Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Изучение генетически трансформированной люцерны ( Medicago varia Mart ) с целью использования ее в селекционной работе

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Корнеева, Ирина Владимировна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

СОСТОЯНИЕ ИЗУЧЕННОСТИ ВОПРОСА)

1.1. МОРФОЛОГИЯ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЛЮЦЕРНЫ

1.2. МОРФОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РОСТА РАСТЕНИЙ

В ОНТОГЕНЕЗЕ

1.2.1. ЭТАПЫ ОРГАНОГЕНЕЗА

1.3. СЕМЕННАЯ ПРОДУКТИВНОСТЬ ЛЮЦЕРНЫ И ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ЕЕ КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ И КАЧЕСТВЕННЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ

1.3.1. САМОНЕСОВМЕСТИМОСТЬ

1.3.2. ПРОГАМНАЯ ФАЗА ЛЮЦЕРНЫ ВСВЯЗИ

С САМОНЕСОВМЕСТИМОСТЬЮ

1.3.3. ТРИППИНГ И ЕГО ВЛИЯНИЕ НА ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ

ЦВЕТКА И ЗАВЯЗЫВАЕМОСТЬ БОБОВ У ЛЮЦЕРНЫ

1.3.4. ЭМБРИОЛОГИЧЕСКАЯ ГЕТЕРОГЕННОСТЬ КАК ПРИЧИНА СНИЖЕНИЯ СЕМЕННОЙ ПРОДУКТИВНОСТИ

1.3.5. ГОРМОНАЛЬНАЯ РЕГУЛЯЦИЯ СЕМЯОБРАЗОВАНИЯ

1.4. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ РАСТЕНИЙ ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. МЕСТО И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ОПЫТОВ

2.2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.2.1. МЕТОДЫ М0РФ0ФИЗИ0ЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.2. МЕТОДЫ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.3. МЕТОДЫ ЦИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.4. МЕТОДЫ ФИЗИ0Л0Г0-БИ0ХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.5. МЕТОДЫ МАТЕМАТИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Изучение генетически трансформированной люцерны ( Medicago varia Mart ) с целью использования ее в селекционной работе"

Люцерна - одна из наиболее ценных бобовых кормовых культур, завоевавшая признание во многих регионах мира в богарном и орошаемом земледелии. Широкому распространению люцерны способствуют ее исключительно полезные биологические и агротехнические свойства, а также высокие кормовые достоинства, обусловленные большим содержанием в ней белковых веществ (Лупашку, 1988). Люцерна используется на зеленую массу, сено, сенаж, силос, травяную муку, пасту, концентрат растительного белка и т.д. (Писковацкий, Ненароков, 1984). Из обширного рода люцерна (Medicago Ь.) наибольший интерес представляет подрод Falcago ОгоббЬ, включающий в себя многолетние виды. Особенно ценятся высокофертильные и самофертильные клоны люцерны, используемые при создании синтетических популяций этой культуры. Выращивание таких клонов не затруднит в дальнейшем их применение на практике (Ибрагимова, 1991).

В нашей стране необходимо создать сорта с повышенным содержанием белка и некоторых незаменимых аминокислот, устойчивостью к специфическим (для каждой зоны) болезням и вредителям, высокой семенной продуктивностью, дружностью цветения, отзывчивостью на удобрения, высокой засухоустойчивостью, зимостойкостью и солевыносливостью, низким процентом содержания клетчатки в грубых кормах и др. (Иванов, 1980). Традиционный процесс улучшения растений состоит в отборе генофонда, перестройке существующих генотипов путем гибридизации или мутагенеза, отборе среди полученного разнообразия, стабилизации выделенных генотипов и размножении их, то есть направлены на реализацию признаков, уже заложенных в геноме исходных форм. В отличие от традиционных методов генетическая инженерия обладает существенным преимуществом - возможностью свободно манипулировать генетическим материалом, что позволяет создавать новые растения с уникальными свойствами. Кроме того, биотехнологические методики имеют дело с фрагментами растений (изолированные органы, протопласты) и дают возможность быстрого размножения, клонирования материала, использования изменчивости in vitro, соматической гибридизации и генетической трансформации (Новоселова, Мазин, 1986; Гапоненко, Долгов, 1997; Romano et al., 1993).

Наряду с решением прикладных задач генетическая инженерия и другие методы биотехнологии создают новую платформу для изучения фундаментальных проблем науки, механизмов важнейших физиологических процессов (рост, дифференциация, плодообразование и т.д.) (Юсибов, 1990; Гапоненко, Долгов, 1997). Например, известно, что фитогормоны регулируют и строго контролируют многие жизненные процессы в растениях. Для включения и выключения физиологических и морфогенетических программ используются одни и те же фитогормоны, но в разных концентрациях и соотношениях. Изменение фитогормонального статуса растений путем переноса в них генов синтеза фитогормонов может привести к изменению метаболизма у растений. Обычно влияние фитогормонов изучают путем экзогенного их введения, что не всегда позволяет получить адекватный ответ растения и учесть такие процессы, как поглощение, транспорт и метаболизм гормонов в целом растительном организме. Перенос в растения генов, влияющих на баланс фитогормонов, представляет собой альтернативный подход (Бутенко, 1984; Чайлахян, 1984; Юсибов и др.,1991; Андрианов, 1992; Андрианов и др., 1994).

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Исследование влияния перенесенных генов, в частности генов синтеза фитогормонов, на фенотип и хозяйственно-ценные признаки трансформантов и их потомство является необходимым этапом программ с применением методов генетической инженерии (Атанасов, 1993). Созданные генетически трансформированные растения являются уникальным средством для изучения экспрессии чужеродных генов (Дейнеко и др., 1994; Гапоненко, Долгов, 1997). Исследование морфологии, биохимии и физиологии трансформантов может прояснить вопросы о целесообразности переноса того или иного гена или комплекса генов, изменяющих гормональный баланс растений, а также позволить выявить спектр других возможных изменений морфофизиологических и биохимических свойств растений или хозяйственно - ценных признаков.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ

Целью настоящей работы было изучение морфофизиологических и биохимических особенностей генетически трансформированных растений люцерны и отбор перспективных образцов для селекционных работ. В соответствие с этим в задачи исследований входили:

-оценка изменений вегетативных органов и корневых систем трансформированных растений люцерны в зависимости от использованной генетической конструкции;

-изучение способности трансформантов к ризогенезу в благоприятных и неблагоприятных условиях;

-изучение семенной продуктивности на основе изменений мужской и женской генеративных сфер генетически трансформированной люцерны;

-исследование некоторых биохимических показателей трансформантов, определяющих их хозяйственную ценность (сырой протеин, каротиноиды, свободный пролин и хлорофиллы).

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые проведено комплексное изучение генетически трансформированных растений люцерны. Составлена классификация типов ветвления побегов, выделены основные типы корневых систем трансформантов. Изучены темпы и особенности ризогенеза трансформированной люцерны в благоприятных и неблагоприятных условиях существования растений. Исследованы мужская и женская генеративные сферы трансформантов. Применительно к задачам исследования уточнена классификация фертильности семяпочек. Обнаружена закономерность плодообразования у трансформантов в зависимости от качественных и количественных показателей пыльцы и семяпочек. Определено содержание свободного пролина, сырого протеина и пигментов по отдельным фазам развития растений. Выявлен спектр изменений, полученных в результате агробактериальной трансформации люцерны различными генетическими конструкциями.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Экспериментально показана возможность внесения в существующие генотипы недостающих хозяйственно-ценных признаков. Выявлены образцы с изменениями, имеющими практическую ценность для кормовых культур, и представляющие собой перспективный селекционный материал.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Корнеева, Ирина Владимировна

ВЫВОДЫ

1.В результате исследований установлено, что перенос агробактериальных генов влияет на качественные и количественные морфофизиологические и биохимические признаки трансформированных растений люцерны.

2.Трансформированные растения различаются по морфофизиологическим признакам: габитусу надземной части, типам ветвления, средней длине побега, длине среднего междоузлия, среднему количеству междоузлий. Нами выделено 8 типов ветвления.

3.В результате трансформации изменяется величина зеленой массы, количество стеблей в кусте и др. Установлено, что 50% образцов Ш-трансформации имеют кустистость на уровне контроля (среднюю), 38% - низкую и 12% - очень низкую. В варианте Тг4 больше всего образцов с очень низкой густотой куста (43%), а у Ы - с низкой (50%).

4.Отрастание на 20-й день после укоса у трансформированной люцерны более растянуто во времени, чем у исходного образца. В целом по вариантам отмечено, что темпы роста побегов у Тг4- и И1-трансформантов интенсивнее, чем у растений ^-трансформации.

5.Генетическая трансформация модифицирует корневую систему (нами было выделено 4 морфотипа). Наиболее глубокие изменения наблюдаются в варианте М, следовательно, трансформация А. rhizogenes может направленно применяться для модификации корневых систем.

6.Модификация корневых систем сопровождается изменением их массы: в вариантах Тг4 и ^ масса корней существенно больше или равна (7.59 - 2.40 г), а в варианте М - меньше или равна (1.40 - 3.08 г) массе корней в контроле (3.15 г).

7.Трансформированные растения различаются по способности к ризогенезу. Изучение ростовых и морфогенетических реакций у трансформантов позволило определить интенсивность перехода растений в период покоя в осенне-зимних условиях.

8.Показатели состояния генеративной сферы трансформантов широко варьируют: фертильность семяпочек от 16.8 до 42.9%, фертильность пыльцы от 9.9 до 95.4%, наполненность пыльников от единичных пыльцевых зерен до полных пыльников.

9.Трансформация влияет на морфофизиологические характеристики репродуктивных органов: изменяется окраска, количество и строение цветков и соцветий, форма и количество плодов, а также количество и масса семян.

10.Установлено, что процесс плодообразования у трансформированной люцерны имеет ряд закономерностей, зависящих от качественных и количественных показателей физиологического состояния пыльцы и семяпочек.

11.Трансформанты различаются по содержанию свободного пролина, сырого протеина, хлорофиллов и каротиноидов. Осенью содержание свободного пролина у трансформированной люцерны в 5-14 раз больше, чем весной (в контроле в 5 раз). Количество хлорофиллов и каротиноидов широко варьирует. Выделено пять образцов с содержанием сырого протеина от 24.1 до 25.1%.

12.Изменение у трансформантов константных признаков (число междоузлий на главном стебле, высота растений, количество стеблей в кусте, длина боба) является косвенным доказательством смещения баланса фитогормонов вследствие экспрессии чужеродных генов и свидетельствует о глубокой перестройке метаболизма, что делает новые генотипы источником ценных признаков для работы по селекции люцерны.

107

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью создания перспективного селекционного материала с хозяйственно-ценными признаками рекомендуется использование метода генетической трансформации штаммами Agrobacterium с генами, изменяющими гормональный статус растений: А.^те£ас:1еп8 (А 281/р&У 941и) и А.rhizogenes (А4[рМ А4]).

2.Созданные на основе метода генетической трансформации с помощью штаммов А.^те:?ас1епэ (А 281/рСУ 941'Ь'Ь) и A.rhizogenes (А4[А4]) перспективные генотипы люцерны (^21, tt26, tt29, И150, И157, М59) с различным сочетанием ценных признаков (высокая фертильность пыльцы, хорошая семенная продуктивность, высокий урожай зеленой массы с растения, мощная корневая система, повышенное содержание сырого протеина, свободного пролина,хлорофиллов и каротиноидов) рекомендуется использовать в дальнейшей селекционной работе.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Корнеева, Ирина Владимировна, Москва

1. Андрианов В.М. Влияние чужеродных генов на рост и фитогормональный статус трансгенных растений: Автореф. дисс. на соискание учен, степени д-ра биол. наук.- М., 1992. 56с.

2. Андрианов В.М., Симонова М.Л., Лебедев В.Г. и др. Регулируемая экспрессия гена биосинтеза цитокинина в трансгенных растениях новый подход к изучению фитогормональной регуляции роста и развития растений. Генетика, 1994, Т.30 (приложение). - С.6-7.

3. Атанасов А. Биотехнология в растениеводстве. Новосибирск, 1993. 241с.

4. Башкирова Н.В. Генетическая природа самосовместимости у люцерны посевной // 5 съезд Всесоюз. о-ва генетиков и селекционеров: Тез. докл. М., 1987. Т.4, 4.1. С.39-40.

5. Бобер А.Ф., Башкирова Н.В. К вопросу о генетической природе самосовместимости люцерны // Сб. науч. тр. по прикл. ботанике, генетике и селекции / ВИР. 1986. Т.103. С.11-15.

6. Борзенкова P.A. Динамика эндогенных фитогормонов и их роль в формировании и функционировании фотосинтетического аппарата картофеля. Свердловск, 1985. С.16-35.

7. Борзенкова р.А., Сулейманова О.Н., Собянина Е.А. и др. Накопление свободного пролина в листьях и клубнях генотипов картофеля при водном стрессе. Физиология и биохимия культ, растений, 1993, Т.25, N1. С. 51-58.

8. Бутенко Р.Г. Индукция морфогенеза в культуре тканей растений // Гормональная регуляция онтогенеза растений. М.: Наука, 1984. 239 с.-г1. J- U'О

9. Валуцкая А.Г. Сравнительное изучение флавоноидов рода Peucedanum L. // Изв. Сиб. отд. АН СССР. 1977. Вып.З. 15. С.114-119.

10. Верещагина В.А., Колясникова Н.Л. Изучение реакции самонесовместимости у многолетних видов люцерны // Ботан. исслед. на Урале. Свердловск, 1988. С.16.

11. Верещагина В.А., Колясникова Н.Л. Потенциальная и реальная семенная продуктивность завязей разных видов люцерны // Сб. науч. тр. по прикл. ботанике, генетике и селекции / ВИР. 1986. Т.99. С.23-27.

12. Вишнякова М.А. Исследование прогамной фазы оплодотворения у люцерны в связи с самонесовместимостью // Сб. науч. тр. по прикл. ботанике, генетике и селекции / ВИР. 1986. Т.99. С.17-22.

13. Власенко B.C., Кончичева А.Г. Прогнозирование стабильности урожайности озимой пшеницы по морфофизиологическим показателям. Докл. ВАСХНИЛ, 1985, N7, с.13-15.

14. Волынец А.П., Пальченко Л.А., Морозик Г.В. Причины низкой семенной продуктивности люцерны. Докл. АН БССР, 1983, т.27, с.1125-1127.

15. Волынец А.П., Прохорчик P.A., Пшеничная Л.А. и др. Физиология плодообразования у люцерны. Мн. : Наука и техника, 1989. 208с.

16. Гапоненко А.К., Долгов C.B. От гибридных растений к трансгенным. Природа, 1997, N5. С.52-65.

17. Гассер Ч.С., Фрейли P.P. Трансгенные культурные растения. В мире науки, 1992, N8. С.24-30.

18. Глеба Ю.Ю. Биотехнология растений // Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда. VII Международная конф. (25-28 ноября 1997г., г.Москва). С.6-7.

19. Давыдова Ю.В. Создание генетически маркированных растений и клеточных линий для использования в биотехнологии картофеля: Автореф. дисс. на соискание учен, степени канд. биол. наук. М., 1994. 20с.

20. Дейнеко Е.В., Загорская А.А, Ривкин М.И., Шумный В.К. Изменение экспрессии NPTII-маркерного гена у трансгенных растений табака. Генетика, 1994, Т.30 (прил.). С.41.

21. Дерфлинг К. Гормоны растений. Системный подход. М., "Мир", 1985. 303с.

22. Дзюбенко Н.И. Оценка и возможности использования признаков самофертильности и автотриппинга в селекции люцерны: Автореф. дисс. на соискание учен, степени канд. биол. наук. Л., ВИР, 1982. 24с.

23. Доспехов Б. А. Методика полевого опыта. М., Агропромиздат, 1985. 351с.

24. Жаринов В.И. Абортивность семяпочек в плодах люцерны посевной (Medicago sativa L.) и факторы, влияющие на ее уровень. Научные доклады высшей школы. Сер. биол. науки. Ботаника, 1977, N8.

25. Жаринов В.И. Особенности опадения репродуктивных элементов люцерны. Бюл. Моск. о-ва испытателей природы. Отд. биол., 1978, Т.83, вып.6, с.111-113.

26. Жаринов В.И. Фактическая и потенциальная семенная продуктивность люцерны в зоне лесостепи УССР. В кн.: Труды Харьковского СХИ, 1977, Т.235.

27. Зволинский В. П., Горбунков В. Г. Особенности побегообразования и оптимальная высота скашивания многолетних трав // Докл. Рос. Акад. с.-х. наук. 1994. - N2. - С.22-24.

28. Ибрагимова С. С. Люцерна как объект биотехнологических исследований // Регенерация растений. Махачкала, 1991. - С.20.

29. Иванов А.И. Люцерна. "Колос". 1980. 349с.

30. Ивашута С.И., Агафодорова М.Н., Солодкая Л.А., Кирьян И.Г., Мазин В. В. Влияние реципиентных систем на эффективность генетической трансформации кормовых растений. Биотехнология, N1-2. 1995.С.6-10.

31. Ивашута С.И. Изучение и создание реципиентных систем для генетической трансформации кормовых культур: Дисс. на соискание учен, степени канд. биол. наук. М., 1994. 123с.

32. Ильина Е.Я. Динамика формирования побегов и прдуктивность люцерны посевной: Автореф. дисс. на соискание учен, степени канд. биол. наук. Свердловск, 1969. 20с.

33. Казачковская Е.Б., Вишнякова М.А., Орел Л. И. Самонесовместимость и отмирание семяпочек до опыления как факторы снижения семенной продуктивности Medicago varia (Fabaceae) // Бот. журн., 1991. Т.76. N12. С.1682-1695.

34. Казачковская Е.Б. Морфологическое проявление женской стерильности у люцерны // Proc. of the XI Intern, syrap. "Embryology and seed reproduction." St. Peterburg, 1992. - C.256 - 257.

35. Камбуравала Канканамге Д. С. Ранавира. Влияние фитогормонов на органогенез зеленых растений табака: нормальных и трансформированных: Автореф. на соисканиеучен, степени канд. биол. наук / Ин-т физиологии растений им.К.А.Тимирязева. М., 1990. - 17с.

36. Каролевски П., Пронина Н.Д. Роль свободного пролина в реакции растений фасоли на действие сульфитных ионов. С.-х. биология. Сер. биология растений, 1993, N1. С.84-88.

37. Квасова Э.В. Изучение популяции люцерны по признаку самофертильности: Автореф. на соискание учен, степени канд. биол. наук. Новосибирск, 1975. 22с.

38. Квасова Э.В., Шумный В. К. Изменение структуры популяций люцерны по признакам автотриппинга и автогамии под влиянием инбридинга и отбора. Изв. Сиб. отд-ия АН СССР, 1990. Сер. биол. наук, вып.2, с.117-121.

39. Квасова Э. В., Шумный В. К. О механизмах самонесовместимости у люцерны // Изв. Сиб. отд. АН СССР. 1977. Вып.З. N15. С.62-68.

40. Кефели В.И. Природные ингибиторы роста и фитогормоны. М., "Наука", 1974, 253с.

41. Коваленко В.И., Ибрагимова С.С., Шумный В.К. Триппинг и его влияние на жизненный цикл цветка и завязываемость бобов у люцерны // С.-х. биология. 1987. N4. С.20-27.

42. Копержинский В.В. Биология цветения и образования семян и питания генеративных органов люцерны (Основы повышения урожая семян): Автореф. дисс. на соискание учен, степени д-ра с.-х. наук. Балашиха, 1958.

43. Корнеева И.В. Изменение морфофизиологических и биохимических признаков у трансформированных растений люцерны // Тезисы докл. "Актуальные вопросы теории и практики кормопроизводства" (июнь 1995г., г.Липецк).

44. Кудрявцев В. А. Многоканальность регуляции генеративного развития растений // Материалы Всесоюз. науч. конф. по с.-х. биотехнологии. Целиноград, 1991. С.156-157.

45. Кулаева О.Н. Цитокинины, их структура и функция. М., "Наука", 1973. 264с.

46. Кулаева О.Н. Гормональная регуляция физиологических процессов у растений на уровне синтеза РНК и белка. 41-е Тимирязевское чтение. М., "Наука", 1982. 83 с.

47. Куперман Ф. М. Морфофизиологическая изменчивость растений в онтогенезе. Лекция из курса "Биология развития растений". М., Изд-во Моск. ун-та, 1963.

48. Куперман Ф. М. Морфофизиологические правила органогенеза побегов цветковых растений.- Сб. науч. тр. Всесоюз. селекц.-генет. ин-та, 1974, вып.11, с.51-58.

49. Курьянович A.A. Влияние недостаточной влагообеспеченности на накопление свободного пролина в листьях растений пшеницы по фазам развития. Науч.-техн. бюл. ВИР, 1992, Вып. 223. С. 18-19.

50. Кутузова Г.Д., Дементьева Е.И. Генная инженерия для решения задач современной энзимологии. / Итоги науки и техники. Серия Биотехнологии. М., 1983, т.II, с.62-64.

51. Либберт Э. Физиология растений. М., "Мир", 1976. 580с.

52. Лимарь P.C., Сахарова О.В. Быстрый спектрофото-метрический метод определения пигментов листьев (по Нибом'у) // Методы комплексного изучения фотосинтеза. Выпуск 2. Л., 1973.

53. Луковников Г.А., Ярош Н.П. Определение витаминов и других биологически активных веществ. В кн.: Методы биохимического исследования растений. М., 1972. С.120-121.

54. Лупашку М.Ф. Люцерна. М.,"Агропромиздат", 1988.

55. Мазин В.В., Ивашута С.И., Агафодорова М.Н., Солодкая Л.А. Система разобщенных доминирующих центров для генетической трансформации люцерны и клевера. Физиология растений. 1994. Т.41, N6. С.868-872.

56. Макарова Р.В., Андрианов В.М., Борисова Т.А. и др. Морфогенетические последствия экспрессии бактериального ipt-гена у регенерантов табака in vitro. Физиология растений, 1997, Т.44, С.11-19.

57. Марьяхина И.Я. Ветвление растений в зависимости от прохождения этапов органогенеза. В кн.: Эксперим. биология с.-х. растений. М., 1971, с.78-93.

58. Мауриня Х.А., Берзиня-Берзите Р.В. Взаимосвязь между окислительно-восстановительными процессами в растениях и их сексуализацией. Сб.науч. тр. Всесоюз. селекц.-генет. ин-та, 1974, вып. 11, с. 116-121.

59. Мауриня Х.А., Варна Р.Я. Содержание витаминов группы "В" в растениях в зависимости от сексуализации. Науч.-техн. бюл. Всесоюз. селекц.-генет. ин-та, 1971, вып. 21, с.37-42.

60. Международный классификатор СЭВ рода Medicago L. subgen Medicago subgen Falcago (Reichenb.) Peterra. / ВИР и др. - Л., 1984. - 49с.

61. Мелик-Саркисов О.С., Цоглин Л.Н., Витол И. С., Андреенко Т.И., Розанов В.В. Активность пероксидазы из листьев здоровых и пораженных Х-вирусом растений картофеля // Доклады ВАСХНИЛ. М., "Агропромиздат". 1990. N5.

62. H.H., Борисюк В. А. фотосинтеза посевов

63. Продукц. процесс, его моделирование и полевой контроль. Саратов, 1990. С.121-126.

64. Можаев Н.И. Люцерна на корм и семена. А-Ата, Кайнар,1981.

65. Мокроносов А.Т. Взаимосвязь фотосинтеза и функций роста // Фотосинтез и продукционный процесс. М., 1988. С.109-121.

66. Муромцев Г.С., Чкаников Д.И., Кулаева О.Н., Гамбург К.З. Основы химической регуляции роста и продуктивности растений. М., "Агропромиздат", 1987.

67. Нам В.М. Биология цветения и цитоэмбриология люцерны в связи с пониженной завязываемостью семян: Автореф. дисс. на соискание учен, степени канд. биол. наук. Ташкент, 1973.

68. Новоселова A.C. Актуальные проблемы семеноводства многолетних трав. С.-х. биология, 1982, т. XVII, N 1, с.38 - 45.

69. Новоселова A.C., Мазин В.В. Использование методов биотехнологии в селекции многолетних бобовых трав. В сб.: Состояние и развитие с.-х. биотехнологии. Матер. Всесоюз. конф. М., 1986.

70. Орел Л.И. Генетические исследования в эмбриологии растений // Науч.-техн. бюл. ВИР. 1992. - Вып.218. - С.3-4.

71. Орел Л.И., Иванов А.И., Константинова Л.Н., Дзюбенко Н.И. определение уровня потенциальной плодовитости завязей в связи с семенной продуктивностью // Науч.-техн. бюл. ВИР. -1983. Вып.131. - С.56-58.

72. Митрофанов Б.А., Гойса Онтогенетические изменениясельскохозяйственных растений //

73. Орел JI. И., Казачковская Е.Б. Эмбриологическая гетерогенность как причина снижения семенной прдуктивности Medicago sativa (Fabaceae) // Бот. журн. 1991. Т.76. N2. С.161-172.

74. Орел Л.И., Казачковская Е.Б. Эмбриологическиеособенности цветков разного возраста у люцерны // Тр. по прикл. ботанике, генетике и селекции. 1989. Т.124. С.25-30.

75. Орел Л.И., Константинова Л.Н., Казачковская Е.Б. Морфологические признаки фертильности и стерильности семяпочек и зароды шевых мешков люцерны / ВИР. 1987. Вып.170. С.5-9.

76. Орел Л.И., Константинова Л.Н., Огородникова В.Ф., Дзюбенко Н.И. Фертильность семяпочек люцерны и методы ее оценки // Сб. науч. тр. по прикл. ботанике, генетике и селекции / ВИР. 1986. Т.99. С.10-17.

77. Орел Л.И., Константинова Л.Н., Огородникова В.Ф. и др. Отбор растений люцерны с высокой плодовитостью завязей: Методические указания. Л.: Изд-во ВИР, 1985.35с.

78. Пак Чун Ир. Изучение влияния повышенных уровней фитогормонов в трансгенных растениях на экспрессию хлоропластных генов: Автореф. дисс. на соискание учен, степени канд. биол. наук, ВНИИ генетики и селекции пром. микроорганизмов. М., 1991. 19с.

79. Пирузян Э.С., Мочульский A.B. Трансгенные растения как модель для изучения молекулярных механизмов стрессового ответа. Новые методы биотехнологии растений, Пущино, 1991, с.9-10.

80. Писковацкий Ю.М., Ненароков Ю.М. и др. Методические указания по селекции многоукосных сортов люцерны для условий Нечерноземной зоны. М., 1984.

81. Полевой B.B. Физиология растений. М.: "Высш. шк.", 1989, 464с.

82. Полевой В.В. Фитогормоны. JI.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1982. 249с.

83. Поликарпова Ф.Я., Гуськов A.B. Биохимическое прогнозирование регенерации придаточных корней у плодовых культур // Регенерация растений. Махачкала, 1991.

84. Рапава Л.П. Динамика эндогенных регуляторов роста у зимневегетирующих овощных растений всвязи с их морозоустойчивостью. В кн.: Актуал. вопр. соврем, ботаники. Киев, 1977, с.60-62.

85. Ржанова Е.И., Ахундова В.А. Морфогенез многолетних травянистых растений на примере клевера и люцерны. В кн.: Экспериментальный морфогенез цветковых растений. (Опыт исследования различных жизненных форм). М., 1972. С.165-193.

86. Ржанова Е.И. Морфофизиологическая характеристика культурных видов трибы виковых: Автореф. дисс. на соискание учен, степени д-ра биол. наук. Л., 1975.

87. Сазонова А.П., Волынец А.П. Качество пыльцы люцерны в зависимости от экологических условий. Весц1 АкадемИ навук БССР. Сер. Б1ял. навук, 1983, N3, с.23-26.

88. Самохвалов С.Г., Прижукова В.Г., Чечеткина H.A. Метод для массового определения аммония в 1н KCl-вытяжке с использованием индофенольной зелени. Химия в сельском хозяйстве, 1974, N10, с.71-74.

89. Семенова Е.В. Репродуктивная биология бобов (Faba bona Medik.) и причины снижения семенной продуктивности: Автореф. дисс. на соискание учен, степени канд. биол. наук. Л., 1988, 18с.

90. Соколова Т.В., Томаков A.A. Динамика свободного пролина у контрастных по солетолерантности генотипов хлопчатника. V конф. биохимиков респ. Сред. Азии и Казахстана: Тез. докл., Ташкент, 1991, с.228.

91. Соколова Т.В., Томаков A.A. Солеустойчивость тонковолокнистых сортов хлопчатника и содержание свободного пролина. Второй съезд Всесоюз. о-ва физиологов растений: Тез. докл., М., 1992, ч.2. С.197.

92. Стаценко А.П. О роли свободного пролина в криоадаптации озимых растений. Физиология и биохимия культ, растений, 1994, Т.26, N5. С.509-512.

93. Терехин Э.С. Семя и семенное размножение. С.Петербург, 1996.

94. Фаловский A.B., Фаловская З.В. Зависимость качества пыльцы и семенной продуктивности люцерны от влажности почвы // Использ. искусств, климата в селекции с.-х. культур. Л., 1988, с.72-80.

95. Фисенко С.М. Изучение микроспорогенеза у стерильных и фертильных форм люцерны. Вестник с.-х. науки Казахстана, 1978, N9, с. 28-31.

96. Фуре А.Г. Особенности бутонизации и цветения в связи с семенной продуктивностью люцерны // Сб. науч. тр. / Харьк. СХИ. 1984, т.308, с. 78-81.

97. Харборн Дж. Введение в экологическую биохимию. М. : Мир, 1985. - 308с.

98. Хрянина Т.М. Влияние фитогормонов и возраста листьев на активность фотосинтетического аппарата // Продукц. процесс, его моделирование и полевой контроль. Саратов, 1990.

99. Чайлахян М.Х. Гормональная регуляция онтогенеза растений: Сб. докл. на Всесоюз. Симпозиуме "Гормональная регуляция онтогенеза растений" (г.Москва, 22-24 марта, 1982). М.: "Наука", 1984.

100. Чайлахян М.Х. Регуляция цветения высших растений. М., "Наука", 1988. 560 с.

101. Чайлахян М.Х., Хрянин В.Н. Пол растений и его гормональная регуляция. М., "Наука", 1982.

102. Чернядьев И. И. Фотосинтез и цитокинины. Обзор // Прикл. биохимия и микробиология. 1993. - Т.29, вып.5. -С.644-674.

103. Шарикова Л.А., Агафодорова М.Н., Ивашута С.И. и др. Флуоресцентный анализ хлорофилла листьев растений-трансформантов люцерны // Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии (г.Москва, 1996).

104. Шлык А. А. О спектрофотометрическом определении хлорофиллов а и Ь. Биохимия, 1968, 33, 2, 275.

105. Юркевич Л.Н., Потопальский А.И. Пролин как фактор устойчивости ржи к засолению субстрата. Физиология и биохимия культ, растений, 1994, Т.26, N6. С.600-605.

106. Юрцев В.Н. Руководство к лабораторно практическим занятиям по цитологической и эмбриологической микротехнике. М., 1961.

107. Ш.Юсибов В.М., Андрианов В.М. и др. Получение и анализ трансгенных растений картофеля с измененным балансом фитогормонов // Plant biotechnology and molecular biology. First Simposium "Trends in Plant Biotechnology". USSR, November 20-21, 1991.

108. Яковлев Г.П. Порядок бобовые // Жизнь растений. М., "Просвещение". 1981, т.5, ч.2. С.189-201.

109. Arnoldo М., Baszczynski C.L., Bellemare G. et al. Evaluation of transgenic canola plants under field conditions. Genome, 1992, Vol.35, N1. P.58-63.

110. Ashton N.W., Grimesley N.H., Cove D.J. Analisis of gametophytic development in the moss, Physcomitrella patens, using auxin and cytokinin resistant mutants. Planta, 1979, 144.- P.427-435.

111. Bates L.S., Waldren R.P., Theare D.O. Rapid determination of face proline for water-stress. Studies Plant and soil, 1973, 39, 1.

112. Benetka V., Pavingerova D. Phenotypic differences in transgenic plants of chrysanthemum. Plant breedg., 1995, Vol.114, N2. P.169-173.

113. Binns A.N. Cytokinin accumulation and action biochemical, genetic and molecular approaches. Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol., Palo Alto (Calif.), 1994, Vol.45.- P.173-196.

114. Catsky J., Pospisilova J., Machackova I.,Wilhelmova N., Sestak L. Photosyntesis and water relations in transgenic tobacco plants with T-DNA earring gene 4 for cytokinin synthesis // Biol, plant. 1993. - 35, N3. - P.393-399.

115. Cooper D.C., Brink R. A. Partial self incompatibility and collapse of fertile ovules as factors affecting seed formation in alfalfa // J. Agric. Res. 1940. Vol. 60. N7. P. 453 473.

116. Counsil Report. Biotechnology and the American Agricultural Industry. Biotechnology. JAMA. March 20, 1991 -Vol.265, N11. P.1429-1436.

117. Davidson A.L., Dunnil P., Kesnavarg-Moore E. et al. // Symp. of IACR-long Ashtion Research Station. / Bristol (England). September 16-18, 1996.

118. De Blok M., Debrouwer D. Engineered fertility control in transgenic Brassica napus L.: Histochemical analysis of anther development. Planta, 1993, Vol.189, N2. P.218-225.

119. Demarly Y. Les biotehnologies et l'amélioration des plantes // Bull. rech. agron. Gembloux. 1994. - 29, N1. - P.5-21.

120. De Nettancourt D. Incompatibility in angiosperms. Berlin: Springer Verlag, 1977. 230 p.

121. Dumas C., Gauda T. Stigma-pollen recognition: A new look // Act. Pol. 1981. Vol.50. P.235-247.

122. Fedina I. S., Popova A. V. Photosynthesis, photorespiration and proline accumulation in water stressed pea leaves. Photosynthetica, 1996, Vol.32, N2. - P.213-220.

123. Gepsten S., Soudry E. Isolation and characterization of delayed senescence mutant of Arabidopsis thaliana: Abstr.

124. Pap. Annu. Meet. Amer. Soc. Plant Physiologist, Portland, Ore, July 30 Aug.3, 1994 // Plant Physiol. - 1994. - 105, N1, Suppl. - P.42.

125. Goddyn O.J.M., Pen J.//T/BTech.1995.V.13.P.379-387.

126. Goy P.A., Duesing J.H. Trora Pots to Plots: Genetically Modified Plants on Trial. Biotechnology. Vol.13. May 1995. P.454-458.

127. Heuer B., Feigin A. Interactive effects of chloride and nitrate on photosynthesis and related growth parameters in tomatoes. Photosynthetica, 1993, Vol.28, N4. P.549-559.

128. James C., Rattier A.F. // ISAAA Briefs. 1996. N1. P.1-31.

129. Karamanos A.J. The involvement of proline and some metabolites in water stress and their importance as drought resistance indicators. Bulg. J. Plant Physiol., Sofia, 1995, Vol.21, N 2/3. P.98-110.

130. Kandasamy M.K., Thorsness M.K., Rundle S.J. et al. Ablation of Papillar Cell Function in Brassica Flowers Results in the Loss of Stigma Reseptivity to Pollination. Plant Cell, 1993, Vol.5, N3. P.263-275.

131. Klee H.J., Horsch R.B., Hinchee M.A. et al. The effects of overproduction of two Agrobacterium tumefaciens T-DNA auxin biosynthetic gene products in transgenic petunia plants. Genes Dev., 1987, 1, 86-96.

132. Lawlor D.W., Boyle F.A., Kendall A.C., Keys A.I. Nitrate nutrition and temperature effects on wheat enzyme composition, nitrate and total aminoacid of leawes // J. Exp. Bot. 1987. - 38, N 188. - P.378-392.

133. Lewak S. Metabolic control of dormancy: Abstr. 9th Congr. Fed. Eur. Soc. Plant Physiol., Brno, 3-8 July, 1994 // Biol, plant. 1994. - 36, Suppl. - P.115.

134. Lohman Karin N., Gan Susheng, John Manorama C., Amasino Richard M. Molecular analysis of natural leaf in Arabidopsis thaliana // Physiol, plant. 1994. - 92, N2. -P.322-328.

135. Martin M., Miceli F., Morgan J.A. et al. Synthesis of osmotically active substances in winter wheat leaves as related to grought resistance of different genotypes. J. Agron. Crop. Sc., 1993, Vol.171, N3. -P.176-184.

136. Martin T.,. Sotta B., Jullien M. et al. ZEA 3: A Negative Modulator of Cytokinin Responses in Plant Seedlings. Plant Physiol., 1997, 114. P.1177-1185.

137. Matsuoka M., Ichikawa H., Saito A. et al.Expression of a rice homeobox gene causes altered morphology of transgenic plants. Plant Cell, 1993, Vol.5, N9. P.1039-1048.

138. Petcu E., Atanasiu L. Relationship between proline content variation, thermostability of membranes and cold resistance in some wheat genotypes. Romanian agr.research, Fundulea, 1994, N2. P.55-60.

139. Reese R.N., Dybing C.D., White C.A., Page S.M., Larson J.E. Expression of vegetative storage protein in soybean raceme tissues in response to flower set // J. Exp. Bot. -1995. 46, N 289. - P. 957 - 964.

140. Romano C.P., Cooper M.L., Klee H.J. Uncoupling auxin and ethylene effects in transgenic tobacco and arabidopsis plants. Plant Cell, 1993, Vol.5, N2. P.181-189.

141. Sarkar R.K. Effect of water stress on proline accumulation with certain biochemical characters in soybean. Indian J. Plant Physiol., 1993, Vol.36, N3. P.184-186.

142. Sayers E.R., Murphy R.P. Seed set in alfalfa as compared to pollen tube grouth, fertilization frequency and post fertilization ovule abortion // Crop Sci. 1966. Vol.6. N3. P. 365 - 368.

143. Shobert B., Fschesche H. Unusal solution properties of proline and its interaction with proteins // Biochem. et biophys. acta. 1978. - 541, N2. - P.1341-1344.

144. Singh V.P., Voleti S.R., Rao C.N. Distribution pattern of free proline in rice (Oryza sativa L.) grownunder low light irradiance. J. Agron. Crop Sc., 1995, Vol. 175, N3. P. 207 - 209.

145. Sitbon F., Hennion S., Sundberg B. et al. Transgenic tobacco co-expressing the A.tumefaciens iaaM and iaaH genes display altered growth and IAA metabolism. Plant Physiol,, 1992, 99, 1062-1069.

146. Sossountzov L., Maldiney R., Sotta B. et al. Immunocytochemical localization of cytokinins in Craigellatomato and sideshootless mutant. Planta, 1988, 175. 1. P.291-304.

147. Tuan Hua David Ho, Sachs M.M. Environmental control of gene expression and stress proteins in plants. In Plants under stress, Cambrige univ. press, 1989, 157 - 180.

148. Viemont J., Lambert C. Transformation of the root system by Agrobacterium rhizogenes changes rhytmic growth of the shoot of Erica X darleyensis in vitro // Ann. Bot. (USA). -1994. 73, N6. - P.603-607.

149. Wang F., Hein M.B., Fitchen J. et al. // Intern. Symp. on Engineering Plants for Commercial Products and Applications. Kentucky (USA). October 1-4, 1995.

150. Wiens D. Ovule survivorship, brood size, life history, breeding systems and reproductive success in plants // Oecologia. 1984. V.64, N1. P.47-53.