Исследование экскреции некоторых метаболитов азотистого обмена кожей человека

Гурина, Елена Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Исследование экскреции некоторых метаболитов азотистого обмена кожей человека
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Исследование экскреции некоторых метаболитов азотистого обмена кожей человека"

На правах рукописи

ой-—- /.¡^

Турина Елена Юрьевна

ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСКРЕЦИИ НЕКОТОРЫХ МЕТАБОЛИТОВ АЗОТИСТОГО ОБМЕНА КОЖЕЙ ЧЕЛОВЕКА

Специальность 03 00 04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 4 МАЙ 2007

Воронеж-2007

003060003

Работа выполнена в Волгоградской государственной сельскохозяйствен академии

Научный руководитель Официальные оппоненты

Ведущая организация

доктор биологических наук, профессор Храмов Владимир Анатольевич

доктор биологических наук, профессор Ковалева Тамара Андреевна кандидат биологических наук Кожокина Оксана Михайловна

Волгоградский государственный медицинский университет

Защита состоится 30 мая 2007 года в /(? ■—Часов на заседании диссертационного совета Д 212 038 03 при Воронежском государственном университете по адресу 394006, Воронеж, Университетская пл, 1, биоло: почвенный факультет, аудитория 59

С диссертацией можно ознакомиться в зональной научной библиотеке Воронежского государственного университета

Автореферат разослан апреля 2007 года

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор

Грабович М Ю

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы Биохимические и физиологические основы метаболизма различных органов человека и организма в целом занимают одно из центральных мест современной биохимии, физиологии и смежных с ними наук Достижения в этой области к настоящему времени довольно значительны благодаря возможностям современного биохимического анализа различных биологических сред, прежде всего, анализа крови и мочи (А Ш Зайчик, 2000, В С Камышников, 2000)

Тем не менее, в последние годы все больше внимания со стороны исследователей различных профилей уделяется новым, неинвазивным методам биохимического анализа (РI СаярегБ, 2001) Преимущества их использования состоят в том, что полностью исключается возможность инфицирования человека и снижается до минимума стрессовое воздействие при взятии проб биологического материала для анализов Внедрение неинвазивных методов в практику аналитической биохимии является одним из приоритетных направлений современной физиологии, биохимии и медицины

Так в этой связи известны успехи внедрения в практику биохимических анализов слезной жидкости (БЕ Сомов, 1994, Б С Хышиктуев, 2006), слюны (А Б Ильиных, 2001) Весьма эффективным в этом отношении мог бы оказаться и кожный экскрет

Через кожные покровы удаляются различные продукты азотистого, углеводного обмена (Я Куно, 1961) Среди них не только вредные конечные продукты обмена (углекислый газ, аммиак, мочевина и др ), но и необходимые для организма метаболиты Это такие соединения, как молочная кислота (В А Храмов, 1995), глюкоза (В А Храмов, 2001) и даже аминокислоты (С Павель-ски, 1964) Все это указывает на то, что кожа - довольно сложный и малоизученный орган выделения, который требует пристального внимания со стороны исследователей

Поэтому исследование экскреции различных метаболитов и биологически активных веществ через кожные покровы - весьма актуальная проблема современной биологической химии и смежных с ней наук Это связано не только с малой изученностью процессов кожной перспирации, но и с большим практическим аспектом применения результатов этого исследования

Цель и задачи исследования. Целью настоящей диссертационной работы явилось систематическое изучение экскреции через кожные покровы человека некоторых важных продуктов азотистого обмена

Для достижения этой цели нами были поставлены следующие задачи

1 Разработать удобные методы забора проб кожного экскрета для последующего количественного определения в них продуктов азотистого обмена

2 Предложить доступные и легко воспроизводимые приемы и методики для анализа азотистых метаболитов в кожном экскрете человека

3 Исследовать (охарактеризовать количественно) экскрецию через кожные покровы человека таких важных конечных и промежуточных продуктов

\ л

азотистого метаболизма, как креатинин, мочевина, аминокислоты, урокановая кислота

4 Выявить закономерности влияния на кожную экскрецию указанных веществ таких факторов, как возраст, пол, физические нагрузки, а в ряде случаев также и экологических условий

5 Оценить возможность применения метода электрофореза на бумаге для разделения цис- и транс- изомеров урокановой кислоты

Научная новизна Впервые систематически изучено влияние различных факторов на экскрецию кожей человека некоторых метаболитов азотистого обмена Показано, что кожная экскреция креатинина зависит от физически? нагрузок Выявлена зависимость экскреции мочевины через кожу от возраста, пола, физических нагрузок, получены достоверные сведения о влиянии экологических условий на экскрецию мочевины Экспериментально доказано, что выведение аминокислот через кожные покровы не зависит от вышеназванных условий Предложены удобная процедура определения урокановой кислоты в кожном экскрете и простой метод разделения ее геометрических изомеров

Практическая значимость. Практическая значимость настоящего диссертационного исследования состоит в расширении и углублении знаний о кожной экскреции человека как достаточно сложном и требующем детального изучения явлении Экспериментальные результаты настоящей работы могут быть использованы для контроля физической тренированности спортсмгнов, для определения влияния условий внешней среды на организм человека, а также в диагностических целях Предложенный нами метод может быть применен для разделения цис- и транс-изомеров урокановой кислоты

Материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на зооветеринарном и агрономическом факультетах Волгоградской государственной сельскохозяйственной академии, а также в практике преподавания элективных курсов по химическим дисциплинам в средней школе

Апробация работы Материалы диссертации докладывались и обсуждались на международных, региональных и внутривузовских конференциях Они были представлены на VI Региональнаой конференции молодых исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2001 г), Международных конференциях студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов - 2005» (Москва, МГУ, 2005 г) и «Ломоносов - 2007» (Москва, МГУ, 2007 г), Международной научно - технической конференции «Наука и образование - 2006» (Мурманск, МГТУ, 2006 г), XVI Российской молодежной научной конференции, посвященной 85-летию со дня рождения профессора

В П Кочергина (Екатеринбург, 2006 г) Подана заявка на патент (№ 2006 135 310 приоритет 5 10 06 г «Разделение изомеров урокановой кислоты с помощью электрофореза на бумаге» Авторы В А Храмов , И Ф. Горлов, Е Ю Турина)

Публикации. Основные результаты настоящей диссертационной работы изложены в 11 публикациях 7 статьях и 4 тезисах

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения результатов, заключения,

выводов, списка литературы (160 источников) и представлена на 120 страницах машинописного текста Иллюстрационный материал включает 14 рисунков и 20 таблиц

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение. Обоснована актуальность темы, определены цели и задачи исследований

Глава 1. Обзор литерату ры. В главе представлен анализ литературных данных о креатинине и мочевине - важнейших конечных продуктах азотистого обмена человека (физико - химические свойства, биологические функции, биохимические особенности), методы определения в крови и моче Описаны методы определения аминокислот в биологических объектах В связи с наличием ряда структурных особенностей показана важность определения содержания на коже урокановой кислоты

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2 Объект н методы исследования. Основным объектом исследований служил кожный экскрет Для анализа зависимости экскреции креати-нина, мочевины, аминокислот, урокановой кислоты от уровня физической подготовки, пола, возраста, влияния экологических факторов использовали кожный экскрет, забор которого производился у спортсменов тяжелоатлетов и баскетболистов до и после тренировки, у студентов (юношей и девушек) математического и естественно - географического факультетов ВГПУ, агрономического и зооветеринарного факультетов ВГСХА до и после занятий комплексом физических упражнений (среди студентов не было лиц профессионально занимающихся спортом), а также у учащихся школ г Волгограда и области (до и после уроков физкультуры), у сотрудников кафедр химии ВГПУ и ВГСХА Забор необходимого количества кожного экскрета проводили с помощью полосок хроматографической бумаги фирмы \Vatman № 1 размером 3*6 см (для креати-нина) и 1*6 см (для мочевины и аминокислот) смоченных дистиллированной водой и выдерживали на разных участках кожи (кожа лба, кожа боковой поверхности шеи и кожа тыльной стороны ладони) в течении 3-5 минут до высыхания Экстракцию адсорбированных веществ осуществляли дистиллированной водой

Для количественного определения креатинина в выделениях кожи использовали реакцию Яффе (И Я Липицкая,1989) Содержание мочевины в коленом экскрете оценивали с помощью тиосемикарбазидной модификации реакции Фирона (В А Храмов, ЮВ Галаев,1969) Определение аминокислот в кожном экскрете проводили используя нингидриновый метод (А В Чечет-кин 1990) Наличие в кожном экскрете гистидина и урокановой кислоты изучали методом восходящей бумажной хроматографии Разделение цис- и трансизомеров урокановой кислоты осуществляли модифицированным методом электрофореза

Статистическую обработку результатов исследований проводили с помощью пакета статистических программ «81а1§гарЫс5» Отличия в контрольных и

опытных сериях экспериментов анализировали методом попарных сравнений, используя критерий Стьюдента при 5 % уровне значимости

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Глава 3. Исследование экскреции кожей креатинина н мочевины.

В организме человека поддерживается постоянный уровень креатинина тканях и крови Количественное содержание креатинина в таких биологически средах, как кровь, моча является важным показателем физиологического сс стояния некоторых органов и организма человека в целом (И Ф Комаров др,1981, А Б Бамринова,1986)

Мочевина - конечный продукт азотистого обмена у уреотелических же вотных и человека С ее образованием связаны процессы утилизации вредны для жизнедеятельности азотистых веществ и выделения их из организма В св$ зи с этим постоянно идет поиск новых методов анализа мочевины (С 8 Яи О А БопопкЛо, В А КаШ, 1992, М ТаЬаХа, Т МигасЫ, 1988) Отметим, что дос таточно исследованы в отношении содержания мочевины такие жидкости, ка кровь, моча

Проблема выведения креатинина и мочевины через кожные покровы им с ет важное значение для понимания многих вопросов физиологии человека, частности проблем, связанных с физиологией спорта Поэтому были разработг ны методы забора кожного экскрета и проведено исследование зависимост кожной экскреции креатинина и мочевины от уровня физической подготовю пола, возраста и влияния экологических факторов

Было изучено влияние физических нагрузок на экскрецию креатиник кожей у спортсменов Реципиентами служили спортсмены тяжелоатлеты и бас кетболисты Все обследуемые находились в хорошей спортивной форме Рс зультаты исследований приведены в табл 1 и 2 и на рис 1

Таблица

Содержание креатинина в кожном экскрете до (I) и после физической нагрузки (II)

Кожа лба

Группа обследуемых I II Ь коэффициент Стьюдента

Х±т, 10"6 г/см2 доверительный интервал при р =0,05 Х±т, 10"6 г/см2 доверительный интервал при р =0,05

тяжелоатлеты 1,80 ±0,09 1,42-2,18 2,10 ±0,17 1,53-2,66 1,57

баскетболисты 1,18 ±0,07 1,03-1,33 1,56 ± 0,11 1,36-1,76 3,02

Таблица 2

Содержание креатнннна в кожном экскрете до (X) и после физической нагрузки (II)

' Группа обследуемых I II !- коэффициент Сть годе нта

Х± ш, 10"6 г/см2. доверительный интервал при р =0,05 Х± ш, 10"6 г/см2. доверительный интервал при р =0,05

тяжелоатлеты 1,59 ±0,07 1,36 - 1,81 2,08 ±0,12 1,67-2,47 3,76

баскетболисты 1,06 ±0,07 0,90-1,22 1,59 ±0,17 1,25 -4,93 3,04 !

Экспериментальные исследования зависимости кожной экскреции креа-тинина показали, что у тестируемых групп количественное содержание креати-нина в выделениях кожи на различных участках возрастает после физических нагрузок. У спортсменов тяжелоатлетов исходный уровень креатинина (1,80* 10"6 см 2 - кожа лба и 1,59* 10"6 см 2 кожа боковой поверхности шеи) повышен по сравнению с уровнем креатинина у спортсменов баскетболистов.

2.5

1.5

0.5

Скрг«тга<ин ' г/см"

тяжелоатлеты

баскетболисты

Рис. 1 Содержание креатинина в кожном экскрете у спортсменов на различных участках тела (кожа лба и кожа боковой поверхности шеи) до и после физической нагрузки. Обозначения: I- кожа лба до нагрузки; 2- кожа лба после нагрузки; 3 - кожа боковой поверхности шеи до нагрузки; 4 - кожа боковой поверхности шеи после нагрузки; * - отличия статистически достоверны

Можно предположить, что количество экскретируемого кожей креатинина так же, как и концентрация его в крови и уровень его выделения с мочой, зависит от мышечной массы тела.

Также изучено влияния физических нагрузок на экскрецию креатинина кожей в зависимости от пола. В связи с этим обследованы студенты (юноши и

девушки) математического и естественно — географического факультетов ВГПУ Состояние здоровья оценивалось как нормальное Следует отметить, чт в отобранной для эксперимента группе, не было спортсменов или людей, систематически занимающихся физическими упражнениями Результаты исследований приведены в табл 3, 4 и на рис 2 и 3

Таблица

Содержание креатинпна в кожном экскрете до (I) и после физической нагрузки (II)

Кожа лба

Группа обследуемых I II 1- ко-эффи ци-ент Стью дента

Х±т, 10'6 г/см2 доверительный интервал при р =0,05 Х±ш, Ю-6 г/см2 доверительный интервал при р =0,05

Юноши 1,36 ±0,09 1,14-1,58 1,84 ±0,10 1,59 ±2,09 3,69

Девушки 1,26 ±0,06 1,09-1,43 1,66 ±0,07 1,44-1,88 4,34

Таблица 4 Содержание креатинина в кожном экскрете до (I) и после физической нагрузки (II) Кожа боковой поверхности шеи

Группа обследуемых I II ко-эффи ци-ент Стью дента

X ± ш, 10"6 г/см2 доверительный интервал при р =0,05 Х± т, Ю-6 г/см2 доверительный интервал при р =0,05

Юноши 1,13 ±0,09 0,95 - 1,31 1,65 ±0,14 1,38 ± 1,92 3,05

Девушки 1,15 ± 0,10 0,90-1,40 1,61 ±0,08 1,41 - 1,81 3,38

Полученные результаты свидетельствуют, что содержание креатинпна на коже лба до нагрузки увеличено по сравнению с содержанием креатинина на коже боковой поверхности шеи, но не намного После нагрузки концентрация креатинина на данных участках кожной поверхности практически одинаковая

Рис 1 Содержание креатинина в кожном экскрете у студентов (юношей и де-#ут.чс) па различных участках тела (кожа лба и кожа боковой поверхности ¡.пси} до и после физической нагрузки. Обозначения: 1- кожа лба до нагрузки; 2-уожп лба после нагрузки; 3 - кожа боковой поверхности шеи до нагрузки; 4 -ь. -жи боковой поверхности шеи после нагрузки; * - отличия статистически достоверны

Исследования кожной экскреции креатинина до и после физических нагрузок в зависимости от пола показали, что уровень креатинина возрастает поел;: выполнения физических упражнений и на коже лба и на коже боковой поверхности шеи как у юношей, так и у девушек.

□ кожа лба юноши

■ кожа лба девушки

П Ьок.поверхность шеи юноши □ бок.поверхность шеи

Это позволяет сделать вывод, что количественное изменение кожной экскреции креатинина не зависит от участка кожной поверхности.

Студенты (юноши) Студенты (девушки)

Рис, 3 Содержание креатинина в кожном экскрете в зависимости от пола. 10'6 г/см2.

Статистический анализ полученных данных дал возможность заключить, что существенных различий в количестве экскретируемого кожей креатинина в зависимости от пола не наблюдается. Это позволило сделать вывод о том, что количество выделяемого кожей креатинина не зависит от пола.

Для выявления влияния возраста на экскрецию мочевины кожей обследовались учащиеся 1-го, 6-го, 9-го классов гимназии № 12 Краснооктябрьского

района г. Волгограда. Состояние здоровья в момент исследования оценивалось как нормальное. Результаты исследований представлены в табл. 5 и на рис. 4.

Таблица 5

Содержание мочевины в кожном экскрете я зависимости от возраста у учащихся 1, 6, 9 классов

Группа обследуемых X ± т, 10"6 г/см2. доверительный интервал при р =0,05

учащиеся 1 - го класса 37,58 ±2,84 29,49-45,63

учащиеся 6-го класса 67,75 ±2,33 61,03-74,47

учащиеся 9-го класса 29,68 ±2,22 23,35 -г- 36,01 1

Результаты исследований показали, что содержанке мочевины на коже у учащихся 6-го класса довольно высокое и составляет 67,75 * 10"''г/см" по сравнению с учащимися 1-го и 9-го классов.

□ 1 класс ■ € класс

□ 9 класс

Рис. 4. Содержание мочевины в кожном экскрете в зависимости от возраста у учащихся 1, 6, 9 классов, 10'6 г/см2

Результаты доказывают, что содержание мочевины в кожном экскрете изменяется в зависимости от возраста. Предполагаем, что это связано с возрастными особенностями активного полового созревания, сопровождающимися более интенсивным обменом веществ, приводящим к повышению продукции мочевины и выведению ее из организма.

Изучено содержание мочевины в кожном экскрете в зависимости от пола. В эксперименте принимали участие учению! 1-го и 9-го классов гимназии № 12 г. Волгограда. Результаты исследований приведены в табл. 6 н на рис. 5,

Таблица 6

Содержание мочевины в кожном экскрете в зависимости от пола

Группа обследуемых X ± т., 10"6 г/см2. доверительный интервал при р =0,05

учащиеся 1 - го класса (мальчики) 1 52,62 ±2,16 45,76 -н 59,48

учащиеся 1 - го класса (девочки) 22,5 ± 1,48 17,79-ь27,21

учащиеся 9 - го класса (юноши) 39,87 ±3,51 28,72* 51,02

учащиеся 9-го класса (девушки) 25,62 ±2,43 17,91 -е-33,33

9 класс; юноши)

1 класс(мальчикм)

Э клэсс(девушки)

1 класс( девочки)

Рис. 5. Содержание мочевины в кожном экскрете в зависимости от пола, 10 6 г/см*.

Проведенные исследования и статистическая обработка результатов достоверно указывает на различие в содержании мочевины у мальчиков и девочек 1-го класса. Количество мочевины у мальчиков 1-го класса значительно превосходит содержание мочевины на коже у девочек. Мы предполагаем, что это связано с тем, что обмен веществ, в том числе и азотистый обмен, в этом возрасте выше у мальчиков в связи с их высокой физической активностью по сравнению с девочками того же возраста.

Подобной зависимости у обследуемых 9-ого класса установить не удалось. Вероятно, это связано с тем, что к этому возрасту интенсивность полового созревания у юношей и девушек приблизительно достигает одного уровня и различия в азотистом обмене, связанном с экскрецией мочевины через кожные покровы1 не носят достоверного характера.

Для выяснения влияния физических нагрузок на экскрецию мочевины кожей были обследованы учащиеся 1-го, 6-го классов гимназии № 12 г Волгограда. Пробы кожного экскрета брали до и после физических нагрузок. Результаты исследований приведены в табл.7 и на рис.6.

Таблица 7

Содержание мочевины в кожном экскрете до (1) И после физической нагрузки (К)

- Группа обследуемых I | II « к«-

X ± щ. 10"6 г/см2. доверительный интервал при р =0,05 Х±т, ] О"6 г/см2. доверитель- 1 Фиии-ный интервал : ент при р —0.05 | Стью-1 дента

учащиеся I - го класса 37,56 ±2.84 29,49 ч- 45,63 70,3 5± 4,07 58,78 -5- 81,92 6,61

учащиеся 6-го класса 67,75 ±2,33 61,03 - 74,47 .... 98,61± 2,16 92,37 - 104,85 9,73

1 класс 6 класс

О до нагрузки я после нагрузки

Рис. 6. Влияние физических нагрузок на экскрецию мочевины кожей.

Результаты достоверно подтвердили возрастание мочевины а кожном экскрете после физических нагрузок, что, безусловно, связано с усилением обмена веществ в организме во время физической нагрузки.

В настоящей работе определенное внимание было уделено исследованию влияния экологических условий на экскрецию мочевины кожей. В этой связи изучена кожная экскреция мочевины как одного из основных метаболитов азотистого обмена у людей, проживающих в различных по экологическим показателям районах г. Волгограда и Волгоградской области.

Анализ литературных данных свидетельствует, что для южной части

г. Волгограда (Красноармейский, Кировский районы) характерно интенсивное загрязнение атмосферы воздуха хлороводородом, углеводородами, ГТДК которых превышает в 5 раз и выше (здесь и далее приведены данные Поволжского экологического вестника 1995-97 гг). В северной части города воздух загрязняется аэрозолями металлов, фтористыми соединениями, оксидами азота, взвешенными веществами, превышая ПДК более чем в 5 раз (В.Е Лановских и др., 1995; А. Б. Курилова и др., 1996).

В эксперименте участвовали учащиеся 9-х классов Краснооктябрьского, Красноармейского, Кировского районов города Волгограда, а так же города Волжского и Котовского района Волгоградской области. Результаты исследований приведены в табл. 8 и на рис. 7.

Таблица 8

Влияние экологических факторов на содержание мочевины в кожном экскрете у учащихся 9-х классов различных районов г. Волгограда, Волжского и Котовского района Волгоградской области _____

Районы Х±л1, I О"6 г/см2 доверительный интервал при р =0,05

1. Краенооктябрьекий. 29,68 ±2,22 23,35 36,01

2. Кировский. 65,53 ±3,37 55,88 + 75,18

3. Красноармейский. 46,72 ±2,3 40,18 -г- 53,26

| 4. Котовский. 58,27 ±3,18 49,27 + 67,27

5. г. Волжский 107 ±5,22 92,16- 121,84

С„„„,„Н1,:, 10 ' г/см!

□ 1. Красносктябрьский р-н

□ 2. Кировский р-н

ЕЗ 3. Красноармейский р-н ИЗ 4 Котовский р-н ■ 5. г.Волжский

Рис. 7. Содержание мочевины в кожном экскрете у учащихся 9-х классов ¿'.Волгограда, Волжского и Котовского района Волгоградской области, I О'6 г/см2.

В центре города регистрируются вещества, характерные как для южной части г Волгограда, так и для северной, ПДК превышает в 2 раза В связи с этим, мы полагаем, можно объяснить меньшее содержание мочевины у учащихся Краснооктябрьского района близостью к центру и более благоприятной экологической обстановкой района Вместе с тем загрязнение атмосферы различными веществами в Красноармейском и Кировском районах, вероятно, оказывает определенное влияние на обмен веществ человека, в частности, на азотистый обмен, что отражается на содержании мочевины в кожном экскрете Экологическая ситуация в г Волжском еще более неблагоприятная, и содержание мочевины на коже значительно вьнпе

Что касается Котовского района, то он относится к регионам нефтепереработки со стабильно высокими показателями смертности среди трудоспособного населения (в нем зарегистрированы максимальные показатели по развитию злокачественных новообразований у населения) Эти обстоятельства, как показали исследования, определяют высокий уровень экскреции мочевины через кожные покровы обследуемых этого района

В эксперименте участвовали учащиеся 9-х классов Краснооктябрьског о, Красноармейского, Кировского районов города Волгограда, а так же города Волжского и Котовского района Волгоградской области

Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что содержание мочевины в кожном экскрете находится в тесной зависимости от экологической ситуации, сложившейся на территории проживания обследуемых

Глава 4. Исследование экскреции кожей аминокислот и урокановой кислоты. Аминокислоты как структурные компоненты белков давно привлекают пристальное внимание со стороны исследователей В живой клетке они подвергаются различным функциональным превращениям, результатом чего является образование биологически активных веществ других классов Примером одного из таких превращений служит внутримолекулярное их дезаминиро-вание, приводящее к непредельным кислотам Последние (например, урокано-вая кислота - продукт дезаминирования гистидина) выполняют ответственные биологические функции, и изучение их обмена является актуальным в наши дни

Первоначально была исследована зависимость количества аминокислот, экскретируемых кожей, от возраста и пола С этой целью обследовано 50 практически здоровых людей (учащиеся школ, студенты, сотрудники кафедр химии ВГПУ и ВГСХА) в возрасте от 7 до 30 лет, среди них 25 - лица мужского пола, 25 — лица женского пола Условно реципиенты поделены на три возрастные группы 7-12 лет (1 группа), 13 - 18 лет (2 группа), 19 - 30 лет (3 группа) Результаты исследований приведены на рис 8

возрастная возрастная возрастная группа группа группа

Са_____________________10е г/см=

7-12 лет 13-18 лет 19-ЭО лет

□ юноши В девушки

Рис. 8, Содержание аминокислот в кожном экскрете в зависимости от возраста и пола.

Анализ исследований показал, что каких - либо различий в уровне аминокислот на коже у обследуемых первой группы по половому признаку и в зависимости от участка тела не обнаружено. Во второй возрастной группе наблюдали небольшое снижение уровня аминокислот на коже у девушек по сравнению с таковыми у юношей: у последних содержание аминокислот на коже лба было на 21,7 % выше. По сравнению с первой возрастной группой, содержание аминокислот на разных участках кожи не имеет существенных отличий. Результаты исследований позволяют констатировать, что количество аминокислот, экскретируемых кожей, не зависит от возраста и пола. При сравнении уровня аминокислот на коже на разных участках существенных различий не замечено, что позволяет говорить о том, что количественный состав аминокислот на коже на разных участках тела относительно постоянен.

В настоящем квалификационном исследовании было также изучено влияние физических нагрузок на количество экскретируемых кожей аминокислот. В этой связи обследовано 50 практически здоровых людей в возрасте 9-20 лет. Условно реципиенты поделены на три (юноши) и две (девушки) возрастные группы: 9... 11 лет (I группа), 15... 17 лет (2 группа), 18...20 лет (3 группа). Определение количества аминокислот в кожных выделениях проводили дважды: до и после физических нагрузок. Результаты исследований приведены на рис. 9,10.

Поверхность кожи лба

Поверхность кожи шеи

^аминокислоты Г/СМ

7 6 5 4 3 2 1 О

Первая Вторая Третья

возрастная возрастная возрастная группа группа группа

Рис. 9. Уровень аминокислот на поверхности кожи у юношей до и после физической нагрузки.

Поверхность кожи лба

С аминокислоты Ю Г'СМ

Первая возрастная группа Вторая возрастная группа

Поверхность кожи шеи

^аминокислоты 10 Г/СМ

Первая возрастная групла Вторая возрастная группа

Рис. 10. Уровень аминокислот на поверхности кожи у девушек до и после физической нагрузки.

Было установлено, что уровень аминокислот после физических нагрузок озрастал по сравнению с таковым до физических нагрузок лишь в кожных кскретах 18 20-летних обследуемых Так у юношей он увеличивался на 15 20% У реципиентов в возрасте 9 17 лет этот показатель либо не изме-ялся, либо снижался на 7 10% Изменения количеств экскретируемых кожей минокислот были незначительными и, как показала статистическая обработка :олученных данных, эти различия не являлись достоверными Это свидетельст-овало о том, что физические нагрузки также не влияют на уровень экскреции аминокислот кожей

Таким образом, экспериментальным путем установлено, что количество аминокислот, выделяемых через кожу здоровых людей, не зависит от возраста, пола, физических нагрузок

Аминокислота гистидин и продукт его внутримолекулярного дезамини-рования - урокановая кислота относятся к группе биологически активных природных имидазольных соединений Им принадлежит важная роль в обмене веществ, и изучение закономерностей превращения гистидина и урокановой кислоты в организме человека является актуальной задачей современной биохимии

Химическая структура урокановой кислоты позволяет превращать ультрафиолетовую радиацию в обычную теплоту, которая рассеивается в окружающую среду Это происходит потому, что в молекуле урокановой кислоты содержится система сопряженных двойных связей, благодаря чему она эффективно поглощает ультрафиолетовую часть солнечного света При этом изменяется конфигурация ее молекулы транс-изомер переходит на свету в цис-изомер, а в темноте идет обратная реакция

N Н

урокановая кислота

¿-гистидин

,СОО Н

СООН

Ы'

N Н

цис-изомер

транс-изомер

Таким образом, урокановая кислота может рассматриваться как естественное средство защиты от избыточной УФ радиации (В А Буробин, 1978)

Исследуя кожные смывы с помощью восходящей тонкослойной хроматографии на бумаге, нами были зафиксированы пятка, принадлежащие шсгидин} и урокановой кислоте. Для обнаружения пятен указанных веществ, хромато-грамму обрабатывали реагентами, дающими положительную диазореакцию. Па бумажных хроматограммах упаренных смывов с кожи четко обнаруживались зоны, соответствующие по К^гистидину и урокановой кислоте: К, для гистиди-на составляет 0,1 и для урокановой кислоты - 0,5 в системе растворителей н-бутанол-уксусная кислота-вода, 8:3:1. При этом пятно урокановой кислоты было двойным: это свидетельствовало о наличии в экскретируемой кожей человека жидкости двух ее геометрических изомеров - цис- и т ран с-у р ок ано во и кислоты.

Был разработан удобный и легко доступный для любой аналитической лаборатории способ разделения цис- и транс-изомеров урокановой кислоты. Сущность предлагаемого нами способа заключается в том, что цис- и трансизомеры урокановой кислоты легко разделяются путем электрофореза на бумаге в ацетатном буфере при рН 5,5 в течение 15-20 мин. В основе способа лежат различия в значениях изоэлектрической точки (р1) этих двух пространственных изомеров. Дноурокановая кислота имеет р1 - 4,85, ее транс-изомер - 4,65. Исследования показали, что этого различия оказалось достаточно для того, чтобы эти два изомера имели разную скорость движения к аноду при электрофорезе на бумаге при рН 5,5.

Способ осуществляется следующим образом. Образец, содержащий смесь изомеров цис- и транс-уро кан ов ой кислоты (такими образцами служили смывы с кожи человека), подвергается электрофорезу на бумаге в 0,01 -0,05 моль/л ацетатном буферном растворе при рП 5,5 в течение 15-20 мин. Затем электрофоре-грамма извлекается, сушится и обрабатывается реактивами для цветной реакции Паули, проявляются красно-оранжевые пятна. Причем более подвижное пятно (11 мм) принадлежит /ирсшс-урокановой кислоте, более медленное пятно (6 мм) - ^ис-урокановой кислоте. Результаты исследований приведены на рис. 11.

Рис. ] /. Электрофореграмма водного смыва с кожи и раствора урокановой кислоты и гистидина.

С помощью предложенной нами процедуры удалось показать, что в смывах с кожных покровов человека содержатся оба изомера урокановой кислоты Причем доля г/ыс-урокановой кислоты увеличивается по действием ультрафиолетового облучения Выявлено также, что сам стандартный реагент урокановой кислоты существует в транс-форме, но при растворении в воде, особенно при хранении на свету постепенно частично переходит в ^иоформу

Предложенный способ разделения геометрических изомеров может быть рекомендован к использованию в практике биохимических медицинских лабораторий, изучающих азотный обмен у человека и животных, а также процессы перспирации метаболитов через кожу человека, например, при исследовании ферментов гистидазы и уроканазы и других, связанных с обменом гистидина и урокановой кислоты

ВЫВОДЫ

1 Предпринято систематическое изучение процессов экскреции через кожные покровы человека таких важных продуктов азотистого обмена, как креатинин, мочевина, аминокислоты, урокановая кислота

2 Предложены удобные методы забора проб кожного экскрета человека адсорбция полосками хроматографической бумаги, смыв экскрета с поверхности кожи, экстракция с помощью растворителя

3 Показано, что количественное содержание креатинина в Кожных выделениях человека зависит от уровня физической подготовки, общей мышечной массы и не зависит от пола

4 Выявлено, что на уровень мочевины в кожных выделениях влияют не только возраст, пол и физические нагрузки, но и экологические факторы

5 Обнаружено, что экскреция аминокислот через кожу не зависит от возраста, пола, физических нагрузок

6 Предложен удобный и надежный метод разделения геометрических изомеров урокановой кислоты

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ

1 Гурина, ЕЮ Определение креатинина и креатина в кожном экскрете у здоровых людей /ЕЮ Гурина // VI Региональная конференция молодых исследователей Волгоградской области, г Волгоград, 13-16 ноября 2001 г Тезисы докладов-Волгоград Политехник, 2002 - С 21-22

2 Гурина, Е Ю Методы забора проб кожного экскрета /ЕЮ Гурина, Г А Савин, В А Храмов // Естествознание и гуманизм Сборник научных работ-Томск «Вайар», 2005 - Т 2 -№ 5 - С 91

3 Гурина, Е Ю Определение гистидина и урокановой кислоты в экскретах кожи человека /ЕЮ Гурина // Материалы Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2005» Секция «Химия». - М МГУ -2005 - Т 1 - С 69

ЕЮ Турина // Химия в школе - М РАО, изд-во «Центрхимпресс»,

2005 - № 10 - С 63

5 Савин, ГА Количественное определение мочевины в кожном экскрете / Г А Савин, Е Ю Турина // Материалы международной научно-технической конференции «Наука и образование-2006» Мурманск, МГТУ (4-12 апреля 2006 г )-Мурманск 2006 - С 612-613

6 Гурина, ЕЮ Простой метод определения урокановой кислоты и гисти-дина в кожном экскрете человека /ЕЮ Гурина, Г А Савин, В А Храмов // Вестник ВолгГАСУ Серия Естественные науки - Волгоград Волг-ГАСУ, 2006 - Выи 5(18)-С 120-121

7 Савин, ГА Количественное определение урокановой кислоты в кожном экскрете человека /ГА Савин, Е Ю Гурина, В Г Овчинников // Естествознание и гуманизм Сборник научных работ - Томск «Вайар» 2006 -Т 3 - № 1 - С 141.

8 Гурина, ЕЮ Исследование экскреции урокановой кислоты кожей человека /ЕЮ Гурина, Г А Савин // Проблемы теор и эксперим химии тез докл XVI Рос молодеж конф., посвящ 85-летию со дня рожд проф В П Кочергина, Екатеринбург, 25-28 апреля 2006 г - Екатеринбург Изд-во Урал ун-та 2006 - С 16

9 Гурина, Е Ю Разделение цис- и транс- изомеров урокановой кислоты методом электрофореза на бумаге /ЕЮ Гурина, В А Храмов, Ю А Голо-сеев // Материалы Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2007» - Химия, М 2007 - С 520

10Храмов, Б А О бумажной хроматографии аминокислот / В А Храмов, Е Ю Гурина // Химия в школе - М РАО, изд-во «Центрхимпресс», 2007 - № 5 - С 8-9

11 Храмов В А Разделение изомеров урокановой кислоты методом электрофореза на бумаге / В А Храмов, Е Ю Гурина, Ю А Голосеев // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии -2007 - № 4 -С 20-22

Подписано в печать 27 04 2007 Формат 60x84/16 Уел печ л 1,25 Тираж 100 Заказ 259 Издателъско-полиграфический центр Воронежского государственного университета 394006, г Воронеж, Университетская площадь, 1, ком 43, тед 208-853 Отпечатано в лаборатории оперативной печати ИПЦ ВГУ

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гурина, Елена Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Кожа, ее строение и функции

1.2. Общие сведения о креатинине

1.2.1. Физико - химические свойства креатинина

1.2.2. Биохимические особенности креатинина

1.3. Клиренс креатинина и его значение

1.4. Методы определения креатинина

1.5. Соотношение экскреции креатинина и некоторых метаболитов

1.6. Общие сведения о мочевине

1.7. Мочевина - конечный продукт азотистого обмена

1.8. Биологические функции мочевины

1.8.1. Осмотическая функция

1.8.2. Действие мочевины на белки

1.8.3. Действие мочевины на ферменты

1.9. Аминокислоты - важнейшие метаболиты азотистого обмена

1.10. Методы определения аминокислот в биологических объектах

1.11. Строение и свойства урокановой кислоты

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Цель и задачи исследования

2.2. Методы забора проб кожного экскрета

2.2.1. Адсорбция с помощью полосок хроматографической или фильтровальной бумаги

2.2.2. Смыв экскрета с поверхности кожи

2.2.3. Экстракция с помощью растворителя

2.3. Методы исследования кожного экскрета

2.4. Методика эксперимента

2.4.1. Исследование экскреции креатинина кожей человека

2.4.2. Изучение кожной экскреции мочевины

2.4.3. Исследование содержания аминокислот в кожном экскрете человека

2.4.4. Фотоколориметрический и хроматографический методы обнаружения гистидина и урокановой кислоты в кожном экскрете

2.5. Статистическая обработка экспериментальных данных

ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСКРЕЦИИ КОЖЕЙ КРЕАТИНИНА И МОЧЕВИНЫ

3.1. Исследование зависимости кожной экскреции креатинина от уровня физической подготовки и пола

3.1.1. Изучение влияния физических нагрузок на экскрецию креатинина кожей у спортсменов (тяжелоатлетов и баскетболистов)

3.1.2. Изучение влияния физических нагрузок на экскрецию креатинина кожей в зависимости от пола

3.2.Содержание мочевины в кожном экскрете в зависимости от возраста

3.3.Со держание мочевины в кожном экскрете в зависимости от пола

3.4.Влияние физических нагрузок на экскрецию мочевины кожей

3.5.Влияние экологических факторов на экскрецию мочевины кожей

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ЭКСКРЕЦИИ КОЖЕЙ АМИНОКИСЛОТ И УРОКАНОВОЙ КИСЛОТЫ

4.1. Содержание аминокислот в кожном экскрете в зависимости от возраста и пола

4.2. Влияние физических нагрузок на экскрецию аминокислот кожей

4.3. Изучение кожной экскреции гистидина и урокановой кислоты

4.4. Простой метод разделения изомеров урокановой кислоты

Введение Диссертация по биологии, на тему "Исследование экскреции некоторых метаболитов азотистого обмена кожей человека"

Актуальность проблемы. Биохимические и физиологические основы метаболизма различных органов человека и организма в целом занимают одно из центральных мест современной биохимии и смежных с ней наук. Это важно не только с позиций научного интереса, но и с точки зрения практического применения знаний об обмене веществ для решения насущных вопросов жизни и деятельности людей, в частности для профилактики и лечения многих заболеваний. Достижения в этой области к настоящему времени довольно значительны благодаря возможностям современного биохимического анализа различных биологических сред, прежде всего, анализа крови и мочи (Зайчик, 2000; Камышников, 2000).

Следует отметить, что в последние десятилетия все большее внимание со стороны физиологов, биохимиков и других специалистов, изучающих обмен веществ человека, уделяется новым, неинвазивным методам биохимического анализа (Caspers, 2001). Эти методы имеют преимущества в том, что их использование полностью исключает возможность инфицирования человека и снижает до минимума стрессовое воздействие при взятии проб биологического материала для анализов. Внедрение неинвазивных методов в практику аналитической биохимии является одним из приоритетных направлений современной физиологии, биохимии и медицины.

Так в этой связи известны успехи внедрения в практику биохимических анализов слезной жидкости (Сомов, 1994; Киселева, 1995; Сорокин, 1997; Ган-ковская, 1998; Козлов, 2001; Хышиктуев, 2005, 2006), слюны (Коробейникова, 2001; Губина, 2001; Храмов, 2002; Чубирко, 2005). Весьма эффективным в этом отношении мог бы оказаться и кожный экскрет.

Вопросам биохимии, физиологии и гигиены кожи уделялось определенное внимание еще с давних времен. Однако подлинно научные основы эти направления приобрели лишь в 18-19 веках (Орлов, 1884; Ломиковский, 1898). Это отчасти объясняется тем, что в отличие от других органов коже уделялось незаслуженно скромное внимание.

Практическая значимость изучения строения и функционирования кожи человека первоначально была связана с потребностями медицины и гигиены. Лишь в последующем в связи с внедрением современных методов исследования стали развиваться направления, связанные с изучением строения и функционирования кожи в целом и отдельных ее составляющих, а также биохимических аспектов, связанных с кожной экскрецией.

Через кожные покровы, как это было показано ранее (Куно,1961), удаляются различные продукты азотистого, углеводного обмена. Среди них и те, которые, так или иначе, вредны для организма: углекислый газ, аммиак, мочевина, вода, минеральные соли и другие.

Однако было установлено, что кроме указанных конечных продуктов метаболизма через кожные покровы экскретируются и необходимые для организма вещества. Это такие соединения, как молочная кислота (Храмов, 1995; Савин, 1998; Перфильева, 1999; Овчинников, 2006), глюкоза (Храмов, 1996), фосфаты (Храмов, 2005) и даже аминокислоты (Павельски, 1964). Все это указывает на то, что кожа - довольно сложный и малоизученный орган выделения, который требует пристального внимания со стороны исследователей.

Поэтому исследование экскреции различных метаболитов и биологически активных веществ через кожные покровы - весьма актуальная проблема современной биологической химии и смежных с ней наук. Это связано не только с малой изученностью процессов кожной перспирации, но и с большим практическим аспектом применения результатов этого исследования.

Для достижения этой цели нами были поставлены следующие задачи:

1. Разработать удобные методы забора проб кожного экскрета для последующего количественного определения в них продуктов азотистого обмена.

2. Предложить доступные и легко воспроизводимые приемы и методики для анализа азотистых метаболитов в кожном экскрете человека.

3. Исследовать (охарактеризовать количественно) экскрецию через кожные покровы человека таких важных конечных и промежуточных продуктов азотистого метаболизма, как креатинин, мочевина, аминокислоты, урокановая кислота.

4. Выявить закономерности влияния на кожную экскрецию указанных веществ таких факторов, как возраст, пол, физические нагрузки, а в ряде случаев также и экологических условий.

5. Оценить возможность применения метода электрофореза на бумаге для разделения цис- и транс- изомеров урокановой кислоты.

Научная новизна. Впервые систематически изучено влияние различных факторов на экскрецию кожей человека некоторых метаболитов азотистого обмена. Показано, что кожная экскреция креатинина зависит от физических нагрузок. Выявлена зависимость экскреции мочевины через кожу от возраста, пола, физических нагрузок; получены достоверные сведения о влиянии экологических условий на экскрецию мочевины. Экспериментально доказано, что выведение аминокислот через кожные покровы не зависит от вышеназванных условий. Предложены удобная процедура определения урокановой кислоты в кожном экскрете и простой метод разделения ее геометрических изомеров.

Практическая значимость. Практическая значимость настоящего диссертационного исследования состоит в расширении и углублении знаний о кожной экскреции человека как достаточно сложном и требующем детального изучения явлении. Экспериментальные результаты настоящей работы могут быть использованы для контроля физической тренированности спортсменов, для определения влияния условий внешней среды на организм человека, а также в диагностических целях. Предложенный нами метод может быть применен для разделения цис- и транс-изомеров урокановой кислоты.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на международных, региональных и внутривузовских конференциях. Они были представлены на VI Региональнаой конференции молодых исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2001 г.); Международных конференциях студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов - 2005» (Москва, МГУ, 2005 г), «Ломоносов - 2006» (Москва, МГУ, 2006 г) и «Ломоносов - 2007» (Москва, МГУ, 2007 г); Международной научно - технической конференции «Наука и образование - 2006» (Мурманск, МГТУ, 2006 г); XVI Российской молодежной научной конференции, посвященной 85-летию со дня рождения профессора В. П. Кочергина (Екатеринбург, 2006 г).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Количественное содержание креатинина в кожном экскрете человека зависит от уровня физической подготовки, общей мышечной массы и не зависит от пола.

2. Уровень мочевины в кожных выделениях изменяется взависимости от возраста, пола, физических нагрузок, и экологических условий.

3. На кожную экскрецию аминокислот не влияют различные факторы: возраст, пол, физические нагрузки.

4. В кожном экскрете обнаружен гистидин и урокановая кислота, представленная цис - и транс — изомерами, которые можно разделить с помощью электрофореза на бумаге.

Публикации. Основные результаты настоящей диссертационной работы изложены в 11 публикациях: 7 статьях и 4 тезисах.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 120 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения результатов, заключения, выводов, списка литературы (160 источников). Иллюстрационный материал включает 14 рисунков и 20 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Гурина, Елена Юрьевна

выводы

1. предпринято систематическое изучение процессов экскреции через кожные покровы человека таких важных продуктов азотистого обмена, как креатинин, мочевина, аминокислоты, урокановая кислота;

2. на основе детального анализа имеющегося в научной литературе материала предложены простые и удобные методы забора проб кожного экскрета человека: адсорбция бумажными полос, смыв экскрета с поверхности кожи, экстракция с помощью растворителя;

3. разработаны доступные и легко воспроизводимые приемы и методики анализа упомянутых выше азотистых метаболитов в кожном экскрете человека, основанные на использовании фотоэлектроколориметрического, хроматогра-фического и электрофоретического методов научных исследований;

4. исследованы процессы экскреции через кожные покровы человека конечных продуктов азотистого обмена: креатинина и мочевины. Показано, что количественное содержание креатинина в кожных выделениях человека зависит от физических упражнений, общей мышечной массы. Выявлено, что на уровень мочевины в кожных выделениях влияют не только возраст, пол и физические нагрузки, но и экологические факторы;

5. изучены процессы экскреции через кожу человека таких метаболитов, как аминокислоты и урокановая кислота. При этом выявлены закономерности влияния на кожную экскрецию указанных веществ различных факторов: возраста, пола, физических нагрузок. Показано, что экскреция аминокислот через кожу не зависит от возраста, пола, физических нагрузок. Предложен простой, удобный и надежный метод разделения геометрических изомеров урокановой кислоты;

6. полученный экспериментальный материал по проблеме диссертационного исследования систематизирован и оформлен в виде учебно-методических указаний к проведению практических занятий по химическим дисциплинам в школе и вузе. Эти указания были апробированы в школьном и вузовском учебном процессе и рекомендованы к использованию в преподавании химических дисциплин в школе и вузе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В заключении отметим, что поставленная перед нами цель настоящей диссертационной работы была успешно выполнена.

В процессе исследований были предложены простые и удобные методы забора проб кожного экскрета, которые использовались для аналитического определения азотистых метаболитов, содержащихся в кожных выделениях.

Результаты проведенных исследований зависимости кожной экскреции креатинина свидетельствуют о том, что у всех тестируемых групп количественное содержание креатинина в выделениях кожи возрастает после физических нагрузок. У спортсменов тяжелоатлетов исходный уровень креатинина повышен по сравнению с уровнем креатинина других групп обследуемых. Можно предположить, что количество экскретируемого кожей креатинина так же, как и концентрация его в крови и уровень его выделения с мочой, зависит от мышечной массы тела. Кроме того, установлено, что изменение концентрации креатинина в кожном экскрете после физической нагрузки происходит одинаково у всех обследуемых групп и не зависит от содержания креатинина в покое. Выявлены также некоторые различия в выделении креатинина разными участками тела (лоб, шея). Так как экскреция креатинина зависит от объема и активности мышечной массы, то подобное исследование может представлять интерес для спортивной медицины: поиск корреляции между физическими нагрузками и кожной экскреции креатинина.

В настоящей работе исследована зависимость содержания мочевины в кожном экскрете человека от таких факторов, как возраст, пол, физическая нагрузка, экологические факторы. В случае изучения влияния физической нагрузки на кожную экскрецию мочевины пробы брались до начала физической нагрузки (перед уроком физкультуры) и после физической нагрузки (после урока физкультуры).

В эксперименте участвовали школьники 1-го, 6-го, 9-го классов.

На основе проведенной работы были выявлены следующие факты.

Во-первых, полученные экспериментальные данные свидетельствуют о том, что содержание мочевины в кожном экскрете изменяется в зависимости от возраста. Например, у учащихся 6-го класса ее содержание значительно выше, чем у учащихся 1-го и 9-го классов. Предполагаем, что это связано с тем, что в возрасте 12-14 лет начинается период активного полового созревания. В результате увеличивается скорость обмена веществ в организме, что приводит к большей секреции мочевины и выведению ее из организма.

Проведенная статистическая обработка материала убеждает в достоверности полученных результатов.

Во-вторых, исследования и статистическая обработка результатов достоверно указывает на различие в содержании мочевины в кожном экскрете у мальчиков и девочек 7 - 8-летнего возраста (учащиеся 1 класса): количество мочевиныу мальчиков значительно превосходит содержание мочевины на коже девочек. Предположительно это связано с большей подвижностью мальчиков по сравнению с девочками.

Подобной зависимости у обследуемых 9-ого класса установить не удалось. Вероятно, это связано с тем, что к этому возрасту интенсивность полового созревания у юношей и девушек приблизительно достигает одного уровня и различия в азотистом обмене, связанном с экскрецией мочевины через кожные покровы, не носят достоверного характера.

В-третьих, установлено, что физическая нагрузка способствует увеличению содержания мочевины в кожном экскрете, что, безусловно, связано с повышением обмена веществ в организме во время физической работы.

В результате изучения влияния экологической ситуации на экскрецию мочевины кожей, были полученные экспериментальные данные которые свидетельствуют о том, что содержание мочевины в кожном экскрете находится в тесной зависимости от экологической ситуации, сложившейся на территории области проживания обследуемых. В экологически неблагоприятных районах уровень экскреции мочевины был довольно высоким. Вероятно, это связано с нарушением азотистого обмена и некоторых функций кожи, в частности, защитной функции (снижение бактерицидных свойств).

В данном диссертационном исследовании было изучено содержание аминокислот в кожном экскрете в зависимости от возраста, пола и физических нагрузок.

Анализ полученных данных позволяет констатировать, что количество аминокислот, экскретируемых кожей, не зависит от возраста,пола и физических нагрузок.

При сравнении уровня аминокислот на коже на разных участках существенных различий не замечено, что позволяет говорить о том, что количественный состав аминокислот на коже на разных участках тела относительно постоянен.

В настоящей работе было проведено определение количественного содержания урокановой кислоты и гистидина в смывах с кожи человека и предложен способ разделения геометрических изомеров урокановой кислоты, который может быть рекомендован к использованию в практике биохимических медицинских лабораторий, изучающих азотный обмен у человека и животных, а также процессы перспирации метаболитов через кожу человека. Например, при исследовании ферментов гистидазы и уроканазы и других, связанных с обменом гистидина и урокановой кислоты.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гурина, Елена Юрьевна, Волгоград

1. Анатомия человека. Русско-латинский атлас / Г.Л. Билич М.: «Оникс», 2006.

2. Анатомия человека: В 2-х тт. / М.Р. Сапин М.: «Оникс». 2006.

3. Балаховский, И.С. О физиологических закономерностях колебания концентрации мочевины в крови / И.С. Балаховский, Т.А. Орлова // Лаб. дело. 1980. № ю. С. 588-592.

4. Балаховский, И. С. Содержание осмотически активных веществ и выведение креатинина с мочой у здоровых мужчин / И.С. Балаховский // Лаб. дело. 1983. №5. С. 6-9.

5. Батвинков, Н.И. Связь обмена аминокислот плазмы крови и функционального состояния печени при воспалительных заболеваниях желчного пузыря / Н.И. Батвинков, Л.И. Нефедов, К.А. Фомин // Клин, хирургия. 1991. № 11. С. 13-15.

6. Березов, Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин М.: Медицина, 1982.

7. Биохимия. Пер. с франц. / Ж. Крю М.: Мир, 1979.

8. Биктимеров, P.P. Новые подходы к хроматографическому определению аминокислот в биологических жидкостях / P.P. Биктимеров, А.А. Дутов, П.П. Терешков, И.В. Темникова, Е.Ю. Левашина, А.А. Федотова // Клин, лаб. диагн. 2005. № 10. С. 2-3.

9. Буробин, В.А. Защита от ультрафиолетовой радиации / В.А. Буробин //

10. Лаб. дело. 1978. № 11. С. 650-653.

11. Великанова, О.Ф. Спектрофотометрический метод определения суммарного количества аминокислот в сыворотке крови / О.Ф. Великанова, Ю.В. Галаева // Лаб. дело. 1981. № 11. С. 701 -704.

12. Величковский Б. Т. Главнейшая задача экологии человека в России / Б. Т.Величковский // Гиг. и сан., 2003, № 3, с. 6 9.

13. Воронецкене, В.И. Содержание аминокислот в продуктах / В.И. Воронец-кене, Д.А. Микалаускайте // Вопросы питания. 1991. № 2. С. 54-57.

14. Ганковская, Л.В. Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии / JI.B. Ганковская, В.П. Еричев. // Сборник трудов РГМУ. М.: 1998. С. 756.

15. Гершенович, З.С. Защитное действие мочевины при гипероксии. Содержание свободной и связанной форм мочевины в мозге / З.С. Гершенович,

16. A.А. Кричевская, B.C. Шугалей, M.J1. Андреев // Вопр. мед. химии. 1972. Вып. 2. С. 207-211.

17. Гофман, Э.Г Динамическая биохимия / Э.Г. Гофман М.: Мир, 1971.

18. Губина, А.К. Профессиональная гигиена полости рта и методы ее проведения / А.К. Губина, Э.С. Михайлова, А.Г. Воробьевская и др. // Метод, рекомендации Воронеж: 2001.

19. Турина, Е.Ю. Влияние патологий печени на экскрецию лактата кожей / Е.Ю. Турина, Г.А. Савин // Материалы Международной конференции молодых ученых по фундаментальным наукам «Ломоносов-2006» Химия. - М.: МГУ, 2006. Т. 2. С. 15.

20. Гурина, Е.Ю. Исследование экскреции урокановой кислоты кожей человека / Е.Ю. Гурина, Г.А. Савин // Проблемы теор. и эксперим. химии: тез. докл. XVI Рос. молодеж. конф., посвящ. 85-летию со дня рожд. проф.

21. B.П. Кочергина, Екатеринбург, 25-28 апреля 2006 г. Екатеринбург: Изд-во Урал, ун-та. 2006. С. 16.

22. Гурина, Е.Ю. Методы забора проб кожного экскрета / Е.Ю. Гурина, Г.А. Савин, В.А. Храмов // Естествознание и гуманизм. Сборник научных работ-Томск: «Вайар», 2005. Т. 2. № 5. С. 91.

23. Гурина, Е.Ю. Определение гистидина и урокановой кислоты в экскретах кожи человека / Е.Ю. Гурина // Материалы Международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2005». Секция «Химия». -М.: МГУ. 2005. Т. 1. С. 69.

24. Турина, Е.Ю. Простой метод определения урокановой кислоты и гистидина в кожном экскрете человека / Е.Ю. Турина, Г.А. Савин, В.А. Храмов // Вестник ВолгГАСУ. Серия: Естественные науки. Волгоград: Волг-ГАСУ, 2006. Вып. 5(18). С. 120-121.

25. Елисеева, О.И. К методике количественного анализа свободных аминокислот сыворотки крови / О.И. Елисеева // Лаб. дело. 1974. № 7. С. 421424.

26. Збарский, Б.И. Биологическая химия / Б.И. Збарский, И.И. Иванов, С.Р. Мардашев-М.: Медицина, 1972,

27. Зайцева, Н.В. Газохроматографическое определение микроколичеств 2-хлорфенола в биологических жидкостях / Н.В. Зайцева, Т.С. Уланова, Т.В. Нурисламова, Н.А. Попова, Е.А. Рудакова // Гиг. и сан. 2002. № 3. С. 73-74.

28. Зайцева, Н.В. Идентификация фенолсодержащих соединений в биологических жидкостях / Н.В. Зайцева, В.П. Гаранин, Т.С. Уланова, Т.В. Нурисламова, Н.А. Попова//Гиг. и сан. 2003. № 1. С. 72-74.

29. Зайцева, Н.В. Определение альдегидов в биологических средах методомвысокоэффективной жидкостной хроматографии / Н.В. Зайцева, Т.С. Уланова, Т.Д. Карнажицкая, A.M. Сыпачева // Гиг. и сан. 2002. № 2. С. 77-79.

30. Зайцева, Н.В. Определение формальдегида в биологических жидкостях / Н.В. Зайцева, Т.С. Уланова, Т.Д. Карнажицкая, Ю.А. Тырыкина // Гиг. и сан. 1999. №4. С. 69-71.

31. Зайцева, Н.В. Практическое применение метода газовой хроматографии для определения ароматических углеводородов в биологических жидкостях / Н.В. Зайцева, Т.С. Уланова, Т.В. Нурисламова, Н.А. Попова // Гиг. и сан. 1999. № 5. С. 75-77.

32. Зайцева, Н.В. Экология и здоровье детей Пермского региона / Н.В. Зайцева, Н.И. Аверьянова, И.П. Корюкина Пермь: 1997.

33. Зайчик, А.Ш. Основы общей патологии: Учебник для медицинских вузов./ А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов СПб.: 2000. 405 с.

34. Ильинская, О.Н. Определение свободного гистидина методом тонкослойной хроматографии / О.Н. Ильинская, И.М. Скипина, Н.С. Карамова, О.Б. Иванченко, М.А. Шмидт, З.Ф. Круглова // Клин. лаб. диагн. 2001. № 6. С. 12-14.

35. Казначеева, А.И. Содержание свободных аминокислот у практически здоровых лиц в плазме крови, эритроцитах и моче / А.И. Казначеева, Н.З. Злыднев // Лаб. дело. 1976. № 8. С. 480-482.

36. Камышников, B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. / B.C. Камышников Минск: 2000.

37. Киселева, Т.Н. Значение биохимических показателей слезной жидкости для ранней диагностики и прогноза течения травматического увеита / Т.Н. Киселева. // Автореф. дис. канд. мед. наук. Челябинск: 1995.

38. Клинические лабораторные исследования в педиатрии / Й. Тодоров София: 1963.

39. Клиническая химия в диагностике и лечении. Пер. с англ. / Дж. Ф. Зилва, П.Р. Пэннелл М.: Мир, 1988.

40. Кожа / под ред. A.M. Чернуха, Е.П. Фролова М.: 1982.

41. Кожные и венерические болезни / Ю.К. Скрипкин, Г.Я. Шарапова М.: Медицина, 1987.

42. Коробейникова, Э.Н. Количественное определение содержания белка и муцина (гликопротеинов) в слюне / Э.Н. Коробейникова, Е.И. Ильиных // Клин. лаб. диагн. 2001. № 8. С. 34-35.

43. Коробейникова, Э.Н. Определение содержания свободных аминокислот в сыворотке крови и моче здоровых детей / Э.Н. Коробейникова, Г.В. Ме-щеринова // Лаб. дело. 1981. № 4. С. 221-223.

44. Куно, Яс Перспирация у человека: (Неощутимая перспирация, потоотделение, водно-солевой обмен) / Пер. с англ. В. К. Кузьминой. Под ред. и с предисл. проф. А. А. Летавета и д-ра мед. наук А. Е. Малышевой. М.: Иностранная литература, 1961. - 382 с.

45. Лабораторные методы исследования в клинике / под ред. В.В. Меньшикова М.: Медицина, 1987.

46. Назаров, К Клиренсы эндогенного креатинина, мочевины и мочевой кислоты у больных гипертонической болезнью / Н. Лазаров // Лаб. дело. № 1.С. 54.

47. М.ЯакинГ.Ф. Биометрия/Г.Ф. Лакин. -М.:Высшая школа,1990.- 352 с.

48. Липицкая, И.Я. Кинетический метод определения креатинина по реакции Яффе // И.Я. Липицкая, Т.И. Коткина, А.В. Тарасов, В.Н. Титов // Лаб. дело. 1989. №2. С. 37-41.

49. Ломжовский, М.М. Причины изменения внутренних органов у животных при задержке кожной перспирации / М.М. Ломиковский // Дис. . д-ра филос.

50. Мазо, В.К. Определение суммарного количества аминокислот в крови и других биологических жидкостях / В.К. Мазо, Н.З. Злыднев // Лаб. дело. 1977. №4. С. 213-216.

51. Математическая статистика: анализ вариационных рядов.Учебно методическое пособие / Сост. проф. О. И. Коломок, ст. преп. Р. И. Маловичко. Волгоград: ВГСХА, 2004, 64 с.

52. Медовар, Б.Я. Электрофоретическое и хроматоэлектрофоретическое определение свободных аминокислот мочи / Б.Я. Медовар // Лаб. дело. 1972. №2. С. 67-71.

53. Мороз, А.Р. Диагностическое значение исследований аминокислотного обмена при длительном контакте с пестицидами / А.Р. Мороз // Клин, лаб. диагн. 1994. № 3. С. 43-47.

54. Молекулярная биология: Структура и функции белков / В.М. Степанов -М.: Высшая школа, 1996.

55. Методы первичного выявления генетической активности загрязнителей среды с помощью бактериальных тест-систем: Метод, указание / Л.М. Фонштейн, С.К. Абилев, Е.В. Бобринев и др. М.: 1985.

56. Методические подходы к выявлению отклонений состояния здоровья женщин и детей на территории экологического риска / В.Е. Лановских, Т.К. Бердикова, М.И. Кириченко, Д.А. Чугунова // Поволжский экологический вестник Волгоград: Комитет по печати, 1995.

57. Микробиология кожи человека. Пер. с англ. / У.К. Нобл М., Медицина, 1986.-493 с.

58. Микрофлора кожи человека клинико - диагностическое значение / Материалы конференции в г. Таллине 25.02.1988.

59. Микрофлора человека в норме и при паталогии / В. Г.Петровская, О. П. Марко М.: Медицина, 1976.- 232 с.

60. Мочевина в живых организмах / Издательство Ростовского университета Ростов н/Д: 1970.

61. Мочевина/ А.Т. Зотов-М.: Госхимиздат, 1963.

62. Мухамбетова, JI.X. Гигиеническая оценка состояния окружающей среды и здоровья населения в Москве / JI.X. Мухамбетова М.: 1997. С. 41-44.

63. Наточин, Ю.В. Методы микроопределения хлоридов и креатинина в биологических жидкостях / Ю.В. Наточин, Е.И. Шахматова // Лаб. дело. 1973. № 1.С. 17-20.

64. Нефедов, Л.И. Статистический анализ структуры аминокислотного пула крови доноров / Л.И. Нефедов, И.И. Климович // Здравоохранение Белоруссии. 1991. №11. С. 10-13.

65. Новиков С. М. Принципы, критерии и методы оценки кратковременных воздействий химических веществ, загрязняющих атмосферный воздух / С. М. Новиков, Т. А. Шашина, Н. С. Скворцова // Вестник РАМН. 2006. № 5. С. 3-7.

66. Общая микробиология / Г.Шлегель. М.: Мир, 1987. -566 с.

67. Овчинников, Ю.А. Биоорганическая химия / Ю. А. Овчинников. -М.:Просвещение, 1987. 815 с.

68. Орлов, JI.B. К вопросу о влиянии ванн на кожную перспирацию / Л.В. Орлов // Дис. д-ра филос. СПб.: 1884.

69. Орлова, Т.А. Микрометод определения креатинина в высушенной крови / Т.А. Орлова, И.С. Балаховский // Лаб. дело. 1982. № 9. С. 4-9.

70. Онищенко Г. Г. Критерии опастности загрязнения окружающей среды // Гиг. и сан.,2003, № 6, с. 2-3.

71. Основы биохимии. Пер. с англ. 1-2 тт. / А. Ленинджер М.: Мир, 1985.

72. Основы биохимии. В 3-х тт. / А. Чайт, Ф. Хендлер, Э. Смит, Р. Хилл, И. Леман М.: Мир, 1981.

73. Очерки по патологической биохимии, Пер. с англ. / Р. Хашен, Д. Шейх -М.: Мир, 1981.

74. Перфильева, О.Н. Влияние различных факторов на содержание лактата в кожном экскрете / О.Н. Перфильева, Т.А. Касаткина, Г.А. Савин // Вестник СНО. Волгоград: Перемена, 1999. № 11. С. 30-35.

75. Пинигин М. А., Сабирова 3. Ф. Комплексная характеристика влияния факторов среды и социальных условий на здоровье населения / М. А. Пинигин, 3. Ф. Сабирова // Вестник РАМН. 2006. № 5. С. 12-16.

76. Потоотделение и проницаемость кожи человека / П.П. Слынько Киев: 1973.

77. Практикум по биохимии сельскохозяйственных животных: Учеб. пособие для зооинженерных и ветеринарных фак. с.-х. вузов / А.В. Чечеткин, В.И. Воронянский, Г.Г. Покусай, Н.И. Карташов, Н.Л. Докторович, И.В. Кириченко М.: Высшая школа, 1980.

78. Рахманин, Ю.А. Методическая проблема оценки угроз здоровью человека факторов окружающей среды / Ю. А. Рахманин, С. М. Новиков, Г. И. Румянцев // Гиг. и сан.,2003, № 6, с. 5 10.

79. Рогозкин, В.А. О фосфорилировании креатина в мышцах / В.А. Рогозкин -Биохимия, 1963. Т. 28. Вып. 3. С. 217-220.

80. Руководство по детской дерматологии / Ю.К. Скрипкин, Ф.А. Зверькова, Г.Я. Шарапова, А.А. Студеницин-М.: Медицина, 1983.

81. Руководство по клинической лабораторной диагностике / под ред. М.А. Бамриновой Киев: 1986. Ч. 3. С. 34.

82. Савин, Г.А. Влияние некоторых патологий на экскрецию молочной кислоты кожей / Г.А. Савин, В.Г. Овчинников, Е.Ю. Гурина // Естествознание и гуманизм. Сборник научных работ. Томск: 2006. Т. 3. № 1. С. 135

83. Савин, Г.А. Исследование содержания аминокислот в кожном экскрете человека / Г.А. Савин, Е.Ю. Гурина // Вестник ВолгГАСУ. Серия «Естественные науки». 2007. Вып. . С. (в печати)

84. Савин, Г.А. Исследование экскреции лактата кожей в зависимости от различных факторов / Г.А. Савин, Е.Ю. Турина, В.А. Храмов // Естествознание и гуманизм. Сборник научных работ. Томск: 2005. Т. 2. № 5. С. 91.

85. Савин, Г.А. Кожный тест на стресс / Г.А. Савин, О.Н. Перфильева // Клин, лаб. диагн. 1998. № 11. С. 7-8.

86. Савин, Г.А. Количественное определение мочевины в кожном экскрете / Г.А. Савин, Е.Ю. Турина // Материалы международной научно-технической конференции «Наука и образование-2006». Мурманск, МГТУ (4-12 апреля 2006 г.) Мурманск: 2006. С. 612-613.

87. Савин, Г.А. Количественное определение урокановой кислоты в кожном экскрете человека / Г.А. Савин, Е.Ю. Турина, В.Г. Овчинников // Естествознание и гуманизм. Сборник научных работ. Томск: «Вайар». 2006. Т. 3. № 1.С. 141.

88. Савин, Г.А. Уровень лактата в кожном экскрете как показатель физической тренированности спортсменов / Г.А. Савин, Е.В. Ушакова, О.Н. Перфильева // Теория и практика физ. культуры. 2000. № 1. С. 18-19.

89. Сидоренко, Г.И. Гигиеническая оценка состояния окружающей среды и здоровья населения в Москве / под ред. Г.И. Сидоренко М.: 1997. С. 511.

90. Сомов, Е.Е. Слеза: Физиология, методы исследования, клиника. / Е.Е. Сомов, В.В. Бржеский СПб.: 1994.

91. Сорокин, ЕЛ. Актуальные проблемы офтальмологии / E.JI. Сорокин. // Материалы зональной конференции офтальмологов Сибири и Дальнего Востока. Благовещенск: 1997. С. 110-111.

92. Сноридзе, Б. К вопросу дегидратирующего действия мочевины и ее влияния на жизненно важные функции организма / Б. Сноридзе // Автореф. Дисс. канд. биол. наук-Донецк: 1972.

93. Сидоренко, Г.И. Гигиеническая оценка состояния окружающей среды и здоровья населения в Москве / под ред. Г.И. Сидоренко М.: 1997. С. 5-11.

94. Смертность как один из показателей экологического неблагополучия Волгоградской области / JI.K. Квартовкина, А.И. Жуков, И.А. Левашова, С.Е. Першин // Поволжский экологический вестник Волгоград: Комитет по печати, 1997.

95. Справочник биохимика / Р.Досон, Д. Элиот, У. Элиот, К. Джонс.-М.: Мир, 1991. 544с.

96. Справочник по прикладной статистике / Э. Ллойд,У. Ледерман. -М.:Финансы и статистика, 1989. 508 с.

97. Статистический анализ экспериментальных данных / В.К. Протасов -М.: Мир, 2005.- 137 с.

98. Текущая, Е.Е. Методы и практика контроля тяжелых металлов в биосредах / Е.Е. Текуцкая, Л.И. Софьина, Л.В. Бендер, Н.П. Онищенко // Гиг. и сан. 1999. №4. С. 72-74.

99. Травянко, Т.Д. Соотношение экскреции половых гормонов и креатинина в моче здоровых женщин / Т.Д. Травянко // Лаб. дело. 1980. № 1. С.33-34.

100. Титов, В.Н. Методические приемы исследования креатинина / В.Н. Титов, М.Г. Творогова, А.В. Тарасов, И.Я. Липицкая // Лаб. дело. 1989. № 9. С. 4-10.

101. Угулина, А. Ф. Диагностическое значение раздельного концентрационного индекса по креатинину / А.Ф. Угулина, Г.Ф. Сергеева // Казанский медицинский журнал. 1971. № 2. С. 54-57.

102. Уртенова, З.Ю. Влияние физической нагрузки и условий внешней среды на кожную экскрецию азотистых метаболитов / З.Ю. Уртенова // Дис. канд. биол. наук Волгоград: 1994.

103. Физиологические константы в клинике внутренних болезней: Пер. с польск. / С. Павельски, 3. Завадски-М.: Медицина, 1964.

104. Физиология человека. Пер. с англ. / под ред. Р. Шмидта и Г. Тевса -М.: Мир, 1986.

105. Химия аминокислот и пептидов / Дж. Гринштейн, М. Виниц М.: Мир, 1965.

106. Храмов, В.А. «Адский камень» как реактив для аналитической химии / В.А. Храмов, Е.Ю. Турина, Г.Л. Гиззатова // Химия в школе М.: РАО, изд-во «Центрхимпресс», 2006. № 5. С. 60.

107. Храмов, В.А. Кожные тесты, отражающие изменения азотистого обмена у спортсменов в условиях физической нагрузки / В.А. Храмов, З.Ю. Уртенова // Теория и практика физ. культуры. 1987. № 8. С. 20-21.

108. Храмов, В.А. Кожная экскреция глюкозы у здоровых молодых людей / В.А. Храмов, М.Е. Спивак // Гиг. и сан. 2001. № 3. С. 71.

109. Храмов, В.А. Определение в одной пробе лактата и ряда азотистых шлаков, экскретируемых кожей человека / В.А. Храмов // Теория и практика физ. культуры. 1996. № 9. С. 14-15.

110. Храмов, В.А. Простой метод определения креатинина, экскретируе-мого кожей человека / В.А. Храмов // Деп. ВИНИТИ, № 474В, 25.02.93.

111. Храмов, В.А. Простой метод определения лактата в биологических жидкостях / В.А. Храмов, Г.А. Савин // Гиг. и сан. 1995. № 4. С. 52-54.

112. Храмов, В.А. Простой способ определения глюкозы в кожных экскретах человека / В.А. Храмов, В.В. Папичева // Клин. лаб. диагн. 2000. №7. С. 14-15.

113. Храмов, В.А. Тиосемикарбазидная модификация реакции Фирона и ее использование для количественного определения мочевины / В.А. Храмов, Ю.В. Галаев // Вопр. мед. химии. 1969. Вып. 4. С. 435-438.

114. Храмов, В.А. Чрескожная экскреция неорганических фосфатов у молодых людей / В.А. Храмов, Е.Ю. Турина // Научный вестник. Зоотехния-Волгоград: ВГСХА, 2005. Вып. 3. С. 71-72.

115. Храмов, В.А. Что еще можно обнаружить на коже человека / В.А. Храмов, Е.Ю. Турина // Химия в школе М.: РАО, изд-во «Центрхим-пресс», 2005. № 10. С. 63.

116. Храмов, В.А. Уровень аминоазота и имидазольных соединений в ротовой жидкости человека / Храмов В.А., Пригода Е.В. // Стоматология. 2002. №6, С. 10-11.

117. Храмов, В.А. Экскреция продуктов азотистого обмена при физических нагрузках в условиях среднегорья / В.А. Храмов, З.Ю. Уртенова // Теория и практика физ. культуры. 1995. № 10. С. 58-59.

118. Хышиктуев, Б.С. Диагностическое значение исследований слезной жидкости при диабетической ретинопатии (обзор литературы) / Б.С. Хышиктуев, М.В. Максименя, С.А. Козлов // Клин. лаб. диагн. 2006. № 3. С. 34-36.

119. Хышиктуев, Б.С. Клинико-диагностическое значение исследования слезной жидкости (обзор литературы) / Б.С. Хышиктуев, С.А. Козлов, М.В. Максименя, П.П. Терешков // Клин. лаб. диагн. 2005. № 12. С. 3-6.

120. Хышиктуев, Б.С. Состав жирных кислот слезной жидкости у здоровых и пациентов с офтальмопатологией / Б.С. Хышиктуев, П.П. Терешков, С.А. Козлов, JI.A. Голуб, М.В. Максименя // Клин. лаб. диагн. 2005. №4. С. 18-19.

121. Чёвари, С. Определение креатинина в сыворотке крови и без осаждения белков в моче / С. Чёвари, И. Мештян, К. Ебст // Лаб. дело. 1977. № 5. С. 266-269.

122. Чубирко, М.И. Биомониторинг тяжелых металлов в слюне / М.И. Чубирко Г.М. Басова, Н.Н. Степанова, Т.А. Попова, JI.H. Якушкина, В.П. Куралесина // Гиг. и сан. 2005. № 2. С. 66-67.

123. Чудо человека / Гитт Вернер Bielefeld, Germany: Christliche Litera-tur-Verbreitung E.V. 1999.

124. Шеханова, И.А. Биогеохимические и токсикологические исследования загрязнений / И.А. Шеханова, Б.С. Пристер, С.Е.Дятлов, Н.Н. Пан-ченко // Сб. науч. тр. ВНИРО.-М.: 1984. С. 112-122.

125. Юдина, Т.В. Методологические и методические проблемы оценки состояния здоровья населения / Т.В. Юдина // Материалы Всесоюзной науч. конф.: Сб. науч. тр. СПб.: 1992. С. 42-46.

126. Danielsson, J. A TD-DFT Study of the Photochemistry of Urocanic Acid in Biologically Relevant Ionic, Rotameric, and Protomeric Formes / J. Daniels-son, J. Ulicny, A. Laaksonen // J. Am. Chem. Soc. 2001. V. 123. № 40. P. 9817-9821.

127. De Fine Olivarius, F. Seasonal variation in urocanic acid isomers in human skin / F. De Fine Olivarius, H.C. Wulf, J. Crosby, M. Norval // Photo-chem. Photobiol. 1997. V. 66. № 1. P. 119-123.

128. De Fine Olivarius, F. Urocanic acid isomers and photosensitivity in healthy children / F. De Fine Olivarius, H.C. Wulf, J. Crosby, M. Norval // Br. J. Dermatol. 1998. V. 139. № 4. P. 605-609.

129. De Fine Olivarius, F. Urocanic acid isomers: relation to body site, pigmentation, stratum corneum thickness and photosensitivity. // Wulf, H. C.; Therkildsen, P.; Poulsen, T.;Crosby, J.; Norval, MArch. Dermatol. Res., 1997.289(9), 501-505.

130. Hermann, К. Analysis of histidine and urocanic acid isomers by re-versed-phase high-performance liquid chromatography / K. Hermann, D. Abeek // J. Chromatogr. В Biomed. Sci. Appl. 2001. V. 750. № 1. P. 71-80.

131. Hermann, K. Determination of histidine and urocanic acid isomers in the human skin by high-performance capillary electrophoresis / K. Hermann, D. Abeek // J. Chromatogr. В Biomed. Sci. Appl. 2000. V. 749. № 1. P. 41-47.

132. Hermida-Ramon, J.M. Analisis of the Relative Stability of c/s-Urocanic Acid in Condensed Phase. The Use of Langevin Dipoles / J.M. Hermida-Ramon, G. Karlstrom, R. Lindh // J. Phys. Chem. В 2002. V. 106. № 28. P. 7115-7120.

133. Hug D.H. The degradation of L-histidine and trans- and cis-urocanic acid by bacteria from skin and the role of bacterial cis-urocanic acid isomerase / D.H. Hug, D.D. Dunkerson, J.K. Hunter // J. Photochem. Photobiol. B. 1999. V.50. № l.P. 66-73.

134. Hug D.H. The potential role for urocanic acid and sunlight in the immune suppression with protein malnutrition / D.H. Hug, J.K. Hunter, D.D. Dunkerson, D. Duane // J. Photochem. Photobiol. B. 1998. V. 44. № 2. P. 117-123.

135. Hug D.H. Malnutrition, urocanic acid, and sun may interact to suppress immunity in sojourners to high altitude / D.H. Hug, J.K. Hunter, D.D. Dunkerson, D. Duane // Aviation, Space and Environmental Medicine. 2001. V. 72. №2. P. 136-145.

136. Kpissay, A. Avidence for Azidyl Radical Initiated Olefin Isomerization. One-way Isomerization of (Z)-Urocanic Acid / A. Kpissay, C.N. Kuhl, T. Mohammad, K. Haber, H. Morrison // Tetrahedron Lett. 1997. V. 38. № 49. P. 8435-8438.

137. Kammeyer, A. Prolonged increase of cis-urocanic acid levels in human skin and urine after single total-body ultraviolet exposures. // Pavel, Stanislav;

138. Asghar, Syed S.; Bos, Jan D.;Teunissen, Marcel В. M. Photochem. Photobiol., 1997. 65(3), 593-598.

139. Lappin, M.B. Urocanic acid and cutaneous antigen presentation / M.B. Lappin, J.C. Simon // J. Photochem. Photobiol. B. 1998. V. 44. № 2. P. 112116.

140. Mohammad, T. Urocanic acid photochemistry and photobiology / T. Mohammad, H. Morrison, H. HogenEsch // Photochem. Photobiol. 1999. V. 69. №2. P. 115-135.

141. Naohiro, T. Simultaneous determination of urocanic acid isomers and histidine in human stratum corneus by high-performance liquid chromatography / T. Naochiro, M. Kiichi, H. Kiyoshi, M. Toshiaki // Analitical Sci. 2001. V. 17. №6. P. 775-778.

142. Noble, W. C. Skin microbiology: coming of age / W.C. Noble // J. Med. Microbiol. 1984. V. 17. № 1. P. 1-12.

143. Norval, M. Effects of solar radiation on the human immune system / M. Norval // J. Photochem. Photobiol. B. 2001. V. 63. № 1. P. 28-40.

144. Norval, M. Studies to determine the immunomodulating effect of cis-urocanic acid / M. Norval, A.A. El-Ghorr // Methods. 2002. V. 28. 1. P. 63-70.

145. Page, C. S. A Theoretical Study of the Low-Lying States of the Anionic and Protonated Ionic Forms of Urocanic Acid / C.S. Page, M. Olivucci, M. Merchan//J. Phys. Chem. 2000. V. 104. № 38. P. 8796-8805.

146. Rui, C.S. Amperometric flow-injection biosensor system for the simultaneous determination of urea and creatinine /C.S. Rui, K. Sonomoto, Y. Kato // Anal. Sci. 1992. V. 8. № 6. P. 845-850.

147. Ryan, W.L. Electronic Spectroscopy and Photoisomerization of trans-Urocanic Acid in a Supersonic Jet / W.L. Ryan, D.H. Levy // J. Am. Chem. Soc. 2001. V. 123. № 5. P. 961-966.

148. Simon, J.D. Spectroscopic and dynamic studies of the epidermal chro-mophores trans-urocanic acid and eumelanin / J.D. Simon // Acc. Chem. Res. 2000. V. 33. №5. P. 307-313.

149. Tabata M. A chemiluminometric method for the determination of urea in serum using a three-enzyme bioreactor / M. Tabata, T. Murachi // J. Biolu-min Chemilumin. 1988. V. 2. № 2. P. 63-67.

150. Wadud, S. Determination of histidine and related compounds in rumen fluid by liquid chromatography / S. Wadud, R. Onodera, M.M. Or-Rashid, M.R. Amin // J. AOAC Int. 2000. V. 83. № 1. P. 8-15.

151. Wadud, S. In vitro catabolism of histidine by mixed rumen bacteria and protozoa / S. Wadud, R. Onodera, M.M. Or-Rashid, S. Oshiro // Curr. Microbiol. 2001. V. 42. № l.P. 12-17.

Информация о работе

Гурина, Елена Юрьевна
кандидата биологических наук
Волгоград, 2007
ВАК 03.00.04

Диссертация

Исследование экскреции некоторых метаболитов азотистого обмена кожей человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно