Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека

Ломтева, Светлана Витальевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека
ВАК РФ 03.03.05, Биология развития, эмбриология

Автореферат диссертации по теме "Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека"

604609039

На правах рукописи

ЛОМТЕВА Светлана Витальевна

Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека

03.03.05 - биология развития, эмбриология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 3 СЕН 2010

Ставрополь - 2010

004609089

Работа выполнена в

Научно-исследовательском институте биологии федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Южный федеральный университет»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Шкураг Татьяна Павловна.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Губарева Любовь Ивановна;

доктор биологических наук Криворучко Александр Юрьевич.

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Ростовский государственный

медицинский университет» Рослдрава РФ.

Защита диссертации состоится оСС7 иСА'/^ __2010 г.

в /У__часов на заседании диссертационного совета ДМ '212.256.09 при

Ставропольском государственном университете по адресу: 355009, г. Ставрополь, ул. Пушкина, д. 1, корп. 2, комн. 506.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ставропольского государственного университета.

Автореферат разослан ^^ ^ _2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета (У^Х/'^ Ржепаковский И.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Впервые аллантоин был найден в эмбриональных тканях птиц, отсюда и название - аллантоин (от «аллантоис» - одна из зародышевых оболочек). Аллантоин - C4H603N4 (диуреид глиоксиловой кислоты), один из продуктов обмена веществ, является низкомолекулярным гетероциклическим соединением. У большинства млекопитающих в клетках печени содержится уратоксидаза, которая катализирует окисление мочевой кислоты до ал-лантоина. В начале прошлого столетия, Виечовский (Wiechowski W., 1909) показал, что в отличие от других млекопитающих, человек и обезьяны выделяют не аллантоин, а мочевую кислоту как конечный продукт пуринового обмена. Сегодня известно, что восемь независимых мутаций гена уратоксидазы (Uox) отличают человека и гоминид (горилла, шимпанзе, орангутан и гиббон) от обезьян Старого Света (макаки, павианы, мандрилы), результатом этих мутаций явилась инактивация гена уриказы (Oda М. е.а., 2002). Вследствие этих Uox-мутаций конечным продуктом деградации пуринов в организме приматов является не аллантоин, а мочевая кислота, уровень которой в сыворотке крови человека более чем в 50 раз выше по сравнению с другими млекопитающими (Friedman T.B. е.а., 1985).

Аллантоин был обнаружен в небольших количествах в амниотической жидкости человека (Uyeno D., 1917). Однако эти данные противоречили результатам авторитетного Виечовского не нашедшего аллантоин ни в моче новорожденных, ни в амниотической жидкости (Wiechowski W., 1910). Об аллантоине забыли практически на сто лет. Появление новых методов детекции аллантоина подняли из истории биохимии «забытую молекулу» и повышенные концентрации аллантоина у человека были обнаружены при различных состояниях, сопровождающихся развитием окислительного стресса - при физических нагрузках (Guskov Е.Р. е.а., 1990; Mikami Т. е.а., 2000; Rasasen L.A. е.а., 1993), при ревматоидном артрите (Yardim-Akaydin S. е.а., 2004), инфаркте миокарда (Kock R. е.а., 1994), синдроме Дауна (Zitnanova I. е.а., 2004). Взрыв исследований по окислительному стрессу в начале 90-х годов показал, что существует не только ферментативный способ образования аллантоина, но и что аллантоин может образовываться в результате атаки молекулы мочевой кислоты свободными радикалами кислорода (Andrews Р., 1992; Lagendijk J. е.а., 1995; Marklund N. е.а2000; Ma S.W. е.а., 2004; Gruber J. е.а., 2009). Большой вклад в изучение ан-тиоксидантных и антимутагенных свойств аллантоина, исследование его как витаминоподобного регулятора многих биологических процессов у животных и растений, контролирующих клеточную пролиферацию, внес профессор Е.П. Гуськов (Гуськов Е.П. и др., 2001, 2002; Гуськов Е.П. и др., 2004) за что автор выражает ему особую благодарность и посвящает свою работу его светлой памяти.

Известно, что аллантоин обеспечивает жизнеспособность развивающегося эмбриона млекопитающих, и многие нарушения эмбриогенеза и патологические беременности у животных связаны с недостатком аллантоина (Wu X. е.а., 1994). С другой стороны эмбриональные и плацентарные клетки чувствительны

к окислительному стрессу (Burton G. J. е.а., 2003). Поэтому для исследования роли аллантоина в процессе репродукции человека мы постулировали два возможных механизма образования его во время эмбриогенеза - за счет атаки мочевой кислоты сводными радикалами кислорода, и исходя из предположения, что некоторые метаболические пути, утраченные организмом человека в процессе эволюции, могут рекапитулировать в эмбриональных тканях.

Цель данной работы - изучить роль аллантоина в эмбриональном и феталь-ном периоде развития человека, исследовать возможность определения аллантоина в сыворотке крови матери, как прогностического маркера, для ранней диагностики гипоксии плода и оценки особенностей течения беременности.

Задачи исследования:

1. Исследовать содержание аллантоина в фолликулярной жидкости и в ворсинках хориона эмбриона человека.

2. Изучить динамику содержания аллантоина и мочевой кислоты в сыворотке крови матери в течение беременности.

3. Определить интенсивность свободно-радикальных процессов в крови матери на разных неделях гестации и сравнить ее с содержанием аллантоина и мочевой кислоты.

4. При гипоксии плода исследовать в сыворотке крови матери содержание аллантоина, мочевой кислоты, хориогонического гонадотроиина, альфафето-протеина и неконъюгированного эстриола.

5. Изучить возможность использования аллантоина в качестве прогностического маркера для оценки функционального состояния системы мать-плацента-плод.

Научная новизна. В работе впервые проведены многоплановые исследования с целью изучения роли алантоина в процессе репродукции человека. Впервые показано накопление аллантоина в трофобласте (на 7-8 неделе гестации плода).

Впервые исследовано содержание аллантоина в сыворотке крови матери на разных неделях беременности и впервые показано, что уровень аллантоина достоверно повышен на протяжении всей беременности, при этом динамика накопления аллантоина претерпевает изменения. Максимальный пик концентрации аллантоина в крови беременных наблюдается в первом м триместре беременности (на 6-7 неделях развития плода).

Показано, что отношение аллантоин/мочевая кислота (А/МК) в сыворотке крови матери может отражать интенсивность свободно- радикальных процессов плода, и являться биомаркером окислительного стресса во время беременности. Впервые показано, что по содержанию аллантоина в сыворотке крови матери можно прогностировать особенности течения беременности во втором и третьем триместре.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Содержание аллантоина (мкмоль/л) в сыворотке крови матери достоверно возрастает на всех сроках беременности.

2. Отношение аллантоин/мочевая кислота может служить информативным биомаркером в оценке гипоксии плода.

3. Аллантоин во время беременности выполняет роль антиоксиданта, защищая плод от изменений интенсивности свободно-радикального окисления различных биомолекул в процессе развития.

4. Содержание аллантоина в сыворотке крови при осложненном течении беременности повышается. Повышение аллантоина стабилизирует пролифера-тивный фенотип трофобласта и свидетельствует о важной роли аллантоина, направленной на сохранение плода.

Теоретическое и практическое значение работы. В теоретическом плане работа раскрывает новую роль аллантоина в процессе эмбриогенеза человека. Показано, что увеличение аллантоина в течение беременности происходит за счет возрастания уровня свободно-радикальных процессов и окисления ими мочевой кислоты в аллантоин. Данные, представленные в работе, позволяют, как количественно, так и качественно, оценить значение аллантоина как прогностического маркера в оценке развития плода. Выявлена возможность оценки гипоксии плода по количественному отношению уровня аллантоина к мочевой кислоте. Увеличение концентрации аллантоина в питательной среде при культивировании ворсинок хориона in vitro подтверждают гипотезу о том, что некоторые метаболические пути, утраченные организмом человека в процессе эволюции, могут рекапитулировать в эмбриональных тканях. Полученные результаты расширяют представления о биохимических процессах в процессе эмбрионального развития человека и открывают новые перспективы их практического применения в пренатальной диагностике плода.

Полученные в работе новые экспериментальные данные используются при чтении лекций в спецкурсах «Эмбриология человека», «Медико-генетическое консультирование», «Основы патобиохимии», «Генетика и биохимия окислительного стресса» на биолого-почвенном факультете ЮФУ.

Работа выполнена в рамках научной тематики НИИ биологии Южного федерального университета «Исследование молекулярных механизмов биологических эффектов аллантоина» по программе Приоритетные направления развития науки, технологий и техники в Российской Федерации на период 2007-2009 гг., а также в рамках грантов ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России 2009-2012» по теме «Создание и апробация нового способа FIAV для быстрой идентификации аллельных вариантов генов», госконтракт № 02.740.11.5015 и «Разработка технологии мониторинга репродуктивной функции человека и развития плода с использованием новых геномных и постгеномных маркеров», госконтракт № 02.740.11.0501.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на научных сессиях биолого-почвенного факультета ЮФУ (2007, 2009, 2010); на заседании Ростовского отделения общества ВОГиС (2007, 2009); International Workshops and Scientific Discussion Club «New Thechnology in Integrative Medicine and Biology» (Bangkok-Pattaya, 2006); на XIV международной конференции «New Information Technologies in medicine, biology, pharmacology and ecology» (Гурзуф, 2006); на I съезде физиологов СНГ (Сочи-2005); на международной научно-практической конференции «Новая технологическая платформа биомедицинских исследований» (Ростов-на-Дону, 2007); на научно-практической конфе-

ренции «Новые технологии в экспериментальной биологии и медицине» (Ростов-на-Дону, 2007), на IY съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008), на III Международной конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины» (Ростов-на-Дону, 2009).

Публикации результатов исследования. По теме диссертационного исследования опубликовано 12 работ, в том числе четыре из них в периодических изданиях из перечня ведущих рецензируемых научных журналов, утвержденных ВАК Министерства образования и науки России и рекомендованных для публикации основных научных результатов диссертации на соискание искомой ученой степени.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 108 страницах и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования, заключения выводов, списка использованной литературы, включающего 50 отечественных и 139 зарубежных источника. Работа содержит 22 таблицы, иллюстрирована 11 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалом исследования служили образцы фолликулярной жидкости, полученные при проведениях программ экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) из фолликулов 48 женщин, и лапароскопии - 12 женщин. Ворсинки хориона были взяты у абортусов на 7-8-ой неделе беременности. Содержание ал-лантоина в сыворотке крови на разных этапах гестации было изучено на 220 беременных и 30 небеременных женщин. Эффективность пренатального скрининга была оценена на 6447 беременных женщинах, проживающих в Ростовской области и проходивших пренатальный скрининг по сывороточным маркерам крови в первом (п=981) и во втором (п=5466) триместре беременности в 2006-2008гг. Материал для исследования был получен на базе «Центра репродукции человека и ЭКО» (Ростов-на-Дону) и клинико-диагностической лаборатории «Наука» (Ростов-на-Дону).

Аллантоин определяли методом высокожидкостной хроматографии (HPLC, BioRad) на колонке 4,6 х 250 mm, с носителем нуклеофила С-18. Содержание мочевой кислоты в сыворотке крови определяли, используя набор реагентов «Ольвекс диагностикум» (Россия).

Определение интенсивности хемилюминесценции (XJI) плазмы крови в системе Н202 - люминол. Регистрировали высоту быстрой вспышки (h) и свето-сумму (Sm) хемилюминесценции в течение 500 секунд. Интенсивность пере-кисного окисления липидов определяли по уровню малонового диальдегида (МДА) (Милютина Н.П. и др., 2008). Определение активности антиоксидант-ных ферментов - супероксиддисмутазы (СОД) (Fried R., 1975) и каталазы (Ко-ролюк М.А. и др., 1988). Определение суммарной пероксидазной активности (СПА) и получение липидных экстрактов вели по Блаю и Дайеру (Милютина Н.П., и др. 2008).

Содержание белка в гомогенатах тканей, в плазме и в суспензии эритроцитов определяли методом Лоури. Количество гемоглобина определяли гемоглобин-

цианидным методом. Определение сывороточных маркеров плода - альфафе-топротеина (АФП), хорионического гонадотропина человека (ХГЧ), иеконью-гированного эстриола (НЭ) в крови беременных женщин в I и II триместрах и гормонов в фолликулярной жидкости проводили на автоматическом иммуно-ферментном анализаторе Айве! (Италия), используя тест-системы фирм «Алкор Био» (Россия) и «ОКО» (Германия).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение содержания аллантоина в фолликулярной жидкости и в ворсинках хориона эмбриона человека Фолликулярная жидкость содержит значительное количество плазматических белков, выполняющих пластические функции, а также регуляторных белков, ферментов, гормонов, биоактивных веществ и факторов роста (Ешеп М. е.а., 1998). Мы исследовали уровень гормонов и аллантоина в фолликулярной жидкости, аспирированной из преовуляторных фолликулов в момент их пункции по программе ЭКО на фоне индукции суперовуляции (1 группа) и в фолликулярной жидкости, аспирированной из фолликулов в момент диагностической лапароскопии при нормальном менструальном цикле (2 группа).

Результаты исследования гормонов в фолликулярной жидкости свидетельствуют об увеличении уровня фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), тестостерона и стероидсвязывающего глобулина (ССГ) при суперовуляции и снижении уровня эстрадиола у пациенток второй группы (табл. 1). Не обнаружено достоверных различий в содержании аллантоина в фолликулярной жидкости исследуемых групп. Содержание аллантоина в фолликулярной жидкости зафиксировано нами, как очень низкое и регистрировалось в пределах от 0,1 до 0,8 мкмоль/л, и средняя концентрация в фолликулярной жидкости составляла 0,6 мкмоль/л±0,01. Для изучения содержания аллантоина в тканях эмбриона мы исследовали ворсинки хориона на 7-8 неделе беременности. В таблице 2 представлены данные о содержании аллантоина и мочевой кислоты в ворсинках хориона (0 ч) и в культуральной среде (Хориокар-1) при выращивании ворсинок хориона (24 ч и 48 ч).

Таблица 1 - Содержание гормонов и аллантоина в фолликулярной жидкости яичников на фоне суперовуляции (ЭКО) и без нее (лапароскопия)

Гормональный и аллантоиновый профиль 1 группа ЭКО, п=48 2 группа лапароскопия, п=12 Р

Фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), МЕ/л 3,4±0,17 2,8±0,12 <0,001

Пролактин, мМЕ/л 790,7±55,82 750,3±62,17 >0,05

Прогестерон, нмоль/л 222,6±21,15 204,5±34,12 >0,05

Эстрадиол, нмоль/л 6,9±0,72 11,4±0,65 <0,01

Тестостерон, нг/мл 9,8±0,51 6,1±0,48 <0,001

Стероидсвязывающий глобулин, нмоль/л 67,8±8,16 22,5±2,47 <0,001

Аллантоин, мкмоль / л 0,6 ±0,01 0,7±0,05 >0,05

Как показали результаты наших исследований, содержание аллантоина в культуральной среде (0 ч) составляет 4,2±0,78 мкмоль/л. При культивировании ворсинок хориона восьми недельных абортусов уже через 24 ч наблюдается повышение концентрации аллантоина более, чем в два раза (8,92±1,9 мкмоль/л), и через 48 ч содержание аллантоина в культуральной среде продолжает увеличиваться и достигает уровня 14,6±1,51мкмоль/л.

Таблица 2 - Показатели динамики концентраций аллантоина и мочевой кислоты в культуральной среде (Хориокар-1) при выращивании ворсинок хориона 8-ми недельных абортусов

Время культивирования (ч) Контроль (содержание в среде Хориокар-1) 24 (п=14) 48 (п=14)

Аллантоин, (мкмоль/л) 4,2±0,78 8,92±1,9*** 14,6±1,51***

Мочевая кислота, (мкмоль / л) 17,2±1,16 66,28±3,01*** 74,94±4,31***

Отношение аллантоин/мочевая кислота,% 24,24 13,46 19,48

Примечание: *** - статистически достоверные результаты (р < 0,001), по отношению к контролю - «0 часов».

Таким образом, отмечено увеличение содержания аллантоина на 113 и 250 процентов через 24 и 48 ч соответственно. Данное увеличение содержание аллантоина, вероятно, можно рассматривать как механизм неферментативного пути атаки мочевой кислоты свободными радикалами. Поэтому мы исследовали содержание мочевой кислоты в культуральной среде при выращивании ворсинок хориона. При культивировании ворсинок хориона уровень мочевой кислоты через 24 ч составил 66,28±3,01 мкмоль/л и через 48 ч составил 74,94±4,31 мкмоль/л, что на 285 и 336% соответственно выше контрольных значений. Если бы прирост аллантоина осуществлялся за счет неферментативного пути, логично было бы регистрировать уменьшение содержания мочевой кислоты и увеличение отношения А/МК. В наших исследованиях мы наблюдали повышение концентрации мочевой кислоты и аллантоина одновременно. Поэтому мы предположили, что такое изменение может обеспечиваться не только за счет экзогенного притока аллантоина и атаки мочевой кислоты свободными радикалами, но и, возможно, за счет работы фермента уратоксидазы в эмбриональном периоде.

Динамика уровня аллантоина и мочевой кислоты в крови беременных женщин в зависимости от срока гестации

На рисунке 1 представлены данные о содержании аллантоина в сыворотке крови беременных женщин на разных неделях развития плода.

Уровень аллантоина в норме у здоровых женщин составил 11,27±2,67 мкмоль/л. Ранее было показано, что концентрация аллантоина у здоровых людей не зависит от пола и возраста и регистрируется в пределах 8-15 мкмоль/л (Iris F.F., 1999; Yardim-Akaydin S. е.а., 2004).

Как видно из представленных результатов, уровень аллантоина в сыворотке крови беременных женщин претерпевает существенные изменения в течение

беременности. Максимальный пик концентрации аллантоина в крови беременных наблюдается на 6-7 неделе гестации и составляет 30,62±5,54 мкмоль/л, что практически в 3 раза больше по сравнению с контролем. На 10-14 неделях происходит понижение содержания аллантоина в сыворотке до 23,77±4,60 мкмоль/л. С 15 по 18 неделю наблюдается вновь повышение концентрации аллантоина, и она составляет 27,62±3,72 мкмоль/л. Возможно, это связано с его биологически активными свойствами, в частности, антиоксидантными. Начиная с 19 недели, нами отмечено достоверное снижение концентрации аллантоина в сыворотки крови на 49% по отношению к уровню аллантоина на 7 неделе беременности и на 43% по отношению к 15-18 неделям гестации. В течение последующих недель происходит повышение содержания аллантоина в сыворотке крови и его уровень достигает 22,65±3,87 мкмоль/л.

Контр. 6-7. 7-го. 11-14. 15-18. 19-22. 23-26. 27-30. 31-34. 35-38. н/б

Срок гестации, недели

Рисунок 1 - Содержание аллантоина (мкмоль/л) в сыворотке беременных женщин на разных сроках гестации

Мы предполагаем, что значительное накопление аллантоина в сыворотке беременных женщин связанно с его плодным происхождением. Вероятно, именно в этот период происходит максимальная активация уриказы, образующей ал-лантоин, который, обладая анаболическим, антиоксидантным и антимутагенным эффектами (Гуськов Е.П. и др., 2001, 2004) обеспечивает значительный рост плода, наблюдаемый во втором триместре, и осуществляет его защиту от патогенных воздействий.

Пул аллантоина в организме человека складывается из его экзогенного поступления с пищевыми продуктами и эндогенного неферментативного образования, получаемого при окислении мочевой кислоты активными кислородными метаболитами. Поэтому следующим этапом нашей работы было исследование содержания мочевой кислоты на тех же сроках гестации. Результаты представлены на рисунке 2.

Как видно из представленных результатов, уровень мочевой кислоты в норме у небеременных здоровых женщин составляет 252,21±15,23 мкмоль/л, что согласуется с данными литературы (Тоевси V., ЫЩа11 81., 2002). У беременных женщин уровень мочевой кислоты в сыворотке крови уменьшается в первом триместре на 23% с последующим повышением во втором триместре до кон-

трольного уровня, а затем в третьем триместре постепенно увеличивается и возрастает на 43% к концу беременности по сравнению с контролем.

Komp. 6-7. 7 10 U-U 15-38. 19 ¿2 21-26 27-30 31-34 35-38, н/б

Срок re стации, недели

Рисунок 2 - Содержание мочевой кислоты (мкмоль/л) в сыворотке крови беременных женщин на разных сроках гестации

Мочевая кислота, являясь активным поглотителем свободных радикалов, предотвращает дальнейшее окисление жизненно важных молекул, например, белков и жиров. На ранних стадиях беременности концентрация мочевой кислоты понижается за счет повышенного расщепления. Напротив, в конце беременности концентрация мочевой кислоты повышается за счет ускорения катаболизма. Одним из механизмов увеличения пула мочевой кислоты, может быть, «выключение» гена уриказы, сопровождающиеся уменьшением содержания ал-лантоина и соответственно увеличением мочевой кислоты. Достоверное увеличение мочевой кислоты на поздних сроках беременности, вероятно, эволюци-онно связано с тем, что в данный период происходит формирование коры головного мозга плода. Раннее была высказана гипотеза, что мочевая кислота может выступать в роли стимулятора мозговой активности. В своей статье Э. Орван указал, что наши родственники, приматы, лишены фермента уриказы, который у прочих млекопитающих расщепляет мочевую кислоту до аллантои-на. В связи с этим, мозг приматов испытывал на себе стимулирующее влияние мочевой кислоты, что и могло во многом предопределить дальнейшее появление разумных существ именно в этой ветви эволюции позвоночных (Orowan Е., 1955).

В последнее время появляется все больше данных о том, что отношение А/МК может являться биомаркером окислительного напряжения, то есть с увеличением окислительного стресса уровень аллантоина повышается из-за повышения «окислительного обмена» мочевой кислоты (Iris F.F. е.а., 1999). На рисунке 3 представлены результаты исследования динамики изменения А/МК в сыворотке крови женщин на разных сроках беременности.

Контр 6-7 7-10. 11-14 15-18. 19-22. 23-26. 27-30. 31-34 35-38. н/б

Срок гестации, недели

Рисунок 3 - Отношения количества аллантоина к мочевой кислоте (%) в сыворотке беременных женщин на разных сроках гестации

Результаты исследования показывают, что у небеременных женщин уровень отношения А/МК находится в пределах 4,48±0,6%. У беременных женщин с первых дней и по 14 неделю беременности наблюдается высокий уровень отношения количества А/МК, который составляет 12,58±3,28%, что в три раза выше, чем у небеременных. Это может быть связано как с низким антиокси-дантным статусом, так и с увеличенным окислительным стрессом, из-за большой нагрузки на организм матери во время беременности. К 19 неделе наблюдается резкий спад отношения А/МК до уровня, значение которого 5,9±1,46% приближается к значению у небеременных женщин - 4,48±0,6%, но не достигает его. Начиная с 34 недели, отношение аллантоина к мочевой кислоте снова повышается до 6,49±1,26%.Проблема участия аллантоина в реакции материнского организма на развивающуюся ткань плода представляет особый интерес, одним из элементов которого является сопоставление концентраций аллантоина, А/МК и интенсивности свободно-радикальных процессов. Для определения уровня свободно-радикального окисления и соотношения про- и антиоксидант-ных систем в плазме и сыворотке крови исследовали интенсивность Н202-люминолзависимой хемилюминесценции.

