Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Клеточный центр в морфогенетических реакциях клетки

ВАК РФ 03.00.17, Цитология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гудима, Георгий Олегович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

X. Структура центриолей

2. Образование центриолей.

3. Организация клеточного центра.

4. Микротрубочки

5. Функционирование центриолей в клетке

6. Подвижность клеток in vitro .31.

ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

X. Культуры клеток.

2. Экспериментальные процедуры.

3. Электронная микроскопия

4. Определение ориентации центриолей;по отношению к плоскости субстрата

5. Подсчет микротрубочек, отходящих от центриолей.

ГЛАВА Ш. РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Построение гистрограмм, отражающих случайную ориентацию центриолей к плоскости субстрата.

2. Мышинные эмбриональные фибробласты (ЮФ)

3. Фибробласты ЗТЗ

4. L-клетки.

5. Макрофаги.

6. Гранулоциты.

7. Т-лимфоциты.

8. Эпителий эмбриональной почки мыши (ЭПМ)

ГЛАВА 1У. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Поведение клеточного центра при распластывании и поляризации фибробластов

2. Клеточный центр при распластывании, поляризации и движении клеток крови.

3. Поведение клеточного центра при распластывании эпителиальных клеток

ЗАКЛЮЧЕН И Е

ВЫВОДЫ.

Л ИТ ЕР АТУР А

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клеточный центр в морфогенетических реакциях клетки"

Центриоль впервые была описана О.Гертвигом (1875) как определенная структура, лежащая в полюсе веретена деления. Было высказано цредположение, что центриоли ответственны за поляризацию веретена. Центриоли были также обнаружены в интерфазных клетках. Уже в ранних работах, посвященных центриолям, предполагалось, что их положение по отношению к ядру может определять полярность клетки (Ван Бенеден,1883, цит.по: Вильсон, 1936). После того, как с помощью электронной микроскопии была описана уникальная среди клеточных органоидов структура цен-триолей (цилиндр со стенкой из 9-ти триплетов микротрубочек) и их связь с радиально расходящимися по клетке микротрубочками, центриолям стали отводить главную роль в организации всего цитоскелета ( Bomens ,1979). Это предположение о роли цен-триолей базируется также на том, что центриоли могут иметь в клетке определенную ориентацию. Электронномикроскопическое исследование показало, что в клетках культуры ткани центриоль располагается преимущественно перпендикулярно плоскости субстрата перед началом митоза и сразу после него (Воробьев,Ченцов, 1978; Vorob;jev,Chentsov ,1982), а также, возможно, при движении фибробластов ( А1Ъгеcht-Buehlег, Buslmell, 1979).

В клетках животных центриоли входят в состав клеточного центра - зоны цитоплазмы, содержащей, кроме центриолей, ассоциированные с ними структуры (перицентриолярные сателлиты, свободные фокусы схождения микротрубочек, митотическое гало), и лишенная рибосом, митохондрий и других органоидов. Ассоциированные с центриолями структуры не являются постоянно сущест^ вующими. На разных фазах клеточного цикла происходит их закономерная смена (Воробьев,Ченцов,1978; Vorobiev,Chentsov,i982). Центриоли же являются постоянными компонентами клеточного центра. Возможно, что они являются его организующими компонентами.

Несмотря на интенсивное изучение, роль центриолей в клетке до сих пор остается неясной. Возможно, что изучение закономерностей функционирования клеточного центра как целого поможет понять также и роль центриолей. С этой точки зрения представляется перспективный изучение структуры и поведения центриоляр-ного аппарата в связи с функциональной нагрузкой клетки. На основе таких исследований можно будет определить, какие процессы в клетке происходят с участием центриолей. Кроме того, полученные данные помогут понять механизмы функционирования центриолей.

Клеточный центр является основным местом образования микротрубочек в клетке (:Frankel,1976; Osborn, Weber, 1976 ; Vo-robjev,Chentsov, 1983,1984). Его структура может изменяться в различных функциональных состояниях клетки. Изменение структуры клеточного центра связано с перестройкой системы микротрубочек.

Одной из сторон проявления функциональной активности клетки в интерфазе является подвижность. Подвижность представляет собой результат сложного комплекса морфогенетических реакций, то есть процессов, связанных с изменением формы клетки. Это, в свою очередь, сопровождается перестройкой системы микротрубочек. В подвижных клетках можно наблюдать различные функциональные состояния, связанные с изменением их (клеток) формы, а также последовательную смену этих состояний. Это делает подвижность клеток удобной моделью для изучения функциональных перестроек клеточного центра. В настоящее время достаточно полно описаны морфологические аспекты цроцесеа движения и изменения системы микротрубочек, которые происходят при изменении формы клетки (Тинт,1979;Abercrombie,1961;Jacoby,1965; Abercrombie et al.,1970;0sborn,Weber,1976;Vasiliev,Gelfand,1976j Zigmond et ai.,1981;Kupfer et ai.,1982 ). Систематического анализа строения и активности клеточного центра в этих условиях проведено не было. В связи с этим целью работы было изучение струк- . туры клеточного центра при различных функциональных состояниях подвижных клеток.

В результате сравнительного электронномикроскопического анализа получены новые данные о закономерностях функционирования клеточного центра в культивируемых интерфазных клетках. Показано, что после посадки подвижных клеток на субстрат центри-оли перемещаются в обращенную к субстрату часть цитоплазмы. Такое расположение центриолей сохраняется в течение всего времени пребывания клетки на субстрате. Выяснена локализация центриолей по отношению к ядру и активному краю клетки. Показано впервые, что в процессе распластывания происходит активация образования микротрубочек в клеточном центре. Начальные этапы активации происходят в суспендированных клетках, рост же микротрубочек за пределы клеточного центра начинается при распластывании клеток.

Впервые показано, что на стадии радиального распластывания и в поляризованных нормальных фибробластах активные цен-триоли ориентированы преимущественно перпендикулярно плоскости субстрата. Наличие этого свойства коррелирует со степенью морфологической трансформации фибробластов.

Показано также ориентированное расположение активных центриолей по отношению к верхней и нижней поверхностям клетки: дистальный конец активной центрноли обращен в большинстве клеток в сторону верхней поверхности клетки.

Заключение Диссертация по теме "Цитология", Гудима, Георгий Олегович

ВЫВОДЫ

1. В культивируемых подвижных клетках мыши центриоли располагаются в обращенной к субстрату части клетки.

2. При суспендировании фибробластов и эпителиальных клеток происходит активация образования микротрубочек в клеточном центре. Это выражается в том, что вокруг центриолей появляются многочисленные короткие микротрубочки. Рост их за пределы клеточного центра происходит только при распластывании клеток.

3. При поляризации фибробластов центриоли перемещаются в переднюю часть клетки. Количество микротрубочек, отходящих от центриолей, в процессе поляризации возрастает в 2 раза по сравнению с монослойной культурой. В клеточном центре может также увеличиваться количество фокусов схождения микротрубочек. Таким образом, в фибробластах клеточный центр принимает активное участие в движении клеток.

4. При распластывании и поляризации фибробластов происходит ориентация активных центриолей перпендикулярно плоскости субстрата. Ориентация связана с усиленным ростом длинных микротрубочек от клеточного центра.

5. Ориентация активных центриолей перпендикулярно плоскости субстрата не наблюдается в сильно трансформированных L-клет-ках, в отличие от нормальных МЭФ и слабо трансформированных клеток ЗТЗ. Наличие перпендикулярной ориентации центриолей следовательно, коррелирует со степенью морфологической трансформации фибробластов.

6. Поведение подвижных клеток крови при посадке на стекло отличается от такового у фибробластов. Так, макрофаги проходят

- 202 все стадии распластывания, описанные для фибробластов, но в 3-4 раза быстрее. Гранулоциты либо образуют небольшую кольцевую ламеллу, после чего поляризуются, либо поляризуются без радиального распластывания. Т-лимфоциты поляризуются сразу после посадки на стекло. Таким образом, увеличение скорости движения клетки в культуре сопровождается как ускорением процесса распластывания, так и исчезновением отдельных его стадий.

7. В подвижных клетках крови центриоли располагаются по отношению к ядру и ведущему краю различным образом: в поляризованных макрофагах в основном впереди или сбоку от ядра, в гранулоцитах - между сегментами ядра в центральной части клетки, в Т-лимфоцитах - позади ядра в уроподе.

8. При распластывании и поляризации клеток крови в клеточном центре не происходит значительной перестройки системы микротрубочек. По-видимому, расположение и активность центриолей в этих клетках не связаны с осуществлением движения.

9. При суспендировании эпителиальных клеток центриоли оказываются около ядра. Такое положение их сохраняется в одиночных нераспластанных клетках. В клетках эпителиальных островков, которые хорошо распластаны, центриоли могут быть удалены от ядра и располагаются вблизи от верхней поверхности клетки. В краевых клетках эпителиальных островков центриоли располагаются между ядром и активным краем клетки.

10. В клетках всех изученных типов активные центриоли были обращены дистальными концами в большинстве случаев в сторону верхней поверхности клетки. Это заставляет предполагать, что центриоль способна различать свободную и связанную с субстратом поверхности клетки.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Закономерности функционирования клеточного центра в морфогенетических реакциях клетки

В настоящей работе было изучено поведение клеточного центра различных клеток в морфогенетических реакциях, связанных с перестройкой системы микротрубочек. Несмотря на особенности, характерные для каждого из изученных типов клеток, можно выделить ряд общих закономерностей функционирования клеточного центра.

Вскоре после посадки одиночных подвижных клеток на поверхность субстрата центриоли оказываются в обращенной к субстрату части цитоплазмы. Такое положение центриолей сохраняется в течение всего времени пребывания клеток на субстрате. Как показывают результаты настоящей работы, положение центриолей в нижней по отношению к субстрату части цитоплазмы связано с определенной организацией цитоскелета распластанных и поляризованных клеток.

Центриоли могут менять свою локализацию по отношению к ядру и краям клетки. Так, в поляризованных фибробластах и макрофагах центриоли располагались в основном между ядром и ведущим краем клетки. Такую же локализацию имели центриоли в распластанных краевых клетках эпителиальных островков.

Изменение формы клетки может сопровождаться перестройкой системы микротрубочек. В этих условиях наблюдается изменение активности клеточного центра. В клетках, форма которых стабилизирована, активность клеточного центра находится на низком уровне. Когда клетка изменяет свою форму (распластывание, поляризация, движение), активность клеточного центра повышается в несколько раз - возрастает количество отходящих от него микротрубочек.

Распластывание сопровождается созданием в клетке развитой системы микротрубочек (Тинт,1979; Osborn, Weber,1976). Процесс образования их проходит в несколько этапов. Вначале вокруг центриолей появляются короткие микротрубочки. Часть из них может затем прикрепиться к центриолям и ассоциированным с ними структурам. Эти два этапа могут происходить до начала распластывания и не требуют контакта клетки с субстратом. Рост же микротрубочек за пределы клеточного центра начинается только после уплощения клетки. При этом, по-видимому, не важно, каким образом происходит уплощение клетки: за счет прикрепления к субстрату и образования широкой зоны ламеллярной цитоплазмы (фибробласты) или благодаря растягиванию, как это имеет место в распластанных эпителиальных островках. Образование большого количества длинных микротрубочек может сопровождаться ориентацией активных центриолей перпендикулярно к плоскости субстрата.

Особый интерес представляют данные об ориентированном положении центриолей по отношению к верхней и нижней поверхностям культивируемых клеток. Как было обнаружено в настоящей работе, активные центриоли в клетках всех изученных типов располагались дистальным концом, как правило, в сторону верхней поверхности клетки. Можно предполагать, что центриоли могут различать верхнюю и нижнюю поверхности клетки и располагаться по отношению к ним закономерным образом. Остается, однако, непонятным, с чем именно связано описанное положение центриолей.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гудима, Георгий Олегович, Москва

1. Братина Е.Е.,1975. Ультраструктура нормальных фибробластов на ранних стадиях распластывания в культуре ткани. Цитология, т.ХУЛ, стр.248-253.

2. Васильев Ю.М., Гельфанд И.М., 1981. Взаимодействие нормальных и неопластических клеток со средой. М., Наука.

3. Васильев Ю.М., Гельфанд И.М., Ерофеева Л.В., 1966. Поведение фибробластов в клеточной культуре при удалении части монослоя. Докл.АН СССР, т.171, стр.721-724.

4. Васильев Ю.М., Гельфанд И.М., Домнина М.В., Иванова О.Ю., Комм С.Г., Ольшевская Л.В., 1972. Действие метафазных ингибиторов на форму и движение фибробластов в культуре. Цитология, т.Х1У, стр.80-87.

5. Видьсон Э., 1936. Клетка и ее роль в развитии и наследственности. М.-Л., Биомедгиз.

6. Воробьев И.А., Ченцов Ю.С., 1977. Ультраструктура центросомы в клетках кроветворной ткани аксолотля. Цитология, т.XIX, стр.598-608.

7. Воробьев И.А., Ченцов Ю.С., 1978а. Центриоли в клеточном цикле .1. Ультраструктура и ориентация центриолей во второй половине митоза. Биол.науки, $ 9, стр.65-71.

8. Воробьев И.А., Ченцов Ю.С., 19786. Центриоли в клеточном цикле .П. Интерфаза и первая половина митоза. Биол.науки, № II, стр.54-64.- 204

9. Воробьев И.А., 1979. Центриолярный аппарат в клетках культуры ткани. Диссертация на соискание ученой степени канд.биол. наук, М.

10. Воробьев И.А., Ченцов Ю.С., 1982. Динамика восстановления микротрубочек вокруг клеточного центра в культивируемых клетках после их охлаждения. Цитология, т.ХНУ, с тр.1288-1289.

11. Иванова О.Ю., Комм С.Г., Фетисова Е.К., 1981. Контактные взаимодействия эпителиальных пластов. Цитология, т.ХХШ, стр. 1298-1303.

12. Иванова О.Ю., Комм С.Г., Васильев Ю.М., Гельфанд И.М., 1977. Влияние колцемида на радиальное распластывание фибробластов в культуре. Цитология, т.XIX, стр.181-185.

13. Москвин-Тарханов М.И., Оншценко Г.Е., 1978. Центриоли в мега-кариоцитах костного мозга мыши. Цитология, т.XX, стр.14361437.

14. Надеждина Е.С., 1981. Центриоли и базальные тельца: связь с ядром, выделение и некоторые характеристики. Диссертация на соискание ученой степени канд.биол.наук, М.

15. Онищенко Г.Е., Ченцов Ю.С., 1977. Центриоли в полиплоидных клетках. В кн.: П Всес.симп.по соматической полиплоидии (9-12 ноября). Материалы. Ереван: Изд.АН Арм.ССР; стр.89-94.

16. Онищенко Г.Е., 1978. 0 соответствии числа центриолей плоидности гепатоцитов в печени мыши. Цитология, т.ХХ, стр.395-399.

17. Плохинский Н.А., 1970. Биометрия. Изд.Моск.унив.

18. Ровенский 10.А., Ольшевская Л.В., 1973. Динамика процесса распластывания нормальных фибробластоподобных клеток и малиг-низированных фибробластов линии L на поверхности подложки. Цитология, т.ХУ, стр.1029-1036.

19. Ровенский Ю.А., Славная И.Л., Васильев,Ю.М., 1971. Исследование реакций нормальных фибробластоподобных клеток и фибробластов линии на упорядоченный рельеф подложки. Цитология, т.ХШ, стр.574-583.

20. Старосветская Н.А., 1969. Ультраструктура митотического аппарата в клетках культуры ткани. Цитология, т.XI, стр.12281233.

21. Тинт И.С., 1979.Морфология системы микротрубочек при округлении, распластывании и поляризации нормальных и трансформированных фибробластов. Цитология,т.XXI, етр.1139-1144.

22. Abercrombie М., 1961. The bases of locomotory behavior of fibroblasts. Exp. Cell Res., Suppl. v.8, p. 188-196.

23. Abercrombie M., 1970. Contact inhibition in tissue culture. In Vitro, v.6, p.128-142.

24. Abercrombie M., J.E.M.Heaysman, S.M.Pegrum, 1970. The locomotion of fibroblasts in culture. I.Movements of the leading edge. Exp.Cell Res., v.60, p.393-398.

25. Abercrombie M., J.E.M.Heaysman, S.M.Pegrum, 1971. The locomotion of fibroblasts in culture. IV. The electron microscopy of leading lamella. Exp.Cell Res., v.67,p.359-367«

26. Afzelius B.A., Ewetz I»., Palmblad J., Uden A.-M., Venizelos K., 1980. Structure and Function of Neutrophil leukocytes from Patients with the Immotile-Cilia Syndrome. Acta Med. Scand., v.208, p.145-154.

27. Albrecht-Buehler G., 1976. The function of filopodia in spreading 3T3 mouse fibroblasts. Cold Spring Harbor Syrap. on Cell Proliferation. Cell Motility, v.3, p.247-264.

28. Albrecht-Buehler G., A.Bushnell, 1979. The orientation of centri-oles in migrating 3T3 cells.Exp.Cell Res., v.120,p.111-118.- 206

29. Albrecht-Buehler, G., Bushnell A., 1980, The ultrastrueture of primary cilia in quescent 3^3 cells. Exp.Cell Res., v.126, p. 427-437.

30. Allan R.B., P.C.Wilkinson, 1978. A visual analysis of chemotac-tic and chemokinetic locomotion of human neutrophilic leukocytes. Exp.Cell Res., v.111, p.191-203.

31. Allen C., G.G.Borisy, 1974. Structural polarity and directionality of growth of microtubules of Chlamydomonas flagella. J.Molec.Biol, v.1, p.384-402.

32. Allenspach A.L., Roth L.E., 1967. Structural variations during mitosis in the chick embryo. J.Cell Biol., v.33»P«l79-196.

33. Allison A.C., 1974. Mechanism of movement and maintenance of polarity in leukocytes. In: Chemotaxis: Its Biology and Biochemistry. Antibiotics and Chemotherapy. E.Sorkin, ed. Karger, Basel. Switzerland, v.19, p.191-217.

34. Allison A.C., Davies P., de Petris S., 1971. Role of contractile microfilaments in movement and endocytosis. Nature New Biol., v.232, p.153-155.

35. Amato P.A., E.R.Unanue, D.L.Taylor, 1983. Distribution ofactin in spreading Macrophages: A comparative study ofliving and fixed cells. J.Cell Biol., v.96, p.750-761.i

36. Ambrose E.J., 1961. The movements of fibrocytes. Exp.Cell Res., v.8, p.54-60.

37. Anderson E., 1970. A cytological study of the centrifuges whole,half and quarter eggs of the sea urchin Arbacia punctulata. J.Cell Biol., v.47, p.711-733.

38. Anderson R.G.W., 1972. The three dimensional structure of the basal body from^the rhesus monkey oviduct. J.Cell Biol, v.54, p.246-265.

39. Anderson D.C., b.J.Wible, B.J.Hughes, C.W.Smith,B.R.Brinkley, 1982. Cytoplasmic Microtubules in Polymorphonuclear Leukocytes: Effect of Chemotactic Stimulation and Colchicina Cell, v. 31, p.719-729.

40. Bergen L.G., G.G.Borisy, 1980. Head-to-tail polymerization of microtubules in vitro. Electron microscopic analysis of seeded assembly. J.Cell Biol., v.84, p.141-150.

41. Bergen L.G., Kuriyama R., Borisy G.G., 1980. Polarity ofmicrotubules nucleated by centrosomes and chromosomes of Chinese hamster ovary cells in vitro. J.Cell Biol, v.84, p.151-159.

42. Bernhard W., de Harven E., I960. L'ultrastructure de centriole et d'autres elements de l'appareil achromatique. In: 4th International Congress Electron Microscopic (Berlin,1958). Berlin, Springer, v.2, p.217-227.

43. Bershadsky A.D., I.S.Tint, V.I.Gelfand, V.A.Rosenblat, Ju.M.

44. Vasiliev, I.M.Gelfand, 1978. Microtubule system in cultu-; red mouse epithelial cells. Cell Biol. Intern.Rep., v.2, p.345-351.

45. Bessis M., 1964. Hemopoetic Tissue and Blood. In: Electron microscopic anatomy (Kurtz S.M., ed. N.Y., London, Acad. Press), p.144-175.

46. Berns M.W., Rattner J.B., Brenner S., Meredith S., 1977. The role of the centriolar region in animal cell mitosis. J.Cell Biol., v.72, p.351-367.

47. Bhisey N., Feeed J.J., 1971. Altered movement of endosomes in colchicine treated cultured macrophages. Exp.Cell Res., v.65, p.376-384.

48. Bianco C., Gotze 0., Cohn Z.A., 1979. Regulation of macrophagemigration by products of complement system. Proc.Natl. Acad.Sci. of USA, v.76, p.888-891.

49. Biberfeld В., Kolm G., Permann P., 1968. Morphological observations on lymphocyte peripolesis and cytotoxic action in vitro. Exp.Cell Res., v.52, p.672-684.

50. Borisy G.G., Gould R.R., 1977. Microtubule organizing centers of the mitotic spindle. In: "Mitosis: facts and questions'.' Proc.workshop, Heidelberg, Berlin, p.78-87.

51. Bornens M., 1977. Ihe centriole as a gyroscopic oscillator.1.plications for cell organization and some other consequences. Biol. Cellulaire, v.35, p.115-132.

52. Bragina E.E., Vasiliev J.M., Gelfand I.M.,-1976. Formation of bundles of microfilaments during spreading of fibroblasts on the substrate, Exp.Cell Res., v.97, p.241-248.

53. Brenner S., Branch A., Meredith S., Berns M., 1977. The absence of centrioles from spindle poles of rat kangaroo(PtKg) cells. Undergoing meiotic-like reduction division in vitro. J.Cell Biol., v.72, p.368-397.

54. Brinkley B.R., Puller G.W., Highfield D.P., 1975. Cytoplasmic microtubules in normal and transformed cells in culture* Analysis by tubuline antibody immunofluorescence. Proc. Natl. Acad.Sci. of USA, v.72, p.4981-4985.

55. Brown D.L., Bouck G.B., 1973. Microtubule biogenesis and cell shape in Ochromonas. III. Effects of herbicidal mitotic- 209 inhibitor isopropyl-H-phenylcarbamate on shape and flagel-.lum regeneration. J.Сell Biol., v.61, p.514-536.

56. Brown D.L., Massalski A., Patenaude P., 1976. Organization of the flagellar apparatus and associated cytoplasmic microtubules in the quadriflagellate alga Polytomella agillis. J.Сell Biol., v.69, p.106-125.

57. Buckley J.K., 1975. Three dimensional fine structure of cultural cells: Possible implications for subcellular motility. Tissue and Cell, v.1, p.51-65,

58. Buckley J.K., Porter K.R., 1967. Cytoplasmic fibrils in living cultured cells. Protoplasma, v.64, p.349-361.

59. Carter S.B., 1967. Effects of cytochalasins on mammalian cells. Nature (bond.), v.213, р.2б1-2б4.

60. Cerottini G.C., Engers H.D., McDonald H.R., Brunner К.Т.,1974. Generation of cytotoxic T-lymphocytes in vitro. I.Response of normal and immune mouse spleen cells in mixed leukocytes cultures. J.Exp.Med., v.140, p.703-717.

61. Chen W.-T, 1981. Mechanism of Retraction of the Trailing Edge during Fibroblast Movement, J.Cell Biol., v.90,p.187-200.

62. H.T.Cheung, W.D.Gantarow, G.Sundharadas, 1978. Colchicine and cytochalasin В (CB) effects on random movement, spreading and adhesion of mouse macrophages. Exp.Сell Res.,v.111, p.95-103. Г

63. Cohen W.D., 1979» Analysis of cytomorphic system in anucleate Salamander erythrocytes,J.Gell Biol., v.63, p.344 a.

64. Cohen W.D., Newhauser J., 1980. Association of centrioles with the marginal band of a molluscan erythrocyte. J.Cell Biol, v.86, p.286-291.

65. Crispe I.H.,1976. The effect of vinblastine, colchicine andhexylene glycol on migration of human monocytes, Exp.Сell Res., v.100, p.443-446.

66. Dahl H.A., 1963. Fine structure of cilia in rat cerebral cortex Zeitschr. fur Zellforsch., v.60, p.369-386.

67. Dahlen H., Scheie P.D., 1967. Two types of long microextensions from cultivated liver cells. Exp.Cell Res.,v.53,p.670-682.

68. Dalcq A.M., 1964. Le centrosome. Bull. Acad. R.Med.Belg, v.50, p.1408-1449.

69. Dales S., 1972. Concerning the universality of a microtubule antigen in animal cells. J.Cell Biol., v.52,p.748-754.

70. De Brabander M., Borgers M., 1975. The formation of annulated lamellae induced by desintegration of microtubules. J.Cell Science, v.19, p.331-340.

71. De Brabander M., Wanson J.-C., Mosselmans R., 1978. Effects of antimicrotubular compounds on monolayer cultures of adult rat hepatocytes. Biol.Cellulaire, v.31, p.127-140.

72. De Brabander M., Geuens G., Nuydens R., De Mey J., 1980. The effect of metabolic inhibitors on the nucleated assembly of microtubules in living mitotic and interphase cells. Eur.J.Cell Biol., v.22, p.303-310.

73. De Brabander, M., Geuens G., De Mey., J.Joniau M., 1981. Nucleated assembly of mitotic microtubules in living PtK2 cells after release from nocodasole treatment. Cell Motility, v.1, p.469-483.

74. De Brabander M., G.Geuens, R.Nuydens, R.Willebrords, J.De Mey, 1982. Microtubule Stability and Assembly in Living Cells: The Influence of Metabolic Inhibitors, Taxol and PH. Cold Spring Harbor Symposia on quantitative biology.v.XLVI, p.227-240.

75. Dentler W.L., Grannett S., Rosenbaum J.L.1975. Ultrastruetural localization of the high molecular weight proteins associated with in vitro assembled brain microtubules, J.Cell Bioi., v.55, p.237-241.

76. Dingle A.D., Ifolton C.I966. Development of the flagellar apparatus of Naegleria. J.Cell Biol., v.31, p.43-54.

77. Dippell R.V.1968. The development of basal bodies in Paramecium. Eroc.Natl,Acad.Sci. of USA, v.61, p.461-468.

78. Doolin P.P., Birge W.F., 1966. Ultrastruetural organization of cilia and basal bodies of the epithelium of the chloroid plexus in the chick embryo. J.Cell Biol., v.29,p.333-345.

79. Dunn G.A., 1973. Extension of nerve fibers, their mutual interaction and direction of growth in tissue culture. In: Locomotion of tissue cells. Ciba Foundation Symposium (ed. M.Abercrombie)Associated Scientific Publishers, New York , v.14, p.211-232.

80. Dustin P., 1978. Microtubules. Berlin, Heidelberg, New York, Springer-Verlag.

81. Dustin P. Microtubule of mitose. Bull. Assoc.Anat., 1979,v.63, p.109-126.

82. Erlandson R.A., de Harven E., 1971* The ultrastructure of synchronous Hela cells. J.Cell Science, v.8, p.353-397.

83. Fawcett D.W.1966. Centrioles. In: The cell, its organelles and inclusions, p.49-62.

84. Fawcett D.W., Porter K.R., 1954. A study of the fine structure of ciliated epithelia. J.Morphol, v.94, p.221-264.1 •< •

85. Flock A., Duvall, A.J. The ultrastructure of the kinocilium of the sensory cells in the inner ear and lateral line organs.

86. J.Cell Biol., 1965, v.25, p.1-8.

87. Follett E.A.C., Goldman R.D., 1970. The occurence of microvilli during spreading and growth' of BHK 21/C13 fibroblasts. Exp.Cell Res., v.59, p.124-136.

88. Fonte V.G., Searls R.L., Hilfer S.R., 1971. The relationship of cilia with cell division and differentiation. J.Cell Biol., v.49, p.226-229.

89. Frankel F.R.1976. Organization and energy-dependent growth of microtubules in cells. Eroc.Natl.Acad.Sci. of USA,v.73> p.2798-2802.

90. Freed J.J. Lebowitz M.M. 1970. The association of class of sab tatory movements with microtubules in cultured cells. J.Cell Biol», v.45, p.334-353.

91. Friedlander M., Wahrman J. The sprindle as a basal body distri -butor. A study in the meiosis of the male silkworm moth, Bombyx mori. S.Cell Sci., 1970, v.7, p.65-89.

92. Fuller, G.M., B.R.Brinkley, J.M.Boughter, 1975. Immunofluorescence of mitotic spindles by using monospecific antibody against bovine brain tubulin. Science, v.187,p.948-950.

93. Fulton C. 1971. Centrioles. In: Origin and continuity of cell organelles. N.Y., p.170-221.

94. Gail, M.H., Boone C.W., 1971. Effect of colcemid of fibroblast motility.Exp .Cell Res., v.65, p.221-227.

95. Gall J.G. Centrioles replication. A study of spermatogenesis in the snail viviparus. J.Biophys. Biochem. Cytol, 1961, v. 10, p.163-193.

96. Gallin J.I., Rosenthal A.S., 1974. The regulatory role of divalent cations in human granulocyte chemotaxis. Evidence for an association between calcium exchange and microtubule assembly. J.Cell Biol., v.62, p.594-609.- 213

97. Gaskin P., Cantor C.R., Shelanski M.L., 1974» Turbidimetricstudies of the in vitro assembly and disassembly of porcine microtubules. J.Molec. Biol., v.89, p.737-758.

98. Geiger a, D.Rosen, G.Berke, 1982. Spatial Relationship of Microtubule organizing Centers and the Contact Area of Cytotoxic T lymphocytes and Target Cells. J.Cell Biol., v.95, p.137-143.

99. Gibbons J.R., Grimstone A.V. I960. On flagellar structure in certain flagellates. J.Biophys. Biochem. Cytology, v.7, p.697.

100. Goldman R.D., 1971. The role of three cytoplasmic fibers in BHK 21 cell motility. I. Microtubules and the effects of colchicine. J.Cell Biol, v.51, p.752-762.

101. Goldman R.D., E.A.C.Follett, 1969. The structure of the major cell processes of isolated BHK 21 fibroblasts. Exp.Cell. Res., v.57, p.263-276.

102. Goldman R.D., Knipe D.M., 1973. Function of cytoplasmic fibers in nonmuscle cell motility. Cold Spring Harbor Symp.Quant. Biol., v.37, p.523-534.

103. Gotlieb, A.I., Heggeness M.H., Ash J.P., Singer S.J., 1979.

104. Mechanochemical Proteins, Cell Motility and Cell-Cell Contacts: The localization of Mechanochemical Proteins Inside Cultured Cells at the Edge of an in Vitro "Wound". J.Cell Physiol., v.100, p.563-578.

105. Gotlieb А. I», L.McB.May, L.Subrahmanyan, V.I.Kalnins.Distribution of microtubule organizing centers in migrating sheets of endothelial cells. J.Cell Biol., 1981, v.91, p. 589-594.

106. Gould R.R., 1975. The basal bodies of Chlamydomonas reinhard-tii. Formation from probasal bodies, isolation and parti- 214 al characterisation, J.Cell Biol., v.65, p.65-74.

107. Gould R.R., G.G.Borisy, 1977. The pericentriolar material in Chinese hamster ovary cells nucleates microtubule formation. J.Cell Biol., v.73, p. 601-615.

108. Gustavson Т., Wolpert Iu, 1961. Studies of the cellular basis of morphogenesis in sea urchin embryo. Exp.Cell Res., v.24» p.64-78.

109. Heath J.P., Dunn G.A., 1978. Cell to substratum contacts of chick fibroblasts and their'relation to the microfilament system. A correlated interference-reflexion and high-voltage electron-microscope study. J.Cell Science, v.29, p.197-212.

110. Heath J.B., Greenwood A.D., 1971* Ultrastructural observations on the kinetosomes and Golgi bodies during the asexual life cycle of Saprolegnia. Zeitschr.ltiir Zellforsch., v.112, p.371-389.

111. Heaysman J.E.M., S.M.Pegrum, T.M.Preston, 1982. Spreading chick heart fibroblasts. Exp.Cell Res., v.140, p. 85-93.

112. Heidemann S.R., Zieve G.W., Mcintosh J.R., 1980. Evidence for microtubule subunit addition to the distal end of mitotic structures in vitro. J.Cell Biol., v.87, p.152-159.

113. Heggenass M.H., Simon M., Singer S.G., 1978. Association of mitochondria with microtubules in cultured cells. Proc. Natl.Acad.Sci. of USA, v.75, p. 3863-3866.

114. Jacoby M., 1965. Macrophages. Cells and Tissues in Culture. Willmer ed., v.2, p.1-93. Academic Press.

115. Kalnins V.I., Porter K.R., 1969. Centriole replication during ciliogenesis in the chick tracheal epithelium. Zeitschr. fur zellforsch. v.100, p.1-30.

116. Kiefer'B.I., 1970. Development, organization and degeneration of the Drosophila sperm flagellum. J.Cell Sci., v.6, p.177-201.

117. King C.A., Preston T.M., R.H.Miller, P.Donovan, 1980. Cellsubstrate interactions during amoeboid locomotion of neut- 216 rophil leukocytes. Exp.Cell Res., v.126, p.453-458.

118. Kirschner, M., 1980. Implications of treadmilling for the stability and polarity of actin and tubulin polymers in vivo. J.Cell Biol., v.86, p.330-334.

119. Konishi A., Beacham W.S., Hunt C.C., 1973« Centrioles in intrafusal muscle fibers. J.Cell Biol., v.59, p.749-755.

120. Mahowald A.P., Caulton J.H., Edwards M.K., Floyd A.D. Loss of centrioles and polyploidization in follicle cells of Dro-sophila melanogaster. Exp.Cell Res., 1979, v.118, p.404-410.- 217

121. Malawista S.E., Benesh K.G., 1967. Human polymorphonuclearleukocytes demonstration of microtubules and the effect of colchicine. Science, v.156, p.521-522.

122. Malech H.L.,R.K.Root, J.I.Gallin,1977. Structural analysis of human neutrophilic migration: centrioles,microtubules and microfilaments orientation and function during chemotaxis. J.Cell Biol., v.75, p.666-693.

123. Margolis R.L. and Wilson L., 1973. Opposite End Assembly and Disassembly of Microtubules at Steady State in Vitro. Cell, v.13, p.1-8.

124. Maro B.,Bornens M.,1980. The centriole-nucleus association:effects of cytochalasin В and nocadazole. Biol.Cellulaire, v.39, p.287-290.

125. Maxwell, D.S., Kruger L., 1965. The fine structure of astrocytes. J.Cell Biol., v.25, p.141-158.

126. McFarland W., 1969. Microspices on the lymphocyte uropod. Science, v.163, p.818-820.

127. McFarland W., Heilmann D.H., 1965. Lymphocyte foot appendage. Its role in lymphocyte function and in immunological reactions. Nature, v.205, p.887-889.

128. McGill, M., Brinkley B.R.,1975. Human chromosomes and centrioles as nucleating sites for the in vitro assembly of microtubules from bovine brain tubulin. J.Cell Biol.,v.67, p.189-199.

129. Mc Nitt R.,1974.0entriole ultrastructure and its possible role in microtubule formation in an aquatic fungus. Protoplas-ma, v.80, p.91-108.

130. Mensing H., B.F.Pontz, Muller P.K., V.Gauss-Muller,1983. A stuAdy on fibroblast chemotaxis using fibronectin and conditioned medium as chemoattractants. Eur,J.Cell Biol., v.29, p.268-273.

131. C.A.Middleton,1976.Contact induced spreading is a new phenomenon depending on cell-cell contact.Nature,v.259,p.311-313•

132. Millecchia L.L., Rudzinska M.A.,1970. Basal body replication and ciliogenesis in a Suctorian, Tokophyra infusionum. J.Cell Biol.,v.46,p.553-563.

133. Mohri H.,1968.Amino-acid comparison of tubulin consisting microtubules of sperm flagella.Nature(Lond.),v.217,p.1053-1054.

134. Mullins R.,R.Wette,1966. 0n the statistical Expectation and Evaluation of Centriole Orientations in Cell Profiles.

135. J.Cell Biol., v.30, p.652-655.

136. Mulvaney B.D.,Heist H.E.,1971. Centriole migration during regeneration and normal development of olfactory epithelium.

137. J.Ultrastr.Res., v.35, p.274-281.

138. Murray R.G.,Murray A.S.,Pizzo G.,1965.The fine structure of mitosis in rat thymic lymphocytes. J.Cell Biol. ,v.26,p.60J-6l9.

139. Nadeshdina E.S., Fais D.,Chentsov Yu.S.,1979. On the association of centrioles with the interphase nucleus.Eur.J.Cell Biol.,v.19,p.109-115.

140. Nossal R., Zigmond S.H., 1976. Chemotropism induces for polymorphonuclear leukocytes. Biophys.J.,v.l6,p.1171-1182.

141. Ockleford,C.D. ,3>ucker J.B. ,1973.Growth,breakdown repair andrapid contraction of microtubular axopodia in the Helio-zoan actinophryssol. J.Ultrastr.Res.,v.44,p.369-387.

142. Oldfield F.E.,1963. Orientation behavior of chick leucocytes in culture and their interactions with fibroblasts. Exp.Cell Res.,v.30, p.125-138.

143. Olmsted J.B.,Borisy G.G.,1975.Ionic and nucleotide requirementsfor microtubule polymerization in vitro.Biochemistry,v.14,ip.2996-3005.

144. Osborn M.,Weber E.,1976.Cytoplasmic microtubules in tissue culture cells appear to grow from an organising structure towards the plasma membrane.Proc.Natl.Acad.Sci.of USA,v.73, p.867-871^

145. An attempt at comparative ultrastructural cytology in di-tvisinf plant cells. Cytobios, v.1, p.257-280.- 220

146. Porter K.R. ,1966. Cytoplasmic microtubules and their functions. In; Principles of biomolecular organization. London, J.and A.Cherchille Ltd.,p.308-356.

147. Porter K.R., 1973. Microtubules in intracellular locomotion. Ciba Found. Symp.,v.14, p.108-148.

148. Pryzwansky K.R., Schliwa M., Porter K.R.,1983. Comparison of the three-dimensional organization of unextracted and Triton-extracted human neutrophilic polymorphonuclear leukocytes. Eur.J.Cell Biol., v.30, p.112-125.

149. Pulvertaft R.N.Y.,1959.Cellular assotiations in normal and abnormal lymphocytes.Proc.Roy. Soc.Med.,v.52,p.315-322.

150. Ra^araman R., Rounds D.F.,Yen S.P.S.,Rembaum A.,1974. A scanning electron microscope study of cell adhesion and spreading in vitro. Exp.Cell Res., v.99, p.327-329.

151. Ramsey W.S., Harris A., 1973» Leukocytes locomotion and its inhibition by antimitotic drugs. Exp.Cell Res., v.82, p.262-270.

152. Rattner J.В., Phillips S.G.,1973. Independence of centrioleformation of DNA synthesis. J.Cell Biol., v.57,p.359-372.

153. Rich A.M., M.Rabinovitch and S.T.Hoffstein, 1980, Negative correlation between neutrophil (PMN) microtubule numbers and enchanced migration: a combined electron microscopic and functional study. J.Cell Biol., v.87, p.254 a.

154. Rieder C.L.,Jensen C.G., Jensen L.G.W., 1979. The resorption of primary cilia during mitosis in a vertebrate (PtK^) cell line. J.Ultrastr.Res., v.68, p.173-185.

155. Ringo D.L., 1967. The arrangement of subunits in flagellar fibers. J.Ultrastr. Res., v.17, p.266-277.

156. Robbins E., Gonatas К.К., 1964. The ultrastructure of a mammalian cell during the mitotic cycle, J.Cell Biol., v.21, p.429-442.

157. Robbins E., Jentzsch G., Micali A., 1968. The centriole cycle5/in «Synchronized HeLa cells. J.Cell Biol., v.36, p.329-339.

158. Roos U.-P., 1973. Light and electron microscopy of rat kangaroo cells in mitosis. II. Kinetochore structure and function. Chromosoma (Berl.), v.41» p. 43-82,

159. Rosenau W., MoonH.D., 1963. Interaction of lymphoid cellswith target cells in tissue culture. In: Cell-Bound Antibodies, Wistar Gast Press, v.75.

160. Sabatini D.D., Bensch K., Barnett R.J., 1963. Cytochemistry and electron microscopy the preservation of cellular ultra-structure and enzymatic activity by aldehyde fixation. J.Cell Biol., v. 17, p. 19-58.

161. Salmon E.D., 1975. Spindle microtubules: thermodynamics of in vivo assembly and role in chromosome movement. N.Y.Acad, of Sciences, Annals, v.253, p. 383-406.

162. Sakagushi H., 1965. Pericentriolar filamentous bodies.J.Ultrastr.1. Res., v.12, p. 13-21.

163. Sandborn E., Koen P.P., McNabb J.D., Moore G., 1964. Cytoplasmic microtubules in mammalian cells. J.Ultrastr.Research, v.11, p.123-135.

164. Schaffer P.W., 1969. Centrioles of a human cancer intercellular order and intercellular disorder. Science (Wash.D.C.), v. 164, p.1300-1302.

165. Sharp I.A., Bullvell R.G., 1956. Interaction ("peripolesis") of macrophages and lymphocytes and other cells. Brit.J. Haemathol., v. 2, p.283-289.

166. Szolloci D«, 1964-. The structure of centrioles and their satellites in a jellyfish. J.Cell Biol., v.21, p.465-479.

167. Taylor A.C., 1961. Attachment and spreading of cells in culture. Exp.Cell Res., suppl., w8, p.154-173*

168. Thornhill R.A., 1967. The ultrastructure of the olfactory epithelium of the lamprey Lamperta fluviatilis. J.Cell Sci., v.2, p.591-602.

169. Tilney L.G., 1971. Origin and continuity of microtubules. In: Origin and continuity of cell organelles. N.Y., p.222-260.

170. Tilney L.G., Goddard J., 1970. Nucleating sites for the assembly of cytoplasmic microtubules in the ectodermal cells of blastulae of Arbacia punctulata. J.Cell Biol., v.46, p.564-575.

171. Tilney L.G., Porter K.R, 1967. Studies on microtubules of Heli-ozoa Actinosphaerium. J.Cell Biol., v.34, p.327-343.

172. Tilney L.G., Bryan L., Bush D.J., 1973. Microtubule evidence for thirteen protofilaments. J.Cell Biol., v.59, p.267-275.

173. Todaro G.J., Green H., 1963. Quantitative studies of the growth of mouse embryo cells in culture and their development into established lines.J.Cell Biol., v.17, p.299-313.- 224

174. Trotter J.A., 1981, The organization of actin in spreading macrophages, Exp.Cell Res., v.132, p. 235-248.

175. Tucker R.W., Scher C.D., Stiles C.D., 1979. Centriole decilia-tion associated with the early response of 3T3 cells to growth factors but not to SV-40. bell, v.16, p.1065-1072.

176. Tucker R.W., A.B.Pardue, Keigi P., 1979. Centrioles ciliation in related to quiescence and DNA synthesis in 3T3 cells. Cell, v.17, p.527-536.

177. Turksen K., Opas M., Aubin J.E., Kalnins V.S., 19S3. Microtubules, microfilaments and adhesion patterns in differentiating chick retinal pigment (RPE) cells in vitro. Exp.Cell Res., v.147, p. 379-392.a

178. Turner F.R., 1968. An ultrastructural study of plant spermatogenesis. Spermatogenesis in nitella. J.Cell Biol., v.37» P.370-393.

179. Vasiliev J.M., Gelfand I.M., 1976. Effect of colcemid on mor-phogenetic processes and locomotion of fibroblasts. Cold Spring Harbor Symp. on Cell Proliferation. Cell Motility, v.3, p.279-304.

180. Vasiliev J.M., Gelfand I.M., Domnina L.V., Ivanova O.Yu.,

181. Komm S.G., Olshevskaya T.A., 1970. Effect of colcemid on the locomotory behavior of fibroblasts. J.Embriology exp. Morphol., v.24, p.625-640.

182. Vorobjev I.A., Chentsov Yu.S., 1980. The ultrastructure of centriole in mammalian tissue culture cells. Cell Biol. Intern.Reports, v.4, p. 1037-1044.

183. Vorobjev I.A., Chentsov Y.S., 1982. Centrioles in the cell cycle.I. Epithelial cells. J.Cell Biol., v.93, p.938-949.- 225

184. Vorobjev I.A., Chentsov Yu.S., 1983. The dynamics of recon-stitution of microtubules around the cell center after cooling. Eur.J.Cell Biol., v.30, p.149-153.

185. Vorobjev I.A., Chentsov Yu.S., 1984. Centrioles and microtubules in the interphase cells under colcemid action: dose-and time-dependent effects. Eur.J.Cell Biol., in press.

186. Wang E., Connolly J., Kalnins V.I., Choppin P.W., 1979. Relationship between movement and aggrevation of centrioles in syncytia and formation of microtubule bundles. Proc.Natl. Acad.Sci. of USA, v.76, p.5719-5723.

187. Weiss P., 1961. Guiding principles in cell locomotion and aggregation. Exp.Cell Res., suppl.f v.8, p.260-281.

188. Weiss L., 1969. Interaction of sensitized lymphoid cells and target cells in tissue cultures and in hoografts: an election microscope and immunofluorescence study. J.Cell Biol., v.35, p. 140.

189. Weber K., Pollack R., Bibring Т., 1975. Antibody against tubulin: the specific visualisation of cytoplasmic microtubules in tissue culture cells. Proc.Natl.Acad.Sci. of USA, v.72, p.459-463.

190. Weber K., Ralhke R.C., Osborn M., РгаДке W.W., 1976. Distribution of actin and tubulin in cells and in glycerinatedcells models after treatment with the cytochalasin B.Exp. Cell Res., v. 102, p. 285-297.

191. Wessels N.K., Spooner B.S., Luduena M.A., 1973* Surface movements, microfilaments and cell locomotion. In: Locomotion of tissue cells. Ciba Found.Symp. (ed. M.Abercrombie, Associated Scientific Publishers, N.Y.), v.14, p. 53-77.

192. Wheatley D.N., 1968. Centrioles in hepatocytes. Experientia, v.24, p. 1157-1158.

193. Wheatley D.N., 1974. Pericentriolar virus-like particles in Chinese hamster ovary cells. J.General Virology, v.24, p.395-399.

194. Witkowski J.A., Brington W.D., 1971. Stages of spreading of human diploid cells on glass surface. Exp.Cell Res., v.68, p. 372-380.

195. Wolfe J., 1972. Basal body fine structure and chemistry. Advances in Cell and Mol.Biol., v.2, p. 151-192.

196. Yamada K., Spooner B.S., Wessels U.K., 1971. Ultrastructure and function of growth cones and axons of cultured nerve cells. J.Cell Biol., v.49, p.614-633.

197. Zeligs J., 1979. Association of centrioles with clusters of apical vesicles in mitotic thyroid epithelial cells: are centrioles involved in directing secretion? Cell and Tissue Res., v.201, p. 11-21.

198. Zigmond S.H., 1974. Mechanisms of sensing chemical gradients by polymorphonuclear leukocytes. Nature (Lond.), v.249, p.450-470.

199. Zigmond S.H., 1977. Ability of polymorphonuclear leukocytesto orient in gradients of chemotactic factors. J.Cell Biol., v.75, p.606-616.

200. Zigmond S.H., 1981* Consequences of chemotactic peptide re сер tor modulation for leukocyte orientation* J.Cell Biol., v.88, p. 644—648.

201. Zigmond S.H., H.I.Levitsky, B.J.Kreel, 1981. Cell polarity: an examination of its behavioral expression and its consequences for polymorphonuclear leukocyte chemotaxis. J.Cell Biol., v.89, p. 585-592.

202. Автор выражает глубокую благодарность профессору Ю.С.Чен-цову и кандидату биологических наук И.А.Воробьеву за руководство настоящей работой.

203. Автор благодарен Г.Н.Давидовичу, А.Г.Богданову, Н.Е.Го-родсковой, В.Н.Барминой за предоставление сеансов и консультации по сканирующей электронной микроскопии.

204. Автор благодарен М.Е.Неверовой за предоставление культур клеток ЗТЗ и L , С.Н.Быковской и Т.А.Куприяновой за предоставление культуры активированных Т-лимфоцитов.

205. Автор благодарен сотрудникам отдела электронной микроскопии Межфакультетской ЛНИЛ им. А.Н.Белозерского и кафедры цитологии и гистологии Биологического факультета МГУ за внимание к работе.