Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Консервирующий комплекс вспомогательных веществ для нестерильных детских лекарственных форм

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Консервирующий комплекс вспомогательных веществ для нестерильных детских лекарственных форм"

харківськії:; НАУКот-досхичк!: інститут мікробіології

ТА ІМУНОЛОГІЇ ім. і.і. 1«ЬЧН±КОЕА Г і 0 0/1 На правах рукопису

( ' і І ’ * ]

" КОБЗАР ГАННА ІВАНІВНА

УДК 579.6:615.1 : 615.322:616-053.2

консерелж: КОШШКС ІШОШШХ РЕЧОВИН дш нестерильних дагят лікарських &ом

03.00.07 - мікробіологія

' АВТОРЕФЕРАТ

дисертації на здобуття вченого ступеня кандидата біологічних наук

Харків - 1994

Робота ЕЕконана у Державної.}' науковому центрі ^ •

лікарських засобів /¿ЗШіЗ/

Паукоьаіі керівник - ькадейк ЬІігснародної академії

' кої'Ш'а.еркпх наук і систег.1.,

■ заслулешгіі робітник вищої школи

України, професор А.Л.Цнганеяко

Науковій консультант - кандидат біологічних наук. .

Т.Д.Скубко -

Ойідіі-яі опопентк: доктор уєднчних наук, процесор Б.Л.Кадтока

доктор біологічно. наук, процесор

і.Ь.Руденко

"рові дна органі затія - Українське ¿арі,.адевтіічна

с^С&ДВУіІЯ.

Захист дисертації відбудеться О'-7<?¡4£-1354 р.

0 /годині яе засіданні спеціалізованої Вченої . Раді: л 08Є.С7.0І лри Харківському наукоЕо-дослідкої..у інституті дікробі&логії та імунології іь. І.І.’.Ізчнікова за адресов: ЗГ0С57, к. Харків, вул. Душкінська, 14.

З дисертацією кожна ознайомитись у бібліотеці інституту.

Автореферат розісланий

Вчений секретар спеціалізованої ■ ;

Вченої Ради, хандвдат біологічних наук

С.І.Чупринова

Актуальність проблет. Лікарська препараті:, до яких не ставляться вимори Фармакопеї по стерильності, ¡».айхе завади заорі днені мікроорганізмами /Р.Манахилов, Р.Григорова, IS84; H.Suufartii, I9i.:b;

іі. tiurnumann, ii.iiussern, 1968; И.КЛарасова, 1969; А.С,Тихонова, ¿.И.Дмитрова, 1969; Т.А.Иуб и др., I9SI /. Лри цьоку ыкроси р процесі життєдіяльності здатні руйнувати молекули лікарських і ДОПОМІЖНИХ реЧОЕИН І подуть обумовити ЗІ.'ІНУ ХІІ/ІЧНОГО складу готової лікарської форми / J. Williams, £.U. tlonnett, 1973; L.U. 1 deveriJgc, 1975; И.С.Егоров г др., 1979; Т.Л.Скубко я др., 1590/. В ряді країн зареєстровані випадки тяжких інфекційних захворювань, які виникли в результаті використання лікарських препаратів, контакт нованих уковяопатогеннкми і патогенними мікроорганізмами /Т.С. Кондратьева, Л.А.Иванова, 1976; Г.Ояьлченова, Г.Генчева, І9Б6;

. н. Scie/ynska, 1986; Е.В.Бухарцева и др., 1993 /.

Основними джерелами контамінації мікроорганізмами нестериль-них лікарських форм є допоміжні речовини і лікарські субстанції рослинного і тваринного походження, в яких рівень мікроорганізмів інколи досягає 1.10^ колонівитворюючих одиниць / КУО / в І г / И.К.Дімитрова, 1986; К.А.Каграманова и др., 1991 /.

З кетою підвищення якості лікарських препаратів в Державну фармакопею XI вид., вил, 2, цо діє на Україні, введені вимоги щодо допустимого рівня мікроорганізмів в яестерильних лікарській формах. Б І г/кл/ препаратів для внутрішнього використання допускається не більше І.ІО3 ІСУО бактерій і І.ІО^КУО грибів /плісеневій і дрівдкевих сумарно/. Не допускається наявність бактерій

сімейства EnteroBacteriacsae, Pseudomonas aeruginosa і Staphylococcus aureus.

Проблема вибору допоміжних речовин, здатних забезпечити мікробіологічну Оезіїек) ситової дитичої лікарської форш і задовольнити її ПО технологічним, ХІИЧНИМ, біологічним І І ЩПЗ.Ї вимогам,

актуальна і вельми складна.

Сзред коасерьантів, «о дозеолєні 'дуй медичного застосування, отлыгг сть ширились або не є;зхті!.; нк-'іі в концентраціях, які вако-рис-гов; иться в виробництві дитячих лікарських засобів для перо-рального впивання, аоо негативно впливали на їх смакові якості.

На.іоільїі раціональний *ля порорального вживання в дитя- . чі/. практиці шзная: рідкі лікарські І-орки з кормговаш&л сма-. ксьгл.и л костяки, ііри«;мнау замахом і привабливий. зовнішнім зиг-лядок. І.ікл, які не відповідають їда. вимогам, здатні негативно ' ■'¡.лищта' на лабільну психіку «атини і ышшкати не'тільки трід- • [¡ой;! під «ас вгавання, але іі ароавитя слайу терапевтичну дій / А.!.'..Котенко, 1982 /. • ■

¿ля коригування сі.аковнх якостей в дитячі лікарські препарати вводять .^укор рафінований. Але рідкі ¡ор(.:и ліків, в складі яки присутні , органічні компоненти, одночасно е хоро«а.. . середовищем для розвитку бактерій і грибів. Тоьу в складі таких препаратів потрібна наявність аротикікробншс допоміжних речовин,, здатних в процесі використання і зберігання забезпечити стійкість лікарської ^орки до біологічного руйнування. -Перспективною лікарською формой для дитячої практики е сухі гранули, із яках в клініці чи домашніх умовах для дітей еііготоеляють ^ о дяці суспензії. -

Співробітниками лабораторії технології дитячих лікарських . • засобів Державного наукового центру лікарських засобів проведений пошук нешкідлива допошхних речовин для виготовлення , гранул фламіну, флакуміну, калефлояу і силі бору з кориговани- ' т смаковш якостяш. Препарати пропоновані для лікування гастроентерологічних захворювань у дітей, із сухих гранул цих препараті з, розфасованих в стандартні банки з ырно» покіткою,

ЛІТ®,! для вливання виготовляють водяні суспензії В об’ємі

100 ьгл. '

Мета роботи і завдання дослідження. Метою роботи е теоретичне і практичне обгрунтування можливості використання комплексу допоміжних речовин, до складу якого входять пектин яблучний, кислота сорбінова", кислота лимонна і цукор рафінований як консерванта в виробництві несїерильЕих дитячих лікарських препа -раті в рослинного походження: гранул фламіну, флакуміну, калєф-лону і силі бор; .

Досягнення мети даної роботи реалізовано рішенням таких завдань: .

- вивчити рівень мікробної контамінації допоміжних речовин

і лікарських субстанцій; .

- вивчити протимікробну активність водяних суспензій пектину яблучного е концентраціях, які використовуються в вгроб -нидтві гранульованих лікарських препаратів для дітей;

- визначити яротішікробну активність пектину яблучного, кислоти сорбінової і кислоти лимонної відносно мікрофлори, що забруднює лікарські препарати флавоноїдної природа;

- вивчити протимікробну активність водяних суспензій комп-

лексу допоміжних речовин з- метою обгрунтування можливості використання його як консерванте дитячих ліків рослинного доход -ження; . ' .

- визначити вплив протимікробного комплексу допоміжних речовин на нормальну мікрофлору кишечника в акспершенті ;

- вивчити протимікробну активність водяних суспензій, виготовлених із гранул фламіну, флакуміяу, калефлону і силі бору, в виробництві яких використані інгредієнті* комплексу допоміжних речовин;

- дослідити в динаміці рівень мікробної контамінації су-

■ т 6 - . ■ ' -

; ' . . О , ..

хих гранул фламі ну, фдакуміну, калефлону і силі бору під час ix

виготовлення і на протязі терміну зберігання;

- вивчити рівень мікробної контамінації водяних суспензій, виготовленії із гранул фламіну, флакуміну, калефлону і силі бору, на протязі періоду використання /10 діб/ і визначити їх стійкість при різних температурних режимах зберігання.

Наткова новизна роботи. Вперше для виробництва лікарських препаратів флавоноїдної природи з коригованими смаковими якостями на основі нешкідливих природних речовин: пектину яблучного, кислоти сорбінової, кислоти лимонної і цукру рафінованого розроблено комплекс допоміжних речовин, який здатний забезпечити мікробіологічну безпеку сухих гранул фламіну , флакуміну, калефлону і салі бору і виготовлених із них водяних суспензій. . . ■

Виявлена наявність протимікробної активності в водяних суспензіях пектину яблучного в концентраціях, які вшсористо-вуються в виробництві дитячих лікарських форк, по відношенню до Staphylococcus aureus АТСС 6538 Р, Pseudomonas aeruginosa "Те-сакоа", Escherichia qoli М-17 і bacillus cereus АТСС 8035.

. Показана залежність рівня контамінації водяних суспензій флавоноїдного препарату від наявності в його складі пек-тину яблучного, кислоти лимонної і кислоти сорбінової.

Вивчена протимікробна активність воданих суспензій комплексу допоміжних речовин, показана її залежність від концентрації складових компонентів комплексу і мікробного навантаження, обгрунтована можливість використання комплексу допоміжних речовин як консерваата в нестеральних дитячих лікарсь. г.х формах. . .

Вивчена і доведена відсутність інгібіторного впливу протимікробних суспензій комплексу ДОПОМІЖНИХ; речовин на ттій-

генну мікрофлору кишечника в експерименті. При цьоку виявлено зменшення кількості дріжджів і плісеневих грпоі в в Лекалі я; товстого кишечника тварин і доведена залежність її и; концентрації сорбінової кислоти б водяних суспензіях.

Встано&дена наївність протимікробної активності водлних суспензій із гранул фламіну, fcaxiwuy, калеїиюяу і скмоорг відносно умовнопатогенних і патогенних ілг.роорганізьІЕ.

Практична дінність роботи. Консервуючий комплекс допоміжних речовин впроваджений у виробництво сухих гранул ^таніну, ,Т:ла-куміну, калефлону і силібору, пропонованих для лікування гастроентерологічних захворювань у дітей, ці лікарські формі контакі-новані незначною кількістю сапрофітних оактерій і плісеневих грибів, розвиток яких не відбуваються протягом ьстановленого для ліків терміну зберігання. Водяні суспензії, .виготовлені із гранул фламіну, флакуміну, кале|>лону і силі бору, стійкі до розвитку оактерій і грибів.

На підставі проведених дослідів і з метою випуску дитячих нестерильних лікарських препаратів високої якості встановлено допустиму кількість життєздатних мікроорганізмів /не більше 500 КУО/г бактерій і 50 КУО/г грибів / в су^хих гранула, фламіну, флакуміну, кале$лону і силібору.

Гранули флакукіну, кате^лону та силі бору пройшли клінічну апробацію згідно з вимога».® Фармакологічного коитету ПОЗ України по доклінічноку вивченню лікарських препаратів.

В позитивних відгуках, клініцистів особливий акцепт поставлений на зручності використання препаратів у вигляді еодянпх суспензій з коригованики смаковими якостями.

Гранули фламіну проходять стадію клінічного вивчення.

Консервуючий комплекс допоміжних речовин може бути ЕДКОр,':-станий при створенні соьих гранульованих лікарських засобів рослинного походження. •

- 8. - '

Зв'язок завдань досліджень з планом наукових робіт. Дисертаційну роботу виконано згідно з планом науково-дослідних робіт державного наукового центру лікарських засобів за постановою Каоінету Міністрів України від 8 жовтня 1992 року J* 573 "Upo розвиток медичної, ветеринарної та мікробіологічної промисловості, поліпшення забезпечення населення і потреб тваринництва лікарськими засобами, медичною і ветеринарною технікою", договору J¿ 811 "Проведення науково-дослідних робіт з мето® створення ноеих виробництв ін»вкцііших розчинів, медичних аерозолів, м’яких і дитячих ліків на 1993 рік" і теми ft 9 "Засоби для лікування шлунково-кишкових захворювань: про-тивиразкових, .жовчогінних і гепатозахисних".

Апробація роботи. Окремі штеріали дисертації докладені на Всесоюзній науковій конференції "Состояние и перспективи разработки, производства и использования вспомогательных веществ для изготовления лекарственных средств"/Харків, 1982/; на ІУ з’їзді фармацевтів Української PCP /Запоріжжя, 1Э84 /; на конференції молодих вчених Всесоюзного науково-дослідного інституту хікії і технології лікарських засобів / Харків, 1986 /; на Другій республіканській конференції по медичній ботаніці / Київ, 1988 /; на Галузевій нараді "Основные направления снижения микробной обсеменеяности нестерильных лекарственных средств" / Лубни, 1989 /; на III з'їзді фармацевтів Туркменської PCP / Ашгабад, 1983 /; на науково-практичній конференції "Перспективы создания и производства лекарственных средств в Украине" / Одеса, 1993 /.

Пубді каці ї. По окремим положенням дисертаційної роботи опубліковано 7 наукових робіт, оформлені і представлені 01.12,1993р. /лист 'і 06/1553 / в Держпатент України матеріали заявки на винахід "Консервуючий комплекс допоміжних

І

■ - _ s -

рёчоЕИн й& нестерыьяш: дитячих лікарських фор»".

Стоуійгура і обсяг дисертації. Матері&ля дисертації вик* ладені на 130 сторінках машинописного тексту і складаються із ectjhv, огляду літератури, 3 глав власних досліджень, закінчення, висновків, бібліографічного показчика літератзря, який включає 129 вітчизняних і 63 іноземних джерел. Робота ілюстрована 17 таблицями та 7 малюнками.

-Основні положення. які виносяться на захист;

-- допоміжні речовинй: пектин яблучний, клслота сорбінова -'і Шслота лимонна в присутності цукру рафінованого е ефектив-’ййк консервуючим комплексом флавоноїдних нестерильяих лікарських препаратів, пропонованих для лікування гастроентерологічних захЕорнвань у дітей;

- комплекс допоміжная речовин проявляє яротіші кробну активність по відношенню до мкроорганізмі-в, наявність яких згідно вимог Лерзавної фармахопеї XI гад., вид. 2, фармакопей США, Німеччини, Великобританії і інших в готових лікарських формах не допускається або обмежується: staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Candida albicans і

Aspergillus niger.

. , . i*

- консервуючий комплекс допоміжних речовин в дослідах

in vivo не проявляє іягібіторного впливу на індигенну МІК- . рофяору кишечника тварин; ... •- ' .

- використання в фармацевтичні А промисловості консервуо-чого комплексу допоміжних речовин дозволяє одержати дуй дітей пероральні лікарські препарати, безпечні в інфекційному відношенні і відповідаючі вимогам щодо допустимого рівня конта-

■ ті нації мікроорганізмами.

-ГО- ' . . . . ■

ЗМІСТ РОБОТИ .

Матеріал» і метод досді дення. Об'єктом дослідів, в роботі є допоміжні речовини: пектин яблучний,, кислота сорбінова, кислота лимонна, цукор рафінований; лікарські субстанції:: фламін, флакушн, калефлон, силі бор; водяні суспензії дектязг яблучного; водяні суспензії комплексу допоміжних речовин;;сухі: гранула фламіну, флакумну, калефлону, силі бору і водяні суспэа*-зії, виготовлені із гранул шх препаратів. .

Дослідження рівня контамінації мікроорганізмами допо-. міжних речовин, лікарських субстанцій, сухих гранул препа-.. раті в і водяних суспензій проводили згідно з вимогами Дер-жавнох фариакопеї XI вод., вш. 2, розділу "Испытание на • . микробиологическую чяс??ту-. При цьому визначала загальне число КУО/ г/мд/ аеробних бактерій, дрідджевих і плі сенеьшс Грибів, а також наявність бактерій сімейства Enterobacteria-ceae, Pseuooraonas aeruginosa і Staphylococcus aureus..

При вивченні протимікробної активності водяних суспензій пектину яблучного, комплексу допоміжних речовин І ' лікарських препаратів використовували пропонованій фарма- . . копеями Німеччини /1888/, СЫА /1990/ і Великобританії / .• ’ /19Э1/ метод "штучного мікробного зараження" для вивчення протимікробної активності консервантів в перорашшх пре- ■ паратвх. ■ . . ' 1.

В роботі використовували гршпозитивні і грамнега;— ; • тивні бактерії, плісеневі і дріадкеподібні гриби,, одержав®;. ■ -в музеї патогенних бактерій Державного науково-дослідного ! інституту стандартизації і контролю кедичнях біодогічш.у. препаратів іи. !.А,Тарасевича Ы. Москва/ і науково-доtw.хд-ноку відділі глибоких мікозів О-Петербіргського ГКІУВ..АЛЯ

посіву застосовували / 18 - 24 / - годинні культури бактерії;, 48-годинні культури дріаджеподібюи. і б-дс&ові культури плі-

■ СЄНЄВИХ грибі Е.

Піл час проведення дослідів були використані кившгьні і діагностичні еєредовица виробництва лП "Аллергєн” н. Ставрополя і підприємства "Ьіолек" м. Харкова, пропоновані Державшою фарь-ахопее» П ввд.,.зип. 2 для кщілення і ідентифікації мікроорганізмів в лікарських засобах. .

Стерилізацію досліджуваних водяних суспензій проводили ішіхои прогрівання на протязі 3 діб по 15 хвилин кожної доби при температурі 70 °С /З.А.Метхіїева с др., 1974 /\

Стерильні водяні суспензії "зарагали" суспензіям*етнокультур і. витримували на протязі 20 діб при температурі йд 20 до 25 °С. ' -

Мікробне навантаження в годаних сусвензіях пехїійу яблучного становило від І.ІО3 до 2.І03 КУО/кл бактерій ї від Р 9

о.10 -до 6.10“ КУО/кл гриоів; в водяних суспензіях комплексу допог.:і:гних речовин - від 10 до 1.10^ КУО/шг бактерій і від 10 до 5.І03 КУО/мл грибів; в водяних суспензіях лікарських препаратів - від 5.І03 до І.ІО4 КУО/ші бактерій і бід 5.ІС2 до 1.10^ К70/мл грибів.

. Лосі ви есдяяих суспензій проводили негайно піеля "за- . раленая", через 15, ЗО хвилин, І, 2, 4, 8 і 24 години, 2, 4,

С, В, 10 і т.д. до ЗО діб по І мл на відповідні густі хітви-льяі середоЕіща в чаягквх Летрі, Дгя нейтралізації протимікробної дії сорбінової кислоти на мікроорганізми в -кивкльні серс-доеісцн доС&еллля тв:н-£0 в концентрації 1,0 % /С.З.Дєкисое?. и др., 1990/. Чайкг з весівами бактерій вятранугаиг пр-отягок 2446 годгн яри температурі від ЗО до 35 °С, грибів - 3-5 діб при тегаературі від 20 до 25 °С. По закінчені:! строку

іяк><5ації підраховували число колоні витворюючих одкшшь на яивільних середовищах в чаксах Яетрі, а при їх відсутності наявність бактерицидної і фунгіцидної дії зідтверсзф'вали аляхом посіву Ю «я водяних суспензій на здвильні середовища, пропоновані для контролю стерильності / тіогліколеве і рідке Сайуро / відповідно. Оскільки досліджувані водяні суспензії були виготовлені з використанням стерильної водопро-* еідяої вохи, то для контраш етергяьяу. вошароюдау кндг *заражаяа# суспензіями кояои^хь^'р. ■ ' -

Впечєекя кмсгу валяних суезеязій кокпжежсу дошшяши речовиа яз мікрофлорі' кизечншса проводили яа ЗО підростгг»-чо білих б«звородних щурятах обох статей масою від 45 до 58 г, віком 32 доби. Тварини с-улк розподілені на 3 групи щ> 10 в хояній; І - контроль; 2 і 3 групи тварин одержували во-, дані суспензії комплексу довокіашх речовин Л 2 і.Ч 3 відповідно. Склаа дах суспензій приведений в табл. 2.

Водяні суспензії тварини одержували перорально протя-пяк ЗО діб: персі 15 діб добова доза становила 15,0 мл/кг / ваЯвяад добова терапевтична доза лікарських суспензій для дітей вікои до І рогу/; наступні 15 діб - ЗО ш/кг / каЗвиаа добова терапевтична доза лікарських суспензій для .дітей /. . \

Пря вивченні кишкової мікрофлори у тварин,в роботі керувались методичними рекокендаці ями: "Микробиологическая диагностика дисбактериозов*. - Киев, 1986 і “ Применение бактерийных биологических препаратов в практике лечения больных кишечники инуекцилет. .Диагностика и . ■ лечение дисбактериоза кишечника". - Москва, 1286. В фекаліях щурят виявляли кількість КУО/'г біфідобактврій, бактероїдів, лактобоктерій, шижових паличок /лахтозогго-зетивяих/, ентерококів, стафілококів, синьо ГНІЙНОЇ пали-

- ІЗ -

пки, загальне число аеробних бактері іі, дріжджів і плісеневт: грибів до початку, через 15 і 30 діб проведення дослід;,*. 2 роботі оули використані такі живильні середовища: ілльурокка, агар для бактероїді е в кодифікації /T,P.Li0H0t..apeba, А.З.Ско-лянская, 1984/, L.PC - 4, Зндо, Келінн, жовтково-сольовий агар, малахітовий агар, кров'яний агар, rj сте сервдоагце Сабуро. - 1

Результати досліджень піддані статистичнім обробці методом варіаційної' статистики з використанням критеріїв Ст’ю-дента /А.Т.Ашарин, А.А.Воробьев, 1962; Pjo.iep Е.Б., 1978 / із застосуваннам ІШ - 386. •

РЕЗУЛЬТАТИ дОСЛІДІЕНЬ .

На підставі мікробіологічних досліджень для виробництва гранул фламіну, флакуміну, яалзфлону і сипі бору були відібрані природні допоміжні речовини: пектин яблучний /ГСТ III—З—

Є2, сорт Г /, кислота сорбінова / ТУ 6-І4-358-76І J, кислота лимонна / ЇРТ 3652-6S, х.ч. /, цукор рафінований / ЛОТ 22-78/.

Вивчення рівня мікробної коктаг/і наці ї показало, ідо в пектині яблучному загальне число аеробних бактерій ст<~.ови-ло не більше 15 КУО/г, грибів - 20 КУО/г; цукру рафінованоку

- бактерій не більше 25 КУО/г, грибів 10 КУО/г. Бактерії сімейства tuteroOacteriacsae, Pseuuomonas aeruginosa і Staphylococcus aureus в цих речовинах не виявлені. Б кислотах сорбіновій і лимонній бактерії і гриби не ивдвлені.

Лікарські субстанції контакіновані значною кількістю шгісенавих грибів. Число їх у фламіні находилось в межах від 105 до 110 KTD/г, флакукіні -від 1220 до I5S0 КУО/г, кале^-лоні - від 90 до 105 КУО/г, сяліборі - від ГІО до 130 КУО/г.

- 14 - '

Загальна число салроіітнкх. аеробних бактерій в.кожній суб-^ станції не перевіювало 25 '¿ЗО/г.

До складу комплексу пектин яблучний введений як стабілізатор і загусник водяних суспензій. Він представляє собою рослинний кислий полісахарид. В науковій літературі є одиничні відомі оті про наявність проти».ікробної дії £ пектину' яолучного відносно дєякііХ .ятопатогенних оакгерій /Е.А.лієт-хиева и др., 1972; ¿.Д.Костик, Е.А.’Летхьеьа,- 1§72- /j Лротя-їлкрзбна дія його відносно кікроорганізлав, наявність яких ь лікарських лрепьратві не допускається чя облещується, в наукових працях не опис ata.

Вивчення протилікрхної активності водяних суспензій пактину поличного в кок. ьчтраціях 0,5; 1.0 і І}5 % вра значеннях pH 3,25; 3,15 і ^,.3 відповідно дозволяли виявити наявність бактерицидної ;ії у нього відносно асіїороГеян і граі:негативнЕХ і rpa&nos дивних бактерій. Незалежно віл •.ой31 центрації пектину яолучі ою в водяних суспензіях з foot®-»ту контамінуваяня Pseudomo" ‘S aeruginosa '"ТесакОЙ1* не ВЕЯ.-ИЛІІ через 4 ГОДИНИ, ätaphylt ccccus aureus 6538 Р - 24 ГОДИШ, tschorichia coli ¡¿-17 ■ ¿8 годин. Число киттзздатних клітин Uacillus сегаиз АТС" о035 протягом 10 діб знаходилось на одногст рівні. Бодякі ;успензії пектину яблучного н? проявили протн’укгаяьної гк?..Еіості і на протязі 10 діб в ,ь.і проходило активне розкно ?.іня CantUoa aldicans .ЯСС БВЬ-’53 І Aspergillus ,-ij gor ВКГЬ р І5Є/78ІЗ.

Для інгісі рування р;збитку грибів до складу кокплілсу введена сорбік ,;а кислоті. Протимікробну активність в юі-центрадії 0,1 % вона про. і в. де відносно бактерій і гриб: з у вільноку недисоїійованок: > гані в кислої»,у середовищі r..ж значеннях pH мд 3,0 до / Н.й.РусаяоЕа, й.А.ілветкоїл,

/„• § вйШйУрат 0/05’ % при значеннях pH 3,8 сорбінова ■ ,ч кислота не проявляє фукЙс'/йїячної дії / О.Л„ Белозерова>^

Т.И.Ефимова, 1969 /. Зйифа'Чи pH водяних суспензій за рахунок"' . пектину яблучного і шсясґій лимонної, ми передбачала, що кислота сорбінова здатна посилити антимікробну активність і де дасть можливіс№ використати її в дитячих ліках в мінімальній концентрації» Аяб ефективність сорбінової кислоти в водяних суспензіях з&А$іШі також і від природи викорвстаяого стайілі-ЗйЙрЙ / ¿¡ІІіМжлот,/1985 /„ Вплив пектину яблучного на ефек-їжййсїь сорбінової кислоти в науковій літературі не описаний. .

На прикладі водяних суспензій, виготовлених із різних за складом гранул флакуміну,, була визначена протимікробна актив-.. ■-ність пектину яблучного, КИСЛОТИ лимонної І КИСЛОТИ сорбіво.-вої при наявності хфкру рафінованого відносно мікрооргаяізхі рііі , зйбрудйюйчм лікарську форму /тайлиця І /. .

, ■ Таблиця І- :

ЗйМбзіМйїеті мікроорганізмів в водяних суспензіях; ;;..

виготовлених із гранул флакуміну -

Склад гранулі ? Темпера- тура Число бактерій КУО/мл Число грибів КУО/мл

зберігання сус-пе§зіа, В момент виготовлення Че^ез діб Б момент виготовлення Через 10 діб

Флакумін - 0,5 Цукор раййнований-18,0 20 - 25 3 ’ І 5 10183

Пектин яблучний - 1,5 6-8 - 2 — 2582

Флакумін - 0,5 Цукор рафінований-17,33 ПекТИН ЯбЛуЧНИЙ - 1,5..;:. Кислота лимонна - 0.07/ .20 -.25 2 І 10 1600

-.6-8 — 4 220

'¿лакумн - 0,5 Ііукор рзфінований-ЖЗз ІІЄКТИ'-’ ‘'олучний - 1,5 ^ Кисло'' сорбінова -0,-05 20 -.25 3 2 ; 4 І

6-8. «■* 3 ." .: , ■ І

' -зультати дослід дгв: показали, що незалежно від температурних рзіямі'в в водяних-«у сп енз і ях при наявності в гранулах

флакуміну, цукру рафінованого і пектину яблучного розвитку бактерій не відбувалось, але число плісеневих -грибів досягло високого рівня / ІОІЕУ і 2582 КУО/мл /. Введення до .^складі гранул кислоти лимонної дало можливість знизити рівень -.¡гасла плісеневих грибів в суспензії тільки на один порядок / 1600 і 220 КУО/мл /. Ари наявності в гранулах пектину яблучного і кислоти сорбінової розвитку бактерій і грибів в водяних суспензіях не відбувалось. Отже, одержані дані свідчать про виявлений синергізм дії, при якому кислота сорбінова в концентрації. 0,05 % в присутності пектину яблучного проявила фунті статичну активність відносно плісеневих грибів.

До складу комплексу для коригування смакових якостей водяних суспензій введені також кислота лимонна і цукор рафінований.

Основною метою, дисертаційної роботи було визначити можливість використання комплексу допоміжних речовин и цілому /пектину яблучного, кислоти сорбінової, кислоти лимонної і цукру рафінованого./ як консерванта в лікарських препаратах для дітеї. •

Для дослідів брали водяні суспензії комплексу # І, й 2 і * 3, які мали різні концентрації кожного компоненту /таблиця 2 /.

Таблиця. 2

Концентрація допоміжних речовин в водяних сусвензйіх комплексу, %

Назва речовин Водяні суспензії:

% І й 2 * 3

Пектин яблучний 0,5 1,0 х,5

Кислота сорбінова 0,025 0,05 ОД

Кислота лимонна 3,05 О.і 0,15

Цукор рафінований 15,0 20,0 30,0

pH 2.7 2,65 2,6

Цроташ*рэбау якт»яиіеи% виданих стшеязіа иястшяиу до-ппуттгиит речовт ШБЧеза ЯО ЯДНЖгЯЙЭ до юиашвм взлхчхж, синьогшйюа яаиавя, стафілококу эсшяияоро, дрїдд*аіади5-яого і шессяєеого грибів. Ці шдрооргЕшанж дроекдрвап 5*2?" швэв/зеш. Німеччини, ПТ1И і ЗелшЕзбршвнії даа ВИВЧЕННЯ «фвК—

\яавоеа ковсервантів в перорааьних ліка^сьзжг препаратах.

Б зв’згу з ш, що в наукові3 літературі, е відокості про . готу*. етороутворююЧИІ бактерій ЗасіПиз сегеиз і васіїїиз зиьгШв а виникненні харчових отруєнь. в дослідах була до-даиюво випробувана ¡¡асіИиз сегеиз. щас Ш35.

Результати дослідження. проттікробкої гетишості водяних сускензі® дослідзувйного комплексу яшшзазк /тайшвдя 3 /, цо ВІДНОСНО ГСЕМГОЗИТЯВНИХ СПОрОуТ£ОПЕ£ЛгОС ОЕЕХерІЙ вони проявили 6актері остатг^ну дао. На лротззі ЗО дій йасіїіиз сегеиз була жеттездаетоп, але збїгьзкнвн чзсса ЗГОДл яе відбувалось. Відносно аспорогенЕИх грзшегапїЕЗНх і г^аоэлтшших йаятерій водяні суспензії прояншш баэтерэдкну дів в інтервалі чару еід 15 хвюшн до 48 года. Інгібіїоршй зшив нщтнх суспен— зі 3 на гргби кани впрагенЕЗ і становив відносно дрізкхеподхб*-них від 24 годин до Ю діб, плісеневих від 48 годян да 2Б діб. ІЗ ЗбІЛЬШЄНЕЯК Еощентраідї ДОПОМІЖНИХ РЄЧ0Е2Н ПрОТЕМІВ«-робка йсгвееїсть водяних суспензій б$да бгльа иирезенаи.

В контрольних зразках бактерії і граби були життездатая^-ия і розьнозувалігсь за вянктяок стафілококу золотистого, чяяі^-ло ШО/ш якого поступово зменшувалось.

' Лра тткетгі питання про «оядагісяь втсоряетаияи коми»-лексу долокіяшпс речовйі як коксервгтта зорі ьнювали його про® таіікробву- ЕЕТЯВНІСТЬ і вимоги до луотимкробяої активна* сті консервантів' а-арижопей Шиеччгня, США., і Зешвсобригац^

Таблиця З

Життєздатність мікроорганізмів у еодяних суспензіях какллексу доаояімщи речовин

Мікроорганізми Концентрація КУОД'їЛ • /від - до / Водяні суспензії: КЖЇЇ'

Л І ір 2 а з

Весі Низ сегеиз АТОС С035 . 10 - І.ІО2 І.ЇО2 - їло3 їла3 - їло4 Литтоздатні 6ЄЗ 3£5ІЛЬ])іЄ зть на протязі ЗО р,іо, гїня числа КУО/кл " з Ге. їй* 0,3 ДО4 2,5Д0

Еосіїегісйіа соїі М - 17 . ' 10 - 1,10^ їло2 - їло3 їло3 - їло4 24 г ; В г .48 г ! 8г 48 г | 8 Г Я г % г г г 3,4Л(? 2,з,и; ?,б.иг

Рзеийокопаз оеги£Іпоза "Тесаков” 10 -• ІЛОа їло2 - їло3 їло3 - їло4 Ц Г і 2 г 2-і г | 2 г г і 2г 15 ХЕ 15 хв 15 хв • 3.5.І04 5Л.Ю5 2.2Л06

Е-ЬзрЬуІососсиз аігеиз АТСС 6538 Р ІС - І.10^ їло2 - їло3 їло3 - їло4 ""24 г ! Є г 24 г і 24 г ' 24 г 1 24 г 4 р 4 р 4 Г 19 20 32

Сапйісіа аІМсаав КСТС 8?,5 - 653 10 - їло2 ІЛ02 - 5Л02 5Л02 - 5Л03 . 6 діб 8 діб 10 діб 48 г 4 доби 6 діб 24 Г 4. дєюи . 6 діб 8,5 Л04 5,ЗЛО5 7, ІЛО5

¿0?ЄГ£ІІІиЗ ВКІІГр 166/7813 10 - їло2 їло2 - СЛО2 5Л02 - 5Л03 8 діб 16 діб 26 діб 48 г 12 діб 14 діб 48 Г 6 діб 6 діб 3,2 ЛО^ 2.3Л03 5.5Л03

. ~ia— . -

Основний критерієм ефективності консерванта:е зменшення ■числа зсгО/їїл бактерій і грибів за певний пері од .часу. Проте терміни посівів на живильні середовища і вимоги до протимін-робної гктявності консервантів фармакопейна ¿встановлені різні. При мікробному навантаженні від. 1.10^ дсгИіо£ КГО/мл тгхд.. ¿догами фармакопеї CIA через 28 діб в препараті , пусказтьет. бактерій не більше 0,1 % ЮТ/мл, грибів - без г 'Рішення числа КУО/мл; фарлакопеї Німеччини - через 7 діб-; С;ат-оі2 не більше ІДО3 КУО/мл, грибі в - через 14 і :28 діб •

F! більше. 10.КУО/мл; фармакопеї Великобританії - через 7 sítíce бакгоріз нз-бідьше ІДО2 КУО/мл, грибів - без збільшення числа ЕУО/мл.' . . -

Б лікарських, препаратах для внутрішнього вживання до-:;.-пускагтьск не ;більше Д.Ш* КУО/мл бектергй і ІДО2 КУО/мл... • грибів. Шкробне-навантаження1 від 1.10® до ІДО.® КУО/мл для тшак ліків е .завищеним'і не дає змоги виявити реальної., ефективності консерванта / k.g., WaXlhasser , 1985 /. .Тому для вивчення протимікробної активності комплексу допоміжних речовин, пропонованих для-виробництва дитячих ліківілк дослідах було використано г.тсдаальне мікробне навантаження ІДО4 КУО/мл бактерій і 5.IQ3 КУО/мл грибів. .

Порівнюючи дані .протимікробної активності комплексу допоміжних речовин і вимоги фармакопей Німечтани^^США і Великобританії до протимікробної активності консерванті в, можна зробити висновок, що б водяних суспензіях достаяйуваний КОМ— шц.кс' зда-.ний виконувати функцію- ефективно ганяойсерванта.

ІЬогчмікробна активність комплексу допойсжних,речовин обушалена наявністю в його складі пектину;яблучного, кислоти сорбінової і кислоти лимонної, які проявляють бактерицидну дію

. . ч -

відносно кишкової палички. В наукових працях е одиничні вгдо-

' - 20 -

мості про те, що пектин яблучний залежно від концентрації в дослідах in vitro t ІП vivo проявляє ікгібіторний всляв •на ккккоду йкрофлору / Й.БДуваева, 1986; О.Л.^азитов*. и -;Др., I9S8; С.И.Морев, В.В,Зубков, 1986 /. Вплету кислоти

■ сорбінової і кислоти лимонної на кишкову мікрофлору в лі-.зературі г-не описано.

Дапозігжні речовини досліджуваного кошлексу входить де ■.-складу лікарських .'препараті в, які пропоновані для лі кував-: :юг гастроентерологіннихзахворювань у дітей. Курс лікувак-:-ляг такими препаратами становить 3, 4 і більше ткзнів. При .^хронічних гастроентерологічних захворюваннях і особливо

з.-к'®єаіод вирш:ених запальних процесів створюються умови . дая формування дизйактеріозів /В.Г.Дорофейчук и др. Д96&; Д.У'.Гшаанов и ;ц)., 1989 /.

Зибчєння впливу комплексу допоміжних речовин на.кишкову мікрофлору показало, Що водяні суспензії В 2 і JT3, які в дослідах in vitco проявили виражену протимікробну активність відносно асгорогенних грамнегативних і .граи-позитивних ЛвхтаріЙ, в дослідах m vivo не проявили ін-гібіторногеггвпллву на індигенну і випадкову кишкову мікрофлору підростаючих щурят. Статистично вірогідних різниць по рівню біфідобактерій, лактобвктерій, бактероїдів, киш-ког;:;: паличок /лактозопозитивяих/, ентерококів і стафілококів в фекаліях дослідних і контрольних груп не одержано. Статистично вірогідні різниці одержані по рівно дріжджів і. плісеневих грибів. Рівень дріжджів в фекаліях знижувався г-чєрез 15 діб логарифм числа їх становив в груді контрольних тварин і групі тварин Jé 3 відповідно 4,12 +

0,58 і 3,34 + 0,51 /Р< 0,05/, через ЗО діб - в групі контрольних тварин 4,03 + 1,60, групі тварин ї 2 - 3,17 + 1,31

' Р<0,05 /, групі тварин JS 3 - 2,82 + 1,54 / Р<0,01 /. Рі-іень плісеневих грибів в фекаліях знизився через ЗО дій і ло-■ариї-м числа їх становив в групі контрольних 'тварин 4,12 + 0,35, ■рупі тварин J5 2 2,69 + 0,56 / Р<0,05 /, групі тварин іі З :,86 + 0,96 / Р<0,01 /. Показники рівня дріжджів і плісеневих ■рибів відрізнялись не тільки від контрольних груп тварин, але між дослідим.® групами і» 2 і Л 3. З кінці досліду найменший іівень їх був в групі тварин S 3, які одержували водяні сус-;ензії з найвищою концентрацією сорбінової кислоти 0,1 %. Цс ;ані корелюють з даними, проведеними в дослідах in vitro, в :ких була виявлена залежність ефективності еодяних суспензій юкплексу допоміжних речовин відносно грибів від концентрації орбї нової кислоти.

Дріжджеподібні і плісеневі гриби належать до випадкової умовнопатогенної кікрофлори кишечника. При гастроентероло— ічних.захЕорюьаннях у дітей в китовій мікрофлорі часто ви-вляжть дріжджеподібні гриби роду Candida /Б.г.Дорофейчук И p., 1968/. Тому використання лікарських препаратів, здат-их інгібірухати розвиток грибів, дозволяє зробити передбач ення, що таке явище буде сприяти відновленко нормального гак-:-;-обного ценозу кишечника у дітей.

Вивчення протимікробної активності водяних суспензій, виготовлених із гранул флавіну, флакуміну, калефлону і силі бору jr. , оказало, що відносно грампозигавних спороутворнжяих бактерій: . они проявили бактеріостатичну дію, відносно асдорогенних рамнегативних і грашозитивних бактерій - бактерицидну дію в нтервалі часу бід ЗО хвилин до 24 годин. Більш стійкими в лі-арських суспензіях були дрідвдеподібні і плісеневі гриби. Б одяких суспензіях калефлону, фламіну і силі бору час, необхідні для їх інактивації, становив від 24 годин до 5 діб, в сус-

пензії флахуміну - оільие 10 діб / таблиця 4 /.

Таолидя 4

Життєздатність мікроорганізмів в лікарських препаратах ДЛЯ ДІ ТЄЙЛ годин )

Mi крооргаш зми Водяні суспензії виготовлені із гранул

іламіну ¿ламніну кале^лону ciuioopv

Bacillus cereus ATCC bOj5 Життєздатність на протязі 10 діб оез зоільшенкя числа КУО/ыл

Escherichia cuii M-17 24 24 4 4

Proteus vulgaris 0X19 N221 0,5 т ± і 2

Citrobacter ireundii 33/57 0,5 4 - 0,5 4

Enterobactcr cloaceae A-186 24 24 4 24

Shigella Sonnei N 3 0,5 24 І 2

Salmonella typhimu-rium N55 ■ 0,5 24 І 4

Klebsiella pneumoniae NCTC 5U54 - Т І 0,5 0,5

Pseudomonas aeruginosa "Тесаков" 2 • 2 І • І

Staphylococcus aureus ATCC 6358 P 0,5 0,5 0,5 0,5

Streptococcus pioge-nes OILK-1 0,5 0,5 І І.

Corinebacter diphthe-raides N1711 І 2 , 2 24

Candida albicans NCTC 885-653 72 .Більше 10 діб 24 120

Aspergillus niger ВКПГр 156/7813 9Є Більше 10 діб 120 96

pH 2,6 3,17 3,2 3,2

Різниаг в швидкості інактивації кікрзорг ані змів в водяних суспензіях лікарських препаратів можна пояснити варіюванням в них концентрацій допоміжних речовин /пектину яблучного, кислота лимонної і цукру рафінованого/, наявністю лікарських субстанцій і різниш значеннями pH. Концентрація сорбінової кислоти в лі -карських суспензіях становила 0,05 %.

Досліджеьня рівня мікробного забруднення гранул фламіну / 16 серій /, <,'ли.-міну / 50 серій /, калефлону / 29 серій / і силі бору / 23 серій / показала, що препарати контаміновані незначною кількістю сапрофітних бактерій і плісеневих грибів: граничні їх межі в гранулах фламіну відповідно від З до 80 КУО/г і від 0 до 26 КУО/г, гранулах флакуміну - від 0 до 150

КУО/г і від 0 до 20 КУО/г, гранулах калефлону - від 0 до 330

КУО/г і від 0 до 15 ЮО/г, гранулах силібору - від 10 до 130

КУО/г і від 0 до 25 ЮТ/г. '

_ Проведені досліди 28 серій гранул фламіну, флакуміну, калефлону і силібору на протязі встановленого терміну придатності для препаратів / 2 роки / показала: що рівень контамінації їх бактеріями і плісеневими грибами знижувався і не перевищував 80 КУО/г бактерій і ТО КУО/г плісеневих гриив. Необхідно відмітити, шо після І року зберігання плісеневих грибів в гранулах препаратів не виявлено.

В водяних суспензіях, виготовлених із гранул лікарських препаратів, на протязі 10 діб розмноження бактерій і грибів не відбувалось незалежно від температурних режимів / 20 -25 °С і 6 - 8 °С / і максимальне їх число відповідно становило в суспензіях фламіні' 5 КУО/ші і І КУО/мл, флакуміну 26 КУО/мл і 2 КУО/мл, калефлону 25 КУО/мл і 0, силібору 4 КУО/ш

і І КУО/мл. •-

- '24 -

ДріЖДЖІ, бактерії сімейства Enterobacteciaceae,. .'seuQo-monas aeruginosa і Staphylococcus aureus в Гранула'1’ І водяних суспензіях лікарських препаратів ні в одному випадку не еиятлєні . Одержані дані по рівню мікробної контамінації граьул і водяних суспензій підтверджують консервуючу ефек-тдвн. сть досліджуваного комплексу допомі;іних речовин відкос-по мікроорганізмів, забруднюючих готові дитя-їх лікарські препарати рослинного походження.

ВИСНОВКИ

1. Мікробіологічними дослідженнями обгрунтована раїцо-

■ альність викоркст лая комплексу нешкідливих природних ДОПОМІЖНИХ речовин, до складу якого входять пектин яблучний, кислота сорбінова, кислота лимонна і цукор рафінований, для виробництва флавоноїдних дитячих лікарських засобів, відповідаючих вимогам нормативио-технічнох документації по допустимому рівню мікробного забруднення.

2. Визначена протимікробна активність ьодяних суспен-

зій пектину яблучного в концентраціях від 0,5 до 1,5 % по відношенню ДО Pseudomonas aeruginosa "Тесаков", -Staphylococcus aureus АТСС 6538 Р, Escherichia coli М—J.7 І

UeciiiLis cereus АТСС 8035.

3. Встановлено протимікробну активність водяних суспензій комплексу допоміжних речовин по відношенню до спороутво-рцючих грамлозитивних, аслерогенних грамнегативних і гремпо-зитиених, а також дріждуепедібних і плісеневих грибів і показана її залежність від концентрації інгредієнтів, виду мікроорганізмів і їх мікробного навантаження.

4. Комплекс допоміаіних речовин б вивчених концентраціях по ефективності відповідає вимогам, поставлених до консервантів в готових лікарських формах.

5. В еодяних суспензіях досліджуваного комплексу виявлений синергізм дії сорбінової кислоти в присутності пектину яблучного і кислоти лимонної відносно грибі в, що обумовлює використання її в виробництві лікарських препаратів для дітей в концентрації 0,05 %.

6. Пропонований комплекс допоміжних речовин не проявляє інгіоіторного впливу в дослідах in vivo на бактерійну кишко-üj uісро^лору підростаючих білих щурят /бі'іідобактерії, лак-тобактерії, бактероїди, кишкові палички /лактозопозитивні/, ентерококи, стафілококи / і проявляє протифунгальну дів відносно дріЖД.УІв і плісеневих грибів.

7. Сухі гранули фладіну, флакуйну, калефлону та силі бору для дітей, виготовлені з використанням допоміжних речовин дослідауваного комплексу, відрізняються незначним рівнем контамінації сапрофітними бактеріями і плісеневими грибами, розвиток яких не відбувається на протязі.встановленого терміну придатності для ліків. В препаратах відсутні дріжджі, бактерії сімейства EnteroUacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa і

. Staphylococcus aureus.

■ , 8. Водяні суспензії, виготовлені із гранул фламіну, фла-кукіну, калефлону і силі бору і стійкі до розвитку бактерій і грибів. Вони проявляють протимікробну дію відносно широкого спектру умовноп атогенних і патогенних мікроорганізмі в.

ПРАКТИЧНІ РЕШ.ІЕНДАЦІЇ

І. В виробництві нестерильних лікарських препаратів доцільно використовувати допоміжні речовини, які здатні прояв-

■ - 2G -

ляти і нгібіторниіі вплив на їх мі кро^лору.

2. На стадії розробки готових лікарських засобів необхідне наукове обгрунтування по використанню ефективних концентрацій консервуючих речовин з застосуванням мікробіологічних методів дослідження.

3. ІІри розробці Національної £ариакопеї пропонувати ввести метод по визначенню ефективності консервантів в готових лікарських засобах. Метод по визначенню протимікробної активності комплексу допоміжних речовин моде стати основою для його розробки.

СПИСОК РОБІТ, ОПУБЛІКОВАНИХ Ю ТИЛІ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Перспективы использования пектинов в качестве вспомогательных фармацевтических веществ // Тез. докл. Бсесоюзн. Haj ч. коті. "Состояние и перспективы разработки, производства и использования вспомогательных веществ для изготовления лекарственных средств". - Харьков, 1982. - С. ІЄ4 - 166 / у спгвавт. з 0.!>.,Котенко, О.Г.Горінт.., В.М.Спірідоновиы,

П.I.Безрук, 1 .".Перцевик, В.В.Черкасенко/.

2. Розробка технології дитячої лікарської форми фламіну, фітину та кофеїну-оензоату натрію //Фармацевтичний журная.

- 1982. - A S. - С. 74 У у співазт. з 0.!.'.Котенко, В.М.Спі-рідоновим, О.Г.Горіни.-., В.В.Черкасенко, П.і.Безрук, і.М.Перцевим/.

3. К вопросу создания детских лекарственных форм // Тез. докл. ІУ сьезда фармацевтов Украинской ССР. - Запорожье, 1964. -С. 70 / у співаЕГ, з Р.^.Ставровою, о. .¿'.Ьілоконь, В.^.Ьіло-конь, I.U.Брсзгіновою, О.І.Вісленко, Л.Я.Бевою, Е.Т.ЗшиковоюУ

4. Требования к качеству сырья и вспомогательных катери-адов в производстве лекарственных средств до показателям микробной чистоты /Дез.докл. Всесоазн. научз. ковЬ. "Кауч-

-¡o-технический прогресс и оптимизация технологических процессов создания лекарственных препаратов". - Львов, 1987. С. 242243 /у сшвавт. з Т.П.Скубко, Г.В.Оболенцевою, Я.З.Деркач /.

5. Изучение влияния начальной контаминации гранул для гетей на микробиологическую чистоту суспензий // Тез. докл.

[II съезда фармацевтов Туркменской ССР. - Ашгабад, 1989. -

202 - 203 /у сп1вавт. .з Т.П.Скубко, Г.В.Оболеццевою, ^З.Деркач /.

6. Значение микробиологических исследований при созда-:ши детских лекарственных средств // Микробиология, эпидемиология а клиника инфекционных болезней: Со. научн. гр. Харьк. лед. ин-та. - Харьков, 1992. - С. 5 - 10 / у сшвавт. з ^.Я.Циганенко, Т.П.Скубко, Г.В.Оболенцевою,' К.Г.Жеыеровою/.

7. Подход к оценке эффективности консервантов в готовых аекарственных средствах // Тез. докл. науч-г лракт. кона. "Перспективы создания и производства лекарственных средств в Ук-заине". - Одесса, 1993. - С. 161 - 162 / у сшвавт. з ТЛ.Скуб-ю, С.ОЛтткевич, Н.З.Даркач /.

Підписано до друку 13.01.94 р. формат 60x84 І/Іб, папір для розмнож вальних апаратів, друк офсетний, ротапринт, ВД ХОУС, з.96, тирЛРО, прим.310002, м. Харків, вул. Маршала Баканова, 28 .