Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Коррекция иммунного ответа при химиотерапии экспериментального трихинеллеза

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Коррекция иммунного ответа при химиотерапии экспериментального трихинеллеза"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

СЕМИПАЛАТИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК 616.995.1:612.017.12

МЫНЖАНОВ Масьнут Рахкяяович

КОРРЕКЦИЯ ИММУННОГО ОТВЕТА ПРИ ХИМИОТЕРАПИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ТРИХИНЕЛЛЕЗА

03. 00. 13 - Физиология человека и животкызс • ОЗ. ОО. .20 - Гельминтология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Семипалатинск -1993

Работа выполнена в Семипалатинской государственной ■ медицинской институте.

Научный руководитель:

доктор биологических каук, профессор Т.К. Раисов.

Официальное оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор З.Х. Даугалиева. кандидат биологических наук б.И. Шайкенов

Еедуцая организация: Носковекая Медицинская Йкадения

Защита диссертации состоится: 1993 г.

в'"____" часов на заседании специализированного ученого

совата/( ) при. Сеаип?латинском государственном

медицинской институте. ■

(490019, г. Семипалатинск, ул. йбаз, 103).

С диссертацией когно ознакомиться в библиотеке СГМИ.

2.С Т

Автореферат разослан "________ 1993 г.

Нчанкй секретарь специализированного

ученого совета, кандидат медицинских наук, доцент

Т. 6. Хлебугина

05ЕАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

актуальность проблемы. Трихинеллез это тянелое, остро протекающее гедьминтозное заболевание человека и иивотных (R. üwen. 1835). Гельминтоз «гироко распространен в природе. В последние годы зарегистрирован рад новых очагов заболевания (O.A. березанцев, 1985; A.C. Бессонов, 1985; P.A. Пенькова, 1988 и другие). Поиск и совершенствование средств специфического лечения трихинеллеза невозможны без познания механизма физиологических, оиохимических, генетических и иммунологических процессов, происходящих-я организме больных, йиогие вопросы патогенеза остаются до сих пор не раскрытыми, несмотря на солидное количество раоот по этой проблеме. Необходимость их разработки, дальнейшего совериенствованиз терапии и профилактики заболевания является очевидной как для развития теории, так и практики. В настоящее время в эксперименте и клинике иироко использувтся для химиотерапии трихинеллеза производные бензимидазола - мебендазол, альбен-дазол, тиабендазол и другие. Вместе с те«, применение мебендазола приводит к нарушении иммунного баланса в организме больных на фоне дополнительной сенсибилизации (H.H. Озерецковская, 1975-1992, Й.К. .Богоявленский., 1970-1991, З.В. Переверзева, 1981, 1988, С!.Б, Садыков. 1988, O.A. Фалеева, 1991. и другие). Однако сочетанное применение десенсибияизирупцих- средств и глвкокортикоидов с ие-бендазолоа. приводит к развитии хронического течения болезни, нарушению-, процесса инкапсуляции и снияенип специфического действия препарата. (H.H. Озерецковская, 1975-1992С. Клейн, 1976. 1985; З.В.Переверзева, 1981; Т.К. Раисов. 1991),

В эксперименте О.Я.Л. Бекии, H.H. Озерецковская (1985), З.Х. Даугалиева (1989-1991) и З.В. Пероверзева с соавторами (1988-1992) испытали сочетанное действие препаратов из группы ингибиторов синтеза простогландинов, обладавших высоким паразито-цидным и иммунокоррелируицим эффектом. Такве пологителыше результата онли получены при комбинированном применении мебендазола и иммуностимуляторов Т-активина и вилозана (Т.К. Раисов, 1991, Ü.H. Фалеева, 1991). Поэтому возникла необходимость продол-гить поиск новых иммуностимуляторов, корригирующих иммунный ответ и изучить их сочетанное действие на формирование инвазионного

процвсса и ответные раакции организма хозяина в зависимости от сроков введения препарата и стадии развития экспериаентального трихинеллеза.

Целью иастоадего исследований явилось изучение клеточных и аморальных механизмов ныяунитета в развитии экспериментального трихинеллеза, влияние иаауностммуляторов-полиэлектролитов и их сочетаного действия с цебандазолоа на формирование и течение патологического процесса на модели экспериментального трихинеллеза белых мыпей.

В связи с этим была поставлена следуицме задачи:

1. Изучить динамику формирования патологического процесса и рада имунологических показателей а подопытных аивотных при экспериментальной трихинеллезе.

2. Изучить влияние иаоендазола на прюгаваеность кишечных трихинелл, интенсивность инвазии и показатели игшунитета при экспериментальном трихинеллезе в зависимости от срока введения препарата.

3. -Изучить влияние ииауностииуляторов-полизлвктролитов (по-лиоксидоний, градекс, вегетаи) и их комбинации с ыабендаз'олом на интенсивность инвазии, показатели рада специфических и не специфических иммунологических тестов при экспериментальной трихинеллезе белых мышей в зависимости от сроков введения препаратов.

4. Дать оценку действия изучениях иммуностимуляторов и ие-бендазола на патологический процесс на разных стадиях экспериментального трихинеллеза.

Научная новизна работы. -На клеточной уровне дана характеристика Т и В- системам иммунитета, установлена роль цирку-лирувщих иммунных комплексов и нормальных агглютининов в динамике развития болезни. Ери этой установлено угнетение Т- системы иммунитета.

Впервые при терапии трихинеллеза, испытаны иммуностимуляторы - полиэлектролиты в комбинации с мейендазолом. Выявлено, что совместное введение мебендазола с иммуностимуляторамиСполиоксидоний,. градекс, вегетан) снивает прививаемость гельминтов, интенсивность инвазии и тем самым улучшает эффективность лечения. Впервые пока-

зана эффективность введения мебендазола в сочетании с иммуностимулятором градексои при экспериментальном трихинеллезе белых кк-пей.

Практическая значимость работы. Введение ииицностикдля-торов-полиэлектролитов в сочетании с кебендазолоы, особенно на ранней стадии, оправдано, вследствие повывения иммунного статуса организма,позволявшие стабилизировать циркулирующие иммунные комплексы, повысить титры нормальных антител, Т- и В-лимфоциты. Разработка комплексного лечения трихинеллеза моает быть использована для далънейпего ее совершенствования. Внедрен способ лечения трихинеллеза IРгцпрэдлоаенив, Удостоверение N 1673).

Полоаения. выносимые на защита:

1. Формирование инвазионного процесса при экспериментальной трихинеллезе сопровондается угнетением репродуктивной активности Т- и В- систем, снижением резистентности нивотных и повыпением концентрации циркулирующих иммунных комплексов.

2. Иебендазол оказывает высокий трихннеллоцидный эффект. Введение на ранних стадиях заболевания .увеличивает содергание Т-ликфоцитов, способствует снижении гуморальных антител, вызывает угнетение гетерофильных агглптининов» повывает уровень циркулиру-ещих иммунных комплексов, по сравнении с нелеченными подопытными аивотными.

3. Сочетанное действие мебендазола с иммуностикуляторами-по-лиэлектролитами (полиоксидоний, градекс, вегетан) повивает трихннеллоцидный эффект мебендазола.

4. Вклвчение з терапии экспериментального трихинеллеза наряду с мебендазолом иммцностимуляторов-полиэлектролитов,способствует повышении эффективности лечения и улучшает иммунологические показатели в организме подопытных вивотних.

Апробация раооты, йатериалы диссертации дологены на совместном мевкафвдральном заседании и проблемной комиссии по иммунологии и аллергологии Семипалатинского государственного медицинского института с 1932), на III научной конференции по проблеме трихинеллеза человека и животных (г. Киров, 1992), на мекдународном симпозиуме по аллергологии и клинической иммунологии (Алма-Ата,

- б -

1992), на меадународном конгрессе по иммунологии (Венгрия, Будапешт. 1992) и на Г мездународном конгрессе стран Азии и Океании по иммунологии и аллергологии (Тайланд, Бангкок, 1992).

Публикации. Но теме диссертации опубликовано 9 печатных работ. Получено одно удостоверение на рационализаторское предло-зение Н 1673 от 22.06.92 г.

.Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страницах ааоиношсного текста, иллюстрирована таблицами и

¿У рисунками. Работа состоит из введения,обзора литература,материалов и методов собственных исследований, обсуждения результатов и выводов и библиографического указателя литературы. Литературный указатель включает .JiX отечественных и __1Г-£ иностранных источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования были проведены на 705 беспородных белых мышах, преимущественно самцах, массой 18-20г. Подопытных аивотных -заражали личинками Trichinella spiralis (Owen,1835) лабораторного штамма НИИ зоологии ЙН Республики Казахстан. Доза зарагения составляла 80-100 личинок на мыаь. Личинок трихинелл предварительно декглсулировали в искусственном ге-лудочном соке, отмывали в физиологическом растворе и подсчитывали под бинокулярном микроскопом по методике, предложенной И.Я. Зимо-роем (1962). Заранение мышей проводили введением личинок в пищевод с помощъи канвли.

Работа состояла из 3 разделов:

а) Изучение формирования патологического процесса при трихи-неллезной инвазии у подопытных иивотных. .

б) Изучение действия мебендазола на течение патологии.

в) Изучение сочетанного действия мебендазола с иммуностиыу-латорами-полизлектролитами на изменения течения инвазионного процесса.

Небендазол вводили мышам в нелудок с крахмальным клейстером в дозе 75 иг/кг массы .тела. Иммуностимуляторы вводили подкожно: полиоксидоний в дозе 10 ыг/кг массы тела, градекс - 2 мг/кг массы

тела и вегетан - 100 ыкг. Дозировка химиопрепаратов брали основываясь на данных литературы (H.H. Озерецковская, 196?; О.Я.Л. Бе-киш с соавт., 1978; 3,В. Лереверзева, 1У81; И.И. Бурак, 1982; Р.В. Петров. 1987; P.M. Хаитов, 1987). Препараты вводили на кишечной (2-4 дни после заражения), миграционной (6-11 дни) и мы-иечной (25-30 дни) стадиях трихинеллеза.Контролем слугили инвази-рованные гивотные.не получаввие препараты,Подопытных нивотных забивали в следувщие дни после зараяения; ?, 15, 21, 35 и 60 и определяли паразитоциднув активность и иммунологические показатели.

Иммунный ответ оценивали по следующим показателям;

- Количественное определение Т-лимроцитов в периферической крови методом спонтанного розеткообразовакия по М.' Jondali (1972) (Е-РОК) в модификации fl. Wilson и R. Coombs (1973);

- Количественное определение B-лимфоцитов в периферической крови методом коиплементарного розе^-ообразования (EflC-POK) по N.F. Mendes (1974);

-Определение циркулирувщих иммуншх комплексов (UUO методом селективной преципитации по й. Digt-'oa С1977) в модиф,-:;;ации В. Гриневич и й. Алферовой (1981);

- Реакции непрямой гемагглвтинации (РНГй) проводили по методу К.' Malberg ( 1987 ); .

- Реакция имиуноферментного анализа (ЙФЙ) по методу Е. Энг-валл и П. Перлман (1971);

-Титры гетерофильных агглвтининов по методу Paul и Bunnel (1932). '

Эффективность л&чения оценивали по количеству взрослых трихинелл в тонком кишечнике и личинок в диафрагме подопытных аи-вотных.Наличие кишечных трихинелл определяли визуально после вскрытия всего отдела тонкого кишечника с покощьи бинокулярного микроскопа ЙБС-1.Интенсивность инвазии скелетных мышц устанавливали по числу трихинелл в диафрагме после ее переваривания в искусственном желудочком соке при температуре 37 градусов по Цельсии в течение 10 часов с пересчетом на 1 г веса мышечной ткани (Э.В. Перзверзева. 1980; Й.И. Бурак, 1982).

Обработка полученных результатов исследований проводилась .с помощью методов вариационной статистики (В.И. Петухов, 1985).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

I. Формирование патологического процесса при трихинеллвзной инвазии Результаты экспериментальных исследований показали, что у зараженных мышей процент привившихся трихинелл составил через ? дней после заражения 21,0±2,1%, 15 дней 15,0+1,4%, 21 день 3,1±1,2% (табл. 1). На 35 и ВО дни у подопытных аивотных зрелых-трихинелл в 'кивечнике не определяли. В тоае время личинки трихинелл обнаруживали в мыацах диафрагма, на 21 день 227,1+16,0 ,на 35 - 4445,0±190,2 и 60 - 5222,0±175.0.

При исследовании общего количества лейкоцитов на 7 сутки после заражения установлена тенденция увеличения числа лейкоцитов в крови заравенных аивотных 10,5 +0,9 (Р>0,05), по сравнении с контрольными еивотными В,7 ± 0,4 тыс/мкл. Значительное и достоверное увеличение количества лейкоцитов установлено с 15 дня после заражения (12,5 ± 1,1 против контроля .8,8 ± 1,1 тыс/мкл). Пик лейкоцитоза приходился на 35 день инвазии (17,0 ±1,2 тыс/мкл), а на 6Ü день незначительное сниаенив.

Изучение подопытных и контрольных аивотных показало, что при трихинеллезной инвазии повышалось количество эозинофилов на 15 день после зараяения, с пиком подъема на 35 день исследования (30,2 ± 1,4% против 15,4 ± 0,9% у контрольных). На 60 день исследования зозинофилия была по преанеку достоверной (11,9± 1,2%) и высокой. Полученные, результаты согласуштся с данными других авторов (H.H. Озерецковской ,197В; B.C. Клейн,1978; Н.Л. Веретенни-ковой с соавт.,1985; Т.М. Норенец, 1984, 1985; Г.Н. Дьяченко» 19893, Изменения количества эритроцитов на 7,. 15, 21 дни исследования были статистически недостоверными. Однако к 35 дна количеств;. эритроцитов у подопытных аивотных рэзко снижалось, а к 60 дни достигало 8,2 + 1,7 против 12,0 + 0,9 шш/мкл в контрольной группе.

Анализ данных о количестве E-PQK показывает, что на 7 день исследования количество этих клеток в крови у заракенных майей имело тенденции к сникению (3000,0±64,5 Е-Р0К/мкл или 56,2±1,4% против контроля 3300,0±70,5 Е-Р0К/мкл или 60,4±0,8%). Через 15 дней после заражения количество Е—РОК в крови мышей еще больше снизалось, а к 21 днш эти изменения были в 1,5-2 раза ниже.

чем. в контрольной группа (Р < 0.05). При изучении функциональной активности В-лимфоцитов в реакции спонтанного розеткообразования установлено, что уже на 1 сутки после заражения число EflC-POK в крови подопытных животных достоверно уменьшалось по сравнении с контролем,(Р < 0,03). Однако, на 21 д8ш> и в более поздние сроки исследования отмечено некоторое увеличение данного показателя.

Таким образом, полученные результаты свидетельствувт о том, что формирование трихинеллезной инвазии сопрововдается имму-носупрессией Т- и В- звена имунитета, с преимущественным Т- иммунодефицитом.

2. Действие мебендазола на течение патологического процесса

Наяи результаты показали, что у «ивотных, получавших мебен-дазол на 2-4 дни после заражения . (кишечная стадия) приводило на 21 день исследования к освобождении тонкого кишечника от зрелых трихинелл и предупреждало инвазии мышц(табл.1). Введение мебендазола на 6-11. дни после заражения (миграционная стадия), сокращало сроки паразитированиа гельминтов в кивечнике, резко снижало их численность по сравнении с нелеченными еивотными. У еивотных, получавших мебендазол на 25-30 дни (мнвечная стадия), количество личинок в мышцах значительно уменьшалось по сравнении с нелеченной группой.

В количестве лейкоцитов и зозинофилов при введении мебендазола на кишечной стадии, такке отмечали их повышение у животных 3, 4 и 5 групп и .лишь у еивотных 2 группы количество лейкоцитов и зозинофилов было на уровне контрольных. Заражение'аивотных личинками Тг.spiralis на кишечной стадии вызывало снижение количества эритроцитов с 7 дня поело заранвния. На протяженных всего периода исследований количество эритроцитов у зараненшшх мышей было в пределах 7,0+0,2 - В,8±0,1 млн/мкл против 9,0±0,4 - 10,7±0,9 млн/икл у контрольных незаракенных еивотных.

При введении мебендазола, изучение функциональной активности 'Г- лимфоцитов в Е-Р0К, показало обдув тенденции к снижении у всех подопытных еивотных в первые 21 день после заражения (рис.1). На 35 день и более поздние сроки после заравения мы нашли незначительное увеличение как относительного, так и абсолвтно-го количества Т- лимфоцитов. Это возможно зависило от восста-

Таблица 1

Содерзание зрелых трихинелл в кииечнике и личинок в иызце диафрагмы подопытных аизотних при действии аебвндазола.

Название препарата

Группа ниеотнш

Сроки лечения

(дни)

Сроки исслгдова ния (дни)

Число трихинелл

в кипечника

в 1г мыпцы диафрагмы

Небенда-зол

2 - 4

6-11

25 - 30

7 15 21 35 60

15 21 35 60

35 60

6,8 ± 0,9» 0,8 ± 0,2* 0 0 0

5,0 ± 0,2*

О О О

О

о о о о

о о

205,0 ± 14,4* 264,0 ± 18,0*

1380,0 ± 120,0* 960,0 ± '17,0*

Контроль

7

15 21' 35 60

21,0 ±2,1 0. 15,0 ±1,4 О * 3,1 ± 1,2 227,1 ± 16,1 О .4445,0 ± 190,2 О 5222,0 ± 175,0

2

3

4

5

Примечание: * - достоверность различий- по сравнении с нелеченяой группой.

новлания функциональной активности Т-аффвкторов гипарчувствиталь-ности замедленного типа.Сопоставляя данные, полученные у вивотных 2 и 3 группа С2-4 и 6-11 дни введения иебендазола) в.динамике В-лимфоцитов следует отметить их общую тенденции увеличения в течение 80 дней исследования (рис.2). 9 животных 2 группы набладали увеличение количества ЕЙС-РОК на протяжении всего периода исследо

- Ii -

Рис.1

Соагазжамга относитагвэного количества Т-лим-я>оиитоэ у калесггных, полумызшмх ксжоисазол.

U

Рис. В

Со.аержплиа отмоеитвланог-о катчоетиа В-лим-

<мшитоо у тиоотныХ| получашти навсндазол. «

___Нстома В__

10

IVÍ2S-SÍ»

Ч Дмм

15

21

S3

63

ванна от 9,4i0,9 до 10,0±0,3 (21 день). У аивотных 3 группы,отмечали увеличение количество ЕйС-РОК на 21 и 60 дни после заразения до 9,5i0,2 - 10,2±1,2, а в остальные дни количество В-лиафоцатов было достоверно нике, чем у интактных аивотных 6 группы. H аивотных 4 группы (мебендазол вводили на 25-30 дни) наблпдалось снияе-ние количества B-лимфоцитов.

Таким образом, при введении небендазола подопытным зивотнам, отмечалось достоверное увеличение в периферической крови как относительного, так и абсолвтного количества розеткообразувцих Т- и В-лиыфоцитов. Введение небендазола на всех стадиях инвазии вызывало невольное снинение титров антител на 35 и 60 сутки по сравнению с контрольной группой и увеличение циркулирующих иммунных комплексов. . Так концентрация ЦИК при введении небендазола на 2-4 дни после зараяения сопровондалась увеличением их количества до 84,0 + 1,8 опт.од, (против 74,0 ± 2,8 в контроле) введение аебэн-дазола на 6-И и 25-30 дни вызывало еце больпеэ образование иммун них комплексов,высокая концентрация которых сохранялась в течении всего периода наблюдений в сравнении с контролем. Таким образом, высокий уровень иммунных комплексов в кровотоке как контрольных, так и получавиих мебендазол на 6-11 и 25-30 дни, свидетельствует о развитии иммунопатологических процессов,

Содвркание гетерофильных агглютининов было достоверно низе у гиЕотных 1 группы (контрольных заразешшх) по сравнении с контрольными (незараЕенными). Так, титры гетерофильных агглитининов у животных 5 группы были в пределах 1,5±0,1 - 2,0±0,2- log2, то у еивотных б группы 1,8±0,2 - 2,2+0,4 log2, H хивотных 1,2,3 и 4 групп достоверных отличий содерааний гетерофильных агглитининов в сыворотке крови не наблюдалось. Полученные результаты согласуатся с данными других авторов О.Я.Л. 5екии (1985), H.H. Озерецковской (1976-1992), Т.К. Раисова (1991).

Таким образом полученные данные свидетельству!» о том, что мебендазол обладает высоким трихинеллоцидным действием -особенно на ранних стадиях трихинеллеза и несколько сниаает имнуносуп-рессивное действие трихинелл на организм подопытных аивотных. Вместе .с тем, мебендазол повыяает сенсибилизации организма-хозяина к антигеном трихинелл и не полностью восстанавливает иммунные свойства хозяина. Поэтому все это обуславливает необходимость внлачения в комплекс патогенетической терапии трихинеллеза препа-

раты корригируящие иммунный ответ хозяина и не уменьшающие три-хинеллоцидный эффект мебендазола.

3. Сочеганное действие мебендазола с иммуностимуляторами-поли-электролиташг на течение патологического процесса

В институте иммунологии Сг.!1осква) разработаны оригинальные высокоэффективные иммуностимуляторы полимерной природы, а именно: полиоксидоний, вегетан и градекс. Указанные вецества пригодна для применения в трех качестзах: а) как иммуностимуляторы иироиогэ профиля (спектра) действия; б) как иммуноадъизанты; о) как иммуностимулирующие псситзли для антигенов в структуре конъагирояан-них вакцин, лредстазляяцнх собой ксвалентн.че конъигаты "антиген-полимер" .

Проведенные исследования показали (табл. 2). что введение кебендазола с полиоксидонием независимо от сроков введения сопро-воздалось высоким паразитоцидным эффектом, превыиасциа трихинел-лоциднуп активность мебендазола. Введение полиоксидония и мебен-даз-ола на 2-4 дни инвазии сопровокдалось снизением прианваемости кипечннх трихинелл по сравнении с контролем, а такзе предупреждением инвазии скелетных мыпц. Введение мебендазола с полиоксидонием на 6-11' дни после заразениа приводило также к уменьиения при— ниваемости кипечннх трихинелл и снизало интенсивность инвазии с иыице диафрагмы. Введение кебендазола с полиоксидонием на мысеч-ной стадии; трихинеллеза (25-30 дни) статистически достоверно уменьшало интенсивность инвазии в мышце диафрагмы по сравнении с введением только мебендазола. Аналогичные результаты были получены и при совместном введении мебендазола с градексом и вегетанси. Однако, полученные данные показали, что совместное.введение мебендазола с градексом приводило к более вцрааенному трихинелло-цидному эффекту, чемс другими-иммуностимуляторами. Поэтому, г дальнейших сериях исследований ма попытались более подробно изучить • влияние сочетанного введения мебендазола с градексом на изучаемые показатели в зависимости от срока введения 'химиопрепа-ратов (табл. 2).

Из данных таблицы видно, что.комбинированное введение мебендазола. с градексом на кишечной, миграционной и мышечной стадиях трихинеллеза, приводило к более высокой эффективности лечения.

Таблица 2

Содержание зрелых трихинелл в кишечнике и личинок в сыпце диафрагмы подопытных животных под влиянием ыебендазола и иммуностимуляторов

Название Сроки ■Сроки Число трихинвлл

препарата лечения исследова-

В 1 Г мыкци диафрагмы ■

(дни) ния (дни) в ииввчника

Иебенда- 2-4 7 6,8 ± 1.4* 0

зол + 15 0,3 ± 1,9* 0

полиок- 21 . 0 0

сидоний 35 0 0

60 0 0

6 -11 15 2,9 ± 1,2* 0

21 0 0

35 0 164,0 ± 34.0*

60 0 134,1 ± 47,0*

25 -30 35 0 1470,0 ±252,0*

60 0 520,0 ±110,0*

Мебенда- 2 - 4 7 8,4 ± 4,2* 0

зол + 15 . 4,2 ± 3 2 .0

вегетан 21 0 • 0

33 0 . 0

. 60 0 0

6 -11 15 4,В ±'2,8* 0

21 0 0 .

35 0 244,0 ±102,0

60 0 201,0 ±129.1

25 -30 35 0 1450,0 ±190,0*

60 . 0 . 590,0 ±170,0*

Мебенда-. 2-4 7 2,8 ± 1,4* 0

зол + 15 0.3 ± 1.2* 0

градекс ' 21 0 0 ■

35 . 0 0

■ -60 0 ■ 0

6 -И 15 1,8 ± 2,8* 0

21 0' 0

35 0 124,0 г 65,0*

60 0 50,2 ± 25,0*

25 -30" 35 0 984,0 ±220,0*

60 0 360,0 ±150,0*

Контроль 7 22,0 ± 1,4 . 0

15 15,0 ±' 4,6 0

- 21 3,0 ± 1,2 204,0 ± 12,0

35 0 4350,0 ±185,1

60 0 5120,0 ±170,2

Примечание: * - достоверность различий по сравнении с нчлеченной группой.

чем при терайии-одним мебендазолоа. Кроме того у них наблидалось определенное снизениэ инвазии скелетных миец личинками трихинелл. Следует отметить, ' что у нквотных этих групп снизение интенсивности, инвазии было'в 5 - 30'раз низе в сравнении с контролем.

.На протяяении 60 дней как у подопытных,так и контрольных зи-вотных наблюдался лейкоцитоз. Введение аебендазола с градексом на 2-4 и 6-11 дни после зараяеннз не вызывало достоверных изменений в количестве лейкоцитов.

У мыиай, получавпих нзбзндазол на кипечной и миграционной стадии инзазяи, количество эозинофилов находилось в пределах нормы, в то время как у цквотных 3 группы и контрольных зарагенкп" иаблпдали с 7 по 35 дни зозинофилиа. Изменение количества эритроцитов как у подопытных зивотннх, так и в контрольных группах были статистически недостоверны. Совместное лечение иебендазола с грл-дексоы не влияло на содерзании эритроцитов в периферической кре-ви, по всей вероятности увеличение (по сравнения с зиготными леченными небендазолоа) шло за счет дэйстзия градекса на зритропо-эз. Результаты исследований показкватт, что применение мебендазо-ла • с градексоа обусловило более высокий уровень иммунного ответа организма инвазированннх ншей по сравнении с леченными одним не-бендазолом.

Комбинированное введение аебендазола с градексом на 2 - 4 и 6-11 дни после заразения приводит к повыиенному содержании количества Т-лиаФоцитов во все дни исследования, по сравнении с контрольной, нелеченной группой подопытных нивотьых (рис. 3). В тоге время эти данные били близки к показателям интактных зивотнкх. Введение иебендазола с градзксоа на мшзечной стадии трихинеллеза, такяе вызывало незначительное повнление количества Т-линфоцитоз по сравнении с контрольной, нелеченной группой.

Полученные результаты показывают, что градекс в вышеназванных , условиях, по - видимому, способствует повышении активности и зрелости иннунокоипэтонтнцх. клеток, укреплении козеокаль-ного аппарата лимфоцитов, активации поверхностных мембранных структур последних. Значительнуи роль при этом, возможно, играет активация хелперных механизмов Т-системы.

Яри сочзганном оедении мебендазола с градексом на кииечной (2-4 дни), миграционной (6-11 дни) г мышечной стадии (25-30 дни) отмечали повыи'ение относительного содеряания В-лимфоцитов по

стновению как к интактным, так и к контрольный, нелеченным подопытным животным (рис, 4).

И мышей подопытных и контрольной гриппы достоверных ' отяичий в количестве гетерофильных агглвтининов .на 7 день после'заражения не было. Однако следует отметить, что .на 15 и 21 дни у животных, получавших- мвбендазол с градексом. на 2-4 и 6-11 дни отмечали достоверное увеличение содержания гетерофильных агглвтининов в крови от 0,6 1 од2 на 15 день-до 1,6 Лод2.на 21 день исследования. На 35 и 60 дни у животных леченных на 2-4 и 6-11 дни наблюдалось снинение титров гетерофильных агглютининов, но было достоверно выше, чем в контроле. У животных получавших препараты на 25-30 дни, достоверно отличий в динамике гетерофильных агглютининов нами не установлено.

Введение мебендазола с градексом на 2-4 день после заражения вызывало увеличение титров антител на 7 и 15 дни до 5,1+0,2 и 8,0.±С.4 1од2. На 21 день титр антител снизился до 4,2+0,6 1ов2 и к 60 дни у животных этой группы-антител не. находили. У животных, получавшие препараты ка 4-11 дни,- титры антител были повышены на 15 и 35 дни после заражения. При введении-мебендазола с градексом на 25-30 дни увеличение титров антител наблюдалось только -на 35 день. У контрольных зарагенных.животных, титры антител нарастали постепенно и достигали- максимума на 60 день (7,-2+0,4 Зов2).. ..-'

Изучение фонового уровня циркулирующих иммунных комплексов показало их идентичность у всех подопытных животных от 72,2+!,4 до 74,1+1,2 оптических единиц. .У еивотных,. получавших йебендазол с градексом на кишечной стадии (2-4 -дни),после зараяения, увеличение циркулирущих имиунйых комплеков отмечали на 7 день, до 80,1 + 2,4 опт.ед.

У еивотных получавших препараты на ¡миграционной (6-11 дни) стадии наблюдалась тенденция к увеличении до 35 дня исследований (от 78,2 + 1,7 до 84,6 ± 2,2 опт.ед.). При введении препаратов на мышечной стадии" (25-30 дни) наблидали увеличение ЦИК (до В9,9 ± 1,2 опт.ед.) на 35 день после заражения, йвеличение количества ЦКК в крови подопытных животных объясняется увеличением синтеза антител при действии иммуностимулятора.

Таким образом, наши исследования подтвердили предположение о ток, что иыкуностимуляторы-полизлектролиты усиливают элиминацию кроветворных клеток, миграции В-лимфоцитов из костного мозга, и

Рис. Э

Салсжониз отнаеито/тьмог-а количества Т—лимччзцитсэ у миаотныХ) поггумоиших ма-ееноазол и граавкс.

Рис. -4

Соиврмпниа отисситалансго колинаства В-лимч>сиитсэ у жкаотных, получавших ма-венпазол и пзаяЕкс.

Т-лиифоцитов из тимуса (А.К, Наямитдинов с соавт., 1979; Р.В, Петров, Р.М.Хаитов, 1981).

Поэтому, разработка схем комплексной терапии с использованием ср-.дств зтиотропной терапии (антгельминтиков) и Препаратов, повышающих иммунобиологическув реактивность - это одно из перспективных - направлений в разработке мероприятий по борьбе с гелькинтозаыи, и в частности с такими как трихинеллез.

Комбинированная терапия экспериментального трихинеллеза специфическим препаратом ыебендазолои и иммуностимулятором-полиэ-лектролитоы градексом, нормализующая иммунный ответ хозяина мовет быть в дальнейшем предлокена .для апробации в клинике. .

ВЫВОДЫ

1. При экспериментальном трихинеллезе белых мышей, формирование патологического процесса сопровождается снижением содержания Т- и В- лимфоцитов, угнетением функциональной активности Т-клеток иммунитета, снижением количества эритроцитов, выраженным лейкоцитозом и зозинафилией.

2. Введение мебендазола на-кишечной стадии заболевания вызывает повышение содержания Т-. и В- лимфоцитов, снижение специфических антител, способствует быстрому изгнании .половозрелых трихинелл из кишечника и полностью предупрекдает инвазию мышц, .Тем самым подтверждается высокий трихинеллоцидный эффект мебендазола. На мышечной стадии инвазии паразитоцидный эффект препарата сопровождаете:,! супрессией Т-лимфоцитов, повышением концентрации циркулирующих иммунных комплексов и.угнетение гетерофильных агглютининов; ..■.-'

3. Сочетанное введение мебендазола с иммуностимуляторами-полиэлектролитами (градекс,-полиокс-идоний, вегетан) повышает трихинеллоцидный эффект мебендазола.

А. Комбинированное действие мебендазспа с иммуностимулятора-ки-полизлектролитани повышает содеркание Т- и В- лимфоцитов, увеличивает г.одеркание гетерофильных агглютининов, снижает концентрации циркулирующих иммунных комплексов, и не влияет на количество лейкоци-ов,. эозинофилов, эритроцитов в периферической крови.

Ь. Для клинического испытания при лечении трихинеллеза ыокет быть рекомендована комбинация мебендазола с иммунретимуля-

тором градексом, усиливающий трихинеллоцидный эффект мебендазала и улучшавший иммунологические показатели в организме подопытная животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Изучение механизма иммунитета при трихинеллезе на клеточном уровне позволило расшифровать динамику Т- и В-систек иммунитета. Подтверждена высокая трихинеллоцидная активность мебендазсла я показано возникновение инмуносупрессии в организме хозяина. Совместное введение мебендазола с иммуностимуляторами вызывало коррекция иммунного ответа и повыпала эффективность действия мебендазола. Полученные экспериментальные данные позволяют усазер-иенствовать разработку патогенетической терапии тканевых гельминтов, в том числе и трихинеллеза. Материалы данного исследования могут быть использованы и положены в основу методических и информационных документов по изучении физиологических механизмов, формирование патологических процессов при трихинеллезной инвазии и совершенствования патогенетической терапии экспериментального трихинеллеза. Полученные результаты могут быть использованы на курсах лекций на кафедрах биологии медицинских инсти-.утов, институтов усовершенствования врачей, биологических кафедрах университетов и кафедр паразитологии в ветеринарных институтах,

•" СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Коррекция иммунного статуса при экспериментальном трихинеллезе: Материалы докладов UI научной конференции по проблеме трихинеллеза человека и яивотных.- Киров, 1992.- С. 150—151. ССоавт.: Раисов Т.К.).

2. Влияние вольтарена на иммунные реакции хозяина при три хинеллезной инвазии.- Там ае,- С. 152-155.ССоавт. :Раисов Т.К., Теаирбеков Д-.А., Уразалина H.H.Агафонова И.П.)

3. Состояние систем клеточного иммунитета при химиотерапии экспериментального трихинеллеза. Тезисы докладов к XI научно;; конференции "Оакторы клеточного и гуморального иммунитета п?;' различных физиологических и патологических состояниях", бинск, 1992.- С. 123, ССоавт.: Раисов Т.К.)

4. Влияние иммуностимулирующей терапии на приживаемость ки-гечных трихинелл и интенсивность инвазии: Сборник научных трудов Алма-Атинского и Семипалатинского зооветеринарных институтов "Повышение продуктивности сельскохозяйственных животных и совер-Еенствование мер борьбы с болезнями".-Семипалатинск, 1992.-С.! 37-139.(Соавт.: Раисов Т.К., Темирбеков Д.А.).

5. Влияние комплексного лечения экспериментального трихинеллеза небендазолон и вольтареном на интенсивность инвазии.

-Так же,- С. 139-143 .(Соавт.: Раисов Т.К., Темирбеков Д.А. ).

Кинетика Т- и Б- лимфоцитов при экспериментальном трихи-ь^ллезе мывей,- Международный симпозиум по аллергологии и клинической иммунологии,- Тезисы докл. раздел 2,-Алма-Ата.-1392. - С. 25G, (Соавт.: Раисов Т.Н.),

7. Субпопуляция лимфоцитов при трихинеллезной инвазии. Там »е. - С. 239.'(Соавт.: Темирбеков Д.А. , Раисов Т.К.)

В. State of cell-bound .immunity at the chemotherapy of experiaental trichinosis: 8-th International Congress of IcmunoloBy Budapest, Hundary, 1992. Abstracts P.103.

9. Correction of iununologic state of the chemotherapy of the experimental trichinosis:8th International Congress of lEGuncicgy Budapest, Hungary, 1992. Abstracts P.163.

Рационализаторские предложения.

1. Способ лечения- трихинеллеза. Удостоверение N. 1573 от 22.0C.S2 г. (Соавт. Раисов Т.К.).