Интенсивность Н202-люминолзависимой хемилюминесценции в плазме беременных женщин в зависимости от уровня гестации

В наших экспериментах был использован метод индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) в системе Н202 - люминол. Люминол относят к химическим активаторам XJI, он реагирует со свободными радикалами с образованием возбужденных молекул. Люминол, не обладая побочными цитотоксическим действием и фотоэффектами, дает при окислении высокий квантовый выход (Fritzsche R., De Weck A.L., 1988). Ввиду того, что при окислительном стрессе образуются различные активные формы кислорода, нами был выбран люминол, обладающий неспецифической реакционной способностью. Механизм Н202-индуцированной хемилюминесценции образцов тканей основан на взаимодей-

ствии Н2О2 с прооксидантными компонентами, в первую очередь, с железосодержащими компонентами, что приводит к образованию активных форм кислорода, таких как: гидроксид-радикал, синглетный кислород и супероксиданион-радикал. Это может вызвать активацию свободно-радикальных процессов (СРП), ведущих к образованию перекисных радикалов, рекомбинация которых сопровождается высвечиванием кванта света. Установлено также прямое участие синглетного кислорода в хемилюминесценции, индуцированной Н2О2. При этом амплитуда (высота) вспышки ХЛ (Н), индуцированной Н2О2, характеризует резистентность тканей к перекисному окислению. Величина ее прямо пропорциональна окисляемости тканевых липидов и концентрации металлов переменной валентности и обратно пропорциональна содержанию природных анти-оксидантов в исследуемом биосубстрате. Светосумма ХЛ (8т) отражает скорость расходования свободных радикалов липидной природы в результате их взаимодействия с антиоксидантами за 100 сек. Светосумма ХЛ обусловлена в первую очередь уровнем прооксидантов в системе, а влияние антиоксидантных компонентов носит вторичный характер. В нашем эксперименте мы изучали изменение интенсивности ХЛ по величине быстрой вспышки (Н) и светосуммы (8т ЮОсек) в плазме крови беременных и небеременных женщин. Данные представлены на рисунке 4.

Рисунок 4 - Суммарная хемилюминесценции (Sm 100 секунд, у.ед.) в плазме беременных женщин на разных сроках гестации

Полученные данные показывают, что в первом триместре интенсивность свободно-радикальных процессов (СРП) достоверно увеличена и составляет в среднем 119,5±12.71 у.ед. Во втором и третьем триместрах его уровень падает в среднем до 89,2± 8,26 и 67,4±7,69 у.ед. соответственно и достигает уровня, характерного для небеременных здоровых женщин. К 10-13 недели беременности устанавливается новый стационарный уровень обменных процессов: на фоне резкого увеличения пула аллантоина в крови активность свободно-радикальных процессов падает даже ниже контрольного уровня.

На рисунке 5 представлены результаты динамики А/МК в плазме крови беременных женщин и интенсивности СРП. Нами выявлены однонаправленные

изменения между отношением аллантоина к мочевой кислоте и интенсивностью свободно-радикальных процессов. Это отражается в резком возрастании уровня свободно-радикальных процессов и как адаптивный механизм - увеличении содержания антиоксидантов, в частности, аллантоина, в крови матери за счет свободно-радикальной деструкции мочевой кислоты. Это еще раз подчеркивает, что отношение А/МК может служить биомаркером окислительного стресса во время беременности человека. Роль свободных радикалов в процессе эмбриогенеза связанна с быстрым ростом и развитием эмбриона. Алексей Оловников считает, что в процессе эмбриогенеза в зародыше накапливается большое количество свободных радикалов, которые играют роль «распаковывающих агентов» (Оловников А.М, 1996).

23-26. 27-30. 31-34. 35-38,

Срок гестации, недели

* Суммарная хемилюминесценция Отношение аллантоин/мочевая кислота

Рисунок 5 - Динамика изменения отношения аллантоин: мочевая кислота и суммарная хемилюминесцеиция у беременных женщин на разных сроках гестации

Динамика уровня аллантоина и мочевой кислоты в крови беременных женщин при гипоксии плода

Содержание аллантоина и мочевой кислоты, а также их отношение А/МК определяли у женщин с гипоксией плода на 15-18 неделе беременности. Группа женщин с гипоксией плода (группа 1) была сформирована на основании биохимических показателей функциональной системы мать-плацента-плод, включающих интенсивность свободно-радикальных процессов (XJI, МДА, СПА, внеэритроцитарный гемоглобин - ВЭГ), уровень антиоксидантного статуса (СОД, каталаза), а также хориогонический гонадотрошш, свободный эстриол и альфафетопротеин (Бурлев В.А., 1992; Крайнова H.H. и др., 1998; Ong C.Y. е.а., 2000).

Как видно из таблицы 3, в первой группе женщин наблюдалась резкая активация начальных стадий свободно-радикального окисления по сравнению с группой 2, у которых эти показатели были в пределах физиологической нормы. Параметры хемилюминесценции в первой группе превышали норму в 3-7 раз

(индивидуальные траектории), что указывает на мощную генерацию цитоток-сических активных форм кислорода. Уровень промежуточного продукта пере-кисного окисления липидов МДА - в плазме повышался более чем на 50 процентов, а в эритроцитах на 14%. Интенсификация свободно-радикальных процессов приводит к резкому нарушению стабильности мембран эритроцитов (ВЭГ, СПА). Активация свободно-радикального окисления происходит на фоне повышенной активности СОД и каталазы, что указывает на недостаточную емкость антиоксидантной системы. Таким образом, у женщин данной группы наблюдался выраженный окислительный стресс, приводящий к гипоксии плода.

Таблица 3 - Биохимический профиль сывороточных маркеров в крови матери на 15-18 неделе беременности при гипоксии плода

Наименование Группа I (Гипоксия) Группа 2 (Контроль)

Хемилюминесценция плазмы, отн. ед 1t Н 143±4,6 Sm473±3,8 Высота (Н) 23±1,0 С вегосумма (Эт) 74,2±2,4

Малоновый диальдегид Эритроциты: нмоль/мг НЬ; Плазма: нмоль/мл Эритроциты: 3,96 ft Плазма:45,87 Эритроциты: 3,0±0,7 Плазма: 20,92±3,08

СПА, Ед/мл ff 3,55±0,34 1,58±0,26

ВЭГ, мкМ/л ff 4,30±0,23 3,5±0,42

СОД, ЕдАк/мг НЬ 2,75±0,17 3,17±0,39

Катал аза Эр -нМ Н202 мг НЬ Плазма - нМ Н202 мг НЬ U Эритроциты: 22,12 11 Плазма - 8,74 Эритроциты: 31,0±4,1 Плазма: 31,0±4,1

ХГЧ, МЕ/л U 14100±535 35971±654

АФП, мкг/мл 47,1 ±0,76 45,4±0,70

НЭ, нг/мл 2,7±0,06 2,3±0,05

Мочевая кислота, мкмоль/л U 223,7±22,74 254,3±22,74

Аллантоин, мкмоль/л ft 36,4±1,42 27,6± 3,72

А/МК х100% 1t 16,2± 0,47 10,8±0,85

Биохимические показатели интенсивности свободно-радикальных процессов и уровень гормонов плода в группе женщин с гипоксией плода имели широкий индивидуальный размах варьирования изучаемых параметров, поэтому мы применили факторный анализ по выделению главной компоненты. Результаты факторного анализа позволили нам предположить, что изменения содержания хориогонического гонадотропина и отношения аллантоина к мочевой кислоте являются наиболее значимыми при оценке гипоксии плода. На первый фактор приходилось 57,2% дисперсии, при этом индивидуальные однонаправленные изменения были зарегистрированы в содержании уровня ХГЧ и аллантоина. Далее мы рассмотрели направленность изменений содержания ХГЧ, аллантоина, мочевой кислоты и отношения содержания аллантоина к мочевой кислоте у беременных женщин с гипоксией плода на 15-18 недели беременности (табл. 4, 5,6).

Как видно из представленных результатов в группе женщин с гипоксией плода и пониженном уровне хорионического гонадотропина половина женщин (51%) имела содержание аллантоина и мочевой кислоты в пределах нормы. В остальных случаях была зарегистрирована разнонаправленная динамика изме-

нений, при этом более чем в 20% случаях уровень аллантоина был снижен, а содержание мочевой кислоты регистрировалось в пределах нормы (табл. 4-6).

Таблица 4 - Динамика изменения аллантоина (мкмоль/л) при пониженном ХГЧ (0,3-0,4 MOM) и концентрации мочевой кислоты в пределах референсных значений в сыворотке крови беременных (15-18 недель) при гипоксии плода

Количество беременных (абс/отн) 75 (51%) У ХГЧ, N-A, N-MK 9 (6%) U ХГЧ, ft—A, N-Mk 31 (21%) U ХГЧ, U—Л, N-MK

Содержание мочевой кислоты (мкмоль/л)

М±ш 254,30±22,74 263,30±16,36 253,70±26,02

Содержание аллантоина мкмоль/л

М±т 27,53±1,36 38,26±3,82 ft 17,72±2,19 11

А/МК х 100%

М±т 10,88±0,85 14,56±0,35 U 7,05±1,05 И

Таблица 5 - Динамика изменения аллантоина (мкмоль/л) при пониженном ХГЧ (0,3-0,4 МОМ) и повышенной концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови беременных (15-18 недель)

Количество бере- 6 (4%) 14 (10%)

менных (абс/отн) U ХГЧ, ft-A, ft-Мк U ХГЧ, U-A, ft-Мк

Содержание мочевой кислоты мкмоль/л

М±т 359,90±25,61 ft 364,90±19,05 ft

Содержание аллантоина (мкмоль/л)

М±т 32,46±1,34 ft 17,55±3,07 U

А/МК х 100%

М±т 9,05±1,1 4,82±0,59 U

Таблица 6 - Динамика изменения аллантоина (мкмоль/л) при пониженном ХГЧ (0,3-0,4 МОМ) и пониженной концентрации мочевой кислоты в сыворотке крови беременных (15-18 недель) с гипоксией плода

Количество бере- 7(5%) 4(3%)

менных (абс/отн) Ц ХГЧ, N-A, И-Мк- U ХГЧ, ft-A, D-Mk

Содержание мочевой кислоты мкмоль/л

М±т 180,15±8,57 U 186,50±7,89 U

Содержание аллантоина (мкмоль/л)

М±т 25,27±1,65 40,75±1,65 ft

А/МК х 100%

М±т 14,04±0,89 ft 21,87±1,50 ft

Особенности течения беременности у женщин во втором и третьем

триместре, с выявленным повышенным уровнем А/МК Для оценки эффективности аллантоина, как прогностического маркера течения беременности собрали и изучили информацию о течении и ведении беременности у 27 женщин с повышенным уровнем А/МК во втором и третьем триместре (1 группа) и у 48 женщин с уровнем А/МК в пределах референсных значений (2 группа), беременность которых закончилась родами (табл. 7).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что у женщин с повышенным уровнем А/МК во втором триместре беременности достоверно чаще реги-

стрировался гестоз второй половины беременности, а в третьем триместре фе-топлацентарная недостаточность (ФПН). Одной из причин такого повышения аллантоина у женщин с гестозом и ФПН может быть то, что повышенный уровень аллантоина стабилизирует пролифиративный фенотип трофобласта, препятствуя его дифференцировки в инвазивный фенотип. Это в свою очередь ведет к недостаточной инвазии трофобласта спиральной артерии, нарушению их гестационной перестройки и развитию гестоза и ФПН.

Таблица 7 - Осложнения течения беременности у женщин с повышенным уровнем А/Мк

Патология беременности | 1 группа 2 группа

Второй триместр

Угрожающее прерывание беременности 1 (3,7%) 2 (4,1%)

Гестоз второй половины беременности 10 (38,3%) 7 (14,5%)

Анемия беременных 4 (14,8%) 6 (12,5%)

Третий триместр

Угрожающие преждевременные роды 1 (3,7%) 3 (6,25)

Фетоплацентарная недостаточность 6 (22,9%) 4 (8,3%)

Анемия беременных 1 (3,7%) 5 (10,2%)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Наши исследования показали, что уровень аллантоина в сыворотке крови беременных женщин, будучи втрое выше этого показателя у небеременных женщин, претерпевает существенные изменения в течение всей беременности. Наиболее существенное повышение содержания аллантоина отмечается на 7 неделе беременности. Во втором триместре беременности отмечен также повышенный уровень. В третьем триместре концентрация аллантоина значительно снижается, приближаясь к уровню у небеременных женщин. Повышение аллантоина во время беременности отмечено у других млекопитающих, в частности было показано, что уровень аллантоина повышается в амниотической жидкости крыс на 21 день беременности и сохраняется повышенным в сыворотке крови во время вскармливания потомков, в течение 20 дней после родов (Morgan E.H., Hanson А., 1964), У крыс и других млекопитающих, за исключением приматов, имеется фермент - уриказа, в результате деятельности которого образуется аллантоин. Увеличение аллантоина во время беременности у грызунов можно объяснить увеличением экспрессии гена уриказы. Однозначно ответить на вопрос о происхождении аллантоина в сыворотке крови беременных женщин в настоящее время не представляется возможным, однако мы предполагаем, что значительное накопление аллантоина в сыворотке беременных женщин связанно с его плодным происхождением. Вероятно, именно в этот период происходит максимальная активация уриказы, образующей аллантоин, который,

обладая анаболическим, антиоксидантным и антимутагенным эффектами (Гуськов Е.П. и др., 2004), обеспечивает значительный рост плода, наблюдаемый во втором триместре, и осуществляет его защиту от патогенных воздействий. Полученные нами результаты о содержании аллантоина в ворсинках хориона и сыворотке крови матери ставят несколько вопросов, главные из которых - происхождение аллантоина и его физиологическое значение при беременности. Факт достоверного повышения уровня аллантоина при выращивании ворсинок хориона и на 7-8 неделе гестации подтверждает наше предположение об индукции синтеза аллантоина на ранних сроках беременности. С другой стороны, 6-8 недель - это период первой волны инвазии цитотрофобласта в эндометрий, сопровождающийся бурными пролиферативными процессами. И, вероятно, аллантоин определенным образом причастен к этим явлениям.

Ранее было показано, что патологические процессы, лежащие в основе плацентарной недостаточности, сопровождаются развитием окислительного стресса в тканях плаценты (Бурлев В.А., 1992; Кения М.В. и др., 1993; Колесникова Л.И., 1993; Wang Y., Walsh S.W., 1996; Multi-Turkoglu U. e.a., 1998; Poranen A.K. e.a., 1998; Walker J.J., 1998). Кроме того, выявлено накопление мочевой кислоты в тканях плаценты при развитии плацентарной недостаточности (Саллум А. и др., 2004). Увеличение содержания аллантоина и отношения А/МК у женщин с гипоксией плода и развитием фетоплацентарной недостаточности возможно связано с изменением окислительного статуса на более ранних этапах беременности, когда происходит первая (6-8 неделя) и вторая волна (16-18 неделя) инвазии.

Возможно, повышение аллантоина, как антиоксиданта, приводит к блокированию кислород-зависимой дифференцировки трофобласта в синцититрофоб-ласт и его инвазии. Повышение аллантоина стабилизирует пролифиративный фенотип трофобласта, препятствуя его дифференцировки в инвазивный фенотип. Это, в свою очередь, ведет к недостаточной инвазии трофобласта спиральной артерии, нарушению их гестационной перестройки и развитию фетоплацентарной недостаточности и гестозов.

Обнаруженное нами повышение содержания аллантоина в крови и тканях трофобласта беременных позволяет выдвинуть ряд гипотез, требующих дальнейшего подтверждения временной экспрессии Uox-гена в ткани плаценты и печени эмбрионов. Не исключено существование механизмов накопления аллантоина в организме беременных за счет регуляции его почечной реабсорбции и секреции. Возможно наличие пути синтеза аллантоина у плода из мочевины и глиоксилата (обращение реакции гидролиза аллантоиновой кислоты).

Несмотря на то, что организм человека не способен синтезировать аллантоин, резкое увеличение его концентрации в плаценте (трофобласте) свидетельствует о его протекторной функции у развивающегося плода. В процессе эмбриогенеза из-за внешних и внутренних факторов, изменяющих метаболизм материнского организма, могут возникать состояния гипероксической гипоксии у плода, повышающие уровень свободно-радикальных процессов. В этой ситуации трофобласт, насыщенный аллантоином, играет роль антиоксидантного и антимутагенного фильтра, защищающего внутреннюю среду плода.

выводы

1. Содержание аллантоина в фолликулярной жидкости регистрируется в пределах от 0,1 до 0,9 мкмоль/л, и его средняя концентрация в норме составляет

0.7.0,05 моль/л. При культивировании ворсинок хориона восьминедельных абортусов наблюдается повышение концентрации аллантоина в культуральной среде на 113% и 250% через 24 и 48 ч соответственно.

2. Содержание аллантоина в сыворотке крови матери достоверно увеличено на всех этапах гестации, при этом в первом триместре на 6-8 неделе он практически втрое превышал контрольные значения и его уровень составлял 30,62± 5,54 мкмоль/л, к концу беременности его уровень также достоверно отличался от контроля, на 38 неделе он составлял 22,96±3,68 мкмоль/л и превышал контроль вдвое.Содержание мочевой кислоты в сыворотке крови матери возрастает на протяжении беременности, достигая максимальных значений к концу третьего триместра.

3. В первом триместре интенсивность свободно-радикальных процессов, оцениваемая по уровню индуцированной хемилюминесценции достоверно увеличивается и Sm ХЛ составляет в среднем 119,5±12,71 у.ед. Во втором и третьем триместрах светосумма XJ1 медленно снижается, достигая практически контрольных значений к концу беременности. Интегральный показатель отношения содержания аллантоина к мочевой кислоте и светосумма ХЛ имеют однонаправленные изменения в процессе эмбрионального развития человека.

4. Снижение хориогонического гонадотропина до 0,3-0,4 MOM и увеличение отношения аллантоин/мочевая кислота выше 16% во втором триместре беременности достоверно прогнозируют развитие гипоксии плода.

5. Доказано увеличение аллантоина у женщин с гестозами второго триместра и с фетоплацентарной недостаточностью в третьем триместре.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Дронова, М.А. Ретроспективный клинико-генеалогический анализ привычного невынашивания беременности / С.С. Амелина. Г.Г. Гуревич, C.B. Лом-тева, Е.К. Тимолянова // Перинатология и неонатология: Сборник научно-практических работ. - М.:, МОНИИАГ,- 1989. - С. 8-12.

2. Гуськов, Е.П. Аллантоин, окислительный стресс и беременность / Е.П. Гуськов, В.Н. Прокофьев, C.B. Ломтева // Научные труды I съезда физиологов СНГ. - Сочи, Дагомыс, 2005. - Т. 2. - С. 135.

3. Кузьмин, A.B. Способ прогнозирования исходов программы ЭКО И ПЭ / A.B. Кузьмин, В.И. Орлов, К.Ю. Сагамонова, Е.А. Ефанова, E.H. Ермоленко, C.B. Ломтева // Эмбрион человека как клинический и лабораторный объект: Международная конференция / Приложение к журналу «Вестник Уральской медицинской академической науки». - Екатеринбург, 2005. -С. 46.

4. Шестопалов, A.B. Биологические функции аллантоина / A.B. Шестопалов, Т.П. Шкурат, З.И. Микашинович, И.О. Крыжановская, М.А. Богачева, C.B.

Ломтева, В.Н. Прокофьев, Е.П. Гуськов // Известия РАН. Серия биологическая.-2006,-№ 5.-С. 541-545.

5. Шестопалов, А.В. Аллантоин - биологические свойства и функции / А.В. Шестопалов, Т.П. Шкурат, З.И. Микашинович, И.О. Крыжановская, М.А. Богачева, С.В. Ломтева, В.Н. Прокофьев, Е.П. Гуськов // Успехи современной биологии. - 2006. - Т. 126. - № 6. - С. 586-591.

6. Прокофьев, В.Н. Исследование аллантоина при опухолевых процессах / В.Н. Прокофьев, И.О. Покудина, Е.В. Чистякова, А.А. Родионов, С.В. Ломтева, Е.Г1. Гуськов // Новая технологическая платформа биомедицинских исследований: Материалы научно-практической конференции. - Ростов-на-Дону, 2006. - С. 20-21.

7. Прокофьев, В.Н. Аллантоин, мочевая кислота и канцерогенез / В.Н. Прокофьев. И.О. Покудина, Е.В. Чистякова, А.А. Родионов, С.В. Ломтева, Е.П. Гуськов // New technology in integrative medicine and biology». «Stress and extreme conditions: Proceedings of international scientific interdisciplinary workshop. -Thailand (Bangkok-Pattaya), 2006. - C. 62.

8. Ломтева, С.В. Роль аллантоина при физиологической и патологической беременности / С.В. Ломтева, В.Н. Прокофьев // Естествознание и гуманизм: современный мир, природа и человек: Межвузовский сборник научных трудов. - Томск, 2007. - Т. 4. - № 3. - С. 14-15.

9. Ломтева, С.В. Аллантоин как биомаркер при физиологической и патологической беременности / С.В. Ломтева, В.Н. Прокофьев // Новые технологии в экспериментальной биологии и медицине: Материалы научно-практической конференции. - Ростов-на-Дону, 2007. - С. 46-47.

10. Ломтева, С.В. Аллантоин и нормальная беременность / С.В. Ломтева, Л.В. Гутникова, В.Н. Прокофьев, Е.П. Гуськов // Материалы IV съезда Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. - Новосибирск, 2008. - С. 402.

11. Александрова, А.А. Роль аллантоина в процессах репродукции / А.А. Александрова, Т.П. Шкурат, С.В. Ломтева, К.В. Азарин, В.А. Чистяков // Валео-логия. - 2008. - № 4. - С. 32-36.

12. Гутникова, Л.В. Исследование эффективности пренатального скрининга в первом триместре беременности / Л.В. Гутникова, А.А. Александрова, С.В. Ломтева, Е.А. Данько, Е.В. Машкина, Т.П. Шкурат // Валеология. - 2009. -№ 3. - С. 28-34.

Подписано в печать 118.08.2010 г. Формат 60x84 Vie-Уел печ. л. 1,0, Уч.-изд. лист 1.0. Тираж 100 экз. Заказ № 1239. Типография Южного федерального университета 344090, г. Ростов-на-Дону, пр. Стачки, 200/1, теп (863) 247-80-51.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ломтева, Светлана Витальевна

ПЕРЕЧЕНЬ ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ И ТЕРМИНОВ ■.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Эволюционная и физиологическая роль ллллнтоинл в онто- и филогенезе.

1.2 Кислород и его активные формы в развитии плода.

1.3 Механизмы защиты от окислительного стресса и концепция протекторного катаболизма.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Объекты исследований.

2.2 Методы исследований.

2.2.1 Определение аллантоина и мочевой кислоты.

2.2.2 Хемилюминесцентный (ХЛ) анализ.

2.2.3 Определение активности антиоксидантного статуса.

2.2.4 Определение гормонов твердофазным иммуноферментным методом.

2.3 Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ:.

3.1 Изучение содержания аллантоина в фолликулярной жидкости и в ворсинках хориона эмбриона человека.

3.1.1 Содержание гормонов и аллантоина в фолликулярной э/сидкости в норме и па фоне индукции суперовуляции.

3.1.2 Изучение содержания аллантоина в питательной среде в зависимости от времени культивирования ворсинок хориона.

3.2 Динамика уровня аллантоина и мочевой кислоты в крови беременных женщин в зависимости от срока гестации.

3.2.1 Изучение динамики содержания аллантоина в сыворотке крови беременных.

3.2.2 Изучение динамики содержания мочевой кислоты в сыворотке крови беременных

3.3 ИнтенсивностьН202-Л10Минолзависимойхемишоми11есценциив плазме беременных женщин в зависимости от уровня гестации.

3.4 Динамика уровня аллантоина и мочевой кислоты в крови беременных же1 пцин при гипоксии плода.

3.4.1. Биохимический профиль сывороточных маркеров в крови матери при гипоксии плода.

3.4.2 Динамика изменения аллантоина в сыворотке крови у матерей с пониженным содержанием хорионического гонадотропина.

3.5. оце1ika существующего неинвазивного пре11аталыюго скринига состояния плода.

3.5.1 Оценка ложноположительных результатов у беременных с повышенным содержанием ХГЧ.

3.5.2 Оценка ложиоположительных результатов у беременных с повышенным и пониженным содержанием РАРР-А.

3.6 Особенности течения беременности у женщин во втором и третьем триместре, с выявле11ным повышенным уровнем А/Мк.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ИСТОЧНИКОВ.

ПЕРЕЧЕНЬ

ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ И ТЕРМИНОВ

А - аллантоин

А/МК - отношение аллантоина к мочевой кислоте

АФП - альфафетопротеин

АМК - активные метаболиты кислорода

ВЭГ - внеэритроцитарный гемоглобин

ВПР - врожденные пороки развития

МСБ - маркерные сывороточные белки

МДА - малоновый диальдегид

МК - мочевая кислота

ПОЛ - перекисное окисление липидов

СОД - супероксид дисмутаза

С ПА - суммарная пероксидазная активность

СПР - свободно-радикальные процессы

ССГ - стероидсвязывающий глобулин

СРО - свободно-радикальное окисление

ХБ - хромосомные болезни

XJI - хеми люминесценция

ХГЧ - хорионический гормон человека

НЭ - неконьюгрованный эстриол

ФСГ - фоликулостимулирующий гормон

ФПН - фетаплацентарная недостаточность

ЭКО - экстракорпоральное оплодотворение

МоМ - multiples of median — кратность норме или отношение полученного при исследовании индивидуального результата к медиане референсных значений (среднему популяционному значению)

РАРР-А - Pregnancy-associated plasma protein - А (Ассоциированный с беременностью белок А) ROS - radical oxygen spicies (активные формы кислорода)

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека"

Актуальность проблемы. Впервые аллантоин был найден в эмбриональных тканях птиц, отсюда и название - аллантоин (от «аллантоис» - одна из зародышевых оболочек). Аллантоин - C4H6O3N4 (диуреид глиоксиловой кислоты), один из продуктов обмена веществ, является низкомолекулярным гетероциклическим соединением. У большинства млекопитающих в клетках печени содержится уратоксидаза, которая катализирует окисление мочевой кислоты до аллантоина. В начале прошлого столетия, Виечовский (Wiechowski W., 1909) показал, что в отличие от других млекопитающих, человек и обезьяны выделяют не аллантоин, а мочевую кислоту как конечный, продукт пуринового обмена. Сегодня известно, что восемь независимых мутаций гена уратоксидазы (Uox) отличают человека и гоминид (горилла, шимпанзе, орангутан и гиббон) от обезьян Старого Света (макаки, павианы, мандрилы), результатом этих мутаций явилась инактивация гена уриказы (Oda М. е.а., 2002). Вследствие этих Uox-мутаций конечным продуктом деградации пуринов в организме приматов является не аллантоин, а мочевая кислота, уровень которой в сыворотке крови человека более чем в 50 раз выше по сравнению с другими млекопитающими (Friedman Т.В. е.а., 1985):

Аллантоин был обнаружен в небольших количествах в амниотической жидкости человека (Uyeno D., 1917). Однако эти данные противоречили результатам авторитетного Виечовского не нашедшего аллантоин ни в моче новорожденных, ни в амниотической жидкости (Wiechowski W., 1910). Об аллантоине забыли практически на сто лет. Появление новых методов детекции аллантоина подняли из истории биохимии «забытую молекулу» и повышенные концентрации аллантоина у человека были обнаружены при различных состояниях, сопровождающихся развитием окислительного стресса - при физических нагрузках (Guskov Е.Р. е.а., 1990; Mikami Т. е.а., 2000; Rasasen L.A. е.а., 1993), при ревматоидном артрите (Yardim-Akaydin S. 4 е.а., 2004), инфаркте миокарда (Kock R. е.а., 1994), синдроме Дауна (Zitnanova I. е.а., 2004). Взрыв исследований по окислительному стрессу в начале 90-х годов показал, что существует не только ферментативный способ образования аллантоина, но и что аллантоин может образовываться в результате атаки молекулы мочевой кислоты свободными радикалами кислорода (Andrews Р., 1992; Lagendijk J. е.а., 1995; Marklund N. е.а2000; Ma S.W. е.а., 2004; Gruber J. е.а., 2009). Большой вклад в изучение антиоксидантных и антимутагенных свойств аллантоина, исследование его как витаминоподобного регулятора многих биологических процессов у животных и растений, контролирующих клеточную пролиферацию, внес профессор Е.П. Гуськов (Гуськов1 Е.П. и др., 2001, 2002; Гуськов Е.П. и др., 2004), за что автор выражает ему особую благодарность и посвящает свою работу его светлой памяти.

Известно, что * аллантоин обеспечивает жизнеспособность развивающегося эмбриона млекопитающих, и многие нарушения эмбриогенеза и патологические беременности у животных связаны с недостатком аллантоина (Wu X. е.а., 1994). С другой стороны эмбриональные и плацентарные клетки чувствительны к окислительному стрессу (Burton G. J. е.а., 2003). Поэтому для исследования роли аллантоина в процессе репродукции человека мы постулировали два возможных механизма образования его во время эмбриогенеза - за счет атаки мочевой кислоты сводными радикалами кислорода, и исходя из предположения, что некоторые метаболические пути, утраченные организмом человека в процессе эволюции, могут рекапитулировать в эмбриональных тканях.

Цель данной работы — изучить роль аллантоина в эмбриональном и фетальном периоде развития человека, исследовать возможность определения аллантоина в сыворотке крови матери, как прогностического маркера, для ранней диагностики гипоксии плода и оценки особенностей течения беременности.

Задачи исследования:

1. Исследовать содержание аллантоина в фолликулярной жидкости, и в ворсинках хориона эмбриона человека.

2. Изучить динамику содержания аллантоина и мочевой кислоты в сыворотке крови матери в течение беременности.

4. При гипоксии плода исследовать в сыворотке крови матери содержание аллантоина, мочевой кислоты, хориогонического гонадотропина, альфафетопротеина и неконъюгированного эстриола.

Показано, что отношение аллантоин/мочевая кислота (А/МК) в сыворотке крови матери может отражать интенсивность свободно-радикальных процессов плода, и являться биомаркером окислительного стресса во время беременности. Впервые показано, что по содержанию аллантоина в сыворотке крови матери можно прогностировать особенности течения беременности во втором и третьем триместре.

Основные положения, выносимые на защиту:

2. Отношение аллантоин/мочевая кислота может служить информативным биомаркером в оценке гипоксии плода.

4. Содержание аллантоина в сыворотке крови при осложненном течении беременности повышается. Повышение аллантоина стабилизирует пролиферативный фенотип трофобласта и свидетельствует о важной роли аллантоина, направленной на сохранение плода.

Теоретическое и практическое значение работы. В теоретическом плане работа раскрывает новую роль аллантоина в процессе эмбриогенеза человека. Показано, что увеличение аллантоина в течение беременности происходит за счет возрастания уровня свободно-радикальных процессов и окисления ими мочевой кислоты в аллантоин. Данные, представленные в работе, позволяют, как количественно, так и качественно, оценить значение аллантоина как прогностического маркера в оценке развития плода. Выявлена возможность оценки гипоксии плода по количественному отношению уровня аллантоина к мочевой кислоте. Увеличение концентрации аллантоина в питательной среде при культивировании ворсинок хориона т vitro подтверждают гипотезу о том, что некоторые метаболические пути, утраченные организмом человека в процессе эволюции, могут рекапитулировать в эмбриональных тканях. Полученные результаты расширяют представления о биохимических процессах в процессе эмбрионального развития человека и открывают новые перспективы их практического применения в пренатальной диагностике плода.

Работа выполнена в рамках научной тематики НИИ биологии Южного федерального университета «Исследование молекулярных механизмов биологических эффектов аллантоина» по программе Приоритетные направления развития науки, технологий и техники в Российской Федерации на период 2007-2009 гг., а,также в рамках грантов ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России 2009-2012» по теме «Создание и апробация нового способа FIAV для быстрой идентификации аллельных вариантов генов», госконтракт № 02.740.11.5015 и «Разработка технологии мониторинга репродуктивной функции человека и развития плода с использованием новых геномных и постгеномных маркеров», госконтракт № 02.740.11.0501.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на научных сессиях биолого-почвенного факультета ЮФУ (2007, 2009, 2010); на заседании Ростовского отделения общества ВОГиС (2007, 2009); International Workshops and Scientific Discussion Club «New Thecknology in Integrative Medicine and Biology» (Bangkok-Pattaya, 2006); на XIV международной конференции «New Information Technologies in medicine, biology, pharmacology and ecology» (Гурзуф, 2006); на I съезде физиологов СНГ (Сочи-2005); на международной научно-практической конференции «Новая технологическая платформа биомедицинских исследований» (Ростов-на-Дону, 2007); на научно-практической конференции «Новые технологии в экспериментальной биологии и медицине» (Ростов-на-Дону, 2007), на IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов

Новосибирск, 2008), на Ш Международной конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины» (Ростов-на-Дону, 2009).

Заключение Диссертация по теме "Биология развития, эмбриология", Ломтева, Светлана Витальевна

выводы

1. Содержание аллантоина в фолликулярной жидкости регистрируется в пределах от 0,1 до 0,9 мкмоль/л, и его средняя концентрация в норме составляет 0,7±0,05 моль/л. При культивировании ворсинок хориона восьминедельных абортусов наблюдается повышение концентрации аллантоина в культуральной среде на 113% и 250% через 24 и 48 ч соответственно.

2. Содержание аллантоина в сыворотке крови матери достоверно увеличено на всех этапах гестации, при этом в первом триместре на 6-8 неделе он практически втрое превышал контрольные значения и его уровень составлял 30,62±5,54 мкмоль/л, к концу беременности его уровень также достоверно отличался от контроля, на 38 неделе он составлял 22,96±3,68 мкмоль/л и превышал контроль вдвое. Содержание мочевой кислоты в сыворотке крови матери возрастает на протяжении беременности, достигая максимальных значений к концу третьего триместра.

3. В первом триместре интенсивность свободно-радикальных процессов, оцениваемая по уровню индуцированной хемилюминесценции достоверно увеличивается и Sm XJI составляет в среднем 119,5±12,71 у.ед. Во втором и третьем триместрах светосумма ХЛ медленно снижается, достигая практически контрольных значений к концу беременности. Интегральный показатель отношения содержания аллантоина к мочевой кислоте и светосумма ХЛ имеют однонаправленные изменения в процессе эмбрионального развития человека.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ломтева, Светлана Витальевна, Ростов-на-Дону

1. Абрамова, Ж.И. Человек и противоокислительные вещества / Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер // Л.: Наука. 1985. - 232 с.

2. Аршавский, И.А. Роль гестационной доминанты в качестве фактора, определяющего нормальное или уклоняющееся от нормы развитие зародыша / И.А. Аршавский // Актуальные вопросы акушерства и гинекологии. 1957. - С. 320 — 333.

3. Аршавский, И.А. Механизмы онто- и геронтогенеза у представителей класса млекопитающих / И.А. Аршавский // Усп. физиол. наук. 1998. - Т. 29. - № 4. - С. 93 - 107.

4. Ахундова, Д. Изучение цитогенетической активности некоторых витаминов, как возможных элементов естественной системы антимутагенов: автореф. дис. . канд. биол. наук / Д. Ахундова. Баку, 1974. - 20 с.

5. Афанасьев, И.Б. Кислородные радикалы в биологических процессах (обзор) / И.Б. Афанасьев // Химикофармацевтич. журнал. 1985. -Т.19. -№ 1. - С. 11-22.

6. Биленко, М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов / М.В. Биленко. М.: Медицина. - 1989. - 368 с.

7. Бурлев, В.А. Свободно радикальное окисление в системе мать -плацента - плод при акушерской патологии: автореф. дис. . докт. мед. наук /В.А. Бурлев. -М., 1992. - 50 с.

8. Бурмистров, С.О. Перекисное окисление липидов, белков и активность антиоксидантной системы сыворотки крови новорожденных и взрослых / С.О. Бурмистров, Е.Е. Дубинина, А.В. Арутюнян А.В // М., 1997. -С. 36-40.

9. Владимиров, Ю.А. Хемилюминесценция клеток животных / Ю.А. Владимиров, М.П. Шерстнев // Итоги науки и техники. Биофизика. 1989. -Т. 24. - 176 с.

10. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров, О.А. Азизова, А.И. Деев и др. // Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. М. - 1991. - Т. 29. - С. 252.

11. Губарева Л.И. Экологический стресс / Л.И. Губарева. Спб: Лань, Ставрополь: Ставропольсервисшкола, 2001. — 448 с.

12. Гуськов, Е.П. Цитологические последствия гипербарической оксигенации в ряду клеточных циклов лимфоцитов периферической крови человека / Е.П. Гуськов, Т.П. Шкурат //Генетика. 1985. - Т.21. - № 8. - С. 1361 -1367.

13. Гуськов, Е.П. Избыточность фенотипа, оксигенный мутагенез и концепция протекторного катаболизма / Е.П. Гуськов, А.И. Лукаш // М. -1987.-20 с.

14. Гуськов, Е.П. Генетические эффекты гипербарической оксигенации: дисс. . докг. биол. наук / Е.П. Гуськов. — М., 1989. 303 с.

15. Гуськов, Е.П. Нестабильность генома соматических клеток человека как адаптивная норма / Е.П. Гуськов, Т.П. Шкурат // Успехи современной биологии. 1989. - Т. 108. -Вып 2 (5). - С. 163 - 171.

16. Гуськов, Е.П. Влияние аллантоина на активность ферментов регулирующих ROS зависимый статус организма / Е.П. Гуськов, Т.П. Шкурат, Н.П. Милютина и др. // ДАН. - 2001. - Т. 379. - № 3. - С. 398 - 401.

17. Гуськов, Е.П. Аллантоин как тушитель свободных радикалов / Е.П. Гуськов, М.Е. Клецкий, И.В. Корниенко и др. // ДАН. 2002. - Т. 383. -№ 3. - С. 105- 107.

18. Гуськов, Е.П. Аллантоин как витамин / Е.П. Гуськов, В.Н. Прокофьев, М.Е. Клецкий и др. // Доклады академии наук. 2004. - Т. 398. -№6.-С. 1-6.

19. Девис, М. Витамин С: Химия и биохимия / М. Девис, Дж. Остин, Д. Патридж. -М.: Мир, 1999. 176 с.

20. Журавлев, А.И. Развитие идей Б.Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии / А.И. Журавлев // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М., 1982. - С. 3 - 37.

21. Зенков, Н.К. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меньшикова -М.: Наука. Интерпериодика, 2001. 340 с.

22. Казимирко, В.И. Свободно радикальное окисление и антиоксидантная терапия / В.И. Казимирко, В.И. Бутылин, Н.И. Горобец. -К.: Морион, 2004. - 160 с.

23. Кения, М.В. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе / М.В. Кения, А.И. Лукаш, Е.П. Гуськов // Успехи совр. Биологии. 1993. - Т. 113. - Вып. 4. - С. 456 - 470.

24. Колесникова, Л.И. Роль процессов перекисного окисления липидов в патогенезе осложнений беременности: автореф. дис. . докт. мед. наук / Л.И. Колесникова. Иркутск, 1993. - 39 с.

25. Корошок, М.А. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова, В.Е. Токарев // Лабораторное дело. -1988. -№1.- С. 16-19.

26. Кричевская, А.А. Биохимические механизмы кислородной интоксикации / А.А. Кричевская, А.И. Лукаш, З.Г. Броновицкая. Ростов -на - Дону, РГУ, 1980. - 120 с.

27. Лукаш, А.И. Увеличение содержания гемоглобина и железа в сыворотке крови крыс как результат снижения устойчивости мембран эритроцитов в условиях ГБО и защитный эффект мочевины / А.И. Лукаш,

28. B.В. Внуков, И.Я. Шерстнёва // Косм.биол. и авиакосм.медицина. 1979. - № 2.-С. 47-51.

29. Малышев, И.Ю. Стресс, адаптация и оксид азота / И.Ю. Малышев, Е.Б. Манухина // Биохимия. 1998. - Т.63. - № 7. - С. 992 - 1006.

30. Меньшикова, Е.Б. Окислительный стресс при воспалении / Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков // Успехи соврем, биологии. — 1997. Т.117. - № 2. -С. 155-171.

31. Меньшикова, Е.Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е.Б. Меньшикова, В.З. Ланкин, Н.К.Зенков и др. М.: Фирма «Слово», 2006. - 556 с.

32. Одыванова, Л.Р. Окись азота в нервной системе / Л.Р. Одыванова, А.А. Сосунов, Я. Гатчев, Дж. Цервос — Наварро // Успехи совр. биологии. -1997. Т.117. - №3. - С. 374 - 389.

33. Оловников, А.М. Молекулярный механизм морфогенеза: теория локационной ДНК / А.М. Оловников // Биохимия. -1996. Т. 61 - Вып.11.1. C.1948 1970.

34. Онуфриев, М.В. Постреанимационные изменения активности синтазы окиси азота и радикалообразования в отделах мозга крыс / М.В. Онуфриев, М.Ю. Степаничев, Н.А.Лазарева, Н.В. Гуляева // Анестиозиол. и реаниматол. 1996. - № 5. - С. 58-61.

35. Осипов, А.Н. Активные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, О.А. Азизова, Ю.А. Владимиров // Успехи соврем, биологии. -1990. -Т.31. С. 180-208.

36. Пескин, А.В. Роль кислородных радикалов в раннем развитии / А.В. Пескин, Н. П. Шарова, Д.Д. Димитрова, С.Д. Столяров, JI.C. Филатова // Докл. РАН. 1997. - № 355. - С. 262 - 265.

37. СаллуМ., А. Динамика содержания продуктов пуринового катаболизма в плаценте / А. СаллуМ., А.В. Шестопалов, З.И. Микашинович, И.О. Крыжановская // Известия ВУЗов. Сев. Кавк. Регион. Естеств. Науки. 2004. - Прил. № 1. - С. 63 - 67.

38. Серова, Л.В. Система мать — плод как объект для изучения механизмов физиологического действия невесомости / Л.В. Серова // Космическая биол. 1987. - Т. 21. - № 3. - С. 63 - 67.

39. Серова, Л.В. Невесомость и приспособительные возможности млекопитающих / Л.В. Серова. М.: ИПГМ., 1996. - 127 с.

40. Серова, Л.В. Влияние неблагоприятных факторов среды на систему мать плод / Л.В. Серова // Успехи физиологических наук. - 1999. -Т. 30. -№ 3. - С. 62-72.

41. Соколовский, В.В. Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний / В.В. Соколовский // Межд.мед.обзоры 1993. - Т.1. - № 1. -С. 11-14.

42. Хочачка, П. Биохимическая адаптация / П. Хочачка, Дж. Сомеро -М.: Мир, 1988,— 568 с.

43. Храпова, Н.Г. Перекисное окисление липидов и системы, регулирующие его интенсивность / Н.Г. Храпова // Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. 1981. — С. 147 - 155.

44. Чеботарев, Е.Е. Окислительные процессы при гамма -нейтронном облучении организма / Е.Е. Чеботарев, В.А. Барабой, Н.А.Дружина и др. Киев: Наук. Думка. - 1986. - 216 с.

45. Шестаков, В. А. Хемилюминесценция плазмы крови в присутствии перекиси водорода / В.А. Шестаков, Н.О.Бойчевская, М.П. Шерстнев // Вопр. Мед. химии. 1979. Т. 25. -№ 2. - С. 132 - 137.

46. Шестопалов, А.В. Биологические функции аллантоина / А.В. Шестопалов, Т.П.Шкурат, З.И. Микашинович и др. // Известия РАН. Серия биологическая. 2006. - № 4. - С. 1 - 5.

47. Ширшев, С.В. Цитокины плаценты в регуляции иммуно -эндокринных процессов при беременности / С.В. Ширшев // Усп. совр. биол. 1994. - Т. 114. - Вып. 2. - С. 223 - 239.

48. Шкурат, Т.П. Цитогенетические последствия гипербарической оксигенации в пролиферирующих клетках животных и человека: автореф. дис. . канд. биол. наук / Т.П. Шкурат. М., 1986. - 24с.

49. Эфроимсон, В.П. Гениальность и генетика / В.П. Эфроимсон. -М.: Информационно издательское агентство «Русский мир». — 1998. - 543с.

50. Ames, B.N. Uric acid provides an antioxidant defense in humans against oxidant and radical caused aging and cancer: A hypothesis / B.N. Ames, R. Cathcart, E. Schwiers, P. Hochstein // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. - 1981. - V. 78.-№ 11.-P. 6858-6862.

51. Ames, B.N. Oxidants are a major contributor to aging / B.N. Ames, M.K. Shigenaga// Ann. N. Y. Acad. Sci. -1992. № 663. - P. 85 - 96.

52. Andrews, P. Evolution and environment in the Hominoidea / P. Andrews //Nature. 1992. - V. 360. - P. 641 - 646.

53. Arnhold, J. Hammerschmidt S., Arnold K. Role of functional groups of hypochlorous acid /J.Arnhold, S. Hammerschmidt, K. Arnold // Biochem. et biophys. Acta. 1991. - V. 1097. -P. 145 - 151.

54. Baneijee, S. Is vitamin E a safe prophylaxis for preeclampsia? / S. Baneijee, A.E. Chambers, S. Campbell // Am. J.Obstet. Gynecol. 2006. - V. 194. -P. 1228-1233.

55. Barrington, J.W. Selenium deficiency and miscarriage: a possible link? / J.W. Barrington, P. Lindsay, D. James e.a. // Br. J. Obstet. Gynecol. 1996. -V. 103.-P. 130 - 132.

56. Becker, B.F. Towards the physiological function of uric acid / B.F. Becker // Free Radic. Biol. Med. 1993. - V. 14. - № 6. - P. 615 - 613.

57. Bilodeau, J.F. Current concepts in the use of antioxidants for the treatment of preeclampsia / J.F. Bilodeau, C.A. Hubel. // Am. J. Obstet. Gynecol. -2003. V. 25. - P. 742 - 750.

58. Brunet, A. Stress dependent regulation of FOXO transcription factors by the SIRT1 deacetylase / A. Brunet, L. Sweeney, J. Sturgill e.a. // Science.'- 2004. - V. 303. - P. 2011 - 2015.

59. Bugas, N. Immune regulatory role of nitric oxide within the central nervous system / N. Bugas, J. F. Drlfrassy, M. Tardien // Res. Immunol. - 1995. - V.146. - № 9. - P. 707 - 710.

60. Bunout, D. Nutrition and aging / D. Bunout, V. Cambiazo // Revista medica de chile. 1999. - V.127. -№ 1. - P. 82 - 88.

61. Burdon, R.N. Hydrogen peroxide in relation to proliferation and apoptosis in BNK 21 hamster fibroblasts / R.N. Burdon, V. Gill, D. Alliangana // Free Radic. Res. - 1996. - V.24. - P. 81 - 93.

62. Burton, G.J. Oxygen, early embryonic metabolism and free radical -mediated embryopathies / G.J. Burton, J. Hempstock, E. Jauniaux // Reprod. Biomed. 2003. V. 6. - P. 84 - 96.

63. Burton, G.J. Oxigen, the Janus gas; its effects on human placental development and function / G.J. Burton //J. Anat. 2009. - V.215 - P.27 - 35.

64. Chappell, L.C. A longitudinal study of biochemical variables in women at risk of preeclampsia / L.C. Chappell, P.T. Seed, A. Briley e.a. // Am. J. Obstet. Gynecol. 2002. - V. 187. - P. 127 - 136.

65. Cheng, I.W. Hemin promoted peroxidation of erythrocyte membranes / I.W. Cheng, L.P. Zhang, F. Li // Blood. - 1991. - V.78. - № 10. - P. 404.

66. Chiu, D.T.Y. Peroxidative reactions in red cell biology. In: Pryor WA / D.T.Y. Chiu, B. Lubin, S.B. Shohet // Free Radicals in Biology. New York, Academic Press. 1982. - P. 115 - 160.

67. Chiu, D.T.Y. Lipid peroxidation in human red cells / D.T.Y. Chiu, F.A. Kuypers, B. Lubin // Semin. Hematol. 1989. - V.26. - P. 257 - 276.

68. Chiu, D.T.Y. Free radical and oxidative damage in human blood cells / D.T.Y. Chiu, T.Z. Liu //J. Biomedical Scienc. 1997. - № 4. - P. 256 - 259.

69. Christen, P. Urate oxidase in primate phylogenesis / P. Christen, W.C. Peackock, A.E. Christen, W.E. Wacker // Eur. J. Biochem. 1970. - V. 12. - P. 3 -5.

70. Dijkers, P. Forkhead transcription factor FKHR LI modulates cytokine - dependent transcriptional regulation of p27KIPl / P. Dijkers, R. Medema, C. Pals e.a. // Mol. Cell. Biol. - 2000. - V. 20. - P. 9138 - 9148.

71. Enien, W.M. Human ovarian granulose cells and follicular fluid indices: the relationship to oocyte maturity and fertilization in vitro / W.M. Enien, E. Chantler, M.W. Seif, M. Elstein // Hum. Reprod. 1998. - V. 13. - № 5. -P.1303-1306.

72. Eppig, J.J. Coordination of nuclear and cytoplasmic oocyte maturation in eutherian mammals / J.J. Eppig // Reprod. Fertil. Dev. -1996. V. 8. - P. 485 - 489.

73. Essers, M. FOXO transcription factor activation by oxidative stress mediated by the small GTPase Ral and JNK / M. Essers, S. Weijzen, A. de Vries -Smits e.a. // EMBO J. 2004. - V. 23. - P. 4802 - 4812.

74. Ezashi, Т. Low O2 tensions and the prevention of hES cells / T. Ezashi, P. Das, R.M. Roberts // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. - V. 102. - P. 4783-4788.

75. Fischer, B. Oxygen tension in the oviduct and uterus of rhesus monkeys, hamsters and rabbits / B. Fischer, B.D. Bavister //Reprod. Fertil. 1993. -V.99-P.673-679.

76. Friedman, T.B. On the loss of uricolytic activity during primate evolution—I. Silencing of urate oxidase in a hominoid ancestor / T.B. Friedman, G.E. Polanco, J.C. Appold, J.E. Mayle // Сотр. Biochem. Physiol. 1985. - V. 81B.-P. 653-659.

77. Fridovich, I. Oxygen radicals, hydrogen peroxide, and oxygen toxicity 11. Fridovich // Free radicals in biology. New York: Acad. Press. 1976. - V.l. -P. 239-277.

78. Fridovich, I. Overview: biological sources of O2 ~ / I. Fridovich // Meth. Enzymol. 1984. - V.105. - P. 59 -61.

79. Fridovich, I. Superoxide dismutases. An adaptation to a paramagnetic gas /1. Fridovich //J. Biol. Chem. 1989. - V. 264. -№ 14. - P. 7761 - 7764.

80. Fried, R. Superoxide dismutase of mammalian nervous system / R. Fried, P. Mandel //J. Neurochem. 1975. - V. - 24. - № 3. - P. 433 - 438.

81. Fritzsche, R. Chemiluminescence microscopy reveals functional heterogeneity in single neutrophils undergoing oxygen burst / R. Fritzsche, A.L. De Week // Eur. J. Immunol. 1988. - V. 18. - № 5. - P. 817 - 820.

82. Fuchs, D.A. Effect of adrenaline and blood gas conditions on red cell volume and intra erythrocytic electrolytes in the carp, Cyprinus carpio / D.A. Fuchs, C. Albers //J. Exp. Biol. - 1988. - V. 137. - P. 457 - 476.

83. Grisham, M.B. Myoglobin catalyzes the oxidation of GHS using Admamyum stimulated production of hudrogen peroxide / M.B. Grisham // Circulation. 1989. - V.80. - № 4. - P. 11 - 29.

84. Graber, J. Allantoin in human plasma, serum, and nasal lining fluids as a biomarker of oxidative stress: avoiding artifacts and establishing real in vivo concentrations / J. Gruber, S.Y. Tang , A.M. Jenner , I. Mudway , A. Blomberg,

85. A. Behndig , K. Kasiman , C.Y. Lee , R.C.Seet, W.Zhang , C. Chen , F.J. Kelly ,

86. B.Halliwell// Redox Signal. 2009. - V.ll. -№> - 8. P.1767 - 1776.

87. Guskov, E.P. Genetic effects of hyperbaric oxygen therapy / E.P. Guskov, T.P. Shkurat, E.I. Shimanskaja, S.I. Guskova // Mutation research. -1990. -V. 241. -№ 1. P. 341-347.

88. Halliwell, B. Antioxidant characterization. Methodology and mechanism / B. Halliwell // Biochem. Pharmacol. 1995. - V.49. - P. 1341 -1348.

89. Halliwell, B. Can oxidative DNA damage be used as a biomarker of cancer risk in humans? Problems, resolutions and preliminary results from nutritional supplementation Studies / B. Halliwell // Free radical research. 1998. - V.29. - № 6. - P. 469 - 486.

90. Hellsten, Y. Allantoin formation and urate and glutathione exchange in human muscle during submaximal exercise / Y. Hellsten, M. Svensson, B. Sjodin e.a. // Free Radic. Biol. Med. 2001. - V. 31. -P.1313 - 1322.

91. Hicks, M. Identification of products from oxidation of uric acid induced by hydroxyl radical / M. Hicks, L.S. Wong, R.O. Day // Free Radic. Res. Commun. 1993. - V. 18. - P. 337 - 351.

92. Hung, Т.Н. A longitudinal study of oxidative stress and antioxidant status in women with uncomplicated pregnancies throughout gestation / Т.Н. Hung, L.M. Lo, Т.Н. Chiu e.a. // Reprod. Sci. 2010. - V. 4. - P. 401 - 409.

93. Jauniaux, E. Evaluation of respiratory gases and acid base gradients in fetal fluids and uteroplacental tissue between 7 and 16 weeks / E. Jauniaux, A. Watson, G.J. Burton // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2001. - V. 184. - P. 998 - 1003.

94. Jauniaux, E. Physiological implications of the materno fetal oxygen gradient in human early pregnancy / E. Jauniaux, B. Gulbis, G.J. Burton // Reprod. Biomed. Online. - 2003. - V. 7. -№ 2. - P. 250-253.

95. Jauniaux, E. Placental related diseases of pregnancy: involvement of oxidative stress and implications in human evolution / E. Jauniaux, L. Poston, G.J. Burton // Hum. Reprod. Update. - 2006. - V.12. - P. 747 - 755.

96. Joenje, H. Oxygen induced cytogenetic instability in normal human lymphocytes / H. Joenje, A. Oostra // Hum. Genet. - 1986. - V. 74. - P. 438 - 440.

97. Kajihara, T. Differential Expression of FOXOl and F0X03a Confers Resistance to Oxidative Cell Death upon Endometrial Decidualization / T. Kajihara, M. Jones, L. Fusi e.a. // Mol. Endocrinol. 2006. - V. 20. - P. 2444 -2455.

98. Kharfi, A. Human chorionic gonadotropin (hCG) may be a marker of systemic oxidative stress in normotens ive and preeclamptic term pregnancies / A. Kharfi, Y. Giguere, P. De Grandpre e.a. // Clin. Biochem. 2005. - V. 38. - № 8. -P. 717-721.

99. Kilburna, H. Unsymmetrically substituted polyamine analogue induces caspase independent programmed cell death in Bel - 2 - overexpressing cells / H. Kilburna, P. Woster, R. Casero // Cancer. Res. - 1998. - V. 58. - P. 2711 -2714.

100. Mikami, T. Is allantoin in serum und urine a useful indicator of exercise induced oxidative stress in humans? / T. Mikami, K. Kita, S. Tomita, G. Qu, Y. Tasaki, A. Ito // Free Radic. Res. - 2000. - V. 32. - P. 235 - 244.

101. Koch, L.G. Evolution,atmospheric oxigen, and complex disease / L.G. Koch, S.L. Britton // Physiol. Genomics. 2007. - V. 30. - P. 205 - 208.

102. Kodaman, P. Endocrine regulated and protein kinase С -dependent generation of superoxide by rat preovulatory follicles / P. Kodaman, H.R. Behrman // Endocrinology. - 2001. - V. 142. - P. 687 - 693.

103. Kohen, R. Oxidation of biological systems: oxidative stress phenomena, antioxidants, redox reactions, and methods for their quantification / R.Kohen, A.Nyska // Toxicol. Pathology. 2002. - V. 30. - № 6. - P. 620 - 650.

104. Komar, A.A. The Ure3. Yeast Prion: from Genetics to biochemistry / A.A. Komar, R. Melki, C. Cullin // Biochemistry. 1999. - V. 64. - P. 1401 -1407.

105. Kuzin B. Nitric oxide regulates cell proliferation during Drosophila development / B. Kuzin, I. Roberts, N. Peunova, G. Enikolopo // Cell. 1996. -V.87.-P. 639-649.

106. Labied, S. Progestins regulate the expression and activity of the forkhead transcription factor FOXOl in differentiating human endometrium / S.1.bied, Т. Kajihara, P. Madureira e.a. I I Mol. Endocrinol. 2006. - V. 20. - P. 35 -44.

107. Lagendijk, J. The determination of allantoin, a possible indicator of oxidant status, in human plasma / J. Lagendijk, J.B. Ubbink, W.J. Vermaak // Chromatogr. Sci. 1995. - V.33. - P. 186 - 193.

108. Lissi, E.A. Visible chemiluminescence from rat brain homogenates undergoing autoxidation. П. Kinetics of the luminescence decay / E.A. Lissi, T. Caceres, L.A. Videla // Free Radic. Biol. Med. 1988. - V. 4. - № 2. - P. 93 - 97.

109. Loft, S. Markers of oxidative damage to DNA: Antioxidants and molecular damage / S. Loft, H.E. Poulsen // Oxidants and antioxidants. 1999. -V. 300. -P. 166-184.

110. Ma, S.W. A study of the effect of oral glucose loading on plasma oxidant: antioxidant balance in normal subjects/ S.W. Ma, B. Tomlinson, I.F. Benzie // Eur. J. Nutr. 2005. - V. 44. - P.250-254.

111. MacLean, P.D. Bilirubin as an antioxidant in micelles and lipid bilayers: its contribution to the total antioxidant capacity of human blood plasma / P.D. MacLean, E.C. Drake, L. Ross, C.Barclay //Free Radic. Biol.Med. 2007. -V. 43. -№ 4. - P. 600-609.

112. Many, A. Xanthine oxidase/dehydrogenase is present in human placenta / A. Many, A. Westerhausen Larson, A. Kanbour - Shakir, J.M. Roberts // Placenta. - 1996. - V. 17. - P. 361 - 365.

113. Mayer, M. Biochemical and biological aspects of the plasminogen activator system / M. Mayer // Clin. Biochem. 1990. - V. 23. - P. 197 - 211.

114. McCall, M.R. Can antioxidant vitamins materially reduce oxidative damage in humans? / M.R. McCall, B. Frei // Free radical biology and medicine. -1999. V.26. -№ 7 - 8. - P. 1034-1053.

115. Mendel, L. Chemical studies on growth/ L. Mendel, R. Mitchell // Amer. J. Physiol. 1907. - № 20. - P. 97 -116.

116. Mikami, T. Is allantoin in serum and urine a useful indicator of exercise induced oxidative stress in humans? / T. Mikami, K. Kita, S. Tomita e.a. // Free Radic. Res. - 2000. - V.32. - P. 235 - 244.

117. Mireles, L.C. Antioxidant and cytotoxic effects of bilirubin on neonatal erythrocytes / L.C. Mireles, M.A. Lum, P.A. Dennery // Pediatr Res. -1999. V. 45. - № 3. - P. 355 - 362.

118. Mootz, D. The ciystal structure of DL allantoin / D. Mootz // Acta Crystallogr. - 1965. - V. 19. - № 5. - P. 726 - 734.

119. Morgan, E.H. Serum and urine allantoin in pregnancy and lactation in the rat / E.H. Morgan, A. Hanson // Acta phvsiol. Scand. 1964. - V.60. - P. 164 -169.

120. Murerell, G.A.C. Modulation of fibroblast proliferation by oxygen free radicals / G.A.C. Murerell, M.J.O. Francis, L. Bromly // Biochem. 1990. -V. 265. -№3.- P. 659-665.

121. Mutlu -Turkoglu, U. Imbalance between lipid peroxidation and antioxidant status in preeclampsia / U. Mutlu - Turkoglu, E. Ademoglu, L. Ibrahimoglu e.a. // Gynecol. Obstet. Invest. - 1998. - V. 46. - № 1. - P. 37 - 40.

122. Myatt, L. Reactive oxygen and nitrogen species and functional adaptation of the placenta / L. Myatt // Placenta. 2010. - P. 66 - 69.

123. Neubauer, C. A Guide to the Qualitative and Quantitative analysis of the urine/ C. Neubauer // Ann. Chem. 1856. - №. 69 - P. 206 - 224.

124. Nishi, H. HTF 1 transactivates TGF - beta3 in trophoblast / H. Nislii, T. Nakada, M. Hokamura e.a. // Endocrinology. - 2004. - V. 145. - P. 4113 -4118.

125. Oda, M. Loss of Urate Oxidase Activity in Hominoids and its Evolutionary Implications / M. Oda, Y. Satta, O. Takenaka, N. Takahata // Mo I. Bio I. andEvol. 2002. - V.19. - P. 640 - 653.

126. Ong, C.Y. First trimester maternal serum free beta human chorionic gonadotropin and pregnancy associated plasma protein A as predictors of pregnancy complications / C.Y. Ong, A.W. Liao, K. Spencer e.a. // BJOG. 2000. -V. 107.-№10.-P. 1265-1270.

127. Onkoshi, A. Oxidation of 11 deoxycorticosterone in methanol with hemin and hydrogen peroxide / A. Onkoshi, K. Abe, Y. Kodera, Y. Inada // Agr. and Biol. Chem. - 1989. - V.53. -№ 7. - P. 2013-2014.

128. Ogihara, T. Allantoin / T. Ogihara, H. Ogihara, H. Tamai // Nippon Rinsho. 1999. - V. 57. - P.769 - 771.

129. Orowan, E. The origin of man / E. Orowan // Nature. 1955. - V. 175.-P. 683-684.

130. Ottosen, L.D. Observations on intrauterine oxygen tension measured by fibre optic microsensors / L.D. Ottosen, J. Hindkaer, M. Husth e.a. // Reprod. Biomed. Online. - 2006. - V.13. - P. 380 - 385.

131. Packer, J.E. Free radical research and the society from radical research / J.E. Packer, A.J. Kettle // Chem. N.Z. 1994. - V.58. - № 4. - P. 14.

132. Patterson, R. Prooxidant and antioxidant properties of human serum ultrafiltrates toward LDL: important role of uric acid / R. Patterson, E. Horsley, D. Leake // Jornal of lipid Reseatch. 2003. - V. 44. - P. 512 - 521.

133. Pilbeam, D. Genetic and morphological records of the Hominoidea and Hominoid origins: a synthesis / D. Pilbeam // Mol. Phylogenet. Evol. 1996. -V. 5.-P. 155-168.

134. Plessinger, M.A. Pretreatment of human amnion — chorion with vitamins С and E prevents hypochlorous acid induced damage / M.A. Plessinger, J.R. Woods, R.K. Miller // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2000. - V. 183. - P. 979 -985.

135. Poston, L. Vitamin С and vitamin E in pregnant women at risk for preeclampsia (VIP trial): randomised placebo controlled trial / L. Poston, A.L. Briley, P.T. Seed e.a. // Lancet. - 2006. - V. 367. - P. 1145.

136. Ramsey, E.M. Placental Vasculature and Circulation / E.M. Ramsey, M.W. Donner // Anatomy, Physiology, Radiology, Clinical Aspects, Atlas and Textbook. Stuttgart: Georg Thieme, 1980.

137. Rasanen, L.A. Accumulation of allantoin and uric acid in plasma of exercising trotters / L.A. Rasanen, T. Myllymaki, S. Hyyppa e.a. // Am. J. Vet. Res. 1993. - V. 54. -P. 1923 - 1928.

138. Reidy, J. Chromosome breakage in human lymphocyte culture in influenced by medium manipulation / J. Reidy, X. Thou, A. Chen //Amer. J. Hum.Genet. 1982. - V. 34. -№ 6. - P. 139(A).

139. Reidy, J. Influence of culture media on spontaneous chromosome breakage: effects of folic acid and methionine / J. Reidy, X. Thou, A. Chen // Environ. Mutagenes. 1984. - V. 6. - № 3. - P. 405 - 406.

140. Rodesch, F. Oxygen measurements in endometrial and trophoblastic tissues during early pregnancy / F. Rodesch, P. Simon, C. Donner, E. Jauniaux // Obstet. Gynecol. -1992. V. 80. - P.283 - 285.

141. Ruder, E.H. Oxidative stress and antioxidants: exposure and impact on female fertility / E.H. Ruder, T,J. Hartman, J. Blumberg, M.B. Goldman // Hum. Reprod. Update. 2008. - V. 14. - P. 345 - 357.

142. Ruder, E.H. Impact of oxidative stress on female fertility / E.H. Ruder, T J. Hartman, M.B. Goldman //Curr. Opin. Obstet. Gynecol. 2009. V. 21. -№3.-P. 219-222.

143. Sahnoun, Z. Free radicals: fundamental notions and methods of exploration. Part 2 / Z. Sahnoun, K. Jamoussi, K.M. Zeghal // Therapie. 1998. -V.53. - № 4. - P. 315 - 339.

144. Salkowski, E. Bildung von Allantoin sua Ham? / E. Salkowski // Ber. Chem. Ges. -1876. -№. EX. P. 719.

145. Scott, G.S. The role of uric acid in protection against peroxinitrite -mediated pathology / G.S. Scott, D.C. Hooper // Med. Hypotheses. 2001. - V. 56.-P. 95-100.

146. Selye, H. Forty years of stress research: principal remaining problems and misconceptions / H. Selye // Can. Med. Assoc J. 1976. - V. 115. - №.1. - P. 53 - 56.

147. Sevanian, A. Mechanisms and consequences of lipid peroxidation in biological systems / A. Sevanian, P. Hochstein // Ann. Rev. Nutr. 1985. - № 5. -P. 365-390.

148. Sevanian, A. Serum urate as an antioxidant for ascorbic acid / A. Sevanian, K.J.A. Davies, P. Hochstein // Am. J. Clin. Nutr. 1991. - V. 54. - № 6. -P. 1129-1134.

149. Sferruzzi Perri, A. IGF - 2 mediates the effect of hypoxia on human cytotrophoblast outgrowth / A. Sferruzzi - Perri, C. Roberts // Proc. Soc. Reprod. Biol. - 2003. - V. 15. - P. 90.

150. Sies, H. Oxidative stress: from basic research to clinical application / H. Sies // Amer. J. Med. 1991. - V. 91. -P. 31 - 38.

151. Shigenaga, M.K. Urinaiy 8 hydroxy - 2' - deoxyguanosine as a biological marker of in vivo oxidative DNA damage / M.K. Shigenaga, C.J. Gimeno, B.N. Ames // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1989. - V.86. - P. 9697 -9701.

152. Stein, P.T. Oxidative stress early in pregnancy and pregnancy outcome / P.T. Stein, Т.О. Scholl, M.D. Schluter e.a. // Free Radic. Res. 2008. -V. 42. P. 841 -848.

153. Straughn, J. The purines and purine metabolism/ J. Straughn, A. Jones // Arch. Ital. De biol. 1907. - №. 6. - P. 245 - 254.

154. Sunters, A. Fox03a. transcriptional regulation of Bim controls apoptosis in paclitaxel treated breast cancer cell lines / A. Sunters, S. Fernandez de Mattos, M. Stahl e.a. // Biol. Chem. - 2003. - V. 278. - P. 49795 - 49805.

155. Sugino, N. The role of oxygen radical mediated signaling pathways in endometrial function / N. Sugino // Placenta. - 2007. - V. 28. - P. 133 - 136.

156. Takada, Y. The degradation of urate in liver perioxsomes. Association of allantoinase with allantoicase in amphibian liver but not in fish and invertebrate liver / Y. Takada, T. Noguchi // Biol. Chem. 1983. - V. 258. - P. 4762 - 4764.

157. Takami, M. Antioxidants reversibly inhibit the spontaneous resumption of meiosis / M. Takami, S. Preston, V. Toyloy, H. Behrman // Am. J. Physiol. 1999. - V. 276. - P. 684 - 688.

158. Thibault, C. Mammalian oocyte maturation / C. Thibault, D. Szollosi, M. Gerard //Reprod. Nutr. Dev. 1987. - V. 27. - P. 865 - 896.

159. Toescu, V. Oxidative stress and normal pregnancy / V. Toescu, S.L. Nutall // Clin. Endocrin. -2002. V. 57. -P. 609 - 613.

160. Uyeno, D. The physical properties and chemical composition of human amniotic fluid / D. Uyeno // Amer. J. Physiol. 1917. - P. 77 - 103.

161. Vladimirov, Iu.A. Free radicals and antioxidants / Iu.A. Vladimirov // Vest. Ross. Akad. Med. Nauk. 1998. -№ 7. - P. 43 - 51.

162. Vural, P. Antioxidant defence in recurrent abortion / P. Vural, C. Akgul, A. Yildirim, M. Canbaz // Clin. Chim. Acta. 2000. - V. 295. - P. 169 -177.

163. Walker, J.J. Antioxidants and inflammatory cell response in preeclampsia / J.J. Walker // Seminars in Reprod. Endocrin. 1998. - V. 16. - № l.-P. 47-55.

164. Wang, Y. Antioxidant activities and mRNA expression of superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase in normal and preeclamptic placentas / Y. Wang, S.W. Walsh // Soc. Gynecol. Invest. 1996. - V. 3. - P. 174 -184.

165. Watanabe, S. Uric acid, hominoid evolution, and the pathogenesis of salt sensitivity / S. Watanabe, D. - H. Kang, L. Feng e.a. // Hypertension. - 2002. -V. 40.-P. 355-366.

166. Watson, A. Variations in expression of copper/zinc superoxide dismutase in villous trophoblast of the human placenta with gestational age / A. Watson, M. Palmer, E. Jauniaux, G.J. Burton // Placenta. 1997. - V. 18. - P. 295 -299.

167. Watson, A. Susceptibility of human placental syncytiotrophoblast mitochondria to oxygen mediated damage in relation to gestational age / A. Watson, M. Palmer, J. Skepper e.a. // Clin. Endocrinol. Metabol. - 1998. - V. 83. -P.1697 - 1705.

168. Weels, G. The purines and perine metabolism of the human fetus and placenta / G. Weels, H. Corper // Amer. J.Physiol. 1909. - № 6. - P. 469 - 482.

169. Wendel, A. Enzymes: tools and targets / A. Wendel // Basel: Karger, 1988.-267 p.

170. Wiechowski, W. The presence of allantoin in the normal Menschenharn and its importance for assessing the human

171. Harnsaurestoffwechsels/ W. Wiechowski // Biochem. Z. 1909. - №19 - P. 368 -383.

172. Wiechowski, W. A contribution to the knowledge of the purine metabolism of the Apes / W. Wiechowski // Biochem. Z. 1910. - № 25 - P. 431.

173. Wohler, F. Concerning the modifications which particular organic materials undergo in their transition to the urine/ F. Wohler, F.T. Frerichs // Ann. Chem. Pharm. 1848. -№ 63. - P. 335.

174. Wohler, F. Untersuchungen iiber die Natur der Harnsaure/ F. Wohler, J. Liebig // Ann. Chem. Pharm. 1838. -№ 26 - P. 241 - 340.

175. Woods, J.R. Vitamins С and E: missing links in preventing preterm premature rupture of membranes? / J.R. Woods, M.A. Plessinger, R.K. Miller // Am. J. Obstet. Gynecol. 2001. - V. 185. - P. 5 - 10.

176. Wu, X. Two independent mutatinal events in the loss of urate oxidase during hominoid evolution / X. Wu, D.M. Muzny, C.C. Lee, C.T. Caskey // Mol. Evol. 1992. - V. 34. - P. 78 - 84.

177. Wulf, D Principles derived from the study of simple skills do not generalize to complex skill learning / D. Wulf // Physiol. Rev. 2002. - V. 82. - P. 47 - 95.

178. Yardim Akaydin, S. Oxidation of uric acid in rheumatoid arthritis: is allantoin a marker of oxidative stress? / S. Yardim - Akaydin, A. Sepici, Y. Ozkan, M. Torun, B. Simsek, V. Sepici // Free Radic Res. - 2004. - V. 38. - P. 623 - 628.

179. Yusa, T. Chromosomal and teratogenic effects of oxygen in the mouse / T. Yusa // Br. J. Anaesth. -1981. V.53. - P. 505 - 510.

180. Zamudio, S. Chronic hypoxia in vivo reduces placental oxidative stress / S. Zamudio, O. Kovalenko, J. Vanderlelie // Placenta. 2007. - P. 846 -853.

181. Zitnanova, I. Uric acid and allantoin levels in Down syndrome: antioxidant and oxidative stress mechanisms? / I. Zignatova, P. Korytar, O.I. Aruoma e.a. // Clin. Chim. Acta. - 2004. - V. 341. - P. 139 - 146. fj

Информация о работе

Ломтева, Светлана Витальевна
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2010
ВАК 03.03.05

Диссертация

Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека ВАК РФ 03.03.05, Биология развития, эмбриология

Автореферат диссертации по теме "Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Ломтева, Светлана Витальевна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека"

Заключение Диссертация по теме "Биология развития, эмбриология", Ломтева, Светлана Витальевна

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Ломтева, Светлана Витальевна, Ростов-на-Дону

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение роли аллантоина в процессе репродукции человека
ВАК РФ 03.03.05, Биология развития, эмбриология