Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование локализации гена предрасположенности к каталепсии у мышей с помощью полиморфных микросателлитных маркеров

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Исследование локализации гена предрасположенности к каталепсии у мышей с помощью полиморфных микросателлитных маркеров"

На правах рукописи

ИССЛЕДОВАНИЕ ЛОКАЛИЗАЦИИ ГЕНА ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К КАТАЛЕПСИИ У МЫШЕЙ С ПОМОЩЬЮ ПОЛИМОРФНЫХ МИКРОСАТЕЛЛИТНЫХ МАРКЕРОВ

Генетика-03.00 15

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск 2006

Работа выполнена в лаборатории нейрогеномики поведения, Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск.

Научный руководитель доктор медицинских наук,

Попова Нина Константиновна, Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск;

Официальные оппоненты' доктор биологических наук,

Бородин Павел Михайлович, Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск;

доктор биологических наук, Гуляева Людмила Федоровна, Институт молекулярной биологии и биофизики СО РАМН, г Новосибирск

Ведущее учреждение' Московский Государственный Университет

им. М В. Ломоносова, г. Москва

Защита диссертации состоится «Д5> Я К^а-рЯ 2006г. на утреннем заседании диссертационного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук (Д - 003 0! 1 01) в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале инстигута по адресу. 630090, г Новосибирск, проспект Лаврентьева, 10, тел (383)-333-12-78, e-mail. dissov@bionet nsc ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан «Йз» ^-¿ta-Spff 2005г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

АД Груздев

<U>0£A

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность проблемы

Основной задачей нейрогеномики поведения является выявление молекулярных, клеточных и физиологических механизмов трансдукции информации, закодированной в ДНК. в сложный поведенческий признак Особенно важным является изучение генетической структуры патологий поведения и высшей нервной деятельности

Каталепсия (реакция замирания, животный гипноз, мнимая смерть) является одной из форм пассивной защитной реакции замирания, поскольку в естественных условиях она связана со страхом (Gallup, 1977, Klemm, 1989, Dixon 1998). Она представляет собой обездвиженность с пластическим мышечным тонусом и встречается у всех позвоночных, включая млекопитающих (Карманова, 1977). В чрезмерно выраженной форме у человека каталепсия является синдромом патологического поведения, характерного для некоторых аффективных расстройств и ряда форм шизофрении (Singerman, Raheja, 1994; Krüger et al, 2003, Taylor, Fink, 2003).

Существуют различные типы каталепсии В целом их можно объединить в две большие группы' фармакологические виды каталепсии, как морфинная (De Ryck et al., 1980) или галоперидоловая (Sariberg, 1980, Patel, Hitzemann, 1999), и наследственные типы реакции замирания Из последних извесгны каталепсия крыс ГК (Барыкина и др , 1983; Kolpakov et al, 1996) и щипковая каталепсия у мышей

Интересной для генетических исследований каталепсии является щипковая каталепсия (pinch-mduced catalepsy) мышей. У некоторых особей этого вида кратковременную реакцию замирания можно вызвать раздражением рефлексогенной зоны шеи (Omstein, Amir, 1981, Klemm, 1983) Полагают, что эта рефлекторная реакция имеет адаптивное значение и в естественных условиях проявляется у самок при копуляции, у детенышей при их транспортировке матерью и т д Выявлены межлинейные различия по скорости развития каталепсии у мышей (Ornstem, Amir, 1981) Высокая предрасположенность к щипковой каталепсии по сравнению с мышами других линий была обнаружена у мышей линии СВА (Куликов и др , 1989) у 54% самцов и самок этой линии развивалась стойкая реакция замирания. Для изучения закономерностей наследования предрасположенности животных к каталепсии был проведен гибридологическии анализ признака на мышах двух контрастных линий СВА - с максимальной его выраженностью и некаталептической AKR Анализ показал, что этот признак является аутосомным, рецессивным, моно- или олигогенным с неполной пенетрантностью (Куликов, 1989, Kulikov et al., 1993).

Однако генетическая структура каталепсии и локализация гена или генов, определяющих данную патологию, до настоящего времени оставалась не выясненной. Большое значение в проявлении каталепсии исследователи придают дофаминовым (особенно D2 типа) рецепторам (Klemm, 1989) Работами, проводимыми в Институте цитологии и генетики СО РАН (Kulikov et al., 1995, Popova, Kulikov, 1995), показана важная роль серотониновой системы мозга, а именно: ключевой фермент биосинтеза серотонина, триптофангидроксилаза, 5-НТ) а и 5-НТ2а рецепторы вовлечены в регуляцию каталепсии у мышей

Большая часть поведенческих признаков являются количественными, контролируются полигенно и значительно зависят от факторов внешней среды (Мазер, Джинкс, 1985; Васильева, 1999, Crusie, 1999), НО ЛЖ^томлюжно выделить

главные гены с большим вкладом в изменчивость признака, чем остальные гены (Мазер, Джинкс, 1985) Для изучения генетической структуры количественных признаков был разработан специальный подход - QTL (quantitative trait loci) анализ Локусы ДНК, для которых методом QTL показано статистически достоверное сцепление с поведенческим признаком, могут включать полигены, учас1вуюшис в определении наследственной изменчивости по данному признаку (Plomin et al, 1994; Le Roy, 1999; Moisan, 1999; Roubertoux, 2001) Одними из лучших маркеров для QTL анализа являются микросателлитные последовательности, поскольку они достаточно часто встречаются в геноме и обладают такими свойствами, как полиморфность, кодоминантность (Hearne et al, 1 992, Bennett, 2000, Pitel, Riquet, 2000, Schlotterer, 2004)

Так, у мышей был проведен QTL анализ каталепсии, возникающей при введении галоперидола В результате было показано, что этот тип реакции замирания связан с геном дофаминовых D2 рецепторов (Patel, Hitzemann, 1999) Такое заключение не являлось неожиданным, поскольку галоперидол по механизму воздействия является блокатором дофаминовых рецепторов, преимущественно D2 типа Природа же генетических факторов, контролирующих щипковую каталепсию, до настоящего времен оставалась невыясненной Сложность картирования щипковой каталепсии у мышей в том, что она относится к альтернативным признакам с неполной пенетрантностью, и для картирования ее генов неприемлемы существующие программы QTL подхода, основанные на регрессионном анализе

Целью настоящего исследования было выявление генетической структуры щипковой каталепсии у мышей СВА и картирование генов или гена, определяющих у этих животных высокую предрасположенность к каталепсии Для выполнения цели исследования были поставлены следующие задачи

I определить на хромосомах мыши локусы, ответе гвенные за предрасположенность к каталепсии, при помощи полиморфных микросателчитных маркеров;

2. выявить гены-кандидаты и проверить их связь с наследственной предрасположенностью к каталепсии;

3 изучить в процессе селекции на каталепсию изменения параметров этого признака и особенности генотипов селектированных животных,

4. показать возможность картирования альтернативных поведенческих признаков с неполной пенетрантностью. Научная новизна.

• впервые проведен генетический анализ наследственной щипковой каталепсии у мышей и определена ее генетическая структура, включающая один майорный ген и несколько полигенов;

• впервые установтено, что ген, определяющий высокую предрасположенное 1Ь к каталепсии, находится в дистальном фрагменте хромосомы 13 мыши,

• впервые установлено, что селекция на каталепсию приводит к фиксированию в потомстве локуса ДНК, полученного от каталептической линии СВА и тесно связанного с геном серотониновых 5-HTiA рецепторов,

• показана возможность картирования альтернативного признака с неполной пенетрантностью классическим подходом QTL анализа с использованием полиморфных микросателлитных маркеров

Научно-практическая ценность.

В данной работе установлена генная структура сложного поведенческою признака - щипковой каталепсии у мышей СВА, которая выражается в гипертрофированной форме у этих животных Поскольку реакция замирания представляет собой важный элемент пассивно-оборонигельного поведения, то изучение ее генетического механизма способствуе1 более глубокому пониманию эволюционной значимости каталепсии

Продемонстрирована возможность картирования альтернативного признака с неполной пенетрантностью классическим подходом С?Т1_ анализа с помощью полиморфных микросателлитных маркеров

Показана тесная связь предрасположенности к каталепсии с участком ДНК мыши, несущим ген б-НТ^ рецепторов нейромедиатора серотонина, что привлекает внимание к более детальному изучению функций этих рецепторов и их роли в формировании поведенческих признаков

Получены в результате селекции на каталепсию мыши со стабильно высокой долей каталептиков, значительно большей, чем у родительской линии СВА Возможно дальнейшее использование этих животных в изучении генетических и физиологических факторов каталепсии, а также ее связи с другими формами поведения.

Положения, выносимые на защиту.

1. Высокая предрасположенность к каталепсии у мышей инбредной линии СВА кодируется одним майорным геном, локализованным в дистальном участке хромосомы 13 (между 58 и 75 сМ) и рядом не сцепленных с ним полигенов;

2 Вклад главного гена в наследование склонности к реакции замирания составляет 18%, а полигенов - 32%;

3 Селекция на каталепсию приводит к закреплению в потомстве аллеля микросателлитного маркера ЗМи^б, полученного от родительской линии СВА и тесно связанного с геном 5-НТУл рецепторов,

4 Наиболее вероятным геном-кандидатом на роль майорного гена каталепсии является ген, кодирующий 5-НТ1Л рецептор нейромедиатора серотонина

Апробация работы.

Результаты данной работы были представлены и обсуждены на Ученых Сессиях Института цитологии и генетики СО РАН в 2000, 2003 годах, на XXXIX, ХЬ и ХЬП международных научных студенческих конференциях "Студент и научно-технический прогресс" (Новосибирск, 2001, 2002, 2004), VII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей '(Человек и его здоровье/) (Санкт-Петербург, 2004), Ш Съезде генетиков и селекционеров '"Генетика в XXI веке- современное состояние и перспективы развития" (Москва, 2004), Международной школе молодых ученых «Геномика человека и модельных объектов» (Звенигород, 2004), IX зимней школе С1МО (Хельсинки, 2005), V Съезде физиологов Сибири (Томск, 2005), Международной школе по нейрогенетике поведения (Москва, 2005)

Публикации.

Материал диссертации представлен в 9 публикациях, в том числе в 3 статьях в реферируемых журналах

Структура и объем работы.

Работа изложена на 95 страницах, содержит 13 рисунков, 8 таблиц и включает все необходимые разделы введение, обзор литературных данных,

материалы и методы, результаты и их обсуждение, выводы и список использованной литературы (257 ссылок)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Животные. В работе использовались высоко инбредные и контрастные по предрасположенности к каталепсии линии мышей CBA/Lac (каталептическая линия) и AKR/J (некаталептическая линия), поддерживающиеся около 50 лет в виварии ИЦиГ СО РАН, а также их гибриды Все мыши тестировались на каталепсию в возрасте 2 месяцев Непосредственно ja 2 дня до тестирования животных изолировали в индивидуальные клетки, чтобы снять возможное влияние группового эффекта

Гибридологический анализ был проведен посредством скрещивания особей СВА и AKR, затем реципрокные гибриды Fi были скрещены с мышами родительской линии СВА, в результате получили бэккроссов (ВС)

Селекционный эксперимент включал отбор и скрещивание бэккроссов-каталептиков из разных семей для предотвращения инбридинга, отбор и скрещивание каталептических мышей первою поколения селекции Sj из разных семей (также для предотвращения инбридинга) Аналогично получали мышей S3 (от скрещивания каталептиков S2) и S4 (от скрещивания каталептиков S3) При получении последующих поколений селекции был введен братско-сестринский инбридинг производился отбор и скрещивание мышей-каталептиков из одной семьи В настоящее время выведено поколение Sij селекции.

Каталепсию вызывали как у самцов, так и у самок, зажимая в течение 5 с кожу шеи, затем животное помещали на две параллельные, разновысокие перекладинки, расположенные под углом 45° При этом передние лапы животного располагались на высоте 23 см от поверхности сгола и на 3 см выше задних. Тест на каталепсию считали положительным, если период, в течение которого мышь сохраняла приданное ей неестественное положение, был не менее 20 с Время теста ограничивали 120 с, после чего животное возвращали в его клетку Каждый из последовательных 10 тесгов проводили с интервалом в 1-2 минуты Животные, дающие 3 положительных теста из 10, рассматривались как каталептики (Куликов и др., 1989).

Выделение ДНК проводили по Маниатис с соавт (1984) в модификации, разработанной в лаборатории, очистку ДНК проводили фенольно-хлороформпым методом.

Выбор микросателлитных маркеров. Бьпо выбрано 65 микросателлигных маркеров, полиморфных между линиями СВА и AKR, т е для каждого из этих маркеров аллели типа СВА и AKR максимально четко дифференцировались после электрофоретической обработки Данные маркеры равномерно покрывали все 19 аутосом мыши с интервалом не более 25 сМ

ДНК-типирование проводилось методом ПЦР с последующим электрофоретическим разделением продуктов реакции в агарозном и полиакриламидном гелях.

Тестирование функциональной активности 5-HTja рецепторов серотонина у мышей проводили, определяя с помощью электронного термометра КУТ Couple Thermometr выраженность гипотермии, вызванной введением 8-ОН-DPAT, агониста 5-HTjA рецепторов. У мышей измеряли ректальную температуру тела, затем внутрибрюшинно вводили 8-OH-DPAT (в дозе1мкг/кг) и через 20 минут

снова измеряли температуру тела Функциональною активность рецепторов оценивали по изменению температуры тела до и после введения препарата.

Статистическая обработка результатов. Частоты распределения каталептиков сравнивали с помощью нормального распределения после преобразования долей в арксинусы по Фишеру Функциональная акшвносгь 5-HTia рецепторов и время замирания выражались как М ± m после обработки данных од нофакторным ANO VA анализом

Исследование локализации генов, кодирующих предрасположенность к каталепсии, было осуществлено методами одномаркерного анализа и интервального картирования, разработанных для альтернативных признаков с неполной пенетрантностью При одномаркерном анализе, проведенном на бэккроссах-каталептиках, сцепление между предрасположенностью к каталепсии (выражаемой в процентах каталептиков) и каждым маркером оценивалось независимо от других маркеров Проверка отклонения распределения числа гомо-fNc'c) и гетерозигот (Nc/a) от их случайного распределения (1:1) проводилась с помощью критерия х2 с одной степенью свободы

х2 = (Nc/c-N)2/N + (NWN)2/N, где N = (Noc + Nc/a)/2.

Вводилась поправка Бонферрони на множественное сравнение (Lynch, Walsh, 1998): Р = Po/n, где п - число используемых маркеров Одномаркерный анализ позволяет определить хромосому, на которой находится ген, кодирующий признак

Картирование гена каталепсии на данной хромосоме проводили с помощью интервального оценивания посредством двух независимых статистических подходов. В первом методе по Brodkin et al. (2002) использовались только бэккроссы-каталептики Исследуемая хромосома с помощью набора полиморфных маркеров разбивается на ряд интервалов размером 10-15 сМ Число гомо- и гетерозиготных особей подсчитывается для каждо[о маркера и каждого интервала между двумя соседними маркерами Для подсчета числа гомо- и гетирозигот для интервала между соседними маркерами рекомбинантные особи предварительно удаляются. Случай, когда исключение рекомбинаптных особей приводит к увеличению %2, расценивается как доказательство локализации гена, кодирующ« о признак, в данном интервале (Brodfan et al, 2002)

Второй подход опирается на классический метод максимального правдоподобия, разработанный для парных признаков, и использует данные по всем бэккроссам' каталептикам и некаталептикам Выдвигаются две статистические гипотезы Согласно гипотезе Но, предрасположенность к каталепсии определяется некоторым числом диспергированных в ¡еноме полигенов, каждый из которых вносит свой небольшой вклад в развитие признака 1 ипотеза Hj предполагает, что реакция замирания контролируется рядом полигенов и одним майор-геном, пенетрантность которого сопоставима по величине с суммарной пенетрантностью многочисленных полигенов.

Все множество бэккроссов по каждому из проверяемых маркеров было разбито на четыре фенотипические группы 1) гомозиготы - каталептики, 2) гомозиготы - некаталегттики, 3) гетерозиготы кататептики и 4) гетерозиготы -некаталептики Проверку соответствия предсказаний численное гей каталептиков и некаталептиков для гипотез Н> и Но набтюдаемым чис тенностям особей в четырех фенотипических группах проводили с помощью метода минимума %2 (Крамер,

1975) и метода максимального правдоподобия (Le Roy, 1999), которые позволяют не только тестировать гипотезу, но и оценить ее параметры (позиция и пенетрантность главного гена, пенетрантность полигенов)

Значения параметров подбираются таким образом, чтобы минимизировать величину х2 или максимизировать величину L. Поиск минимума или максимума функций проводился по алгоритму Хука-Дживса при помощи программы, реализованной на языке BASIC (Bunday, 1984).

Оценку числа степеней свободы (df) для критерия -/_2 проводили как df = число маркеров х 3 - число оцениваемых параметров Коэффициент для первого члена формулы, равный 3, определятся условием нормировки для четырех наблюдаемых групп для каждого маркера.

Доверительный интервал для положения гена, определяющего каталепсию, был построен при использовании принципа one-LOD (Lander, Botstem, 1989; Lynch, Walch, 1998).

Для животных ВС, поколений Si и S2 вычислялись концентраций аллелей маркеров хромосомы 13 с помощью значений концентраций соответствующих генотипов по формулам:

[с] = (Nc/c + 0.5 X Nc/a)/(Nc/c + Nc/a + Na/a), [ö] = Na/a + 0.5 X Nc/a)/(Nc/c + Nc/a + Na/a),

где [с] - концентрация аллеля с, полученного от СВА, [а] - концентрация аллеля а, полученного от AKR, Nc/c, Nc/a и Na/a - полученные в эксперименте числа с/с, с/а и а/а генотипов.

Гипотезу об отсутствии эффекта селекции по поведению на распределение гомо- и гетерозигот с/с, с/а и а/а у мышей Si и S2 проверяли сравнением экспериментальных результатов с теоретическими значениями (подсчитанными по закону Харди-Вайнберга, исходя из предположения об отсутствии селекции) с помощью х2 теста с 2-мя степенями свободы

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Доля каталептиков у мышей линий СВА, AKR и их гибридов Fi и бэккроссов.

40 л

20

I

Рис 1 Процент каталептиков среди мышей линий СВА, АКК и их гибридов р! и бэккроссов (ВС)

Процент каталептиков в линии СВА (50%, Рис 1) хорошо согласуется с полученными ранее данными (54%, КиНкоу е1 а!., 1993) (х2 ~ 1-93, р>0 1) и указывает на то, что предрасположенность к каталепсии стабильно наследуется в поколениях линии СВА По этому признаку не было обнаружено половых различий (X2 = 1,94, р>0,16) По доле каталептиков у бэккроссов не было выявлено ни половых (х2=1 Л. р>0,19), ни реципрокных различий (%2 = 0,01, р>0,9), поэтому для дальнейшего исследования данные по самцам и самкам для бэккроссов анализировались совместно Полученное распределение каталептиков и некаталептиков среди бэккроссов согласовывалось с ожидаемым (74, х2 ~ 0,35, р>0,05), подсчитанным исходя из предположения о наличии мевделевского расщепления 1.1 и 50%-ой пенетрантности исследуемого признака

2. Локализация гена предрасположенности к каталепсии методом одномаркерного анализа.

t«

-Ф сМ

--20 - - 40 --60 --80 --100 120

17 fig

«сМ

--20 --40 --60 -■80 -■ LC0

Рис 2 Локализация на 19 аутосомах мыши 65 попиморфных микросателитных маркеров, выбранных для картирования предраспочоженности х каталепсии при скрещивании животных линий СВА и AKR

Список полиморфных маркеров■ 1 - DlMit221, DlMit234, DlMit2l6, DiMitl64, D1MU424, DlMitl51, 2 -D2MU417, D2Mit380, D2Mit206, D2MU493, D2Mitl42, 3 - D3Mit307, D3Mit77, D3Mit258, D3Mit87, 4 - D4Mit2il. D4Mitl78, D4M:tl25, 5 - D5Mal3, D5Mitl51, DSMitlO, D5Mit31; 6 - D6Miti07, D6Mitl88, D6MUJ05, D6Mitl4, 7 - D7MU227, D7MU31, D7Mit238, 8 - D8Mit4, D8Mitl93, D8Mit242, D8MU121, 9 - D9Mitl29, D9MU269, D9MU277, 10 - D10MU106, D10MU42, D10Mitl03, 11 - DllMit271, DllMit36, DllMit224, 12 - D12Mit221, D12M44, D12MH167, 13 - D13MU64, D13Mit202, D13MU76, D13MU78, 14 - D14Mit83, D14MU92, D14MH97, 15 - D15Mit85, D15Mitl22, D15Mitl71, 16 - D16Mitl46, D16Mit76, D16Mitl89, 17 - D17Mitll5, D17Mitl53, 18 - D18Mit60, D18MU182, D18MU154, 19 - D19Mit63, D19Mitl0 Рядом с аутосомами указаны их номера с 1 по 19

Генотип бэккроссов-каталептиков был определен для каждого из 65 микросателлитных маркеров, полиморфных между линиями СВА и АКЯ и равномерно покрывающих все 19 аутосом с интервалом не более 25 сМ ( Рис 2)

Критическое значение х2 при уровне значимости, равном 0,05, для проверки гипотезы о сцеплении, скорректированное на число маркеров, равное 65 (Р = Ро/65), было 11 3 (Куликов и др , 2003; Куликов, Базовкина, 2003) Получили, что гипотеза об отсутствии сцепления строго отвергается только для одного маркера 013МЙ78 (X2 = 17 78, р<0 002), локализованного в теломерном фрагменте (75 сМ) хромосомы 13 (Рис.3)

20 ■ 19 -1Б ■ 14 -12 -10 • в -6 -4 ■ 2 -

ШЗМа78 **

лДЛ

-цЦ-

1 2 3 4 5 Б 7 В 3 1011121314 1515171819

ХРОМОСОМЫ

Рис 3 Значения критерия %2 для проверки сцепчения предрасположенности к каталепсии с полиморфными микросателлитными маркерами у бэккроссов, проявляющих каталепсию Номера и относительные размеры хромосом отложены по оси абсцисс **р<0 01

Близкое к критическому значению у} (10,92, р<0,058) было получено для маркера Е>1 ЗМП76, расположенного в положении 61 сМ на хромосоме 13 Для других маркеров, локализованных более проксимально на хромосоме 13 или на других 18 аутосомах, значения %2 были ниже критического (не более 5,0) (Рис 3)

Несмотря на достоверное значение критерия у_2 моногенной модели предрасположенности к каталепсии противоречит наличие 20 гетерозигот среди 77 каталептиков, наблюдаемых при ДНК-типировании с маркером П13Мй78 Разумным будет принятие модели наследования каталепсии, включающей майорный ген в теломерном участке хромосомы 13 и несколько полигенов, вовлеченных в регуляцию признака и определяющих его оставшуюся вариабельность, т е наличие среди бэккроссов гетерозигот по маркеру 01ЗМЙ78

С маркером В9Мк129, расположенным на растоянии 2 сМ от гена дофаминовых 02 рецепторов, не было обнаружено сцепления для ВС (у} = 0,12, р>0,05) Следовательно, генетико-молекулярный механизм регуляции естественной оборонительной реакции, какой является щипковая каталепсия, отличается от

механизма, определяющего тесно сцепленную с 1еном D2 рецептора чувс!вительность к каталептогену галоперидолу, (Kanes et al., 1996, Patel, Hitzemann, 1999), и ген D2 рецепторов не является майорным геном наследственнойщипковой каталепсии у мышей

Стоит также отметить, что при анализе результатов не было выявлено сцепления предрасположенности к каталепсии с маркерами D7Mit227 и D10MÍH03, локализованными на хромосомах 7 и 10, на расстоянии 8 сМ от генов, кодирующих гены триптофангидроксилазы tphl и tph2, соответственно Не был установлен факт наличия сцепления признака каталепсии с маркером D14Mit92, расположенным на хромосоме 14 мыши (Hsieh et al., 1990) на расстоянии 3,5 сМ от гена 5-НТ2,\ рецепторов. Таким образом, гены триптофангидроксилазы и серотониновых 5-НТ2А рецепторов не могут претендовать на роль главного гена щипковой каталепсии.

3. Локализация геяа предрасположенности к каталепсии методом интервального оценивания.

Стандартные программы для точного картирования гена на хромосоме, такие как MAPQTL (Van Ooijen, 2004), предполагают, что признак имеет непрерывное (обычно нормальное) распределение. Поэтому эти программы не пригодны для картирования признаков с альтернативным распределением и с неполной пенетрантностью (Brodkin et al., 2002). Для более точного картирования главного гена каталепсии на хромосоме 13 был использован два независимых подхода, метод, предложенный Brodkin et al (2002) для такого альтернативного признака как процент агрессивных мышей, и классический метод максимального правдоподобия, разработанный для парных признаков

3.1. Картирование гена каталепсии по методу Brodkin et al. (2002).

Рис 4 Величины критерия X1 для проверки сцепления предраспочоженности к каталепсии с маркерами (черные кружки) и иптервшами (белые кружки) на хромосоме 13 (по методу Вгойкт е1 а1, 2002)

На дистальном участке хромосомы 13 мыши между 30-75 сМ было выбрано 6 полиморфных микросателлигных маркеров 013Мг1б4 (30 сМ), 013М!1202 (47 сМ), 013МЙ73 (55 сМ), 013Мк76 (61 сМ), ШЗМИ214 (71сМ) и ШЗМ«78 (75 сМ), расположенных на участке от 30 до 75 сМ хромосомы 13 (Рис 4)

Эти маркеры разбили исследуемую область хромосомы на 5 интервалов. В среднем расстояние между двумя соседними маркерами (размер интервала) равнялось 9 сМ, наименьший интервал получился между маркерами Г)13Мк214 и 013Мй78 (4сМ), наибольший - между 013МП64 и В13Ми202 (17 сМ), такое разбиение давало достаточно высокое разрешение С этими маркерами были ДНК-типированы бэккроссы-каталептики Оценивались два параметра 1) величина соответствия между наблюдаемым и ожидаемым (1-1) распределением гомо- и гетерозигот для каждого маркера и 2) величина соответствия между наблюдаемым и ожидаемым (1:1) распределением двойных гомо- и гетерозигот для обоих маркеров для каждого И) 5 интервалов после удаления рекомбинантных особей При оценке обоих параметров использовался критерий у2 (Рис 4)

Только для одного интервала между маркерами 013Мй214 и 013Мк78 величина превысила значения критерия для граничных маркеров В13Ми214 (%2 = 15,91) и 013Мк78 (%2 =17,78), достигнув значения 18,51 Такое увеличение величины %2 можно рассматривать как доказательство того, что ген, кодирующий предрасположенность к каталепсии, локализован в интервале от 71 до 75 сМ хромосомы 13, т. е. между маркерами 013Ми214 и ЗМ1178

Однако метод, предложенный Вгос1кт с соавт. (2002), не позволяет оценить доверительный интервал локализации главного гена, определяющего предрасположенность к кагалепсии, на хромосоме 13 Из характера кривой можно ожидать, что доверительный интервал может быть значительно шире

3.2. Картирование гена каталепсии методом максимального правдоподобия и минимума %2-

Более точная локализация гена каталепсии проводилась интервальным картированием с использованием классического метода максимального правдоподобия (Рис.5).

Максимальная величина отношения правдоподобия гипотезы Н| по отношению к гипотезе Но (1ЛМЗ) для маркеров хромосомы 13 равнялась 8,38, что было выше обычно принимаемого порогового значения, равного 3 Таким образом, для последующего анализа принимается гипотеза, постулирующая локализацию гена каталепсии на хромосоме 13. "/_2-тест также отвергает гипотезу Но о полигенном наследовании предрасположенности к каталепсии (%2 = 59,6, с!Г = 17, р<0,001), но подтверждает гипотезу Нь постулирующую модель наследования этого признака, включающую один майорный ген и несколько полигенов (%2 = 23 5, (1Г = 15, р>0,05) При этом вклад майорного гена в предрасположенность к каталепсии оценивается как 18%, а полигенов - 32% Следовательно, суммарная пенетрантность признака, определяемая совместным действием главного гена и всех полигенов, которые находятся в гомозиготном состоянии у мышей СВА, равна 018 + 0 32 = 0 5. Эта величина равна пенетрантности кагалепсии у мышей СВА.

Методы максимального правдоподобия и миним)ма х2 локализуют главный ген кагалепсии в положении 73 сМ на хромосоме 13 мыши Доверительный 95%

интервал для этого ¡ена находится в районе с 58 до 75 сМ хромосомы 13 (Рис.5) и включает интервал, полученный по методу ВгосНоп с соавт (2002)

Положению на хромосоме, сМ

Рис 5 Локализация главного гена каталепсии интервальным оцениванием, основанным на методах максимального правдоподобия (А) и минимума $ (Б), с использованием 6 маркеров хромосомы 13 мыши

Три независимых статистических подхода, примененных на бэккроссах: одномаркерный анализ, интервальное оценивание методом Вго(1кте1а1 (20021 и классический метод максимального правдоподобия и минимума х' Для парных признаков подтверждают модель наследования каталепсии, включающую один главный ген и множество не сцепленных с ним полигенов, и локализуют ген каталепсии между 58 и 75 сМ хромосомы 13 мыши. Из базы данных МИ (http://www.informatics.jax ог§) известно около 30 различных генов, находящихся между 58 и 75 сМ хромосомы 13 мыши Но в качестве возможных генов-кандидатов (те. генов, продукты которых так или иначе вовлечены в регуляцию нейромедиаторных процессов) разумно рассматривать только четыре из них два гена, кодирующие интегрины а] (65 сМ) и <12 (64 см), ген ростового фактора фибробластов 10 (РОР-Ю) (75 сМ) и ген серотониновых 5-НТм рецепторов (58 сМ) Однако до сих пор нет никаких сведений в литературе о связи каталепсии с интегринами и ростовыми факторами фибробластов, но имеются данные о вовлечении 5-НТ]а рецепторов в регуляцию каталепсии Так, активация 5НТ]А рецепторов агонистами приводит к выраженному ингибированию каталепсии, вызванной нейролептиками (Вгоеккашр е( а1 1988; Кеа1-ВеНуеаи е1 а1 1993) и наследственной каталепсии у крыс ГК (КиИкоу й а1, 1994) и мышей СВА (Ророуа а1., 1994). Было также показано, что крысы ГК имеют пониженную плотность 5НТ1Д рецепторов в стриатуме (Ророуа е! а! 1997), что немаловажно, поскольку

стриатум является структурой мозга, участвующей в развитии реакции замирания (Di Chiara, Morelli 1984)

4. Динамика выраженности каталепсии в ходе селекции на данный признак.

Селекция на каталепсию, начатая с поколения бэккроссов, привела к быстрому повышению доли каталептиков у гибридов (Рис.6) Так, процент каталептических животных в первом поколении селекции Si (35 %) достоверно выше, чем у бэккроссов (27%, %2 =41, р<0,05) (Рис 6) У мышей S3 процент каталептиков составил 71%, то есть стал достоверно выше, чем у СВА (50%, »

р<0 001) Наблюдается некоторое снижение процента каталептиков у мышей S5 и Sr„ что вероятно, объясняется введением братско-сестринского инбридинга У последующих поколений селекции доля каталептиков остается стабильно высокой Так, у последнего полученного на сегодняшний день поколения S>j число ч

каталептиков составляет около 80% Быстрый ответ на селекцию подтверждает представление о наличии одного майорного гена каталепсии

юо „

СВА AKR С1 ВС S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 SB S9

Рис б Динамика изменения доли катачептиков в процессе сечекции мышей на предраспочоженностъ к катачепсии ?де 5? - поколения сечекции

***р<0 001 по сравнению с СВА

Что касается, времени замирания, то в ходе селекции этот параметр достоверно не изменялся Так. средний показатель времени замирания у мышей *

поколения 8а составил 44.8 ±45 сек, в то время как у животных-каталептиков СВА - 43 7 ± 9 9 сек.

5. Изменение концентрации генотипов и соответствующих аллелей СВА *

и АКК у мышей в ходе селекции на каталепсию.

Бэккроссы.

У мышей поколения ВС были вычислены концентрации с-аллеля, полученного от линии СВА и а-аллеля, полученного от линии АКИ, для трех из шести полиморфных микросателтитных маркеров хромосомы 13 В!ЗМЦ202, 013Мц76 и ШЗМ1178, расположенных на хромосоме, соответственно, в позициях 47, 61 и 75 сМ Концентрации с и а аллелей бьпи подсчитаны, исходя ич

полученных в эксперименте распределения чисел с/с и с/а генотипов. Достоверных различий в значениях концентраций аллелей для этих маркеров найдено не было.

Мыши поколения селекции 8] и $2.

Были вычислены ожидаемые по закону Харди-Вайнберга концентрации генотипов для маркеров 013Мп202 и 013МЦ76 у живошых поколения Б] селекции Вычисления производились, исходя из значений концентраций с- и я-аллелей у бэккроссов Ожидаемые концентрации сравнивались с полученными в реальном эксперименте Получили, что селекция влияет на распределение генотипов для маркера 013МЙ76 (х2=12,6, р<0,01), что свидетельствует о наличии сцепления предрасположенности к каталепсии с этим маркером В то же время селекция не оказала никакого воздействия на концентрации генотипов для маркера 013Ми202 (у2 = 1,5). Это подтверждает отсутствие достоверного сцепления каталепсии с данным маркером.

У мышей Бг также сравнивались концентрации генотипов для маркера В13М«76: реальные и 1еоретические, подсчитанные по закону Харди-Вайнберга (исходя из концентраций с- и й-аллелей у мышей 8>) %2-тест показал влияние селекции на распределение генотипов, а значит, и наличие сцепления склонности к реакции замирания с маркером ШЗМЦ76 и для мышей 82 поколения селекции (у_г = 14.5, р<0 01).

Таким образом, отсутствие влияния селекции на соотношение концентраций аллелей и генотипов маркера 013УШ202 показано на мышах в, и вг поколениях В то же время у этих же животных было зарегистрировано достоверное повышение доли с/с генотипа и относительное сокращение доли с/а и а/а генотипов для маркера ШЗМк76 по сравнению с распределением, ожидаемым по закону Харди-Вайнберга. Это, соответственно, сопровождалось увеличением концентрации с-аллеля, полученного от линии СВА и снижением а-аллеля, полученного от линии АКК. Наблюдалась явная динамика в повышении концентраций с/с генотипа и, соответственно, с-аллеля Споскольку у мышей Бг значения этих параметров были выше, чем у мышей Б [ )в процессе селекции на каталепсию

Мыши поколения Sgи вп-

ВС Б2 в8 512

1 а аллель, полученный от СВА| '■аллель, полученный от АКР1

Рис 7 Изменение в ходе селекции на каталепсию концентраций СВА и АКЯ аллелей для маркера 013Ми76у бэккроссов, 5/, Яг, & и поколений селекции

У мышей в» и 5:2 анализ ДНК, проведенный с использованием маркера 013М1176, не выявил ни одного аллеля родительской линии АКЯ (Рис 7), что продолжает динамику увеличения с-аллетя и понижения а-аллеля, показанную для животных Э] и 82 и связанную с селекцией мышей на высокую предрасположенность к каталепсии Элиминация а-ателя и фиксирование с-аллеля в процессе селекции подтверждает полученные на бэккроссах данные о сцеплении каталепсии с теломерным участком хромосомы 13 мыши

6. Изучение функциональной активности 5НТм рецепторов у мышей линий СВА, АКИ и поколения селекции.

0 О я

| -0.5

1 -1

О. -1 5 0)

|akr!

Рис 8 Влияние агониста 5-НТ1А рецепторов на температуру теча мышей родитгчьских инбредных чиний AKR, СВА и Sn поколения селекции на каталепсию Данные представляют изменения температуры теча до и через 20 мин после введения 8-OH-DPAT в дозе 1мг/к?

***р^О 001 по сравнению с AKR

Введение агониста серотониновых 5-HTiA рецепторов 8-OH-DPAT показало достоверную разницу гнпотермическо! о эффекта у родительских линий (р<0,001) У мышей СВА понижение температуры тела через 20 минут после инъекции составило 2,2 ± 0,3°С, в то время как у особей AKR - всего лишь 0,5 ± 0,2°С Вместе с этим, эффект препарата на животных S>2 был схожим с его воздействием на мышей СВА, т е. достоверно отличающимся от AKR у гибридов температура тела понизилась на 2,5 ± 0,2°С (Рис.8)

Поскольку введение данного препарата служит тестом на функциональную активность серотониновых 5-НТ]А рецепторов, то можно сделать вывод о том, что с одной стороны, активность рецепторов этого типа существенно различается у родительских линий СВА и AKR С другой стороны, мыши, селекционированные на каталепсию, наследуют активность рецепторов по СВА типу, что хорошо согласуется с тем фактом, что у этих животных зафиксирован полученный от линии СВА фрагмент хромосомы 13, несущий ген 5-HTja рецепторов Все вышесказанное говорит о том, что селекция на предрасположенность к замиранию связана с состоянием 5-HTiA рецепторов, тест на функциональную активность 5-HTia рецепторов, проведенных на родительских линиях и селекционных мышах, можно

14

считать физиологическим доказательством вовлечения гена этих рецепторов в регуляцию наследственной щипковой каталепсии

Таким образом, наилучшая модель, описывающая 1енетический контроль предрасположенности к щипковой каталепсии существует майор-ген, локализованный между 58 и 75 сМ хромосомы 13 мыши и вносящий существенный 18% вклад в наследование реакции замирания. Судя по всему, этим 1 лавным геном является ген 5-НТ)А рецепторов Аллель этого гена, характерный для мышей СВА, определяет у этих животных и их гибридных потомков, селекционированных на каталепсию, и предрасположенность к стойком) замиранию, и высокую функциональную активность 5-НТ1Д рецепторов Кроме майорного имеются полигены, оказывающие второстепенное влияние на проявление каталепсии, суммарный их вклад оценивается как 32% Не исключено, что гены триптофангидроксилазы, дофаминовых и серотониновых 5-НТгд рецепторов, отвергнутые нами в процессе обсуждения результатов в качестве майорного 1ена, как раз являются такими полигенами. Такой тип наследования, включающий один главный и несколько минорных 1енов, характерен для многих поведенческих признаков (Мазер, Джинкс, 1985)

ВЫВОДЫ.

1 Определен характер наследования щипковой каталепсии, высокая предрасположенность к этому признаку у мышей инбредной линии СВА кодируется одним майорным геном и рядом не сцепленных с ним полигенов, причем вклад главного гена составляет 18%, а полигенов - 32%

2 При помощи ОТЬ анализа с использованием микросателлитных маркеров майорный ген щипковой каталепсии у мышей локализован в интервале между 58 и 75 сМ хромосомы 13.

3 Отмечено быстрое увеличение доли каталептиков ответ на селекцию по каталепсии, что подтверждает результаты ОТЬ анализа о наличии одного главного гена каталепсии

4. Селекция на каталепсию привела к закреплению в потомстве аллеля микросателлитно! о маркера 1)13МЬ76, полученного от родительской линии СВА

5. Показано отсутствие сцепления признака щипковой каталепсии мышей с микросателлитными маркерами, локализованными вблизи генов, кодирующих дофаминовые Вг рецепторы, триптофангидроксилазу и серотониновые 5-НТгл рецепторы, что позволяет не рассматривать каждый из данных генов в качестве майорного I ена высокой склонности мышей к каталепсии

6 Наиболее вероятным геном-кандидатом на роль майор-гена каталепсии является ген, кодирующий 5-НТ1Д рецептор нейромедиатора серотонина, расположенного в положении 58 сМ на чрочосоме 13 мыши на расстоянии 3 сМ от микросателлитного маркера Б13 Мк76.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ

1. Куликов А.В, Базовкина Д.В. Проверка гипотез о сцеплении в гибридологическом анализе альтернативных поведенческих признаков с неполной пенетрантностью //Генетика 2003 Т 39 №8 С 1066-1072.

2 Куликов А В , Базовкина Д.В., Муазан М П . Мормэд П Картирование гена предрасположенности к каталепсии у мышей с помощью полиморфных микросателлитных маркеров //Докл РАН 2003 Т.293 №1 С. 134-137.

3 Базовкина Д.В., Куликов А.В , Кондаурова Е М , Попова Н К Селекция на предрасположенность к каталепсии усиливает депрессивноподобное поведение у мышей //Генетика 2005 Т41 №9 С 1222-1228

4 Базовкина Д.В. Сцепление наследственной предрасположенности к каталепсии с теломерным участком хромосомы 13 мыши // Материалы XXXIX международной научной студенческой конференции "Студент и научно-технический прогресс", Новосибирск, 2001 «Биология» С 42-43

5. Базовкина Д.В. Проверка гипотезы о сцеплении локуса предрасположенности к каталепсии у мышей с генами 5-HTia, D2 рецепторов и трипюфангидроксилазы. // Материалы XL международной научной студенческой конференции "Студент и научно-технический прогресс", Новосибирск, 2002 «Биочогия» С 37

6 Кондаурова Е М, Базовкина Д.В. Изменения поведения мышей в ходе селекции на каталептическую реакцию // Материалы XLII международной научной студенческой конференции "Студент и научно-технический npoipecc", Новосибирск, 2004 '(Биология» С 51-52

7 Кондаурова Е М., Базовкина Д.В. Изменения поведения в ходе селекции мышей на каталепсию // Седьмая Всероссийская медико-биологическая конференция молодых исследователей "Человек и его здоровье", изд СПбГЭТУ "ЛЭТИ" г Санкт-Петербург, 2004 С 126

8 Базовкина Д.В., Куликов А В , Кондаурова Е М , Попова Н К Селекция на предрасположенность к каталепсии усиливает депрессивноподобное поведение у мышей // Тезисы докладов V Сибирского физиологического съезда. Бюлл Сиб Мед.. 2005. т 4 (приложение !) С 103

9. Kondaurova Е М , Bazovkina D.V., Kulikov А V , Popova N К Selective breeding for catalepsy in mice effects on the allele concentration of microsatellite D13Mit76 linked to the 5-HTiA receptor gene. '/ International Summer School in Behavioral Neurogenetics, Moscow, 2005. P. 54

Подписано к печати Об 12 2005

Формат бумаги 60 х 90 1/16 Печ л. 1.Уч изд л 0,7

Тираж 100 экз. Заказ 174.

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, просп. ак. Лаврентьева, 10

s£t>¿?6A_

ЛУГ

p- - 248

í

r

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Базовкина, Дарья Владимировна

ff ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Обзор литературы. Использование полиморфных микросателлитов для ф Генетического анализа и картирования поведенческих признаков.

1.1. Микросателлиты и теория их использования.1G

1.1.1. Микросателлитные повторы, их локализация в геноме, полиморфизм, функции.

1.1.2. Микросателлитные повторы как генетические маркеры.

1.1.3. Сравнение микросателлитов с другими генетическими молекулярными маркерами.

1.2. Методы генетического анализа признаков поведения, использующие микросателлиты.

1.2.1. Особенности генетической структуры признаков поведения.

1.2.2. QTL анализ, его принципы, преимущества и недостатки. ф 1.2.3. Метод генов-кандидатов и принцип позиционного клонирования мутаций.

1.2.4. Генетический анализ реакции замирания. Применение QTL анализа для ф картирования галоперидоловой каталепсии.

ГЛАВА 2. Материалы и методы.

1.1. Экспериментальные животные.

1.1.1. Условия содержания.

1.1.2. Гибридологический эксперимент.

1.1.3. Селекционный эксперимент.

1.2. Измерение каталепсии.

1.3. Выделение ДНК.

Ш] 1.4. Выбор микросателлитных маркеров. ф 1.5. ДНК-типирование.

1.6. Тестирование функциональной активности 5HTia рецепторов.

1.7. Статистическая обработка результатов.

1.7.1. Оценивание выраженности каталепсии.

1.7.2. Проверка гипотезы о сцеплении альтернативнго признака с неполной пенетрантностью.

ГЛАВА 3. Результаты исследования.

1.1. Доля каталептиков у мышей линий СВА, AKR и их гибридов Fi и бэккроссов.

1.2. Локализация гена предрасположенности к каталепсии методом одномаркерного анализа. 1.3. Локализация гена предрасположенности к каталепсии методом интервального оценивания.

1.3.1. Картирование гена каталепсии по методу Brodkin et al. (2002).

1.3.2. Картирование гена каталепсии методом максимального правдоподобия и минимума %2.

1.4. Динамика выраженности каталепсии в ходе селекции на данный признак.

1.5. Изменение концентрации генотипов и соответствующих аллелей СВА и AKR у мышей в ходе селекции на каталепсию.

1.5.1. Бэккроссы.

1.5.2. Мыши поколения селекции Si и S2.

1.5.3. Мыши поколения SgH S12.

1.6. Изучение функциональной активности 5HTia рецепторов у мышей линий

СВА, AKR и S12 поколения селекции.

ГЛАВА 4. Обсуждение результатов.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование локализации гена предрасположенности к каталепсии у мышей с помощью полиморфных микросателлитных маркеров"

Актуальность проблемы

Основной задачей феногенетики поведения является выявление молекулярных, клеточных и физиологических механизмов трансдукции информации, закодированной в ДНК, в сложный поведенческий признак. Решение этой задачи включает выявление относительной доли наследственности и среды в формировании поведенческого фенотипа, исследование характера генетической детерминации поведенческих реакций на уровне целого организма, изучение физиологических и биохимических каналов, через которые реализуется генетическая информация на уровне поведения. Особенно важным является изучение генетической структуры патологий поведения и высшей нервной деятельности.

Каталепсия (реакция замирания, животный гипноз, мнимая смерть) является одной из форм пассивной защитной реакции замирания, поскольку в естественных условиях она связана со страхом (Gallup, 1977; Klemm, 1989; Dixon, 1998). Она представляет собой обездвиженность с пластическим мышечным тонусом и встречается у всех позвоночных, включая млекопитающих (Карманова, 1977). В чрезмерно выраженной форме у человека каталепсия является синдромом патологического поведения, характерного для некоторых аффективных растройств и ряда форм шизофрении (Singerman, Raheja, 1994; Kruger et al., 2003; Taylor, Fink, 2003).

Существуют различные типы каталепсии. В целом их можно объединить в две большие группы: фармакологические виды каталепсии, как морфинная (De Ryck et al., 1980) или галоперидоловая (Sanberg, 1980; Patel, Hitzemann, 1999), и наследственные типы реакции замирания. Из последних известны каталепсия крыс ГК (Барыкина и др., 1983; Kolpakov et al., 1996) и щипковая каталепсия у мышей.

Интересной для генетических исследований каталепсии является щипковая каталепсия (pinch-induced catalepsy) мышей. У некоторых особей этого вида кратковременную реакцию замирания можно вызвать раздражением рефлексогенной зоны шеи (Ornstein, Amir, 1981; Klemm, 1983).

Полагают, что эта рефлекторная реакция имеет адаптивное значение и в естественных условиях проявляется у самок при копуляции, у детенышей при их транспортировке матерью и т. д.

Выявлены межлинейные различия по скорости развития каталепсии у мышей (Ornstein, Amir, 1981). Высокая предрасположенность к щипковой каталепсии по сравнению с мышами других линий была обнаружена у мышей линии СВА (Куликов и др., 1989). У 54% самцов и самок этой линии развивалась стойкая реакция замирания. Для изучения закономерностей наследования предрасположенности животных к каталепсии был проведен гибридологический анализ признака на мышах двух контрастных линий: СВА - с максимальной его выраженностью и некаталептической AKR. Анализ показал, что этот признак является аутосомным, рецессивным, моно- или олигогенным с неполной пенетрантностью (Куликов, 1989; Kulikov et al., 1993).

Однако генетическая структура каталепсии и локализация гена или генов, определяющих данную патологию, до настоящего времени оставалась не выясненной. Общеизвестна ключевая роль дофаминовых (особенно D2 типа) рецепторов в проявлении каталепсии (Klemm, 1989). Работами, проводимыми в Институте цитологии и генетики СО РАН (Kulikov et al., 1995; Popova, Kulikov, 1995), показана важная роль серотониновой системы мозга, а именно: ключевой фермент биосинтеза серотонина, триптофангидроксилаза, 5-HTiA и 5-НТ2А рецепторы вовлечены в регуляцию каталепсии у мышей.

Большая часть поведенческих признаков являются количественными, контролируются полигенно и значительно зависят от факторов внешней среды (Мазер, Джинкс, 1985; Васильева, 1999; Crusio, 1999), но при этом можно выделить главные гены с большим вкладом в изменчивость признака, чем остальные гены (Мазер, Джинкс, 1985). Для изучения генетической структуры количественных признаков был разработан специальный подход -QTL (quantitative trait loci) анализ. JIокусы ДНК, для которых методом QTL показано статистически достоверное сцепление с поведенческим признаком, могут включать полигены, участвующие в определении наследственной изменчивости по данному признаку (Plomin et al., 1994; Le Roy, 1999; Moisan, 1999; Roubertoux, 2001).

Одними из лучших маркеров для QTL анализа являются микросателлитные последовательности, поскольку обладают такими свойствами, как полиморфность, кодоминантность и достаточно высокая частота встречаемости в геноме (Hearne et al., 1992; Bennett, 2000; Pitel, Riquet, 2000; Schlotterer, 2004).

Так, у мышей был проведен QTL анализ каталепсии, возникающей при введении галоперидола. В результате было показано, что этот тип реакции замирания связан с геном дофаминовых D2 рецепторов (Patel, Hitzemann, 1999). Такое заключение не являлось неожиданным, поскольку галоперидол по механизму воздействия является блокатором дофаминовых рецепторов, преимущественно D2 типа. Природа же генетических факторов, контролирующих щипковую каталепсию, до настоящего времен оставалась невыясненной. Сложность картирования щипковой каталепсии у мышей в том, что она относится к альтернативным признакам с неполной пенетрантностью, и для картирования ее генов не приемлемы существующие программы QTL подхода, основанные на регрессионном анализе.

Целью настоящего исследования было выявление генетической структуры щипковой каталепсии у мышей СВА и картирование генов или гена, определяющих у этих животных высокую предрасположенность к каталепсии. Для выполнения цели исследования были поставлены следующие задачи:

1. определить на хромосомах мыши локусы, ответственные за предрасположенность к каталепсии, при помощи полиморфных микросателлитных маркеров;

2. выявить гены-кандидаты и проверить их связь с наследственной предрасположенностью к каталепсии;

3. изучить в процессе селекции на каталепсию изменения параметров этого признака и особенности генотипов селектированных животных;

4. показать возможность картирования альтернативных поведенческих признаков с неполной пенетрантностью.

Научная новизна.

• впервые проведен генетический анализ наследственной щипковой каталепсии у мышей и определена ее генетическая структура, включающая один майорный ген и несколько полигенов;

• впервые установлено, что ген, определяющий высокую предрасположенность к каталепсии, находится в дистальном фрагменте хромосомы 13 мыши;

• селекция на каталепсию привела к фиксированию в потомстве локуса ДНК, полученного от каталептической линии СБА и тесно связанного с геном серотониновых 5-HTiA рецепторов;

• показана возможность картирования альтернативного признака с неполной пенетрантностью классическим подходом QTL анализа с использованием полиморфных микросателлитных маркеров.

Научно-практическая ценность.

Результатами данной работы установлена генная структура сложного поведенческого признака - щипковой каталепсии у мышей СБА, которая у данных животных выражается в гипертрофированной форме. Поскольку реакция замирания представляет собой важный элемент пассивно-оборонительного поведения, то изучение ее генетического механизма способствует более глубокому пониманию эволюционной значимости каталепсии.

Кроме этого, была продемонстрирована возможность картирования альтернативного признака с неполной пенетрантностью классическим подходом QTL анализа с помощью полиморфных микросателлитных маркеров.

В данном исследовании показана также тесная связь предрасположенности к каталепсии с участком ДНК мыши, несущим ген 5-НТ1А рецепторов нейромедиатора серотонина, что привлекает внимание исследователей к более детальному изучению функций этих рецепторов и их роли в формировании поведенческих признаков.

Получены в результате селекции на каталепсию мыши со стабильно высокой долей каталептиков, значительно большей, чем у родительской линии СВА. Возможно дальнейшее использование этих животных в изучении генетических и физиологических факторов каталепсии, а также ее связи с другими формами поведения.

Положения, выносимые на защиту. высокая предрасположенность к каталепсии у мышей инбредной линии СВА кодируется одним майорным геном, локализованным в дистальном участке хромосомы 13 (между 58 и 75 сМ) и рядом не сцепленных с ним полигенов, вклад главного гена в наследование склонности к реакции замирания составляет 18%, а полигенов - 32%, селекция на каталепсию привела к закреплению в потомстве аллеля микросателлитного маркера D13Mit76, полученного от родительской линии СВА и тесно связанного с геном 5-HTiA рецепторов, наиболее вероятным геном-кандидатом на роль главного гена каталепсии является ген, кодирующий 5-НТ1А рецептор нейромедиатора серотонина.

Апробация работы.

Результаты данной работы были представлены и обсуждены на Ученых Сессиях Института цитологии и генетики в 2000, 2003 годах, на XXXIX, XL и XLII международных научных студенческих конференциях "Студент и научно-технический прогресс" (Новосибирск, 2001, 2002, 2004), VII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2004), III Съезде генетиков и селекционеров "Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития" (Москва, 2004), Международной школе молодых ученых «Геномика человека и модельных объектов» (Звенигород, 2004), 9ой зимней школе CIMO (Хельсинки, 2005), V Съезде физиологов Сибири (Томск, 2005), Международной летней школе по нейрогенетике поведения (Москва, 2005).

Публикации.

Материал диссертации представлен в 9 публикациях, в том числе в 3 статьях в отечественных реферируемых журналах.

Структура и объем работы.

Работа включает все необходимые разделы: введение, обзор литературных данных, материалы и методы, результаты и их обсуждение, выводы и список использованной литературы. Общий объем составляет 95 машинописных листов. Представлено 13 рисунков и 8 таблиц.

Благодарности.

Автор выражает сердечную благодарность своим научным руководителям Поповой Н.К. и Куликову А.В. за помощь при написании этой диссертационной работы, а также аспирантке лаборатории нейрогеномики поведения Кондауровой Е.М. за помощь в проведении экспериментов. Отдельную благодарность за поддержку технического обеспечения работы над диссертацией автор приносит Антонову Д.JI.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Базовкина, Дарья Владимировна

ВЫВОДЫ

Определен характер наследования щипковой каталепсии: высокая предрасположенность к этому признаку у мышей инбредной линии СВА кодируется одним майорным геном и рядом не сцепленных с ним полигенов, причем вклад главного гена составляет 18%, а полигенов -32%

При помощи QTL анализа с использованием микросателлитных маркеров майорный ген щипковой каталепсии у мышей локализован в интервале между 58 и 75 сМ хромосомы 13.

Отмечено быстрое увеличение доли каталептиков ответ на селекцию по каталепсии, что подтверждает результаты QTL анализа о наличии одного главного гена каталепсии.

Селекция на каталепсию привела к закреплению в потомстве аллеля микросателлитного маркера D13Mit76, полученного от родительской линии СВА.

Показано отсутствие сцепления признака щипковой каталепсии мышей с микросателлитными маркерами, локализованными вблизи генов, кодирующих дофаминовые D2 рецепторы, триптофангидроксилазу и серотониновые 5-НТ2а рецепторы, что позволяет не рассматривать каждый из данных генов в качестве майорного гена высокой склонности мышей к каталепсии.

Наиболее вероятным геном-кандидатом на роль майор-гена каталепсии является ген, кодирующий 5-HTiA рецептор нейромедиатора серотонина, расположенного в положении 58 сМ на хромосоме 13 мыши на расстоянии 3 сМ от микросателлитного маркера D13Mit76.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Базовкина, Дарья Владимировна, Новосибирск

1. Базовкина Д.В., Куликов А.В., Кондаурова Е.М., Попова Н.К. Селекция на предрасположенность к каталепсии усиливает депрессивноподобное поведение у мышей. // Генетика. 2005. Т.41. № 9. С. 1222-1228.

2. Банникова А.А. Молекулярные маркеры и современный филогенез млекопитающих. // Журн. Общ. Биол. 2004. Т.65. № 4. С.278-305.

3. Барыкина Н.Н., Чепкасов И.Л., Алехина Т.А., Колпаков В.Г. Селекция крыс Вистар на предрасположенность к каталепсии // Генетика. 1983. Т.19. С.2014-2021.

4. Беляев Д.К. Генетические аспекты доместикации животных. // Проблемы доместикации животных и растений.-М: Наука, 1972. С. 39-45

5. Васильева JI.A. Количественные признаки: генетические свойства, методы анализа.- Новосибирск: Изд. НГУ, 1999. 127 С.

6. Жимулев И.Ф. Общая и молекулярная генетика,- Новосибирск: Сиб. унив. изд., 2003. 479 С.

7. Зорина З.А., Полетаева И.И., Резникова Ж.И. Основы этологии и генетики поведения.-М.: Изд. МГУ, 1999.- 383 С.

8. Карманова И.Г. Эволюция сна.-JI.: Наука, 1977. 174 С.

9. Колпаков В.Г., Куликов А.В., Алехина Т.А., Чугуй В.Ф., Петренко О.И., Барыкина Н.Н. Кататония или депрессия? Линия крыс ГК генетическая животная модель психопатологии // Генетика. 2004. Т.40. С.827-834.

10. Крамер Г. Математические методы статистики.-М.: Мир, 1975. 648 С.

11. Куликов А.В., Базовкина Д.В. Проверка гипотез о сцеплении в гибридологическом анализе альтернативных поведенческих признаков с неполной пенетрантностью // Генетика. 2003. Т.39. С.1066-1072.

12. Куликов А.В., Базовкина Д.В., Муазан М.-П., Мормэд П. Картирование гена предрасположенности к каталепсии у мышей с помощью полиморфных микросателлитных маркеров // Докл. Акад. Наук. 2003. Т.393. С. 134-137.

13. Куликов А.В., Козлачкова Е.Ю., Попова Н.К. Закономерности наследования каталепсии у мышей//Генетика. 1989. Т.25. С.1402-1408.

14. Мазер К., Джинкс Дж. Биометрическая генетика.-М.: Мир, 1985. 463 С.

15. Патрушев Л.И. Экспрессия генов. М.: Наука, 2000. 830 С.

16. Петрова Е.В. Особенности изменения врожденных и приобретенных форм поведения крыс с генетической каталепсией // Журн. высш. нервн. деят. 1990. Т.40. С.475-480.

17. Попова Н.К. Серотонин мозга в генетически детерминированном защитном поведении // Журн. Высш. Нервн, Деят. 1997. Т.47. С.93-97.

18. Попова Н.К. Роль серотонина мозга в экспрессии генетически детерминированного защитно-оборонительного поведения // Генетика. 2004. Т.40. С.770-778.

19. Попова Н.К., Науменко Е.В., Колпаков В.Г. Серотонин и поведение. Новосибирск :Наука, 1978. 304 с.

20. Сингер М., Берг П. Гены и геномы. М.: Мир, 1998. Т.2. С.156-315

21. Скринская Ю.А., Попова Н.К., Никулина Э.М., Куликов А.В. Участие дофаминергической системы стриатума в регуляции каталепсии у крыс и мышейразличных генотипов. // Журн. высш. нервн. деят. 1997. Т. 47. С. 1032-1039.

22. Трут Л.Н. Очерки по генетике поведения.-Новосибирск: Наука, 1978. 255 С.

23. Abbar М., Courtet P., Amadeo S., Caer Y., Mallet J., Baldy-Moulinier М., Castelnau D., Malafosse A. Suicidal behaviors and the tryptophan hydroxylase gene. // Arch Gen Psychiatry. 1995. V. 52. P. 846-849.

24. Abrams R., Taylor M.A., Coleman-Stolurow K. Catatonia and mania: patterns of cerebral dysfunction // Biol. Psychiatr. 1979. V. 14. P. 111-117.

25. Aghajanian G.K. Electrophysiology of serotonin receptor subtypes and signal transduction pathways // Psychopharmacology: The Fourth Generation of Progress / Bloom F.R., Kupfer D.J.(Eds.), N.Y.: Raven Press, 1995. P.1451-1459.

26. Allison D.B., Neale M.C. Joint tests of linkage and association for quantitative traits. // Theor Popul Biol. 2001. V.60. P.239-251.

27. Amir S., Brown Z.W., Amir Z., Ornstein K. Body-pinches induced long lasting cataleptic-like immobility in mice: Behavioral characterization and the effects of naloxone // Life Sci., 1981. V.10. P.l 189-1194.

28. Ashley C.T., Warren S.T. Trinucleotide repeat expansion and human disease. // Annu. Rev.Genet. 1995. V.29. P.703-728.

29. Atkin N.B. Microsatellite instability. // Cytogenet. and Cell Genet. 2001. V.92. P.177-181.

30. Balsara J.J., Jadhav J.H., Chandorkar A.G. Effect of drugs influencing central serotonergic mechanisms on haloperidol-induced catalepsy // Psychopharmacol., 1979. V.62. P.67-69.

31. Barinaga M. A new tool for examining multigenic traits. // Science. 1994. V. 264. P. 1691.

32. Barnes N.M., Sharp T. A review of central 5-HT receptors and their function // Neuropharmacol., 1999. V.38. P. 1083-1152.

33. Beckmann, J.S., Weber, J.L. Survey of human and rat microsatellites. // Genomics. 1992. V.12. P.627-631.

34. Belknap J.K., Hitzemann R., Crabbe J.C., Phillips T.J., Buck K.J., Williams R.W. QTL Analysis and Genomewide Mutagenesis in Mice: Complementary Genetic Approaches to the Dissection of Complex Traits. // Beh. Genetics. 2001. V.31.P.5-15.

35. Bennett P. Demystified microsatellites. // J. Clin Pathol: Mol Pathol. 2000. V.53. P.177-183.

36. Bensch S., Akesson M. Ten years of AFLP in ecology and evolution:why so few animals? // Molecular Ecology. 2005. V. 14. P.2899-2914.

37. Beuzen N.D., Stear M.J., Chang K.C. Molecular markers and their use in animal breeding. // The Veterinary Journal. 2000. V.160. P.42-52.

38. Biet E., Sun J., Dutreix M. Conserved sequence preference in DNA binding among recombination proteins: an effect of ssDNA secondary structure. // Nucl. Acids Res. 1999. V.27. P.596-600.

39. Blier P., de Montigny C. Current advances and trends in the treatment of depression//Trends Pharmacol. Sci. 1994. Y.15. P.220-226.

40. W 40. Braun A., Little D.P., Reuter D., Muller-Mysok В., Koster H. Improvedanalysis of microsatellites using mass spectrometry. // Genomics. 1997. V.46.1. P. 18-23.

41. Brodkin E.S., Goforth S.A., Keene A.H., Fossella J.A., Silver L.M. Identification of quantitative trait loci that affect aggressive behavior in mice // J. Neurosci. 2002. V.22.P.1165-1170.

42. Broekkamp C.L., Oosterloo S.K., Berendsen H.H., van Delf A.M. Effect of metergoline, fenfluramine and 8-OH-DPAT on catalepsy induced by haloperidol or morphine // Naunyn-Schmiedebergerg's Arch. Pharmacol. 1988. V.338.P. 191-195.

43. Brumfield R.T., Beerli P., Nickerson D.A., Edwards S.V. The utility of single nucleotide polymorphism in inferences of population history. // Trends Ecol. Evol. 2003. V. 18. P.249-256.

44. Buck K.J., Metten P., Belknap J.K., Crabbe J.C. Quantitative trait loci involved in genetic predisposition to acute alcohol withdrawal in mice. // J. Neurosci.-1997.-Vol. 17.-P. 3946-3955

45. Bunday B. Basic Optimasation Methods. London: Edward Arnold Ltd, 1984. 128 P.

46. Burchill S.A., Selby P.J. Molecular detection of low-level disease in patients with cancer. // J. Pathol. 2000. V. 190. P.6-14.

47. Calderon S.F., Sanberg P.R., Norman A.B. Quinolinic acid lesions of ratstriatum abolish Dl- and D2-dopamine receptor-mediated catalepsy // Brain Res., 1988. V.450. P.403-407.

48. Callan D.F., Thompson A.D., Shen Y., Phillips H.A., Richards R.I., Mulley J.C., Sutherland G.R. Incidence and origin of null alleles of the (AC)n microsatellite markers. // Am. J. Hum. Genet. 1993. V.52. P.922-927.

49. Campbell D., Duchesne P., Bernatchez L. AFLP utility for population assignment studies: analytical investigation and empirical comparison with microsatellites. // Mol. Ecol. 2003. V.12. P.1979-1991.

50. Cardon L.R., Bell L. Association study designs for complex diseases. // Nature• Rev. Gen. 2001. V.2. P.91-99.

51. Catasti P., Chen X., Mariappan S.V., Bradbury E.M., Gupta G. DNA repeats in the human genome. // Genetica. 1999. V.106. P.15-36.

52. Chambers G.K., MacAvoy E.S. Microsatellites: consensus and controversy. // Сотр. Biochem. Physiol. В Biochem. Mol. Biol. 2000. V.126. P.455-476.

53. Chang D.K., Metzgar D., Wills C., Boland C.R. Microsatellites in the eukaryotic DNA mismatch repair genes as modulators of evolutionary mutation rate. // Genome Res. 2001. V. 11. P. 1145-1146.

54. Chen X., Sullivan P.F. Single nucleotide polymorphism genotyping: biochemistry, protocol, cost and throughput. // Pharmacogenomics J. 2003. V.3. P.77-96.

55. Cifarelli R.A., Gallitelli M., Cellini F. Random amplified hybridization microsatellites (RAHM): isolation of a new class of microsatellite-containing DNA clones. //Nucleic Acids Res. 1995. V.23. P.3802-3803.

56. Collins F.S. Positional cloning: let's not call it reverse anymore. // Nature Genet. 1992. V.l.P.3-6.

57. Collins R.L., Fuller J.L. Audiogenic seizure prone (asp) a gene affecting behavior in linkage group 8 of the mouse. // Science. 1968. V.162. P.l 137-1139.

58. Copeland N.G., Gilbert DJ., Jenkins N.A., Nadeau J.H., Eppig G.T., Maltais L.J., Miller J.C., Dietrich W.F., Sting R.G., Lincoln S.E. et al. Genom maps IU 1993. Wall chart. // Science. 1993. V.262. P.67-82.

59. Cornall R.J., Aitman T.J., Hearne C.M. Todd J.A. The generation of a library of PCR-analyzed microsatellite variants for genetic mapping of the mouse genome.//Genomics. 1991. V.10. P.874-881.

60. Cousin E., Genin E., Mace S., Ricard S., Chansac C., del Zompo M., Deleuze J.F. Association studies in candidate genes: strategies to select SNPs to be tested. // Hum Hered. 2003. V.56. P.151-159.1. Ш)

61. Cunningham E.P., Meghen C.M. Biological identification systems: genetic markers. // Rev. sci. tech. Off. int. Epiz. 2001. V.20. P.491-499.

62. De Ryck M., Teitelbaum P. Morphine catalepsy as an adaptive reflex state in rats // Behav. Neurosci. 1984. V.98. P.243-261.

63. Di Chiara G., Morelli M. Output pathways mediating bazal ganglia function // Advances in Behavioral Biology / McKenzie J., Klemm W.R., Wilcock L. (eds.), NY : Plenum Press, 1984. P.443-446.

64. Dib C., Faure S., Fizames C., Samson D., Drouot N., Vignal A., Millasseau P., Marc S., Hazan J., Seboun E. A comprehensive genetic map of the human genome based on 5,264 microsatellites. // Nature. 1996. Y.380. P.152-154.

65. Dietrich W.F., Miller J., Steen R., Merchant M.A., Damron-Boles D., Husain Z., Dredge R., Daly M.J., Ingalls K.A., O'Connor T.J. A comprehensive genetic map of the mouse genome. //Nature. 1996. V.380. P. 149-152.

66. Dixon A.K. Ethological strategies for defense in animals and humans: Their role in some psychiatric disorders // Brain J. Med. Psychol., 1998. V.71. P.417- 445.

67. Eggen A. Cartographie fine d'un gene et clonage positionnel. // INRA Production Aimales, numero hors serie "Genetique moleculaire: principes et application aux populations animals", 2000. P.133-139.

68. Ellegren H. Microsatellite mutations in the germline: implications for evolutionary inference. // Trends Genet. 2000. V. 16. P.551-558.

69. Ellegren H. Microsatellites: simple sequences with complex evolution. // Nature Rev. Gen. 2004. V.5. P.435-445.

70. Elsen J.-M. Classical linkage analysis // Neurobehavioral Genetics. Methods and Applications / Jones В., Mormede P. (eds.), Boca Raton: CRC Press, 1999. P.43-55.

71. Emara M.G., Kim H. Genetic markers and their application in poultry breeding. // Poult. Sci. 2003. V.82. P.952-957.

72. Field D., Wills C. Long, polymorphic microsatellites in simple organisms. // Proc. R. Soc. Lond. 1996. V.263. P.209-215.

73. Flint J., Corley R., DeFries J.C., Fulker D.W., Gray J.A., Miller S., Collins A.C. A simple genetic basis for a complex psychological trait in laboratory ■mice// Science. 1995. V.269. P.1432-1435.

74. Frank D. The genetic basis of evolutionary changes in behavioral patterns. // In: The genetics of behavior/ Ed. J. H. F. van Abeelen.-Amsterdam., 1974. P.119-140.

75. Gallup G.G. Tonic immobility: The role of fear and predation // Psychol. Res. 1977. V.27.P.41-61.

76. Galvao R., Mendes-Soares L., Camara J., Jaco I., Carmo-Fonseca M. Triplet repeats, RNA secondary structure and toxic gain-of-function models for pathogenesis. // Brain Res. Bull. 2001. V.56. P.191-201.

77. Garant D., Kruuk L.E. How to use molecular marker data to measure evolutionary parameters in wild populations. // Mol. Ecol. 2005. V.14. P.1843-1859.

78. Garchon H.J., Bedossa P., Eloy L., Bach J.-F. Identification and mapping to chromosome 1 of a susceptibility locus for periinsulitis in non-obese diabetic mice.//Nature. 1991. V. 353. P. 260-262.

79. Gaudeul M., Till-Bottraud I., Barjon F., Manel S. Genetic diversity and differentiation in Eryngium alpinum L. (Apiaceae): comparison of AFLP and microsatellitemarkers. //Heredity. 2004. V.92. P.508-518.

80. Gebhardt F., Zanker K.S., Brandt B. Modulation of epidermal growth factor receptor gene transcription by a polymorphic dinucleotide repeat in intron 1. // J. of Biol. Chem. 1999. V.274. P.13176-13180.f

81. Gerber S., Mariette S., Streiff R., Bodenes C., Kremer A. Comparison of microsatellites and amplified fragment length polymorphism markers for parentage analysis. //Mol. Ecol. 2000. V.9. P.1037-1048.

82. Gerhardt C.C., van Heerikhuizen H. Functional characteristics of heterologously expressed 5-HT receptors // Eur. J. Pharmacol. 1997. V.334. P.1-23.

83. Gershenfeld H.K., Neumann P.E., Mathis C., Crawley J.N., Li X., Paul S.M. Mapping quantitative trait loci for open-field behavior in mice // Behav. Genet., 1997. V.27. P.201-210.

84. Gershenfeld H.K., Paul S.M. Mapping quantitative trait loci for fear-like behaviors in mice // Genomics, 1997. V.49. P. 1-8.

85. Gill P., Jeffreys A.J., Werrett D.J. Forensic application of DNA 'fingerprinting'. //Nature. 1985. V.318. P.577-579.

86. Groenen M.A., Cheng H.H., Bumstead N., Benkel B.F., Briles W.E., Burke Т., Burt D.W., Crittenden L.B., Dodgson J., Hillel J. A consensus linkage map of the chicken genome.//Genome Res. 2000. V.10. P.137-147.

87. Haley C.S., Knott S.A. A simple regression method for mapping quantitative trait loci in line crosses using flanking markers. // Heredity. 1992. V.69. P. 315-324.

88. Hancock J.M. Simple sequences in a 'minimal' genome. // Nat. Genet. 1996.1. V.14. P.14-15.

89. Harding R.M., Boyce A.J., Clegg J.B. The evolution of tandemly repetitive DNA: recombination rules. // Genetics. 1992. V.132. P.847-859.

90. Hartgraves S.L., Kelly P.H. Role of mesencephalic reticular formation in cholinergic-induced catalepsy // Brain Res., 1984. V.307. P.47-54.

91. Hearne C.M., Ghosh S., Todd J.A. Microsatellites for linkage analysis of genetic traits. // TIG. 1992. V.8. P .288-294.

92. Hearne C.M., McAleer M.A., Love J.M., Cornall R.J., Aitman T.J., Todd J.A Additional microsatellite markers for mouse genome mapping. // Mamm. Genome. 1991. V.l. P.273-282.

93. Henke L., Fimmers R., Joseph! E., Cleef S., Dulmer M., Henke J. Usefulnessof conventional blood groups, DNA minisatellites, and short tandem repeatpolymorphisms in paternity testing: a comparison. // Foren. Sci. Intern. 1999. V.103. P.133-142.

94. Hitzemann R., Demarest K., Koyner J., Cipp L., Patel N., Rasmussen E., McCaughran J. Jr. Effect of genetic cross on the detection of quantitative trait loci and a novel approach to mapping QTLs. // Pharmacol Biochem Behav. 2000. V.67. P.767-772.

95. Hoffman E.K., Trusko S.P., Murphy M., George D.L. An SI nuclease-sensitive homopurine/homopyrimidine domain in the c-Ki-ras promoter interacts with a nuclear factor. // Proceedings of the Nation. Acad, of Sci. USA. 1990. V.87. P.2705-2709.

96. Holmes N.G. Microsatellite markers and the analysis of genetic disease. // Br Vet J. 1994. V. 150. P.411-421.

97. Horn G.T., Richards В., Klinger K.W. Amplification of a highly polymorphic VNTR segment by the polymerase chain reaction. // Nucleic Acids Res. 1989. V.17. P.21-40

98. Ioannidis J.P., Ntzani E.E., Trikalinos T.A., Contopoulos-Ioannidis D.G. Replication validity of genetic association studies. // Nat. Genet. 2001. V.29. P.306-309.

99. Jasinska A., Michlewski G., Mezer M., Sobczak K., Kozlowski P., Napierala M., Krzyzosiak W. J. Structures of trinucleotide repeats in human transcripts and their functional implications. // Nucleic Acids Res. 2003. V.31. P.5463-5468.

100. Jeffreys A.J., Murray J., Neumann R. High-resolution mapping of crossovers in human sperm defines a minisatellite associated recombination hotspot. // Molec. Cell. 1998. V.2. P.267-273.

101. Jeffreys A.J., Wilson V., Thein S.L. Hypervariable minisatellite regions in human DNA. //Nature. 1985. V.314. P.67-73.

102. Kalendar R., Grob Т., Regina M.T., Suoniemi A., Schulman A. IRAP and REMAP: two new retrotransposon-based DNA fingerprinting techniques. // Theor. Appl. Genet 1999. V.98. P.704-711.

103. Kanes S., Dains K., Cipp L., Gatley J., Hitzemann В., Rasmussen E., Sanderson S., Silverman M., Hitzemann R. Mapping the genes for haloperidol-induced catalepsy. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1996. V.277. P.1016-1025.

104. Kantety R.V., La Rota M., Matthews D.E., Sorrells M.E. Data mining for simple sequence repeats in expressed sequence tags from barley, maize, rice, sorghum and wheat. // Plant. Mol. Biol. 2002. V.48. P.501-510.

105. Karl S.A., Avise J.C. PCR-based assays of mendelian polymorphisms from anonymous single-copy nuclear DNA: techniques and applications for population genetics. // Mol Biol Evol. 1993. V.10. P.342-361.

106. Kashi Y., King D., Soller M. Simple sequence repeats as a source of quantitative genetic variation. // Trends Genet. 1997. V.13. P.74-78.

107. Katti M.V., Ranjekar P.K., Gupta V.S. Differential distribution of simple sequence repeats in eukaryotic genome sequences. // Mol. Biol. Evol. 2001. V.18. P.1161-1167.

108. Kerem В., Rommens J.M., Buchanan J.A., Markiewicz D., Cox Т.К., Chakravarti A., Buchwald M., Tsui L.C. Identification of the cystic fibrosis gene: genetic analysis. // Science. 1989. V.245. P.1073-1080.

109. Klemm W.R. Drug effects on active immobility responses: What they tell us about neurotransmitter systems and motor functions // Progress in Neurobiology, 1989. V.32. P.403-422.

110. Klemm W.R. Behavioral inhibition // Brainstem Mechanisms of Behavior / Klemm W.R., Vertes R.P. (eds.), N.Y.: John Wiley & Sons, 1990. P.497-533.

111. Kolasiewicz W., Wolfarth S., Ossowska K. The role of the thalamic nucleus in the catalepsy evoked from the substantia nigra pars reticulata in rats // Neurochem. Lett. 1988. V.90. P.219-223.

112. Kolpakov V.5 Barykina N.N., Alekhina T.A., Ponomarev I.Yu. Some genetic animal models for comparative psychology and biological psychiatry.-Novosibirsk : Institute Cytology and Genetics, 1996. 172 P.

113. Koreth J., O'Leary J.J., O'D McGee J. Microsatellites and PCR genomic analysis. // J. Pathol. 1996. V.178. P.239-248.

114. Kostowski W., Gumulka W., Czlonkowski A. Reduced cataleptogenic effects of some neuroleptics in rats with lesioned midbrain raphe and treated with p-chlorophenylalanine // Brain Res., 1972. V.48. P.443-446.

115. Kovtun IV Goellner G., McMurray C.T. Structural features of trinucleotide repeats associated with DNA expansion. // Biochem. and Cell. Biology. 2001. V.79. P.325-326.

116. Kruger S., Bagby M., Hoffler J., Braunig P. Factor Analysis of the Catatonia Rating Scale and Catatonic Symptom Distribution Across Four Diagnostic Groups. // Compreh. Psychiatry. 2003. V.44. P.472-482.

117. Kruglyak L., McAllister L. Who needs genetic markers? // Nat. Genet. 1998. V.18. P.200-202.

118. Kuhner M.K., Beerli P., Yamato J., Felsenstein J. Usefulness of single nucleotide polymorphism data for estimating population parameters. // Genetics. 2000. V.156. P.439-447.

119. Kuklin A., Munson K., Gjerde D., Haefele R., Taylor P. Detection of single-nucleotide polymorphisms with the WAVE DNA fragment analysis system. // Genetical Testing. 1998. V.l. P.201-206.

120. Kulikov A, Kolpakov V, Maslova G, Kozintsev I, Popova N. Effect of selective 5-HT1A agonists and 5-HT2 antagonists on inherited catalepsy in rats // Psychopharmacology. 1994. V. 114. P. 172-174.

121. Kulikov A, Kozlachkova E, Kudryavtseva N, Popova N. Correlation between tryptophan hydroxylase activity in the brain and predisposition to pinch-induced catalepsy in mice // Pharmacol. Biochem. Behav. 1995. V.50. P.431-435.

122. Kulikov A.V., Kozlachkova E.Yu., Maslova G.B., Popova N.K. Inheritance of predisposition to catalepsy in mice // Behav. Genet. 1993. V.23. P.379-384.

123. Kulikov A., Kozlachkova E., Popova N. The activity of tryptophan hydroxylase in brain of hereditary predisposed to catalepsy rats // Pharmacol. Biochem. Behav. 1992. V.43. P.999-1003.

124. Kwok P.Y., Chen X. Detection of single nucleotide variations. // Genetic Engineering. 1998. V.20. P.125-134.

125. Kwok P.Y., Chen X. Detection of single nucleotide polymorphisms. // Curr Issues Mol Biol. 2003. V.5. P.43-60.

126. Lai E. Application of SNP technologies in medicine: lessons learned and future challenges. // Genome Res. 2001. V.ll. P.927-929.

127. Landegren U., Nilsson M., Kwok P.Y. Reading bits of genetic information: Methods for single-nucleotide polymorphism analysis. // Genome Res. 1998. V.8. V.169-116.

128. Lander E.S., Botstein D. Mapping Mendelian factors underlying quantitative traits using RFLP linkage maps // Genetics, 1989. V.121. P.185-199.

129. Lander E., Kruglyak L, Genetic dissection of complex traits: guidelines for interpreting and reporting linkages resultes. // Nature Genetics. 1995. V.l 1. P. 241-247.

130. Le Roy I. Quantitative trait loci (QTL) mapping // Neurobehavioral Genetics. Methods and Applications / Jones В., Mormede P. (eds.), Boca Raton: CRC Press, 1999. P.69-76.

131. Leal S.M. Genetic maps of microsatellite and single-nucleotide polymorphism markers: are the distances accurate? // Genet. Epidemiol. 2003. V.24. P.243-252.

132. Leung W.K., Kim J.J., Kim J.G., Graham D.Y., Sepulveda A.R. Microsatellite instability in gastric intestinal metaplasia in patients with and without gastric cancer. //American J. of Pathology. 2000. V.156. P.537-543.

133. Li Y.C., Korol A.B., Fahima Т., Beiles A., Nevo E. Microsatellites: genomic distribution, putative functions and mutational mechanisms: a review. // Mol. Ecology. 2002. V. 11. P.2453-2465.

134. Li Y.C., Korol A.B., Fahima Т., Nevo E. Microsatellites within genes: structure, function, and evolution. //Mol. Biol. Evol. 2004. V.21. P.991-1007.

135. Lin M.T., Tsay H.J., Su W.H., Chueh F.Y. Changes in extracellular serotonin in rat hypothalamus affect thermoregulatory function. // Am. J. Physiol. 1998. V. 274. P. 1260-1267.

136. Lipshutz R.J., Fodor S.P.A., Gingeras T.R., Lockhart D.J. High density synthetic oligonucleotide arrays. //Nature Genetics. 1999. Y.21. P.20-24.

137. Little P.J., Compton D.R., Mechoulam R., Martin B.R. Stereochemical effects of ll-hydroxy-dekta-8-THC-dimethylheptyl in mice and dogs // Pharmacol. Biochem. Behav. 1989. V.32. P.661-666.

138. Love J.M., Knight A.M., McAleer M.A, Todd J.A. Towards construction of a high resolution map of the mouse genome using PCR-analysed microsatellites. //Nucleic Acids Res. 1990. V.18. P.4123-4130.

139. Lynch M., Walsh B. Genetics and Analysis of Quantitative Traits.-Massachusetts: Sinauer Associates, 1998. 265 P.

140. MacClern G.E. A retrospect on neurobehavioral genetics. // Neurobehavioral Genetics. Methods and Applications / Jones В., Mormede P. (eds.), Boca Raton: CRC Press, 1999. P. 1-10.

141. Maes M., Meltzer H.Y. The serotonin hypothesis of major depression // Psychopharmacology. The fourth generation of progress / Bloom E.E., Kupfer N.N. (eds.), N.Y.: Raven Press, 1995. P.933-944.

142. Maj J., Mogilnicka E., Przewlocka B. Antagonistic effect of cyproheptadine on neuroleptic-induced catalepsy // Pharmacol. Biochem. Behav., 1975. V.3. P.25-27.

143. Marcotte E.M., Pellegrini M., Yeates Т.О., Eisenberg D. A census of protein repeats. //J. ofMol. Biology. 1999. V.293. P. 151-160.

144. Marklund S., Ellegren H., Eriksson S., Sandberg K., Andersson L. Parentage testing and linkage analysis in the horse using a set of highly polymorphic microsatellites. //Anim. Genet. 1994. V.25. P. 19-23.

145. Martin-Farmer J., Janssen G.R. A downstream CA repeat sequence increases translation from leadered and unleadered mRNA in Escherichia coli. II Mol. Micobiology. 1999. V.31. P.1025-1038.

146. Masiga D.K., Turner C.M. Amplified (restriction) fragment length polymorphism (AFLP) analysis. // Methods Mol. Biol. 2004. V.270. P.173-186.

147. McCarthy J.J. Advances in pharmacogenomic research and development. // Mol. Biotechnol. 2003. V.25. P.275-282.

148. McGraw C.P., Klemm W.R. Genetic differences in susceptibility of rats to immobility reflex ("animal hypnosis") // Behav. Genet. 1973. V.3. P.155-162.

149. Metzgar D., Bytof J., Wills C. Selection against frameshift mutations limits microsatellite expansion in coding DNA. // Genome Res. 2000. Y.10. P.72-80.

150. Meyer S., Weiss G., van Haeseler A. Pattern of nucleotide substitution and rate heterogeneity in the hypervariable regions I and II of human mtDNA. // Genetics. 1999. V.152. P.l 103-1110.

151. Milan D. Notion de gene candidat. // INRA Production Aimales, numero hors serie "Genetique moleculaire: principes et application aux populations animals", 2000. P.l 19-123.

152. Moisan M.-P. From QTL detection to gene identification // Neurobehavioral Genetics. Methods and Applications / Jones В., Mormede P. (eds.), Boca Raton: CRC Press, 1999. P.77-91.

153. Moisan M.-P., Courvoisier H., Bihoreau M.T., Gauguier D., Hendley E.D., Lathrop M., James M.R., Mormede P. A major quantitative trait locus influences hyperactivity in the WKHA rat. // Nat. Genet. 1996. V.14. P.471-473.

154. Morgante M., Hanafey M., Powell W. Microsatellites are preferentially associated with nonrepetitive DNA in plant genomes. // Nature Genet. 2002. V.30. P. 194-200.

155. Moxon E.R., Wills C. DNA microsatellites: agents of evolution? // Sci. Am. 1999. V.280. P.94-99.

156. Mullis 1С., Faloona F., Scharf S., Saika R., Horn G., Erlich H. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction. // Cold Spring Harb. Symp. quant. Biol. 1986. V.51. P.263-273.

157. Murphy T.D., Karpen G.H. Localization of centromere function in a Drosophila minichromosome. // Cell. 1995. V.82. P.599-609.

158. Naidoo R., Chetty R. The application of microsatellites in molecular pathology. //Pathol. Oncol. Res. 1998. V.4. P.310-315.

159. Nakamura Y., Leppert M., O'Connel P., Wolff R., Holm Т., Culver M., Martin C., Fujimoto E., Hoff M., Kumlin E., White R. Variable number tandem repeat (VNTR) markers for human gene mapping. // Science. 1987. V.235. P.1616-1622.

160. Nataraj A.J., Olivos-Glander I., Kusukawa N., Highsmith W.E. Single-strand conformation and heteroduplex analysis for gel-based mutation detection. // Electrophoresis. 1999. V.20. P.l 177-1185.

161. Neal-Beliveau B.S., Joyce J.N., Lucki I. Serotonergic involvement in haloperidol-induced catalepsy // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1993. V.265. P.207-217.

162. Nielsen R., Signorovitch, J. Correcting for ascertainment biases when analyzing SNP data: applications to the estimation of linkage disequilibrium. // Theor. Popul. Biol. 2003. V.63. P.245-255.

163. Oda S., Maehara Y., Sumiyoshi Y., Sugimachi К Microsatellite instability in cancer: what problems remain unanswered? // Surgery. 2002. V.131. P.55-62.

164. Ohashi J., Tokunaga K. Power of genome-wide linkage disequilibrium testing by using microsatellite markers. // J. Hum. Genet. 2003. V.48. P.487-491.

165. Olson M.Y., Hood L., Cantor C., Botstein D. Isolation of single-copy human genes from library of yeast artificial chromosome clones. // Science. 1989. V.245. P.1348-1351.

166. Ornstein K., Amir S. Pinch-induced catalepsy in mice // J. Сотр. Physiol. Psychol., 1981. V.95. P.827-835.

167. Overstreet D.H. Genetic animal models of endogenous depression // Genetically Defined Animal Models of Neurobehavioral Dysfunctions / Driscoll P. (ed.), Boston: Birkhauser, 1992. P.253-276.

168. Papa R., Troggio M., Ajmone-Marsan P., Nonnis Marzano F. An improved protocol for the production of AFLP markers in complex genomes by means of capillary electrophoresis. // J. Anim. Breed. Genet. 2005. V.122. P.62-68.

169. Parsons Y.M., Shaw K.L. Mapping unexplored genomes: a genetic linkage map of the Hawaiian cricket Laupala. II Genetics. 2002. V.162. P.1275-1282.

170. Patel N., Hitzemann R. Detection and mapping of QTL for haloperidol-induced catalepsy in C57BL/6J and DBA/2 J F2 Intercross // Behav. Genet. 1999. V. 29. P.303-310.

171. Peripato A.C., De Brito R.A., Vaughn T.T., Pletscher L.S., Matioli S.R., Cheverud J.M. Quantitative trait loci for maternal performance for offspring survival in mice. // Genetics. 2002. V.162. P.1341-1353.

172. Pitel F., Riquet J. Les marqueurs anonyms et la detection de leur polymorphisme. // INRA Production Aimales, numero hors serie "Genetique moleculaire: principes et application aux populations animals", 2000. P.45-53.

173. Plomin R. The role of inheritance in behavior // Science. 1990. V.248. P.183-188.

174. Plomin R., McClearn G.E., Gora-Maslak G., Neiderhiser J.M. Use of recombinant inbred strains to detect quantitative trait loci associated with behavior. // Behav Genet. 1991. V.21. P.99-116.

175. Plomin R., Owen M.J., McGuffin P. The genetic basis of complex human behaviors.//Science. 1994. V.264. P.1733-1739.

176. Popova N.K. Brain serotonin in genetically defined defensive behaviour // Complex Brain Functions: Conceptual Advances in Russian Neuroscience / Millar R., Ivanitsky A.M., Balaban P.M. (eds.), Harwood Press, 1999. P.307-329.

177. Popova N, Kulikov A. On the role of brain serotonin in expression of genetic predisposition to catalepsy in animal models // Am. J. Med. Genetics (Neuropsychiatric Genetics). 1995. V.60. P.214-220.

178. Prinssen E.P., Colpaert F.C., Коек W. 5-HTIA receptor activation and anti-cataleptic effects: high-efficacy agonists maximally inhibit haloperidol-induced catalepsy //Eur. J. Pharmacol. 2002. V.453. P.217-221.

179. Pycock C., Horton R., Carter C. Interactions of 5-hydroxytryptamine and gamma-aminobutyric acid with dopamine. // Dophamine.-New York., 1978. P.323.

180. Qin Z.H., Zhou L.W., Zhang S.P., Wang Y., Weiss B. D2 dopamine receptor antitese oligodeoxynucleotide ingibits the synthesis of a functional pool of D2 dopamine receptors. //Mol. Pharmacol. 1995. V.48. P.730-737.

181. Raina A., Dogra T.D. Application of DNA fingerprinting in medicolegal practice. // J. Indian Med. Assoc. 2002. V.100. P.688-694.

182. Rassmann K., Schlotterer C., Tautz D. Isolation of simple-sequence loci for use in polymerase chain reaction-based DNA fingerprinting. // Electrophoresis. 1991. V.12. P.l 13-118.

183. Reichardt L.F., Tomaselli K.J. Extracellular matrix molecules and their receptors. Function in neuronal development. // Annu. Rev. Neurosci. 1991. Vol.14. P.531-570.

184. Rendel J.M., Sheldon B.L., Finlay D.E. Canalization of development of scutellar bristles in a Drosophila by control of the scute locus. // Genetics. 1965. V.52. P.1137-1151.

185. Richard G.F., Paques F. Mini- and microsatellite expansions: the recombination connection. // EMBO Rep. 2000. V.l. P. 122-126.

186. Richardson Т., Cato S., Ramser J., Kahl G., Weising K. Hybridization of microsatellites to RAPD: a new source of polymorphic markers. // Nucleic Acids Res. 1995. V.23. P.3798-3799.

187. Rohrer G.A., Alexander L.J., Hu Z., Smith T.P.L., Keele J.W., Beattie C.W. A comprehensive map of the porcine genome. // Genome Res. 1996. V.6. P.371-391.

188. Ross P.L., Lee K., Belgrader P. Discrimination of single-nucleotide polymorphisms in human DNA using peptide nucleic acid probes detected by MALDI-TOF mass spectrometry. // Analytical Chem. 1997. V.69. P.4197-4202.

189. Roubertoux P.L. What Can the Neurobiologist Learn from Mapping Genes Linked with Behavioral Traits? // Beh. Genetics. 2001. V.31. P. 1-4.

190. Rubinsztein D.C., Amos W., Leggo J., Goodburn S., Jain S., Li S.H., Margolis R.L., Ross C.A., Ferguson-Smith M.A. Microsatellite evolution evidence for directionality and variation in rate between species. // Nature Genetics. 1995. V.10. P.337-343.

191. Sanberg P.R., Bunsey M.D., Giordano M., Norman A.B. The catalepsy test: Its ups and downs //Behav. Neurosci. 1988. V.102. P.748-759.

192. Sarkar G., Paynton C., Sommer S.S. Segments containing alternating purine and pyrimidine dinucleotides: patterns of polymorphism in humans and prevalence throughout phylogeny. // Nucleic Acids Res. 1991. V.l9. P.631-636.

193. Schafer A.J., Hawkins J.R. DNA variation and the future of human genetics. // Nature. Biotech. 1998. V.16. P.33-39.

194. Schierwater В., Ender A. Different thermostable DNA polymerases may amplify different RAPD products. // Nucleic Acids Res. 1993. V.21. P.4647-4648.

195. Schlotterer C. Genome evolution: are microsatellites really simple sequences? // Curr. Biol. 1998. V.8. P.132-134.

196. Schlotterer C. Evolutionary dynamics of microsatellite DNA. // Chromosoma. 2000. V.109. P.365-371.

197. Schlotterer C. The evolution of molecular markers just a matter of fashion? // Nat Rev Genet. 2004. V.5. P.63-69.

198. Shastry B.S. SNP alleles in human disease and evolution. // J. Hum. Genet. 2002. V.47.P.561-566.

199. Singerman В., Raheja R. Malignant catatonia a continuing reality. // Ann. Clin. Psychiatry. 1994. V.6. P.259-266.

200. Smith R.H. Wildness and domestication in Mus musculus: A behavioural analysis // J. Сотр. Physiol. Psychol. 1992. V.79. P.22-29.

201. Stallings R.L., Ford A.F., Nelson D., Torney D.C., Hildebrand C.E., Moyzis R.K. Evolution and distribution of (GT)n repetitive sequences in mammalian genomes. // Genomics. 1991. V.10. P.807-815.

202. Stoll J., Kozak C., Goldman D. Characterization and chromosomal mapping of a cDNA encoding thryptophan hydroxylase from a mouse mastocytoma cell line.//Genomics. 1990. V.7. P.88-96.

203. Talbot C.J., Radcliffe R.A., Fullerton J., Hitzemann R., Wehner J.M., Flint J. Fine scale mapping of a genetic locus for conditioned fear. // Mammal. Genome. 2003. V.14. P.223-230.

204. Takahashi J.S., Pinto L.H., Vitaterna M.H. Forward and reverse genetic approaches to behavior in the mouse. // Science. 1994. V.264. P. 1724-1733.

205. Tautz D. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers. //Nucleic Acids Res. 1989. V.17. P.6463-6471.

206. Tautz D. Genomic finger printing goes simple. // BioEssays. 1990. V.12. P.44-46.

207. Tautz D., Schlotterer C. Simple sequences. // Curr. Opin. Genet. Dev. 1994. V.4. P.832-837.

208. Taylor M.A., Fink M. Catatonia in psychiatric classification: a home of its own. //Am J Psychiatry. 2003. V.160. P. 1233-1241.

209. Terwilliger J.D., Haghighi F., Hiekkalinna T.S., Goring, H.H. A bias-ed assessment of the use of SNPs in human complex traits. // Curr. Opin. Genet. Dev. 2002. V.12. P.726-734.

210. Todd J.A., Aitman T.J., Cornall R.J., Ghosh S., Hall J.R., Hearne C.M., Knight A.M., Love J.M., McAleer M.A., Prins J.B. Genetic analysis of autoimmune type 1 diabetes mellitus in mice. // Nature. 1991. V.351. P.542-547.

211. Toth G., Gaspari Z., Jurka J. Microsatellites in different eukaryotic genomes: survey and analysis. // Genome Res. 2000. V.10. P.967-981.

212. Tsuchihashi Z., Dracopoli N.C. Progress in high throughput SNP genotyping methods. //Pharmacogenomics J. 2002. V.2. P. 103-110.

213. Vander-Wende С., Spoerlein M.T. Morphine-induced catalepsy in mice: modification by drugs acting on neurotransmitter systems // Neuropharmacol. 1979. V.18.P.633-637.

214. Veenstra-VanderWeele J., Anderson G.M., Cook E.H. Pharmacogenetics and the serotonin system: initial studies and future directions // Eur. J. Pharmacol. 2000. V.410. P.165-181.

215. Visscher P.M., Haley C.S. Power of a chromosomal test to detect genetic variation using genetic markers. // Heredity. 1998. V.81. P.317-326.

216. Vogt P. Potential genetic functions of tandem repeated DNA sequence blocks in the human genome are based on a highly conserved "chromatin folding code". // Human Genet. 1990. V.84. P.301-336.

217. Voight J.P., Kienzle F., Sohr R., Rex A., Fink H. Feeding and 8-OH-DPAT-related release of serotonin in the rat lateral hypothalamus. // Phamacol. Biochem. Behav. 2000. V.65. P.183-189.

218. Yos P., Hogers R., Bleeker M., Reijans M., van de Lee Т., Homes M., Frijters A., Pot J., Peleman J., Kuiper M., Zabeau M. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting. // Nucleic Acids Res. 1995. V.23. P.4407-4414.

219. Wadenberg M.L. Serotonergic mechanisms in neuroleptic-induced catalepsy in the rat // Neurosci. Biobehav. Rev. 1996. V.20. P.325-339.

220. Wallnau L.B., Bordash G., Corso P. The effects of tryptophan and manipulations of serotonergic receptors on tonic immobility in chickens. // Pharmacol. Biochem. Behav. 1981. V. 14. P.463-468.

221. Walsh S.J. Recent advances in forensic genetics. // Expert Rev. Mo.l Diagn. 2004. V.4.P.31-40.

222. Walther D., Bader M. A unique central tryptophan hydroxylase isoform // Biochem. Pharmacol. 2003. V.66. P.1673-1680.

223. Walther D.J., Peter J.-U., Bashammakh S., Hortnagl H., Voits M., Fink H., Bader M. Synthesis of serotonin by a second thryptophan hydroxylase isoform // Science. 2003. V.299. P.76.

224. Wambebe C. Influence of (-)-sulpiride and YM-09151-2 on stereotyped behavior in chicks and catalepsy in rats // Jpn. J. Pharmacol. 1987. V.43. P.121-128.

225. Weber J.L., May P.E. Abundant class of human DNA polymorphisms which can be typed using the polymerase chain reaction. // Am. J. Hum. Genet. 1989. V.44. P.388-396.

226. Weber J.L. Informativeness of human (dC-dA)n.(dG-dT)n polymorphisms. // Genomics. 1990. V.7. P.524-530.

227. Weber J.L., Wong G. Mutation of human short tandem repeats. // Hum. Mol. Genet. 1993. V.2. P. 1123-1128.

228. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Res. 1990. V.18. P.6531-6535.

229. Winter E., Varshavsky A. A DNA binding protein that recognizes oligo(dA) D oligo(dT) tracts. //EMBO Journal. 1989. V.8. P. 1867-1877.

230. Wuellner U., Klockgether Т., Schwarz M., Sontag K.-H. Behavioral actions of baclofen in the rat ventromedial thalamic nucleus: Antagonism by delta-aminovalerate // Brain Res. 1987. V.422. P.129-136.

231. Xie D-W., Deng Z-L., Ishigaki Т., Nakamura Y., Suzuki Y., Miyasato K., Ohara K. The gene encoding the 5-HT1A receptor is intact in mood disorders. // Neuropsychopharmacology. 1995. V.12. P.263-268.

232. Yamasaki M., Hattori Y., Konishi M., Itoh N. Spatially restricted expression of fibroblast growth factor-10 mRNA in the rat brain. // Brain Res. Mol. 1997. V.47. P.139-146.

233. Yue G., Li Y., Chen F., Cho S., Lim L.C., Orban L. Comparison of three DNA marker systems for assessing genetic diversity in Asian arowana (Scleropages formosus). II Electrophoresis. 2002. V.23. P.1025-1032.

234. Zabeau, M., Vos, P. Selective restriction fragment amplification: a general method for DNA fingerprinting. // European Patent. 1993. 0 534858 Al.

235. Zago M.A., Tavella M.H., Simoes B.P., Franco R.F., Guerreiro J.F., Santos S.B. Racial heterogeneity of DNA polymorphisms linked to the A and the О alleles of the ABO blood group gene. // Ann Hum Genet. 1996. V.60. P.67-72.

236. Zane L., Bargelloni L., Patarnello T. Strategies for microsatellite isolation: a review. // Mol Ecol. 2002. V.ll. P.l-16.

237. Zhang M., Creeze I. Antisense oligodeoxynucleotide reduces brain dopamine D2 receptors: behavioral correlates //Neurosci. Lett. 1993. V.161. P.223-226.

238. Zhang X., Beaulieu J.M., Sotnikova T.D., Gainetdinov R.R., Caron M.G. Tryptophan hydroxylase-2 controls brain serotonin synthesis // Science. 2004. V.305. P.217.

239. Zietkiewicz E., Rafalski A., Labuda D. Genome fingerprinting by simple sequence repeat (SSR)-anchored polymerase chain reaction amplification. // Genomics. 1994. V.20. P.176-183.