Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Исследование физиологической активности новых тканевых препаратов и сульфидно-иловых грязей и их применение в животноводстве

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Исследование физиологической активности новых тканевых препаратов и сульфидно-иловых грязей и их применение в животноводстве"

р г б оа

2 5 СЕН 1395

На правах рукописи

ЛОТКОВСШ ТАТЬЯНА РИ1АРДОВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НОВЫХ ТКАНЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ И СУЛЬФИДНО-ИЛОВЫХ ГРЯЗЕЙ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЖИВОТНОВОДСТВЕ

03.00.13. - Физиология человека и шивотных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание цченой степени кандидата биологических наук

Ставрополь - 1995

Работа выполнена в Ставропольской государственной _ сельскохозяйственной академии.

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор Мещеряков Ф.А.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Сухомлин К.Г-.

■ заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор Уразаев Н.й.

Ведущее предприятие - Курская государственная сельскохозяйственная академия

Защита диссертации состоится г> в

ч. на заседании диссертационного совета .К' 120.53.01. в Ставропольской государственной' сельскохозяйственной академии, 355017, г.Ставрополь, пер^Эоотехнический, 12.

С диссертацией нояно ознакомиться в библиотеке Ставропольской государственной сельскохозяйственной академиии

Автореферат разослан —

Ученый секретарь 6

диссертационного совета Боголюбова А.П.

- 3 -

Общая характеристика работы

Актуальность темы . Промышленное ведение животноводства и длительная иммунизация животных . понижают естественную резистентность. Загрязненность окружающей среды. сложная экологическая обстановка. насыщение организма лечебными средствами и профилактическими биопрепаратами также неблагоприятно воздействуют "на нивой организм (Ф.А.Мещеряков. 1992 ), Нарушение единства природного комплекса, почва - растения - животные^ приводит к изменениям по всей цепочке взаимодействий биологических сясгвм (Н.А.Уразаев. 1974, 1977 , 1978 ). Поэтому большое значение приобретает вопрос повышения общей резистентности организма животных путем применения неспецифических стимулирующих препаратов.

В последнее время многих исследователей вновь привлекает вопрос о получениями применении тканевых препаратов. Разработка и внедрение новых экологически чистых препаратов имеют не только теоретическое, но и практическое значение. При создании биологических препаратов руководствовались основными положениями теории учения о биогенных стимуляторах. созданной трудами Н.И.Краузе (1949), В,П.Филатова (1950), И.А.Калашник (1960) и др.

В связи с .этим лоиск новых биостимуляторов, экологически чистых и технически простых в получении, является актуальным и практически обоснованным. (}дним из направлений такого поиска является разработка актив,ации препаратов путем облучения ультрафиолетовыми.лучани.

Аутотрансфузиа крови, облученной ультрафиолетовыми лучами. .применяли как средство патогенетической терапии (В.П.чТкаченко, 1982, Й.А.Стекольнйков, 1985, И.А.Калашник. 1987. О.Папуашвили. 1988» Г.М.Нгаредяймти, 1988, В.П.Бакиеев/ 1990 и ДР.).

В связи с вышеизложенным" появилась необходимость в изготовлен^ новых биопрепаратов, установлении дозы и продолжительности облучения, а также в разработке объективных общедоступных методов контроля активности .этих препаратов. Актуальность поставленных вопросов заключается в перспективах применения биостимуляторов для увеличения сохранности и повышения продуктивности животных при различных условиях ведения хозяйства.

Цель и задачи. Основная цель заключалась в разработке и использовании новых биостимуляторов, и простой объективной оценки их активности, В соответствии с этим перед нами были ■ поставлены следующие задачи:

- разработать- оптимальные параметры облучения ультрафиолетовыми лучами препаратов крови, мозга и сульфидно-иловых грязей:

- разработать объективные методы определения активности полученных пр'епаратов;

- определить сроки сохранения активности биостимуляторов при разных способах облучения и хранения;

- установить влияние полученных биостимуляторов~ на отдельные физиологические показатели животных.

Научная новизна. Впервые применены препараты биостимулятор крови активированный (БСШ, биостимулятор из тканей мозга (БСМ), экстракт сапропеля активированный (ЭСЙ). Разработаны дозы и'способы введения биостимуляторов для функциональной активации организма овец. Разработаны объективные методы определения активности, биостимуляторов. Определено влияние препаратов на естественную резистентность, количественные показатели белков и морфологические изменения в крови овец._

Практическая значимость работы. Применение полученных биологических стимуляторов ускоряет рост животных, повышает естественную резистентность • организма к различным неблагоприятным воздействиям внешней среды, что позволяет повысить сохранность аивотных и их продуктивность.

-• Основные полояения диссертации, выносимые на замитц,

- Получение биологической активности тканевых препаратов путем комплексного воздействия охлаждением. облучением ультрафиолетовыми лучами и сублимационной сушкой.- Повышение биологической активности тканевых препаратов при сублимационной сушке.

- Продолжительность сохранения биологической активности жидких и сублимированных тканевых препаратов.

- Применение трехсуточной культуры "тетрахимена пириформис для определения биологической активности и безвредности .препарата. Использование изменения интенсивности бродильного процесса винных дроааей как дополнительного метода определения биологической активности препаратов.

- Увеличение размножения простейших рубца и угнетение

развития бактерий вне организма при действии препарата.БСКА.

- Увеличение прироста животных, повышение бактерицидной, лизоиимной и фагоцитарной активности при введении в ротовло полость ? дозе 0,1 чл/кг БСК1.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и эбсуммш на научной конференции профессорско-преподавательского состава Ставропольской государственной сельскохозяйственной академии ( 1931. 1392, 1993 , 1994гг..') и на научно-практической кпнфррении:! молодых ученых, посвященной 80-летию образования Кыргызского СХИ "Проблемы научного обеспечения повышения эффективности сельскохозяйственного производства" (Бишкек, 1993 ).

Публикация. По материалам диссертации опубликовано три научные рабг~ы.

Структура и _объем диссертации. Диссертация включает раздел-: л«зор литературы. собственные исследования, выводы и практические предложения, список литературы. Она изложена на 110 страница;: машинописного текста, содержит 25 таблиц и 2 рисунка. Слисок литературы включает' 147 наименований, в том числе 8 иностранных -второе.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методика исследований

Исследования проведены в лаборатории физиологии и хирургии Ставропольской государственной сельскохозяйственной академии и на Ставропольской биофабрике в 1990-1994 гг.

Первоначальные исследования были направлены на получение новых биостимуляторов. Для биостимулятора крови активированного брали кровь, полученную от клинически здоровых животных. Кровь получали из яремной вены и тотчас же дефибринировали, сливали ее жидкую часть в стерильные колбы, закрывали стерильными пробками и помещали в холодильную кгмеру на 24 и 48 часов при температуре 2...4'С. Затем подвергали облучению ультрафиолетовыми лучами.

Для получения биостимулятора мозга активированного использовали нозг крупного рогатого скота и овец, который брали сразу же после убоя здоровых животных. После снятия оболочек, мозг так же помещали в холодильник на 24, 48 часов при температуре 2.. .4"С.

Сырьем для экстракта сапропеля активированного слуяила

сульфидно-иловая грязь (пелоиды} из Тамбукансксго озера. Пелоиды высунивали в вакуумном сушильном шкафу при температуре 50-60° С, измельчали до порошкообразного состояния и просеивали через сито. Сухую измельченную грязь загрували в реактор, заливали смесью этилового спирта и эфира и оставляли на 6 часов при перемешивании. В реактор с мешалкой помещали вазелиновое масло и вливали концентрат липидов. Реактор с отработанным порошком грязи подключали к конденсатору с приемником и отгоняли оставшийся в Порошке экстрагент.

Для облучения препаратов был использован аппарат УФ0К-4 разработки физико-технического института низких температур Мкраинн. .Он снабжен ртутно-кварцевыми лампами ДРТ-125-1, излучающими спектр ультрафиолетовых лучей в .области С, Внутри аппарата, менду лампами проходит капилляр из кварцевого стекла, к нему с двух сторон подсоединены эластичные трубки,

Для контактного облучения применяли аппарат ДРТ-400 источником излучения в котором является ртутно-кварцевая горелка типа ПРК-2. Основным ренимом работы горелки является дуговой разряд в парах ртути.

Биологическую активность биостимуляторов проверяли способами, основанными на бродильной активности винных дровней и на интенсивности ' размножения инфузорий культуры тетрахимена пириформис.

Для изучения влияния препаратов на количество микробных тел и 4 простейших использовали животных, имевших фистулу рубца. Операция по наловении фистулы выполнена по общепринятой методике.

•.Средние пробы содервимого отбирали через фистулу перед дачей корма и воды. Подсчет простейших проводили в счетной камере Горяева при малом увеличении. Подсчет количества бактерий в содержимом рубца делали по методу З.М.Фостер и др. (1961).

Для клинических испытаний препаратов мы использовали цыплят адлерской серебристой породы в возраста 4 месяцев. Препарат крови вводили на дистиллированной воде, в ротовую полость и интраназально в дозах 0.1...0.5 мл/кг.

Кормление цыплят осуществлялось по нормам ВИ1а. Прирост яивой массы определяли взвешиванием в утренние часы до приема .корма и воды. Абсолютный привес вивой массы и. относительную скорость роста определяли по.методике П.Б.Гофман (1938).

Влияние БСКА на организм изучали' на овцах Ставропольской мериносовой породы в р„озрасте 2-х лет при введении

биостимулятора в .ротовую полость в дозах 0.1...0,5 мл/кг. Определяли гематологические, биохимические показатели и показатели естественной резистентности.

Количество эритроцитов . и лейкоцитов определяли счетчиком микрочастиц Пикоскель типа PS-4. Содержание гемоглобина в крови животных определяли по стандартной метсдике на фотоэлектрическом эритрогемочетре. Определение гематокрита проводили с помощью микроцентрифуги МЦГ-8 в капиллярных трубках. Определение скорости оседания эритроцитов проводили микрометодом Т.П.Панченкова.

Определение общего белка сыворотки крови проводили рефрактометрическим методом по показателю преломления исследуемого вещества с помощью рефрактометра типа РДЗ.

Из показателей уровня естественной резистентности овец определяли: лизоцимную и бактерицидную активность сыворотки крови, фагоцитарную активность лейкоцитов по методическим рекомендациям ВНИИОК (1987).

Результаты опытов' были обработаны в вычислительном центре сельскохозяйственной академии.

2.2. Получение жидких биостимуляторов

Первые опыты при получении биостимуляторов показали,, что облучение ультрафиолетовыми лучами вызывает, в зависимости от интенсивности, повышение или угнетение биологической активности. Поэтому первостепенной задачей было определение оптимальных параметров облучения препаратов крови, мозга и экстракта Тамбукана при применении различных препаратов.

Перед применением НФ0К-4 все части аппарата: капилляр, полихлорвиниловые или резиновые трубки, шприц Нанэ подвергались стерилизации кипячением в дистиллированной воде по общепринятой методике.

Облучение в аппарате УФ0К-4 проводили следуищим образом: в аппарат опускали трубку, идувди к аппарату и включали лампу, препарат поступал в кварцевый капилляр, облучался со всех сторон и заполнял шприц (прикрепленный к другой трубке).

После наполнения до 100 мл и возврата обратно, происходило повторное ' облучение ультрафиолетовыми лучами. На этом заканчивался один цикл, в течелие которого . препарат облучался 2-хкратно. Контроль продолнительности рабочего цикла

- 8 -

осуществлялся с помощью секундомера.

Для контактного облучения мы использовали аппарат ДРТ-400. В стерильные чашки Петри наливали видкий препарат объемом 10 мл, при расстоянии от лампы до препарата 20 см, время облучения составляло 10...30 минут.

Облучение проводили при постоянном помешивании.

После облучения препарат сливали во флаконы емкостью по 250 мл, закрывали их резиновыми пробками и завальцовывали металлическими колпачками.

Для получения БСМ мозг крупного рогатого скота и овец помещали в холодильник при температуре 2...4"С. Через 24 и 48 часов измельчали и опускали в емкость гомогенезатора, 'Гуда ве наливали дистиллированную воду в соотношении 1:1. Смесь гомогенезировали до получения однородной массы. Полученный гомогенезат фильтровали через четыре слоя' марли. Фильтрат облучали ультрафиолетовыми лучами, наливали во флаконы и герметически закрывали.

Для облучения использовали аппараты УФ0Н-4 и ДРТ-400. Облучение аппаратом ДРТ-400 продолжалось в течение 20 минут, а аппаратом УФОК-4 - 3 минуты.

Экстракт сапропеля активированный получали облучением ультрафиолетовыми лучами-препарата Тамбукан. Цикл облучения в аппарате УФОК-4 составлял 4...10 минут. При контактном облучении препарат активировали 5...30 минут.

Полученные биостимуляторы были проверены на стерильность и биологическую активность. Таким образом, препараты БСКй, БСМ, ЗСЙ- просты в получении и экологически чистые.

2.3. Получение сублимированных препаратов БСКй и БСМ

<

Изыскание методов длительного сохранения биологической активности препаратов имеет большое практическое значение. Наиболее эффективным является метод лиофильного высушивания, так как в сухом виде при использовании глубокого вакуума препараты сохраняют свои первоначальные свойства в течение длительных сроков хранения.

После облучения видкий препарат расфасовывали в боксе в стерильные флаконы. Разлив препарата осуществлялся с помощью дозатора, соединенного с бутылью, содераащей препарат, по 2.5 и 5 мл соответственно во флаконы емкостью 10 и 20 ил.

Сушку проводили в сублимационных камерных аппаратах типов ТГ-50 и КС - 30. Она состоит из двух взаимосвязанных процессов, замораживания препаратов в низкотемпературных холодильниках с последуищей его сублимацией в специальном сублимационном камерном аппарате. Сушка происходит с углублением зоны сублимации - сверху вниз.

После разлива кассеты с препаратом помещали в охлажденную до температуры - 40-50" С камеру холодильника типа НС-2.50/70 и промораживали при данной температуре в течение 8-16 часов. В 2-3 флакона с препаратом в разных кассетах устанавливали 2-3 датчика для снятия в процессе сублимации показаний температуры препарата.

Продолжительность сушки на сублимационных аппаратах различных марок продолжалась до 90 часов.

После завершения сушки камеру через специальный фильтр заполняли стерильным воздухом или инертным газом.

Кассеты с высушенным препаратом и, закрытые марлевыми салфетками, переносили в бокс и закрывали над спиртовками стерильными резиновыми пробками, изготавливаемыми из особого сорта резины, не влияющего на состав препарата.

Далее производили завальцивывание асюллпЧсСппвН кол пачками, изготавливаемыми из алюминия.

Готовые флаконы маркировали • с указанием серии препарата, даты изготовления и срока годности. Этикированные флаконы помещали в коробки и сохраняли в темном прохладном месте,

Качество препаратов проверяли по следующим показателям: биологическая активность, растворимость, цвет и наличие посторонних примесей, стерильность, безвредность.

Сухие препараты БСКА и БСМ, полученные в результате сублимационной сушки, растворяли дистиллированной водой до первоначального объема нативной крови и мозга. Приготовленные сублимированные препараты растворяются при температуре 15-20°С в течение не более : 5 минут.

Растворенный препарат. БСКА представляет собой . жидкость темно-красного цвета, не содержащую хлопьев, сгустков и нерастворенных взвесей. Препарат БСМ после растворения в дистиллированной воде имеет белый цвет и не содержит посторонних примесей.

Стерильность биостимуляторов проверяли на питательных средах МПБ и МПй. При посеве препаратов на среду МПБ в течение 7 суток она оставалась стерильной, а МПА - в течение и суток.

Безвредность препаратов проверяли по действию на культуру тетрахимена пирифорнис. Из каждой серии брали по 3 флакона биостимулятора и высевали на питательную среду с культурой. В течение 4 суток интенсивность размножения инфузорий повышалась. Затем безвредность препаратов проверяли на лабораторных аивотных.

Технология производства сублимированных биостимуляторов проста и не требует больших затрат. В то ме время препараты, подвергнувшиеся лиофильной сушке,удобны в применении, хранении и транспортировке и являются безвредными.

2.4. Методы определения активности биостимуляторов •

Для определения биологической активности мы использовали метод, основанный на активности винных дрожжей.

В опытные пробирки наливали по 1 мл дрокаей, по 8 мл 20'/. раствора глюкозы и по 0.5...1.0 мл испытываемого препарата. В контрольную пробирку вместо биостимулятора наливали 1 мл физиологического раствора. Содержимое пробирок перемешивали и ставили на 24 часа в термостат при температуре 30 "С. Для сбора образующихся газов на пробирку надевали резиновый баллончик.

Через 24 часа баллончик обвязывали нитками у основания и, путем помещения' его в градуированный цилиндр с водой, измеряли количество образующихся газов. По количеству вытясненной жидкости определяли объем выделившихся газов, что и служило показателем активности бродильного процесса по сравнению с контролем.

• Для разработки экспресс метода мы использовали свобод-ноаивущих инфузорий тетрахимена пириформис, культивированных на питательной среде, при добавлении испытуемых препаратов. Для культивирования инфузорий готовили пептонную среду, разливали в стерильные бактериологические пробирки по 3 мл, закрывали ватно-марлевыми пробками и подвергали стерилизации в течение 15-20 минут. Пересев культуры проводили каждые 10 дней в боксе.

Инкубировали тетрахимену пириформис' в термостате при температуре 20°С в течение трех суток. Для выявления активности биостимуляторов в пробирки с питательной средой добавляли по _0.2мл препарата и ставили на водяную банш при температуре ?5 ° С на 20 минут. Стедует отметить, что при не соблюдении этих условий, появлялось бактериальное загрязнение, которое подавляло рост инфузорий Затем добавляли 0.02мл стандартной трехсуточной

культуры и ставили в термостат при температуре 20 0 С на четверо суток, в течение которых пробирки встряхивали 2-3 раза в день.

Для фиксации тетрахимены пириформис готовили раствор следующего состава: 1 мл 52 раствора йода и 149 мл воды.

Подсчет инфузорий тетрахимена пириформис вели в счетной камере.

Для оценки активности препаратов БСКЙ, БСМ, ЗСЙ мы использовали единицы активности (Ей), которые определяются отношением средней арифметической опыта (Мо) к средней арифметической контроля (Мк), умноженное на 10.

Мо

ЕА=--------------- х 10, например, количество

Мк

простейших в опыте с препаратом БСКА составляло 144000 инфузорий в 1 мл, а в контроле б0000 инфузорий в 1 мл, следовательно

144000

ЕА = г-------------- х 10 = 24.

60000 •

Проведенными опытами установлено, что инфузории тетрахимена пириформис изменяются по количеству в зависимости • от активности препаратов.

Описанные способы определения активности биостимуляторов наиболее простые, а поэтому наиболее удобны для использования в лаборатории, где производится получение этих препаратов.

2.5. Биологическая активность биостимуляторов

В результате проведенных опытов с винными дрожжами установлено, что БСКЙ в дозе 1мл усиливает брожение в среднем на 82. Снижение дозы до 0.5 мл активирует процесс на 1312. Таким образом, БСКЙ в небольших дозах увеличивает интенсивность бродильного процесса. При увеличении дозы биостимулятор угнетает бродильный процесс.

При добавлении 1 мл БСМ активность бродильного процесса

повивалась на 93.82, а при добавлении 0.5мл - ■ на 156,32. Таким образом, между дозой БСМ и активностью бродильного процесса существует обратная зависимость, чем меньше доза, тем выше интенсивность бродильного процесса.

Результаты по определению биологической активности экспресс методом показали - активность БСКА составляет 23.9+1.7ЕА, что на 48.47. выше активности неактивированной крови, ■ При активности БСМ 30.8+1.84ЕА, стимулирующее действие неактивированного мозга было на 55.52 меньше. Активность экстракта сапропеля в среднем составила 11.2+0.45ЕА, т.е. на 28.22 меньше, чем активность ЭСА.

Таким образом применяемые нами методы получения тканевых препаратов позволяют получить высоко биологически активные препараты.

Анализ результатов по определении биологической активности препаратов показал, что хранение биостимуляторов при тёмпературе 2,..4°С в течение года не вызывает значительного снижения активности по сравнении с исходными величинами. По мере увеличения продолжительности хранения препаратов БСКА и БСМ активность их снижалась с разной скоростью, в зависимости от температуры, что характеризует взаимосвязь между температурой хранения и биологической активностью.

■ Хранение биостимуляторов при более высоких температурах вызывало значительное снижение активности. Особенно резко это проявлялось при температуре хранения 18'С, При такой температуре биологическая активность препарата БСКА через 3 месяца снижалась на 20X, а препарата БСМ - на 42.3%. В более поздние сроки препараты практически полностью теряли свою активность.

Наибольшей интенсивностью окислительных процессо® отличаются препараты, хранившиеся при температуре 18" С. Охлаждение до 2...4°С снижает эти процессы. .

Температура хранения не влияла на биологическую активность препарата ЭСА. В конце года его активность, несмотря на различные условия хранения, снижалась одинаково и составляла 15ЕА, что на 42.42 меньше первоначальной биологической активности.

Таким образом, различными температурными режимами можно увеличить срок действия биостимуляторов. Биологическая активность жидких препаратов' сохраняется в течение одного месяца, а сухих 12 месяцев.

- 13 -

2.6. Влияние препзрзта 5СКР. нз микрооргзнизмы • рубцового содержимого

Результаты наших исследований показали. что количественный состав инфузорий и простейших рубца при добавлении препарата БСКА подвержен значительным изменениям.

Проведенными исследованиями установлено, что в первые четыре часа вне организма при температуре 39 "'С в анаэробных условиях, происходит спонтанное увеличение количества • инфузорий с ?70.0±30.0 тыс/мл до 987.0+37.5 тыс/мл и уменьшение количества бактерий с 0.964+0.7 млрд/мл до 0.760+0.02 млрд/мл,- что составляет в среднем 28.2% и 21.2У. соответственно.

При добавлении 0.1 мл . неактивированной крови к содержимому рубца интенсивность размножения простейших через один и четыре часа уменьшалось до 700.0+25.0 тыс/мл и 666.0+55.0 тыс/мл (9.1% и 32.52). Количество микробных тел увеличивалось на 15.3% и 31.4% (1.117+0.6 млрд/мл и 0.999+0.03 млрд/мл).

Через час после добавления 0.1 ыл препарата БСКА коли.. - — у» ....Л»»^ ,4 .. Л г% лпппч^Ш Д04 Л 4-Ч Ч Л тис /м П ПП11 О Т ПII

количество микробных тел уменьшилось до 0.846+0.05 млрд/мл (12.2%). Через четыре часа численность простейших увеличивалась до 1150.0+25.0 тыс/мл, а общее количество микробных тел снизилось до 0.739+0.04 млрд/мл, что составляет 16.5% и 2.8% соответственно. В дальнейшем происходило снинение количества инфузорий и бактерий (габл.1),т>

При добавлении 0.2 мл неактивированной крови к содержимому рубца вне организма количество простейших уменьшалось через час,до 612.5+12.5 тыс/мл, через 4 часа до 500.0+25.0 тыс/мл, что в среднем составляет 20.5% и 49;3% от контроля. Общее, количество микробных тел при этом увеличивалось и составило 1.283±0.13млрд/мл и 1.017+0.04 млрд/мл. что на 33% и 33.8% больше, чем в пробе рубцсвого содеряимого без добавления препарата БСКА и неактивированной крови.

При увеличении дозы препарата БСКА до 0.2 мл общее количество микробных тел возросло и составило через час 1.093+0.04 ылрд/мл, а последующие часы оно уменьшилось до 0.884+0.18 млрд/мл. Количество простейших уменьшилось через час до 762.5+62.5 тыс/мл, через 4 часа до 737.5+37.5 тыс/мл, что на 1% и 25.3% меньше, чем в контроле.

Таблица 1

Влияние препарата БПКЙ на количество микроорганизмов содержимого рубца

(п=100 э

Условия Общее количество микробных тел. млрд/мл Простейшие. тыс/мл

опыта

8-00 М±и . 12-00 М+й 8-00 М±и 12-00 М±! •

Содержимое рубца 0.964+0.0? 0.760+0.02 '770.0±30.0 987.0±37.5

Содержимое рубца с - !

0.1 мл необлученной 1.117±0.6 0.999+0.03 700.0+25.0 666.0+55.0

к.Зови

Р Р*0.1 р^0.05 р-0.001

Содержимое рубца с

0.1 мл БСКЙ 0.840+0.05 0.739+0.04 891.0+55.0 1150.0+25,0

Р р-0.1 Р-0.1 р^0.05 р^О.001

Содержимое рубца с Г. 283+0. 13

0.2 мл необученной 1.0,17+0.04 612.5±12.5 500. 0±25.0

крови

Р р^О. 05 р^0.001 " М.001 р^О.001

Содержимое рубца с

0.2 мл БСКЙ 1.093±0.04 0.884+0.18 762.5±62.5 ■ 737.5±37.5

Р р^0.1 Р-0.1 Р-0.1 ■ рс0.001

•©

Таким образом, препарат ЕСКЙ способствует увеличению простейших в содержимом рубца вне организма.

2.7. Влияние биостимулятора на рост и развитие птицы

Для определения влияния БСКА на рост и развитие птицы нами были подобраны цыплята с одинаковой энергией роста, в контрольной группе 1415.0+15.0 г., в опытных группах 1420.0+10.0 г.; 1425.0+8.0 г.; 1400.0+10.0 г..

Пользуясь полученными дачными мы анализировали абсолютный и относительный прирост айвой массы.

В контрольной группе средняя масса одной птицы увеличилась за месяц с 1415.0+15.0 г до 1565.0+31.0 г. Следует отметить, что конечная живая масса контрольной группы ниже опытной группы на 105.0 г, цыплятам, которым давали препарат БСКА в ротовую полость в дозе 0.1 мл/кг. Абсолютный прирост живой массы в опытной группе был выше на 66.72 и относительный прирост также превосходил на 58.82 (15.86+2.72 против 9.99+0.842).

иивая масса цыплят, которым вводили 0.5 мл/кг биостимулятора в ротовую полость , через месяц была выше контрольной группы на 65.0 г. Абсолютный и относительный прирост айвой массы также был выше показателей контрольной группы на 36.72 и 33.42 соответственно.

Цыплята, которым вводили 0.1 и 0.5 мл/кг препарата БСКА интраназально, отставали в росте по сравнению с цыплятами контрольной группы на 135.0 г и 100.0 г. Показатели абсолютного и относительного прироста также были ниже. Абсолютный прирост при введении препарата в дозе 0.1 мл/кг интраназально составил 34,0±15.1 г, при введении 0.5 мл/кг - 65.0±43.0 г. что на 77.32 и 56.72 меньше абсолютного прироста айвой массы контрольной группы. Относительный прирост при введении 0.1 мл/кг и 0.5 мл/кг препарата БСКА интраназально снизился до 2.36±1.032 и 4.54+0.352 соответственно, что на 76.42 и 54.62 меньше относительного прироста живой массы контрольной группы.

Анализируя полученные результаты, можно сделать вывод, что препарат БСКА не только является безвредным, но и в дозах 0.1 мл/кг и 01.5 мл/кг при введении в ротовую полость увеличивает показатели абсолштного и относительного прироста айвой массы.

' - 16,2.8. Влияние препарата БСКА на гематологические показатели и естественную резистентность

Проведенные исследования по количественному определению форменных элементов крови показали, что морфологический состав крови зависит от дозы препарата БСКА.

У овец после введения 0.1 мл/кг биостимулятора отмечали в крови увеличение гемоглобина через 30 часов с 92.0±0.7 до 115.0+0.5 г/л, количества эритроцитов спустя сутки с 6.2±0.4 до 7.6+0.1 10 /л. Количество лейкоцитов через 6 часов после введения препарата увеличивалось на 33.32 по отношению к контрольной группе, затем снизилось на 28.3%.

Максимальное значение гематокрита отмечалось через 30 часов и составляло 49.5+0.52. Скорость оседания эритроцитов' повысилась спустя сутки с 0.5+0.01 до 1.2+0.2 мм/ч и затем через двое суток снизилось до 0.3+0.01 мл/ч.

При даче овцам препарата БСКА в дозе 0.25 мл/кг отмечались следующие изменения' гематологических показателей. Количество гемоглобина в течение всего опыта не превышало показателей .уровня гемоглобина в крови в контрольной группе. Количество эритроцитов постепенно повышалось и достигло максимального значения через 30 .часов - 7.9+0.3 10 /л затем снизилось до 7.5±0.1 10 /л. Количество лейкоцитов спустя сутки повысилось до с 9.5+0.7 до 15.0+0.9 '10 /л, затем .снизилось до уровня лейкоцитов в контрольной группе 10.7+0.1 и 10.6+0.1 10 /л.

Показатель гематокрита увеличивался на 24.72-через 6 часов по отношению к контрольной группе и снижался приблизительно к первоначальному значению спустя двое суток. Скорость оседания эритроцитов через сутки достигла максимального значения 1.0+0.2 мм/ч, затем стала снижаться.

У опытных животных через двое суток после введения препарата БСКА в дозе 0.-5 мл/кг количество гемоглобина увеличивалось с 97,0 +0.9 до 120.0+0.1 г/л, количество эритроцитов с 6.35+0.6 до 10.6 ±0.,.7 10 /л. Количество лейкоцитов спустя сутки увеличивалось на 42.6% по отношению к контрольным животным, затем отмечалась тенденция к снижению и через 48 часов уменьшилось на 3.72.

Спустя двое суток , после введения биостимулятора, количество гематокрита увеличивалось с 35.6±0,4 до 41,3+0,4/!, а затем снижалось до 36.5+1.02. Скорость оседания-^эрйтроцитов

повысилась с 0,5+0»01 до 0.9+0*1 мм/ч через 6 часов после дачи препарата. В последующие часы она уменьшилась до 0.3+0.01 мм/ч .

Мы поставили перед собой задачу исследовать влияние препарата БСКА на содержание общих белков крови.

Во всех опытах после введения биостимулятора в дозах 0.1; 0.25: 0.5 мл/кг мы наблюдали изменения содержания общего белка крови.

Препарат БСКА в дозе 0.1 мл/кг вызывал незначительное увеличение общего белка сыворотки крови на 0.52 с последующим уменьшением его содержания с С7!.4+0.01 до 60.9+0.2 г/л

После введения препарата в дозе 0.25 мл/кг, количество общего белка сыворотки крови через 24 часа увеличилось с 59.5+0.2 до 68.8+0.01 г/л, .или на 15,62. Снижение содержания общего белка наблюдалось через 30 часов после введения препарата, но превышало исходный уровень на 5.22.

Введение препарата БСКА в дозе 0.5 мл/кг вызвало наибольшее увеличение содержания общего белка сыворотки крови через 30 часов с 60.3+0.5 до 65.9+0.5 г/л . Затем содержание общего белкс1 В ПОЛОПНТНПЙ гпмппо пии;«»;;; д; £3.510.5 г/л.

Следовательно, введение препарата БСКА в дозе 0.5 мл/кг способствует повышению морфологических и биохимических показателей состава крови в пределах физиологической нормы. Количество гемоглобина увеличивалось на 30.42, эритроцитоз - на 65,62, лейкоцитов - на 42.62, гематокрита - на 11.62, общего белка - на 12.22 по сравнению с контрольной группой. Введение препарата в дозах 0.1 и 0,25 мл/кг также влияло на показатели крови, но в меньшей степени.

Проведенные нами опыты с препаратом БСКА доказали, что он влияет не только на гематологические и биохимические показатели, но и повыиает естественную резистентность.

Важным показателем неспецифической резистентности является активность лизоцима - фермента, способного лизировать живые и мертвые клетки. Мы определяли лизоцимную активность в сыворотке крови баранов после введения биостимулятора в различных дозах.

До опыта лизоцимная активность в контрольной группе составляла 29.7+0.5 мкг/мл, в подопытной - 29.6+0,3 мкг/мл. В течение опыта в контрольной группе активность колебалась от 29.7+0.5 до 28.6+0.3 мкг/мл.

У животных, которым ввели 0.1 мл/кг препарата БСКА, лизоцимная активность постепенно повышалась в течение трех суток

и достигла максимального значения спустя 72 часа, оно составило 39.6+0.3 мкг/мл.

Введение препарата в дозе 0.25 мл/кг привело к повышению лизоцимной активности через 48 часов на 34.52 по сравнению с контрольной группой. В дальнейшем отмечали тенденцию к снижению лизоцимной активности.

У животных после дачи БСКй в дозе 0.5 мл/кг лизоцимная активность в первые сутки опыта была равна 37.2+0.2 мкг/мл, через двое суток она поднялась на 39.22 по сравнению с контролем, спустя трое суток она начала снижаться, но была больше контроля на 31.52 ,

Для оценки степени естественной резистентности овец нами определялся также фагоцитоз лейкоцитов, который является важным -показателем уровня сопротивляемости организма.

В контрольной группе с момента начала и окончания опыта отмечали незначительное колебание фагоцитарной активности, т.е. процентного соотношения активных, участвовавших в фагоцитозе лейкоцитов, к общему числу подсчитанных. Уровень фагоцитарной активности менялся в зависимости от того, какое количество препарата БСКЙ было введено животным.

Показатель фагоцитарной активности после введения 0.1 мл/кг биостимулятора повышался незначительно и составил 5.52 к контрольной группе. •

После введения 0.25 мл/кг препарата БСКА максимальный уровень фагоцитарной активности наблюдали через 48 и 72 часа -32.0+0.42 и 32.0+0.72.

До начала применения препарата в дозе 0.5 мл/кг показатель фагоцитарной активности был 30.0+0.42, в дальнейшем происходило увеличение его до 33.5+0.52, что выше уровня аналогичных показателей контрольной группы на 8.82 .

Интенсивность бактерицидного ' действия сыворотки крови определяли так-^же, через 24, 48 и 72 часа .после введения различных Доз Препарата.

Бактерицидная активность в контрольной группе менялась незначительно, от 41.5±0.52 в первый день до 40.2+0.22 на третий день и возвращалась на четвертые сутки к исходному уровню.

Введение 0.1 мл/кг препарата вызывало незначительное возрастание бактерицидной активности до 42.4+0.12 через сутки и в дальнейшем снижалась до 39.3+0,82.

Биостимулятор а дозе 0.25 ал/кг вызывал снижение бактерицидной активности с 41.6% до 33.0+0.1%.

Дальнейшее увеличение дозы препарата дй 0.5 мл/кг повышало бактерицидную активность с 41.6+0,4 до 48.5+0.1%.

Таким образом введение препарата в дозе 0.5 мл/кг способствует повышению морфологического и биохимического состава крови, а такяе повышает уровень лизоцимной, бактерицидной и Фагоцитарной активности.

ВЫВОДЫ

1. Разработана новая технология получения высоко биологически активных препаратов из крови путем предварительного охлаждения в течение 24-48 часов при температуре 2...4" С, последовательного облучения в аппаратах ЗФОК-4 и ДРТ-400 и сублимации. Определены оптимальные параметры различных способов физического воздействия при получении тканевых биостимуляторов.

2. Ультрафиолетовое облучение масляного якгтпа»тэ пипклипнп-.._»=:;и;; ¡-р^й иивыиаег его биологическую активность.

3. Применение • трехсуточной культуры тетрахимены пири-формис является объективным экспресс методом определения биологической активности и безвредности применяемых препаратов. Использование изменения интенсивности бродильного процесса винннх дроняей является дополнительным методом к экспресс методу.

4. йидкий препарат БСКА сохраняется в течение 1 месяца, а сублимированный - не менее 12 месяцев.

5. Препарат БСКА повышает уровень размножения простейших и угнетает развитие бактерий вне организма.

6. Введение в ротовув полость БСКА в дозе 0.1 мл/кг и 0,5 мл/кг повышает среднесуточный прирост нивой массы у кур.

?. Установлено увеличение количества гемоглобина, эритроцитов, гематокрита", общего белка сыворотки крови, лизоцимной, бактерицидной, фагоцитарной активности и кратковременное повышение количества лейкоцитов у овец.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для повышения естественной резистентности и прироста яивой массы рекомендуем провести широкие производственные испытания применения БСКЙ в дозе 0.5 мл/кг

2. Ппи ппоиэводствбнных опытах необходимо учитывать гематологические показатели.

3. Для определения биологической активности препаратов и их безвредности рекомендуем применять трехсуточную культуру тетрахимена пириформис и использовать изменение интенсивности бродильного процесса винных дротаей как дополнительный метод.

4. Разработанные методы определения биологической активности препаратов могут быть использованы в лабораториях, где изготавливаются биостимуляторы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Яотковская Т.Р. Влияние активированной крови на микроорганизмы содеряимого • рубца овец //Морфоф'ункциональные показатели продуктивных животных: Сб.науч.тр./Ставроп.СХИ. Ставрополь, 199!. - С. -14-15.

?., Лотковпкая Т.Р. Экспресс метод определения биологической активности препаратов //Морфофункциональные показатели продуктивны:-: животных: Сб.науч.тр./ Ставроп.СХИ. - Ставрополь, 1932.. - С.12-13.

3. Лоткоескзя Т.Р. Влияние биостимулятор"' крови но. микроорганизмы содранного рубца овец //Проблемы научного обеспечения повышения эффективности сельско-хозяйственного производства /Тезисы докладов 3 меярегион. научн.-' практ. конф. молодых ученых и специалистов, посвящ. 60-летию образования Кыргызского сельскохозяйственного института /Кыргызский СХИ. -Бишкек,1392. -ч.2.~ С. ¡79-180.