Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование механизма увеличения следовой деполяризации миелинизированных нервных волокон при блокировании калиевых каналов тетраэтиламмонием и 4-аминопиридином

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кузнецова, Ирина Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Следовая деполяризация нервных волокон.

1.2. Типы калиевых каналов миелинизированных нервных волокон.

1.3. Электрическая активность возбудимых мембран при блокировании калиевых каналов тетраэтиламмонием.

1.4. Влияние 4-аминопирдина на электрическую активность возбудимых мембран.

Глава 2. Объект и методы исследования.

2.1. Морфология нервного волокна.

2.2. Методика препаровки и отведения потенциала действия одиночного нервного волокна.

2.3. Используемые аппаратура и растворы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 3. Влияние тетраэтиламмония и 4-аминопиридина на следовую деполяризацию миелинизированных нервных волокон.

3.1. Изменение амплитуды и продолжительности следовой деполяризации миелинизированных нервных волокон при блокировании калиевых каналов тетраэтиламмонием

3.2,Особенности изменения следовой деполяризации мелинизированных нервных волокон при блокировании калиевых каналов 4-аминопиридином.

3.3. Влияние анодической и католической поляризации на следовую деполяризацию, увеличенную блокаторами калиевых каналов.

Глава 4. Влияние натрий-переносящей системы на следовую деполяризацию, увеличенную блокаторами калиевых каналов.

4.1. Влияние уменьшения и увеличения концентрации ионов Na+ в наружном растворе на следовую деполяризацию, увеличенную блокаторами калиевых каналов

4.2. Влияние замены ионов Na+ в наружном растворе ионами Li+ и холинхлори-да на следовую деполяризацию, увеличенную блокаторами калиевых каналов

4.3. Влияние блокаторов натриевых каналов новокаина и тетродотоксина на следовую деполяризацию, увеличенную блокаторами калиевых каналов.

Глава 5. Влияние калий-переносящей системы на следовую деполяризацию, увеличенную блокаторами калиевых каналов.

5.1. Изменение амплитудно-временных характеристик следовой деполяризации при совместном действии блокаторов калиевых каналов тетраэтиламмония и 4-аминопиридина.

5.2. Влияние уменьшения и увеличения концентрации ионов К+ в наружном растворе на следовую деполяризацию, увеличенную блокаторами калиевых каналов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование механизма увеличения следовой деполяризации миелинизированных нервных волокон при блокировании калиевых каналов тетраэтиламмонием и 4-аминопиридином"

Актуальность темы исследования. Следовая деполяризация (СД), следующая за спайковой частью потенциала действия (ПД) и представляющая собой медленное возвращение поляризации к исходному уровню, описана во многих возбудимых тканях (Gasser H.S., 1935; Lorente de No R., 1947; Franken-haeuser В., Hodgkin A.L., 1956; Каталымов Л.Л., 1974 a, 6; David G. et al., 1995; Azouz R., Jensen M.S., Yaari Y., 1996). Относительно происхождения СД в различное время высказывались «калиевая гипотеза» (Shanes A.M., 1950), связывающая возникновение СД с аккумуляцией выходящих во время возбуждения ионов К+ в интерстициальной жидкости нерва, «натриевая гипотеза» (Shanes A.M., 1953; Kocsis J.D., Waxman S.G., 1987; Вергун O.B., 1994; Honmou et al. 1994), объясняющая возникновение СД с сохранением после спайка следового натриевого тока, «хлорная гипотеза» (Shanes A.M., et al., 1953), связывающая возникновение СД с повышением проницаемости мембраны для ионов хлора, «гипотеза об аккумуляции ионов калия» (Frankenhaeuser В., Hodgkin A.L., 1956; Greengard P., Straub R.W., 1958; Narahashi Т., Yamasaki Т., 1960; Каталымов JI.Д., 1974 а), согласно которой выходящие во время возбуждения ионы К+ аккумулируются в примембранном пространстве нервного волокна и определяют возникновение длительной СД, «ёмкостная гипотеза» (Barrett E.F., Barrett J.N., 1982; Blight A.R., Someya S., 1985), связывающая генерацию СД с разрядом ёмкости через интернодальный миелин.

Значительное увеличение СД получено при блокировании калиевых каналов тетраэтиламмонием (ТЭА) и 4-аминопиридином (4-АП) (Каталымов Л.Л., 1976; Scappaticci К.А., Barrett E.F., 1981; Kocsis J.D., Waxman S.G., 1987; Barrett E.F. et al., 1988; Honmou O. et al., 1994; David J. et al., 1995). Увеличение СД при блокировании калиевых каналов с позиции наиболее признанной гипотезы аккумуляции ионов калия в примембранном пространстве перехвата Ранвье (Каталымов Л.Л., 1974 а) не находит удовлетворительного объяснения. Ряд авторов

Kocsis J.D., Waxman S.G., 1987; Honmou O. et al., 1994) объясняет возникновение продолжительной СД при блокировании калиевых каналов активацией медленного натриевого тока. Вклад этого натриевого тока в увеличении СД, однако, подкреплён лишь косвенными доказательствами - возникновением повторных ответов и устранением СД при полном подавлении ПД тетродотокси-ном. Кроме того, имеются сведения (Schmidt Н., Stampfli R., 1966; Bromm В. et al., 1978; Schonle С., Koppenhofer E., 1981) о способности блокаторов калиевых каналов замедлять процесс натриевой инактивации, что может способствовать продлению натриевого тока. Всё это указывает на необходимость изучения роли натриевого тока в эффекте увеличения СД миелинизированных нервных волокон блокаторами калиевых каналов.

Рассмотренные объяснения увеличения СД при блокировании калиевых каналов ТЭА и 4-АП в значительной степени являются не доказанными. Между тем, выяснение механизма увеличения СД при блокировании калиевых каналов позволило бы приблизиться к пониманию природы СД, функциональная значимость которой в деятельности нервной системы многообразна и подтверждена многими авторами. Со следовой деполяризацией связано возникновение супернормальной фазы (Erlanger I., Gasser Н., 1937; Lorento de No R., 1947), феномен тетанизированного одиночного ответа (Введенский Н.Е., 1886; Каталы-мов J1.JT., 1976). Кроме этого, СД привлекается для объяснения циркуляции импульсов в нейрональных сетях и механизма кратковременной памяти (Соколов Е.Н., 1967; Kandel Е., Abel Т., 1995).

Цель исследования. Исследовать механизм, лежащий в основе увеличения следовой деполяризации миелинизированных нервных волокон при блокировании калиевых каналов тетраэтиламмонием и 4-аминопиридином.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние блокаторов калиевых каналов тетраэтиламмония и 4-аминопиридина на амплитудно-временные характеристики следовой деполяризации миелинизированных нервных волокон.

2. Исследовать зависимость увеличения следовой деполяризации при блокировании калиевых каналов от уровня мембранного потенциала.

3. Исследовать возможное участие натриевого тока при уменьшении и увеличении концентрации ионов Na+ в наружном растворе, а также блокировании натриевых каналов в механизме увеличения СД под влиянием тетраэтиламмония и 4-аминопиридина.

4. Исследовать роль калиевого тока в увеличении СД блокаторами калиевых каналов тетраэтиламмонием и 4-аминопиридином путём изменения концентрации ионов калия в наружном растворе и при совместном действии ТЭА и 4-АП.

Научная новизна. Подтверждено, что блокаторы калиевых каналов ТЭА и 4-АП увеличивают СД как по амплитуде, так и длительности. Амплитуда и длительность СД под влиянием ТЭА увеличились на 107,25 % и 43,01 %, а под влиянием 4-АП - на 130,64 % и 58,64 %, соответственно. Степень увеличения СД при совместном действии ТЭА и 4-АП зависит от последовательности применения блокаторов к нервному волокну: СД увеличивается в 3 раза, если первым используется ТЭА и в 5 раз - если первым применяется 4-АП, что определяется свойством быстрых и медленных калиевых каналов активироваться при разных уровнях мембранного потенциала. СД, увеличенная блокаторами калиевых каналов, не изменяется при замене наружных ионов натрия на холин или литий, варьировании концентрации ионов натрия в наружном растворе и блокировании натриевых каналов новокаином и тетродотоксином.

Положения, выносимые на защиту:

1. Блокирование калиевых каналов ТЭА и 4-АП увеличивает следовую деполяризация миелинизированных нервных волокон и является потенциал-зависимым: усиливается при гиперполяризации мембраны и ослабляется при её деполяризации.

2. Следовая деполяризация миелинизированных нервных волокон под влиянием агентов, уменьшающих натриевый ток, не претерпевает достоверных изменений.

3. Ослабление калиевого тока при увеличении концентрации ионов калия в наружном растворе приводит к значительным изменениям СД, увеличенной блокаторами калиевых каналов. СД, увеличенная 4-АП, уменьшается в гиперкалиевом растворе, а СД, увеличенная ТЭА, наоборот, ещё более увеличивается.

Научно-практическая значимость определяется тем, что расшифровка механизма увеличения следовой деполяризации при блокировании калиевых каналов ТЭА и 4-АП позволит приблизиться к пониманию, каким образом бло-каторы калиевых каналов улучшают передачу возбуждения через повреждённый демиелинизацией участок нервного волокна. Кроме этого, проведённые исследования позволяют углубить существующие представления об ионно-мембранных механизмах следовых потенциалов миелинизированных нервных волокон.

Апробация работы. Основные результаты доложены на ежегодных внутривузовских конференциях Ульяновского государственного педагогического университета имени И.Н. Ульянова (1997 - 2002 г.г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 работ. 9

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста, включает 29 рисунков. Состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 200 источников, из которых 179 иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Кузнецова, Ирина Владимировна

выводы

1. Блокирование калиевых каналов тетраэтиламмонием (ТЭА) увеличивает амплитуду следовой деполяризации миелинизированных нервных волокон на 107,25 %, длительность на 43,01 %; блокирование 4-аминопиридином (4-АП) - на 130,64 %, и на 58,64 % соответственно. Совместное блокирование калиевых каналов ТЭА и 4-АП приводит к 35 - кратному увеличению амплитуды и 1,5-2 - кратному увеличению продолжительности следовой деполяризации.

2. На фоне блокирования калиевых каналов ТЭА и 4-АП гиперполяризация мембраны анодным током вызывает дополнительное усиление СД, а снижение мембранного потенциала катодным током - её ослабление, что, возможно, связано с изменением количества медленно инактиви-рующихся натриевых каналов, вовлекаемых в активность при де- и гиперполяризации мембраны.

3. Полученные нами экспериментальные данные не позволяют связать увеличение СД при блокировании калиевых каналов с возможным сохранением следового натриевого тока после спайка, поскольку следовая деполяризация не изменяется при замене ионов натрия в наружном растворе на ионы лития и непроникающие ионы холина, варьировании концентрации ионов натрия в наружном растворе и блокировании натриевых каналов новокаином и тетродотоксином.

4. Удовлетворительное объяснение увеличению СД при блокировании калиевых каналов может быть дано лишь в рамках калиевой гипотезы, объясняющей возникновение СД аккумуляцией выходящих во время потенциала действия ионов калия в примембранном пространстве.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

После одиночного потенциала действия (ПД) нерва и нервных волокон регистрируется продолжительная следовая деполяризация (Gasser H.S., 1935; Lorente de No R., 1947; Greengard P., Straub R.W., 1958; Stein R.B., 1966; Ката-лымов Л.Л., 1974 a; Swaldow H.A. et al., 1976; Yoshimura M. et al., 1987; Stock-bridge N., 1988). Относительно происхождения следовой деполяризации (СД) в литературе высказано несколько альтернативных гипотез. Наиболее признанной и обоснованной гипотезой является гипотеза об аккумуляции ионов калия в примембранном пространстве перехвата Ранвье (Каталымов Л.Л., 1974 а, б, 1976). С точки зрения этой гипотезы увеличение СД под влиянием блокаторов калиевых каналов ТЭА и 4-АП (Каталымов Л.Л., 1976; Scappaticci К.A., Barrett

E.F., 1981; Kocsis J.D., Waxman S.G., 1987; Barrett E.F. et al., 1988; Honmou O. et al., 1994; David J. et al., 1995) невозможно на данный момент объяснить. Для объяснения увеличения СД под влиянием блокаторов калиевых каналов в 1987 году (Kocsis J.D., Waxman S.G., 1987), а затем в 1994 (Honmou О. et al., 1994) выдвинута «натриевая гипотеза», согласно которой б локаторы калиевых каналов приводят к активации медленного натриевого тока, который и определяет возникновение продолжительной СД. Кроме этого, имеются сведения (Schmidt

F.O., Stampfli R., 1966; Bromm В. et al., 1978; Schonle C., Koppenhofer E., 1981), что блокаторы калиевых каналов помимо того, что ослабляют калиевый ток (1К), способствуют замедлению натриевой инактивации. Привлечение натриевой гипотезы для объяснения увеличения СД под влиянием блокирования калиевых каналов и возможность блокаторов калиевых каналов замедлять процесс натриевой инактивации, вступает в явное противоречие с данными о том, что СД определяется только ионами калия (Каталымов Л. Л., 1974 а, б, 1995 а).

С целью выяснения того, какие же из основных потенциал-образующих ионов (калия или натрия) участвуют в эффекте увеличения СД под влиянием блокаторов калиевых каналов, исследовали влияние калий-переносящей и натрий-переносящей систем на СД, увеличенную тетраэтиламмонием (ТЭА) и 4-аминоииридином (4-АП). Блокаторы калиевых каналов ТЭА и 4-АП, ослабляя калиевый ток, воздействуют на различные типы калиевых каналов: ТЭА блокирует как быстрые, так и медленные калиевые каналы, а 4-АП - только быстрые (Dubois J.M., 1981, 1983). Эти различия в действии блокаторов используются для идентификации быстрых и медленных калиевых каналов и установления их функции.

В настоящей работе установлено, что блокаторы калиевых каналов ТЭА и 4-АП в различной степени увеличивают СД миелинизированных нервных волокон. ТЭА увеличивает амплитуду СД на 107,25%, а длительность - на 43,01%), в то время как 4-АП увеличивает амплитуду СД на 130,64%, а длительность - на 58,64%).

Первый блок экспериментов был посвящен исследованию, каким образом изменяется СД в зависимости от продолжительности действия ТЭА и 4-АП и их концентрации.

Добавление в нормальный раствор Рингера 10 ммоль ТЭА привело к растягиванию ПД - его длительность увеличивается до 1,70+0,21 мс после 5 минут действия, и с 1,70+0,21 до 2,50+0,33 мс - после 10 минут действия блокатора. Амплитуда СД увеличилась через 5 минут действия ТЭА с 2,07+0,37 до 3,46+0,40 мВ, а длительность - с 193,75±30,72 до 270,08±31,64 мс, После 10 минут действия ТЭА амплитуда СД дополнительно увеличилась и составила 4,29±0,89 мВ; длительность СД увеличилась до 277,08+35,44 мс.

В серии экспериментов с использованием различных (10, 20 ммоль) концентрацией ТЭА получены следующие результаты, на основе которых был построен график «доза-ответ». Приложение к нервному волокну ТЭА в концентрации 10 ммоль привело к увеличению амплитуды (с 2,41+0,58 до 3,45+0,56 мВ) и длительности (с 227,14+6,67 до 330,61+7,58 мс) СД. Увеличение концентрации ТЭА в наружном растворе до 20 ммоль ведёт к дополнительному возрастанию амплитуды (с 3,45+0,56 до 3,79+0,67 мВ) и длительности (с

330,61±7,58 до 371,43±7,49 мс) СД. Таким образом, ТЭА в концентрации 10 ммоль увеличил амплитуду СД в 1,43 раза и её длительность в 1,46 раза, а дополнительное блокирование калиевых каналов 20 ммоль ТЭА увеличило амплитуду и длительность СД только в 1,10 и 1,12 раза соответственно. Исходя из этих данных можно говорить, что блокирование калиевого тока при повышении концентрации блокатора в 2 раза приводит к сравнительно небольшому увеличению СД. Это говорит о том, что значительная часть каналов уже заблокирована при 10 ммоль, а введение в раствор 20 ммоль ТЭА может лишь блокировать оставшуюся часть каналов, что находит отражение в истощении эффекта ТЭА на величину СД.

Итак, блокатор калиевых каналов ТЭА, не изменяя амплитуды ПД, приводит к растягиванию ПД, а также увеличению амплитуды и длительности СД. Эффект ТЭА на СД зависит от времени действия и концентрации блокатора, что выражается в увеличении её амплитуды и длительности.

В эксперименте с другим блокатором калиевых каналов - 4-АП выявлены аналогичные изменения СД в зависимости от времени действия 4-АП и его концентрации. Через 5 минут после смены нормального раствора Рингера на такой же раствор с 2 ммоль 4-АП произошло растягивание ПД - его длительность увеличилась с 1,08±0,17 до 2,88±0,37 мс. Амплитуда СД увеличилась с 2,27±0,47 до 4,29±0,56 мВ, а её длительность с 187,00±8,57 до 300,94+7,93 мс. После 10-минутного действия блокатора амплитуда и длительность СД увеличились на 31,24% (с 4,29±0,56 до 5,63±0,59 мВ), а длительность - на 30,00% (с 300,94±7,93 до 391,22110,41 мс).В 40 % случаев на фоне растянутой нисходящей фазы ПД и увеличенной СД возникали повторные ответы. В 2 % случаев наблюдали спонтанную активность, выражающуюся в самопроизвольном возникновении ПД.

В следующей серии экспериментов изучали сравнительные изменения СД под влиянием двух различных (1 и 2 ммоль) концентраций 4-АП. Результаты этой серии экспериментов, также как и в случае ТЭА, сведены в график «дозаответ». Приложение к нервному волокну 4- АП в концентрации 1 ммоль привело к увеличению амплитуды (с 2,17±0,42 до 3,33±0,51 мВ) и длительности (с 183,33+5,87 до 305,6±7,31) СД. Двукратное увеличение концентрации 4-АП (до 2 ммоль) дополнительно увеличило амплитуду (с 3,33±0,51 до 4,05+0,27) и длительность (с 305,60±7,31 до 344,40±9,03) СД. Таким образом, 4-АП в концентрации 1 ммоль увеличивает амплитуду СД в 1,53 раза, а её длительность - в 1,67 раза. Дополнительное блокирование калиевых каналов 2 ммоль 4-АП привело к дополнительному увеличению СД - в 1,22 раза по амплитуде и в 1,13 раза - по длительности.

Сравнивая результаты опытов с использованием различных концентраций 4-АП с аналогичной серией по ТЭА, очевидно сходство в блокировании калиевого тока в зависимости от концентрации блокаторов. Как и в случае ТЭА, двукратное увеличение концентрации 4-АП в растворе Рингера не может уже привести к столь значительному увеличению СД. Это позволяет говорить, что большая часть каналов блокируется при первом применении блокатора, а та часть каналов, которая осталась незаблокированной, блокируется большими концентрациями блокаторов.

Итак, блокатор калиевых каналов 4-АП, не изменяя амплитуду ПД, приводит к увеличению длительности ПД, увеличению амплитуды и длительности СД, а также возникновению повторных ответов (в 40 % случаев) и спонтанной активности (в 2 % случаев). Эффекты 4-АП на СД зависят от продолжительности действия и концентрации блокатора. По мере увеличения продолжительности действия 4-АП и при повышении его концентрации в наружном растворе СД увеличивается.

Следующие серии экспериментов посвящены выяснению того, каким образом будет изменяться СД, увеличенная ТЭА и 4-АП при поляризации мембраны анодическим и катодическим токами. Добавление к нормальному раствору Рингера 10 ммоль ТЭА привело к типичному расширению ПД (с 1,30 до 2,78 мс) и увеличению амплитуды (с 1,43 до 3,04 мВ) и длительности (с 193,78 до 305,55 мс) СД. После приложения к нервному волокну гиперполяризующего тока возросла амплитуда ПД (до 96,43 мВ). СД также увеличилась как по своей амплитуде (с 3,04 до 4,46 мВ), так и длительности (с 305,55 до 501,29 мс). Последующее приложение к нервному волокну деполяризующего тока привело к значительному уменьшению высоты ПД (до 82,14 мВ). Продолжительность ПД уменьшилась на 0,56 мс. Наряду с этим уменьшилась СД. Её амплитуда снизилась до 2,14 мВ, а длительность сократилась до 300,07 мс.

Сходное влияние оказывали анодическая и католическая поляризации на амплитудно-временные характеристики ПД и СД нервного волокна, предварительно обработанного другим блокатором калиевых каналов - 4-АП. После добавления в нормальный раствор Рингера 4-АП (2 ммоль) ПД не изменился по своей амплитуде, но произошло характерное увеличение его длительности, а также возрастание амплитуды (с 1,40 до 3,57 мВ) и длительности (с 199,70 до 333,33 мс) С Д. Поляризация нервного волокна, обработанного 4-АП, католическим током вызвала снижение амплитуды ПД (с 87,51 до 80,36 мВ), а также амплитуды (с 3,57 до 1,07 мВ) и длительности (с 333,33 до 138,88 мс) СД. Поляризация этого же волокна анодическим током, наоборот, привела к увеличению амплитуды и длительности как ПД, так и СД. Амплитуда ПД увеличилась с 87,51 до 98,22 мВ; амплитуда и длительность СД возросли с 3,57 до 4,29 мВ и с 333,33 до 405,55 мс, соответственно.

Результаты опытов с действием анодической и католической поляризацией на СД, увеличенную ТЭА и 4-АП, объясняются потенциал-зависимым блокированием калиевых каналов, которое усиливается при гиперполяризации и ослабляется при деполяризации. Эти изменения СД также могли бы быть связаны с изменением количества медленно инактивирующихся натриевых каналов, вовлекаемых в активность де- и гиперполяризацией, возможность чего проверена в следующей части работы.

Итак, поляризация нервного волокна с заблокированными ТЭА или 4-АП калиевыми каналами приводит к существенным изменениям амплитудновременных характеристик ПД и СД. При поляризации катодным током ПД и СД уменьшаются как по своей амплитуде, так и длительности. Гиперполяризация анодным током приводит к увеличению амплитуды и длительности и ПД, и СД.

Второй блок экспериментов посвящен изучению СД, увеличенной ТЭА и 4-АП, при изменении величины натриевого тока (INa). Уменьшение INa производили путём уменьшения [Na]o, замены наружных ионов Na+ на ионы лития и холина, а также при помощи блокирования натриевых каналов новокаином и тетродотоксином (ТДТ). Увеличение INa производили с помощью увеличения внеклеточной концентрации натрия. Цель этих экспериментов - выявление возможной роли натриевого тока в эффекте увеличения СД блокаторами калиевых каналов.

В первой серии экспериментов изучали поведение СД, увеличенной блокаторами калиевых каналов ТЭА и 4-АП, при повышении и снижении концентрации ионов Na+ в омывающем нервное волокно растворе Рингера.

Добавление к нормальному раствору Рингера 10 ммоль ТЭА привело к типичной картине - продлению ПД и увеличению амплитуды и длительности СД. Повышение концентрации ионов Na+ в наружном растворе до 222 ммоль привело к увеличению амплитуды (с 57,33±3,61 до 60,00±4,17 мВ) и длительности (с 2,03±0,19 до 2,28±0,18 мс) ПД. Увеличение концентрации ионов Na+ в наружном растворе с 10 ммоль ТЭА привело к недостоверному (р<0,05) увеличению СД. СД увеличилась лишь на 11,54% (с 2,81±0,31 до 3,14±0,23 мВ) по амплитуде и на 11,30 % (с 205,56±7,94 до 228,78±9,21 мс) по длительности. Сходная динамика изменений ПД и СД в гипернатриевом растворе наблюдалась в экспериментах с другим блокатором калиевых каналов - 4-АП. Добавление к нормальному раствору Рингера 2 ммоль 4-АП привело к увеличению длительности ПД (с 1,02±0,11 до 2,00±0,16 мс). СД увеличилась по амплитуде с 1,09±0,47 до 2,17±0,39 мВ, а по длительности - с 100,00±6,98 до 213,89±8,05 мс. Смена нормального раствора Рингера с 2 ммоль 4-АП на гипернатриевый раствор (222 ммоль Na+) с таким же содержанием 4-АП привела к уже наблюдаемому в предыдущей серии опытов увеличению амплитуды и длительности ПД. Амплитуда и длительность ПД увеличились на 1,33 мВ и 0,21 мс, соответственно. Увеличение концентрации ионов натрия в наружном растворе привело к недостоверным (р<0,05) изменениям СД. Она увеличилась по амплитуде на 0,34 мВ, а по своей длительности - на 19,48 мс.

Тот факт, что усиление INa путём повышения [Na+] существенно не изменяет амплитудно-временные характеристики СД, увеличенной блокаторами калиевых каналов, говорит в пользу того, что INa не принимает участия в генерации СД.

Уменьшение внеклеточной концентрации ионов натрия следующим образом сказалось на СД, увеличенной блокированием калиевых каналов ТЭА и 4-АП. Снижение концентрации ионов Na+ на 20 % от первоначальной привело к недостоверным (р<0,05) изменениям как ПД, так и СД. Аналогичные изменения ПД и СД в гипонатриевом растворе получены в экспериментах с другим блока-тором калиевых каналов - 4-АП. Проведение этой серии опытов показало, что уменьшение натриевого тока путём 20%-удаления ионов Na+ из раствора Рингера не вызвало достоверных изменений СД, увеличенной блокаторами калиевых каналов.

Таким образом, проведение серий экспериментов со снижением и увеличением концентрации ионов Na+ в наружном растворе убедительно демонстрируют, что INa не вносит вклада в генерацию продолжительной СД миелинизи-рованных нервных волокон при блокировании калиевых каналов ТЭА и 4-АП.

В следующей серии экспериментов мы решили проверить, как будет вести себя СД, увеличенная блокаторами калиевых каналов, при замене ионов Na+ на Li+ или холин. Вначале изучали СД, увеличенную блокаторами калиевых каналов ТЭА и 4-АП, при полной замене ионов Na+ на Li+. Добавление к нормальному раствору Рингера 10 ммоль ТЭА привело к расширению ПД (на 38,20 %) и увеличению СД. Амплитуда СД увеличилась с 1,37±0,45 до 1,97±0,49 мВ, а её длительность - с 140,00±7,85 до 203,23±8,62 мс. После полной замены ионов натрия на литий в растворе Рингера, содержащем 10 ммоль ТЭА, не произошло сколько-нибудь заметных изменений. ПД и СД по своей амплитуде недостоверно уменьшилась с 59,62±4,39 до 55,39±4,17 мВ и с 1,97±0,49 до 1,86±0,47 мВ соответственно. Замена ионов натрия в наружном растворе на Li+, содержащем другой блокатор калиевых каналов - 4-АП, также не приводила к существенным изменениям параметров ПД и СД.

В следующей серии экспериментов производили 50 % замену наружных ионов Na+ на непроникающие ионы холина в растворе Рингера либо с 10 ммоль ТЭА, либо с 2 ммоль 4-АП. Как и в предыдущей серии опытов, каких-либо значительных изменений ни ПД, ни СД не наблюдалось.

Итак, замена наружных ионов натрия на Li+ или холин не сказывается на амплитудно-временных характеристиках СД, что подтверждает идею о неспособности ионов Na+ создавать продолжительную СД.

Следующим шагом в проверке участия натриевого тока в СД, увеличенной ТЭА и 4-АП, стали эксперименты с применением тетродотоксина и новокаина.

В первой серии экспериментов изучали характер изменений СД, увеличенной ТЭА и 4-АП, при блокировании натриевых каналов тетродотоксином (ТДТ). Добавление к нормальному раствору Рингера 10 ммоль ТЭА привело к типичному изменению ПД и С Д. Длительность ПД увеличилась с 0,94±0,17 до 1,30+0,24 мс. СД увеличилась по амплитуде с 1,27±0,30 до 1,83±0,52 мВ, а по длительности - с 117,65±9,39 до 158,82±9,46 мс. ТДТ добавленный в раствор Рингера содержащий 10 ммоль ТЭА, в концентрации 1-10"6 моль привёл к значительному снижению амплитуды ПД - на 76,63 % (с 79,00±6,27 до 18,46±3,82), в то время как СД уменьшилась всего на 45,36 % (с 1,83±0,52 до 1,00±0,33 мВ) по амплитуде и на 40,74 % (с 158,82±9,46 до 94,11±8,59 мс) по своей длительности. Сходные результаты были получены в опытах с воздействием ТДТ на СД, увеличенную 4-АП. ТДТ в этих экспериментах снизил амплитуду ПД на

28,95 % (с 73,08±6,99 до 51,92±6,65), а амплитуду и длительность СД - на 17,14 % (с 5,66+0,36 до 4,69±0,31мВ) и 8,78 % (с 453,03±7,38 до 413,35±7,57 мс) соответственно.

В следующей серии экспериментов изучали поведение СД, увеличенной ТЭА и 4-АП, под влиянием другого блокатора натриевых каналов - новокаина. Вначале исследовали оказываемое новокаином влияние на СД, увеличенную ТЭА. ТЭА в концентрации 10 ммоль привёл к увеличению длительности ПД (с 1,08±0,14 до 2,16+0,23 мс), а также амплитуды (с 1,10+0,28 до 1,74+0,53 мВ) и длительности (с 145,67+7,15 до 323,19+7,74 мс) СД. Добавление к раствору Рингера, содержащему 10 ммоль ТЭА, новокаина в концентрации 1-Ю"4 г/мл привело к существенному снижению амплитуды ПД - на 37,70 % (с 71,00+7,59 до 44,23+4,29 мВ). СД изменялась при этом в меньшей мере: её амплитуда снизилась на 27,10 % (с 1,77+0,53 до 1,27+0,45 мВ), а продолжительность - на 22,65 % (с 323,14+7,74 до 250,00+7,23).

Оказываемый новокаином эффект на ПД и СД нервных волокон, предварительно обработанных 4-АП, оказался сходным с полученным в серии опытов с ТЭА. ПД нервного волокна в растворе Рингера, содержащем 2 ммоль 4-АП, после добавления в раствор МО"4 г/мл новокаина значительно уменьшился по амплитуде (на 55,37 %). В то же время СД уменьшилась лишь на 36,19 % по своей амплитуде и на 23,46 % по длительности.

Итак, проведённые опыты показали, что СД, увеличенная блокаторами калиевых каналов, при ослаблении INa новокаином и ТДТ изменяется в меньшей степени, чем ПД, что убедительно свидетельствует в пользу того, что натриевый ток не принимает участия в эффекте увеличения СД при блокировании калиевых каналов.

Обобщая полученные данные, можно сказать, что ни одна из серий опытов блока работы, посвящённого исследованию возможного участия в создании продолжительной СД при блокировании калиевых каналов ТЭА и 4-АП, не доказала участия ионов натрия в генерации СД.

Третий блок экспериментов был посвящен изучению СД, увеличенной ТЭА и 4-АП, при изменении величины калиевого тока (1к). Уменьшение 1к производили путём совместного применения ТЭА и 4-АП, а также с помощью уменьшения концентрационного градиента для ионов калия. Увеличение 1к производили путём увеличения концентрационного градиента для ионов К+.

Как известно (Dubois J.M., 1981), ТЭА и 4-АП блокируют различные типы калиевых каналов. ТЭА блокирует как быстрые, так и медленные калиевые каналы, в то время как 4-АП - только быстрые. Было интересно выяснить, каким образом разная последовательность применения этих блокаторов, подавляющих различные компоненты калиевого тока, скажется на амплитудно-временных характеристиках СД. Иными словами, существует ли разница в эффекте увеличения СД, если сначала заблокировать быстрые, а затем медленные калиевые каналы, и наоборот.

В первой серии экспериментов сначала блокировали все типы калиевых каналов с помощью ТЭА, а затем добавляли блокатор быстрых калиевых каналов - 4-АП. В этой серии опытов амплитуда ПД в нормальном растворе Рингера составила 71,76±3,31 мВ, а его длительность - 1,10±0,06 мс. Амплитуда и длительность СД оказались равными 1,44±0,09 мВ и 159,2617,38 мс, соответственно. После добавления в нормальный раствор Рингера 10 ммоль ТЭА увеличилась длительность ПД (с 1,10±0,06 до 1,85±0,11 мс). Под влиянием ТЭА СД увеличилась по своей амплитуде с 1,44±0,09 до 2,87±0,24 мВ, а по длительности - с 159,26±7,38 до 370,47±12,41 мс. Дополнительное введение в раствор Рингера, содержащий 10 ммоль ТЭА, 4-АП в концентрации 2 ммоль привело к следующим изменениям. Произошло резкое растягивание ПД - его длительность увеличилась на 135,68 % (с 1,85+0,11 до 4,36±0,34 мс), а также увеличилась СД. Её амплитуда возросла на 63,07 % (с 2,87±0,24 до 4,68±0,39 мВ), а длительность - на 35,57 % (с 370,47±12,41 до 502,25117,64 мс). Дополнительное растягивание нисходящей фазы ПД и увеличение СД после применения 4

АП может быть объяснено блокированием той части быстрых калиевых каналов, которая не была заблокирована ТЭА.

Удивительные результаты были получены в серии опытов, где сначала применяли 4-АП, а затем ТЭА. Блокирование быстрых калиевых каналов 4-АП вызвало растягивание ПД на 61,96 % (с 2,76±0,07 до 4,47+0,14) и колоссальное увеличение СД. Её амплитуда увеличилась на 108,27 % (с 3,87±0,24 до 8,06±0,30 мВ), а длительность - на 98,86 % (с 422,59±14,19 до 840,35±31,37 мс).

Возник вопрос, с чем же связано столь большое увеличение СД, если ТЭА применяется после 4-АП. Для объяснения этого факта исходили из имеющихся в литературе данных (Dubois J.M., 1981, 1983), что для активации медленных калиевых каналов требуется генерация более чем одного ПД - медленные каналы активируются при меньших значениях МП, нежели быстрые. Исходя из этого, становится понятным, почему ТЭА имеет меньший эффект в растягивании ПД и увеличении СД, когда применяется первым. В нормальных условиях генерация одного ПД не может активировать медленные калиевые каналы и ТЭА блокирует доступные для него быстрые калиевые каналы. В случае, когда первым применяется 4-АП, блокирующий быстрые калиевые каналы, генерируется резко растянутый ПД с большой СД. Это приводит к тому, что конечный уровень деполяризации мембраны во время такого ПД значительно выше по сравнению с нормальным ПД. Такой "ненормальный" ПД может быть уподоблен, как минимум, двум ПД, которых уже достаточно, чтобы создать необходимый уровень деполяризации мембраны для активации медленных калиевых каналов. Видимо, это и является причиной того, что ТЭА начинает так сильно увеличивать СД: чем больше калиевых каналов активировано, тем больше их может быть заблокировано ТЭА.

Итак, совместное действие блокаторов калиевых каналов ТЭА и 4-АП приводит к 3-кратному увеличению амплитуды следовой деполяризации миелинизированных нервных волокон в случае, если первым применяется ТЭА и к 5-кратному увеличению, если первым используется 4-АП.

Следующая серия экспериментов была посвящена эффекту гиперкалиевого раствора на СД, увеличенную блокаторами калиевых каналов ТЭА и 4-АП. Как и в предыдущей серии опытов, сначала исследовали эффект гиперкалиевого раствора на СД, увеличенную 4-АП. 4-АП, введённый в нормальный раствор Рингера, в концентрации 2 ммоль привёл к типичному увеличению длительности ПД (с 1,20±0,12 до 2,50± 1,75 мс) и СД. СД увеличилась по своей амплитуде на 2,3 мВ (с 1,27+0,11 до 3,57±0,25 мВ), а по длительности на 231,50 мс (с 281,00±9,07 до 512,50±10,28 мс). Смена раствора, содержащего 2 ммоль 4-АП, на гиперкалиевый привела к значительному уменьшению ПД и СД. Амплитуда ПД упала с 81,43±4,03 до 64,2913,29 мВ. СД при этом уменьшилась на 2,37 мВ по амплитуде и на 231,25 мс по длительности. Принципиально такая же картина наблюдается, когда гиперкалиевым раствором действовали на СД в норме -не увеличенную блокаторами калиевых каналов. Увеличение концентрации ионов калия в наружном растворе вызывало существенное уменьшение ПД и СД. Данное действие гиперкалиевого раствора связано с деполяризацией мембраны.

Следующая серия экспериментов была направлена на выяснение действия гиперкалиевого раствора на СД, увеличенную ТЭА. В нормальном растворе Рингера регистрируется ПД амплитудой 75,00±3,89 мВ и длительностью 1,21±0,14 мс. Амплитуда СД составила 1,40+0,31 мВ, а длительность -98,57+5,39 мс. После добавления в омывающий раствор 10 ммоль ТЭА произошло характерное расширение ПД (с 1,21±0,14 до 2,78+0,24 мс) и увеличение амплитуды (с 1,40+0,31 до 2,50+0,38 мВ) и длительности (с 98,57+5,39 до 187,94±6,72 мс) СД. ТЭА в условиях избытка ионов К+ в наружном растворе Рингера, в отличие от 4-АП, продолжает увеличивать СД. Так, амплитуда СД увеличилась на 0,41 мВ (с 2,50±0,38 до 2,91 ±0,40 мВ), а длительность - на 105,37 мс (с 187,94±6,72 до 293,31±8,24 мс)

С чем же связано, что смена раствора Рингера нормального солевого состава с 10 ммоль ТЭА на гиперкалиевый с таким же содержанием ТЭА приводит к дальнейшему росту СД. Ответ заключается в том, что ТЭА снимает вызванную калием деполяризацию мембраны, не позволяя тем самым МП снижаться в гиперкалиевом растворе. Способность ТЭА снимать калиевую деполя-риацию мембраны установлена многочисленными авторами на различных объектах (Luttgau Н., 1960; Ходоров Б.И., Беляев В.И., 1965; Каталымов JI.JI., 1976).

Усиление калиевого тока путём устранения наружных ионов калия привело к следующим эффектам на СД, увеличенную блокаторами калиевых каналов. Вначале исследовали влияние снижения концентрационного градиента на СД, увеличенную 4-АП. В данной серии опытов амплитуда ПД составила 66,17±5,67 мВ, а его длительность - 1,04±0,11 мс. Амплитуда и длительность СД равны 1,37±0,14 мВ и 100,04±8,57 мс, соответственно. Добавление к нормальному раствору Рингера 2 ммоль 4-АП вызвало увеличение длительности ПД на 0,52 мс (с 1,04±0,11 до 1,56±0,14 мс). 4-АП вызвал увеличение СД: её амплитуда возросла с 1,37±0,14 до 2,93±0,46 мВ, а длительность - с 100,04±8,57 до 327,78±9,06 мс. Смена раствора Рингера, содержащего 2 ммоль 4-АП, на бескалиевый раствор с тем же количеством 4-АП не повлияла на СД. Иными словами, бескалиевый раствор никаким образом не сказался на процессе блокирования калиевых каналов 4-АП. Самое интересное заключается в том, что бескалиевый раствор оказывает совершенно другое действие на СД в норме, не увеличенную блокаторами калиевых каналов. Удаление ионов калия из наружного раствора приводит к возникновению следующей сразу же после спайковой части ПД кратковременной следовой гиперполяризации, которая переходит в продолжительную СД, длящуюся 102,78±5,54 мс.

Чем же объясняется разница в действии бескалиевого раствора на СД в норме и увеличенную 4-АП. Ситуация в норме объясняется тем, что увеличение концентрационного градиента для К+ приводит к кратковременной СГ. Такой кратковременной СГ недостаточно, чтобы произвести полную реполяризацию мембраны - СД, следующая за СГ, длится вплоть до 102,78±5.54 мс, обеспечивая постепенное восстановление МП к исходному уровню. Почему же в случае

СД, увеличенной блокаторами калиевых каналов, не происходит если не появления на её месте СГ, то хотя бы её уменьшения. Ответ, по всей видимости, заключается в том, что усиление концентрационного градиента для ионов калия путём их устранения из наружного раствора крайне недостаточно для противодействия эффекту блокирования калиевых каналов. Иными словами, усиление выходящего потока ионов калия не может выбить блокатор из калиевого канала. Сходное выше описанному поведение наблюдали и в серии, где исследовалось влияние бескалиевого раствора на СД, увеличенную ТЭА. Устранение ионов калия из омывающего нервное волокно раствора Рингера с 10 ммоль ТЭА также не изменило амплитудно-временные характеристики ПД и СД.

Итак, устранение ионов калия из омывающего волокно раствора не сказывается на процессе блокирования калиевых каналов - СД, увеличенная ТЭА и 4-АП, не изменяется в бескалиевом растворе. Избыток ионов калия, напротив, приводит к значительным изменениям СД, увеличенной блокаторами калиевых каналов.

Таким обраном, последний блок исследований, посвящённый изучению СД, увеличенную ТЭА и 4-АП, в условиях ослабления и усиления калиевого тока, свидетельствует об определяющей роли ионов калия в генерации СД мие-линизированнх нервных волокон. Действительно, наблюдаемое дополнительное увеличение СД при совместном действии ТЭА и 4-АП, можно объяснить предположением, что резкое ослабление выходящего калиевого тока ведёт к чрезвычайно медленной диффузии ионов калия через плохо проницаемые структуры перехвата Ранвье, что приводит к затягиванию во времени процесса аккумуляции ионов калия. Затягивание во времени аккумуляции ионов калия в примембранном пространстве перехвата Ранвье и является, по всей вероятности, причиной значительного увеличения СД при блокировании калиевых каналов ТЭА и 4-АП.

110

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кузнецова, Ирина Владимировна, Ульяновск

1. Беляев В.И. Изменение электрической активности одиночного перехвата Ранвье изолированного нервного волокна под влиянием новокаина // Бюлл. экспер. биолог, и мед. 1964. - Т. 8. - С. 24 - 27.

2. Боровягин B.JI. Некоторые данные электромикроскопических исследований ультраструктуры периферических нервных волокон лягушки // Цитология. 1960. - №2. - С. 138- 143.

3. Введенский Н.Е. О соотношении между раздражением и возбуждением при тетанусе. Полн. собр. соч., Л., 1886. (цитировано по: Каталымов Л.Л., 1976).

4. Вергун О.В. Следовая деполяризация миелинизированных нервных волокон: эффекты фармакологической модуляции натриевых и калиевых каналов: Дис. . канд. биолог, наук. Ульяновск, 1994. 177 с.

5. Вислобоков А.И., Крылов Б.В., Акоев Г.Н. Преимущественное блокирование 4-аминопиридином каналов быстрого калиевого тока нейронов моллюска// Физиологический журнал СССР им. И.М. Сеченова. 1983. -Т. LXIX. - № 11. - С. 1420- 1426.

6. Гелетюк В.И., Казаченко В.Н. Дискретный характер проводимости калиевого канала в нейронах прудовика // Биофизика. 1983 б. - Т.28. -С. 994 - 998.

7. Гелетюк В.И., Казаченко В.Н. Механизм блокирования К+ каналов тетра-этиламмонием // Биофизика. 1987. - Т. XXXII. - Вып. 5. - С. 859 - 873.

8. Гелетюк В.И., Казаченко В.Н. Одиночный калий-зависимый С1-канала в нейронах моллюска: множественность состояний проводимости // Доклады АН СССР. 1983 а. - Т.268. - С. 1245 - 1247.

9. Каталымов Л.Л. Особенности следовой деполяризации нерва и одиночного нервного волокна лягушки // Нейрофизиология. 1974 а. - Т. 6. -№10.-С. 532-541.

10. Каталымов Л.Л. Влияние ингибиторов натриевой проницаемости (новокаина и тетродотоксина) на следовую деполяризацию миелинизированных нервных волокон // Физиологический журнал им. И.М. Сеченова. -1995 а. -Т 81. №9.-С. 127- 133.

11. Каталымов Л.Л. Ионы натрия не участвуют в генерации следовой деполяризации миелинизированных нервных волокон // Доклады Академии Наук. 1995 б. - Т. 341 -№6. - С. 839 - 841.

12. М.Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1980. - 292с.

13. Машковский М.Д. Лекарственные средства. В двух томах. Т.1. Харьков: Торсинг, 1997.-С. 195.

14. Соколов Е.Н. Исследование памяти на уровне отдельного нейрона // Журн. высш. нервн. деят. 1967. - Т. 17. - №5. - С. 909 - 922.

15. Хилле Б. Ионная селективность Na+- и К+- каналов в мембранах нервного волокна. // Мембраны: ионные каналы. М.: Мир, 1975. - С. 25 - 97.

16. Хилле Б. Ионные каналы в возбудимых мембранах. Современное состояние и биофизические аспекты проблемы. // Мембраны: ионные каналы. -М.: Мир, 1978.-С. 9-24.

17. Ходоров Б.И. Проблема возбудимости. Л.: Медицина, 1975. - 302 с.

18. Ходоров Б.И., Беляев В.И. Физиологический электротои одиночного перехвата Ранвье в условиях воздействия ионов тетраэтиламмония // Биофизика клетки. 1965. - С. 159 - 174.

19. Adams D.J., Gage P.W. Ionic currents in response to membrane depolarization in an Aplysia neuron // J. Physiol. 1979. - Vol. 289. - P. 115 - 141.

20. Arenson M.S., Nistri A. The effects of potassium channel blocking agents on the responses of in vitro frog motoneurones to glutamate and other excitatory amino acids: an intracellular study //Neuroscience (Oxford). 1985. - Vol. 14. -P. 317-325.

21. Armstrong C.M. Time course of TEA-induced anomalous rectification in squid giant axon // J. Gen. Physiol. 1966. - Vol. 50. - P. 491.

22. Armstrong C.M. Inactivation of the potassium conductance and related phenomena caused by quaternary ammonium ion injection in squid axons // J. Gen. Physiol. 1969. - Vol. 54. - P. 553-575.

23. Armstrong C.M. Interaction of TEA ion derivates with the potassium channels of giant axons // J. Gen. Physiol. 1971. - Vol. 58. - P. 413 - 437.

24. Armstrong C.M. Potassium pores of nerve and muscle membranes // Membranes. Series of advances. 1975. - Vol. 3.-P. 325-358.

25. Armstrong C.M. A closer picture of the R channel gate from ion trapping experiments // J. Gen. Physiol. 1997. - Vol. 109. - P. 523 - 524.

26. Armstrong C.M., Binstock L. Anomalous rectification in the squid axon injected with TEA // J. Gen. Physiol. 1965. - Vol. 48. - P. 859 - 872.

27. Armstrong C.M., Hille В. The inner quaternary ammonium ion receptor in potassium channels of the node of Ranvier // J. Gen. Physiol. 1972. - Vol. 59.-P. 388-400.

28. Armstrong C.M., Loboda A. A model for 4-aminopyridine action on К channels: similarities to tetraethylammonium ion action // Biophys. J. 2001. -Vol. 81.-P. 895-904.

29. Azouz R., Jensen M.S., Yaari Y. Ionic basis of spike after-depolarization and burst generation in adult rat hippocampal CA1 pyramidal cells // J. Physiol. -1996.-Vol. 492.- P. 211 -223.

30. Barrett E.F., Barrett J.N. Intracellular recording from vertebrate myelinated axons: mechanism of the depolarizing afterpotential // J. Physiol. 1982. -Vol. 323.-P. 117-144.

31. Barrett E.F., Morita K., Scappaticci K.A. Effects of tetraethylammonium on the depolarizing after-potential and passive properties of lizard myelinated axons // J. Physiol. 1988. - Vol. 402. - P. 65 - 78.

32. Benatar M. Neurological potassium channelopathies // Quart. J. Med. 2000. -Vol. 93.- P.-787-797.

33. Bergman C. Seuil d^exitation et regimes d'activite du noeud de Ranvier. These doctorate. Paris, 1969. - 74 S.

34. Bergman J. Analyse experimentale et interpretation de l'hyperpolarisation post-tetsnique de grenouille. Paris, 1973. - 184 S.

35. Bergman C., Stampfli R. Difference de permeabilite des fibres nerveuses myelinisees sensorielles et motorices a l'ion potassium // Helv. Physiol. Acta. -1966.-Vol. 24.-P. 247-258.

36. Bethge E.W., Bohuslavizki K.H., Hansel W., Kneip A., Koppenhofer E. Effects of some potassium channel blockers on the ionic currents in myelinated nerve // Gen. Physiol. Biophys. 1991. - Vol. 10. - P. 225 - 244.

37. Bezanilla F., Armstrong С. M. Negative conductance caused by entry of sodium and cesium ions into the potassium channels of squid axons // J. Gen. Physiol. 1972. - Vol. 60. - P. 588 - 608.

38. Bezanilla F., Perozo E., Papazian D., Stefani E. Molecular basis of gating charge immobilization in Shaker potassium channels // Science. 1991. - Vol. 254.-P. 679-683.

39. Black J.A., Kocsis J.D., Waxman S.G. Ion channel organization of the myelinated fibers // TINS. 1990. - Vol. 13. -№2. - P. 48 - 54.

40. Blight A.R., Someya S. Depolarizing afterpotentials in myelinated axons of mammalian spinal cord //Neuroscience. 1985. - Vol. 15. - P. 1 - 12.

41. Bordey A., Sontheimer H. Differential inhibition of glial K+ currents by 4-AP // J. Neurophysiol. 1999. - Vol. 82. - P. 3476 - 3487.

42. Bostock H., Sears T.A., Sherratt R.M. The effects of 4-aminopyridine and tet-raethylammonium ions on normal and demyelinated mammalian nerve fibres // J. Physiol. 1981. - Vol. 313. - P. 301 - 315.

43. Bostock H., Sherratt R.M., Sears T.A. Overcoming conduction failure in demyelinated nerve fibres by prolonging action potentials // Nature (Lond.). -1978. Vol. 274. - P. 385 - 387.

44. Bowe C.M., Kocsis J.D., Waxman S.G. Differences between mammalian ventral and dorsal spinal roots in response to blockade of potassium channels during maturation // Proc. R. Soc. B. 1985. - Vol. 224. - P. 355 - 366.

45. Bowe C.M., Kocsis J.D., Waxman S.G. The association of the supernormal period and the depolarizing afterpotential in myelinated frog and rat sciatic nerve. //J. Neuroscience. 1987. - Vol. 21. - P. 585-593.

46. Bromm В., Ochs G., Schwarz F.R. Is tetraethylammonium chloride a specific blocker of the potassium channel? // J. Physiol. 1978. - Vol. 284. - P. 150 -151.

47. Brunton T.L., Cash J.T. Contributions to our knowledge of the connection between chemical constitution physiological action, and antagonism // Proc. R. Soc. (Lond.).- 1884.-Vol. 175.-P. 197-214.q

48. Burke W., Katz В., Machne X. The effect of quaternary ammonium ions on crustacean nerve fibres // J. Physiol. 1953. - Vol. 122. - P. 588 - 598.

49. Castle, N.A., Slawsky M.T. Characterization of 4-aminopyridine block of the transient outward K+ current in adult rat ventricular myocytes // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1993. - Vol. 264. - P. 1450 - 1459.

50. Chandler W.K., Meves H. Voltage clamp experiments on internally perfused giant axons // J. Physiol. 1965. - Vol. 180. - P. 788 - 820.

51. Chen F.S.P., Fedida D. On the mechanism by which 4-aminopyridine occludes quinidine block of the cardiac K+ channel, hKvl.5. // J. Gen. Physiol. 1998. -Vol. 111.-P. 539-554.

52. Chiu S.Y., Ritchie J.M. Evidence for the presence of potassium channels in the internode of frog myelinated nerve fibres // J. Physiol. 1982. - Vol. - 322. -P. 485 -501.

53. Chiu S.Y., Ritchie J.M. On the physiological role of internodal potassium channels and the security of conduction in myelinated nerve fibres // Proc. R. Soc. Lond. 1984. - Vol. 220. - P. 415 - 422.

54. Chiu S.Y., Ritchie J.M., Rogard R.B., Stagg D. A quantitative description of membrane currents in rabbit myelinated nerve // J. Physiol. 1979. - Vol. -292.-P. 149- 166.

55. Chuman M.A., Schauf C.L., Davis F.A., Stefoski D. Selective blockade of components of potassium activation in Myxicola axon // Experientia. 1987. -Vol. 43.-P. 169-171.

56. Clay J.R. Quaternary ammonium ion blockade of IK in nerve axons revisited. Open channel block vs. state independent block // J. Membrane Biol. 1995. -Vol. 147.-P. 23-24.

57. David G., Modney В., Scappaticci K.A., Barrett J.N., Barrett E.F. Electrical and morphological factors influencing the depolarizing after-potential in rat and lizard myelinated axons // J. Physiol. 1995. - Vol. 489. - P. 141- 157.

58. Devaux J., Gola M., Jacquet G., Crest M. Effects of K+ channel blockers on developing rat myelinated CNS axons: identification of four types of K+ channels // J. Neurophysiol. 2002. - Vol. 87. - P. 1376 - 1385.

59. Dubois J.M. Evidence for the existence of three types of potassium channels in the frog Ranvier node membrane // J. Physiol. 1981. - Vol. 318. - P. - 297 -316.

60. Dubois J.M. In Aminopyridines and Similarly Acting Drugs (eds Lechat P., Thesleff S., Bowman W.C.). Oxford: Pergamon, - 1982. - P.81- 83 (цитировано no: Howe J.R., Ritchie J.M., 1991).

61. Dubois J.M. Potassium current in the frog node of Ranvier // Prog. Biophys. molec. Biol. 1983. - Vol. 42. - P. 1 - 20.

62. Eng D.L., Gordon T.R., Kocsis J.D., Waxman S.G. Development of 4-AP and sensitivities in mammalian myelinated nerve fibers // Neurohysiol. 1988. -Vol. 60.-P. 2168-2179.

63. Erlanger I., Gasser H. Elektrical signes of nervous activity. University of Pennsylvania, Press Philadelphia, 1937.

64. Fain G. L., Quandt F.N. The effects of tetraethylammonium and cobalt ions on responses to extrinsic current toad rools // J. Physiol. 1980. - Vol. 303. - P. 515 -533.

65. Fatt P., Katz B. The electrical properties of crustacean muscle fibres // J. Physiol. 1953. - Vol. 120. - P. 171 -204.

66. Frankenhaeuser В., Hodgkin A.L. The after effects of impulses in the giant nerve fibres of Loligo // J. Physiol. 1956. - Vol. 131. - P. 341 - 376.

67. Frankenhaeuser В., Huxley A.F. The action potential in the myelinated nerve fibre of Xenopus laevis as computed on the basis of voltage clamp data // J. Physiol. 1964. - Vol. 171. - P. 302 - 315.

68. French R.J, Shoukimas J.J. Blockage of squid axon potassium conductance by internal tetra-N-alkylammonium ions of various size // Biophys. 1981. - Vol. 34.-P. 271-291.

69. Fujuhara K., Miyoshi T. The effects of 4-aminopyridine on motor evoked potentials in multiple sclerosis // J. Neurol. Sci. 1998. - Vol. 159. - P. 102 -106.

70. Gasser H.S. Changes in nervepotentials produced by rapidly repeated stimuli and their relation to the responsiveness of nerve to stimulation // Amer. J. Physiol.- 1935.-Vol. 111.- P. 35-50.

71. Gasser H.S., Richards C.H., Grundfest H. Properties of the nerve fibers of slowest conduction in the frog // Amer. J. Physiol 1938. - Vol. 123. - P. 299 -318.

72. Gillespie J.I. Voltage-dependent blockade of the delayed potassium current in skeletal muscle by 4-aminopyridine // J. Physiol. (Gr. Brit.)- 1977. Vol. 273. - 64 P. - 65 P.

73. Gillespie J.I., Hutter O.F. Proceedings: the actions of 4-aminopyridine on the delayed potassium current in skeletal muscle fibres // J. Physiol. (Camb.). -1975,- Vol.252. 70P-71P.

74. Golenholen K., Madrek K. Slow automatic activity in squid axons induced by 4-aminopyridine // J. Physiol. 1978. - Vol. 284. - P.69 - 70.

75. Greengard P., Straub R.W. After potentials in mammalian nonmyelinated nerve fibres // J. Physiol. 1958. - Vol. 144. - P. 442 - 462.

76. Grissmer S. Properties of potassium and sodium channels in frog internode // J. Physiol. 1986.-Vol. 381.-P. 119-134.

77. Grundfest H., Gasser H.S. Properties of mammalian nerve fibers of slowest conduction // Amer. J. Physiol.- 1938. Vol. 123. - P. 307 - 318.

78. Guy H.R., Conti F. Pursuing the structure and function of voltage-gated channels I I Trends Neurosci. 1990. - Vol. 13. - P. 201 - 206.

79. Haj-Dahmane S., Andrade R. Ionic Mechanism of the slow afterdepolarization induced by muscarinic receptor activation in rat prefrontal cortex // J. Neuro-physiol. 1998. - Vol. 80. - P. 1197 - 1210.

80. Hartmann H.A., Kirsch G.E., Drewe J.A., Taglialatela M., Joho R.h., Brown A.M. Exchange of conduction pathways between two related K+ channels // Science (Wash. DC). 1991. - Vol. - P. 942 - 945.

81. Hille B. Pharmacological analysis of the ionic channels of nerve. Thesis of Rockefeller University. New York, 1967 a. - 183 S.

82. Hille B. The selective inhibition of delayed potassium currents in nerve by tet-raethylammonium ion // J. Gen. Physiol. 1967 6. - Vol.50. - P. 1287 - 1302.

83. Hille B. Potassium channels in myelinated nerve: selective permeability to small cations // J. Gen. Physiol. 1973. - Vol. 61. - P. 669 - 686.

84. Hille B. Ionic channels of nerve: questions for theoretical chemists // Biosys-tems. 1977. - Vol. 8. - P. 195 - 199.

85. Hille B. Ionic channels in excitable membranes. Current problems and biophysical approaches // Biophys. J. 1978. - Vol. 22. - № 2. - P. 283 - 294.

86. Hille B. Schwarz W. K-channels in excitable cells asmultion pores // Brain. Res. Bull. 1979.-Vol. 4. - № 1.-P. 159 - 162.

87. Hlubek M.D., Cobbett P. Differential effects of K+ channel blockers on frequency-dependent action potential broadening in supraoptic neurons // Brain Res. Bull. 2000. - Vol. 53. - P. 203 - 209.

88. Hodgkin A. L., Huxley A.F. Currents carried by sodium and potassium ions through the membrane of the giant axon of loligo // J. Physiol. 1952 a. - Vol. 116.-P. 449-472.

89. Hodgkin A.L., Huxley A.F. A quantitative description of membrane current and its application to conduction and excitation in nerve // J. Physiol. 1952 6. -Vol. 117.-P. 500-544.

90. Hodgkin A.L., Keynes R.D. Active transport of cations in giant axons from Sepia and Loligo // J. Physiol. 1955 a. - Vol. 128. - P. 28.

91. Hodgkin A.L., Keynes R.D. The potassium permeability of a giant nerve fibre // J. Physiol. 1955 6. - Vol. 128. - P. 61 - 88.

92. Holmgren M., Jurman M.E., Yellen G. N- type inactivation and the S4 S5 region of the Shaker K+ channel // J. Gen. Physiol. - 1996. - Vol. 108. - P. 195 -206.

93. Holmgren M., Smith P., Yellen G. Trapping of organic blockers by closing of voltage-dependent K+ channelsA evidence for a trap door mechanism of activation gating // J. Gen. Physiol. 1997. - Vol. 109. - P. 527 - 535.

94. Honmou O., Utzschneider D.A., Rizzo M.A., Bowe C.M., Waxman S.G., Kocsis J.D. Delayed depolarization and slow sodium currents in cutaneous afferents. // J. Neurophysiol. 1994. - Vol. 71. - P. 1627- 1637.

95. Hoshi Т., Zagotta W.N., Aldrich R.W. Biophysical and molecular mechanisms of Shaker potassium channel inactivation // Science (Wash DC). -1990.-Vol. 250,- P. 533 -538.

96. Howe J.R., Ritchie J.M. On the active form of 4-aminopyridine: block of K+ currents in rabbit Schwann cell // J. Physiol. 1991. - Vol. 433. - P. 183 -205.

97. Ikeda S.R., Korn S .J. Influence of permeating ions on potassium channel block by external tetraethylammonium // J. Physiol. 1995. - Vol. 486.2. - P. 267-272.

98. Jensen M.S., Azouz R., Yaari Y. Spike after-depolarization and burst generation in adult rat hippocampal CA1 pyramidal cells // J. Physiol. 1996. -Vol. 492.-P. 199-210.

99. Jirounek P., Chardonnens E., Brunet P.C. Afterpotentials in nonmyelinated nerve fibers // J. Neurophysiol. 1991. - Vol. 65. - P. 860 - 873.

100. Jordan S.N. Beitrage zur Kenntnis der Pharmakologischen Gruppe des Muscarins // Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 1877. - Vol. 8. - P. 15 - 30.

101. Kandel E., Abel T. Neuropeptides, adenylyl cyclase, and memory storage (comment) // Science. 1995. - Vol. 268. - № 5212. - P. 825- 826.

102. Kao C.Y. Pharmacology of tetrodotoxin and saxitoxin // Fed. Proc. -1972.-Vol. 31.- P. 1117-1123.

103. Katsuki Y., Yanagisawa K., Kanzaki J. Tetraethylammonium and tetrodotoxin: effects on cochear potentials // Science. 1966. - Vol. 151. - P. 1544 - 1545.

104. Katz R., Miledi R. Estimates of quantal content during 'chemical potentiation' of transmitter release // Proc. Roy Soc. London. Ser. B. 1979. -Vol. 205.-P. 369-378.

105. Kenyon J.L., Gibbons W.R. 4-Aminopyridine and the early outward current of sheep cardiac Purkinje fibers // J. Gen. Physiol. 1979. - Vol. 73. - P. 139-157.

106. Kirsch G.E., Taglialatela M., Brown A.M. Internal and external TEA block in single cloned K+ channels // Am. J. Physiol. 1991. - Vol. 261. - P. С 583 -590.

107. Kirsch G.E., Yeh J.Z., Oxford G.S. Modulation of aminopyridine block of potassium currents in squid axon // Biophys. J. 1986. - Vol. 50. - P. 637644.

108. Kirsh G.E., Narahashi T. 3,4-diaminopyridine. A potent new potassium channel blocker // Biophys J. 1978. - Vol. 22. - P. 507 - 512.

109. Kirsh G.E., Narahashi T. Site of action and active form of aminopyridi-nes in squid axon membranes // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1983. - Vol. 226. -P. 174 - 179.

110. Kishi Y., Aratani M., Fukuyama Т., Nakatsubo F., Goto T. Synthetic studies on tetrodotoxin and related compounds. 3. A stereospecific synthesis of an equivalent of acetylated tetrodamine. // J. Am. Chem. Soc. 1972. - Vol. 94.- P. 9217.

111. Kita Т., Kita H., Kitai S.T. Effects of 4-aminopyridine (4-AP) on rat neostriatal neurons in an in vitro slice preparation // Brain Research. 1985. -Vol. 361.-P. 10-18.

112. Klee M.R. Tetraethylammonium and 4-aminopyridine distinguish between two types of Aplysia neurons // J. Physiol. 1978. - Vol. 284. - 125P.

113. Kocsis J.D., Bowe C.M., Waxman S.G. Different effects of 4-aminopyridine on sensory and motor fibers: pathogenesis of paresthesias // Neurology. 1986. - Vol. 36. - P. 117 - 120.

114. Kocsis J.D., Eng D.L., Gordon T.R., Waxman S.G. Functional differences between 4-aminopyridine and tetraethylammonium-sensitive potassium channels in myelinated axons // Neuroscience Letters 1987. - Vol. 75. - P. 193- 198.

115. Kocsis J.D., Ruiz J.A., Waxman S.G. Maturation of mammalian myelinated fibers: changes in action-potential characteristics following 4-aminopyridine application // J. Neurophysiol. 1983. - Vol. 50. - №2. - P. 449-463.

116. Kocsis J.D., Waxman S.G. Absence of potassium conductance in central myelinated axons // Nature. 1980. - Vol. - 287. - P. 348 - 349.

117. Kocsis J.D., Waxman S.G. Long-term regenerated nerve fibres retain sensitivity to potassium channel blocking agents // Nature. 1983. - Vol. 304. - P. 640 - 642.

118. Kocsis J.D., Waxman S.G. Ionic channel organization of normal and regenerating mammalian axons // Progress in Brain Research. 1987. - Vol. 71. -P. 89-101.

119. Koppenhofer E. TEA-Wirkung auf die Yonenstrome marhaltiger Ner-venfasern Xenopus laevis // Pflugers Archiv. 1966. - Vol. 289. - P. R. 9.

120. Koppenhofer E. Die Wirkung ven TEA auf die Membranstrome Ranvi-erscher Schnurringe von Xenopus laevis // Pflugers Archiv. 1967. - Vol. 293. -P. 34-55.

121. Koppenhofer E., Vogel W. Wirkung von Tetrodotoxin und TEA ander innerseite der Schnurringsmembran ven Xenopus laevis // Pflugers Archiv. -1969.-Vol. 313.-P. 361 -380.

122. Larsson H.P., Baker O.S., Dhillon D.S., Isacoff E.Y. Transmembrane movement of the Shaker K+ channel S4 // Neuron. 1996. - Vol. 16. - P. 387 -397.

123. Lehmann, H. -J.: Die Nervenfaser. In v. Mollendorff-Bargmanns Hand-buch der mikroskopischen Anatomie, Bd. IV/4., 1959. 515 S.

124. Loboda A., Armstrong C.M. Resolving the gating charge movement associated with late transitions in К channel activation // Biophys. J. 2001. -Vol. 81.-P. 905-916.

125. Lorento de No R. A study of nerve physiology. Studies from the Rock-feller Institute for medical Research. New York, 1947. - P. 131-132.

126. Lorente de No R. On the effect of certain quaternary ammonium ions upon frog nerve // J. Cell. сотр. Physiol. 1949. - Vol. 33. - Suppl. P. 1 -231.

127. Lundh H. Effects of 4- aminopyridine on neuromuscular transmission // Brain Research. 1978. - Vol. 153. - P. 307 - 318.

128. Lundh H., Thesleff S. The mode of action of 4-aminopyridine and gua-nidine on transmitter release from motor nerve terminals // Eur. J. Pharmacol. -1977.-Vol. 42.-P. 411 -412.

129. Luttgau H. Das Kalium Transportsystem am Ranvier - Knoten isoliertermarkhaltiger Nervenfasern // Pflugers Archiv. - 1960. - Vol. 271. - P. 613 -633.

130. Mandrek K., Gollenhofen K. Analysis of 4-aminopyridine-induced au-matic activity in the giant axon of the squid // Pflugers Arch. 1977. - Vol. 368.-P.R30.

131. Meves H. Die Nachpotentiale isolierter markhaltiger Nervenfasern des Frosches bei Einzelreizung 11 Pfliig. Arch. ges. Physiol. 1960. - Vol. 271. -P. - 655 - 679.

132. Meves H. Die Nachpotentiale isolierter markhaltiger Nervenfasern des Frosches bei tetanischer Reizung // Pfliig. Arch. ges. Physiol. 1961. - Vol. 272. - P.-336-359.

133. Meves H., Pichon Y. Effects of 4-aminopyridine on the potassium current in internally perfused giant axons of the squid // J. Physiol. 1975. - Vol. 251.-60-62 P.

134. Meves H., Pichon Y. The effect of internal and external 4-aminopyridine on the potassium currents in intracellularly perfused squid giant axons // J. Physiol. 1977. - Vol. 268.-P. 511 -532.

135. Molgo J. Voltage-clamp analysis of the sodium and potassium currents in skeletal muscle fibres treated with 4-aminopyridine // Experienta. 1978. -Vol. 34.-P. 1275- 1277.

136. Molgo J., Lemeignan M. and Lechat P. Analysis of the action of 4-aminopyridine during repetitive simulation at the neuromuscular junction // Eur. J. Pharmacol. 1979. - Vol. 53. - P. 307 - 311.

137. Molgo J., Lemeignan M., Lechat P. Effects of 4- aminopyridine at the frog neuromuscular junction // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1977. - Vol. 203. -P. 653-663.

138. Narahashi Т., Yamasaki T. Mechanism of the after-potential production in the giant axons of the cockroach // J. Physiol. 1960. - Vol. 151. - P. 75 -88.

139. Pelhate M., Hue В., Pichon Y., Chanelet J. Action de la 4-aminopyridine sur la membrane de Гахопе isole d'insecte // C. r. hebd. Seanc. Acad. Sci. 1974. - Vol. 278D. - P. 2807 - 2809.

140. Pelhate M., Pichon Y. Selective inhibition of potassium current in the giant axon of the cockroach // J. Physiol. 1974. - Vol. 242. - P. 90 - 91.

141. Perozo E., Papazian D.M., Stefani E., Bezanilla F. Gating currents in Shaker K+ channels. Implications for activation and inactivation models // Bio-phys.- 1992.-Vol. 62.-P. 161-171.

142. Plant T.D., Standen N.B. The action of 4-aminopyridine (4-AP) on the early outward current (IA) in Helix aspersa neurones // J. Physiol. 1982. -Vol. 332.- 18 P.

143. Poulter M.O., Padjen A.L. Intracellular application of 4-aminopyridine and tetraethylammonium decreases accommodation in frog myelinated axons // Soc. Neurosci. Abstr. 1988. - Vol. 14. - P. 299.

144. Poulter M.O., Padjen A.L. Different voltage-dependent potassium conductances regulate action potential repolarization and excitability in frog myelinated axon // Neuroscience. 1995. - Vol.68. - P. 497 - 504.

145. Puil E., Miura R.M., Spigelman I. Consequences of 4-aminopyridine applications to trigeminal root ganglion neurons // J. Neurophysiol. 1989. -Vol. 62.-P. 810-820.

146. Radicheva N.I., Kolev V.B. 4-aminopyridine and tatraethylammonium-induced changes in action potentials of unmyelinated Axons // Acta Physi-ologica et Pharmacologica Bulgarica. 1992. - Vol. 18. - P. 21-26.

147. Rasband M.N., Schwarz T.L., Ellisman M.N., Schachner M., Novakovic S.D., Shrager P. Shaker-type potassium channel (Kvl.l) clustering in remyeli-nating rat axons // Soc. Neurosci Abstr. 1996. - Vol. 22. - P. 50.

148. Rasband M.N., Shrager P. Ion channel sequestration in central nervous system axons // J. Physiol. 2000. - Vol. 525. - №1. - P. - 63 - 73.

149. Rasband M.N., Trimmer J.S., Schwarz T.L., Levinson S.R., Ellisman M.N., Schachner M., Shrager P. Potassium channel distribution, clustering, and function in remyelinating rat axons // J. Neuroscience. 1998. - Vol. 18. -№1. - P. 36-47.

150. Reid G., Scholz A., Bostock H., Vogel W. Humans axons contain at least five types of voltage-dependent potassium channel // J. Physiol. 1999. - Vol. 518.- P. 681 -696.

151. Ritchie J.M., Straub R.W. The hyperpolarization which follows activity in mammalian non-medullate fibres // J. Physiol. 1957. - Vol. 136. - P. 80 -97.

152. Robertson J.D.: The ultrastructure of nodes of Ranvier in frog nerve fibres // J.Physiol. 1957. - Vol. 137. - P. 8.

153. Roper J., Schwarz J.R. Heterogeneous distribution of fast and slow potassium channels in myelinated rat nerve fibres // J. Physiol. 1989. - Vol. 416.-P. 93-110.

154. Schauf C.L. Differential sensitivity of amphibian nodal and paranodal K+channels to 4-aminopyridine and TEA // Experienta. 1987. - Vol.43. - P. 405-408.

155. Schoepfle G.M. Change in spike height during anodal polarization of isolated single nerve fibers. // Amer. J. Physiol 1956. - Vol. 187. - P. 549 -557.

156. Scholz A., Reid G., Vogel W., Bostock H. Ion channels in human axons // J. Neurophysiol. 1993. - Vol. 70. - P. 1274 - 1279.

157. Schonle Ch., Koppenhofer E. On the influence of purified tetraethylammonium chloride on Na+-currents of voltage clamped Ranvier nodes // Pfliigers Archiv. 1981. - Vol. 391. -P. R 38.

158. Schwarz J.R., Bromm В., Spielmann, Weytjens J.L.F. Development of Na inactivation in motor and sensory myelinated nerve fibres of Rana escu-lenta // Pflugers Archiv. 1983. - Vol. 283. - P. 126 - 129.

159. Schwarz J.R., Reid G., Bostock H. Action potentials and membrane currents in the human node of Ranvier // Pflugers Archiv. 1995. - Vol. 430. -№2-P. 283-292.

160. Shanes A.M. Potassium retention in crab nerve // J. Gen. Physiol. -1950. Vol. 33. - P. 643 - 649.

161. Shanes A.M. Potassium movement in relation to nerve activity // J. Gen. Physiol. 1951. - Vol. 34. - P. 795 - 807.

162. Shanes A.M. The ultraviolet spectra and neurophysiological effects of "veratrine" alkaloids // J. pharmacol. Exptl. The rup. 1952. - Vol. 105. - P. 216-281.

163. Shanes A.M., Grundfest H., Freygang W. Low level impedance changes following the spike in the squid giant axon before and after treatment with "veratrine" alkaloids // J. Gen. Physiol. 1953. - Vol. 37. - P. 39 - 51.

164. Sherratt R.M., Bostock H., Sears T.A. Effects of 4-aminopyridine on normal and demyelinated mammalian nerve fibres // Nature (Lond.). 1980. -Vol. 283.-P. 570-572.

165. Shrager P.G., Macey R.I., Strickholm A. Internal perfusion of crayfish giant axon: Action of tannic acid, DDT, and TEA // J. cell. Physiol. 1969. -Vol. 74.-P. 77-90.

166. Simurda, J., Simurdova M., Christe G. Use-dependent effects of 4-aminopyridine on transient outward current in dog ventricular muscle // Pflugers Arch. 1989. - Vol. 415. - P. 244 - 246.

167. Smith K.J., Felts P.A., John G.R. Effects of 4-aminopyridine on demyelinated axons, synapses, and muscle tension // Brain. 2000. - Vol. 123. - P. 171 - 184.

168. Spigelman I., Puil E. K+ Channel blockade in trigeminal root ganglion neurons: effects on membrane outward currents // Journal of Neurophysiology.- 1989. Vol. 62. - P. - 802-809.

169. Stanfield P.R. The effect of tetraethylammonrum ion on the delayed currents of frog skeletal muscle // J. Physiol. 1970. - Vol. 209. - P. 209 - 229.

170. Stanfield P.R. Tetraethylammonium ions and the potassium permeability of excitable cells // Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. 1983. - Vol. 97. - P. 1-67.

171. Stansfeld C.E., Marsh S.J., Halliwell J.V., Brown D.A. 4-aminopyridine and dendrotoxin induce repetitive firing in rat visceral sensory neurons by blocking a slowly inactivating outward current // Neuroscience Letters. 1986. -Vol. 64.-P. 299-304.

172. Stockbridge N. Etiology of the supernormal period // Biophys J. 1988.- Vol. 54.-P. 777-780.

173. Stein R.B. The frequency of nerve action potentials generated by applied currents // Proc. R. Soc. Lond. Biol. Sci. 1966. - Vol. 167. - P. 64 - 68.

174. Swaldow H.A., Waxman S.G. Variations in conduction velocity and excitability following single and multiple impulses of visual callosal axons in the rabbit // Exp. Neurol. 1976. - Vol. 53. - P. 128 - 150.

175. Swenson R.P. Inactivation of potassium current in squid axon by a variety of quaternary ammonium ions // J. Gen. Physiol. 1981. - Vol. 77. - P. 255-271.

176. Taglialatela M., Stefani E. Gating currents of the cloned delayed-rectifier K+ channel DRK1. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1993. - Vol. 90. - P. 4758 -4762.

177. Targ E.F., Kocsis J.D. Action potential characteristics of demyelinated rat sciatic nerve following application of 4-aminopyridine // Brain Research. -1986.-Vol. 363.-P. 1-9.

178. Tasaki I. Demonstration of two stable states of the nerve membrane in potassium rich media // J. Physiol. 1959. - Vol. 148. - P. 306 - 331.

179. Tasaki I., Hagiwara S. Demonstration of two stable potential states in the squid giant axon under TEA // J. Gen. Physiol. 1957. - Vol. 40. - P. 859 -855.

180. Theleff S. Aminopyridine and synaptic transmission II Neuroscience. -1980.-Vol. 5.-P. 1413-1419.

181. Thompson S. H. Three pharmacologically distinct potassium channels in molluscan neurons // J. Physiol. 1977. - Vol. 265. - P. 465 - 488.

182. Thompson S. H. Aminopyridine block of transient potassium current // J. Gen. Physiol. 1982.-Vol. 80.-P. 1 -18.

183. Ulbricht W., Wagner H.H. Block of potassium channels of the nodal membrane by 4-aminopyridine and its partial removal on depolarization // Pflugers Archiv. 1976. - Vol. 367. - P. 77 - 87.

184. Ulbricht W., Wagner H.H., Schmidtmayer J. Effects of aminopyridines on potassium currents of the nodal membrane // In Aminopyridines and Similarly Acting Drugs (eds Lechat P., Thesleff S., Bowman W.C.). Oxford: Pergamon, 1982. - P.29 - 40.

185. Vergun O.V., Kroncheva S.N., Valkina O.N. 4-aminopyridine increases after-potentials and induces the spontaneous activity in single myelinated nerve fibres // Membr. and Cell Biol. 1995. - Vol. 9. - P. 69 - 74.

186. Vierhaus J., Ulbricht W. Effects of a sudden change in sodium concentration on reapetitively avoked action potentials of single nodes of Ranvier // Pflug. Arch. ges. Physiol. 1971. - Vol. 326. - P. 76 - 87.

187. Wagner H.H., Ulbricht W. 4 aminopyridine block of К channels and its partial relief on depolarization // Abstr. 5th Int. Biophys. Congr. - 1975. -P. 138.130

188. Yeh J.Z., Oxford G.S., Wu C.H., Narahashi T. Dynamics of aminopyri-dine block of potassium channels in squid axon membranes // J. gen. Physiol. -1976 6. Vol. 68. - P. 519 - 535.

189. Yeh J.Z., Oxford G.S., Wu C.H., Narahashi T. Interactions of amino-pyridines with potassium channels of squid axon membranes // Biophys. J. -1976 a.-Vol. 16.-P. 77-81.

190. Yellen G., Jurman M.E., Abramson Т., MacKinnon R. Mutations affecting internal TEA blochade identify the probable pore-forming region of a K+ channel // Science (Wash DC). 1991. - Vol. 251. - P. 939- 941.

191. Yoshimura M., Polosa C., Nishi S. Afterdepolarization mechanism in the in vitro, cesium-loaded, sympathetic preganglionic neuron of the cat // J. Neu-rophysiol. 1987. - Vol. 57. - P. 1325 - 1337.

192. Zhang L., Krnjevic K. Effects of 4-aminopyridine of the action potential and the after-hyperpolarization of cat spinal motoneurons // Can. J. Physiol. -1986. Vol. 64. - P. 1402 - 1406.

193. Выражаю признательность своему научному руководителю Каталымову Леониду Лазаревичу за ценные консультации при проведении и оформлении работы.