур хранения на лабораторную всхожесть семян дикорастущих травянистых растений. I. Семена без периода покоя // Криобиология. 1990. - №4. - С. 23 - 28.
134. Тихонова В.Л., Кружалина Т.Н. Влияние глубокого замораживания семян на рост и развитие некоторых лекарственных растений // Раст. ресурсы. 1997. -Т. 33, вып. 3. - С. 45 - 52.
135. Тихонова В.Л., Кружалина Т.Н., Шугаева Е.В. Влияние замораживания на жизнеспособность семян некоторых культивируемых лекарственных растений // Раст. ресурсы. 19976, - Т. 33, вып. 1. - С. 68 - 74.
136. Тихонова B.J1., Лысых Н.И., Фирсанова В.М. Влияние замораживания на жизнеспособность семян дикорастущих растений // Бюл. Гл. ботан. сада. -1997в. Вып. 175. - С. 83 - 90.
137. Тихонова В.Л., Макеева И.Ю., Хоциалова Л.И. Морфобиологические особенности семян копеечника альпийского // Бюл. Гл. ботан. сада. 1984. -Вып. 133.-С. 93-97.
138. Тихонова В.Л., Шугаева Е.В., Фирсанова В.М. Жизнеспособность семян некоторых видов дикорастущих лекарственных растений при глубоком и неглубоком замораживании // Раст. ресурсы. 1996. - Т. 32, вып. 3. - С. 43 - 50.
139. Тихонова В.Л., Яшина С.Г, Полевая B.C., Крастс И.В. Влияние глубокого замораживания семян на рост и развитие растений (на примере гвоздики Фишера) // Криобиология. 19896. - № 1. - С. 23 - 28.
140. Тихонова В.Л., Яшина С.Г., Шабаева Э.В. Влияние замораживания семян на рост и развитие дикорастущих травянистых растений: Тез. II междунар. конф. "Успехи современной криобиологии". Харьков, 1992. - С. 180-181.
141. Ткаченко К.Г. Всхожесть семян некоторых видов флоры Дальнего Востока // Растения в муссонном климате: Материалы междунар. конф., посвящ. 50-летию Ботан. сада-ин-та ДВО РАН. Владивосток: Дальнаука, 1998.-С. 113-116.
142. Уткин В.В. О жизнеспособности семян крымских сложноцветных в зависимости от сроков хранения // Бюл. Гл. ботан. сада. 1964. - Вып. 56. -С. 44 - 49.
143. Федосенко В.А. Использование сверхнизких температур для длительного хранения семян (методы и техника) // Науч.-техн. бюл. / ВНИИ растениеводства им. Н.И. Вавилова. 1978. - Вып. 77. - С. 53 - 57.
144. Фирсова М.К. Семенной контроль. М.: Колос, 1969. - 295 с.
145. Фомина Л.И. Первые этапы онтогенеза Hedysarum alpinum L. и Lespedesa hedysaroides (Pall.) Kitag. в Читинской области // Раст. ресурсы. 1990. - Т. 26, вып. З.-С. 370-382.
146. Халипова Г.И. Долговременное сохранение генофонда видов рода Campanula L. в банках семян // Репродуктивная биология редких исчезающих видов растений: Тез. докл. Всерос. науч. конф. (21-24 июня 1999 г., Сыктывкар). Сыктывкар, 1999. - С. 115-117.
147. Харкевич С.С. Состояние и задачи изучения и охраны биологического разнообразия российского Дальнего Востока: сосудистые растения // Комаров, чтения. Владивосток, 1997. - Вып. 44. - С. 6 - 30.
148. Харкевич С.С., Качура Н.Н. Редкие виды растений советского Дальнего Востока и их охрана. М.: Наука, 1981. - 234 с.
149. Холина А.Б., Воронкова Н.М. Влияние замораживания на прорастание семян некоторых видов сем. Fabaceae флоры Дальнего Востока России // Раст. ресурсы. 2001. - Т. 37, вып. 2. - С. 39 - 42.
150. Холина А.Б., Нестерова С.В., Воронкова Н.М. Особенности прорастания семян дальневосточных леспедец // Тр. Первой Всерос. конф. по ботан. ресурсоведению. СПб., 1996. - С. 84 - 85.
151. Холина А.Б., Нестерова С.В., Воронкова Н.М. Биология прорастания семян Thermopsis lupinoides (L.) Link. // Раст. ресурсы. 1999. - Т. 35, вып. 3. -С. 43-50.
152. Ценопопуляции растений (основные понятия и структура). М.: Наука, 1976.-217 с.
153. Центолович В.Т. Особенности морфологии и биологии семян рододендрона сихотинского // Экологические проблемы семеноведения интродуцентов: Тез. докл. VII Всесоюз. конф. Рига: Зинатне, 1984. - С. 134.
154. Черепанов С.К. Сосудистые растения России и сопредельных государств (в пределах бывшего СССР). СПб.: Мир и семья, 1995. - 992 с.
155. Шашлова В.И. Биологические особенности прорастания семян шлемника байкальского // Экологические проблемы семеноведения интродуцентов: Тез. докл. VII Всесоюзн. конф. Рига; Зинатне, 1984. - С. 140-141.
156. Шретер А.И. Целебные растения Дальнего Востока и их применение. -Владивосток: ИПК «Дальпресс», 2000. 144 с.
157. Academia in the spotlight: Kew Gardens. Traditional excellence speaks to the future // Biotech. Forum Europe. 1990. - Vol. 7, № 3. - P. 197 - 201.
158. Barton L.V. Special studies on seed coat impermeability // Contributions. Boyce Thompson Institute for Plant Research. 1947. Vol. 14, № 7. P. 355-362.
159. Barton L.V. Seeds preservation and longevity. London, 1961. - 216 p.
160. Bhat S.R., Bhat K.V., Chandel K.P.S. Studies on germination and cryopreservation of Musa-balbisiana seed // Seed Sci. and Technology. 1994. -Vol. 22, №3.-P. 637-640.
161. Bonner F.T. Storage of seeds: potential and limitations for germplasm conservation // Forest Ecology and Management. 1990. - Vol. 35, № 1-2. -P. 35-43.
162. Bonner F.T. Storing red oak acorns // Tree Plant. Notes. 1973. - Vol. 24, № 3. - P. 12-13.
163. Botanic gardens and the world conservation strategy. London: Acad. Press, 1987.-367 p.
164. Boyce K.G. Cryopreservation of seed of lucerne, medic and sub clover cultivars in liquid nitrogen // Seed Science and Technology. 1987. - Vol. 15, № 2. -P. 446 - 468.
165. Brant R.E., McKee G.W., Cleveland, R.W. Effect of chemical and physical treatment on hard seed of Penngift crownvetch // Crop Sci. 1971. - Vol. 11, № 1. -P. 1-6.
166. Busse W.F. Effect of low temperatures on germination of impermeable seeds // Bot. Gazette. 1930. - Vol. 89. - P. 169 - 179.
167. Chaudhury R., Chandel K.P.S. Studies on germination and cryopreservation of cardamom {Elettaria-cardamomum Maton) seeds // Seed Sci. and Technology. -1995. Vol. 23, № 1. - p. 235 - 240.
168. Chen Liguang, Zheng Yushan Effects of cryopreservation on Castanea Henryi seeds and excised embryos // Acta Agriculturae Universitatis Jiangxiensis. 2000. Vol. 22, №4. P. 571-575.
169. Chmielarz P. Cryopreservation of Norway spruce Picea abies (L.) Karst. seeds for two years // Plant Varieties and Seeds. 1998. - Vol. 11, № 2. - P. 129 - 130.
170. Decruse S.W., Seeni S., Pushpangadan P. Effects of cryopreservation on seed germination of selected rare medicinal plants of India // Seed Sci. and Technology. -1999. Vol. 27, № 2. - P. 501 - 505.
171. Deno N.C. Seed germination: theory and practice. 1993 (manuscript).
172. Ellis R.H., Hong T.D., Roberts E.H. The development of desiccation-tolerance and maximum seed quality during seed maturation in six grain legumes // Annals of Botany. 1987. - Vol. 59, № 1. - P. 23 - 29.
173. Ewart A.J. On the longevity of seeds // Proc. Roy. Soc. Victoria. 1908. -Vol. 21, № 1.-P. 1-210.
174. Eynard I. Effect on liquid nitrogen and oxygen on the germination of the hard seeds of alsike clover, lucerne and red clover // Alliona. 1957. - Vol. 3. - P. 23 - 2.
175. Eynard I. Effect of very low temperatures on the germination of the hard seeds // Sementi Elette. 1958. - Vol. 4. - P. 52 - 61.
176. Forsline P.L., Towill L.E., Waddell J. W., Stushnoff C., Lamboy W.F., McFerson J.R. Recovery and longevity of cryopreserved dormant apple buds // J. Amer. Soc. Horti. Sci. 1998. - Vol. 123, № 2. - P. 365 - 70.
177. Gelmond H. Physiological aspects of seed germination // Seed Sci. and Technology. 1978. - Vol. 6, № 3. - P. 625 - 639.
178. Ghisleni P.L. The effect of liquid oxygen on the germinating capacity of the hard seeds of birdsfoot trefoil {Lotus corniculatus L.) and ladino clover {Trifolium repens L.) // Nuovo Giornale Botanico Italiano. 1957. - Vol. 59. - P. 145 - 152.
179. Gomez-Campo C. Seed bank as emergency conservation strategy // Plant conservation in the Mediterranean area. Dordrecht, 1985. - P. 237 - 247.
180. Gonzalez-Benito E., Pita J.M., Perez C., Perez-Garcia F. Effect of cryopreservation on seed germination of different Leguminosae species // Basic and applied aspects of seed biology. Dordrecht, 1997. - P. 797 - 802.
181. Gonzalez-Benito M.E., Carvalho J.M.F.C., Perez C. Effects of desiccation and cryopreservation on the germination of embryonic axes and seeds of cotton // Pesquisa Agropecuaria Brasileira. 1998a. - Vol. 33, № 1. - P. 17-20.
182. Gonzalez-Benito M.E., Fernandez-Llorente F., Perez-Garcia F. Interaction between cryoperservation, rewarming grate and seed humidification on the germination of two Spanish endemic species // Annals of Botany. 1998b. -Vol. 82, №5.-P. 683-686.
183. Gonzalez-Benito M.E., Iriondo J.M., Perez-Garcia F. Seed cryopreservation: an alternative method for the conservation of Spanish endemics // Seed Sci. and Technology. 1998c. - Vol. 26, № 1. - p. 257 - 262.
184. Gonzalez-Benito M.E., Iriondo J.M., Pita J.M., Perez-Garcia F. Effects of seed cryopreservation and priming on germination in several cultivars of Apium-graveolens II Annals of Botany. 1995. - Vol. 75, № 1. - P. 1 - 4.
185. Harrington J.F. Seed storage and longevity // Seed Biology. N.Y.: Acad. Press, 1972. - Vol. 3. - P. 145 - 246.
186. Harrison B.J., Carpenter R. Storage of Allium сера seed at low temperatures // Seed Sci. and Technology. 1977. - Vol. 5, № 4. - P. 699 - 702.
187. Hawkes J.G. Germplasm banks: a method for endangered plant conservation // Conservation techniques in botanic gardens. Koeltz scientific books. Konigstein, 1990.-P. 49-56.
188. Matsushima M., Skekiguchi J., Nakajima K. Preservation of forage and vegetable seeds at super-low temperature // Nat. Inst. Agrobiol. Resources. Annu. Report Kannaondai. 1987. - № 3. - P. 29 - 31.
189. Nemoto Т., Ohashi H. Seedling morphology of Lespedeza (Leguminosae) II J. Plant Res. 1993. - Vol. 106, № Ю82. - P. 121 - 128.
190. Nesterova S.V. Seed cryogenic characteristics and conservation possibility of woody plant genofond // Cedar broadleaved forests of Far East: Proc. of Intern. Conf. Khabarovsk, 1996. - P. 215.
191. Oka S., Yakuwa H., Sato K., Niino T. Survival and shoot formation in vitro of pear winter buds cryopreserved in liquid nitrogen // HortScience. 1991. - Vol. 26, № l.-P. 65-66.
192. Peacock D.N., Hummer K.E. Pregermination studies with liquid nitrogen and sulfuric acid on several Rubus species // HortScience. 1996. - Vol. 31, № 2. -P. 239-239.
193. Pence V.C. Cryopreservation of seeds of Ohio native plants and related species // Seed Sci.and Technology. 1991. - Vol. 19, № 2. -P. 235-251.
194. Pita J.M., Barrero S., Escudero A. Cryopreservation: an alternative method for the conservation of endangered populations of two Iberian pines {Pinus nigra Arnold and Pinus sylvestris L.) // Silvae Genetica. 1997. - Vol. 46, № 4. - P. 250 - 252.
195. Pita J.M., Sanz V., Escudero A. Seed cryopreservation of seven Spanish native pine species // Silvae Genetica. 1998. - Vol. 47, № 4. - P. 220 - 223.
196. Pritchard H.W., Manger K.R., Prendergast F.G. Changes in Trifolium arvense seed quality following alternating temperature treatment using liquid nitrogen // Annals of Botany. 1988. - Vol. 62, № 1. - P. 1 - 11.
197. Reis A.M., DaCunha R. Sub-freezing effect on viability of Anadenanthera peregrina (L.) Speg. seeds with different moisture contents // Pesquisa Agropecuaria Brasileira. 1997. - Vol. 32, № 10. - P. 1071 - 1079.
198. Roberts E.H. Predicting the storage life of seeds // Seed Sci. and Technology. -1973. Vol. 1, № 3. - P. 499 - 514.
199. Rolston M.P. Water impermeable and seed dormancy // Bot. Rev. 1978. -Vol. 44.-P. 365-396.
200. Roos E.E. Long-term seed storage // National plant germplasm system of United States. Plant Breeding Reviews. Vol. 7. 1989. P. 129 158.
201. Roos E.E., Manalo J.R. Testing vigor of beans following unfavorable storage conditions // HortScience. 1971. - Vol. 6. - P. 347 - 348.
202. Sakai A., Noshiro M. Some factors contributing to the survival of crop seeds cooled to the temperature of liquid nitrogen // Crop genetic resources for today and tomorrow. Cambridge:Univ. Press, 1975. - P. 317 - 326.
203. Seeds of woody plants in the United States. Washington, 1974. - 883 p.
204. Spaeth S.C. Imbibitional stress and transverse cracking of bean, pea and chickpea cotyledons // HortScience. 1986. - Vol. 21. - P. 110 - 111.
205. Stanwood P.C. Tolerance of crop seeds to cooling and storage in liquid nitrogen (-196°C) // J. Seed Technology. 1980. - Vol. 5, № 1. - P. 26 - 31.
206. Stanwood P.C. Cryopreservation of seed germplasm for genetic conservation // Cryopreservation of plant cells and organs. Boca Raton: C.R.C. Press, 1985. -P. 200 - 226.
207. Stanwood P.C. Survival of Sesame seeds at the temperature (-196°C) of liquid nitrogen // Crop Sci. 1987. - Vol. 27,№ 2. - P. 327 - 330.
208. Stanwood P.C., Bass L.N. Seed germplasm preservation using liquid nitrogen // Seed Sci. and Technology. 1981. - Vol. 9, № 2. - P. 423 - 437.
209. Stanwood P.C., Roos E.E. Seed storage of several horticultural species in liquid nitrogen (-196°C) // HortScience. 1979. - Vol. 14, № 5. - P. 628 - 630.
210. Styles E.D., Joanne M.B., Cheryl M., Bernadette M.H. Storage of seed in liquid nitrogen // Cryobiology. 1982. - Vol. 19, № 2. - P. 195 - 199.
211. Suszka В., Tylkowski T. Storage of acorns of the English oak (Quercus robus L.) over 1-5 winters // Arbor. Kornickie. 1980. - № 25. - P. 199 - 229.
212. Suszka В., Tylkowski T. Storage of acorns of the northern red oak (Quercus borealis Michx =Q. rubra L.) over 1-5 winters // Arbor. Kornickie. 1982. - № 26. P. 253-306.
213. Thompson P.A. The use of seed banks for conservation of populations of species and ecotipes // Biol. Conservation. 1974. - Vol. 6, № 1. - P. 15-19.
214. Thompson P.A., Brown G.E. The seeds bank at the Royal Botanic Gardens, Kew // Kew Bui. 1972. - Vol. 26. - P. 445 - 456.
215. Tikhomova V.L., Smirnov I.A. The seed bank for native plants in cultivation at the Main Botanical Garden of the Russian Academy of Sciences, Moscow // Botanic Gardens Conservation News. 1997. - Vol. 2, № 9. - P. 42.
216. Tikhonova V.L., Yashina S.G. Long-term storage of endangered wild plant seeds // Physiol. Gen. Biol. Rev. 1997. - Vol. 13, part 1. - P. 1 - 33.
217. Touchell D.H., Dixon K.W. Cryopresevation of seed of Western-Australian native species // Biodiversity and Conservation. 1993. - Vol. 2, № 6. - P. 594-602.
218. Touchell D.H., Dixon K.W. Cryopresevation for seedbanking of Australian species // Annals of Botany. 1994. - Vol. 74, № 5. - P. 541 - 546.
219. Wang Junhui, Huang Chunnong Progress in the research of cryopreservation of woody plant germplasm // World Forestry Research. 1998. - Vol. 5. - P. 6 - 11.
220. Zhang Zhiguo, Liu Hua, Xia Zhijun, Wang Junhui Cryopreservation of seeds of Dendrobium candidum И J. TCM College. 1997. - Vol. 16, № 5. - P. 40 - 42.
221. Семена Cerasus sargentii и Microcerasus humilis перед посевом необходимо стратифицировать при температуре +5°С в течение 3 месяцев. Семена Atragene ochotensis при такой же температуре выдерживают 30 дней.
-
Нестерова, Светлана Владимировна
-
кандидата биологических наук
-
Владивосток, 2004
-
ВАК 03.00.32
- Биология семян растений Северо-Востока Азии
- Биологические основы восстановления запасов дикорастущего женьшеня в лесах Приморского края
- Биологические особенности видов рода Allium L. при интродукции
- Флора Спасского района
- Формирование высокопродуктивных агрофитоценозов с донником белым в условиях степной зоны Приморского края
