Метаболическая активность плацентарных макрофагов и молекулярные механизмы формирования плаценты при различных вариантах течения беременности

Шестопалов, Александр Вячеславович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Метаболическая активность плацентарных макрофагов и молекулярные механизмы формирования плаценты при различных вариантах течения беременности
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Метаболическая активность плацентарных макрофагов и молекулярные механизмы формирования плаценты при различных вариантах течения беременности"

На правах рукописи

ШЕСТОПАЛОВ АЛЕКСАНДР ВЯЧЕСЛАВОВИЧ

МЕТАБОЛИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПЛАЦЕНТАРНЫХ МАКРОФАГОВ И МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ФОРМИРОВАНИЯ ПЛАЦЕНТЫ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТАХ ТЕЧЕНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Ростов-на-Дону 2007

003059581

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ростовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные консультанты доктор биологических наук, профессор Микашинович Зоя Ивановна

доктор медицинских наук, профессор Буштырева Ирина Олеговна

Официальные оппоненты доктор медицинских наук, профессор Терентьев Владимир Петрович

доктор биологических наук, профессор Арутюнян Александр Вартанович

доктор медицинских наук, профессор Бородулин Владимир Борисович

Ведущая организация ГОУ ВПО Кубанский государственный медицинский университет

Защита состоится « О & » сг 2007 года в Гца

заседании диссертационного совета Д 208 082 01 при ГОУ ВПО Ростовском государственном медицинском университете (344022, г Ростов-на-Дону, пер Нахичеванский, 29)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Ростовского государственного медицинского университета

Автореферат разослан « % ' ^у>_^ 2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

Корганов Н Я

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Плацента является уникальным органом, так как ее формирование, созревание, достижение функционального оптимума, старение и, наконец, отторжение по биологическим меркам происходит предельно быстро За короткий промежуток времени низкодифференцированный опухолево-подобный трофобласт превращается в сложноорганизованный орган, имеющий свою специфическую систему гормональной регуляции, иммунологического контроля, обеспечивающий внутриутробную жизнь плода В этом стремительном развитии особое значение приобретают процессы пролиферации и программированной клеточной гибели (ПКГ) Существует определенный круг исследователей, занимающихся изучением процессов апоптоза в плаценте (В Huppertz et al, 1998, 1999, 2006, D W Morrish et al, 2001, M Jerzak, P Bischof, 2002) Ими установлена первостепенная роль этого процесса в механизмах син-цитилизации трофобласта, перестройке спиральных артерий и др Большинство авторов исследуют молекулярно-биологический уровень, генетические характеристики программируемой клеточной гибели в плаценте, в то время как вопросам биохимического обеспечения этих процессов, метаболическим реакциям клеток, сопровождающим данные явления, внимания практически не уделялось Между тем, получение ответов на данные вопросы позволит приблизиться к решению проблемы ранней диагностики и метаболической коррекции осложненной беременности

В настоящее время формируется концепция об иммунологических отношениях матери и плода, согласно которой, супрессия специфической ветви иммунного ответа матери сопровождается активацией неспецифического врожденного иммунитета (Г Т Сухих и соавт , 2003)

В децидуальной оболочке и строме плаценты, среди клеточных элементов, наибольший интерес вызывают плацентарные макрофаги, которые присутствуют в значительном количестве в строме ворсин формирующейся плаценты на протяжении всей беременности (АП Милованов, 1999, ИГ Шатилова, 1999) И этот интерес определяется не только их количественным превалированием

Несмотря на значимость плацентарных макрофагов как клеток-эффекторов иммунного взаимодействия мать-плацента-плод, клеток-регуляторов ангиогенеза в плаценте, исследования их свойств и участия в формировании патологического течения беременности достаточно фрагментарны и ограничиваются в основном их морфологическими и иммунологическими характеристиками (JI В Черипова и соавт , 1994, С А Сельков, 1996, О В Павлов и соавт, 1999, ИГ Шатилова и соавт, 1997, MC Шамугия, 1999, ЭК Айла-мазян, CA Сельков, 2002, M G Petroff et al, 2002, 2003, L Gardner, A Moffett, 2003, S. Renaud et al, 2005, F Arcuri et al, 2006) Вместе с тем, биохимические особенности и метаболические реакции плацентарных макрофагов остаются неизученными

Связующим звеном между метаболической активностью плацентарных макрофагов и процессами апоптотической деградации ДНК в плаценте может

явиться изучение секреции макрофагами молекул с апоптогенными и антиапоп-тогенными свойствами, в частности, оксида азота - продукта NO-синтазного пути окисления аргинина

Существует еще несколько путей в метаболизме аргинина аргиназный, приводящий к образованию полиаминов - спермидина и спермина - активаторов пролиферативных процессов и декарбоксилазный, ведущий к образованию агматина - молекулы, способной включатся в синтез полиаминов, подавлять пролиферацию гладкомышечных клеток и ингибировать активность N0-синтазы (M A Medina et al, 2003)

Однако, в литературе отсутствуют сведения о содержании полиаминов и агматина в динамике развития плаценты человека при физиологической и осложненной беременности Вероятно, нарушения, связанные с метаболизмом аргинина по аргиназному пути, приведут не только к нарушению детоксикации аммиака, но и к изменению регуляции пролиферации, а соответственно к дефектам развития плаценты

С позиций регуляции процессов пролиферации и программируемой клеточной гибели, активные формы кислорода (АФК) являются вторичными мес-сенджерами передачи сигналов от ростовых факторов и способны влиять на регуляцию клеточного цикла (M M Дементьева, 1999, Е Е Дубинина и соавт, 2006, Е Б Меньшикова и соавт , 2006, W Droge, 2002, С Nathan, 2003) В связи с этим, представляет интерес изучение вопроса возможной связи нарушения апоптотических процессов с окислительным стрессом Исследованию состояния антиоксидантной системы и перекисного окисления липидов при физиологическом и осложненном течении беременности посвящено значительное количество отечественных и зарубежных работ (В А Бурлев, 1992, JI И Колесникова, 1993, В M Прокопенко и соавт , 1995, 1997, 1999, 2000, 2006, H H Крайнева и соавт , 1998, С И Назарова и соавт , 2005, 2006, А К Poranen et al, 1996, Y Wang, S W Walsh, 1996, U Mutlu-Turcoglu et al, 1998, J J Walker, 1998) Однако, роль плацентарных ферментов антиоксидантной защиты в регуляции пролиферации и апоптоза в плаценте до настоящего времени все еще не ясна

С точки зрения эволюционной биохимии, плацента является уникальным объектом исследования, так как проходит в своем развитии ряд стадий от бла-стоцисты до органа с высочайшим уровнем дифференцировки Несмотря на более чем столетнюю историю филогенетического закона Геккеля о повторении филогенеза в онтогенезе, его биохимическая доказательная база остается крайне фрагментарной (Б Карлсон, 1983) И, на наш взгляд, исследование содержания продуктов деградации пуринов, в частности аллантоина, в динамике физиологической и осложненной беременности может поставить ряд новых вопросов и дать некоторые ответы относительно онтогенетического становления азотистого метаболизма

Представляется необходимым определить значение макрофагов в формировании плаценты Важным является анализ роли систем генерации активированных кислородных метаболитов и ферментативной антиоксидантной системы в регуляции апоптоза и пролиферации, их взаимосвязи в различные периоды физиологической и осложненной беременности

Опираясь на вышеизложенное, можно обозначить основное направление исследований, которое на наш взгляд позволит сформировать теоретический фундамент молекулярных механизмов осложненного течения беременности и предложить решение практических вопросов, связанных с диагностикой и лечением плацентарной недостаточности

Цель работы: выявление молекулярных механизмов формирования плаценты и метаболической активности плацентарных макрофагов, определение роли их нарушений в патогенезе различных форм плацентарной недостаточности и поиск путей их метаболической коррекции

Для достижения цели работы были поставлены следующие задачи исследования:

1 Оценить ИО-секреторную активность плацентарных макрофагов и активность их антиоксидантных ферментов при различных вариантах течения беременности,

2 Определить активность Са2+/Г^2+-зависимой эндонуклеазы, цитохромок-сидазы и содержание продуктов деградации пуринов (гипоксантина, ксантина, мочевой кислоты и аллантоина) в плаценте при различных вариантах течения беременности,

3 Установить содержание аргинина, путресцина, спермидина и агматина в плаценте при различных вариантах течения беременности,

4 Исследовать активность ферментов антиоксидантной защиты (СОД, ка-талазы, глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы) в плацентарных макрофагах и тканях плаценты в динамике физиологической беременности и при плацентарной недостаточности,

5 Выяснить влияние аргинина и изосорбида динитрата на метаболическую активность эритроцитов и лейкоцитов крови беременных с плацентарной недостаточностью

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Установлены биохимические закономерности формирования плаценты с позиций молекулярного обеспечения процессов пролиферации и апоптоза Формирование плаценты сопряжено с повышением активности процессов деградации ДНК, ЫО-секреторной активности плацентарных макрофагов, снижением уровня полиаминов и пуриновых дериватов по мере развития беременности

Впервые выявлен не однозначный характер изменений активности Са27Мй2+ -зависимой эндонуклеазы в плаценте на разных этапах формирования Получены новые данные о содержании гипоксантина, ксантина и мочевой кислоты в тканях плаценты, позволяющие прийти к заключению о снижении интенсивности процессинга РНК и повышении процессов реутилизации пуриновых метаболитов в динамике физиологической беременности

Впервые определено содержание аллантоина в организме беременных женщин, выявившее временные расхождения в повышении его уровня в плаценте и сыворотке крови беременных, что свидетельствует о разных темпах

становления пуринового метаболизма в зародышевых и внезародышевых тканях и является отражением филогенетического закона

Выявлено реципрокное снижение интенсивности аргиназного и декарбок-силазного путей и активация МО-синтазного пути метаболизма аргинина, что указывает на важную роль ауторегуляторных механизмов в динамике формирования плаценты

Данные об активности антиоксидантных ферментов плацентарных макрофагов и особенностях формирования антиоксидантной ферментативной системы плаценты человека в процессе физиологической беременности определяют их значимость в формировании защитно-приспособительных реакций, обеспечивающих состоятельность беременности

Впервые установлено, что процессы синцитилизации и первой волны инвазии трофобласта сопровождаются увеличением генерации перекиси водорода плацентарными макрофагами, активацией в клетках трофобласта Са27М§2+-зависимой эндонуклеазы, увеличением содержания аллантоина, высоким уровнем полиаминов

Установлены общие закономерности метаболических реакций плаценты при патологическом течении беременности в различные сроки, заключающиеся в депрессии метаболизма аргинина, активации процессов деградации пурино-вых нуклеотидов, накоплении мочевой кислоты, дисбалансе в работе антиоксидантных ферментов Впервые выявлен различный характер нарушений в ЫО-секреции, активности антиоксидантных ферментов плацентарных макрофагов и плаценты при неразвивающейся беременности, ранних и поздних самопроизвольных абортах и при плацентарной недостаточности

Впервые установлена структура адаптивных реакций красных и белых клеток крови при направленной метаболической коррекции препаратами аргинина и изосорбида динитрата, позволяющими оптимизировать плацентарную гемодинамику и качественно улучшить перинатальные исходы

НАУЧНО-ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

РАБОТЫ

Работа вносит вклад в углубленное понимание биохимических механизмов, лежащих в основе функционирования плаценты на различных этапах ее формирования Полученные данные совершенствуют представления о роли метаболических изменений в плаценте в патогенезе осложненного течения беременности

Одним из практических приложений работы является определение новых подходов к целенаправленной, патогенетически обоснованной терапии невынашивания беременности Теоретически обоснована перспективность назначения в I триместре пациенткам с высоким риском развития неразвивающейся беременности тиоловых антиоксидантов Показана целесообразность применения при поздних самопроизвольных абортах антиоксидантной терапии, предотвращающей окислительную активацию процессов апоптоза в плаценте

Показана диагностическая значимость определения секреторной активности лейкоцитов крови и содержания аллантоина в сыворотке крови матери в

оценке состояния фетоплацентарного комплекса беременных с плацентарной недостаточностью в III триместре

Полученные данные обосновывают дифференцированный подход в назначении препаратов - доноров оксида азота и активаторов NO-синтазы в зависимости от сроков возникновения патологии беременности

Выявленное снижение продукции оксида азота при плацентарной недостаточности являются теоретическим обоснованием целесообразности применения препаратов - доноров оксида азота и активаторов NO-синтазы при этой патологии в III триместре Полученные данные свидетельствуют о перспективности разработки методов селективной коррекции сниженной NO -секреторной активности плацентарных макрофагов Теоретически обоснованы и совместно с кафедрой акушерства и гинекологии №3 ФПК и ППС РостГМУ разработаны и апробированы способы лечения плацентарной недостаточности, основанные на включении в стандартную схему терапии хронической фетоплацентарной недостаточности препаратов L-аргинина и изосорбида динитрата Данные способы позволяют добиться повышения эффективности коррекции плацентарной гемодинамики, улучшения метаболических характеристик эритроцитов и лейкоцитов крови, что обеспечивает улучшение перинатальных исходов новорожденных

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ

Основные положения диссертации представлены на VI Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2002), на III и VII Международных научно-практических конференциях «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2002, 2006), на научно-практических конференциях «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» (Ростов-на-Дону, 2003, 2004, 2005, 2006), на IV Научной сессии РостГМУ (Ростов-на-Дону, 2004), на VII и VIII Российских форумах «Мать и дитя» (Москва 2005, 2006)

По теме диссертации опубликовано 36 работ, в том числе 11 - в изданиях, рекомендованных ВАК

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1 Плацентарные макрофаги, обеспечивающие иммунологическую адаптацию фетоплацентарного комплекса, участвуют в регуляции молекулярных процессов формирования плаценты, о чем свидетельствует динамика секреции оксида азота и соотношения ферментов метаболизма активных форм кислорода при физиологической беременности

2 В течение физиологической беременности в плаценте формируются ре-ципрокные отношения между NO-синтазным и аргиназным путями обмена, регистрируется возрастание активности процессов деградации нук-леотидов, антиоксидантной защиты, обеспечивающие адекватность фетоплацентарной гемодинамики и рост плаценты

3 Становление плацентарного метаболизма при физиологической беременности и формирование метаболических ответов при осложненной бере-

менности согласуются с филогенетическим законом, о чем свидетельствует динамика содержания аллантоина в плаценте и сыворотке крови, активность эффекторного фермента апоптоза -зависимой эндо-нуклеазы и глутатионзависимых ферментов в плаценте

4 Осложненное течение беременности сопровождается формированием различных, зависимых от срока беременности метаболических реакций со стороны плацентарных макрофагов, депрессией метаболического обеспечения пролиферации и развитием окислительного стресса

5 Плацентарная недостаточность характеризуется инверсией секреторной активности нейтрофилов крови, повышением уровня аллантоина, активацией гликолиза и антиоксидантных ферментов в эритроцитах, направленных на увеличение кислородной емкости крови

6 Влияние препаратов аргинина характеризуется метаболической трансформацией клеток крови восстановлением секреторной активности лейкоцитов, индукцией толерантного гипобиотического модулирования гликолиза в эритроцитах, нормализацией кислородтранспортной функции крови, что сочетается с восстановлением фетоплацентарной гемодинамики и, как следствие, улучшением перинатальных исходов

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация изложена на 256 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 53 таблицами и 59 рисунками Диссертация состоит из введения, 5 глав, включающих обзор литературы (глава 1), раздела, посвященного характеристике материала и методов исследования (глава 2), 3-х глав изложения результатов собственных исследований (главы 3, 4, 5), заключения, выводов и списка литературы, включающего 386 источника, в том числе 89 отечественных и 297 зарубежных

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ Материал и методы исследования

С целью реализации поставленных задач был исследован биологический материал, полученный от 276 женщин В I триместре были исследованы биохимические показатели в тканях формирующейся плаценты, полученных физиологически протекавших беременностей, прерванных медицинским абортом в сроки 4-12 недель беременности Был исследован абортивный материал, полученный при прерывании неразвивающейся беременности (п=10), а также материал при 15 повторных ранних самопроизвольных абортах до 12 недель беременности

Во II триместре были исследованы 10 случаев поздних самопроизвольных абортов и 19 случаев индуцированной острой плацентарной недостаточности -плаценты практически здоровых женщин, беременность которых была прервана по социальным показаниям путем индукции родовой деятельности с помощью введения в плодный пузырь гипертонического раствора

В III триместре были исследованы 35 плацент от беременностей, осложнившихся хронической вторичной фетоплацентарной недостаточностью и 16 плацент от физиологически протекающих беременностей

Наряду с плацентами исследованы плацентарные макрофаги, плазма и клетки крови беременных женщин с физиологической и осложненной беременностью

С целью оценки эффективности метаболической коррекции ФПН была исследована кровь беременных с диагнозом фетоплацентарная недостаточность до и после лечения

I группу (контрольную) составили 22 пациентки с неосложненным течением III триместра беременности, относящиеся к диспансерным группам здоровых или практически здоровых, II группа включала 101 беременных женщин с фетоплацентарной недостаточностью различной этиологии в III триместре беременности

В зависимости от проводимой терапии все женщины II группы были разделены на три подгруппы Беременные IIa подгруппы (п=48) получали этиопа-тогенетическую терапию по стандартным схемам лечения ХФПН (И О Крыжа-новская, 2002, И О Буштырева, В Е Радзинский, 2005) Пациентки 116 подгруппы (п=25) дополнительно к стандартной терапии ХФПН получали субстрат для эндогенного синтеза оксида азота - L-аргинин по 1,0 г per os 3 раза в сутки в течение 10 дней У пациенток IIb подгруппы (п=28) к стандартной схеме лечения был добавлен донатор оксида азота - изосорбид динитрит по 0,2 г 3 раза в сутки в течение 10 дней

Получение культур плацентарных макрофагов проводилось по методу OB Павлова и соавт (1998) Определение продукции оксида азота плацентарными макрофагами проводили по методу, описанному Ю В Шебзуховым и соавт (1998) В выделенных макрофагах определяли активность СОД (Н Misra, I Fridovich, 1972) и каталазы (М А Королюк и соавт , 1988)

Для оценки интенсивности процессов дефрагментации ДНК определяли активность Ca2+/Mg2+-3aBHCHMoii эндонуклеазы в ядерных экстрактах клеток плаценты по методу, описанному А Г Баснакьян и соавт (1989), в модификации В JI Кожура и соавт (1991, 1998), активность цитохромоксидазы в плаценте определяли по методу Р С Кривченковой (1977) Определение гипоксанти-на, ксантина, мочевой кислоты и аллантоина было проведено методом высокоэффективной жидкостной хроматографии по FF Iris et al (1999) Анализ был произведен на жидкостном хроматографе ThermoQuest (Inc Spectra System LC) Содержание аллантоина было определено спектрофотометрическим методом (X В Chen, М J Gomes, 1992)

Содержание аргинина, путресцина, спермидина и агматина в гомогенатах плацент было определено методом высокоэффективной жидкостной хроматографией (HPLC) с обращенной фазой (G Wu et al, 1998)

Активность антиоксидантных ферментов в гомогенатах плаценты определяли спектрофотометрическими методами Активность СОД определяли по степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолия в присутствии супероксидного радикала (HP Misra, I Fridovich, 1972) Активность каталазы

определяли по методу М А Королюк и соавт (1988) Активность глутатионпе-роксидазы определяли по методу В М Моина, основанному на определении скорости окисления глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила Активность глутатионредуктазы в гомогенате плаценты определяли по скорости окисления НАДФН Количество восстановленного глутатиона в гомогенате плаценты определяли по методу GL Ellman (1959) Активность ферментов в гомогенате плаценты и макрофагах пересчитывали на содержание белка, определяемое методом ОН Lowry (1951), в модификации EF Hartrec (1972) Активность ферментов в эритроцитах пересчитывали на содержание гемоглобина

Исследование системы нейтрофилов крови беременных производили до и после проведенного курса медикаментозной терапии Получение культуры нейтрофилов крови проводилось в градиенте плотности (d=l,085) Исследовали спонтанную продукцию NO нейтрофилами и показатели НСТ-теста (К Л Войткевич, 1977, Ю В Шебзухов и соавт , 1998)

Для изучения газотранспортной функции эритроцитов крови исследовали содержание гемоглобина по методу, описанному И С Лугановой, М Н Блиновым (1975) 2,3-ДФГ определяли неэнзиматическим методом Dyse, Bessman в модификации И С Лугановой, МН Блинова (1975) Содержание ПВК оценивали по Фридеману и Хаугену в модификации ПМ Бабаскина (1981), молочной кислоты - по методу, описанному В В Меньшиковым (1987)

Статистическая обработка результатов исследования проводилась согласно общепринятым методам с определением средней арифметической, ошибки средней Статистическую обработку данных проводили с помощью компьютерной программы STATISTICA 6 0 (Statsoft) Достоверность различий между исследуемыми группами определяли с помощью t-критерия Стьюдента после проверки распределения на нормальность Статистически значимыми считали отличия, соответствующие величине ошибки достоверности р<0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Наши исследования показали, что в целом при физиологически протекающей беременности с увеличением гестационного срока от первого к третьему триместру метаболическая активность плацентарных макрофагов характеризуется повышением NO-секреторной активности на 83,6% (р<0,001), падением активности супероксиддисмутазы и каталазы на 64,3% (р<0,001) и 49,4% (р<0,05), соответственно, и падением ферментативной генерации перекиси водорода (табл 1)

Вместе с тем, нами установлено, что в ткани плаценты на протяжении первого триместра беременности отмечается многократное возрастание активности Са2+Л^2+-зависимой эндонуклеазы (р<0,05) без последующего изменения этого показателя в III триместре (рис 1)

Также, в III триместре выявлено снижение содержания ксантина, гипок-сантина и мочевой кислоты на 33%, 18,2% и 28,4% (р<0,05), соответственно, достоверное снижение активности аргиназы на 26,9% (р<0,05) и содержания спермидина и агматина на 46% и 51% (р<0,05), соответственно, возрастание ак-

тивности СОД в 10,5 раз (р<0,01), глутатионпероксидазы и глутатионредукта-зы на 52,7% и 117,6% (р<0,01), соответственно (табл 2, 3)

Таблица 1 Метаболическая активность плацентарных макрофагов в различные _ сроки физиологической беременности (м±т) _

Группы Спонтанная продукция NO (нмоль/ 2 105 клеток) Продукция NO в присутствии ЛПС (нмоль/2 105 клеток) Активность сод, ЕД/мгбелка Активность ка- талазы, мМ/мин г белка

4 -6 нед беременности, п = 12 2,385+0,162 2,479±0,235 8,11 ±0,55 2,04+0,33

7-9 нед беременности, п = 15 2,165±0,173 2,185±0,126 8,15+0,48 1,66±0,32

10 - 12 нед беременности, п = 10 2,440±0,302 2,403±0,272 8,88+0,45 2,59±0,45

III триместр, роды, п = 10 4,221+0,157* 4,430+0,177* 3,17+0,24* 1,31±0,16*

Примечание * - статистически значимые различия (р<0,05)

по сравнению с 10-12 неделями беременности

Рис 1 Активность Ca2+/Mg2+-завнсимой эндонуклеазы в плаценте на протяжении физиологической беременности

4-6 нед 7-9 нед 10-12нед Сроки беременности

Статистически значимые различия (р<0,05) по сравнению с 4-6 нед беременности, с I триместром

Мы полагаем, что метаболическая активность плацентарных макрофагов в I триместре, характеризующаяся относительно низкими показателями секреции оксида азота и высокими показателями продукции перекиси водорода Стремительный рост активности Са2+/Мё2+ -зависимои эндонуклеазы в ядерных экстрактах плаценты от 4 к 8 неделям гестации являются биохимической основой ключевых процессов первого триместра беременности - первой волны инвазии и синцитилизации трофобласта

Таблица 2. Содержание пурииовых дериватов, аргинина и его метаболитов в

плаценте в динамике физиологической беременности (м±т)

Гипоксан- тин мкмоль/г белка Ксантин мкмоль/г белка Мочевая кислота мкмоль/г белка Аргинин н моль/г ткани Путресцин нмоль/г ткани Сперми- дин нмоль/г ткани Агматин нмоль/г ткани

1 триместр n=15 14,53+2,0 19,0+3,65 1,02+0,097 346,8+56 91,9+14,9 160+37,8 38,2+12,4

II! триместр n=10 9,7+0,68 15,55+0,84 0,73+0,03* 308+51,2 67,7+7,5 86,2+13,6* 19,67±3,4*

Примечание * - статистически значимые различия (р<0,05) по сравнению с I триместром

Таблица 3 Активность ферментативной антиоксидантной системы в плаценте на протяжении физиологически протекающей беременности (м±ш)

Группы Активность сод, ЕД/мг белка Активность каталазы, мМ/мин г белка Активность глутатион-пероксидазы, мкМ/мин на 1 г белка Активность глутатион-редуктазы, М/с на 1 г белка Содержание восстановленного глу- татиона, мкмоль на 1г белка

4 -6 нед беременности, п = 12 1,972+0,158 38,41+4,57 18,99+1,38 4,481+0,471 17,17+1,91

7-9 нед беременности, п = 13 1,788+0,190 32,32+4,15 20,29+2,40 4,615+0,656 16,89±1,20

10-12 нед беременности, п = 10 1,268±0,131* 39,45±6,90 13,44±2,14* 5,308+1,119 12,67±2,36

III триместр, роды, п = 10 13,315±3,142* ** 37,71±4,636 20,52±1,66" 11,535+1,322* 17,25±2,89

Примечание * - статистически значимые различия (р<0,05)

по сравнению с 7 - 9 неделями беременности, ** - статистически значимые различия (р<0,05)

по сравнению с 10 — 12 неделями беременности

Очевидно, что выявленная нами максимальная активность СОД плацентарных макрофагов в I триместре беременности обеспечивает высокий физиологический уровень продукции перекиси водорода На ранних стадиях формирования плаценты биологическая целесообразность этого явления, вероятно, связана с активацией транскрипционных факторов NFkB и АР-1 и обеспечением индукции синтеза монокинов и матриксных металлопротеаз в плацентарных макрофагах (С Pustovrh et al, 2000, J A Bowen, J S Hunt, 2000, К Fukushima et

al, 2003) и клетках цитотрофобласта (Р Bischof et al, 1995, 2000, 2002), что необходимо для образования дифференцированного, имплантационно и инвазив-но компетентного трофобласта

При этом инвазивный рост трофобласта должен быть дозированным, строго контролируемым На наш взгляд, плацентарные макрофаги, рекрутируя и активируя большие гранулярные лимфоциты (БГЛ) (Т Burrows et al, 1993), обеспечивают дозированную инвазию трофобласта в эндометрий Основываясь на литературных данных, мы предполагаем существование тесных взаимоотношений между плацентарными макрофагами и БГЛ Вероятно, монокины плацентарных макрофагов стимулируют выработку цитокинов БГЛ и совместно с ними формируют цитокиновую сеть плаценты (М А Пальцев и соавт, 1999, НК Тетруашвили и соавт, 1999, MC Шамугия, 1999, CA Сельков и соавт, 2000, ИИ Крукиер, 2005), обеспечивающую дифференцировку клеток трофобласта (КСФ-1, ГМ-КСФ, ТФР-ß, ФНО-а), продукцию хорионического гонадо-тропина (КСФ-1), ограничение инвазии трофобласта (ТФР-ß, ФНО-а), иммуно-супрессию NK- и Т-клеток и защиту от лизиса ЛАК (у-ИНФ, ТФР-ß) (М А Пальцев и соавт , 1999)

Установленный нами пик активности супероксиддисмутазы в плацентарных макрофагах, приходящийся на I триместр, вероятно, связан также с необходимостью обезвреживания супероксидного анион радикала, и, соответственно, образования пероксинитритов - продуктов окисления NO

Также мы полагаем, что относительно низкий уровень секреции оксида азота в I триместре физиологичен, так как плацентарное кровообращение находится в зачаточном состоянии и для васкуляризации достаточно низкого уровня NO, но значительного содержания полиаминов Поэтому в этот период происходит перераспределение пула аргинина в строну аргиназного пути метаболизма

Кроме того, на роль основного вазодилататора в этот срок беременности может претендовать перекись водорода, представляющая собой фактор гиперполяризации эндотелия (Н Miura et al, 2003)

Тот факт, что увеличение продукции перекиси водорода плацентарными макрофагами совпадает по времени с первой волной инвазии (а, соответственно, и с активацией пролиферации) подтверждает мнение С Н Damsky et al (1992), что инвазия трофобласта является удивительным примером строго дозированного опухолеподобного роста

В определенной степени данный тезис подтверждают выявленные нами особенности содержания азотистых метаболитов в трофобласте в этот период, характеризующие его как низкодифференцированную ткань с высокой проли-феративной активностью - значительный уровень аргинина, путресцина и спермидина на фоне максимальной активности аргиназы при относительно высоком (по сравнению с поздними сроками гестации) содержании пуриновых дериватов — гипоксантина, ксантина и мочевой кислоты

Высокое содержание полиаминов в трофобласте в этот период беременности обеспечивает высокие пролиферативные потенции развивающейся плаценты несколькими механизмами В частности, спермидин в клетках эукариот

может преобразовываться в гипузин (NH2-(CH2)2-CH(0H)-CH2-NH-(CH2),-CH(NH2i-C00H) -необычную аминокислоту, являющуюся неотъемлемой частью eIF5A - эука-риотического фактора инициации 5А (М Н Park et al, 1981), важного индуктора пролиферации (М Н Park et al, 1993)

По всей видимости, высокий уровень полиаминов в трофобласте также вызывает торможение апоптоза (НС На et al, 1997, 1998, L С Penning et al, 1998), а вернее его пролонгирование во времени, что является необходимым на ранних этапах синцитилизации (В Huppertz et al, 2006)

Большой интерес представляют и полученные нами данные об активности антиоксидантных ферментов плаценты Было установлено, что активность глутатионзависимых ферментов и содержание восстановленного глутатиона в I триместре минимальны Скорее всего, это вызвано необходимостью поддержания на низком уровне концентрации восстановленного глутатиона, который подавляет активацию NF-кВ и АР-1 (W Droge, 2002) Выявленный в наших исследованиях низкий уровень активности СОД в плаценте, вероятно необходим для предотвращения нивелирования эффектов АФК, секретируемых плацентарными макрофагами

Синцитиотрофобласт является структурой, вступающей в прямой контакт с эффекторными механизмами иммунной системы матери Эта ткань не только способна самовозобновляться, но также должна приобрести иммунологически привилегированный статус, маскируя и защищая развивающийся плод от цито-токсических и аутоиммунных эффекторных механизмов (Г Т Сухих, Л В Ванько, 2003)

Существует вполне обоснованная теория, что синцитилизация - это пролонгированный во времени процесс апоптоза, при котором активность эффекторных каспаз блокируется высоким уровнем антиапоптогенных молекул семейства Bcl-2, Flip, IAP (В Huppertz et al, 2006) Таким образом, в образующемся синцитии эффекторная каспаза-3 синтезируется, но находится в неактивном состоянии, поэтому ферментативной деградации CAD/DFF 45 (ингибитора Ca2+/Mg2+-3aBHCHMoft эндонуклеазы) не происходит Это, очевидно, и определяет установленную нами крайне низкую активность Ca2+/Mg2+-зависимой эндонуклеазы в трофобласте на 4-6 неделях беременности

В течение 3 - 4-х недель после синцитиального слияния происходит активация эффекторных каспаз 3 и 6 в специфических участках синцитиотрофобла-ста (В Huppertz et al, 1998, В Huppertz et al, 1999), что ведет к расщеплению CAD/DFF 45 и, по нашим данным, активации Ca2+/Mg2+-3aBHCHMofi эндонуклеазы, которая выявлена нами на 7-9 неделях беременности Мы полагаем, что это является механизмом завершения формирования синцития первой генерации и началом его самовозобновления, который в дальнейшем поддерживается в плаценте на постоянном уровне вплоть до отторжения ее в процессе родов

Представления о «молекулярном диалоге» между отдельными элементами сложной плацентарной системы мы попытались представить на рис 2

Инвазия трофобласта Синцитилизация

Рост плаценты

Рис 2 Метаболическая система плаценты в I триместре физиологической беременности

Как следует из рисунка, одно из центральных мест в метаболической регуляции плацентарного комплекса в I триместре занимают плацентарные макрофаги, которые, синтезируя оксид азота, АФК и монокины, стимулируют сек-

реторные и иммунносупрессорные свойства БГЛ плаценты, регулируют биохимические процессы, формирующие метаболический фундамент пролиферации и пролонгации апоптоза в трофобласте, тем самым обеспечивая его дозированный, ограниченный инфильтративный рост, дифференцировку и иммунологическую адаптацию

Последний триместр беременности сопровождается относительным замедлением роста плаценты, наиболее выраженным в 36-40 недель, однако плацента продолжает обеспечивать потребности быстро растущего плода (АП Милованов, 1999)

В конце физиологической беременности происходят изменения метаболических характеристик как плацентарных макрофагов, так и ткани плаценты

Результаты наших исследований свидетельствуют, что к концу III триместра секреция N0 плацентарными макрофагами нарастает, и при естественном родоразрешении в срок уровень продукции N0 выше соответствующих показателей I триместра на 83,6% Это сопровождается снижением активности СОД и каталазы в плацентарных макрофагах на 64% и 49,4%, соответственно

Изменение характера метаболической активности плацентарных макрофагов в конце беременности выражается, как нами показано, в повышении продукции оксида азота, обладающего ангиогенным и вазоактивным эффектами (Sladek S М, Magness R R, Conrad К Р , 1997), снижении генерации перекиси водорода (снижение пролиферативного эффекта, синтеза интегринов и мат-риксных металопротеаз) и дисмутации супероксиданионрадикала, что увеличивает риск образования пероксинитрита Наши данные согласуются с результатами динамики содержания нитритов в сыворотке крови при физиологической и осложненной беременности (С И Назарова и соавт , 2005)

Нами установлено, что заключительный период беременности характеризуется достаточно высоким, достигнутым ранее, уровнем активности Са27ГУ^2+-зависимой эндонуклеазы, неизменной активностью цитохромоксида-зы и низким относительно I триместра содержанием пуриновых дериватов (содержания ксантина, гипоксантина и мочевой кислоты снижается на 33,0%, 18,2% и 28,4%), соответственно) Вероятно, эти признаки характеризуют процессы старения плаценты и ее подготовки к родам Это выражается в высокой потенциальной готовности к апоптозу, снижении интенсивности процессов белкового синтеза, о чем может свидетельствовать низкое содержание пуриновых метаболитов

Об угнетении пролиферативных процессов в плаценте в этот срок указывает выявленная нами низкая активность аргиназы (на 26,9% меньше чем, в I триместре) и снижение уровня путресцина и спермидина (на 46,0% и 51,0%, соответственно), что свидетельствует не только о подавлении митотической активности клеток ткани плаценты, но и ослаблении участия плаценты в процессах обезвреживания аммиака Вероятно, в начале беременности, когда печень плода еще не сформирована, плацента является лидирующим органом в процессе обезвреживания аммиака Но по мере морфологического и функционального созревания, печень плода начинает играть доминирующую роль в этом процессе, и участие плаценты в детоксикации заметно ослабевает

Со стороны ферментативной антиоксидантной системы наблюдались значительное увеличение активности СОД в 10,5 раз при относительно неизменном уровне каталазы и возрастание активности глутатион-зависимых ферментов (глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы на 52,7% и 145,9%, соответственно)

Наши представления о молекулярной организации регуляции фетопла-центарного комплекса в III триместре представлены на рис 3

Плацентарные

Снижение темпов роста

Рис 3 Метаболическая система плаценты в III триместре беременности

Как следует из рисунка 3, основной регуляторной молекулой плацентарных макрофагов из группы АКМ является N0, который, поддерживая вазоди-латацию спиральных артерий матки, обеспечивает адекватную фетоплацентар-ную гемодинамику Действуя на клетки плаценты, N0, по-видимому, ингиби-рует аргиназный путь метаболизма и вызывает снижение синтеза полиаминов Данный механизм приводит к торможению пролиферативных процессов и соответственно снижению темпов роста плаценты С другой стороны, вероятно, N0 активирует АКБ-зависимый ответ, что проявляется в повышении активности антиоксидантных ферментов Известно, что в структуру АЯЕ-ответа входит также активация гемоксигеназы II (К К/акаБО & а1, 2003), образующей СО, который, обладая миорелаксирующим эффектом, совместно с N0 обеспечивает вазодилатацию

Таким образом, плацентарные макрофаги, обеспечивающие иммунологическую адаптацию фетоплацентарного комплекса, участвуют в регуляции молекулярных процессов формирования плаценты К таким метаболическим процессам, в частности, относятся процессы деградации ДНК и нуклеотидов, аргиназный и декарбоксилазный пути обмена аргинина, метаболизм активных форм кислорода и глутатиона В течение физиологической беременности в плаценте наблюдаются реципрокные взаимоотношения между ЫО-синтазным и аргиназ-ным путями метаболизма аргинина нарастает интенсивность ЫО-синтазного пути в плацентарных макрофагах и снижается активность аргиназного пути в ткани плаценты, что отражает значимость ауторегуляторных механизмов в процессе формирования плаценты и регуляции фетоплацентарной гемодинамики

Молекулярные основы патологического течения беременности в I триместре

Известно, что при раннем самопроизвольном аборте происходит нарушение имплантации и плацентации При этом, по нашим данным, наблюдаются изменения в метаболизме плацентарных макрофагов, модифицирующие их ре-гуляторное влияние на трофобласт, что сопровождается метаболическими изменениями в клетках хориона

Метаболические особенности плацентарных макрофагов при раннем самопроизвольном аборте характеризуются гиперпродукцией оксида азота, на фоне незначительного снижения активности СОД на 13,0% и выраженного увеличения активности каталазы на 33,2% (рис 4), приводящего к уменьшению генерации перекиси водорода и дисмутации супероксидного анионрадикала, что увеличивает риск образования пероксинитрита

Плацентарный метаболизм при самопроизвольных абортах характеризуется снижением активности аргиназы на 48,7% и, как следствие, подавлением синтеза полиаминов (уровень аргинина, путресцина, спермидина и агматина падает на 59,3%, 59,5%, 71,5% и 70,3%, соответственно), уменьшением содержания гипоксантина и ксантина на 42,7% и 34,9%, соответственно (рис 5), что позволяет полагать о депрессии процессов синтеза белка, сопровождающейся снижением деградации интронных последовательностей мРНК

Спонтанна продукция оксида азота

Продукция оксида азота в присутствии Л ПС

Физиологическая Ранний Неразвивающаяся беременность самоаборт беременность

*■ статистически значимые различия по сравнению с физиологическим течением беременности (р<0,01}

РИС. 4. Продукция оксида азота плацентарным к макрофагами при самопроизвольном аборте и неразвивающейся беременности в I триместре.

Также отмечено повышение уровня мочевой кислоты на 236,3% на фоне достоверного возрастания активности цитохромоксидазы на 23,5%.

Аитиоксидантная система трофобласта при данной патологии характеризуется достоверным угнетением активности СОД на 42,7%, но повышением активности каталазы и глутатнонредуктазы на 46,2% и 34,3%, соответственно.

350 - % от показателей

при физиологичаском течении беременности

250 200

150

100

50 0

* Г—1

дп

П П П п п

СС

I <

Б ^ 3 ^ л

Ё о

5 Ч

< I

В с

у С,

о о

X о

(О X

* т

и §

га£ !Е та 4 О С

л & N 1

о 3 11 ш л

< I

11 <1

— Физиологическое течение беременности * - статистически значимые различия по сравнению с физиологическим течением беременности (р<0,05)

Рис. 5. Биохимические показатели в плаценте при рапием самопроизвольном аборте.

Из данных литературы известно, что при ранних самопроизвольных абортах в децидуальной оболочке снижается содержание и активность БГЛ, но увеличивается количество Т-лимфоцитов (Н В Крошкина, 1997) Вместе с тем, при данной патологии повышен уровень провоспалительных интерлейкинов ТЬ,-иммунного ответа ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-12, ФНО-а и снижен - ИЛ-10 (ТЬ-иммунный ответ) (И И Крукиер, 2005), что свидетельствует о растормажива-нии клеточного иммунного ответа Вероятно, повышение секреции оксида азота и уменьшение перекись-зависимого регуляторного каскада приводит к снижению иммуносупрессивных свойств плацентарных макрофагов и БГЛ, активации Т-эффекторов, осуществляющих лизис трофобласта и N0-индуцированной аутофагии

Метаболические изменения, происходящие в самом трофобласге, свидетельствуют о снижении процессов пролиферации (депрессия аргиназного пути обмена аргинина) и развитии тканевой гипоксии (активация цитохромоксидазы, вероятно, вследствие разобщения окислительного фосфорилирования)

Накопление мочевой кислоты (рис 5) является отражением развивающейся в трофобласте гипоксии, которая создает условия для активации ксанти-ноксидазы, катализирующей последовательное превращение гипоксантина в ксантин и далее в мочевую кислоту Надо полагать, что накопление мочевой кислоты в ткани трофобласта вносит свой вклад в патогенез самопроизвольного аборта, вызывая явления эндотелиальной дисфункции и, соответственно, нарушение формирования сосудов фетоплацентарного комплекса

Учитывая факт активирующего влияния мочевой кислоты на экспрессию циклооксигеназы-2 (Д КапеШв й а1, 2003), ее избыточное образование в тканях трофобласта при самопроизвольных абортах может привести к гиперпродукции простагландина Р2<1, вызывающего повышение сократительной активности миометрия и, соответственно, индукцию «механики» самопроизвольного аборта

Направленность изменений активности СОД и каталазы в клетках трофобласта при этой патологии соответствует таковой в плацентарных макрофагах, но выражена в большей степени Вероятно, снижение генерации перекиси водорода, вследствие угнетения активности СОД на 42,7%, и повышение активности каталазы на 46,2%, сопровождается снижением стимулирующего влияния Н202 на пролиферацию трофобласта, синтез интегринов и матриксных металлопротеиназ, что приводит к депрессии инвазивного поведения трофобласта и отторжению плодного яйца В то же время выявленная активация глута-тионового звена отражает компенсаторный механизм, направленный на сохранение беременности путем активации глутатионзависимого мембранного транспорта аминокислот, детоксикации, ингибирования эффекторных каспаз

Несмотря на определенное проапоптогенное влияние на клетки трофобласта (гипоксия, оксид азота, провоспалительные цитокины) нами не выявлено повышение активности Са2+ЛМ§2+-зависимой эндонуклеазы в клеточных ядрах плаценты Напротив, активность данного фермента имела тенденцию к снижению, что, вероятно, отражает нарушение формирования синцитиотрофобласта

и, соответственно, несостоятельность антигенного экранирования от агрессии иммунной системы матери.

200 % от показателей

при физиологическом течении беременности

100

П п

=1 О О

г'

Ь о

% о.

< и

И5 >>

Iй-

< I

ев

о с;

СО и

и о

эе х

о» ^

о:

шл Й л

5; И £ И

_ Я £ М

¡К

В о Ь О

о5 <г

II о

о п п

5 5 1

Ё <

- Физиологическое течение беременности

' - статистически значимые различия по сравнению с физиологическим течением беременности (р,:С,СЬ;

Рис; 6. Биохимические показатели в плаценте при неразвивающейся беременности в I триместре.

При неразвивающейся беременности (рис. 6) на фоне изменений, свойственных раннему самопроизвольному аборту, нами выявлены более выраженные декомпенсированпые изменения в глутатионовом звене антиоксидантной защиты, обмене аргинина и деградации пуриновых нуклеотидов. В частности, изменение содержания ксантина, гипоксантина (уменьшение на 49,3% и 51,6%, соответственно), полиаминов (снижение содержания аргинина, путрес-цина, спермидина и агматина на 58,4%, 54,3%, 76,9% и 78,2%, соответственно) носят более выраженный характер. В то же время, уровень мочевой кислоты повышается не столь звачительно (на 99%) и наблюдается выраженное снижение содержания аллантоина на 21,8% (рис. 6).

Также при неразвивающейся беременности в отличие от самопроизвольных абортов наблюдается отсутствие активации биоэнергетических процессов, о чем свидетельствует неизменная активность цитохромоксндазы, и депрессия глутатионовой антиоксида нтной системы (падение активности II10 на 51,0% н снижение уровня восстановленного глутатиона более чем на треть относительно физиологических значений).

Эти биохимические особенности неразвивающейся беременности несомненно являются факторами, дополнительно усугубляющими нарушения в регуляции развития беременности и приводящими не только к ее прекращению,

но и отсутствию включения эффекторных механизмов отторжения плодного яйца

В связи с этим патогенетически обоснованным представляется назначение пациенткам с высоким риском развития неразвивающейся беременности тиоловых антиоксидантов с целью стимуляции глутатион-независимых деток-сикационных процессов в плаценте

Молекулярные основы патологического течения беременности во II триместре

Индуцированная острая плацентарная недостаточность (ИОПН) и поздний самопроизвольный аборт (ПСА) характеризуются изменениями метаболических характеристик плацентарных макрофагов, сходными со случаями ранних самоабортов Об этом свидетельствует повышение на 36,8% и 50,8% МО-секреторной активности и значительное снижение активности СОД на 42,5% и 70,7% при ИОПН и ПСА, соответственно Единственным отличием в характеристике плацентарных макрофагов при данных состояниях, при сравнении с патологией I триместра, - это значительное снижение активности каталазы на 48,3% и 80,3%) при ИОПН и ПСА, соответственно, что влечет повышение соотношения СОД/каталаза и, как следствие, увеличение генерации перекиси водорода (табл 4)

Таблица 4 Продукция оксида азота плацентарными макрофагами при острой плацентарной недостаточности и при позднем самопроизвольном аборте (М±ш)

Группы Спонтанная продукция оксида азота (нмоль/2105 клеток) Продукция оксида азота в присутствии ЛПС (нмоль/2105 клеток) Активность сод, ЕД/мг белка Активность каталазы, мМ/мин г белка

10 -12 нед беременности, п = 10 2,440+0,302 2,403+0,272 8,88+0,45 2,59+0,45

Индуцированная острая плацентарная недостаточность, п = 19 3,338+0,146* 3,439+0,162* 5,11+0,48* 1,34+0,38*

Поздний самопроизвольный аборт, п = 10 3,679+0,378* 3,728±0,311* 2,60±0,69* ** 0,51+0,16* **

Примечание *- статистически значимые различия (р<0,01)

по сравнению с физиологическим течением беременности, статистически значимые различия (р<0,01) по сравнению с острой плацентарной недостаточностью

Таким образом, особенность реагирования плацентарных макрофагов на патологические сигналы во II триместре беременности заключается в гиперпродукции оксида азота и перекиси водорода

Плацентарный метаболизм при данных патологических состояниях II триместра беременности характеризуется депрессией обмена аргинина (при поздних самопроизвольных абортах уровень аргинина, путресцина, спермидина и агматина снижен на 71,1%, 56,5%, 84,1% и 60,1%, а при ИОПН - на 71,7%, 61,9%, 75,6% и 40,7%, соответственно), активацией процессов деградации ДНК и нуклеотидов, (проявляющейся в достоверном возрастании на 43,6% и 183,4% активности Ca27Mg2+-3aBnciiMOH эндонуклеазы, цитохромоксидазы на 35,6% и 27,6% при ОИПН и ПСА, соответственно, накоплением пуриновых дериватов -повышением содержания гипоксантина, ксантина и мочевой кислоты на 96,1%, 100,8% и 58,8%, соответственно, при ИОПН и мочевой кислоты на 159,8% - при ПСА) Ферментативная антиоксидантная система характеризуется значительным снижением активности каталазы на 62,8%, но повышением активности СОД на 54% при поздних самопроизвольных абортах (при ИОПН активность этих ферментов не претерпевает статистически значимых изменений)

Вероятно, в ответ на повреждение, плацентарные макрофаги активируют секрецию оксида азота, являющегося эндотелиальным фактором релаксации сосудов Учитывая тот факт, что оксид азота активирует продукцию мощного стимулятора ангиогенеза - сосудистого эндотелиального фактора роста (LP Reynolds, DA Redmer, 2001), увеличение продукции NO способствует ремоделированию сосудистого русла ворсин и обеспечению адекватного трансплацентарного обмена Вместе с тем, повышение продукции NO способствует активации апоптической гибели клеток плаценты, что подтверждается высокой активностью Ca27Mg2+-3aBHCHMoft эндонуклеазы и накоплением пуриновых метаболитов Учитывая, что этому сопутствует активация цитохромоксидазы, мы предполагаем, что оксид азота реализует свое апоптогенное влияние за счет митохондриального пути апоптоза

Снижение активности СОД на фоне тенденции к повышению активности каталазы и активация глутатионпероксидазы, по всей видимости, приводит к снижению содержания Н202 в ткани плаценты и поэтому может способствовать ослаблению пролиферативной активности в плаценте

Кроме того, снижение активности аргиназы в ткани плаценты сопровождается, во-первых, уменьшением содержания полиаминов и поэтому приводит к торможению пролиферации, а, во-вторых, - уменьшением образования мочевины и, соответственно, ослаблением ее стабилизирующего эффекта по отношению к биополимерам, что вызывает лабилизацию клеточных структур

Под действием этого и, возможно, ряда других факторов в условиях измененной активности антиоксидантных ферментов происходит выраженная активация процесса апоптоза в плаценте, свидетельством чего на молекулярном уровне является резко возрастающая при позднем самопроизвольном аборте активность Ca2+/Mg2+-3aBHCHMott эндонуклеазы Мы полагаем, что коррекция окислительного статуса у пациенток с угрожающим поздним самопроизволь-

ным абортом может явиться перспективной тактикой для предотвращения окислительной активации белка р53 и индукции апоптоза клеток плаценты

Молекулярные основы хронической фетоплацентарной недостаточности в III триместре

При фетоплацентарной недостаточности в III триместре нами выявлено достоверное снижение продукции оксида азота плацентарными макрофагами на 28,7%, что, по-видимому, является одним из звеньев патогенеза нарушений морфогенеза плаценты и кровоснабжения фетоплацентарного комплекса (табл 5) В этом плане наши результаты согласуются с данными К А Габело-вой и соавт (2000), JIЕ Мурашко и соавт (2000), выявившими снижение NO-синтазной активности в плаценте при гестозе

Таблица 5. Метаболическая активность плацентарных макрофагов в III триместре при физиологической и осложненной беременности (М±т)

Группы Спонтанная продукция оксида азота (нмоль/2 105 клеток) Продукция оксида азота в присутствии ЛПС (нмоль/ 2 105 клеток) Активность сод, ЕД/мг белка Активность каталазы, мМ/мин г белка

Физиологическая беременность, п = 10 4,221±0,157 4,430±0,177 2,73+0,56 1,46±0,32

ФПН, п = 12 3,010+0,167* 3,145+0,212* 4,76+0,34* 1,89+0,33

Примечание * - статистически значимые различия (р<0,01)

по сравнению с физиологическим течением беременности

При исследовании антиоксидантных ферментов в плацентарных макрофагах было установлено значительное повышение активности СОД при фетоплацентарной недостаточности на 74,4% в то время как активность каталазы не претерпевала достоверных изменений Такая модуляция соотношения этих ферментов обуславливает снижение содержания супероксидного анионрадика-ла, возможность возникновения пероксинитрильного радикала и увеличение генерации перекиси водорода в плаценте, что свидетельствует об участии плацентарных макрофагов в компенсаторно-приспособительных реакциях

Согласно полученным нами данным, фетоплацентарная недостаточность сопровождается дезорганизацией системы антиоксидантных ферментов в плаценте Изменение восприимчивости клетки к сигналам, опосредуемым усилением продукции АКМ, может быть важным компонентом патогенеза при развитии дисфункции плаценты В условиях родовой деятельности при фетоплацентарной недостаточности нами выявлена извращенная реакция антиокси-дантной системы, характеризующаяся противоположно направленными изменениями активности антиоксидантных ферментов

В плацентах при фетоплацентарной недостаточности {рис. 7) мы обнаружили более высокую на 60,4% (р<0,001) активность пито х ро м о кс и даз ы, связанную, вероятно, с активацией биоэнергетических процессов, характерной для неблагоприятных ситуаций и развития тканевой гипоксии (З.И. Микашинович, 1989). С другой стороны, снижение продукции N0 может быть патогенетичеси связано с активацией цитохромоксидазы, т.к. недостаток N0 снимает ингиби-рующее действие этого радикала на митокондриальную электронотранспорт-ную цепь за счет уменьшения уровня образования перокс и нитритов (С.Я. Проскуряков и соавт., 1999).

%от показателей при физиологическом

360 300

250 200 150 100 50 О

точени бере г менности * —•

* п - ■ т— 1 ■ п п П п п

et о о

< [

£ 5

j -J

о!

х £

л >.

I ч

Ёщ

. а.

< i

о £ О

о ?

Ё <

& с

I о

ГС i

щ С б

О о

* '

- га га

i I

я!

о ч т т

[D ^

5'1

<f £

6s < ^

■ ■ ■ ■ — Физиологическое течение беременности

4 - статистически значимые различия по сравнению с физиологическим течением беременности (р<0,05)

Рис. 7. Биохимические показатели в плаценте при ПМ.

Активность Са /Мй2+-зависимой эндонуклеазы, свидетельствующей об интенсивности эффекторных механизмов апоптоза в плаценте при ФПН достоверно не отличалась от физиологических показателей.

Вместе с тем, нами отмечено статистически достоверное повышение концентрации ксантина, гипоксантина и мочевой кислоты в плаценте на 129,5%, 83,7% и 213,7%, соответственно, на фоне снижения активности аргиназы на 72% и содержания аргинина, путресцина, спермидина и агматина на 53%, 36,7%, 54% и 50,3%, соответственно. С одной стороны, это указывает на низкую проляферативную активность клеток ткани плаценты, а с другой - на достаточно высокий уровень деградации пуриновых нуклеотидов.

Во-первых, это может быть отражением активации в плаценте процесса апонекроза, вызывающего поступление в кровоток матери крупных фрагментов ДНК, синтициальных белков, G-актнна, активирующих аллоиммунную агрессию материнского организма (D.W. Morrish, 2001; В. Huppertz, J, Kigdom, 2004),

Во-вторых, это может быть свидетельством активации ПКГ без фрагментации ДНК (и, соответственно, без активации Ca2+/Mg2+-3aBHCHMoii эндонук-леазы) В этом случае эффекторные каспазы активируют TIAR (Т-клеточнорестриктивный внутриклеточный антиген-зависимый белок), ускоряющий деградацию РНК (А Kawakami et al, 1992, цит по В Huppertz, J Kigdom, 2004)

Наконец, активация цитохромоксидазы и увеличение содержания мочевой кислоты свидетельствует в пользу развития гипоксического повреждения плаценты

Накопление мочевой кислоты в плаценте является патогенетическим механизмом фетоплацентарной недостаточности, вызывающим развитие эндоте-лиальной дисфункции сосудов фетоплацентарного комплекса и, соответственно, и еще больше нарушающим кровообращение в системе «мать-плацента-плод» Таким образом, избыточное накопление мочевой кислоты в плаценте приводит к формированию «порочного круга» в рамках патогенеза фетоплацентарной недостаточности, усугубляющего ишемизацию плаценты и нарушение фетоплацентарного кровотока

Таким образом, при плацентарной недостаточности наблюдается своеобразный «паралич» обмена аргинина, выражающийся в снижении интенсивности всех трех путей его метаболизма - NO-синтазного в плацентарных макрофагах, аргиназного и декарбоксилазного - в плаценте

Из этого следует, что применение препаратов - доноров оксида азота и активаторов NO-синтазы в III триместре осложненной беременности в отличие от патологии I и II триместров (когда усиление продукции оксида азота может иметь негативные последствия), может явиться перспективным направлением лечения этой патологии

При анализе закономерностей становления плацентарного метаболизма при физиологическом течении беременности и формирования метаболических ответов плаценты при осложненном течении нельзя не остановиться на ряде знаменательных фактов - достоверном повышении на 10,9% содержания ал-лантоина в трофобласте на 7-9 неделях физиологической беременности (рис 8), отсутствии выраженной активности Са2+/М^>2+-зависимой эндонуклеа-зы на 4-6 неделях физиологической беременности, достоверном повышении активности глутатионпероксидазы, но отсутствии такового со стороны катала-зы в динамике физиологической беременности, повышении активности Ca2 7Mg2 ^-зависимой эндонуклеазы при патологии II триместра, не наблюдающемся при осложненной беременности в I триместре

Данные явления, на наш взгляд, можно рассмотреть с позиций их филогенеза

Аллантоин - продукт окисления мочевой кислоты под действием урика-зы Однако, в процессе эволюции гоминоид около 13-24 млн лет назад произошла инактивация гена уриказы в результате восьми независимых мутаций (М Oda et al, 2002)

Апоптоз - одна из основных форм программированной клеточной гибели, характерный для многоклеточных организмов и отсутствующий у простейших и прокариот %

120

100 80 60 40 20

Рпс. 8 Содержание аллантоина в гомогенатах плаценты в динамике физиологической беременности

4-6 нед

7-8 нед 9-12нед IIIтриместр Сроки беременности

- статистически значимые различия по сравнению с предыдущим сроком (р < 0,05)

Глутатионпероксидаза - фермент, эволюционно относительно новый, характерный только для высших организмов, в то время, как каталаза определяется практически во всех, даже самых древних клеточных формах жизни

Вероятно, эпизодическая активация образования аллантоина, постепенное включение апоптотических процессов и нарастание активности глутатио-новых антиоксидантных ферментов в плаценте являются иллюстрацией филогенетического закона

Кроме того, сопоставление динамики содержания аллантоина в сыворотке крови с показателями хемилюминесцентного анализа выявило определенные однонаправленные изменения уровня аллантоина и активности СР-процессов

до 8 недели беременности (рис 9) %

6 8 10 13 15 17 28 37-40

Сроки беременности (нед ) * - статистически значимые различия

по сравнению с показателям у небеременных (р < 0,01) Рис 9 Содержание аллантоина и хемилюминесценция в сыворотке крови беременных женщин

Ранние сроки беременности, характеризуются переходом организма матери на новый метаболический уровень и достаточно мощными перестройками в системе нейроэндокринной регуляции, которые, по-видимому, проходят через стадию стресса Это отражается в резком возрастании уровня СР-процессов и, как адаптивный механизм, - в повышении уровня антиоксидантов в крови матери, в частности, аллантоина, возможно, за счет СР-деструкции мочевой кислоты

К 10-13-ой неделе беременности устанавливается новый стационарный уровень обменных процессов - на фоне резкого увеличения пула аллантоина в крови активность СР-процессов падает даже ниже контрольного уровня

Нами выявлено, что в крови беременных с фетоплацентарной недостаточностью регистрируется понижение выработки МО-радикала на 27,82% и повышение интенсивности «респираторного взрыва» нейтрофилов крови в НСТ-тесте на 8,6%, увеличение концентрации молочной кислоты в плазме на 55,94%) и в эритроцитах на 25%, свидетельствующее об активации гликолити-ческой оксидоредукции и формировании гипоксии, снижение содержания 2,3-ДФГ в эритроцитах на 40%, что указывает на повышение сродства гемоглобина к кислороду и увеличение кислородной емкости крови, высокий уровень активности каталазы в эритроцитах

На этом основании нами были отобраны информативные биохимические маркеры фетоплацентарной недостаточности и критерии эффективности ее лечения

Выявленные общие закономерности метаболических сдвигов позволили нам теоретически обосновать направление коррекции фетоплацентарной недостаточности с применением препаратов аргинина и изосорбида динитрата

Суммируя выявленные нами эффекты различных вариантов лечения фетоплацентарной недостаточности (рис 10) можно постулировать следующее

Применение стандартной схемы лечения фетоплацентарной недостаточности (подгруппа На), не влияя на процессы гликолитического окисления глюкозы в эритроцитах, продукцию нитроксильного радикала нейтрофилами крови, вызывает повышение генерации активных форм кислорода нейтрофилами крови на 2,4% (0 1>р>0 05), возрастание активностей СОД и каталазы в эритроцитах на 20,26%) и 16,04%), соответственно (р<0,05), увеличение гематокрита (р<0,05) Таким образом, при данном варианте лечения в организме беременных не происходит адаптивных модуляций в аффинитете гемоглобина и гемо-динамических изменений в фетоплацентарной гемодинамике, но уровень регуляции ПОЛ переходит на более высокий уровень

Тем не менее, анализ состояния плодов по данным КТГ-исследования показал наличие положительной динамики в данной подгруппе и этот показатель составил 7,12±0,69 и 7,47±0,62 балла до и после лечения, соответственно Оценка состояния новорожденных в исследуемой подгруппе по шкале Апгар на 1-ой и 5-ой минутах составила 6,66±0,55 и 7,56±0,57, соответственно

При добавлении аргинина к стандартной схеме лечения (подгруппа Иб) произошли следующие изменения

• достоверно активировалась на 19,2% выработка оксида азота нейтрофи-лами крови на фоке снижения показателей НСТ-теста на 5,5% (р<0,05);

• достоверно снизились концентрации пирувата и лактат в плазме крови на 10,6% и 11,0%, соответственно;

• произошло снижение на 15,7% уровня пирувата (р<0,05) и повышение на 28,3% содержания 2,3-ДФГ в эритроцитах;

• возросла на 21,44% активность каталазы (р<0,05) на фоне прежнего уровня СОД;

» произошло достоверное снижение систол о-диастол и чес ко го отношения н маточных и пупочных артериях на 27,35% и 15,9%, соответственно.

Таким образом, в данной подгруппе беременных наблюдается модуляция аффинитета гемоглобина 2,3-ДФГ, снижение интенсивности кислородзависи-мых механизмов фагоцитоза нейтрофилов, усиление разложения пероксида водорода каталазой эритроцитов, а также восстанавливается ЬЮ-секреторная активность нейтрофилов и нормализуются показатели фетоплацентарной гемодинамики.

Показатели состояния плодов по данным КТГ-исследопания, полученные после терапии во 1!б подгруппе были достоверно выше (р<0.01), чем во Па подгруппе и составили 7,96±0,5 балла. Показатели оценки состояния новорожденных по шкале Лпгар на 1-й и 5-й минутах в данной подгруппе были практически идентичны таковым в группе с физиологической беременностью и составили 7,32±0,65 и 7,92±0,4 соответственно.

В плазме

В эритроцитах

Физиологическая Ёвреманноот!.

\ Да лечения

После лечения: группа Л а группа Л б

Группа ! I е{

- статистически значимые различия по сравнению с показателями до лечения (р <0,05}

Пируват

2.3-ДФГ

Рис. 10. Результаты метаболической коррекции ФПН.

Применение изосорбида динитрата (подгруппа Пв) вызвало

• достоверное снижение уровня лактата на 15,2% и значительное повышение на 35,4% содержания 2,3-ДФГ в эритроцитах,

• достоверное снижение на 20% уровня пирувата в плазме крови без значимых изменений в содержании лактата,

• отсутствие видимых изменений в N0 и АФК-секреторных свойств ней-трофилов и антиоксидантной системе эритроцитов,

• снижение систоло-диастолического отношения в маточных артериях на 9% (р<0,05) без выраженных изменений в пупочных артериях

Следствием данных изменений является положительная динамика в состоянии плодов по данным КТГ, уступающая по степени выраженности Пб подгруппе, но соответствующая показателям На подгруппы - 7,14±0,74 и 7,6±0,68 баллов, соответственно, до и после проведенного лечения Состояние новорожденных, оцененное по шкале Апгар также соответствовало значениям Па подгруппы и составило 6,6±1,42 и 7,25±1,53 на 1-й и 5-й минутах соответственно

Таким образом, предложенный и апробированный нами способ метаболической коррекции плацентарной недостаточности с применением аргинина позволяет достичь нормализации кислородтранспортной функции крови путем индукции толерантного «гипобиотического» модулирования гликолиза (В И Ку-линский, И А Ольховский, 1992), увеличивая его эффективность как поставщика 2,3-ДФГ, метаболической трансформации эритроцитов, сопровождающейся уменьшением гематокрита и, соответственно, вязкости крови Данный способ позволяет добиться нормализации метаболической активности нейтрофилов крови путем восстановления МО-секреторной активности и снижения генерации АФК до физиологического уровня Следствием данных изменений и преодоления эндотелиальной дисфункции происходит восстановление фетоплацентарной гемодинамики и, как следствие, улучшаются перинатальные исходы

Результаты исследований позволили нам сформировать концепцию о системной организации метаболизма в плаценте, согласно которой

• при физиологическом течении беременности формируется единая метаболическая система между различными клеточными популяциями плаценты, в которой системообразующими элементами являются секреторные АКМ плацентарных макрофагов - перекись водорода и оксид азота,

• формирование данной системы подчиняется принципам реципрокности, показывает значимость механизмов ауторегуляции и отражает филогенетический закон,

• нарушение координированной последовательности регуляторных влияний вызывает диссоциацию единой метаболической системы, что приводит к осложненному течению беременности,

• восполнение продукции оксида азота (системообразующего элемента в III триместре беременности) при метаболической коррекции ФПН аргинином приводит к восстановлению фетоплацентарной гемодинамики и улучшению перинатальных исходов

выводы

1 В динамике физиологической беременности от первого к третьему триместру происходят фазные изменения метаболической активности плацентарных макрофагов, характеризующиеся возрастанием ИО-секреторной активности, снижением активности СОД и каталазы

2 В процессе формирования плаценты происходят изменения метаболического обеспечения пролиферации на уровне аргиназного пути метаболизма, характеризующиеся максимальной активностью аргиназы и высоким уровнем аргинина, путресцина, спермидина и агматина в ткани плаценты в первом триместре беременности и минимальным их содержанием - в третьем

3 При физиологическом течении беременности с увеличением гестацион-ного срока в плаценте регистрируется возрастание активности антиокси-дантных ферментов и Са2+/Мё2+ -зависимои эндонуклеазы, сопровождающееся снижением содержания мочевой кислоты

4 В динамике физиологической беременности наблюдаются реципрокные изменения в ИО-синтазном пути обмена аргинина в плацентарных макрофагах и аргиназном пути обмена в плаценте, а также разнонаправленные изменения активности антиоксидантных ферментов в плацентарных макрофагах и ткани плаценты

5 В динамике физиологической беременности максимальное содержание аллантоина в тканях плаценты наблюдается на 7-9 неделях Ранние сроки беременности характеризуются синхронным повышением содержания аллантоина и возрастанием уровня свободнорадикальных процессов в сыворотке крови К 10-13-ой недели беременности устанавливается новый стационарный уровень обменных процессов, характеризующийся резким увеличение пуча аллантоина в крови и падением активности свободнорадикальных процессов

6 При осложненном течении беременности в зависимости от сроков формируются различные метаболические ответы со стороны плацентарных макрофагов Патологические состояния I и II триместров сопровождаются достоверным повышением продукции оксида азота и снижением активности СОД, а хроническая фетоплацентарная недостаточность в третьем триместре отличается достоверным снижением секреции оксида азота и возрастанием активности СОД

7 В плаценте осложненное течение беременности сопровождается значительной депрессией обмена аргинина и выраженным дисбалансом в анти-оксидантной системе

8 Осложненная беременность характеризуется достоверными изменениями показателей деградации нуклеотидов и нуклеиновых кислот Достоверное снижение содержания аллантоина в плаценте наблюдается при неразвивающейся беременности и позднем самопроизвольном аборте При патологии второго триместра отмечено повышение активности Са2+/1^2+-зависимой эндонуклеазы

9 Фетоплацентарная недостаточность характеризуется понижением выработки N0 радикала и активацией кислородзависимых механизмов фагоцитоза нейтрофилов крови В эритроцитах наблюдается снижение содержания лактата и 2,3-ДФГ и высокий уровень активности каталазы, в сыворотке и плазме крови - увеличение концентрации аллантоина и молочной кислоты по сравнению с физиологической беременностью

10 Добавление аргинина к стандартной схеме лечения вызывает достоверную активацию секреции оксида азота нейтрофилами крови, на фоне снижения интенсивности кислородзависимых механизмов фагоцитоза, уменьшение концентрации пирувата и лактата в плазме крови, падение уровня пирувата, повышение содержания 2,3-ДФГ и активности каталазы в эритроцитах

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 Изменение концентрации лактата в плазме крови, содержания 2,3-ДФГ и активности каталазы в эритроцитах являются критериями диагностики хронической фетоплацентарной недостаточности Информацию о состоянии адаптационных реакций фетоплацентарного комплекса может дать определение уровня секреции N0 и выраженности «респираторного взрыва» нейтрофилов у беременных с ФПН в III триместре

2 С целью коррекции выявленных метаболических нарушений в плаценте у беременных на ранних сроках рекомендуется использование тиоловых антиоксидантов В комплексное патогенетическое лечение хронической фетоплацентарной недостаточности в III триместре беременности рекомендуется включение препаратов Ь-аргинина

СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Шестопалов, А В Окислительный метаболизм и функциональная активность макрофагов при иммунной анергии / А В Шестопалов, А П Шепелев, 3 И Микашинович, К Н Кассир, Р X Самад // II Всероссийский симпозиум «Хроническое воспаление» тез докл - Новосибирск, 2002 -С 84

2 Шестопалов, А В Роль плацентарных макрофагов в регуляции апоптоза при раннем самопроизвольном аборте / А В Шестопалов, 3 И Микашинович, О В Борисенко // III Международная научно-практическая конференция «Здоровье и образование в XXI веке» тез докл - М , 2002 -С 431

3 Шестопалов, А В Активность антиоксидантных ферментов при невынашивании беременности / А В Шестопалов, 3 И Микашинович, О В Борисенко // VI Международная конференция «Биоантиоксидант» тез докл -М , 2002 - С 627

4 Борисенко, О В Компенсаторные реакции антиоксидантной системы в первом триместре беременности / О В Борисенко, 3 И Микашинович, А В Шестопалов // Всероссийская конференция «Компенсаторно-приспособительные процессы фундаментальные и клинические аспекты» тез докл - Новосибирск, 2002 -С 10

5 Шестопалов, А В Продукция оксида азота в плаценте при разных вариантах развития беременности / А В Шестопалов, 3 И Микашинович, О В Борисенко // 68-я итоговая научная сессия КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН сб науч тр -Курск, 2002 - С 362

6 Шестопалов, А В Направленность изменений антиоксидантной системы плаценты при гестозе / А В Шестопалов, 3 И Микашинович, О В Борисенко // «Актуальные проблемы медицины и биологии», выпуск 2 сб науч тр - Томск, 2003 -С 11-12

7 Шестопалов, А В Функции макрофагов фетоплацентарного комплекса в обеспечении сохранения и развития беременности / А В Шестопалов, 3 И Микашинович, О В Борисенко, И О Крыжановская, И М Стави-ский // Известия ВУЗов Северо-Кавказский регион Естественные науки -2003 -№2 -С 102-105

8 Шестопалов, А В Биохимические изменения в формирующейся плаценте при самопроизвольном аборте / А В Шестопалов, 3 И Микашинович, И О Крыжановская, О В Борисенко, Е С Будник // Научно-практическая конференция «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» тез докл - Ростов-на-Дону, 2003 -С 141-142

9 Шестопалов, А В Направленность изменений пуринового обмена в плаценте при самопроизвольном аборте / А В Шестопалов, 3 И Микашинович, И О Крыжановская, А М Саллум, О В Борисенко // Научно-практическая конференция «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» тез докл - Ростов-на-Дону, 2003 - С 142-144

10 Shestopalov, А V Balance between prooxidant and antioxidant mechanisms in the placenta at the fetoplacental insufficiency / A V Shestopalov, О V Boris-enko, Z I Mikashinovich, I О Kryjanovskaya, О P Eremenko // International conference «Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health» - Smolensk, 2003 -P 141

11 Шестопалов, А В Продукция оксида азота плацентарными макрофагами на протяжении физиологически протекающей беременности / А В Шестопалов, 3 И Микашинович, О В Борисенко, И О Крыжановская, Е С Будник, 10 Б Хоменко // Известия ВУЗов Северо-Кавказский регион Естественные науки -2004- прил №1 -С 68-71

12 Борисенко, О В Ферментный спектр в плаценте при самопроизвольном прерывании беременности / О В Борисенко, А В Шестопалов // IV Научная сессия Ростовского государственного медицинского университета сб науч тр - Ростов-на-Дону, 2004 - С 62-64

13 Шестопалов, А В Роль плацентарных макрофагов в инициации самоаборта и неразвивающейся беременности в I триместре / А В Шестопа-

лов, 3 И Микашинович, И О Крыжановская, О В Борисенко, Е С Буд-ник // IV Научная сессия Ростовского государственного медицинского университета сб науч тр - Ростов-на-Дону, 2004 -С 135-136

14Саллум, AM Динамика содержания продуктов пуринового катаболизма в плаценте / А М Саллум, А В Шестопалов, 3 И Микашинович, И О Крыжановская // Известия ВУЗов Северо-Кавказский регион Естественные науки -2004 -прил №1 -С 63-67

15 Шестопалов, А В Содержание аллантоина в плаценте и его роль в регуляции апоптоза / А В Шестопалов, А М Саллум, И О Крыжановская // Известия ВУЗов Северо-Кавказский регион Естественные науки -2004 - прил №3 -С 69-73

16 Шестопалов, А В Динамика активности Ca2+/Mg2+ -зависимои эндонук-леазы в плаценте на протяжении физиологически протекающей беременности / А В Шестопалов, 3 И Микашинович, О В Борисенко, И В Корниенко, И О Крыжановская // Известия ВУЗов Северо-Кавказский регион Естественные науки -2004 - прил №4 - С 78-91

17 Шестопалов, AB Динамика активности аргиназы и содержания полиаминов в развивающейся плаценте / А В Шестопалов, А М Саллум, Е С Будник, Ю Б Хоменко, 3 И Микашинович, И О Крыжановская // Известия ВУЗов Северо-Кавказский регион Естественные науки - 2004 -прил №11 -С 105-109

18 Крыжановская, И О Пути реализации компенсаторно-приспособительных реакций плаценты при плацентарной недостаточности различной этиологии / И О Крыжановская, А В Шестопалов, М П Курочка, Ю Б Хоменко, 3 И Микашинович // Научно-практическая конференция, посвященная памяти и 60-летию со дня рождения д м н , проф Н В Рымашевского «Актуальные вопросы акушерства, гинекологии и педиатрии» - Ростов-на-Дону, 2004 - С 75

19 Крыжановская, И О Роль плацентарных макрофагов в патогенезе плацентарной недостаточности / И О Крыжановская, А В Шестопалов, М П Курочка, Ю Б Хоменко, 3 И Микашинович, А С Фильченко // Научно-практическая конференция, посвященной памяти и 60-летию со дня рождения д м н , проф , Н В Рымашевского «Актуальные вопросы акушерства, гинекологии и педиатрии» - Ростов-на-Дону, 2004 - С 66-67

20 Крыжановская, И О Универсальные стресс-реализующие системы у беременных группы высокого перинатального риска / И О Крыжановская, А В Шестопалов, 3 И Микашинович, Е С Будник // Научно-практическая конференция, посвященной памяти и 60-летию со дня рождения д м н , проф , Н В Рымашевского «Актуальные вопросы акушерства, гинекологии и педиатрии» — Ростов-на-Дону, 2004 - С 75-76

21 Гуськов, Е П Аллантоин как витамин / Е П Гуськов, В Н Прокофьев, М Е Клецкий, И В Корниенко, О А Гапуренко, Л П Олехнович, В А Чистяков, А В Шестопалов, М А Сазыкина, А В Маркеев, Т П Шкурат, С Р Малхосьян, Ю А Жданов // Доклады академии наук - 2004 - Т 398, №6 - С 823-827

22 Буштырева, И О Молекулярно-биохимические пути реализации адаптационных механизмов фетоплацентарного комплекса при плацентарной недостаточности различной этиологии / И О Буштырева, А В Шестопа-лов, М П Курочка, Ю Б Хоменко, 3 И Микашинович, Н П Егорова, А С Фильченко // Научно-практическая конференция «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» тез докл - Ростов-на-Дону, 2005 -С 46-48

23 Буштырева, И О Направленность компенсаторно-приспособительных реакций плаценты в III триместре беременности, отягощенной фетоплацен-тарной / И О Буштырева, М П Курочка, Ю Б Хоменко, А В Шестопа-лов, 3 И Микашинович, А С Фильченко, Т В Богданова // Научно-практическая конференция «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» тез докл - Ростов-на-Дону, 2005 -С 35-37

24 Буштырева, И О Некоторые биохимические аспекты патогенеза плацентарной недостаточности / И О Буштырева, М П Курочка, Ю Б Хоменко, А В Шестопалов, 3 И Микашинович, О В Борисенко // Вестник РУДН -2005 - №4 (32) - С 92-98

25 Буштырева, И О Патогенетическое обоснование использования активаторов эндогенной продукции оксида азота в комплексном лечении фетоп-лацентарной недостаточности / И О Буштырева, М П Курочка, Ю Б Хоменко, А В Шестопалов, 3 И Микашинович, В Я Пармон // Научно-практическая конференция «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» тез докл — Ростов-на-Дону, 2005 - С 32—35

26 Буштырева, И О Роль макрофагальной системы в поддержании дисфункции плаценты / И О Буштырева, М П Курочка, Ю Б Хоменко, А В Шестопалов // «Актуальные проблемы инфекционной и неинфекционной патологии» сб науч тр — Ростов-на-Дону, 2005 —С 36-37

27 Буштырева, И О Эффективность применения L-аргинина в комплексной терапии фетоплацентарной недостаточности / И О Буштырева, М П Курочка, Ю Б Хоменко, А В Шестопалов, 3 И Микашинович // VII Российский форум «Мать и дитя» тез докл -М,2005 -С 38-39

28 Буштырева, И О Иммунологические аспекты самоаборта и неразвивающейся беременности в I триместре / И О Буштырева, А В Шестопалов, 3 И Микашинович, С С Заяц, Е С Будник, Ю Б Хоменко // VII Российский форум «Мать и дитя» тез докл - М , 2005 - С 40

29 Шестопалов, А В Биологические функции аллантоина /А В Шестопалов, Т П Шкурат, 3 И Микашинович, И О Крыжановская, М А Богачева, С В Ломтева, В П Прокофьев, Е П Гуськов // Известия РАН Серия биологическая -2006 -№5 -С 541-545

30 Буштырева, И О Анализ эффективности применения индукторов образования и донаторов оксида азота в комплексном лечении фетоплацентарной недостаточности / И О Буштырева, М П Курочка, Ю Б Хоменко, Е В Шумилина, А В Шестопалов, 3 И Микашинович // «Перинатальные инфекции лечить или нет9» сб науч тр - Ростов-на-Дону, 2006 -С 50-52

31 Буштырева, И О Влияние NO-индуцирующей терапии на исходы беременностей у пациенток с хронической фетоплацентарной недостаточностью / И О Буштырева, М П Курочка, Ю Б Хоменко, Е В Шумилина, А В Шестопалов, 3 И Микашинович // «Перинатальные инфекции лечить или нет7» сб науч тр - Ростов-на-Дону, 2006 - С 53-55

32 Шестопалов, А В Влияние аргинина и нитратов на показатели углеводного обмена и газотранспортной системы крови/ А В Шестопалов // Известия ВУЗов Северо-Кавказский регион Естественные науки - 2006 -прил №8 -С 112-116

33 Шестопалов, А В Особенности обмена аргинина в плаценте при разных вариантах течения беременности //AB Шестопалов, 3 И Микашинович, И О Буштырева, И М Ставиский // VII Международная научно-практическая конференция «Здоровье и образование в XXI веке» тез докл - М , 2006 - С 579-580

34 Шестопалов, А В Молекулярные механизмы формирования плаценты при разных фариантах течения беременности // AB Шестопалов, 3 И Микашинович, И О Буштырева, И М Ставиский // VII Международная научно-практическая конференция «Здоровье и образование в XXI веке» тез докл -М,2006 - С 580-581

35 Шестопалов, AB Аллантоин - биологические свойства и функции /А В Шестопалов, Т П Шкурат, 3 И Микашинович, И О Крыжановская, М А Богачева, С В Ломтева, В П Прокофьев, Е П Гуськов // Успехи современной биологии -2006 -т 126, №6 - С 611-616

36 Буштырева, И О Молекулярно-клеточные механизмы реализации адаптационных реакций в системе мать-плацента-плод при ХФПН в III триместре беременности / И О Буштырева, М П Курочка, Е Ю Лебеденко, Ю Б Хоменко, А В Шестопалов, 3 И Микашинович // VIII Всероссийский научный форум «Мать и дитя» тез докл — М , 2006 —С 56-57

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

2,3-ДФГ 2,3-дифосфоглицерат

АР-1 фактор транскрипции

АРЕ элемент антиоксидантного ответа (фактор транскрипции)

Н202 перекись водорода

НЬ гемоглобин

N0 оксид азота

НР-кВ фактор транскрипции

АКМ активированные кислородные метаболиты

АФК активные формы кислорода

БГЛ большие гранулярные лимфоциты

ИЛ интерлейкин

ИОПН индуцированная острая плацентарная недостаточность

ИФ интерферон

КТГ кардиотокография

лпс липополисахарид

МП матриксные металопротеиназы

НАДФ никатинамидадениндинуклеотид фосфат

нет нитросиний тетразолий

о2- супероксидный анион радикал

пкг программированная клеточная гибель

ПСА поздний самопроизвольный аборт

сод супероксидцисмутаза

ФНО фактор некроза опухоли

ШЕСТОПАЛОВ АЛЕКСАНДР ВЯЧЕСЛАВОВИЧ

03.00.04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Печать цифровая Бумага офсетная Гарнитура «Тайме» Формат 60x84/16 Объем 2,0 уч -изд -л Подписано в печать 12 04 2007 г

Заказ № 1050 Тираж 100 экз Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г Ростов-на-Дону, ул Суворова, 19, тел 247-34-88

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Шестопалов, Александр Вячеславович

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

1.1. Функции макрофагов фетоплацентарного комплекса в обеспечении сохранения и развития беременности.

1.2. Роль апоптоза в развитии плаценты.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материал исследования.

2.2. Методы исследования.

ГЛАВА 3. Метаболическая активность плацентарных макрофагов при различных вариантах развития беременности.

3.1. Метаболическая активность плацентарных макрофагов при физиологической беременности.

3.2. Метаболическая активность плацентарных макрофагов при патологии

I триместра.

3.4. Метаболическая активность плацентарных макрофагов при хронической фетоплацентарной недостаточности.

ГЛАВА 4. Молекулярные механизмы формирования плаценты при физиологическом и патологическом течении беременности.

4.1. Процессы деградации ДНК и нуклеотидов.

4.1.1. Процессы деградации ДНК при физиологической беременности

4.1.2. Процессы деградации ДНК и нуклеотидов в плаценте при патологии первого триместра.

4.1.3. Процессы деградации ДНК и нуклеотидов в плаценте при патологии второго триместра.

4.1.4. Процессы деградации ДНК и нуклеотидов в плаценте при хронической фетоплацентарной недостаточности.

4.1.5. Краткое резюме.

4.2. Содержание аллантоина в плаценте и сыворотке крови в динамике беременности.

4.2.1. Содержание аллантоина в плаценте в динамике физиологической беременности.

4.2.2. Содержание аллантоина в сыворотке крови в динамике физиологической беременности.

4.2.3. Содержание аллантоина в динамике патологической беременности.

4.3. Обмен аргинина в плаценте.

4.3.1. Активность аргиназы и полиаминов в плаценте в динамике физиологической беременности.

4.3.2. Активность аргиназы в плаценте при патологическом течении беременности в первом триместре.

4.3.3. Активность аргиназы и содержание аргинина, полиаминов и агматина в плаценте при патологическом течении беременности во II триместре.

4.3.4. Активность аргиназы и содержание полиаминов в плаценте при патологическом течении беременности в III триместре.

4.4. Активность антиоксидантных ферментов в плаценте при различных вариантах течения беременности.

4.4.1. Активность СОД и каталазы в плаценте.

4.4.2. Активность глутатионзависимых ферментов и содержание восстановленного глутатиона в плаценте.

ГЛАВА 5. Влияние аргинина и ИЗОСОРБИДА ДИНИТРАТА на метаболические процессы крови и фетоплацентарную гемодинамику при плацентарной недостаточности.

5.1. Биохимических параметров плазмы крови и показатели гемодинамики при разных вариантах течения беременности в III триместре.

5.1.1. Показатели секреторной активности лейкоцитов крови.

5.1.2. Содержание пирувата и лактата в плазме крови.

5.1.3. Показатели маточно-плацентарно-плодовой гемодинамики.

5.2. Показатели метаболизма эритроцитов при разных вариантах течения беременности в III триместре.

5.2.1. Содержание продуктов гликолиза в эритроцитах.

5.2.2. Активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах.

5.3. Влияние аргинина на метаболические процессы крови и фетоплацентарную гемодинамику у беременных с плацентарной недостаточностью.

5.3.1. Показатели секреторной активности лейкоцитов крови.

5.3.2. Содержание продуктов гликолиза в плазме крови.

5.3.3. Показатели маточно-плацентарно-плодовой гемодинамики.

5.4. Показатели метаболизма эритроцитов при разных вариантах лечения фетоплацентарной недостаточности в III триместре.

5.4.1. Субстраты углеводного метаболизма в эритроцитах.

5.4.2. Активность антиоксидантных ферментов в эритроцитах.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Метаболическая активность плацентарных макрофагов и молекулярные механизмы формирования плаценты при различных вариантах течения беременности"

Актуальность темы

Плацента является уникальным органом, так как ее формирование, созревание, достижение функционального оптимума, старение и, наконец, отторжение по биологическим меркам происходит предельно быстро. За короткий промежуток времени низкодифференцированный опухолевоподоб-ный трофобласт превращается в сложноорганизованный орган, имеющий свою специфическую систему гормональной регуляции, иммунологического контроля, обеспечивающий внутриутробную жизнь плода. В этом стремительном развитии особое значение приобретают процессы пролиферации и програмированной клеточной гибели (ПКГ). Существует определенный круг исследователей, занимающихся изучением процессов апоптоза в плаценте (В. Huppertz et al., 1998, 1999; D.W. Morrish et al., 2001; M. Jerzak, P. Bischof, 2002). Ими установлена первостепенная роль этого процесса в механизмах синцитилизации трофобласта, перестройке спиральных артерий и т.д. Большинство авторов исследуют молекулярно-биологический уровень, генетические характеристики ПКГ в плаценте, в то время как вопросам биохимического обеспечения этих процессов, метаболическим реакциям клеток, сопровождающим данные явления внимания практически не уделялось. Между тем, получение ответов на данные вопросы позволит приблизиться к решению проблемы ранней диагностики и метаболической коррекции осложненной беременности.

В настоящее время формируется концепция об иммунологических отношениях матери и плода, согласно которой, супрессия специфической ветви иммунного ответа матери сопровождается активацией неспецифической врожденной иммунной системы (Г.Т. Сухих и соавт., 2003).

В децидуалыюй оболочке и строме плаценты, среди клеточных элементов, наибольший интерес вызывают плацентарные, которые присутствуют в значительном количестве в строме ворсин формирующейся плаценты на протяжении всей беременности (А.П. Милованов, 1999; И.Г. Шатилова, 1999). И этот интерес определяется не только их количественным превалированием.

Несмотря на значимость плацентарных макрофагов как клеток, формирующих неспецифическую резистентность фетоплацентарного комплекса, клеток-эффекторов иммунного взаимодействия мать-плацента-плод, клеток-регуляторов ангиогенеза в плаценте, исследования их свойств и участия в формировании патологического течения беременности достаточно фрагментарны и описывают в основном их морфологические и иммунологические характеристики (JI.B. Черипова и соавт., 1994; С.А. Сельков, 1996; О.В. Павлов и соавт., 1999; И.Г. Шатилова и соавт., 1997; М.С. Шамугия, 1999; Э.А. Айламазян, С.А. Сельков, 2002; M.G. Petroff et al., 2002, 2003; L. Gardner, A. Moffett, 2003). Биохимические особенности и метаболические реакции плацентарных макрофагов в обеспечении неспецифической резистентности фетоплацентарного комплекса остались не изученными.

Связующим звеном между метаболической активностью плацентарных макрофагов и процессами апоптотической деградации ДНК в плаценте может явиться изучение секреции макрофагами молекул с апоптогенными и антиапоптогенными свойствами, в частности оксида азота — продукта NO-синтазного пути окисления аргинина.

Существует еще несколько путей метаболизма аргинина: аргиназный, приводящий к образованию полиаминов - спермидина и спермина - активаторов пролиферативных процессов и декарбоксилазный, ведущий к образованию агматина - молекулы, способной включаться в синтез полиаминов, подавлять пролиферацию гладкомышечных клеток и ингибировать активность NO-синтазы (М.А. Medina et al., 2003).

Однако в литературе отсутствуют сведения о содержании полиаминов и агматина в динамике развития плаценты человека при физиологической и осложненной беременности. Вероятно, нарушения, связанные с метаболизмом аргинина по аргиназному пути, приведут не только к нарушению деток-сикации аммиака, но и к изменению регуляции пролиферации, а соответственно к дефектам развития плаценты.

С позиций регуляции процессов пролиферации и ПКГ, активные формы кислорода (АФК) являются вторичными мессенджерами передачи сигналов от ростовых факторов и способны влиять на регуляцию клеточного цикла (М.М. Дементьева, 1999; Е.Б. Меньшикова и соавт., 2006; W. Droge, 2002; С. Nathan, 2003). В связи с этим представляет интерес возможное наличие связи между нарушениями апоптотических процессов и окислительным стрессом. Исследованию состояния антиоксидантной системы и перекисного окисления липидов при физиологическом и осложненном течении беременности посвящено значительное количество отечественных и зарубежных работ (В.А. Бурлев, 1992; Л.И. Колесникова, 1993; Н.Н. Крайнова и соавт., 1998; А.В. Аккер и соавт., 2000; В.В. Абрамченко, 2001; А.К. Poranen et al., 1996; Y. Wang, S.W. Walsh, 1996; U. Mutlu-Turcoglu et al., 1998; J.J. Walker, 1998 и др.), однако, роль плацентарных ферментов антиоксидантной защиты в регуляции пролиферации и апоптоза в плаценте до настоящего времени все еще не ясна.

С точки зрения эволюционной биохимии плацента является уникальным объектом исследования, т.к. проходит в своем развитии ряд стадий, от бластоцисты до органа с высочайшим уровнем дифференцировки. Несмотря на более чем столетнюю историю биогенетического закона Геккеля о повторении филогенеза в онтогенезе, его биохимическая доказательная база остается крайне фрагментарной (Б. Карлсон, 1983). И, на наш взгляд, исследование содержания аллантоина и других продуктов деградации пуринов в динамике физиологической и осложненной беременности может поставить ряд новых вопросов и дать некоторые ответы относительно онтогенетического становления азотистого метаболизма.

Представляется необходимым определить место макрофагов в формировании плаценты. Важным является анализ роли систем генерации активированных кислородных метаболитов (АКМ) и ферментативной антиокси-дантной системы в регуляции апоптоза и пролиферации, их взаимосвязи в различные периоды физиологической и осложненной беременности.

Опираясь на вышеизложенное, можно обозначить основное направление исследований, которое, на наш взгляд, позволит сформировать теоретический фундамент молекулярных механизмов осложненного течения беременности и предложить решение практических вопросов, связанных с диагностикой и лечением плацентарной недостаточности.

Цель работы; выявление биохимических механизмов формирования плаценты и метаболической активности плацентарных макрофагов, определение роли их нарушений в патогенезе различных форм плацентарной недостаточности и поиск путей их метаболической коррекции.

Для достижения сформулированной цели работы поставлены следующие задачи исследования:

1. Оценить NO-секреторную активность плацентарных макрофагов и активность их антиоксидантных ферментов при различных вариантах течения беременности;

2. Определить активность Са /Mg -зависимой эндонуклеазы, цитохро-моксидазы и содержание продуктов деградации пуринов (гипоксанти-на, ксантина, мочевой кислоты и аллантоина) в плаценте при различных вариантах течения беременности;

3. Установить содержание аргинина, полиаминов (путресцина и сперми-дина) и агматина в плаценте при различных вариантах течения беременности;

4. Исследовать активность ферментов антиоксидантной защиты (СОД, каталазы, глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы) в плацентарных макрофагах и тканях плаценты в динамике физиологической беременности и при плацентарной недостаточности;

5. Выяснить влияние аргинина и изосорбида динитрата на метаболическую активность эритроцитов и лейкоцитов крови беременных с фетоплацентарной недостаточностью.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА Установлены биохимические закономерности формирования плаценты с позиций молекулярного обеспечения процессов пролиферации и апоптоза. Формирование плаценты сопряжено с повышением активности процессов деградации ДНК, NO-секреторной активности плацентарных макрофагов, снижением уровня полиаминов и пуриновых дериватов по мере развития беременности.

Впервые выявлен неоднозначный характер изменений активности

2 94

Са /Mg -зависимой эндонуклеазы в плаценте на разных этапах ее формирования. Получены новые данные о содержании гипоксантина, ксантина и мочевой кислоты в тканях плаценты, позволяющие прийти к заключению о снижении интенсивности процессинга РНК и актитвации процессов реутилизации пуриновых метаболитов в динамике физиологической беременности.

Впервые определено содержание аллантоина в организме беременных женщин, выявившее временные расхождения в повышении его в плаценте и сыворотке крови беременных, что свидетельствует о разных темпах становления пуринового метаболизма в зародышевых и внезародышевых тканях и является отражением филогенетического закона Гекелля.

Выявлено реципрокное снижение интенсивности аргиназного и декар-боксилазного путей и активация NO-синтазного пути метаболизма аргинина, что указывает на важную роль ауторегуляторных механизмов в динамике формирования плаценты.

Впервые установлено, что процессы синцитилизации и первой волны инвазии трофобласта сопровождаются увеличением генерации перекиси водорода плацентарными макрофагами, активацией в клетках трофобласта Са /Mg -зависимой эндонуклеазы, увеличением содержания аллантоина, высоким уровнем полиаминов.

Установлены общие закономерности метаболических реакций плаценты при патологическом течении беременности в различные сроки, заключающиеся в депрессии метаболизма аргинина, активации процессов деградации пуриновых нуклеотидов, накоплении мочевой кислоты, дисбалансе в работе антиоксидантных ферментов. Впервые выявлен различный характер нарушений в NO-секреции, активности антиоксидантных ферментов плацентарных макрофагов и плаценты при неразвивающейся беременности, ранних и поздних самопроизвольных абортах и при плацентарной недостаточности.

Впервые установлена структура адаптивных реакций красных и белых клеток крови при направленной метаболической коррекции препаратами аргинина и нитратами, позволяющими оптимизировать плацентарную гемодинамику и качественно улучшить перинатальные исходы.

Сформулирована новая концепция о системной организации метаболизма в плаценте. Выявлены системообразующие факторы на разных сроках физиологической беременности. Сформулированы принципы данной системы — реципрокность, ауторегуляция и отражение филогенетического закона Геккеля.

Доказана значимость нарушения координированной последовательности регуляторных влияний в формировании осложненной беременности.

НАУЧНО-ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ.

Работа вносит вклад в углубленное понимание биохимических механизмов, лежащих в основе функционирования плаценты человека на различных этапах ее формирования. Полученные данные совершенствуют представления о роли метаболических изменений в плаценте в патогенезе осложненного течения беременности.

Одним из практических приложений работы является определение новых подходов к целенаправленной патогенетической терапии невынашивания беременности. Обоснована перспективность назначения в I триместре пациенткам с высоким риском развития неразвивающейся беременности тиоловых антиоксидантов, метионина. Показана целесообразность применения при ранних и поздних самопроизвольных абортах антиоксидантнои терапии, предотвращающей окислительную активацию процессов апоптоза в плаценте.

Показана диагностическая значимость определения секреторной активности лейкоцитов крови и содержания аллантоина в сыворотке крови матери в оценке состояния фетоплацентарного комплекса беременных с плацентарной недостаточностью в III триместре.

Полученные данные обосновывают дифференцированный подход к назначению препаратов — доноров оксида азота и активаторов NO-синтазы в зависимости от сроков возникновения патологии беременности.

Выявленное снижение продукции оксида азота при плацентарной недостаточности являются теоретическим обоснованием целесообразности применение препаратов - доноров оксида азота и активаторов NO-синтазы при этой патологии в III триместре. Полученные данные свидетельствуют о перспективности разработки методов селективной коррекции сниженной NO -секреторной активности плацентарных макрофагов. Теоретически обоснованы и совместно с кафедрой акушерства и гинекологии №3 ФПК и ППС РостГМУ (зав. кафедрой д.м.н., профессор Буштырева И.О.) разработаны и апробированы способы метаболической коррекции плацентарной недостаточности, основанные на включении в стандартную схему терапии хронической фетоплацентарной недостаточности препаратов L-аргинина и изосор-бида динитрата. Данные способы позволяют достичь эффективной коррекции нарушений плацентарной гемодинамики, улучшения метаболических характеристик эритроцитов и лейкоцитов крови, что обеспечивает улучшение перинатальных исходов.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ПУБЛИКАЦИИ Основные положения диссертации представлены на VI Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 2002), на III и VII Международных научно-практических конференциях «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2002, 2006), на научно-практических конференциях «Актуальные вопросы акушерства и гинекологии» (Ростов-на-Дону, 2003, 2004, 2005, 2006), на IV Научной сессии РостГМУ (Ростов-на-Дону, 2004), на VII и VIII Российских форумах «Мать и дитя» (Москва 2005, 2006).

По теме диссертации опубликовано 36 работ, в том числе 11 - в изданиях, рекомендованных ВАК.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ, ВЫНОСИМЫЕ НА

ЗАЩИТУ:

1. Плацентарные макрофаги, обеспечивающие иммунологическую адаптацию фетоплацентарного комплекса, участвуют в регуляции молекулярных процессов формирования плаценты, о чем свидетельствует динамика секреции оксида азота и соотношения ферментов метаболизма активных форм кислорода при физиологической беременности.

2. В течение физиологической беременности в плаценте формируются реципрокные отношения между NO-синтазным и аргиназным путями обмена, регистрируется возрастание активности процессов деградации нуклеотидов, антиоксидантной защиты, обеспечивающие адекватность фетоплацентарной гемодинамики и рост плаценты.

3. Становление плацентарного метаболизма при физиологической беременности и формирование метаболических ответов при осложненной беременности согласуются с филогенетическим законом, о чем свидетельствует динамика содержания аллантоина в плаценте и сыворотке крови, активность эффекторного фермента апоптоза

Са /Mg зависимой эндонуклеазы и глутатионзависимых ферментов в плаценте.

4. Осложненное течение беременности сопровождается формированием различных, зависимых от срока беременности метаболических реакций со стороны плацентарных макрофагов, депрессией метаболического обеспечения пролиферации и развитием окислительного стресса.

5. Плацентарная недостаточность характеризуется инверсией секреторной активности нейтрофилов крови, повышением уровня аллантоина, активацией гликолиза и антиоксидантных ферментов в эритроцитах, направленных на увеличение кислородной емкости крови.

6. Влияние препаратов аргинина характеризуется метаболической трансформацией клеток крови: восстановлением секреторной активности лейкоцитов, индукцией толерантного гипобиотического модулирования гликолиза в эритроцитах, нормализацией кислородтранспортной функции крови, что сочетается с восстановлением фетоплацентарной гемодинамики и, как следствие, улучшением перинатальных исходов.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Шестопалов, Александр Вячеславович

ВЫВОДЫ

1. В динамике физиологической беременности от первого к третьему триместру происходят фазные изменения метаболической активности плацентарных макрофагов, характеризующиеся возрастанием NO-секреторной активности, снижением активности СОД и каталазы.

2. В процессе формирования плаценты происходят изменения метаболического обеспечения пролиферации на уровне аргиназного пути метаболизма, характеризующиеся максимальной активностью аргиназы и высоким уровнем аргинина, путресцина, спермидина и агматина в ткани плаценты в первом триместре беременности и минимальным их содержанием - в третьем.

3. При физиологическом течении беременности с увеличением гестаци-онного срока в плаценте регистрируется возрастание активности анти

2 "Ь 2+ оксидантных ферментов и Са /Mg -зависимой эндонуклеазы, сопровождающееся снижением содержания мочевой кислоты.

4. В динамике физиологической беременности наблюдаются реципрок-ные изменения в NO-синтазном пути обмена аргинина в плацентарных макрофагах и аргиназном пути обмена в плаценте, а также разнонаправленные изменения активности антиоксидантных ферментов в плацентарных макрофагах и ткани плаценты.

5. В динамике физиологической беременности максимальное содержание аллантоина в тканях плаценты наблюдается на 7-9 неделях. Ранние сроки беременности характеризуются синхронным повышением содержания аллантоина и возрастанием уровня свободнорадикальных процессов в сыворотке крови. К 10-13-ой недели беременности устанавливается новый стационарный уровень обменных процессов, характеризующийся резким увеличение пула аллантоина в крови и падением активности свободнорадикальных процессов.

6. При осложненном течении беременности в зависимости от сроков формируются различные метаболические ответы со стороны плацентарных макрофагов. Патологические состояния I и II триместров сопровождаются достоверным повышением продукции оксида азота и снижением активности СОД, а хроническая фетоплацентарная недостаточность в третьем триместре отличается достоверным снижением секреции оксида азота и возрастанием активности СОД.

7. В плаценте осложненное течение беременности сопровождается значительной депрессией обмена аргинина и выраженным дисбалансом в антиоксидантной системе.

8. Осложненная беременность характеризуется достоверными изменениями показателей деградации нуклеотидов и нуклеиновых кислот. Достоверное снижение содержания аллантоина в плаценте наблюдается при неразвивающейся беременности и позднем самопроизвольном аборте. При патологии второго триместра отмечено повышение активности Са /Mg -зависимой эндонуклеазы.

9. Фетоплацентарная недостаточность характеризуется понижением выработки N0 радикала и активацией кислородзависимых механизмов фагоцитоза нейтрофилов крови. В эритроцитах наблюдается снижение содержания лактата и 2,3-ДФГ и высокий уровень активности каталазы, в сыворотке и плазме крови - увеличение концентрации аллантоина и молочной кислоты по сравнению с физиологической беременностью.

10.Добавление аргинина к стандартной схеме лечения вызывает достоверную активацию секреции оксида азота нейтрофилами крови, на фоне снижения интенсивности кислородзависимых механизмов фагоцитоза лейкоцитов, уменьшение концентрации пирувата и лактата в плазме крови, падение уровня пирувата, повышение содержания 2,3-ДФГ и активности каталазы в эритроцитах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Изменение концентрации лактата в плазме крови, содержания 2,3-ДФГ и активности каталазы в эритроцитах являются критериями диагностики хронической фетоплацентарной недостаточности. Информацию о состоянии адаптационных реакций фетоплацентарного комплекса может дать определение уровня секреции NO и выраженности «респираторного взрыва» нейтрофилов у беременных с ФПН в III триместре.

2. С целью коррекции выявленных метаболических нарушений в плаценте у беременных на ранних сроках рекомендуется использование тио-ловых антиоксидантов. В комплексное патогенетическое лечение хронической фетоплацентарной недостаточности в III триместре беременности рекомендуется включение препаратов L-аргинина.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Шестопалов, Александр Вячеславович, Ростов-на-Дону

1. Аббасова, С.Г. Система Fas-FasL в норме и при патологии / С.Г. Аббасо-ва, В.М. Липкин, Н.Н. Трапезников, Н.Е. Кушманский // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. 1999. — № 3. - С. 3-16.

2. Абрамченко, В.В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. (Ок-сидативный стресс в акушерстве и его терапия антиоксидантами) / В.В. Абрамченко. СПб.: Издательство ДЕАН, 2001. - 400 с.

3. Айламазян, Э.К. Роль иммунной системы фетоплацентарного комплекса в механизмах преждевременного прерывания беременности / Э.К. Айламазян, С.А. Сельков // Материалы IV Российского форума «Мать и дитя». М. 2002.

4. Аккер, А.В. Показатели оксидантного и антиоксидантного статуса у беременных с гестозом / А.В. Аккер, Б.Я. Варшавский, С.А. Ельчанинова и др. // Акуш. и гинекологии. 2000. - № 4. - с. 17-20.

5. А.с. 877436 СССР Способ определения пировиноградной кислоты в крови / М.П. Бабаскин. 1981, №40.

6. Барышников, А.Ю. Иммунологические проблемы апоптоза / А.Ю. Барышников, Ю.В. Шишкин М.: Эдиториал УРСС, 2002. - 320 с.

7. Баснакьян, А.Г. ДНКазы клеточных ядер: множественность и гетерогенность / А.Г. Баснакьян, Н.В. Бубнов, И.И. Вотрин // Биохимия. 1989. -Т. 54, вып. 2.-С. 273-283.

8. Белокриницкая, Т.Е. Цитокины в системе мать-плод при синдроме задержки развития плода / Т.Е. Белокриницкая, Ю.А. Витковский // Акушерство и гинекология. 1999. — №5. - С. 15-17.

9. Блощинская, И.А. Оксид азота и белки HSP70 при физиологической беременности, гестозе и на доклинической стадии развития гестоза / И.А. Блощинская, И.М. Давидович // Бюл. эсперим. биол. и мед. 2003. - №3. - с. 279-282.

10. Бурлев, В.А. Свободнорадикальное окисление в системе мать-плацента-плод при акушерской патологии: автореф. дис. докт. мед. наук / В.А. Бурлев.-М., 1992.-50 с.

11. Буштырева, И.О. Клинико-диагностические стандарты в акушерстве: методические указания / И.О. Буштырева, В.Е. Радзинский. — Ростов н/Д, 2005.-С. 28-31.

12. Н.Ванин, А.Ф. Образование оксида азота в активированных макрофагах / А.Ф. Ванин, Г.Б. Меньшиков, П.И. Мордвинцев, B.C. Репин // Бюл. экс-перим. биол. и медицины. 1991. - Т. 111, № 6. - С. 588-590.

13. Герасимов, И. Г. Кинетика реакции восстановления нитросинего тетра-золия нейтрофилами крови человека / И. Г. Герасимов, О. А. Калуцкая // Цитология. 2000. - т. 42, №2. - С. 160-165.

14. Говалло, В.И. Иммунология репродукции / В.И. Говалло. М.: Медицина, 1987.-304 с.

15. Гольдберг, Е.Д. Роль гемопоэзининдуцирующего микроокружения при цитостатических миелосупрессиях / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.В. Жданов. Томск, 1999.

16. Гуськов, Е.П. Аллантоин как тушитель свободных радикалов / Е.П. Гуськов, М.Е. Клецкий, И.В. Корниенко и др. // ДАН. 2002. - Т.383, № З.-С. 105-107.

17. Гуськов, Е.П. Нестабильность генома соматических клеток человека как адаптивная норма / Е.П. Гуськов, Т.П. Шкурат // Успехи соврем, биологии. 1989. - Т.108, Вып. 2(5).-С. 163-171.

18. Гуськов, Е.П. Влияние аллантоина на активность ферментов регулирующих ROS-зависимый статус организма / Е.П. Гуськов, Т.П. Шкурат, Н.П. Милютина и др. // ДАН. 2001. - Т.379, №3 - С. 398-401.

19. Дементьева, М.М. Оценка показателей апоптоза при гиперпластических процессах и раке эндометрия: автореф дис. канд. мед. наук / М.М. Дементьева. М.,1999. - 25 с.

20. Дубинина, Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса / Е.Е. Дубинина // Вопр. мед. химии, 2001. Т. 47, № 6. - С. 561-581.

21. Зюзьков, Г.Н. Гуморальные механизмы регуляции эритропоэза при гипоксии / Г.Н. Зюзьков, A.M. Дыгай, Е.Д. Гольдберг // Бюлл. эксп. биол. и мед. 2005. - №2. - с. 133-137.

22. Карлсон, Б. Основы эмбриологии по Пэттену. т.1 / Б. Карлсон. М. «Мир»., 1983.-358 с.

23. Кожура, В.Л. Влияние верапамила на активность Са2+-, Mg2+- зависимых эндонуклеаз в клеточных ядрах гипоталамуса при длительном ги-поволемическом шоке / В.Л. Кожура, Н.В. Носова, И.С. Новодержкина // Пат.физ. и эксп. тер. 1998. - № 2. - С. 13-15.

24. Колесникова, Л.И. Роль процессов перекисного окисления липидов в патогенезе осложнений беременности: автореф. дис. докт. мед. наук / Л.И. Колесникова. Иркутск, 1993. - 39 с.

25. Колобова, Е.А. Активность Са2+Л\^2+-зависимых эндонуклеаз в эндометрии: автореф. дис. канд. биол. наук / Е.А. Колобова. -М., 2000. -18 с.

26. Королюк, М.А. Метод определения активности каталазы / М.А. Коро-люк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова, В.Е. Токарев // Лаб.дело. 1988. -№1.-С. 16-19.

27. Кривченкова, Р.С. Определение активности цитохромоксидазы в суспензии митохондрий / Р.С. Кривченкова // Совр. методы в биохимии. -1977.-С. 47-49.

28. Кричевская, А.А. Аминокислоты, их производные и регуляция метаболизма / А.А. Кричевская, А.И. Лукаш, B.C. Шугалей, Т.И. Бондаренко. -Изд-во РГУ, 1983.- 110 с.

29. Крошкина, Н.В. Роль децидуальных лимфоидных клеток в иммунорегу-ляторных процессах при беременности: автореф. дис. канд. биол. наук / Н.В. Крошкина. М. - 19 с.

30. Крукиер, И.И. Динамика цитокинов в разные сроки развития плаценты при физиологической и осложненной беременности / И.И. Крукиер // Вопр. биол. мед. фарм. хим. -2005. №1. - С. 18-21.

31. Крукиер, И.И. Продукция NO и окислительная деструкция белков в плаценте при физиологической беременности и плацентарной недостаточности / И.И. Крукиер // Бюл. эсперим. биол. и мед. 2003. - №10. - с. 418-420.

32. Кулинский, В.И. Две адаптационные стратегии в неблагоприятных условиях — резистентная и толерантная. Роль гормонов и рецепторов / В.И. Кулинский, И.А. Ольховский // Успехи современной биологии. 1992. -Вып. 5/6.-С. 697-714.

33. Куцый, М.П. Участие протеаз в апоптозе / М.П. Куцый, Е.А. Кузнецова,

34. A.И. Газиев//Биохимия. 1999.-Т. 64, вып. 2.-С. 149-163.

35. Липская, Л.А. Зависимая от ионов кальция и магния эндонуклеаза 37 кДа активируется при индуцированном колхицином апоптозе в клетках HL-60 / Л.А. Липская // Цитология. 1994. - Т. 36, № 3. - С. 303-309.

36. Луганова, И.С. Определение 2,3-ДФГ неэнзиматическим методом и АТФ в эритроцитах больных хроническим лимфолейкозом / И.С. Луга-нова, М.Н. Блинов // Лаб. Дело. 1975. - № 7. - С. 652-654.

37. Малкоч, А.В. Физиологическая роль оксида азота в организме / А.В. Малкоч, В.Г. Майданник, Э.Г. Курбанова // Нефрол. и диализ. 2000. -Т.2, №1/2. - С. 47-53.

38. Маянский, А. Н. Апоптоз нейтрофилов / А. Н. Маянский, Н.А. Маян-ский, М.И. Заславская, Н.М. Позднеев, С.Н. Плескова // Иммунология. -1999.-№6.-С. 11-20.

39. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1989. - 340 с.

40. Меньшиков, В.В. Лабораторные исследования в клинике: Справочник /

41. B.В. Меньшиков, Л.Н. Делекторская, Р.П. Золотницкая. М.: Медицина, 1987.-368 с.

42. Меньшикова, Е.Б. Окислительный стресс. Прооксидантны и антиокси-дантны / Е.Б. Меныцикова, В.З. Ланкин, Н.К. Зенков и др. М.: Слово, 2006.-553 с.

43. Микашинович, З.И. Общие и частные закономерности изменений метаболизма в эндокринных органах и крови при разной тяжести травматического шока и острой кровопотери: автореферат дис. докт. биол. наук / З.И.Микашинович. Ростов н/Д, 1989. - 34 с.

44. Милованов, А.П. Патология системы мать-плацента-плод: руководство для врачей / А.П. Милованов. М.: Медицина, 1999. - 448 с.

45. Милованов, А.П. Молекулярные механизмы регуляции цитотрофобла-стической инвазии в маточно-плацентарной области / А.П. Милованов, А.К. Кириченко // Арх. патологии. 2001. - Т. 63, вып. 5. - С. 3-8.

46. Моин, В.М. Простой и специфический метод определения активности глутатионпероксидазы в эритроцитах / В.М. Моин //Лаб. дело. 1986. -№ 12.-С. 724-727.

47. Павлов, О.В. Морфофункциональные характеристики плацентарных макрофагов in vitro при различных исходах беременности / О.В. Павлов, С.А. Сельков, А.В. Селютин и др. // Бюл. эксперим. биол. и медицины. -1999. Т. 127, №4. - С. 429-432.

48. Павлов, О.В. Получение культур плацентарных макрофагов человека / О.В. Павлов, С.А. Сельков, А.В. Селютин, М.С. Шамугия // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1998. - Т. 125, №5. - С. 579-582.

49. Пак, И.В. Состояние перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты при риске невынашивания беременности и при угрожающем выкидыше: автореф дис. канд. мед. наук / И.В. Пак. Алма-ты, 1996.-21 с.

50. Пальцев, М.А. Иммунологические аспекты материнско-плодовых взаимоотношений / М.А. Пальцев, И.Н. Волощук, Е.М. Демидова и др. // Вестн. Рос. АМН. 1999. - №5. - С. 32-36.

51. Побединский, Н.М. Морфофункционая характеристика маточно-плацентарного кровотока / Н.М. ПобединскиЙ, И.Н. Волощук, Е.С. Ляш-ко, П.А. Ковганко // Акуш. и гинекология 1999. - № 2. - С. 7-9.

52. Погорелов, В.М. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом гемопоэзе / В.М. Погорелов, Г.И. Козинец // Гематол. и трансфузи-ол. -т.40, № 5. С. 17-25.

53. Погорелова, Т.Н. Молекулярные аспекты плацентарной недостаточности / Т.Н. Погорелова, В.И. Орлов, Н.А. Друккер, И.И. Крукиер. Ростов н/Д: Изд-во Рост, ун-та, 1997. - 176 с.

54. Прокопенко, В.М. Глутатионзависимая система антиоксидантной защиты при преждевременных родах / В.М. Прокопенко, Г.К. Парцалис, Н.Г. Павлова и др. // Бюл. эксперим. биол. и медицины. -2002. Т. 133, №5. -С. 511-513.

55. Проскуряков, СЛ. Биология окиси азота / С.Я. Проскуряков, А.Г. Коно-плянников, А.И. Иванников, В.Г. Скворцов НУ си. совр. биологии. -1999. Т.119, №4. - С. 380-395.

56. Пшенникова, М.Г. Катехоламины, оксид азота и устойчивость к стрес-сорным повреждениям: влияние адаптации к гипоксии / М.Г. Пшенни-кова, Е.В. Попкова, Н.А. Бондаренко и др. // Рос. физиол. журнал. -2002. Т.88, №4. - С. 485-495.

57. Радзинский, В.Е. Биохимия плацентарной недостаточности / В.Е. Рад-зинский, П.Я. Смалько. М.: Изд-во РУДН, - 2001. - 273 с.

58. Рзакулиева, JI.M. Самопроизвольное прерывание беременности в ранние сроки: автореф дис. канд. мед. наук/Л.М. Рзакулиева. -М., 1991.-21 с.

59. Сельков, С.А. Иммунологические аспекты невынашивания беременности: автореф. дис. .докт. мед. наук / С.А. Сельков. СПб., 1996. - 54 с.

60. Сельков, С.А. Цитокиновая сеть и макрофаги плаценты в регуляции родовой деятельности / С.А. Сельков, О.В. Павлов, А.В. Селютин // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. -2000. Т. 129, №6.-С. 604-610.

61. Сотникова, Н.Ю. Гуморальные, клеточные и рецепторные критерии иммунологического благополучия беременной женщины и новорожденного: автореф дис. докт. мед. наук / Н.Ю. Сотникова. — Иваново, 1992. -37 с.

62. Сторожук, П.Г. Концепция наличия в эритроцитах ферментативной системы, инициирующей оксигенацию гемоглобина / П.Г. Сторожук // Некоторые вопросы медицинской и прикладной энзимологии. — Краснодар, 1988.-С. 4-14. *

63. Сторожук, А.П. Биологическая роль активных форм кислорода при физиологически и патологически протекающей беременности.: автореф. дис.д-ра мед. наук / А.П. Сторожук. Ростов-на-Дону, 2004. - 43 с.

64. Сухих, Г.Т. Иммунология беременности / Г.Т. Сухих, Л.В. Ванько. М: Изд-во РАМН, 2003. - 400 с.

65. Уткин, В.М. Морфологические проявления иммуноклеточных реакций в эндометрии при самопроизвольных выкидышах / В.М. Уткин, Б.И. Глу-ховец, Ю.И. Ухов и др. // Акуш. и гинекология. 1989. - № 6. - С. 3033.

66. Филинова, Н.Ю. Участие плацентарных иммунологических и белковых факторов в патогенезе задержки внутриутробного развития плода у беременных с гестозом: автореф. дис. канд. мед. наук / Н.Ю. Филинова. -Иваново, 2000. 24 с.

67. Хананашвили, Я.А. Апоптоз: морфогенетические и физиологические аспекты / Я.А. Хананашвили, П.А. Хлопонин, Д.П. Хлопонин. Ростов н/Д., 2001,-58 с.

68. Хоменко, Ю.Б. Возможности коррекции адаптационных реакций фетоплацентарного комплекса в III триместре беременности: автореф. дис. канд. мед. наук / Ю.Б. Хоменко. Ростов-на-Дону, 2006. - 22 с.

69. Чумаков, П.М. Функции гена р53: выбор между жизнью и смертью / П.М. Чумаков // Биохимия. 2000. - Т.65, № 1. - С. 34^17.

70. Шамугия, М.С. Плацентарные макрофаги и их секреторные продукты в патогенезе невынашивания: автореф. дис. канд. мед. наук / М.С. Ша-мугия. СПб., 1999. - 23 с.

71. Шатилова, И.Г. Роль плацентарных макрофагов (клетки Кащенко Гоф-бауэра) в развитии ворсин и патогенезе неразвивающейся беременности: автореф. дис. канд. мед. наук / И.Г. Шатилова. -М., 1999. 28 с.

72. Шатилова, И.Г. Плацентарные макрофаги (клетки Кащенко-Гофбауэра) и их роль в патологии / И.Г. Шатилова, А.П. Милованов, М. Кадыров // Архив патологии. 1997. - Т.59, №5. - С. 70-74.

73. Шебзухов, Ю.В. Синтез окиси азота перитонеальными макрофагами мыши под действием С-реактивного протеина / Ю.В. Шебзухов, М.Ю. Вайсбурд, К.В. Артюшкин, Е.Б. Мысякин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1998. - Т. 125, №1. - С. 48-50.

74. Шестаков, В.А. Хемилюминесценция плазмы крови в присутствии перекиси водорода / В.А. Шестаков, Н.О. Бойчевская, М.П. Шерстнев // Вопр. мед. химии. 1979. - Т.25, №2. - С. 132-137.

75. Эфроимсон, В.П. Гениальность и генетика / В.П. Эфроимсон. М.: Информационно-издательское агентство «Русский дом», 1998. - 543 с.

76. Юсупова, Л.Б. О повышении точности определения активности глутатионредуктазы эритроцитов / Л.Б. Юсупова // Лаб. дело. 1989. - № 4. -С. 19-21.

77. Яценко, Т.А. Репродуктивная функция женщин, работающих в мебельном производстве: дис. канд. мед. наук / Т.А. Яценко Ростов-на-Дону, 1989.-259 с.

78. Ahmed, A. Colocalisation of vascular endothelial growth factor and its Fit-1 receptor in human placenta / A. Ahmed, X.F. Li, C. Dunk et al. // Growth Factors. 1995.-V. 12, №3.-P. 235-243.

79. Andrews, P. Evolution and environment in the Hominoidea / P. Andrews // Nature. 1992. - V.360. - P. 641-646.

80. Antonson, B. Inhibition of Bax channel-forming activity by Bcl-2 / B. Anton-son, F. Conti, A. Ciavatta et al. // Science. 1997. - V.277. - P. 370-372.

81. Arid, A. Regulation of monocyte chemotactic protein-1 gene expression in human endometrial cells in cultures / A. Arici, P.C. MacDonald, M.L. Casey //Molec. Cell. Endocrinol.- 1995.-V. 107, №2.-P. 189-197.

82. Arnett, H.A. The protective role of nitric oxide in a neurotoxicant-induced demyelinating model / H.A. Arnett, R.P. Hellendall, G.K. Matsushima et al. // J. Immunol. 2002. - V.168. - P. 427-433.

83. Asahina, T. Studies on the role of adhesive proteins in maintaining pregnancy / T. Asahina, T. Kobayashi, Y. Okada et al. // Hormone Research. 1998. -V.50, Suppl. 2. - P. 37-45.

84. Aschkenazi, S. Differential regulation and function of the fas/fas ligand system in human trophoblast cells / S. Aschkenazi, S. Straszewski, K.M. Verwer et al.// Biol. Reprod. 2002. - V.66, JSr« 6. - P. 1853-1861.

85. Axt-Fliender, R. The immunolocalization of Bcl-2 in human term placenta / R. Axt-Fliender, M. Friedrich, A. Kordina et al.// Clin. Exp. Obstet. Gynecol. -2001.- V.28, №3. P. 144-147.

86. Bae, Y.S. Epidermal growth factor (EGF)-induced generation of hydrogen peroxide / Y.S. Bae, S.W. Kang, M.S. Seo et al. // J. Biol. Chem. 1997. -V. 272.-P. 217-221.

87. Bae, Y.S. Platelet-derived growth factor-induced H202 production requires the activation of phosphatidylinositol 3-kinase / Y.S. Bae, J.Y. Sung, O.S. Kim et al.// J. Biol. Chem. 2000. - V.275. - P. 10527-10531.

88. Baines, M.G. Decidual infiltration and activation of macrophages leads to early embryo loss / M.G. Baines, A.J. Duclos, E. Antecka, E.K. Haddad // Am. J. Reprod. Immunol. 1997. - V.37, № 6. - P. 471-^77.

89. Balcundi, D.R. Labor-associated changes in Fas ligand expression and function in human placenta / D.R. Balcundi, N. Hanna, M. Hileb et al. // Pediatr. res. 2000. - V.47, №3. - P. 301-308.

90. Barsacchi, R. Cyclic GMP-dependent inhibition of acid sphingomyelinase by nitric oxide: an early step in protection against apoptosis / R. Barsacchi, C. Perrotta, P. Sestili et al. // Cell Death Differ. 2002. - №9. - P. 1248-1255.

91. Battaglia, С. Adjuvant L-arginine treatment for in-vitro fertilization in poor responder patients / C. Battaglia, M. Salvatori, N. Maxia et al. // Human Reproduction- 1999. V.14., No.7. - P. 1690-1697.

92. Baumann, R. Hypoxic incubation leads to concerted changes in carbonic anhydrase activity and 2.3-DPG-concentration of chick embryo red cells / R. Baumann, E-A. Haller, U. Schoning, M. Weber // Develop Biol. 1986. -V.116.-P. 548-551.

93. Bischof, P. Control of MMP-9 expresion at the maternal-fetal interface / P. Bischof, A. Meisser, A. Campana // J. Reprod. Immunol. 2002. - V.55. -№1-2.-P. 3-10.

94. Bischof, P. Mechanisms of endometrial control of trophoblast invasion / P. Bischof, A. Meisser, A. Campana // J. Reprod. Fertil. Suppl. 2000. - V. 55. -P. 65-71.

95. Black, S. Syncytial fusion of human trophoblast depends on caspase 8 / S. Black, V. Kadyrov, P. Kaufmann et al. // Cell Death and Differentiation. -2004.-№11.-P. 90-98.

96. Boggess, K.A. Differential localization of placental extracellular superoxide dismutase as pregnancy progresses / K.A. Boggess, H.H. Kay, J.D. Crapo et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. 2000. -V. 183, №1. - P. 199-205.

97. Boggess, K.A. Extracellular superoxide dismutase localization and activity within the human placenta / K.A. Boggess, T.D. Oury, H.H. Kay, J.D. Crapo // Placenta. 1998. - V.19, №5-6. - P. 417-^22.

98. Bosca, L. Mechanisms of nitric oxidedependent apoptosis: involvement of mitochondrial mediators / L. Bosca, S. Hortelano // Cell Signal. 1999. -№11.-P. 239-244.

99. Boveris, A. The role of mitochondrial nitric oxide synthase in inflammation and septic shock / A. Boveris, S. Alvarez, A. Navarro // Free Radic. Biol. Med. 2002. - V. 33. - P. 1186-1193.

100. Bowen, J.A. The role of integrins in reproduction / J.A. Bowen, J.S. Hunt // Pub. Soc. Experim. Biol, and Medicine. 2000. - V.223. - P. 331-343.

101. Brian, R. Apoptosis and its clinical impact / R. Brian, B.R. Gastman // Head & Neck. 2001. - № 6. - P. 409-425.

102. Brookes, P.S. Mitochondria: regulators of signal transduction by reactive oxygen and nitrogen species / P.S. Brookes, A.L. Levonen, S. Shiva, P. Sarti, V.M. Darley-Usmar // Free Radic. Biol. Med. 2002. - V.33. - P. 755-764.

103. Brown, G.C. Nitric oxide inhibition of mitochondrial respiration and its role in cell death / G.C. Brown, V. Borutaite // Free Radic. Biol. Med. 2002. -V.33.-P. 1440-1450.

104. Brune, B. The role of nitric oxide and cyclooxygenase-2 in attenuating apoptosis / B. Brune, A. von Knethen // J. Environ. Pathol. Toxicol. Oncol. -2002.-V.21.-P. 103-112.

105. Burk, M.R. Severely reduced presence of tissue macrophages in the basal plate of pre-eclamptic placentae / M.R. Burk, C. Troeger, R. Brinkhaus et al. // Placenta. 2001. - V.22, №4. - P. 309-316.

106. Burrows, T.D. Expression of adhesion molecules by human decidual large granular lymphocytes / T.D. Burrows, A. King, Y.W. Loke // Cell Immunol. -1993.-V.147,№1.-P. 81-94.

107. Buzza, M. The granzyme В inhibitor, PI-9, is differentially expressed during placental development and up-regulated in hydatidiform moles / M.

108. Buzza, P. Hosking, P. Bird // Placenta 2006. - V.27, №1. - P. 62-69.• • 2+

109. Byrne, A.M. Contribution of increased mitochondrial free Ca to the mitochondrial permeability transition induced by tert-butylhydroperoxide in rat hepatocytes / A.M. Byrne, J.J. Lemasters, A.L. Nieminen // Hepatology. -1999.-V.29.-P. 1523-1531.

110. Chambers, С.A. CTLA-4-mediated inhibitions in regulation of T-cell responses: mechanisms and manipulation in tumor immunotherapy / C.A. Chambers, M.S. Kuhns, J.G. Egen, J.P.Allison // Annu. Rev. Immunol. -2001. -V.19.-P. 565-594.

111. Chang, M.D. Mouse placental macrophages have a decreased ability to present antigen / M.D. Chang, J.W. Pollard, H. Khalili et al.// Proceed. National Acad. Scienc. USA. 1993. - V.90, №2. - P. 462-466.

112. Chen, Q. Senescence-like growth arrest induced by hydrogen peroxide in human diploid fibroblast F65 cells / Q. Chen, B.H. Ames // Procl. Natl. Acad. Sci. USA. 1994. - V.91. - P. 4130-4134.

113. Chiu, P.M. Apoptotic activity in gestational trophoblastic disease correlates with clinical outcome: assessment by the caspase-related M30 CytoDeath antibody / P.M. Chiu, Y.S. Ngan, U.S. Khoo et al.// Histopathol. 2001. - V.38, №3. - P. 243-247.

114. Christen, P. Urate oxidase in primate phylogenesis / P. Christen, W.C. Peackock, A.E. Christen, W.E. Wacker // Eur. J. Biochem. 1970. - V.12. -P. 3-5.

115. Cooper, J.C. Localization of vascular endothelial growth factor and its receptor, fit, in human placenta and decidua by immunohistochemistry / J.C. Cooper, A.M. Sharkey, J. McLaren et al. // J. Reprod. Fertil. 1995. - V.105, №2.-P. 205-213.

116. Costa, N.J. Interactions of mitochondrial thiols with nitric oxide / N.J. Costa, C.C. Dahm, F. Hurrell, E.R. Taylor, M.P. Murphy // Antioxid. Redox. Signal.-2003. №5.-P. 291-305.

117. HO.D'Acquisto, F. Protective role of nuclear factor В against nitric oxide-induced apoptosis in J774 macrophages / F. D'Acquisto, F. de Cristofaro, M.C. Maiuri, G. Tajana, R. Carnuccio // Cell Death Differ. 2001. - №8. - P. 144-151.

118. Dai, H. The polyamine oxidase inhibitor MDL-72527 selectively induces apoptosis of transformed hematopoietic cell through lysosomotropic effects / H. Dai, D.L. Kramer, C. Yang et al. // Cancer. Res. 1999. - V.59. - P.4944-4954.

119. Del Gobbo, V. The immunosuppressive cytokines influence the fetal survival in patients with pregnancy-induced hypertension / V. Del Gobbo, M.G. Giganti, R. Zenobi et al. // Am. J. Reprod. Immunol. 2000. - V.44, №4. -P. 214-221.

120. Deveraux, Q.L. IAPs block apoptotic events induced by caspase-8 and cyto-chrom с by direct inhibition of distinct caspases / Q.L. Deveraux, N. Roy, H.R. Stennicke et al. //Embo. J. 1998. - V. 17. - P. 2215-2223.

121. Dragon, S. Erythroid carbonic anhydrase and hsp70 expression in chick embryonic development: role of cAMP and hypoxia / S. Dragon, R. Baumann // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Сотр. Physiol. 2001. - V.280. - P.870-878.

122. Dragon, S. Hypoxia, Hormones, and Red Blood Cell Function in Chick Embryos / Dragon S., Baumann R. // News in Physiological Sciences. 2003. - V.18,No.2.-P. 77-82.

123. Dragon, S. Norepinephrine-mediated hypoxic stimulation of embryonic red cell carbonic anhydrase and 2,3-DPG synthesis / S. Dragon, S. Glombitza, R. Gotz, R. Baumann // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Сотр. Physiol. 1996. -V.271.-P. 982-989.

124. Dragon, S. Adenosine 3':5'-cyclic monophosphate (cAMP)-inducible pyrimidine 5'-nucleotidase and pyrimidine nucleotide metabolism of chick embryonic erythrocytes / S. Dragon, R. Hille, R. Gotz, R. Baumann // Blood -1998. V.91. - P. 3052-3058.

125. Dragon, S. cAMP and in vivo hypoxia induce tob, ifrl, and fos expression in erythroid cells of the chick embryo / S. Dragon, N. Offenhauser, R. Baumann // Am. J. Physiol. Regul. Interg. Сотр. Physiol. 2002. - V.282. -P. 1219-1226.

126. Droge, W. Free radicals in the physiological control of cell function / W. Droge // Physiol. Res. 2002. - V.82. - P. 47-95.

127. Dudley, D.J. Macrophage inflammatory protein-I alpha regulates prostaglandin E2 and interleukin-6 production by human gestational tissues in vitro / D.J. Dudley, S.S. Edwin, M.D. Mitchell // J. Soc. Gynecol. Invest. -1996. V.3, №1. - P. 12-16.

128. Dudley, D.J. Regulation of decidual cell chemokine production by group В streptococci and purified bacterial cell wall components / D.J. Dudley, S.S. Edwin, J. Van Wagoner et al.// Am. J. Obstet. Gynecol. 1997. - V.177, №3. - P. 666-672.

129. Dudley, D.J. Regulation of human decidual cell macrophage inflammatory protein-1 alpha (MIP-1 alpha) production by inflammatory cytokines / D.J. Dudley, S. Spencer, S. Edwin, M.D. Mitchell // Am. J. Reprod. Immunol. -1995. V.34, №4. - P. 231-235.

130. Edwards, Y.S. NO protects alveolar type II cells from stretch-induced apoptosis. A novel role for macrophages in the lung / Y.S. Edwards, L.M. Sutherland, A.W. Murray // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2000. -V.279. - P. L1236-L1242.

131. Ellman, G.L. Tissue sulfhydryl groups / G.L. Ellman // Arch. Biochem. Bio-phys. 1959. - V.82. - P. 70-77.

132. Erel, C.T. Apoptosis in the placenta of pregnancies complicated with IUGR / C.T. Erel, B. Dane, Z. Calay et al. // Int. J. Gynaecol. Obstet. 2001. - V.73, №3. - P. 229-235.

133. Eu, J.P. An apoptotic model for nitrosative stress / J.P. Eu, L. Liu, M. Zeng, J.S. Stamler // Biochemistry. 2000. - V.39. - P. 1040-1047.

134. Facchiano, F. Transglutaminase activity is involved in polyamine-induced programmed cell death / F. Facchiano, D. D'Arcangelo, A. Riccomi et al. // Exp. Cell. Res. 2001. - V.271. - P. 118-129.

135. Facchinetti, F. Effect of L-arginine load on platelet aggregation: a comparison between normotensive and preeclamptic pregnant women / F. Facchinetti,

136. Neri, F. Piccinini et al. // Acta Obstet Gynecol Scand. 1999a. - V. 78, №6. -P. 515-519.

137. Facchinetti, F. L-arginine infusion reduces blood pressure in preeclamptic women through nitric oxide release / F. Facchinetti, M. Longo, F. Piccinini, I. Neri, A. Volpe // J. Soc. Gynecol. Investig. 1999b. - V.6, №4. - P. 202207.

138. Facchinetti, F. L-arginine infusion reduces preterm uterine contractions / F. Facchinetti, I. Neri, A. Genazzani // J. Perinat. Med. 1996. - V.24, №3. - P. 283-285.

139. Folin, O. The Uric Acid Problem / O. Folin, H. Bergland, C. Derick // The Jornal of biological chemistry. 1924. - V.LX, N.2. - P. 361-471.

140. Fournel, S. Cutting edge: soluble HLA-G1 triggers CD95/CD95 ligand-mediated apoptosis in activated CD8+ cells by interacting with CD8 / S. Fournel, M. Aguerre-Girr, X. Hue et al. // J. Immunol. 2000. - V.164. - P. 6100-6104.

141. Fraser, A. A license to kill / A. Fraser, G. Evan // Cell. 1996. - V.85. - P. 781-784.

142. Fridovich, I. Superoxide dismutases / I. Fridovich // Ann. Rev. of Biochemistry. 1975.-V.44.-P. 147-159.

143. Friedman, T.B. On the loss of urieolytie activity during primate evolution— I. Silencing of urate oxidase in a hominoid ancestor / T.B. Friedman, G.E. Po-lanco, J.C. Appold, J.E. Mayle //Сотр. Biochem. Physiol. 1985. - V.81B. -P. 653-659.

144. Fukushima, K. TNFa-Induced apoptosis and integrin switching in human extravillous trophoblast cell line / K. Fukushima, Sh. Miyamoto, H. Komatsu et al. // Biol. Reprod. 2003. - V.68. - P. 1771-1778.

145. Galea, E. Inhibition of mammalian nitric oxide synthases by agmatine, an endogenous polyamine formed by decarboxilation of arginine / E. Galea, S. Regunathan, V. Eliopoulos et al. // Biochem. J. 1996. - V.316. - P. 247249.

146. Gao, F. Apoptosis during placentation / F. Gao, G.O. Fu, F. Ding, Y.X. Li // Sheng li xue bao Acta physiologica Sinica. 2001. - V.25, №6. - P. 409413.

147. Gardner, L. Dendritic Cells in the Human Decidua / L. Gardner, A. Moffett //BIOLOGYOF REPRODUCTION.-2003.-V.69.-P. 1438-1446.

148. Genbacev, O. Invasive cytotrophoblast apoptosis in pre-eclampsia / O. Gen-bacev, E. DiFederico, M.T. McMaster, S.J. Fisher // Hum. Reprod. 1999. -V.14, Suppl. 2. - P. 59-66.

149. Genbacev, O. A repertoire of cell cycle regulators whose expression is coordinated with human cytotrophoblast differentiation / O. Genbacev, M.T. McMaster, S.J. Fisher // Am. J. Pathol. 2000. - V. 157. - P. 1337-1351.

150. Glombitza, S. Adenosine causes cAMP-dependent activation of chick embryo red cell carbonic anhydrase and 2,3-DPG synthesis / S. Glombitza, S.

151. Dragon, M. Berghammer, M. Pannermayr, R. Baumann // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Сотр. Physiol. 1996. - V.271. - P. R973-R981.

152. Green, D.R. Ten years of publication in cell death / D.R. Green, R.A.Knight, G. Melino, A. Finazzi-Agro, S. Orrenius // Cell Death Differ. 2004. - V.l 1. -P. 2-3.

153. Greenfield, E.A. CD28/B7 costimulation: a review / E.A. Greenfield, K.A. Nguyen, V.K. Kuchroo // Crit. Rev. Immunol. 1998. - V.l8. - P. 389-418.

154. Guleria, I. A critical role for the programmed death ligand 1 in fetomaternal tolerance / I. Guleria, A. Khosroshahi, M. Ansari et al. // JEM. 2005. -V.202, № 2. - P. 231-237.

155. Guskov, E.P. Genetic effects of hyperbaric oxygen therapy / E.P. Guskov, T.P. Shkurat, E.I. Shimanskaja, S.I. Guskova // Mutation research. 1990. -V.241, №1. - P. 341-347.

156. Ha, H.C. The natural polyamine spermine functions directly as a free radical scavenger / H.C. Ha, N.S. Sirisoma, P. Kuppusamy et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1998a. - V.95. - P. 11140-11145.

157. Ha, H.C. Unsymmetrically substituted polyamine analogue induces caspase-independent programmed cell death in Bcl-2-overexpressing cells / H.C. Ha, P.M. Woster, R.A. Casero Jr.// Cancer. Res. 1998b. - V.58. - P. 27112714.

158. Ha, H.C. The role of polyamine catabolism in polyamine analogue-induced programmed cell death / H.C. Ha, P.M. Woster, J.D. Yager, R.A. Casero Jr. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - V.94. - P. 11557-11562.

159. Haddad, E.K. Role of interferon-gamma in the priming of decidual macrophages for nitric oxide production and early pregnancy loss / E.K. Haddad, A.J. Duclos, E. Antecka et al. // Cel. Immunol. 1997. - V. 181, №1. - P. 6875.

160. Haddad, E.K. Early embryo loss is associated with local production of nitric oxide by decidual mononuclear cells / E.K. Haddad, A.J. Duclos, M.G. Baines // J. Experim. Medicine. 1995. - V.182, №4. - P. 1143-1151.

161. Halperin, R. Placental apoptosis in normal and abnormal pregnancies / R. Halperin, S. Peller, M. Rotschild et al. // Gynecol. Obstet. Invest. 2000a. -V.50. - P. 84-87.

162. Halperin, R. Expression of the p53 gene and apoptosis in gestational trophoblastic disease / R. Halperin, S. Peller, J. Sandbank et al. // Placenta -2000b. V.21, № 1. — P. 58-62.

163. Hanssens, M. Identification of rennin-containing cells in the coriodecidua / M. Hanssens, L. Vercruysse, M.J. Keirse et al.// Placenta. 1995. - V.16, №6.-P. 517-525.

164. Hartrec, E.F. Protein measurement with the Folin phenol reagent / E.F. Har-trec // Anal. Biochem. 1972. - V.48, №2. - P. 422^127.

165. Hayashi, T. Purine nucleotide catabolism in placenta / T. Hayashi, R.C. Baldridge, P.S. Olmsted, D.L. Kimmel // Am. J. Obstet. Gynecol. 1964. -V.88.-P. 470-478.

166. Hellsten, Y. Allantoin formation and urate and glutathione exchange in human muscle during submaximal exercise / Y. Hellsten, M. Svensson, B. Sjodin et al. // Free Radic. Biol. Med. 2001. - V.31. - P. 1313-1322.

167. Hoffmann, P. Effects of L-arginine and sodium nitroprusside on the spontaneous contractility of human non-pregnant uterus / P. Hoffmann, F. Stanke-Labesque, R. Fanchin et al. // Human Reproduction. 2003. - V.18, No.l. -P. 148-151.

168. Hoogenraad, N. Inhibition of intestinal citrulline synthesis causes severe growth retardation in rats / N. Hoogenraad, N. Totino, H. Elmer et al. // Am. J. Physiol. 1985. - V.249. - P. G792-G799.

169. Hortelano, S. Nitric oxide induces tyrosine nitration and release of cytochrome с preceding an increase of mitochondrial transmembrane potential in macrophages / S. Hortelano, A.M. Alvarez, L. Bosca // FASEB J. 1999. -V.13.-P. 2311-2317.

170. Hortelano, S. Nitric oxide induces apoptosis via triggering mitochondrial permeability transition / S. Hortelano, B. Dallaporta, N. Zamzami et al. // FEBS Lett. 1997. - V.410. - P. 373-377.

171. Hung, Т.Н. Hypoxia-reoxigenation: a potent inducer of apoptotic changes in the human placenta and possible etiological factor in preeclampsia / Т.Н. Hung, J.N. Skepper, D.S. Charnock-Jones, G.J. Burton // Circ. Res. 2002. -V.90, №12. - P. 1274-1281.

172. Hunt, J.S. Cytokine networks in the uteroplacental unit*, macrophages as pivotal regulatory cells / J.S. Hunt // J. Reprod. Immunol. 1989. - V.16, № 1. - P. 1-17.

173. Hunt, J. Fas ligand is positioned in mouse uterus and placenta to prevent trafficking of activated leukocytes between the mother and the conceptus / J.

174. Hunt, D. Vassmer, T. Ferguson, L. Miller // J. Immunol. 1997. - V.158. - P. 4122-4128.

175. Huppertz, B. Villous cytotrophoblast regulation of the syncytial apoptotic cascade in the human placenta / B. Huppertz, H.G. Frank, J.C. Kingdom, F. Reister, P. Kaufmann // Histochem. Cell Biol. 1998. - V.l 10. - P. 495-508.

176. Huppertz, B. Apoptosis cascade progresses during turnover of human tro-phoblast: analysis of villous cytotrophoblast and syncytial fragments in vitro / B. Huppertz, H.G. Frank, F.Reister et al. // Lab. Invest. 1999. - V.79, №12. -P. 1687-1702.

177. Huppertz, B. Apoptosis and its role in the trophoblast / B. Huppertz, M. Kadyrov, J. Kingdom // Am. J. Obstet. Gyn. 2006. - V.l95. - P. 29-39.

178. Jaffrey, S.R. Protein S-nitrosylation: a physiological signal for neuronal nitric oxide / S.R. Jaffrey, H. Erdjument-Bromage, C.D. Ferris, P. Tempst, S.H. Snyder // Nat. Cell Biol.- 2001.-№3.~ P. 193-197. .

179. Janckila, A.J. Localization of tartrate-resistant acid phosphatase in human placenta / A.J. Janckila, H. Yaziji, S.C. Lear et al. // Histochem. J. 1996. -V.28,№3.-P. 195-200.

180. Jikihara, H. Interferon-gamma inhibits the synthesis and release of renin from human decidual cells / H. Jikihara, A.M. Poisner, S. Handwerger // Biol. Reprod. 1996. - V.54, №6. - P. 1311-1316.

181. Jikihara, H. Tumor necrosis factor-alpha and interleukin-1 beta inhibit the synthesis and release of renin from human decidual cells / H. Jikihara, A.M. Poisner, S. Handwerger // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995. - V.80, №1. -P. 195-199.

182. Jikihara, H. Human uterine decidual macrophages express rennin / H. Jikihara, A.M. Poisner, R. Hirsch, S. Handwerger // J. Clinic. Endocrinol. Metab. 1995.-V.80, №4.-P. 1273-1277.

183. Jochemczyk-Banek, U. A test to evaluate the activity of n-acetyltransferase and catalase in pathologic states of pregnancy / U. Jochemczyk-Banek, L. Dzieciuchowicz, A. Ulfik // Ginekologia Polska. 1996. - V.67, №6. - P. 279-282.

184. Johnson, G. Osteopontin: Roles in Implantation and Placentation / G. Johnson, R. Burghardt, F. Bazer, T. Spencer // BIOLOGY OF REPRODUCTION. -2003.-V.69.-P. 1458-1471.

185. June, C.H. The B7 and CD28 receptor families / C.H. June, J.A. Bluestone, L.M. Nadler, C.B.Thompson // Immunol. Today. 1994. -V.15. - P. 321-331.

186. Ka, H. Temporal and spatial paterns of expession of inhibitors of apoptosis in human placentas / H. Ka, J.S. Hunt // Am. J. Pathol. 2003. - V.163. - P. 413-422.

187. Kam, D. Caspase-14 expression in the human placenta / D. Kam, A. Charles, A. Dharmarajan // Reprod. Biomed. 2005. - V.l 1, №2. - P. 236243.

188. Kanellis, J. Uric Acid stimulates monocyte chemoattractant protein-1 production in vascular smooth muscle cells via mitogen-activated protein kinase and cyclooxygenase-2 / J. Kanellis, S. Watanabe, J. Li et al. // Hypertension. -2003.-V.41.-P. 1287.

189. Kappelmayer, J. Factors of the extrinsic pathway of blood coagulation in fetal placental macrophages / J. Kappelmayer, R. Adany // Am. J. Reprod. Immunol.- 1989.-V.21, №2.-P. 37-40.

190. Kauma, S.W. Placental Fas ligand expression is a mechanism for maternal immune tolerance to the fetus / S.W. Kauma, T.F. Huff, N. Hayes, A. Nilkaeo // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1999. - V.84, №6. - P. 2188-2194.

191. Kelly, R.W. The inhibition of synthesis of a beta-chemokine, monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) by progesterone / R.W. Kelly, G.G. Carr, S.C.

192. Riley // Biochem. Biophys. Research Communic. 1997. - V.239, №2. - P. 557-561.

193. Kerr, Y.F.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics / Y.F. Kerr R., A.H. Wyllie, A.R. Currie // Br. J. Cancer. 1972. - V.26, №2. - P. 239-257.

194. Kim, C.J. Patterns of bcl-2 expression in placenta / C.J. Kim, Y.J. Choe, B.H. Yoon et al. // Pathol. Res. Pract. 1995. - V.191, №12. - P. 12391244.

195. Knowels, R.G. Nitric oxide syntase in mammals / R.G. Knowels, S. Mon-cada // Biochem. J. 1994. - V.298. - P. 249-258.

196. Koenig, J.M. Enhanced expression of Fas-associated proteins in decidual and trophoblastic tissues in pregnancy-induced hypertension / J.M. Koenig, N. Chegini // Am. J. Reprod. Immunol. 2000. - V.42, №6. - P. 347-349.

197. Komar, A.A. The Ure3. Yeast Prion: from Genetics to Biochemistry / A.A. Komar, R. Melki, C.Cullin, 1999. 13 p.

198. Kroemer, G. Classification of cell death: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death / G. Kroemer, W.S. El-Deiry, P. Golstein et al. // Cell Deth and Differentiotion. 2005. - N12. - P. 1463-1467.

199. Krzysiek, J. Immunology of early pregnancy. I. Immunologically competent cells in the endometrium and decidua / J. Krzysiek, G. Turowski // Ginecolo-gia Polska. 1996. - V.67, №9. - P. 467^71.

200. Kudo, Y. Indoleamine 2,3-dioxygenase: distribution and function in the developing human placenta / Y. Kudo, C. Boyd, I. Spyropoulou et al. // J. Re-prod. Immunol. 2004. - V.61. - P. 87-98.

201. Kudo, Y. Mechanisms regulating the expression of indoleamine 2,3-dioxygenase during decidualization of human endometrium / Y. Kudo, T. Нага, T. Katsuki et al. // Human Reproduction. 2004. - V.19, No 5. - P. 1222-1230.

202. Kurauchi, O. The study of mitochondrial gene modifications in human placenta / O. Kurauchi, T. Furui, M. Tanaka et al. // Placenta. 1995. - V.16, №5.-P. 461-467.

203. Lacassie, H. J. Management of Eisenmenger Syndrome in pregnancy With Sildenafil and L-arginine / J.H. Lacassie, A.M.Germain, G. Valdes et al. // Obstetricians and Gynecology. 2004. -V. 103. - P. 118-120.

204. Lagadari, M. Analysis of macrophage presence in murine placenta: influence of age and parity status / M. Lagadari, S. Blois, R. Margni, S. Miranda // Am. J. Reprod. Immunol. 2004. - V.51. - P. 49-55.

205. Lagendijk, J. The determination of allantoin, a possible indicator of oxidant status, in human plasma / J. Lagendijk, J.B. Ubbink, W.J. Vermaak // J. Chromatogr. Sci. 1995. - V.33. - P. 186-193.

206. Lea, R.G. Cytokines and the regulation of apoptosis in reproductive tissues: a review / R.G. Lea, S.C. Riley, C. Antipatis et al. // Am. J. Reprod. Immunol. 1999. - V.42, №2. - P. 100-109.

207. Lees, С. Placental nitric oxide production and umbilical artery vascular impedance in early pregnancy / C. Lees, E. Jauniaux, D. Jurkovic, S. Campbell // Obstet. Gynecol. 1998. - V.91, №5. - P. 761-765.

208. Li, G. Agmatine: an endogenous clonidine-displacing substance in the brain / G. Li, S. Regunathan, C.J. Barrow et al.// Science. 1994. - V.263. - P. 966 -969.

209. Li, G. Agmatine is synthesized by a mitochondrial arginine decarboxilase in brein / Li G., Regunathan S., Reis D.J.// Ann. N.Y. Acad. Sci. 1995. - V. 763.-P. 325-329.

210. Li, H. Regulatory role of arginase I and II in nitric oxide, polyamine, and proline syntheses in endothelial cells / H. Li, C.J. Meininger, J.R. Hawker et al. // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2001. - V.280. - P. E75-E82.

211. Li, L. Inhibition of polyamine synthesis induces p53 gene expression but not apoptosis / L. Li, J. Li, J.N. Rao et al.// Am. J. Physiol. 1999. - V.276. -P. C946-C954.

212. Li, L. NFkB activation and susceptibility to apoptosis after polyamine depletion in intestinal epithelial cells / L. Li, J.N. Rao, B.L. Bass, J.Y. Wang // Am. J. Physiol. -2001. V.280. - P. G992-G1004.

213. Li, P. Cytochrom с and dATP-dependent formation of Apaf-l/caspase-9 complex initiates an apoptotic protease cascade / P. Li, D. Nijhawan, I. Budi-hardjo et al. // Cell 1997. - V.91. - P. 479-489.

214. Liang, L. Regulation of interleukin-6 and interleukin-1 beta gene expression in the mouse deciduum / L. Liang, K. Kover, S.K. Dey, G.K. Andrews // J. Reprod. Immunol. 1996. - V.30, № 1. - P. 29-52.

215. Liston, P. Suppression of apoptosis in mammalian cells by NAIP and related family of IAP genes / P. Liston, N. Roy, K. Tamai et al. // Nature 1996. - V. 379.-P. 349-353.

216. Lowry, O.H. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O.H. Lowry, N.J. Rosenbrough, A.L. Farr, R.J. Randall //J. Biol. Chem. 1951. -V. 193.-P. 192-202.

217. Ma, S.W. A study of the effect of oral glucose loading on plasma oxidant: antioxidant balance in normal subjects / S.W. Ma, B. Tomlinson, I.F. Benzie //Eur. J. Nutr. 2004. - V. 11.

218. Mannick, J.B. Nitric oxide produced by human В lymphocytes inhibits apoptosis and Epstein-Barr virus reactivation / J.B. Mannick, K. Asano, K. Izumi, E. Kieff, J.S. Stamler//Cell. 1994. - V.79. - P. 1137-1146.

219. Many, A. Invasive cytotrophoblasts manifest evidence of oxidative stress in preeclampsia / A. Many, C.A. Hubel, S.J. Fisher et al. // Am. J. Pathol. -2000.-V.l 56.-P. 321-331.

220. Many, A. Hyperuricemia and xanthine oxidase in preeclampsia revisited / A. Many, C.A. Hubel, J.M. Roberts // Am. J. Obstet. Gynecol. 1996a. - V.l74. -P. 288-291.

221. Many, A. Xanthine oxidase/dehydrogenase is present in human placenta / A. Many, A. Westerhausen-Larson, A. Kanbour-Shakir, J.M. Roberts // Placenta.- 1996b.-V.17.-P. 361-365.

222. Marchetti, P. Mitochondrial permeability transition is a central coordinating event of apoptosis / P. Marchetti, M. Castedo, S.A. Susin et al. // J. Exp. Med.- 1996.-V.l 84.-P. 1155-1160.

223. Marietta, M. L-arginine infusion decreases platelet aggregation through an intraplatelet nitric oxide release / M. Marietta, F. Facchinetti, I. Neri, F. Pic-cinini, A. Volpe, G. Torelli // Thromb Res. 1997. - V.88, №2. - P. 229235.

224. Martin, A.A. Genotypic analysis of infant macaques infected transplacental^ and orally / A.A. Martin, N. Lacour, L.N. Martin et al.// J. Medic. Prima-tol. 1996. - V.25, №3. - P. 225-235.

225. Martinou, J.S. Cytochrome с release from mitochondria: all or nothing / J.S. Martinou, S. Desager, B. Antonson // Nat. Cell. Biol. 2000. - №2. - P. 4143.

226. Marzusch, K. Interleukin-12- and interleukin-2-stimulated release of inter-feron-gamma by uterine CD56++ large granular lymphocytes is amplified by decidual macrophages / K. Marzusch // Hum. Reprod. 1997. - V.12, №5. -P. 921-924.

227. Matsubara, S. Enzyme-cytochemically detectable glucose-6-phosphate dehydrogenase in human villous macrophages (Hofbauer cells) / S. Matsubara, T. Takayama, R. Ivasaki et al. // Placenta. 2001a. - V.22, №10. - P. 882885.

228. Maxwell, S.R. Antioxidant status in patients with uncomplicated insulin-dependent and non-insulin-dependent diabetes mellitus / S.R. Maxwell, H.

229. Thomason, D. Sandler et al. // Eur. J. Clin. Invest. 1997. - V. 27. - P. 484490.

230. McCloskey, D.E. Induction of programmed cell death in human breast cancer cells by an unsymmetrically alkylated polyamine analogue / D.E. McCloskey, R.A. Casero Jr., P.M. Woster, N.E. Davidson // Cancer. Res. -1995. V.55. - P. 3233-3236.

231. Meadows, J. Differential localization of prostaglandin E synthase isoforms in human placental cell types / J. Meadows, B. Pitzer, D. Brockman, L. Myatt // Placenta. 2004. - V.25. - P. 259-265.

232. Medina, M.A. Biogenic amines and polyamines / M.A. Medina, J.L. Ur-dales, C. Rodrigues-Caso et al. // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 2003. -V.38.-P. 23-59.

233. Mignotte, B. Mitochondria and apoptosis / B. Mignotte, J.L. Vayssiere // Eur. J. Biochem. 1998. - V.252. - P. 1-15.

234. Mikami, T. Is allantoin in serum und urine a useful indicator of exercise-induced oxidative stress in humans? / T. Mikami, K. Kita, S. Tomita, G. Qu, Y. Tasaki, A. Ito // Free Radic Res. 2000. - V.32. - P. 235-244.

235. Miller, D.K. The role of the caspase family of cysteine proteases in apoptosis / D.K. Miller // Semin. Immunol. 1997. - V.9. - P. 35^9.

236. Minn, A.J. Bcl-x(L) forms an ion channel in synthetic lipid memdranes / A.J. Minn, P. Velez, S.L. Schendel et al. // Nature 1997. - V.385. - P. 353357.

237. Misra, H.P. Superoxide dismutases / H.P. Misra, I. Fridovich // J. Biol. Chem.- 1972.-V.247.-P. 3170-3175.

238. Miura, H. Role for hydrogen peroxide in flow-induced dilation of human coronary arterioles / H. Miura, J.J. Bosnjak, Y. Ibata et al. // Circ. Res. -2003.-V.92.-P. e31-e40.

239. Mizuno, M. Functions of macrophages in human decidual tissue in early pregnancy / M. Mizuno, K. Aoki, T. Kimbara // Am. J. Reprod. Immunol. -1994. V.31, №4. - P. 180-188.

240. Mojena, M. Protection by nitric oxide against liver inflammatory injury in animals carrying a nitric oxide synthase-2 transgene / M. Mojena, S. Hortelano, A. Castrillo et al. // FASEB J. 2001. - V. 15. - P. 583-585.

241. Moncada, S. Biosinthesis and endogenesis roles of nitric oxide / S. Mon-cada, R.M. Palmer J., E.A. Higgs // Pharmacol. Rev. 1991. - V.43. - P. 109-142.

242. Montes, M.J. Constitutive secretion of interleukin-6 by human decidual stromal cells in culture. Regulatory effect of progesterone / M.J. Montes, C.G. Tortosa, C. Borja et al. // Am. J. Reprod. Immunol. 1995. - V.34, №3. - P. 188-194.

243. Mori, T. Isolation and identification of apoptosis inducing nucleosides from CD57(+)HLA-DRbright natural suppressor cell line / T. Mori, M.W. Guo, X.1. et al. // Biochem. Biophys. Res. Communications. 1998. - V.251, №2. -P. 416^22.

244. Morrison, R.F. Vascular endothelial cell proliferation: regulation of cellular polyamines / R.F. Morrison, E.R. Seidel // Cardiovasc. Res. 1995. - V.29. -P. 841-847.

245. Munir, S. Nodal and ALK7 Inhibit Proliferation and Induce Apoptosis in Human Trophoblast Cells / S. Munir, G. Xu, Y. Wu, B. Yang, P. Lala, C. Peng // J. Biol. Chem.- 2004. V.279, №30. - P. 31277-31286.

246. Munn, D.H. Prevention of allogeneic fetal rejection by tryptophan catabo-lism / D.H. Munn, M. Zhou, J.T. Attwood et al.// Science 1998. - V.281 - P. 1191-1193.

247. Mutlu-Turkoglu, U. Imbalance between lipid peroxidation and antioxidant status in preeclampsia / U. Mutlu-Turkoglu, E. Ademoglu, L. Ibrahimoglu et al. // Gynecol. Obstet. Invest. 1998. - V.46, №1. - P. 37^0.

248. Nathan, C. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells / C. Nathan // FASEB J. 1992. - V.6. - P. 3051-3064.

249. Nathan, C. Specificity of a third kind: reactive oxygen and nitrogen intermediates in cell signaling / C. Nathan II J. Clin. Invest. 2003. - V.l 11. - P. 769-778.

250. Neilin, L.D. L-Arginine uptake and metabolism following in vivo silica exposure in rat lungs / L.D. Neilin, G.S. Krenz, L.G. Chicoine et al. // Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 2002. - V.26. - P. 348-355.

251. Neri, I. The L-arginine-nitric oxide system regulates platelet aggregation in pregnancy / I. Neri, M. Marietta, F. Piccinini, A. Volpe, F. Facchinetti // J. Soc. Gynecol. Investig. 1998. - V.5, №4. - P. 192-196.

252. Neri, I. Effects of L-arginine on utero-placental circulation in growth-retarded fetuses / I. Neri, V. Mazza, M. Galassi, A. Volpe, F. Facchinetti // Acta Obstet Gynecol Scand. 1996. - V.75, №3. - P. 208-212.

253. Oda, M. Loss of Urate Oxidase Activity in Hominoids and its Evolutionary Implications / M. Oda, Y. Satta, O. Takenaka, N. Takahata // Molecular Biology and Evolution. 2002. - V. 19. - P. 640-653.

254. Oliver, D. Polyamines as gating molecules of inward-rectifier K+ channels / D. Oliver, T. Baukrowitz, B. Fakler // Eur. J. Biochem. 2000. - V.267. - P. 5824-5829.300.0rowan, E. The origin of man / E. Orowan // Nature. 1955. - V. 175. - P. 683-684.

255. Park, M.H. Identification of hypusine, an unusual amino acid, in protein from human lymphocytes and of spermidine as its biosynthetic precursor / M.H. Park, H.L. Cooper, J.E. Folk // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1981. - V. 78.-P. 2869-2873.

256. Park, M.H. Is hypusine essential for eukaryotic cell proliferation? / M.H. Park, E.C. Wolff, J.E. Folk // Trends Biochem. Sci. 1993. - V. 18. - P. 475479.

257. Patterson, R. Prooxidant and antioxidant properties of human serum ultrafil-trates toward LDL: important role of uric acid / R. Patterson, E. Horsley, D. Leake // Jornal of lipid Reseatch. 2003. - V.44. - P. 512-521.

258. Payne, S.G. Death receptor Fas/Apo-l/CD95 expressed by human placental cytotrophoblasts does not mediate apoptosis / S.G. Payne, S.C. Smith, S.T. Davidge et al. // Biol. Reprod. 1999. - V.50, №5. - P. 1144-1150.

259. Pegg, A.E. Polyamine metabolism and its importance in neoplastic growth and as a target for chemotherapy / A.E. Pegg // Cancer. Res. 1988. - V.48. -P. 759-774.

260. Penning, L.C. Sensitization of TNF-induced apoptosis with polyamine synthesis inhibitors in different human and murine tumour cell lines / L.C. Penning, R.G. Schipper, D. Vercammen et al.// Cytokine. 1998. - V.l0. - P. 423—431.

261. Petroff, M.G. Decidual macrophages are potentially susceptible to inhibition by class la and class lb HLA molecules / M.G. Petroff, P. Sedlmayr, D. Az-zola, J.S. Hunt // J. Reprod. Immunol. 2002. - V.56. - P. 3-17.

262. Petroff, M.G. B7 family molecules are favorably positioned at the human maternal-fetal interface / M.G. Petroff, L. Chen, T. Phillips, D. Azzola, P. Sedlmayr, J. Hunt // Biol. Reprod. -2003. V.68. - P. 1496-1504.

263. Pilbeam, D. Genetic and morphological records of the Hominoidea and Hominoid origins: a synthesis / D. Pilbeam // Mol. Phylogenet. Evol. 1996. -V.5-P. 155-168.

264. Piatt, J.S. Interferon-gamma gene expression in cycling and pregnant mouse uterus: temporal aspects and cellular localization / J.S. Piatt, J.S. Hunt // J. Leukocyte Biol. 1998. - V.64, №3. - P. 393^00.

265. ЗН.Рогапеп, A.K. Lipid peroxidation and antioxidants in normal and preeclamptic pregnancies / A.K. Poranen, U. Ekblad, P. Uotila, M. Ahotupa // Placenta. 1996. - V. 17, №7. - P. 401—405.

266. Quenby, S. Oncogene and tumour suppressor gene products during tro-phoblast differentiation in the first trimester / S. Quenby, C. Brazeau, A. Drakeley et al. // Molec. Hum. Reprod. 1998. - V.4. - P. 477-481.

267. Radi, R. Peroxynitrite reactions and formation in mitochondria / R. Radi, A. Cassina, R. Hodara, C. Quijano, L. Castro // Free Radic. Biol. Med. 2002. -V.33.-P. 1451-1464.

268. Rao, R.M. Cloning and characterization of an apoptosis-associated gene in the human placenta / R.M. Rao, A.M. Dharmaraian, A.J. Rao // Apoptosis. -2000. -V.5, №1. P. 53-60.

269. Rasanen, L.A. Accumulation of allantoin and uric acid in plasma of exercising trotters / L.A. Rasanen, T. Myllymaki, S. Hyyppa, P. Maisi, A.R. Poso // Am. J. Vet. Res. 1993. - V.54. - P. 1923-1928.

270. Ratts, V.S. Expression of BCL-2, В AX and ВАК in the trophoblast layer of the term human placenta: a unique model of apoptosis within a syncytium /

271. V.S. Ratts, X.J. Tao, C.B. Webster et al. // Placenta 2000. - V.21, №4. p. 361-366.

272. Redman, C.W. The pathogenesis of pre-eclampsia / C.W. Redman, I.L. Sargent // Gynecol. Obstet. Fertil. 2001. - V.29, №7-8. - P. 518-522.

273. Reed, J.C. Cytochrom с can live with it - cant live without it / J.C. Reed // Cell - 1997.-V.91.-P. 559-562.

274. Regunathan, S. Stimulation of imidazoline receptors inhibits proliferation of human coronary artery vascular smooth muscle cells / S. Regunathan, D.J. Reis // Hypertension. 1997. - V.30. - P. 295-300.

275. Reister, F. Macrophage-induced apoptosis limits endovascular trophoblast invasion in the uterine wall of preeclamptic women / F. Reister, H.G. Frank, J.C. Kingdom et al.//Lab. Invest. -2001. V.81, №8. -P. 1143-1152.

276. Reynolds, L.P. Angiogenesis in the female reproductive system / L.P. Reynolds, S.D. Killilea, D.A. Redmer // FASEB J. 1992. - V.6. - P. 886-892.

277. Reynolds, L.P. Angiogenesis in the placenta / L.P. Reynolds, D.A. Redmer // Biol. Reproduction 2001. - V.64. - P. 1033-1040.

278. Reynolds, L.P. Utero-placental vascular development and placental function / L.P. Reynolds, D.A. Redmer // J. Anim. Sci. 1995. - V.73. - P. 18391851.

279. Roch, C.R. Differential expressions of fas and fas ligand in human placenta / C.R. Roch, J.W. Lee, B.H. Kang et al. // J. Korean. Med. Sci. 2002. -V. 17, №2. - P. 213-216.

280. Rubio, V. Nitrogen metabolism in the sheep fetus. Observation in the liver and placenta / V. Rubio, C.B. Tan, W.H. Andrews et al. // Biol. Neonate. -1983. V.43, №1-2. - P. 86-91.

281. Ruiz-Chica, J. Characterisation of polyamine-induced aggregates of oli-godeoxyribonucleotides by Raman spectroscopy / J. Ruiz-Chica, M.A. Medina, F. Sanchez-Jimenez, F.J. Ramirez // J. Mol. Struct. 2001. — V.565 -566.-P. 141-146.

282. Satriano, J. Agmatine suppresses proliferation by frameshift induction of an-tizyme and attenuation of cellular polyamine levels / J. Satriano, S. Matsufuji, Y. Murakami et al. // J. Biol. Chem. 1998. - V.273. - P. 15313-15316.

283. Scott, G.S. The role of uric acid in protection against peroxinitrite-mediated pathology / G.S. Scott, D.C. Hooper // Med. Hypotheses. 2001. - V.56. - P. 95-100.

284. Sener, A. Stimulus-secretion coupling of arginine-induced insulin release. Insulinitropic action of agmatine / A. Sener, F. Lebrun, F. Blaicher, W.J. Malaisse // Biochem. Pharmacol. 1989. - V.38. - P. 327-330.

285. Sezukawa, K. Nerve growth factor-induced neuronal differentiation requires generation of Rac-1 -regulated reactive oxygen species / K. Sezukawa, K. Mi-ura, J. Mersushita et al. //J.Biol. Chem.-2000. V.275.-P. 13175-13178.

286. Simister, N.E. Human placental Fc receptors and the trapping of immune complexes / N.E. Simister // Vaccine. 1998. - V.16, №14-15. - P. 14511455.

287. Simons, M. Adenovirus-mediated gene transfer of inhibitor of apoptosis protein delays apoptosis in cerebellar granule neurons / M. Simons, S. Bein-roth, M. Gleichmann et al. // J. Neurochem. 1999. - V.72. - P. 292-301.

288. Sinzger, C. Tissue macrophages are infected by human cytomegalovirus in vivo / C. Sinzger, B. Plachter, A. Grefte et al. // J. Infect. Diseases. 1996. -V.l73, №1. - P. 240-245.

289. Sladek, S.M. Nitric oxide and pregnancy / S.M. Sladek, R.R. Magness, K.P. Conrad // Am. J. Physiol. 1997. - V.272, №2. - P. R441-463.

290. Soloveva, V. Differentiation of placental trophoblast giant cells requires downregulation of p53 and Rb / V. Soloveva, D. Linzer // Placenta. 2004. -V.25, №1. - P. 29-36.

291. Spencer, F. Antiproliferative effects of inducible nitric oxide synthase inhibition on decidualization in pseudopregnant rats / F. Spencer, L. Chi, M.X. Zhu // Proceed. Soc. Exper. Biol. Med. 1998. - V.218, №1. - P. 45-50.

292. Stallmach, T. Cytokine production and visualized effects in the feto-maternal unit / T. Stallmach, G. Hebisch, H.I. Joller-Jemelka et al. // Lab. Invest. 1995. - V.73, №3. - P.384-392.

293. Sturman, J. Polyamine biosynthesis in human fetal liver and brain / J. Stur-man, C. Snail // Inter. Pediat. Ras. Found. 1974. - V.5. - P. 231-237.

294. Sugimoto, M. Polyamines prevent apoptotic cell death in cultured cerebellar granule neurons / M. Sugimoto, J. Harada // Brain Res. 1997. - V.753. - P. 251-259. -----

295. Sugino, N. Changes in activity of superoxide dismutase in the human endometrium throughout the menstrual cycle and in early pregnancy / N. Sugino, K. Shimamura, S. Takiguchi et al. // Hum. Reprod. V.l 1, №5. - P. 10731078.

296. Susin, S. A. Molecular characterization of mitochondrial apoptosis-inducing factor / S.A. Susin, H.K. Lorenzo, N. Zamzami et al. // Nature. 1999. - V. 397.-P. 441-446.

297. Suzuki, A. Involvement of EAT/mcl-1, a bcl-2 related gene, in the apoptotic mechanisms underlying human placental development and maintenance / A. Suzuki, A. Umezawa, M. Sano, S. Nozawa, J. Hata // Placenta. 2000. -V. 21.-P. 177-183.

298. Sy, D. Radioprotection of DNA by spermine: a molecular modeling approach / D. Sy, S. Hugot, C. Savoye et al. // Int. J. Radiat. Biol. 1999. - V. 75.-P. 953-961.

299. Szewczyk, A. Mitochondria as a Pharmacological Target / A. Szewczyk, L. Wojtczak // Pharmacol. Review. 2002. - V.54. - P. 101-127.

300. Takada, Y. The degradation of urate in liver perioxsomes. Association of al-lantoinase with allantoicase in amphibian liver but not in fish and invertebrate liver / Y. Takada, T. Noguchi // J. Biol. Chem. 1983. - V.258. - P. 47624764.

301. Tekin, S. Regulation of numbers of macrophages in the endometrium of the sheep by systemic effects of pregnancy, local presence of the conceptus, and progesterone / S. Tekin, P. Hansen // Am. J. Reprod. Immunol. 2004. -V.51. - P. 56-62.

302. Telfer, J.F. Expression of endothelial and inducible nitric oxide synthase in non-pregnant and decidualized human endometrium / J.F. Telfer, G.A. Irvine, G. Kohnen et al. // Molec. Hum. Reprod. 1997. - V.3, №1. - P. 69-75.

303. Thureen, P.J. Ovine placental and fetal arginine metabolism at normal and increased maternal plasma arginine concentrations / P.J. Thureen, K.A. Baron, P.V. Fennessey, W.W. Hay // Pediatric. Research. 2002. - V.51. - P. 464-471.

304. Uckan, D. Trophoblasts express Fas ligand: a proposed mechanism for immune privilege in placenta and maternal invasion / D. Uckan, A. Steele, B.Y. Cherry et al. // Molec. Hum. Reprod. 1997. - V.3. - P. 655-662.

305. Uyeno, D. The physical properties and chemical composition of human amniotic fluid /D. Uyeno // Amer. Jornal. Of Physiol. 1917. - P. 77-103.

306. Vargiu, C. Agmatine modulates polyamine content in hepatocytes by inducing spermidin/spermin acetyltransferase / C. Vargiu, C. Cabella, S. Belliardo et al. // Eur. J. Biochem. 1999. - V.259. - P. 933-938.

307. Vince, G.S. Immunobiology of human uteroplacental macrophages-friend and foe? / G.S. Vince, P.M. Johnson // Placenta. 1996. - V.l7, №4. - P. 191-199.

308. Von Knethen, A. NF-кВ and AP-1 activation by nitric oxide attenuated apoptotic cell death in RAW 264.7 macrophages / A. Von Knethen, D. Call-sen, B. Brune, // Mol. Biol. Cell. -1999a. V.l0. - P. 361-372.

309. Von Knethen, A. Superoxide attenuates macrophage apoptosis by NF-кВ and AP-1 activation that promotes cyclooxygenase-2 expression / A. Von Knethen, D. Callsen, B. Brune//J. Immunol. 1999b. - V.163. - P. 28582866.

310. Walker, J.J. Antioxidants and inflammatory cell response in preeclampsia / J.J. Walker // Seminars in Reprod. Endocrinology. 1998. - V.l6, №1. - P. 47-55.

311. Wallace, H.M. A perspective of polyamine metabolism / H.M. Wallace, A.V. Fraser, A. Hughes // Biochem. J. 2003. - V.376. - P. 1-14.

312. Wang, J.-Y. Role of K+ channel expression in polyamine-dependent intestinal epithelial cell migration / J.-Y. Wang, J. Wang, V.A. Golovina et al. // Am. J. Physiol. Cell. 2000. - V.278. - P. C303-C314.

313. Wang, Y. Antioxidant activities and mRNA expression of superoxide dis-mutase, catalase, and glutathione peroxidase in normal and preeclamptic placentas / Y. Wang, S.W. Walsh // J. Soc. Gynecol. Invest. 1996. - V.3. - P. 174-184.

314. Ward, S.G. CD28: a signaling perspective / S.G. Ward // Biochem. J. -1996.-V.318.-P. 361-377.

315. Watanabe, S. Uric acid, hominoid evolution, and the pathogenesis of salt-sensitivity / S. Watanabe, D.-H. Kang, L. Feng et al. // Hypertension. 2002. -V.40.-P. 355-366.

316. Watson, A.L. Changes in concentration, localization and activity of catalase within the human placenta during early gestation / A.L. Watson, J.N. Skep-per, E. Jauniaux, G.J. Burton // Placenta. 1998. - V. 19, №1. - P. 27-34.

317. Weels, G. The purines and perine metabolism of the human fetus and placenta / G. Weels, H. Corper // Amer. Jornal of Physiol. 1909. № VI. - P. 469-482.

318. Wetzka, B. Expression of prostacyclin and thromboxane synthases in placenta and placental bed after pre-eclamptic pregnancies / B. Wetzka, D.S. Charnock-Jones, B. Viville et al. // Placenta. 1996. - V.17, №8. - P. 573581.

319. Wolf, B.B. Suicidal tendencies: apoptotic cell death by caspase family proteinases / B.B. Wolf, D. R. Green // J. Biol. Chem. 1999. - V.274. - P. 20049-20052.

320. Wu, G. Arginine metabolism: nitric oxide and beyond / G. Wu, S.M. Morris Jr. I I Biochem. J. 1998. - V.336. - P. 1-17.

321. Wu, W.H. Biosynthesis arginin decarboxilase from Escherichia coli / W.H. Wu, S.M. Morris // J. Biol. Chem. 1973. - V.248. - P. 1687-1695.

322. Wu, X. Two independent mutatinal events in the loss of urate oxidase during hominoid evolutoin / X. Wu, D.M.Muzny, C.C.Lee, C.T.Caskey // J. Mol. Evol. 1992. - V.34. - P. 78-84.

323. Wulf, D. // Physiol. Rev. 2002. - V. 82. - P. 47-95

324. Yamada, T. Endothelial Nitric-oxide Synthase Antisense (NOS3AS) Gene Encodes an Autophagy-related Protein (APG9-like2) Highly Expressed in Trophoblast / T. Yamada, A. Carson, I. Caniggia et al. // J. Biol. Chem. -2005.-V.280,№18.-P. 18283-18290.

325. Yardim-Akaydin, S. Oxidation of uric acid in rheumatoid arthritis: is allan-toin a marker of oxidative stress? / S. Yardim-Akaydin, A. Sepici, Y. Ozkan et al. // Free Radic. Res. 2004. - V.38. - P. 623-628.

326. Yeldandi, A.V. Localization of the human urate oxidase gene (UOX) to lp22 / A.V. Yeldandi, Y.D. Patel, M. Liao et al. // Cytogenet. Cell. Genet. -1992.-V.61.-P. 121-122.

327. Zacharski, L.R. Cellular localization of enzymatically active thrombin in intact human tissues by hirudin binding / L.R. Zacharski, V.A. Memoli, W.D. Morain et al. // Thrombosis & Haemostasis. 1995. - V.73, №5. - P. 793797.

328. Zarlingo, T.J. Comparative localization of endothelial and inducible nitric oxide synthase isoforms in haemochorial and epitheliochorial placentae / T.J.

329. Zarlingo, A.L. Eis, D.E. Brockman et al. // Placenta. 1997. - V.18, №7. - P. 511-520.

330. Ziche, M. Nitric oxide mediates angiogenesis in vivo and endothelial cell growth and migration in vitro promoted by substance P / M. Ziche, L. Morbidelli, E. Masini et al. // J. Clin. Invest. 1994. - V.94. - P. 2036-2044.

331. Zimmerman, T. Synthesis of arachidonic acid in the human placenta in vitro / T. Zimmerman, L. Winkler, V. Moller et al. // Biol. Neonate. 1979. -№35.-P. 209-212.

332. Zitnanova, I. Uric acid and allantoin levels in Down syndrome: antioxidant and oxidative stress mechanisms? / I. Zitnanova, P. Korytar, O.I. Aruoma et al. // Clin. Chim. Acta. 2004. - V.341. - P. 139-146.

333. Zorzi, W. Demonstration of the expression of CD95 ligand transcript and protein in human placenta / W. Zorzi, O. Thellin, B. Coumans et al. // Placenta. 1998. - V.19, №4. - P. 269-277.

Информация о работе

Шестопалов, Александр Вячеславович
доктора биологических наук
Ростов-на-Дону, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Метаболическая активность плацентарных макрофагов и молекулярные механизмы формирования плаценты при различных вариантах течения беременности - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы