Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Использование полиморфизма антигенов эритроцитов и главного комплекса тканевой совместимости в разведении и совершенствовании крупного рогатого скота

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Использование полиморфизма антигенов эритроцитов и главного комплекса тканевой совместимости в разведении и совершенствовании крупного рогатого скота"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕ^Я СЕЛЬСГОХОЗШЛ^ЕШХ НАУК (РАСХН)

ХЯКРООСКЯС1УШ а\УЧ1Х>-кссдЕдоа^твльсшй Р Г 6 ОД ИКчТПГГУТ ЛИВОТНОВОДСТВЛ (ЕЕ)

На правах ругетпкон

БУКЛРОВ Яур'-жокед ГаджкуЕквяч

КСПОЛЬЗОБАШГЕ ПОЕЗ^ОРЕЗЗУА ЛПТЙГЕЕСЗ ЭРИТРОЦИТОВ К ГЛАШЮГО КО!ШЁЕСА ТКАЕЗЕОЯ СОБШШ£ЮСТЙ В РАЗВЗДЕЕЗ! I! ООВ2КЗШГВОЗШЕ! НРУЕЕОГО РОГАТОГО СКОТА

03.02.01 - Разведенке.селекция г! Еослроивг-одсгво СЗ^гъскохсзяЛСТЕЗГШЫХ зшзгкнх

Автореферат диссертация

на соискаике учеиой степени догагора биогогичесгавг наук

I

Дувров:^ - 1£95

Работа выполнена я лаборатории генетического маркирования крупного рогатого скота, свиней и овец Всероссийского научно-исследовательского института животноводства.

Научный консультант:

академик РАСХН, доктор сельскохозяйственных' наук, . профессор Л. К. ЗРКСТ.

Официальные оппоненты:

член-корреспондент РАСХН, доктор сельскохозяйственных

наук, профессор А. В. СОДДАТОВ;

доктор сельскохозяйственных наук С. К. ОХАПКИН;

доктор биологических наук Г. Г. СШРИПНИЧЕНКО.

Ведущее учревдение - Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных кивотных.

Защита диссертации состоится " шюаЛ- 1дд5 г.

в 10 часов на заседании Специализированного Совета Д. 020.16.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института : 142012, Московская область. Подольский район, пос. Дубровицы.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЖа.-

Автореферат разослан " " 1995 Г.

Ученый секретарь Специализированного Совета кандидат сельскохозяйственных наук

Ю.И.1ИАК0В

- 2 - .

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность текы. Систематическое изучение биологических маркеров отдельных животных, родственных групп, стад и пород позволило разработать и апробировать концепцию генетической индивидуальности организма и использования наследственных особенностей животных при прогнозировании продуктивности, совершенствовании методов разведения и селекции крупного рогатого скота.

Эритроцитариые и лимфоцитарные маркеры, благодаря легкости их идентификации, простоте типа наследования и широкому наследственному разнообразию, являются доступными и перспективными для массового использования в племенном и товарном скотоводстве (П.Ф. Сороковой, К Г. Букаров, В. К. Чернушенко и др., 1982, А. Р. Слепченко и др. 1982; А.№ Машуров, 1980; O.K. Смирнов и др., 1981; В. П. Павличенко, 1983; Э. К. Бороздин, С. К. Охапкин, 1983; Д. В. Карликов и др., 1987; М. Д. Дедов, Е А. Попов, 1991; В. К. Чернушенко 1992; С. К Охапкин 1990; ЕО. Сухова 1992; L. Andersson-Eklund, В. Danell, J. Rendel, 1990; К. Majala, 1966, 1989).

Генетическое маркирование - прогрессивная методология, позволяющая дополнить селекционные показатели информацией молеку-лярно-биохимического уровня.

Наши исследования являются составной частью программ совершенствования отечественного черно-пестрого, палево-пестрого и бурого скота, реализуемых совместно с учеными и специалистами Селекционного центра крупного рогатого скота ВИНа с 1977 г.

Ряд вопросов, представляющих взаимный интерес, решался совместно со специалиста»® НИШ Монголии (1978-85 гг.).Чехословакии (1985-90 гг.) и Польши (1985, 1988-S0 гг.).

Работа выполнена в соответствии с научно-техническими программами ' 0.СХ.77. N гос. per. 76087186, 81103329; 0.51.25. Ц. ¡1 гос. per. 01870025367, КПНТП - N гос. per. 018780025368; договором РАСХН N 31/1.

1.2. Цель и задачи исследования. Целью данной работы явилось совершенствование технологии генетического маркирования, использование индивидуальной изменчивости в разведении и совершенствовании скота, повышение точности оценки племенных к продуктивных качеств.

Для достижения указанной цели были поставлены задачи-.

1. Усовершенствовать существующую и разработать новую промышленную технологию получения реагентов для определения эритро-цитарных маркеров.

2. Создать и воспроизвести информативный банк диагностику-мов из 84 наименований для типирования крупного рогатого скота по эритроцитарным маркерам.

3. Разработать методы маркирования скота по антигенам главного комплекса тканевой совместимости (Во1-А), включая антиген дифференцировки пола.(Н-У-аитиген).

4. Разработать методы оценки иммунореагсгивности и дифференцировки животных на типы по этому показателю.

5. Усовершенствовать технику постановки иммуногенетеческих тестов,генотипирования и экспертизы проиеховдения животных.

6. Разработать системную концепцию и принципы генетического мониторинга при разведении и совершенствовании скота (аоомаркер-ный анализ).

7. Разработать новые и усовершенствовать существующие методы использования генетических маркеров для оптимизации разведения и совершенствования скота в соответствии с целями селекции.

1.3. Научная новизна и практическая значимость. Впервые в стране ' создан информативный банк из 84 реагентов, в т. ч. 15 новых, для определения зритроцитарных антигенов (ЕА-антигенов), открывающих 11 генетических систем. Разработка промышленной технологии изготовления реагентов для ЕА-тшшрования позволила осуществить их коммерческий выпуск на Армавирской биофабрике и способствовала внедрению метода в масштабах всей страны, в ближнем и дальнем зарубежье.

Впервые проведено типирование скота по 17 антигена« главного комплекса тканевой совместимости (ВоЬА). ВоЬА-типирование использовано для контроля проиеховдения, маркирования, определения генетического сходства и расстояний мезду стадами. Впервые разработана технология Н-У маркирования пересаживаемых эмбрионов с целью регуляции пола потомства, предложены методы получения К-У реагентов, микрометоды ЕА- и Во1-А-типирования, методы дифференцировки животных по уровню иммунного ответа, открыты ЕА-О" и ЕА-С" сублокусы.

Впервые проведено маркирование генофонда черно-пестрых, палево-пестрых и бурых пород скота с использованием информативного бачка реагентов.

Впервые проведен системный анализ влияния точности иденти-

фикации животных на селекционно-генетические параметры (IA, R, h2).

Усовершенствованы методы использования генетических триеров при традиционном разведении скота , а также при пересадке эмбрионов.

Впервые сформулированы системная концепция , принципы генетического мониторинга и зоомаркершй селекции.

Опыт нашей работы в период 1977 по 1994 гг. показал, что использование генетических маркеров улучшило селекционно-племенную работу, ускорило достижение целей селекции. Метод маргарова-ния внедрен в больших объемах при незначительных инвестициях.

Впервые ЕА-маркирование и мониторинг нами внедрен (1977-1986 гг.) в племенных хозяйствах Московской области: в ГПЗ "Заря коммунизма", "Константиново", ."Холмогорка", "Б. Алексеевс-кое", "Никоновское", "Петровское", "Первомайское", "Птичное", на пдемзаводах колхозов "Ленинский луч", им. Ленина, им. Владимира Ильича, "Путь к коммунизму", на племфермах "Непецино", "Фаминское" , "Дубровлцы", колхоза им. Макарова, Московской Селекционной Станции и др. (акт внедрения от 23.12.1983 г.)

Полученные результаты внедрены в 30 хозяйствах Московской, а такие в 35 хозяйствах Смоленской, "Тульской, Ярославской, Костромской, Воронежской и др. областей Российской Федерации.

Исследования, проведенные нами, а тага® рядом других учреждений, позволили подготовить приказ Я 211 1.5СХ СССР от 11 июля 1979г. "О внедрении иммуногенетического контроля достоверности происхождения племенных сельскохозяйственных гшвотных". Это способствовало улучшению племенного учета и селекционной работы. В стране была создана и функционирует сеть из 19 иммуногенетичес-ких лабораторий.

Если на начало внедрения метода по централизованным постав-тал реагентов, изготовленных Армавирской биофабрикой (1980 г.), в стране было аттестовано 68,7 тысяч голов племенного крупного рогатого скота, то в 1986 г. число аттестованных гшвотных составило 145,4 тис. голов. При этом поголовье недостоверных по происхождению животных снизилось с 24, ОХ до 20,6%. Разработка методов выявления антигенов на пересаливаемых эмбрионах расширяет возможности селекции и совершенствует методы разведения. Становится возможным отбор по полу пересаживаеь^ых эмбрионов (HY+ и HY-). Новизна этих, а также других исследований по маркированию животных, подтверждена авторскими свидетельствами (N 1405744,

N 1704787) и патентом РФ (N2001627). Внедрение микрометодов ти-пирования животных позволило в 20 раз снизить расход реагентов, повысить эффективность исследований.

При непосредственном участии и методическом контроле автора на предприятиях Виопрома МСХ СССР (Армавирская биофабрика) налажен промышленный выпуск реагентов для ЕА-типирования крупного рогатого скота (акты внедрения от 26.05.1981, 5.06.1981, 20.09.1991).

На основе наших исследований были подготовлены технические условия (ТУ-46-21) выпуска наборов ЕА-реагентов. Изданы методические рекомендации по выведению линий черно-пестрого скота нового типа с использованием генетических маркеров.

1.4. Основные полокешш, вьшосимиые на защиту: технология создания информативного банка реагентов для ЕА- и ВоЬА-типирова-ния клеток крови и H-Y-типирования живых пересаживаемых эмбрионов, разработка метода определения иммунореактивности организма, методов генетического мониторирования и оценки селекционной ситуации в популяциях, маркирование генофонда черно-пестрого, палево-пестрого и бурого скота, формирование структуры родственных групп и стад, совершенствование методов отбора и подбора, оценки быков-производителей с использованием маркерной информации. Изучение эффективности методов маркирования скота и их совершенствование.

1.5. Апробация полученных результатов. Материалы исследований доложены: на ежегодных отчетах БИЖ - 1977-1985 гг. , 1991-1994 гг.; Ученом Совете ВНИИРГЖ ( 1989) ; Совете Мгвдунар. лаб. по биотехнологии в жив-ве (1987, 1988, 1990 гг., г. Нитра, ЧСФР) ; XVI Ыевдунар. конф. по группам крови и биохим. полиморфизму (г. Ленинград, 1978); XXXIII конф. ЕАЖ (г. Ленинград, 1982); Научно-методич. комиссиях ВАСХНИЛ по общим вопросам генетики и управления селекционным процессом (г.Москва, 1981, 1985); 4-ом съезде ВОГиС (г.Кишинев, 1981); V Всес. симп. "Молекулярные механизмы генетич. процессов" (г. Москва, 1983); Объединенном Совете НШЖ МНР и МСХ СССР (г. Улан-Батор, 1985); Симп. по биологии воспроизводства (г. Нитра, ЧСФР, 1987); Семинарах "Актуальные вопросы зоовет. науки" (г. Нитра, ЧСФР, 1987, 1989); Мекдунар. семинаре Агрофильм 88 (г. Нитра, ЧСФР, 1988); 17 заседании СЭВ по проблеме "Разработка основных проблем в области жив-ва, в т. ч.

по биотехнологии" (г. Нитра, ЧСФР, 1988) ■, Научно-метод. конф. Биоцентра НИИЖ г. Китра (1989); Семинаре по повышению квалиф. спец-тов див-ва (Скальски двор, Брно, ЧСФР, 1989); IV Франко-че-хосл. конгрессе "От ооцита к эмбриону" (г.Прага, ЧСФР, 1990); Симп. по биологии репродукции ун-та им. Масарика (г.Брно, ЧСФР, 1991); Меддунар. симп. "Биотехнология в жив-ве" (г. Нитра, ЧСФР, 1991); на 15 генетических днях (г. Чешские-Вудеевицы, ЧСФР,

1991), Всерос. семинаре "Повышение эффективности использования горных земель" (п. Ахты, Дагестан, РФ, 1991); Межотдельской конф. отделов ВИКа - селекции круп. рог. скота, биотехнологии и тех-нол. производства свинины (1992); 50 конф. аспирантов и молодых ученых ВШа (п. Дубровицы, 1992); Меадунар. симп. по биотехнологии в жив-ве с участием специалистов ФРГ и США (п. Дубровицы,

1992); Научных чтениях, посвященных памяти акад. В. К. Миловано-ва, (п.Быково, 1993, 1994); 1 Мекдунар. конф. по частной генетике с.-х. животных, Аскания-Нова (1993).

1.6. Публикация результатов исследований. Основные результаты исследований, выполненные по теме диссертации, опубликованы в 59 научных работах. Наиболее полно отрагхагат содержание диссертации 24 работы, цитированные в автореферате.

1.7. Объем и стругстура работы. Диссертация изложена на 300 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, заключения, зызодов, предложений производству. Работа иллюстрирована 111 таблицами и 10 рисунками. Список литературы содержит 311 источников, в том числе 189 на иностранных языках.

2. 1'атерз;агы н кэтода г.сследовашй. (Схема исследований, рис. 1). Исходные сыворот1ш для ЕА-типирования получали методом адлоиммунизацга совместно с В. К. Чернушенко с 1977 по 1980 гг. з совхозе "Михейкозский" Смоленской области. Донорские стада такие были созданы в селекцентрах костромской (с-з "Чернопенский", к-з "Знамя труда"), и ярославской пород (О. X "Михайлове кое"), в О. X. "Дубровицы"-ВИК, Центральном аймаке Монголии и кооперативе "Новые Сады" (Словакия). Моиоспецифические реагенты получали в 54 сериях. Проведено 4273 анализирующих и 2467 заключительных абсорбций. Банк ЕА-реагентов был воспроизведен 3-кратно. Воспроизведенные и ковке реагенты проверяли в международных сравнительных испытаниях 1978, 1979-80, 1983-84, 1991-92 гг. Для повышения титра и увеличения выхода антител при иммунизации реципиентов использовал!! иммуностимулятор "Нитра-1".

I-

-V-

I. Совершенствование существующих и разработка новых Технологий получения реагентов•

-1 -

Создание и воспроизводство информативного банка ЕА-реагентов, 84 наим. 11 генетических систем

-2 -

Разработка метода дифференцировки животных по уровню иммунного ответа

-— 3 -

Разработка техники ВоЬА тицирования и получение реагентов 17 наименований

-4 -

Разработка микрометодов ЕА и ВоЬА ти-пирования

-5 -:-

Разработка технологии Н-У типирования и оценка приживаемости пересаживаемых эмбрионов --6 -

Новые методы получ. реагентов: иммуно-стимуляция, элюиро-вание, десорбция, внутриселезеночная иммунизация

-7 -—

Открытие новых ЕАО" и ЕАС" систем эрит-роцитарных маркеров, совершенствование методов гено-типирования

-1-

-у-

П. Маркирование алделофонда и контроль происхоадения животных черно-пестрых, палево-пестрых н бурых пород скота

Племлредприятия и станции искусственного осеменения животных в РФ

N=13, п=3426 - 2 -

Племенные хозяйства Московской области

N=30, п=19854

о ————-

Племенные хозяйства Тульской, Смоленской, Костромской, Ярославской и др. областей РФ N=35, п=22563 -:- 4 -

Шпуляции Украины, Белоруссии, Казахстана, Монголии и др N=10, п=2891

-5 -

Трансплантанты, химера и двойни спонтанного и биотехнического происхождения N=19, п-125

-6 --

Системный анализ влияния учета на селекционные параметры

2

1А, Я, Ь

-7 -

Разработка комплекса компьютерных программ для внедрения маркерной селекции Н=7

-1

-—V-

III. Разработка к анализ методов использования шркеров в разведешш к совершенствовали! крупного рогатого скота

Маркер позитивный и маркер негативный отбор производителей для использования на маточных стадах N=23, п=989

- 2 -:-

Отбор и оценка маркированных сыновей родоначальников линий N=189, п=5403

- 3 -

Анализ продуктивности маркированного потомства быков-производителей

N=16, п-752 ---4 -

Частотные характеристики маркеров в связи с продуктивностью

Н=4, п=380 -5 -

Сочетаемость маркированных генотипов производителей и маток

N=2, п=84-

-6 -—

Генетическое сходство и расстояние при разведении скота

N«17, п=6247

- 7 -

Принципы генетического мониторинга и зоо-маркерной селекции

N=3

Рис. 1. СХЕМА ИССЛЕДОВАНИЙ

С 1979 г. разработанные нами методы использовали на Армавирской биофабрике для промышленного получения реагентов. Это дало возможность массового внедрения генетического маркирования в практику разведения скота (акты о внедрении от 26.05.1981, 5.06.1981 и 20.10.1991).

Технику длительного хранения маркируемых эритроцитов разработали на замораживателе "Сноуболл" (Австрия) с использованием криопротектора ДНСО (диметилсульфоксид).

Определение антигенов главного комплекса гистосовместимости (BoLA - типирование) проводили по разработанной наш методике (рац. предл. N 4/155, 1980 г. BISK). Гипериммунные сыворотки получат двумя методами - иммунизацией быков изолированными лимфоцитами (п=11) и цельной кровью (п=25).

Опыты по изучению иммунореактивности проводили на 22. телятах молочного комплекса "Щапово" и фермы "Овечкино". Уровень иммунного ответа у 72 телят 4-месячного возраста на ксеноантигены и его связь с последующи ростом, развитием и удоем взрослых коров изучали с 1982 по 1984 г.

Для идентификации антигена дифференцировки пола живых пересаживаемых эмбрионов и клеток организма использовали метод H-Y антител (патент РФ N 2001627, 1993).

.Совершенствование методов генетического контроля воспроизводства скота проводили на основе анализа особенностей наследования ЕА-антигенов, включая неполные сети, яивоткых-трансплан-татов , химер биотехнологического и спонтанного происхождения.

Системный анализ влияния точности идентификации животных на параметры оценки производителя, повторяемость его оценки, а так-ке на коэффициенты наследуемости признаков провели с использова-. нием популяционно-генетических методов анализа и моделирования селекционных параметров (ЕЕ Григорьев 1981, Е И. Стрекозов, 1989).

Экономическую эффективность генетического маркирования определяли в соответствии с рекомендациями П.Ф. Сорокового и др. (1991). Моделирование эффективности отбора по генетическим маркерам проводили с использованием алгоритмов С. Smith (1967).

Разработка концепции генетического мониторинга осуществлена путем систематического накопления и анализа экспериментального материала

Оценку быков по качеству дочерей, унаследовавших альтерна-

тивные маркеры (косегрегационный анализ), провели по методике П. Ф. Сорокового (1974). Генетические дистанции между популяциями определяли по Ы. Нею (1980).

Анализировали эффективность маркер-позитивного и маркер-негативного отбора производителей, отбора маркированных сыновей родоначальника родственной группы, продуктивность экспериментально полученного маркированного потомства, связь частотных характеристик маркеров с продуктивностью, сочетаемость маркированных генотипов производителей и маток, значение генетических расстояний в разведении и совершенствовании скота

Эффективность сочетаемости маркированных родительских пар по мясной продуктивности потомства определили при скрещивании производителя кианской породы Гиабо 87 с коровами холмогорской породы.

Для обработки, анализа и внедрения результатов исследований разработали комплекс из 20 статистических и популяционно-генети-ческих программ, реализуемых на микроэвм типа "Электроника" ВЗ-21, ВЗ-34, МК-61.

3. Результаты исследований и их обсуждение.

3.1. Совершенствование сушггвувзих и разработка повшг ш-тодоз получения нэдувоспецкфачесюзх реагентов двя выявления зритроцнтарцых антигенов. В период с 1977 по 1986 гг. в 54 сериях абсорбция трехкратно (1677-79 гг. , 1980-82 гг. , 1983-86 гг.) воспроизвели банк реагентов. На однократное воспроизводство банка реагентов потребовалось 18 серий абсорбций (табл. 1). Были использованы- эритроциты б пород скота.

Таблица 1. Исследования по созданию и воспроизводству информативного банка реагентов ВИЖа

Кодовые обозначения серий опытов по изготовлению реагентов Проведено серий абсорбций Год исследования Воспроизводство банка

3(2), Й2, К2, Л2, Ы2, Н2 0(2), 112, Р2. С2. Т2, У2, №, Х2, 42, Ш2, Щ2, Э2, КЕ, Я2 6 7 7 1977 1978 1979 I

АЗ, БЗ, ВЗ, ГЗ, ЛЗ, ЕЗ ¡КЗ, 3(3), ИЗ, КЗ, ЛЗ К£3, НЗ, 03, ПЗ, РЗ, СЗ 6 5 6 1980 1981 1982 11

ТЗ, УЗ, ФЗ, ХЗ, цз, 43, ШЗ ЩЗ, 33, ЮЗ, ЯЗ, А4, Б4, В4 Г4, Д4, Е4 5 2 7 3 1983 1984 1985 1986 III

В табл. 2 приведены параметры получения реагентов по технологии БИКа.

Таблица 2. Технологические параметры производства реагентов

N Содеркание работы Колич. показатели

п/п по одной серии абсорбций (одной серии)

1 Отбор крови от доноров одной или 40 гол.

нескольких пород скота

2 Отбор крови от одного донора 10 л

3 Пробные абсорбции сывороток 79 иг.

4 Промышленные абсорбции сывороток 46 игр.

5 Абсорбции гипериммунной сыворотки 49 л

6 Элюция антител с абсорбента г шт.

7 Получение стандартных реагентов 4 ит.

8 Десорбции антисывороток и реагентов 40 шт.

В процессе исследований усовершенствована известная технология и предложена новая. Преимущество новой технологии выявляется по 9 параметрам: выходу исходной яммуноспецифической сыворотка (иынз на 25-30%), себестоимости реагентов (ниже в 2 раза), расходу реагента (нгае в 20 раз), и т. д.

Полученные новые стандартные и экспериментальные сыворотки идентифицированы в международных сравнительных испытаниях 1978 (СССР), 1979-80 гг. (Австрия), 1983-84 гг. (Шотландия), 1991-92 гг. «йяшгндня). В испытаниях 1991-92 гг. участвовали 35 лабораторий, в т. ч. 4 лаборатории США, 3 - ФРГ, по 2 - Голландии, ЮАР, Японии, по одной - от России (ВИН) и еще от 21 страны. В тестах были использованы 90 реагентов, относящиеся к 11 ЕА-системам. Информативный банк ВШа представлен 84 реагента!®: ЕАА - 5 наименований- АН, А2, Б, Н, V ; ЕАВ - 48 наименований - В1, В2, 62, <33, И, 12, К, 01, 02 , 03, 04, Р1, Р2, О, Т1, Т2, У1 У2, А'1, А'2, А'З, В', 0', Е'1. Е'2, Е'З, Е'4, Г'1, Р'2, в', Г1, У 2, ]'1, уг. К', 0-1, 0' 2, Р'1. Р'2, О', У, В", В", &Ч, 6"2, I", К"; ЕАС- 13 наименований - С1, С2, Е, Ш, Я2, V, XI, У,2, С, V, X/, С"1, С"2 ; ЕАР 3 наименования г, V, !Г; ЕАЛ 2 наименования - И, j2 ; ЕАЬ и ЕАМ по 1 наименовано Ь и М ; ЕАБ - 8 наименований - 51, Б2, 1/1, 112, Н', II', Н", У'; ЕАг - 1 наименование -г ; ЕШ' - 2 наименования И', Б' и ЕАТ' - 1 наименование Т'. В перечень новых стандартных реагентов ВИЙа, открывающих 15 антигенов в ЕАВ-, ЕАС- и БАБ- системах входят: ЕАВ-система -вЩ 51/8/1), вЗ=(5ив), О' 2=(3и34), Г2«(ЗиЗО), 04-(0х), •Е'4«(Е'х), К'ЧБШО), Г'-ССгСБ/Н), БМРо/Ва! 87/2), 6"1«( Ро/Ва1-87/4), 6"2=( Ро/Ва1-87/5); ЕАС-система

- 11 -EAS-еиетеыа

Ul»(Po/Bal-87/6),

SU7,

C"1»(SU27/1), С"2»(SU27/2); U2~(Po/Bal-87/7).

В составе банка также 11 экспериментальных реагентов: SU8, Süll, SU12, SUIS, SU14, SU16, SU17, SU19, SU21, SU22.

Аттестация донорских стад в Российской Федерации (рис. 2) позволила пользоваться разнообразнием аллелофонда пород при иммунизации и абсорбции, осуществлять обмен иммуноспецифическими ■сыворотками и эритроцитами для исследований.

ВИЖ - лаборатория генетики

/

\

с Число

Организации Год ЕА-типир. Порода

кивотных

1. Армавирская биофабрика 1979-1Ö83 500 красная степ-

Главбиопрома ШХ СССР ная и помеси

2. Костромской СХИ 1977-1983 240 костромская

3. Новосибирское ГПО 19?Э 200 симментальская

4. Омское ГШ 1979 186 черно-пестрая

с Ui Свердловское ГШ 1979 200 тагильская

6. СибНИПГИЕ (Новосибирск) 1978 200 черно-пестрая

7. Смоленский филиал ВИКа 1977-1980 447 СЫЧ. , !1Ш!ПДКаЯ

8. Урал НйМСХОЗ 1980-1982 329 черно-пестрая

9. Ярославский НЮШК 1977-1983 180 ' ярославская

Рис. 2. Создание, в России донорских стад для ЕА-типирушда реагентов

получения

ВИЖ - лаборатория генетики

/

\

Число

Организация Год ЕА-типир. животных Порода

1. УкрНИИЖ "Аскания Нова" 1979-1983 498 кр. степная, АЗТ, помеси

2. УкрНИИСХ, г. Житомир 1979-1983 557 черно-пестрая, укр. белоголовая, помеси

3. УкрНИШ, г. Харьков 1982 30 черно-пестрая _ I,

4 БедНИИЖ, г. Кодино 1982 100

5. КазНИИ эксп. биологии, 1981 167 алатауская

г. Алма-Ата

б. КиргНШШВ, г. Фрунзе 1979-1980 202 алатауская

7. ЭЮШиВ, г.Тарту 1979 50 кр. эстонская

Рис. 3. Создание донорских стад в союзных республиках

Из рис. 2 видно, что реагенты ВИЖа в период с 1977-1983 гг. использовали в 9 регионах РФ с целью создния донорских стад разных пород, для внедрения иммутшгенетического анализа в практику.

IIa рис. 3 показано создание донорских стад на Украине, в Белоруссии, в Казахстане и др. республиках.

Сотрудничество лаборатории генетики ВИН со странам? дальнего зарубежья по разработке и внедрению новых методов генетического маркирования показано на рис. 4.

Рис. 4. }.!эядународнав сотрудничество ВИЙ при создании банка реагентов для ЕА-, BoLA- и H-Y-типирования скота

3.2. Разработка иэтодов изоляции лимфоцитов, проведепие №-ггугаюациЯ, постановка серологических тестов я получвипэ ВоЬА-ди-агЕостикуиов. Как наиболее технологичную, мы применили разработанную нами модификацию макромзтода постановки лимфоцитотокси-ческих реакций, повысившую производительность труда более чем в 8 раз.

После двух циклов иммунизация с перерывом в 2 мес. у реципиентов, выработавших антитела в титре 1:16 и выше, брали кровь для получения ВоЬА-сывороток. Сыворотки, полученные при многократных инъекциях реципиентам 20 мл цельной крови (внутрими-

шечно и частично в толщу ко;;®), также были испытаны на неродственных животных разных пород.

ВоЬА-антисыворотки использовали при контроле происхождения телок черно-пестрой породы на ферме "Овечкгаю". В тестах использовали экспериментальные сыворотки ВоЬА БЩО-ЙО. Получено совпадение экспертных заключений по двум типам антигенов (табл. 3).

■Таблица 3. Генетический контроль происхождения потомства быков черно-пестрой породы по лимфоцитарным и эритроцитарным антигенам

Семейные связи goLA-тип Заключение о происхогэдении по отцу

BoLA ЕАВ

0. Бзмир 2977 п. 1685 15,17,18 15,17,18,19 0+ G2Y2E' 1Q' /G2Y2E' 1Q' G2Y2E' 1Q' 0+

П. 1748 П. 1754 П. 1708 п. 1762 п. 1760 П. 1717 15.17 13,15,16 15.18 15 15,20 15,16,19 000000- 04Е' G" 0-P1E*3/Q2Y2E4Q' 0? 12 0-Q' /04Е' 38" 012 0-04Y2A' 1 0-

0. Акрес 1712771 П. 166? 13,15,16/19,20 15,18,20 0+ G2Y2E' 1Q' /02А* 2J'2K' 0' 02А* 2J'2K'0* 0+

П. 1688 п. 1697 п. 1732 п. 1767 15,16,18 17,18 15,16,17,18,19 15,18 00-0+ 0- 12 012 0-G2Y2E' 1Q' 0+ 12 0-

0. Зкми 93 П. 1671 15,16/18,19 15,16,19,20 0+ P1E' 3/04 Y2 A' 1 P1E'3 0+

п. 1736 п. 1703 12,13,16,17,18, 19,20 15 00- G2Y2E' 1Q' 0-04Y2A' 1 0?

Изучен полиморфизм животных словацкой пестрой (СП), чешской пестрой и помесей СП с другими улучшающими породами. В тестах использовали 17 ВоЬА-реагентов: «1, «2, УЗ, Ш, «5, Мб, «6.2 (И8), 47, №, те, то, «11, Ш2, тз, Ш6, «20, «31. Для СП характерны антигены «6(7.8%), «8(5.1%), «10(13.4%), «11(5.1%) и «20(10.6%). У помесей СП с голландской черно-пестрой породы частоты антигенов «1 и «2 равны 1. 26%. У чистопородных животных СП аллели «1, КЗ и «4 не обнаружены. У помесных животных возросли частоты по снецифичностям «5(16.3%), «8(19.4%), «12(6.5%),

\'£0(20. 9%), У31( 13.4%). У голштинского сгаэта наиболее часто встречаются антигены Ш - 13. 6%, V® - 25. 2%, У12 - 17. 7% и отсутствовали антигены У2, УЗ, УЭ.

Для чешской пестрой породи характерны антигены; VI(5.ОХ), №(7.5%) и И0(8.27.). Анализ показал, что наименьшая генетическая дистанция по ВоЬЛ-антигенам установлена меяду популяциям животных СП с помесньа,м СП х черно-пестрая - 0-0.116. Наибольшее расстояние выявили медду СП и голштинской породами (0-0.257).

3.3. Разработка ь'этода иарккрования пересаливэьйр:топов по атотепу дкфферетртровки пола Для аллоиммунизаций были использованы инбредные кролики новозеландской породы, инбредные крысы Льюис, Браун-Норвей, а тага® инбредные мыши С57В1/6. Шра-ботку антител осуществляли путем внутриселезеночной иммунизации самок.

При аттестации 174 эмбрионов мышей соотношение Н-У+ и Н-У-эмбрионов составило 79 : 95 ( X2 - 0,7; Р > 0,05).

В 6 сериях опытов на 292 мышиных эмбрионах определили условия их экспозиции в разных средах, используемых при манипуляциях по маркированию эмбрионов. Приживаемость Н-У типированных эмбрионов (26,71% ).была не ниже, чем в контроле (23,3%). Точность оценки пола 101 эмбриона составила 78,2%.

Техника Н-У типирования была унифицирована применительно к зьйрионам крупного рогатого скота. Выли определены признаки свечения эмбрионов, дающих начало музским и женским особям.

У крупного рогатого скота аттестовали 70 эмбрионов, которые распределились 31 Н-У+ и 39 Н-У-. После 24-часовой инкубации в ФВС 37 из 40 (92.5%) Н-У-типированных эмбрионов продолжили развитие в культуре.

После аттестации 13 бластоцист были пересажены телка),! черно-пестрой породы. Ректальное исследование на 60 день показало, что 4 реципиента из 10 были стельными (40%).

3.4. Разработка иэтодов оценки реактгапостн ишункой систе-1Д1 для дайеренцировки лшотнда по уровню иммунного ответа. Сравнение первичного и вторичного иммунного ответа показало, что вторичный иммунный ответ является более стабильной характеристикой животного и его использование несколько предпочтительнее. Методика дифференцировки телят по уровню иммунного ответа на ксеноантиген позволяет выделить 3 типа: низкий, средний и высокий (6. 6+-0.18, 8. 5+-0.-71 к 10. 4+-0. 70) Изучена связь давой

массы тела 3, 6 и 12 месячных телят с уровнем иммунного ответа при первичной и вторичной иммунизации и с последующей молочной продуктивностью коров.

Различия по нивой массе тела телок в связи с уровнем вторичного иммунного ответа усилились с возрастом. В 12-месячном возрасте телки, выделенные в группу 1ог2-6. 5, весили на 15.3 кг меньше (р < 0.05), чем телки со средним значением титра 1ог2 -8. 5. Не выявлена связь последующего удоя коров с уровнем иммунного ответа в раннем онтогенезе.

3.5. Гепетичес1к>а маркирование и контроль происхождения плешивого крупного рогатого скота. Систематически осуществляли контроль происхождения и маркирование скота. В хозяйствах (п=30) Шсковской области было аттестовано 19854 гол. , а в хозяйствх (п-35) других областей - 22563 ремонтных быков, коров-селекцион-ных групп и телок. На 13 племпредприятиях аттестовали 3426 Оыков-производетелей для комплектования их проверенными по происхождению животными и контроля потомства.

Таблица 4. Иммуногенетическое маркирование и контроль происхождения племенного крупного рогатого скота

Год Число хозяйств Быки-про- Коровы Ремонтные Итого по

и племпредпр. изводители плем. ядра быки и телки годам

1977 18 201 650 278 1129

1978 16 174 901 298 1373

1979 25 210 1472 2125 3807

1980 12 1206 2651 3285 7142

1981 39 668 6113 8452 15233

1982 38 204 2005- 3269 5498

1983 25 330 1101 1053 2484

1984 16 202 2745 1915 4862

1985 17 231 1938 1861 4030

Всего 3426 19576 22556 45558

Из табл. 4 видно,- маркировано более 45,5 тыс. . животных. Это позволило изучить аллелофонд и осущэствить мониторинг в подконтрольных стадах. Полученные данные позволяют считать, что допустимыми пределами ошибок в учете по отцу для молочного скота -2,4% (ГГО"Еланский " ) - 4,6% (пл. з-д к-за им. Ленина Тульской орл.). Хозяйства, в которых ошибки в племенном учете превышают 15,ОХ, следует выводить из категории племенных. Систематический контроль снизил ошибки в родословных с 1977 по 1983 г. с 27% до 12. 4(акт от 23.12.1983.). Улучшение учета было отмечено по плем-

заводу к-за "Ленинский луч" (акты от 24.11.1982 и 20.12.1983), племферме "Непецино" (акт от 4.10.1985), племферме "Дубровкцы" (ага от 28.1.1986).

Таким образом, контроль происхождения при отборе быков на племпредприятия и их оценке по качеству потомства позволяет выявлять и устранять ошибки, гарантирует достоверность полученных результатов, ускоряет реализацию селекционных программ. Сотрудничество нашей лаборатории со специалистами других регионов позволило широко внедрить этот метод в РФ и сошных республиках.

3. б. Совершенствование гжтодов генотинировагош и контроля воспроизводства крупного рог атого скота. Открытие новых антигенов и расширение банка диагкостккушв позволили установить новые закономерности, отражающие взаимоотношения межу антигенами сложных ЕА-систем. Антигены 6 и Р" входят, в частности, в состав ЕАВ-аллелей черно-пестрой - 62У2Е'Ю'В", 6201У2В", В162К04У2А' 20' С' и чешской красно-пестрой - 62У2А'2В'О'6'0"У'О", В162КЕ' ЗГ' в' 0' 6"0", В1в2К0'0" пород. Анализ показал, что антиген Б" не встечаетсп в составе аллелей, состоящих из антигена 61 или 61 в комбинации с другими антигенами - 6111, 6101 и др. Учет указанных закономерностей расширяет еозмохности генотипирования.

Эритроцитариые антигены - в1 и Б" образуют закрытый суб-локус внутри отрытой ЕАВ-системы (рис. 5).

ЕАВ-Б1-сублокус

Б1 11111

В1 В2 62 ] БЗ I К И 12 Р1

£АВ-0"-сублокус

Рис. 5. Модель аллельных сублокусов ЕАВ-61 и ЕАВ-Б"

Структура ЕАВ-комплекса разделена на 2 аллельиых сублокуса ЕАВ-61 и ЕАВ-Б". Сходная закономерность установлена для антигенов ЕАС системы ( ЕАС-С"-сублокус).

На практике часто имеют дело с неполными семьями. В таких случаях проведение экспертизы по одному из родителей затруднено. Поэтому, внедрили форму бланка для проведения экспертизы происхождения, учитывающую информацию об отце матери (ОЮ- В связи с тем, что ОМ - популярные в регионе маркированные быки-производи-

тели ЦСИО и племпредприятий Московской области, контроль проис-хокдения матерей племенных быков, наряду с происхождением самого пробанда, не требует дополнительной аттестации.

Так, материнство неаттестованной Ляны 817 (ГПЗ "Константи-ново") подтверждается передачей ею дочери N 893 аллеля 6301Т1У2А'2Е'ЗР'2К*, который она унаследовала от отца Амоса 325315.

Сходная ситуация имела место при экспертизе происхождения на племферме "Дубровицы" коровы N 32.

Нерегулярное наследование зритроцитарных антигенов установили в потомстве Экми 93 и коровы N1330 ( О. X. Дубровицы ). Потомок 5786 унаследовал неправильный аллель ИРЮЗА'2Е'ЗЛ'К'0'. Мать N1330 маркирована И/ОЗА'ггК'О', а отец - Р1Е'3/04У2А'1.

Полученные данные указывают на необходимость учета случаев нерегулярного наследования при экспертизе происхождения животных и ЕА-картировании.

3.7. Влияние точности идентификации атотпых на оценку би-гав-производителей по качеству потомства и популяционно-гепетн-ческие параметры стад. Анализ данных табл. 5 позволяет сделать

Таблица 5. Точность оценки производителя

Уровень ошибок Число потомков Коэффициент наследуемости

0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30

0,30 0,30 0,30 0,30 5 10 30 60 0,503 0.517 0,568 0,621' 0,516 0,543 0,622 0.706 0,528 0.566 0.671 0,758 0,541 0,587 0,706 0,795 0,554 0,606 0,734 0,822 0,563 0,624 0,759 0.843

оооо оооо 5 10 30 60 0,652 0.665 0.709 0,756 0,664 0,688 0,756 0.817 0,675 0,707 0.790 0,853 0,686 0.725 0.817 0,878 0,696 0,741 0,837 0,896 0.705 0,755 0,854 0,909

ооор ^ ^ оооо 5 10 30 60 0.818 0,826 0,854 0.882 0,826 0.841 0.882 0,914 0.833 0.853 0,901 0,933 0,840 0,863. 0,915 0,945 0,846 0,873 0,925 0.954 0,852 0,881 0,934 0,960

вывод о том, что ошибки в идентификации животных снижают точность оценки быков - производителей по качеству потомства. Так, точность оценки быка-производителя по удою дочерей (Ь2- 0,25) при численности последних о-ЗО и уровне ошибок 30% составит 55,4-73,4%.

3.8. {.Ъделировалие зффеютгопосги отбора по гепетичесга"! шркераи Эффективностью маркерной селекции считали генетическое превосходство отобранных по маркеру животных:

в - гте" * I * (32 где - корреляция между фактической и предсказанной генетической ценностью, I - интенсивность селекции, 6г - стандартное генетическое отклонение.

Несмотря на относительно небольшой селекционный прогресс (36-51 кг/год) использования маркера при отборе быков и коров, его выгоды очевидны, т. к. маркерная информация является критерием в предварительном отборе молодых быков.

Моделировали ожидаемый генетический прогресс по удою потомства при доле влияния маркера на изменчивость удоя, равной 5-10%. При этом генетический прогресс составил 0,72-1,1%.

Генетическое улучшение при этапной (ступенчатой) селекции складывается из суммы эффектов отдельных этапов.

Расчет показал, что при разнице между группами маркированных дочерей быка в 140-300 кг использование маркерной информации повышает темп генетического совершенств ¡ния животных по удою в 1.2 - 1.4 раза (22 - 42 %). Показано, что маркирование влияет на повышение молочной продуктивности по 3-м каналам (табл. 6). Суммарный эффект влияния генетических маркеров на удой достаточен для его учета в селекции -9.3 7. (при уровне удоя 6000 кг).

Таблица 6. Повышение молочной продуктивности коров при генетическом мониторинге

м п/п Мероприятие в % к контролю (удой 6000 кг)

1 Ранний отбор в потомстве быков-дочерей, унаследовавших желательные маркеры отца, сцепленные с удоем + 5,0

2 Учет генетической структуры стада и закрепление быков-производителей оптимально сочетающихся с наследственностью маточного поголовья (групповой и индивидуальный подбор) + 3,1

3 Контроль происхождения, предотвращение потерь продукции молока, достигаемое за счет исключения ошибок в учете + 1,2

Суммарный эффект 9,3%

Данные, получены в НПО "Пойма" совместно с к. с-х. и. ЕЛ. Поповым, в 1992 г. показали, что генетический тренд за поколение по все*! дочерям быка Барбариса 207 составил 162 кг. Отбор по гену 62У2Е'10' приводит к прогрессу стада за поколение (5 лет) на 227 кг. Разность кедаду фенотипическим трендом всех дочерей и маркированных указанным аллелем составила 65,4 кг/год (227,4-162), т.е. на 407. (в 1,4 раза) выше по сравнению с отбором без использования маркеров.

3.9. Сцэнга быков по качеству парированного потогетва. Изучена молочная продуктивность дочерей 16 быков-производителей при расщеплении ЕАВ-маркированного генотипа: по черко-пестрой породе - (быки плекзавода колхоза "Ленинский луч") Мастер 001. (п-213) и Нор 1717325 (п-74), (быки ГГО "Б. Алексеевское") Дракон 259 (п-20) и Лупп 730 (п-17); по красно-пестрой голштинской породе - (быки ГГО им. Ленина) Ридтаэс 1743506 (п-22), Техаль 1726749 (п-44) и Импровер 333471 (п-45); по сычевской - (бык пле(.гзавода "Сычевка") Люте 5750 (п=49); по симментальской - (быки ГПЗ "Еланский") Лимон 5179 (п-10) и Лакмус 5481 (п-12); по ивицкой - (быки ГПЗ "Караваево") Гамблер 160083 (п-23) и Султан 157734 (п-19); по костромской - Луч 8021 (п-61) и Балет 1430(п=57). Различия по удою коров, маркированных альтернативными гаплотипами отца, находились в пределах 1269 (бык Гамблер)-180 кг (бык Иьшровер).

Статистически значимее различия обнаружены по выходу молочного тара у дочерей Ыастера в пользу гаплотипа В2У2Е' 10'. Но удою и выходу.молочного жира у дочерей Гамблера 160083 и по удою у дочерей Люкса 5750. Гены быка Гамблера, сопряженные с маркером ЕАВ-В103У2А' 2Е' 36' Р' О' У , представля0г интерес для улучшения отечественных бурых пород скота.

Оценка родоначальника линии черно-пестрого скота московского типа Мастера 001 по маркированным дочерям ЕАС- и ЕАР- систем также выявила различия (табл. 7). Таблица 7. Оценка быка Мастера 001

Маркированные дочери п Удой за 1 лактацию +- к контролю 7. К контролю +- к сверстницам

Х2 75 6406+-128 +149 2. 4 +1253

ЕУ 72 6089+- 93 -168 2. 3 + 946

V 22 6547+-214 +290 4.6 +1404

Г 83 6193+-105 - 64 1.0 +1050

Наибольшей продуктивностью отличались дочери Мастера 001, маркированные аллелем EAF-V, которые превышаю? удой всех дочерей отца (контроль) на 290 кг, а сверстниц на 1404 кг. Дочери, унаследовавшие маркер EW, на 317 кг уступали полусестрам , унаследовавшим Х2 группу сцепления. Таким образом, удои коров-дочерей Мастера 001, унаследовавших альтернативные аллели, отличались на 4. 7 - 5.6 % от среднего удоя его дочерей.

Анализ расцепления генотипа Мзстера 001 и его'комбинационной способности показал, что удой его дочерей от разных типов спаривания по маркерам варьировал от 5670 до 7018 кг, а у отдельных - до 9500 кг. Обиая схема анализа связи селегацюнного показателя с генетическим! маркерами производителя представлена на рис. 6.

Игл - 1!астер 001 - C3Y2E' 1Q' /01Y2.V 1-EW/X2

V-

Сыновья G2Y2E' 1Q' , 04Y2A' 1, EW, Х2, H-Y+

ЕАС-система Х2 > EW V неравновесное сцепление

Оценка маркированных сыновей по дочерям

1 V 1 1 V |

62Y2E' 1Q' - > 04Y2A' 1-

сыновья сыновья

Оценка связи маркера с удоен дочерей

G2Y2E' 1Q' 04Y2A' 1 различия по маркерам ЕАВ-системь незначимые (Р > 0. 05)

Х2

Для продуктивного стада и разведения

_1_

Оценка сыновей по маркированным дочерям

-1-

V

_:_

Оценка продуктивности по маркеру G2Y2E' 1Q' >

Оценка продуктивности по мэркеру 04Y2A' 1

Рис. 6. Схема выявления связи между удоем и ЕА-маркерами в потомстве быка-производителя Мастера 001

Из табл. 8 видно, что расцепление генотипов сыновей 4 родоначальников линий по маркерш.! ЕАВ-сиетемы сопряжено с достоверными различиями по удою. Внучки Экми 93. происходящие от отца, унаследовавшего маркер Р1Е'3, уступают по удою своим двоюродным сестрам по отцу на 186 кг. Следовательно,' маркирование повышает точность оценки быков и прогнозирования удоя в родственной группе. При обычном закреплении быка Мастера за коровами без учета генетических маркеров из 18 типов сочетаний только 7 были удовлетворительными , а в 11 - нуждались в пересмотре и закреплении коров за другими быками.

Таблица 8. Оценка сыновей родоначальников новых линий московского типа черно-пестрого скота

Кличка, N родоначальника, генотип Маркеры сыновей Колич-во Удой, кг X кира

сыно -вей внучек внучки,1 лактация разница по маркир. гр.

Экми 93 04У2А' 1/Р1Е' 3 04У2А' 1 Р1Е'3 .15 15 407 337 4081 3895 186 ** 3.71 3.6»

Ыайор 163 (32У2Е'10'/ В162КЕ' 1Р'0* 62У2Е'1С' В102КЕ' 1Р'0' 14 8 389 160 4086 3856 130 а. ой а 71:

Барс 326089 04У2А'1/ 62У2Е'Ю' 04У2А'1 6"У2Е' Ю' 7 17 138 469 4202 4090 112 ** и т а. '.'и

Астронавт 17 04Е' 36*'/0' 04Е'ЭЗ" 0' 33 30 1111 863 4434 4353 81 ** 71 3. 73

3.10. ЬЪшггоринг в разведении и совершенствовании крупного рогатого скота Обобщение многолетнего опыта ЕИЖ, БНИКплем, ВНН-ИРГЕ, а также зарубежных исследований по использованию генетических маркеров в животноводстве, позволило разработать концепцию и три основных принципа мониторинга при разведении и совершенствовании крупного рогатого скота Основными принципами мониторинга являютя: нейтральность маркеров, их сопряженность с селекционными показателям и обратная связь . Селекционная практика выдвигала и выдвигает задачи, решение которых в рамках классической зоотехнии затруднено, а иногда и не возможно. Имеет месте разное толкование селекционных категорий (порода, тип, отродье. линия, кросс и др.). Маркирование предоставляет возможность их однозначной идентификации.

Шниторинг частот основных ЕАВ-аллелей в хозяйствах "Дубро-вицы", "Шдпово" и "Непецино" показал статистически достоверное снигание частот одних ЕАВ аллелей на 1.3 - 5.13 % (В102А' 2Е' 3J' 2К' О', B103Y2A'2E'33'P'Q'G", 04E'3S") и повышение па 1.03 - 6,17 % других (ВШ.бЙУгЕ'Ю', 02A'2J'K'0'; 04D'Е'3F'G'О', 01Y2/V20', Q'). Частоты 9 из 12 статистически достоверно изменились. Исходя из снижения общего числа аллелей в стаде с 64 до 48 шяно заключить, что теш занесения равен одной аллели в год. Удой коров за указанный период вырос на 2750 кг. С 1980 по 1S92 гг. частоты основных аллелей ЕАВ-системы в стаде племфэрмы "Не-педино" такие существенно изменились. Удой сравниваемых групп коров вырос от 4215 до 6330 кг. Следовательно, повышение продуктивности сопрязкено с изменением частотных и качественных характеристик аллелофонда стада.- Так, аллель ЕАВ-с не те мы г, имэвяий исходную частоту 13.2% (1980 г,), у животных, аттестованных в 1992 г. , отсутствовал. В то z» время, частота желательного адле-ля, маркирующего высокомолочные генотипы - 62Y2E'1Q' - выросла от 3.5% до 27.7% (Р< 0.001).

Для выяснения возможных последствий сокращения числа аллелей в стадах анализировали широту наследственной изменчивость* и молочной продуктивности первотелок. В исследованиях учитывали показатели 318 дочерей 30 быков черно-пестрой породы голландской селекции в 4 племенных стадах (племзавод к-за "Ленинский луч", ГПЗ "Большое Алексеевское", ГШ "Холмогорка", племфэрма "Непецино") с уровнем удоя не пике 4000 кг.

Анализ показал, что во всех исследованных стадах, у ¡соров наиболее часто встречаются аллели ЕАВ-системы 12, b, G2Y2E'1Q', B103Y2A'2E'3G'P'Q'G". Их сочетания маркировали генотипы большинства животных. Установлено, что у 70 % коров наследственная изменчивость ограничена 10 ЕАВ-аллелями и только у 30 % кивотных были выявлены редкие аллели: U02QA'1K'Q', B1Y2G'G", Р1Г, OIA' 10'. Последующий анализ показал, что -тавотные - носители маркеров ЕАВ-системы эритроцитов с низкой частотой встречаемости постепенно были вытеснены из стад.

Средний удой первотелок последней группы на 11.3 % был нияе (460 кг, Р<0.001), чем первой (табл. 9).

Таблица 9. Полочная продуктивность коров-первотелок

Частоты генотипов, % п Удой, кг Жир, %

оо 265 115 4514+-42 4054+-51 *** 3. 84+-0. 03 3. 84+-0. 03

До использования голштинских быков в аллелофонде черно-пестрого скота преобладали ЕАВ-аллели: 12, B162K04Y2A'20', 04Y2D' Е' 1F' 20', Г, Y2D'6'I'Q*. В стадах Московской области гены европейского происхождения замещаются на голштинские, северо- амершсанской селекции. Вследствие этого, суживается генофонд стад. Удой коров при этом повышался на 50 - 160 кг в год.

В потомстве F1 и F2 от скрещивания голштинских быков с коровами черно-пестрой породы существенно увеличились частоты ЕАВ-алледей, наиболее типичных для голштинского скота, -G2Y2E' 1Q', 01A'102A'2J'2K'0', 04Y2A'l и ЕАС-системы - Е, R2, Х2. При этом снизились частоты аллелей B1G2K04Y2A'20', B103Y2A'2E'3G'P'Q'G", 12, 04Y2D' Е' 1F' 20' , CIE, C2R2V.0'.

Мониторинг движения наследственной информации в родительском, дочернем и внучатом поколениях родоначальника новой линии быка Ыастера 001 указывает на эффективность использования маркеров при формировании родственных групп и линий.

а 11. Экспериментальный подбор род5тзльсгааг пар по генетическим t,íapfcepai¿ В результате подбора в потомстве быка Мота 1060 был получен бык Дуб 805 (ЕАВ-12/12). В возрасте 12 месяцев он был поставлен на пункт искусственного осеменения в колхозе -"Горшка". За ним закрепили 58 коров к-за "Горшиха" и 60 коров О. X. "Ыихайловское". Данные о продуктивности дочерей быка Дуба 805 -ЕАВ-12/12 приведены в табл. 10.

Таблица 10. Результаты оценки быка Дуба 805

Гр. животн. п Удой, кг ЬЗолочньй \ жир

Дочери Матери Сверстницы 21 21 88 3226+-137 2824+-153 2968+- 70 4.62+-0. 06 4. 49+-0. 07 4. 46+-0. 03 151+-7.3 * 125+-6.2 132+-4.0

Дочери Дуба превосходят сверстниц и матерей по удою соответственно на 258 (8. 7л) и 402 кг (14.2%), жирномолочности - на 0.1о и 0.16%, выходу молочного жира за 1 лактацию - на 19 и 26 кг. Бык был оценен как улучшатель по удою и жирномолочности. Ему присвоили категорию АЗБ1.

Данные исследований 1977 - 85 гг. тсисазали, что использование быков с маркированными желательными генами позволяет повысить продуктивность их потомства на 8 - 10 X.

Доказательством эффективности маркерной селекции такие является оценка ремонтных быков в хозяйствах Московской области (табл. 11). Сравнение оценок 28 сыновей Мастера, маркированных ЕАВ-62У2Е' 10', и 21 сына того ке быка, маркированного ЕАВ-04У2А' 1, выявило достоверные различия по удою их дочерей.

Таблица 11. Результаты отбора и подбора быков с учетом маркеров ЕАВ-системы эритроцитов

ЕАВ-маркер Число ремонт. быков Удой, кг % кира

число дочерей 1 лактация разница по удою

G2Y2E' 1Q* 28 727 4424 249 *** 3. 69

(желательный)

04Y2A' 1 21 781 4175 - 3. 72

(допустимый)

Анализ показал, что дочери быков, маркированных ЕАВ-62У2Е'Ю', превосходят по удою дочерей быков, маркированных ЕАВ-04У2А' 1, на 249 кг (Р< 0.001).

3.12. изркер-позкиамшй и иаркер-кегативпкй отбор прозгаго-дзггелей.

Полученные даннь/е (табл.12) свидетельствуют о статистичес-

Таблица 12. Продуктивность дочерей быков бурой швицкой породы, маркированных и немаркированных аллелей 0301Т1У2Е'ЗР'2.

Гр. Паркер быков Число Удой (кг) Н и р U) Живая Масса (КГ) Возраст отела (дни) Скорость доения (кг/мин)

быков доч.

I 63+ 8 183 4068 3. 82 518 907 2. 00

(ими. ) +-61 +-0. 01 +-2. 0 +-8 +-0. 02

I] 63- 5 351 3915 3. 79 511 975 1.85

(ими. ) +-49 ** +-0. 0* +-1. 7** +-0.02***

III 63- 9 430 3769 3.81 521 992 1.86

(нест.) +-39 +-0. 00 +-1. 4 +-8 +-0. 01

IV БЗ+ 1 15 4250 3. 84 520 880 2.14

(мест.) +-177** +-0. 01 +-6.7 +-23*** +-0. 08***

(си достоверном превосходстве быков, носителей маркера 63+. по качеству потомства Дочери быков указанной группы превосходят по удом сверстниц - дочерей быков, не носителей маркера 63, на 153 кг (3.9%, Р<0. 01), а дочерей быков местной селекции - на 299 кг (8%, Р<0.001).

3.13. Генетические дисганщш и кг значенкэ в разведенки скота. Генетические дистанции между 9 популяциями черно-пестрого скота Московской области приведены на рис. 7, из которого следует, что минимальное генетическое расстояние и наибольшее сходство имеет место мевду быками ЦСИО и быками племпредприятий Московской области (Б-О. 028, 1-0.972), а наибольшее расстояние и минимальное еходство-ыэзду аллелофондом стада "Нэпецино" и голш-тинскими быками ЦСИО (0-0.796, 1-0.451).

Рассматриваемые популяции дивергировали на 2 кластера. Первый малый кластер составляют популяции: быки-ЦСЖ) (код 6), быки племпредприятий Московской области (код 8) и коровы стада пдем-совхоза "Фоминское (код 5), представленные животными импортного голландского происхождения. Указанные популяции, являются в наибольшей мере "голландизированными".

Популяции:

ЦСИО-быки 6

черно-пестрой породы

Быки племпредприятий 8

племсовхоз "Соминское" 5 (коровы)

ГГО "Б. Алексеевское" 1 (коровы)

ГПЗ "Холмогорка" 3

(коровы)

Ремонтные быки 9

племзавод колхоза 2

"Ленинский луч"

племферма "Бепецино" 4 (коровы)

ЦСИО-быки голштинской 7 породы

0.028

0.052 0.038

0.045

0.063

0.096

0194

О. 320

0.0

0.1

0.2

0.3

Рис. 7. Дендрограмма кластеров сравниваемых популяций черно-пестрой породы крупного рогатого скота

Второй большой кластер представлен остальными 6 популяциями. Генетически более отдаленной от голландизировачного скота является популяция голитинекнх быков ЦСИО (0-0. 320). Наибольшее сходство с голштинскими быками имели коровы племфермы колхоза ".Ленинский луч" (0-0. 263).

3.14, Генетические тркери в поз'-'ок::::; эффективности скре-ПФ31П31 ШГОЧЛЫХ коров С бПШШ ¡¿ясных пород.

Принципы генетического мониторинга являются универсальными. Изучено расцепление генотипа кианского быка Гиабо 87 для повышения эффективности скрещивания (табл. 13).

Таблица 13. ).!асса тела клан - холмогорских быков

Унаследован п Масса Отклонение от

ЕАР-маркер тела, кг средней, кг

Р 9 379 +-11.4 -И

V И 399 +-13. 0 + 9

Из дачных табл. 13 видно, что потомки бкка Гиабо 87, унаследовавшие маркер отца ЕАГ-У при межпородном скрещивании, к концу откорма весили на 20 кг (5,1%) больше по сравнению со средним весом потомков, унаследовавших ЕАР-Р маркер. Учет сочетаемости ЕДР-У и ЕД.Ч-т маркеров отца с материнским! показал, что потомки - двойные гетерозиготы -Р/У-М/т (п=6), - имели достоверно боль-ауо ягеую массу на 42,3 - 58.3 кг (10.8 - 17 %).

Анализировали генетические особенности монгольско; . скота ;п»225, х-во "Туяа Эрдэнэ"), домашних яков (п-100) и гибридных ютомков (п-85), в том числе - 49 голов от прямого скрещивания Зпгав монгольской породы с сачками яка (саран-хайнак) и 36 потомков от обратного скрещивания як х коровы монгольского скота 'наран-хайнак) в связи с повышением эффективности животноводства ]утем отбора и подбора родительских пар по генетическим маркерам.

3.15. Использование вютмяггельноа техники ~ программируемых микрокалькуляторов "Электроника" ВЗ-21, КЗ-34, МК-46, МК-54, Ж-56, МК-61, МК-85 (РФ), НР-9820А (США), а также ПК IВМ РС облегчает обработку материалов, анализ и внедрение . Разработаны и публикованы тексты 7 генетических программ и примеры их исполь-ования в разведении и селекции скота.

4. Заключение. Результаты собственных исследований автора позволяют сделать вывод о том, что разработаны технология и концепция генетического мониторинга, позволяющие на генном уровне осуществлять анализ селекционных процессов, принимать оптимальные решения при разведении и совершенствовании крупного рогатого скота

Усовершенствованы существующие и разработаны новые методы получения реагентов для ЕА-, ВоЬА- и Н-У-типирования.

Создание в ВИКе информативного банка ЕА-типирующих реагентов способствовало развитию новых направлений исследований по изучению генофонда в бвязи с ускорением темпов повышения продуктивности скота - Т. Е Бахмутова (1980), А. Е Баранов (1986), по филогенезу и породообразовательному процессу - ¡А Д- Дедов, а А. Попов (1991), по гетерозису при межвидовом скрещивании -П. Ф. Сороковой, ЕГ. Букаров, Е. Загдсурэн (1982), по раннему прогнозированию продуктивных признаков - Ф. Фотиадис (1984), по сохранению генофонда локальных пород - Е И. Черкащенко (1984) по повышении эффекта селекции по удою - ЕК. Чернушенко (1992), по оптимизации воспроизводства стада - С. Е Уханов (1982) и др.

Установлено, что связи между маркерами и количественными признаками возникают в процессе разведения и селекции (рис. 8).

Исходный неотселекционированный генофонд популяции, отличающийся генетической изменчивостью и специфичностью

СЕЛЕКЦИЯ

1......-.-,.... . . . ■ ....... 1

Снижение

генетической

изменчивости

Изменение уровня

селекционных

параметров

Возникновение связей селекционных признаков с генетическими маркерами

Рис. 8. Изменение генофонда крупного рогатого скота в связи с селекцией по экономически ценным признакам

Сочетание принципов маркерного и зоотехнического анализа (зоомаркерный анализ) вывело селекцию на качественно новый уровень. Зоомаркерный анализ позволяет учитывать особенности кон«-ретных стад при достижении селекционных целей. 1/акромониторинг стад Подмосковья выявил гетерогенность их генофонда в связи с селекцией . Зоомаркерный. анализ в каждом случае дополнительно повышает продуктивность потомства на 6 - 10% по удою и ускоряет темп увеличения удоя в 1.3 - 1.5 раза. В наших исследованиях показана роль мониторинга на всех этапах селекционной работы (индивидуальный и групповой отбор, подбор, оценка генетической структуры стада, ситуации в стадах, прогнозирование генетического потенциала животных, эффективности селекции). Это позволило предложить схему совершенствования скота с использованием концепции генетического маркирования и зоо-маркерного анализа .

Генетический мониторинг и зоомаркерный анализ следует рассматривать как составные части современной технологии разведения крупного рогатого скота.

5. В Ь! 3 о д и

1. Во Всероссийском НИИ животноводства разработана прогрессивная промышленная технология изготовления наборов моноспецифи-.ческих стандартных реагентов и создан банк из 84 реагентов для тнпирования крупного рогатого скота по 11 системам эритроцитар-ных антигенов. Предлагаемая технология, использует откормочных быков для продукции гемолитических сывороток, иммуностимулятор (ас. U 1704767, СССР, 1992 г.), боенскуа кровь для иммуноадсор-бции, фракционнуа изоляцию антител и последующее их элюирование (а. с. N 1405755, СССР, 1988 г.).

2. Создание информативного баню реагентов повысило эффективность генетического моииторирования при разведении скота, расширило возможности его генотипирования, повысило разрешающую способность генетических маркеров при экспертизе происхождения. Это также позволило установить внутри ЕАВ- и ЕАС-комплексов две закрытые системы - сублокусы EAB-D" и ЕАС-С". Для контроля происхождения быков, отбираемых на племпредприятия, для оценки по качеству потомства усовершенствован и внедрен метод экспертизы, дополнительно учитывающий маркеры отца матери (ОМ) пробанда.

сз

° - 29 -

3. На основе изучения серологии и генетики лимфоцитарных антигенов класса 1 главного комплекса гистосовместимости крупного рогатого осота (BoLA). разработана техника массовой генетической аттестации. Широкий наследственный полиморфизм антигенов, представляюгцих 17 специфичностей - Wl, W2, W3, W4, W5, V6. 2/W18, W, WB. V9, VIO, Vil, V12, V13, W16. V20 и W31, позволяет использовать их при контроле воспроизводства киеотных, при оценке генетического сходства популяций и молекулярно-таксономических взаимосвязей между породами в их шкроэволюционном и филогенетическом развитии. Оценки генетических дистанций между популяциями, а также результаты генетического контроля воспроизводства крупного рогатого скота на основе BoLA-антигенов, являются не смещенными.

4. Разработан иммунофлуоресцентный метод определения H-Y-антигена (антигена самцов) на живых пересаживаемых эмбрионах крупного рогатого скота (п-70) и лабораторных мышей. Установлена кросс-реактивность H-Y-типируюшях реагентов, полученных внутри-селезеночной иммунизацией инбредных мышей линии С57В1/6 (патент РФ К 2001627, 1993 г.). Аттестованные эмбрионы крупного рогатого скота распределились в соотношении 1:1 (31 H-Y+ и 39 H-Y-). После 24-х часовой инкубации в ФБС 37 из 40 (92.5X) H-Y-типирован-ных эмбрионов продолжили развитие. Приживаемость. пересаженных эмбрионов скота после H-Y-типирования составила 40%. Лабораторные испытания на модельных эмбрионах мьшзей (п=101) показали 78.2Х точность метода определения пола по H-Y-антигену.

5. На основе вторичного иммунного ответа на ксеногеиный раздражитель (антигены эритроцитов лошади) телята были дифференцированы на высоко-, средне- и низко-реагирующее типа Титр и (l<y¿2) гемолизинов у трех типов животных соответственно были равны - 10.4, 8.5 и б. 5.

6. С увеличением возраста телок черно-пестрой породы от ■ рождения до 12 месяцев различия в кивай массе, связанные с уровнем гетероишунного ответа, возрастали и достигали статистически значимых величин. Телки с низким уровнем иммунного ответа (log2 - 6.5) весили на 15.3 кг (Р<0.05) меньше, чем со средним уровнем (log2 - 8.5). Различия по уровню удоя ва первую лактацию (3702 и 3766 кг) у животных, дифференцированных в раннем возрасте по уровны иммунного ответа, были ке значимыми.

Разработка метода учета интенсивности аллоиммунного ответа у телят на эритроцитарные антигены позволила установить, что иммунная система телят до 1.5-месячного возраста,является незрелой, в возрасте 2-4 месяцев она слабореактивна, в б-месячном возрасте-становится зрелой.

7. Генетическое маркирование и контроль происхождения 45.5 тыс. голов крупного рогатого скота черно-пестрых, палево-пестрых и бурых пород Московской, Тульской, Смоленской, Ярославской, Костромской, Тамбовской и других областей РФ позволило выранжи-ровать животных с неизвестным происхождением, предотвратить стихийный инбридинг, исключить получение смещенных оценок племенной ценности быков-производителей.

8. Маркирование аллелофонда скота позволило определить межпородные различия, идентифицировать генетические группы, внутри-породные типы, отродья, стада, родственные группы, линии и отдельных животных. Эти результаты представляют интерес в связи с охраной прав авторов селекционных достижений и владельцев исота.

9. Определение генетических дистанций между 9 популяциями черно-пестрого скота псковского региона выявило минимальное генетическое расстояние и наибольшее сходство между быками ЦСИО и быками племпредприятий Московской области (Б-О. 028). Наибольшее генетическое расстояние было установлено между стадом коров племфермы "Непецино" и популяцией голштинских быков ЦСИО (Б-0.796).

В бурой швицкой породе минимальное генетическое расстояние Ошю установлено между быками-производителями и коровами селекционных групп Смоленской области (Б-0.074), а максимальное -между импортированными из США быками и племенными коровами Смоленской и Тульской областей ( 0-0. 526, 0-0.520).

10. Иммуногенетические исследования крупного рогатого скота различных корней позволили разработать и внедрить концепцию генетического мониторинга и зоомаркерного анализа в скотоводстве. В стадах черно-пестрого, палево-пестрого и бурого скота установлено замещение маркерных генов низкопродуктивных животных на высокопродуктивные гены, привносимые быками голитинской и бурой швицкой породы североамериканской селекции.

11. Генетический мониторинг и зоомаркерный анализ показали, что у черно-пестрого скота нового московского типа гены, определяющие удой, распределены неравномерно по отношению к ЕАВ-локусу (81 - 249 кг молока), а гены жирномолочности - равномерно (0.02 - 0.03%). Генетическое маркирование черно-пестрого скота эффективно в связи с селекцией по удою.

6. Предложения производству. С целью широкого внедрения в скотоводство методов генетического мониторинга и зоомаркерного анализа необходимо :

1. Ввести в инструкцию по оценке быков производителей и планы селекционно племенной работы раздел "Генетический мониторинг быков по качеству потомства" для прогнозирования продуктивности потомства, правильного отбора и подбора животных, повышения аффекта селекции в 1. 2 - 1.3 раза, удоя дочерей на 6 - 10% в стадах с уровнем 4000 - 6000 кг молока

2. В Московском регионе при получении высокопродуктивных животных черно-пестрого скота с удоем 6000 - 10000 кг молока рекомендуем использовать генотипы, маркированные ЕAB-аллелями -G2Y2E' IQ', 04Y2A' 1, ОгА'гПК'О', Q', B201Y2D', 04E'3G", 01, 12, G201Y2, 04Y2D'E'1F'0', 04D'E'1F'G*0', Gill, Bill.

3. Предприятиям биопромышленности Минсельхозпрода России, фирмам биотехнологического профиля предлагаем для внедрения :

а) технологию создания банка стандартных реагентов для выявления 84 эритроцитарных антигенов 11 генетических систем (ас. N 1405755, СССР, 1988 г.);

б) технологию создания банка реагентов для идентификации 17 лимфоцитарных антигенов класса I главного комплекса гкстосовмес-тимости крупного рогатого скота (BoLA);

в) технологию производства реагентов для идентификации пола у пересаживаемых эмбрионов млекопитающих (патент РФ N 2001627, 1993 г.);

г) технологию получения иммуностимулятора "Нитра-1" для увеличения выхода деловой гипериммунной сыворотки (ас. N 1704787, СССР, 1992 Г.);

д) микрометод постановки серологических тестов, снижающий расход реагентов в 20 раз.

Результаты исследований по теме опубликованы в 24 работах:

1. Букаров Е Г. Антигены гистосовмеетимости сельскохозяйственных животных // 1У с'езд.ВОГИС им. Е И. Вавилова, Тезисы докладов. II - 1982. -С . 202-203.

2. Букаров Е Г. Биологические маркеры в разведении крупного рогатого скота // Сельское хозяйство за рубежом.. - 1984. , -М 10 -С. 43-46.

3. Букаров Е Г. Оценка племенной ценности молочного скота с использованием программируемых микрокалькуляторов // Биометрическая генетика и системный анализ в животноводстве. Скальски двор. ЧСФР. - 1988,- С. 27-35.

4. Букаров Н. Г. Разработка принципов зоомаркерного анализа при соверЕенствовании крупного рогатого скота // Тезисы Международной конференции "Молекулярно-генетические маркеры животных". Киев.- 1994.-С. 54.

5. Букаров Е Г. Результаты деятельности совместной чехосло-вацко-советской лаборатории по биотехнологии в животноводстве. Агрокомплекс-Нитра 1988. -С. 36-42.

6. Букаров ЕГ. Способ получения Н-У антисыворотки для определения пола при пересадке эмбрионов. Патент РФ N2001627 от 30.10.1993 г.

7. Букаров Е Г. Эффективность и перспективы использования микрометодов в иммуногенетических исследованиях 1фупного рогатого скота // Иммуногенетика и селекция сельскохозяйственных животных. 11 - 1986. - С. 75-78.

8. Букаров Е Г. , Лось Е Ф. Анализ групп крови и продуктивности дочерей быков разных генотипов // Мездунар. симпозиум. Шлекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов сельскохозяйственных животных. Санкт-Петербург - Пушкин. -1994. -С. 102-103.

9. Букаров Е Г. , Сороковой Е Ф. Антигены совместимости тканей крупного рогатого скота - новый класс иммуногенетических маркеров //Сб. науч. трудов / ВНИИРГЖ. -С. 1985. -С. 110-118.

10. Букаров Е Г., Сороковой П. Ф. Эффективность генетического маркирования крупного рогатого скота по типам крови // Животноводство. - 1987.- N7.-0. 19-21.

11. Букаров Е Г., Краварик Д. , Ковач Е , Вулла Я. , Графенау Е , Овчинников А. К , Сороковой Е Ф. Способ получения иммуноглобулинов. Авт. свид. N1704787 (СССР). Опубликовано в Б.И. N2, 1992.

12. Методические рекомендации по выведению линий черно-пестрого скота нового типа / ВИЖ. сост.: Карликов Д. В. , Петляков А. Т. , Стрекозов Е И. и др. , Дубровицы. - 1987. 45с.

13. Смирнов 0. К. , Сороковой IL Ф. , Букаров Е Г. , Вудникова А. К , Храпковский А. И. , Пасечник A. Е Мясная продуктивность помесного крупного рогатого скота под влиянием сочетаемости родительских пар по генетической и биохимической индивидуальности // С/х биология. - 1981.- N5.-С. 661-666. •

14. Сороковой П.Ф., Букаров ЕГ. Анализ молочной продуктивности коров черно-пестрой породы по иммуногенетическим маркерам // Бюллетень научных работ / БИЖ. - 1983. Выпуск 69.-С. 31- 36.

15. Сороковой П. Ф. , Еукаров Е Г. Генетические особенности черно-пестрого и голигганского скота // Иммуногенетика и селекция сельскохозяйственных животных. М. - 1986.-С. 7-14.

16. Сороковой П. Ф., Букаров Е Г. Иммуногенетический контроль происхождения глеменного крупного рогатого скота // Информ. лист.- М. 331 -85. ЦНТЙ. М. - 1985. -С. 1-3.

17. Сороковой Е Ф., Букаров Е Г. Итоги и перспективные направления иммуногенетических исследований в племенном скотоводстве // Бюллетень научных работ / БИЖ. - 1986. Вып. 47. -С. 64-70.

18. Сороковой Е Ф. , Букаров Е Г: Оценка сочетаемости наследственных факторов по генетическим маркерам. // Животноводство. - 1987.- N1.- С. 23-24.

19. Сороковой Е Ф., Букаров Е Г. Способ получения реагентов для определения наследственных антигенов групп крови животных. Авт. свид. N1405755 (СССР). Опубл. в Б. И. N24. 1988.

20. Сороковой Е Ф. , Букаров Е Г., Чернушенко В. К. , Машуров A. îi , Семенов Б. А Использование генетических маркеров для выбора оптимальных параметров наследственной изменчивости при селекции молочного скота // XXXIII ежегодная конф. Европейской Ассоциации по жив-ву. - 1982.-С. 1-10.

21. Bukarov N. Viuzitie imunogenetiky pre raspracovani novych metod slaohtenija hovedzieho dobytka // Biotechnol. v Polnohospod. CSVTS. B. Bystryca CSSR. 1987. s. 138-145.

22. Bukarov N. S.( Bulla J. Immunofluorescent identification of rrale-specif ic antigen on pre implantation mouse embryos // 4-th Franko-czechoslovak meeting: "Trought the oocyte to the embryo". Praque. 1990. p. 69.

23. Bukarov N. G., Bulla J., Windish V. et al., Immunogenetic method of sexing pre implantation embryos against the H-Y antigen // Monsanto seminar. CSFR. Nitra 1990. p. 34-41.

24. Bukarov N. G. , Semanova M. L., Bukarova V. I. Imunogeneticka metoda urcovania pohlavia transplantovanyct embryi pri pouziti polyklonalnych a monoklonalnych H-1 proti latok // Veterinarstvi. 1989. N11. s. 510-511.