Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучения влияния отдельных метаболитов на регуляцию звеньев обмена углеводов в клетках крови крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изучения влияния отдельных метаболитов на регуляцию звеньев обмена углеводов в клетках крови крупного рогатого скота"

УКРАТНСЬКА АКАДЕМ1Я АГРАРНИХ НАУК [НСТИТУТ Ф13ЮЛ0ГП I БЮХШИ ТВАРИН

На правах рукопису

5 тОН 1995

БУЦЯК Василь 1ванович

УДК 577.150.2:577,158.

ВИВЧЕННЯ ВПЛИВУ ОКРЕМИХ МЕТАБОЛ1Т1В НА РЕГУЛЯЦ1Ю ЛАНОК ОБМ1НУ ВУГЛЕВОД1В У КЛ1ТИНАХ КРОВ1 ВЕЛИКО! РОГАТО! ХУДОБИ

03.00.04 — бюхЫя

Автореферат дисертацп на здобуття паукового ступсня кандидата бшлопчних наук

Лынв — 1995

Дисертащею е рукопис.

Робота виконана на кафедр1 бкшми 1 бютехнологп Львшсько! акаденш иетеринарно! медицини ¡м. С. 3. ГЖИЦЬКОГО.

Науковий кер1вник — доктор бюлопчних наук, дшсний член НТШ,

професор ГОЛОВАЦЬКИЙ I. Д.

Офщжж опоненти: — доктор бюлопчних наук ПУП1Н I. Г. 7

— доктор бюлопчних наук, професор СОЛОГУБ Л. I.

Провщна установа — 1нститут бкшмм ¡м. О. В. Палладша НАН

Украши.

Захист вщбудеться «» 1995 р. о « /Я. » год. на заа-

данш спещал1зовано5 вченоТ ради Д. 04.14. 01. при 1нститут{ ф1з!олог11 1 бю-х1мИ тварин УААН за адресою: 290034, м. Львш-34, вул. В. Стуса, 38.

3 днсертащею можна ознайомитися в б1блютещ шституту.

Автореферат розхланий « » 1995 р.

Вчений секретар спещал1зовано1 ради, доктор с.-г. наук

Я. 1. КИРИЛ1В

змтниХАРАКТЕРИСТИКА ЮЮТИ - ___________

Дигумм?>оть fewa.Btsesso,, qo в^гяэзозаа маявггать таятога розь У зягяхько»/ o6s»iHt рэчэигн, ocatsbsnj века забезпзчуоть ехвргвтач-Mt готр^бя оргзтмэцу, а таяоя таоаята а «гяая йетатьох diosortiwo-«птяятя етаяу*. Ht bïp завод н J Я оеяра! еачгоэзптся иуаявэтааи, а s ovï'».t?M I ï угэорпотьея нушгаТкоя! яяв^отя. la yol* об*!»Ив рвчояяя, 35Гяе*ови*Я няйб)яьз л*б»яьняЯ, я!к пзгдяо реагуе на зовн!э-

иьоро i вкутрМяиього серевоввща,

S' iltSlf t ЭВ*ЯЗУ1йЧдО ЯвНROO Miv PltXO]||30M

t пчятоо^сфягн!»« »пяжош s tpjoso$üüfa?3 ./1,ГогойаяаЯ,196Э) 1970/, ян» я* 1 рвиеозоЛюс^итя в сп1«ьня*я продукта*?» обо* йжгх1в. Воя* »ояуть вплачатиоя я парвяв або другий аяях» *яв кятабоя»тя Яя* аяяхЯ» по-рОному впяимпть к» актявШсть фермент 1 в.

Тая, буяо вотанояявно га*ьм1вн«1> enana п|двящвноТ концэнтраци б^оофорянюиату и» фо(Лм»вксозо»9о*вр4зну/C.Pftrr ,1956/та фов-ёорят»«о»утвэну реапЩ / j.Bot ,1958, ЦГояовацыгаЯ, 1973/. При Atet-oioPtwlft »оипентраш 6-фоефоряо*окат активу« фоофофрукто1ниаэу fü, Sapag-Hafinr,R. Lagunas ,1973/ t и рСГУЯЯТор «Я« протняакниЯ Ä0 Фруятого-2,6-дй*ос*Мту впяяа ка пврежяэчеяня Ря1кол1а-гя1конвогглм / J*Somœercorn, К.Freedlanfí,I984/.

Ивдавио, /1.Гояовапмгай,199Э/ буяо вяявяеяо, цо п!д aleo б-^ое-£чрят>яоиату !вг!бу®ться утвореияя яактату э 4руатозо-6-<{ое<*«ту а яя}тяная рвпаточя Зайдеяа.З-Фое4оря1перат энесеяяй раэои 1э 6-фоо-фогявяояато- , 3Htwae сай гаяьиЛтяй ейвкт t пря гоому вам 1е*отя»о ив ряаорастовувтьвя.

Вяхояячя з вяза праеадэнсго 1 враковувча, rça в орятрошгтах !ятеяс*вио прот||»епен^зофое^«таЯ «яях oßwtny втр*вво*1в, а та-эая м, я ню: эклхорягься знячаа в1яъ*1ета floe*o!4HnepaTt« ета-по доШяьянч дооя!дятя. BSaswoatB «lio «»втабоя!таот1 palao*tsy t пая-toS!>*6статного в»яху ortwtny wp«*boäIb * еригрооатаг в пор»йяямн1. . s *еЯй00ята*я. .

, Йята t завдаяяя кое»!кж<И№, Интоа косдиазэияя бужо вявчит* йэа«*овяяяв я актах продукта гя55юя!эу I пенто soto о*«гиог о шяхху об*}н? йурзееод1в в ге*»я1эатах eparporaTto та я1здтах яеЯ*опят1в ■ад'йпюТ рлгатоТ хувобя. Дяя з"яеуваян*цъоро гитакяа» а таю» qo6 яяхяячятя ланку ре*возойч5в}ат1з0ч8разноГ peasnjií, as» 1ет1бу«тмв e-Jocross5tcoî'4Toi<r, s яасях ДоояЮя^япязс кимрястачяЯ субстрат -

Буян пропелен( дося!дження:

- виворнсгання фрухтозо-1,6-диЛоефату ге«оя1затами еритроцит!в та * (за raw яей*оцит1в;

- впяиву продуктtв пентозофосфатноро яяяху - б-фоофогяекокату ado S~c яоконоя&пону на паретворення фруктозо-1,6-дифосфату t фруж-Тозо-1-фоофа*у. •

- Д11 З-ЛюсфогяЩерату та НАД на 1нг!бувчий впякв б-фосфоряо-конату при перетворенн1 фрумозо-1,6-дифосфату;

- впянву нукяеозиду Лнозину/ на паротворання фруктозодиФосфа-ту taiTKH&MK ipoet.

Наукова новизна. Вперяя на кя!ткнах кров! велико! рогато! ху-воби.досл!джень в it лив .б-(!)осфоР1гокоиату та локоналакто ну на огрей! рваыШ використання фруктозог1,6-ди^о*я.ту. Виявлено, цо метаболии пентозофосфатноро вяяху 6-фосфогяюхонат або i-глпкаиолак-тон !н!р!бують пврвтворвнкя /^рУ^тозо-Х.б-диФоо^вту до лактату.Внесения 3-фоофогл!цературозгалъмовуе дане 1нг1бування.Екзогеннкй НАД давю стимулов гяИгоя1тачн9 пвретворення фруктозооифо{Лату,але при оьочУ 8 загальному збвр1гастъся 1нг1бування б-АооЪогяоконатом продухи!К лактату.Встановявчо, цо нукявозид Лнозин/ гаяьмуе вико риотання фруктозодкфосфату та утворення лактату.

Практична значения роботи. Проведении« дося1д*еннями даповне-но дан^про взавцозв"язо* м!ж продуктами гя1ко*1зу та пенгоэофое-фатним ияяхом обм!ну вуглевод1в.Вотановлено, можяив{вть'впяиву на доояЩжуван! процеси в орган!зм! ияяхом введения ежзогенниг спо-ш.

АпробаШя роботи ! ПУбя!ю»Щ. OchobhI пояоженняроботи аао-духан1 та обговорен! на 49-Tift науково-виробнич!й конференцП /1992 р/ та 50-ifi науково-практичнiй крнфвренц!! /1994 р/ Льв!всь ■о! вкадемП ветеринарноТ мепипяна, п"ят!й та восПй наукових сес!ях н«ужового товармотва Ы.Т.Шевченха /Льа1в,1994,1995/. йас1даннМсаФедри б!ох!м1! 1 б1отехнояогП Льв1воько!' акадэм!У ветеринарно! медицани /1995 р/.

Матер! а ли ДнсергацИ вихаавен! в семи роботах, в тому чнол! У трьох 01цгб«)1юваних,

Особиста участь автора в одераанн! рдзуиьтат!в. Дисертац|йяа робота вяконана самоотШно 1з застосуванняи сучасних б!ох!м!чнях

------- ------------ -------- -------- - 4 -________

метод!в досягдження.

Об"ем 1 структура писертац)!. Робота с #.регконтом загялыгокя-Фезрально1 течи.ДисертаШя написана на 122 етор^гл* «ютшиописчого тексту» {явотрояана 15 малпнлами 1 Ю табяигошя.

Робота вклочае так! разд1ян: вступ, огляв л1тератури,матерная } методике досл1Лжеиия, вяасн! доел1дження, оброворення результата доол1ДЕень» вясновки, список я1тератури» який мостить 258 дде-рея з них 193 - Лтоземнячн» мовами.

ЙАТЕРШ 1 НЕГОДй Д0СЯ1ДКЕНЬ Досл)дчення проводил» на еритроцитах та лейкоцитах кров1 велико! рогато! худоби в лаборатор!! кайедри на протяэ} 1992 - 1994 рок! в.

П)ддэсл{дни«'! тваринаэди булл бички м!сцево! чорнорябо! пори-ви ч1ком 1,5 - 2,0 роки.Проби кров! брали на Льв}всъко*у м"яооком-б!нат! зразу п|сля уехан!чного оглушення тварин, як! витричува-лись перед забоем на голодней Д1ег1 12 гэпин.Дяя эалоб{гання эо}-

влння кров;' м,торис?о5у?-йля гаеячгкяй розеин оисаяату кая!п.В ок-ре««их аипадгэх ипяоркстовуваия 2,51 розчим трьохзеч!некого цитра-ту натр!о, а т«ко* видалялм фЮрян.

Ерятрсвяти одержут*к пяяхои центркфугування 15 хя пра 1500у а настутшим трирдэопк« в!дкив?-яням !х ф!з(ояог !ч»ям роэчнном

МЛ1 та пентрк(?!угуваиня*. Геиоя!з вякяйяяяи йсдаЕ&икта р! сного об"емУ диетильоваьо! вод»-

Лейкоилтим отримупали, ¡з деЫбринованоТ кров! , аентри+угу-нанням Ю хв при 700<} та в!дсмоктуванняч утворено/ пл!вкя лейкоцит! в з поверх»! ерятроят1!« I вшиваниям !х Л!з!ояор!чним роз-чииом ^аС1.В}дчияання'лейкопят1в продавил* три раз» а наступят* иентркфугувзнням.Л1зис б!яокр1вщв проводили яяяхом эаморояуван-ня та ивидкого В!дтапвання при температур! ЗТ^С о гигроскоп) гат* контролем повноти я!зису.

1нкубаа!йна проба Мстила: 14 мкиояь тр!о-НС1 буфер, рН-7,4, у !|!дпов!Дних д'оея1дах <Ърухтозо-1 »б-дг^ое^ат, (!?руктозо-1-фоЬ{вт, б-^юсФорлоконат або <£-рлоконолактон в к1лькаст1 2,42 мкколь на мл прбби.'Дпя ветановлення вих1дних данях буян проведен! дое*!д-.чення * яких використояували Лвуктоэо-1,6-ди*ов?а? та т.т-

¡сокат у ¡якиентрагНях 0,5, 1,0,2,42, 4,84 ивюп. на «я пробп.

В дооя(вж8инк£ е яох ювдия как в на гахористакиг фружтоао-1, 6-диФоо&й?у, 3^oodfiorifQepary або НАД, вноеияя Чк в 1ккубап1йне середоекце в!цпов1дно по 2,0 мккояь та 0,5 мпюп на мя 1и«уйаи1й-ко! проб*.

В пожну 1н*ублЩйну пробу вноекяя по 1,0 их гемоя1зату еркт-росаПв або 0,4 я|зоваикх *вй«совдт1в.0б"«м проб е1дтов1виа окдл-вбв 2,8 та 1,5 мл.1нкубац|я триваяа 60 хв при температурi 3t4J, Дяя в^працпвання часу (нкубац)Т буяо дооя1л*ено з*1нк за 20 'Г 40 хя.

В) «си проб осаджуваяи внесениям холодно* х*орно'( кяояоти до KiHUeinr кониентраЩГ б<. В контрояьних пробах б»*хи оелгжували зразу, ntox* оеадяення /через 10 хв/ ценгр„-^угуйл*и,»хитий над* ооад нейтралtaysam яарбонатом калtu.Перхлорат хая in вядаяяяи цент-риЛугуванням на холоЖ. Для повноти ооадхення перхяорату Kaxio ивВтрав1аован1 проби витрмиувалм 30 хв в холодкяьняку при темпера-typi 4 С.

3 нейтрал!эотиочу иадооад{ виэначал* «наиматично, на спектрофотометр! "Сф-16", bwIot яактату та nlpyeary за Вогдадуг ,1970, 1974/. На фотоелехтрокольорянетр! "ФШ-Ьб*" вхаиачаж* фрукте»/ »а методом в. Kulka /1956/, пей то s и 1 р локоэу sa мето«ккоо 1.Го*оваць-кого /1961/, иеоргаи1чннй fooüop за мето^ккоо <3.?1аЬз , T.Subberow /1965/ ь вякорисганням, як в1диовняха аскорб1ново! хмояоти.В окре-мах дося1океняях прововяяя осадження неоргаШчного фоофоту ва методом описании Н.Меповоо t С.Северином /i960/,

Дяя ROCxiftxeHb нкоряотовуааям реахтявн: фрухго8о-1,6-дифос-фм, фруктоао-Гн&оофат, б-фоо&орлоконат, 3-фоо$огх(одрвт, Ыо»ян, Tple, жактет д er i в раг еяаву, НАД, НАДН ф!рмя "йевааХ ¿-рлвконо-яавток вяробияцгва США. bat рзактиви в1ттазняного виробниптва ЖЕ&сяИкацИ *чда" 1 *хч".

Стетметячну обробку резуж1ллт1в прото**»* за Стьюаентом. В соки i fi сер» досл}ду буяо по «so тира-et сп. повторностай.ОД pospa-кукга проводя** ив м!я) ЮМ "И-3" а еякорноганияи готовя« прог-рзм рзврзбяених 1.&укаяоаям та ¡.Коряттм /1967/.

Р£ЗОД>ТАТИ ДОаЩШЬ ТА IX ОБГОЮРЕННЙ •N ■ 1.йер«творвиня #ру«то8о-1,6-дЕфоо4ату в ернтровятах кров!* . v S ю^аткоох Aocslxaees« буян савчэкк! Фруиюэо-

«рштровями крое! «essm! рогато! худобе, * м*

лежйоаг ! ~в ! ё" Зсго'ЪэнпднтрдгНТ 1,0,2,42та 4,64 пхчот яя-едг-

пробя/ та часу {нкубг.зН /20,40,60 х?/.

Результат« пюс досл!джень посяужвяи оеновоо для даяьдах дос-в!д*ень вихор«о-гзии)! Фрухтозо-I,6-$»«*4)f>i»?v ге»«оя1эаудия бритвой»-

ïi3.

• -иходяч'а э лих Доез1,>;опь, s :«аз1Я prier! гякярявтвяугчзг* ur ; к •'••ру.чтззо-! ,:*-я:гЬсе*иту ,42 «х.т.юяь та пас ШкубяшТ 60 ?в " 2.3ллиа метабоя!ту пеитозоФо агатного пляху - б^юоиюрлойикат;»

»»и»« n»no.,nnoumi Лпуятпяп-1,б-вя1?юо!)ату о егатооштах

"Г* ««»«vr»» nrfn^;

В ДОСЛ ШЧЧННЯХ при BHSC8HHi до 1н!субаП1Йио1 пробн одношено 3 *рУХТ030-1,б-дя»,0О>ЛТ0»« б-^ООТюГЛСХОНЛТУ /*ЗЛ. 1/ BiRMtiUSHO знаянкй ЛпМбуочий вплив остакньсго на перетворення фруптозо-1,6-яя!?юоТату гемол1зата>гп ерятроачт i fr. Змензуеться викориотання (Ьруктозодп^юсЬч-ту на 502, утворзния лаатату на 49%, розхопування ендогенких понтоз ка 60%, Пряр!ст неорган1чного фосфору 1 гяохозя змэнауеться в|дпо-в!дно на 19 { 65$,

ктюлъ

I,i i сЬ

0,7 -

0,0 -

0,5 -

0,4 -

0,3 1

0,2 ..

0,1 -

0 . 1

J

гЬ

f

НЬ ri-

+1

I I 2

Фрухтозо-I, гентози г.актат б-ди^сФат

неорган i ч- глвкоза

ний фосфор

МаяЛ. Вплив б-^осфогяоконату на перетйоренняФруктозо-1,6-дк'Ъоефпту гечол!затами еритроцит!в /дан! в «ккмояь на мл вритропит{в, Ii +nv ,П -5/.

I - 1чкубац{я з í-руктоэо-1с*ато м;

- ЫкубчШя •» <?»У!ггозо-1,6-дй^ое^атом та лвяонатом.

" на да л Л cffiii е*аэу0ть m отражений |нг1бупчнЯ

вглив 6-*о<Л)глУжонату на ряд rrponeatn п®рэтворення ¿рухтезоди'ов-Фату.Эмяниення утворення . яактату ûsiawiib про. помине iwnfö/iwwM

перетворення тр!озофоофат!в, а зменшеяня приросту глокози на 1нг1-бування перетворення фруктозо-б-^ойату у гвксозофосфат!зомеразн!й рвали! У, а також змениуеться деЛоа£орияовання ЛрухтозодисЬос&ату.що вхазус зменяення приросту нворган!чного фоофору.Щд д1ес 6-^осфо-глпконату зменлуеться розходування пентоэ.Вцщв приведена вхазус на скяадний впяив даного метабол! ту наперетворення Фрухтозодифоо-Лату в еритропитах.

П(сля виявяення вице привевеного впяяву, буко до*!двено эаяех Н!сть даного ефекту в!д концентрат? ¿МюоДогяаконату.

3 приведен« на мал.2 данях видно, цо !га»!бування використан-ня (*рухтозо-1,6-дкЛоофату та приросту яахтатУ за я сжить в!д конпант рац1! 6-<!>оеЛогяокона*у. /мая.2/ мкмохь

1,1 -

0,9 -

0,7

0,5

0,3

0.1 О

концентрат я б-АосйоРяоконату Мая.2.Розхопування Яруктозоии-^ооЛвту /I/ та прир!ст лактату /2/ я заяекност! в!д концэнтра-

о-^ооЛюгхоконату /дан! в цкмояь на мя^еритроця^в,

За*в*н!стъ !нг!бування гя!коя!зу в!д конпентраШ! б-фооФогль-кокату з роста с до концентрацИ вого 2,42 мкмояь на мл, а даяьяе II зб1яъвення мало «пяивае на пропесн гл1хоя1зу. Повного !нг1бу-»кня розходування фруктоао-1,6*дйфосфату не наступав точу в даяь-«гах довл!»«еннях ми вя кори Сто вували б-йххлЬогяпконат в конпентра-Ч1Т мкмояь ка мл проба.

Э оих дг>ся1дж8ннях, при Шдвнщенн! конаентрапП б-йоофогяоко-

-Ц50—2,42 4,84 \_% 3

Иал.З.ПрврЮт лахтату притюзщеп яанн! (Ьруктозодю'ЬооЛату /1/!нку-бованого э «МюаЬорлрконатом 1

/в мкмояь на,мл вритроннт!в, и + ц* ¿.п * 4/

' -------------------- ---------------- 3 -----------------------------------------------

нату, дальшэ з^екзукться rrpjipiст наоргаМчиого ftocfopy f ¡Мзхо заеквуеться npaptcr ргохоэи, 40 Шдтвзрзжу® прнвепен! дан! про опосередкос^ниЯ в двких уковах вгошв б-фосфоглвкокату на устарения Фруктоэо-б-ЛоеЛату i його перегворення в Рехозо^юе^вт^оие-Тгкгзпi# peamjii.

. Даяья| поелibzchhh, вплнпу б-фосйогяэконлту,, буяо проведено на л iзатАх явйкоод?1г, г.розi селило 1' рогато! хузеб-л.

Ut дося!дження показали, що роэходувакня фруктоэо-^б-дифосла-ту «¡зата^я .-¡¿r.uottisln в загаапа-.с г^гт)**™»»' гт«-ячиИ_

к!в ерятрош!т1в.Сп18в1вноивння при ньому wise (fipyKToaoo, лактатом, пентозамя та рлокоэоо в лейкоцитах та еритроцитах в1дпов1дно дор1в-нптм: 1,00; 1,21: 1,02; 0,35 та 1,00; 1,32; 1,02; 0,29. В лейкоцитах розходування ^руктоэо-1,6-ди^ос^ату та пентоз дор!вное 33? та IK, прир!ст лактату та глпкоэи в!дпов1дно складае 28 j 62?.

'У пор1вняльних 5оея1вженнях в!Г б-<*ю<йогяпконату, що проводились параяеяьно на лейкоцитах та еритроцитах отричаних з кров! то! is тггркга, буяо tsko* я}яи)чвно знаоний гальм!вяяй

б-^ейлгзигакиту на нзр<*ТЕореичя i •?>'/к » о з о;; и ■' о of« г у ?. лейкоцита*.

В лейкоцитах я ropisHKHifj п .=p«Tpo№Tai«t, п1д д itro б-^-ос^югяп-::онату, 1нр|був*ння «{«оряст&ннс (йруктозор»?юо|ату було бчнзькв i етановкло в!дгюв{дто 52$ j 50?,е i кг i буглчия розхог.ування певгоэ -70S та 6Э£, гтрйр}0¥ глг. га ту в!дпо»1Дно 56? f 49S. Утворсння неорга-hIvhopo фос'эру в лейкоцитах та эритроцитах гменсилосъ на 16? та 19?, а !н?!бування приросту рлокози дор|Еновало 58? f 65%,

TaKnv чином, як В еритроцитах, тек 1 Лейкоцитах проявляемся ¡шЧбувча л?я б-* ;cferхпглтгу на перет»орет>ня ЛруктозодийооЗЬату. При цьому виявглась його Д1я на ца одну ланку - роз^еплення ipya-ТОЗО-1,6-ПКфОСтаТУ до.фруктозо-о-фой-лту, ЦО ЗаСЛУГОЕУС ид окремо

росл!вяення.

3. Д!я 3-фосфогя!церату на 1нг!бупання б-фоефорлскоигтои rntxo-

л!зу в ернтроиитах та лейкоцитах.

Було дослужено впяяв З-^сФоглШерату на 1мг1бування перегворення ^руктозо-Г.б-ри^оТату 6-<ftoeior;rcror«rosf в «рятропчтлг t *вй-геопятах. 3 еритроцитах р1зких вид!в тваркн, як в1дояо, с значка кониентратия (foofrapfltnepaTlH, mti здатн! виклзчагя ¡¡.г¡йуяаиия о-+ое*огяпконатоу. Але, як видно э поперейн»х досяЦжень 6-f,oe*o-

гяскон&т в конце«тр&ц!? 1,00, I 2,42 , 4,84 ккиояь ^Нбуе утворен -ня яактату гваоя1заташ! ерйтроцит!в. Отже, в навих укогах вплив запоб!гаочий »гаЧбувакня на проявляеться, очевионо, не зв'язано з розбявяенням фоЫюгя!церат!в, кхе мало м!сие при виготовяенн! ге-мол|зату, внаслШок чого зменшуеться ?х концентрация.

Розбавяення еритроНит!в було в 5,6 рази, що в!дпов!дно змен-шияо концентрац}о фоо*югл(Ц0рат!в I вона, за напими шдрахунками, буяа в мехах 0,2 - 0,4 мкмояь.

Приведен! п!црахунки Шдтвердикись, внесений в 1нкубац!йну пробу З-фооАогяЩерат в концентрат? 2 мкмоль, зн!мае гальм!вну д!п б-фооГюгяоконату.

Дан! вивчення впяиву 3-фосфогл!церату приведен! на мах.З.Низь-к! концентрат? 3-фоофогя!цврату /I мкмояь/ !гтотно не впливаоть на !нг!бування 6-4о(йюряпконатом утворення яактату з фруктозо-1, 6-ди£ю«Лату /мая.З/, аяе внесений 3-фосфог*!иерат в концентрат? 2 мкмояь ! б!яьве зн!мае !нг!буючий вплив бчЬоойюгяоконату, ! про-би 4 та 5 мало в!др1зняготьоя в!Д проби I, де б-ЛооТюглоконат с в!доутн!й.

3 одерханих даних видно, цо З-фоофоглШерат зн!мае (гаЧбувчУ д!о 6-Дч>сфоглюконату на перетворення фруктозо-1,6-ди5юсфату до яактату гемол1затами еритроцит!в.

В £ося!дженнях перетворення самого 3-<£)оЛ>огл!церату в 1нкуба-Ц1йн1й систем!, при в!дсутност1 йруктозоджкхЛату /табл.1/ практично не утворсстьоя лакгат, це св!дчить, цо 3-фоа?югл!нерат в даних умовах не перетвороетьоя до нього,

ТаблиЦя I

Дянам1ка показник1в при !нкубац!? гемол!зат!в еритроцит!в ¡а 3-АооЛ*огя!цераточ/ дач4 в мкмояь на мл вритроцитИ», М п « 5/.

Метабол1ти ! Лрухтоза ! яактат < 1 ........ I Шруват

Да 1нку«ац!1 1 0,58 + 0,06 ! 1,60 + 0,12 ! 0,15 + 0,02

П|аяя ¡нкуба- , 0,48 + 0,04 , 1,64 ♦ 0,16 , 0,48 + 0,08

3 пркмиеиих дося!дкень видно, цо вшивом 3-^о<Логя!иерату, слеР злпэб1г*е ¡«Чбугайня г.врвтвсреяия фруктезо-1,6-д-к*ос!$ату

до jsatfïaçy, до озтакиъсго перегзороетьея яяйе так« к!эт>к{вть <*ос-<йогяЩераг1в, яга у? sopo е it ад л rc.:co2cfioc.-t'¿ri г <ïepça гяШераяьдв;.-г (д-З-Лес^лтдкг) дрогличэну реакШв, тобто тодt, коки утворосться екп{молкрна к1дьк!сть ¡идноЕленого НАД, ккий поенi ото еикориотозу--егься Для ут«ор»чн.<7 тчтяту п ,тя*гя?яер!дрлгеня»я>Я реакпП.Ц» но з осгажМх ßooaipseub /табл.1/, '} iikisx показано, цо яактат на ууворое^ьоя, a nipyisaï аростав в три рази, 3 ;ушвх результат t с эийно. «о утворений п!руват не пврвтвороетьея во яаятату, в эв"яз~ uj' a sSA,cysii i aro а^днаейснора lîAJîIî.

Отже, як в ернтроцятах так I явйковдтах» 3-Лоо?югд1аерат ant-Mac итбупчу дш 6-Дч>офорлоюзкату на первтворення Фруятозодифйс-faту до яактату. Дещо квниа Йото д!л в лейкоцитах, чожвиво.пв зв"язано з наявяЮтп певно* к1яьдоот1 3-Фосфогя!Оерят1в в еритровд-тах /мая. 4/

УКМОЯЬ 1,2 j

i

1,0

0,8 0,6 0,4

" 2

■ » .

-Р

Л, чГ

11ш

nf

т t-

-i

d-

h

яактат

Фруктозо-I,6-диФоо-

Кая.4. Впякв «ЦюсфогяШерату на 1нг1бування б-Лоефогяоконатэм ne-ретворення фруктозодифоойьату до яактату Рвиоя}затаки ерятроод?»Щ I

та я!затами лейкоцит!в |1!П11 дат в чкмояь на мя еритропят1», И ±WV , Па 5/.

1:ткубяп!я: I. - з <Тфутгтозо-1,б-д»»>оеТ>аток;

2.-3 Аруктозо-I,6-ди*оомятом та б-Лоофогяосонато«;

3. - з ЛруктоэодиЛюоМтом, 6-сЬосФог яс*онатоц та З-îo о'мг я i ператом.

i

Внесений в ¡нкубаЩЯнв ееревовице З-ФосбоглШерат, поен!сто эн1мас иаЧбувчий вплив б-фоо5оглвконагу на утпоренняяактатуэ Лруктозо-1,6-диФосгЪату в еритроцитах Г на891 розходування Лрукто-зодкЛзсфату та 70£ приросту лактату в лейкоцитах. Розходування ен-догенних пеятоз гемол1эатамя еритропнт^в, при. внесенн! 3-&оо$огл1-цзрату, повнЮто в!дновл«эеться, тод1 як в лейкоцитах Няыск на 88*! при одинакових к1лькоотях ияеоеноРо З-^ойюряЩерату.

К1льк!сть рлпкоэи в пкх умовах Д0Сл[ДУ, при внесенн! 3-Тюс*о-ряШерату; зростае в еритроцитах на 50?;, а в лейкоцитах на 18?.

Дальше буяо досл}джено д!о &-глоконолактону в пор1внянн1 з <Мюс&оглоконаточ /мая.^/.

мкмоль

1,1

0.9 -

0,7

0,5

0,3

0,1 О

1.

№1

Г*1 чн

т г

1

фруктозо-1,6-

виЛосЛат

пентози

лактат

Мал.5.8плин б-фосфоглоконату або с-глоконолактону на використання гемоя!затами еритроцит|8 фруктозедифосфату /дан! в мкмояь на мл еритроцит!л, М , п 5/

1. - 1нкубац}я з йруктовоцкйоеЪатом;

2. - {нкубаШя з йруктозодиАос^атом та 6н*юсФоглоконатом;

3. - 1нкубаи1п з йруктозодифосватом та ^-глокоиолактоном,

Ц| досл1дження показали, цо перетворення Фруктозодййгас^ту, при !нкубаЩ¥ його з б-ЛосФогликонатом або «Р-глоконэлакточэм були бяизыги>/и.Сп1ив¡дчосення м1ж компонентами: Фруктозоо,диктатом, рлокозоо { пентозами три ^кэ'бац!'! лияе з субстратом були: 1,00: 1,32; 0,29: 1,02. а при внесен^ в 1нкубац{йне середовтп.е 8-глвконолактону сп1вв)дноиення «ш ними компонентами дорI ено-

вало: 1,00; 0,74: 0,06: 0,78, ?об?о буяи под!бним до'проб 1нкубо-ездих о 6-ЛосФаглвконнтом та ^рултозз-Х.б-ди^оМтом.

Отяе, Я-г.теяонояактон, як 1 б-Аовборяояон. одинаково впляваоть ва пэретворення (Лрутозодн^ю оТ-лту до л а»: та ту. Де ваяяиво тому, ¡¡»о З-глюнонолактон на в1Дм1ну а!д б-фосмоглаконату може пронихатя парэл ме«бран5! Шлих тел 1 тин 1 эплмватн яа пзрзбШ гл1ио.п!зу в ума-зах м>у!*®.

Як вягож», процеся гл!кол!зу проховкть т{ лым при забеэпвче»-

и» овеидай> аинойданого." 1ИД, цо узгорвЕТьел прл стае^ет! 1г5-дййооЪор^церикоэото алъде?1ду.Щоб аикяототи мояслявиЯ дс?>!пкт ЙАД рля гл1яол1тичнюс перетворень Лруктозо-1,б-дифас+ату% в умоеах навях досл!д1в, в ЫкубаШЯне еередовище вносит НАД 0,5 мкмояь и» пробу /табл.2/ Тавлиия 2

Вплив б-фосйоглоконату на перетворення фру*тоэоди*оофату гемол!-затами еритроцит!« при внесянн! НАД { 3-ЛоеФсй*ч{пврату /дан! а мям мхмоль на «ритроцит!в, М '»»V, л * 4/. . :

Нетабол1ти | Розходування | Прир!ст

?Лруктозо-1» !пентоз !неорган1чного!яахтату ,___1б-дигЬоеФату ! _I Фосфору_I_.

5-1,6-Дф 1,07 + 0,09 0,12 ¿0,02 0,37 + 0,08 0,5? + 0,07

Ф-1.6-Д» та НАД 1,21 + 0,12 0,14 ¿0,03 0,32 + 0,0? 0,68 + 0,09

Ф-1.6-ДФ та б-ФГ 0,58 + 0,08 0,06+0,01 0,26 + 0,02 0,28 + 0,04

Ф-1,6-ДФ,НАД,б-фГ 0,66 ; 0,09 0,07+0,01 0,18 + 0,02 0,3? + 0,04

3~1,6-Дф,6-ЯГ, 1,09 ~ 0Д20 0,13^0,03 0,28 " 0,06 0,56 " 0,06

НАД та З^ГЛ ~ . ■ .. ' " "

3 таблмЩ 2 еядно, що внесений в ¡няубаа1йн9 сврядовяце НЛД дсщо зб!льяуе розходування ФрутозодиФоо^ату, пентоз та приросту яактату, а прирЮт неорган!иного фосФору з*генотввя»Цри одночасно-му внчоенн! в !нкубап!йнв еаревоипце НАД та 6-ФосЬогяоконату опое-

тер1гй5ться зб1льз9ння гляориетакня ¡^рузтозодябогЬату та ендогег нух пентоз, при загальночу збереженн 1 1нр1бутния утворення лаята-

3 пих досл5вжянь видно, в-о янеса?жЯ НАД цеце зплят!?,е на зайез-пачення процео!в перетворення <^ухтозо-1,6-двфосфату, ала в!н не

зн!мав 1нг1б|торно1 at Y б-фос&ог поконату. Внесетяй г ко а 1нкубаШЙ не середовтцв 3-Фое$оРЯ5Ийрат нови i сто э!диовяое виюрястання фрук тозодкЛооЪату та приросту лактату, що в!дпов!дас Еще Приведении! даним /табл.4/.

4,Вплйв 1нозяну, 3-ЛосфоРл!ц8ра?у та 6-фосфоряокона?у на перетворення Фруятозо-1,б-пи&о&?агу.

Шд emronou Jнозину /табя.З/ змензусться БиЯорнстання Трукто-эо-1,6-диЛосЛату на 24? та прйр!ст лактату 112, розходування пентоз зросло в два рази, що вказус на пклочення рябозного компоненту it¡o-йину в метабол!зм.

npKpJcr нйорган!чного фосфору зменаиося на 41?, в ncptmmwi з !нкубац!йнимм пробами дэ мЮткися якше йруктозо-1,6-;^ифосфат. Очеяизно» неорган!чний Фосфор використовуетъоя для фосфорол1ти*шо-ро розщеплення 1ноэинУ Ппоксантину та рчбозоФосАату.

Табликя 3

Вплив !нозину та 6-фосфоглвконату на перетворення фруктозо-1, * б-дифосфату гемол(затами еригроцит!в /дан! в мкмоль на мл

еритро«ит!В, М ¿/»V , п в 4/ _ --' ■ ...............; " -......■■■---

Метабол}«! | розхорування j прир!ст

!фруктозо-1,) пентоз 1яамату Iнеорганtч-(О-дийосгЬа- I f (його ФооФф try- __I_f__

«-1,6-ДФ . 1,04*0,08 0,16+0,01 0,58+0,04 0,42+0,03

Ф-1.6-ДФ та 6-ФГ 0,56¿D,06 0,08+0,01 0,28+0,03 ' 0,32+0,02

Ф-1.6-ДФ та 1нозин 0,78+0,06 0,36+0,06 0,50+0,04 0,26+0,03

Ф-1,6-Д$,!нозии i 6-9ГО,42^0,05 . 0,19^0,03 0,24нр,03 0,24+0,05 Ф-I,6-ДФ,!нозин «

б-ФГ та 3-фГЛ 0,93^0,08 0,26+0,07 0,53+0,04 0,21+0,02

Утворений в peawjiY рибозо-1-#осЛат, в свое черту вкят)чаеть-ся -в печтозо(Т)о(йатний шлях, пнаел!Док чого зменшуеться загальна к)льк!сть пентозоЛосфатхв.

Внесения я }нкубац1Йне передо теде лоряД э ЛрухтозодиТюейатом та ího3hhom, б-фосфорлокона ту зчентуе викорнйтання Фруктозо-1,6-ди-фоофату на 62?, розховування пентоз на 48? та прир!ст яактату

■r Ï4 * ,..... ..

на & глвоонеЗ S-^saetiofgfKfeisiç tras spagumiz tinyßamßras проб» п1део»те* сиворастпкня пружго*оцшйаайагу im 05Í г» уяи>раЧт . не молочко? 85iOBO¥tJ ил Ö2Ä, В !каубаи(йв8к пробег в }н/)Экком, д® Н9 вкмрчйтойуваввй 6-AoefsoPiieiioH«*, Sr^QûtâfBtPspav fWEHioTp tHjy» HoBïoe роэховусакия fto «atrâfy, -

Разугьтатд додя|дввнь ДОть преставления про çef Pe*ß*f« вате epHtpotWTlB маоть икюлоактквну if¡ep¥e«TH¡r еивтвму, до «j*6ei»x пзадз аззекозп^эов м!в обманом Hyesaûîggta, r-rçrosefoflii&w«* *зят sow га гл)ко*|зом. Сднють цу* npotiaûia дао вавлаи, мне чув автономист* »нвррвтичнж 1 пяаотичннх npotacts.

Дан) аоох»ялакня ««от» можяивЮть з"моумтн дояН вообяивов?! перегвореиня íipyiroso-1,6-дкФосфату те впяна на ньоро б^афориараг нмту, 3«&оо*юг«1ц<?рату та Козину, «о до по вне s 1снупч1 дан) яро ввт тобо«(?ну per у я яШ о обм!ну вур*ввод|в ■ истинах кров),

8 И С H 0 а К И

1,В оритрокятах ra явйковдта* еров! весило? рорато? нурдСя пораткорвння фрувто^о-166-gBéoo!afy до яавтату JtsMôyeîbQii ô-àotrtor

ркгаонатои,

2, Выявлено Host Рочщг езасиозН t»rn6ojH?le psIaosUiy ta пентозо$о®Ъзт!!ого rtsaxjr, 8с?аковгвкос цо бн^овйорявгойат ? is* t буе HS ïfBtSK PeEe0S0iîa»tS0«ap»3Hy peätKUiB, 8Л8 ТЙ5С£ nSperSOpSKHS

vpto3o^o«iartB e ератроцятак t еваюзгэтк ?а д©Ьэcbpps!япелиня ?о&о-1,б-дифоофату,

3,По^1бниЯ до б-Лоофотяосонату 1н1г1б1горнзЛ влдиэ не. пэретвэ» ретня ФруятозодпУюв£в*у проюямЯ-гяолонояавгон,,

4, 3-4юо$юря1аерат entwas J«p (буочмЭ eí«sr б-Аос*юггоконату »бо $ирявхоиолавтону, пр» fftotiy cïm не иэтабод^уетьвя во иодоч-г

алеют,

б. Внесений НАД децо огимуяве утвор«ыяя цлзп&гу 9 йрукгоаоЛ,

6-йц$ов?ату, ояз at» на eanó6trá* Iwiöyeawe б-4»<*?»рявконато¥,

6.Вяеевннй i но зин зкшгаув роэходукшня фрутоаоде&осЬагу

й* 24f m приросту даву»ту на яи1 в1дновясяться 3-éocí>opj. ¿»т

р»ГОМ.

7, Bf«яаяено е®авио»9"д9вк м»н б-фэс^оРЕвЕокагом, ^~фосАоРя1-г трлт<ш хш. ¡Иоанна* при тр«гъорл№1 fyfnWf-lfSrfjetotü&fy р.

ерятроцитах та лейкоцитах.

список опубшованих РОБИ ю тан дисертаЩ

1.Головацышй 1.Д.Буцяк В.1. Впяив 6-Лоо?юг локона ту та З-гяюко-нояактону на гл1кол1гичне перетворення Фруктозо-1»6-дифоафату в ерятроцитах велико! рогато? худоби //Науко во-техн 4 чиий бюяетень 1н-ституту Ф1э16лог!1' I ЙЮх1кП тварин. - Лья{в, 1994-16, 1-С.Э6-40.

2.Буиях В, I. Вплив бчйоофоряокон&ту на гя1коя<тичне перетворення Фруктоз6-1,6-вифосфату в врнтроиитах' велико)? рогато! хувобя// Тези воповШвй 49-тоК наг 'ово-виробничоУ конФврвнцП ЛАВМ, - Льв1в, 1992. С. 168.

3.Гояовацький 1,Д.,Бзгцяк В.1,,Левкут 0.0. При »Н б-АооФоглско-нату та Iнагих метабол1т1в на регуляШо обм!ну вуглевовних отруктур// Тези допоя1дей. ВсеукраЪнська конйеренШя а <Мэ1ологГ/ 1 б1ох1м1Т тварин. - УААН 1нститут ф1з1ояог11 1 б1ох1*П тварин. - Льв}в,1994. С. 44-45. .

Бушга В.И. Изучение влияния отдельных метаболитов на регуляции звеньев обмена углеводов у клетках крояк крупного рогатого окота .

Диссертация на соискание ученой степени кандидат» биологических наук, по специальности 03.00.04 - биохимия.

Институт физиологии и биохимии животных, Львов - 1995 г. Защищается 3 научных исслевователызких работ» которые совержат данные о влиянии.отвельных метаболитов на регуляции процессов обмена углеводов у животных. Установлено, что метаболиты пентозо*?«статного пути 6-ФооФоглохонат я ^-Рлшсонолактонингибируот образование лактата из (Т!руктоэо-1,6-ди?>о(й)ата. в эритроцитах и лейкоцитах крупного рогатого скота. 3-фосФоглп15зрат, внесенный вместе с 6-фоо?ю-глоконатом или 5-глоконояакгокоя, внимает этот ингибиторниЯ эффект _ Добавленной НАД не снимает ингибированке б-фюаТоглпконатом.

B'.iteak V.I. I'ho study of the-irrfluoiico of individual netaVolitaa on the,r3gulation of carbohydrates exchange in blood colls of cattle« ' ■ -

A dissertation to achieve the scientific level of a candidate of biological specializing in 03.00.0^ - blocbcalatry, .

The institute of physiology and biochemistry.of animals, Tiaaro aro '} supporting scientific works, In which, exporiiaaatally is shorn tha influence} of Individual aetaboliteo oj> the regulation o2 caxtoiydratoc «chsa«9 *>lo<»i calle o£ oattls. It .is prowl that the metabolites of the pentozopboaphato pathway - 6 - -hospbc— gluconate with gluconolactone inhibit the formation of 1aetata from fructoae-1,6-biphosphate,in orytrocytoo and leukocytos in cattle large horned livestock. J—phosphoglycorate with 6-phospho-gluconate or ."luconolagtono removes its inhibiting effect, but; itself is i)ot utilized. The addition of HAD doss not change this inhibition, ■

Kit'ieai c.ioEa: oSuln nyrsesonin, iirrfdysaKHfl, $jyrcT030-I,6~ iiH0oc$aT, 6-$oc$oricroHaT, S-^ocioraiuepaT, S-r.wKOHomKTCn, 1H03SIH.