Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Клеточная структура и характер накопления запасных белков и углеводов в эндосперме кукурузы с различной плотностью зерна

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Филичкин, Сергей Андреевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.II

1.1 Запасающие образования эндосперма кукурузы и их основные свойства . II

1.1.1 Белковые тела.II

1.1.1.1 Ультраструктура.

1.1.1.2 Биохимический состав.

1.1.1.3 Возникновение и формирование.

1.1.1.4 Плавучая плотность.

1.1.2 Крахмальные гранулы.

1.1.2.1 Структура и онтогенез

1.1.2.2 Химический состав и синтез.

1.1.2.3 Удельная масса

1.2 Изменение физических, структурных и биохимических свойств эндосперма кукурузы -под действием гена опак

1.2.1 Физико-механические свойства

1.2.2 Структура и ультраструктура

1.2.3 Белки и свободные аминокислоты.

1.2.4 Крахмал и крахмальные гранулы

1.3 Улучшение структуры и физических свойств опак-2 эндосперма.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Клеточная структура и характер накопления запасных белков и углеводов в эндосперме кукурузы с различной плотностью зерна"

На ХХУ1 съезда КПСС перед сельским хозяйством поставлен ряд задач, направленных на создание прочной кормовой базы / I /. В СССР кукуруза на зерно возделывается на.площади 3,5.4 млн.га, в Краснодарском крае - на 185.200 тыс.га. В целом по стране урожайность за последние годы составила 30.36 ц/га. В Постановлении Щ КПСС и Совета Министров о Продовольственной программе СССР предусмотрено увеличить валовой сбор зерна кукурузы в 1985 году до 17 млн.тонн, в 1990 - до 20 млн.тонн / 2 /. При этом большое значение уделяется усилению работ по созданию новых сортов с высоким качеством зерна и повышенной устойчивостью к неблагоприятным условиям среды.

За последние 20 лет в ряде стран, в том числе в СССР, значительное развитие получили исследования по улучшению аминокислотного состава белка кукурузы. Этому способствовало открытие мутантных форм с повышенным содержанием лизина и триптофана. В Краснодарском НИИСХ под руководством академика ВАСХНШ1 М.И.Хад-кинова были созданы и районированы высоколизиновые гибриды опак-2 кукурузы. Содержание лизина у них повышено на 50.60 %. По Краснодарскому краю к 1985 году планируется, довести плошадь посевов высоколизиновой кукурузы до НО тыс.га. Актуальность вопроса состоит еще и в том, что широкое производство зерна высоколизиновой кукурузы затруднено в связи с падением удельной массы и механической прочности опак-2 эндосперма, вызванного заменой стекловидных частей эндосперма рыхлой мучнистой тканью. Как следствие, опак-2 зерно имеет меньшую механическую прочность, травмируется при уборке и хуже хранится. К отрицательным свойствам высоколизиновой кукурузы относится также снижение урожайности. По данным Томова /25/, снижение урожая зерна в результате интродукции гена 03 по 300 гибридам составляет в среднем 8,2 %, а к числу наиболее тесно связанных с этим признаком показателей автор относит плотность и массу 1000 зерен.

В настоящее время селекция высоколизиновой кукурузы направлена на повышение урожайности и улучшение структуры зерновки: получение форм с плотным стекловидным эндоспермом при сохранении высокой питательной ценности белка, В литературе накопилось много сообщений о создании опак-2 аналогов с модифицированным (частично стекловидным) эндоспермом /11,31,61,63,64,65/. Методы, которыми достигается модификация, различны (обработка мутагенами, отбор мозаичных форм, использование двойных мутантов и др.), однако конечный результат одинаков: в рыхлом опак-2 эндосперме появляются стекловидные участки с высокой плотностью. При этом, как правило, ухудшается биологическая ценность белка /61,64,84/.

Несмотря на то, что в последние годы получен ряд линий высоколизиновой кукурузы с частично роговидным эндоспермом, селекция на плотнозерность ведется без учета структурных и биохимических особенностей формирования стекловидной ткани. Например, основное внимание в известных нам работах уделялось изучению содержания фракций белков и аминокислот, тогда как накопление крахмала и его фракций остается за пределами внимания большинства исследователей. В то же время гены вм^ , тос , ае и некоторые другие используются селекционерами для получения высоколизиновой кукурузы с твердым роговидным эндоспермом /14,95/, а механизмы улучшения мучнистой структуры опак-2 зерновки в этих случаях остаются невыясненными.

Много спорных и неизученных вопросов имеется также в области структурных особенностей накопления белка и крахмала в клетках эндосперма высоколизиновой кукурузы. Так, неясно какие именно изменения структуры приводят к преобразованию стекловидной ткани в рыхлую, мучнистую и снижению плотности опак-2 эндосперма, насколько соизмерим вклад в плотнозерность отдельных запасающих образований, какие особенности клеточной и субклеточной организации обеспечивают развитие роговидных участков ткани в эндосперме двойных рецессивных мутантов опак-2/шугари-2 и опак-2/вэкси, можно ли выделять плотнозерные высоколизиновые формы с помощью белков - маркеров и т.д.

Основная цель настоящей работы - изучить структурные и биохимические особенности формирования зерна с высокой плотностью в связи с проблемой улучшения физических свойств эндосперма кукурузы опак-2. Исходя из этого, были сформулированы следующие задачи исследования :

- выявить специфические изменения в клеточной и субклеточной структуре, приводящие к снижению плотности при введении гена опак-2;

- установить роль отдельных запасающих образований в формировании стекловидного эндосперма с высокой плотностью;

- определить связь собственной плотности основных запасающих образований с фракционным ( компонентным)составом локализованных в них веществ;

- выявить возможности идентификации плотнозерных форм вы-соколизиновой кукурузы с помощью белковых маркеров;

- изучить накопление фракций белков, лизина, крахмала ( в том числе амилозы и амилопектина ) у ряда линий, мутантов, гибридов и установить характер связи содержания этих веществ в эндосперме с признаком плотнозерности;

- объяснить причины улучшения структуры опак-2 эндосперма при интродукции генов - модификаторов si^, wx, sup 1, и других;

- определить биохимические критерии отбора для проведения селекционных работ по улучшению физических свойств зерна опак-2 кукурузы.

Научная новизна работы. Показано, что плотность зерна кукурузы является сложным количественным признаком, зависящим от характера упаковки клеток эндосперма белковыми телами и крахмальными гранулами. Белковые тела крахмалоносного эндосперма кукурузы являются концевыми расширениями гранулярной эндоплазматической сети, окруженные одинарной мембраной, к цитошгазматической стороне которой прикреплены полирибосомы. Земн белковых тел развивающегося эндосперма содержит изоэлектрические компоненты, идентичные компонентам, выделенным из дроламинов зрелого зерна.

Лимитирующим фактором признака плотности зерна является накопление гранул крахмала , имеющих максимальную среди запасающих образований плотность, величина которой не зависит от соотношения в крахмале амилозы и амилопектина. Глютелиновые белки играют незначительную роль при формировании плотного эндосперма. Мучнистая часть эндосперма нормальной кукурузы отличается от роговидной по клеточной структуре, содержанию и изоэлектрическим спектрам проламинов, количеству лизина и крахмала. Причиной снижения плотности опак-2 кукурузы является торможение накошгения крахмальных гранул и белковых тел в клетках субалейроновой зоны эндосперма. Изоэлектрические спектры зеина опак-2 кукурузы отличаются от обычной, однако прямо не маркируют высоколизиновые формы с плотным зерном. Повышение плотности зерна опак-2 кукурузы может быть достигнуто путем отбора форм с увеличенным абсолютным содержанием крахмала в эндосперме.

Исходя из проделанной работы, на публичную защиту выносятся следующие положения диссертации :

I. Формирование зерновки кукурузы с плотным стекловидным эндоспермом определяется количеством и характером упаковки отложенных в клетках крахмалоносной паренхимы эндосперма крахмальных гранул и белковых тел,

2. Плотность зерна кукурузы является сложным количественным признаком, который лимитируется накоплением крахмала. При этом изменение в крахмале соотношения амилозы и амилопектина не оказывает влияния на плотность ни самих крахмальных гранул ни эндосперма в целом.

3. Проламины являются единственной белковой фракцией, накопление которой существенно увеличивает плотность эндосперма. Однако, в отдельных случаях ( двойные мутанты опак-2/шугари-2,опак-2/вэкси ) увеличение плотности зерна связано только с усилением ( относительно опак-2 ) накоплением крахмала.

4. Проламины крахмалоносного эндосперма кукурузы локализованы в белковых телах, которые являются расширениями гранулярной эндо-плазматической сети. Белковые тела окружены одиночной мембраной, с цитоплазматической стороной которой ассоциировании полирибосомы. Белки, извлеченные из белковых тел развивающегося эндосперма, состоят из тех же компонентов, что и проламины зрелой зерновки.

5. Эндосперм обычной кукурузы состоит из двух типов ткани, различающихся по плотности, содержанию лизина, крахмала, проламинов и изоэлектрическим спектрам последних, активности рибонуклеазы. В эндосперме опак-2 кукурузы такая дифференциация тканей отсутствует.

6. Снижение плотности опак-2 кукурузы происходит в результате торможения накопления крахмала ( крахмальных гранул ) и проламинов ( белковых тел ) в клетках субалейроновой зоны эндосперма. Действие гена опак-2 на клеточную структуру эндосперма выражается в : а) увеличении размера клеток и митохондрий; б) торможении образования и развития белковых тел; в) снижении накопления крахмальных гранул в клетках субалейронового слоя. Мучнистая консистенция и тусклый эндосперм опак-2 кукурузы являются следствием образования полостей при высыхании белков глютелино-вого матрикса.

7. Изоэлектрический компонентный состав проламинов опак-2 кукурузы отличается от обычной, однако непосредственно не маркирует высоколизиновые формы с плотным зерном.

8. Принципиальный путь повышения плотности опак-2 зерна заключается в отборе форм с увеличенным содержанием крахмала на эндосперм (без снижения объема последнего ) при сохранении оптимального уровня белка ( 8. 10 % ) и лизина в белке ( не менее

4 % ).

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Филичкин, Сергей Андреевич

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В соответствии с поставленными целями и задачами исследования работа была проведена по нескольким взаимосвязанным направлениям :

- изучен компонентный состав проламинов и исследована возможность выделения высоколизиновых форм кукурузы с плотным эндоспермом с помощью белковых компонентов - маркеров;

- исследованы специфические отклонения в клеточной и субклеточной организации эндосперма опак-2 кукурузы, следствием которых является снижение плотности зерна и развитие мучнистого эндосперма;

- определен вклад основных запасающих образований ( крахмальных гранул и белковых тел ) в формирование плотного эндосперма; исследовано влияние компонентного состава проламинов и фракционного состава крахмала на плотность белковых тел и крахмальных гранул соответственно;

- изучены корреляционные зависимости мезду содержанием лизина, фракщй белков по Осборну, крахмала ( в том числе амилозы и амилопектина ) и плотностью зерна кукурузы;

- эндосперм обычной кукурузы разделен на роговидную и мучнистую части и изучены биохимические и структурные особенности этих двух типов ткани.

3.1 Изменение клеточной структуры и ультраструктуры эндосперма под действием гена олак-2 3.1.1 Морфология клеток в различных гистологических слоях эндосперма нормальной и опак-2 кукурузы

Для изучения влияния гена опак-2 на клеточную организацию эндосперма кукурузы линии ш 64 А было проведено его морфомет-рическое исследование по таким параметрам, как размер клеток, белковых тел, крахмальных гранул и процентное содержание последних в клетке для трех зон эндосперма: алейронового, субалейронового слоев и центральной части (рис. I, Приложение 4).

Рис. I Схематическое изображение зон обычной (слева) и опак-2 (справа) кукурузы в районе вершины зародыша (29-й день развития). А - перикарп (200 - 300 мкм); Б - монослой алейроновых клеток (40 - 60 мкм); В - переходные клетки субалейронового слоя (80 - 100 мкм); Г - субалейроновый слой (2 Ю3 - 3 Ю3 мкм); Д - центральная часть (1,5 Ю3 - 2,5 Ю3 мкм).

Целью проведенной работы было обнарумть изменения в клеточной структуре, приводящие к исчезновению в опак-2 эндосперме плотных стекловидных участков и замене их рыхлыми, "мучнистыми. Наибольший интерес с этой точки зрения представляет субалейроновый слой, в клетках которого содержится основной запас белка и крахмала (рис. I Г).

На всех выбранных этапах развития клетки субалейроновой зоны, в опак-2 эндосперме были в 1,5. 2 раза крупнев обычных (табл. 2.1, рис. 2).

В отношении других зон укрупнение клеток наблюдали в алейроновом слое и центральной части (табл. 2.1); исключение состав. лял 22-й день развития, где достоверность различия ниже принятых для биологических объектов границ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Филичкин, Сергей Андреевич, Краснодар

1. Постановление ХХУ1 съезда КПСС но проекту ЦК КПСС "Основные направления экономического и социального развития СССР на 1981 1985 годы и на период до 1990 года". 2 марта 1981 г. М., Политиздат, 1981, с. 46.

2. Постановление ЦК КПСС и Совета Министров СССР о Продовольственной программе СССР на период до 1990 года. 9 ноября 1982 г.

3. Брик П.Л., Ильяшенко Г.А., Кулакова Л.А. и др. Ультра структура клеток мутантов кукурузы. Атлас. Кишинев, 1974, 120 с.

4. Гаврилюк И.П., Губарева Н.К., Конарев В.Г. Выделение, фракционирование и идентификация белков, используемых в геномном анализе культурных растений. Тр. прикл. бот. ген. сел., 1973, т. 2, Л I, с. 248-280.

5. Иванов И.Е. Некоторые свойства и технологические качества зерна высоколизиновой кукурузы. Кукуруза, 1979, ib 4, с. 2829.

6. Инглетт Дж. Изучение белков кукурузы в связи с переработкой зерна и питательной ценностью продуктов. В кн.: Белки семян зерновых и масличных культур. М., Колос, 1977, с. 178-195.

7. Конарев В.Г. Белки растений как генетические маркеры. М., Колос, 1983, 320 с.

8. Конарев В.Г., Перуанский Ю.В., Рубченя А.Ю. Зеин мутанта кукурузы опак-2 и возможности выявления мутантного гена в гибридах. Доклады ВАСХНИЛ, 1969, J6 9, с. 28-31.

9. Корлюк С.С., Сечняк А.Л., Симоненко В.К. и др. Крахмальные зерна тритикале и выполненность его зерновок. Научн.-техн. бюллетень ВСГИ, 1981, т. 3, ib 41, с. 26-29.

10. Лебедев A.B., Рядчиков В.Г., Филипас Т.Е. и др. Фракционныйи аминокислотный' состав белка высоколизиновой и обычной кукурузы. В кн.: Селекция высоколизиновой кукурузы. Сб. научн. тр. Вып. ХЕ, Краснодар, 1976, с. I03-II5.

11. Машненков A.C., Хаджинов М.И. Доминантная мутация Sup 1sup 1 w 70 og/og, улучшающая структуру опейк-2 кукурузы. Доклады ВАСХНИЛ, 1979, Jé 5, с. 3-5.

12. Методы биохимического исследования растений. Под ред. А.И.

13. Ермакова. Л., Колос, 1972, 456 с.

14. Наумвнко А.И., Кирпа Н.Я. Физико-механические свойства зерна и зерновой массы высоколизиновых гибридов кукурузы. Кукуруза, 1978, J6 12, с. 27-28.

15. Павлов А.Н. Алейроновый слой, алейроновые зерна и белковые тела зерновок злаковых культур. Физиол. й биохим. культ, раст., 1972, т. 4, J&5, с. 464-473.

16. Палий А.Ф., Цыганаш В.И., Ротарь А.И. Получение и изучение двойного эндоспермового мутанта su^c^ у кукурузы. Генетика, 1980, т. 16, J6 2, с. 364-366.

17. Перуанский Ю.В., Портной В.Х. Различные типы белковых тел эндосперма злаков. Физиол. и биохим. культ, раст., 1979, т. II, J6 6, с. 583-587.

18. Перуанский Ю.В., Савич И.М. Гетерогенность амилозы и амило-пектина крахмала. Физиол. и биохим. культ, раст., 1978, т. 10, Jß 4, с. 406-410.

19. Плотников В.К., Рядчиков В.Г., Букреева Г.И. и др. Некоторые особенности популяции мРНК созревающего эндосперма кукурузы опак-2. Физиол. раст., 1983, т. 30, № I, с. 63-72.

20. Плотников В.К., Рядчиков В.Г., Филичкин С.А. и др. К выяснению причин перераспределения белковых фракций эндосперма кукурузы опак-2.-Физиология и биохимия культурных растений, 1984, т. 16, №4 /в печати/.

21. Плотников В.К., Филичкин С.А., Рядчиков В.Г. и др. Распределение поли(А)-содержащей РБК мембраносвязанных полирибосомв субклеточных препаратах из созревающего эндосперма кукурузы. Сельскохоз. биология, 1983, В 10, с. 120-125.

22. Попов H.H., Машев Н.П. Влияние микроэлемента цинк въерху биосинтезата на 2- триптофан и индолни ауксини в кълнове и корени на нормални и высоколизинови хибриди царевица

23. Zea mays L. ) Физиол. раст. (НРБ), 1980, Т. 5, № 3,-с. 90-95.

24. Пыльнева П.Н., Ключко П.Ф., Соколов В.М. Особенности электрофоре тического спектра спирторастворимой фракции белка популяции опейк-2 синтетик А. Сб. научн. тр. ВСГИ, Одесса, 1980, с. 100-104.

25. Рокицкий П.Ф. Введение в статистическую генетику. Минск, Вышейная школа, 1978, 420 с.

26. Рядчиков В.Г. Улучшение зерновых белков и их оценка. (Под ред. Хаджинова М.И.). М., Колос, 1979. - 368 с.

27. Рядчиков В.Г., Лебедев A.B., Филипас Т.Е. и др. Белки и структура зерна кукурузы опак-2. В кн.: Итоги работ по селекции и генетике кукурузы. Краснодар, 1979, с. 236-258.

28. Сакало В.Д. Крахмалсинтезируюпше ферменты запасающих тканей растений. Физиол. и биохим. культ, раст., 1979, т. II,5, с. 493-504.

29. Созинов A.A., Попереля Ф.А. Полиморфизм проламинов и селекция. Вест. с.-х. науки, 1979, 10, с. 21-34.

30. Томов Н. Продуктивность новых высоколизиновых гибридов кукурузы.- Междунар. Сельскохоз. Журн., 1981, 5, с. 42-75.

31. Филичкин С.А. Изменение структуры клеток при формировании эндосперма опак-2 кукурузы. Физиол. и биохим. культ, раст., 1982, т. 14, 2, с. II9-I22.

32. Филичкин С.А. Клеточная организация эндосперма опак-2 кукурузы. В кн.: Производство и использование растительного белка. Краснодар, 1981, с. 87.

33. Филичкин С.А., Рядчиков В.Г. Структурные и биохимические особенности накопления запасных белков и крахмала у кукурузы с различной плотностью зерна. В кн.: Селекция кукурузы, Краснодар, 1984, 260 с.

34. Фрей-Вислинг А., Мюле талер К. Ультраструктура растительной . клетки. М., Мир, 1968, 453 с.

35. Чепинога О.П., Сквирская Е.Б. Метод определения РНКазы.

36. Arnold J.M.,Bauman L.F.,Makonen D. Physical and chemical kernel characteristics of normal and opaque-2 endosperm maize hybrids. Crop Sci.,1977,17,N3,p.362-368.

37. Baba T.,Arai Y.,Amano E. et al.Role of recessive amylose-ex-tender allele in starch biosynthesis of maize. Starch/Star-ke.1981,33,N3,P.79-83.

38. Baenziger P.S.,Glover D.V. Protein body size and distribution and protein matrix morphology in various endosperm mutants of Zea mays L. Crop Sci.,1977,17,^3,p.415-421.

39. Baruch D.V.,Meredith P., Jenkins L.D. et al.Starch granules in developing wheat kernels. Cereal Chem.,1979,56,N6, p.554 - 558.

40. Batra V.I.P.,Bansal H.C.,Mehta S.L. Carbohydrate composition of developing grains of the high-lysine barley mutant (Notch-2) and its parents(NP 113). J.Sci.Pood Agric.,1982,33,N1, p.30 - 34.

41. Bechtel D.V. »Pomeranz Y. Endosperm structure of barley isogenic lines. Cereal Chem.,1979,56,N5,p.446-452.

42. Blobel G.»Dobberstein B.Transfer of proteins across membrans. I.Presense of proteolytically processed and nonprocessed nascent immunoglobulin light chans on membrane-bound ribosomesof murine myeloma. J.Cell Biol. ,1975*67,N3,p.855-831.

43. Bollini R.,Chrispeels M.J. The rough endoplasmic reticulum is the side of reserve-protein synthesis in developing Phaseolus vulgaris cotyledons. Planta,1979,246,p.481-501.

44. Boyer C.D.,Daniels R.R.»Shannon J.C. Abnormal starch Granule formation in Zea mays L. endosperms possessing the amylose -extender mutant. Crop Sci.,1976,16,N2,p.298-501.

45. Burr B.,Burr F.A. Zein synthesis in maize endosperm "by polyribosomes attached to protein bodies. Proc.Nat.Acad.Sci.USA, 1976,73,p.515-519»

46. Burr B.,Burr F.A. ,Rubensteia I. et al. Purification and translation of zein messenger RNA from maize endosperm protein bodies. Proc.Nat.Acad.Sci.USA,1978,75,p.696-700.

47. Buttrose M.S. Ultrastructure of the developing wheat endosperm. Aust.J.Biol.Sci.,1963,16,p.305-317.

48. Buttrose M.S. Ultrastructure of barley aleurone cells as known by freeze-etching. Planta,1971,96,p.13-26.

49. Cameron-Mills V. The structure and composition of proteinbodies prified from barley endosperm by silica sol densitygradients. Carlsberg Res.Commun.,1980,45,p.557-576.

50. Cameron-Mills V. ,Wettstein D. Protein body formation in the developing barley endosperm. Carlsberg Res.Commun.,1980,45, p.577-594.

51. Campbell W.P. ,Lee J.W. ,0'Braien T.P. et al. Endosperm morphology and protein body formation in developing wheat grain. Aust.J.Plant Physiol.,1981,8,p.5-19.

52. Christianson D.D.,Khoo U.,Nielsen H.C. et al.Influence of opaque-2 and floury-2 genes on formation of proteins inparticulates of corn endosperm. Plant Physiol.,1974,53, N6,p.851-855.

53. Christianson D.D.»Nielsen H.C.,Khoo U. et al. Isolationand chemical composition of protein bodies and matrix proteins in corn endosperm. Cereal Chem. ,1969» 46, N4,p. 372-381.it I t t

54. Christianson D.D.»Stringfellow A.C.,Burdick D. et al . Endosperm fragmentation of ordinary and high lysine corn. -Cereal Chem.,1971,48,N5,p.558-567.

55. Craig A.,Goodchild D. J. »Hardman A.R. Structural aspects of protein accumulation in developing pea cotyledons.I.Qualitative and quantitative changes in parenchyma cell vacuoles. Aust.J.Plant Physiol., 1980,6,p.81-98.

56. Craig A.,Goodchild D.J.»Miller C. Structural aspects of protein accumulation in developing pea cotyledons.Ill.Three-dimensional reconstruction of vacuoles and protein bodies from serial sections. Aust.J.Plant Physiol.,1980,7,p.329.

57. Dalby A.,Tsai C.Y. Zein accumulation in phenotypically modified lines of opaque-2 maize. Cereal Chem. ,1974,51 ,N6,p.380.

58. Dierks-Ventling C. Storage proteins in Zea mays L.: interrelationship of albumins,globulins and zeins in the opaque-2 mutation. Eur.J.Biochem.,1981,120,N1,p.177-182.

59. Duffus C.M.,Murdoch S.M. Variation in starch granules sizedistribution and amylose content during wheat endosperm development. Cereal Chem.,1979>56,N5,p.427-429.

60. Fonzo N.Di. »Fornasari E. »Gentinetta E. etal. Protein and carbohydrates accumulation in normal ,opaque-2 and floury-2 maize. Ins Carbohydrate and protein synthsis.Ed.by Miflin B.J. ,I.S.C.»Rome »Italy,1978.

61. Gentinetta E.,Maggiore T.,Salamini F. etal. Protein studies in 46 opaque-2 strains with modified endosperm teture. -Maydica,1975»20,N3,p.145-164.

62. Gupta D.N.,Lodha M.L.,Mehta S.L. Metabolism of acetate -14

63. C in normal and opaque-2 Zea mays endosperm during development. Phytochem.,l976,15»N9»P»l379-l381.

64. Hagen G.»Rubenstein I. Two Dimensional gel analysis of the zein proteins in maize. - Plant Sci.Lett.,1980,19,p.217-223*

65. Harris N.»Boulter D. Protein body formation in cotyledons of developing cowpea ( Vigna unguiculata ) seeds. Ann.Bot., 1976,40, p. 739-744.

66. Jones R.A.,Larkins B.A.,Tsai C.A. Reduced synthesis of zein in vitro by a high lysine mutant of maize. Biochem.Biophys. Res. Commun.,1976,69,N2,p.404-410.• / 4 •

67. Jones R.A. ,Larkins B.A.,Tsai C.Y. Storage protein synthesis in maize.II.Reduced synthesis of a major zein component by the opaque-2 mutant of maize. Plant Physiol. ,1977,59,N4, p.525-529.

68. Joshi S.,LOdha M.L.,Mehta S.L. Regelation of starch biosynthesis in normal and opaque-2 maize during endosperm development, Phytochem.,1980,19,N11,p.2305-2309.

69. Juliano B.O. A simlified assay for milled rise amylose. -Cereal Sci.Today,1971,16,p.334.

70. Khoo U.,Wolf M.J. Origin and development of protein granules in maize endosperm. Amer.J.Bot. , 1970,57,N9,p#1042-1050.85»Kreis M., Doll H. Starch and prolamin level in singl and double high-lysine mutants. -Physiol.Plant,l980,48,p.l39-143.

71. Kyle D.Y.,Styles E.D. Development of aleurone and subaleuronelayers in maize. Planta,l978,l37,p.l85-193»it87«I/arkins B.A.,Dalby A. In vitro synthesis of zein-like protein by maize polyribosomes. Biochem.Biophys.Res.Commun. ,1975, 66,N3,p.1048-1054.

72. Larkins B.A.,Hurkman W.J. Synthsis and deposition of zein in protein bodies of maize endosperm. Plant Physiol.,1978, 62,N2,p.256-263.

73. Lee K.H.,Jones R.A.,Dalby A. et al. Genetic regulation of storage protein content in maize endosperm. Biochem.Ge-net.,1976,14,N7,p.641-650.

74. Lodha M.L.,Gupta H.0.,Ram P.C. et al . Some biochemical characteristics of modified phenotype strains of opaque-2 ( Zea mays L.). Curr.Sci.,1976,45,N8,p.285-286.

75. Lodha M.L. ,Ram P.C.,Gupta H.O. et al. Changes in protein,lysine and tryptophan in normal and opaque-2 Zea mays kernels during development. Ind.J.Exp.Biol.,1977,15,N11, p.1080-1082.

76. Loesh P.J.Jr.,Grindeland R.L.»Hammond E.G. et al. Evaluation of kernel hardness in normal and high lysine maize ( Zeamays L. ). Maydica,l977,22N4,p.l97-2l2.

77. Lorenzoni C.»Albery P.»Viotty A. et al Characteriaation of high and low protein strains of maize, In ; CEC EUR 6043-en »Luxemburg,1978,p.173-194.

78. Mashnenkov A.S. Effect of Sup W70 o2/o2 gene on fractional composition of endosperm proteins. - Maize Gen.Coop.News Lett.,1980,54,p.125-126.

79. Mertz E.T. Case histories of existing models. In :Genetic improvement of seed proteins .Wash, i Nat.Acad.Sci.D.C. ,1976, p.57-70.

80. Mertz E.T.,Bates L.S.,Nelson O.E.Mutant gene that changes protein composition and increases lysine content of maize endosperm. Science,1964,145,N3629,p.279-280.

81. Miflin B.J.»Burgess S.R.,Shewry P.R. The development of protein bodies in the storage tissues of seeds:subcellular separations of homogenates of barley,maize,and wheat endosperms and of pea cotyledons. J.Exp.Bot,,1981,32,N126,p.199-219.

82. Misra P.S. Corn endosperm mutants : amino acid composition and protein distribution. Ind.Gen.Plant Breed. ,1978,38,t 41. N2,p«l86-192.

83. Misra P.S.,Mertz E.T.,Glover D.V. Studies on corn proteins. 6.Endosperm proteins changes in single and double endospermmutants of maize. Cereal Chem. ,1975»N2,p. 161-166.

84. Misra P.S.,Mertz E.T.,Glover D.V. Studies on corn proteins. 7 Developmental changes in endosperm proteins of high-lysine matants, Cereal Chem.,1975,52,N5,p.734-739.

85. Misra P.S.,Mertz E.T.,Glover D.V. Studies on corn proteins. 8.Free amino acid content of opaque-2 double mutants. Cereal Chem.,1975,52,N6,p.844-848.

86. Paul is J.W., James C. ,Wall J.C. Comparison of glutelin pro4 # •teins in normal and high lysine corn endosperms. J.Agr. Food Chem.,1969»17,N4,p.1301-1305.

87. Pernollet J.-C. Protein "bodies of seeds : ultrastructure, "biochemistry»"biosynthesis and degradation. Phytochem., 1978,17,P.1472-1480.

88. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as electron opaque stain in electron microscopy. J.C ell Biol., 1963,17,p.208-213.

89. Ribeiral U.C. Effects of modified opaque-2 kernels on yild and protein quality and quantity of maize ( Zea maya L. ) -Diss.Abstr.Int.,B,1974,35 »N1,p.20-21.

90. Robutti J.L. ,Hoseney R.C.,Wassom C.E. Modified opaque-2 endosperm.II.Structure viewed with a scanning electron microscope. Cereal Chem.,1974,51,N2,p.173-180.

91. Santha I.M.,Mehta S.L. »Koundal K.R. et al. Photosynthesis and translocation rate in high lysine mutant barley. Phytochem. ,1982,21,H6,p.1183-1186.1..

92. H8.Sodek L.,Wilson C.M. Incorporation of leucine C and 14lysine C into protein in the developing endosperm of normal and opaque-2 corn. - Arch.Biochem.Biophys. ,1970, 140,N1,p.29-38.

93. Swift J.G. »Buttrose M.S. Protein bodies,lipid layers and amyloplasts in freeze etched pea cotyledons. - Planta, 1973,109,p.61-72.

94. Tallberg A. Protein and lysin content in high-lysine double-recessives of barley.I.Combinations between mutant 1508 and a Highproly back-cross. Hereditas,l98l,94,p.253-260.

95. Tanaka K. ,Sugimoto T.,0gawaM. et al . Isolation and characterisation of two types of protein bodies in the rice endosperm. Agric.Biol.Chem.,1980,44,N7,p.1633-1639.

96. Tsai C.Y. Early termination of zein accumulation in opaque-2 mutant. Maydica,1979,24,N3,p.129-140.

97. Tsai C.T.,Huber D.M.,Warren H.L. A proposed role of zein and glutelin as N sinks in maize. Plant Physiol. ,1980, 66,N5,p.330-333.

98. Tsai C.X. »Nelson O.E. Phosphorylases I and II of maize endosperm. Plant Physiol.,1968,43,N2,p.105-112.

99. Valentini G.,Soave C.,0ttaviano E. Chromosomal locstion of zein genes in Zea mays, Heredity,1979,42,N1,p.33.

100. Viotti A.,Sala E.,Alberi P. et al. RNA metabolism and polysome profiles during seed development in normal and opaque-2 maize endosperms. Maydica.1975,20,N3,p.111-124.

101. Wolf M.G. ,Khoo U.»Seckinger H.L. Subcellular structure of endosperm protein in high-lysine and normal com. Science,1967,157,P.556-557.

102. Wolf M.J.,Khoo U. ,Seckinger H.L. Distribution and subcellular structure of endosperm protein In varieties of ordinary and high-lysine maize. Cereal Chem. ,46,N3,p.253-263.

103. Yamaguchi M.,Kainuma K.,French D. servation of waxy maize starch. -p.249-260.

104. Electron microscopic ob-J.Ultrastr.Res.,1979,69,