Изменение рельефа поверхности эритроцитов под воздействием некоторых токсикантов

Смирнова, Ольга Олеговна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изменение рельефа поверхности эритроцитов под воздействием некоторых токсикантов
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Изменение рельефа поверхности эритроцитов под воздействием некоторых токсикантов"

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

005000757

Смирнова Ольга Олеговна

ИЗМЕНЕНИЕ РЕЛЬЕФА ПОВЕРХНОСТИ ЭРИТРОЦИТОВ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ НЕКОТОРЫХ ТОКСИКАНТОВ

03.03.01 - Физиология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических паук

1 7 НОЯ 2011

Санкт-Петербург 2011

005000757

Работа выполнена на кафедре физиологии животных Санкт-Петербургской Государственной Академии Ветеринарной Медицины.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Скопичев Валерий Григорьевич Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Кривой Игорь Ильич доктор биологических наук Боголюбов Дмитрий Сергеевич

Ведущее учреждение: ФГУН Институт Токсикологии ФМБА России

заседании совета Д 212.232.10 по защите докторских и кандидатских диссертаций - при Санкт-Петербургском государственном университете по адресу: 199034, Санкт-Петербург, Университетская наб., д. 7/9, аудитория 90.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. A.M. Горького Санкт-Петербургского государственного университета.

Автореферат разослан « 26» IО 2011 года.

Защита диссертации состоится

года в 16 часов на

Учёный секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук Алексеев Н. П.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В патогенезе многих заболеваний важное место принадлежит нарушениям конфигурации эритроцитов (Баренбойм, Маленков, 1986; Новицкий, 2008Карчинская, 2008). В условиях непосредственного контакта в периферическом русле токсины могут оказывать различное влияние на биохимические системы, ответственные за сохранение целостности мембран эритроцитов. Модель биологической мембраны эритроцита можно использовать для изучения патологических процессов. При многих патологиях за счёт повреждения цитоскелета эритроциты превращаются в эхиноциты. Вследствие деформации и агрегации эритроцитов нарушаются микроциркуляция и реологические свойства крови (Полещук и др., 2008; Клкис(пе1а1., 1994; уап-ОеШеге1а1., 1996; РагЛазагаНи, Проууэку, 1999).Не исключено и влияние на структуру эритроцитов таких эндотоксинов, как молекулы средней массы (МСМ). Интерес к исследованию молекул средней массыопределяется прежде всего тем, что они получили известность как важные универсальные маркеры интоксикации.Эхиноцитоз и накопление продуктов гидролиза белка в виде молекул средней массы можно рассматривать как универсальные биохимические и морфологические изменения в составе крови при эндо- и экзо- генных интоксикациях. Немаловажно, что эти маркеры не только являются последствием действия токсинов, но и сами порождают цепи патологических реакций. Учитывая этот факт, актуальным становится вопрос поиска оптимальных методов и средств, способных осуществлять общуюдетоксикацию и, в том числе, устранять эхиноцитоз и действие биологически активных молекул средней массы. Абдоминальная декомпрессия -новое направление в ветеринарной медицине, осуществляемое путем воздействия отрицательного избыточного давления на локальные зоны тела. Механизм лечебного воздействия абдоминальной декомпрессии связан с приливом крови к органам брюшной полости во время разрежения, рефлекторным снижением тонуса периферических сосудов, уменьшением внутрибрюшного давления, улучшением циркуляции крови и ее реологических свойств (Длигач, Иоффе, 1982; Аванесов, 2001; Скопичев и др., 2003; 2006; 2007; Скопичев, Жичкина, 2010). Использование локального отрицательного давления (ЛОД) способствует более быстрому очищению организма от токсинов различного происхождения.

Таким образом, актуальность темы диссертации определятся рассмотрением вопросов мало изученной проблемы деформации эритроцитов при интоксикациях различного генеза, а также исследованием нового направления ветеринарной физиотерапии - детоксикации с использованием локального отрицательного давления. Подобные работы необходимы в ходе разработке диагностических и лечебных мероприятий при заболеваниях, сопровождающихся развитием интоксикационного синдрома.

Цели и задачи исследования.Основной целью исследования явилось определение изменений рельефа поверхности эритроцитов в ответ на действие фосфорорганических ингибиторов ацетилхолинэстеразы (ФОИ), молекул средней массы, при эндогенных интоксикациях на примере хронической почечной недостаточности (ХПН) и при детоксикации с использованием абдоминальной декомпрессии.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Определить процентную долю эхиноцйтов, содержание молекул средней массы и молекулярно-массовое распределение веществ пептидной природы в крови крыс после отравления фосфорорганическими соединениями: фосфаколом и карбофосом

2. Изучить методом сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) изменения рельефа поверхности эритроцитов в результате повреждающего действия фосфорорганических ингибиторов ацетилхолинэстеразы (фосфакола и карбофоса)

3. Определить процентнуюдолю эхиноцитов, содержание молекул средней массы и молекулярно-массовое распределение веществ пептидной природы в крови кошек, больных хронической почечной недостаточности

4. Определитьпроцентную долю эхиноцитов, содержание молекул средней массы в крови крыс при отравлении фосфорорганическими соединениями и кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность после детоксикации с применением абдоминальной декомпрессии

5. Выяснить изменение содержания эхиноцитов в кровеносном русле паренхимы селезёнки и печени крыс, отравленных фосфаколом, после детоксикации с использованием абдоминальной декомпрессии

6. Установить invitro изменения формы эритроцитов при воздействии на кровь здоровых кошек надосадочной жидкости, полученной из сыворотки крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью, и содержащей молекулы средней массы в повышенной концентрации

7. Выявить корреляционную связь между процентной долей эхиноцитов и содержанием молекул средней массы после отравления крыс фосфаколом и сеансов абдоминальной декомпрессии

Научная поппзна и практическая значимость работы. В диссертационном исследовании зарегистрированы изменения рельефа поверхности эритроцитов с образованием эхиноцитовпод влиянием фосфорорганических ингибиторов ацетилхолинэстеразы (карбофоса, фосфакола) invivo, при эндогенных интоксикациях на примере хронической почечной недостаточности кошек invivo, а также при воздействии молекул средней Maccbiinvitro. На основании экспериментального материала и анализа литературных данныхвпервые предположена и установлена способность молекул средней массыоказывать непосредственное влияние на деформацию нормоцитовс образованиемэхиноцитовтvitro.

Показано, что применение сеансов абдоминальной декомпрессии при лечении эндо- и экзо- генных интоксикаций способствует значительному снижению в крови универсальных маркеров интоксикации: уровня молекул средней массы и процентной доли эхиноцитов. Следовательно, подтверждена эффективность этого метода детоксикации (на примере хронической почечной недостаточности кошек и отравления крысфосфорорганическими ингибиторамиацеталхолинэстеразы). Установлена продолжительность сохранения эффекта снижения процентнойдолиэхиноцитов и содержаниеммолекул средней массы после проведения сеансов абдоминальной декомпрессии: по данным проведённого эксперимента она составляет 1 сутки .Показано, что воздействие абдоминальной декомпрессии способствует «утилизации»эхиноцитов в паренхиме селезёнки и печени.

Впервые получены данные о наличии сильной положительной корреляции между долей эхиноцитов и содержаниеммолекул средней массы после отравления крыс фосфаколом и сеансов абдоминальной декомпрессии. Ранее в литературе имелись лишь отрывочные сведения по данному вопросу.

Рассмотренные маркеры интоксикации могут быть исследованы в дальнейшем для оценки тяжести патологического состояния в клинической практике. Выявленная способность фракции, содержащеймолекулы средней массы, вызывать деформацию эритроцитов с образованием эхиноцитов может быть использована для дальнейшего подробного изучения изменения формы эритроцитовв ответ на действие различных повреждающих агентов.

Внедрение использования отрицательного давления на локальные зоны тела животных является перспективным направлением в комплексной профилактике и лечении ряда болезней, сопровождающихся развитием интоксикационного синдрома.

Материалы диссертации используются:

• При разработке и усовершенствовании аппаратуры для локальной абдоминальной декомпрессии научно-промышленной компанией ООО «Фирма АКЦ». Полученные в ходе диссертационного исследования результаты реализованы ООО «Фирма АКЦ» в ходе разработки и усовершенствования комплекта изделий абдоминальной декомпрессии КАД-01-АКЦ, что подтверждается представленным актом реализации научных результатов

• При лечении болезней, сопровождающихся развитием интоксикации, с использованием абдоминальной декомпрессии в составе комплексной терапии

• При проведении лекционных и лабораторно-практических занятий со студентами и ветеринарными врачами Санкт-Петербургской Государственной Академии Ветеринарной медицины

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Под влиянием таких веществ, как фосфорорганические соединения и молекулы средней массы, а также при хронической почечной недостаточности эритроциты деформируются с образованием эхиноцитов.

2. Совместно с содержанием в сыворотке крови молекул средней массы, увеличение процентной доли эхиноцитов можно отнести к универсальным маркерам токсических состояний.

3. Путём регистрации изменения рельефа поверхности эритроцитов (снижения процентной доли эхиноцитов) и снижения уровня молекул средней массыв сыворотке крови обосновано детоксикационнос действие абдоминальной декомпрессии.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2009, 2010 гг.), на 61-й, 62-й, 64-й научных конференциях молодых учёных и студентов (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2007, 2008, 2010 гг.), на всероссийском съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, СПбГАВМ, 2009 г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, из них: 3 статьи в журналах, соответствующих перечню ВАК РФ; 8 статей в материалах конференций; 1 тезисы научно-практической конференции; 1 учебно-методическое пособие для ветеринарных врачей; 1 статья в журнале.

Объём и структура диссертадии.Диссертация изложена на 129 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа содержит 15 таблиц, 1 диаграмму и 18

рисунков. Список литературы включает 198 наименований, в том числе 70 -иностранных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методпкп исследования

Опыты выполнены на самцах белых беспородных крыс массой 189-250г в возрасте 5 месяцев; в работе также исследованы здоровые и больные хронической почечной недостаточностью кошки в возрасте 5-14 лет. Для исследований интоксикаций экзогенной этиологии в качестве модельных отравляющих веществ использовались фосфакол (0,01 % раствор) и карбофос (коммерческий 47,4 % раствор). В качестве модели эндогенной интоксикации были исследованы кошки, больные хронической почечной недостаточностью.

В ходе опытов использовались следующие методики:

Подсчёт процентной доли эхиноцитов. В мазках крови и мазках-отпечатках со срезов селезёнки и печени после окраски гематоксилин - эозином подсчитывали процентную долю эхиноцитов с использованием светового микроскопа «МКУ-1» (Россия) и Видео Теста - Морфология («Видео ТесТ», Россия). Мазки просматривали под иммерсией (не менее 10 полей зрения в каждом мазке).

Сканирующая электронная микроскопия.Для выполнения СЭМ эритроцитов каплю крови помещали в бюкс, заполненный 1.5 % раствором глутаральдегида, приготовленном на растворе Хенкса. Через 30 минут, после осаждения эритроцитов на покровном стекле, их отмывали раствором Хенкса и обезвоживали в этаноле возрастающей концентрации (до 100%). Окончательную сушку образцов осуществляли переходом критической точки С02 в аппарате HCR - 2 Hitachi - Н-300 (Hitachi, Япония). После напыления золотом в ионном напылителе образцы просматривали в электронном микроскопе Hitachi - Н-300 (Hitachi, Япония), используя сканирующий вариант микроскопа, ускоряющее напряжение 20кВ.

Скрининговый метод определение концентрации молекул средней массы.Меюд основан на освобождении сыворотки крови от содержащихся в ней высокомолекулярных пептидов с использованием трихлоруксусной кислоты и количественном определении в полученной после центрифугирования надосадочной жидкости уровня молекул средней массы по поглощению в монохроматическом световом потоке при длине волны 254 нм. Анализируемыйцентрифугат представляет собой неочищенную фракцию молекул средней массы.В центрифужные пробирки внесли по 0,25 мл сыворотки и 0,125 мл раствора трихлоруксусной кислоты (100 г/л). После перемешивания содержимого произвели центрифугирование на обычной клинической центрифуге ОПН-3 при 3000 об/мин в течение 30 мин. Отобрали 0,125 мл надосадочной жидкости и перенесли в пробирку с 1,125 мл дистиллированной воды. Содержимое пробирки перемешали и фотометрировали при 254 нм, используя в качестве контрольной пробы дистиллированную воду. Использовали спектрофотометр Schimadzu UV - 1700 (Япония), позволяющий измерять оптическую плотность в ультрафиолетовой области спектра (250 - 260 нм) с использованием стандартных прямоугольных кварцевых кювет с длиной оптического пути 1 см.

Результаты определения содержания молекул средней массы в сыворотке крови выражены в условных единицах, представляющих показатели оптической плотности, учтенные с точностью до третьего знака после запятой (Камышников, 2003).

Жидкостно-гелевая хроматография.Определение молекулярно-массового распределения веществ пептидной природы в сыворотке крови проводили методом жидкосто-гелевой хроматографии с использованием колонки размером 0,5*0,015м,

содержащей гель SephadexG-50. В качестве элюента использовали 0,15 М раствор хлорида натрия, при скорости пропускания элюата 20 мл/ч перистальтическим насосом Bromma 2132(LKB, Швеция). Вариант элюировании - изократический. В качестве детектора применяли проточный спектрофотометр Bromma 2138 UvicordS (LKB, Швеция) при длине волны 230 им (поглощение, характерное для пептидных связей). Графическое изображение распределения пептидных фракций в элюате получали с помощью самописца Bromma 2210 Recorder 1-channel (LKB, Швеция).

Абдоминальная декомпрессия.Абдоминальную декомпрессию

экспериментальным животным проводили на аппарате АДТ - 02 (разработчик-изготовитель - научно-промышленная компания ООО «Фирма АКЦ»), представляющем собой элсктронно-пнсвматический прибор, формирующий в миниатюрной камере отрицательное избыточное давление с величиной максимального уровня разрежения 4,5 кПа.

Применение абдоминальной декомпрессии при отравлении крыс Ф(ЖИспользованы рекомендуемые при лечении отравления ФОИ режимы: 2 сеанса длительностью по 3 минуты каждый с интервалом 2 минуты, разряжение - 2 кПа (Скопичев и др., 2007; Скопичев, Жичкина 2010).

Применение абдоминальной декомпрессии у кошек с хронической почечной недостаточностью. Использованы рекомендуемые для лечения ХПН режимы: 3 сеанса длительностью но 3 мин каждый с интервалом 30 с, разрежение - 2 к Па (Скопичев и др., 2007; Скопичев, Жичкина 2010).

Результаты исследования

Изменение рельефа поверхности эритроцитов крови крыс под воздействием фосфорорганических соединений

Деформация эритроцитов при отравлении крыс фосфаколом

Опыты выполняли на беспородных белых крысах, самцах с массой тела 189 - 250 г в возрасте 5 мес, п=30.Крысам контрольной группы (п = 10) внутримышечно вводили физ. раствор (натрия хлорид 0,9%) в дозе 0,5 мл. Остальным крысам внутримышечно вводили фосфакол: группа № 1, п = 10 - в дозе 0,5 ЛД50 (ЛД50=0,92 +/-0,12 мг/кг); группа № 2, п = 10 - в дозе 5,0 ЛД50.У всех животных первый раз кровь взяли из хвостовой вены до введения фосфакола и физ. раствора, второй раз - через 15 мин после введения фосфакола и физ. раствора, третий раз - через 2 часа.

Все полученные образцы крови использовали для определения молекулярно-массового распределения веществ пептидной природы в сыворотке, определения содержания МСМ в сыворотке, проведения световой микроскопии с целью подсчёта процентной доли эхиноцитов и сканирующей электронной микроскопии.

Хроматография контрольных образцов сыворотки крови крыс (п = 10) до введения физ. раствора, через 15 минут и через 2 часа после введения физ. раствора выявила наличие двух фракций. Первая фракция вышла со свободным объемом, приблизительная ММ составила 30 кДа. ММ второй фракции - 1,05 кДа. Причем по количественному соотношению преобладает фракция низкомолекулярных пептидов (М±т):1,05 кДа - 91,47%±4,5%; 30 кДа - 8,53%±1,8%.

Хроматография образцов сыворотки крови крыс после отравления фосфаколом в дозе 0,5 ЛД50 (п = 10), 5 ЛД50 (п = 10) через 15 минут и 2 часа после введения фосфакола также выявила наличие двух фракций, но в образцах содержатся лишь следовые количества фракции с ММ 30 кДа. Это объясняется более глубокой степенью гидролиза веществ с пептидной связью. При этом концентрация молекул средней массы (низкомолекулярных пептидов) в сыворотке крови крыс после

введения фоефакола достоверно увеличивается по отношению к контролю (таблица 1).При проведении световой микроскопии с целью подсчёта доли эхиноцитов выявлено, что в мазках крови интактных крыс подавляющее большинство эритроцитов имеет формунормоцитов. После введения подопытным крысам фоефакола в дозе 0,5 ЛД50 и в дозе 5,0 ЛД50 доля эхиноцитов в крови крыс достоверно увеличивается по отношению к контрольной группе (таблица 2).

Морфологические исследования рельефа поверхности эритроцитов с использованием сканирующей электронной микроскопии показали, что в контрольных образцах крови подавляющее большинство эритроцитов имеют форму дискоцитов.Применение фоефакола в дозе 0,5 ЛД50 уже через 15 мин после его введения привело к существенному изменению формы эритроцитов с образованием эхиноцитов, что характеризуется нарушением рельефа клеточной поверхности, образованием выростов на поверхности эритроцитов и уменьшением их размеров. Значительное количество эритроцитов имеют дефекты плазмолеммы, сопровождающиеся их разрушением (рис 1).

Таблица 1. Содержание молекул средней массы (условные единицы, М±т) в сыворотке крови крыс (п=30) после введения фоефакола

Группа крыс До введения фоефакола и физ.раствора Время от момента введения фоефакола

15 мин 2 часа

Контроль (физ. раствор) 0,384±0,05 0.432±0,053 0,407i 0,047

№ 1 (фосфакол в дозе 0,5 ЛД50) 0,400±0,05 0,498±0,055* 0,609±0,058*

№ 2 (фосфакол в дозе 5 ЛД50) 0,420±0,055 0,653±0,058* 0,832±0,062**

*р<0,05 по отношению к содержанию МСМ в крови контрольной группы крыс **р<0,01 по отношению к содержанию МСМ в крови контрольной группы крыс

Таблица 2. Процентная доля эхиноцитов (%, 10 полей зрения в каждой пробе; М±т) в крови крыс (п=30) после введения фоефакола.

Группа крыс До введения фоефакола и физ. раствора Время от введенияфосфакола

15 мин 2 часа

Контроль (физ. раствор) 3,0±0,3 3,4±0,7 3,2±0,5

№ 1(фосфакол в дозе 0,5 ЛД50) 2,7±0,25 37,0±2,8** 43±4,5**

№ 2 (фосфакол в дозе 5 ЛД50) 2,9±0,25 51,0±2,4** 49,0±1,5**

**р<0,01 по отношению к доле эхиноцитов в крови крыс контрольной группы

При введении фоефакола в дозе 5 ЛД50 нарушается рельеф клеточной поверхности, формируются гребни, наблюдается отшнуровка мембранного материала. При этом можно наблюдать образование значительных по размерам (до 23 мкм) выростов клеточной поверхности, а кренирование эритроцитов в сочетании с нарушением их стромы приводит к их последующему разрушению.

Рис. 1. Деформация эритроцитов крови крыс в группе № 1 (фосфакол в дозе 0,5 ЛД50) а) через 15 мин после введения фосфакола, эхиноцит б) через 2 часа после введения фосфакола, разрушение эритроцита

Деформация эритроцитов при отравлении крыс карбофосом

Опыты выполняли на беспородных белых крысах, самцах с массой тела 200 - 250 г в возрасте 5 мес, п= ЗО.Контрольной группе крыс (п = 10) вводили внутрибрюшинно физ. раствор в дозе 0,5 мл. Остальным крысам внутрибрюшинно вводили карбофос в виде коммерческого 47,4 % раствора. Группе крыс № 1, п = 10 - в дозе 1/10 ЛД50 (ЛД50 = 1000 мг/кг +/- 25 мг/кг); группе № 2, п=10 - в дозе ЛД50.У всех животных первый раз кровь взяли из хвостовой вены через 2 мин после введения карбофоса, второй раз - через 5 минут, третий - через 10 мин.Все образцы крови использовали для определения содержания молекул средней массы, определения молекулярно-массового распределения веществ пептидной природы в сыворотке, проведения световой микроскопии с целью подсчёта доли эхиноцитов и сканирующей электронной микроскопии.

Хроматография контрольных образцов сыворотки крови крыс (п = 10) до введения физ. раствора, через 2, 5 и 10 минут после введения физ. раствора выявила наличие двух фракций. Первая фракция вышла со свободным объемом, приблизительная ММ составила 30 кДа. ММ второй фракции составила 1,05 кДа. По количественному соотношению преобладала фракция низкомолекулярных пептидов (М±т):1,05 кДа -90,62%±4,5%; 30 кДа - 9,38%±1,5%.

Хроматография образцов сыворотки крови крыс после отравления карбофосом в дозе 1/10 ЛД50 (п = 10), 1ЛД50 (п = 10) через 2, 5 и 10 минут после введения карбофоса также выявила наличие двух фракций, но в данных образцах содержатся только следовые количества фракции с ММ 30 кДа. Это объясняется более глубокой степенью гидролиза веществ с пептидной связью. При этом концентрация молекул средней массы в сыворотке крови крыс после введения карбофоса достоверно увеличивается по отношению к контролю (таблица 3).

При проведении световой микроскопии мазков крови крыс выявлено, что доля эхиноцитов в крови крыс после введения карбофоса достоверно увеличивается по отношению к контролю (таблица 4).При проведении сканирующей электронной микроскопии выявлено, что в контрольных образцах крови количественно значимой деформации эритроцитов не наблюдается, подавляющее большинство эритроцитов имеет форму дискоцитов.При исследовании эритроцитов крови крыс после отравления карбофосом отмечен эхиноцитоз: рельеф поверхности изменяется с образованием гребней, наблюдается отшнуровка мембранного материала. Характерна агрегация деформированных эритроцитов (рис. 2).

Таблица 3. Содержание молекул средней массы (условные единицы; М±ш) в сыворотке крови крыс (п=30) после введения карбофоса.

Группа животных До введения карбофоса и физ.раствора Время от момента введения карбофоса

2 мин 5 мин 10 мин

Контроль (физ. раствор) 0,440±0,05 0,450±0,048 0,436±0,05 0,492+0,048

№ 1 (карбофос в дозе 1/10 ЛД50) 0,390±0,07 0,642±0,053* 0,704±0,05** 0,738±0,05**

№ 2 (карбофос в дозе ЛД50) 0,412+0,05 0,715±0,053** 0,738+0,058** 0,867±0,055**

Таблица 4. Доля эхиноцитов (%, 10 полей зрения в каждой пробе; М±т) в крови крыс (п=30) после введения карбофоса.

Группа животных До введения карбофоса и физ.раствора Время после введения карбофоса

2 мин 5 мин 10 мин

Контроль (физ. раствор) 2,7±0J25 2,5±0Д5 3,0±027 2,7±0^5

№ 1 (карбофос в дозе 1/10 ЛД50) 2,5±0,25 25±2,5** 43±4,1** 50+2,9**

№ 2 (карбофос в дозе ЛД50) 2,7±0,25 42±2,5** 45+3,7** 62±4,3**

**р<0,01 по отношению к доле эхиноцитов в крови крыс контрольной группы

--ши

ЩШЩШ * HS

Шг

" -

а)

Рис. 2. Конгломерация эхиноцитов, кровь крыс группы № 2 через 10 мин после введения карбофоса в дозе 1ЛД50 а) конгломерат эхиноцитов б) конгломераты эхиноцитов с отложением фибрина. Масштабная линейка - 5 мкм.

Изменения формыи эритроцитов крови кошек с диагнозом ХПН.

Проведено исследование молекулярно-массового распределения веществ пептидной природы,содержания молекул средней массыв сыворотке крови и доли эхиноцитов в крови кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность. В качестве физиологического контроля исследована кровь 20 клинически здоровых

кошек е концентрацией креатинина в сыворотке крови до 160 ммоль/л. В исследовании принимали участие 30 кошек в возрасте 5-14 лет с диагнозом ХПН на стадии азотемии. Исследуемые животные были разделены на 3 группы в зависимости от концентрации в сыворотке крови маркера уремии - креатинина (ммоль/л): первая группа - 160 (верхняя граница нормы) - 250, вторая - 250 - 450, третья - 450 и более. В первую группу вошли 10 кошек в возрасте 5-12 лет, во вторую - 10 кошек в возрасте 5-14 лет, в третью - 10 кошек в возрасте 6 - 14 лет.

Хроматография образцов сыворотки крови клинически здоровых кошек (п = 20) выявила наличие двух фракций. Первая фракция вышла со свободным объемом, приблизительная ММ составила 30 кДа. ММ второй фракции - 1,05 кДа. Причем по количественному соотношению преобладает фракция низкомолскулярных пептидов:!,05 кДа - 91,5%±4,5%; 30 кДа - 8,5%±1,5%.Хроматография образцов сыворотки крови кошек с диагнозом ХГШ (п = 30) также выявила наличие двух фракций, но в этих образцах содержатся лишь следовые количества фракции с ММ 30 кДа. При этом содержаниемолекул средней массы в сыворотке крови кошек с диагнозом ХПН достоверно увеличивается по отношению к физиологическому контролю (таблица 5). Доля эхиноцитов (10 нолей зрения в каждой пробе; М±т) в мазках крови клинически здоровых кошек (п=20) составила 4,2±0,05%, подавляющее большинство эритроцитов имеют форму дискоцитов.При проведении световой микроскопии мазков крови кошек, больных ХПН на разных стадиях, выявлено, что доля эхиноцитов достоверно увеличивается по отношению к физиологическому контролю (таблица 5).

Таблица 5. Процентная доля эхиноцитов (%, 10 нолей зрения в кавдой пробе; М±т) и содержание молекул средней массы (условные единицы, М±т) в крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью(п=50).__

Группа кошек (в зависимости от содержания креати.'ина в сыворотке крови) Содержание МСМ Доля эхиноцитов

До 160 ммоль/л (физиологический контроль; п=20) 0,402±0,050 4,2±0,05%

160-250 ммоль/л(п=10) 0,510±0,050* 9,0±1**

250 - 450ммоль/л (п=10) 0,615±0,050* 10±2**

450 и более ммоль/л (п=10) 0,795±0,057** 17±3**

**р<0,01 по отношению к физиологическому контролю *р<0,05 по отношению к физиологическому контролю

Изменения формы эритроцитов при отравлении фосфако.юм и детоксикации с применением абдоминальной декомпрессии.

Опыты выполняли на беспородных белых крысах, самцах с массой тела 220 - 250 г в возрасте 5 месяцев (п =200). Крысам контрольной группы (п = 100) внутрибрюшинно вводили физ. раствор в дозе 0,5 мл. Остальным крысам (п = 100) внутрибрюшинно вводили фосфакол в дозе ЛД50 (0,92 +/-0Д2 мг/кг) в виде 0,01 % раствора. Контроль и опыт были разделены на 6 групп крыс, по 10 крыс в каждой группе. Через 10 минут после внутрибрюшинного введения контрольной группе физ. раствора и подопытным группам фосфакола провели дегоксикацию с применением абдоминальной декомпрессии (2 сеанса длительностью по 3 минуты каждый с интервалом 2 минуты, разряжение - 2 кПа) группам №1-9. Все исследуемые животные были умерщвлены после проведения абдоминальной декомпрессии в

соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных": группа № 1 - через 1 час; № 2 - через 2 часа; № 3 - через 5 часов; № 4 -через 10 часов; № 5 - через 15 часов; № 6 - через 1 сутки; № 7 - через 30 часов; № 8 -через 36 часов; № 9 - через 2 суток. Крысы группы № 10 были умерщвлены через 1 сутки после введения фосфакола без проведения абдоминальной декомпрессии.

Для исследований взяли материал: кровь для определения содержания молекул средней массы в сыворотке и подсчёта доли эхиноцитов (до умерщвления), мазки -отпечатки срезов печени и селезёнки для подсчёта процентной доли эхиноцитов(после умерщвления).

Таблица 6. Доля эхиноцитов (%; 10 полей зрения в каждой пробе; М+/-т) и содержаниемолекул средней массы (условные единицы; М±т) в крови крыс контрольной группы (п=100) и отравленных фосфаколом (п=100) после проведения абдоминальной декомпрессии и без лечения.

Группа крыс Контроль (физ. раствор) Опыт (фосфакол в дозе ЛД50)

Доля эхиноцитов Концентрация мем Доля эхиноцитов Концентрация МСМ

№1 (через 1 час после ЛОД) 2,5±0,2 0,390±0,045 6±0,57** 0,452±0,048*

№2 (через 2 часа после ЛОД) 2,5±0,25 0,458±0,050 9±1,05** 0,447±0,048*

№3 (через 5 часов после ЛОД) 2,4±0Д5 0,382±0,050 8±1,00** 0,513±0,050*

№4 (через 10 часов после ЛОД) 2,4±0Д5 0,415±0,040 8±1,00** 0,510±0,050*

№5 (через 15 часов после ЛОД) 2,5±0,2 0,415±0,0450 9±1,00** 0,550±0,050*

№6 (через 1 сутки после ЛОД) ,2,5±0^5 0,466±0,050 11±1,5** 0,584±0,050*

№7 (через 30 часов после ЛОД) 2,3 ±0,25 0,443±0,0 50 17±1,5** 0,650±0,050**

№8 (через 36 часов после ЛОД) 2,5±0,25 0,436±0,045 20±2,1** 0,670±0,050**

№9 (через 2 суток после ЛОД) 2,6±03 0,405±0,055 21±ЗД** 0,673±0,050**

№10 (через 1 сутки без ЛОД) 2,5±0,25 0,443±0,050 28±3,6** 0,659±0,055**

*р<0,05 по отношению к контрольной группе **р<0,01 по отношению к контрольной группе

Доля эхиноцитов в крови крыс после отравления фосфаколом и проведения сеансов абдоминальной декомпрессии увеличивается по мере увеличения временного промежутка между проведением абдоминальной декомпрессии и взятием крови и максимальна в группе, которой декомпрессия не проводилась и в группе, у которой кровь забрана через двое суток после детоксикации. После отравления фосфаколом наиболее близка к контрольным показателям доля эхиноцитов через 1, 2 и 5 часов после проведения абдоминальной декомпрессии. Аналогичные изменения характерны для содержания в сыворотке крови молекул средней массы.Провели корреляционный

анализ для выявления связи между содержанием молекул средней массы в сыворотке крови и процентной долей эхиноцитов. Коэффициент корреляции составил 0,87 (р>95%), что соответствует сильной положительной корреляции.В контрольной группе после введения внутрибрюшинно физ. раствора и лечения абдоминальной декомпрессией процентнаядоля эхиноцитов и содержание молекул средней массы значимо не изменяются (таблица 6).

После проведения отравленным фосфаколом крысам сеансов абдоминальной декомпрессии доля эхиноцитов, находящихся в сосудах селезёнки и печени, возрастает по сравнению с контрольными образцами и держится на повышенном уровне в течение первых суток. Через сутки после проведения сеансов абдоминальной декомпрессии доля эхиноцитов начинает снижаться, (при этом их концентрация в периферической крови увеличивается). При этом в мазках-отпечатках со срезов печени и селезёнки группы, не подвергшейся детоксикации, показатели близки к контрольным образцам, в то время как маркеры интоксикации в периферической крови имеют максимальные значения (таблица 7). Таблица 7. Доля эхиноцитов (%) в мазках-отпечатках со срезов печени и селезёнки крыс контрольной группы (п=100) и отравленных фосфаколом (п=100) после проведения абдоминальной декомпрессии и без лечения абдоминальной декомпрессией (10 полей зрения в каждой пробе; М±т).

Группа крыс Контроль (физ. раствор) Опыт (фосфакол в дозе ЛД50)

Доля эхиноцитов в мазке-отпечатке среза печени Доля эхиноцитов в мазке-отпечатке среза селезёнки Доля эхиноцитов в мазке-отпечатке среза печени Доля эхиноцитов в мазке-отпечатке среза селезёнки

№1 (через 1 час после ЛОД) 0,6±0,01 0,3±0,01 1,6±0,13** 1,6±0,14**

№2 (через 2 часа после ЛОД) 0,5±0,01 0,3±0,01 2,3 ±0,25** з,з±о,з**

№3(через 5 часов после ЛОД) 0,6±0,01 0,3±0,01 2,6±0,25** 3,б±03**

№4 (через 10 часов после ЛОД) 0,6±0,01 0,2 ±0,01 2,6±0,25** 3,9±03**

№5 (через 15 часов после ЛОД) 0,6±0,01 0,3±0,01 2,6±0,25** 3,б=ЮЗ**

№6(черсз 1 сутки после ЛОД) 0,7±0,01 0,3±0,01 2±0,25** 2,3±0,25**

№7 (через 30 часов после ЛОД) 0,5±0,01 0,2 ±0,01 1,5А0,10** 1,5±0,12**

№8 (через 36 часов после ЛОД) 0,5±0,01 0,2±0,01 1,5±0,10** 1,5±0,10**

№9(через 2 суток после ЛОД) 0,6±0,01 0,3±0,01 1,5±0,13** 1,5±0,13**

№10 (через 1 сутки без ЛОД) 0,6±0,01 0,4±0,01 1,0±0,1** 0,3±0,06*

*р<0,05 по отношению к контрольной группе

**р<0,01 по отношению к контрольной группе

Изменения формы эритроцитов при хронической почечной недостаточности и детоксикации с применением абдоминальной декомпрессии

Исследуемые животные (всего 30 кошек в возрасте 5-14 лет) были разделены на 3 группы в зависимости от концентрации в сыворотке крови маркера уремии -креатинина (ммоль/л): первая группа 160 (верхняя граница нормы) - 250, вторая - 250 - 450, третья - 450 и более. D первую группу вошли 10 кошек в возрасте 5-8 лет, во вторую - 10 кошек в возрасте 5-14 лет, в третью - 10 кошек в возрасте 7-14 лет. В качестве контрольных образцов исследована кровь 10 клинически здоровых кошек с уровнем креатинина в сыворотке крови до 160 ммоль/л.

Определяли содержание молекул средней массы и долю эхиноцитов в крови кошек контрольной группы и кошек, больныххронической почечной недостаточностью на стадии уремии, до и через 2 часа после проведения абдоминальной декомпрессии (разрежение 2 к Па, 3 цикла по 3 мин, пауза 30 с).

Через 2 часа после абдоминальной декомпрессии содержание эхиноцитов в крови кошек, больных ХПН, снижается во всех группах животных, аналогичные изменения происходят с содержанием в сыворотке крови молекул средней массы (таблица 8). Таблица 8. Доля эхиноцитов (%, 10 полей зрения в каждой пробе; М±т) в крови и содержание молекул средней массы (условные единицы, М±т) в сыворотке крови кошек контрольной группы (п=10) и кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность (п=30) до и после сеансов абдоминальной декомпрессии.

Группа кошек Доля эхиноцитов Содержание МСМ

До декомпрессии Через 2 часа после декомпрессии До декомпрессии Через 2 часа после декомпрессии

Контроль - до 160 ммоль/л 2,9±0,2 2,6±0,15* 0,442±0,053 0,440±0,053*

160-250 ммоль/л 9,8±1 3,2±0,30** 0,492±0,054 0,453±0,055*

250 - 450ммоль/л 13,6±1,4 5,7±0,50** 0,589±0,059 0,479±0,056*

450 и более ммоль/л 18,5±2,9 9,6±1,05** 0,814±0,068 0,532±0,055*

*р<0,05 по отношению к доле эхиноцитов до абдоминальной декомпрессии

**р<0,01 по отношению к доле эхиноцитов до абдоминальной декомпрессии Определение способности молекул средней массы непосредственно оказывать влияние на деформацию эритроцитов

Для выделения из сыворотки крови среднемолекулярных пептидов использован метод, базирующийся на способности молекул средней массы не осаждаться трихлоруксусной кислотой (Камышников, 2003).В эксперименте была использована сыворотка крови 20 кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность на стадии уремии из сформированных ранее групп №2 (п=10, содержание креатинина в сыворотке крови 250 - 450 ммоль/л) и №3 (п=10, содержаниекреатинина в сыворотке крови 450 и более ммоль/л). Кошки выбраны исходя из наличия в сыворотке крови молекул средней массы в повышенной концентрации. Полученную из сыворотки крови надосадочную жидкость ранее использовали для определения уровня молекул средней массы (условные единицы;М±т): группа №2 - 0,615±0,050; №3 - 0,795±0,057.

Анализируемыйцентрифугат (надосадочная жидкость) представляет собой неочищенную фракцию средних молскул.Надосадочную жидкость каждой пробы добавили к цельной, стабилизированной ЭД'ГА крови 20 клинически здоровых кошек с содержанием молекул средней массы 0,458±0,055 (условные единицы; М±т).Долю эхиноцитов в крови клинически здоровых кошек подсчитывали до начала эксперимента, через 30 мин и через 1 час после добавления inviti-онадосадочной жидкости, содержащей молекулы средней массы в повышенной концентрации.Доля эхиноцитов в крови клинически здоровых кошек до начала эксперимента составила 5%±0,8%, через 30 мин - ll,5%i0,7%** и через 1 час после добавления inviti-онадосадочной жидкости - 16%±1,5%** (**р<0,01 по отношению к доле эхиноцитов до начала эксперимента).

Обсуждение

В работе была поставлена цель оценить изменения формы эритроцитов в ответ на действие фосфорорганических соединений, молекул средней массы, при эндогенных интоксикациях на примере хронической почечной недостаточности кошек и при детоксикации с использованием абдоминальной декомпрессии.Для исследований интоксикаций экзогенной этиологии в качестве модельных отравляющих веществ использовались ФОИ разной степени токсичности: фосфакол и карбофос.

В сыворотке крови крыс после отравления фосфаколом и карбофосом с использованием жидкосто-гелевой хроматографии выявлен распад белковых молекул с образованием продуктов гидролиза с молекулярной массой менее 30 кДа. При этом содержаниемолекул средней массы в сыворотке крови достоверно увеличивается по отношению к контрольным группам крыс.Световая микроскопия мазков периферической крови показала, что доля эхиноцитов после введения фосфакола и карбофоса подопытным группам крыс достоверно возрастает по отношению к контрольным группам крыс. Ранее был обнаружен дозозависимый эффект образования эхиноцитов в циркулирующей крови, что йвлястся причиной нарушения реологических свойств крови (Жичкина, Скопичев, 2004; Скопичев и др., 2006; Скопичев, Жичкина, 2010).

В ходе морфологических исследований рельефа поверхности эритроцитов с использованием сканирующей электронной микроскопии выявлено, что в контрольных образцах крови крыс их подавляющее большинство имеет форму дискоцитов. При отравлении крысфосфаколоми карбофосомнарушастся рельеф форма эритроцитов с образованием эхиноцитов, наблюдается отшнуровка мембранного материала. При исследовании эритроцитов крыс после отравления карбофосом наблюдали образование конгломератов деформированных эритроцитов.

В качестве модели эндогенной интоксикации были исследованы кошки в возрасте 5-14 лет, больные хронической почечной недостаточностью. При хронической почечной недостаточности эндогенная интоксикация развивается в результате накопления в сыворотке крови продуктов белкового обмена. Жидкосто - гелевая хроматография образцов сыворотки крови кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность (n = 30) выявила наличие двух фракций, в образцах содержатся лишь следовые количества фракции с молекулярной массой 30 кДа. При этом содержаниемолекул средней массы в сыворотке крови кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность достоверно увеличивается по отношению к контролю. При проведении световой микроскопии мазков крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью, выявлено, что процентная доля эхиноцитов достоверно увеличивается по отношению к контролю.

В качестве метода детоксикации, положительно влияющего на микроциркуляториый кровоток и способствующегоотфильтровыванию и удалениюиз кровотока деформированных эритроцитов,исследована абдоминальная декомпрессия (Скопичев и др. 2003; Жичкина, 2004; Скопичев и др., 2007; Аг<Ш1еЫ1., 1969).При отравлении фосфорорганическими соединениями абдоминальная декомпрессия имеет практическое значение в качестве неспецифической терапии. В работе были использованы рекомендуемые ранее режимы локального отрицательного давления в области брюшной полости: 2 сеанса в одном цикле длительностью по 3 минуты каждый с интервалом 2 минуты, разряжение - 2 кПа (Скопичев и др., 2007; Скопичев, Жичкина 2010).Процентная доля эхиноцитов в крови крыс после отравления фосфаколом и проведения абдоминальной декомпрессии увеличивается по мере увеличения временного промежутка между проведением детоксикации и забором крови и максимальна в группе, которой декомпрессия не проводилась и в группе, у которой кровь забрана через двое суток после проведения абдоминальной декомпрессии. Наиболее близка к контрольной доля эхиноцитов через 1, 2 и 5 часов после проведения детоксикации.

Механизм лечебного воздействия абдоминальной декомпрессии связан с приливом крови к органам брюшной полости во время разрежения, улучшением циркуляции крови и её реологических свойств (Аванесов, 2001). После проведения отравленным фосфаколом в дозе ЛД50 крысам абдоминальной декомпрессии в результате дилатации мезентериальных кровеносных сосудов количество эхиноцитов, находящихся в сосудах селезёнки и печени, возрастает по сравнению с контрольными образцами и держится на повышенном уровне в течение первых суток. Через сутки после сеансов локального отрицательного давления процентная доля эхиноцитов начинает снижаться, при этом их содержание в периферической крови увеличивается. При этом в мазках-отпечатках со срезов печени и селезёнки группы, не подвергшейся детоксикации, показатели близки к контрольным образцам (в то время как такие маркеры интоксикации, как процентная доля эхиноцитов и содержание молекул средней массы, имеют максимальные значения).Таким образом, снижение процентной доли эхиноцитов в циркулирующей крови осуществляется за счёт их «утилизации» в паренхиме селезёнки и печени.

При лечении хронической почечной недостаточности с использованием абдоминальной декомпрессии в составе комплексной терапии была установлена детоксикационная эффективность этого метода путём регистрации снижения маркеров уремии (Скопичев и др., 2007). В работе были использованы рекомендуемые ранее режимы абдоминальной декомпрессии: разрежение 2 кПа, 3 сеанса в одном цикле по 3 мин каждый, пауза 30с. (Скопичев и др., 2007; Скопичев, Жичкина, 2010). Через 2 часа после проведения абдоминальной декомпрессии кошкам, больным хронической почечной недостаточностью, доляэхиноцитов исодержание молекул средней массы в крови достоверно снижается во всех группах животных.

Проведённый корреляционный анализ показывает наличие сильной положительной связи между процентной долей эхиноцитов и уровнем молекул средней массы. Ранее также было показано, что укорочение периода полужизни (Т1/2) эритроцитов при уремии коррелирует со степенью нарушения функции почек. Это зависит от присутствия в сыворотке различных токсических веществ. (Ермоленко, Иващенко, 2000).В связи с вышеизложенным была проверена способность фракции, содержащеймолекул средней массы в повышенной

концентрации, оказывать влияние на деформацию эритроцитов в эхиноцитыиш1го. При воздействии шуИго на стабилизированную кровь клинически здоровых кошек надосадочной жидкости с повышенной концентрацией молекул средней массы было обнаружено достоверное увеличение процентного содержания эхиноцитов в мазках крови.

Проведённый анализ состояния рельефа поверхности эритроцитов при хронической почечной недостаточности и при воздействии таких веществ, как фосфорорганичсскис соединения и молекулы средней массы, позволил выявить их общий признак - изменение формы с образованием эхиноцитов.Таким образом, поставленные исследованием задачи были решены и достигнута цель работы.

Выводы

1. После отравления крыс фосфаколом и карбофосом процентная доля эхиноцитов в периферической крови достоверно увеличивается по отношению к интактиым крысам. В сыворотке крови крыс после введения фосфорорганических соединений содержатся продукты распада белковых молекул молекулярной массой менее 30 кДа, при этом содержание молекул средней массы в сыворотке крови достоверно возрастает по отношению к интактным крысам.

2. После введения крысам фосфакола и карбофоса форма эритроцитов изменяется с образованием эхиноцитов, что характеризуется появлением выростов на клеточной поверхности, отшнуровкой мембранного материала, уменьшением размера клеток и агрегацией деформированных эритроцитов.

3. При хронической почечной недостаточности процентная доля эхиноцитов в крови кошек достоверно возрастает по отношению к контрольным животным. В сыворотке крови кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность содержатся продукты распада белковых молекул молекулярной массой менее 30 кДа, при этом в сыворотке крови достоверно увеличивается содержание молекул средней массы по отношению к интактным животным.

4. Локальное отрицательное давление (разряжение 2 кПа), применяемое в области брюшной полости у крыс после отравления фосфаколом и у кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность, способствует достоверному уменьшению в периферической крови процентной доли эхиноцитов и концентрации молекул средней массы. Этот эффект наблюдается в течение суток после проведения абдоминальной декомпрессии крысам, отравленным фосфаколом.

5. Процентная доля эхиноцитов в паренхиме селезёнки и печени крыс, отравленных фосфаколом, после проведения абдоминальной декомпрессии достоверно возрастает по сравнению с контрольными образцами. Через сутки после проведения сеансов абдоминальной декомпрессии процентная доля эхиноцитов в паренхиме селезёнки и печени начинает снижаться, при этом их содержание в периферической крови увеличивается.

6. При воздействии итйо на кровь здоровых кошек надосадочной жидкости (неочищенной фракции средних молекул), полученной из сыворотки крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью, и содержащей молекулы средней массы в повышенной концентрации, процентная доля эхиноцитов в мазках крови достоверно увеличивается.

7. Между процентной долей эхиноцитов и содержанием молекул средней массы в сыворотке крови после отравления крыс фосфаколом и сеансов абдоминальной декомпрессии существует достоверная сильная положительная корреляция.

Практические предложения

Материалы диссертации рекомендуется использовать:

• Для дальнейшей оценки тяжести патологического состояния в клинической практике, учитывая изменения уровня молекул средней массы и эхиноцитоз

• Для дальнейшего более подробного изучения влияния различных токсинов на систему крови, в том числе на рельеф поверхности эритроцитов

• При дальнейшей разработке и усовершенствовании аппаратуры для локальной абдоминальной декомпрессии научно-промышленной компанией ООО «Фирма АКЦ»

• В курсе физиологии, патологической физиологии и клинической фармакологии в высших учебных заведениях

Полученные в ходе диссертационного исследования результаты реализованы ООО «Фирма АКЦ» в ходе разработки и усовершенствования комплекта изделий абдоминальной декомпрессии КАД-01-АКЦ, что подтверждается представленным актом реализации научных результатов.Полученные данные представляют научный интерес для ФГУН Институт токсикологии; ФГОУ ВПО Санкт-Петербургская Государственная Академия Ветеринарной Медицины; ФГОУ ВПО "Военно-Медицинская Академия имени».

Список опубликопаппых работ по теме диссертации

Статьи в журналах, соответствующих перечню ВАК РФ:

1. Скопичев В.Г., Смирнова О.О. Изменение морфологических и биохимических показателей крови при детоксикации с применением локальной декомпрессии // Ветеринарная практика. - № 3 (46). - 2009. - С. 35-39.

2. Смирнова О.О. Изменение морфологических и биохимических показателей эритроцитов при интоксикации /Мевдународный вестник ветеринарии. - 2010, №1. - С. 48-51.

3. Скопичев В.Г., Смирнова О.О. Изменение уровня молекул средней массы и эхиноцитоз при эндо- и экзо- генных интоксикациях. // Морфология. - 2010, т. 137, вып. №3,-С. 31-35.

Публикации в других изданиях:

1. Смирнова О.О. Острый экзотоксический шок /'/ Мат. 61-ой науч. конф. молодых учёных и студентов СПбГАВМ. - СПб, изд. СПбГАВМ, 2007. - С. 96 - 98.

2. Смирнова О.О. Изменение уровня молекул средних масс в крови животных при интоксикациях различной этиологии // Мат. 62-ой юбилейной науч. конф. молодых учёных и студентов СПбГАВМ - СПб: изд. СПбГАВМ, 2008. - С. 104 -106.

3. Смирнова О.О., Жичкина Л.В. Молекулы средней массы в плазме крови как маркер эндотоксикоза // Мат. междунар. науч. конф. профессорско-преподавательского состава, науч. сотрудников и аспирантов СПбГАВМ. - СПб, изд. СПбГАВМ,2009.-С. 95 -97.

4. Смирнова О.О. Молекулы средней массы в плазме крови при отравлении и детоксикации // Химия и жизнь: сб. тезисов и докладов региональной научно-практической конференции / НГАУ. - Новосибирск, 2009. - С. 136.

5. Смирнова О.О. Изменение формы эритроцитов при интоксикации // Мат. всеросс. съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии». - СПб, 2009. - С. 78 - 79.

6. Смирнова О.О., Скопичев В.Г. Эхиноцитоз нри интоксикациях различной степени/Мпновационный потенциал молодых учёных в развитии АПК Сибири: мат. 7 межрегион, конф. молодых учёных и специалистов аграрных вузов Сибирского федерального округа. - Новосибирск, 2009. - С. 182 - 184.

7. Смирнова О.О., Скопичев В.Г. Диагностическое значение эхиноцитоза при эндогенных и экзогенных интоксикациях // Современные проблемы и методы экологической физиологии и патологии млекопитающих, введённых в зоокультуру: мат. междунар. симпозиума. - Петрозаводск,2009. - С. 222 - 226.

8. Скопичев В.Г., Смирнова О.О. Изменение уровня молекул средней массы в сыворотке крови животных при почечной недостаточности. // Научная жизнь. - №6. -2009.-С. 11 -13.

9. Смирнова О.О. Влияние локальной абдоминальной декомпрессии на процентное содержание эхиноцитов в крови животных при интоксикациях // Мат. междунар. науч. конфср. профессорско - преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПбГАВМ. - СПб, Изд. СПбГАВМ, 2010. - С. 76 - 78.

10. Смирнова О.О. Изменение формы эритроцитов под влиянием цитохолазина В. // Материалы 64-й научной конференции молодых учёных и студентов СПбГАВМ. -СПб: изд. СПбГАВМ, 2010. - С. 82 - 83.

11.Скопичев В.Г., Жичкина Л.В., Смирнова О.О. Молекулы средней массы как критерий диагностики патологических состояний. Учебно-методическое пособие для ветеринарных врачей. - СПб: «Анонс», 2010. - 30 с.

Сдано в набор 20.10.11 г. Подписано к печати 20.10.11 г.

Формат бумаги 60x90 Vie Объем 1 7<t .п.л.

Тип. ВАТТ

2011 г.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Смирнова, Ольга Олеговна

Введение.

1. Обзор литературы.

1. 1. Структура цитоскелета эритроцитов.

1. 2. Влияние фосфорорганических ингибиторов ацетилхолин-эстеразы на цитоскелет эритроцитов.

1. 3. Эндогенные токсины - молекулы средней массы.

1. 4. Физиологические аспекты микроциркуляции.

1.4. 1. Деформируемость эритроцитов.

1. 4. 2. Факторы, влияющие на деформируемость эритроцитов.

1. 4. 3. Участие эритроцитов в гемореологических нарушениях.

1. 4. 4. Эхиноциты.

1. 4. 5. Эхиноцитоз и микроциркуляция.

1. 5. Физиологический метод детоксикации - абдоминальная декомпрессия.

1. 5. 1. Что такое локальное отрицательное давление.

1. 5. 2. Механизм действия локального отрицательного давления.

Резюме.

2. Материалы и методики исследований.

2. 1. Жидкостно-гелевая хроматография.

2. 2. Скрининговый метод определения уровня средних молекул.

2. 3. Подсчёт процентной доли эхиноцитов.

2. 4. Сканирующая электронная микроскопия.

2. 5. Абдоминальная декомпрессия.

2. 6. Вычисление ошибки средней арифметической.

2. 7. Вычисление коэффициента корреляции на малых выборках.

2. 8. Оценка достоверности отличий.

3. Результаты исследования.

3. 1. Изменение рельефа поверхности эритроцитов крови крыс под воздействием фосфорорганических соединений.

3. 1. 1. Деформация эритроцитов при отравлении крыс фосфаколом.71 3. 1.2. Деформация эритроцитов при отравлении крыс карбофосом.

3. 2. Изменения рельефа поверхности эритроцитов крови кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность.

3. 3. Изменения формы эритроцитов при отравлении фосфаколом и детоксикации с применением абдоминальной декомпрессии.

3. 4. Изменения формы эритроцитов при хронической почечной недостаточности и детоксикации с применением абдоминальной декомпрессии.

3. 5. Определение способности молекул средней массы непосредственно оказывать влияние на деформацию эритроцитов.

Обсуждение.

Выводы.

Практические предложения.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменение рельефа поверхности эритроцитов под воздействием некоторых токсикантов"

Актуальность темы

При изучении биологической активности химических веществ особое значение приобретают сведения об их влиянии на систему крови. Благодаря своей реактивности, кровь играет основополагающую роль в резистентности и развитии адаптации при действии на организм как различных внешних раздражителей, так и при нарушениях внутренней среды организма (Горизонтов, 1981; Фетисов и др., 1982). Кровь отвечает количественными и качественными изменениями своего состава на любые экзогенные и эндогенные воздействия в целях поддержания гомеостаза (Баренбойм, Маленков, 1986; Новицкий и др., 2008). В связи с этим всестороннее исследование количественного состава крови и морфологии форменных элементов являются необходимыми компонентом изучения воздействия различных токсинов на организм.

В норме в периферической крови большинство эритроцитов представлено дискоцитами (нормоцитами). Не только гематологические заболевания приводят к изменению формы эритроцитов. Эритроциты вовлекаются в патологический процесс и претерпевают серьезные изменения структуры и функции при болезнях разного генеза: злокачественных новообразованиях, воспалительных заболеваниях, нарушениях обмена веществ, заболеваниях сердечно-сосудистой системы, инфекционной патологии, сахарном диабете и др. Характер изменения формы эритроцитов может иметь диагностическое значение и нести дополнительную информацию наряду с данными об их количестве, цветовом показателе крови и концентрации гемоглобина.

Эритроциты выполняют важные для организма функции: дыхательную, транспортную, буферную. В связи с этим эритроциты должны одновременно обеспечивать свой внутриклеточный метаболизм, а также поддерживать функциональную пригодность гемоглобина, функции и сохранность внутриклеточных элементов (Мальцева, Мальцев, 1997; Новицкий и др., 2004; Карчинская, 2008; Новицкий и др., 2008; Рязанцева, Новицкий, 2008).

В условиях непосредственного контакта в периферическом русле химические вещества могут оказывать различное влияние на биохимические системы, ответственные за сохранение целостности мембран эритроцитов, при этом усиливая или ослабляя их генетически детерминированную резистентность. Модель биологической мембраны эритроцита можно использовать для изучения патологических процессов, протекающих в организме. Особую значимость при рассмотрении вопросов обеспечения механических свойств мембраны и эритроцита в целом играют представления об эритроцитарном цитоскелете.

При многих патологиях эритроциты превращаются в эхиноциты (за счёт повреждения цитоскелета). От структурной организации мембран красных кровяных клеток во многом зависят их агрегационная активность и деформируемость, являющиеся важнейшими компонентами в микроциркуляции. Вследствие деформации и агрегации эритроцитов нарушаются микроциркуляция, реологические свойства крови, в результате развивается вторичная тканевая гипоксия и функциональная недостаточность жизненно важных органов (Полещук и др., 2008; КлкисЫ е1 а1., 1994; уап-веШег е1 а1., 1996; РагЛавагаЙи, Ырошзку, 1999).

Ранее было установлено так называемое «дистантное действие» ацетилхолина, вызывающее деформацию эндотелиоцитов и эритроцитов с образованием эхиноцитов (Прозоровский и др., 1995; Прозоровский и др., 1997; Сторожок и др., 1997; Скопичев, Мошкова, 2000; Скопичев, Эйсымонт, 2003; Жичкина, Карпенко, 2004; Скопичев и др. 2006; Панченкова, 2009; МаБиёае! а1., 1995).

Не исключено и влияние на структуру эритроцитов таких эндотоксинов, как молекулы средней массы. Наш интерес к исследованию молекул средней массы определяется прежде всего тем, что они получили известность как важные универсальные маркеры интоксикации, а также сами являются токсикантами. Основная часть средних молекул представлена полипептидами с молекулярной массой 300—5000 Да, в связи с чем их нередко именуют среднемолекулярными пептидами. Эта фракция включает в себя гормоны, нейропептиды, медиаторы иммунного ответа и многие другие продукты белкового обмена, в целом определяющие высокую биологическую активность среднемолекулярных пептидов (Владыка и др., 1987; Парфенова и др., 1987; Скопичев, Жичкина, 2010). В работе предположена и подтверждена возможность непосредственного влияния молекул средней массы на процесс деформации эритроцитов.

Эхиноцитоз и накопление продуктов гидролиза белка в виде молекул средней массы можно рассматривать как универсальные биохимические и морфологические изменения в составе крови при эндо- и экзо- генных интоксикациях. Немаловажно, что эти маркеры не только являются последствием действия токсинов, но и сами порождают цепи патологических реакций. Учитывая этот факт, актуальным становится вопрос поиска оптимальных методов и средств, способных осуществлять общую детоксикацию организма и, в том числе, устранять эхиноцитоз и действие биологически активных молекул средней массы.

Локальная декомпрессия - это новое направление в ветеринарной физиотерапии, осуществляемое путем воздействия пневмоимпульсами отрицательного избыточного давления на локальные зоны тела. Механизм лечебного воздействия абдоминальной декомпрессии связан с приливом крови к органам брюшной полости во время разрежения, рефлекторным снижением тонуса периферических сосудов, уменьшением внутрибрюшного давления, улучшением циркуляции крови и ее реологических свойств (Длигач, Иоффе, 1982; Аванесов, 2001; Скопичев и др., 2003; 2006; 2007; Скопичев, Жичкина, 2010). Новым методом детоксикации в ветеринарной медицине является использование абдоминальной декомпрессии, что способствует более быстрому очищению организма от токсинов различного происхождения.

Таким образом, актуальность темы диссертации определятся рассмотрением вопросов мало изученной проблемы деформации эритроцитов при интоксикациях различного генеза, а также исследованием нового направления ветеринарной физиотерапии - детоксикации с использованием абдоминальной декомпрессии. Подобные работы необходимы в ходе разработке диагностических и лечебных мероприятий при интоксикациях различной этиологии.

Цели и задачи исследования

Основной целью исследования явилось определение изменений рельефа поверхности эритроцитов в ответ на действие фосфорорганических ингибиторов ацетилхолинэстеразы, молекул средней массы, при эндогенных интоксикациях на примере хронической почечной недостаточности и при детоксикации с использованием абдоминальной декомпрессии. В качестве универсальных маркеров токсических состояний проанализированы изменения формы эритроцитов, а также содержание молекул средней массы в сыворотке крови.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Определить процентную долю эхиноцитов, содержание молекул средней массы и молекулярно-массовое распределение веществ пептидной природы в крови крыс после отравления фосфорорганическими соединениями: фосфаколом и карбофосом

2. Изучить методом сканирующей электронной микроскопии изменения рельефа поверхности эритроцитов в результате повреждающего действия фосфорорганических ингибиторов ацетилхолинэстеразы (фосфакола и карбофоса)

3. Определить процентную долю эхиноцитов, содержание молекул средней массы и молекулярно-массовое распределение веществ пептидной природы в крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью

4. Определить процентную долю эхиноцитов, содержание молекул средней массы в крови крыс при отравлении фосфорорганическими ингибиторами ацетилхолинэстеразы и кошек с диагнозом хроническая почечная недостаточность после детоксикации с применением абдоминальной декомпрессии

6. Установить in vitro изменения формы эритроцитов при воздействии на кровь здоровых кошек надосадочной жидкости, полученной из сыворотки крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью, и содержащей молекулы средней массы в повышенной концентрации

Научная новизна работы

В диссертационном исследовании зарегистрированы изменения рельефа поверхности эритроцитов с образованием эхиноцитов под влиянием фосфорорганических ингибиторов ацетилхолинэстеразы (карбофоса, фосфакола) in vivo, при эндогенных интоксикациях на примере хронической почечной недостаточности кошек in vivo, а также при воздействии неочищенной фракции молекул средней массы in vitro.

На основании экспериментального материала и анализа литературных данных предположена и оценена способность молекул средней массы оказывать непосредственное влияние на деформацию нормоцитов с образованием эхиноцитов in vitro. Из сыворотки крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью, выделили среднемолекулярные пептиды (центрифугат, представляющий собой неочищенную фракцию средних молекул). При воздействии in vitro на стабилизированную кровь клинически здоровых кошек центрифугата с повышенной концентрацией молекул средней массы впервые было обнаружено достоверное увеличение процентного содержания эхиноцитов в мазках крови.

Выявлено, что применение сеансов абдоминальной декомпрессии (разновидности локального отрицательного давления) при лечении эндогенных и экзогенных интоксикаций способствует достоверному снижению содержания в крови животных следующих универсальных маркеров интоксикации: уровня молекул средней массы и процентной доли эхиноцитов. Следовательно, подтверждена эффективность этого метода детоксикации (на примере хронической почечной недостаточности кошек и отравления фосфорорганическими соединениями крыс).

Установлена продолжительность сохранения положительного эффекта снижения процентного содержания эхиноцитов и уровня молекул средней массы после проведения сеансов абдоминальной декомпрессии: по данным проведённых исследований она составляет 1 сутки. Ранее в литературе имелись лишь отрывочные сведения по данному вопросу.

Впервые показано, что воздействие сеансов абдоминальной декомпрессии после отравления крыс фосфаколом приводит к увеличению процентной доли эхиноцитов в мазках - отпечатках со срезов паренхимы селезёнки и печени. Соответственно, данный метод детоксикации способствует «утилизации» деформированных эритроцитов.

Впервые получены данные о наличии достоверной сильной положительной корреляции между процентной долей эхиноцитов и содержанием молекул средней массы в крови после отравления крыс фосфаколом и проведения сеансов абдоминальной декомпрессии.

Практическое значение работы

Деформацию эритроцитов с образованием эхиноцитов, наряду с повышением содержания молекул средней массы в сыворотке крови, можно отнести к универсальным маркерам интоксикации. Рассмотренные в диссертационной работе маркеры токсических состояний могут быть использованы в клинической практике с целью усовершенствования диагностических мероприятий, для оценки тяжести патологического состояния, а также для контроля эффективности проводимого лечения.

Теоретическая ценность полученных результатов определяется возможностью дальнейшего более подробного изучения влияния различных токсинов на систему крови и, в первую очередь, на рельеф поверхности эритроцитов. Выявлена способность фракции, содержащей молекул средней массы в повышенной концентрации, вызывать деформацию эритроцитов с образованием эхиноцитов. Этот факт может быть использован для последующего изучения изменения формы эритроцитов в ответ на действие различных повреждающих агентов, в том числе токсического характера.

Подтверждено детоксикационное действие абдоминальной декомпрессии (разновидности локального отрицательного давления). Следовательно, при лечении и профилактике интоксикаций различной этиологии, важная роль должна отводиться неспецифической терапии с использованием локального отрицательного давления в области брюшной полости.

Внедрение использования отрицательного давления на локальные зоны тела животных является перспективным направлением в развитии ветеринарной медицины. Использование этого метода детоксикации актуально для усовершенствования комплексной профилактики и лечения ряда заболеваний, сопровождающихся развитием интоксикационного синдрома.

Материалы диссертации используются:

• При разработке и усовершенствовании аппаратуры для проведения локальной абдоминальной декомпрессии научно-промышленной компанией ООО «Фирма АКЦ». Полученные в ходе диссертационного исследования результаты реализованы ООО «Фирма АКЦ» в ходе разработки и усовершенствования комплекта изделий для проведения абдоминальной декомпрессии КАД-01-АКЦ, что подтверждается представленным актом реализации научных результатов

• При лечении болезней, сопровождающихся развитием интоксикационного синдрома, с использованием абдоминальной декомпрессии в составе комплексной терапии

• При проведении лекционных и лабораторно-практических занятий со студентами и ветеринарными врачами Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины

Положения, выносимые на защиту

1. Под влиянием таких веществ, как фосфорорганические ингибиторы ацетилхолинэстеразы и молекулы средней массы, а также при хронической почечной недостаточности, эритроциты деформируются с образованием эхиноцитов.

3. Путём регистрации изменения рельефа поверхности эритроцитов (снижения процентной доли эхиноцитов) и снижения уровня молекул средней массы в сыворотке крови обосновано детоксикационное действие абдоминальной декомпрессии.

Апробация работы

Основные материалы диссертации были доложены и обсуждены на научных конференциях профессорско - преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 2009, 2010 гг.), на 61 - ой, 62 - ой, 64 - ой научных конференциях молодых учёных и студентов Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (Санкт-Петербург, 2007, 2008, 2010 гг.), на всероссийском съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины, 2009 г.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, из них:

• 3 статьи в журналах, соответствующих перечню ВАК РФ

• 8 статей в материалах конференций

• 1 тезисы научно-практической конференции

• 1 учебно-методическое пособие для ветеринарных врачей в 1 статья в журнале.

Объём и структура диссертации

Диссертация изложена на 129 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы. Работа содержит 15 таблиц, 1 диаграмму и 18 рисунков. Список литературы включает 198 наименований, в том числе 70 -иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Смирнова, Ольга Олеговна

106 выводы

1. После отравления крыс фосфаколом и карбофосом процентная доля эхиноцитов в периферической крови достоверно увеличивается по отношению к интактным крысам. В сыворотке крови крыс после введения фосфорорганических соединений содержатся продукты распада белковых молекул молекулярной массой менее 30 кДа, при этом содержание молекул средней массы в сыворотке крови достоверно возрастает по отношению к интактным крысам.

6. При воздействии in vitro на кровь здоровых кошек надосадочной жидкости (неочищенной фракции средних молекул), полученной из сыворотки крови кошек, больных хронической почечной недостаточностью, и содержащей молекулы средней массы в повышенной концентрации, процентная доля эхиноцитов в мазках крови достоверно увеличивается.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материалы диссертации рекомендуется использовать:

• Для дальнейшей оценки тяжести патологического состояния в клинической практике, учитывая изменения уровня молекул средней массы и эхиноцитоз (универсальные маркеры интоксикации)

• Основные положения диссертации рекомендуется использовать в курсе физиологии, патологической физиологии и клинической фармакологии в высших учебных заведениях

Полученные данные представляют научный интерес для ФГУН Институт токсикологии; ФГОУ ВПО Санкт-Петербургская Государственная Академия Ветеринарной Медицины; ФГОУ ВПО "Военно-Медицинская Академия имени С. М. Кирова".

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Смирнова, Ольга Олеговна, Санкт-Петербург

1. Аванесов В. У. Применение локального отрицательного давления в подготовке спортсменов. М.: СпортАкадемПресс, 2001. - 84 с.

2. Агаджанян Н. А., Чижов А. Я. Гипоксические, гипокапнические и гиперкапнические состояния. М.: Медицина, 2003. - 96 с.

3. Антонов В. Ф. Структура биомембран. Липидные поры. // Соросовский образовательный журнал. 1998. - № 10 (35). - С. 10 - 17.

4. Баренбойм Т. М., Маленков А. Г. Биологически активные вещества. Новые принципы поиска. М.: Наука, 1986. - 363 с.

5. Бархина Т. Г., Никитина Г. М, Бархина М. М., Черных А. С. Патология мембран форменных элементов крови при заболеваниях в экспериментах. // Успехи современного естествознания. 2006. - № 6. - С. 64 - 66.

6. Беляков Н. А., Малахова М. Я. Критерии и диагностика эндогенной интоксикации. // Эндогенные интоксикации: тезисы докладов международного симпозиума. СПб, 1994. - С. 60 - 62.

7. Береклоу С. Регулирование эндотелием растяжимости артерий и хроническая сердечная недостаточность. // Русский Медицинский Журнал. -1996.-Т. 3,№6.-С. 124.

8. Билич Г. Л., Новикова Б. М. Влияние оротовой кислоты на процесс регенерации после резекции желудка. // Вестник хирургии. 1978. -№ 3. - С. 29 - 32.

9. Васильев В. С., Комар В. И. Критерии оценки тяжести болезни и выздоровления при скарлатине. // Здравоохранение Белоруссии. 1983. - № 2. -С. 38-40.

10. Васильев Ю. М. Клетка как архитектурное чудо. Ч. 1. Клетка единая, но делимая. Живые нити. // Соросовский Образовательный Журнал. -1996. -№ 2.-С. 36- 43.

11. Васильев Ю. М. Клетка как архитектурное чудо. Ч. 3. Клетка единая, но делимая. // Соросовский Образовательный Журнал. 1999. - № 8. -С. 18-23.

12. Владыка А. С., Левицкий Э. Р., Поддубная Л. П., Габриэлян Н. И. «Средние молекулы» и проблема эндогенной интоксикации при критических состояниях различной этиологии. // Анестезиология и реаниматология. -1987. -№ 1.-С. 37-41.

13. Гительзон И. И., Терсков И. А. Состав красной крови в норме и патологии. Томск: Издательство Томского университета, 1960. - 200 с.

14. Гончаренко М. С., Андрух Г. А., Рязанцев В. В. Белковый спектр эритроцитарных мембран в норме и при псориазе. // Вестник дерматологии и венерологии. 1989. - № 3. - С. 4 - 7.

15. Гончарова Е. И., Пинаев Г. П. Белки цитоскелета эритроцитов. // Цитология. 1988.-Т. 30, № 1. - С. 5 - 18.

16. Горизонтов П. Д. Система крови как основа резистентности и адаптации организма. // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. М.: Медицина, 1981. - № 2. - С. 323 - 325.

17. Горизонтов П. Д., Белоусова О. И., Федотова М. И. Стресс и система крови. М.: Медицина, 1983. - 240 с.

18. Гостева 3. А., Нешель Е. В., Успенская В. Г. Пневмофиброзы и эмфизема легких. — Л.: «Медицина», 1965. 207 с.

19. Громов П. С., Захаров С. Ф., Шишин С. С., Ильинский Р.В. Двумерная карта мембранных белков эритроцитов человека. // Биохимия. -1988.-т. 53, вып. 8.-С. 1316- 1326.

20. Гулевский А. К. Влияние низкотемпературного воздействия на проницаемость мембран эритроцитов, реконструированных в средах разного ионного состава. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1981.-Т. 91, №5.-С. 551 552.

21. Гущин А. Г., Муравьев А. В., Шаечкина И. К. Оценка комплекса гемореологических параметров при эритроцитозе. // Физиология человека. -2000.-Т. 26, №2.-С. 111-114.

22. Длигач Д. Д., Иоффе JL А. Локальная декомпрессия и работоспособность. Л.: Наука, 1982. - 88 с.

23. Дроздова М. В. Заболевания крови. Киев: Свет. Звезда, 2009. - 632 с.

24. Ермоленко В. М., Иващенко М. А. Уремия и эритропоэтин. -Москва: Медицина, 2000. 104 с.

25. Жихарев С. С., Минеев В. Н., Яблонская В. Н. и др. Атопическая бронхиальная астма как патология мембранно-рецепторного комплекса. // Вестник АМН СССР. 1989. - № 2. - С. 9 - 14.

26. Жичкина Л. В. Применение локальной декомпрессии и энтеросорбентов с целью усиления детоксикационной функции организма. // Материалы 58-ой научной конференции молодых учёных и студентов СПбГАВМ. СПб: издательство СПбГАВМ, 2004. - С. 35 - 36.

27. Жичкина Л. В. Физиологическое обоснование методов детоксикации: Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук: 03. 00. 13.; 14. 00. 25. / Л. В. Жичкина, Санкт

28. Петербургская государственная академия ветеринарной медицины (Санкт-Петербург). СПб: издательство СПбГАВМ, 2006. - 18 с.

29. Жичкина JI. В., Скопичев В. Г. Физиологическое обоснование детоксикационной терапии. // Международный вестник ветеринарии. СПб., 2004. -№ 1.-С. 112- 116.

30. Зверко В. Д., Ракуть В. С., Зинчук В. В. Патогенетическое значение деформируемости эритроцитов в механизмах развития гестоза. // Медицинские новости. 1999. -№ 7.-С.51-52.

31. Зинчук В. В. Деформируемость эритроцитов: физиологические аспекты. // Успехи физиологических наук. 2001. - Т. 32, № 3. - С. 66 - 78.

32. Зинчук В. В., Борисюк М. В. Роль кислородсвязывающих свойств крови в поддержании прооксидантно антиоксидантного равновесия организма. // Успехи физиологических наук. - 1999. - Т. 30, № 3. - С. 38 - 48.

33. Иоффе JI. А., Смирнова JL А. Динамика объема циркулирующей крови при локальной декомпрессии. // Теория и практика физ. культуры. -1977.-№ 7.-С. 27-31.

34. Иржак J1. И. Состав и функции крови. // Соросовский образовательный журнал. 2001. - № 2. - С. 11 - 19.

35. Каверина И. Н., Васильев Ю. М. Влияние деполимеризации и дезинтеграции системы микротрубочек на цитоскелет ^трансформированных и трансформированных клеток. // Цитология. 1991. -Т. 33, № 12.-С. 49 - 53.

36. Казеннов А. М., Маслова М. Н. Структурно-биохимические свойства мембраны безъядерных эритроцитов. // Физиологический журнал СССР им. И.М.Сеченова. 1987. - Т. 73, № 12. - С. 1587-1594.

37. Камышников В. С. Клинико биохимическая лабораторная диагностика: Справочник: в 2 т. Т. 1. - 2-е изд. - Мн.: Интерпрессервис, 2003. - 495 с.

38. Карякина Е. В., Белова С. В. Молекулы средней массы как интегральный показатель метаболических нарушений (обзор литературы). // Клиническая лабораторная диагностика. 2004. - № 3. - С. 4 - 8.

39. Катюхин Л. Н. Реологические свойства эритроцитов. Современные методы исследования. // Российский физиологический журнал им. И. М. Сеченова. 1995. - Т 81, № 6. - С. 122 - 129.

40. Киселева Р. Е., Альба Н. В., Кузьмичева Л. В., Альба Д. Л. Биохимические аспекты эндотоксикоза. Саранск: Издательство Мордовского ун-та, 2002. - 103 с.

41. Конев С. В. Структурная лабильность топологических мембран и регуляторные процессы. Минск: Наука и техника, 1987. - 240 с.

42. Конопля А. И. Взаимосвязь структуры и функции эритроцитов с иммунным гомеостазом. Курск: КГМУ, 2008. - 40 с.

43. Коржуев П. А. Проблема оксигенации гемоглобина. // Успехи физиологических наук. 1973. - Т. 4, № 3. - С. 69 - 112.

44. Коркушко О. В., Лишневская В. Ю. Дужак Г. В. Реологические свойства крови при старении и факторы, их определяющие. // Кровообращение и гемостаз. 2007. - № 1. - С. 5 - 15.

45. Крепе Е. М. Липиды клеточных мембран. Адаптационная функция липидов. Л.: Наука, 1981. - 339 с.

46. Кривой И. И. Холинергическая модуляция нервно-мышечной передачи. //Автореферат диссертациина соискание учёной степени доктора биологических наук. СПб, 1998. - 32 с.

47. Кривой И. И., Кулешов В. И., Матюшкин Д. П. Нервно-мышечный синапс и антихолинэстеразные вещества. Л.: ЛГУ, 1987. - 240 с.

48. Кучеренко В. 3. Применение методов статистического анализа для изучения общественного здоровья и здравоохранения. М.: "Гэотар-Медиа", 2007. - 256 с.

49. Лазарева Г. А., Бровкина И. Л., Лазарев А. И. и др. Иммунометаболические эффекты регуляторов энергетического обмена при нарушении гомеостаза. Курск: Изд-во КГМУ, 2006. - 329 с.

50. Лакин Г. Ф. Биометрия: Учебное пособие для биологических спец. вузов 4-е изд., перераб. и доп. - М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

51. Левтов В. А., Регирер С. А., Шадрина Н. X. Реология крови. М.: Медицина, 1982.-272 с.

52. Леонтьева Н. В., Белоцерковский М. В. Синдром эндогенной интоксикации. СПб.: Изд-во СПб ГМУ. - 1998. - 48 с.

53. Лошадкин Н. А., Курляндский Б. А., Беженарь Г. В., Дарьина Л. В. Военная токсикология. / Под ред. Курляндского Б. А. М.: Медицина, 2006. - 208 с.

54. Лукьянова Л. Д. Гипоксия при патологиях. Молекулярные механизмы и принципы коррекции. // Перфторорганические соединения в биологии и медицине: Сб. науч. тр. Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 2001. - С. 56 - 69.

55. Лукьянова Л. Д. Современные проблемы гипоксии. // Вестник РАМН. 2000. - № 9. - С. 3 - 12.

56. Мальцева Л. А., Мальцев И. А. Калипсоловый синдром эритронопатии у детей. // Актуальные вопросы медицины и биологии: Сб. статей. — Днепропетровск, Днепропетровская государственная медицинская академия. 1997. - Вып. 9. - С. 241.

57. Машковский М. Д. Лекарственные средства. М.: Новая волна, 2002.-208 с.

58. Меерсон Ф. 3. Защитные эффекты адаптации и некоторые перспективы развития адаптационной медицины. // Успехи физиологических наук. 1991.-Т. 22.-С. 82 - 89.

59. Мейер Д., Харви Д. Ветеринарная лабораторная медицина. М.: Софион, 2007. - 456 с.

60. Минеев В. Н. Патогенетические и клинические аспекты нарушений мембранно-рецепторного комплекса эритроцитов при бронхиальной астме: Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук. СПб, 1993. - 32 с.

61. Минеев В. Н., Жихарев С. С., Карпов О. И., Яблонская В. Н. Особенности агрегации эритроцитов при различных формах бронхиальной астмы. // Врачебное Дело. 1989. - № 5. - С. 92 - 94.

62. Моисеева О. И. Транспорт кислорода кровью (роль эритроцитов). // Физиологический журнал СССР им И. М.Сеченова. 1986. - Т. 72, № 1. -С. 93 - 103.

63. Николайчик В. В., Федулов А. Г., Бычко Г. Н. и др. Влияние пептидов на осмотическую устойчивость эритроцитов. // Труды III Всесоюзной межуниверситетской конференции физико-химической биологии. Тбилиси, 1982. - № 2. - С. 364 - 365.

64. Ниманд Ханс Г., Сутер Петер. Ф. Болезни собак: Практическое руководство для ветеринарных врачей. / Пер. с нем. 2-е изд. - М.: Аквариум Принт, 2004.-816 с.

65. Новицкий В. В., Рязанцева Н. В., Степовая Е. А. и др. Теория и практика микроскопии эритроцита. Томск: Печатная мануфактура, 2008. -152 с.

66. Новицкий В. В., Рязанцева Н. В., Степовая Е. А. Физиология и патофизиология эритроцита. Томск: ТГУ, 2004. - 202 с.

67. Ольшанская А. Я., Одинокова В. А., Квитко Н. Н. Эритроциты в тканевом и иммунном гомеостазе. // Советская медицина. 1984. - № 11. - С. 43 - 48.

68. Осадчий П. В., Сигал В. Л. Изменение деформируемости эритроцитов в процессе хранения донорской крови. // Гематология и трансфузиология. 1987. - № 3. - С. 31 - 34.

69. Парфенова Г. А., Чернядыва И. Ф., Ситина В. К. Средние молекулы маркер эндогенной интоксикации. // Врачебное дело. - 1987. -№ 4. - С. 72 - 77.

70. Пирадов М. А., Левченко Н. И., Габриэлян Н. И. и др. Сравнительная оценка эффективности методов определения осмолярности и средних молекул в прогнозе течения инсультов. // Лабораторное дело. 1990. - № 5. - С. 10-12.

71. Полещук О. И., Авшалумов А. С., Марковский В. Б., Синицына Е. Н., Шилов А. М. Изменение реологических свойств крови у больных метаболическим синдромом. II Российский медицинский журнал. 2008. -Т.16,№4.-С. 35 - 39.

72. Приймак А. А., Борисов С. Е., Соловьева И. П. и др. Проблемы дифференциальной диагностики туберкулёза и других гранулёматозов. // Туберкулёз и экология. 1997. - № 3. - С. 1-3.

73. Приймак А. А., Ефимьевский В. П., Богородская Е. М., Свиридова С. А. Функциональная диагностика при саркоидозе органов дыхания. // Туберкулёз и экология. 1996. - № 3. - С. 12-14.

74. Прозоровский В. Б. Практическое пособие по ускоренному определению средних эффективных доз и концентраций биологически активных веществ. Байкальск: Издательство Общества духовной и психической литературы, 1994. - 46 с.

75. Прозоровский В. Б., Ливанов Г. А., Калмансон М. Л. Острые отравления фосфорорганическими соединениями. СПб.: издательство СПбМАПО, 1997.-22 с.

76. Прозоровский В. Б., Скопичев В. Г., Медведева С. В. Участие дистантного холинэргического механизма в реакции сосудистого русла на интоксикацию фосфорорганическими ингибиторами холинэстеразы. // Морфология. 2000.- Т. 118, № 4,- С. 66 - 69.

77. Прозоровский В. Б., Скопичев В. Г., Петров В. В., Дубровник М. С. Структурные изменения эритроцитов крыс при отравлении фосфаколом. //

78. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. М.: Медицина, 1995. -Том 119.-С. 517 - 520.

79. Прокопенко Л. Г., Бровкина И. Л., Быстрова Н. А . и др. Эритроциты и регуляция иммунного гомеостаза (материалы открытия). -Курск: Изд-во КГМУ, 2006. 132 с.

80. Прокопенко Л. Г., Лазарев А. И., Бровкина И. Л. и др. Эритроцитзависимые эффекты лекарственных и физиотерапевтических средств. Курск: КГМУ, 2008. - 336 с.

81. Резван С. Г., Стародубцева Н. А., Жданова О. А. и др. Структурные нарушения мембран эритроцитов крови больных различными формами нефропатий. // Сборник трудов II Российской конференции «Физика в биологии и медицине». Воронеж: ВГУ, 2001. - С. 543.

82. Ройтберг Г. Е. Метаболический синдром. М.: «МЕДпресс-информ», 2007. - 223 с.

83. Савицкий Н. Н. Некоторые методы исследования и функциональной оценки системы кровообращения. Л.: Медгиз: Ленинградское отделение, 1956. - 329 с.

84. Салтыков Б. Б., Пауков В. С. Диабетическая миикроангиопатия. -М.: Медицина, 2002. 240 с.

85. Селезнев С. А., Назаренко Г. И., Зайцев В. С. Клинические аспекты микрогемоциркуляции. Л.: Медицина, 1985. - 208 с.

86. Скопичев В. Г. Холинэстераза в эндотелии капилляров при воздействии фосфорорганических ингибиторов. // Актуальные проблемы ветеринарной медицины. Сборник научных трудов № 131. Санкт-Петербург: издательство СПбГАВМ, 1999. - С. 97 - 99.

87. Скопичев В. Г., Жичкина Л. В. Физиологические принципы детоксикации. СПБ.: фирма АКЦ, 2010. - 460 с.

88. Скопичев В. Г., Жичкина Л. В., Касумов М. К. Применение абдоминальной декомпрессии у животных. Практическое руководство для ветеринарных врачей. Санкт-Петербург: Издательство СПбГАВМ, 2007. - 36 с.

89. Скопичев В. Г., Жичкина Л. В., Фарафонтова В. С. Токсины, на выход! // Практик. СПб, 2006. - № 5. - С. 82 - 88.

90. Скопичев В. Г., Минаев В. Н., Лалаева Т. М. Поверхностная архитектоника эритроцитов и их цитоскелет в условиях модуляции адренореактивной системы при бронхиальной астме. // Международный конгресс ЫегаБШш 98, СПб. - 1998. - С. 1 - 2.

91. Скопичев В. Г., Прозоровский В. Б. Морфологические изменения эритроцитов мышей и крыс при воздействии фосфорорганическими ингибиторами холинэстеразы. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1993. - Т. 115, № 4. - С. 443 - 445.

92. Скопичев В. Г., Прозоровский В. Б. Участие дистантного холинергического механизма в реакциях сосудистого русла на интоксикацию фосфорорганическими ингибиторами холинэстераз. // Морфология. 2000.-№ 4. - С. 66 - 69.

93. Скопичев В. Г., Прозоровский В. Б., Ардабьева Т. В. и др. Структурные изменения эритроцитов как возможная причина низкойэффективности специфической терапии отравлений карбофосом. // Морфология. 1997. - Т. 116, № 6. - С. 60 - 64.

94. Скопичев В. Г., Прозоровский В. Б., Жичкина Л. В., Панченкова О. А Основные принципы детоксикации при воздействии фосфорорганических соединений (ФОС). // Международный вестник ветеринарии. 2006. - № 3 -4.-С. 28 -38.

95. Степовая Е. А., Новицкий В. В., Рязанцева Н. В. и др. Хронический бронхит: участие эритроцитов в патологическом процессе. // Клиническая медицина. 2004. - № 1. - С. 53 - 56.

96. Сторожок С. А., Санников А. Г., Белкин А. В. Зависимость стабильности деформабильности мембран эритроцитов от межмолекулярных взаимодействий белков цитоскелета. // Научный вестник ТГУ. 2000. - Т. 3. - С. 34 - 76.

97. Сторожок С. А., Санников А. Г., Захаров Ю. М.Молекулярная структура мембран эритроцитов и их механические свойства.- Тюмень: ТГУ, 1997.- 140 с.

98. Струков М. А. Кислородотранспортные системы при различных методах реанимации больных с тяжёлым экзотоксическим шоком. // Токсикологический вестник. 1999. - № 2. - С. 11- 16.

99. Терехова М. В., Олейникова А. И. В кн.: Некоторые вопросы анатомии и физиологии. Алма-Ата: 1980. - С. 6 - 13.

100. Тухватулин Р. Т. Адаптивные изменения обратимой агрегации эритроцитов: Автореферат диссертации доктора биологических наук. -Томск, 1996.-29 с.

101. Уилсон Д. Т. Молекулярная биология клетки. М.: Мир. -1994. - 319 с.

102. Фарафонтова А. С. Обоснование применения энтеросорбции и локальной декомпрессии для профилактики лучевых поражений: Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук. СПб, 2003. - 18 с.

103. Федосеев Г. Б. Механизмы обструкции бронхов. СПб: Медицинское информационное агентство, 1995. - 336 с.

104. Фетисов В.И., Устинов В.Н., Ежов В.В., Сокольский Г.А. Анализ признакового пространства для классификации 1,5-дизамещенных тетразолов. // Химико-фармацевтический журнал. 1982. - Т. 16, № 10. - С. 74 - 79.

105. Фомин Н. А. Физиология человека. М: Просвещение, 1995. - 19 с.

106. Чаленко В. В. Возможные причины повышения концентрации молекул средней массы при патологии. // Патологическая физиология. -1991. -№ 4. С. 13 - 14.

107. Чепоров С. В., Волокова Е. Д., Кислов Н. В., Маймистова А. А., Груглова Е. В. Анализ изменений деформируемости эритроцитов в норме и при патологии. // Регионарное кровообращение и микроциркуляция. 2008.-№ 4 (28). - С. 47 - 52.

108. Чиж И. М. Указания по военной токсикологии. М.: ГВКГ им. Н. Н. Бурденко, 2000. - 300 с.

109. Шахламов В. А. Капилляры. М.: Колос, 1971. - 234 с.

110. Шепилова Ж. И., Балякин С. О. Диагностическое значение определения средних молекул при некоторых деструктивных патологических процессах. // Лабораторное дело. 1984. - № 9. - С. 546 - 548.

111. Эмануэль В. Л., Карягина И. Ю., Эмануэль Ю. В., Ковальчук Ю. П. Лабораторная диагностика интоксикационного синдрома. СПб.: СПбГМУ. -2003 г. - 40 с.

112. Яворская В. А., Белоус А. М., Мохаммед А. Н. Исследование уровня молекул средней массы и процессов перекисного окисления липидов в крови больных с разными формами инсульта. // Журнал неврологии и психиатрии. 2000. - № 1.- С. 48 - 51.

113. Руденко С. В., Ши Л., Бондаренко В.А. Реакция эритроцитов на изменение электролитного состава среды. IV. Влияние органических анионов. // Бюф1зичний вюник. 2009. - Вип. 23 (2). - С. 59 - 68.

114. Adrill В., Fentem P., Finley R. Some effects on the blood vessels of the human forearm of local exposure to pressure below sub atmospherica. // Journal of Physiology. 1969. - V. 80. - P. 31.

115. Anderson J. W. Physiological and metabolic effects of dietary fiber. // Federation proceedings. 1985. - V. 44, № 14. - P. 2902 - 2906.

116. Asaba H. Accumulation and exertion of middle molecules. // Clinical Nephrology. 1983.-V. 19, №3.-P. 116- 123.

117. Asp N. G. Definition and analysis of dietary fider. // Journal of Clinical Investigation. 1987. - № 129. - P. 16 - 20.

118. Babb A., Farrell P., Uvelli D. et al. Hemodialyser evaluation by examination of solute molecular spectra. // Transactions American Society for Artificial Internal Organs. - 1972. - № 18. - P. 98 - 105.

119. Babb A., Popovich R., Christopher T. et al. The genesis of the square-metre-hour hypotesis. // Transactions American Society for Artificial Internal Organs. - 1971. -№ 17.-P. 81 -91.

120. Banerjee R. The diagnostic relevance of red cell rigidity / Banerjee R., Nageshwari K., Puniyani R. R. // Clinical Hemorheology and Microcirculation. -1998. Vol. 19, № 1. - P. 21-24.

121. Barnard E. A., Wicekowski J., Chiu T. H. Cholinergic receptor molecules and cholinesterase molecules at mause skeletal muscle junctions. // «Nature». 1971. - Vol. 234. - P. 207.

122. Bennett V., Gilligan D .M. The spectrin-based membrane skeleton and micronscale organization of the plasma membrane. // Annual review of cell biology, United States. 1993. - Vol. 9. - P. 27 - 66.

123. Bennett V., Healy J. Organizing the fluid membrane bilayer: Diseases linked to spectrin and ankyrin. // Trends in Molecular Medicine. 2008. - 14 (1). P.-28 -36.

124. Benz E. J. The erythrocyte membrane and cytoskeleton: structure, function and disorders. Philadelphia: W. B. Saunders Company. - 1994. - P. 257 - 292.

125. Betz T., Bakowsky U., Muller M.R. et al. Conformational change of membrane proteins leads to shape changes of red blood cells. // Bioelectrochemistry. 2007. - Vol. 70. - P. 122 - 126.

126. Borghi N., Brochard Wyart F. Tether extrusion from red blood cells: Integral proteins unbinding from cytoskeleton. // Biophysical Journal. - 2007. - № 93. - P. 1369- 1379.

127. Bunn H. F. Sickle hemoglobin and other hemoglobin mutants. The molecular basis of blood diseases. Philadelphia: W. B. Saunders Company. -1994.-P. 207-256.

128. Colman R. W., Hirsh J., Marder V., Salzman E. W. Hemostasis and thrombosis, basic principles and clinical practice. New York: Lippincott, 1982. - 986 p.

129. Cowin P. M., Burke B. Cytoskeletal-membrane interactions. // Current Opinion in Cell Biology Cell Biology. 1996. - Vol. 8. - P. 56 - 65.

130. Cohen C. M., Dotimas E., Korsgren C. Human erythrocyte membrane protein band 4.2 (pallidin).//Seminars in Hematology.-1993.-№30.-P. 119-137.

131. Daleke D. L. Regulation of phospholipid asymmetry in the erythrocyte membrane. // Current Opinion in Hematology.-2008. -№ 15.-P. 191-195.

132. Delaunay J. The molecular basis of hereditary red cell membrane disorders. // Blood Reviu. 2007. - № 21. - P. 1-20.

133. Driessen G. K., Haest C. W., Heidtmann H., Kamp D., Schmid-Schonbein H. Effect of reduced red cell "deformability" on flow velocity in capillaries of rat mesentery. // Pfl tigers Archiv European Journal of Physiology. -1980.-Vol. 388, №. l.-P. 75 -78.

134. Eloot S., Torremans A., De Smet R. et al. Kinetic behavior of urea is different from that of other water-soluble compounds: the case of the compounds. // Kidney International. 2005. - № 67. - P. 1566 - 1575.

135. Fagner P., Man N., Cueille G. et al. Improved separation and quantification of the "middle molecules" G4-2 in uremia. // Clinical Chemistry. -1983.-№29.-P. 703 -707.

136. Gartner L. P, Hiatt J. M. Color Textbook of Histology, 3th ed. -Philadelphia: W. B. Saunders. Comp, 2006. 592 p.

137. George C., Thao Chan M., Weill D. De la deformabilite erythrocytaire a 1'oxygenation tissulaire. // Medical act. 1983. - Vol. 10, № 3. - P. 100 - 103.

138. Glorieux G., Dhondt A., Jacobs P. et al. In vitro study of the potential role of guanidines in leucocyte function related atherogenesis and infection. // Kidney International. 2004. - № 65. - P. 2184 - 2192.

139. Heyns O. S. Abdominal decompression in the first stage of labour. // Journal of Obstetrics and Gynecology. 1959. - V. 66. - P. 220.

140. Ipsaro J. J., Huang L., Mondragon A. Structures of the spectrin-ankyrin interaction binding domains. // Blood. 2009. - № 113. - P. 5385 - 5393.

141. Jakobik V., Burns I., Decsi T. Fatty acid composition of erythrocyte membrane lipids in healthy subjects from birth to young adulthood. // European Journal of Pediatrics. -2009. №168/2. - P. 141 - 147.

142. Kaoui B., Biros G., Misbah C. Why Do Red Blood Cells Have Asymmetric Shapes Even in a Symmetric Flow? // Physical Review Letters. -2009. -№ 103. 188101.

143. Karlin A. The acetylcholine receptor in the electoplax. // Abstrs. 5th International Congress Pharmacology. S - Francisco: Bethesda. - 1972. - P. 3.

144. Kaushansky K., Lichtman M. A., Kipps T. J., Seligsohn U., Prchal J. T. et al. Williams Hematology, Eighth Edition. Professional & Medical ,2010. -2460 p.

145. Kikuchi Y., Da Q. W., FujinoT. Variation in red blood cell deformabilitty and possible consequences for oxygen transport to tissue. // Microvascular Research. 1994. - Vol. 47, № 2. - P. 222 - 231.

146. Kodippili G. C., Spector J., Sullivan C., Kuypers F. A., Labotka R., Gallagher P. G. Imaging of the diffusion of single band 3 molecules on normal and mutant erythrocytes. // Blood, 2009. № 113. - P. 6237 - 6245.

147. Li J., Lykotrafitis G., Dao M., Suresh S. Cytoskeletal dynamics of human erythrocyte. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2007. - № 104. - P. 4937 - 4942.

148. Linderkamp O., Ruef P., Brenner B., Gulbins E., Lang F. Impaired deformability of erythrocytes and neutrophils in children with newly diagnosed insulin-dependent diabetes mellitus. // Diabetologia. 1999. - Vol. 42, № 7. - P. 865 - 869.

149. Liillmann H., Mohr K., Wehling M. Pharmakologie und Toxikologie. Stuttgart: Thieme, 2003. - 624 p.

150. Masuda N., Takatsu M., Monad H., Ozawa T. Sarin poisoning in Tokyo subway. // Lanset. 1995. - № 8962. - P. 1446 - 1447.

151. McKenzie J. E., Scandling D. M., Ahle N. A. et al. Effects ofsoman on coronary blood and cordial fiinctijn in swine. // Fundamental and Applied Toxicology. 1996. - Vol. 29, № 1. - P. 140 - 146.

152. Menyhart J., Grof J. Many hitherto unknown peptides are principal constituents of "uremic" middle molecules. // Clinical Chemistry. 1981. - № 27. -P. 1712- 1716.

153. Mescher A. Edition of Junqueira's Basic Histology, 12th Edition: Text and Atlas. The McGraw - Hill Companies, 2009. - 480 p.

154. Mohandas N., Chasis J. A. Red blood cell deformability, membrane material properties and shape: regulation by transmembrane, skeletal and cytosolic proteins and lipids // Seminars in Hematology. 1993. - Vol. 30. - P. 171 - 192.

155. Nakache M., Caprani A., Dimicoli J. L. et al. Relationship between deformability of red blood cells and oxygen transfer: a modelized investigation. // Clinical Hemorheology. 1983. - Vol. 3, № 2. - P. 177 - 189.

156. Nash G. B., Meiselman H. J. Red cell ageing: changes in deformability and other possible determinants of in vivo survival. // Microcirculation. 1981. - Vol. 1, № 3. - P. 255 - 284.

157. Ohvo Rekila H., Ramstedt B., Leppimaki P., Slotte J. P. Cholesterol interactions with phospholipids in membranes. //. Progress in Lipid Research. -2002.-Vol. 41, №i. p. 457-468.

158. Okonek S. Haemoperfusion with coated actiwated charcoal for trating acute poisoning by remedies, plant protestants, and fungi. // Archives of Toxicology. 1974. - Vol. 32, №2. - P. 97 - 108.

159. Paglia D. E. Enzymopathies. In: Hoffman R., Benz Jr. E. J., Shattil S. J. et al. Hematology: Basic Principles and Practice. Ed. New York: Churchill Livingstone. - 1995. - P. 656 - 667.

160. Palevsky H. 1. Pulmonary hypertension and right heart failure. In: Carlson R.W., Geheb M.A., eds. The Princeples and Practice of Medical Intensive Care. / Ed. Philadelphia: W. B. Saunders. 1993. - P. 838 - 849.

161. Palevsky H. I., Schloo B. L., Pietra G. G., Weber K. T., Janicki J. S., Rubin E., Fishman A. P. Primary pulmonary hypertension. Vascular structure, morphometry, and responsiveness to vasodilator agents. // Circulation. 1989. -Vol. 80.-P. 1207- 1221.

162. Parthasarathi K., Lipowsky H. Capillary recruitment in response to tissue hypoxia and its dependence on red blood cell deformability // Journal of Physiology. 1999. - Vol. 277, № 6, Pt 2. - P. 2145 - 2157.

163. Riker W., Oramoto M. Pharmacology of motor nerve terminals. // Annual Review of Pharmacology. 1969. - V. 9. - P. 173.

164. Risinger M., Dotimas E., Cohen C. Human erythrocyte protein 4.2, a high copy number membrane protein, is N-myristylated. // The Journal of biological chemistry. 1992. - № 267. - P. 5680 - 5685.

165. Schepers E., Meert N., Glorieux G. et al. P-cresylsulfate, the main in vivo metabolite of p-cresol, activates leucocyte free radical production. // Nephrology Dialysis Transplantation. 2007. - № 22. - P. 592 - 596.

166. Seyfer A. E., Zajtchuk R., Hazlett D. R., Mologne L. A. Systemic vascular performans in endotoxic shock, // Surgery, gynecology & obstetrics. -1977. Vol. 145, № 3. - P. 401 - 407.

167. Singel D. J., Stamler J. S. Chemical physiology of blood flow regulation by red blood cells: the role of nitric oxide and S-nitrosohemoglobin. // Annual Review of Physiology. 2005. - № 67. - P. 99 - 145.

168. Tanaka A., Takahashi Y., Mizokuchi M. et al. Plasma, urinary and erythrocyte concentrations of guanidine compounds in patients with chronic renal failure. // Renal Failure. 1999. - № 21. - P. 499 - 514.

169. Van-Gelder J. M., Nair C. H., Dhall D. P. Erythrocyte aggregation and erythrocyte deformability modify the permeability of erythrocyte enriched fibrin network. // Thrombosis Research. 1996. - Vol. 1, № 82. - P. 33 - 42.

170. West J. B. Gas transport to the periphery. In: Respiratory Physiology: The Essentials (4th ed.), edited by West J. B. Baltimor: Willisms and Wilkins, 1990.-P. 69 - 85.

171. Westhoff C. M. The structure and function of the Rh antigen complex. // Semin Hematol. 2007. - V. 44 (1). - P. 42 - 50.

172. White R. A., Peters L. L., Adkison L. R., Korsgren C., Cohen C. M., Lux S. E. The murine pallid mutation is a platelet storage pool disease associated with the protein 4.2 (pallidin) gene. // Nature Genetics. 1992. - № 2. - P. 80 - 83.

173. Willekens F. L., Werre J. M., Groenen Dopp Y. A. et al. Erythrocyte vesiculation: a self - protective mechanism? // British Journal of Haematology. -2008. -№ 141.-P. 549-556.

174. Williamson R. C., Toye A. M. Glycophorin A: Band 3 aid. // Blood Cells Molecules and Diseases. 2008. - 41 (1). - P. 35 - 43.

175. Wills M. Uremic toxins and their effect on intermediary metabolism. // Clinical Chemistry. 1985. - № 31. - P. 5 - 13.

176. Wilson P. W. F., Grandy S. M. The metabolic syndrome: practical guide to origins and treatment: part I. // Circulation. 2003. - 108. - P. 1422 -1425.

Информация о работе

Смирнова, Ольга Олеговна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2011
ВАК 03.03.01

Диссертация

Изменение рельефа поверхности эритроцитов под воздействием некоторых токсикантов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы