Изучение молекулярных механизмов биостимулирующего действия лазерного и светодиодного облучения

Жидкова, Татьяна Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изучение молекулярных механизмов биостимулирующего действия лазерного и светодиодного облучения
ВАК РФ 03.01.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Изучение молекулярных механизмов биостимулирующего действия лазерного и светодиодного облучения"

На правах рукописи

ЖИДКОВА ТАТЬЯНА ВЛАДИМИРОВНА

ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕХАНИЗМОВ БИОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ЛАЗЕРНОГО И СВЕТОДИОДНОГО ОБЛУЧЕНИЯ

03.01.02 - Биофизика

АВТОРЕФЕРАТ Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2011

005015555

Работа выполнена в Государственном учебно-научном учреждении

факультет фундаментальной медицины «Московского государственного

университета имени М.В.Ломоносова»

Научный руководитель:

Академик РАМН, профессор, доктор „ тл „ .

г 1 1 г Владимиров Юрии Андреевич

биологических наук 1 * *

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор

Потапенко Александр Яковлевич

Доктор биологических наук, ведущий „ „ _ _

„ Михальчик Елена Владимировна

научный сотрудник '

Ведущая организация:

Институт Биохимии им. А.Н. Баха РАН

Зашита состоится « » _ 20_ года в_часов

на заседании диссертационного совета Д 208.072.01 при ГОУ ВПО РГМУ по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО РНИМУ им. II.И. Пирогова Минздравсоцразвития России по адресу: 117997, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1

Автореферат разослан « » 20_года

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор V II.Г- Потешкина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования

Более 50 лет тому назад, вскоре после изобретения лазеров возникла и стала развиваться новая медицинская технология лечения широкого круга различных заболеваний - лазерная терапия, однако молекулярные механизмы стимулирующего действия лазеров до сих пор до конца не были изучены. В частности оставались недоказанными предположения о фотореактивации супероксиддисмутазы и об активации дыхательной цепи митохондрий под действием лазерного и светодиодного облучения. Цель исследования

Целью данной работы было изучение молекулярных механизмов биостимулирующего действия лазерного и светодиодного облучения на активность СОД, на функцию изолированных митохондрий, а также разработка методики сравнения фотосенсибилизаторов для их использования в лазеротерапии. Задачи исследования

1. Разработать новую методику определения активности СОД и апробировать её при работе в модельных системах (водные растворы СОД и миметиков СОД) и в работе с образцами биологических жидкостей (плазма, гемолизат эритроцитов и суспензия митохондрий).

2. Осуществить проверку литературных данных об инактивации Си-2п супероксиддисмутазы (СОД) в кислой среде, а также в присутствии пероксида водорода, и ее фотореактивации под действием красного света с использованием разработанного и уже известных методов анализа активности СОД.

3. Изучить влияние лазерного и светодиодного облучения на функцию изолированных митохондрий (скорость дыхания при окислительном фосфорилировании, коэффициент дыхательного контроля и мембранный потенциал).

4. Изучить влияние оксида азота (N0) и последующего лазерного и светодиодного облучения на функцию изолированных митохондрий.

5. Изучить влияние N0 и лазерного и светодиодного облучения на скорости переноса электронов во II-III и IV комплексах дыхательной цепи митохондрий.

6. Разработать методику оценки активности новых сенсибилизаторов для лазеротерапии, основанную на эффективности фотосенсибилизированной пероксидации липидов в биологических (митохондриальных) мембранах.

Научная новизна

При проведении данного исследования была разработана новая методика определения активности СОД, а также миметиков СОД. Изучено действие новых миметиков СОД (медной модели СОД и комплексных соединений N-ацетил-L- цистеина с ионом Со(И), Со(Ш) и Zn(II)), как в модельной системе, так и в ткани. Впервые проведено сравнение действия НИЛИ разных участков оптического спектра на функцию интактных митохондрий в одинаковом интервале доз. Исследовано действие облучения на митохондрии, дыхательная цепь которых ингибирована низкими концентрациями оксида азота. Установлено, что действие синего света разрушает нитрозильные комплексы цитохром с оксидазы в митохондриях (при физиологических концентрациях оксида азота). Предложена методика сравнения активности фотосенсибилизаторов по их способности вызывать перекисное окисление липидов в митохондриях. Практическая значимость

Результаты исследований действия лазерного и светодиодного облучения на митохондрии вносят вклад в фундаментальную науку; полученные закономерности вошли в программу обучения студентов Факультета Фундаментальной медицины МГУ и Медико-биологического факультета РГМУ. Разработанная методика определения активности супероксиддисмутазы может существенно снизить стоимость анализов в экспериментальных и

клинических исследованиях. При создании новых сенсибилизаторов для фотодинамической терапии может быть использована разработанная в диссертации методика оценки их активности. Положения, выносимые на защиту

1. Предположение о том, что при закислении окружающей среды до pH 5,9-6,0 происходит фотоинактивация Си -Zn-СОД, а под действием красного света лазеров происходит фотореактивация (Горбатенкова, Е.А., Азизова и сотр. Биофизика, 1988), в наших опытах не подтвердилось. Нами была разработана методика определения активности СОД и миметиков СОД в системе кобальт/пероксид водорода/люцигенин; с использованием этого, а также других методов было показано, что инактивация Си,Zn-СОД происходит только при pH, ниже 4, и также при инкубации с пероксидом водорода, но при этом воздействие облучения с диной волны 650 нм не приводило к восстановлению активности СОД.

2. Было показано, что наряду с повреждающими действием интенсивного света в синей, красной и зеленой области спектра, которое особенно выражено при высоких дозах облучения, имеет место стимулирующее действие света на перенос электронов в дыхательной цепи митохондрий при действии синего света (7-12%).

3. Важным механизмом биостимулирующего действия лазерного облучения служит фотолиз NO-комплексов переносчиков электрона в дыхательной цепи. Под действием синего света, происходит возрастание скорости переноса электронов в митохондриях, дыхательная цепь которых была ингибирована низкими концентрациями оксида азота (300 нм).

4. Основной мишенью интенсивного света служит, по нашим данным, комплекс N0 с цитохром с оксидазой. В отсутствие NO в среде, ни в одном случае не происходило изменений скорости переноса электронов 11-111 и IV комплексом дыхательной цепи под действием зеленого и красного света, напротив, скорость восстановления цитохрома с на участке II-III

комплексов дыхательной цепи под действие синего света снижалась (на 30% при дозах 3-31 Дж/см2). В то же время активность IV комплекса, ингибированного на 50% оксидом азота, восстанавливалась под действием света (на 30% при длине волны 442 нм и дозе 3 Дж/см2). 5. Разработана методика оценки активности ФС для фотодинамической терапии, основанная на способности фотосенсибилизаторов (ФС) вызывать перекисное окисление липидов в биологических (митохондриальных) мембранах. При этом активность ФС убывает в ряду фотодитазин, темопорфин, фотолон. Внедрение результатов исследования

Результаты исследования (а именно: методика определения СОД, фотолиз нитрозильных комплексов цитохром с оксидазы в митохондриях, сравнение активности фотосенсибилизаторов) являются составной частью лекционных курсов кафедры медицинской биофизики ГУНУ ФФМ МГУ имени М.В. Ломоносова и кафедры медицинской биофизики медико-биологического факультета ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздравсоцразвития России. Апробация

Основные результаты диссертации были представлены в устных, а также тезисах 5 конференций, среди которых: 15-ый международный конгресс «Лазер Хельсинки-2010» (Хельсинки, 2010); Пироговская студенческая научная медицинская конференция (Москва, 2011); 9-я Международная специализированная выставка по аналитической химии «Аналитика Экспо» (Москва, 2011); 35-ая Международная научно-практическая конференция «Применение лазеров в медицине и биологии (Харьков, 2011); 7-ая национальная научно-практическая конференция с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2011).

Диссертационная работа апробирована 11 ноября 2011 г. на совместном заседании кафедры медицинской биофизики ГУНУ ФФМ МГУ имени М.В. Ломоносова и кафедры и отдела медицинской биофизики МБФ ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития России. Публикации

В ходе выполнения диссертационной работы по материалам исследований были опубликованы 5 статей (в том числе 3 в международной печати), а также 5 тезисов конференций. Объем и структура работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 6 глав результатов и обсуждения результатов, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 186 источник. Работа выполнена на 138 страницах машинописного текста. Иллюстрированный материал представлен 46 рисунками и 16 таблицами. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Реагенты В работе использовали дигидрофосфат калия, люцигенин, пероксид водорода, хлорид кобальта (11) шестиводный, гемоглобин, супероксид дисмутаза (СОД), миметики СОД, буфер Кребса-Рингера рН 7,4, гепарин, НЕРЕБ, трис-НС1, ЭДТА, сахароза, цитохром с из сердца лошади, маннитол, АТФ, АДФ, сукцинаг натрия, ОЬ-дитиотреитол, хлорид калия, хлорид магния, азид натрия, .1С-1, диметилсульфоксид, реагент для определения общего содержания белка, бычий сывороточный альбумин, дилипидированный бычий сывороточный альбумин, сульфит натрия, хлорид натрия, люминол, 2,2'-азобис(2-метилпропионамидин)дигидрохлорид, пероксидаза из корней хрена, глицин, оксид азота N0, метиленовый синий, кристаллический фиолетовый и бриллиантовый зеленый.

Получение раствора оксида азота 10 мл 125 мМ раствора КС1 помещали в герметичный сосуд и пропускали 10-15 минут аргон для удаления кислорода из раствора. Полученный раствор насыщали газообразным N0 10 минут при

комнатной температуре. Полученный раствор использовали в день приготовления.

Хемилюминесцентные измерения Для измерения хемилюминесценции в системе кобальт, пероксид водорода и люцигенин и железоиндуцированного перекисного окисления липидов суспензии митохондрий использовали хемилюминометр ИнтерОптика-С SmartLum-5773 (Россия). Измерения проводили при температуре 25°С. Измерения люцигенинзависимой хемилюминесценции в ткани проводили при постоянной аэрации. Электрохимические измерения Для измерения потребления кислорода суспензией митохондрий использовали датчики типа Кларка (Эконикс-Эксперт, Россия). В качестве субстратов использовали сукцинат натрия и АДФ. Измерения проводились при постоянном перемешивании при температуре 25°С.

Спектрофотометрия Для измерения скорости восстановления/окисления цитохрома с, концентрации белка и оксида азота, получения спектров поглощения использовали спектрофотометр SPECORD 200 (Analytic Jena, Германия) или BECKMAN 65 (Beckman, США). Измерения проводились в стеклянных и пластиковых кюветах с длиной оптического пути 1,00 см. В модельной проточной системе использовали фотоэлектроколориметр КФК-3 и цилиндрическую кварцевую проточную кювету (1=1,5 см). Измерения проводили при температуре 25°С.

Флуоресценция JC-1 Для оценки мембранного потенциала митохондрий использовали флуоресценцию JC-1, измеренную на спектрофлуориметре Hitachi MPF-4 (Япония). Спектры флуоресценции измеряли при Х.ех = 490 нм, мембранный потенциал оценивали по интенсивности флуоресценции J-агрегатов (Хет = 590 нм). Измерения проводили при температуре 25°С. Облучение образцов В качестве источника излучения использовали лазерный диод с длиной волны 650 нм (40 мВт; диаметр луча 5 мм, Интероптика, Россия) и лазеры с длиной волны 532 нм (20 мВт; диаметр луча 5 мм, Лазер-Экспорт,

Россия) и 442 им (20 мВт; диаметр луча 5 мм, Plasma, Россия). Облучение проводили при постоянном перемешивании, расстояние источника излучения до образца составляло 20 см.

Статистический анализ Данные представлены в виде среднего значения М и стандартного отклонения SD (M±SD). Для статистической обработки результатов использовали критерии Стьюдента, Даннета и Ньюмена-Кейлса. Линеаризацию данных проводили с использованием метода наименьших квадратов. РЕЗУЛЬТАТЫ

При создании новой методики для определения активности СОД на первом этапе были подобраны условия проведения анализа в системе кобальт, пероксид водорода и люцигенин. С ростом концентрации каждого из компонентов наблюдали рост интенсивности хемилюминесценции. При определение активности СОД в биологических образцах интенсивность хемилюминесценции должна быть достаточно высока для приемлемой воспроизводимости данных, а развитие хемилюминесценции должно происходить в короткий срок. Мы выбрали в качестве оптимальных концентраций кобальта, пероксида водорода и люцигенина 0,30, 3,00 и 0,10 мМ соответственно. При этом время продолжительность записи кривой хемилюминесценции выбрано 10 минут.

Далее методика была апробирована в водных растворах СОД. С ростом концентрации СОД наблюдалось снижение интенсивности хемилюминесценции (Рис. 1А). Для построения градуировочной зависимости использовали площадь под кривой хемилюминесценции за 10 минут. Линеаризацию проводили в координатах Штерна-Фольмера S0 / S и с(СОД), где

250 200

(Я

а 150 £ £100

50 0

0 нМ 0,25 нМ

0,75 нМ

1,50 нМ

4,00 нМ

2 4 6 8 10

Время, мин

1 2 3

с (СОД), нМ

Рисунок 1 Влияние СОД на хемилюминесценцию в системе Сог+, Н202 и люцигенин. А Хемилюминесцентные кривые. В растворе 100 мМ ФБ рН 8,5 (общий объем 1000 мкл), 0,30 мМ СоС12, 0,10 мМ люцигенин, 3,00 мМ пероксида водорода, СОД от 0,13 до 4,00 нМ. Б Зависимость площади под кривой хемилюминесценции от концентрации СОД в координатах Штерна-Фольмера.

площадь под кривой в присутствии СОД, - площадь под кривой без СОД и с(СОД) - концентрация СОД (Рис. 1 Б).

Данной методикой установлена активность СОД в ед/мг белка во фракции митохондрий (1188±184), эритроцитах (153±20) и плазме (51 ±2) крыс (п = 3), а также в эритроцитах (247±29) и плазме (35±2) человека (п = 5). Метод также апробирован на новых миметиках СОД. Параметры линейного уравнения, а также величина с,/2 представлены в таблице 1.

Таблица 1 Аналитические параметры определения СОД и миметиков СОД (п = 9, р = 0,95)._

Аналит Диапазон линейности Сггмп С]/2 И

СОД 0,06-4,00 нМ 0,02 нМ (0,8±0,1) нМ 0,997

Медная модель СОД 45-320 нМ 15 нМ (96±12)нМ 0,994

Комплексное соединение Со (II) 0,01 -0,2 мМ 4 мкМ (58±14) мкМ 0,992

Комплексное соединение Со (III) 0,003-1 мМ 1 мкМ (95±9) мкМ 0,996

Комплексное соединение гп (II) 0,3-70 мкМ 0,1 мкМ (20±2) мкМ 0,995

Для проверки гипотезы о фотореактивации СОД разработанную методику, а также известные методики определения активности СОД в системе азобис(2-метилпропионамидин)дигидрохлорид-люминол и пероксидаза из корней хрена-люминол для определения активности СОД использовали при изучении влияния рН, пероксида водорода и излучения в кранной области спектра (650 им) на активность фермента. Активность СОД, выдержанной при рН 6 (рис. 2), не отличалась статистически значимо от активности СОД, выдержанной в нейтральной среде и снижалась при рН ниже 5, а области рН 23 падала до 30-36% от контрольного значения (рис. 2). Активность СОД при выдерживании 2 часа с пероксидом водорода падала (Рис. 2) на 30% при рН 6 и 7, после чего постепенно снижалась на 70% от контрольного значения при рН 7 без пероксида водорода (рис. 2). Облучение образцов СОД при рН 3 не приводило к восстановлению активности СОД, а облучение образцов при рН 6 и 7 в присутствии Нг02 приводило к еще большему снижению активности СОД

•♦■СОД »СОД+Ю мкМ пероксид водорода

Рисунок 2 Зависимость активности СОД (Асод) от рН (-♦-) и активности СОД в присутствии 10 мкМ пероксида водорода Н2О2 (-■-) в системе кобальт/пероксид водорода/люцигенин. Символом * отмечены точки, отличающиеся от контрольного значения при рН 7,0 (а = 0,05).

120 і ¡с юо £ 80 1 60 а 40 |20 о -

100

ОрН 7,0 орН 3,0 0рН 3,0+ Иу

120 °"100 £ 80 1 60

,8 20 о

100

□ рН 7,0 !

□ рН 7.0+Н202 орН 7,0+Н202+Иу

□ рН 6,0+Н202 ирН 6,0+Н202+Иу

60 70

шііі—

Рисунок 3 Влияние облучения с длиной волны 650 нм, доза 6 Дж/см , на активность супероксиддисмутазы (Лсод)і инактивированной при рН 3 (А) и 10 мкМ пероксида водорода при рН 7 и 6 (Б). Символом * отмечены точки, отличающиеся от контрольного значения (а = 0,05). Символом # отмечены точки, отличающиеся от необлученного образца (а = 0,05) при одинаковом рН.

на Ю и 30 % соответственно по сравнению с контрольным значением при рН 7 (рис. 3).

Для исследования стимулирующего действия излучения в разных частях видимого спектра (442, 532 и 650 нм) на митохондрии изучали влияние различных доз облучения на параметры дыхания интактных органелл (скорость потребления кислорода при окислительном фосфорилировании У3, коэффициент дыхательного контроля ДК, скорости переноса электронов во II-III и IV комплексах дыхательной цепи, а также мембранный потенциал). Изменение скорости У3 при облучении представлено на рисунке 4А. Как можно видеть при 442 нм происходило постепенное увеличение скорости У3, которое достигало максимума (112%) для дозы 6 Дж/см2, после чего происходило снижение. По-видимому, дыхательная цепь в норме частично ингибирована оксидом азота. А под действием света комплексы диссоциируют и увеличивается потребление кислорода. Можно сделать предположение, что под действием синего света происходит разрушение светочувствиетельных комплексов в дыхательной цепи митохондрий, что приводит к нарастанию скорости У3.

В случае 532 нм (рис. 4А) статистически значимых отклонений от контроля У3 не обнаружено, хотя и наблюдалось постепенное снижение. При свете в области 650 нм происходит снижение УЗ до 75% при дозах 6-31 Дж/см2. Зависимость коэффициента ДК от дозы облучения для различных длин волн представлено на рисунке 4Б. Коэффициент ДК постепенно снижался с увеличением дозы облучения для всех длин волн. При этом в наибольшей степени ДК снижался при облучении 650 нм (на 40% от контроля), в случае 442 и 532 нм снижение ДК происходило на 20 и 23% соответственно при максимальной дозе облучения.

В ряде работ утверждалось, что облучение митохондрий светом Не-Ые лазера приводит к росту мембранного потенциала. Хотя для синего, зеленого и красного источников света мы наблюдали изменения в скорости дыхания, статистически значимых изменений в мембранном потенциале не обнаружено. Можно сделать вывод, что действие облучения с длинной волны 442, 532 и 650 нм в диапазоне доз 0-31 Дж/см' не приводит к повреждению митохондрий, сопровождающемуся снижением мембранного потенциала. Так как светочувствительные комплексы дыхательной цепи митохондрий могут быть первичными фотоакцепторами облучения, была проведена серия экспериментов, в которых исследовалось влияние света разных длин волн (442, 532 и 650 нм) на митохондрии, дыхательная цепь которых ингибирована N0. Для этого изучали влияние оксида азота и облучения на параметры митохондрий. При увеличении концентрации оксида азота от 300 нМ до 10 мкМ наблюдали постепенное снижение скорости У3 и коэффициента ДК. Для исследования действия облучения на митохондрии, ингибированные N0 использовали низкую концентрацию оксида азота 300 нМ, близкую к физиологическому уровню N0 в норме до 200 нм, когда оксид азота преимущественно связывается с цитохром с оксидазой.

Доза, Дж/см2

Рисунок 4 На рисунке (А) представлена зависимость скорости потребления кислорода митохондриями в 3 состоянии Уз (% к контрольному образцу без облучения) и коэффициента дыхательного контроля ДК (Б) от дозы облучения для 442 (♦), 532 (ш) и 650 (А) нм. Символом * отмечены точки, отличающиеся от контрольного значения (а = 0,05).

Добавление 300 нм оксида азота к митохондриям (рис. 5) вызывало снижение скорость V} примерно на 47%, а ДК в среднем до 2.8 (41% от контроля). Облучение образцов, ингибированных 300 нМ N0, только в случае 442 нм приводило к статистически значимому росту скорости V-,, на 62%, а также к росту коэффициента ДК на 36% относительно митохондрий, ингибированных N0 (Рис 5А и Б).

Действие синего лазера связано, по-видимому, с разрушением нитрозильных комплексов дыхательной цепи, образовавшихся при добавлении оксида азота. Однако изучение параметров дыхания интактных органелл не дает ответ на вопрос, какие именно нитрозильные комплексы в дыхательной цепи чувствительны к облучению. Для уточнения локализации стимулирующего и ингибирующего действия облучения на митохондрии оценивали скорость переноса электронов на участке П-Ш и IV комплексов дыхательной цепи соответственно под действием облучения и оксида азота.

120 100 ^80

>40

го -i о

п Контроль

□ 300 нМ NO

□ NO + 442 нм

□ NO + 532 нм

□ NO + 650 нм

100 НЬ -!J—

86 i

53 49 54

120 10 0 -^80 ¿■60 ^ 40 20 0 J

100

□ Контроль

□ 300 нМ NO

□ NO + 442 нм о NO + 532 нм

□ NO + 650 нм *J]__

Рисунок 5 Влияние 300 нМ N0 и облучения (доза 3 Дж/см ) на скорости потребления кислорода митохондриями в состоянии У3 (А) и коэффициента дыхательного контроля ДК (Б), выраженные в процентах к контролю. Символом * отмечены точки, отличающиеся от контрольного значения (а = 0,05). Символом # отмечены точки, отличающиеся от образца с 300 нМ N0 (а = 0,05).

Влияние различных доз облучения при 442, 532 и 650 нм на активность II-III комплексов представлено на рис. 6А, Б и В соответственно. Согласно полученным результатам, статистически значимое изменение скорости переноса на уровне П-Ш комплексов происходило только в случае синего

лазера. При этом активность 11-Ш комплексов снижалась примерно на 30% независимо от дозы облучения. Эффект синего лазера на скорость переноса электронов между II и III комплексами (снижение скорости), по-видимому, связан с разрушением под действием синего света фрагмента сукцинатдегидрогеназы флавинадениндинуклеотида (ФДН). ФДН образуется из рибофлавина, а чувствительность рибофлавина к синему свету общеизвестна. Изменений в скорости переноса электронов П-Ш комплексов при облучении 532 и 650 нм не зафиксировано.

Эффекта активации светом синего лазера на уровне цитохром с оксидазы, как и угнетения красным светом, обнаруженного на интактных митохондриях, не выявлено. Возможно, при подготовке митохондрий к измерению активности IV комплекса (заморозка при -20°С) образцы теряют чувствительность к действию

120 110 , 100 І 90 -І 80 -' 70 60 50

442 нм

5 10 15 20 25 Доза, Дж/см2

120 т 110 ^ 100 + * 90

I 80 і 4 70 60 50

• 532 нм

0 5 10 15 20 25 30 Доза, Дж/см2

-і" '

■ 650 нм

120 110 ^100 ^ 90 Ї 80 70 і 60 50

0 5 10 15 20 25 30 Доза, Дж/см2

Рисунок 6 Зависимость активности ІІ-Ш комплексов (Лц.ш) от дозы облучения 442 нм (А), 532 нм (Б) и 650 нм (В). Символом * отмечены точки, отличающиеся от контрольного значения (« = 0,05).

света, вызванную нарушением работы NO-синтазы или выходом оксида азота из активного центра IV комплекса (теряется чувствительность к синему свету), выходом гематопорфиринов из мембран (теряется чувствительность к красному свету).

При ингибировании оксидом азота II-III и IV комплексов концентрация N0. необходимая для 50% ингибирования, составляла 3 мкМ. При действии света с длиной волны 442 нм активность II-III комплексов, ингибированного N0, падала на 16%, действие света с длиной волны 532 и 650 нм изменений не вызывало (рис. 7А). Активность IV комплекса, ингибированного N0,

120 100 -5? 80 | 60 * 40 20 0

100

□ Контроль Q 3мкМ NO

□ N0+442 нм

□ N0+532 нм

□ N0+650 нм

1 ш

28 44 43

120 н 100

s?80 J "¿60 -

4 40

0 J

□ Контроль

□ 3 мкМ N0

□ N0+442 нм

□ N0+532 нм

в N0+650 нм

і •

100

78 59

55 55

Рисунок 7 Влияние добавки 3 мкМ оксида азота (N0) и облучения с длиной волны 442, 532 и 650 нм (доза 3 Дж/см2) на активность П-Ш (А) и IV (Б) комплексов. Символом * отмечены точки, отличающиеся от контрольного значения (а = 0,05). Символом # отмечены точки, отличающиеся от образца с добавкой 300 нМ N0 (а = 0,05).

возрастала на 33% при действии света с длиной волны 442 нм, в то время как облучение 532 и 650 нм активность IV комплекса не восстанавливали (рис. 7Б). Одно из самых распространенных использований лазера в клинической практике - облучение крови. Однако использование данного эффекта в терапевтических целях ограничено тем, что концентрация эндогенных порфиринов в организме человека варьируется в широком интервале, поэтому требуется индивидуальный подход при выборе доз. Использование экзогенных порфиринов при облучении крови является альтернативным решением. Стимулирующая доза при этом будет определяться количеством экзогенного

фотосенсибилизатора и его активностью. Концентрацию фотосенсибилизатора в крови непосредственно после инъекции препарата легко рассчитать, зная количество введенного препарата и объем циркулирующей крови (ОЦК). Поэтому следующим шагом исследования было сравнение способности фотосенсибилизаторов, применяемых для фотодинамической терапии, вызывать перекисное окисление липидов в мембранных структурах митохондрий при облучении в красной области спектра (650 нм), а также разработка нового подхода при определении ОЦК. Перспективным направлением в данной области является фотометрическая экспресс оценка ОЦК без априорной информации. Для создания методики подобраны и исследованы несколько красителей (кристаллический фиолетовый, бриллиантовый зеленый и метиленовый синий), разрешенных для внутривенного использования. В результате экспериментов оптимальными условиями измерений признаны 630 и 690 нм для метиленового синего и 615 и 663 нм для кристаллического фиолетового.

Для характеристики исследуемых фотосенсибилизаторов были сняты спектры поглощения индивидуальных веществ, все фотосенсибилизаторы имели максимумы поглощения в области 400-700 нм. В красной области для всех соединений максимум находился в районе 650-660 нм. Были экспериментально рассчитаны коэффициенты молярного поглощения при длине волны 650: (0,039 ± 0,002), (0,057 ± 0,002) и (0,0043 ± 0,0007) млмкг'см"' для фотодитазина, темопорфина и фотолона соответственно (я = 3). Так как степень перекисного окисления зависит как от концентрации фотосенсибилизатора, так и от дозы облучения, были проведены серии экспериментов, в которых варьировались концентрации ФС и доза облучения. В ходе экспериментов выяснилось, что количество накопившихся перекисей липидов (соответствующее корню интенсивности быстрой вспышки Ун), прямо пропорционально поглощенной дозе облучения (рис. 8).

1,4

1,2 -

О)

О,;

О,'

О,:

0,1

■ Фотодитазин

* Темопорфин

♦ Фотолон

с (мкг/мл)

Рисунок 8 Зависимость tgA (скорости накопления перекисей липидов при облучении митохондрий в присутствии фотосенсибилизатора) от концентрации фотосенсибилизатора.

Тангенс угла наклона на рис. 8 определяет выход гидропероксидов (или радикалов) липидов при облучении, что определяет цитотоксический эффект. Таким образом, цитотоксический эффект убывает в ряду фотодитазин > темопорфин > фотолон. ВЫВОДЫ

В ходе проделанной работы сделаны следующие выводы: I. В связи с необходимостью проверки гипотезы о фотореактивации СОД предложена новая методика определения активности СОД и миметиков СОД в системе кобальт, пероксид водорода, люцигенин при рН 8,5. Данным методикой установлена активность СОД в ед/мг белка во фракции митохондрий (1188±184), эритроцитах (153±20) и плазме (51±2) крыс (п = 3), а также в эритроцитах (247±29) и плазме (35±2) человека (п = 5). Метод позволил оценить активности четырех новых миметиков СОД. При исследовании способности миметиков СОД уменьшать образование супероксидных

радикалов в ткани наиболее перспективной оказались медная модель СОД и комплексное соединение с ионом Со(П).

2. Было проведено исследование влияния рН, пероксида водорода и излучения на активность СОД с применением трех методов, в том числе разработанного нами. Было показано, что активность Си,2п-С0Д при снижении рН падает только при рН ниже 4 и после этого не восстанавливается при облучении светом с длиной волны 650 нм (доза 6 Дж/см2). Активность фермента также снижалась при рН 7 и 6 на 30% при выдерживании фермента в растворе пероксида водорода. Однако облучение образцов, инактивированных пероксидом водорода, светом с длиной волны 650 нм (доза 6 Дж/см2) вызывает снижение активности СОД, что объясняется образованием дополнительного количества радикалов из пероксида водорода, чувствительного к свету. Полученные данные не подтвердили данные о фотореактивации СОД под действием красного света лазера (Горбатенкова, Е.А., Азизова и сотр. Биофизика, 1988).

3. Поскольку в литературе было высказано предположение, согласно которому биостимулирующее действие на митохондрии вызывает стимуляцию дыхательной цепи, было проведено исследования влияния облучения в разных частях спектра на параметры интактных органелл. Во всех случаях было обнаружено деструктивное действие облучения, выраженное в снижении коэффициента дыхательного контроля, а в случае красного света в снижении скорости У3. Стимулирующий эффект наблюдали только при облучении синим светом при низких дозах (доза 3-6 Дж/см2), выраженный в росте скорости дыхания митохондрий в 3 состоянии, эффект можно объяснить светочувствительностью нитрозильных комплексов дыхательной цепи.

4. Для проверки гипотезы о фоточувствительности нитрозильных комплексов в дыхательной цепи было проведено исследование влияния облучения на митохондрии, ингибированные N0. Было обнаружено, что под действием оксида азота происходит снижение скоростей У3 и коэффициента дыхательного

контроля. При этом скорость V3 и коэффициент ДК митохондрий, ингибированных 300 нм N0 на 53 и 59%, восстанавливалась на 62 и 36% соответственно под действием синего света (442 нм, доза 3 Дж/см2). При 532 и 650 нм восстановления не происходило.

5. Чтобы уточнить локализацию повреждающего и стимулирующего действия облучения в дыхательной цепи митохондрий, было проведено сравнение скоростей переноса электронов во II-III и IV комплексах под действием N0 и облучения. Ни в одном случае нам не удалось обнаружить изменений под действием зеленого и красного света. Под действием синего света (дозы 331 Дж/см2) наблюдалось снижение скорости переноса электронов во П-Ш комплексах, что возможно связано с фотохимической реакцией флавинадениндинуклеотида - фрагмента комплекса II. При этом активность цитохром с оксидазы, но не II-III комплексов, в митохондриях, ингибированных N0, восстанавливалась под действием света 442 нм (доза 3 Дж/см2). Полученные данные свидетельствуют, что активация дыхательной цепи митохондрий связана с фотолизом комплексов N0 с цитохром с оксидазой.

6. Проведено сравнение способности фотосенсибилизаторов вызывать перекисное окисление липидов в мембранных структурах митохондрий при облучении светом с длиной волны 650 нм. Согласно полученным результатам, цитотоксический эффект убывает в ряду фотодитазин, темопорфин, фотолон.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Жидкова Т.В., Проскурнин М.А., Соколов М.Э., Поленова Т.В., Иванова Е.К. Спектрофотометрическая экспресс-оценка объема циркулирующей крови без априорной информации // Технологии живых систем. 2010. №4. С. 26-34.

2. Zhidkova T.V., Vladimirov Y.A. Effect of nitric oxide and laser and LED radiation on mitochondrial respiration and membrane potential // Photodiagnosis Photodyn Ther. 2010. V.7. Supplement 1. P. 29.

3. Жидкова T.B., Полимова A.M. Сравнение активности новых миметиков супероксиддисмутазы в срезах головного мозга мышей // Вестник РГМУ. 2011. №1. С. 180.

4. Zhidkova T.V., Proskurnina E.V., Parfenov Е.А., Vladimirov Y.A. Determination of superoxide dismutase and SOD-mimetic activities by a chemical system: Co2/H202/lucigenin // Anal Bioanal Chem. 2011 V. 401. № 1. P. 381-6.

5. Proskurnin M.A., Zhidkova T.V., Volkov D.S., Sarimollaoglu M., Galanzha E.I., Mock D., Nedosekin D.A., Zharov V.P. In vivo multispectral photoacoustic and photothermal flow cytometry with multicolor dyes: A potential for real-time assessment of circulation, dye-cell interaction, and blood volume II Cytometry A. 2011. V. 70. № 10. P.834-47.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Жидкова, Татьяна Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1. Актуальность работы.

1.2. Целиизадачи.

1.3. Научная новизна работы.

1.4. Практическое значение работы.

1.5. Положения, выносимые на защиту.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Гипотезы механизма действия НИЛ И.

2.2. Развитие представлений о фотодинамическом механизме биостимулирующего действия лазерного и светодиодного излучений.

2.2.1. Предпосылки фотодинамической гипотезы.

2.2.2. Действ ие гелий неонового лазера на клетки.

2.2.3. Общесистемное действии фотоиндуцироаанного прайминга гранулоцитов крови.

2.2.4. Фотодинамический механизм действия красного света на заживление ран.

2.2.5. Фотодинамический механизм общесистемного действия локального облучения лазером или светодиодами.

2.3. Фотореактивация супероксиддисмутазы.

2.3.1 Методы определения активности супероксиддисмутазы.

2.4. Фотолиз нитрозильных комплексов.

2.4.1. Нитрозильные комплексы гемоглобина.

2.4.2. Нитрозильные комплексы цитохрома

2.4.3. Нитрозильные комплексы цитохром с оксидазы.

2.5. Возможные механизмы действия света лазера в красной и ИК области спектра.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. реагенты.".

3.2. Аппаратура.

3.3. Методики.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ.

4.1. Проверка гипотезы о фотореактовациисупероксиддисмутазы.

4.1.1. Разработка методики определения активности супероксиддисмутазы в системе кобальт/пероксид водорода/люцигенин.

4.1.2. Системы для определения активности супероксиддисмутазы.

4.1.3. Влияние рН, пероксида водорода и облучения на активность СОД.

4.2. Действие лазерного и светодиодного излучения на митохондрии.

4.2.1. Методические особенности при работе с митохондриями.

4.2.2. Действие облучения на скорость V3 и коэффициент ДК.

4.2.3. Действие облучения на мембранный потенциал.

4.3. Действие оксида азота, а также лазерного и светодиодного излучения на митохондрии.

4.3.1. Действие оксида азота на митохондрии.

4.3.2. Действие облучения на митохондрии в присутствии оксида азота.

4.4. Действиеоксидаазота,атакжеоблученияна1НПи1Укомплексы.

4.4.1. Действие облучения на активность 11-111 и IV комплексов.

4.4.2. Действие оксида азота на 11-111 и IV комплексы.

4.4.3. Действие оксида азота и облучения на Активность II-III и IV комплексов.

4.5. Использование новых сенсибилизаторов для фотодинамической терапии.

4.5.1. Спектры поглощения ФС.

4.5.2. Влияние облучения и сенсибилизаторов на перекисное окисление в митохондриях.

4.5.3. Создание спектрофотометрической методики экспресс-оценки объема циркулирующей крови без априорной информации.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

5.1. Проверка гипотезы о фотореактивации супероксиддисмутазы.

5.1.1. Разработка методики определения активности СОД имиметиков СОД в системе кобальт, пероксид водорода и люцигенин.

5.1.2. Сравнение систем для определения активности супероксиддисмутазы.

5.1.3. Влияние pH, пероксида водорода и облучения на активность СОД.

5.2. Действие лазерного и свстод йодного излучения на митохондрии.

5.2.1. Действие облучения на скорость V3 и коэффициент ДИ.

5.2.2. Действие облучения на мембранный потенциал.

5.3. Действие оксида азота, а также лазерного и светодиодного излучения на митохондрии.

5.3.1. Действие облучения на митохондрии в присутствии оксида азота.

5.4. Действие оксида азота, а также облучения на INII и IV комплексы.

5.4.1. Действие облучения на активность INII и IVкомплексов.

5.4.2. Действие оксида азота и облучения на активность 11-111 и IVкомплексов.

5.5. Использование новых сенсибилизаторов для фотодинамической терапии.

5.5.1. Оценка активности новых сенсибилизаторов для лазеротерапии.

5.5.2. Создание спектрофотометрической методики экспресс-оценки объема циркулирующей крови без априорной информации.

6. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изучение молекулярных механизмов биостимулирующего действия лазерного и светодиодного облучения"

1.1. Актуальность работы

Более 50 лет тому назад, вскоре после изобретения лазеров, возникла и стала развиваться новая медицинская технология лечения широкого круга различных воспалительных и онкологических заболеваний, основанная на использовании низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ). Одним из направлений применения НИЛИ стала лазеротерапия, основанная на стимулирующем действии лазерного облучения (видимого и инфракрасного диапазона: 400-900 нм) в отсутствие внешних сенсибилизаторов [1-4]. Более доступный альтернативный источник облучения - лазерные светодиоды, также нашли применение в лазеротерапии.

Однако молекулярные механизмы стимулирующего действия лазеров и светодиодов до конца не изучены. Одной из гипотез действия НИЛИ является фотореактивация фермента защитной системы организма супероксиддисмутазы (СОД) под действием света в красной области спектра [5, 6]. Согласно другой гипотезе, дыхательная цепь митохондрий, а также нитрозильные комплексы дыхательной цепи, являются первичными фотоакцепторами НИЛИ.

В данной работе мы исследовали влияние облучения в красной области спектра на активность СОД, изучали влияние лазерного и светодиодного облучения в разных частях видимого света на интактные митохондрии, а также митохондрии, дыхательная цепь которых частично ингибирована оксидом азота. Также изучена способность экзогенных фотосенсибилизаторов вызывать перекисное окисление в мембранных структурах для их использования в лазеротерапии.

В ходе исследований были получены данные, опровергающие гипотезу о фотореактивации СОД, а также фундаментальные данные о светочувствительности нитрозильных комплексов цитохром с оксидазы в митохондриях к синему, но не красному свету. Для внедрения полученных к настоящему времени данных о молекулярных механизмах действия лазерного и светодиодного излучения в медицинскую практику создана методика сравнения активности экзогенных фотосенсибилизаторов.

1.2. Цели и задачи

Для этого были поставлены следующие задачи:

2. Осуществить проверку литературных данных об инактивации Си^п супероксидцисмутазы (СОД) в кислой среде, а также в присутствии пероксида водорода, и ее фотореактивации под действием красного света с использованием разработанного и уже известных методов анализа активности СОД.

3. Изучить влияние лазерного и светодиодного облучения на функцию изолированных митохондрий (скорость дыхания при окислительном фосфорипировании, коэффициент дыхательного контроля и мембранный потенциал).

5. Изучить влияние N0 и лазерного и светодиодного облучения на скорости переноса электронов во И-Ш и IV комплексах дыхательной цепи митохондрий.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Жидкова, Татьяна Владимировна

6. выводы

На основании проделанной работы сделаны следующие выводы:

1. В связи с необходимостью проверки гипотезы о фотореактивации СОД предложена новая методика определения активности СОД и миметиков СОД в системе кобальт, пероксид водорода, люцигенин при рН 8,5. Данным методикой' установлена активность СОД в ед/мг белка во фракции митохондрий (1188±184), эритроцитах (153±20) и плазме (51±2) крыс (п ~ 3), а также в эритроцитах (247±29) и плазме (35±2) человека (и = 5). Метод позволил оценить активности четырех новых миметиков СОД. При исследовании способности миметиков СОД уменьшать образование супероксидных радикалов в ткани наиболее перспективной оказались медная модель СОД и комплексное соединение с ионом Со(П).

6 Дж/см ). Активность фермента также снижалась при рН 7 и 6 на 30% при выдерживании фермента в растворе пероксида водорода. Однако облучение образцов, инактивированных пероксидом водорода, светом с длиной волны 650 нм (доза 6 Дж/см ) вызывает снижение активности СОД, что объясняется образованием дополнительного количества радикалов из пероксида водорода, чувствительного к свету. Полученные данные не подтвердили данные о фотореактивации СОД под действием красного света лазера (Горбатенкова, Е.А., Азизова и сотр. Биофизика, 1988).

3. Поскольку в литературе было высказано предположение, согласно которому биостимулирующее действие на митохондрии вызывает стимуляцию дыхательной'цепи, было проведено исследования влияния облучения в разных частях спектра на параметры интактных органелл. Во всех случаях было обнаружено деструктивное действие облучения, выраженное в снижении коэффициента дыхательного контроля, а в случае красного света в снижении скорости V3. Стимулирующий эффект наблюдали только при облучении синим светом при низких дозах (доза 36 Дж/см2), выраженный в росте скорости дыхания митохондрий в 3 состоянии, эффект можно объяснить светочувствительностью нитрозильных комплексов дыхательной цепи.

4. Для проверки гипотезы о фоточуствительности нитрозильных комплексов в дыхательной цепи было проведено исследование влияния облучения на митохондрии, ингибированные N0. Было обнаружено, что под действием оксида азота происходит снижение скоростей V3 и коэффициента дыхательного контроля. При этом скорость V3 и коэффициент ДК митохондрий, ингибированных 300 нм NO на 53 и 59%, восстанавливалась на 62 и 36% соответственно под действием синего света (442 нм, доза 3 Дж/см ). При 532 и 650 нм восстановления не происходило.

5. Чтобы, уточнить локализацию повреждающего и стимулирующего действия облучения в дыхательной цепи митохондрий, было проведено сравнение скоростей переноса электронов во II-Ш и IV комплексах под действием N0 и облучения. Ни в одном случае нам не удалось обнаружить изменений под действием зеленого и красного света. Под действием ^ синего света (дозы 3-31 Дж/см ) наблюдалось снижение скорости переноса электронов во II-III комплексах, что возможно связано-с фотохимической реакцией флавинадениндинуклеотида - фрагмента комплекса II. При этом активность цитохром с оксидазы, но не II-III комплексов, в митохондриях, ингибированных NO, восстанавливалась под действием света 442 нм (доза 3 Дж/см). Полученные данные свидетельствуют, что активация дыхательной цепи митохондрий связана с фотолизом комплексов NO с цитохром с оксидазой.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Жидкова, Татьяна Владимировна, Москва

1. Turner J., Hodl L. Laser Therapy in Dentistry and Medicine. 1996 Prima Books AB, 156 c.

2. Илларионов B.E. Основы лазерной терапии. 1992 M.: Медицина, 122 с.

3. Козлов В.И., Буйлин В.Н. Лазеротерапия. 1993 М.: Медицина, 149 с.

4. Утц С.Р., Волнухин В.А. Низкоинтенсивная лазерная терапия в дерматологии. 1998 Саратов: Изд-во Саратовского ун-та, 92 с.

5. Vladimirov Y.A., Gorbatenkova Е.А., Paramonov N.V., Azizova О.A. Photoreactivation of superoxide dismutase by intensive red (laser) light // Free Radic Biol Med. 1988. V. 5. № 5-6. 281-6

6. Горбатенкова E.A., Азизова O.A., Владимиров Ю.А. Реактивация супероксиддисмутазы излучением гелий-неонового лазера // Биофизика. 1988. Т. 33. 717-8

7. Finsen N.R. The Red Light Treatment of Small-Pox // Br Med J. 1895. V. 2. № 1823. 1412-1414

8. Maiman Т.Н. Stimulated optical radiation in ruby // Nature. 1960. V. 187. № 4736. 493-94

9. Javan A., Bennett W.R., Herriott D.R. Population Inversion and Continuous Optical Maser Oscillation in a Gas Discharge Containing a He-Ne Mixture" // Phys. Rev. Lett. 1961. V. 63. 106-10

10. Gordon S.A., Surrey K. Red and far-red action on oxidative phosphorylation // Radiat Res. 1960. V. 12. 325-39

11. Passarella S., Perlino E., Quagliariello E., Baldassare I.M., Catalano I.M., Cingolani A. Evidence of changes induced by He-Ne laser irradiation in thebiochemical properties of rat liver mitochondria I I Bioelectrochem. Bioenenerg. 1983. V. 10. 185-98

12. Vekshiii N.L., Mironov G.P. Flavin-dependent oxygen uptake in mitochondria under illumination. // Biofizika. 1982. V. 27. № 3. 537-9

13. Karu T.I. Low power laser therapy. 2003 Boca Raton: CRC Press LLS, 481 p.

14. Karu T.I., Kalendo G.S., Letokhov V.S. Effect of ultrashort UV laser pulses on HeLa tumor cells // Lettere Nuovo Cimento. 1981. V. 32. № 2. 55-59

15. Giese A.C. Lasers in Biology and Medicine. 1980 New York: Plenum Press, 229 p.

16. Karu T.I. Molecular mechanism of the therapeuic effect of low-intensity laser radiation // Laser Life Sci. 1988. V. 2. 1-53

17. Karu T.I., Kalendo G.S., Letokhov V.S., Lobko V.V. Biostimulation of HeLa cells by low intensity visible light. III. Stimulation of nucleic acid synthesis in plateau phase cells // Nuov. Cim. D. 1984. V. 3. № 319-325.

18. Karu T.I., Kalendo G.S., Letokhov V.S., Lobko V.V. Biostimulation of HeLa cells by lowintensity visible light. П. Stimulation of DNA and RNA synthesis in a wide spectral range //Nuov. Cim. D. 1984. V. 3. 309-18,

19. Karu T.I., Kalendo G.S., Letokhov V.S., Lobko V.V. Biostimulation of HeLa cells by low intensity visible light // Nuov. Cim. D. 1982. V. 1. 828-40.

20. Владимиров Ю.А. Три гипотезы о механизме действия красного (лазерного) света. 1994 Москва: НИИ физ.-хим. Медицины. 23-35 с.

21. Ромм А.Р., Шерстнев М.П., Волков В.В., Владимиров Ю.А. Действие лазерного излучения на перекисную хемилюминесценцию раневого экссудата // Бюллетень Экспериментальной Биологии и Медицины. 1986. V. 102: № 10. 426-428

22. Горбатенкова Е.А., Владимиров Ю.А., Парамонов Н.В., Азизова О.А. расный свет гелий-неонового лазера реактивирует супероксиддисмутазу // Бюлл. эксп. биол. мед. 1989. Т. 57. № 3. 302-5

23. Клебанов Г.И., Шураева Н.Ю., Чичук Т.В., Осипов А.Н., Владимиров Ю.А. Сравнительное исследование влияния излучения лазера и светодиодов на перекисное окисление липидов раневого экссудата крыс // Биофизика. 2006. Т. 51. №2. 332-9

24. Клебанов Г.И., Шураева Н.Ю., Чичук Т.В., Осипов А.Н., Владимиров Ю.А. Сравнительное исследование действия лазерного и светодиодного излучения на1 перекисное окисление липидов в раневом экссудате крыс // Биофизика. 2006. Т. 51. № 1. 332-339

25. Клебанов Г.И., Чичук Н.В., Осипов А.Н., Владимиров^ Ю.А. Роль порфиринов плазмы в стимулирующем действии излучения Не-№-лазера на лейкоциты.человека// Биофизика. 2005. Т. 50. № 4. 713-8

26. Клебанов Г.И., Чичук Н.В., Осипов А.Н., Владимиров Ю.А. Роль продуктов перекисного окисления^ липидов в механизме действия лазерного облучения на лейкоциты крови человека // Биофизика. 2005. Т. 50. № 5. 862-6

27. Клебанов Г.И., Полтанов Е.А., Чичук Т.В., Осипов А.Н., Владимиров Ю.А. Изменение активности супероксиддисмутазы и содержания пероксинитрита в перитонеальных макрофагах, подвергнутых облучению Не-Ые лазером // Биохимия. 2005. Т. 70. № 12. 1335-40

28. Клебанов Г.И., Любицкий О.В., Владимиров Ю.А. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения красного диапазона на активность супероксиддисмутазы макрофагов // Биофизика. 2003. Т. 48. № 3. 462-473

29. Клебанов Г.И., Чичук Н.В., Владимиров Ю.А. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на пероксидацию мембранных липидов и концентрацию ионов кальция в цитозоле фагоцитов // Биол. мембраны. 2001. Т. 18. № 1. 42-50

30. Клебанов Г.И., Толстых М.П., Климов Ю.В., Раджабов A.A. Лазерная и антиоксидантная терапия заживления ран // Биомедицинская радиоэлектроника. 2001. Т. № 2. 15-29

31. Клебанов Г.И., Владимиров Ю.А. Клеточные механизмы прайминга и активации фагоцитов // Успехи соврем, биологии. 1999. Т. 119. № 5. 462-75

32. Клебанов Г.И., Страшкевич И.В., Чичук Т.В., Модестова Т.М., Владимиров Ю.А. Влияние эндогенных фотосенсибилизаторов на лазер-индуцированный прайминг лейкоцитов крови // Биол. мембраны. 1998. Т. 15. №3.273-85

33. Клебанов Г.И., Чичук Т.В., Шутова Л.И., Странадко Е.Ф., Владимиров Ю.А. Фотосенсибилизированный производными гематопорфирина или фталоцианином гемолиз эритроцитов при лазерном облучении // Биол.мембраны. 1997. Т. 14. № 5.486-494

34. Клебанов Г.И., Странадко Е.Ф. Влияние липофильных антиоксидантовна фотосенсибилизированную производными гематопорфиринапероксидацию липосомальных мембран при облучении гелий-неоновымлазером // Биол. мембраны. 1996. Т. 13. № 2. 133-7123

35. Осипов А.Н., Борисенко Г.Г., Владимиров Ю.А. Биологическая роль нитрозильных комплексов гемопротеинов// Биохимия. 2007. Т. 72. № 13. 1491-504

36. Борисенко Г.Г., Постов С.С., Казаринов К.Д., Осипов А.Н., Владимиров Ю.А. Нитрознльные комплексы цитохромов митохондриальной цепи первичные хромофоры в механизме фотоактивации дыхания // Биологические Мембраны. 2002. Т. 19. № 5. 378-390

37. Кати Т. // Laser Therapy. 1992. V. 4. № 5-24

38. Morimoto Y., Arai Т., Kikuchi M., Nakajima S., Nakamura H. Effect of low-intensity argon laser irradiation on mitochondrial respiration // Lasers Surg Med. 1994. V. 15. №2. 191-9

39. Bachowski G.J., Morehouse KM., Girotti A.W. Porphyrin-sensitized photoreactions in the presence of ascorbate: oxidation of cell membrane lipids and hydroxyl radical traps // Photochem Photobiol. 1988. V. 47. № 5. 635-45

40. Поглазов A.P., Шубин M.B., Скоцеляс Ю.Г., Алимов Г.А., Владимиров Ю.А. Флуориметрическое изучение выхода Са 2+ из липосом, индуцированного воздействием фосфолипазы А. // Биофизика. 1975. Т. 20. 69-71

41. Шубин М.В., Поглазов А.Ф., Скоцеляс Ю.Г., Владимиров Ю.А. Изучение влияния перекисного окисления липидов на проницаемость мембран липосом для ионов Са2+//Биофизика. 1975. Т. 20. № 1. 161-163

42. Каган В.Е., Азизова О.А., Архипенко Ю.В., Клаан Н.К., Козлов Ю.П., Владимиров Ю.А. Взаимосвязь структурных и функциональных перестроек в мембранах саркоплазматического ретикулума при перекисном окислении липидов. // Биофизика. 1977. Т. 22. № 4. 625-630

43. Vladimirov Y.A., Olenev V.I., Suslova Т.В., Cheremisina Z.P. Lipid peroxidation in mitochondrial membrane // Advances in Lipid Research. 1980. V. 17.173-249

44. Wagner W.D., K. N. // J. Am. Chem. Soc. 1989. V. 111. 1590-1598

45. Владимиров Ю.А., Азизова О.А., Деев А.И., Козлов А.В:, Осипов А.Н., Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах. Итоги Науки и Техники,серия Биофизика,том.29. 1992 Москва: ВИНИТИ, 3-250 с.

46. Рубцов Б.В;, Клебанов Г.И., Заморин O.B., Владимиров Ю.А. Влияние перекисного окисления липидов, индуцированного УФ- облучением,- на Са-АТФазу мембран саркоплазматического ретикулума // Известия Академии Наук СССР.Серия Биология. 1984. № 4623-626

47. Santos A.E., Laranjinha J.A., Almeida L.M. Sulfonated chloroaluminum phthalocyanine incorporates into human plasma lipoproteins: photooxidation. of low-density lipoproteins // Photochem Photobiol. 1998. V. 67. № 4. 378-85

48. Klebanov G.I., Teselkin Yu O., Babenkova I.V., Bashkujeva Т., Chichuk T.V., Vladimirov Yu A. Low-power laser irradiation induces leukocyte priming // Gen Physiol Biophys. 1998. V. 17. №4. 365-76

49. Klebanov G.I., Kreinina M.V., Poltanov E.A., Khristoforova T.V., Vladimirov Y.A. Mechanism of therapeutic effect of low-intensity infrared laser radiation // Bull Exp Biol Med. 2001. V. 131. № 3. 239-41

50. Кару Т.Й., Рябых Т.П., Федосеева F.E. Фотосенсибилизирующая иноктивация опухолевых клеток фталоцианинами // Радиобиология. 1989; Т. 29. № 2. 230-4

51. Ricevuti G., Mazzone A., Monaia С., Fratino P., Degiulio R:, Dell'Acqua R., Leonardi G;, Jucci; A., Sacchi S. In vivo and in vitro HeNe laser effects on phagocyte functions//Inflammation. 1989. V. 13. № 5. 507-27

52. Funk J.O:, Kruse A., Kirchner Hi Cytokine production after helium-neon laser irradiation in cultures of human peripheral blood mononuclear cells // J Photochem Photobiol B: 1992. V. 16. № 3-4. 347-55

53. Fridovich It Superoxide radical and superoxide dismutases // Annu Rev Biochem. 1995. V. 64. 97-112

54. Byrnes K.R., Barna'L., Chenault V.M., WaynantR.W., Ilev I.K., Longo L., Miracco C., Johnson B., Anders J.J. Photobiomodulation improves cutaneous wound healing in-an« animal* model'of type II diabetes // Photomed Laser Surg. 2004. V. 22. №4.281-90

55. Foley P.A. Recent advances: Dermatology // BMJ. 2000. V. 320. № 7238. 850-3

56. Hopkins J.T., McLoda T.A., Seegmiller J.G., Baxter B.G. Low-Level Laserj

57. Therapy Facilitates Superficial Wound Healing in Humans: A Triple-Blind, Sham-Controlled Study // J Athl Train. 2004. V. 39. № 3. 223-229

58. Medrado A.R., Pugliese L.S., Reis S.R., Andrade Z.A. Influence of low level laser therapy on wound healing and its biological action upon myofibroblasts // Lasers Surg Med. 2003. V. 32. № 3. 239-44

59. Mendez T.M., Pinheiro A.L., Pacheco M.T., Nascimento P.M., Ramalho L.M. Dose and wavelength of laser light have influence on the repair of cutaneous wounds // J Clin Laser Med Surg. 2004. V. 22. № 1. 19^25

60. Sen C.K., Khanna S., Babior B.M., Hunt T.K., Ellison E.C., Roy S. Oxidant-induced vascular endothelial growth factor expression in human keratinocytes and cutaneous wound healing // J Biol Chem. 2002. V. 277. № 36. 33284-90

61. Woodruff L.D., Bounkeo J.M., Brannon W.M., Dawes K.S., Barham C.D., WaddelLD.L., Enwemeka C.S. The efficacy of laser therapy in wound repair: a meta-analysis of the literature // Photomed Laser Surg. 2004. V. 22. № 3. 241-7

62. Robson M.C. Cytokine manipulation of the wound // Clin Plast Surg. 2003. V. 30. № 1. 57-65

63. Schaffer M.R., Tantry U., Gross S.S., Was'serburg H.L., Barbul A. Nitric oxide regulates wound healing // J Surg Res. 1996. V. 63. № 1. 237-40

64. Senel О., Cetinkale О., Ozbay G., Ahcioglu F., Bulan R. Oxygen free radicals impair wound healing in ischemic rat skin // Ann Plast Surg. 1997. V. 39. № 5. 516-23

65. Henry G., Garner W.L. Inflammatory mediators in wound healing // Surg Clin North Am. 2003. V. 83. № 3. 483-507

66. Клебанов Г.И., Полтанов Е.А., Чичук Т.В., Осипов А.Н., Владимиров Ю.А. Изменение активности супер оксидцисму тазы и содержанияпероксинитрита в перитонеальных макрофагах, подвергнутых облучению He-Ne лазером // Биофизика. 2005. Т. 70. № 12:1335-40

67. Machneva T.V., Kosmacheva N.V., Vladimirov Y.A., Osipov A.N. Effects of low power.laser radiation of blue, green and red ranges on free radical processes in rat blood in endotoxic shock // Biochemistry (Moscow). Послана в печать

68. Владимиров Ю.А. Фотохимия и люминесценция белков. 1965 Москва: Наука, 232 с.

69. Fee J.A., Phillips W.Dr The behavior of holo- and apo-forms of bovine superoxide dismutase at low pH // Biochim:Biophys Acta. 1975: V. 412. № 1. 2638 ' . " :•■■■■ " "

70. McCord J.M., Fridovich I: Superoxide Dismutase an enzymic function for erythrocuprein (hemocuprein) // J Biol Chem. 1969. V. 244: № 22. 6049-6055

71. Yao D., Ylessidis A.G., Gou .Y, Zhou X., Zhou Y., Evmiridis N.P. Chemiluminescence detection of superoxide anion release and superoxide dismutase activity: modulation effect of Pulsatilla chinensis // Anal BioanaT Chem. 2004: V. 379. №1. 171-7

72. Laihia J.K., Jansen C.T., Ahotupa M. Lucigenin and linoleate enhanced chemiluminescent assay for superoxide dismutase activity // Free Radic Biol Med, 1993. V. 14. №5. 457-61 ; .

73. Beauchamp G., Fridovich I. Superoxide dismutase: improved assays and an assay applicable to acrylamide gels // Anal Biochem. 1971. V. 44. № 1. 276-87

74. Ewing J.F., Janero D.R. Microplate superoxide dismutase assay employing a nonenzymatic superoxide generator// Anal Biochem. 1995. V. 232. № 2. 243-8

75. Popov I.N., Lewin G., von Baehr R. Photochemiluminescent detection of antiradical activity. I. Assay of superoxide dismutase // Biomed. Biochim. Acta. 1987. V. 46. №11.775-779

76. Misra H.P., Fridovich I. The generation of superoxide radical during the autoxidation of hemoglobin // J Biol Chem. 1972. V. 247. № 21. 6960-2

77. Jewett S.L., Rocklin A.M. Variation of one unit of activity with oxidation rate of organic substrate in indirect superoxide dismutase assays // Anal Biochem. 1993. V. 212. № 2. 555-9

78. Lissi E., Pascual C., Castillo M.D. On the use of the quenching of luminolluminescence to evaluate SOD activity // Free Radic Biol Med; 1994. V. 16. № 6. 833-37

79. Okado-Matsumoto A., Fridovich I. Assay of superoxide dismutase: cautions relevant to the use of cytochrome c, a sulfonated tetrazolium, and cyanide // Anal Biochem. 2001. V. 298. № 2. 337-42

80. Nishikimi M.", Appaji N.R., Yagi K. The occurrence of superoxide anion in the reaction of reduced phenazine methosulfate and molecular oxygen // Biochem* Biophys Res Commun. 1972. V. 46. № 2. 849-53

81. Lenaerts I., Braeckman B.P., Matthijssens F., Vanfleteren J.R. A high-throughput microtiter plate assay for superoxide dismutase based on lucigenin chemiluminescence//Anal Biochem. 2002. V. 311. № 1. 90-2

82. Lvovich V., Scheeline A. Amperometric sensors for simultaneous superoxide and hydrogen peroxide detection // Anal. Chem. 1997. V. 69. 454-62

83. Mesaros S., Vankova Z., Grunfeld S., Mesarosova A., Malinski T. Peparation and optimization of superoxide microbiosensor // Anal Chim Acta. 1998. V. 358. 27-33

84. Peskin A.V., Winterbourn C.C. A microtiter plate assay for superoxide dismutase using a water-soluble tetrazolium salt (WST-1) // Clin Chim Acta. 2000. V. 293. № 1-2. 157-66

85. Naoghare P.K., Kwon H.T., Song J.M. Development of a photosensitive,high-throughput chip-based superoxide dismutase (SOD) assay to explore the130radioprotective activity of herbal plants // Biosens Bioelectron. 2009. V. 24. № 12. 3587-93

86. Vladimirov Y., Borisenko G., Boriskina N., Kazarinov K., Osipov A. N0-hemoglobin may be a light-sensitive source of nitric oxide both in solution and in red blood cells // J Photochem Photobiol B. 2000. V. 59. № 1-3. 115-22.

87. Osipov A.N., Borisenko G.G., Vladimirov Y.A. Biological activity of hemoprotein nitrosyl complexes // Biochemistry (Mosc). 2007. V. 72. № 13. 1491504

88. Mittermayr R., Osipov A., Piskernik C., Haindl S., Dungel P., Weber C., Vladimirov Y. A., Redl H., Kozlov A.V. Blue laser light increases perfusion of a skin flap via release of nitric oxide from hemoglobin // Мої Med. 2007. V. 13. № 1-2. 22-9

89. Осипов A.H., Степанов Г.О., Владимиров Ю.А., Козлов А.В., Каган В.Е. Регуляция пероксидазной активности цитохрома с с помощью оксида азота и лазерного излучения // Биохимия. 2006. Т. 71. № 10. 1128-32

90. Wainio-W.W. Reactions of cytochrome oxidase // J Biol Chem. 1955. V. 212. № 2. 723-33

91. Boelens R., Rademaker H., Pel R., Wever R. EPR studies of the photodissociation reactions of cytochrome с oxidase-nitric oxide complexes // Biochim Biophys Acta. 1982. V. 679. № 1. 84-94

92. Brown G. Nitric oxide and mitochondrial respiration // Biochim Biophys Acta. 1999. V. 1411. № 2-3. 351-69

93. Karu T. Primary and secondary mechanisms of action of visible to near-IR radiation on cells // J Photochem Photobiol B. 1999. V. 49. № 1. 1-17

94. Karu T.I., Pyatibrat L.V., Kolyakov S.F., Afanasyeva N.I. Absorptionmeasurements of a cell monolayer relevant to phototherapy: reduction of131cytochrome c oxidase under near IR radiation 11 J Photochem Photobiol B. 2005. V. 81. №2. 98-106

95. Karu T., Pyatibrat L., Ryabykh T. Melatonin modulates the action of near infrared radiation on cell adhesion // J Pineal Res. 2003. V. 34. № 3. 167-72

96. Karu T., Pyatibrat L., Afanasyeva N. Cellular effects of low power laser therapy can be mediated by nitric oxide // Lasers Surg Med. 2005. V. 36. № 4: 307-14

97. Karu T.I. Mitochondrial signaling in mammalian cells activated by red and near-IR radiation//Photochem Photobiol. 2008. V. 84. № 5. 1091-9

98. Karu T.I. Multiple roles of cytochrome c oxidase in mammalian cells under action of red and IR-A radiation // IUBMB Life. 2010. V. 62. № 8. 607-10

99. Brunori M., Giuffre A., Sarti P. Cytochrome c oxidase, ligands and electrons // J Inorg Biochem. 2005. V. 99. № 1. 324-36

100. Karu T. Ten Lectures on Basic Science of Laser Phototherapy. 2007 Gra' ngesberg: Prima Books AB, 400 p.

101. Alexandratou E., Yova D., Handris P., Kletsas D., Loukas S. Human fibroblast alterations induced by low power laser irradiation at the single cell level using confocal microscopy// Photochem Photobiol Sci. 2002. V. 1. № 8. 547-52

102. Karu T.I., Pyatibrat L.V., Kalendo G.S. Cell attachment modulation by radiation from a pulsed light diode (lambda = 820 nm) and various chemicals // Lasers Surg Med. 2001. V. 28. № 3. 227-36

103. Karu T.I., Pyatibrat L.V., Kalendo G.S. Donors of NO and pulsed radiation at lambda = 820 nm exert effects on cell attachment to extracellular matrices // Toxicol Lett. 2001. V. 121. № 1. 57-61

104. Karu T.I., Pyatibrat L.V., Kalendo G.S. Cell attachment to extracellular matrices is modulated by pulsed radiation at 820 nm and chemicals that modify the activity of enzymes in the plasma membrane // Lasers Surg Med. 2001. V. 29. №3.274-81

105. Storrie B., Madden E.A. Isolation of subcellular organelles // Methods Enzymol. 1990. V. 182. № 203-25

106. Berry E.A., Trumpower B.L. Simultaneous determination of hemes a, b, and c from pyridine hemochrome spectra// Anal Biochem. 1987. V. 161. № 1. 1-15

107. Reers M., Smith T.W., Chen L.B. J-aggregate formation of a carbocyanine as a quantitative fluorescent indicator of membrane potential // Biochemistry. 1991. V. 30. № 18. 4480-6

108. Kumar K.N., Eggeman K.T., Adams J.L., Michaelis E.K. Hydrodynamic properties of the purified glutamate-binding protein subunit of the N-methyl-D-aspartate receptor // J Biol Chem. 1991. V. 266. № 23. 14947-52'

109. Lissi E., Pascual C., Castillo M.D. Luminol luminescence induced by 2,2'-Azo-bis(2-amidinopropane) thermolysis // Free Radic Res Commun. 1992. V. 17. №5.299-311

110. Lissi E., Pascual C., del Castillo M.D. On the use of the quenching of luminol luminescence to evaluate SOD activity // Free Radic Biol Med. 1994. V. 16. № 6. 833-7

111. Burdo T.G., Seitz W.R. Mechanism of cobalt catalysis of luminol chemiluminescence // Anal. Chem. 1975. V. 47. № 9. 1639-43

112. Popov I.N., Lewin G., Baehr R. Photochemiluminescent detection of antiradical activity. I. Assay of superoxide dismutase // Biomed. Biochim. Acta. 1987. V. 46. № 11.775-779

113. Kuthan H., Haussmann H.J., Werringloer J. A spectrophotometric assay for superoxide dismutase activities in crude tissue fractions // Biochem J. 1986. V. 237. № 1. 175-80

114. Nishikimi M., Appaji N., Yagi K. The occurrence of superoxide anion in the reaction» of reduced phenazine methosulfate and molecular oxygen // Biochem Biophys Res Commun. 1972. V. 46. № 2. 849-54

115. Asada K., Kanematsu S. Reactivity of thiols with superoxide radicals // Agr. Biol. Chem. 1976. V. 40. № 9. 1891-2

116. Maral J., Puget K., Michelson A.M. Comparative study of superoxide dismutase; catalase and glutathione peroxidase levels in erythrocytes of different animals // Biochem Biophys Res Commun. 1977. V. 77. № 4. 1525-35

117. Simonian M.A., Nalbandian R.M. Preparation of electrophoretically homogeneous erythrocuprein< and its thermodenaturation // Biokhimiia. 1975. V. 40. № 4. 726-32

118. Bray R.C., Cockle S.A. Reduction and Inactivation of Superoxide Dismutase by Hydrogen Peroxide // Biochem. J. 1974. V. 139: 43-48

119. Passarella S., Ostuni A., Atlante A., Quagliariello E. Increase in the ADP/ATP exchange in rat liver mitochondria irradiated-in vitro by helium-neon laser. // Biochem Biophys Res Commun. 1988. V. 156. № 2. 978-86

120. Giulivi C. Functional implications of nitric oxide produced' by mitochondria in mitochondrial metabolism. // Biochem J. 1998. V. 332. № 3. 673-9

121. Elfering S.L., Sarkela T.M., Giulivi C. Biochemistry of mitochondrial nitric-oxide synthase. // J Biol Chem. 2002. V. 277. № 41. 38079-86

122. Tatoyan A., Giulivi C. Purification and characterization of a nitric-oxide synthase from rat liver mitochondria: // J Biol Chem.' . 1998. V. 273. № 18. 11044-8

123. Giulivi С., Poderoso J.J., Boveris A. Production of nitric oxide by mitochondria. //JBiol Chem. 1998. V. 273. № 18. 11038-43

124. Ghafourifar P., Richter C. Nitric oxide synthase activity in mitochondria. // FEBS Lett. . 1997. V. 418. № 3. 291-6

125. Mazur E.M., Likhacheva E.V. Development of photodynamic techniques for treating chronic pharyngits using chlorin e6 derivatives // Photodiagnosis and Photodynamic Therapy. 2010. V. 7. № 1. 2

126. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перексииое окисление липидов в биологических мембранах. 1972 Москва: Наука, 252 с.

127. Владимиров Ю.А., Суслова Т.Б., Оленев В.И. Хемилюминесценция, сопряженная с образованием липидных перекисей в биологических мембранах. П. Роль Fe(2+) в разитии цепного окисления липидов и сверхслабого свечения // Биофизика. 1969. Т. 14. № 836-45

128. Vladimirov Y.A., Olenev V.I., Suslova Т.В., Cheremisina Z.P. Lipid peroxidation in mitochondrial membrane // Adv Lipid Res. 1980. V. 17. 173-249

129. Владимиров'Ю.А., Корчагина M.B., Оленев В.И. Хемилюминесценция, сопряженная с образованием липидных перекисей в биологических мембранах. VII. Реакция, сопровождающаяся свечением // Биофизика. 1971. Т. 16. № 5. 953-8

130. Ложкин А.В. Методы оценки объема и степени кровопотери // Вестник службы крови России. 2004. № 4. 39-47

131. Tsopelas С., Sutton R. Why certain dyes are useful for localizing the sentinel lymph node // J Nucl Med. 2002. V. 43. № 10. 1377-82

132. Imai T., Takahashi K., Fukura H., Morishita Y. Measurement of cardiac output by pulse dye densitometry using indocyanine green: a comparison withthe thermodilution method//Anesthesiology. 1997. V. 87. №4. 816-22

133. Шестаков H.M. О сложностях и недостатках современных методов определения объема циркулирующей крови и о возможности более простого и быстрого метода его определения // Терапевтический архив. 1977. Т. 49. №3. 115-120

134. Фомкин В.И. Определение объема циркулирующей крови с помощью красителя вофавердина//Лабораторное дело. 1976. Т. № 8. 377-378

135. Shoemaker К., Rubin J., Zumbro G.L., Tackett R. Evans blue and gentian violet: alternatives to methylene blue as a surgical marker dye // J Thorac Cardiovasc Surg. 1996. V. 112. №2. 542-4

136. Маневич Л.Е. Сравнительная оценка методов определения объема циркулирующей крови с помощью азокрасителя синего Эванса и декстрана полиглюкина//Лабораторное дело. 1966. Т. № 1. 23-25

137. Nagano К., Kusaka Т., Okubo К., Yasuda S., Okada Н., Namba М., Kawada К., Imai Т., Isobe К., Itoh S. Estimation of circulating blood volume in infants using-the pulse dye densitometry method // Paediatr Anaesth. 2005. T. 15. № 2. 125-30

138. Dunbar J.C., J.T. J., Uchida T. Kinetics of metal dissociation in the yeast Cu2,Zn2-superoxide dismutase. Apparent asymmetry in.the metal binding sites // Carlsberg Res. Commun. 1982. T. 47. № 3. 163-71

139. Lucas M., Solano F. Coelenterazine is a superoxide anion-sensitive chemiluminescent probe: its usefulness in the assay of respiratory burst in neutrophils // Anal Biochem. 1992. V. 206. № 2. 273-7

140. Nakano M. Detection of active oxygen species in biological systems // Cell Mol Neurobiol. 1998. V. 18. № 6. 565-79

141. Afanas'ev I.B., Ostrachovitch E.A., Korkina L.G. Lucigenin is a mediator of cytochrome С reduction but not of superoxide production // Arch Biochem Biophys. 1999. V. 366. № 2. 267-74

142. Liochev S.I., Fridovich I. Lucigenin as mediator of superoxide production: revisited // Free Radic Biol Med. 1998. T. 25. № 8. 926-8

143. Liochev S.I., FridovichT. Lucigenin (bis-N-methylacridinium) as a mediator of superoxide anion production // Arch Biochem Biophys. 1997. V. 337. № 1. 11520

144. Peeters-Joris C., Vandevoorde A.M., Baudhuin P. Subcellular localization of superoxide dismutase in rat liver // Biochem J. 1975. V. 150. № 1. 31-9

145. Владимиров Ю.А., Проскурнина E.B. Лекции по медицинской биофизике : учебное пособие для студентов медицинских вузов. 2007 Москва: Изд-во Московского ун-та Академкнига, 431 с.

146. Rembish S J., Trush М.А. Further evidence that lucigenin-derived chemiluminescence monitors mitochondrial'superoxide generation in rat alveolar macrophages // Free Radic Biol Med. 1994. V. 17. № 2. 117-26

147. Kashima-Tanaka M., Tsujimoto Y., Kawamoto K., Senda N., Ito K., Yamazaki M. Generation of free radicals and/or active oxygen by light or laser irradiation of hydrogen peroxide or sodium hypochlorite // J Endod. 2003. V. 29. №2. 141-3

148. Schmid G.H. The effect of blue light on some flavin enzymes // Hoppe Seylers Z Physiol Chem. 1970. V. 351. № 5. 575-8

149. Welter R., Yu L., Yu C.A. The effects of nitric oxide on electron transportcomplexes // Arch Biochem Biophys. 1996. V. 331. № 1. 9-14137

150. O'Connor A.E., Gallagher W.M., Byrne A.T. Porphyrin and nonporphyrin photosensitizers in oncology: preclinical and clinical advances in photodynamic therapy //Photochem Photobiol. 2009. V. 85. № 5. 1053-74

151. Мачнева T.B., Ольховский П.А., Протопопов Д.М., Булгакова Н.Н., Владимиров Ю.А., Осипов А.Н. Роль эндогенных порфиринов в лазерной терапии экспериментальных кожных ран // Биофизика. 2010. Т. Послана в печать

152. Мачнева Т.В., Булгакова Н.Н., Владимиров Ю.А., Осипов А.Н. Роль порфиринов в эффектах лазерной терапии ран // Биофизика. 2010. Т. 55. № 3. 532-8

153. Baulig W., Bernhard Е.О., Bettex D., Schmidlin D., Schmid E.R. Cardiac output measurement by pulse dye densitometry in cardiac surgery // Anaesthesia. 2005. V. 60. № 10. 968-73

154. Haruna M., Kumon K., Yahagi N., Watanabe Y., Ishida Y., Kobayashi N., Aoyagi T. Blood volume measurement at the bedside using ICG pulse spectrophotometry // Anesthesiology. 1998. V. 89. № 6. 1322-8

155. Даценко Б.М., Пилипенко Н.И., Губский В.И., др. и. Определение объема циркулирующей плазмы индикатором Т-1824 // Лабораторное дело. 1990. Т. №11. 32-34

156. Углова Н.Н., Воложин А.В., Поткин В.Е. К методике определения объема циркулирующей крови при помощи синего Эванса Т-1824 // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1972. Т. 16. № 2. 80-82

157. Гланц С.А., Шевчук В.В. Микрометод определения массы крови у лабораторных животных // Лаборатороное дело. 1963. Т. № 4. 49-52

Информация о работе

Жидкова, Татьяна Владимировна
кандидата биологических наук
Москва, 2011
ВАК 03.01.02

Диссертация

Изучение молекулярных механизмов биостимулирующего действия лазерного и светодиодного облучения - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы