Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел

Шишко, Алексей Альфредович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел"

На правах рукописи

ШИШКО АЛЕКСЕЙ АЛЬФРЕДОВИЧ

ИЗЫСКАНИЕ СРЕДСТВ САНАЦИИ И ДЕЗИНФЕКЦИИ ПРИ АСКОСФЕРОЗЕ ПЧЕЛ

03.00.07-микробиология

16.00.04-ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2006

Работа выполнена в ФГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт» (г. Казань).

Научный руководитель Научный консультант Официальные оппоненты

Ведущее учреждение

- доктор ветеринарных наук, профессор Угрюмова Валентина Степановна

- доктор ветеринарных наук, академик АНТ Равилов Абдулхамет Зарифович

-доктор биологических наук Гильмутдинов Рустем Якубович

-доктор ветеринарных наук, профессор Софронов Владимир Георгиевич

ФГОУ ВПО Башкирский государственный аграрный университет (г. Уфа)

Защита состоится «» и'О^Я_2006 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт» (420075, Казань, Научный городок-2, ФГНУ «ВНИВИ»).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института (г. Казань)

Автореферат разослан <Д» м<уя_2006 г.

Ученый секретарь диссертационного

совета, кандидат ветеринарных нам?, ^

ст. научный сотрудник -/^^тстпггУ3?-^^^З.И. Степанов

1 .ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы. Пчеловодство, являясь одной из рентабельных отраслей сельского хозяйства, обеспечивает получение ценнейших продуктов питания и способствует в регионах с интенсивным развитием повышению урожайности многих, так называемых, энтомофильных сельскохозяйственных культур. Кроме того, в результате опыления насекомыми сельскохозяйственных культур улучшаются посевные качества семян и товарное качество плодов (Смирнов A.M., 1972).

В последние годы гибель пчел и снижение продуктивности в результате инфекционных заболеваний продолжают возрастать, что связано с высокой концентрацией семей пчел (Батуев Ю.М., 1977), массовыми передвижениями (кочевки) пасек, обменом племенной продукцией как внутри одной страны, так и в международном масштабе. Трудности изолирования пчел на местности способствуют широкому распространению возбудителей инфекционных болезней других видов насекомых, которые могут передаваться и медоносным пчелам (Лебедев В.И., 2003; Пономарев В.А., 2004). В связи с интенсификацией исследований в этой области появились новые данные и установлены новые нозологические единицы, которые требуют пересмотра имеющихся знаний по тем или иным болезням. Кроме того, за последние годы наблюдается снижение иммунного статуса пчел в связи с резким ухудшением экологической ситуации, нарушением правил содержания и разведения, применением малоэффективных терапевтических средств (Гробов О.Ф., Сычев М.М., 1998; Смирнов A.M., ; 2000).

К числу наиболее опасных инфекционных заболеваний пчел, причины возникновения которых напрямую связаны с несоблюдением норм содержания, неполноценным кормлением, недостаточной эффективностью ветеринарно-санитарных мероприятий, относятся микозы (аскосфероз. 'аспергиллез и др.). Эпизоотическое состояние по микозам как за рубежом, так и в нашей стране остается напряженное, особенно широкое распространение получил

аскосфероз пчел или известковый расплод (Клочко Р.Т. и соавт., 1996у Яременко H.A., 1996; Яременко H.A. и соавт., 1998; Морозова Л .Я. и соавт., 2005).

Профилактика инфекционных и инвазионных болезней пчел и борьба с ними как у нас, так и в других странах, в основном, строилась на применении химиотерапевтических препаратов или перегоне пораженных семей на новые местности или в новые ульи. Эти меры без уничтожения самого возбудителя во внешней среде не могут привести к оздоровлению пасек, а только снижают заболеваемость, вызывая скрытое течение заболеваний, а также приводят к накоплению антибиотиков, сульфаниламидных препаратов в продуктах пчеловодства, что создает определенную опасность для здоровья людей.

Исходя из этого, важным этапом противоэпизоотических мероприятий является дезинфекция и санация, эффективность которых зависит от того, насколько полно и своевременно будут обеззаражены все инфицированные объекты на неблагополучной пасеке, что обеспечивает разрыв эпизоотической цепи в звене передачи возбудителя инфекционного процесса.

1.2. Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явился поиск эффективных дезинфицирующих, санирующих и лечебно-профилактических средств при аскосферозе медоносной пчелы.

В соответствии с поставленной целью были определены следующие задачи:

- провести мониторинг эпизоотической ситуации по аскосферозу пчел в отдельных регионах России;

- провести скрининг химических соединений из различных классов и изучить фунгицидные свойства эффективных препаратов и их композиций в отношении гриба A. apis;

- изучить ультраструктуру спор гриба A. apis и её изменения при воздействии отобранных перспективных препаратов;

- изучить токсичность эффективных препаратов и их композиций на организм теплокровных животных и медоносной пчелы;

- изучить дезинфицирующие, санирующие и лечебно-профилактические

свойства эффективных препаратов и их композиций при аскосферозе пчел в лабораторных и производственных условиях.

1.3.Научная новизна работы. Отобраны новые функционально замещенные аммониевые соединения, обладающие фунгицидной и фунгистатической активностью, в частности при аскосферозе и аспергиллезе пчел (Патент РФ № 2220957 от 10 января 2004 г.). Впервые изучена активность препарата йодохлорин, а также создана композиция на основе препаратов йодохлорин и йодтриэтиленгликоль, обладающая высокой фунгицидной активностью в отношении возбудителя аскосфероза пчел; изучены изменения ультраструктуры спор A. apis под воздействием препаратов йодохлорин, йодтриэтиленгликоль и композиции на их основе.

Токсикологическими исследованиями установлена безвредность композиции в отношении организма теплокровных животных и медоносной пчелы.

1.4. Практическая ценность работы. Разработаны состав и режимы применения препарата йодохлорин и композиции препарата йодохлорин с йодтри-этиленгликолем в качестве лечебно-профилактических, дезинфицирующих и санирующих средств при аскосферозе пчел.

Методика проведения производственных испытаний по оценке дезинфицирующих, санирующих и лечебно-профилактических свойств йодохлорина и композиции на его основе при аскосферозе, аспергиллезе и гнильцовых заболеваниях пчел утверждена начальником РГУ Управления ветеринарии Республики Марий Эл.

Временное наставление по применению препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем в качестве дезинфицирующего, санирующего, и лечебно-профилактического средства при аскосферозе пчел утверждено директором ВНИВИ 28.10.04. Препарат йодохлорин и композиция йодохлорина с йодтриэтиленгликолем внедрены на пасеках республик Марий Эл и Мордовия.

1.5. Основные положения диссертации, выдвигаемые на защиту:

- мониторинг эпизоотической ситуации по аскосферозу пчел в отдельных регионах России;

- скрининг химических соединений из различных классов и изучение фунгицидных свойств эффективных препаратов и их композиций в отношении гриба A. apis;

- ультраструктура спор гриба A. apis и её изменения при воздействии отобранных перспективных препаратов;

- токсичность йодтриэтиленгликоля и композиции препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем на организм теплокровных животных и медоносной пчелы;

- дезинфицирующие, санирующие и лечебно-профилактические свойства йодтриэтиленгликоля и композиции препаратов йодохлорин и йодтриэтиленгликоль при аскосферозе в лабораторных и производственных условиях.

1.6. Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы доложены и одобрены на научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань) по итогам НИР за 2003-2005гг., на международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам Агропромышленного комплекса (г. Казань), 2003 г.; на международной научной конференции молодых ученых «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных», Владимир, 2004.

1.7. Публикации. Основные положения диссертации изложены в 8 работах, опубликованных в журналах «Ученые записки КГАВМ», «Пчеловодство», «Ветеринарный врач» и материалах научных конференций.

• 1.8. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Работа иллюстрирована 13

таблицами, 20 рисунками. Список литературы включает 243 источников, из них 105 - иностранных.

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований.

Работа выполнена в 2003-2005 гт. в лаборатории вирусологии ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», (г. Казань), а также в условиях пчеловодческих пасек республик Марий Эл и Мордовия.

В процессе выполнения диссертационной работы были использованы:

а) эпизоотический штамм A. apis, выделенный из патологического материала, полученного из неблагополучных по аскосферозу пасек, обладающего характерными культуральными и морфологическими свойствами;

б) питательные среды: мясопептонный агар (МПА), среда Эндо, солевой агар, среда Сабуро и сусло-агар для изучения бактериально-грибковой обсемененности воздуха омшаников, фунгицидных и дезинфицирующих свойств препаратов в лабораторных и производственных условиях;

в) пчелиный расплод и взрослые пчелы для изучения санирующих, лечебно-профилактических и токсикологических свойств композиции йодохлорина с йодтриэтиленгликолем в лабораторных и производственных условиях;

г) мед, полученный от семей пчел, не подвергшихся и подвергшихся обработке композицией йодохлорина с йодтриэтиленгликолем, для ветеринарно-санитарной оценки.

Культуру A. apis выделяли из материалов, полученных с неблагополучных по грибковым заболеваниям пасек. Материалом служили трупы личинок и куколок, участки сот размером 10x10 см с погибшими мумифицированными личинками.

Для микроскопии пчел и личинки помещали в чашки Петри и

просматривали под микроскопом при малом увеличении с целью обнаружения на поверхности их тела гифов гриба, органов спороношения, спороцист и мицелия.

Для выделения культуры возбудителя соскобы с тел погибших личинок и куколок переносили в чашки Петри на среду Сабуро и сусло-агар. Культивирование гриба A. apis проводили на твердых питательных средах в условиях термостата при температуре 30-35°С. С целью получения чистой культуры A. apis проводили дополнительный пересев с периферии колоний, • характерных для данного вида гриба.

Идентификацию выросших колоний проводили визуально, используя для этою стереоскопический микроскоп МБС-9 и руководствуясь видовыми дифференциальными признаками, характерными для данного вида возбудителя.

Для первичного отбора использовали вещества из различных классов химических соединений и композиций на их основе. Фунгицидные свойства препаратов изучали общепринятыми методами (Першин Г.Н., 1971), используя при этом концентрации веществ от 0,125 до 2%, при экспозиции 5-120 минут.

Учет результатов проводили в течение 5-14 суток. В дальнейшем, фунгицидные свойства препаратов, отобранных при первичном отборе, были изучены с применением метода батистовых тестов (Першин Г.Н., 1971; Вашков В.И., 1977).

Изучение острой оральной токсичности проводили общепринятыми методами согласно Методическим указаниям МУ 1.2.1105-02 «Оценка токсичности и опасности дезинфицирующих средств» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 10 февраля 2002 г.), с учетом «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Фисенко В.П. и соавт., 2000), а также согласно «Методическим рекомендациям по изучению общетоксического действия фармакологических средств», одобренным Фармакологическим государственным комитетом Минздрава России (протокол №13 от 25 декабря

1997г.) и утвержденным Управлением государственного контроля лекарственных средств и медицинской техники Минздрава России 29 декабря 1997 г., на белых мышах массой 18-22 г, белых крысах массой 180-210 г. Опыты повторяли трехкратно. Наблюдение за животными вели в течение 14 суток, отмечая сроки появления клинических признаков отравления, его характер, сроки гибели животных и их выздоровление.

Изучение токсического влияния композиции йодохлорина с йодтриэтиленгликолем на организм пчелы проводили методом дозированного скармливания в- лабораторных условиях согласно «Методическим рекомендациям по изучению препаратов и способов борьбы с варроозом пчел, 1982» с последующим проведением гистоморфологических исследований органов пищеварения пчел. Вскрытие проводили через сутки после обработки препаратом.

В качестве материала для гистологических исследований были отобраны: медовый зобик; средняя кишка; тонкая и толстая кишка заднего отдела кишечника опытных и контрольных (не подвергнутых обработке) групп пчел.

Гистосрезы готовили с парафиновых блоков толщиной 2-5 мкм с последующим окрашиванием гематоксилин-эозином (Меркулов Г.А., 1969).

Для более детального изучения влияния композиции на организм пчелы проводили биохимические исследования по выявлению изменения активности ферментов в организме пчел, в частности каталазы — манганометрическим' методом (Мерщиев В.М., 1990).

Испытания лечебно-профилактических свойств композиции йодохлорина с йодтриэтиленгликолем проводили на пчелосемьях, подобранных по принципу аналогов, в идентичных условиях содержания. При этом учитывали силу семей и степень пораженности их аскосферозом. С этой целью на пасеке сформировали 4 группы (по 5 семей в каждой группе) пчелосемей — 3 опытных (инфицированных аскосферозом) и 1 контрольную, не инфицированную аскосферозом.

Исследование дезинфицирующих и санирующих свойств композиции йодохлорина с йодтриэтиленгликолем проводили в лабораторных и производственных условиях на пасеках республик Мордовия и Марий Эл, неблагополучных по аскосферозу общепринятыми методами (Смирнов A.M., 1971), а также согласно «Методике проведения производственных испытаний по оценке санирующих и лечебно-профилактических свойств йодохлорина и композиций на его основе при аскосферозе, аспергиллезе и гнильцовых заболеваниях пчел», утвержденной начальником РГУ Управления ветеринарии Республики Марий Эл.

Перед проведением испытаний по изучению санирующих свойств композиции йодохлорина с йодтриэтиленгликолем были исследованы сезонные колебания бактериально-грибковой обсемененности воздушной среды омшаника в течение весенне-летне-осеннего периода (апрель-октябрь).

Данные колебания оценивали с учетом общей бактериальной обсемененности, а также дифференцированно по выделению Е. coli, St. aureus и грибов. Отбор проб воздуха проводили методом седиментации (Антонов В.Я., Блинов П.Н., 1974). Аэрозольную санацию воздушной среды омшаника проводили с применением аэрозольного генератора САГ-1; доза препарата при этом составляла 5-15 мл/м3. Экспозиция при постановке опытов составляла 10-90 мин. Оценку эффективности аэрозольной санации воздуха проводили по изменению количества колоний Е. coli, St. aureus и грибов общепринятыми методами (Боченин Ю.И., Холодов И.Я., 1986).

Для изучения влияния композиции на состав меда обработанных семей провели ветеринарно-санитарную экспертизу. В исследованиях был использован центрифугированный мед из запечатанных не менее чем на 2/3 площади сот, отобранных от опытных пчелосемей после опрыскивания их композицией, состоящей из йодохлорина и йодтриэтиленгликоля, и скармливания пчелам лечебно-сахарного сиропа соответствующих концентраций. Контролем служил мед, полученный от семей, получавших

сироп в чистом виде и обработанных стерильной дистиллированной водой. При этом определяли органолептические, физико-химические и биохимические показатели («Мед натуральный». Технические условия. ГОСТ 19792-87).

Полученный цифровой материал был обработан статистически -методами вариационной статистики; при этом расчитывали . критерий достоверности по формулам с применением показателя достоверности Р, который устанавливали по таблице Стьюдента. Расчеты проводились на персональном компьютере при помощи програмного обеспечения Mathcad 11 Enterprise Edition [www.mathcad.com].

При выполнении отдельных этапов работы принимали участие: к.в.н. старшие научные сотрудники ВНИВИ Матвеева Е.Л. и Габдраупова Х.С.; аспирант Фаткуллова А.А.; заведующий лабораторией разработки и постановки на производство диэмульгаторов и ингибиторов коррозии ОАО «НИИ нефтепромхим» к.х.н. Угрюмов О.В.; к.х.н., старший научный сотрудник лаборатории химии нефти ИОФХ КНЦ РАН Фахретдинов П.С. за что автор выражает им искреннюю благодарность.

2.2. Результаты исследований

Учитывая важность оценки эпизоотической ситуации, дающей представление о масштабе распространения очагов заболевания, был проведен анализ результатов эпизоотического мониторинга аскосфероза пчел в регионах Поволжья и Урала за ряд лет. Полученные данные свидетельствует о широком распространении аскосфероза во многих регионах России. Наиболее неблагополучными по этому заболеванию являются республики Удмуртия и Татарстан (рисунки 1, 2). Так, в Республике Удмуртия процент семей, пораженных аскосферозом, достигал до 30-40%; при этом пик заболеваемости в 1998, 1999 и 2000 гг. достигал 38,5%, 40,0% и 33,3% соответственно с последующим снижением заболеваемости до спорадических случаев.

В Республике Татарстан в эти ^ 50,0" сроки заболеваемость пчелосемей ¡5 40,0

о 30,0

аскосферозом варьировала от 8,9 до | ^

20,7% и максимумы заболевания Ц )оо

регистрировались в 1998 (20,7% ), « 00

1999 (14,3%) и 2003 (13,6%) г.г., а с

последующим снижением Рис.I. Динамика заболеваемости аскосферозом в

Республике Удмуртия

заболеваемости до 8,9% (2004г.).

7,7

0,4

1998

2000

2001

2002 ГОДЫ

В республиках

Башкортостан, ^

17.5

Марий Эл и Мордовия, а так же ё 15

§ 12,5

Нижегородской области заболевав- | ш

о 7,5

мость относительно невысока и как § 5

НЗ 2,5

видно из рисунков 3, 4, 5 и 6 не м 0

достигает больших значений; при этом

следует отметить, что в Рес'публикеРис2- Динамика заболеваемости аскосферозом

в Республике Татарстан

Башкортостан лишь в 1999 г. был отмечен высокий уровень 30-1

заболеваемости (25,9%), а в последую-^ 25"

10-

1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004

ГОДЫ

25,9

4,2

Рис.3. Динамика заболеваемости аскосферозом в Республике Башкортостан

2002 годы

щие годы наблюдалось снижение заболе-

ваемости. В Республике Марий Эл высо- § кий уровень заболеваемости (23%) был^ 5-отмечен в 1998 г., а в последующие годы уровень заболеваемости аскосферозом колебался в пределах 0,3-1,1% и в 2002 г. не выявлено ни одного случая

заболевания пчелосемей. В Республике Мордовия относительно высокая заболеваемость отмечалась в 1999 — 2001 г.г., и процент пораженных семей составил 13,7,9,4 и 13,1 соответственно.

13,7

1998 1999 2000 2001 2002

ГОДЫ

Рис.4. Динамика заболеваемости аскосферозом в Республике Марин Эл

Рис.5. Динамика заболеваемости аскосферозом в Республике Мордовия

12-1

6420

1998 1999 2000 2001 ' Рис.6. Динамика заболеваемости аскосферозом в Нижегородской области

Нижегородской . области относительно высокий уровень заболеваемости аскосферозом наблюдался лишь в 2000 г. (13,2%). Необходимо также ^ 8. отметить, что для данного региона § характерен низкий процент 1

заболеваемости аскосферозом в целом. 5

Таким образом, анализ эпизоотической ситуации показал, что аскосфероз представляет серьезную угрозу для развития пчеловодства в связи с его достаточно широким распространением, что свидетельствует о необходимости разработки и внедрения в отрасль пчеловодства эффективных лечебно- профилактических, санирующих и дезинфицирующих средств широкого спектра действия и усовершенствование на их основе ветеринарно-санитарных мероприятий по купированию неблагополучных очагов и оздоровлению пасек.

Первичному испытанию в отношении возбудителя аскосфероза пчел были подвергнуты соединения из различных химических классов, синтезированные Институтом органической и физической химии им. А.Е. Арбузова и ОАО «НИИ нефтепромхим», а также композиции на их основе. В результате была установлена их фунгицидная активность в отношении вышеуказанного

возбудителя, что послужило основанием для оформления заявок на предполагаемые изобретения, на которые получен Патент на изобретение РФ № 2220957 от 10 января 2004 г. На основании испытаний были отобраны оптимальные йодсодержащие препараты, обладающие высокой фунгицидной активностью: йодохлорин, йодтриэтиленгликоль и композиция на их основе. Так, йодохлорин в концентрации солей KJ 0,3 - NaCl 0,9масс% обладает фунгицидной активностью при экспозиции 15 минут. Аналогичный результат достигается при воздействии йодтриэтиленгликоля в концентрации 0,5% при том же сроке экспозиции; в концентрациях 0,1- 0,4% йодтриэтиленгликоль не обладает фунгицидным действием. При концентрации йодтриэтиленгликоля в препарате йодохлорин в объеме 0,5% фунгицидный эффект проявляется при экспозиции 5 минут. Исходя из полученных данных, наиболее оптимальным соотношением препаратов йодохлорин и йодтриэтиленгликоль в композиции составляет 0,3-0,9 масс% и 0,5% соответственно.

Композиция на основе йодохлорина и йодтриэтиленгликоля готовится путем электрохимической активации раствора солей йодида калия и хлорида натрия с последующим добавлением 0,5% йодтриэтиленгликоля. В результате химического взаимодействия йодохлорина и йодтриэтиленгликоля в растворе происходят следующие реакции:

- образование диальдегидов и оксиальдегидов;

- образование дикислот, альдегидокислот;

- образование перекисных соединений;

- образование гидроперекисей;

При взаимодействии с хлорсодержащими соединениями происходит реакция хлорирования с образованием moho-, ди- и полихлортриэтиленгликоля или замещение гидроксила на хлор с образованием дигалоидных и гидроксигалоидных соединений.

При взаимодействии этиленгликоля с хлорноватистой кислотой происходит образование моно- и ди- эфиров последней.

При взаимодействии с йодсодержащими соединениями протекают те же процессы, что и с хлорсодержащими. В результате взаимодействия йодтриэтиленгликоля с интермедиатами йодохлорина происходит образование различных активных комплексов с хлористым йодом, хлорОм, йодом, хлорноватистой и йодноватистой кислотами, хлороводородом и т.д. Перечисленные выше комплексы обладают выраженными антимикробными свойствами.

Учитывая выраженную антимикробную активность композиции препарата йодохлорин и йодтриэтиленгликоля, большой научный интерес представляет электронно-микроскопическое изучение гриба A. apis по изучению ультраструктуры споры гриба и изменений после воздействия композиции, позволяющее более полно раскрывать механизм дезинфицирующего действия композиции. К тому же в современной отечественной литературе нам не удалось найти данные по электронной микроскопии относительно ультраструктуры спор A. apis. Результаты изучения показали, что наиболее ярко механизм действия композиции проявляется в первые 5 — 10 минут и выражается в виде значительных морфологических изменений как поверхностных, так и глубоких структур споры. Скорость и глубина изменений прямо пропорциональны длительности воздействия. Было установлено, что при экспозиции 5 минут споры A. apis находятся в начальной стадии распада, а при экспозиции 10 минут происходит практически полный распад цитоплазмы и структурных компонентов спор гриба.

Динамика деструктивных процессов в споре обусловлена синергическим действием компонентов композиции. На ранних стадиях композиция обладает механизмом действия подобно действию кислот - при этом наблюдается отхождение цитоплазмы от цитоплазматической мембраны, а затем -практически полное растворение цитоплазматической мембраны и частичное разрушение муреина клеточной стенки. Впоследствии проявляются изменения, характерные действию галогенов (I", СГ), которые, проникая в клетку сквозь

поврежденную оболочку, оказывают губительное действие на внутренние структуры и цитоплазму споры. В результате в споре образуются конгломераты. с высокой электронной плотностью в виде мелких гранул.

Изучение острой оральной токсичности йодтриэтиленгликоля и композиции препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем на белых мышах и крысах показало, что при введении йодтриэтиленгликоля перорально белым мышам ЛДюо и МПД составляют 5100 мг/кг и 4350 мг/кг соответственно, ЛД50 - 4675 мг/кг. Для белых крыс ЛДюо и МПД составляют 5350 мг/кг и 4600 мг/кг соответственно, ЛД50 - 4975 мг/кг. Исходя из полученных данных, йолтритп пен гликоль относится к III классу опасности (ГОСТ 12.1.007 - 76).

Исследования острой оральной токсичности композиции препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем на белых мышах и крысах показали, что ЛД|оп и МПД составляют 5550 мг/кг и 4800 мг/кг соответственно; ЛД50 - 5150 мг/кг. Для белых крыс ЛДюо и МПД - 6900 мг/кг и 6150 мг/кг соответственно, а ЛД5о - 6525 мг/кг. Исходя из полученных данных, композиция относится к IV классу опасности (ГОСТ 12.1.007 — 76) и является практически нетоксичным соединением.

Важное место в разработке дезинфицирующих, санирующих и лечебно-профилактических средств принадлежит оценке их влияния на организм животных, в присутствии которых они применяются, исходя из этого, нами проведены исследования по изучению влияния на организм медоносной пчелы композиции препарата на основе йодохлорина и йодтриэтиленгликоля.

В комплекс исследований входило: изучение выживаемости пчел в лабораторных условиях, состояние поведения и изменение активности фермента каталазы в организме пчелы.

В результате было установлено, что при получении пчелами препарата и сахарного сиропа в соотношении 1:5 в течение 10 суток погибло 13,7 % от общего количества пчел, участвующих в опыте. При увеличении уровня их соотношений до 1:4 и 1:3 количество погибших пчел составило 15,5 % в обоих

случаях. Дача композиции с сахарным сиропом в соотношении 1:2 не вызывала повышения уровня смертности подопытных пчел. За время эксперимента в этом случае погибло 14,5%. В то же время в контрольной группе пчел, содержавшихся в аналогичных условиях и получавших сахарный сироп в чистом виде, было зафиксировано 16,4% гибели пчел.

При этом следует отметить, что за период исследований по оценке состояния и поведения как опытных, так и контрольной групп пчел отклонений нами отмечено не было. Более низкий процент смертности пчел в опытных группах по сравнению с контрольной обусловлен наличием в препарате ионов йода, оказывающих стимулирующее действие и способствующих выживанию пчел в стрессовой ситуации, вызванной содержанием их в условиях, отличающихся от естественных. Исследованиями Мукминова М.Н. и Салимова Т.М. (2005) также было показано стимулирующее действие препаратов йода, в том числе йодохлорина на яйценоскость маток, которая, согласно результатам их исследования, при скармливании препаратов с сахарным сиропом повышается на 5-15%. Также, выраженное стимулирующее действие йодорганических соединений на ускорение развития расплода, увеличение продолжительности жизни рабочих пчел и повышение продуктивности было отмечено Ишмуратовым Г.Ю. и соавт. (2005).

Одним из этапов наших исследований явилось изучение ферментативной активности каталазы. По мнению некоторых авторов (Жеребкин М.В., 1979; Мерщиев В.М., 1995) активность каталазы является одним из основных показателей уровня обмена веществ медоносной пчелы. Каталаза - тканевой фермент, который участвует в регуляции окислительно-восстановительных процессов и, следовательно, в регуляции обмена веществ в тканях организма медоносной пчелы — активирует процессы разложения пероксидов в тканях и нейтрализации продуктов метаболизма. В результате установлено, что индекс активности в процессе исследований в течение трех суток при пероральном применении композиции колебался: в средней кишке 0,030±0,001-0,029±0,007;

прямой кишке 0,051±0,002-0,050±0,001, а в контрольной группе показатели колебались в средней кишке 0,030±0,001; прямой 0,053±0,002. Следует отметить, что во всех случаях показатель достоверности Р>0,05.

Изучение лечебно-профилактического действия препарата йодохлорин при аскосферозе методом дозированного скармливания показало, что применение препарата йодохлорин в зависимости от соотношения препарата и сахарного сиропа вызывало снижение уровня пораженности опытных пчелосемей от 43,9 до 60,8%. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Исследования лечебно-профилактического действия препарата йодохлорин при аскосферозе пчел методом скармливания

Группа 11ч ел/сем. Препарат Исходные КОНЦ-ИИ, масс% Соотношение препарата и сахарного сиропа До обработки После обработки Уровень снижения заболеваемости.%

1 Йодохлорин 03 - 0,9 12 24,0 ±3,0 9,4 ± 1,7 60.8

2 -II- -II- 13 21,0 ±3,3 8,9 ± 23 57,6

3 -II- -II- 1:4 18,0 ± 2.6 10,1 ± 1,8 43,9

4 -II- -II- 15 26,0 ± 3,1 12,8 ± 2,1 50,8

5 Сахарный сироп - - 19,0 ± 2Д 24,0± 2,5 -

Изучение лечебно-профилактического действия йодохлорина методом опрыскивания показало, что процент снижения пораженности составил от 66 до 75,4. Результаты исследования представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Исследование лечебно — профилактического действия препарата йодохлорин при аскосферозе пчел методом опрыскивания

Группа пчел/сем Препарат Исходные КОКЦ-ИН, масс% До обработки После обработки Уровень снижения заболеваемости, %

1 йодохлорин 0,3-0,9 21,0±23 6,1 ± 0,9 70

2 -II- -II- 40,0 ±2,1 5.9 ±1.6 75,4

3 20,0 ± 2,0 6,8 ± 2,1 66

.4 -II- 25,0 ± 3,1 6,3 ± 1,3 74,4

5 Физраствор - 23,0 ± 1,8 24.0 ± 2,6 -

Из данных, представленных в таблицах 1 и 2, видно, что опрыскивание при аскосферозе более эффективно, чем скармливание препаратов. Так, в

среднем, процент снижения зараженности пчелосемей аскосферозом при использовании препарата йодохлорин составил 53,3% при скармливании и 64,3% при опрыскивании соторамок в присутствии пчел.

Испытания дезинфицирующих и санирующих свойств препарата йодохлорин и композиции препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем при аскосферозе медоносной ' пчелы были проведены в несколько этапов. На первом этапе исследований была изучена дезинфицирующая активность препарата йодохлорин и композиции его с йодтриэтиленгликолем на возбудителя аскосфероза . пчел (A. apis) в лабораторных условиях. Исследования проводили на тест-объектах из материалов, используемых в пчеловодстве. Результаты исследования представлены в таблице 3.

Таблица 3 - Дезинфицирующая активность препарата йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем на тест-объектах в отношении _ A. apis_■__

Тест-поверхности Экспозиция, мин Результаты исследований

■, Йодохлорин Композиция • Контроль

Конц-ня, масс% Опыт ' Конц-ня, масс% Опыт

Дерево 10 0,3-0,9 + 0;3-0,9+0,5 + +

15 + +

30 +

60 - +

Соты 10; 0,3-0,9 + 0,3-0,9+0,5 +

15 - +

30 - +

£0 - +

Нержавеющая сталь 10 0,3-0,9 + 0,3-0,9+0,5 + +

15 + + +

30 + - +

60 - - +

Оцинкованное железо 10 0,3-0,9 + 0,3-0,9+0,5 + +

15 . + + +

30 + - +

60 - . - +

Примечание: «+» и «-» - рост и отсутствие роста исходной культуры Из данных таблицы 3 видно, что дезинфицирующая активность

композиции выше активности препарата йодохлорин. Так, дезинфицирующий

эффект композиции в лабораторных опытах наступает при экспозиции 15 минут для деревянных и 30 минут для металлических тест-объектов; для тест -объектов, изготовленных из воска, дезинфицирующая активность проявляется при экспозиции 10 минут, что обусловлено отсутствием на последних биологической защиты. При этом следует отметить, что дезинфицирующая активность препарата йодохлорин на деревянных поверхностях несколько ниже и гибель спор возбудителя наступает лишь через 30 минут экспозиции, а на металлических поверхностях — через 1 час; тест-объекты, изготовленные из воска, обеззараживаются при экспозиции 15 минут.

Для подтверждения результатов лабораторных опытов были проведены производственные сравнительные испытания дезинфицирующей активности препарата йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем. Результаты испытаний представлены в таблице 4.

Таблица 4 - Дезинфицирующая активность препарата йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем в производственных условиях

отношение A. apis

Тест-иовсрхности Экспозиция, мин Результаты исследований

Йодохлорин Композиция Контроль

Конц-ип, масс% Опыт Конц-ня, ,масс% Опыт

Ульи 15 03-0,9 + 0,3-0,9+0,5 + +

30 + - +

- - +

90 - - +

Соторам ки 15 0,3-0.9 + 0,3-0.9-0,5 + +

30 + - +

60 ■ - +

90 - - +

Инвентарь из нержавеющрйст алн " 15 0,3-0,9 + 0,3-0,9+0,5 + +

30 + + +

60 + - +

90 - - +

Инвентарь из оцинкованного железа 15 0.3-0,9 + 0.3-0,9+0,5 + +

30 + + +

60 + - +

90 - - +

Примечание: «+» и «-» - рост и отсутствие роста исходной культуры Из представленных в таблице 4 данных видно, что в производственных

условиях дезинфицирующая активность композиции ниже результатов,

полученных в лабораторных экспериментах. Так, если дезинфицирующий эффект для деревянных тест-поверхностей в лабораторных условиях установлен при экспозиции 15 минут, то гибель спор возбудителя на поверхности стенок улья и соторамках наступает лишь через 30 минут, а для уничтожения спор A. apis на металлических поверхностях экспозиция составляла 60 минут против 30 минут в лабораторных условиях. Как и в предыдущих исследованиях препарат йодохлорин показал более низкую активность по сравнению с композицией. Так, на тест-поверхностях из дерева и воска дезинфицирующая активность проявляется в течение 30 минут, для металлических поверхностей необходимо увеличение экспозиции до 90 минут.

Сравнительными исследованиями санирующей активности препарата йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем показано, что композиция обеспечивает более качественную санацию по сравнению с препаратом йодохлорин, что доказано более высоким процентом снижения как общей бактериальной обсемененности воздушной среды омшаника, так и видовой микрофлоры, включая грибы и бактерии рода Bacillus. Так, активность композиции, при санации воздушной среды, в среднем, выше активности препарата йодохлорин на 17,7%. Что же касается эффективности композиции в отношении грибов и бактерий рода Bacillus, то здесь ее активность выше активности препарата йодохлорин на 12,7 и 11,4% соответственно.

В ходе изучения антимикробной активности было установлено, что санирующий эффект препарата ' йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем зависит не только от дозы, но и от сроков экспозиции. Так, проведенными исследованиями показано, что наиболее эффективной дезинфицирующей дозой для препарата йодохлорин является 15 мл/м3 при экспозиции 30 минут, а для его композиции с йодтриэтиленгликолем 10 мл/м1 при экспозиции 15 минут.

Полученные данные показывают, что композиция препарата йодохлорин с

йодтриэтиленгликолем проявляет более высокую активность в отношении как грибковой, так и бактериальной микрофлоры и может быть рекомендована в качестве средства для санации воздушной среды омшаника в весенний период для санитарного разрыва, в осенний период — перед постановкой ульев на зимовку на пасеках неблагополучных по микозам (аскосфероз, аспергиллез), а также - для плановых обработок.

Заключительным этапом наших исследований стала ветеринарно-санитарная экспертиза меда, полученного от обработанных семей. Результаты исследования показали, что органолептические и физико-химические показатели как контрольного, так и меда после обработки композицией соответствовали нормативным показателям качества меда (ГОСТ 19792 — 87).

Таким образом, проведенные исследования позволяют нам предложить препарат йодохлорин и композицию препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем в качестве дезинфицирующих, санирующих и лечебно -профилактических средств при аскосферозе медоносной пчелы, а также режимы обработки пчелосемей, пораженных аскосферозом и санации воздушной среды омшаника созданной композицией.

Препараты внедрены на пасеках республик Марий Эл и Мордовия в качестве дезинфицирующего и санирующего средства при аскосферозе пчел.

3. ВЫВОДЫ

1. Показана высокая степень пораженности пчелосемей аскосферозом; в Удмуртии процент семей, пораженных аскосферозом, достигает до 3040%, в Татарстане заболеваемость — до 9-20%, в Башкортостане — до 25,9%, Марий Эл — до 22,5% , в Республике Мордовия - до 13,7%, в Нижегородской области — до 13%.

2. Отобранные препараты йодохлорин и йодтриэтиленгликоль, обладающие высокой фунгицидной активностью, позволили создать на их основе

композицию, содержащую 0,3 йодида калия - 0,9 хлорида натрия (масс%) и 0,5% йодтриэтиленгликоля, оказывающую эффективное действие в отношении A. apis.

3. Композиция на основе препаратов йодохлорин и йодтриэтиленгликоль относятся к IV классу опасности (ЛД50 для белых мышей — 5150 мг/кг, для крыс — 6525 мг/кг). Препарат не оказывает отрицательного воздействия на организм медоносной пчелы; не вызывает патологических изменений органов пищеварения и не влияет на ферментативную активность каталазы.

4. Установлено, что препарат йодохлорин обеспечивает обеззараживание спор A. apis на деревянных поверхностях при экспозйции 60 минут, на металлических поверхностях — через 1,5 часа. При использовании композиции указанный эффект на деревянных поверхностях достигается при экспозиции 30 минут, металлических поверхностях - 60 минут.

5. Электронно-микроскопическими исследованиями подтверждена высокая фунгицидная активность препаратов йодохлорин, йодтриэтиленгликоль и композиции на их основе на споры гриба A. apis.

6. Обработка пчел и соторамок композицией методом мелкокапельного опрыскивания не вызывает изменений в химическом и качественном составе меда и он соответствует ГОСТу 19792 - 87.

7. Препарат йодохлорин рекомендуется в качестве лечебно -профилактического средства; композиция препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем - в качестве лечебно - профилактического, дезинфицирующего и санирующего средства при аскосферозе пчел.

¿ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для проведения лечебно-профилактических мероприятий при аскосферозе препарат йодохлорин рекомендуется применять путем трехкратного скармливания с сахарным сиропом в соотношении 1:2 в дозе 50 мл на улочку с интервалом 5 суток; методом мелкокапельного опрыскивания - 15 мл на рамку, двукратно, с интервалом 5 суток.

2. Разработано временное наставление по применению препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем в качестве дезинфицирующего, санирующего и лечебно-профилактического средства при аскосферозе пчел, утвержденное директором ВНИВИ 28.10.04.

Препараты йодохлорин и композиция препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем внедрены на пасеках республик Марий Эл и Мордовия.

5.СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шишко. A.A. Изыскание дезинфицирующих средств при микозах пчел / A.A. Шишко . // Матер, международ, науч. Конф., «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных», 24-26 марта, Владимир, 2004. - С. 179-180.

2. Шишко. A.A. Токсикологическая оценка действия на организм медоносной пчелы композициии на основе препарата йодохлорин / A.A. Шишко; B.C. Угрюмова, А.З. Равилов // Ученые записки КГАВМ, Казань. - 2005. - С.309-311.

3. Шишко. A.A. Разработка средств санации при болезнях пчёл / A.A. Шишко, B.C. Угрюмова, А.З. Равилов // Ветеринарный врач, Казань. -2005. - №4. - С.34.

4. Эпизоотологический мониторинг болезней пчёл в республике Татарстан

/ B.C. Угрюмова, A.A. Шишко. А.З. Равилов // Матер. Междунар. научно

- производств, конф. по акт. проблемам Агропром. комплекса. - Казань.

- 2003. — 4.1. — С. 145-147.

5. Действие йодохлорина на организм пчелы / М.Н. Мукминов, B.C. Угрюмова, А.З. Равилов, Ä.A. Шишко // Пчеловодство. - М., 20Ö3. - №3. -C.3I.

6. Эпизоотический мониторинг болезней пчёл / B.C. Угрюмова, A.A. Шишко. А.З. Равилов // Пчеловодство. - М., 2004.-№3. - С.25-26.

7. Четвертичные аммониевые соединения-перспективиое направление в ветеринарной дезинфектологии / B.C. Угрюмова, А.З. Равилов, A.A. Шишко // Ветеринарный врач, Казань. - 2005. - №1. - С.59-62.

8. Пат. 2220957 Российская Федерация «Ы-[Алкил-феноксиполи(этиленокси)карбонилметил]гетерилоний хлориды, обладающие свойствами ингибиторов коррозии, а также бактерицидной,вирусоцидной и фунгицидной активностью, и способ их получения» / Угрюмов О.В., Варнавская O.A., Хлебников В.Н., Лебедев H.A., Романов Г.В., Угрюмова B.C., Фахретдинов П.С., Равилов А.З., Камзина Ю.Н., Юсупова Г.Р.. Шишко A.A.. Гатиатуллин И.Г.;'Заявитель и патентообладатель: Открытое акционерное общество «Научно-исследовательский институт по нефтепромысловой химии» - № 2002133263; заявл. 09.12.2002; опубл. 10.01.2004. - 6с.

Подписано в печать 07.04.2006. Формат 60x84/16. Усл.печ.л. 1. Заказ №3. тираж 100 экз. Офсетный участок ВНИВИ 420075, г. Казань, Научный городок-2

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шишко, Алексей Альфредович

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Морфологическая характеристика и физиологические особенности гриба A. apis

1.2. Эпизоотическая ситуация по заболеванию аскосферозом медоносной пчелы

1.3. Действие физико - химических факторов на возбудителя аскосфероза пчел

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1. Штаммы микроорганизмов, питательные среды, взрослые пчелы, расплод, мед

2.2. Выделение возбудителя аскосфероза пчел и изучение его культурально-морфологических свойств

2.3. Первичный отбор и изучение фунгицидных свойств препаратов из различных классов химических соединений

2.4. Изучение физико-химических свойств композиции препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем

2.5. Изучение токсичности композиции препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем

2.6. Изучение лечебно-профилактических свойств препарата йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем при аскосферозе пчел

2.7. Изучение дезинфицирующих и санирующих свойств препарата йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем при аскосферозе пчел в лабораторных и производственных условиях

2.8. Электронно-микроскопическое исследование ультраструктуры гриба A. apis под воздействием препарата йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем

2.9. Ветеринарно-санитарная экспертиза меда, полученного от пчел, подвергнутых обработке композицией препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем

2.10. Статистическая обработка результатов исследования

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Эпизоотическая ситуация по аскосферозу пчел 2 Изучение культурально-морфологических свойств изолятов

A. apis, выделенных из неблагополучных пасек ^ Первичный отбор и изучение фунгицидных свойств препаратов из различных классов химических соединений ^ Физико-химическая характеристика композиции йодохлорина с йодтриэтиленгликолем ^ Результат исследования токсических свойств композиции йодохлорина с йодтриэтиленгликолем ^ Результаты исследования лечебно-профилактического действия препарата йодохлорин при аскосферозе пчел

Результаты изучения дезинфицирующих и санирующих ^ у свойств препарата йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем при аскосферозе пчел в лабораторных и производственных условиях

Результаты электронно-микроскопического изучения ^ g ультраструктуры спор гриба A. apis под воздействием препарата йодохлорин и его композиции с йодтриэтиленгликолем

Результаты ветеринарно-санитарной экспертизы меда, 3.9. полученного от пчел, подвергнутых обработке композицией препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел"

Актуальность темы. Пчеловодство, являясь одной из рентабельных отраслей сельского хозяйства, обеспечивает получение ценнейших продуктов питания и способствует в регионах с интенсивным развитием повышению урожайности многих, так называемых, энтомофильных сельскохозяйственных культур. Кроме того, в результате опыления насекомыми сельскохозяйственных культур улучшаются посевные качества семян и товарные качество плодов [106].

Медоносная пчела подвержены различным заболеваниям, ущерб от которых, зачастую, может быть очень велик, поэтому успешное развитие пчеловодства не представляется возможным без глубокого и всестороннего изучения патологии медоносной пчелы.

В последние годы гибель пчел и снижение продуктивности в результате инфекционных заболеваний продолжают возрастать, что связано с высокой концентрацией семей пчел [5], массовыми передвижениями (кочевки) пасек, обменом племенной продукцией как внутри одной страны, так и в международном масштабе. Трудности изолирования пчел на местности способствуют широкому распространению возбудителей инфекционных болезней других видов насекомых, которые могут передаваться и медоносным пчелам [73, 98]. В связи с интенсификацией исследований в этой области, появились новые данные и установлены новые нозологические единицы, которые требуют пересмотра имеющихся знаний по тем или иным болезням.

Важную роль в распространении заболеваний играют биологические особенности поведения пчел, перелеты пчел, слеты роев, нападение на более слабые семьи [31]. Определенную роль при этом играют и экологические факторы - повышение радиационного фона, загрязнение окружающей среды и неквалифицированное применение лечебных препаратов [9]. Предрасполагающими факторами в развитии многих заболеваний являются резкие колебания температуры и повышенная влажность воздуха, нарушение вентиляции улья и высокое содержание СО2 [53].

Кроме того, за последние годы наблюдается снижение иммунного статуса пчел в связи с резким ухудшением экологической ситуации, нарушением правил содержания и разведения, применением малоэффективных терапевтических средств [29, 110].

К числу наиболее опасных инфекционных заболеваний пчел, причины возникновения которых напрямую связаны с несоблюдением норм содержания, неполноценным кормлением, недостаточной эффективностью ветеринарно-санитарных мероприятий, относятся микозы (аскосфероз, аспергиллез и др.). Эпизоотическое состояние по микозам как за рубежом, так и в нашей стране остается напряженным, особенно широкое распространение получил аскосфероз пчел или известковый расплод [59, 89, 136, 137].

Исходя из этого, важным этапом противоэпизоотичеких мероприятий является дезинфекция и санация, эффективность которых зависит от того, насколько полно и своевременно будут обеззаражены все инфицированные объекты на неблагополучной пасеке, что обуславливает разрыв эпизоотической цепи в звене передачи возбудителя инфекционного процесса. Для профилактики и лечения аскосфероза в последние годы многими исследователями предложен целый ряд достаточно активных фунгицидных препаратов [10, 21, 20, 25, 30, 31, 34, 37, 42, 44, 48, 59, 96, 107, 117, 132]. Однако как показала практика, применение большинства из них имеет ряд существенных недостатков, а именно, не учитываются особенности патогенеза заболевания и жизненного цикла пчел, а также сроки и режимы проведения обработок. К тому же токсичность самих соединений и продуктов их распада, а так же коррозионная активность в использовании многих из предложенных препаратов не позволяет применять их непосредственно в пчелиных семьях в присутствии пчел и расплода, что особенно важно при проведении вынужденной дезинфекции при возникновении заболевания.

В связи с этим актуальным представляется вопрос изыскания эффективных средств борьбы с болезнями пчел грибковой этиологии, в том числе и при аскосферозе пчел.

Исходя из вышеизложенного, целью данной работы явилось изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе медоносной пчелы.

Для выполнения цели исследования были выдвинуты следующие задачи:

1 .Провести мониторинг эпизоотической ситуации по аскосферозу пчел в отдельных регионах России;

2.Провести скрининг химических соединений из различных классов и изучить фунгицидные свойства эффективных препаратов и их композиций в отношении гриба Ascosphaera apis;

3.Изучить ультраструктуру спор гриба Ascosphaera apis и её изменения при воздействии отобранных перспективных препаратов;

4.Изучить токсичность эффективных препаратов и их композиций на организм теплокровных животных и медоносной пчелы;

5.Изучить дезинфицирующие, санирующие и лечебно-профилактические свойства эффективных препаратов и их композиций при аскосферозе пчел в лабораторных и производственных условиях.

Научная новизна работы. Отобраны новые, функционально замещенные аммониевые соединения, обладающие фунгицидной и фунгистатической активностью, в частности при аскосферозе и аспергиллезе пчел (Патент на изобретение РФ № 2220957 от 10 января 2004 г.). Впервые изучена активность препарата йодохлорин в отношении возбудителя аскосфероза, а также создана композиция на основе препаратов йодохлорин и йодтриэтиленгликоль, обладающая высокой фунгицидной активностью в отношении возбудителя аскосфероза пчел. Токсикологическими исследованиями установлена безвредность композиции в отношении организма медоносной пчелы.

Практическая ценность работы. Разработаны состав и режимы применения препарата йодохлорин и композиции препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем в качестве лечебно-профилактических дезинфицирующих и санирующих средств при аскосферозе пчел.

Методика проведения производственных испытаний по оценке дезинфицирующих санирующих и лечебно-профилактических свойств йодохлорина и композиции на его основе при аскосферозе, аспергиллезе и гнильцовых заболеваниях пчел утверждена начальником Управления ветеринарии Республики Марий Эл.

Временное наставление по применению препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем в качестве дезинфицирующего, санирующего и лечебно-профилактического средства при аскосферозе пчел утверждено директором ВНИВИ 28.10.04.

Препарат йодохлорин и композиция препаратов йодохлорин и йодтриэтиленгликоль внедрены на пасеках республик Марий Эл и Мордовия.

Апробация работы. Основные материалы диссертационной работы изложены и одобрены на научных сессиях ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань) по итогам НИР за 2003-2005гг., на международной научно-производственной конференции по актуальным проблемам

Агропромышленного комплекса (г. Казань), 2003 г.; на международной научной конференции молодых ученых «Проблемы мониторинга и генодиагностики инфекционных болезней животных», Владимир, 2004.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 работ.

На защиту выносятся следующие положения:

1.Мониторинг эпизоотической ситуации по аскосферозу пчел в отдельных регионах России;

2.Скрининг химических соединений из различных классов и изучение фунгицидных свойств эффективных препаратов и их композиций в отношении гриба Ascosphaera apis;

3.Ультраструктура спор гриба Ascosphaera apis и её изменения при воздействии отобранных перспективных препаратов;

4.Токсичность йодтриэтиленгликоля и композиции препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем на организм теплокровных животных и медоносной пчелы;

5.Дезинфицирующие, санирующие и лечебно-профилактические свойства йодтриэтиленгликоля и композиции препаратов йодохлорин и йодтриэтиленгликоль при аскосферозе в лабораторных и производственных условиях.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложений. Работа содержит 13 таблиц, 20 рисунков. Список литературы включает 243 источника, из' них 105 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Шишко, Алексей Альфредович

ВЫВОДЫ 1. Показана высокая степень пораженности пчелосемей аскосферозом; в Удмуртии процент семей, пораженных аскосферозом, достигает до 30-40%, в Татарстане заболеваемость - до 9-20%, в Башкортостане - до 14,2-25,9%), Марий Эл - до 1,1-23% , в Республике Мордовия - до 9,4-13,7%, в Нижегородской области - до 3,6-13%.

2. Отобранные препараты йодохлорин и йодтриэтиленгликоль, обладающие высокой фунгицидной активностью, позволили создать на их основе композицию, содержащую 0,3 йодида калия - 0,9 хлорида натрия (масс%) и 0,5% йодтриэтиленгликоля, оказывающую эффективное действие в отношении A. apis.

3. Композиция на основе препаратов йодохлорин и йодтриэтиленгликоль относятся к IV классу опасности (ЛД50 для белых мышей - 5150 мг/кг, для крыс - 6525 мг/кг). Препарат не оказывает отрицательного воздействия на организм медоносной пчелы; не вызывает патологических изменений органов пищеварения и не влияет на ферментативную активность каталазы.

4. Установлено, что. препарат йодохлорин и его композиция с йодтрнэтиленгликолем обеспечивает обеззараживание спор A. apis на деревянных поверхностях при экспозиции 60 минут, на металлических поверхностях через 1,5 часа. При использовании композиции указанный эффект на деревянных поверхностях достигается при экспозиции 30 минут, металлических поверхностях - 60 минут.

6. Обработка пчел и соторамок композицией методом мелкокапельного опрыскивания не вызывает изменений в химическом и качественном составе меда и он соответствует ГОСТ 19792-87.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.Для проведения лечебно-профилактических мероприятий при аскосферозе препарат йодохлорин рекомендуется применять путем трехкратного скармливания с сахарным сиропом в соотношении 1:2 в дозе 50 мл на улочку с интервалом 5 суток; методом мелкокапельного опрыскивания - 15 мл на рамку, двукратно, с интервалом 5 суток.

2. Разработано временное наставление по применению препарата йодохлорин с йодтриэтиленгликолем в качестве дезинфицирующего, санирующего и лечебно - профилактического средства при аскосферозе пчел утвержденное директором ВНИВИ 28.10.04.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шишко, Алексей Альфредович, Казань

1. Алексеев, В.А. Количественный анализ / В.А. Алексеев, М., ГНТИ химической литературы. 1954. - С. 325-332.

2. Алексеенко, Ф.М. Справочник по болезням вредителям пчел / Ф.М. Алексеенко, В.А. Ревенок, М.А. Чепурко. Киев.: Урожай, 1991.- С.68-73.

3. Алексеевский, Е.В. Количественный анализ / Е.В. Алексеевский, Р.К. Тольц, А.П. Мусанин. JL: ГНТИ химической литературы, 1955. - С. 361-362.

4. Антонов, В.Я. Лабораторные исследования в ветеринарии / В.Я. Антонов, П.Н. Блинов. М.: Колос, 1974.- С. 192-193.

5. Батуев, Ю.М. Вирозы пчел / Ю.М. Батуев // Ветеринария. 1977. - № 9. - С. 25-26.

6. Батуев, Ю.М. Пчеловодство / Ю.М. Батуев, Г.Д. Билаш. М.: Сов. энциклопедия, 1991.- С. 68-73.

7. Беренштейн, Ф.Я. Микроэлементы в физиологии и патологии животных / Ф.Я. Беренштейн. Минск, 1966.- С. 46-54.

8. Бесков, С.Д. Аналитическая химия. Качественный и количественный анализ / С.Д. Бесков, О.А.Слизковская. М.: Учпедгиз, 1958. - С. 522528.

9. Блинов, Н.В. Изыскание новых экологически безопасных средств борьбы с аскосферозом пчел: дисс. канд. вет. наук: 16.00.06 / Блинов Николай Валерьевич. М., 2002. - 131с.

10. Ю.Бобов, В.Д. Аскосфероз пчел и меры борьбы с ним: дисс. канд. вет.

11. Наук: 16.00.06 / Бобов В.Д. М., 1989.-165с. П.Бобов, В.Д. Терапия аскосфероза / В.Д. Бобов, В.Ф. Титов // Пчеловодство. - 1987. - №1. - С. 17-18.

12. Бобов, В.Д. Аскоцин при аскосферозе / В.Д. Бобов, В.Ф. Титов, Ю.И. Муринов, В.Д. Горбунова // Пчеловодство. 1991. - № 3. - С. 16-17.

13. Боченин, Ю.И. Влажная и аэрозольная дезинфекция в ветеринарии / Ю.И. Боченин, И.Я. Холодов. М.: Мир, 1986. - С. 3.

14. М.Йодинол в медицине и ветеринарии / редкол.:А.В. Вальдман, П.Д. Евдокимов, В.О. Михнач. Л.: Наука. Лен-ое отд. - 1967. - С. 46.

15. Ван, И.И. Профилактический и лечебный эффект беномала против известкового расплода / И.И. Ван, З.Ф. Чжао //Апимондия. 1993. - № 16.-С.94.

16. Ваннер, Н.Э. Острая и хроническая токсичность электроактивированных растворов хлорида натрия / Н.Э. Ваннер, Ф.Ф. Скворцов, А.А. Закомырдин // Тез. докл. Всерос. науч. конф. М., 1994. - С.47 - 50.

17. Ватанабе, В. Активность масла Aomori Hiba на известковый расплод и клещей / В. Ватанабе //Апимондия. 1993. - № 16. - С.94.

18. Вашков, В,И. Антимикробные средства и методы дезинфекции при инфекционных заболеваниях / В.И. Вашков. М.: Медицина, 1977.-С.21-46

19. Воронков, И.М. «Внимание! Аскосфероз» / И.М Воронков // Пчеловодство. 1993. - № 4. - С. 26-27.

20. Годяцкий, С.Я. Газовая дезинфекция сотов в системе профилактики гнильцовых болезней пчел: дисс. канд. вет. наук / Годяцкий С.Я.-Рыбное, 1972.-С.5-18.

21. Годяцкий, С.Я. Дезинфекция сотов / С.Я. Годяцкий, Л.Ф. Соловьева // Рекомендации. Рыбное, 1989. - С.11-14.

22. Горбунова, Н.П. Малый практикум по низшим растениям / Н.П. Горбунова, Е.С. Клюшникова, Н.А. Комарницкий и др.. М.: Высшая школа, 1967.-С. 157.

23. Горин, А. Аскосфероз опасная болезнь пчелиного расплода / А. Горин //Пчеловодство. - 1983.-№ П.- С. 14.

24. Горин, А. Аскосфероз опасное заболевание / А. Горин // Пчеларство. -1992. -Т90.- бр.12.- С. 18-19.

25. Григорян, А.Г. Ветеринарно-санитарные мероприятия при аскосферозе пчел: дисс. канд. вет. наук / Григорян А.Г. М., 1983.- С.68-72.

26. Григорян, А.Г., Попов Е.Т. Мероприятия при аскосферозе пчел / А.Г. Григорян, Е.Т. Попов, МСХ СССР. 1983. - С. 12.

27. Гробов, О.Ф. Предупреждение потерь от болезней пчел / О.Ф. Гробов // Ветеринария. -1988.- № 4.- С. 6-8.

28. Гробов, О.Ф. 35 лет лаборатории профилактики болезней и экологической охраны пчел / О.Ф. Гробов // Пчеловодство. 1996. - № 2.-С. 28-31.

29. Гробов, О.Ф. Биологический способ профилактики заразных болезней / О.Ф. Гробов, М.М. Сычев // Пчеловодство. 1998. - № 5. - С.28.

30. Гробов, О.Ф. Болезни и вредители пчел / О.Ф. Гробов, А.К. Лихотин. -2-е изд., перераб. и доп. М.: Мир, 2003. - С.288.

31. Гробов, О.Ф. Болезни и вредители медоносных пчел /О.Ф. Гробов, A.M. Смирнов, Е.Т. Попов. М.: Агропромиздат, 1987. - С. 52-57.

32. Гробов, О.Ф. Профилактика и лечение при болезнях пчел / О.Ф. Гробов, A.M. Мачнев, Н.А. Яременко // Ветеринария. 1998. - № 4.- С. 13-15.

33. Гургулова, К. Микозы пчел / К. Гургулова // Пчеларство. 1988. - Т.36. -№ 10.-С. 22-24.

34. Гургулова. К. Профилактика аскосфероза / К. Гургулова // Пчеларство. -1991. -Т.89. -№3-6. С. 13-15.

35. Гургулова, К. Проблемы аскосфероза в пчеловодстве / К. Гургулова, К. Кончев // Пчеларство. 1988. - Т.96. - № 12.-С. 17-19.

36. Гургулова, К. Испытание антимикотических средств против аскосфероза / К. Гургулова, К. Кончев, Т. Вербанова, К. Гераксиев // Пчеларство. 1990. - Т.88. - № 3. - С. 4-6.

37. Деканадзе, A.M. Влажная дезинфекция при вирусных болезнях пчел / A.M. Деканадзе // Проблемы ветеринарной санитарии и экологии: сб. науч. тр., ВНИВСГиЭ. Т.95, часть II.- М., 1994.- С. 42.

38. Дмитриченко, А.П. Йод в кормлении сельскохозяйственных животных / А.П Дмитриченко // Биологическая роль йода: сб. тр. М.: Колос, 1972.-С.12.

39. Ендреяк, Р. Аскосфероз пчелиного расплода (известковый рагсплод) / Р. Ендреяк // Инфекционные заболевания пчел и пчелиного расплода в странах средней и восточной Европы: сб. докл. сем. Братислава, 1996. - С. 44-52.

40. Еськов, Е.К. Биологические последствия развития пчел в семьях, пораженных аскосферозом / Е.К. Еськов, Н.А. Копина, JI.IO. Огрищенко, Ю.А. Садовников // Академия пчеловодства. Рыбное, 1995.-С. 27-35.

41. Жуков, А.А. Распространение аскосфероза пчел и устойчивость его возбудителя / А.А. Жуков // Всерос. НИИ вет. сан., гигиены и экол: сб. науч. тр.- 1994. С. 4-7.

42. Жуков, А.А. Биологические свойства гриба Ascosphera apis и меры борьбы с аскосферозом пчел: дисс. канд. биол. наук / Жуков А.А.- М., 1995.- 141с.

43. Зенухина, Н.З. Лечебные препараты при аскосферозе пчел / Н.З. Зенухина, В.А. Улановский, Л.Ю. Орищенко // Пчеловодство. 1993. -№9.-С. 18-19.47.3юман, Б.В. Терапия аскосфероза / Б.В. Зюман // Науч.-техн. бюл. Дальн. НИВИ. -1990. Вып. 1/2. - С. 37- 40.

44. Игнатьева, Г.И. Средства и методы дезинфекции и деакаризации объектов пчеловодства при септимиции и варроозе пчел: дисс. канд. вет. наук. / Игнатьева Г.И. М., 1983. - С. 67 - 71.

45. Илиешу, Н.В. Терапия аскосфероза / Н.В. Илиешу // Пчеловодство. -1975.-№6.-С. 30.

46. Каган, Ю.С. Токсикология фосфорорганических пестицидов / Ю.С. Каган. М.: Медецина. - 1977. - С. 298.

47. Каданников, А.Ю. Влияние некоторых физических факторов на Ascosphaera apis / А.Ю. Каданников // Науч.-техн. бюл. Дальн. НИВИ. -1990.-Вып. 1/2. С.23-24.

48. Канчев, К. Аскомат новый препарат для профилактики и подавления аскосфероза пчел / К. Канчев, И. Гетчев // Инфекционные заболевания пчел и пчелиного расплода в станах средней и восточной Европы: сб. докл. сем.- Братислава.- 1996,- С. 84-87.

49. Касьянов, А.И., Лебедев В.И. Термогенез и тепловой режим пчелиной семьи /А.И. Касьянов, В.И. Лебедев . Рыбное, 2004. - С. 178.

50. Квасников, А. Аскосфероз пчел: как с ним бороться / А. Квасников, А. Власенко // Сел. хоз-во Молдавии. 1987. № 5. - С. 42-43.

51. Керимбаев, А.К. К диагностике и профилактике аскосфероза медоносных пчел / А.К. Керимбаев, В.М. Мерщиев // сб. тр. КазНИВИ. Алма-Ата, 1988.-С. 104.109.

52. Кильмаева, Н.А. Действие дезинфицирующих средств на возбудителей аспергиллеза пчел / Н.А. Кильмаева // Сб. науч. тр. ВНИВСГиЭ. 1996. -Т. 102. - С. 77-79.

53. Клочко, Р.Т. Ветеринарно-санитарные мероприятия на пасеках и воскозаводах / Р.Т. Клочко. М.: Колос, 1972. - С. 3.

54. Клочко, Р. Гъбни заболявания по пчелите / Р.Т. Клочко // Пчеларство. -1998.-№2.-С.7-8.

55. Клочко, Р.Т. Аскомизол при аскосферозе пчел / Р.Т. Клочко, Г.И. Игнатьева, А.Б. Сохликов // Ветеринария. 1995. - №3.- С.27.

56. Клочко, Р.Т. Ветеринарно-санитарные мероприятия при аскосферозе пчел / Р.Т. Клочко, Л.С. Малиновская, Г.И. Игнатьева, С.Н. Луганский, А.Б. Сохликов // Сб. науч. тр. ВНИИ вет. сан. гигиены и экологии. -1996.-С.9-13.

57. Ковалевский, В.В. Биологическая роль йода / В.В. Ковалевский // Биологическая роль йода: сб. тр. -М.: Колос, 1972. С. 12, 14, 21.

58. Кодама, К. Борьба с известковым расплодом / К. Кодама // Сб. докл. XXX Межд. конг. по пчеловодству. Изд. Апимондия. Бухарест. - 1985. -С. 187-193.

59. Кокорев, Н. Пчелы. Болезни и вредители / Н. Кокорев. М.: Континент-Пресс, 2005. - С.345.

60. Колев, И. Апистарт II в борьбе с аскосферозом / И. Колев // Пчеларство. 1995.-Т.93.№8-9.-С. 22.

61. Котова, Г.Н. Практические советы пчеловоду / Г.Н. Котова, Н.Л. Буренин. М.: Колос, 1971.-е. 191.

62. Кривошей. С.Ф. Чеснок против аскосфероза / С.Ф. Кривошей // Пчеловодство. 1995. - № 1. - С. 27-28.

63. Кривцов, Н.И. Пчеловодство / Н.И. Кривцов, В.И. Лебедев, Г.М. Тупиков. М.: Колос, 2000. - С. 379-380.

64. Кривцова. Л.С. Лабораторные испытания средств против аскосфероза пчел / Л.С. Кривцова // Сб. научно, иссл. работ по пчеловодству. -Рыбное, 1995.-С. 231-236.

65. Кривцова Л.С. Эффективность фунгицидных препаратов при аскосферозе / Л.С. Кривцова // Проблемы экологии и развития пчеловодства в России: матер, научно-практ. конф.- Рыбное, 1999.-С. 126-128.

66. Крылов, В. Лечат растения / В. Крылов // Сел. хоз-во Туркменистана. -1991. №6.- С.38.

67. Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимические и микробиологические. Справочник /сост: Б.И. Антонов, Т.О. Яковлева,

68. B.И. Дерябина и др.. М.: Агропромиздат, 1991. - С. 84-85.

69. Ласз, И. Аскосфероз (известковый расплод) опыт борьбы с заболеванием / И. Ласз // Инфекционные заболевания пчел и пчелиного расплода в странах средней и восточной Европы: сб. докл. сем. - Братислава, 1996. - С. 75-78.

70. Лебедев, В.И. Причины гибели пчел / В.И. Лебедев, И.М. Воронков,

71. C.К. Ивашкевич // Пчеловодство. 2003. - №4. - С. 24 - 25.

72. Лихотин, А.К. Аскозол новый препарат для лечения аскосфероза и аспергиллеза пчел /А.К. Лихотин, Д.Н. Удавлиев, Н.И. Попов // Пчеловодство. - 1999. - № 2. - С 24-25.

73. Луганский, С.Н. Исследование цветочной пыльцы при аскосферозе / С.Н. Луганский // Ветеринария. 1988. - № 10. - С. 41.

74. Луганский, С.Н. Выживаемость возбудителя аскосфероза пчел в цветочной пыльце и перге / С.Н. Луганский, И.Б. Павлова // Ветеринария. 1998. - № 12. - С. 25.

75. Мадебейкин, И.Н. Защита пчел от аскосфероза / И.Н. Мадебейкин, И.И. Мадебейкин // Пчеловодство. 2000. - № 1. - С. 30.

76. Мастицкий, Д.С. Чеснок лечит пчел / Д.С. Мастицкий // Сел. хоз-во Белоруссии. 1990. - № 4. - С.21-22.

77. Махова, М. Известковый расплод в Чешской Республике / М. Махова // Инфекционные заболевания пчел и пчелиного расплода в странах средней и восточной Европы: сб. докл. сем. Братислава, 1996. - С. 6972.

78. Меркулов, Г.А. Курс патологоанатомической техники / Г.А. Меркулов -Л.: Медицина, 1969. С.406.

79. Мерщиев, В.М. Манганометрический метод определения активности каталазы в организме пчел / В.М. Мерщиев // Рац. предложение НИИП. 1990.-С.3-4.

80. Мерщиев, В.М. Смешанные болезни пчел: диагностика, лечение и профилактика / В.М. Мерщиев // Сб. научно, иссл. работ по пчеловодству. Рыбное, 1995. - С. 166-182.

81. Методические указания по исследованию влияния препаратов на пчел и клещей Варроа.- М., 1982.

82. Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве. Ветеринарные препараты, Справочник. М., 1988.

83. Методические указания. Оценка токсичности и опасности дезинфицирующих средств: МУ 1.2.1105-02: утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 10 февраля 2002 г. •

84. Микитюк, П.В. Диагностика и меры борьбы с болезнями пчел в условиях интенсификации пчеловодства / П.В.Микиткж, С.Т. Рягин -Киев, 1981.-С. 60-62.

85. Михальцевич, Г.Н. Патогенная флора на фоне варроатоза / Г.Н. Михальцевич, М.Г. Величко // Пчеловодство. -1996. № 1. - С. 26-27.

86. Морозова, Л.Я. Основные болезни медоносных пчел в зимне-осенний период / Л.Я. Морозова, Кайгородова М.С., О.И. Матросенкова // Пчеловодство. 2005. - №6. - С. 27-28.

87. Мюллер, Э. Микология / Э. Мюллер, В. Леффлер. М.: Мир, 1995. -С.205, 211-212.

88. Накане, Т. Применение медикаментов для лечения больных известковым расплодом пчел / Т. Накане, К. Кажикава // Сб. докл. XXX Межд. конг. по пчеловодству. Изд. Апимондии. Бухарест, 1985. С. 194201.

89. Першин, Г. Н. Методы экспериментальной химиотерапии / Г. Н. Першин. М., Изд.: Медицина, 1971.-С. 318.

90. Полтев, В.И. Болезни пчел / В.И. Полтев. М.: Колос, 1964.- С. 102-106

91. Полтев, В.И., Болезни и вредители пчел / В.И. Полтев, Е.В. Нешатаева. -М.: Колос, 1977.- С. 82-84.

92. Поляков, А.А. Ветеринарная дезинфекция / А.А. Поляков М.: Колос, 1975.-С. 235-237.

93. Пономарев, В.А. Экология шмелей рода Bombus (latr.) и профилактика инфекционных болезней при их лабораторном разведении / В.А. Пономарев // Автореф. дисс. докт. биол. наук. Иваново, 2004. - С. 1114

94. Попов, Е.Т. Аскосфероз основная болезнь пчел / Е.Т. Попов // Пчеловодство. - 1995. - № 4. - С. 20-22.

95. Ю2.Сенженко, Л.П. Совместное применение эндоглюкина с разными препаратами / Л.П. Сенженко, Ю.С. Аликин, Т.А. Терещенко // Пчеловодство. 1999. - № 6. - С. 20-22.

96. ЮЗ.Силаева, С.В. Функциональная активность щитовидной железы у высокопродуктивных коров при разном уровне микроэлементногопитания / С.В. Силаева // Автореф. дисс. канд. вет. наук. Дубровицы, 1970. - С. 10-12

97. Смирнов, A.M. Ветеринарно-санитарные основы профилактики и борьбы с заразными болезнями пчел / A.M. Смирнов // Автореф. дисс. докт. вет. наук. М., 1980,- С.21-22

98. Смирнов, A.M. Отвечаем на вопросы / A.M. Смирнов // Пчеловодство. 1989.-№ 1. - С.32-33.

99. Смирнов, A.M. Оздоровление пчел: система мер / A.M. Смирнов // Пчеловодство. 1991. - №8.- С. 23-26.

100. О.Смирнов, A.M. Ветеринарно-санитарные мероприятия на пасеках /

101. A.M. Смирнов // Ветеринария. 2000. - № 8. - С. 3 - 4. Ш.Смирнов, A.M. Диагностика аскосфероза / A.M. Смирнов, А.Г.

102. Григорян // Пчеловодство. -1985. №2. - с. 18-19. 112.Смирнов, A.M., Аскосфероз пчел / A.M. Смирнов, С.Н. Луганский,

103. Е.Т. Попов и др.. Госагропром СССР, 1988. 11 З.Смирнов, A.M. Борьба с аскосферозом пчел / A.M. Смирнов, С.Н. Луганский, Р.Т. Клочко // Ветеринария. - 1990. - № 4. - С. 10-14.

104. Смирнов, A.M. Надежное оздоровление пасек / A.M. Смирнов, Р.Т. Клочко, С.Н. Луганский, Г.И. Игнатьева // Пчеловодство. 1993. - № 9. -С. 2-5.

105. Смирнов, A.M. Новые подходы к. лечению аскосфероза пчел / A.M. Смирнов, Г.И. Игнатьева, А.Б. Сохликов // Пчеловодство. 1999. - № 3.- С. 20-22.

106. Сокол, И. Болезни пчел и пчелиного расплода / И. Сокол, И. Кубинец // Инфекционные заболевания пчел и пчелиного расплода в странах средней и восточной Европы: сб. докл. сем. Братислава, 1996. - С. 1922.

107. П.Соловьева, Л.Ф. Профилактика и лечение аскосфероза пчел / Л.Ф. Соловьева. Рыбное, 1997.- С.11-13.

108. Соловьева, Л.Ф. На пасеках рязанщины / Л.Ф. Соловьева // Пчеловодство. 1998. - № 5. - С.25-27.

109. Сохликов, А.Б. Аскооль новое средство борьбы с грибковыми болезнями пчел / А.Б. Сохликов // Пчеловодство. - 1993.- № 9. - С. 1920.97.

110. Спесивцева, Н.А. Микозы и микотоксикозы / Н.А. Спесивцева. М.: Колос, 1964. -С. 269-272.

111. Стафецкий, Р. Болезни пчел и борьбы с ними в Латвийской Республике / Р. Стафецкий // Инфекционные заболевания пчел и пчелиного расплода в странах средней и восточной Европы: сб. докл. сем. Братислава, 1996. - С. 66-68.

112. Сычев, М.М. Грибковые болезни пчел: профилактика и меры борьбы / М.М. Сычев // Пчеловодство. -1995. № 3. - С. 19-22.

113. Сычев, М.М. Грибковые заболевания пчел / М.М. Сычев // Ветеринарная газета. 1998. -№ 4. - 1 с.

114. Сычев, М.М. Органические кислоты и аскосфероз / М.М. Сычев, В.М. Алейник //Пчеловодство. 1991. -№ 8. - С. 13-14.

115. Тавара, Т. Борьба против известкового расплода болезни медоносных пчел / Т. Тавара // Сб. докл. XXX Межд. конг. по пчеловодству. Изд. Апимондии, Бухарест, 1985. - С. 207-212.

116. Таранов, Г.Ф. Книга пчеловодства / Г.Ф. Таранов. М.: Росагропромиздат, 1992. - С. 163-165.

117. Тименский, П.И. Сезонные работы в пчеловодстве / П.И.Тименский.

118. М: Росагропромиздат, 1988. С. 192.

119. Томац, И. Известковый и каменный расплод в Югославии / И. Томац // Сб. докл. XXIX Межд. конг. по пчеловодству. Изд. Апимондии. Бухарест, 1983.-С.71.

120. Тошков, А. Дисбактериоз у пчелиных семей / А. Тошков, Г. Камбуров, Я. Караджов, М. Шабанов // Сб. докл. XXIII Межд. конг. по пчеловодству. Изд. Апимондии. Бухарест, 1971.-С. 473.

121. Угрюмова, B.C. Изыскание новых дезинфицирующих средств при аспергиллезе пчел / B.C. Угрюмова, М.Н. Мукминов, А.З. Равилов // Ветеринарный врач. 2001. - № 3. - С.59.

122. Чанышев, З.Г. Санитарно-профилактические и терапевтические мероприятия при американском и европейском гнильцах медоносной пчелы в условиях Башкирской АССР: дисс. канд. вет. наук / Чанышев З.Г.-М., 1969.-С.35.

123. Шарло, Г. Методы аналитической химии. Количественный анализ неорганических соединений / Г. Шарло. М.- Л.: Химия, 1965. - С. 459465.

124. Яременко, Н.А. Эпизоотическое состояние и дальнейшие задачи по борьбе с болезнями пчел / Н.А. Яременко // Ветеринария. 1996. - № 4. -С. 13.

125. Яременко, Н.А., Профилактика и лечение при болезнях пчел / Н.А. Яременко, О.Ф.Гробов, А.К. Мачнев // Ветеринария. 1998. - № 12. - С. 3.

126. Ястребцов, М.М. Избавился от аскосфероза / М.М. Ястребцов // Пчеловодство. 1993. - № 3.- С. 34.

127. Anderson, J. Brood diseases in Scotland. Rothamsted Conference / J. Anderson. 1934. - 18. - p. 17-18.

128. Anderson, J. Chalk Brood / J. Anderson // Scottish Beekeeper. - 1938.-V.14: - p. 106.

129. Bailey, L. Theeffect of temperature on the pathogenicity of the fungus Asc. apis, for larvae of the honey bee, Apis mellifera / L. Bailey // Proc. int. Coll. Insect Path. Microbial Control, Waqeninqen, North Holland. 1966. - p.p. 162- 167.

130. Bailey, L. Honey bee Pathology / L. Bailey // Ann. Re. Entumol. 1968. -V. 191. - p. 13.

131. Bailey, L. Honey bee pathology / L. Bailey, B. Ball // Academ. Press Harcourt Brace Jovanovich Publishers London-SanDiego-NewYork-Boston-Sydney-Tokyo- Toronto. 1991. - p. 53-63.

132. Baker, G. New records of Ascosphera apis from North America / G.Baker, P.Torchio // Mycologia. 1968. - V.60. - p. 189-190.

133. Bamford, S. The effects of temperatura and pH on the germination of spores of the chalkbrood fungus, Ascosphera apis / S. Bamford, L. Heath // J. Apicult. Res. -1989.- V.28.- № 1.- p. 36-40.

134. Bamford, S. The infection of Apis mellifera larvae by Ascosphera apis / S. Bamford, L. Heath//J. Apicult. Res. 1989. - V.28.- № 1.- p. 30-35.

135. Barthel, B. Der kallebrut auf der Spur / B. Barthel // Garten und

136. Kleintierzucht, Ausgade С., linker. 1971. V. 10. -№4. -p. 12-13.

137. Betts, A.D. Fungus diseases of bees / A.D. Betts // Bee World.- 1919.-№ 1- p.252.

138. Betts, A.D. Chalk brood / A.D. Betts // Bee World. 1932.- № 13.- p. 7880.

139. Betts, A.D. The diseases of bees: their sinds, causes and treatment / A.D. Betts // Hickmott, Camberly, England. 1951. p.5-8.151 .Borchert, A. Krankheiten der Honigbeine. Berlin / A. Borchert // Richard Schoets. 1939. -p.5.

140. Brizard A., Albisetti J. Motions essentielles de pathologie apicole / A. Brizard, J. Albisetti // Vademecum de Information et la documentation en apiculture. 1982. - p. 288.

141. Carrera, P. The development of Ascosphera apis, within larvae of Apis melitera lidustica / P. Carrera, A.Sommaragua, G. Vailiti // J. Apicult. Res. -1987.-V.26.-№ 1.-P. 59-63.

142. Canadieja, J. Chalkbrood in our apiaries / J. Canadieja // (Serbisch) Pcela.- 1978. V.97.-№9. - p. 246.

143. Christensen, M. Notes on the Ascosphaera species in citni chalkbrood in honeybees /М. Christensen, M. Gilliam //Apidologie.- 1983.-V.14. -№4.- p. 12-17.

144. Claussen, P. Ttutwicklungseschichtliche Untersuchungen uber den Erroger der Keltbrut, bezeichueten Krankheit der Bienen / P. Claussen //Arb. Biol. Reichsanst. 1921. - V. 10. - №6. - P. 467-519.

145. Deans, A. Challk brood / A. Deans // Bee World. 1940. - №21. - p. 46.

146. De Jong, D. Experimental enhancement of chalk brood infections / D. De

147. Eriksson, D. Hawksworth. 1979.- p. 1-78

148. Faucon, J.P. L'ascospherose / J.P. Faucon // Sante Abeille. 1991. - V.I21.-pp. 27-28, 33-34.

149. Giauffret, A. Les mycoses de 1 'abeille: etude de quelgues antimycosiques /

150. A. Giauffret, Y. Taliercio // Bulletin Apicult. 1967. - №10. - p. 163-174.

151. Gilliam, M. Chalk brood status today, and hopes for control / M. Gilliam // American Bee Journal. - 1978. - V. 118. №7.- p. 468-471.

152. Gilliam, M. Infectivity and survival of the chalk brood pathogen, Ascosphaera apis in colonies of honey bees, Apis mellifera / M. Gilliam // Apidologie. 1986. - №17. - p.93-99.

153. Gilliam, M. Hygienic behavior of honey bees in relation to chalkbrood disease / M. Gilliam, S. Taber III, G. Richardson // Apidologie . 1983. -№14.-p. 29-39.

154. Gilliam, M. Digestive enzymes andmicroorganisms in honey bees, Apis mellifera influence of streptomycin, age,season and pollen / M. Gilliam,

155. B. Lorenz, G. Richardson // Microbios.- 1988.- V.55. p.95-114.,

156. Glinski, Z. Aktywnosc wybranyen srodkow dezentekcyjnych w stosunku Asc. Apis / Z. Glinski, M. Kowalska, T. Osipowski // Med.weter. 1981. -R. 37. - № 5.-S. 277-280.

157. Glinski, Z. Effects of environmental conditionson Ascosphaeraapis. I. The effects of temperatura and relative humidity on growth and sporulation of Asc. Apis /Z. Glinski, M. Chmilewski //Apicult. 1989. - R.40. - №1 Abstr. -p. 2.

158. Glinski, Z. Perspektywy zwalczania grzybicpszczoly miodnej z uwzglednieniem immunomodulujacych efektow lekow przeciwgrzybiczych / Z.Glinski, J. Rzedzicki, T. Wolski, L. Kauko //Ann. UMCS.DD. 1998. -R.53. - p. 201-216.

159. Gochnauer, T.A. Diseases and enemies of the honey bee. In The hive and the hohey bee / T.A. Gochnauer // R.A. Grout, editor. Rev. ed. Dadant and Sond, Hamilton, Illinois. 1963. - p. 648-649.

160. Gochnauer, T. Chalk brood disease of honeybee larvae: a theat to Canadian beekeeping / T.A. Gochnauer, S. Hughes, J. Corner // Canada Agriculture. -1972. 17. - p. 36-37.

161. Gochnauer, T.A. Decontaminating effect of ethylene oxide on honeybee larvae previously killed by chalkbrood disease / T.A. Gochnauer, V.J. Margetts // J. Apicult. Res. 1980. - V. 19. - №4. -p. 261 -264.

162. Goettel, M.S. Bioassay of selected fungicides for control of chalkbrood in altalfa leafcutter bees, Megachile rotundata / M.S. Goettel, K.W. Richards, G.B. Schaalye / M.S. Goettel //Apidologie. 1991. - V. 22. - № 5. -p. 509-522.

163. Gribic, D. Djelovange ascocidina na ascospheru apis / D. Gribic, I. Tomac, I. Basic //Agron. Gasnik. 1988. - №2/3. -p. 107-109.

164. Hale, P.J. Effect of time and temperature on the viability of Asc. Apis / P.J. Hale, D.M. Menapase // J. Invertebrate Pathol. 1980. - V. 36. - № 3. - p.429.430.

165. Hartwid A. Chalkbrood//Pszxzelarstwo. 1981. - R.32. -№ 5. - p. 31-32. # 182. Heath, L. Development of Chalk Brood in a Honey Bee Colony Review /

166. Heath // Bee World.- V.63.- № 3. 1982. - p.l 19-130 v 183.Heath, L. Occurrence and distribution of chalkbrood disease of honeybees /

167. Heath//Bee World. -1985. №66. - p.9-15.

168. Hirose, J. An outbreak of chalkbrood disease honeybees / J. Hirose // Journal Japan. Veter.Med. Assn. 1980. - V. 33. - № 2. - p. 77-78.

169. Hitchcock, J. Chalk brood disease of honey bees in the United States / J. Hitchcock, M. Chrisyensen // American Bee Journal. 1972. - V.112. - p. 248-249.

170. Ф 186.Huber, J. Untersuchungen zur Physiologie Insektentotendender Pilze / J.

171. Huber // Archiv Mikrobiol. 1958. -V. 29. -p. 257-276.к

172. Kordos, L. Treatment of chalkbrood / L. Kordos // Meheszet. 1977. -V. 25.-№5.-p. 83.

173. Kowalska, M. Badania nad wlasciwosciami morfologicznymi i hodowlanymi Asc. apis / M. Kowalska // Pol. Arch, weter. 1983. - V. 23. -p. 87-89.

174. Lahitte, J.D. Les mycoses / J.D. Lahitte //Bull. tech. apis. 1988.-V. 15.-№ 1.-p. 37-44.

175. Lunder, R. Undersokelse av kalkyngee 1971 / R. Lunder // Birokteren. -1972.-V. 88.-p. 55-60.

176. Maassen, A. Weitere Mitteilungen uber die seuchenhatten Brutkrankheiten der Bienen / A. Maassen // Mitteilungen ans der Kaiserlichen Biologischen

177. Anstalt fur Land-und Forstwirtschaft. 1913. -R.14. - p. 48-58.

178. Marin, M. Micozele albinelor / M. Marin //Apicult. 1987. - № 4. - p. 7-9.

179. Martinka, E. Prevencion protiv zvapenateniu vcelieho plodu / E. Martinka // Vcelar. 1994. -R. 68.-S. 52.

180. Matheson, A. Wolrd bee health report /А. Matheson // Bee World. 1993. -V.74. - p. 176-212.

181. Matus, F. A menek koltesmeszecedesenek elofordulasa hazankban / F. Matus, I. Sarbak // Magyar Allatorvosok Lapja.- 1974. V.29. - p. 250-255.

182. Maurizio, A. Uber die Kalkbrut der Bienen / A. Maurizio // Archiv fur Bienen Kunde. 1934. - V. 15.-p. 165-193.

183. Maurizio, A. Beitrage zur Kenntnis der Pilzflora im Bienenstock. I Die Pericystis-Intection der Bienenlarven / A. Maurizio // Berichte der Schweizerischen Botanischen Gesellschaft. -1935. V.44. - p. 133-156.

184. Mayer, M. Testing for super hygienic bees / M. Mayer // Bee Culture. -1996.-V. 124. -p. 517-519.

185. Mayer, D.F. Effects of fungicides on chalkbrood disease of alfalfa leafcutting bee / D.F. Mayer, J.D. Lunden, E.R. Miliczky // Applied-Agricultural-research. 1990. - V. 5. -№3. -p. 223-226.

186. Мепарасе, D. The spread of chalk brood in the North American honey bee / D. Мепарасе, W. Wilson //American Bee Journal. 1976. -V.116. - № 12. -p. 570.

187. Мепарасе, D. Fuding oxytetracyclines as terramycin does not aggravate chalkbrood infections / D. Мепарасе, W. Wilson // Apidologie. 1979. - № 2.-p. 167-174.

188. Мепарасе, D. Terramycin does not inhibit or enhance chalkbrood intections / D. Мепарасе, P. Hale // American Bee Journal. 1980. - V.120. -№2. - p. 115-117.

189. Мепарасе, D. Citral and a combination of sodium pbopionate and potassium sorbate did not control challe brood / D. Мепарасе, P. Hale// American Bee Journal.- 1981. V. 121.- № 12. -p. 889-891.

190. Molins Marin, J. Ensayas preliminares de "Apicol" sobre el "pallo escayolado" (Asc. apis) in vitro / J. Molins Marin, F. Perez Garcia, A.• Gomez Pajaelo // Vida Apicola.- 1986. -№19. -p.50-51.

191. Morgenthaler, O. Das jahreszeitliche Auftreten der Bienesenche / O. 1 Morgenthaler // Schweizeriche Bienen-Zeitung. 1944. - V. 1. - p. 285-336.

192. Morse, R. Hohey Bee Pests, Predators, and Diseases. A.I. Root company / R. Morse, K. Flottum // Medina, Ohio, USA. 1997. -p. 81-105.

193. Prokschl, Н. Beitrage zur Kenntnis der Entwicklundsdeschichte von Pericystis apis Maassen / H. Prokschl // Archiv fur Mikrobiologie. -1953. -V.18.-p. 198-209.

194. Rath, W. Vorversuche zur unterschiedlichen Kalkbrutresistenz bei zuchterisch bearbeiteten Bienenmaterial / W. Rath // Apidologie. 1985. -V.16.-№3.-p. 220-222.

195. Rath, R. Eine pilzliche Erkrankung der Brut der Honigbiene (Apis mellifera L.) / R. Rath//Die Biene. 1993. - S. 153-157.

196. Reynolds, E.S. The use of lead citrate at hight pH as an electron opaque staine in electron microscopy / E.S. Reynolds // J. Cell Biol. 1963.- V.17.-p. 208-212.

197. Rossi, С. Momiticacion de las larvas de la abeja (Apis mellitera L.) una Ф nueva entermedad en la Argentina causada por Asc. Apis / C. Rossi, M.

198. Carranza // Gaceta del Colmenar. 1980. -V.42A. -p. 235-237. 1 218.Rust, R. Effects oftemperature and host developmental stage on

199. Ascosphaera torchioi / R. Rust, R Torchio //Apidologie. 1992. -V.23. - p. 1-9.

200. Scou, J. Two species of Ascosphaera and notel on the conidial state ofbettsia alvei / J. Scou//Friesta. 1975. - V.l 1. - p. 62. 224.Seal, D.W.A. Chalk brood disease of bees / D.W.A. Seal // New Zealand * Journal of Adricalture.- 1957. - V.95. - p.562.

201. Spiltoir C.F. Life cycle of Asc. Apis / C.F. Spiltoir //Am. J. Bot. 1955.

202. V.42.-№6.-p. 501-508. 226.Spivak, M. Field Assays for Hygienic Behavior in Honey Bees (Apidae: Hymenoptera) / M. Spivak, D. Downey // J. Econ. Entomol. 1998. - V.91.-№1. - p.402 - 406.

203. Starks, P. Fever in honeybee colonies / P. Starks, C. Blackie, T. Seeley //

204. Natur-wissenschaften. 2000. - №87. - p. 229-231. 228.Stephen, W. Challe brood disease in the leafcutting bee / W. Stephen //

205. Oregon State Univ.- 1978. №630 - p. 1-6. 229.Stephen, W.P. Etiologiy and epizootology of chalkbrood in the leafcuttin • bee, Megachila rotundata (Fabricius), with notes on Ascosphaera species /

206. W.P. Stephen, J.D Vandenberg, B.L. Fichter // Bull. Agric. Exper. St. Oregon " St. Univ. 1981.-№ 653.-p. 2-6.

207. Sulimanovic, D. Did chalkbrood spread? / D. Sulimanovic // Pcela. 1982.-G.101. -№3.- S. 73-76. 231.Sulimanovic, D. Koji lijer protiv vapnenastod Legia / D. Sulimanovic //

208. Taber, S. III. 1982. Determining resistance to brood diseases / S. Taber III.// American Bee Journal. 1982. - V.l 22. - p. 422-425.

209. Takaki, E. Pathogenesis of chalkbrood disease in Apis mellifera. Histologikal changes in infected larvae and distribution of the fungus in stored pollen / E. Takaki // Honeybee Scienc.- 1986.-V. 7. №3. - p. 120124.

210. Takatori, K. Asc. apis isolated from chalk brood in honey bees / K. Takatori, I. Tanaka // Japanese Journal of Zootechuical Science. 1982. -№53. - p. 89-92.

211. Tander, B. Improved uranyl acetate staining for electron microscopy / B. Tander // J. Electron. Microsc. Techn. 1990. - V. 16. - N. 1.- p. 81 -82.

212. Tarpy, D. Genetic diversity within honeybee colonies prevents severe infec-tions and promotes colony growth / D. Tarpy // Proceedings of the Royal Society of London, Series B. 2003. - V.270. - p.99-103.

213. Thomas, C. An epizootic of chalkbrood. Asc. Apis (Maassen ex Claussen) Olive and Spiltoir, in the honeybee. Apis mellifera L. In California / C.

214. Thomas, A. Luce // American Bee Journal. 1972. - V.l 12. - №3. - p. 88-90.

215. Williams, P.A. Chalkbrood research at Madison Wisconsin / P.A. Williams // American Bee Journal. 1976. -V. 116.- №6. -p.484-486.

216. Yakobson, B. A recent chalkbrood ont break in Israel: attemps, at therapentic intervention / B. Yakobson, D. Elad // American-Bee-Journal. -1991.-V. 131. № 12.-p. 786.

Информация о работе

Шишко, Алексей Альфредович
кандидата биологических наук
Казань, 2006
ВАК 03.00.07

Диссертация

Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шишко, Алексей Альфредович

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел"

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Шишко, Алексей Альфредович

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шишко, Алексей Альфредович, Казань

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изыскание средств санации и дезинфекции при аскосферозе пчел
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология