Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изучение роли полиморфных вариантов генов цитокинов в формировании гиперпластических процессов эндометрия

ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Изучение роли полиморфных вариантов генов цитокинов в формировании гиперпластических процессов эндометрия"

На правах рукописи

ДЕМАКОВА Наталья Александровна

ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ В ФОРМИРОВАНИИ ГИПЕРПЛАСТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ЭНДОМЕТРИЯ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

25 СЕН 2014

Белгород - 2014

005552780

Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования

«Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Министерства образования и науки Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Чурносов Михаил Иванович

Официальные оппоненты:

Солодилова Мария Андреевна, доктор биологических наук, доцент, ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Минздрава России, профессор кафедры биологии, медицинской генетики и экологии Иващенко Татьяна Эдуардовна, доктор биологических наук, профессор, ФГБУ «НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отга» СЗО РАМН, ведущий научный сотрудник лаборатории пренатальной диагностики врожденных и наследственных заболеваний

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет имени А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Зашита диссертации состоится »¿/¿(у/ 2014 года в «

часов на заседании совета по защите диссертаций уна соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 212.015.13 при ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», по адресу: 308015 г. Белгород, ул. Победы, 85.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Минобрнауки России и на сайте www.bsu.edu.ru

Автореферат разослан « $ » //М?2014 г.

Ученый секретарь совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д212.015.13, доктор биологических наук

В.И. Кочкаров

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Гиперпластнческие процессы эндометрия (ГПЭ) представляют собой патологическую диффузную или очаговую пролиферацию железистого и стромалыюго компонентов слизистой оболочки матки с преимущественным поражением железистых структур [Киселев В.И. и др., 2011]. Среди всех гинекологических заболеваний на долю гипернластических процессов эндометрия приходится 15-50% [Lacey J.V. et al., 2010; Giuntoli R.L. et al., 2012; Truskinovsky A.M. et al., 2014; Бреусенко В.Г. и др., 2009; Припепская В.Н. и др., 2009; Ткаченко Л. В. и др., 2011; Шешукова Н.А. и др., 2011]. В последние годы отмечен рост патологии эндометрия среди женщин всех возрастных групп [Juhi S. et al., 2013; Chestnova G.P. et al., 2013; Acmaz G. et al., 2014; Клещев M.A. и др., 2010; Антоненко B.C., 2011; Мартиросян K.A. и др., 2011]. Причем до 40% женщин молодого возраста с гиперпластическими процессами эндометрия подвергаются хирургическому лечению, что зачастую приводит к потере репродуктивной функции [Munro M.G. et al., 2011; Trimble C.L. et al., 2012; Goncharenko V.M. et al., 2013; Киселев В.И. и др., 2011]. Гиперплазия эндометрия в 20-25% случаев является основой для формирования злокачественных опухолей эндометрия [Pennant S. et al., 2008; Daya D., 2014; Давыдов А.И. и др., 2009; Кулаков В.И. и др., 2009; Доброхотова Ю.Э. и др., 2011; Запорожан В.Н. и др., 2012].

Согласно данным литературы, ведущее значение в этиопатогенезе гиперпластических процессов эндометрия отводится избыточной эстрогеннон стимуляции, сочетающейся с недостаточностью прогестерона [Peng X. et al., 2009; Takreem A., et al., 2009; Свиридова Н.И., 2009; Татарчук Т.Ф. и др., 2011; Сидорова И.С. и др., 2011], гормон-независимой пролиферации [Киселев В.И. и др., 2011], воспалению [Wang T. et al., 2011; Стрижаков А.Н. и др., 2011], сниженному апоптозу [Chandra V. et al., 2011; Чернуха Г.Е. и др., 2013; Слукнна Т.В. и др., 2008], патологическому неоангиогенезу [Hvingel В. et al., 2012; Шешукова Н.А. н др., 2012], а также нарушениям иммунного статуса в эндометрии [Wilkievvicz А.К. et al., 2010; Задонская Ю.Н., 2009; Шешукова Н.А. и др., 2012]. Ключевыми звеньями реализации каскада данных механизмов являются процессы взаимодействия широкого спектра цитокинов: факторов некроза опухолей, хемокинов, интерферонов, факторов роста и др. [Wang С. et al., 2011; EritjaN. et al., 2013; Лысенко O.B. и др., 2011; Коваленко Е.П. и др., 2011]. Эти цитокины, обладая рядом медико-биологических эффектов (регуляция иммунного ответа, участие в воспалительных реакциях, контроль апоптоза, пролиферации и ангиогенеза), могут быть вовлечены в этиопатогенез гиперпластических процессов эндометрия [Kusakabe К. et al., 2009; Dobrzycka В. et al., 2011; Xuebing P. et al., 2011; Колесникова H. В. п др., 2010; Коваленко Е.П. и др., 2012].

В настоящее время известно, что полиморфизмы ряда генов имеют важное значение в развитии гиперпластических процессов эндометрия [Abdel Aziz A.F. et al., 2009; Ashton K.A. et al., 2009; Пушкарев B.A. и др., 2009; Кипич H.B. и др., 2012; Азарова А.З., 2012]. При этом следует отметить, что большинство работ по изучению генетических механизмов формирования гиперплазии эндометрия проведено за рубежом [Aban M. et al., 2006; Esinler I. et al., 2006; Fang F. et al., 2010; Okuda T. et al., 2010; Sergentanis T.N. et al., 2011; Jiang D.K. et al., 2011; O'Hara AJ. et al., 2012]. Клинико-генетическне исследования, которые посвящены молекулярно-генетическим аспектам гиперплазии эндометрия, в России немногочисленны и затрагивают в основном гены интегринов [Серегина А.Е., 2009], каталитической субъединицы теломеразы [Адамян J1.B. и др., 2009], факторов роста и пролиферации [Чернуха Г.Е. и др., 2013], ферментов метаболизма эстрогенов [Клочкова Н.Е. и др., 2009; Харенкова Е.Л. и др., 2009; Артымук Н.В.и др., 2009]. Вовлеченность генетических полиморфизмов цитокинов в этиопатогенез гиперпластических процессов эндометрня среди населения России изучена крайне слабо.

Работа выполнена в рамках государственного задания Министерства образования и науки РФ «Изучение генетических факторов риска развития мультифакториальных заболеваний человека» (№ 511/2014).

Цель: Изучить роль полиморфных вариантов генов цитокинов в формировании гиперпластических процессов эндометрия у населения Центрального Черноземья России.

Задачи:

1. Провести анализ распределения генетических вариантов цитокинов (-308 G/A TNFa, +252 A/G Lia, +36 A/G TNFR1, + 1663G/A TNFR2, -403A/G RANTES, A/G J-TAC (rs4512021), +1931A/T MIPlp, C/G MCP1 (rs2857657), -801G/A SDF1) среди больных гиперпластическими процессами эндометрия и в контрольной группе.

2. Изучить вовлеченность генов-кандидатов и их сочетаний в формирование гиперпластнческих процессов эндометрия.

3. Рассмотреть вклад генетических факторов в подверженность к развитию гиперплазии эндометрия и полипов эндометрия.

4. Выявить связи генетических полиморфизмов с формированием гиперпластических процессов эндометрия, сочетающихся с миомой матки и аденомиозом.

5. Проанализировать роль наследственной отягощенности в характере связей молекулярно-генетических маркеров с возшнсновением гиперпластических процессов эндометрия.

Научная новнзпа. Впервые установлены ассоциации генетических полиморфизмов -308 G/A TNFa, +252 A'G Lia, +36 A/G TNFR1, +1663G/A TNFR2, A/G I-TAC (rs4512021), C/G MCP1 (rs2857657), +1931A/T MlPip, -801G/A SDF1 и их комбинаций с формированием гиперпластических процессов эндометрия у населения Центрального Черноземья России.

Выявлены различия в вовлеченности генов-кавдидатов в развитие гиперпластических процессов эндометрия в зависимости от их сочетания с другими гиперпластическими процессами матки (миома матки, аденомиоз). Определены отличия в характере ассоциаций генетических вариантов цитокинов с формированием гиперплазии эндометрия и полипов эндометрия. Показаны особенности вклада генетических полиморфизмов цитокинов в подверженность к гнперпластическим процессам эндометрия в зависимости от отягощенного семейного анамнеза.

По результатам работы получен патент на изобретение № 2468367 от 27.11.2012 «Способ прогнозирования риска развития гиперплазии эндометрия у женщин с генитальным эндометриозом».

Научно-практическое значение. Результаты проведенного исследования вносят вклад в развитие представлений о молекулярно-генетических основах формирования шперпластических процессов эндометрия. Полученные данные могут быть использованы в предиктивной медицине для формирования среди женщин групп повышенного риска развития гиперпластическнх процессов эндометрия. Результаты работы используются в учебном процессе в ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» и в практической деятельности врачей женской консультации МБУЗ «Городская поликлиника № 2» г.Белгорода и перинатального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на 111 Международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства и гинекологии» (Москва, 2009),

V Съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров (Москва, 2009), Всероссийской школе-семинаре «Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы» (Белгород, 2009), Всероссийской конференции с элементами научной школы для молодежи «Репродуктология: новые технологии, проблемы перспективы» (Белгород, 2010), II Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (Курск, 2011),

VI Международной (XV Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2011),

V Международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства, гинекологии и перинатологии» (Москва, 2011), XIV Всероссийской медико-бнологнческой конференции молодых исследователей (с международным участием): «Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2011),

VII Международной (XVI Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2012), 4th's International Symposium on Clinical and Applied Anatomy (Ankara,

2012), VI конгрессе патофизиологов Украины «От экспериментальных исследований к клинической патофизиологии» (Мисхор, 2012),

V Международной научно-практической конференции «Геронтологические чтения-2012» (Белгород, 2012), III Международной научно-практической конференции «Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине» (Казань, 2012), 77-й Российской научной конференции студентов и молодых ученых, посвященной 80-летию БГМУ (Уфа, 2012), VIII Международной (XVII Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2013), VI Международной конференции молодых ученых «Современные вопросы акушерства, гинекологии и перпнатологии» (Москва, 2013), XII Congress of the European Association of Clinical Anatomy (Lisbon, 2013),

VI Межрегиональной научно-практической конференции с международным участием для врачей акушеров-гинекологов «Здоровье женщины - здоровье нации» (Белгород, 2013), Международной конферетпш «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» (Харьков, 2013).

Личный вклад автора. Автор принимал участие в выполнении всех подготовительных и основных этапов работы, включая анализ и обобщение сведений литературы по изучаемой проблеме, постановку цели и задач исследования, разработку методических подходов для их решения, выполнение молекулярно-генетического исследования, обработку, анализ и обобщение полученных результатов. Автор принимал личное участие в апробации полученных результатов исследования. Соискателем самостоятельно проведена подготовка основных публикаций по выполненной работе, написана и оформлена рукопись.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 25 печатных работ, в том числе 5 в журналах из списка ВАК. Получен патент на изобретение.

Положения, выносимые па защиту:

1. Генетические полиморфизмы -308 G/A TNFa, +252 A/G Lta, +36 A/G TNFR1, A/G I-TAC (rs45I2021), +193IA/T MlPlft, C/G MCP! (rs2857657), -801G/A SDF1 ассоциированы с развитием гиперпластических процессов эндометрия у населения Центрального Черноземья России.

2. Связи молекулярно-генетических маркеров с формированием гиперплазии эндометрия и полипов эндометрия различны.

3. Сочетания генетических вариантов рецепторов факторов некроза опухолей и хемокинов вовлечены в подверженность к возникновению гиперпластических процессов эндометрия без миомы матки и/или аденомиоза.

4. Характер ассоциаций генов-кандидатов цитокинов с формированием гнпериластических процессов эндометрия в группах женщин в зависимости от наличия наследственной отягошенности различается.

Структура н обьем диссертации. Диссертационная работа включает в себя следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследования и их обсуждение, а также выводы, список литературы н приложения.

Материалы диссертации изложены на 170 страницах машинописного текста и содержат 19 таблиц и 16 рисунков. Библиографический указатель содержит 264 наименования, из которых 138 — ссылки на работы иностранных авторов.

Материалы м методы исследовании

Характеристика исследованных групп.

Для решения поставленной цели и задач исследования была сформирована выборка из 502 женщин, в которую вошли 253 пациентки с гиперпластическлми процессами эндометрия и 249 женщин контрольной группы. В выборки больных и контроля включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженками Центрального Черноземья России и не состоящие в родстве между собой. Пациентки включались в соответствующую группу больных только после установления диагноза заболевания, который подтверждался с помощью клинических и лабораторно-инструментальных методов обследования. Кпинико-инструментальное обследование пациенток проводилось на базе гинекологического отделения першттального центра Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа. Контрольная группа была сформировала при экспедиционном обследовании населения областей Центрального Черноземья: Красненского и Прохоровского районов Белгородской области, Репьевского района Воронежской области и Черемиснновского района Курской области. Средний возраст исследуемых женщин с гипернластическими процессами эндометрия варьировал от 21 года до 72 лет и в среднем составил 42,05±11,08 лет. В качестве контроля в работе использовалась выборка 249 женщин без пшекологических заболеваний в возрасте от 20 до 60 лет (средний возраст 41,2±7,5 лет), отобранных по национальному составу (русские) и месту рождения (уроженцы Центрального Черноземья) соответственно группе больных гиперпластическими процессами эндометрия. Таким образом, группа контроля полностью сопоставима с выборкой пациенток с ГПЭ по полу, возрастному цензу, национальности и месту рождения (р>0,05).

Всем больным с гиперпластическими процессами эндометрия и индивидуумам группы контроля выполнено генотппирование девяти полиморфных маркеров генов цитокинов: фактора некроза опухоли а (-308 G/A TNFa), лимфотокенна а (+252 AJG Lia), рецептора фактора некроза опухоли 1 типа (+36 A/G TNFR1), рецептора фактора некроза опухоли 2 типа (+1663G/A TNFR2), фактора, регулирующего активацию нормальной Т-клеточной экспрессии и секреции (-403A/G RANTES), интерферон

индуцнбельного а-хемоаттрактанта Т-клеток (A/G I-TAC (rs 4512021)), макрофагального воспалительного белка-1 (+1931А/Т MlPlß), хемоатграктанта моноцитов-1 (C/G МСР1 (rs 2857657)), фактора-1, продуцируемого стромальными клетками (-801G/A SDF1). Выбор данных систем для исследования обусловлен их возможной вовлеченностью в патогенез гиперпластических процессов эндометрия за счет способности изучаемых полиморфизмов изменять экспрессию соответствующих цитокинов[Groothuis P.G. et al., 2005; Jang et al., 2007; Mavri A. et al., 2007; Tan В. H. L. et al., 2011].

Молекулярно-генетнческпе методы.

Выделение геномной ДНК из периферической крови проведено стандартным методом фенол-хлороформной экстракции из замороженной венозной крови [Mathevv, 1984].

Анализ всех локусов осуществлялся методом полимеразнон цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы «Силекс-М», олигонуклеотидных праймеров и зондов, синтезированных фирмой «Синтол».

Генотипирование ДНК-маркеров проведено методом детекции TaqMan зондов по данным величин RFU (уровень относительной флуоресценции) каждого зонда на амплификаторе «1Q5» с детектирующей системой в режиме реального времени. Для дискриминации аллелей использовали программу «Bio-Rad 1Q5-Standart Edition».

Статистические методы.

Статистическая обработка данных осуществлялась с использованием пакетов прикладных программ «STATISTICA for Windows 6.0» и «Microsoft Excel 2007». Определение фенотипических и генных частот проводили стандартными методами [Жнвотовский J1.A., 1983]. Для проверки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому, исходя из равновесия Харди-Вайнберга, использован критерий х2 [Вейр Б. и др., 1995]. Ассоциации аллелей и генотипов изученных ДНК-маркеров с формированием гиперпластических процессов эндометрия оценивали с помощью анализа таблиц сопряженности 2x2 с расчетом критерия х2 с поправкой Иетса на непрерывность и отношения шансов (OR) с 95% доверительным интервалом [Schlesselman J., 1982]. Анализ роли комбинаций генетических вариантов цитокинов в возникновении гиперпластических процессов эндометрия проведен с помощью программного обеспечения APSatnpler, использующего метод Монте-Карло марковскими цепями и байесовскую непараметрическую статистику [Favorov A.V. et al., 2011]. При проведении множественных сравнений с целью минимизации ошибок первого рода (ложноположительные результаты) использовали поправку Бонферрони [Реброва О.Ю., 2006].

Результаты исследования и их обсуждение

1. Изучение ассоциаций полиморфных локусов генов цитокинов с развитием гиперпластических процессов эндометрия

Анализ связей генетических вариантов цитокинов с формированием гиперпластических процессов эндометрия показал, что среди пациенток с ГПЭ концентрация генотипа +36AG TNFR1 (62,14%) была максимальна, а частота генотипа +36ЛЛ TNFR1 (17,28%) - минимальна по сравнению с аналогичными показателями контрольной группы — 46,75% (х2=11,06, р=0,002, с учетом поправки Бонферрони рсог =0,006, OR=l,87, 95%С1 1,282,73) и 26,42% (х2=5,45, р=0,017, Рсо,=0,051, OR=0,58, 95%С1 0,37-0,92), соответственно.

Таким образом, молекулярно-генетическнм фактором риска развития ГПЭ является генотип +36AG TNFR1 (OR=l,87), а протективным действием обладает генетический вариант +36АА TNFR1 (OR=0,58). Согласно данным литературы, TNFR1 может участвовать как в процессах апоптоза, так и в воспалительных реакциях [Harada Т. et al., 2004; Kavurma М. et al., 2008; Wajant H. et al., 2011]. Эти патогенетические механизмы лежат в основе формирования ГПЭ [Chandra V. et al., 2011; Сухих Г.Т. и др., 2005; Стрижаков А.Н. и др., 2011].

С использованием биоинформатических подходов выявлены комбинации генетических вариантов цитокинов, ассоциированные с повышенным риском развития ГПЭ: +36AG TNFR], A I-TAC и С MC PI (OR=l,98); +36AG TNFR1 н С MCP I (OR=l,94); +36AG TNFR J и +1931 A MlPIß (OR= 1,91); +36AG TNFR1, A I-TAC и -80IG SDF1 (011= 1,91) (табл. 1). Различия в концентрациях этих сочетаний генетических вариантов цитокинов между больными с ГПЭ и контролем составляют 1,4-1,5 раз. Патогенетическая значимость генов хемокинов при формировании ГПЭ, выявленная в нашем исследовании, согласуется с литературными данными по их медико-биологическим эффектам в организме. Согласно материалам работ Кулагиной Н.В. и др. [2007], Белоцкого С.М. и др. [2008], Hirota Y. et al. [2006], Zhang Z. et al. [2007], Salomonnson E. et al. [2013], интерферон индуцибельный а-хемоатграктант Т-клеток {I-TAC), хемоатграктант моноцитов-1 (МС1Ч), макрофагальный воспалительный бслок-1 (MlPIß), фактор-1, продуцируемый стромальными клетками (SDFI), вовлечены в процессы миграции лейкоцитов, мобилизации провоспалительных цитокинов, ангиогенеза, апоптоза, пролиферации и дифференцировки клеток, которые имеют важное этиопатогенетическое значение при развитии ГПЭ.

Таблица /

Распространенность сочетали» некоторых гепетпческпх вариантов цптокнноп у больных ГПЭ и в контрольной группе

Полиморфизмы Сочетали» (аллели/ гепотипы) Больпые Ш ) (п=253) Контроль (п=249) Р (Р»г) OR (95% CI)

n/N % n/N %

+36 A/G TNFRI. A/GI-TAC (rs4512021), CJG МСР1 (rs2S57657) +36AG TNFRI совместно с А 1-ТАС и С МСР1 121/237 51,06 82/238 34,45 0,0002 (0,0021 1,98 (1,37-2,87)

+36 A/G TNFRI, C/G MCP1 (rs2857657) +36AG TNFR1 совместно с С MCP 1 148/243 60,91 109/245 44,49 0,0002 (0,001) 1,94 (1,36-2,79)

+36 A/G TNFR1, +1931 AT М1Г Iß +36AG TNFRI совместно с +1931 AMIPIß 138/238 57,98 102/243 41,98 0,0003 (0,002) 1,91 (1,33-2,74)

+36 A/G TNFRI, A/G 1-TAC (rs4512021), SniG/A SDF1 +36AG TNFRI совместно с А 1-ТАС И S01GSDF1 123/237 51,90 82/238 34,45 0,0003 (0,004) 1,91 (1,32-2,75)

2. Сравнительный аналпз вовлеченности генов-кандидатов в формирование гиперплазии эндометрия и полипов эндометрия

Изучение генетических характеристик пациенток с гиперплазией эндометрия (п=69) и полипами эндометрия (п=174) выявило, что отличительной особенностью больных с гиперплазией эндометрия является наибольшая частота аллелей -308 A TNFa (19,05%) и +1663 А TNFR2 (49,30%) в сравнении с женщинами группы контроля (10,08%, ^=7,05, р=0,009, OR=2,07, 95%С1 1,20 - 3,58 и 37,29%, х,2=5,51, р=0,02, OR=l,63, 95%С1 1,08- 2,46, соответственно) и пациентками с полипами эндометрия (9,48%, у;=7,26, р=0,008, OR=2,22, 95%СТ 1,22-4,01 и 38,24% ^=4,19, р=0,04, OR=l,57, 95%С1 1,02- 2,41, соответственно) (рис. 1). Таким образом, молекулярно-генетическими маркерами повышенного риска возникновения гиперплазии эндометрия являются аллели -308 А TNFa (OR=2,07) и +1663 A TNFR2 (OR=l,63). О связи генетического полиморфизма -308 G/A TNFa с развитием гиперплазии эндометрия при генитальном эндометриозе свидетельствуют и результаты других исследований [Конева O.A. и др., 2009]. Патогенетическая значимость TNFR2 при формировании ГПЭ, выявленная в нашей работе, согласуется с данными литературы. Так, по данным S. Haider [2009], активация TNFR2 может вызвать антнапоптотические эффекты.

коигрольиан груииа больные с иолниамн Сильные с

эндометрия i инернлашей

эндометрии

Рис. I. Распределение шшеля -308 A TNFa среди больных с гиперплазией эндометрии, полипами эндометрия и в .контрольной группе, %

Установлено, что факторами риска развития гиперплазии эндометрия служат следующие сочетания генетических маркеров: -308 А TNFa,+36 G TN 1<IU, +1663A TNFR2 и +1931 A MlPiß (Pcur=0,009, OR --4J1, 95%CI 1,88-9,01); -308 A TNFa, +36G TNFR1 и +1663 A TNFR2 (pcor=0,011, OR=3,43, 95%CI 1,64-7,19); -308 A TNFa, +1663A TNFR2, +1931 A MlPlß и -801 G SDF1 (pour=0,027, OR=3,19, 95%C1 1,56-6,51); +252 G Lia, +36 G TNFR1 и +1931 A MlPlß (pcor=0,015, OR= 2,40, 95%CI 1,374,22); -308 A TNFa, +1663 A TNFR2 и -801 G SDF1 (pcor=0,016, OR= 2,91, 95%C1 1,485,70); -308 A TNFa, +252 G Lia и +1663 A TNFR2 (Pcor=0,016, OR=2,91, 95%C1 1,48-5,70); +252 G Lia и +1931 AA MlPlß (Pcur=0,012, OR=2,43, 95%CI 1,27-4,32); -308 A TNF a,+1663A TNFR2 и +1931 A MlPlß (pcur-0,016, OR=3,06, 95%C1 1,51-6,21); -308 A TNF и и +1663A TNFR2 (Pcor =0,010, OR=2,82, 95%CI 1,44-5,51); -308 A TNFa, +36 G TN F RI и +1931 A MlPlß (Peo. =0,032, OR=2,69, 95%CI 1,37-5,31); +1663 A TNFR2 и CC MCP1(Pso, =0,036, OR=2,13, 95%C1 1,21-3,74); +252 G Lia и +36 G TNFR1 (Prar=0,030, OR= 2,05, 95%CI 1,18-3,56); -308 A TNF a и +36 G TN F RI (Pcor=0,04, OR=2,27, 95%CI 1,18-4,35) (рис. 2).

Рис. 2. Ассоциации сочетаний генетических вариантов цитокинов с формированием гиперплазии эндометрия

Генетическими факторами повышенного риска развития полипов эндометрия являются: +252 АА Lta и +36 AG TN FR] (pcor=0,0009, OR=2,22, 95%CI 1,44-3,40); +252 AA Lta W+36A TNFR1 (Pcor=0,0336, OR=l,71, 95%CI 1,15-2,55); +36 A TNFR1 и -801 GC, SDF1 (pcor=0,0354, OR=1,70, 95%CI 1,14-2,53) (рис. 3). Таким образом, в формирование гиперплазии эндометрия вовлечены семь генетических полиморфизмов цитокинов (-308 G/A TNFa, +252 A/G Lta, +36 A/G TNFR1, +1663 A/G TNFR2, +1931A/T MlPlß, C/G MCP, -801 G/A SDF), тогда как с развитием полипов эндометрия ассоциированы комбинации генетических вариантов лишь трех полиморфных локусов (+252 A/G Lía, +36 A/G TNFR1, -801 G/A SDF).

Рис. 3. Вовлеченность сочетаний генетических вариантов иптокиноп в формирование полипов эндометрия

3. Исследование связей генетических полиморфизмов с развитием гиперпластических процессов эндометрия, сочетающихся с миомой мятки и яденпмиозом

Согласно литературным данным [Аничков Н. М. и др., 2005; Сидорова И.С. и др., 2006], миома матки и аденомиоз имеют общие молекулярные механизмы патогенеза с гиггерпластическими процессами эндометрия и поэтому достаточно часто встречаются сочетано [Ищенко А.И. и др., 2008; Стрижаков А.Н. и др., 2011]. В исследуемой нами группе 253 пациентки с ГПЭ миома матки встречалась у 26,88% женщин (и=68), аденомиоз был выявлен в 11,07% случаев (п=28), у 8,30% пациенток (n=21) присутствовал как аденомиоз, так и миома матки. Выявлено, что генетические варианты +36AG TNFRI (OR=2,IO) и +36АА TNFR / (OR=0,52) маркируют развитие ГПЭ без аденомноза: среди больных концентрация генотипа +36 AG TNFR1 (64,80%) была более чем в 1,4 раза выше, а частота генетического варианта +36 АА TNFR/ (15,82%) в 1,7 раза меньше, чем в контрольной группе (46,75%, х2=13,62. р=0,0009, рсог=0 003 (Ж=2,10 95% CI 1,40-3,14 и 26,42% ¿45,61, р=0,01. рсог=0,03, ПК 0.52 95%С1 0,32-0.87, соответственно).

Установлены «рисковые» комбинации изучаемых генетических маркеров, ассоциированные с развитием ГПЭ у женщин без миомы матки и аденомиоза: +36AG TNFR/, А Г-ТАС, A MlPlfi и С МСГ (рсог=0,017, OR=2,68, 95%С1 1,71-4,19); +36AG TNFRI, A /-ТАС и С MC.Pl (рсог =0,026, OR=2,57, 95%С1 1,65-4,00); +36AG TNFR1, А /-'ГАС и A MlPlft (ргог=0,05, OR=2,51, 95%С1 1,61-3,92); +36AG TNFR/, А 1-ТАС и -НО!G SDF1 (рсог =0,05, OR= 2,47, 95%С1 1,59-3,84) (рис. 4).

Рис. 4. Связи комбинации генов-кандидатов с развитием 1 ПЭ без миомы магки и аденомиоза

4. Оценка роли наследственной отягощенности в характере

ассоциаций молекулирно-генетическш. маркеров с возникновением гиперпластических процессов эндометрия

Изучены особенности ассоциаций генетических полиморфизмов цитокинов с формированием гиперпластических процессов эндометрия в зависимости от наличия наследственной отягощенности. В исследуемой выборке из 253 пациенток с ГПЭ 36,36% женщин (п=92) имели отягощенный семейный анамнез по гиперпластическим процессам матки, а у 63,24% женщин (п= 161) наследственность была не отягощена.

Проведенный биоинформатический анализ выявил генетические факторы повышенного риска развития ГПЭ у женщин с отягощенным семейным анамнезом без миомы и аденомиоза: + 36 A TNFRl, A I-TAC, + 1931 A MlPlß и С MC PI (pcor=0,00048, OR-5,05, 95%CI 2,16-11,81); +36 AG TNFR1 и A I-TAC (рот=0,00042, OR =3,80, 95%C1 1,92-7,53); +36 А TN FR/ и AG I-TAC (Pcor=0,00054, OR= 3,69, 95%C1 1,88-7,24); +36 А TNFRl, A I-TAC и 11931 A MlPlß (pcw=Ü,00088, OR= 4,49, 95%C1 1,9210,49); +36 A TNFRl, A I-TAC и С MCP1 (pcur=0,008, OR= 4,36, 95%C1 1,8710,16); л 36 AG TNFRl, G I-TAC и +1931 A MlPlß (Pcor=0,0048, OR=3,25, 95°/oCl 1.67-6,33); +36 A TNFRl и A I-TAC (Ром =0,0024, OR=3,77, 95%C1 1,62-8,80); +36 A TNFRl, +1931 A MlPlß и С MCPI (pcor=0,008, OR= 3,60, 95%C1 1,46-8,84); f 36 A TNFRl, G I-TAC и +1931 A MlPlß {pcor=0,008, OR= 2,88, 95%C1 1,43-5,80) (рис. 5).

Рис. 5. Ассоциации сочетаний гснстических цитокипов с формированием ГПЭ у женщин с отягощенным семейным анамнезом бет миомы матки и аденомиоча

Выявлены отличия в характере ассоциаций генетических полиморфизмов с формированием ГПЭ в группах женщин без отягощенного семейного анамнеза в зависимости от наличия сопутствующих гиперпластических процессах матки (миомы и аденомиоза). Так, в формирование ГПЭ у индивидуумов без наследственной отягощенности с миомой матки и/или аденомиозом (рис. 6) вовлечены четыре комбинации генетических вариантов: +36 G TNFRl, +1663 AG TNFR2 (рсот=0,01, OR=2,26, 95%С! 1,32-3,88); t 36 G TNFRl] + 1663 A TNFR2 и +1931 A MlPlfl (pcor=0,04, OR=2,12, 95%CI 1,23-3,64); +36 G TNFRl и +1663 A TNFR2 (pOT=0,03, OR=2,OS, 95%СГ 1,21-3,59); G 1-TAC, G MCP1 и -801 A SDF1 (pcor=0,05, C)R=0,25, 95%CI 0,08-0,76). Тогда как подверженность к развитию ГПЭ у пациенток без наследственной отягощенности, без миомы матки и/или аденомиоза определяется лишь одной комбинацией генетических вариантов: i 36 AG TNFRl, < 1663 GG TNFR2 и A 1-7 A С (pcor=0,005, OR=2,9g. 95% Cl 1.64-5.42) (рис. 7).

+36/Ю 7Ю'Л1

<-1663 Л/С ЧШ'1<2

А/в 1-ТАС

+1931А/Т ШИ10

с/С мср

-801 О/А ХОР

оа=2Дб 0я=2,08

011=2,12

(Ж=0,25

1 Ш1ЕР1У1АСТИЧЕСКИБ

ПРОЦЕССЫ ЭНДОМЕТРИЯ СРЕДИ

ЖЕНЩИН БЕЗ НАСЛЕДСТВЕННОЙ ОТЯГОЩЕИНОСТИ С МИОМОЙ МАТКИ И/ИЛИ АДЕНОМИОЗОМ

Рис. 6. Вклад комбинации генетических полиморфизмов в подверженность к возникновению ГПЭ у женщин без наследственной отягощешюсти с м номой магки и/или аденомиозом

| 36 АуС

ТЫРЮ 011=2,98

+ ¡663 А/О ТЫРЮ

Л/С 1-ТАС

ГИПЕРПЛАСТИЧЕСКИЕ

ПРОЦЕССЫ ЭНДОМЕТРИЯ СРЕДИ

ЖЕНЩИН БЕЗ НАСЛЕДСТВЕННОЙ О'ГЯГОЩЕННОСТИ, БЕЗ МИОМЫ МАТКИ И АДЕНОМИОЗА

Рис. 7. Связи сочетаний полиморфных локусов цитокинов ; формированием ГПЭ у женщин без наследственной отягощенное™, без миомы магки и адеиомиоза

Выводы

1. Полиморфизмы генов шггокинов - фактора некроза опухоли а (-308 G/A TNFa), лимфотоксина а (+252 A/G Lía), рецептора фактора некроза опухоли 1 типа (+36 A'G TNFR1), рецептора фактора некроза опухоли 2 типа (+1663G/A TNFR2), интерферон индуцпбельного а-хемоатграктанта Т-клеток (A'G I-TAC (rs4512021)\ макрофагалы.ого воспалительного белка-1 (+193IA/T MlPlß). хемоаттрактанта моноцитов-! (C/G MCP] (rs2857657)), фзгсгора-!, продуцируемого стромальными клетками (-801G/A SDF1) ассоциированы с развитием гиперпластических процессов эндометрия у населстга Центрального Черноземья России.

2. Молекулярно-генетнческим маркером повышенного риска возникновения гиперпластических процессов эндометрия является генетический вариант +36 АС, TNFR1 (OR=I,87), а протективным фактором формирования ГПЭ служит генотип +36 АА TNFRI (OR=0,58). Сочетания генетического варианта t 36 AG TNFR1 с аллелями А 1-ТАС н С МСР1 (OR=l,98); С MCP 1 (OR=l,94); +1931Л MlPlß (OR=l,9l); A l-TAC „ -801G SDF1 (OR=l,91) ассоциированы с развитием птерпластических процессов эндометрия.

3. Факторами риска развития гиперплазии эндометрия являются аллели -ЗОЯ A TNFa (OR=2,07), +1663 A TNFR2 (OR-1,63). Сочетания генетических вариантов локусоп -ЗОЯ G/A TNFa, у252 A'G Lia,* 36 А/С, TNFRI, +1663A/G TNFR2, +1931 А'Т MlPlß, C/G МСР1 (rs2857657), -801 G/A SDF1 ассоциированы с развитием гиперплазии эндометрия, а комбинации генетических полиморфизмов +252 A 'G Lia, +36 А/С, TNFR1, -801 G/A SDF1 связаны с формированием полипов эндометрия.

4. Генотипы +36 АА TNFRI (OR=0,52) и +36 AG TNFRI (OR-2,10) маркируют развитие пгперпластнческих процессов эндометрия без аденомиоза. Комбинации генетических вариантов +36 АС, TNFRI, А 1-ТАС +1931А MlPlß и С MCP! (OR=2,68); +36 AG TNFRI, А 1-ТАС и' С MCI'} (OR=2,57); +36 AG TNFRI. А I-TAC и +1931A MlPlß (OR=2,5t); +36 AG TNFRI, А I-TAC и -801G SDF1 (OR=2,47) ассоциированы с развитием птерпластических процессов эндометрия без миомы маткн и аденомиоза.

5. Комбинация полиморфных вариантов цитокииов +36 G TNFRI и GG I-TAC (OR=0,30) связана с развитием ГПЭ у женщин с наследственной отягонгешгостыо. Сочетания генетических вариантов цитокинов +36A/G TNFRI, A/G I-TAC (rs4512021), + 1931АП' MlPlß, C G МСР1 (rs2857657) ассоциированы с развитием ГПЭ у индивидуумов с отягощенным семейным анамнезом без миомы матки и аденомиоза.

6. Сочетания генетических вариантов +36 A'G TNFRI +1663 A G TNFR2, A/G I-TAC (rs4512021), +1931 Л/Т MlPlß, C/G MCP! (rs2857657), -801 G'A SDFI маркируют формирование ГПЭ у женщин без наследственной отягошенноети с миомой матки н/или аденомиозом, а комбинации генетических полиморфизмов >36 A G TNFRI. i 1663 A G

TNFR2 и AG I-TAC (rs4512ü21) определяют подверженность к развитию ГПЭ у пациенток без наследственной отягощенностн, без миомы матки и/или аденомиоза.

Список опубликованных рабиг но теме диссертации

1. Горяшюва, H.A. Изучение полиморфизмов генов TN Fa и TNFRI у больных с гнперпластическими процессами эндометрия [Текст] / H.A. Горяшюва (Демакова), М.И. Чурносов // Нанобиотехнологии: проблемы и перспективы : сб. тез. всерос. школы-семинара для студентов, аспирантов и молодых ученых, Белгород, 14-17 окт. 2009 г. / БелГУ; под ред. O.E. Лебедевой. - Белгород, 2009. - С. 12-13.

2. Изучение роли генетического разнообразия фактора некроза опухоли при гиперпластических процессах магкн [Текст] / H.A. Горяинова (Демакова), О.Б. Алтухова, O.A. Конева [и др.] // Вестник РУДН. Сер. Медицина. - 2009. - № 4. - С. 542-544.

3. Горяинова, H.A. Популяционно-генетический анализ молекулярно-генстическнх маркеров гиперпластических процессов матки [Текст] / H.A. Горяшюва (Демакова), Л.А. Цалкова, И.В. Батлуцкая // Лечебное дело. - 2009. - Спец. вып. - С. 89-90. - (Современные вопросы акушерства и гинекологии: материалы III Междунар. конф. молодых ученых, Москва, 15 мая 2009 г.).

4. Генетический полиморфизм и гипериластические процессы матки [Текст] / H.A. Горяинова (Демакова), О.Б. Алтухова, O.A. Конева [и др.] II V съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров, Москва, 21-27 нюня 2009 г.: в 2 ч. / Ин-т общ. генетики им. Н.И. Вавилова РАН, Моск. гос. ун-т им. М.В. Ломоносова. - Москва, 2009. -Ч. I. - С. 405.

5. Горяинова, H.A. Гаилотическое разнообразие по локусам фактора некроза опухоли у больных гпперпластическими процессами эндометрия [Текст] / H.A. Горяшюва (Демакова), М.И. Чурносов // Медицинская генетика. - 2010. - Спец. вып. - С. 48. - (Материалы VI съезда Российского общества медицинских генетиков, Ростов-на-Дону, 14-18 мая 2010 г.).

6. Горяшюва, H.A. Изучение ассоциаций генетических полиморфизмов цитокинов семейства фактора некроза опухоли с формированием гиперпластических процессов эндометрия [Текст] / H.A. Горяинова (Демакова) // Реп роду ктология: новые технологии, проблемы, перспективы: материалы Всерос. конф. с элементами науч. шк. для молодежи, Белгород, 12-15 окт. 2010 г. / НИУ «БелГУ», Деп. здравоохранения и соц. защиты населения Белгор. обл., Белгор. обл. клинич. больница Свт. Иоасафа. — Белгород, 2010. — С. 125-129.

7. Горяинова, H.A. Распределение генетического полиморфизма 11663A G рецептора фактора некроза опухоли второго типа (TNFR2) среди

пациенток с гиперпластическимн процессами эндометрия [Текст] / H.A. Горяинова (Демакопа) // Медицинский академический журнал. -

2010. — Т. 10, № 5. — С. 120.

8. Горяинова, H.A. Изучение роли генетического полиморфизма гена -308G/A TNFa в развитии птерпластических процессов эндометрия в сочеташш с миомой матки [Текст] / H.A. Горяинова (Демакова) // Вестник РГМУ. - 2011. - Спец. вып. № 1. - С. 25-26. - (Материалы VI Мсждунар. (XV всерос.) Пироговской науч. мед. конф. студентов и молодых ученых, Москва, 24 марта 2011 г. / РАМН, РГМУ им. H.H. Пирогова ; отв. за вып. Р. С. Ягубян).

9. Горяинова, H.A. Гены-кандидаты хемокииов и гнперпластические процессы эндометрия [Текст] / H.A. Горяинова (Демакова) // Медико-биологические аспекты мультифакториалытой патологии: II всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием, Курск, 17-19 мая 2011 г. : сб. материалов конф. / Курск, гос. мед. ун-т, Адм. Курск, обл., Рос. акад. естеств. наук [и др.]; отв. ред. В.П. Иванов. — Курск,

2011.-С.48.

10. Горяинова, H.A. Результаты геиотипироваппя -403 G01 RANTfiS у больных птерпластическнми процессами эндометрия [Текст] / H.A. Горяинова (Демакова) // Вестник РГМУ. — 2011. - Спец. вып. № 2. -С. 174. — (Современные вопросы акушерства, гинекологии и перинатолопш : материалы Междунар. конф. молодых ученых, Москва, 20 мая 2011 г. / РГМУ им. Н. И. Пирогова).

11. Горяинова, H.A. Материалы о распределении генотипов C/G MCP (rs 2857657) при гиперпластических процессах эндометрия [Текст] / H.A. Горяинова (Демакова) // Фундаментальная наука и клиническая медицина — человек и его здоровье: тез. XIV Всерос. медико-биол. конф. молодых исследователей (с междунар. участием), Санкт-Петербург, 16 апр. 2011 г. / СПбГУ, Рос. физнол. о-во им. И.П. Павлова, Междунар. о-во патофизиологов [и др.] ; гл. ред. П. К. Яблонский. — Санкт-Петербург, 2011. — С. 70-71. — (Фундаментальная наука и клиническая медицина; T. XIV).

12. Демакова, H.A. Особенности генетического полиморфизма G А I-TAC среди пациенток с гиперпластическими процессами эндометрия в сочетании с миомой матки [Текст] / H.A. Демакова, О.Б. Алтухова // Геронтологический журнал им. В.Ф. Купревнча. - 2012. - Т. 3, № 1-2. -Белгород, 2012. — С. 6-7. — (Геронтологнческие чтения-2012 : материалы 5-ой юбил. Междунар. науч.-практ. конф., Белгород, 6-10 февр. 2012 г. / НИУ «БелГУ», Геронтол. о-во).

13. Демакова, H.A. О генетическом полиморфизме хемокнна -403 G/A JUNTES у жешннн с гиперпластическими процессами эндометрия, сочетающихся с генитальным эндометриозом [Текст] / H.A. Демакова, О.Б. Алтухова. B.C. Орлова // Вестник РГМУ. - 2012. -

Спец. вып. № I. - С. 45-46. - (Материалы VII Между нар. (XVI Всерос.) Пироговской науч. мед. конф. студентов и молодых ученых, Москва, 15 марта 2012 г.).

14. Демакова, H.A. Некоторые результаты молекулярно-генетнческого исследования больных с гипернластнческнми процессами эндометрия в зависимости от их сочетания с аденомиозом [Текст] / H.A. Демакова // Вопросы теоретической и практической медицины : материалы 77-й Рос. науч. конф. студентов и молодых ученых, посвящ. 80-летию БГМУ : в 2 т. / Башкир, гос. мед. ун-т, Рос. союз молодых ученых ; редкол.: В.Н. Павлов [и др.]. - Уфа, 2012. - Т. 1. - С. 204-205.

15. Goryainova, N. The study of the role of genetic polymorphisms of cytokines in the hyperplastic uterogenic processes formation [Text] / N. Goryainova (Demakova), O. Altuhova, O. Koneva [et al.] H Anatomy : intern, journal of experimental and clinical anatomy. — 2012. — Vol. 6, suppl. — P. S54. - (4th International Symposium of Clinical and Applied Anatomy (1SCAA), 28 Junc-1 July 2012, Ankara, Turkey).

16. Чурносов, M.И. Генетический анализ гиперпластических процессов матки [Текст] / М.И. Чурносов, H.A. Демакова, О.Б. Алтухова // Таврический медико-биологический вестник. — 2012. — Т. 15, № 3, ч. 2. — С. 394-395. - (MaiepiajiH VI конгр. натофЫолопв Украши, Micxop, Крим, 3-5 жовтня 2012 р.).

17. Демакова, 1 I.A. Прогностическая значимость генного полиморфизма -80IG/A SDFI в развитии гиперпластических процессов эндометрия [Текст] / H.A. Демакова // Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине : Ш между нар. науч,-практ. конф., Казань, 22-24 нояб. 2012 г. : сб. тез. / МГУ им. М.В. Ломоносова, ФМБА России, Казаи. (Приволж.) федер. ун-т [и др.]. -Казань, 2012. - С. 286-287.

18. Распространенность генетических вариантов хемокинов у больных гиперпластнческнми процессами эндометрия в сочетании с миомой матки [Текст] / H.A. Демакова, О.Б. Алтухова, Н.М. Агарков [и др.] // Известия Юго-Западного государственного университета. Сер. Управление, вычислительная техника, информатика. Медицинское приборостроение. -2012. 2, ч. 3. - С. 246-249.

19. Демакова, H.A. Исследование взаимосвязи наследственной отягощенностн и полиморфизма фактора некроза опухоли альфа с гиперпластическимн процессами эндометрия [Текст] / H.A. Демакова // Вестник РГМУ. - 2013. - Спец. вып. № 1. - С. 10-11. - (Материалы VIII междунар. (XVII всерос.) Пироговской науч. мед. конф. студентов и молодых ученых, Москва, 21 марта 2013 г.).

20. Демакова, H.A. Генетические детерминанты гиперпластических процессов эндометрия [Текст] / H.A. Демакова, E.H. Крикун // Вестник РГМУ. - 2013. - Снец. вып. № 2. - С. 168-169. - (Современные вопросы акушерства, гинекологии и нсринатологин : материалы VI Междунар. конф. молодых ученых, Москва, 17 мая 2013 г.).

21. Search for molecular-genetic markers of risk germination hyperplastic processes in endometry combined with hysteromyoma [Text] / N. Demakova, O. Altuhova, M. Chumosov [et al.] // European Joint congress of clinical anatomy 2013 : XII Congress of the European Association of Clinical Anatomy (EACA) with the British Association of Clinical Anatomy (BACA) and the Anatomical Society (SAP), Lisbon, 26-29 June 2013 / Faculty of Medicine of the Lisbon University. — Lisbon, 2013. - P. 160.

22. Демакова, H.A. Оценка роли ранее проведенных механических воздействий с формированием гиперпластических процессов эндометрия [Текст] / Н.А. Демакова // Здоровье женпшны - здоровье нации : материалы VI межрегион, науч.-практ. конф. с междунар. участием для врачей акушеров-гинекологов, Белгород, 21-22 марта 2013 г. / НИУ «БелГУ», Деп. здравоохранения и соц. зашиты населения Белгор. обл., Белгор. обл. клин, больница Свт. Иоасафа. — Белгород, 2013. - С. 47.

23. Демакова, Н.А. Генетические подходы к изучению формирования гиперпластических процессов эндометрия среди женщин разных возрастных групп [Текст] / Н.А. Демакова // Актуальные вопросы акушерства и гинекологии : сб. науч. тр. конф. с междунар. участием, Харьков, 4 окг. 2013 г. / Харьков, нац. мед. ун-т (Украина), НИУ «БелГУ», Ассоц. акушеров-гинекологов. — Харьков. 2013. — С. 63-67.

24. Демакова, Н.А. Вовлеченность генетических полиморфизмов цитокинов в подверженности к развитию гиперпластических процессов эндометрия [Электронный ресурс] / Н.А. Демакова // Медицина и образование в Сибири : сетевое науч. изд. / Нопосиб. гос. мед. ун-т. -Новосибирск, 2013. - № 6. - Режим доступа: http://ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php7id-l 161.

25. Молекулярно-генетнческие механизмы развития гиперпластических процессов эндометрия [Текст] / Н.А. Демакова, О.Б. Алтухова, С.П. Пахомов [и др.] // Научные ведомости БелГУ. Сер. Медицина. Фармация. - 2014. — № 4 (175), вып. 25. - С. 177-182.

Патент ira изобретение РФ

1. Чурносов М.И., Конева О.А., Рудых Н.А., Горяннопа Н.Л. (Демакова Н.А.). Способ прогнозирования риска развития гиперплазии эндометрия у жешшш с гешггальныч зндометриозом// патент № 2468367 от 27.11.2012.

Подписана в печать 07 07.2014. Формат Ы) -84/16. Гарншура Times New Roman. Усл. и. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 191. Орш инал-макет лодклшисм н тиражирован и ИД «Белгород» НИУ «БелГУ» 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85