Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов

Шевченко, Анна Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов"

На правах рукописи

Шевченко Анна Александровна

Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов

03.00.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2008

1 134

003171134

Работа выполнена на кафедре биохимии медицинского факультета Российского университета дружбы народов

Научный руководитель

доктор биологических наук, профессор Сяткин Сергей Павлович

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук, профессор Козельцев Владислав Львович доктор биологических наук Сыроешкин Антон Владимирович

Ведущая организация

ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится «18» июня 2008 года в 14 00 часов на заседании диссертационного совета Д 212 203 13 при Российском университете дружбы народов по адресу 117198, Москва, ул Миклухо-Маклая, д 8, медицинский факультет

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу 117198, Москва, ул Миклухо-Маклая, Д 6

Автореферат разослан « 16 » мая 2008 г

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 212 203 13

профессор

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

В процессе совершенствования методов лечения злокачественных новообразований человека на первый план в проблеме современной химиотерапии выдвигается разработка и направленный синтез новых высокоэффективных противоопухолевых агентов В последнее время арсенал применяемых в клинике противоопухолевых средств значительно расширился, однако большинство из них остаются малоэффективными и высокотоксичными

В настоящее время стало очевидным, что методология подходов разработки новых перспективных химиотерапевтических соединений направленного действия с заранее заданными свойствами должна базироваться на фундаментальных исследованиях особенностей метаболизма опухолевой клетки В этом отношении обмен полиаминов (ПА), являющихся эссенциальными факторами процессов клеточного роста и дифференцировки (Seiler N , 2003), с учетом активности трансглутаминазы (ТГ) может служить удобной и надежной мишенью для поиска и конструирования противоопухолевых агентов, в частности, в качестве специфических ингибиторов ТГ и регуляторов активности ключевых ферментов обмена ПА

Была высказана гипотеза о том, что аналоги ПА способны замещать эндогенные ПА в клетке в участках связывания Это приводит к нарушению функций внутриклеточных ПА (Porter, Bergeron, 1988) Исследования ограничились аналогами ПА алифатической структуры (Wallace H M, Fraser A V, 2003) Однако предварительные результаты показали, что онкопротекторной активностью могут обладать также гетероциклические соединения, в частности, бис-уридильные (Syatkin S Р , Fedorontchuk Т V , Lidack M Yu, et al, 1994), азафлуореновые и бензимидазольные (Сяткин С П, Березов Т Т, Фролов В А , и др , 2007) производные, а также пуриновые алколоиды (Beninati, Lentitni, 1998) Выбор данных веществ был обусловлен тем, что в их структуре можно выделить полиаминовые фрагменты Изучение характера и степени влияния названных веществ на ключевые ферменты обмена ПА позволит сделать предположение об их возможном канцерогенном или противоопухолевом действии

Целью исследования было изучение биологических (антипролиферативных и антиопухолевых) и биохимических свойств структурных аналогов ПА из числа гетероциклических соединений оригинального синтеза Задачи исследования

1 Изучение влияния производных бензимидазола и азафлуорена на основные показатели обмена ПА на бесклеточных тест-системах из тканей с повышенной клеточной пролиферацией

2 Определение действия производных анилина и диоксаборенинопиридина на скорость окислительного дезаминирования ПА на бесклеточной тест-системе из ткани регенерирующей печени крыс

3 Оценка антинеопластических свойств производных азафлуорена, пиперидона и метилксантина на клеточной модели из мышиной меланомы линии В16-F10

Научная новизна работы Проведено сравнительное исследование влияния ряда гетероциклических соединений оригинального синтеза на метаболизм ПА в бесклеточных тест-системах, на скорость пролиферации и на дифференцировку клеток мышиной меланомы линии B16-F10 Результаты экспериментов позволяют впервые выявить и рекомендовать для дальнейшего исследования биологических свойств ряд синтетических аналогов ПА в качестве потенциальных противоопухолевых средств

Практическая значимость работы.

Полученные результаты могут быть использованы для формирования базы данных при разработке программного обеспечения расчетов связи «структура-активность» для компьютерного моделирования химических структур с заданными биологическими свойствами, в частности, с антипролиферативным и противоопухолевым действием

Определены группы веществ из числа исследованных гетероциклических соединений, которые позволяют прогнозировать перспективные направления дальнейшего синтеза соединений с повышенным терапевтическим эффектом действия ч \

Выявлены вещества с выраженной противоопухолевой активностью, которые рекомендованы для дальнейших клинических исследований в области онкологии, и подлежат патентированию Положения, выносимые на защиту

1 Канцерогенные свойства производных диоксаборенинопиридина и бензимидазола Пролиферативные свойства производных пиперидона Антипролиферативные свойства производных анилина Онкопротекторные свойства и свойства индукторов клеточной дифференциации производных азафлуорена и ксантина

2 Перспективность дальнейших исследований производных азафлуорена и ксантина в качестве потенциальных противоопухолевых средств

3 Превосходство в эффективности действия производных азафлуорена над остальными исследованными гетероциклическими соединениями

Связь исследований с научной программой

Работа проведена в рамках темы НИР РУДН «Исследование структуры и биологической активности ферментов с антиопухолевой активностью» № 01 2 00 105254 и темы НИР № 030507-1-173 «Исследование противоопухолевых свойств новых биологически активных препаратов и создание отечественной иммунолипосомальной системы направленного транспорта лекарств»

Исследования, в рамках научной стажировки, проводились в лаборатории клеточной биологии Второго Римского университета «Тог Уег£а1а» под руководством профессора Симоне Бенинати (2006-2007гг), поддержанные грантом президента Российской Федерации в 2006 году

Апробация работы

Результаты работы были представлены на 9 конгрессах и конференциях, в том числе на 6 международных

Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на 9-ом Международном конгрессе по аминокислотам (Вена, Австрия, 2005), на 4-ой Международной конференции студентов и молодых ученых "Актуальные вопросы спортивной медицины, лечебной физической культуры, физиотерапии и курортологии" (Москва, 2005), на Итоговой конференции медицинского факультета Российского университета дружбы народов «Клинические и теоретические аспекты современной медицины» (Москва, 2005), на Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию самарского государственного медицинского университета «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» (Самара, 2005), на Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Перспектива-2006» (Нальчик, п Эльбрус, 2006), на 20-ом Международном конгрессе по биохимии и молекулярной биологии ГОВМВ и 11-ом РАОВМВ конгрессе (Киото, Япония, 2006), на Международной конференции «Роль полиаминов и их аналогов в раковых и других заболеваниях» (Тиволи, Рим, Италия, 2006), на 15-ой Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Гурзуф, 2007), на 10-ом Международном конгрессе по аминокислотам и белкам (Каллитея, Греция, 2007)

Публикации

По теме диссертации опубликовано 17 работ, в том числе 6 в рецензируемых журналах

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на_ машинописных страницах текста и состоит из введения,

обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований,

обсуждения результатов, заключения и выводов Список литературы включает_источника,

из них_зарубежных Работа содержит_рисунка и_таблиц

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В ходе эксперимента были проведены исследования биологических свойств производных метилксантина (табл 1) и биохимических свойств гетероциклических соединений оригинального синтеза А - производные бензимидазола и азафлуорена (табл 2), Б -производные анилина (табл 3), В - производные диоксаборенинопиридина (табл 4), Г -производные пиперидона (табл 5), Д-производные азафлуорена (выборочная группа) (табл 6)

Исследуемые вещества были получены в лаборатории синтеза гетероциклических соединений кафедры органической химии РУДН (зав кафедрой - профессор Варламов А В ), в виде порошков, а также в лаборатории клеточной биологии Второго Римского Университета «Тог Уе^а1а»

Все исследуемые вещества были растворены в соответствии с их физико-химическими свойствами до соответствующей конечной концентрации в пробах Приготовленные растворы хранились в плотно закрытых емкостях темного стекла в холодильнике

Таблица 1

Пуриновые алкалоиды - метилированные производные ксантипа_

Код веще ства Химическое название Код веще ства Химическое название

КФ 1,3,7-триметилксантин КОФЕИН 8-С1-ТФ 8-ХЛОРТЕОФИЛЛИН

ТБ 3,7-диметилксантин ТЕОБРОМИН 8-Вг-ТФ 8-БРОМТЕОФИЛЛИН

ТФ 1,3-диметилксантин ТЕОФИЛЛИН ТФ-7-Ац ТЕОФИЛЛИНА-7-АЦЕТАТ

Таблица 2

Производные бензимидазола и азафлуорена (группа А)

Код веще ства Химическое название Код веще ства Химическое название

1А 7-аминопиридо[1,2-а] бензимидазол 7А 9-[а-пиридиламинометилен]-4-азафлуорен

2А 7-нитропиридо[ 1,2-а]бензимидазол 8А 1-амино-9-фениламино-4-азафлуорен

ЗА 1 -амино-4-азафлуорен 9А 1 -амино-4-азафлуоренон-9

4А 1 -амино-4-азафлуоренол 10А 1,4-диазоацетонафтилено[ 1,2-Г]флуорантен

5А З-дицианометилен-4-азафлуорен 11А 2-метоксикарбонил-(|3-бензоилэтил)анилин

6А 9-[а-((3-гидроксютил)аминометилен]-4-азафлуорен 12А 5-(2-метоксикарбонил)фенил-а-фурфурол

Таблица 3 Производные анилина (группа Б)

Код веще ства Химическое название Код веще ства Химическое название

1Б З-аншшно-1 -фенилпропанон-1 7Б 3-(2-трифторметиланилино)-1-фенилпропанон-1

2Б 1 -фенил-3-(4-толуидино)-пропанон-1 8Б З-(З-хлоранилино)-1 -фенилпропанон-1

ЗБ 3-(4-хлоранилино)-1 -фенилпропанон-1 9Б З-(З-нитроанилино)-1 -фенилпропанон-1

4Б 3-(4-броманилино)-1-фенилпропанон-1 10Б Этиловый эфир 4-(3-оксо-3-фенилпропиламино) бензойной кислоты

5Б 3-(4-йоданилино)-1 -фенилпропанон-1 ИБ 3-(3-ацетиланилино)-1-фенилпропанон-1

6Б 3-(2-фторанилино)-1 -фенилпропанон-1

Таблица 4

Производные диоксаборепинопиридипа (группа В)._

Код вещества Химическое название

СоА1 6-Метил-2-(2-молил)-4,8а-дифенилпергидро[1,3,2]-диоксаборинино[5,4-с]пиридин

СоА2 6-Метил-2-(4-метоксифенил)-4,8а-дифенилпергидро[1,3,2]-диоксаборинино [5,4-с1пиридин

СоАЗ 6-Метил-2-(2,4,6-триметилфенил)-4,8а-дифенилпергидро[1,3,2]-диоксаборинино Г5,4-с1пиридин

СоА4 6-Метил-2-(3-трифторметилфенил)-4,8а-дифенилпергидро[1,3,2]-диоксаборинино [5,4-с1пиридин

СоА5 6-Метил-2-(2-тиенил)-4,8а-дифенилпергидро[1,3,2]-диоксаборинино[5,4-с]пиридин

СоАб 6-Метил-2,4,8а-трифенилпергидроГ1,3,21-диоксаборининоГ5,4-с1пиридин

СоА7 6-Метил-2-(3-фтор-4-хлорфенил)-4,8а-дифенилпергидро[1,3,2]-диоксаборинино Г5,4-с]пиридин

СоА8 6-Метил-2-(3-толил)-4,8а-дифенилпергидроГ1,3,21-ДиоксаборининоГ5,4-с1пиридин

СоА9 6-Метил-2-(4-толил)-4,8а-дифенилпергидроГ1,3,21-диоксаборининоГ5,4-с')Биридин

Таблица 5

Производные пиперидопа (группа Г)_

Код вещества Химическое название

1Г 17-метил-6,7,9,10,16,17,19,20-октагидро-18Я-16,20-эпиминодибензо [И,о][\,4,7] триоксациклогексадеции-18-он

2Г 6,7,9,10,16,17,19,20-октагидро-18Я-16,20- эпиминодибензо [И,о] [ 1,4,7] триоксациклогексадецин-18-он

ЗГ 17-(2-гидроксиэтил)-6,7,9,10,16,17,19,20- октагидро -18Я-16,20- эпиминодибензо |7г,о1Г1,4,71 триоксациклогексадецин-18-он

4Г 18-оксо-Л'-пиридин-2-ил-6,7,9,10- тетрагидро -18Я-дибензо [й,о][ 1,4,7] триоксациклогексадецин-17-карбоксамид

5Г Аг-(17,19-диметил-18-оксо-6,7,9,10,17,18-гексагидро-16Я- дибензо [/г,о][1,4,7] триоксациклогексадещщ-16-ил)-Л'-мстилапстамид

Таблица 6

Код веще ства Формула и название Код веще ства Формула и название

1Д О ж2 1 -амино-4-азафлуоренон-9 зд 1 -амино-2-бром-4-азафлуоренон-9

2Д О Вг 1 -бром-4-азафлуоренон-9 4Д м' ын2 0 1 -амино-9-фениламино-4-азафлуорен

I. Количественный анализ основных показателей обмена ПА в бесклеточных тест-системах.

В экспериментах использовали белых беспородных крыс - самцов массой 100 - 130 г, содержащихся на стандартном рационе вивария РУДН со свободным доступом к воде

Штамм гепатомы Г-27 был получен из Онкологического научного центра РАМН им H H Блохина Штамм гепатомы пассировался на крысах, как было описано ранее И H Швембергером (1970)

Частичная гепатэктомия была проведена по методике Higgms, Anderson (1931) под эфирной анестезией Для получения регенерирующей ткани печени животные усыплялись декапитацией через 12-15 часов после операции Извлекались малые дольки печени и перфузировали на льду физиологическим раствором с температурой 2~4°С, взвешивались и гомогенизировались Бесклеточные тест-системы представляли собой цитозольную фракцию (20 000 g X 20 мин при 4°С) 33 % гомогената ткани печени с добавлением необходимых компонентов Полученый супернатант 33% гомогената использовался для экспериментов по определению активности аминоксидаз (по методике в модификации С П Сяткина, 1981) и ОДК, уровня ПА методом ВЭЖХ (в модификации С П Сяткина и К А Голомазовой, 2006) Пробы предварительно бензоилировались бензоилхлоридом Расчет количеств бензоильных производных ПА проводился автоматически по компьютерной программе прибора «Милихром 5-3» с учетом предварительного анализа площадей пиков бензоильных производных путресцина (Пут), спермидина (Сд) и спермина (См) в растворах стандартов 2 Количественный анализ основных факторов пролиферации и дифференциации на клеточной модели.

Клеточные культуры. Клетки меланомы линии munno B16-F10 с высокой метастатической активностью были выращены в соответствии с условиями стандартного культивирования (Fidler IJ И Cifone MA, 1979) Использовалась питательная среда, состоящая из Dulbecco's modified Eagle's medium (D-MEM), ph 7 4, обогащенного 10% бычьей эмбриональной сывороткой FCS (Fetal Calf Serum), с добавлением L-глутамина 2 мМ и смеси пенициллина со стрептомицином (100 ед/мл пенициллина, 0,1 мг/мл стрептомицина) Клетки культивировались при температуре 37 °С, во влажной атмосфере, содержащей 5% COi Общее число клеток периодически высчитывалось по специальной методике с использованием микроскопа

Для экспериментов, проведенных в рамках данного исследования, были приготовлены исходные растворы веществ оригинального синтеза с заданной концентрацией в диметилсульфоксиде (ДМСО), подкисленном соляной кислотой Для обработки клеточной культуры были использованы растворы веществ с конечными концентрациями 5, 25 и 100 цМ, полученные путем разбавления материнских растворов В контрольные группы добавлялся только подкисленный раствор ДМСО с соответствующей конечной концентрацией В случае производных метилксантина, клетки обрабатывали водными растворами этих веществ с конечными концентрациями 50, 500 цМ и 1 мМ Такие конечные концентрации веществ были выбраны на основе данных литературы

Оиенка антипролифепативной активности и иитотоксичности тестируемых веществ Клетки мышиной меланомы линии B16-F10 размещались в специальных инкубаторах с 6 ячейками (до 105 клеток в каждой) и культивировались в стандартных условиях, как указано выше На следующий день в питательную среду к клеткам добавлялись растворы исследуемых веществ с заданной конечной концентрацией и инкубировались в течении 24, 48 и 72 часов По истечению данных интервалов времени, клетки смывались со дна ячеек инкубатора с помощью 1 мМ раствора ЭДТА, центрифугировали со скоростью 500 оборотов/мин в течение 10 минут на центрифуге Minifuge Т (Haereus, Sepatech) и подсчитывалось их количество по методике с использованием предметного стеклышка с нанесенной сеткой и оптического микроскопа

Процент пролиферации клеток, инкубированных с тестируемыми веществами, высчитывался следующим образом

Уровень пролиферации (%) = (№ обработанных веществом клеток / M контрольных клеток) х 100

Для оценки цитотоксичности веществ подсчитывалось количество клеток в присутствии красителя 1% Trypan Blue, после окрашивания погибших клеток в синий цвет, и вычислялось по формуле

Цитотоксичность (%) = (№ окрашенных клеток /№6 всех клеток) х 100 Определение внутриклеточных уровней ПА Хроматографический метод модифицировали специально для определения уровней ПА в лизате клеточной культуры мышиной меланомы линии B16-F10 Перед хроматографическим разделением свободные ПА переводились в соответствующие производные путем химической модификации о-фтальальдегидом (1 1) Депротеинезация клеточного лизата осуществлялась добавлением раствора перхлорной кислоты, с последующим центрифугированием (14 ООО оборотов/мин в течении 15 мин) и фильтрованием супернатанта Определение было выполнено на аппарате АКТАВASIC 10 HPLC (Amersham Pharmacia Biotech, Milan, Италия) Обратнофазовые разделения проводились при комнатной температуре в колонках LC-18 Supelcosyl column (150mm х 4,6mm, 3 |im) (Supelco, Milan, Италия)

Определение активности ТГ «in vivo» и «ш vitro» Клетки мышиной меланомы линии В16-F10 инкубировались вместе с [С]-метиламином (0 5 цл/мл MEM) (стандартная радиоактивность 38 15 mCi/mmole) и тестированными веществами с соответствующей конечной концентрацией в течении 48 и 72 часов Клетки лизировали, добавляя раствор ТХУ Осадок многократно промывался 10% раствором ТХУ и центрифугировали, повторяя промывание более б раз Радиоактивность в осадке и супернатанте измерялась на сцинцилляторе (Трио-carb 2100, PACKARD, производительность 70-90%)

Определение прямого действия ТГ проводилось следующим методом Лизат из клеток мышиной меланомы B16-F10 инкубировался с радиоактивным 3[Н]-Пут и раствором исследуемого вещества с заданной конечной концентрацией в течение 1 часа Реакция останавливалась в течении 30 минут на льду путем добавления в пробу смеси 10% раствора ТХУ с 200 мМ раствором метиламина Выпавший осадок промывался, и измерялась его радиоактивность согласно методу определения активности ТГ «in vivo», описанному выше Определение уровней меланина внутри клеток Клетки мышиной меланомы B16-F10 культивировались в стандартных условиях, как указано выше По истечению суток менялась среда, и они обрабатывались тестируемыми веществами Определения проводились через 48 и 72 часа Клетки смывались с помощью раствора 1 мМ ЭДТА, центрифугировались (500 об/мин, 10 мин), суспендировались в фосфатном PBS-буфере (состав буфера 150 мМ NaCl, 10 мМ трис-HCl, рН 7,5) и снова центрифугировались Осадок растворялся в 1 мл лизирующего буфера (состав буфера трис-HCl 50мМ, ЭДТА 2мМ, NaCl 150мМ, Tnton-X-100 1%, ингибиторы протеазы PMSF 200мМ, леупептин 1мг/мл, бестатин 1мг/мл, пепстатин А 1мг/мл, апротинин 1мг/мл и бензамидин 1М) Полученный раствор оставлялся на льду под действием ультразвуковой машины в течении 30-40 секунд После этого проба переносилась в эппендорф и центрифугировалась (12000 об/мин, 5 мин) Супернатант сохранялся для определения уровня белков (по методу Bradford, см ниже) К осадку добавлялся 1 мл смеси этанола и эфира (1 1) и раствор центрифугировался Промывание повторялось К конечному осадку добавлялся 1 мл 1N раствора NaOH, и проба оставлялась в термостате при температуре 37°С до полного растворения осадка Измерялась абсорбция полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 475 нм Концентрация меланина вычислялась по стандартному калибровочному графику

Количественный анализ белка Выполнялся по методу Брэдфорда (Bradford, 1976) Смешивались 200 |дл BIORAD (реакционная смесь), 790 цл воды и 10 цл клеточного осадка Через 10 минут, эта смесь переносилась в кювету, и считывалась абсорбция на спектрофотометре (UVIKON 860-spectra) при длине волны 595нм Концентрация белка в пробе рассчитывалась с помощью калибровочного графика, построенного для бычьей альбуминовой сыворотки, растворенной в 0 1N растворе NaOH, в качестве стандарта

Количество белка в пробах из исследуемых тканей для расчета удельной активности ПАО и ДАО определялась по Lowry (1951) в модификации С П Сяткина (1981)

Статистический анализ данных. Статистический анализ полученных результатов проводился с помощью ^критерия Стьюдента (Афифи, Эйзен, 1982). Различия считались достоверными, если коэффициент вероятности случайных событий был меньше Р < 0,05.

Результаты исследования

Исследовалось влияние производных метилксантина и гетероциклических веществ оригинального синтеза из групп А, Б, В, Г, Д на обмен ПА в тканях с повышенной клеточной пролиферацией. Тестирование проводилось на двух уровнях:

1. Бесклеточный. В качестве моделей для исследований использовались две бесклеточные тест-системы из тканей с повышенным митотическим индексом:

регенерирующая печень крыс - быстро пролиферирующая ткань с усиленным синтезом ПА за счет повышения активности ОДК и с нормальной активностью аминоксидаз (ПАО и ДАО), солидная гепатома крыс Г-27 - опухолевая ткань с повышенной «патологической» клеточной пролиферацией, характеризующейся нормальной или незначительно повышенной активностью ОДК и практически полной потерей активности аминоксидаз (ПАО и ДАО).

2. Клеточный. Тестирование проводилось на клеточной культуре мышиной меланомы линии В1б-П0 с высокой метастатической активностью.

1. Исследование биохимических свойств гетероциклических веществ оригинального

синтеза па бесклеточном уровне.

1.1. Тест-система из регенерирующей печени крыс.

Количественная оценка влияния синтетических аналогов ПА из исследуемых групп на обмен ПА в бесклеточной тест-системе из регенерирующей печени крыс определялась характером и величиной их действия на активность аминоксидаз - ПАО и ДАО. Полученные экспериментальные данные представлены на рисунках 1-3.

Примечание. Результаты представлены в виде М± ш для 9 измерений. Рис. 1. Влияние производных бензимидазола и азафлуорена (группа А) на скорость окислительного дезаминирования Пут, Сд и См в бесклеточной тест - системе из регенерирующей печени крыс.

Полученные результаты (рис. 1) свидетельствуют о том, что все исследованные вещества группы А, кроме 1А, существенно увеличивают распад См. Окисление Пут ускоряют соединения ЗА, 10А и 12А, а Сд - 4А, 7А, 9А и 10А.

Как видно из диаграммы (рис. 2), все протестированные соединения группы Б вызывали статистически достоверные изменения в скорости окислительного дезаминирования ПА.

Вещества

Примечание. Результаты представлены в виде М± т для 9 измерений.

Рис. 2. Влияние производных анилина (группа Е) на скорость окислительного дезаминирования Пут, Сд и См в бесклеточной тест - системе из регенерирующей печени

крыс.

Вещество 9Б ингибировало дезаминирование Сд, а вещество 11Б - Пут и См. Это позволяет прогнозировать у них канцерогенные свойства. Все остальные вещества проявили канцеростатические свойства, активируя процесс окислительного дезаминирования. Довольно резкая активация См наблюдалась при действии вещества 5Б. Наибольшее активирующее действие на окислительный распад всех трех ПА оказало вещество ЗБ.

Все тестируемые вещества группы В также вызывали статистически достоверные изменения активностей ДАО и ПАО (рис. 3).

Примечание. Результаты представлены в виде М± т для 9 проб Рис. 3. Влияние производных диоксаборенипопиридина (группа В) на скорость окислительного дезаминирования Пут, Сд и См в бесклеточной тест - системе из регенерирующей печени крыс.

Процесс окислительного дезаминирования Пут значительно ингибировался всеми тестируемыми веществами этой группы. Скорость окислительного дезаминирования Сд уменьшалась в 2 раза, См - уменьшалась незначительно или оставался неизменным (при

действии СоА2 и СоАЗ). Это позволило предположить наличие у всех исследуемых веществ данной группы канцерогенных свойств.

Влияние тестируемых веществ из группы А на обмен ПА в ткани регенерирующей печени оценивались по характеру и силе их действия на скорость синтеза ПА. Результаты этой серии опытов представлены в таблице 7 и на рис. 4.

Таблица 7.

Влияние производных бензимидазола и азафлуорена (группа А) на активность ОДК в бесклеточной тест - системе из регенерирующей печени крыс

Вещество Активность ОДК, нкат/мг белка Ингибирование, %

Контроль 12,96±0,07 0

1А 6,32± 0,05* 51,23

2А 7,25±0.08* 44,06

ЗА 4,26±0,06* 67,13

4А 8,33±0,07* 35,73

5А 9,23±0,05* 28,78

6А 10,98±0,07* 15,28

7А 8,00±0,06* 38.27

8А 3,61±0,08* 72,14

9А 5,02±0,06* 61,26

10А 2,18±0,06* 83,18

11А 10,00 ±0,08* 22,84

12А 7,56±0,06* 41,67

Примечание Результаты представлены в виде М± т для 9 проб *Статистически достоверные отличия от контроля, Р<0,05

Вешрства

Рис. 4. Влияние производных бензимидазола и азафлуорепа (группа А) на активность ОДК в бесклеточной тест - системе из регенерирующей печени крыс.

Следует отметить, что все исследованные вещества проявили ингибирующее действие на активность ОДК. Самыми активными оказались вещества 1А,ЗА, 8А и 10А.

Уровни ПА рассматривались как интегральные показатели изменения баланса скорости распада и синтеза ПА под влиянием тестируемых веществ. Результаты представлены на рис. 5.

11! 1.111

•У тГ «Г (?• «Г

1р|!ШМ

цДНДйшШш

лГ «Г <Г ^ л»- лГ

ЕЭ П/тресцж ЕЗОтермадин □ Отергумн |

Вещества

Примечание. Результаты представлены в виде М± гп для 9 проб

Рис. 5. Влияние производных беизимидазола и азафлуорена (группа А) на уровни ПА в бесклеточной тест - системе из регенерирующей печени крыс.

Все исследованные соединения вызывали снижение уровней Пут и ПА. Наиболее эффективными оказались ЗА, 8А и 10А. 1.2 Тест-система из гепатомы Г-27 крыс.

Количественная оценка влияния тестируемых соединений на скорость синтеза ПА в бесклеточной тест-системе из гепатомы Г-27 крыс проводилась аналогичным образом. Результаты этой серии опытов представлены в таблице 8 и на рис. 6.

Таблица 8.

Влияние производных беизимидазола и азафлуорена (группа А) на активность ОДК в бесклеточной тест - системе из гепатомы Г-27 крыс

Вещество Активность ОДК, нкат/мг белка Ингибирование, %

Контроль 15,79±0,06 0

1А 7,36± 0,06* 53,39

2А 8,64±0,08* 45,28

ЗА 5,32±0,07* 66,31

4А 9,21±0,05* 41,67

5А 10,58±0,06* 33,00

6А 12,36±0,08* 21,79

7А 9,18±0,06* 41,86

8А 4,75±0,07* 69,92

9А 6,32±0,07* 59,97

10А 3,95±0,06* 74,98

11А 12,07±0,09* 23,56

12А 8,39±0,07* 46,93

Примечание. Результаты представлены в виде М± т для 9 проб. *Статистически достоверные отличия от контроля, Р<0,05

Полученные данные указывают на то, что все исследованные вещества проявили ингибирующее действия на активность ОДК. Наиболее эффективными ингибиторами оказались вещества ЗА, 8А, 9А и 10А.

Примечание. Результаты представлены в виде М= ш для 9 проб. Рис. 6. Влияние производных бензимидазола и азафлуорена (группа А) на активность ОДК в бесклеточной тест - системе из гепатомы Г-27 крыс Все протестированные вещества группы А так же, как и в серии опытов с регенерирующей печенью, вызывали понижение уровней ПА (рис. 7). Соединения ЗА, 8А, 9А и 10А были наиболее активными.

I 40 Ё

5 30

I 20-

I 10-

Ш П/тресц ки ЕЗ Сперлодш □ Сперуин

«у & ^ ^

Примечание. Результаты представлены в виде М± т для 9 проб. Рис. 7. Влияние производных бензимидазола и азафлуорена (группа А) на уровни ПА в бесклеточной тест - системе из гепатомы Г-2 7 крыс.

2. Исследование биологических свойств тестируемых веществ оригинального синтеза и производных метилксантчна на клеточном уровне.

2.1. Влияние исследуемых веществ на пролиферацию клеток мышиной меланомы линии В16-Р10.

Оценка влияния тестируемых веществ на пролиферацию клеток мышиной меланомы линии В16-Р10 проводилась путем сравнения количества клеток после инкубации с одним из веществ с заданной концентрацией в течении 24, 48 и 72 часов с контрольными клетками (без обработки веществами). Результаты представлены на рис. 8-9.

После 24, 48 и 72 часов инкубации с веществами группы Г было отмечено в разной степени увеличение клеточного роста (рис. 8а). Вещества группы Д (рис. 86) существенно снижали скорость роста клеток мышиной меланомы В16-Р10. Самой высокой антипролиферативной

активностью обладало вещество 1Д в концентрации 25 цМ, а также ЗД в той же концентрации, после 48 и 72 часов инкубации.

300 1 250 200 -

г?

¿150 а

§■100 ■&

| 50

ЛН

]

а) б)

Примечание: Результаты представлены в виде М= т для 4 проб. Рис 8. Влияние производных ттеридона (группа Г) (а) и производных азафлуоуена (группа Д -выборочная) (б) на пролиферацию клеток мышиной меланомы линии В16-Р10. Все вещества группы производных метилксантина снижали уровень роста клеток мышиной меланомы В16-Р10 (рис. 9а). Наиболее активным оказался ТФ в концентрации 1мМ на протяжении всего периода инкубирования.

а) б)

Примечание: Результаты представлены в виде М± т для 4 проб.

Рис. 9. Влияние производных метилксантина (а) и производных ТФ (б) на пролиферацию клеток мышиной меланомы линии В16-Р10.

Производные ТФ также вызывали значительное снижение клеточного роста культуры клеток мышиной меланомы В16-Р10 (рис. 96). Более сильные антипролиферативные свойства показали вещества ТФ-7-Ац и 8-С1-ТФ в концентрации 1 мМ.

2.2. Цитотоксичность исследуемых веществ. Результаты исследования цитотоксичности тестируемых веществ суммированы в таблицах 9-18. Вещества, значения цитотоксичности которых не превышают 30%, оказывают допустимый токсический эффект на клетки. Посчитана также токсичность действия растворителя (раствора подкисленного ДМСО) на клетки, значение которого берется за контроль.

Таблица 9

Цитотоксичпость вещества № 1Г в концентрациях 5 рМ и 100 рМ после 24, 48 и 72 часов _инкубации с клетками мышиной мелапомы линии В1б-Р10_

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

Коппцю чь+Д МСО 25,81 % 19,02 % 17,53 %

5рМ 26,30 % 18,92 % 19,04 %

ЮОиМ 28,91 % 25,11 % 25,31 %

Таблица 10

Цитотоксичпость вещества № 2Г в концентрациях 5 рМ и 100 рМ после 24, 48 и 72 часов _инкубации с клетками мышиной мелапомы линии В16-Р10_

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

Контро гь 30,30 % 9,39 % 11,17 %

Коитро и,~.1\1С() 32,93 % 12,21 % 14,46 %

5н V 16,33% 17,76 % 19,05 %

ЮОиМ 18,20 % 15,80% 13,33 %

Таблица 11

Цитотоксичпость вещества М ЗГ в концентрациях 5 рМ и 100 рМ после 24, 48 и 72 часов инкубации с клетками мышиной мелапомы линии В16-П0_

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

кон трон• 68,03 % 36,20 % 32,71 %

Контроль-~ДМСО 69,23 % 34,18 % 35,80 %

5цМ 61,70% 21,47 % 21,72 %

тым 45,20% 16,50% 17,07 %

Цитотоксичность веществ данной группы имеет достаточно низкие значения для обеих концентраций и всех трех интервалов времени инкубации веществ с культурой клеток мышиной меланомы линии В16-Р10

Таблица 12

Цитотоксичпость вещества Же 1Д в концентрациях 5 рМ, 25 рМ и 100 р.М после 24, 48 и

72 часов инкубации с клетками мышиной мелапомы линии В16-Р10.

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

Контро 1ь+.'ШСО 19,68 % 21,70 % 15,05 %

5и М 18,05 % 17,11 % 15,44 %

25и \1 25,30 % 20,37 % 16,53 %

ЮОиМ 33,61 % 31,61 % 32,86 %

Таблица 13

Цитотоксичность вещества № 2Д в концентрациях 5 рМ и 25 рМ после 24, 48 и 72 часов инкубации с клетками мышиной мелапомы линии В16-П0_

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

Контро и," 1 М( О 8,1 % 9,6 % 7,6 %

ЧиМ 11,4 % 12,1 % 8,2 %

25ц М 21,4 % 22,8 % 21,4%

Таблица 14

Цитотоксичность вещества Же ЗД в концентрациях 5 рМ и 25 рМ после 24, 48 и 72 часов инкубации с клетками мышиной меланомы линии В16-П0_

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

Контро ¡ьЬ11 /СО 15,2 % 9,2 % 12,0 %

17,5 % 8,3 % 9,6 %

25цМ 23,8 % 18,2 % 11,8 %

Таблица 15

Цитотоксичностъ вещества № 4Д в концентрациях 5 цМ и 100 ¡иМ после 24, 48 и 72 часов инкубации с клетками мышиной меланомы линии В16-П0_

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

Контроль 12,53 % 22,83 % 31,26 %

Контра ih+JMC'O 15,24 % 21,30 % 32,85 %

SfiM 19,28 % 23,54 % 36,63 %

lOOfiM 20,85 % 38,20% 43,50 %

Вещества группы Д проявили также низкие показатели цитотоксичности во всех случаях, кроме вещества 4Д, где токсичность превышала предельно допустимые значения

Таблица 16

Цитотоксичностъ 8-С1-ТФ в концентрациях 50 ¡иМ, 500 ¡иМ и 1 мМ после 24, 48 и 72 часов

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

Коптро /ь+ЛМСО 17,3 % 3,7 % 2,7 %

SOitM 6,5 % 3,0 % 2,1 %

500/tM 12,2 % 8,3 % 5,2 %

1м M 11,1 % 7,0 % 5,8 %

Таблица 17

Цитотоксичностъ 8-Вг-ТФ в концентрациях 50 рМ, 500 рМ и 1 мМ после 24, 48 и 72 часов инкубации с клетками мышиной меланомы линии В16-Р10_

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

Контро и,+ ПГСО 32,0 % 7,2 % 3,7 %

50иМ 26,6 % 18,1 % 7,9 %

SOOfiM 24,0 % 8,9 % 11,7 %

1мМ 37,5 % 26,6 % 16,1 %

Таблица 18

Цитотоксичностъ ТФ-7-Ац в концентрациях 50 ftМ, 500 рМ и 1 мМ после 24,48 и 72 часов

Время инкубации 24 ч 48 ч 72 ч

Коптро ih+Д ЧСО 9,5 % 6,7 % 4,3 %

50иМ 9,7 % 3,4 % 6,6 %

S00fi\r 16,0 % 8,4 % 6,3 %

1м V/ 27,0 % 13,6 % 8,2 %

Производные ТФ оказывали незначительное токсическое влияние на клетки мышиной меланомы B16-F10 Наиболее цитотоксичным проявило себя вещество 8-Вг-ТФ

2 3 Влияние испытуемых веществ на уровень образования полиаминов в клетках мышиной меланомы B16-F10

Определение уровней ПА в контрольных клетках мышиной меланомы B16-F10 и в клетках, обработанных тестируемыми веществами в концентрациях с максимально проявленным антипролиферативным эффектом в пределах допустимой цитотоксичности, проводилось путем обратнофазного хроматографического разделения (ВЭЖХ), как описано выше в разделе «Материалы и методы»

На рис 10-13 показаны хроматограммы, полученные соответственно для смеси стандартов (спермин SPM, спермидин SPD, путресцин PUT, диаминоктан DAO), для контрольных клеток мышиной меланомы B16-F10 и для клеток, инкубированных с веществами (веществом 1Д в концентрации 25 цМ) в течении 48 и 72 часов

-1 PUT I

f—

DAO

Рис. 10 Хроматограмма смеси 4 стандартов спермина (SPM), спермидина (SPD), путресцина(РиТ) и диаминоктана (DAO)

и\1

БРО

SPM

рит

DAO

Рис 11. Хроматограмма ПА, экстрагированных из контрольных клеток мышиной меланомы

В16-Р10.

Рис 12 Хроматограмма ПА, экстрагированных из клеток мышиной меланомы В16-Р10, инкубированных с веществом 1Д в концентрации 25 /лМ в течении 48 часов

Рит

DAO

Рис.13 Хроматограмма ПА, экстрагированных из клеток мышиной меланомы В16-Р10, инкубированных с веществом 1Д в концентрации 25 рМв течении 72 часов

На хроматограммах контрольных (рис.11) и обработанных веществом 1Д (рис. 12-13) клеток уровень путресцина был ниже предельной концентрации, регистрируемой прибором в используемым нами методом.

С другой стороны, площадь пиков спермина (SPM) и спермидина (SPD) в клетках, инкубированных с веществом 1Д в концентрации 25 (iM в течении 48 и 72 часов, заметно уменьшилась по сравнению с пиками контрольных клеток. Уровни ПА в контрольных и обработанных веществами клетках вычислялись по калибровочному графику концентраций стандартов и пересчитывались на количество белка в каждой пробе.

На диаграмме (рис. 14) суммированы полученные результаты. Уровни ПА, выраженые в нмоль/мг белка, даны в зависимости от времени инкубации.

Примечание: Результаты представлены в виде М- гп для 3 проб.

Рис.14. Уровни См и Сд в контрольных клетках мышиной меланомы В16-Р 10 и в клетках, инкубированных с веществом 1Д в концентрации 25 ^М в течении 48 и 72 часов.

Количество См в клетках под влиянием вещества 1Д в концентрации 25 цМ снизилось на 40,7% после 48 часов инкубации и на 41,1% после 72 часов по сравнению с его уровнем в контрольных клетках.

Вещество 1Д вызвало понижение уровней Сд на 47%, действуя 48 часов, и на 57,3% после 72 часов действия по сравнению с контролем.

Следуя той же методике, проводилось исследование лизата клеток мышиной меланомы В16-Р10, предварительно инкубированных в течении 48 и 72 часов с 1 мМ растворами ТФ и КФ и производных ТФ. Аналогичным способом были посчитаны уровни ПА в пробах. Результаты представлены на рис. 15.

72ч

а) б)

Примечание: Результаты представлены в виде М± т для 3 проб. Рис. 15. Уровни ПА в контрольных клетках мышиной меланомы В16-Р 10 и в клетках, инкубированных с ТФ и КФ в концентрациях 1 мМ в течении 48 (а) и 72 часов (б).

Диаграммы, отражающие результаты хроматографического измерения содержания ПА в клетках мышиной меланомы В16-Р 10, предварительно инкубированных с 1 мМ растворами ТФ и КФ в течение 48 (рис. 15а) и 72 часов (рис. 156), показывают наличие незначительного

понижение уровней ПА. Снижение уровней См и Сд наблюдалось лишь в течение 48 часов воздействия веществ. Далее количество ПА в клетках практически не менялось.

72ч

I Сим

3 Спд

а) б)

Примечание: Результаты представлены в виде М± ш для 3 проб.

Рис. 16. Уровни ПА в контрольных клетках мышиной меланомы В16-Р10 и в клетках, инкубированных с производными ТФ в концентрациях 1 мМв течении 48 (а) и 72 часов (б).

Производные ТФ в концентрации 1мМ также оказывали противоопухолевое влияние, понижая уровни ПА (рис. 16). Самым активным образом проявил себя 8-Вг-ТФ, уменьшая уровень См более, чем на 40% и Сд более, чем в два раза, после 48 и 72 часов инкубации клеток меланомы с веществами. Хлор-производное (8-С1-ТФ) в той же концентрации было менее активным, чем 8-Вг-ТФ. Тем не менее, оно намного превышало онкопротекторную активность ТФ, вызывая существенное снижение содержания См и Сд, после 48 и 72 часов воздействия на клетки.

2.4. Влияние испытуемых веществ на активность ТГ в клетках мышиной меланомы В16-

F10.

I 48ч I 72ч

Примечание: Результаты представлены в виде М- m для 5 проб.

Рис. 17. Влияние вацеств группы Д на активность ТГ «in vivo» в клетках мышиной меланомы

B16-F10.

Из диаграммы (рис. 17) видно, что все три вещества группы Д увеличивали активность ТГ, после 72 часов инкубирования с клетками мышиной меланомы B16-F10. При этом, после 48 часов активировало фермент лишь 1Д, остальные два вещества проявили свойства ингибиторов ТГ.

Следует отметить, что все три производных метилксантина являются активаторами ТГ. При этом ТФ наиболее эффективно действовал на ТГ, удваивая ее активность (рис. 18а).

По сравнению с ТФ его производные почти в два раза увеличивали активность ТГ, после 72 часов инкубирования с клетками мышиной меланомы B16-F10 (рис. 186). Интересно, что после 48 часов инкубации особого эффекта на активацию ТГ эти вещества не оказывали.

а)

1 48ч 172ч

Контроль ТФ

^ 48ч В 72ч

Контроль ТФ

8-С1-ТФ 8-Вг-ТФ

б)

Примечание: Результаты представлены в виде M=t ш для 5 проб.

Рис. 18. Влияние производных метилксантина (а) и производных ТФ (б) на активность ТГ «in vivo» в клетках мышиной меланомы BI6-F10. Исследовали влияние веществ группы Д, производных метилксантина и ТФ на активность ТГ «in vitro». Ни одно из протестированных веществ прямого действия на ТГ активность не оказало.

2.5. Влияние испытуемых веществ на уровень образования меланина в клетках мышиной меланомы B16-F10.

На рис. 19 показаны уровни образованного меланина в клетках мышиной меланомы В16-П0, после 48 и 72 часов инкубации с веществами группы Д в концентрации 25 цМ.

1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100

П.

I 48ч i 72ч

Примечание: Результаты представлены в виде М± m для 5 проб.

Рис. 19. Влияние веществ группы Д на уровень образования меланина в клетках мышиной

меланомы В16-Р10.

По сравнению с контрольными клетками, в клетках, обработанных веществами 2Д и ЗД, уровень меланина практически не изменялся после 48 часов инкубации и незначительно увеличивался, после 72 часов инкубации. Резкое и многократное возрастание количества выработанного меланина наблюдалось у клеток, обработанных веществом 1Д.

Значительное влияние на уровень образования меланина в клетках мышиной меланомы В16-Р10 оказали производные метилксантина в концентрации 1 мМ (рис. 20а), повышая его во много раз уже через 48 часов инкубации. Наиболее активным образом из этой группы веществ проявил себя ТФ.

Производные ТФ в концентрации 1 мМ резко увеличивали уровни образования меланина в клетках лишь через 72 часа инкубации (рис. 206), это говорит об их относительно замедленном действии по сравнению с ТФ.

Рис. 20. Влияние производных метилксантша (а) и производных ТФ (б) на уровень образования меланина в клетках мышиной меланомы В16-Р10.

Полученные результаты по количественной оценке влияния тестируемых веществ на активность ТГ и уровни меланина подтверждают предположение о том, что антипролиферативный эффект может быть вызван посредством индукции клеточной дифференциации.

2.6. Влияние тестируемых веществ на диффереииировку клеток мышиной меланомы

В16-Р10

На фотографиях, сделанных оптическим микроскопом (рис. 21), можно наблюдать появление видимых морфологических изменений в клетках, обработанных раствором вещества 1Д. В клетках, инкубированных 48 часов с веществом 1Д 25 цМ, четко заметны признаки дифференцировки - появление цитозольных отростков, схожих с дендритами нейронов (эмбриональное происхождение этой ткани - нейроэктодерма). Внешне клетки выглядят намного темнее по сравнению с контролем, что объясняется повышенной выработкой в них меланина.

а) б)

Рис. 21. Клетки меланомы В16-Р10: а) контроль; б) после 48 часов действия вещества 1Д при

концентрации 25рМ.

При инкубировании клеток мышиной меланомы В16-Р10 с 1мМ раствором ТФ одновременно с торможением скорости деления и роста клеток наблюдалось начало дифференцировки клеток, что подтверждалось появлением отростков, похожих на дендриты и аксоны нейронов, а также заметное потемнение клеток (рис. 22). Это говорит об увеличении уровня внутриклеточного меланина.

: ■, f.....*

Рис.22. Влияние ТФ на дифференцировку клеток мышиной меланомы В16-Р10: а) контрольные клетки мышиной меланомы В16-Р10; б) дифференцированные клетки мышиной меланомы В16-Р10 под действием 1мМ ТФ.

ВЫВОДЫ

1. Производные диоксаборенинопиридина и бензимидазола снижают скорость окислительного дезаминирования путресцина и полиаминов, проявляя тем самым канцерогенные свойства.

2. Производные анилина существенно ускоряют окислительный распад путресцина и ПА, проявляя тем самым потенциальные антипролиферативные свойства.

3. Производные азафлуорена на бесклеточном уровне (тест-системы из регенерирующей и опухолевой ткани) демонстрируют потенциальные онкопротекторные свойства, существенно снижая уровни и скорость синтеза путресцина и полиаминов, при этом существенно повышая скорость окислительного дезаминирования этих веществ.

4. Наиболее активные производные азафлуорена (1-амино-4-азафлуоренон-9; 1-бром-4-азафлуоренон-9; 1-амино-2-бром-4-азафлуоренон-9; 1-амино-9-фениламино-4-азафлуорен) на клеточном уровне (клетки мышиной меланомы B16-F10) также проявляют противоопухолевые свойства, снижая скорость пролиферации (на 25-70%) и внутриклеточные уровни полиаминов (на 40-60%). Эти вещества увеличивают активность трансглутаминазы (в 1,5-3 раза) и индуцируют выработку меланина (в 1,5-8 раз), вызывают морфологические изменения в клетках (появление цитозольных отростков), демонстрируя свойства индукторов клеточной дифференциации.

5. Производные пиперидона проявляют пролиферативные свойства, увеличивая скорость клеточного роста (клетки мышиной меланомы B16-F10) в 1,5-2 раза.

6. Ксантинокые производные замедляют скорость клеточной пролиферации (клетки мышиной меланомы B16-F10) на 20-60%, снижают внутриклеточные уровни полиаминов на 30-40%, увеличивают активность трансглутаминазы в 1,5-2 раза, активируют выработку меланина в 3-5 раза, вызывают морфологические изменения в клетках (появление цитозольных отростков), проявляя онкопротекторные свойства.

7. Ни одно из протестированных производных азафлуорена и ксантина не оказало прямого действия на активность трансглутаминазы «in vitro».

8. Наиболее перспективным из тестированных веществ с точки зрения противоопухолевых свойств является 1-амино-4-азафлуоренон-9 в конечной концентрации 25 цМ. Это вещество эффективнее по всем использованным при тестировании показателям, чем наиболее активные производные пуриновых алкалоидов в концентрации! мМ.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1 Golomazova К, Syatkin S , Svinarev V, Fedoronchuk Т, Shevchenko A Carcinogenic and Carcmostatic Properties of Psychotropic Medications // - Ammo Acids - Springer Wien New York, Vol 29(1), 2005 - P 20-21

2 Шевченко A A, Голомазова К А Канцерогенные свойства психотропных препаратов // Материалы четвертой международной конференции студентов и молодых ученых "Актуальные вопросы спортивной медицины, лечебной физической культуры, физиотерапии и курортологии" - М РГМУ, Апрель 2005 г - С 45-46

3 Голомазова К А, Шевченко А А Пролиферативные свойства синтетических аналогов полиаминов // Материалы четвертой международной конференции и молодых ученых "Актуальные вопросы спортивной медицины, лечебной физической культуры, физиотерапии и курортологии" -М РГМУ, Апрель 2005 г -С 27-29

4 Шевченко А А , Голомазова К А Влияние структурных аналогов полиаминов на скорость окислительного дезаминирования путресцина, спермидина и спермина в ткани регенерирующей печени крыс // Материалы итоговой научной студенческой конференции -М РУДН, Апрель 2005 г - С 109-110

5 Сяткин С П , Голомазова К А , Левов А Н , Федорончук Т В , Свинарев В И , Шевченко А А, Березов Т Т Канцерогенные и канцеростатические свойства производных бензимидазола и азафлуорена как структурных аналогов полиаминов // Материалы межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию самарского государственного медицинского университета «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» - Самара , июнь 2005 г - С 389-393

6 Шевченко А А Доклинические исследования структурных аналогов полиаминов как потенциальных противоопухолевых агентов // Материалы всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Перспектива-2006» - Нальчик Каб -Балк ун-т , Апрель 2006 - С 87-91 (0,4 п л)

7 Berezov Т, Syatkin S ,Golomazova К, Levov А ,Fedoronchuk Т, Svmarev V, Shevchenko А Carcinogenic and carcmostatic properties of benzimidazole and azafluorene derivatives as a polyammes structural analogs // The 20th IUBMB International Congress of Biochemistry and Molecular Biology and 11th FAOBMB Congress, Kyoto, Japan (June 2006) - P 188

8 S P Syatkin, К A Golomazova, A Levov, T V Fedoronchuk, VI Svmarev, A A Shevchenko, T T Berezov Quantitative evaluation of benzimidazole and azafluorene derivatives influence on polyamme metabolism as potential antitumor agents // International Conference on the Role of Polyammes and their Analogs in Cancer and Other Diseases, Tivoli (Rome), Italy (September, 2006)-P 231-232

9 V A Frolov, S P Syatkin, К A Golomazova, V I Svmarev, A A Shevchenko, T V Fedoronchuk The influence of psychotropic medications on polyammes metabolism in tissues with high rate of proliferation // International Conference on the Role of Polyammes and their Analogs m Cancer and Other Diseases, Tivoli (Rome), Italy (September, 2006) - P 217-218

10 Lentmi A, Provenzano B, Caraglia M, Shevchenko A, Abbruzzese A and Benmati S Impairment of the metastatic activity of melanoma cells by transglutaminase-catalyzed incorporation of polyammes into lammin and Matngel Ammo Acids, Volume 34, Number 2, 2008 (Printed m The Netherlands) - P 251-256

11 Натрошвили H Г, Неборак E В, Шевченко А А Влияние производных диоксаборининопиридина на скорость окислительного дезаминирования полиаминов // Итоговая конференция студенческого научного общества медицинского факультета РУДН «Клинические и теоретические аспекты современной медицины», 24 - 27 апреля 2007 г / Материалы конференции - М РУДН, 2007 - с 97

12 Неборак ЕВ, Натрошвили Н Г Шевченко А А Окислительное дезаминирование путресцина, спермидина и спермина на фоне действия аналогов полиаминов анилинового ряда //Итоговая конференция студенческого научного общества медицинского факультета

РУДН «Клинические и теоретические аспекты современной медицины», 24 - 27 апреля 2007 г / Материалы конференции - М РУДН, 2007 - с 98

13 Сяткин С П , Фролов В А, Голомазова К А , Левов А Н , Федорончук Т В , Свинарев В И, Шевченко А А, Неборак К В, Натрошвили Н Г Применение окислительного дезаминирования полиаминов и путресцина при мониторинге канцерогенных и противоопухолевых свойств производных бензимидазола и азафлуорена // Материалы XV международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии», 31 мая-10 июня, 2007, Гурзуф -2007 - С 92-94

14 A Shevchenko, S Bemnati A new synthetic polyarmne analogue reduces B16-F10 melanoma cells proliferation by the enhancement of transglutaminase activity // 10th International Congress on Ammo Acids Kallithea, Greece (August 20-25, 2007) - Amino Acids - Springer Wien New York, Vol 33,2007 - P 45

15 SP Syatkin, К A Golomazova, TV Fedoronchuk, AN Levov, TT Berezov, VI Svinarev, A A Shevchenko, N G Natroshvili, E V Neborak Prediction of antiproliferative and carcinogenic properties of benzimidazole and azafluorene derivatives as synthetic structural analogs of polyammes // 10th International Congress on Amino Acids Kallithea, Greece (August 20-25, 2007) - Amino Acids - Springer Wien New York, Vol 33, 2007 - P 43

16 T T Березов, В А Фролов, С П Сяткин, К А Голомазова, Т В Федорончук, А А Шевченко, А Н Левов Прогноз возможных онкопротекторных и канцерогенных свойств структурных аналогов полиаминов из группы производных бензимидазола и азафлуорена Вестник РУДН -2007 - № 6 - С 331-335

17 С П Сяткин, Т Т Березов, В А Фролов, К А Голомазова, А Н Левов, А А Шевченко, Т В Федорончук Прогноз канцерогенных и противоопухолевых свойств производных бензимидазола и азафлуорена Вестник РУДН - 2007 - № 6 - С 70-73

1 Левову АН (кхн, доцент) - синтезировал и предоставил для исследования вещества оригинального синтеза из числа гетероциклических производных бензимидазола, азафлуорена, анилина, диоксаборенинопиридина и пиперидона

2 Симоне Бенинати - профессору, зав кафедрой клеточной биологии Второго Римского Университета «Тог Уе^а1а» за предоставленную возможность проведения научных исследований в рамках проекта в период прохождения зарубежной научной стажировки (20062007), финансированной президентом Российской Федерации

Список сокращений

ПА - полиамины ТГ - трансглутаминаза ТФ - теофиллин КФ - кофеин

8-Вг-ТФ - 8-бромтеофиллин

8-С1-ТФ - 8-хлортеофиллин

ТФ-7-Ац - теофиллин-7-ацетат

D-MEM - Dulbecco's modified Eagle's medium

(питательная среда)

FCS - Fetal Calf Serum (бычья эмбриональная сыворотка)

ДМСО - диметилсульфоксид ТХУ - трихлоруксусная кислота

PBS - фосфатный буфер

BSA - Bovine Serum of Albumine (бычья

альбуминовая сыворотка)

ПАО - полиаминоксидаза

ДАО - диаминоксидаза

ОДК - орнитиндекарбоксилаза

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная

хроматография

См, SPM - спермин

Сд, SPD - спермидин

Пут, PUT - путресцин

DAO - диаминоктан

Благодарности

Шевченко Анна Александровна

Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов

Данная работа посвящена исследованию антипролиферативных и противоопухолевых свойств структурных аналогов полиаминов из группы производных метилксантина и веществ оригинального синтеза Исследование проводилось на бесклеточных моделях, полученных из регенерирующей печени крыс и гепатомы Г-27 крыс, и на клеточных культурах мышиной меланомы B16-F10 В ходе эксперимента было оценено влияние указанных выше веществ на активность аминоксидаз, орнитиндекарбоксилазы, трансглутаминазы, антипролиферативую активность, на уровни полиаминов и меланина в бесклеточных тест-системах и в клетках

Shevchenko Anna Alexandrovna

Carcinostalic and carcinogenic properties of synthetic polyamine analogues.

This work is dedicated to investigation of antiproliferative and antitumor properties of structural analogues of polyamines - methilxantmes and original synthetic substances The investigation was earned out on non-cellular models, obtained from regenerating rat liver and rat hepatoma H-27, and on the cell culture of murine melanoma line B16-F10 Influence of cited above substances on ammeoxydase, ormthinedecarboxylase, transglutaminase and antiproliferative activity, levels of polyamines and melanin was assessed in the non-cellular testing models and in the cells

Подписано в печать 16 05 08 Формат 60x84/16 Тираж!00экз Уел печ л 1,5 Заказ476

Типография Издательства РУДН 117923, ГСП-1, г Москва, ул Орджоникидзе, д 3

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шевченко, Анна Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Химическое строение и распространение полиаминов.

2. Метаболизм полиаминов.

2.1. Пути синтеза полиаминов и роль орнитиндекарбоксилазы.

2.1.1. Орнитиндекарбоксилаза.

2.1.2. 8-аденозил-Ь-метиониндекарбоксилаза.

2.1.3. Спермидин- и сперминсинтазы.

2.2.Пути распада полиаминов и роль аминоксидаз.

2.2.1. Диаминоксидаза.

2.2.2. Полиаминоксидазы.

2.3. Роль трансглутаминазы в обмене полиаминов.

3. Пролиферация клеток.

3.1. Влияние полиаминов на деление и рост клеток.

3.1.Г. Полиамины в нормальных пролиферирующих клетках.

3.1.2.Полиамины в регенерирующей и эмбриональной ткани животных.

3.1.3. Полиамины и опухолевый рост.

3.2. Неоплазии.

3.2.1.Меланом а.

3.2.2.Мелани н.4Г

3.2.3 .Меланогенез.

4. Дифференциация клеток.

5. Действие аналогов полиаминов и метиленовых производных ксантина на метаболизм полиаминов.

Резюме.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов"

Актуальность проблемы. В процессе совершенствования методов лечения злокачественных новообразований человека на первый план в проблеме современной химиотерапии выдвигается разработка и направленный синтез новых высокоэффективных противоопухолевых агентов. В последнее время арсенал применяемых в клинике противоопухолевых средств значительно расширился, однако большинство из них остаются малоэффективными и высокотоксичными.

В этом отношении обмен полиаминов (ПА), являющихся эссенциальными факторами процессов клеточного роста и дифференцировки [143, 255], с учетом активности трансглутаминазы (ТГ) [193] может служить, удобной и надежной мишенью для поиска и конструирования противоопухолевых агентов, в частности, в качестве специфических ингибиторов ТГ и регуляторов активности ключевых ферментов обмена ПА.

Была высказана гипотеза о том, что аналоги ПА способны замещать эндогенные ПА в клетке в участках связывания. Это приводит к нарушению функций внутриклеточных ПА [234]. Исследования ограничились аналогами ПА алифатической структуры [270]. Однако предварительные результаты показали, что онкопротекторной активностью могут обладать также гетероциклические соединения, в частности, бис-уридильные [266], азафлуорено-вые и бензимидазольные [29] производные, а также алкалоиды [207]. Выбор данных веществ был обусловлен тем, что в их структуре можно выделить по-лиаминовые фрагменты. Изучение характера и степени влияния названных веществ на ключевые ферменты обмена ПА позволит сделать предположение об их возможном канцерогенном или противоопухолевом действии.

Цель исследования. Изучение биологических (антипролиферативных и антиопухолевых) и биохимических свойств структурных аналогов ПА из числа гетероциклических соединений оригинального синтеза.

Задачи исследования

1. Изучение влияния производных бензимидазола и азафлуорена на основные показатели обмена ПА на бесклеточных тест-системах из тканей с повышенной клеточной пролиферацией.

2. Определение действия производных анилина и диоксаборенинопи-ридина на скорость окислительного дезаминирования ПА на бесклеточной тест-системе из ткани регенерирующей печени крыс.

3. Оценка антинеопластических свойств, производных азафлуорена, пиперидона и метилксантина на клеточной модели из мышиной меланомы линии B16-F10.

Научная новизна работы. Проведено сравнительное исследование влияния ряда гетероциклических соединений оригинального синтеза на меf таболизм ПА в бесклеточных тест-системах, на скорость пролиферации и на дифференцировку клеток мышиной меланомы линии B16-F10. Результаты экспериментов позволяют впервые выявить и рекомендовать для дальнейшей го исследования биологических свойств ряд синтетических аналогов ПА в качестве потенциальных противоопухолевых средств.

Практическая значимость работы. Полученные результаты могут быть использованы для формирования базы данных при разработке программного обеспечения расчетов связи «структура-активность» для компьютерного моделирования химических структур с заданными биологическими свойствами, в частности, с антипролиферативным и противоопухолевым действием.

Положения, выносимые на защиту

1. Канцерогенные свойства производных диоксаборенинопиридина и бензимидазола. Пролиферативные свойства производных пиперидона. Ан-типролиферативные свойства производных анилина. Онкопротекторные свойства и свойства индукторов клеточной дифференциации производных азафлуорена и ксантина.

2. Перспективность дальнейших исследований производных азафлуорена и ксантина в качестве потенциальных противоопухолевых средств.

3. Превосходство в эффективности действия производных азафлуорена над остальными исследованными гетероциклическими соединениями.

Связь исследований с научной программой. Работа проведена в рамках темы НИР РУДН «Исследование структуры и биологической активности ферментов с антиопухолевой активностью» № 01.2.00 105254 и темы НИР: № 030507-1-173 «Исследование противоопухолевых свойств новых биологически активных препаратов и создание отечественной иммунолипосомальной; системы направленного транспорта лекарств».

Исследования, в рамках научной стажировки, проводились в лаборатории клеточной биологии Второго Римского университета «Тог Vergata» под руководством профессора Симоне Бенинати (2006-2007 гг.), поддержанные грантом президента Российской Федерации в 2006 году.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на 9 конгрессах и конференциях, в том числе на 6 международных.

Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на 9-ом Международном конгрессе по аминокислотам (Вена, Австрия, 2005); на 4-ой Международной конференции студентов и молодых ученых «Актуальные вопросы спортивной медицины, лечебной физической культуры, физиотерапии и курортологии» (Москва, 2005); на Итоговой конференции медицинского факультета Российского университета дружбы народов «Клинические и теоретические аспекты современной медицины» (Москва, 2005); на Межрегиональной научно-практической конференции, посвященной 85-летию самарского государственного медицинского университета «Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины» (Самара, 2005); на Всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Перспектива-2006» (Нальчик, п. Эльбрус, 2006); на 20-ом Международном конгрессе по биохимии и молекулярной биологии IUBMB и 11-ом FAOBMB конгрессе (Киото, Япония, 2006); на Международной конференции «Роль полиаминов и их аналогов, в раковых и других заболеваниях» (Тиволи, Рим, Италия, 2006); на 15-ой Международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Гурзуф, 2007); на 10-ом Международном конгрессе по аминокислотам и белкам (Каллитея, Греция, 2007).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 работ, в том числе 6 в рецензируемых журналах:

1. Golomazova К., Syatkin S., Svinarev V., Fedoronchuk Т., Shevchenko А. г

Carcinogenic and Carcinostatic Properties of Psychotropic Medications // Amino Acids - Springer Wien. - New York, 2005. - Vol. 29(1). - P.20-21.

2. Шевченко A.A., Голомазова K.A. Канцерогенные свойства психотропных препаратов // Материалы четвертой международной конференции студентов и молодых ученых: Актуальные вопросы спортивной медицины, лечебной физической культуры, физиотерапии и курортологии. - М.: РГМУ, 2005. - С. 45-46.

3. Голомазова К.А., Шевченко А.А. Пролиферативные свойства синтетических аналогов полиаминов // Материалы четвертой международной конференции и молодых ученых: Актуальные вопросы спортивной медицины, лечебной физической культуры, физиотерапии и курортологии. - М.: РГМУ, 2005. - С. 27-29

4. Шевченко А.А., Голомазова К.А. Влияние структурных аналогов полиаминов на скорость окислительного дезаминирования путресцина, спермидина и спермина в ткани регенерирующей печени крыс // Материалы итоговой научной студенческой конференции. - М.: РУДН, 2005. - С. 109-110.

5. Сяткин С.П., Голомазова К.А., Левов А.Н., Федорончук Т.В., Свина-рев В.И., Шевченко А.А., Березов Т.Т. Канцерогенные и канцеростатические свойства производных бензимидазола и азафлуорена как структурных аналогов полиаминов // Материалы- межрегиональной научно-практической- конференции, посвященной 85-летию самарского государственного медицинского университета: Новая идеология в единстве фундаментальной и клинической медицины. - Самара: 2005. - С. 389-393.

6. Шевченко А.А. Доклинические исследования структурных аналогов полиаминов-как потенциальных противоопухолевых агентов // Материалы всероссийской научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Пер-спектива-2006». - Нальчик: Каб.-Балк.ун-т., 2006. - С. 87-91 (0,4 п.л.). ,

7. Berezov Т., Syatkin S.,Golomazova К., Levov A.,Fedoronchuk Т., Svi-narev V., Shevchenko A. Carcinogenic and carcinostatic properties of benzimida-zole and azafluorene derivatives as a polyamines structural analogs // The 20th IUBMB International Congress of Biochemistry and Molecular Biology and 11th FAOBMB Congress, Kyoto, Japan (June 2006). - P. 188.

8. Syatkin S.P., Golomazova K.A., Levov A., Fedoronchuk T.V., Svinarev V.I., Shevchenko A.A., Berezov T.T. Quantitative evaluation of benzimidazole and azafluorene derivatives influence on polyamine metabolism as potential antitumor agents // International Conference on the Role of Polyamines and their Analogs in Cancer and Other Diseases, Tivoli (Rome). - Italy (September, 2006) - P. 231-232.

9. Frolov Y.A., Syatkin S.P., Golomazova K.A., Svinarev Y.I., Shevchenko A.A., Fedoronchuk T.V. The influence of psychotropic medications on polyamines metabolism in tissues with high rate of proliferation // International Conference on-the Role of Polyamines and their Analogs in Cancer and Other Diseases, Tivoli (Rome). - Italy (September, 2006) - P. 217-218.

10. Lentini A., Provenzano В., CaragliaM., Shevchenko A., Abbruzzese A. and Beninati S. Impairment of the metastatic activity of melanoma cells by transglutaminase-catalyzed incorporation of polyamines into laminin and Matrigel. Amino Acids. - 2008. - Vol. 34, № 2 (Printed in The Netherlands). - P.251-256.

11. Натрошвили Н.Г., Неборак E.B., Шевченко А.А. Влияние производных диоксаборининопиридина на скорость окислительного дезаминирования полиаминов. // Материалы конференции итоговой конференции студенческого научного общества медицинского факультета РУДН: Клинические и теоретические аспекты современной медицины. - М.: РУДН, 2007. - С. 97.

12. Неборак Е.В., Натрошвили Н.Г. Шевченко А.А. Окислительное де-заминирование путресцина, спермидина и спермина на фоне действия аналогов полиаминов анилинового ряда // Материалы конференции итоговой конференции студенческого научного общества медицинского факультета РУДН: Клинические и теоретические аспекты современной медицины. - М.: РУДН, 2007. - С. 98.

13. Сяткин С.П., Фролов В.А., Голомазова К.А., Левов А.Н., Федорон-чук Т.В., Свинарев В.И., Шевченко А.А., Неборак К.В., Натрошвили Н.Г. Применение окислительного дезаминирования полиаминов и путресцина при I мониторинге канцерогенных и противоопухолевых свойств производных бензимидазола и азафлуорена // Материалы XV международной конференции: Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии. - Гурзуф, 2007. - С. 92-94.

14. Shevchenko A., Beninati S. A new synthetic polyamine analogue reduces B16-F10 melanoma cells proliferation by the enhancement of transglutaminase activity // 10th International Congress on Amino Acids. Kallithea, Greece (August 20-25, 2007). - Amino Acids - Springer Wien. - New York, 2007. - Vol. 33. - P. 45.

15. Syatkin S.P., Golomazova K.A., Fedoronchuk T.V., Levov A.N., Berezov T.T., Svinarev V.I., Shevchenko A.A., Natroshvili N.G., Neborak E.V. Prediction of antiproliferative and carcinogenic properties of benzimidazole and azafluorene derivatives as synthetic structural analogs of polyamines // 10th International Congress on Amino Acids. Kallithea, Greece (August 20-25, 2007). -Amino Acids - Springer Wien. - New York, 2007. - Vol. 33. - P. 43.

16. Березов Т.Т., Фролов В.А., Сяткин С.П., Голомазова К.А., Федорончук Т.В., Шевченко А.А., Левов А.Н. Прогноз возможных онкопротекгорных и канцерогенных свойств, структурных аналогов полиаминов из группы производных бензимидазола и азафлуорена // Вестник РУДН. - 2007. - № 6. - С. 331-335.

17. Сяткин С.П., Березов Т.Т., Фролов В.А., Голомазова К.А., Левов А.Н., Шевченко А.А., Федорончук Т.В. Прогноз канцерогенных и противоопухолевых свойств, производных бензимидазола и азафлуорена // Вестник РУДН. — 2007.-№6.-С. 70-73.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 156 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов, 2-х глав с описанием результатов собственных исследований, обсуждения результатов и выводов. Список литературы включает 274 источника, из них 235 зарубежных и 39 отечественных. Работа иллюстрирована 70 рисунками и 24 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Шевченко, Анна Александровна

ВЫВОДЫ

2. Производные анилина существенно ускоряют окислительный' распад путресцина и ПА, проявляя тем самым; потенциальные антипро-лиферативные свойства.

3. Производные азафлуорена- на бесклеточном уровне (тест-системы из регенерирующей и опухолевой ткани) демонстрируют потенциальные онко-протекторные свойства, существенно снижая уровни и скорость синтеза путресцина и полиаминов, при этом существенно повышая скорость окислит тельного дезаминирования этих веществ.

4. Наиболее активные производные азафлуорена (1-амино-4-азафлуо-ренон-9; 1-бром-4-азафлуоренон-9; 1-амино-2-бром-4-азафлуоренон-9; 1-ами-но-9-фениламино-4-азафлуорен) на клеточном уровне (клетки мышиной меланомы B16-F10) также проявляют противоопухолевые свойства, снижая, скорость пролиферации (на 25-70 %) и внутриклеточные уровни полиаминов (на 40-60 %). Эти вещества^ увеличивают активность трансглутаминазы (в 1,5-3 раза) и индуцируют выработку меланина (в 1,5 - 8 раз), вызывают морфологические изменения в- клетках (появление цитозольных отростков), демонстрируя свойства индукторов клеточнойдафференциациш

5; Производные пиперидона проявляют пролиферативные свойства, увеличивая скорость клеточного роста (клетки мышиной меланомы B16-F10) в 1,5-2 раза.

6. Ксантиновые производные замедляют скорость клеточной пролиферации (клетки мышиной' меланомы В16-F10) на 20-60 %, снижают внутриклеточные уровни полиаминов на 30-40 %, увеличивают активность трансглутаминазы в 1,5-2 раза, активируют выработку меланина в 3-5 раза, вызывают морфологические изменения в клетках (появление цитозольных отростков), проявляя онкопротекторные свойства.

8. Наиболее перспективным из тестированных веществ с точки зрения противоопухолевых свойств является 1-амино-4-азафлуоренон-9 в конечной концентрации 25 цМ. Это вещество эффективнее по всем использованным при тестировании показателям, чем наиболее активные производные пурино-вых алкалоидов в концентрации 1 мМ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ литературы, посвященной роли полиаминов и ферментов* их обмена в процессах клеточной пролиферации и дифференцировки показывает, что эта тема является актуальной и требует дальнейшей экспериментальной разработки.

Уникальность ПА, как факторов роста, заключается в том, что они одновременно могут выполнять в живом организме диаметрально противоположные функции: активировать (при оптимальной концентрации) и ингиби-ровать (при высоких концентрициях) синтез нуклеиновых кислот и белка в нормальных и опухолевых тканях. Эти свойства лежат в основе регуляторной функции ПА и определяют их высокую метаболическую лабильность. Так, период полужизни путресцина в различных тканях животных равен двум часам и спермидина - нескольким суткам. Это возможно лишь благодаря непосредственной регуляции внутриклеточных уровней ПА основными ферментами их обмена (ОДК, ДАО и ПАО), которые, в свою очередь, также отличаются высокой метаболической подвижностью. ПА, в зависимости от активности ТГ, образуют прочные комплексы с белками (моно- и бис- производные), которые определенным образом влияют на пролиферацию, дифференциацию клеток, апоптоз и, в случае раковых клеток, имеют антиметастатическое действие. Следовательно, ПА и ТГ активность — маркеры клеточной пролиферации и дифференциации.

Взаимосвязь процессов метаболизма полиаминов и биологических свойств полиаминсодержащих соединений лежит в основе прогноза их канцерогенных и антипролиферативных свойств. Изучению данной взаимосвязи и посвящено настоящее исследование.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В ходе эксперимента проводились исследования биологических свойств метиленовых производных ксантина (Таблица 3) и соединений оригинального синтеза - структурных аналогов полиаминов, условно разделенных на группы: А — производные бензимидазола и азафлуорена (табл. 4); Б — производные анилина (табл. 5); В - производные диоксаборенинопири-дина (табл. 6); Г — производные пиперидона (табл. 7); Д — производные азафлуорена (выборочная группа), (табл. 8).

Исследуемые вещества были получены из лаборатории органического синтеза, кафедры органической химии РУДН, в виде порошков, а также из лаборатории клеточной биологии Второго Римского Университета «Тог Vergata».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шевченко, Анна Александровна, Москва

1. Берлинских Н. К., Залеток С. П. Полиамины и опухолевый рост — Киев: Наук, думка, 1987. 140 с.

2. Березов Т.Т. Обмен аминокислот нормальных тканей и злокачественных опухолей. М.: Медицина, 1969. - 224 с.

3. Борбо Л.И., Яхимович Л.В., Черный В.А., Некрасов П.Я., Дорфман

4. B.М. Выявление биогенных аминов в опухолях с диагностической целью//Архив патологии. 1976. Т.38. -№ 9. С.33-38.

5. Вартанян М. Е. Клинико-биологические и наследственные закономерности течения шизофрении: Автореф. докт. дис. М., 1968. - 60 с.

6. Гамалея Н.Б. Современные биохимические концепции патогенеза шизофрении. — М.: Медицина, 1978. 303 с.

7. Гельштейн В.И. Прогрессия трансплантируемых опухолей мышей // Цитология. 1971.-Т. 13.-C.3-14.

8. Голомазова К.А. Антипролиферативные и антиопухолевые свойства синтетических аналогов полиаминов. Автореферат дисс. канд. биол. наук, РУДН, Москва (2006).

9. Горбунова В.А. Новая система предклинического скрининга новых противоопухолевых препаратов в США: Обзор // Вести. Всесоюз. Он-кол. Науч. Центра АМН СССР. 1991. - № 2. - С.45-46.

10. Горкин В.З., Москвитина Т.А. Биохимические особенности течения шизофрении // Журн. Невропатологии и психиатрии. 1985. - Т. 87, № 7.1. C. 1062-1064.

11. Давыдовский И.В. Общая патология человека. М., 1969. - С. 434.

12. Дин Р. Процессы распада в клетке М.: Мир, 1981. - 120 с.

13. Закревский В.И. Определение активности орнитиндекарбоксилазы у микроорганизмов с помощью 2,4-динитро-1-фторбензола // Сборник научных работ Волгоградского медицинского института. Волгоград. 1973. Т. 26. — С. 375-377.

14. Лидак М.Ю. Нуклеозиды и рак // Целенаправленное изыскание физиологически активных веществ: Докл. VII Всесоюз. симпоз. 26-29 янв. 1987 г. -Рига: Зинатне, 1989. С.79-94.

15. Лысенко А.В., Ускова Н.Н., Альперович Д.В. и др. // Нейрохимия. -1998. Т. 15, № 2. - С.165-172.

16. Москвитина Т.А., Камышанская Н.С., Смирнов А.В. и др./ Определение активности орнитиндекарбоксилазы в печени млекопитающих. Бюл. эксперим.Биол. Мед. 1985. - Т. X, № 6. - С. 147-165.

17. Полищук И. А. Шизофрения Киев: Здоров'я, 1976. - 263 с.

18. Протопопов В. П. Избранные труды. Киев: Здоров'я, 1961. - 560 с.

19. Регенерация печени у млекопитающих/ Сидорова В.Ф., Рябинина З.А., Лейкина Е.М. Л.: Медицина, 1966. - 123 с.

20. Семенов С. Ф., Попова Н. Н. Нервно-психические заболевания в свете иммунопатологии мозга-М.: Медицина, 1969. — 265 с.

21. Сепетилев Д. М. Статистические методы в научных медицинских исследованиях. -М.: Медицина, 1968.- 419с.

22. Сяткин С.П. Микрометод флуорометрического определения полиаминов и путресцина тканей животных тонкослойной хроматографией на пластинках Силу фола УВ-254 // Вопр. мед. химии. 1981. - Т. 27, № 6. -С. 848-851.

23. Сяткин С.П. Модифицированный метод определения белка в пробах с повышенным содержанием липо- и гликопротеидов // Вопр. мед. химии. 1981. - Т. 27, № 1.-С. 136-138.

24. Сяткин С.П. Полиамины и лизосомы как система опосредованной-регуляции химическими веществами процессов клеточной пролиферации и опухолевого роста: Автореф. докт. дисс. М., 1998. - 41 с.

25. Сяткин С.П., Березов Т.Т. Окислительное дезаминирование полиаминов в гепатомах с различной скоростью роста // Вопр. мед. химии. 1979. -Т. 25,№5.-С. 611-617.

26. Сяткин С.П., Березов Т.Т. Быстрый спектрофотометрический метод определения орнитиндекарбоксилазы с помощью 2,4-динитрофторбен— зола//Вопр. мед. химии. 1980. Т. 26, № 4. - С. 561-564.i

27. Сяткин С.П., Березов Т.Т. Метаболизм полиаминов в опухолевых^1 тканях // Вестник Академии медицинских наук СССР. 1982. - Т.З. С. 10-21.

28. Сяткин С.П., Березов Т.Т. Обмен полиаминов в злокачественных' опухолях //Вестник АМН СССР. 1982. -№ 3. - С. 10-21.

29. Сяткин С.П., Березов Т.Т., Гридина Н.Я. и др. Полиамины как биохимические маркеры антипролиферативного действия ингибиторов ферментов биосинтеза полиаминов и путресцина в культуре L-клеток // Вопр. мед. химии. 1991. - Т. 37, № 6. - С. 77-81.

30. Сяткин С.П., Березов Т.Т., Фролов В.А., Голомазова К.А., Левов А.Н., Шевченко А.А., Федорончук Т.В. Прогноз канцерогенных и противоопухолевых свойств производных бензимидазола и азафлуорена // Вестник РУДН. 2007. - № 6. - С. 70-73.

31. Сяткин С.П., Галаев Ф.В. Окисление путнесцина, спермидина и спермина диаминоксидазой печени мышей // Биохимия. 1977. - Т.42. -С.1010-1013.

32. Хоменко А.К. Особенности систем ферментов, участвующих в обмене полиаминов при злокачественном ростею // Опухоль и организмю. -Киев, 1973.-С. 300-301.

33. Хоменко А.К., Залеток С.Т., Суслик Д.Р. Повышение экскреции полиаминов при химическом канцерогенезе // Онкология. Киев. - 1976. -№6.-С. 27-31.

34. Хомутов P.M., Денисова Г.Ф., Хомутов А.Р., Белостоцкая К.М., Шлосман Р.Б., Артамонова Е.Ю. Аминооксипропиламин эффективный ингибитор орнитиндекарбоксилазы in vitro и in vivo // Биоорганическая химия. - 1985.-Т. II.-С. 1574-1576.

35. Хомутов А.Р., Хомутов P.M. Синтез аминооксианалогов путрес-цина и спермидина // Биоорг. химии. 1989. - Т. 15, № 5. - С. 698-703.

36. Шапот B.C. Биохимические аспекты опухолевого роста М.: Медицина, 1975. - 304 с.

37. Швембергер И.Н. Морфология и гистогенез опухолей, индуцированных у крыс нитрозоаминами. Л.: Медицина, 1966. - 154 с.

38. Швембергер И.Н. Перевиваемый штамм гепатомы крысы Г-27 // Цитология. 1970. - Т. 12. - С.1057-1059.

39. Шизофрения и полиамины / Свинарев В.И., Залеток С.П., и др. -Киев, «ЕксОб», 1999. 176 с.

40. Экспериментальные опухоли печени / Быкорез А.И., Пинчук В.Г. -Киев: Наукова думка, 1976. 280 с.

41. Abraham AJ. Studies on DNA-dependent RNA polymerase from Escherichia coli. I. The mechanism of polyamine induced stimulation of enzyme activity // Eur. J. Biochem. 1968. - V. 5 - P. 143-146.

42. Agostinelli E.,' Riccio P., Mucigrosso J., Turini P., Mondovi B. Amine oxidases as biological regulators // Perspectives in polyamine research / Ed. A. Perin, G.Scalabrino, A.Sessa, M.E.Ferioli. Milano, Italy: Wichting Editore. -1988.-P. 11-14.

43. Alhonen-Hongisto E., Eeinonen P., Eaine R., Janne J. Human myeloma cells acquire resistance to difluoromethylornithine without overproducing ornithine decarboxylase // Biochem. Biophys.Res.Commun. 1987. - V. I (14). - P. 132-137.

44. Anderson D. J., Crossland J., Shaw G. G. // Neuropharmacol. 1975. -Vol. 14, №2.-P. 571-577.

45. Anderson G., Heby O. Polyamine and nucleic acid concentration in Ehr-lich ascites carcinoma cells and liver of tumor-bearing mice at various stages of tumor growth // J. Natl.Cancer Inst. 1972. - V. 48. - P. 165-172.

46. Andersson G., Osterberg S., Heby O. Accumulation of spermidine in Ehr-lich ascites tumor cells during plateau phase growth. A function of an increased fraction of G 2 phase cells and polyploideels // Int. J. Biochem. 1978. - V. 9. - P. 263-267.

47. Argento-Ceru M.P., Sartori C., Autuori F. Association of diamine oxidase with microsomal membranes in rabbit liver // Life Sci. 1974. - V. 15, № 11.-P. 1909-1915.

48. Autelli R., Holm I., Heby O., Persson L. Feedback regulation of ornithine decarboxylase expression. Studies using a polysomal run-off system // FEBS Letters. 1990. -V. 260. - P. 39-41.

49. Aziz SM, Lipke DW, Olson JW, Gillespie MN. Role of ATP and sodium in polyamine transport in bovine pulmonary artery smooth cells.// J Cell Physiol. 1993. -V. 155(2). - P. 399-407.

50. Bachrach U. Metabolism and function of spermine and related polyamines // Ann.Rev.Microbiol. 1970. - V.24. - P. 109-134.

51. Bachrach U. Antiviral Action of oxidized polyamines // Virus-cell interactions and viral antimetabolites // Ed. D.Shugar. New York: Acad.Press. — 1972.-P. 149-162.

52. Bachrach U. Function of naturally occurring polyamines. New York: Acad, press, 1973. - 175 p.

53. Bachrach U., Abzug S., Bekierkrust A. Cytotoxic effect of oxidized' spermine on Erlich ascites cells // Biochim. Biophys.Acta. 1967. - V.134. -P.174-181.

54. Bachrach U., Ben-Joseph M. Studies on ornithine decarboxylase activity in normal and T2-infected Escherichia coli // FEBS Lett. 1971. - V. 15. - P.75-77.

55. Bachrach U., Don S., Wiener H. Polyamines and tumor cells: effect of transformation of chick embryofibroblasts by Rons sarcoma virus on polyamine leves // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1973. - V. 55. - P. 1035-1041.

56. Bachrach U., Don S., Wiener H. Polyamine in normal and in virus-transformed chick embryo fibroblasts // Cancer Res. 1974. - V. 34. - P. 1577-1580.

57. Bachrach U., Persky S. Interaction of oxidized polyamines with DNA. V. Inhibitionof nucleic aid synthesis // Biochim. Biophys. Acta. 1969. - V. 179. -P. 484-493.

58. Bardsley W.G., Childs R.E., Crabbe M. Inhibition of enzymes by em-tal ion-chelating reagents. The action of copper-chelating reagents on diamine oxidase // J. Biochem. 1974.-V. 137, № l.-P. 61-66.

59. Barros C., Giudice G. Effect of polyamines on ribosomal RNA synthesis during Sea Urchin development // Exp. Cell. Res. 1968. - V. 50. - P. 671-674.

60. Basil H.S., Feuerstein B.G., Deen D.F., Lubich W.P., Bergeron R.J., Samejima K., Marton LJ. Correlation betwen the effects of polyamine analogues on DNA conformation and cell growth // Cancer Res. 1989. - V. 49: - P. 5591-5597.

61. Basu H.S., Pellarin M., Feuerstein B.G., Deen D.F., Marton L.J. Effect of N',N14-bis(ethyl)homospermine on the growth of U87MG and SF-126 human brain tumor cells // Cancer Res. 1990. V. 50. - P. 3137-3140.

62. Basu H.S., Wnght W.D., Deen D.F., Roti-Roti J., Marton L.J. Treatment with a polyamine analog alters DNA-matrix association in HeLa cell nuclei. A modified halo assay // Biochemistry. 1993. - V. 32. - P. 4073-4076.

63. Beaven M.A., Shaff R.E. Study of the relationship of histaminase and diamine oxidase activities in various rat tissues and plasma by sensitive isotopic assay procedures // Biochem. Pharmacol. 1975. - V. 24, № 9. - P.979-984.

64. Becker F.F. Acute glycogenolysis: a major stimulus of autophagocytic activity in rat hepatocytes // Proc. Soc. Exper. Biol. Med. 1972. - V. 140. -P. 1170-1172.

65. Beninati S, Folk JE. Covalent polyamine-protein conjugates: analysis and distribution // Adv Exp Biol. 1988. - V. 250. - P. 411-422.

66. Beninati S., Abbruzzese: A. and Cardinali M: Differences in the post-traslatio of proteins by polyamines between weakly and higly metastatic В16 melanoma cells//Int. J. Gancer. 1993. - V, 53;- P. 792-7.

67. Beninati S, Nicolini L, Jakus J, Passeggio A and Abbruzzese A. Identification of substrate site for transglutaminase on human protein synthesis initiation factor 5 A // J. Biochem. 1995.-V. 305. P. 325-328.

68. Beninati S, Piacentini M, Cocuzzi ET, Autuori F, Folk JE. Covalent incorporation of polyamines as gamma-glutamyl derivatives into CHO cell protein // Biochim Biophys Acta. 1988. - V. 952(3). - P. 325-33. ••

69. Berdinskih N.K.,Momenko A.K., Zaletok S.P. Diagnostic value of determination of polyamine excretion in patients with malignant tumours // Tenth international congress of biochemistry.: Abstracts. 1976. - P. 599.

70. Berdinskih N.K., Homenko A.K., Zaletok S.P. Study of excretion of polyamines in mammary carcinoma // Seventh international symposium on the biological characterisation of human tumours.: Abstracts. 1977. - P. 141.

71. Bergeron R.J., llawthorine T.R., Vinson J.R.T., Beack D.E., Ingeno MJ. The role of the methylene back bone in the; antiproliferative activity of po polyamine analogues // Cancer Res. 1989. - V. 49.- P. 2959-2964. .

72. Bolkenius F.N., Bey P., Seiler N. Specific inhibition of polyamine oxidase in vivo is a method for the elucidation of its physiological role // Bio-chim. et biophys. acta. 1985. - V. 838, № 1. - P. 69-71.

73. Bolkenius FN, Seiler N. Acetylderivatives as intermediates in polyamine catabolism//Int J. Biochem. 1981.-V. 13(3). - P. 287-92.

74. Boyle S.M., Cohen P.S. Putrescine-mediated degradation of ribonucleic acid in chloramphenicol-treated Escherichia coli // J. Bacteriol. 1968. -V. 95.-P. 1266-1272.

75. Bradford MM. A rapid and sensitive method for the quantification of microgram quantities of protein using the principle of protein dye building // Anal.Biochem. 1976. - V. 72. - P. 246-254.

76. Brewer E.N., Rusch H.P. Control of DNA replication: effect of spermine on DNA polymerase activity in nuclei isolated from Physarun Palycepha-lum // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1966 - V. 25. - P. 579-584.

77. Briggs M.H. Vitamin and coenzyme conyeny of hepatomas induced by butter yellow // Nature. 1960. - V. 187. - P. 249.

78. Burton, R.B. Malignant melanoma in the year 2000 // CA Cancer J.Clin. 2000.-V. 50.-P. 209-213. £

79. Busca, R., Berlotto, C., Ortonne, J-P., and Ballotti, R. Inhibition of the phosphatidylinositol 3-kinase pathway induces В16 melanoma cell differentiation // J. Biol. Chem. 1996. -V. 271.-P. 31824-31830.

80. Byers T.L., Bitonti A.J., McCann P.P. Bis(benzyl)polyamine analogues are substrates for a mammalian cell-transport system which is distinct from the polyamine transport system // J. Biochem. 1990. - V. 269. - P. 39-40.

81. Byers TL, Pegg AE. Regulation of polyamine transport in Chinese hamster ovary cells //J. Biol Chem. 2004 Jul 16. -V. 279(29). P. 29921-29929.

82. Caldarera C.M., Barbiroli В., Monizzi G. Polyamine and nucleic acid drug and development of the chick embryo // J. Biochem. 1965 - V. 97. - P. 84-98.

83. Caldarera C.M., Monizzi G. Polyamines and nucleic acid metabolism in the chick embryo //Ann. N. Y. Acad. Sci. 1970. - V. 171. - P. 709-722.

84. Caldarera C.M., Monizzi G., Rossoni C., Barbiroli B. Polyamines and nucleic acid metabolism during development of chick embryo brain // J. Neuro-chem. — 1969. — V. 16.-P. 309-316.

85. Casero R.A., Bergeron R.J., Porter C.W. Treatment with a-difluoro-methylornithine plus a spermidine analog leads to spermine depletion and growth inhibition in cultured L1210 Leukemia cells // J. Cell. Physiol. 1984. - V. 121. -P. 476-482.

86. Cavia E., Webb Т.Е. The polyamines and nucleic acid in growing rat hepatomas // J. Biochem. 1972. - V. 129. - P. 223-224.

87. Caunders N.A., Kett K.F., Minohin R.F. Uptake, efflux and metabolism of the polyamines and putrescine in rabbit lung slices // Biochim. Biophys. Acta.: Mol. Cell. Res. 1987. - V. 927, № 2. - P. 170-176.

88. Chen K.J., Presepe V., Parhen N., Lin A.J. Changes of ODC activity and polyamines content upon differentiation mouse NB-15 neuroblastoma cell // J. Cell. Physiol. 1982. - V. 110. - P. 285-290.

89. Chen Y.Q. Mechanism of cell damage by hematoporphyrin derivative (HPD) plus light. III. Effect of HPD plus light on lysosomes of liver and hepatoma cell // Chung Hua Chung Liu Tsa Chih. 1989. - V. 11. - P. 22-24.

90. Chung SI, Folk JE. Transglutaminase from hair follicle of guinea pig // Proc. Natl. Acad. Sci. (Wash.) 1972. - V. 69. - P. 303-307.

91. Cohen S.S. The polyamine content of bacterial t-RNA // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1970. - V. 171. - P. 869-881.

92. Cohen S.S. Introduction to the polyamines // New Jersey: Prentice Hall, Inc.-1971.- 179 p.

93. Cohen S.S., O'Malley B.W., Stastny M. Estrogenic induction of or-nithine decarboxylase in vivo and in vitro // Science. 1970. - V. 170. - P. 336-338.

94. Cohen S.S., Raina A. Some interrelations of natural polyamines and nucleic acids in growing and virus-infected bacteria // Organizational Biosynthesis / Ed. H.J. Vogel, J.O. Eampen and V.Bryson. New York: Acad. Press, 1967. - P. 157-184.

95. Claverie N., Mamont P.S. Comparative antitumor properties in rodents of irreversible inhibitors of L-Ornithinedecarboxylase, used or as prodrugs // Cancer Res. 1989. - V. 49. - P. 4466-4471.

96. Crabbe M., Childs R.E., Bardsley W.G. Time-independent inhibition of diamine oxidase by carbonyl-group reagents and urea // Eur. J. Biochem. 1975. -V. 60, №2.-P. 325-333.

97. Cullis PM, Green RE, Merson-Davies L, Travis N. Probing the mechanism of transport and compartmentalisation of polyamines in mammalian cells // Biochem J. 1994. -V. 303. - P. 89-96.

98. Danzm С., Casara P., Claverie N., Metcalf B.W., Fung M.J. (2R,5R)-6-heptyne-2,5-diamine and extremely potent inhibitor of mammalian ornithine decarboxylase //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1983.-V. 116,-P. 237-243.

99. Darzynkiewier Z., Arnason B.G. Suppression of RNA synthesis in lymphocytes by inhibitors of proteolytic enzymes // Exp. Cell. Res. 1974. -V. 85.-P. 95-104.

100. Davidson N.E., Anderson N.G. Chromosome coiling: abnormaleties induced by polyamines // Exp. Cell. Res. 1960. - V. 20. - P. 610-613.

101. Davidson N.E., Mank A., Prestigiacomo L.J., Bergeron R.J., Casero R.A. -Growth inhibition of hormoneresponsive and resistant human breast can cer cells in culture by N ,N -bis(ethyl)spermine // Cancer Res. 1993. - V. 53. -P. 2071-2075.

102. Davison A.N. Pyridoxal phosphate as coenzyme of diamine oxidase // J. Biochem. 1956. - V.64. - P. 546-548.

103. Dawson M., Dryden W.F. The toxicity of spermine and spermidine to cells in culture//Biochem. Pharmacol. 1960. - V. 18.-P. 1307-1313.

104. De Duve C., de Barsy Т., Pool B. e. a. Lysosomotropic agents // Biochem. Pharmacol. 1974. - V. 23. - P. 2495-2531.

105. Delcros J.-G., Sturkenboom M.C.M., Basu H.S., Feuerstein B.C., Sta-fer R.H., Marton L.J. Differential effects of spermine and its analogues on the structures of polynucleotides complexed with ethidium bromide // J. Biochem. -1993.-V. 291.-P. 269-274.

106. Dion A.S., Herbst E.J. Polyamine changes during development of Dro-sophila Melanogaster // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1970. - V. 171. - P. 713-734.

107. Don S., Bachrach U. Polyamine metabolism in normal and in virus-transformed chick embryo fibroblasts // Cancer Res. 1975. - V. 35. - P. 3618-3622.

108. Don S., Wiener H., Bachrach U. Specific increase in polyamine levels in chick embryo cells transformed by Rous sarcoma vifus // Cancer Res. — 1975. — V. 35, № l.-P. 194-198.

109. Dubin D.T., Rosenthal S.M. Polyamine-glutathione conjugates in E.coli // Fed. Proc. 1960. - V. 19. - P. 1.

110. Duffy P.E., Defendini R, Kremzner L.T. Regulation of meningioma cell growth in vitro by polyamines // J. Neuropathol. Exp. Neurol. 1971. - V. 30. — P. 698-713.

111. Edwards M.L., Prakash N.J., Stemench D.M., Sunkara S.P., Bitonti A.J., Davis G.F., Dumont J.A., Bey P. Polyamine analogues with antitumor activity // J. Med. Chem. 1990. - V. 33. - P. 1369-1375.

112. Eichberg J., Zetusky W., Bell M.E., Cavanagn E. Effects of polyamines on calcium dependent rat brain phosphatidylinositol-phosphodiesterase // J. Neuro- ' chem. 1981.-V. 36.-P. 1868-1871.

113. Eloranta Т.О., Khomutov A.R., Khomutov R.M., Hyrvonen T. Ami-nooxy analogs of spermidine as inhibitors of spermine synthase and substrates of hepatic polyamine acetylating activity // J. Biochem. 1990. V.108. - P. 593-598.

114. Eloranta Т.О., Maenpaa P.H., Raina A.M. Synthesis of hepatic polyamines. Ribonucleic acid and S-adenosylmethionine in normal and oestrogen-tncated chicks // J. Biochem. 1991. V. 154. - P. 95-103.

115. Ericsson J.L.E. Studies on induced cellular autophagy. I. Electron microscopy of cells will in vivo labelled lysosomes // Exper. Cell. Res. 1969. — V. 55. - P. 95-106.

116. Fesus L., Madi A., Balajthy Z. Transglutaminase induction by various cell death and apoptosis pathways // Experientia. 1996. - V. 52. - P. 942-949.

117. Feuerstein B.G., Williams L.D., Morton L.J! Implications and concepts of polyamine-nucleic acid interactions // J. Cell. Biochem. 1991. - V. 46. -P. 37-47.

118. Fidler I.J. Selection of successive tumor cell lines for metastasis // Nature (New Biol.) 1973. - V. 245. - P. 148-149.

119. Fidler I.J. and Cifone M.A. Properties of metastatic and nonmetastatic cloned subpopulations of an ultraviolet-light-induced murine fibrosarcoma of recent origin // Am. J. Pathol. 1979. - V. 97. - P. 633-648.

120. Fitzpatrick, T.D., Szabo, G., Seiji, M., and Quevedo, W.C. Biology of melanin pigmentary system. In: T.D. Fitzpatrick (ed), Dermatology in General Medicine. New York: Academy Press. 1979. - P. 131-163.

121. Fitzspatrick F.A. Cyclooxygenase enzymes: regulation and function. Curr. Pharm Des. 2004. - V. 10. - P. 577-88.

122. Fogel W.A. Amine oxidases in mammalian gastrointestinal tract // Ital. J. Biochem. 1992. - V. 41, № 1. - P. 61 A-62A.

123. Fogel-Petrovic M., Shappell N.W., Bergeron R.J., Porter C.W. Polyamine and polyamine analog regulation of spermidine/spermine N1-acetyltransferase in MALME-3M human melanoma cells// J. Biol. Chem. -2002. -Vol. 277, Issue 42. P. 39867-39872.

124. Folk J.E., Park M.H., Chung S.I., Schrode J., Lester E.P., Cooper H.L. Polyamines as physiological substrates for transglutaminase // J.BiokChem 1980. -V. 8.-P. 3695-3700.

125. Francis G.E., Pinsky C.M. Growth and differentiation control // Cancer Chemother. Biol. Response. Modif. Annu // Amsterdam. 1988. - P. 507-544.

126. Fukuchi J., Hiipakka R.A., Kokontis J.M., Nishimura K., Igarashi K., Liao S. TATA-binding protein-associated factor 7 regulates polyamine transportactivity and polyamine analog-induced apoptosis.//Biochem Pharmacol. 1994. — V. 48(8).-P. 1611-8.

127. Fuller O.J., Carper S.W., Clay L, Chen J.-R., Gerner E.W. Polyami-ne regulation of heat-shock-induced spermidine N -acetyltransferase activity // J. Biochem. 1990. - V. 267. - P. 601-605.

128. Gazdar A.F., Stull H.B., Kilton L.J., Bachrach U. Increased ornithine decarboxylase activity in murine sarcoma virus infected cells // Nature. 1976. -V. 262.-P. 696-698.

129. Ghoda L., Basu H.S., Porter C.W., Marton L.J., Coffmo P. The role of ornithine decarboxylase suppressionand polyamine depletion in the antiproli-ferative activity of polyamine analogs // Mol. Pharmacol. 1992. - V. 42. - P.302-306.

130. Giorgi P.P. Polyamine and ammo acid incorporation in vitro into microsomes of rat cerebral cortex. // J. Biochem. 1970. - P. 643-651.

131. Goldstein J.The effect of spermine on the accumulation of nucleic acid and protein in mammalian cells // Exp. Cell. Res. 1965. - V. 37. - P. 494-497.

132. Gumport R.I. Effects of spermidine on the RNA polymerase reaction //Ann. N. Y. Acad. Sci. 1970. -V. 171. - P. 915-938.

133. Gray W.R., Hartley B.S. A fluorescent end-group reagent for proteins and peptides // J. Biochem. 1963. - V. 89. - P. 59.

134. Haddox M.K., Russell D.H. Nuclear transglutaminase activity and nuclear conjugation of polyamines exhibit parallel increases in regenerating rat liver // Eur. J. Cell. Biol. 1980. - V. 22. - P. 12-117.

135. Haddox M.K., Russell D.H. Increased nuclear conjugated polyamines and transglutaminase during liver regeneration // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, Biol. Sci.- 1981.- V. 78.-P. 1712-1716.

136. Halline A.G., Dudeja P.K., Brasitus T.A. 1,2-dimethylhydrasine induced alterations in N-acetylspermidine levels in rat distal colonic mucosa: effects of a-difluoromethylornithme // Cancer Res. 1989. - V. 49. - P. 633-638.

137. Hansson R., Thy sell H. Heparin-induced increase of diamine oxidase in lymph and blood plasma of rat, guinea-pig and rabbit // Acta Physiol. Scand. -1971.-V. 81.-P. 208-214.

138. Harada J.J., Porter C.W., Morris O.K. Induction of polyamine limitation in Chinese hamster cells by a-methylornithine // J. Cell. Physiol. 1981. — V. 107.-P. 413-426.

139. Harris J.W., Wong J.P., Kehe C.R. The role of adenosine triphos-phate, chalones and specific proteins in controlling tumor growth fraction // Cancer Res. -1975.-V. 35.-P. 3181-3186.

140. Heby, O. Role of polyamines in the control of cell proliferation and differentiation // Differentiation 1981. - V.19 (1). - P. 1-20.

141. Heby O., Agrell I. Observations on the affinity between polyamine and nucleic acids // Hoppe Seylers Z Physiol Chem. 1971. - V. 352. - P. 29-38.

142. Heby O., Lewan L. Putrescine and polyamines in relation to nucleic acids in mouse liver after partial hepatectomy // Viuchows Arch. 1971. - V. 8. -P. 58-66.

143. Heby O., Marton L.J., Wilson C.B. Polyamine metabolism in a rat brain tumor cell line: its relationship to the growth rate // J. Cell. Physiol. — 1975. — V. 86.-P. 511-522.

144. Heby O., Persson L. Molecular genetics of polyamine synthesis in eu-karyotic cells // Trends Biochem. Sci. 1990. - V. 172. - P. 153-158.

145. Heby 0., Russel D.M. Depression of polyamine synthesis in L1210 leukemic mice during treatment with apotent antileukemic agent 5-azacytidine //Cancer Res. 1973. - V. 53. - P. 159-165.

146. Heby 0., Russel D.M. Effects of methylglyoxalbis(guanylhydrazone) on polyamine metabolism in spleens of mice with disseminated L1210 lymphoid leukemia // Cancer Res. 1974. - V. 34. - P. 886-892.

147. Herbst E.J., Bachrach U. Metabolism and biological functions of po-lyamines//Ann. N. Y. Acad. Sci. 1970. -V. 171. - P. 691-1009.

148. Hershko A., Amoz S., Mager J. Effect of polyamines and divalent metals on in vitro incorporation of amin acids into ribonucleoprotein particles // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1961. -V. 5. - P. 46-51.

149. Higgins G.M., Anderson R.M. Experimantal pathology of liver: restoration of liver of white rat following partial surgical removal // Arch. Path. -1931.-V. 12. — P. 186-202.

150. Hirsch J.G. The essential participation of an enzyme in the inhibition of growth of tubercle bacilli by spermine // J. Ep. Med. 1953. - V.97. - P. 327-344.

151. Hogan B.L.M. Effect of growth conditions on the ornithine decarboxylase activity of rat hepatoma cells // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1971. — V. 45.-P. 301-307.

152. Holm I., Persson Lo., Pegg A.E., Hebby O. Effects of S-adenosyl-1,8-diamino-3-thio-octane and S-methyl-5'-methylthio adenosine on polyamine synthesis in Ehrlich ascites tumor cells // J. Biochem. 1989. - V. 261. - P. 205-210.

153. Holtta E.Oxidation of spermidine and spermine in rat liver: purification and properties of polyamine oxidase // Biochemistry. 1977. - V. 16, № 1. - P. 91-100.

154. Holtta E., Pulkkinen P., eleving K., Janne J. Oxidation of polyamines by diamine oxidase from human seminal plasma // J. Biochem. — 1975. P. 373-378.

155. Holtta E., Sinervirta R., Janne J. Synthesis and accumulation of polyamines in rat liver regenerating after treatment With carbon tetrachloride // Biochem and Biophys. Res. Communs. 1973. -V. 54. - P. 350-357.

156. Homewood C.A., Warhurst D.C., Peters W., Baggaley V.C. Lysoso-mes, pH and anti-malarial action of chloroquine // Nature. 1975. - V. 235. - P. 50-52.

157. Igarashi К., Tabeda Y. Polyamines and protein synthesis. VI. Role of spermine aminoacyl-t-RNA formation // Biochim. Biophys. Acta. 1970. -V. 213, № l.-P. 240-243.

158. Inouye M, Pardee A.B. Reguirement of polyamines for bacterial division // J. Bacterid. 1970. - V. 101, № 3. - P.770-776. '

159. Israel M., Rosenfield J.S., Modest E.J. Analogs of spermine and spermidine. I. Synthesis of polymethylenepolyamines by reduction of cyanoc-thylated alphaomega-alkylene-diamines //J. Med. Chem. 1964. - V. 7. - P. 710-716.

160. Israel M., Zoll E.G., Muhammad N., Modest E.J. Synthesis and antitumor evaluation of the presumed cytotoxicmetabolites of spermine and N,N-bis(3-aminopropyl)nonane-l,9-diamine // J. Med. Chem. 1973. - V. 16. - P. 1-5.

161. Janne J. Studies on the biosynthetic pathway of polyamines in rat liver //Acta Physiol. Scand. 1967. -V. 300. - P. 70-71.

162. Janne J., Alhoneu-Hopgisto L., Kapyako K., Seppanen P. Experimental approaches to the systemic and topical use of polyamine antimetabolites as antiproliferative agents // Advances in polyamine research. New York: Raven Press, 1983.-P. 17-32.

163. Janne J., Poso H., Raina A. Polyamines in rapid growth and cancer // Biochim. Biophys. Acta. 1978. - V. 473. - P. 241-293.

164. Janne J., Raina A. On the stimulation of ornithine decarboxylase and RNA polymerase activity in rat liver after treatment with growth hormone // Biochim. Biophys. Acta. 1969. - V. 174. - P. 769-772.

165. Kalistratos G., Pfau A., Timmermann A. Untersuchungen uber mali-gnolipin // Z Krabsforsch. 1970. - V. 73. - P. 387-396.

166. Kapeller-Adler R. Amine oxidases and methods for their study. -New York: Wiley-interscience. 1970. - 319 p.

167. Kavekos M. Site specific therapy: an integrative approach to treating melanoma // Med Hypotheses. 2005. - V. 64(6). - P. 1097-9.

168. Khan NA, Sezan A, Quemener V, Moulinoux JP. Polyamine transport regulation by calcium and calmodulin: role of Ca(2+)-ATPase // Chem Biol. — 1999.-V. 6(10).-P. 717-29.

169. Khawhja J.A. Graduel release of spermine and RNA from rat-liver microsomes treated with EDTA // FEBS Lett. 1972. - V. 21. - P. 49-52.

170. Khawhja J. A., Raina A. Possible role of spermine and Mg in the attachment of ribosomes to the endoplasmic reticulum membranes // 7-th Meeting FEBS: Abstracts. 1971. - P. 153.

171. Kimes B.W., Morris D.R. Inhibition of nucleic acid and protein synthesis in Escherichia coli by oxidized polyamines and acrolein // Biochim. Biophys. Acta. 1971. - V. 288. - P. 235-244.

172. Kramer DL, Miller JT, Bergeron RJ, Khomutov R, Khomutov A, Porter CW. Regulation of polyamine transport by polyamines and polyamine analogs // J. Biol. Chem. 2004. - V. 279. - P. 27050-27058.

173. Kobayashi Y. Plasma diamino oxidase titres of normal and pregnant rate // Nature. 1964. - V.203. - P. 146-147.

174. Koenig H., Goldstone A.D., Lu C.Y. p-adrenergic stimulation of Ca2+-fluxes, endocytosis, hexose transport and amino acid transport in mouse kidney cortex is mediated by polyamine synthesis // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1983. -V. 80.-P. 7210-7215.

175. Kostyo J.L. Changes in polyamine content of rat liver following hy-pophysectomy and treatment with growth hormons // Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1966.-V. 23.-P. 150-155.

176. Kremzner L.T., Duffy P.E., Defendini R.F., Terrano M.J. Metabolism of polyamines in normal human and in tumors of the C.N.S. // Excerpta Med. -1969.-V. 193.-P. 242.

177. Kusunoki S, Yasumasu I. Inhibitory effect of alpha-hydrazinoornithine on egg cleavage in sea urchin eggs // Dev Biol. 1978 Dec. - V. 67(2). - P. 336-345.

178. Douarin La N. The neural crest. Cembridge: Cambridge University Press, 1982.

179. Lala P.K., Patt H.M. Cytokinetic analysis to tumor growth // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1966. - V. 56. - P. 1735-1742.

180. Land E.J., Ramsden C.A., Riley P.A. Quinone chemistry and melano-genesis // Methods Enzymol. 2004. - V. 378. - P. 88-1109.

181. Lee, K.W., Lee, H.J., Kag, K.S., and Lee, C.Y. Preventive effects of vitamin С on carcinogenesis // Lancet. 2002. - V. 359. - P. 172.

182. Lentini A, Abbruzzese A, Caraglia M, Marra M, Beninati S. Protein-polyamine conjugation by transglutaminase in cancer cell differentiation: review article // Amino Acids. 2004. - V. 26. - P. 331-337.

183. Lentini A. and Beninati S. Differentiation therapy of cancer: transglutaminase as differentiative tool // Minerva Biotec. 2002. - V.14 (2). - P. 159-64.

184. Libby P.R., Bergeron R.J., Porter C.W. Potent induction of spermidine/spermine N'-acetyltransferase (SSAT) activity and its relationship to inhibition of cell growth // Cancer Res. 1989. - V. 30. - P. 586-589.

185. Lopez-Lazaro, M., and Akiyama, M. Flavonoids as anticancer agents: structure-activity relathionship study // Curr. Med. Chem. Anti-Canc. Agents, 2002.-V. 2.~ P. 691-714.

186. Lotan R. and Lotan D. Stimulation of melanogenesis in a human melanoma cell by retinoids // Cancer Res. 1980. - V. 40. - P.3345-3350.

187. Lowry O.K., Rosebrough N.J., Fair A.L., Randall R.J. Protein measurement with Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. - V. 193. - P. 265-275.

188. Luk G.D., Goodwin G., Marton L.J., Baylin S.B. Polyamines are needed for the survival of human small-cell lung carcinoma in culture // Proc. Natl. Acad. Sci., USA. 1981. - V. 78. - P. 2355-2358.

189. Mach M, White M.W., Neubawer M., Degen J.L., Morris D.R. Isolation of a cDNA clone encoding S-adenosylmethionine decarboxylase // J. Biol. Chem. 1986.-V. 261.-P. 11697-11703.

190. Mamont P.S., Siat M., Joder-Ohlenbusch A.-M., Bernhardt A.; Casa-ra P. Effect of (2R,5R)-6-heptyne-2,5-diamine, a potent inhibitor of L-ornithi-ne decarboxylase, on rat hepatoma cells cultured in vitro // Eur. J. Biochem. 1984. — V. 142.-P. 457-463.

191. MasonH.S. J.Biol. Chem. 1948. - V. 172.-P. 83.

192. Matsui J., Pegg A.E. Increase in acetylation of spermidine in rat liver extracts brought about by treatment with carbon tetrachloride // Biochem. Biophys. Res. Communs. 1980. - V. 92. - P. 1009-1015.

193. Matsushima M., Bryan G.T. Early induction on mouse urinary bladder ornithine decarboxylase activity by rodent vesical carcinogenes // Cancer Res. — 1980.-V. 40.-P. 1897-1901.

194. Mimori К., Mori M., Shiraishi Т., Tanaka S., Haraguchi M., Ueo H., Shitasaka C., Akiyoshi T. Expression of ornithine decarboxylase mRNA and c-myc mRNA in breast tumours // Int. J. Oncol. 1998. - V. 12. - P. 597-601.

195. Misawa M., Endo T. Antitumor compounds // Cell Culture and Somatic Cell Genetics Of Plants. 1988. - V. 5. - P. 553-568.

196. Miyamoto M., Teryama H., Ohnishi T. Effects of protease inhibitors on liver regeneration // Biochem. Biophys. Res. Comm. 1973. - V. 55. - P. 84-90.

197. Miyski K., Hayashi M., Chiba Т., Nasu K. Effect of some polyme-thylenepolyamines on the growth of transplantable cancer // Chem. Pharm. Bull. -1960.-V. 8.-P. 933.

198. Morioka K., Tanada K., Kezuke Y. Etal. Early changes in ornithine decarboxylase activity and polyamines during erythroid differentiation of friend leukemia eels//Oncodevelop. Biol.Med. 1983. - V. 4. - P. 231-237.

199. Moulinoux J.-P., Quemener V., Khan N.A. Biological significance of circulating polyamines in oncology // Cell. Mol. Biol. 1985 - V. 37. - P. 773-783.

200. Nishioka K. International Symposium on Polyamines in Cancer. Critical role of polyamines in cancer: basic mechanisms and clinical approaches // Cancer Res. 1993. - V. 53. - P. 2689-2692.

201. Nishioka K. Polyamines in cancer. Houston, 1996. - 230 p.

202. Nishioka К., Romsdahl M.M. Elevation of putrescine and spermidine in sera of patients with solid tumors // Clin. Chem. Acta. 1974. - V. 57. - № 2. -P. 155-161.

203. O'Brien R.L., Olenick J.G., Hahn F.E. Reactions of quimine, ehloro-quine and quinacrine with DNA and RNA polymerase reactions // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1966.-V. 55.-P. 1511-1517.

204. Ochoa M.J., Weinstein I.B. Spermine inhibition of polypeptide synthesis in a subcellular system derived from the L1210 mouse ascites leukemia // Biochim. Biophys. Acts. 1965. - V. 95. - P. 175-179.

205. Oki Т., Kawasaki H., Ogata K., Yamada H., Tomida I., Morino Т., Fu-kami H. Biochemical studies on polyamine and its analogues. II. Mechanism of phage inactivation by enzymatically oxidized spermine // Afr. Biol. Chem. — 1969. — V. 33.-P. 994-1000.

206. Palumbo A, d'Ischia M, Misuraca G, Prota G, Schultz TM. Structural modifications in biosynthetic melanins induced by metal ions // Biochim Biophys Acta. 1988 Feb 17. - V. 964(2). - P. 193-9.

207. Pantazis, P., Chatterjee, D., Han, Z., and Wyche, J. Differentiation of human malignant malenoma cells that escape apoptosis after treatment with 9-nitrocamptothecin in vitro // Neoplasia. 1999 - P. 231-240.

208. Parkin D., Bray F., Ferlay J. Global cancer statistics // CA Cancer J.Clin. 2002. - V. 55(2). - P. 74-108.

209. Pawelec G, Koch S, Griesemann H, Rehbein A, Hahnel K, Goutte-fangeas C. Immunosenescence, suppression and tumour progression // Cancer Immunol Immunother. 2006 Aug. - V. 55(8). - P. 981-986.

210. Pegg A.E. The effects of diamine abd polyamines on enzymic me-thylation of nucleic acid // Biochim. Biophys. Acta. 1971. - V. 232. - P/630-642.

211. Pegg A.E. Recent advances in the biochemistry of polyamines in eu-karyotes // J. Biochem. 1986. - V. 234. - P. 249-262.

212. Pegg A.E. Perspectives in cancer research. Polyamine metabolism and its importancein neoplastic growth and as a target for chemotherapy // Cancer Res. — 1988.-V. 48.-P. 751-774.

213. Pegg A.E., Coward J.K. Growth of mammalian cells in the absence of the accumumletion of spermine // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1985. — V. 113.-P. 82-89.

214. Pegg A.E., Mc Cann P.P. Polyamine metabolism and function // Am. J. Physiol.-1982.-243, № 1. P. 212-221.

215. Pegg A.E., Williams-Ashman H.G. Biosynthesis of putrescine in the prostate gland of the rat // J. Biochem. 1968. - V. 108. - P. 533-539.

216. Petropoulos Alexandros D., Xaplanteri Maria A., Dinos George P., Wilson Daniel N., Kalpaxis Dimitrios L. Polyamines Affect Diversely the Antibiotic Potency // J. Biol. Chem. 2003. - V. 278, Issue 45. - P. 44826-44831.

217. Pines J. The cell cycle kinases // Semin.Cancer Biol. 1994. - V. 5. — P. 305-313.

218. Porter CW, Bergeron RJ. Regulation of polyamine biosynthetic activity by spermidine and spermine analogs—a novel antiproliferative strategy // Adv Exp Med Biol. 1988. - V. 250. - P. 677-90.

219. Prota G. Progress in the chemistry of melanins and related metabolites // Med Res Rev. 1988. - V. 8(4). - P. 525-556.

220. Prota G. Some new aspects of eumelanin chemistry // Prog Clin Biol Res. 1988.-V. 256.-P. 101-124.

221. Prota, G. The Chemistry of Melanins and Melanogenesis // Prog. Chem. Org. Nat. Prod. 1995. - V. 64. - P. 93-148

222. Raina A., Janne J. Biosynthesis of putrescine: characterizationof ornithine decarboxylase from regenerating rat liver // Acta. Chem. Scand. 1968. — V. 22.-P. 2375-2378.

223. Raina A., Teloranta T. Association of polyamines and RNA in isolated subcellular particles from rat liver // Biochem. Biophys. Acta. 1967. - V. 138. -P. 200-203.

224. Ramesh M. Ray, Shirley A. McCormack, Claire Covington, Mary Jane Viar, Yi Zheng, and Leonard R. Johnson The Requirement for Polyamines for Intestinal Epithelial Cell Migration Is Mediated through Rac // J. Biol. Chem. -2004. V. 279. - P. 26518-26525.

225. Razin S., Rosansky R. Metabolism of antibacterial action of spermine // Arch. Biochem. And Biophys. 1959. -V. 81. - P. 36-56.

226. Russell D.H. Elevated polyamine synthesis in a mouse LI210 Ieu-kemia//Proc. Am. Cancer Res. 1970. - V. 11. - P. 69.

227. Russell D.H. Drug stimulation of putrescine and spermidine synthesis. Relationships to enhancement of ribonucleic acid synthesis // Biochem. Pharmacol. -1971.-V. 20.-P. 3481-3491.

228. Russell D.H. The rolles of the polyamines: putrescine, spermidine and spermine in normal and malignant tissue // Life Sci. 1973. - V. 13. - P. 1635-1647.

229. Russell D.H. Polyamines in growth-normal and neoplastic // Polyamines in normal and neoplastic growth. New York: Raven Press, 1973. - P. 1-13.

230. Russell D.H. Clinical relevance of polyamines // Crit. Rev. Clin. Lab. Sci.- 1983.-V. 18. -P. 261-311.

231. Russell D.H., Haddox M. K. Cyclic AMP-mediated- induction of ornithine decarboxylase in normal and neoplastic growth // Adv. Enzyme Regul. -1979.-V. 17.-P. 61-87.

232. Russell D.H., Levy C.C. Polyamine accumulation and biosynthesis in a-mouse L1210 Leukemia // Cancer Res. 1971. - V. 31. - P. 248-261.

233. Russell D.H., Levy C.C., Schimpft S.C. Urinary polyamines in cancer patients // Cancer Res. 1971.- V. 31. -P. 1555-1558.

234. Russell D.H., McVicker T.A. Polyamine biogenesis in the rat mamiтагу gland // Physiologist. 1971. - V. 14. - P. 3.

235. Russell D.H., Russell S.D. Relative usefulness of measuring polyamines in serum, plasma and urine as Biochemical Markers of cancer // Clin. Chem. — 1975. V. 21, № 7. - P. 860-863.

236. Russell D.H., Snyder S.H. Amine synthesis in rapidly growing rat liver, chick embryo and various tumors //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1968. - V. 60. -P. 420-427.

237. Sarkar FH, Yiwei L. Using chemopreventive agents to enhance the efficacy of cancer therapy // Can. Res. 2006. - V. 66 (7). - P. 3347-3350.

238. Seiler N. Polyamine metabolism // Digestion 46 Suppl. 1990. - V. 2. -P. 319-330.

239. Seiler N. Thirty years of polyamine-related approaches to cancer therapy. Retrospect and prospect. Part 1. Selective enzyme inhibitors // Curr Drug Targets. 2003. - V. 4(7). - P. 537-64.

240. Seiler N. Thirty years of polyamine-related approaches to cancer therapy. Retrospect and prospect. Part 2. Structural analogues and derivatives // Curr Drug Targets. 2003. - V. 4(7). - P. 565-85.

241. Snyder S.H., Russell D.H. Polyamine synthesis in rapidly growing tissues//Fed. Proceedings. 1970. - V. 29.-P. 1575-1582.

242. Sonawane N. D. J, Francis C. Szoka, Jr., and A. S. Verkman Chloride Accumulation and Swelling in Endosomes Enhances DNA Transfer by Polyamine-DNA Polyplexes // J. Biol. Chem. 2002. - V. 277. - P. 25323-25328.

243. Soulet D, Covassin L, Kaouass M, Charest-Gaudreault R, Audette M, Poulin R. Role of endocytosis in the internalization of spermidine-C(2)-BODIPY, a highly fluorescent probe of polyamine transport. // Cell Physiol. 1993. -V. 157(3).-P. 493-501.

244. Soulet Denis, Gagnon Bruno, Rivest Serge, Audette Marie,''Richard Poulin A Fluorescent Probe of Polyamine Transport Accumulates into Intracellular Acidic Vesicles via a Two-step Mechanism // Biochem J. 2002 - V. 367(Pt 2). -P. 347-357.

245. Southren A.L., Calanog A.M., Mishr S., Weingold A.B. Effect of cycloheximide on production of diamine oxidase by the human placenta // J. Appl. Physiol., 1970. V. 29. - P. 684-686.

246. Sovak, M. Grape Extract, Resveratrol, and Its Analogs: A Review // J. Med. Food. 2001. -V. 4. - P. 93-105.

247. Sturman J.A., Gaull G.E. Polyamine metabolism in the brain and liver of the developing monkey // J. Neurochem. 1975. - V. 25. - P. 267-272.

248. Tabor C.W. The stabilizing effect of spermine and related amines on mitochondria and protoplasts // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1960. - V. 2. -P. 117-120.

249. Tabor C.W., Tabor H. 1,4-diaminobutane (putrescine), spermidine and spermine // Ann. Rev. Biochem. 1976. - V. 45. - P. 285-306.

250. Wallace HM. Polyamine catabolism in mammalian cells: excretion and acetylation // Med.Sci.Res. 1987. - V. 15. - P. 1437-1440.

251. Wallace EM, Fraser AV. Polyamine analogues as anticancer drugs // Biochem Soc Trans. 2003. - V. 31(2). - P. 393-6.

252. Wang, H., Race, E.J., and Shrikhande, A.J. Characterization of antho-cyanins in grape juices by ion trap liquid chromatographymass spectrometry // J. Agric. Food Chem., 2003.-V. 51.-P. 1839-1844.

253. Waxman, S. Differentiation therapy in acute myelogenous leukaemia (non-APL) // Leucemia. 2000. - V. 14. - P. 491-6.

254. Williams-Ashman H.G., Pegg A.E., Lockwood D.H. Mechanism and regulation of polyamine and putrescine biosynthesis in male genital glands and other tissues of mammals // Adv. Enzyme Reg. 1969. - V. 7. - P. 291-323.

255. Zarybnicky V., Horasek P. Influence of ionic strength on the staility ofphage T2rto osmotic shock // Folia Microbiol. 1968. - V. 13. - P. 391-400.

Информация о работе

Шевченко, Анна Александровна
кандидата биологических наук
Москва, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шевченко, Анна Александровна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов"

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Шевченко, Анна Александровна

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шевченко, Анна Александровна, Москва

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Канцеростатические и канцерогенные свойства синтетических аналогов полиаминов
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия