Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Изменчивость свойств АТРазы хлоропластов растений

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изменчивость свойств АТРазы хлоропластов растений"

МИНИСТЕРСТВО НАРОДНОГО ОБРАЗОВАНИЯ КАЗАХСКОЙ ССР

КАЗАХСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ С. М. КИРОВА

На правах рукописи

Карпенюк Татьяна Анатольевна

ИЗМЕНЧИВОСТЬ СВОЙСТВ АТРазы ХЛОРОПЛАСТОВ

РАСТЕНИЙ

03.00.04 — биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

К

Алма-Ата 1991 ' .

(Г

Работа выполнена в лаборатории физиологической генетики растений Института ботаники АН КазССР -. Научный руководитель доктрр биологических наук, профессор

Иващенко A.T«

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Окороков I.A.

доктор биологических наук, профессор Еснрев О.В.

Ведущее учреждение

кафедра биохимии Таджикского государственного университета им. В.И. 1екина

■Защита состоится "jfe 1991 г. в час.ьюшн.

на заседании специализированного Ученого совета К 058.01.18 при биологическом факультете Казахского государственного университета, г. Алма-Ата, 480I2I, улица Тимирязева, 46.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Университета.

■ Автореферат разослан "Н " 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук yfo

А.Такенов"

Актуальность проблемы. АТР-еинтаза язляэтся кдпчевым ферментом энергообеспечения растительной клетки. Она состоит из двух секторов - водорастворимого (cf^), самостоятельно Функционируйте- . го как гидролаза, и мембраносвязанного (cfq) , формирующего в мембране протонный канал и вместе с F^ участвующего в синтезе АТР. К настоящему моменту достигнуты значительные успехи в установле-¡пн субъединичного (GS) состаза ферментного комплекса и его генетического контроля, а тагае в поштмании функциональной роли субъ-едкниц. Однако детальный механизм функционирования АТР-синтазы пока не установлен, Необычные структурные' и каталитические характеристики фермента привлекают к нему внимание ученых в связи с изучением взаимосвязи ме:?ду структурой и функцией фермента.

Одним из подходов, приводящих к конкретизации данных, касающихся функционирования фермента, является выявление Функциональной роли отдельных аминокислотных остатков основных каталитических СЗ. Наиболее распространенные приемы, используемые з решении этой задачи, основываются на применении сайт-направленного мутагенеза или на модификации определешшх аминокислотных остатков химическими аналогами субстрата АТРазной реакции.

Используемый в данной работе прием по выяснения роли амино- . кислот СЕ основан на подробном изучении и сопоставлении, с одной стороны, основных физико-химических характеристик АТРазного комплекса хлоропластов растительных объектов, а с другой стороны, особенностей амгшокислотжк последовательностей (АП) каталитических СЕ, обусловливающих проявление этих характеристик.

Цель и задачи исследования. Целы? настоящей работы является изучение изменчивости биохимических признаков АТРазы хлоропластов некоторых растений и анализ АП CS данных и других объектов для установления связи меяду структурой и функцией фермента и выявления эволюционных отношений мегэду органеллами. Исходя из этого были поставлены следующие задачи:

- изучение изменчивости некоторых физико-химических свойств АТРазы хлоропластов на уровне сорта, вида, рода;

- анализ аминокислотных последовательностей субъединиц АТР -синтазы из различных источников;

- выявление возможных корреляций мезду первичной структурой и функцией фермента.

Научная новизна. В диссертационной работе использован подход,

заключается в выяснении особенностей функционирования фермента путем сравнения функциональных и молекулярно-генеткческих свойств АТРазы.

Показано, что по таким физико-химическим свойствам как рН-оп-тимум ферментативной реакции, чувствительность к неорганическим анионам и этанолу ( модификаторам АТРазкой реакции ), а такжз но стацийотности к двухвалентным катионам ( как компонентам субстрата ) АТРаза хлоропластов проявляет консервативность на уровне сорта, вида и рода внутри семейства злаковых. Различия в свойствах проявляются лига на уровне родов, относящихся к различным семействам.

На основе компьютерного анализа 21 СЕЗ и 17 СЕА последовательностей з них выделены наиболее консервативные в процессе эволго-цни участки ( 148-187, 260-303, 312-332 аминокислотные остатки для СЕА и I51-213, 267-372, 395-449 аминокислотные остатки для СЕВ ), которые демонстрируют значительную степень гомологии не только у различных организмов, но и между самими CSA и СЕЗ. Выявлены аминокислотные замены, произошедшие в данных участках поли-пептиднон цепи, вероятно, наиболее существенные для проявления функции, фермента.

Показано, что консервативность свойств фермента на биохимическом уровне согласуется с высокой степенью гомологии АЛ основных каталитических СЕ АТРазного комплекса. Сравнение степени гомологии этих СЕ свидетельствует в пользу эндосимбиотического происхождения клеточных органелл и служит доказательством на молекулярном уровне наиболее тесных эволюционных связей между хлороплас-тами и цианобактериями, а такка митохондриями и Rhodoepirillua

rubrua.

Практическое значение работы. Отсутствие межсортовой изменчивости по изученным физико-химическим свойствам АТРазы хлороплас-тов псеницы и ячменя свидетельствует о большом сходстве геномов хлоропластов внутри вида к, следовательно, о малой вероятности улучшения характеристик АТР-синтазы создаваемых сортов путем межсортовой гибридизация. Существенного изменения свойств АТР-синтазы хлоропластов можно достичь вовлекая в половую, или соматическую гибридизацию растения из различных родов трибы îriticeao или более отдаленных таксонов. АТР-сиотазу хлоропластов мояно использовать в качества биохимического маркера хлоропластов при межродовой гибридизации.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на: Конференции молодых ученых КазГУ им. С.М.Кирова ( Алма-Ата, 1988 ), HI Зсесоюзном симпозиуме " Молекулярные механизм! генетических процессов " ( Москва, IS90 ), 1У Всесоюзной конференции молодых ученых по физиологии растительной клетки ( Минск, 1990 ), Всесоюзном совещании " Молекулярные механизмы и регуляц:1я энергетического обмена " ( Лущино, 1990 ), Республиканской ко.ч^зрекшш " Проблемы теоретической и прикладной генетики в Казахстане " ( Алма-Ага, 1990 ), Втором Всесоюзном совещании " Генетика развития " ( Ташкент, 1990 ).

Публикации. По результатам исследований опубликовано 10 работ.

Структура и объем работа. Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 136 страницах машинописного текста и содержит 10 рисунков и 15 таблиц. Список литературы зилгочает 22S ссылок на работа отечественных п зарубекных азтороз.

Объект и катоды, исследования

Объектом исследования были проростки 15 сортов пеэннцы вида Triticua aestivua И трех сортов ячменя Hordeurr. vulgare. Для сравнительного анализа АТРаза выделялась такие из проростков р.чп, кукурузы, листьев гороха, шпината, табака. В опытах использовали 12-20 дневные проростки, внрэщешшз в водной культуре при температуре 20-22°С, освещенности 10000 ли, с периодом освещен,ш 12 ч. а такдв листья растений, выращенных в теплице. Субкдоропязст:п;е частицы ( СХЧ ) получали путем озвучпзатух ( 10 сек ) хлорэплас-гов, выделенных чзтодои дпМэрегщпадъного цэкгркрутнрозанкл ' Но— номлр-энко и др., ISS5 ). Растворплуэ АТРазу хлоролластоз экстрагировали из озвученных СХЧ по методу Шкса (Tonis е. а. , 1977 ) с некоторыми г.;од:1гзикация,"л. Активность АТРазы определяли по скорости отщепления Рн от ATP (Denigoo o.a. , 1921 ), содсрглниэ белка по методу Лоури (Lovry е.а, , 1951 ). Диск-электрофорез з ПАЛГ проводили по методу Орстейи-Девиса { Остермаи , 1981 ), süs -электрофорез ПО методу Лэмлн (Laealy а.а, , IS70 ). Программ для анализа АП СЕ АТРазного комплекса составлен в лаборатории п расчет проведен на ЭВМ типа I3M PC/AT.

Результаты доследований я их обсуждение

I. Изучение изменчивости свойств АТРазы на уровне сорта.

Исследования по изменчивости свойств АТРазы хлоропластов на-

чали с анализа внутри вида Triticum aeativum . Ключевое полою айв фермента в цопи фотофосфорилировапия в определенной степени позволяло предположить относительную стабильность его каталитических характеристик, но .имеющиеся иа этот счет в литературе дашше но позволяли сделать однозначного внпода о отопени гетерогенности свойств АТРазного комплекса ( 1'авриленко и др., 1985 ). В работа использовали следующие сорта пшеницы, относящиеся к BiyxyTriticua aoetiviim и районированные в ¡Казахстане: Безостая I, Богарная 66, Альбидум 114, Алма-Атинская полукарликовая, Мироновская 800, Кар-лыгаи, Комсомольская I, Прогресс, Кооператорка, Целинная 21, Казахстанская раннеопалая, Казахстанская 3, Омская 9, Саратовская 29, Саратовская 42. Изучались следующие свойства АТРазы: удольная •активность формонта, специфичность к двухвалентны?.! катионам как компонентам субстрата АТРазной реакции; чувствительность АТРазной активности к неорганическим анионам как модификаторам активности; к действию этанола как тесту на гидрофобнне участки фермента; молекулярная масса СЕ; рН-зависимость ферментативной реакции.

Исследоватю свойств растворимого Фактора хлоропластов у не-речислонних сортов гвпешщи но виявило различи!! в функционировании фермента на уровно вида Triticum teafcivua , Так удельная активность препарата of^ для всех сортов била в 1фодолах 22-26 мкмоль Рн в чао па да белка. Тиоционат { 10 мЧ ) подавлял АТРазную реакцию иа С4-76Я, сульфит ( 20 мМ ) активировал АТРазу на 02-116$, бжарбонат ( 40 Ш ) но оказывал существенного.активирующего оф-(рокта. Значительно возрастала гидролаэнал активность стц тпешшн в присутствии этанола, который в оптимальной стимулирующей концентрации { 26 об.% ) повышал уровень активности Фермента в 28-36 раз. При замене в истином субстрате реакции магния на другой двухвалентный катион во всех случаях происходил гидролиз АТР. Ирк этом наибольшая по сравнения с магнием активность наблюдалаоь в присутствии марганца, кальция, цинка. Дпя всех иссладуешх сортов пшешщи по способности заменять магний в субстрате АТРазной реакции катионн располагались в слодувдой последовательности: Нп++ > Са+,> 2п++> Mg++ > Оо++. При электрофорезе в ПААГ с ДС-натрия CF^ распадался на субъединицн с одинаковой молекулярной массой у всех изученных сортов.

Поскольку АТР-синтаза является комплексным ферментом, работа ,по изучению изменчивости Физико-химических свойств данного Фермента проводилась тоете на уровно СХЧ, что нродоставляло дополни-

тельную возможность выявления влияния каждого компонента на проявление тестируемых свойств. Результаты опытов на СХЧ такно свидетельствовали об отсутствии достоверных различии по исследуомт характеристикам внутри вида Triticum aeßtivuia.

Изучение изменчивости тест>фуемнх свойств СР^ ditüo проведено также для трох сортов лчмэня: Днепровсжй 435, Донецкий 8, Черниговский 5. Уровень удельной активности растворимого Вермонта бил одинаков для данных сортов ( 22-24 мкмолъ Р{ в час на да белка )„ Модифицирующее влияние анионов и этанола но степени выраженности наблюдаемого аффекта бцло практически на одном уровне. Так этанол стимулировал активность АТРазы ячмэня в 30-34 раза, при этом оптимум стимуляции иаблодался как и .для пшеницы при 26 о6.% концентрации. Тноционат подавлял гидролиз АТР на 73-77%, а сульфит увеличивал активность на 70-435Í. ¡lo способности заменять магний в субстратном комплексе катионы располагались в ряд: Hn*+>Oa++ > ■ &i++)Hg++> 0o+t . Молекулярная масса субъодшпщ GF^ ячменя соответствовала таковой у пшеницы и составляла 55, 53, 41, I?, II кДн для CEA, GEB, cEG , CED , CEE соотвотствонно. Получешше данные свидетельствуют об отсутствии внутривидовой изменчивости тестиру емнх свойств фермента у сортов вида Hordeum vulgare.

2, Изучение изменчивости свойств АТРазы на уровне вида.

Следующей задачей, поставленной в работе,'было изучение изменчивости свойств АТРазы на уровне вида. Для анализа использовали 5 видов шгашщы: Tritlou» aoativu», Triticun ¡shukovakii,'£rit;i~ oua, tiisopheevii, îrifcicun rconpooceua, Tritlcura dicoccun , отличающихся меэду собо" как по плоидности, так п по сочетании ш.юп-воася геномов* lía уровне ср^ но обнаружено разницы в тестируемых свойствах для данных объектов. Удельная активность форманта для всех видов пкеншш била одинакова п составляла 27-30 мололъ Р в час на иг бэта. В присутствии 10 tál тноционата сохранялось лишь 27-18/? исходной активности, 20 hi,! сульфит повивал ее на 110—IG5';Í, а 40 it'i бикарбонат на 15-25?'. В присутствии этанола ( 25 об,% ) активность возрастала в 20-33 рапа»

'Ракш образом, на уровня вида остается справедлива заключение о вксоксЛ консервативности pacer,laTptmaet.nir фкзтсо-химичоских трактариоияк АТРазного коютахся, а тают наблюдение о незначительном плкгоши на ипх перехода с?., из комплекса ор^ в раотво-pn.'.v'vi состояние, Кчп но уровне сорта., так it на уровне вида Фор-Я рЯОТРОрИКО»* СОСТОЛПиа ОГЛКЧЯЖШ ОТ Î.WI«броНОСРЛЗОШЮЙ фОр!ЛП

лг.;з но уровню удельной активности ( для с?1 она была выле в 10.15 раз ) :: по степени активации этанолом. Tait, если мембраносвя-за:шкй формолт актлэцровадся этанолом примерно в 6-9 раз, то в случаэ ср^ активами1 достигала 28-36 раз. Возмо::сно пореход р*^ ;.;з кс:,таокоа с с?0 в растворимое состояние значительно изменяет его конТюрмащю, тем саьзм увелкч:шая доступность каталитического к регуляторпого сайтов для компонентов субстрата и этанола.

3. Изменчивость свойств АТРазы на уровне рода.

На данном -¿тане работы были проанализированы объекты, относящиеся к различным родам семейства злаковых и другим семействам. Зто пропила, ячмень, ромь, кукуруза, а также горох, бобы, ппинат, та ¿'а:;. С эголлгу.оккой точки зрения было кнтересжгл вовлечь в экс-горпмоит такмэ и представителей цианобактерий -.Synechococcus 'я АпаЪсоп.т 3 таодацв I яризедоны данные, полученные на ср^. Установлено, что сродя злаков изменения свойств фермента незначительны. Так пхенпца, рогь, ячмень и кукуруза показывали консервативность каталитических характеристик с?1( только для растворного (Тсктора кукурузы стпмул:фуз£ио эффекты анионов были выракены несколько с::льиее, а кагпонный ряд хотя и сохранял ту se последовательность, но наблюдалась болоэ высокая активность в присутствии марганца, кальция, щи:ка. CF,, гороха, табака, шпигата и бобоз почт;: по bgîm показателям значительно отличались от ср^ представителей ссмоЛства злаковых, а таказ мезду собой. Только рН-опти-мум ейа одинаков для зсех объектов и соответствовал pH 8,0. По уровжэ удельной активности (269Г0 наиболее выделялся ср1 гороха ( за 100 принята удельная активность С?1 паоницы, равная 22 мк-моль ?.. в час на мг белка ). с?,, табака и бобов проявлял приблизительно равную по уровня активность, но б два раза большую, чем у ср^ пшеницы. Активность АТРазы едкшата отличалась от контрольных -цп^р незначительно. Удельная активность в присутствии 10 мМ тиоцлоната была примерно оджаковой для всех объектов и составляла 32-21% от исходного уровня. Сульфит ( 20 мМ ) оказывал наибольшее актшифующэе влияние на АТРазу шшшата ( 493^ от исходного уровня ), табака ( 363,1 ) и гороха ( 397$ ).У СР., бобов сульфит повышал активность в два раза, что соответствовало уровню активации для ср^ представителей семейства злаковых. Наиболее чувствительной к действию 'бикарбонату оказалась АТРаза шпината ( увеличение активности в 2,8 раза ). В 1,8 раза повышалась активность

в присутствии данного кока и у гороха. Этанол ( 26 ой,% ) в

Таблица I Межродовая изменчивость свойств СЕ^

Объект" Сдельная 'актив-!пость, % Г "10 УП ! ! 20 Ш1 ! 20 м!.1 !26 оо./о ! ЯсцБОз ! Ма.Н С0з '.этанол, ! % ! % \ р ! % ! Со" % <л++\ % 1 Мл** а /о

Пшнзща 100+2 32+4 231+10 123+6 2969+130 126+5 67+6 130+10 144+3

Ячмень юз+з 19+3 250+19 143+13 3098+200 127+5 55+4 - 131+11 142+8

Роль £•3+3 21+3 259+12 • 133+4 3062+250 94+6 56+2 120+7 150+9

¡кукуруза 94+4 22+3 314+31 146+8 3309+260 161+14 70+4 170+29 181+17

Горох £59+в 25+3 397+12 184+7 3313+180 269+21 66+1 302+4 195+9

Табак 191+3 22+8 £63+18 129+8 435+Г5 176+7 74+5 116+15 173+8

Шпинат 118+5 24+2 493+8 282+5 454+18 25-1+10 45+2 341+6 173+5

Бобы 133+7 21+2 223+3 124+2 560+22 121+3 74+1 99+3 156+3

а оа-С/ых. 16+2 55+5 249+15 118+4 46+3 55+2 .77+5 109+8 98+3

Вуаьс/юс£)сси.$ 28+4 69+4 226+9 98+3 52+4 32+3 39+2 122+5 51+2

й За 100$ принята удельная активность шешщн, равная 22 цкмодь Р^ в час на от белка, П.- 4» При оценка действия модификаторов для каздого объекта за 100^ принята активность в присутствии магния«

- а -

30-33 раза увеличивал скорость гидролиза ЛТР у зерновых культур. Такой уровень активации был у ет^ гороха, хотя максимальная стимуляция ( в 45 раз ) наблюдалась для данной культуры при 22% концентрации этанола, с?,, табака, шпината и бобов показали значительно меньшую чувствительность к добавлению гидрофобного соединения как при данной концентрации этанола, так и при добавлении его з оптимальной для данных объектов концентрации. На рисунке приведены данные по зависимости степени активации фермента от концентрации этанола. Графики отра'хают тот факт, что СР., злаковых культур имеют близкое значение оптимума концентрации этанола (2627/1), тогда как для с?л бобов он снижается до 23-24 обЛ. АТРаза из гороха и спината максимально стимулируется этанолом в концентрации 22 об.^ и наименьшее количество его ( 21 об.л ) необходимо для максимальной стимуляции фермента из табака. При этом у с?,, гороха степень активации фермента напбольпая. Наименьший активи-рукауй эффект этанол оказывал на АТРазу бобов, шиката и табака. Эти данные указывают на значительную разницу гидрофобных участков фермента у данных объектов. При сравнительном рассмотрении данных по способности двухвалентных катионов заменять магний в субстратном комплексе с АТР, видно, что для сгц табака, бобов и гороха катионшм ряд изменяется« То есть,оели для АТРазы у представителей семейства злаковых катионы по способности выступать в качество компонентов субстрата располагались.в ряд Мп+* > Са++ > >

> Со++, то для АТРазы из табака эта последовательность выглядела как ) Кп++ > Са'*'+ > > Со++ , для СГ1 гороха и ¡япшата-Са++> > Ип+* > Ме++ > Со++, ДЛЯ С?^ бобов- Пп++> 2п++>Ив++>

Са++> Со++»

Для СХЧ на уровне рода была выявлена сходная с с^ картина в изменчивости свойств.

^ , выделешшо из ЗупесЬосоооив и АпаЬаепа , привлочешшх для анализа в качестве возмояных эволюционных предиествешшков хлоропластного генома, по тестируем;:.! свойствам были близки меаду собой. Так они в равной мере.испытывали ингибирущее действие ти-оцноната' ( на 45-31$ ), активирующее действие сульфита ( на 149-!?&% ). Этанол в концентрации 26 об Л одинаково влиял на АТРаз!гую реакцию, вызывая ео подавление ( на 54.% в случае гц из АпаЬаепа и на 48;» для г из 8упес1юсоееиз )". При этом максимальная стимуля-•ция этанолом для АпаЬаепа ( в 2,5 раза ) достигалась при добавлении ого в"концентрации 15 обЛ, а в случае из ЕупосЬоооссип

Рио. Влияние этанола на АТРазггуп активность СР^ ппэни-цн (I), ячшня (2), хсукуруэн (3), табака (4), шпината (5), гороха (6), бобол (7), ВупосЬоооссив(8), АпаЬаспа (9).

По ооп абоцисс - коицонтрзцпя отанола (объвшт %) по осп ординат - АТРазная активность в %. За 100^ принята максимальная активность СР| в присутствии этанола

( в 1,5 раза ) при внесении в среду инкубации 12 об.% этанола. На активность АТРазы из остальных изученных объектов этанол ( 26 об. % ) не оказывал ингибирухзщего влияния, а при внесении его в сроду инкубация в концентрации, вызывающей максимальный стимулирующий эффект для каадого объекта, повышение ферментативной активности было больно в 6-20 раз. Поэтому можно предположить, что гидрофобные .участки фермента, существенные для катализа и ( или ) кооперативного взаимодействия СЗ, сходные у ВупеоЬососсиз и АпаЪаепа , значительно изменились в процессе эволюции. По способности выступать в качество компонентов субстрата АТРазной реакции катионы располагались в ряд Са++ > Ме++> > Со++ > 2п++, отличны;: от рядов, установленных для всех исследованных в работе объектов. Удельная активность составляла 6,2 мкмолъ Р в час на кг бежа для БупесЬососсиз и 3,5 мкмоль Рн в час на мг белка для АппЪоепа к была ниже, чем для с^ выспих растений. рН-оптимум для гц СупесЬососсис и АпоЬаепп находился в щелочной области рН и отличался от рК-оптимума для АТРазы из других объектов на 0,5 едишхцы рН.

Па основании выпоизложенкого мояно сделать вывод: АТРаза хло-роиластов растении является консервативным белком по используемым в качество биохимических тестов показателя:.! на уровне сорта, вида и рода внутри семейства злаковых. Различия в свойствах проявляются ка уровне родов, относящихся к разным семействам. Наиболее вариабельными показателями, являготся - активация фермента этанолом и специфичность в ряду двухвалентных катионов. Консервативность фермента на биохимическом уровне согласуется с высокой степенью гомологии АП основных каталитических субъедишщ.

4. Связь структуры И фуНКЦИИ.

Создан банк данных, вклэчашдй сведения о последовательностях 103 генов, ¡<од:фувдих СЕ АТРазкого комплекса из 32 объектов. Составлены программы перевода нуклеотидных последовательностей в АП, расчета стопени гомологии кезду однотипными СЕ при оптимальном выравнивании АП, расчета частоты встречаемости отдельных аминокислот в АП, расчета молекулярной массы СЕ.

Анализ АП СЕ АТРазы для изученных объектов, а таете для других представителей растительного и животного мира дает генетическое обоснование отсутствию значительной изменчивости на функциональном уровне фермента.

По общепринятому в настоящий момент мнению каталитический

центр фермента локализован на СЕЗ АТРазного комплекса. Изменения в участках, тлеющих отношение к активно:лу центру фермента, дол*-нн или могут сказываться на проявлении тазах физико-химических характеристик АТРазы как специфичность к двухвалентны:.! катионам, чувствительность к ингабируэдему и активирующим аниона:.!, действие которых проявляется на уровне активного центра Фермента, а также на зависимости ферментативной активности от pH.

3 табл. 2 приведены АЛ СЕВ исследуемых объектов. Поскольку в качества контроля на биохимическую изменчивость сзойств АТРаэн взята пЕОница, все АЛ анализировались такяе по отношению к АН пшеницы. Точкам обозначены гомологичные аминокислотные остатки ( АКО ). Такое обозначение наглядно демонстрирует произошедшие в процессе эволюции замены в АЛ CS, а также их количество и положение в полипептздной цепи. Для удобстза обозначе!п:е рассматриваемого объекта и СЗ вкралоно в 8 буквенном коде, где первая буква обозначает место кодирования дачной CS ("с"-хлоропласты, "п "-ядро, "т"-мнтохондрин). АТР - обозначает АТРазу. Пятая буква относится к типу рассматриваемой СБ. Три последние обозначают сокра-щешюе родовое и видовое название объекта. Сравнение АЛ 21 СЕВ фермента хлороыластов, митохондрий и бактерий позволило выделить области высокой гомологии для всех АЛ. Первая область высокой гомологии расположена от 151 до 213 АКО. В неЗ после 173 АКО в АЛ шпината локализован участок ( 173-186 позиции ), имеющий сходство с АЛ аденидаткиназы, другими нуклеотвдсвязкваэдими белками ( Hsu-Shih- Yuan е.a, IS87 ). Здесь se сосредоточены АКО (к 142, к 155, y 174» S 204» g 203. Е 181 В АЛ Escherichia coli ( Al-Shawie е.п. 1989), играющие роль в связывании !,!еАТР, то есть непосредственно в каталитическом акте, а так.т.з остаток TI97 в АЛ Saccharomyces cerevisiae(KueXler е.а. , 1989), который вместе с прилегающей к нему областью глиц;пгбогатой петли (остатки 172-180 в АЛ пшеницы), играет роль в механизме чувствительности фермента к азиду, сульфиту и бикарбонату. Вероятно замены, произошедшие в АЛ на этом участко, могут влиять на проявление специфичности фермента к двухвалентным катионам, а также к оксианионам. Для АЛ шпината з отом интервале характерна одна замена аспарагиновой кислоты на аспара-гин, в АЛ табака лизин заменен на глутаминовую кислоту. АЛ ячменя кукурузы, гороха на этом участке полностью идентичны. Поскольку специфичность к двухвалентным катионам и к оксианионам у с?^ пшеницы и гороха разная, можно предположить, что в связывании дзух-

Таблица £

Акинокпсяоткые последовательности СЕВ

слТРЕТае CATPBSo1 сАТРЕНтга cATPBZrra слТРЕОзг cATPBHta cATPBPsa сЛТРЕЗро САТРШРО

10 liATPESTO

11 плттЕАпг

12 CATFBSCO

ео

10 20 30 40 50 60 70

KETHPTTSPPGASTIEE3CSTGEXDQIIGPVLDVTFPPGSLPVIYKALWQSRDTDDKQIKVTCEVQQLL6NNRVS I.....D. . V.. L. К. HL. .. А.......Н. Л.....К. К.....I. KG. . . AGQPK

I. -TIT i:

. V.

P.. . V . ?... I

. E. . V.............

. GS. V. . L. г. KP. . w. PP. DTEV. VL. H. HL. . . T. GSEV. . V. K. HL. . . VK, . К. . —ПАР. К. . LVA. HI. S. T. V

. V. --..--------. ZT1П. У. R. V

.V—, ........А. ГШ. Y. T. .

.Л...................К. V. V

90 100 110

I.

. . A. .H. К

. . V. • • .H. .

. . A. . . . H. к

. . A. S. . .H. H

. . E. . A. . . . 0

. . K. . H. . . . 0

GA. Y. . Е. . QDAVPRV

I.

120

130

.....А. . .

К----А. . .

... К____EG. .

____G. . SVGQP

. I. . G. . . VG. .

____G. --GNE. T

S. I. KPQNSAGEE. H . IKGKNEAGODLS. TIKGTKEAGO. LHL

E. . KGHE---

140

RLVL. 150

DRK. D. QX GGI. 160

1 2

3

4

5

6

7

8

9

10 11 \г

i

г

3

4

5

e

7

8

AV/.ÎÏSATDGLÎÎE GÎISYIBTGAPLS VPYGGATL.GRIFHVLGEP VDÏÏLGP VDS S ATFPI HS S APAFIELBTKLSIFETGIKWDLLA

I.

71.

T S. GSS.

170

T.

A.

. 1 . I

LEH. XE 100

E E К G

190

£00

. TRT. S

. T____

. T____

. T. T. £ . TET. £ . TNT. £ EVTT. . KAAT. S XNQE. L, EIGEEERVA. 210

A

D ?

A

220

TQ. T. .

Q.

Q. Q. TG. KLTD. E ELT. . E SVE. . SNSQELL 230

P Vf . P. V

Ю I

£40

HC

PyEEGGSIGLFGGAGVGETVLIlŒLIÏÎÎII/JlMIGGVSVFGGVGEKTEEGNDLYKEHXESGVIHEKHIEESKVALVYGQHNEPPGA

...............L....... L..................

F

. . R. . .A.................

...........L.. . F . p...........-.....

10 .. ,Q..................0........E............

15 ....................Ill........TQ. ...... A____

12 . FAE.. . V............EH.'. IE. S. VSV. Л____

. Q.

. H.

.......F. H.

'......D----AH.

ID. К..........

TD. К. . D.......

. . S. . S. . ,

. 0.. . H

250 260 270 230 290 300 310 320 330

1 RW?VGLTALTKAEYFRDVÎiKODVLLFIDHXFRFVQAGSEVSALLGRHPSAVGyQPTLSTEliGSLQERrASTKKGSITSIQAVYVP

2 . . E. . T. . . E............

3 .. D! !

, , , , ! т." !

5 . I. . • T..

& . . E. . T. . Г Г111Г1Г1ГГГ

7 . . E. G----T____ . T. . . E............

а . E. .....Y____ . T.. . E............

9 .... .....T____ . T. . . E............

10 ......S. . . ! '. H! ! G. DV. Q____ . T. . LE............

И ......SG. . G. DV. Q____ . T. . TE............

ia . I. . A. . G. . '. Y'. Ë-G8 v! ! Y YTQ! ! т! !'.'.'.!!!!!! 1 AE. . . V____ • T. . . T.....V......

340 350 360 370 380 390 400 410

i ADDLTDPAPATTFAHLDATTVLSKGLASKGIYPAVDPLDSTSTHLOPRIVGNEHYETAGR VKETLQRYKELQDDIIAILGLDELSE

2 3 4 • • Л. . . E. I..........

5 Q! !

б !Á! ! ! .................. k! ! .....Q----

т .л... E____ .....Q----

Ô . А. .. ...•....•.«••.«..I . E. . . . . RG. . Q----

9 . А. . . ...............V. , E____ . . G. . Q----

10 ...............S. , E. . . S . RA. QS____

11 G. ! '. ......G........ H. . D. . . H . RA. OS____

12 s! ! . . V. .' ! QÏ ! ; Ï. '. ..........RQ. D. LV. .Q. . . D ABG. OSI. . . q! ! k. i! ! ! ! !. H. '. \ \ \

4-го ' 430 440 450 »160 470 480 490

1 EDSLXVARARKIERFLSGPr FVAEVFTGSPGKYVALAETIRGFOLILSGELDGLPEOAFYLVGHIDEASTKAITLEEEKKSOK

г . . G............... . S. . . . TA. . UN. . И. S. UC.

J 4 .'.G.'.'.'. .'.'.'. .'.'.'.'.'.'. k! !! s. iï.

5 . . G............... . .11.....KU.

6 ^ T^..... . . G............... ! ta! . MH. , lt. SHLK.

7 . . , ....... F . . G............... ! s! '. . TA. . та. t.......

3 . . G............... . TA. . HH. KT.....-

о . . S. Й. . . K. . . H..... ! s" . TA. . A. . QV. S----

10 '. '. '. Q. . . . . K. ED. . S. . NR. . К. . .D. . . b. q. . IE. GAX. KA. S----

11 * V. G. . . . К. ED. . К. . . E..... . D. . . ......D. H. . IA. .EKIKG------

12 ! k! v! . 0. . . . . S. KD.....KG. ME. . i. H. . . ... II. . S. E. . VE. . KK.........

валентного катиона и во взаимодействии с анконами принимают участие AXQ, локализованные не только в данной области. Кроме того на первую высококонсорвативную область после оптимального выравнивания АЛ приходятся АХО в АЛ Escherichia coli , замены которых влияли на проявление pH-зависимости (Kironde е.а., 1989), Они инвариантны для ОВЗ всех изученных объектов. Для АЛ Synechococcus и Anabaena характерно несколько положений, по которым в данной области нет совпадений с АЛ хлоролластных СЕВ. Хотя катионкый ряд для этих объектов отличен от ряда для высших растений, для Р,, Sy-nochococcus и Anabá ene он совпадает, поэтому можно предположи», что для проявлешш каталитических характеристик они не существенны , или что прокзоседаиз в разных местах полипептидной цепи разнородные замены приводят к одинаковому изменении в свойствах, отличающих АТРазу из этих объектов от АТРазы высших растений.

Вторая консервативная область локализована между 267 и 372 АКО. В этой области при оптимальном выравнивании АП обнаруживается область с высокой гомологией в АП шпината и АДР-А7Р антилорте-ра, а также 11тпо&руктохиназы, аденилаткиназы и фактора элонгации Tu» Сада ка попадает последовательность из 10 АКО ( I-t-s-t-:•:/£-G-S-I-T ), общая для всех ионпереносяэдпс АТРаз (Nouai е. a. , IS88), и АКО, которые метятся радиоактивны:.«' аналогам: АТР как принадлежащие непосредственно к каталитическому центру АТРазы ( Parsonage е.е., 1987). Зсэ это позволяет рассматривать замены, расположенные Е данном участке как значимые для зсатализа, т.е. способные привести к изменения физико-хш.агческпх свойств, проявление которых зависит от особенностей строения нуклаотидсвязыващего сайта. Для АП шпината и табака это следующие замены: ¿314 KJ18 Е, s 35SA ; для АП гороха - s3oj о,- s303 т, ï, к 518 е, S358 а. Замены в АП ячменя (1:274 tí е 1су?:урузы (АЗК Т) не сказываются на проявлении тестируемых свойств« АД Synechococcus отличается от АП пшеницы з данном участка по 7 АКО, й Anabaena по 8. Причем в 6 случаях з&мош для данных объектов совпадают, т.о. именно они ж могут' обусловливать суцзствующпо на биохимическом уровне отличия кзззду шеях, как прадставцтслямн цианобактарнй, с хлоропластами* Из этих в замок 2 совпадает с земзн&ми в /Л ышната, табака к гороха и, скорее всего, чвхяя по приводят к кзмзкчпвостк свойств. С учетом сказанного остается отмотпть 4 АКО в АП этих объектов - 'G-293,л 295,V 295,Q 299.

' Третья область высокой гомологии ( 395-449 АКО ) содержит еле-

дуаищо заленн АКО: в АП гороха .М404, v4I3, p43I, s-JGS.

При анализе 17 АП СЕЛ тагсге выделены три наиболее консервативных для всех объектов участка, на которые приходится 7'i от общего числа замен в АП кукурузы, 8'.'í, 7>», 4:', 11%, в АП кгпнката, табака, гороха, Synechococcu3 я Anabaena соответственно. В пер-Еом участке высокой гомологии (148-188 АКО) находится лослодоза-телькость АлО (167-176 ПОЗИЦИЯ), Общая ДЛЯ Escherichia coli и друг;« нуклеотвдсвязызаоипк белков, что указывает ча ото значимость для катализа или межсубъедтшячного взаимодействия. Установлено, что мутации з это" области АП приводят к дефектам в сборке полного АТРазного комплекса (soga е.а., 1939). Вероятно мо.хю заключить, что для проявления каталпт:г-госк:1Х характеристик полноценно собиравшегося и функциоиируэдего АТРазного комплекса у изученных navji объектов, замены в этой области АП не существенны.

Второй участок высокой гомологии расположен мз.тду 260-303 АКО Данный регион ват.эн для катализа, поскольку са:?-нап?авлзнкы:: мутагенез з дачной области приводит к потере АТРазноЛ активности. Кроме того, область с 25S по 263 АХО в АЛ Escherichia coli , общая с другими нуклеотэдовязква;оцпа.'л белками, локализована в данном участке (soga е.a., I0B9). Б этом участке высокой гомологии АЛ пезницы и шгсната идентичны, для АП кукурузы прослеживается замена Р288 L. В АП гороха есть 3 замены (l264 P,q 267 Ii, А302 v) в АП табака - 2 (L264 Р, Р283 L). Поскольку по бизико-химическим свойства!.! фермент из кукурузы очень близок к Вермонту из пленили, можно предположить, что замена пролина па ле"цпг в позиция 288 (характерная также для АП табака), которая но молат не привести к изменения;.? конформации АП в 3T0it области, не щтоднт к геиксируе-. r.:;c.i изменениям на биохимическом уровне. Одновременно нельзя проигнорировать замены L-P в АП гороха и табака, АТРазы которых различаются мепяу собой по большинству характеристик, взятых в качестве теста. Замены АКО в АП Synechococcug и АпаЪпопа не совпадает и могут быть таклее малозначимы для проявления тестпруомзл: свойств.

В третьем участке высокой гомологзш в интервале- в 16 МО сконцентрированы АКО в АП Escherichia coli (Senior, 1988), мутации по которым выявили значимость данного региона для поло.-штельной каталитической кооперативное™ и для образования пути передачи конформационннх изменении меяду каталитическими сайтами. Этот участок содержит заменыs 324 A,Q 378 К в АП шпината л A352S в по-

оладоватальности табака. All кукурузы и гороха но содержат замен на данном участка полилентщщой цепи. В АЛ synechococouu и Апа-Ъыепа наблюдается 5 оходашх замен, 2 из которых подобны заменам в АЛ шпината. Это V320 i, 8324 А, АЗ^б в, 1373 т, Q378 к. Другие» одиночные замени в All этих объектов если и могут быть значимыми, то не для проявления рассматриваемых физико-химических свойств, ь для более тонких кинетически характеристик.

Характерно, что участки о высокой локальной отепенью гомологии б СЕВ и CEA приблизительно совпадают по положению в АЛ. Так на отрезке длиной в 40 АКО (148-187 АКО в CEA и 150-189 АКО с СЕВ) наблюдается 12 инвариантных АКО, что соответствует 30$ гомологии этих областей. С учетом нзофункционалышх аминокислотных замен, не оказывающих существенного влияния на физико-химичэокио характеристики All, гомология этих участков возрастает до 63$. От t, 258 CEA и L 269 СЕВ пшеницы (вторая область высокой гомологи! для обеих СЕ) на протяжении 48 АКО наблюдается совпадение CEA и СЕВ по 15 АКО, что соответствует 29$ гомологии. С учетом изофукк-ционалышх замен степень гомологии повышется до 62%. 11а участке о 312 по 366 АКО для CEA и с 319 по 373 АКО для СЕВ гомология доходила до 30$, а о учетом изофункциональных замен до 61$. Это сад раз подчеркивает важность дашшх участков для катализа, а также указывает на возможность дупликации ь далэко;д прошюм какого-то общего для CEA и СЕВ предшественника,

СЕН хлоропластов демонстрируют наибольшую степень консерватизма в процессе эволадии. К ним по степени гомологии наиболее приближены CEií АТРазц ¡¡s flynechoooocuo к АдеЬеегш (табл. 3). От составляют первую группу высокой гомологии СЕ. Вторая группа 1фвдотанлена митохондриальнымя СЕН. К шел наиболее прибликои фермент из Rhodoepi rillua z-ubrua » СЕ остальных бактерий показывай";1 умеренную степень теологии кш; 12звду собой, так и о СЕ хлороп-лаотиого и ьт'охоггдриалыюго происхождения. Такая тенденция про-одэкиваотоя для boss CE как растворимого» так и шмбршшого сок-тора, которые кодируется ххшомаш; органеля, í¡to свидетельствует t пользу видосшлйиотичаокого цраиоховдения кявточкш: органэлд с оку-мп' от одщх:л допазательотиогл uú кзлакуляриогд урошю игшбздзг тоснпх £зол>:ашш;ши: ь:::::;У.■ хдоромласчаж и цианобакгс--

рюш, a так-гэ ч Rhodocpiriniu juimi.-.

Крою того, сргшше&и етати;г. тосодопп: /Л OOi аяороишиоз i? tr> TftxonnpïsU оннаГ'О раог'эикй (-гибл* 0), гпушо, чю она нц>;.о, чэп лад

Таблица 3

Гсиэлогня аминокислотных последовательностей субъединици Я

Объект* ! 1 2 3 4 5 б 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 13 20 21 22 23

1 cATPHSol ira 100 100 99 99 93 98 71 88 86 29 43 39 37 25 26 35 32 30 34 29 29 28

2 cATPHZra 100 100 99 99 88 S8 71 88 86 29 43 39 37 25 26 35 32 30 34 29 29 28

3 cATPHTao 100 99 99 98 98 71 88 85 29 43 39 37 26 26 35 32 30 34 29 29 28

4 cATPKPsa 100 98 96 86 73 86 85 29 41 39 37 28 28 34 32 28 34 29 29 28

5 cATFHNta . 100 99 99 71 89 88 29 43 39 36 25 25 36 32 30 34 29 29 28

6 cATFHG.ua 100 98 73 83 86 28 41 39 Зо 25 25 35 32 30 34 29 29 28

7 cATPHf.ípo 100 71 SO 89 30 44 40 37 26 26 35 34 28 32 30 30 26

3 сАТРНЕ^г 100 66 65 25 31 26 23 18 18 20 20 20 23 22 22 21

9 пЛТРНАла 100 96 33 43 42 37 24 24 32 32 27 30 27 27 25

10 nATFHSyn 100 33 43 40 36 24 24 32 31 26 28 26 26 24

11 nATPHEco 100 40 38 21 21 22 20 22 25 26 27 27 23

12 пАТРНВте 100 69 31 30 33 34 31 34 34 34 34 33

13 nATPHTba 100 31 33 36 33 33 31 32 31 31 31

14 nATPHRru 100 47 44 46 50 43 49 43 43 45

15 mATPHSce ICO 87 57 62 47 54 46 46 50

16 mATPHKfr 100 62 68 49 58 50 50 53

17 mATPHAni 100 84 55 61 53 53 58

18 rnATPHNcr 100 54 62 57 57 59

19 rrATPKZro 100 85 91 91 93

20 mATPHPsa 100 89 89 92

21 rnATPHPat 100 100 83

22 mATPHNta 100 88

23 mATFHTaa 1С»

я В таблицах используются следупсие сокращения: Sol-Splnacia oleracea, Ъra-Zea mais, Taa-íriticun aastivu^, Psa-Pisum sativum, Nta-Nicotiana tahacum, Gna-Glucine max, lîpo-iiarcnantia polyrorpha, E?r- Eugiene gracilis, Ana-Arabas га, Syn-Synechococcus, 2со-Escherichia coli, Bre-Bacillus TO?at6rnim. Tfca-Tnenrophilic bacterium, Rru-Rho--ácsplnllmn rubrun, Sce-Saccharomyces cerevisiae, Kfr-Kluyvercmyces frazil is, ■inir Aspergillus rudulans, Her-.'Jour os рога сгазза, Pet-Petunia.

СЕН хлоропластов (или митохондрий) разных объектов. Эти данные свидетельствуют о том, что в процесса эволюции хлоропластов и ми-тохоцдркй растений рекомбинации их геномов по генам СЗН АТР-син-тазы не происходит. Одной из причин биологической нецелесообразности. рекомбинации по этому и другим белок-кодирующим генам является отличие ген-этического кода геномов хлоропластов и ядра от кода генома митохондрий.

Выводы

1. По физико-химическим свойствам, выбранным в качества тестов на изменчивость (рЯ-зазксимость, удельная активность, специфичность к двухвалентным катионам, модификация активности неорганическими анионами и этанолом, молекулярная масса субъединиц), растворимый фактор хлоропластов проявляет внутривидовую и межвидовую консервативность. Среда родов семейства злаковых изменчивость по исследуемым характеристикам незначительна. Мембранный компонент не оказывает существенного влияния на проявление тестируемых свойств. Полный ферментный комплекс в СХЧ отлетается от стц более Ш13К1СД уровнем удельной активности, меньшей степенью активацда этанолом и менее выраженными модифицирующими эффектами тиоционата и сульфита.

2. Изменчивость физико-химических свойств ферментного комплекса в растворимом и мембраносвязанном состоянии проявляется у представителей, относящихся к разным семействам. Наиболее вариабельными показателями при- этом является чувствительность к этанолу' и двухвалентным катионам. Различия в модифицирующем влиянии анионов касаются лишь степени выраженности эффекта у некоторых объектов, pli-оптимум при этом не изменяется, молекулярная масса основных каталитических субъедшиц различается незначительно.

3. Аминокислотные последовательности CEA и СЕВ содержат по 3 участка, высококонсервативных в процесса эволюции: 148-18?, 260303, 312-332 аминокислотные остатки в аминокислотной последовательности CEA и I5I-2I3, 267-372, 395-449 аминокислотные остатки в аминокислотной последовательности СЕВ. Произошедшие в них аминокислотные замены могут обусловливать изменчивость изученных свойств фермента у исследованных объектов в первую очередь.

4. Показано, что 6 аминокислотных замен в CEA ячменя, 17 замен в СЗА кукурузы, а такке 14 замен б СЕВ кукурузы ко оказываэт существенного влияния на проявление исследуемых физико-химических свойств. Для АТРазы из хлоропластов шпината, табака, гороха, tío-.

(Зов, а также Synschococcus и АааЪаепа , разлзгчауцейся по большинству изученных в работе биохимических показателей, могут быть существенны-следующие замены: в AÎI CSA спината А 32ч, к У7& ; гороха - р 264, н 26? ,v 302 ; табака - Р 264, s 352 . Дгл АЛ Syne-chococcua И Anabaena-I 320 , А 324 , S З^б , Т 373 , Ь 3?8 . В ЛЛ СЕВ ппината -N 157 , т 314 , s 31а ; табака -е 154 , т 314 , е 31а ; гороха -Т 308 , Т 314 , Е 318 , T 303 . Для АЛ Synechococcua и Anabae-na - G 299 , G 293 , D 295 . V- 296 .

5. Ha основе анализа гомологии субъедишщ данного йорментно-го комплекса показано, что гены АТР-синтазьг хлоропластов произошли от генома цианобактерии Syneohoooccus , а гены АТ?~с:снтазы т.я-тохондрий растительных и :кивотных клеток от генома nhodospirillun rubrun или близкородственных им видов. 3 процессе эзолзции реком-бинацг-я медду геномами хлоропластов и :.:итохондр5й: по генам АТ?-синтазы не происходит.

Сп;:сок г?абот. опубликовактшх по тема лпссетгганнл :

1. Карпенюк Т.А. Исследозшше свойств АТ£азы хлоропласт оз мягкой

_ пиенкцы // К0!п;ере:ап'л молодых ученых и специалистов КазГ/ игл. С.М.Кирова. Естествошшо науки: Тез. докл. - Алма-Ата, 1989. С. 151*.

2. Карпенш Т.А., Пономарежо C.B., Иваненко А.Т. -2::з:п'.о-х::мнчес-кие свойства и Функция аминокислотных остатков полипептндов // Вестник АК КазССР. - 1989. - !Ь 12. - С. 56-59.

3. Пономлренко C.B., Иваненко А.Т., Карпенюк Т.А. Анализ нуклоо-тцдных последовательностей геноз субъедикпц раствор:п.'.ого сопрягающего фактора хлоропластов и его фпзико-хзг.игческк свойств // Молекулярные механизмы генетических процессов: Тез. докл. /II всес. спмпоз. 27-30 марта 1990. - M, 1990, С. 51.

4. Карпенюк Т.А. Изме:шпзость свойств АТРазы хлоропластоз пшеницы и ячменя // 1У всес. ко1форенция молодых ученых по физиологии растительной клетки: Тез. докл. - "гшск, 1990. С. 112.

5. Пономаронко C.B., Карпе нкж Т.А., Иващенко А.Т. Изучение внутривидовой изменчивости свойств АТ*>азы хлоропластов пяткой пзе-шщы и ячменя // Изв. АН КазССР. - 1990. - 3. - С. 38-42.

6. Габдулхаева Б.Б., Карпенюк Т.А., Утеулин К.Р., Пономаренко С. В., Иващэнко А.Т. Изменчивость свойств АТОазы хлоропластов и митохондрий злаков // Проблемы теоретической и прикладной генетики в Казахстане: Тез. дом. респ. конф. 18-22 ноября 1990. - Алма-Ата, 1990. С. 63-64.

7. Поно.'лрэнко С.З., Карпеюзк Т.А., Ивзденко А.Т. Анализ нукле-отидной последовательности генов и свойств субъединиц АТФ-спнтазы хлоропластов. Там же, - С. 64-65,

8. Иваненко А.Т., Карпенюк Т.А., Пономаранко С.В. Изучение в онтогенезе АТ5-синтазы, кодируемой геномами едра и хлоропластов // Генетика развития: Тез. докл. II всес. совещания. 29-31 авг . 1990. - Ташкент, 1990. Т. I (часть I). С. 62-63.

9. Иващенко А.Т., Карпенюк Т.А., Пономаренко С.В. АТР-синтаза бактерий, митохондрий и хлоропластов. Свойства мембранного сектора // Биохимия. - 1991. - Т. 56. - Вып. 3. - С. 406419.

10. Tokaobaeva G.A., ICarpenjuk Т.А., Goncharova A.V., Ропоша-renko S.V., Ivashchenko A.Т. Hydrophobic properties of chlo-roplast coupling fuctor of high plants // 20th Meeting of the FEBS. August 19-24-. 1990. - Budapest, 1990. P. 329.

11. Пономаренко С.В., Гончарова А.В., Карпенюк Т.А. Изменчивость некоторых свойств АТЗазы хлоропластов культурных растений // Физиология и биохимия культурных растений. - в печати.

ПсДписано в печать 26.03.91.

Формат 60x84 I/I6. Бум.

тип.й 2. Печать-офсетная. Усл.печ.лД,К.

Усл.кр,-отт.5,8. Уч.-изд.л.0,8. Тираж 100.

Заказ 296.

Типография КазННИШ; 460120,г.Алка-Ата,Кирова,221.