Концентрация серотонина в плазме крови и тромбоцитах, влияние агонистов 5-НТ2 и 5-НТ4 рецепторов на сократимость миокарда у детей с врожденными пороками сердца

Мустафин, Альвар Альфредович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Концентрация серотонина в плазме крови и тромбоцитах, влияние агонистов 5-НТ2 и 5-НТ4 рецепторов на сократимость миокарда у детей с врожденными пороками сердца
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Концентрация серотонина в плазме крови и тромбоцитах, влияние агонистов 5-НТ2 и 5-НТ4 рецепторов на сократимость миокарда у детей с врожденными пороками сердца"

На правах рукописи

Мустафнн Альвар Альфредович

КОНЦЕНТРАЦИЯ СЕРОТОНИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ И ТРОМБОЦИТАХ, ВЛИЯНИЕ АГОНИСТОВ 5-НТ2 И 5-НТ4 РЕЦЕПТОРОВ НА СОКРАТИМОСТЬ МИОКАРДА У ДЕТЕЙ С ВРОЖДЕННЫМИ ПОРОКАМИ СЕРДЦА

03.00.13-физиология 14.00.09-педиатрия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

и ,

I - - '

Казань-2008

003453264

Работа выполнена в ГО У ВПО «Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитою РФ»

Hay чныс ру ко водители:

доктор биологических наук, профессор Нишэтуллина Разина Рам аз аноша; до кгор медицин свих наук, доцент Миролюбо в Лео нид Мих айло вич Официальные оппоненты:

доктор медицинских н^к, профессор ЗефировТимур Лью вич; до кгор медицинских наук, профессор Бул aro в Вл адимир П етро вич

Ведущаяорганизация - ГУНУ Факультет Фундаменталыюй Медицины. Московский госудфсгвенный университетимени М.В. Ломоносова

Запита состоится« 5 » декабря2008 года в Ючасов на заседании диссертационного оовета Д 208.034.01 при ГОУ ВПО «Кйанский государственный медицинский университет)) (420012, Казань, ул. Бутл ерова49)

С диссертацией можно ознаюмиться в научной библиотеке ГОУ ВПО«Казанский государственный медицинский университет» (420012, Казань, ул. Бутл ерова, 49, юрпусБ).

Авгорефератраюспан октября 2008 г.

Ученый се1фетарь

диссертационного совета, /

доктор медицинских наук, профессор \У/ \У СЛл-^ЛЛ,— Залжютдинова ЛН.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

В последнее время большое внимание уделяется изучению серотонинэргияеской системы. Достаточно хорошо изучены молекулярные и клеточные механизмы синтеза серотонина (Cooper et al., 1996; Cote et al., 2004), его метаболизма (Билич и Хамитов, 1977; Gillis end Pitt, 1982; Suhara, 1998), рецепгорного взаимодействия (Ugrumov et al., 1994; Choi et al., 1996; Tournois et al., 1998; Нигматуллина и др., 2004). Широкий спектр эффектов серотонина объясняется наличием большого разнообразия серотониновых рецепторов (Adham et al., 1993; Ноуег et al., 1996). Синтезированы препараты с терапевтическим эффектом, основанном на стимуляции и блокаде серотониновых рецепторов. Применение препаратов, прямо или косвенно влияющих па серотонинэргическую систему, имеет ряд осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы, вплоть до фатальных, в частности: ар тмин, тромбоз, инфаркт миокарда, первичная легочная и артериальная гипертензия (Herve et al., 1995; Rothman et al., 1999; Ncbigil et al., 2003; Reeihuis et al., 2006). Механизмы этих осложнений до конца не изучены.

Серотонигоргическая система является звеном патогенеза атеросклероза, артериальной и легочной гипергтензии, ишемической болезни сердца, фибрилляции предсердий, сердечной недостаточности (Herve et al., 1990,1995; Kaumann, 1994; Gustafsson et al., 2005). Влияние серотонинэргической системы на сердечно-сосудистую систему достаточно глубоко изучено на животных. Доказано влияние серотонинэргической системы на эмбриогенез (Nebigil et al. 2001, 2003) и онтогенез (Lauder, 1990; Carlberg, Wiesenberg, 1995) сердечно-сосудистой системы, выявлено влияние серотонина на инотропную, хронотропную и люзшропную функцию миокарда (Pino et al., 1998; Richter et al., 2003; Yusuf et al., 2003), пролиферацию эндотелия сосудов (Pakala et al., 1994; Michel et al.,1995; Schranz, 2003), обнаружено участие серотонина в патогенезе поражения клапанов сердца (Gustafsson et al., 2005). Выявлена эффективность блокаторов 5-НТ2 рецепторов в предупреждении развития легочной гипертензии у крыс (Callebert et al., 2006). Внедрение в медицинскую практику серотонинэргических препаратов для терапии сердечно-сосудистых заболеваний тормозит недостаточное количество информации по реализации серотонинэргических эффектов у людей при различной сердечно-сосудистой патологии, не исследовано, насколько эти эффекты совпадают с данными, полученными при исследовании животных.

Врожденные пороки сердца (ВПС) занимают значительную часть в структуре врожденной патологии в виде самостоятельных изолированных нозологических форм, а также в сочетании с патологией других органов и систем. В 58,2% из всех случаев смерти от

врожденных пороков развития, врожденные пороки сердца являются причиной смерти младенцев, намного опережая таковую от пороков развития желудочно-кишечного тракта и нервной системы (данные республиканского регистра МЗ РТ, 2002). Частота рождаемости детей с ВПС составляет 6 - 8 на 1000 живорожденных. Декомпенсация кровообращения находится в прямой зависимости от сложности порока и может проявляться сразу же после рождения. Из 100 детей с ВПС в первую неделю умирают 14-22, в течение первого месяца жизни 19-30, и только 20-25 детей переживают рубеж возраста 1 года при естественном течении заболевания без медицинской помощи (Шарыкин и др., 1989).

Основными причинами смерти при ВПС являются синдромы сердечно-сосудистой недостаточности и легочной артериальной гипертснзии (ЛАГ). В настоящее время терапия данных критических состояний и их профилактика не учитывает роль серотонинэргической системы в их патогенетических процессах, не смотря на то, что эта роль значительна, а в некоторых моментах может быть даже определяющей. Настоящая работа посвящена исследованию роли серотонинэргической системы в процессе формирования легочной гипертензии у детей с ВПС и изучению влияния агонистов серотонина на инотропную функцию миокарда человека, и является очередным шагом к началу использования агонистов и антагонистов серотониновых рецепторов в терапии сердечной недостаточности, артериальной и легочной гипертензии.

Целью данного исследования явилось изучение влияния агонистов 5-НТ2, 5-НТ4 рецепторов на сократимость миокарда, определение концентраций серотонина и его метаболита 5-ГИУК в плазме крови и тромбоцитах у детей с врожденными пороками сердца.

Задачи исследования:

1. Изучение влияния агонистов 5-НТ2 и 5-НТ4 рецепторов на инотропную функцию миокарда правого предсердия у детей с врожденными пороками сердца.

2. Исследование наличия 5-НТ2в, 5-НТ4 рецепторов и мембранного переносчика серотонина в миокарде правого предсердия детей с врожденными пороками сердца иммуногистохимическим методом.

3. Определение концентрации серотонина и его метаболита 5-ГИУК в плазме крови и тромбоцитах у детей с врожденными пороками сердца.

Научная новизна напученных результатов. В данном исследовании впервые в мировой практике комплексное исследование влияния агонистов 5-НТ2, 5-НТ4 рецепторов на миокард с параллельным иммуногистохимическим подтверждением наличия этих рецепторов, определение плазменного и тромбоцитарного содержания серотонина и его метаболита 5-ГИУК проводилось на контингенте пациентов с ВПС в возрасте от 2 месяцев до 17 лет. На основе анализа клинического материала и лабораторных показателей данного возрастного

контингента прослежена реакция серотонинэргической системы на патологию сердечнососудистой системы, начиная с формирования адаптационных процессов и до появления признаков декомпенсации.

Впервые выявлена связь между гемодннамической нагрузкой на правое предсердие и инотронной реакцией миокарда правого предсердия на агонист 5-НТ4 рецепторов у детей с ВПС.

Впервые установлена зависимость между степенью легочной артериальной гипертензии и концентрацией 5-ГИУК плазмы крови у детей с ВПС.

Методом иммуногистохимического анализа впервые установлено наличие 5-НТ2в, 5-НТ4 рецепторов и мембранного переносчика серотонина в миокарде правого предсердия детей с ВПС.

Практическая значимость полученных результатов. Полученные данные позволяют более глубоко понять важную роль серотонинэргической системы при формировании таких патологических состояний как сердечная недостаточность, гипертрофия миокарда, легочная гипертензия, предсердлая аритмия.

Выявленный существенный положительный инотропный эффект агониста 5-НТ4 рецепторов, свидетельствует о значимости влияния серотонинэргической системы в регуляции инеггропной функции миокарда и предполагает возможность применения 5-НТ4 блокаторов и агонистов в клинике, по аналогии с применяемыми (5-блокаторами и инотропными препаратами.

Обнаруженная увеличенная инотропная реакция миокарда правого предсердия у детей с дефектом межпредсердной перегородки (ДМПП) на агоннст 5-НТ4 рецепторов, учитывая аритмогенные свойства серотонина, может объяснить частую встречаемость предсердных аритмий при этом ВПС и предрасполагает рассмотреть применение блокаторов 5-НТ4 рецепторов в качестве антиаритмической терапии.

Выявленная повышенная концентрация 5-ГИУК плазмы у больных с ЛАГ, коррелирующая со степенью легочной гипертензии, позволяет предложить определение 5-ГИУК плазмы для диагностики активности патологического процесса в легочных сосудах и для оценки эффективности терапии пациентов с ЛАГ.

Выявленные повышенные концентрации серотонина и его метаболита 5-ГИУК у пациентов с легочной гипертензией отражают активное участие серотонинэргической системы в патогенезе легочной гипертензии у детей с ВПС, что дает основание для продолжения исследований в этом направлении с целью возможного применения блокаторов рецепторов серотонина при лечении и для профилактики развития легочной артериальной гипертензии у людей.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Стимуляция 5-НТ4 рецепторов миокарда правого предсердия детей с ВПС селективным агонистом вызывает положительный инотропный эффект, который изменяется соответственно гемодинамической нагрузке на миокард правого предсердия,

2. У детей с врожденными пороками сердца, осложненными легочной артериальной гипертензией, концентрации серотонина и 5-ГИУК в плазме крови повышены.

3. Миокард правого предсердия детей с ВПС иммунопозитивен на белки 5-НТ2в, 5-НТ4 рецепторов и мембранного переносчика серотонина.

Сведения об апробации результатов диссертации. Результаты работы и основные положения диссертации были доложены и обсуждены на Всероссийской научной конференции "Физиология сердца", посвященной 70-летию профессора Абзалова Р.А. (Казань, 2005); конференции, посвященной 70-леггию института эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006); VII Международном славянском Конгрессе по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца, IX Всероссийской конференции по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца, VII Всероссийском симпозиуме "Диагностика и лечение аритмий у детей" (Санкт-Петербург, 2006); конференции «Электрокардиология: история, достижения и перспективы развития» к 100-летию регистрации электрокардиограммы в России (Казань, 2006); XIII Всероссийском съезде сердечно-сосудистых хирургов (Москва, 2007), V Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем» (С.-Петербург, 2007), XX съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Москва, 2007), IV Всероссийской телеконференции «Актуальные вопросы кардиологии детского возраста: легочная пшертензия» (Москва, 2008), VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), региональной научно-практической конференции «Детская кардиология» (Казань, 2008).

Сведения о публикациях по теме диссертации. По результатам исследования опубликовано 17 научных работ, в том числе 3 работы опубликованы в научных рецензируемых журналах, определенных Высшей аттестационной комиссией. Общий объем публикаций составляет 2,0 усл. печатных листа, в том числе авторский вклад 1,2 усл. печатных листа.

Личный вклад соискателя. Диссертант участвовал в планировании, постановке цели и задач исследования. Подбор и анализ литературы, организация забора исследуемого материала (препаратов миокарда и крови) проводились непосредственно соискателем. Им лично проведено 43 исследования по сократимости миокарда с последующей компьютерной обработкой экспериментов, иммуногистохимическим методом обработано 172 среза миокарда, у 56 пациентов определена концентрация серотонина и его метаболита методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии. Все результаты исследований получены, статистически обработаны и проанализированы диссерташом лично. Научные положения и выводы диссертации базируются на результатах собственных исследований автора.

Внедрение результатов работы в практику. Результаты диссертационного исследования используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении семинаров на кафедрах нормальной физиологии и госпитальной педиатрии с курсом постдипломного образования и поликлинической педиатрии Казанского государственного медицинского университета.

В кардиохмрургическом отделении ДРКБ МЗ РТ на основе проведенных исследований, отраженных в диссертационной работе, расширены показания к проведению двухэтапной коррекции врожденных пороков сердца, осложненных легочной гипертензией, что способствовало снижению послеоперационной смертности от криза легочной гипертензии с 6 случаев в 2006 году до их отсутствия в 2007-2008 годах.

Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 118 источников, из которых 19 отечественных. Работа изложена на 101 странице машинописного текста, иллюстрирована 27 рисунками, 6 таблицами.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование выполнялось на кафедре нормальной физиологии Казанского государственного медицинского университета, на базе Детской республиканской клинической больницы МЗ Республики Татарстан и Межрегионального клинико-диагностического центра Республики Татарстан.

Объектом исследования явились 99 детей в возрасте от 2 месяцев до 17 лет, из них 81 пациент с различными врожденными пороками сердца и 18 детей без ВПС (контрольная группа). В распределении детей по полу в группе обследованных пациентов (соотношение мальчики/девочки) преобладали мальчики (55/44).

Исследование проводилось в двух направлениях: первое - определение влияния агонистов 5-НТ2 и 5-НТ4 рецепторов на инотропную функцию миокарда, взятого во время операций на сердце с искусственным кровообращением, с последующим иммуногистохимическим выявлением белков 5-НТ2в, 5-НТ4 рецепторов и мембранного переносчика серотонина в препаратах миокарда; второе - определение концентрации серотонина и его метаболитов методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в плазме крови и тромбоцитах у детей с ВПС с различной степенью легочной гипертензии.

Метод определения сократимости миокарда. Пациентов (п=43) с ВПС в возрасте от 2 мес. до 17 лет распределили на две группы: 1 группа - пациенты с наличием лево-правого сброса крови на уровне предсердий, вызывающего повышенную гемодинамическую нагрузку на миокард правого предсердия (23 пациента от 2 месяцев до 15 лет). К этой группе были отнесены пациенты, имеющие диагнозы дефект межпредсердной перегородки и частичный аномальный дренаж легочных вен в правое предсердие (ЧАДЛВ). 2 группа - пациенты с ВПС без шунтирования крови на уровне предсердий (20 пациентов от 2 месяцев до 17 лет), при которых объёмная нагрузка на правое предсердие незначительна. Степень гемодинамической нагрузки на миокард правого предсердия оценивалась по данным эхокардиографии (размеры правого желудочка, размеры дефекта межпредсердной перегородки, отношение легочного и системного кровотоков).

Исследования по определению сократимости миокарда у детей с врожденными пороками сердца проводились на установке Power Lab (ADInstruments), датчик силы MLT 050/D (ADInstniments).

Мышечные волокна длиной 2-5 мм и диаметром 0,5-1 мм препарировались в месте технического разреза предсердий во время операций по поводу врожденных пороков сердца с применением искусственного кровообращения. Опытным путем наиболее оптимальным для забора препарата выбран этап операции перед проведением кардиоплегии. Препараты, взятые на этапе кардиоплегии, in vitro не работали.

Полоски миокарда транспортировались из клиники до лаборатории в ледяном физиологическом растворе в течение 30-40 минут с момента взятия. Миокард погружался в оксигенированный карбогеном (97% Ог и 3% СО2) рабочий раствор при комнатной температуре, в состав которого входили: (мкмоль/л) NaCl-119,8; KCl-5,4; СаСЬ-1,8; MgCI2-1,05; NaHP04-0,42; аскорбиновая кислота - 0,28; глюкоза - 5,05. Для поддержания pH в пределах 7,3-7,4 в раствор добавляли основной или кислотный буфер Trizma (все реактивы фирмы Sigma).

Препараты помещали вертикально в резервуары объёмом 25 мл, в которые поступал рабочий раствор и карбоген. Верхний конец препарата прикреплялся к нержавеющему стержню, соединенному с измерителем напряжения, нижний конец - к фиксированному блоку. Препараты стимулировались через два серебряных электрода электрическим сигналом с частотой стимулов 6 в минуту, амплитудой 10 мВ, продолжительностью стимула 5 мс.

Последовательность опыта: стабилизация в течение 60 минут (приработка), регистрация исходных показателей - 5 минут, в один резервуар с приработанным препаратом вводился агонист 5-НТ2 рецепторов (mCPP hydrochloride), во второй - агонист 5-НТ4 рецепторов (5-methoxytryptamine) - реактивы Tocris, в третий - физиологический раствор (контроль).

Графическая запись регистрируемых сокращений проводилась в течение 20 минут на каждую концентрацию вводимого агониста. Последовательно регистрировалась реакция миокарда на три концентрации агониста в растворе - 0.1, 1.0 и 10.0 мкмоль/литр. В конце исследования в резервуары вводился адреналин в дозе 10 мкмоль/л с целью определения жизнеспособности препарата миокарда. Реакцию миокарда на введение агонистов рассчитывали в процентах от исходной силы сокращения после приработки. Регистрация сокращений и обработка полученных результатов проводилась с помощью прираммы Chart 5.

Метод иммуногистохимии. Препарат миокарда правого предсердия помещался в 10% формалин на 24-48 часов. Затем ткань заливалась в парафин. На стекла, покрытые поли-L-лизином (Menzel GmbH, Germany) фиксировали парафиновые срезы толщиной 5 мкм, приготовленные на микротоме (Microm НМ 340Е, Germany) ю парафиновых блоков. Срезы подвергались депарафинированию и обезвоживанию посредством последовательной инкубации в толуоле 2 смены по 5 минут, этаноле абсолютном 2 смены по 5 минут, этаноле 95% 2 смены по 3 минуты. Стекла со срезами споласкивались в дистиллированной воде и переносились в ТБС буфер. Демаскировка антигенов проводилась кипячением на плитке. Для этого стекла со срезами помещались в сосуд с 0,01 M нитратным буфером (Dako Cytomation, USA), рН=6,1, подвергались кипячению в течение 40 минут, остужались до комнатной температуры, споласкивались и помещались в ТБС буфер на 5 минут. Эндогенную пероксидазу гасили при раскапывании на срезы 1% раствора Н2О2 в течение 20 минут. На срезы раскапывался блокирующий реагент на 5 минут во влажной камере. Блокирующий реагент стряхивался, не промывая в ТБС буфере, раскапывались мышиные моноклональные антитела к переносчику серотонина SERT (Advanced Targeting Systems) в разведении 1:500; противо-человеческие поликлонапьные антитела к 5-НТ2в рецегггору (MBL International Corporation) в разведении 1:250; противо-человеческие, противо-крысиные поликлональные антитела к 5-НТ4 рецептору (MBL International Corporation) в разведении 1:77. Для разведения первичных антител использовался буфер системы Dako Cytomation, USA. Проведение инкубации срезов первичными антителами в течение 50 минут во влажной камере, затем промывка в трех сменах ТБС. Раскапывались связывающие антитела (смесь антикроличьих и антимышиных биотиншшрованных антител) (Dako Cytomation, USA) с последующей инкубацией в течение 10 минут, после чего срезы промывались в 3-х сменах ТБС буфера. После чего раскапывался конъюгированный с пероксидазой стрептавидин (Dako Cytomation, USA), с последующей инкубацией в течение 20 минут, затем срезы промывались в 3-х сменах ТБС буфера. Гистохимическое выявление пероксидазной активности проводилось диаминобензидином в течение 10 минут. Срезы промывались в дистиллировашюй воде, ядра красились гематоксилином и заключались в глицерин-желатину. Исключение первичных

антител из иммуногистохимического протокола служило негативным контролем. Цифровые фотографии сделаны с помощью микроскопа Axio Саш HRc zeiss .

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. Пациенты (п=56), в возрасте от 2 месяцев до 17 лет, были разделены на три группы: 1 группа - пациенты с ВПС, имеющих ЛАГ (п=21, возраст от 2 месяцев до 16 лет), 2 группа - пациенты с ВПС без ЛАГ (п=17, возраст от 2 месяцев до 17 лет), 3 группа - контрольная (п=18, возраст от 3 месяцев до 15 лет) - дети без ВПС.

Степень ЛАГ определялась величиной систолического давления в легочной артерии (ДЛА) по данным эхокардиографии (градиенту давления на ДМЖП, величине транстрикуспидального градиента давлений), по данным зондирования полостей сердца, послеоперационного инвазивного мониторинга давления в легочной артерии, и регистрировалась, как процент систолического ДЛА от системного систолического артериального давления.

Забор венозной крови производился во время наркоза при стабильной гемодинамике, непосредственно перед оперативным вмешательством. У не оперируемых пациентов забор крови производился утром, непосредственно после сна, в положении лежа из заранее установленного катетера локтевой вены. Кровь в объеме 10 мл собиралась в охлажденную льдом пластиковую пробирку, содержащую 50 мкл гепарина, и центрифугировалась при t° + 4°С, 1000 об./мин. в течение 10 минут для получения плазмы, обогащенной тромбоцитами. Для разделения тромбоцитов и плазмы проводилось повторное центрифугирование при 3000 об./мин. 15 минут. Полученный надосадок (плазма) и осадок (тромбоциты) замораживались в отдельных пробирках при t° -20°С до момента исследования.

Непосредственно перед проведением ВЭЖХ препараты размораживались. В каждую пробу плазмы добавляли одну десятую объёма 1 H НСЮ4 до конечной концентрации 0,1 H, а также в качестве стандарта 1нг АМГТ в 10 мкл 0,1 H НСЮ4. В каждую пробу с тромбоцитами добавляли фиксированный объём 0,1 H HCIO4,10 мкл (1 нг) АМГТ (Sigma) и все пробы центрифугировали 20 минут при 14000 об./мин. (разрушение тромбоцитов).

Для разделения и количественной оценки содержания серотонина и 5-ГИУК в плазме использовали хроматографическую систему с насосом РМ-80 (BAS, США) с электрохимическим детектором LC-4B (BAS, США). Для разделения компонентов использовалась аналитическая колонка; HYPERSIL BDS-C18, 3 мкм, 4.0x100 мм (PHENOMENEX, США).

Разделение серотонина и 5-гидроксииндолуксусной кислоты происходило при температуре 23+1°С в условиях постоянного давления на колонке с обратимой фазой. Объем

петли иижектора - 20 мкл. Мобильная фаза: 0.1 моль цитратно-фосфатный буфер, содержащий 1.1 ммоль октансульфоновой кислоты, 0.1 ммоль ЭДТА и 9% ацетонитрила (рН 3.0). Измерение проводили на стеклоугольном электроде (+0.8 V) против электрода сравнения Ag/AgCl.

Концентрацию каждого компонента вычисляли путем сравнения величины пика в пробе с величкксЯ п::::а в стандарте. Для определена« концентрации серотонина и 5-ГИУК в тромбоцитах производился перерасчет, исходя из содержания тромбоцитов плазмы.

Метод статистического анализа. Результаты исследования подвергались статистической обработке на персональном компьютере с использованием программного комплекса «Statistica» V.6.0. Достоверность различий между средними величинами оценивалась по Стъюдешу. Различия считали статистически достоверными при р < 0,05. Корреляционный анализ между рассматриваемыми признаками проводился по методам Пирсона и Фишера.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Влияние агоиистов 5-НТ2 и 5-IIT4 рецепторов на инотропнуга функцию миокарда правого предсердия детей с ВПС

При исследовании сократительной способности миокарда правого предсердия пациентов с ВПС на введение агониста 5-IIT4 рецептора (5-methoxytiyptamine) в 41 препарате из 43 выявлен значимый положительный инотропный эффект. Реакция на введение агониста 5-1ТГ2 рецептора (mCPP hydrochloride) была незначительной и разнонаправленной и достоверно не отличалась от контроля (рис.1). Корреляция результатов исследования по агонисту 5-НТ2 рецепторов с клиническими и инструментальными данными не выявлена.

Положительный инотропный эффект на введение агониста 5-НТ4 рецептора дозозависимо увеличивался и составил на концентрацию 0,1 мкмоль/л 63,4±16,2% от исходной силы сокращения, 1 мкмоль/л - 140,6±28,3%, 10 мкмоль/л - 165,0±33,0%. Эгаг эффект с высокой степенью достоверности (р<0,001) отличался от контрольной группы (рис.1).

180

П"3

130

■ контроль □ 5-НТ2 Н5-НТ4

ц.

-20

I I.

0,1

концентрация, мкмоль/л

Рис.1. Изменение силы сокращения миокарда правого предсердия на введение агинистов 5-НТ2 и 5-НТ4 рецепторов. Примечание: * - достоверность различий с контролем р<0,001.

При анализе корреляционной взаимосвязи исследуемых величин с клиническими показателями выявлена высокая степень корреляции между размерами правого желудочка (ПЖ, мм) по данным эхокардиографии и реакцией силы сокращения миокарда (ДР,%) на введение агониста 5-НТ4 рецептора в дозах 1.0 и 10.0 мкмоль/л со значениями коэффициента корреляции (по Пирсону) 0.66 и 0.67 соответственно.

При сравнении двух выделенных групп: группы пациентов с ДМПП и ЧАДЛВ (1 группа) и группы с другими ВПС (2 группа) выявлены различия по результатам изменения силы сокращения на вводимые концентрации агониста 5-НГ4 рецепторов. У пациентов 1 группы отмечается последовательное дозозависимое увеличение силы сокращения на воздействие 5-тейюху1гур1атше: на концентрацию 0.1 мкмоль/л прирост составил 79,0±22,9%; при увеличении концентрации до 1.0 мкмоль/л прирост увеличился до 234,3±83,0%. Максимальный положительный инотропный эффект 297,0±99,4% выявлен на 5-теШохуйу^атте в концентрации 10.0 мкмоль/л. Во второй группе положительный инотропный эффект был выражен в меньшей степени, чем в первой, кроме того не отмечалось его дозозависимого увеличения. Прирост силы сокращения миокарда во второй группе на 5-тейохуПур1атте в концентрациях 0.1, 1.0 и 10.0 мкмоль/л составил соответственно 47,8±17,0%, 46,8±13,2% и 32,9±17,8%. Достоверные различия по результатам изменения силы сокращения миокарда между группами были выявлены на концентрации 1,0 и 10,0 мкмоль/л (рис. 2).

450,0 400,0 350,0 300,0

150,0 100,0 50,0 0,0

0,1 1,0 10,0 концентрация, мк моль/л

Рис.2. Реакция силы сокращения миокарда правого предсердия на агонист 5-НТ4 рецепторов у детей с диагнозами ДМ11П и ЧАДЛВ (1 группа) и детей с другими ВПС (2 группа). Примечание: * - достоверность различий между группами: один знак - р<0,01, два-р<0,001.

Таблица 1.

Влияние агониста 5-1ГГ4 рецепторов 5- метокситриптамииа на параметры инотропной функции сердца детей с врожденными пороками сердца_

Показатели Группы исходные 0.1 мкмоль/л 1 мкмоль/л 10 мкмоль/л

Скорость сокращения, г/с . . 1 группа 0.248±0.095 0.433 Ю.097 0.656±0.104»*л 0.852*0,116"*л

2 группа 0.289±0.065 0.355±0.076 0.380±0.084 0.366±0.091

Скорость расслабления, г/с ; 1 группа 0.1 ЗШ), 029 0.29 Ь 0.048 0.26Ш.049* ' 0.305±0.063*Л

2 группа 0.148±0.034 0.188^-0.032 0.198±0.049 0.18&НШ9

Общее время сокращения, с I группа 0.96!±0.П2 0.852±0.075 ; 0.882- 0.064 0.92310.057

2группа 0.84Ш.106 0.859±0.150 0.790±0.162 0.863±0.151

-1 группа -2 группа

Примечание: * - достоверность различий по сравнению с исходными показателями, л -достоверность различий между группами (один знак - р<0,05; два знака - р<0,01; три знака -р<0,001).

При сравнении инотропной функции миокарда пациентов исследуемых групп на введение агониста 5-НТ4 рецепторов выявлено достоверное увеличение скорости сокращения и скорости расслабления миокарда пациентов первой группы в сравнении со второй группой и с исходными показателями на вводимые концентрации агониста 1,0 и 10,0 мкмоль/л.

Достоверных различий по изменению общего времени сокращения между группами и в сравнении с исходными показателями не выявлено (таблица 1).

2. Иммуногистохимическое исследование наличия белков 5-НТ2в, 5-НТ4 рецепторов и мембранного переносчика серотонина в миокарде правого предсердия детей с ВПС

Проведенное иммуногистохимическое исследование препаратов миокарда правого предсердия пациентов с ВПС показало присутствие белков 5-НТ4 рецепторов и переносчика серотонина во всех исследуемых препаратах. Прокрашивание на белок 5-НТ4 рецептора распределено равномерно по саркоплазме с ослаблением в околоядерной зоне. Наиболее интенсивное окрашивание выявлено на белок транспортера серотонина, прокрашивание распределено равномерно по кардном нош т-. Выявлено наличие белка 5-НТ2в рецептора в саркоплазме кардиомиоцитов с усилением прокрашивания на ядрах. Присутствие белка 5-НТ2в рецептора определено во всех препаратах, кроме одного.

Белок 5-НТ2в рецептора отсутствует в препарате миокарда правого предсердия ребенка с грубым сочетанным ВПС, недоношенностью, гипотрофией III степени, гипертензионно-гцдроцефальным синдромом и грубыми генетическими изменениями (синдром Холта -Орама). Миокард этого пациента также отличается снижением прокрашивания на белок 5-НТ4 рецептора, с сохраненным хорошим прокрашиванием на белок переносчика серотонина.

Таким образом, анализ результатов определения влияния агониста 5-НТ2 рецепторов на сократительную функцию миокарда показал, что, несмотря на наличие белка 5-НТ2в рецептора в миокарде правого предсердия детей с ВПС, показанную иммуногистохимическим методом, агонист 5-НТ2 рецептора не оказывает значимого влияния на сократительную способность миокарда. Выявленное наличие белка 5-НТ2в рецептора в миокарде без влияния на его сократительную способность при стимуляции 5-НТ2 рецепторов соответствующим агонистом, предрасполагает согласиться с мнением Nebigil et all., (2001, 2003) о морфогенетической роли 5НТ2в рецепторов. Серотонин через 5НТ2в рецептор регулирует дифференцировку и пролиферацию в развивающемся сердце (Nebigil et all., 2001). Выявленный нами случай с отсутствием белка 5-НТ2в рецепторов в миокарде правого предсердия, который клинически характеризовался наличием грубого сочеганного порока сердца и других грубых генетических уродств, также располагает в пользу этой гипотезы.

Анализ результатов определения влияния агонистов 5-НТ4 рецепторов на сократительную функцию миокарда выявил положительный инотропный эффект агониста в 95% случаях у детей с ВПС. Положительный инотропный эффект агонистов 5-1ГГ4 рецепторов описан ранее в экспериментах на животных и человеке (Нигматуллина и др., 2003;

Кашпапп с! а!., 2003). В нашем исследовании выявлена высокая степень корреляции между размерами правого желудочка (по данным эхокардиографии) и изменениями силы сокращения миокарда на введение агониста 5-НТ4 рецепторов. Размер полости правого желудочка определяется объемом крови, притекающим из правого предсердия, косвенно характеризует гемодинамическую нагрузку на миокард правого предсердия, который явился материалом нашего исследования. Увеличение активности 5-НТ4 рецепторов миокарда правого предсердия на увеличение нагрузки на миокард показано и при сравнении двух групп пациентов с различной нагрузкой на правое предсердие. Таким образом, результат данного исследования доказывает наличие прямо пропорциональной зависимости между инотропной реакцией миокарда на агонист 5-НТ4 рецепторов и объемной нагрузкой на правое предсердие, что дает повод предполагать участие серотонинэршческой системы в компенсаторных механизмах миокарда на увеличение нагрузки в виде улучшения его инотропной функции через 5-НГ4 рецепторы.

Значительный положительный инотропный эффект на введение 5-НТ4 агониста свидетельствует о значимости влияния серотонинэргической системы в регуляции инотропной функции миокарда и ставит вопрос о возможности применения 5-НТ4 блокаторов и агонистов в клинике, по аналогии с применяемыми ()-адреиоблокаторами и инотропными препаратами.

3. Концентрация серотонина и его метаболита 5-ПГУК в плазме крови и тромбоцитах у

детей с ВПС

Повышенный уровень серотонина плазмы был выявлен только у пациентов 1 группы (ВПС с наличием ЛАГ) и составил 37,6±7,7 нмоль/л, что в 2,3 раза превышает показатели контрольной группы. В первой группе выявлена положительная корреляционная взаимосвязь с высокой степенью корреляции между концентрациями плазменного серотонина и возрастом пациентов с ЛАГ, со значениями коэффициента корреляции (по Пирсону) г=0.63, р<0,01. При построении регрессионной модели, характеризующей выявленную корреляционную взаимосвязь, оптимальным типом распределения наблюдаемой дисперсии явилось линейное распределение: 5-НТ = 25,4+3,5*Возраст, лет (рис.3, где Р-критерий Фишера, р - уровень значимости, И - коэффициент регрессии). Корреляция величин концентраций серотонина плазмы со степенью ЛАГ не отмечена

Рис. 3. Изменение концентрации серотоннна плазмы в зависимости от возраста у детей с ВПС, имеющих легочную артериальную гипертензию (Р=16.9, р=0.0043,11=0.63).

Концентрации плазменного серотонина у пациентов второй (ВПС без ЛАГ) и контрольной групп составили 18,5±3,0 и 16,4±2,6 нмоль/л соответственно и достоверно отличались от показателей первой группы (р<0,05) - рис.4.

5-НТ плазмы

С 30

"л

§ 25

£ 5 20

ВПС с ЛАГ ВПС без ЛАГ Котрольная группа

Рис.4. Концентрация серотонина в плазме кров« у детей с ВПС, имеющих ЛАГ, без ЛАГ и контрольной группы. Примечание: * - достоверность различий по сравнению с контрольной группой, А - с группой ВПС без ЛАГ; один знак - р<0,05.

Наиболее выраженные достоверные различия между группами отмечались по уровням плазменных концентраций 5-ГИУК - основного метаболита серотонина. У пациентов с ЛАГ концентрации 5-ГИУК плазмы были максимальными и отличались от показателей второй и контрольной группы (р<0,001). У детей с ВПС без ЛАГ' уровень 5-ГИУК плазмы был повышен относительно контрольной группы (р<0,05) (рис.5).

5-ГИУК плазмы

200 -180 160 140 £ 120 I ЮО -1 80 -ео

40 20 о -

ВПС с ЛАГ ВПС без ЛАГ Контрольная

Рис.5. Концентрация 5-ГИУК плазмы у детей с ВИС, имеющих ЛАГ, без ЛАГ и контрольной группы. Примечание: * - достоверность различий по сравнению с контрольной группой, л - с группой ВПС без ЛАГ; один знак - р<0,05, два - р<0,001.

260 240 220 200 180 с 160

| МО > 120 » 100 80 60 40 20 0

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 ДПА.%

Рис.6. Зависимость концентрации 5-ГИУК плазмы от систолического давления в легочной артерии в % от системного систолического артериального давления (F=135.9, р=0.0073, R=0.84).

При анализе взаимосвязи исследуемых величин с клиническими показателями выявлена высокая степень корреляции между концентрацией 5-ГИУК плазмы и степенью ЛАГ со значениями коэффициента корреляции (по Пирсону) г=0.84. Построена регрессионная модель, характеризующая выявленную корреляционную взаимосвязь. Оптимальным типом распределения наблюдаемой дисперсии, в данном случае, явилось полиномиальное распределение: 5-ГИУК = 4,8*ДЛА%-0,027*ДЛА%2-45,9 (рис.6, где Р-критерий Фишера, р -уровень значимости, Я - коэффициент регрессии).

При сравнении групп по показателям концентраций серотонина и 5-ГИУК в тромбоцитах достоверных различий не найдено.

Таким образом, выявленные повышенные концентрации 5-ГИУК плазмы у пациентов с легочной гипертензией, в несколько раз превышающие норму, которые отмечены даже при нормальных уровнях серотонина в плазме, свидетельствуют о наличии повышенного распада серотонина при данной патологии. Учитывая, что основным органом, метаболизирующим серотонин, является легкое, можно говорить о наличии при ЛАГ локально повышенных концентраций серотонина именно в сосудах легких, где под действием фермента моноамипоксидазы (МАО) серотонин превращается в 5-гидроксииндолуксусиую кислоту.

t 5-ГИУК

Периферически* аффекты ееротонима Пато морфологические признаки легочной гипертеиэии

Сосудистый спазм Мускулярнзация легочных артериол

Активация агрегации ■ тромбоцитов Тромбоз in situ

Стимуляция Пролиферации эндотелия ■ Пролиферация' интимы ^ легочных артерий

Рис.7. Патогенез ЛАГ при ВПС с позиции серотонннэргической регуляции.

Единственным на данный момент объяснением локального повышения концентрации серотонина в сосудистом русле легких при ВПС может быть наличие травмы повышенным гидростатическим давлением эластичных легочных артерий, генетически к нему не

приспособленных, которая запускает активацию агрегации тромбоцитов - основного депо серотонина. Серотонин, выделяемый при активации тромбоцитов, кроме прямого вазоконстрикторного эффекта обладает высоким митогенным действием, увеличивая пролиферацию эндотелиальных клеток, приводя к тем изменениям, которые мы наблюдаем патоморфологически. В пользу того, что первоначальной причиной развития ЛАГ при ВПС со значимыми лево-правыми шунтами является повышенное гидростатическое давление в легочных артериях, выступает регресс ЛАГ при своевременной радикальной коррекции ВПС и отсутствие выраженных признаков ЛАГ при ВПС со значимым стенозом легочной артерии. Таким образом, исходя из нашей гипотезы прогрессирования легочной гипертензии при ВПС с позиции серотонинэргической регуляции, единственным методом профилактики ЛАГ при ВПС является своевременная оперативная радикальная коррекция с нормализацией легочного кровотока. При сформированной ЛАГ, для исключения смертности в ранний послеоперационный период от криза легочной гипертензии, оперативное лечение должно проводиться в два этапа: первый - ограничение легочного кровотока оперативным сужением ствола легочной артерии (операция Мюллера), второй - радикальная коррекция ВПС.

Выявленные повышенные концентрации серотонина в группе пациентов с ВПС, имеющих ЛАГ, положительно коррелирующие с возрастом пациентов, свидетельствуют об ухудшении метаболизирующей функции эпителия сосудов легких, связанным с давностью патологического процесса.

Таким образом, определение концентрации серотонина, а также концентрации 5-ГИУК плазмы крови, которая в нашем исследовании коррелирует со степенью ЛАГ, может быть использовано при оценке степени тяжести и эффективности терапии при синдроме легочной гипертензии.

Выдвинутая по результатам нашего исследования гипотеза прогрессирования легочной гипертензии при ВПС с позиции серотонинэргической регуляции наиболее гармонично может объяснить все патологические и патоморфологическне процессы при ЛАГ в отличие от других гипотез, существующих на данный момент. Доказывая значимую роль серотонинэргической системы в развитии легочной гипертензии, данная работа является стимулом продолжения исследований в данном направлении с целью внедрения в лечебную практику препаратов из группы блокаторов серотониновых рецепторов для лечения легочной артериальной гипертензии.

ВЫВОДЫ

1. Агонисг 5-ПТ4 рецепторов (5-methoxytryptamine) оказывает дозозависимый положительный инотропный эффект на миокард правого предсердия детей с ВПС. Этот эффект достоверно выше в группе детей, имеющих врожденный порок сердца с наличием лево-правого шунтирования крови на уровне предсердий, относительно группы с другими ВПС и положительно коррелирует с диастолическим размером полости правого желудочка.

2. Агонисг 5-НТ2 рецепторов (mCPP-hydrochloride) не оказывает значимого влияния на инотропную функцию миокарда правого предсердия детей с ВПС.

3. Миокард правого предсердия детей с ВПС иммунопознгивен на белки 5-НТ2в, 5-НТ4 рецепторов и мембранного переносчика серотонина.

4. Концентрация серотонина плазмы крови в группе детей с ВПС, имеющих легочную артериальную гипертензию, коррелирует с возрастом пациентов и достоверно выше, чем в группе детей с ВПС без легочной гипертензии и в группе детей без ВПС.

5. Концентрация 5-ГУИК плазмы крови у детей с ВПС повышена и коррелирует с величиной давления крови в легочной артерии, выраженного в процентах от системного артериального давления.

6. Тромбоцитарные концентрации серотонина и 5-ГУИК в группах детей с ВПС и без ВПС достоверно не различимы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 .Рекомендовать внедрение в практику кардиохирургииеских и кардиологических отделений определение концентрации метаболита серотонина 5-гидроксииндолуксусной кислоты в плазме крови с целью диагностики активности патологического процесса в легочных сосудах и для оценки эффективности терапии у пациентов с легочной гипергензией.

2.Терапию лекарственными препаратами с серогонигоргической активностью рекомендуется проводить под тщательным ЭКГ и Эхо-КГ контролем с целью исключения осложнений, связанных с побочными эффектами препаратов на сердечно-сосудистую систему.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1. Мустафин A.A. Влияние 5-НТ2 и 5-НТ4 агонистов серотонина на инотропную функцию миокарда человека./ A.A. Мустафин, P.P. Нигматуллина, Л.М. Миролюбов// Вестник молодых ученых. Физиология и медицина. - 2005. - №1. - С.79.

2. Мустафин A.A. Зависимость функциональной активности 5-НТ2, 5-НТ4 рецепторов от возраста и вида патологии при врожденных пороках сердца у детей / A.A. Мустафин, P.P.

Нигматуллина, JI.M. Миролюбов, C.K. Модестова, Г.Р. Галяугдинова // Сборник тезисов всероссийской научной конференции «Физиология сердца», посвященной 70-летию профессора Абзалова P.A. - Казань, 2005. - С.33-35.

3. Мустафин A.A. Функциональная активность 5-НТ2,5-НТ4 серотониновых рецепторов при врожденных пороках сердца у детей / A.A. Мустафин, P.P. Нигматуллина, Л.М. Миролюбов, С.К. Модестова, Г.Р. Галяутдинова // Сборник тезисов конференции, посвященной 70-летию института эволюционной физиологии. - С.-Петербург, 2006.-СЛ47-148.

4. Мустафин A.A. Функциональная активность 5-НТ2 и 5-НТ4 серотониновых рецепторов у детей с врожденными пороками сердца / A.A. Мустафин, P.P. Нигматуллина, Л.М. Миролюбов, С.К. Модестова, Г.Р. Галяутдинова // Сборник тезисов VII Международного славянского Конгресса по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца, IX Всероссийской конференции по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца, VII Всероссийского симпозиума «Диагностика и лечение аритмий у детей». - С.Петербург, 2006. - С.152.

5. Миролюбов Л.М. Операция Мюллера - первый этап хирургической коррекции сложных ВПС / Л.М. Миролюбов, A.A. Захаров, Ю.Б. Калиничева, A.A. Мустафин, Д.Ю. Петрушенко, Д.Р. Сабирова, И.Н. Нурмеев, Л.З. Бикташсва, А.Ю. Иванашкин // Бюллетень НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН «Сердечно-сосудистые заболевания». -Москва, 2006. - Том 7, №3. - С.17.

6. Миролюбов Л.М. Лечение критических ВПС у новорожденных / Л.М. Миролюбов, A.A. Захаров, Ю.Б. Калиничева, A.A. Мустафин, Д.Ю. Петрушенко, Д.Р. Сабирова, И.Н. Нурмеев, Л.З. Бнкгашева, А.Ю. Иванашкин, К.И. Насырова // Бюллетень НЦССХ им. А.Н. Бакулева PAMII «Сердечно-сосудистые заболевания». - Москва, 2006. - Том 7, №3. -С. 10.

7. Мустафин A.A. 5-НТ2 и 5-НТ4 серотониновые рецепторы в регуляции сократимости миокарда в постнатальном онтогенезе / A.A. Мустафин, P.P. Нигматуллина, В.Ф. Ахметзянов, А.Ф. Ахметзянова // Сборник тезисов конференции «Электрокарднология: история, достижения и перспективы развития. К 100-летию регистрации электрокардиограммы в России». - Казань, 2006. - С. 43-46.

8. Миролюбов Л.М. Операция Мюллера в лечении сложных врожденных пороков сердца / Л.М. Миролюбов, Ю.Б. Калиничева, A.A. Мустафин, Д.Ю. Петрушенко, Д.Р. Сабирова, Л.З. Бикташева, А.Ю. Иванашкин // Детские болезни сердца и сосудов. - 2006. - №1 -С.44-47.

9. Мустафин A.A. Функциональная активность 5-НТ4-рецепторов у детей с врожденными пороками сердца / A.A. Мустафин, P.P. Нигматуллина, Л.М. Миролюбов// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2006. - Том 142, №12. - С. 675-677.

10. Мустафин A.A. Роль серотонинэргической системы в формировании легочной артериальной гипертензни у детей с врожденными пороками сердца / A.A. Мустафин, P.P. Нигматуллина, Л.М. Миролюбов, B.C. Кудрин, П.М. Клодт // Клиническая физиология кровообращения.-2007. - №2-С.42-46.

11. Мустафин A.A. Легочная артериальная гипертензия при врожденных пороках сердца с позиции серотонинэргической регуляции / A.A. Мустафин, P.P. Нигматуллина, Л.М. Миролюбов, Ю.Б. Калиничева // Бюллетень НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН «Сердечно-сосудистые заболевания». - Москва, 2007. - Том 8, №6 - С. 11.

12. Нигматуллина P.P. 5-НТ2 и 5-НТ4 рецепторы в регуляции сократимости миокарда в постнатальном онтогенезе / P.P. Нигматуллина, A.A. Мустафин, В.Ф. Ахметзянов, М.В. Угрюмов // Сборник тезисов V Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем», посвященной 100-летию со дня рождения В.Н. Черниговского. - С.-Петербург, 2007. - С.219-220.

13. Нигматуллина P.P. Роль серотонинэргической системы в формировании легочной артериальной гипертензии у детей с врожденными пороками сердца / P.P. Нигматуллина,

A.A. Мустафин, Л.М. Миролюбов, B.C. Кудрин, П.М. Клодт // Сборник тезисов V Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем», посвященной 100-летию со дня рождения В.Н. Черниговского. - С.-Петербург, 2007. -С.220-221.

и. Нигматуллина P.P. Взаимосвязь адренергической и серотониновой регуляции инотропной функции сердца в постнатальном онтогенезе / P.P. Нигматуллина, A.A. Мустафин,

B.Ф.Ахметзянов, А.Ф. Ахметзянова, В.В. Кириллова, Л.М. Миролюбов, Р.К. Джордаикия // Сборник тезисов XX съезда физиологического общества им. И.П. Павлова. - Москва, 2007.- С.353.

15. Нигматуллина P.P. Механизмы регуляции сократимости миокарда серотониновыми рецепторами при сердечно-сосудистых заболеваниях / P.P. Нигматуллина, A.A. Мустафин, B.C. Кудрин, П.М. Клодт, В.В. Кириллова, Л.М. Миролюбов, Р.К. Джорджикия, E.H. Александрова // Сборник тезисов VI Сибирского физиологического съезда. -Барнаул,2008.- С.27.

16. Мустафин A.A. Особенности метаболизма серотонина при легочной артериальной гипертензии у детей с врожденными пороками сердца / A.A. Мустафин, P.P. Нигматуллина, Л.М. Миролюбов, Ю.Б. Калиничева // Сборник тезисов IV Всероссийской конференции «Актуальные вопросы кардиологии детского возраста: легочная гипертензия». - Москва, 2008. - С.32.

17. Мустафин A.A. Сократительная способность миокарда с позиции серотонинэргической регуляции / A.A. Мустафин, P.P. Нигматуллина, Л.М. Миролюбов, В.А. Абдульянов, А.Е. Хомяков, С.К. Модестова, Г.Р. Галяутдинова // Сборник тезисов региональной научно-практической конференции «Детская кардиология». - Казань, 2008. - С.41.

СОКРАЩЕНИЯ:

5-НТ - 5-11у(1гоху1гур1атте

5-ГИУК - 5-гидроксииндолуксусная кислота

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ВПС - врожденный порок сердца

ДЛА - давление в легочной артерии

ДМЖП - дефект межжелудочковой перегородки

ДМПП - дефект межпредсердной перегородки

ЛАГ - легочная артериальная гипертензия

МАО - моноаминоксидаза

ТБС-буфер - трис-солевой буфер

ЧАДЛВ - частичный аномальный дренаж легочных вен

ЭКГ - электрокардио!рафия

ЭхоКГ - эхокардиография

Подписано в печать 27.10.08 г. Форм. Бум. 60x80 1/8. Печ. л. 1.55. Тираж 120. Заказ №477. Отпечатано с готового оригинал - макета в ООО «Вестфалика» г. Казань, ул. Б. Красная, 67. Тел.: 250-30-42

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Мустафин, Альвар Альфредович

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Серотонинэргическая система.

1.1.1 Метаболизм серотонина в нейронах.

1.1.2. Функциональное значение серотонина в ЦНС.

1.1.3. Периферическая серотонинэргическая система.

1.1.4. Классификация серотониновых рецепторов

1.1.5. Транспортер серотонина.

1.1.6. Морфогенетический эффект серотонина в онтогенезе.

1.2 Эффекты серотонина на сердечно-сосудистую систему

1.2.1. Центральные эффекты серотонина на сердечно-сосудистую систему.

1.2.2. Периферические эффекты серотонина на сердечно-сосудистую систему.

1.3. Роль серотонина в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний

1.4 Врожденные пороки сердца

1.4.1 Эпидемиология и классификация ВПС.

1.4.2 Критические состояния при ВПС.

1.4.3 Легочная артериальная гипертензия.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ, ОБЪЕМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объект исследования

2.2. Метод исследования сократимости миокарда

2.3. Метод иммуногистохимии

2.4. Метод ВЭЖХ.

2.5. Статистический анализ

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Влияние агонистов 5-НТ2 и 5-НТ4 серотониновых рецепторов на инотропную функцию миокарда детей с ВПС

3.2. Иммуногистохимическое исследование наличия белков 5-НТ2в, 5-НТ4 рецепторов и SERT в миокарде правого предсердия детей с ВПС

3.3. Концентрация серотонина и его метаболита 5-ГИУК в плазме крови и тромбоцитах у детей с ВПС.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Глава 5. ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Концентрация серотонина в плазме крови и тромбоцитах, влияние агонистов 5-НТ2 и 5-НТ4 рецепторов на сократимость миокарда у детей с врожденными пороками сердца"

В последнее время большое внимание уделяется изучению серотонинэргической системы. Достаточно хорошо изучены молекулярные и клеточные механизмы синтеза серотонина [35,37], его метаболизма [2,53,75], рецепторного взаимодействия [5,31,39,42]. Широкий спектр эффектов серотонина объясняется наличием большого разнообразия серотониновых рецепторов [32,61]. Синтезированы препараты с терапевтическим эффектом, основанном на стимуляции и блоке 5-НТ рецепторов, которые нашли применение в основном в психиатрической практике, гастроэнтерологии и эндокринологии. Применение препаратов, прямо или косвенно влияющих на серотонинэргическую систему, имеет ряд осложнений со стороны сердечно-сосудистой системы, вплоть до фатальных, в частности, аритмии, первичная легочная и артериальная гипертензия, тромбоз, инфаркт миокарда [23,65,83,104]. Механизмы этих осложнений до конца не изучены.

Серотонинэргическая система является звеном патогенеза атеросклероза, артериальной и легочной гипертензии, ишемической болезни сердца, фибрилляции предсердий, сердечной недостаточности [65,66,74,94]. Влияние серотонинэргической системы на сердечно-сосудистую систему достаточно глубоко изучено на животных. Доказано влияние СЭС на эмбриогенез [82,83] и онтогенез [28,68] ССС, выявлено влияние серотонина на инотропную, хронотропную и люзитропную функцию миокарда [43,106,118], пролиферацию эндотелия сосудов [76,90,103], обнаружено участие серотонина в патогенезе поражения клапанов сердца [74]. Выявлена эффективность блокаторов 5-НТ2 рецепторов в предупреждении развития ЛАГ у крыс [47]. Внедрение в медицинскую практику серотонинэргических препаратов для терапии сердечно-сосудистых заболеваний тормозит недостаточное количество информации по реализации серотонинэргических эффектов у людей при различной сердечно-сосудистой патологии, не исследовано, насколько эти эффекты совпадают с данными, полученными при исследовании животных.

Врожденные пороки сердца занимают значительную часть в структуре врожденной патологии в виде самостоятельных изолированных нозологических форм, а также в сочетании с патологией других органов и систем. В 58,2% из всех случаев смерти от врожденных пороков развития, врожденные пороки сердца являются причиной смерти младенцев, намного опережая таковую от пороков развития желудочно-кишечного тракта и нервной системы (данные республиканского регистра МЗ РТ, 2002 г.). Частота рождаемости детей с ВПС составляет 6 - 8 на 1000 живорожденных. Декомпенсация кровообращения находится в прямой зависимости от сложности порока и может проявляться сразу же после рождения. Из 100 детей с ВПС в первую неделю умирают 14-22, в течение первого месяца жизни 19-30, и только 20-25 детей переживают рубеж возраста 1 года при естественном течении заболевания без медицинской помощи [19].

Основными причинами смерти при ВПС являются ССН и ЛАГ. В настоящее время терапия данных критических состояний и их профилактика не учитывает роль серотонинэргической системы в патогенетических процессах ССН и ЛАГ, не смотря на то, что эта роль значительна, а в некоторых моментах может быть даже определяющей. Настоящая работа посвящена исследованию роли серотонинэргической системы в процессе формирования ЛАГ у детей с ВПС и изучению влияния агонистов серотонина на инотропную функцию миокарда человека, и является очередным шагом к началу использования агонистов и антагонистов серотониновых рецепторов в терапии сердечной недостаточности, артериальной и легочной гипертензии.

Цель и задачи исследования

Целью исследования явилось изучение влияния агонистов 5-НТ2, 5-НТ4 рецепторов на сократимость миокарда, определение концентраций серотонина и его метаболита 5-ГИУК в плазме крови и тромбоцитах у детей с врожденными пороками сердца. Задачи:

3. Определение концентраций серотонина и его метаболита 5-ГИУК в плазме крови и тромбоцитах у детей с врожденными пороками сердца.

Объект исследования

Объектом исследования явились 99 детей в возрасте от 2 месяцев до 17 лет, из них 81 пациент с различными врожденными пороками сердца и 18 детей без ВПС (контрольная группа).

Методы исследования

Для получения результатов исследования и их обработки были использованы следующие методы: метод определения сократимости миокарда, взятого во время операций на сердце с искусственным кровообращением; выявление белков 5-НТ2в, 5-НТ4 рецепторов и мембранного переносчика серотонина в препаратах миокарда иммуногистохимическим методом; определение концентрации серотонина и его метаболитов в плазме крови и тромбоцитах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии; статистический метод.

Научная новизна полученных результатов

Впервые в мировой практике комплексное исследование влияния агонистов 5-НТ2, 5-НТ4 рецепторов на миокард, с параллельным иммуногистохимическим подтверждением наличия этих рецепторов, определение плазменного и тромбоцитарного содержания серотонина и его метаболита 5-ГИУК проводилось на контингенте пациентов с ВПС в возрасте от 2 месяцев до 17 лет. На основе анализа клинического материала и лабораторных показателей данного возрастного контингента прослежена реакция серотонинэргической системы на патологию сердечно-сосудистой системы, начиная с формирования адаптационных процессов и до появления признаков декомпенсации.

Впервые выявлена связь между гемодинамической нагрузкой на правое предсердие и инотропной реакцией миокарда правого предсердия на агонист 5-НТ4 рецепторов у детей с ВПС.

Практическая значимость полученных результатов

Полученные данные позволяют более глубоко понять важную роль серотонинэргической системы при формировании таких патологических состояний как сердечная недостаточность, гипертрофия миокарда, легочная гипертензия, предсердная аритмия у детей с ВПС.

Выявленный значимый положительный инотропный эффект агониста 5-НТ4 рецепторов, свидетельствует о значимости влияния серотонинэргической системы в регуляции инотропной функции миокарда и предполагает возможность применения 5-НТ4 блокаторов и агонистов в клинике, по аналогии с применяемыми Р-блокаторами и инотропными препаратами.

У детей с ДМПП выявлена повышенная инотропная реакция миокарда правого предсердия на агонист 5-НТ4 рецепторов, которая может объяснить частую встречаемость предсердных аритмий при этом ВПС. Полученные результаты дают основание к рассмотрению возможности применения блокаторов 5-НТ4 рецепторов при антиаритмической терапии.

Выявленные повышенные концентрации серотонина и его метаболита 5-ГИУК у пациентов с ЛАГ отражает активное участие серотонинэргической системы в патогенезе ЛАГ у детей с ВПС, что дает основание для продолжения исследований в этом направлении с целью определения возможности применения блокаторов рецепторов серотонина при лечении и для профилактики развития легочной артериальной гипертензии у детей с ВПС.

Результаты диссертационного исследования используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении семинаров на кафедрах нормальной физиологии и госпитальной педиатрии с курсом постдипломного образования и поликлинической педиатрии Казанского государственного медицинского университета.

В кардиохирургическом отделении ДРКБ МЗ РТ на основе проведенных исследований, отраженных в диссертационной работе, увеличены показания к проведению двухэтапной коррекции врожденных пороков сердца, осложненных легочной гипертензией, что способствовало снижению послеоперационной смертности от криза легочной гипертензии с 6 случаев в 2006 году до их отсутствия в 2007-2008 годах.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

Личный вклад соискателя

Планирование, постановка цели и задач исследования, подбор и анализ литературы, организация забора исследуемого материала (препаратов миокарда и крови), проведение экспериментов по определению сократимости миокарда, их компьютерная обработка, иммуногистохимические исследования, определение концентраций серотонина и его метаболита методом ВЭЖХ, создание базы данных проводились непосредственно соискателем. Все результаты исследований получены, статистически обработаны и проанализированы диссертантом лично. Научные положения и выводы диссертации базируются на результатах собственных исследований автора.

Результаты исследования отражены в 17-ти научных работах, в том числе 3 работы опубликованы в ведущих научных рецензируемых журналах, определенных высшей аттестационной комиссией. Общий объем публикаций составляет 2,0 условно печатных листа, в том числе авторский вклад 1,2 условно печатных листа.

Сведения об апробации результатов диссертации

Основные положения работы доложены на Всероссийской научной конференции "Физиология сердца", посвященной 70-летию профессора Абзалова Р.А. (Казань, 2005); конференции, посвященной 70-летию института эволюционной физиологии (Санкт-Петербург, 2006); VII Международном славянском Конгрессе по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца, IX Всероссийской конференции по электростимуляции и клинической электрофизиологии сердца, VII Всероссийском симпозиуме "Диагностика и лечение аритмий у детей" (Санкт-Петербург, 2006); конференции «Электрокардиология: история, достижения и перспективы развития» к 100-летию регистрации электрокардиограммы в России (Казань, 2006); XIII Всероссийском съезде сердечно-сосудистых хирургов (Москва, 2007), V Всероссийской конференции «Механизмы функционирования висцеральных систем»(С.-Петербург, 2007), XX съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Москва, 2007), IV Всероссийской телеконференции «Актуальные вопросы кардиологии детского возраста: легочная гипертензия» (Москва, 2008), VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), региональной научно-практической конференции «Детская кардиология» (Казань, 2008).

Структура диссертации, её объем

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 118 источников, из которых 19 отечественных. Работа изложена на 101 странице машинописного текста, иллюстрирована 27 рисунками, 6 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Мустафин, Альвар Альфредович

ВЫВОДЫ

1.Агонист 5-НТ4 рецепторов (5-methoxytryptamine) оказывает дозозависимый положительный инотропный эффект на миокард правого предсердия детей с ВПС. Этот эффект достоверно выше в группе детей, имеющих врожденный порок сердца с наличием лево-правого шунтирования крови на уровне предсердий, относительно группы с другими ВПС и положительно коррелирует с диастолическим размером полости правого желудочка.

2. Агонист 5-НТ2 рецепторов (mCPP-hydrochloride) не оказывает значимого влияния на инотропную функцию миокарда правого предсердия детей с ВПС.

6. Тромбоцитарные концентрации серотонина и 5-ГУИК в группах детей с ВПС и без ВПС достоверно не различимы.

Практические рекомендации

1 .Рекомендовать внедрение в практику кардиохирургических и кардиологических отделений определение концентрации метаболита серотонина 5-гидроксииндолуксусной кислоты в плазме крови с целью диагностики активности патологического процесса в легочных сосудах и для оценки эффективности терапии у пациентов с легочной гипертензией.

2.Терапию лекарственными препаратами с серотонинэргической активностью рекомендуется проводить под тщательным ЭКГ и Эхо-КГ контролем с целью исключения осложнений, связанных с побочными эффектами препаратов на сердечно-сосудистую систему.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Мустафин, Альвар Альфредович, Казань

1. Белоусов, Ю.Б. Клиническая фармакология. Руководство для врачей / Ю.Б. Белоусов, B.C. Моисеев, В.К. Лепахин.—М., 1992.—350 с.

2. Билич, И. Л. Ацетилхолин и серотонин в норме и патологии желудочно-кишечного тракта / И.Л. Билич, Х.С. Хамитов.—Казань: Тат. кн. изд-во, 1977.—142 с.

3. Гайнутдинов, Х.Л. Механизмы памяти. Учебное пособие для студентов педагогических университетов / Х.Л. Гайнутдинов, Т.Х. Гайнутдинова.—Казань, 2002.—83 с.

4. Горбачевский, С.В. Причины и темпы развития легочно-сосудистой болезни при функционально единственном желудочке / С.В. Горбачевский, А.А. Шмальц, А.И. Горчакова // Детские болезни сердца и сосудов.—2006.—№ 4.—С.44—50.

5. Клеточно-молекулярные механизмы функционирования и регуляции сердца / Нигматуллина P.P., Земскова С.Н., Зефиров А.Л., Смирнов А.В.—Казань, 2004.—С.67—85.

6. Маевский, А.А. Дисфункция диффузной нейроэндокринной системы как один из возможных патогенетических механизмов бронхиальной астмы: обзор. / А.А. Маевский // Врачебное дело.—1992.—№ 5.—С.9—11.

7. Мартынюк, Т.В. Современные подходы к медикаментозному лечению легочной гипертензии / Т.В. Мартынюк, И.Д. Коносова, И.Е. Чазова // Consilium medicum: журнал доказательной медицины для практикующих врачей.—2003—Т. 5, № 5.—С.293—300.

8. Писарев, А.А. APUD — система и перспективы использования нейропептидов в клинике: обзор литературы / А.А. Писарев, Л.М. Киричек // Врачебное дело.—1990.—№ 10.—С.69—75.

9. Ройхлин, Н.Т. APUD—система и гормональные основы жизнедеятельности желудочно-кишечного тракта / Н.Т. Ройхлин, И.М.

10. Кветной, Т.М. Соломатина // Советская медицина.—1983.—№ 6.— С.53—59.

11. Роль кардиолога в диагностике врожденных пороков сердца и определении оптимальных сроков их лечения/ И.В. Василевская, Т.М. Подашевская, М.П. Чернова и др. // Детские болезни сердца и сосудов,—2004.—№ 1.—С.34—39.

12. Сергеев, П.В. Рецепторы физиологически активных веществ / П.В. Сергеев, H.JL Шимановский.—М., 1987.—396 с.

13. Сергеев, П.В. Рецепторы физиологически активных веществ / П.В. Сергеев, А.А. Духанин, Н.Л. Шимановский // Бюллетень экспертной биологии и медицины.—1995.—№ 10.—С.342—348.

14. Серотониновая регуляция функций сердца в постнатальном онтогенезе крыс / P.P. Нигматуллина, В.Ф. Ахметзянов, Д.И. Насырова, А.Ф. Ахметзянова // Морфологические ведомости.—2004.-—№ 1/2.—С.72-— 73.

15. Францев, В.И. Хирургическое лечение врожденных пороков сердца у детей первого года жизни / В.И. Францев, Е.В. Безменова.—М.: Медицина, 1976.—126 с.

16. Черняев, А.Л. Патогенез и патологическая анатомия первичной легочной гипертонии / А.Л. Черняев, М.В.Самсонова // Болезни сердца и сосудов.—2006.—Т. 1, № 1.—С. 10—15.

17. Шарыкин, А.С. Неотложная помощь новорожденным с врожденными пороками сердца /А.С. Шарыкин.—М., 2000.

18. Шарыкин, А.С. Неотложная тактика лечения при транспозиции аорты и легочной артерии у новорожденных / А.С. Шарыкин, В.Н. Ильин, Г.В.

19. Лобачева и др. // Российский вестник перинатологии и педиатрии.— 1997.—№ 4.—С.5—14.

20. Шарыкин, А.С. Операции при ВПС у больных в возрасте до 3 месяцев / А.С. Шарыкин, В.В. Алексии Месхишвили // Кардиология.—1989.—Т. 29, № 3.—С.8—13.

21. A useful test for suspected pulmonary embolism / A. Moran, C. Velasco, M.L. Martin, L. San-Roman // J. auton. pharmacol.—1994.—Vol. 14, № 4.— P.307—316.

22. Age-dependent differential responses of monoaminergic systems to high doses of methamphetamine / C.M. Villalon, M.O. den Boer, J.P. Helligers et al. // Fundam. and clinic, pharmacol.—1991.—Vol. 5, № 5.—P.417.

23. Ahn, AH. Tissue injury regulates serotonin ID receptor expression: implications for the control of migraine and inflammatory pain / A.H. Ahn, A.I. Basbaum // J. neurosci.—2006.—Vol. 26, № 32.—P.8332—8338.

24. Aminorex, fenfluramine, and chlorphentermine are serotonin transporter substrates. Implications for primary pulmonary hypertension / R.B. Rothman, M.A. Ayestas, C.M. Dersch et al. // Circulation.—1999.—Vol. 100, № 8.— P.869—875.

25. Atrial and pulmonary endothelin mRNA is increased in a canine model of chronic low cardiac output / C.M. Wei, A.L. Clavell, J.C. Burnett et al. // Nature.—1995.—Vol. 374,—P.542—546.

26. Bing, R.J. Congenital heart disease. An introduction and classification / R.J. Bing, //Am j. med.—1952.—№ 12.—P.77—96.

27. Bruns, D. A fast activating presynaptic reuptake current during serotonergic transmission in identified neurons of Hirudo / D. Bruns, F. Engert, H.D. Lux // . Neuron.—1993.—Vol. 10, № 4.—P.559—572.

28. Carlberg, С. Serotonin 5HT1 receptors / С. Carlberg, I. Wiesenberg // J. pineal res.—1995.—Vol. 18.—P.171—178.

29. Central serotonin receptors / M. Hamon, S. Bourgoin, S. Mestikawy, C. Goetz // Handbook of Neurochemisty.—1990.—Vol. 6.—P. 107—143.

30. Choi, D.S. Immunohistochemical localisation of the serotonin 5-HT2B receptor in mouse gut, cardiovascular system, and brain / D.S. Choi, L. Maroteaux // FEBS lett.—1996.—Vol. 391, № 1-2.—P.45—51.

31. Classification of receptors for serotonin / N. Adham, H.T. Kao, L.E. Schercter et al. // Proc. natl. acad. sci.—USA.—1993.—Vol. 90, № 2,— P.408—412.

32. Cloning of another human serotonin receptor (5-HT1F) / P.H. Hutson, M.J. Biskerdice, S.M. Smith, D.N. Middlemiss D.N. // Eur. j. pharmacol.— 1990.—Vol. 183, № 5,.—P. 1967—1968.

33. Congenital cardiovascular malformations associated with chromosome abnormalities: an epidemiologic study / C. Ferencz, C.A. Neill, J.A. Boughman // J. pediatr.—1989.—Vol. 114, № 1,—P.79—86.

34. Cooper, D.M. Serotonin / D.M. Cooper, C.L. Bier-Laning, M.K. Halford // Mol.pharmacol.—1996.—Vol. 29, № 2.—P. 113—119.

35. Cote, F. Disruption of the nonneuronal tph 1 gene demonstrates the importance of peripheral serotonin in cardiac function / F. Cote, E. Thevenot, C. Fligny // Proc. natl. acad. sci. USA.—2004.—Vol. 100.—P. 13525— 13530.

36. Cote, F. Recent advances in understanding serotonin regulation of cardiovascular function / F. Cote, C. Fligny, Y. Fromes // Trends in mol. Med.—2004.—Vol. 10.—P.232—238.

37. Crabbe, J.C. Elevated alcohol consumption in null mutant mice lacking 5

38. HT1B serotonin receptors / J.C. Crabbe, D.J. Phillips, C.D. Wenger // Nat. genet.—1996.—Vol. 14.—P.98-101.

39. Cross-talk between 5-hydroxytryptamine receptors in a serotonergic cell line. Involvement of arachidonic acid metabolism / C. Tournois, V. Mutel, P. Manivet et al. //J. biol. chem.—1998.—Vol. 273.—P.l 7498—17503.

40. Derkach, V. Serotonin metabolism / V. Derkach, A. Surprenant, R.A. North // Nature.—1989.—Vol. 339, № 6.—P.706—709.

41. Development of the suprachiasmatic nucleus in rats during ontogenesis: serotonin-immunopositive fibers / M.V. Ugrumov, A.P. Popov, S.V. Vladimirov //Neuroscience—1994—Vol. 58.—P.161—165.

42. Effect of 5-HT4 receptor stimulation on the pacemaker current 1(f) in human isolated atrial myocytes / R. Pino, E. Cerbai, G. Calamai et al. // Cardiovasc. res.—1998.—Vol. 40, № 3.—P.516—522.

43. Egermayer, P. Role of serotonin in the pathogenesis of acute and chronic pulmonary hypertension / P. Egermayer, G.I. Town, A.J. Peacock // Thorax.—1999.—Vol 54.—P.161—168.

44. Ergonovine-induced myocardial ischemia: no role for serotonergic receptors? / A.V. Maricq, A.S. Peterson, A.J. Brake et al. // Sciens.— 1991.—Vol. 254, № 5030.—P.333—340.

45. Etiology and morfogenesis of congenital cardiovascular disease / N.Y. Armonk, E.B. Clark, M. Nakazawa, A. Takao.—Futura, 1999.

46. Evidence for a control of plasma serotonin levels by 5-hydroxytryptamine (2B) receptors in mice / J. Callebert, J.M. Esteve, P. Herve et al. // J. Pharmacol exp ther.—2006.—Vol. 317, № 2.—P.724—731.

47. Evidence for an imipramine-sensitive serotonin transporter in human placental brush-border membranes / D.F. Balkovetz, C. Tiruppathi, F.H. Leibach et al. //J. biol. chem.—1989.—Vol. 264.—P.2195—2198.

48. Familial risks of congenital heart defect assessed in a population-based epidemiologic study / J.A. Boughman, K.A. Berg, J.A. Astemborski et al. // Am j. med genet.—1987.—№ 26.—P.839—849.

49. Freedom, R.M Neonatal heart disease / R.M. Freedom, L.N. Benson.— London; New York: Springer-Verlag, 1992.

50. Fu, L.V. Activated platelets contribute to stimulation of cardiac afferents during ischemia in cats: role of 5-HT3 receptors / L.V. Fu, J.S. Longhurst // Physiol.—2002.—Vol. 544.—P.897—912.

51. Genetic basis for altered vascular responses to ouabain and potassium-free solution in hypertension / J.H. Myers, C.A. Bruner, C.F. Sing et al. // Am. j. physiol.—1986.—Vol. 251.—P. 1276—1282.

52. Gillis, C.N. The fate of circulating amines within the pulmonary circulation / C.N. Gillis, B.R. Pitt //Annu rev physiol.—1982.—Vol. 44.—P.269—281.

53. Guidelines on diagnosis and treatment of pulmonary arterial hypertension / N. Galie, A. Torbicki, J. Barst et al. // Eur respir j.—2004.—Vol. 25.— P.2243—2278.

54. Hamon, M. 8ёгоШшпе. 5-hydroxytryptamine (5-НТ) / M. Hamon // Ed. j. epelbaum. Rueil-malmaison: laboratoires sandoz.—1992.—Vol. 23.—P.287-292.

55. Heart disease in infant, children and adolescents / Ed.G. Emmanouilides et al..—Baltimore, 1995.—320 p.

56. Hoffman, B.J. Cloning of a serotonin transporter affected by antidepressants / B.J. Hoffman, E. Mezey, M.J. Brownstein // Science.— 1999.—Vol. 254.—P.579—580.

57. Hosoda, Y. Pathology of pulmonary hypertension: a human and experimental study / Y. Hosoda //Pathol, int.—1994.—Vol. 44, № 4.— P.241—267.

58. Hoyer, D. A proposed new nomenclature for 5-HT receptors / D. Hoyer, J.T. Humphrey, P.P. Hartig // Trends pharmacol. sci.—1993.—Vol. 14.— P.233—236.

59. Hoyer, D. IUPHAR classification of receptors for 5-hydroxytryptamine (serotonin) / D. Hoyer, J.R. Fozard, P.R. Saxena // Pharmacol, rev.—1996.— Vol. 46,—P. 157—203.

60. Identification and role of serotonin 5-HT1A and 5-HT IB receptors in primary cultures of rat embryonic rostral raphe nucleus neurons / F. Hery, P. Boulenguez, A. Semont, et al. // J. neurochem.—1999.—Vol. 72, № 5.— P.1791—1801.

61. In vivo characterization of vasodilating muscarinic-reseptor subtypes in humans / T.A. Brunning, M.G. Hendriks, P.C. Chang, E.A. Kuypers // Circ. rec.—1994.—P.912—919.

62. Incidence, mortality and natural history / J.I. Hoffman, R.H. Anderson, E.A. Shinebourne et al..—Edinburgh, Scotland: Paediatric cardiology; Churchill Livingstoneio—1987.—P.3—14.

63. Increased plasma serotonin in primary pulmonary hypertension / P. Herve, J.M. Launay, M.L. Scrobohaci et al. // Am j. med.—1995.—Vol. 99, № 3.—P.249—254.

64. Kaumann, A.J. Do human atrial 5-HT4 receptors mediate arrhythmias? / A.J. Kaumann // Trends, pharmacol. sci.—1994.—Vol. 15, № 12.—P.451— 455.

65. Kirklin, J.W. Repair of ventricular septal defect in infancy / J.W. Kirklin, J.W. Du Shane // Pediatrics.—1961.—Vol. 27.—P.961.

66. Lauder, J.M. Neurotransmitters as growth regulatory signals: role of receptors and second messengers / J.M. Lauder // Trends neurosci.—1990.— Vol. 16.—P.233-240.

67. Leonhardt, S. A potent 5-hydroxytryptamine receptor (5-HT2A) antagonist / S. Leonhardt, D. Herrick, M. Titeler // J. neurochem.—1989.—Vol. 53.—№ 2.—P.465—471.

68. Linz, P. Serotonin 5HT3 receptors on mehanosensitive neurons with cardiac afferents / P. Linz, R. Veelken // Am. j. physiol. heart, circ. physiol.— 2002.—Vol. 282.—P.1828—1835.

69. Locally formed 5-hydroxytryptamine stimulates phosphate transport in cultured opossum kidney cells and in rat kidney / S. Mestikawy, A. Fargin, J .R. Raymond, H. Gozlan // Neurochem. rec.—1991.—Vol. 16, № 1.—P.I— 10.

70. Lokhandwala, M.F. Interaction between thromboxane A2 and 5-hydroxytryptamine receptor subtypes in human coronary arteries / M.F. Lokhandwala, S.S. Hegde // Am. j. med.—1991.—Vol. 90.—№ 5B.—P.25— 95.

71. Longhurst, J.S. Cardiac sympathetic afferent activation provoked by myocardial ischemia and reperfusion. Mechanisms and reflexes / J.S. Longhurst, S.C. Tjen-A-Looi, L.W. Fu // Ann. n.y. acad. sci.—2001.—Vol. 940.—P.74—95.

72. Long-term serotonin administration induces heart valve disease in rats / B.I. Gustafsson, K. Tommeras, I. Nordrum et al. // Circulation.—2005.— Vol. 111, № 12.—P.1517—1522.

73. Lung as reservoir for antidepressants in pharmacokinetic drug interactions / T. Suhara, Y. Sudo, K.Yoshida et al. // Lancet.—1998,—Vol. 351.— P.332—335.

74. Michel, P. Myoendothelial junctional complexes in postobstructive pulmonary vasculopathy: a quantitative electron microscopic study / P.

75. Michel, F. Ни, B.O. Meyrick // Exp lung res.—1995.—Vol. 21, № 3.— P.437-—452.

76. Molecular and physiological alterations in murine ventricular dysfunction / R.S. Ross, H.A. Rockman, S. Ono et al. // Proc. natl. acad. sci. USA.— 1994.—Vol. 91.—P.2694—2698.

77. Molecular cloning, expression and characterization of a bovine serotonin transporter / O.V. Mortensen, A.S. Kristensen, G. Rudnick, O. Wiborg // Brain res mol brain res.—1999.—Vol. 71, № 1.—P. 120—126.

78. Molecular cloning, functional expression and pharmacological characterization of a novel serotonin receptor (5-hydroxytryptamine2F) from rat stomach fundus / J.D. Kursar, D.L. Nelson, D.B. Wainscott et al. // Mol. Pharmacol.—1996.—Vol. 42.—P.549—557.

79. Moss, A.J. Heart Disease in Infant, Children and Adolescents / A.J. Moss, F.H. Adams, G.C. Emmanouilidies.—Baltimore: Williams and Wilkins, 2001.

80. Murray, K.T. Nonantiarrhythmic drug therapy for atrial fibrillation / K.T.л

81. Murray, L.C. Mace, Z.Yang // Heart Rhythm.—2007.—№ 4,—P.88—90.

82. Nebigil, C.G. Ablation of serotonin 5-HT(2B) receptors in mice leads to abnormal cardiac structure and function / C.G. Nebigil, P. Hickel, N. Messaddeq // Circulation.—2001.—Vol. 103, № 24.—P.2973—2979.

83. Nebigil, C.G. Functional consequence of serotonin 5-HT2B receptor signaling in heart. Role of mitochondria in transition between hypertrophy and heart failure? / C.G. Nebigil, D. Pharm, L. Maroteaux // Circulation.— 2003.—Vol. 108.—P.902—908.

84. Nebigil, C.G. Serotonin 2B receptor is required for heart development / C.G. Nebigil, D.S. Choi, A. Dierich // Proc. natl. acad. sci. USA.—2000.— Vol. 97, № 17.—P.9508—9513.

85. Nora, J.J. Causes of congenital heart diseases: old and new modes, mechanisms, and models /J.J. Nora // Am heart j.—1993.—-Vol. 125, № 5.— P. 1409—1419.

86. Ouadid, H. Prenatal developmental expression of rat brain 5-HT1A receptor gene followed by PCR / H. Ouadid, J. Seguin, A. Dumuis // J. phisiol.—1991.—Vol. 435.—P.93.

87. Ouadid, H. Serotonin increases calcium current in human atrial myocytes via the newly described 5-hydroxytryptamine4 receptors / H. Ouadid, J. Seguin, A. Dumuis //Mol. pharmacol.—1992.—Vol. 41, № 2.—P.346—351.

88. Pakala, R. Effect of serotonin and thromboxane A2 on endothelial cell proliferation: effect of specific receptor antagonists / R. Pakala, C.R. Benedict //J. lab. clin. med.—1998.—Vol. 131.—P.527—537.

89. Pakala, R. Effect of serotonin, thromboxane A2, and specific antagonists on vascular smooth muscle cell proliferation / R. Pakala, J.T. Willerson, C.R. Benedict // Circ.—1997.—Vol. 96.—P.2280—2286.

90. Peroutka, S.J. Postnatal growth of the heart and its blood vessels / S.J. Peroutka, B.G. Mc. Carthy, X.M. Guan // Life sci.—1991.—Vol. 49, № 6,— P.406—418.

91. Plasma membrane transporters of serotonin / J.K. Leysen, F. Clerc, C.J.G. Nem-megees e al. // Neuropharmacology.—1984.—Vol. 23.—№ 12.— P.1493—1501.

92. Primary pulmonary hypertension in a patient with a familial platelet storage pool disease / P. Herve, L. Drouet, C. Dosquet // Circulation.—1990. —Vol. 89, № 1.—P.l 17—120.

93. Quantitative mRNA analysis of serotonin 5-HT4 receptor isoforms, calcium handling proteins and ion channels in human atrial fibrillation / F.1.zoualc'h, К. Steplewski, L. Sartiani et al. // Biochem biophys res commun.—2007.—Vol 357, № 1.—218—224.

94. Ramage, A.G. Central cardiovascular regulation and 5-hydroxytryptamine receptors / A.G. Ramage // Brain res. bull.—2001.—Vol. 56.—P.425—439.

95. Ramsey, I.S. Serotonin transporter function and pharmacology are sensitive to expression level: evidence for an endogenous regulatory factor / I.S. Ramsey, L.J. De Felice // J. biol chem.—2002.—Vol. 277, № 17.— P. 14475—14482.

96. Rudnick, G. Active transport of 5-hydroxytryptamine by plasma membrane vesicles isolated from human blood platelets / G. Rudnick // J. biol. chem.— 1977.—Vol. 252.—P.2170—2174.

97. Sakai, R.R. Intracerebro-ventricular administration of angiotensin type 1 (ATi) receptor anti-sense oligonucleotides attenuate thirst in the rat / R.R. Sakai, L.Y. Ma, S.J. Fluharty // Regul. pept.—1995.—Vol. 59.—P. 183—192.

98. Sanders-Bush, L. Sensitization of human atrial 5-HT4 receptors by chronic beta-blocker treatment / L. Sanders-Bush, J.A. Lynham, B. Bond // Circulation.—1995.—Vol. 92, № 9.—P.2526—2539.

99. Sarpogrelate, a 5-HT2 receptor blocker, may have a preconditioning-like effect in patients with coronary artery disease / E. Horibe, K. Nishigaki, S. Minatoguchi, H. Fujiwara // Circ. J.—2004.—Vol. 68, № 1.—P.68—72.

100. Schranz, D. Pulmonale Hypertension im Kindes- und Jugendalter / D. Schranz // Monatsschr kinder-heilkd.—2003.—Vol. 151.—P.424—441.

101. Selective Serotonin-Reuptake Inhibitors and Persistent Pulmonary Hypertension of the Newborn / J. Reefhuis, S.A. Rasmussen, J.M. Friedman et al. //Nengl j. med—2006—Vol. 354.—P.2188—2190.

102. Sequential segmental analisis of congenital heart disease / R.H. Anderson, A.E. Becker, R.M. Freedom et al. // Pediatr cardiol.—1984.—№ 5.—P.281.

103. Serotonin receptors: guardians of stable breathing / D.W. Richter, T. Manzke, B. Wilken, E. Ponimaskin // Trends mol. med.—2003.—Vol. 9.— P.542—548.

104. Stewart, D.J. Clinical relevance of endothelial dysfunction in cardiovascular disorders / D.J. Stewart // Agents actions suppl.—1995.—Vol. 45.—P.227—235.

105. Stimulation of serotonin transport by the cyclic GMP phosphodiesterase-5 inhibitor sildenafil / C.B. Zhu, W.A. Hewlett, S.H. Francis // Eur j. Pharmacol.—2004.—Vol. 504, № 1-2.—P. 1—6.

106. The 5-HT4 receptor: molecular cloning and pharmacological characterization of two splice variants / C. Gerald, N. Adham, H.T. Kao et al. //EMBOj.—1995.—Vol. 14, № 12.—P.2806—2815.

107. The 5-hydroxytryptamine2A receptor antagonist sarpogrelate hydrochloride inhibits acute platelet aggregation in injured endothelium / K. Houkin, N. Nakayama, T. Nonaka, I. Koyanagi // J. int med res.—2006.— Vol. 34, № 1.—P.65—72.

108. Toth, M. The 5'flanking region of the serotonin receptor gene directs brain specific expression in transgenic animals / M. Toth, D. Ding, T. Shenk // Brain res.—1994,—Vol. 27.—P.315-319.

109. Tschudi, M.R. Age and hypertension differently affect coronary contractions to endothelin-1, serotonin and angiotensins / M.R. Tschudi, D.F. Luscher, H.J. Ferner// Circulation.—1995.—Vol 91.—P.2415—2422.

110. Van Praagh, R: Terminology of congenital heart disease: glossary and commentary / R. Van Praagh // Circulation.—1977.—Vol 56.—P. 139.

111. Vascular structure in lung tissue obtained at biopsy correlated with pulmonary hemodynamics findings after repair of congenital heart defects / M. Rabinovitch, J.F. Keane, W.L. Norwood et al. // Circulation.—1984.— Vol. 69.—P.655.

112. Vikenes, К. Serotonin is associated with coronary artery disease and cardiac events / K. Vikenes, M. Farstad, J.E. Nordrehaug // Circulation.— 1999.—Vol. 100, № 5.—P.483—489.

113. Wenstein, K. Eating disorder and epilepsy in mice lacking 5-HT2c serotonin receptors / K. Wenstein, M.F. Dallman, D. Julius // Nature.— 1995.—Vol. 374.—P.542—546.

114. Yaksh, T.L. Pharmacology and mechanisms of opioid analgesic activity / T.L. Yaksh // Acta anaesthesion scand.—1997.—Vol. 41.—№ 1.—P.94— 111.

115. Yusuf, S. 5-hydroxytryptamine and atrial fibrillation: how significant is this piece in the puzzle? / S. Yusuf, N. Al-Saady, A.J. Camm // J. cardiovasc. electrophysiol—2003 .—Vol. 14.—P.209—214.

Информация о работе

Мустафин, Альвар Альфредович
кандидата медицинских наук
Казань, 2008
ВАК 03.00.13

Диссертация

Концентрация серотонина в плазме крови и тромбоцитах, влияние агонистов 5-НТ2 и 5-НТ4 рецепторов на сократимость миокарда у детей с врожденными пороками сердца - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы