Использование культуры тканей in vitro в селекции гороха

Соболева, Галина Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Использование культуры тканей in vitro в селекции гороха
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Использование культуры тканей in vitro в селекции гороха"

На правах рукописи

Соболева Галина Викторовна

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ КУЛЬТУРЫ ТКАНЕЙ IN VITRO В СЕЛЕКЦИИ ГОРОХА

Специальность 03.00.23 - Биотехнология

Автореферат Диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук

Орел - 2005

Диссертационная работа выполнена в лаборатории биотехнологии ГНЦ РФ ГНУ - Всероссийский научно-исследовательский институт зернобобовых и крупяных культур

Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор А.Н. Зеленов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук С.Н. Агаркова доктор биологических наук Т.И. Пузина

Ведущая организация: Главный ботанический сад имени Н.В. Цицина

РАН

Защита состоится « на заседании диссер-

тационного совета КМ 220.052.01 при Орловском государственном аграрном университете по адресу: 302019 г. Орел, ул. Генерала Родина, 69 тел/факс (08622) 9-40-64

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Орловского государственного аграрного университета по адресу: г.Орел, бульвар Победы, 19

Автореферат разослан « » 2005 г

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат сельскохозяйственных наук, доцент

Т.Ф.Макеева

¿iObi

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Горох является ведущей зернобобовой культурой, широко возделываемой в различных регионах России Традиционный селекционный процесс позволил достичь значительных успехов в повышении урожайности и качесша зерна юроха.

Интенсификация современного сельскохозяйственного производства ставит перед селекционерами задачи создания высокоурожайных сортов гороха нового поколения, отличающихся высокой пластичностью, устойчивостью к болезням и вредителям, стрессовым факторам внешней среды. Для этого необходим поиск и привлечение современных достижений науки, ускоряющих и повышающих результативность селекционного процесса. Одним из наиболее динамично развивающихся направлений, ориентированных на создание нового исходного материала для селекции, является использование биотехнологических методов.

Культура клеток и тканей in vitro в настоящее время находит применение в широком диапазоне биологических исследований. Методы регенерации in vitro в селекции гороха используются явно недостаточно. В связи с этим изучение возможности использования культуры тканей in vitro в селекции гороха является актуальным.

Цель работы состояла в разработке методов культивирования тканей гороха т vitro, получении растений-регенерантов с последующей их морфологической оценкой.

В задачи исследований входило:

- определение оптимальных составов питательных сред для индукции каллусогенеза морфогенеза и ризогенеза в культуре соматических тканей гороха;

- разработка эффективной системы активного пролиферационно1 о и ре-генерационного процессов в длительно культивируемых каллусных тканях;

- разработка условий получения растений-регенерантов в культуре длительно пассируемых каллусов гороха;

- сравнительный морфологический анализ растений-регенерантов, полученных в культуре длительно пассируемых каллусов гороха;

- разработка метода отбора устойчивых к действию осмотического стресса каллусных линий гороха;

- морфофизиологический анализ растений-регенерантов, полученных на селективных средах с осмотически активными веществами;

- апробация методики клонального микроразмножения на сортах гороха селекции ВНИИЗБК;

Научная новизна Впервые разработан метоп длительного субкультивирования каллусов гороха с последующим получением корнесобственных растений-регенерантов Выявлена сомаклональная изменчивость растений-регенерантов по массе 1000 семян, форме листа и длине стебля Разработан метод отбора in vitro устойчивых к осмотическому стрессу каллусов гороха Получены осмоустойчивые регенерантные линии гороха.

Практическая значимость работы. Определены направления использования культуры тканей in vitro в селекционных программах В целях сохранения и ускоренного размножения ценного селекционного материала рекомендуется метод микроразмножения. Для расширения спектра исходного материала в селекции гороха рекомендуется использовать систему длительно пассируемых каллусных тканей. Разработана схема селекции in vitro гороха на осмоустойчивость. Выделены ценные для селекции генотипы гороха

Апробация работы Основные положения и результаты диссертационной работы были представлены на научных конференциях: «Биологические основы интенсивного растениеводства» (Орел, 1993), «Регупяторы роста и развития растений» (Москва, 1995), «Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (Москва. 1996. 2000, 2004), IV съезде общества физиологов России «Физиология растений - наука III тысячелетия» (Москва, 1999). I и II Московских международных конгрессах «Биотехнология - состояние и перспективы развития» (Москва. 2002. 2003). VIII международной конференции «Биология культуры клеток т vitro и биотехнология» (Саратов, 2003), «Физиологические аспекты продуктивности растений» (Орел, 2004)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, из них 5 на английском языке.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит из общей характеристики, шести глав, выводов, предложений и рекомендаций для селекции, списка литературы, приложений. Диссертация изложена на 164 страницах машинописного текста, включает 33 таблицы в тексте и 8 в приложении, 22 рисунка. Список цитируемой литературы содержит 303 наименования, из них 104 на иностранном языке

1. Обзор литературы

Приведены данные о современном состоянии исследований по разработке методов культуры клеток и тканей in vitro и возможностях их использования в селекционно-генетических программах.

Литературный анализ свидетельствует о том. что регенерация растений гороха in vitro до настоящего времени остается достаточно затрудненной. До сих пор не существует единых, эффективных, легко воспроизводимых методик регенерации.

2. Условия, материал и методика проведения исследований

Исследования проводились в течение 1993-2004 гг. в лаборатории био-1схнологии Всероссийского научно-исследовательского института зернобобовых и крупяных кулыур (г. Орел).

Материалом для исследований служили, сорта гороха посевного {Pisum sativum L.) - Зарянка, Орлус, Батрак, Орловчанин, Филби; новые линии оригинального морфотипа гороха «хамелеон» селекции ВНИИЗБК, отличающиеся ярусной гетероморфностью листьев - Аз 26, Аз 92-2210, Аз 93-1964; образец троха красивого (Pisum formosum (Stev.) Alef.).

За основу при работе с культурой тканей гороха была принята методика, предложенная Р.Г. Бутенко (1964). В качестве первичных эксплантов использовали верхушки или семядольные узлы 3-5 дневных асептических проростков гороха. Семена стерилизовали поэтапно, хромовой смесью (55% раствор бихромата калия в концентрированной серной кислоте) - 1 мин; промывка стерильной дистиллированной водой; 96% этанолом — 10 мин; промывка стерильной дистиллированной водой; 0,6% водным раствором хлор-гексидиндиглюконата натрия - 5 мин, пятикратная промывка стерильной дистиллированной водой Стерильные семена проращивали в термостате, при температуре 26°С, на двух слоях влажной стерильной фильтровальной бумаги в чашках Петри по 5-10 семян. Для инициации каллусогенеза первичные экс-планты измельчали скальпелем и помещали на поверхность агаризованных питательных сред.

В качестве питательных сред использовали среды с минеральной основой MS (Murashige Т., Skoog F., 1962) или В5 (Gamborg О L. et al., 1968). В качестве регуляторов роста использовали: 6-бензиламинопурин (БАП), индо-лил-3-уксусную кислоту (ИУК), а-нафтилуксусную кислоту (НУК), индолил-3-масляную кислоту (ИМК). Концентрации и соотношение регуляторов роста в питательных средах приведены в процессе обсуждения результатов. Все культуры выращивали при температуре 25°С. 16-часовом фотопериоде и освещенности 2000 лк.

Осмотический стресс моделировался введением в питательные среды полиэтиленгликоля (ПЭГ) с молекулярной массой 6000 в различных концен-I рациях Продолжительность пассажа составляла 45 .50 суток.

В 1999-2001, 2004 годах регенерантные линии гороха изучались в полевых условиях на опытном поле лаборатории селекции зернобобовых культур ВНИИЗБК. Растения высевались вручную Длина рядка 1 м, расстояние между рядками 15 см, между семенами в рядке 5 см. Регенерантные линии К2-К-з высевались в селекционном питомнике первого года без повторностеи Площадь делянки 1.1м2 Регенерантные линии И^Яч высевались в селекционном питомнике второго года в четырех повторностях, рендомизированно Площадь делянки 2 м2. Посев проводился сеялкой ССФК-7М Восемь регене-рантных линий изучались в контрольном питомнике. Посев проводился

сеялкой СКС - 6-10. Площадь делянки 7,5 м2, в чс1ырех повторностях, размещение рендомизированное. Структурный анали! растений проводился по методике ВИР (1975). В ручном посеве анализировали все растения, сохранившиеся к уборке, а в селекционных питомниках анализировали по 30 растений с каждой повторности. В качестве контроля использовали оригинальные сорта и линии.

В 2004 году в условиях вегетационного опыта лаборатории физиологии растений и аналитических работ проводилась оценка на засухоустойчивость регенерантных линий, полученных в селективных системах с ПЭГ Растения выращивались в сосудах с почвой при двух уровнях увлажнения: 70% и 35% от ПВ. Показатели засухоустойчивости определяли согласно «Практикуму по физиологии растений» под редакцией Н Н. Третьякова (1990).

Основные количественные показатели подвергали вариационно-статистической обработке (Доспехов Б.А., 1985, Рокицкий П.Ф., 1974) с использованием ПК.

3. Индукция процессов каллусогенеза и морфогенеза в каллусных тканях

гороха

3.1.Индукция процессов дедифференциации и каллусогенеза

В связи с многообразием данных о сочетаниях и концентрациях регуляторов роста в питательных средах был проведен сравнительный анализ наиболее часто используемых питательных сред для индукции каллусогенеза у гороха. Изучено шесть вариантов питательных сред Базовая среда включала минеральные соли и витамины среды В5, гидролизат казеина 1 г/л, сахарозу 30 г/л, агар 6 г/л.

Установили, что на всех изученных средах был индуцирован каллусо-генез, независимо от происхождения первичного экспланта и присутствия регуляторов роста (табл.1). Интенсивность каллусогенеза оценивали по относительному приросту каллуса, определяемому как отношение прироста каллуса после одного пассажа к массе исходного экспланта. Интенсивность процес-

сов каллусообразования из верхушек стеблей оказалась на порядок выше, чем из семядольных узлов. Каллусы, сформированные из верхушек побегов, увеличивали первоначальную массу в 20-30 раз. в то время как масса каллусов, происходящих из семядольных узлов, увеличивалась лишь в 4-5 раз

Таблица 1

Относительный прирост каллусов (Д W/W0) у гороха в зависимости от

типа первичных эксплантов и состава питательных сред

Генотип, СредаГ""-<}ксплант мг/л Орловчанин Зарянка

семядольный узел верхушка побега семядольный узел верхушка побега

БАП-0,1 КГ 1 НУК-0,2 2,5 22,0 3,5 23,5

БАП-1,0 КГ2 НУК-2.0 4,1 20,5 4,8 22,9

БАП-0,66 КГ3 НУК-5.0 5,4 22,4 4,9 30.9

БАП-0,1 4 ИМК 1.0 4,9 21,1 4,5 26,9

КГ5 ИМК 1,0 4,7 20,1 4,6 29,1

КГ6 ИМК-1,5 4,9 20,8 4,8 29,0

W0 - начальный вес каллуса, мг ДW - прирост каллуса, мг

У сорта Зарянка процесс каллусообразования про1екал более интенсивно, чем у сорта Орловчанин.

В присутствии ИМК наряду с каллусообразованием у изученных сортов нередко наблюдали формирование корней. В результате рост каллусной ткани замедлялся, шло развитие корневой системы. На средах, содержащих НУК в качестве регуляторов роста, подобных образований не наблюдалось Таким образом, оптимальной средой для индукции каллусогенеза у изученных сортов гороха является питательная среда КГ3 (0,66 мг/л БАП + 5,0 мг/л НУК).

3.2,Индукция процессов морфогенеза в каллусной ткани гороха

Для индукции морфогенеза в каллусных тканях гороха изучалось несколько вариантов питательных сред. Базовая среда включала минеральные

соли среды МЭ. витамины В5. сахарозу 30 г/л, агар 6 г/л Способность кал-лусных тканей гороха к морфогенезу побегов зависела от концентрации регуляторов роста (табл. 2).

Таблица 2

Способность к морфогенезу каллусных тканей гороха_

Среда Орловчанин Зарянка

всею каллусов эффективность морфогенеза. % число побегов на каллус всего каллусов эффективность морфогенеза. % число побегов на каллус

МЯ, 39 23.1 0,8±0,26 24 33,3 0,9±0.20

МЯ, 28 67,9 2,4±0,39 21 62,4 2,0±0,31

М8, 25 68,0 1,9±0,20 38 73,7 2,4±0,32

Наиболее интенсивно процессы морфогенеза протекали на средах МЯ] (5.0 мг/л БАП + 0,2 мг/л НУК) и МЯ2 (5 мг/л БАП + 0,2 мг/л ИУК), характеризовавшихся высокой концентрацией цитокининов Среда МЯ4 (1,0 мг/л БАП + 0.25 мг/л ИМК) с низким содержанием цитокининов резко уступала другим средам по эффективности морфогенеза и числу побегов на каллус. Однако, как показали дальнейшие наблюдения, данная среда представляет несомненный интерес, так как является наиболее эффективной для доращивания реге-нерантных побегов и служит промежуточным звеном между морфогенными и ризогенными регенерационными средами.

В наших исследованиях подтвердились выводы о существовании корреляции между морфологией каллуса и его морфогенной способностью (Му-рашко Л.Н., Фадеева Т.С., 1973). Плотный, компактный каллус отличался пониженной морфогенной активностью. На морфогенных питательных средах наблюдались единичные случаи образования побегов. Рыхлый глобулярный, светло-зеленый каллус отличался высокой морфогенной активностью.

3.3,Индукция процессов ризогенеза гороха

Эффективность процессов ризогенеза у регенерантных побегов, полученных в каллусной культуре, изучали на нигатепьных средах в присут<лвии ауксинов. Базовые среды включали полный состав минеральных солей и витаминов В5 (среды 6 7 К)), или уменьшенную вдвое концентрацию основных компонентов (среды 2 Ш, 3 Ил, 5 Я1)

Как видно из таблицы 3 на всех изученных средах происходили процессы ризогенеза. При этом эффективность ризогенеза у изученных генотипов

колебалась от 16.4% до 26,8% Следует отметить существование некоторых различий по интенсивности ризогенеза. Для сорта Орловчанин лучшей ризо-генной средой являлась среда 31^ У сорта Зарянка процессы корнеобразова-ния наиболее интенсивно протекали на средах 6Ш и Более того, у реге-нерантных побегов сорта Зарянка в среднем образовывалось большее количество корней.

Таблица 3

Индукция ризогенеза у регенератных побегов гороха_

Среда, мг/л Орловчанин Зарянка

число выса-жен-ных побегов эффективность ризогенеза % число корней на побег число выса-жен-ных побегов эффективность ризогенеза % число корней на побег

2111 НУ К-1,8 28 22.1 3,1 24 19,9 4.5

ЗЮ НУК-1,0 26 24,2 4,2 23 26,3 4.4

5Ш ИМК-1,0 22 23,1 3,1 25 21,6 4.8

6Ш ИМК-1,0 25 16,4 3,6 20 26,8 4,8

ИМК-1,5 21 20,3 2,7 24 18,7 1,5

Важно отметить, что уменьшение в 2 раза концентрации макросолей и витаминов не оказывало решающего влияния на индукцию процессов корне-образования Не было выявлено различий по эффективности ризогенеза между средами, содержащими в качестве индукторов ризогенеза НУК или ИМК.

4. Разработка параметров длительного субкультивирования каллусов гороха с сохранением высокого морфогенетического потенциала

4.1. Длительное субкультивирование каллусных тканей гороха

Для селекции наибольший интерес представляют длительно пассируемые каллусные культуры, среди которых возможен отбор сомаклональных вариантов. Анализировали эффективность первичного каллусообразования и выживаемость каллусов при длительном субкультивировании семи генотипов гороха.

Эффективность первичного каллусообразования у эксплантов разных линий гороха оказалась высокой и составляла от 84 до 94%. Однако, способность к первичному каллусообразованию не всегда совпадала со способностью к длительному субкультивированию (табл. 4). Например, у селекционных линий Аз 26, Аз 92-2210, Аз 93-1964, в 1998 году погибла основная часть каллусных клонов. При этом показатели эффективности первичного каллусо-генеза были самыми высокими и колебались от 91,9% до 94,4%

Таблица 4

Динамика выживаемости каллусных клонов различных сортов и линий

гороха по годам (1997-2004 гг.)

Сорт, линия Эффективность первичного кал-лусогенеза, % Выживаемость каллусных клонов (в % к первичному каллусу)

1998 1999 2000 2001 2002 2003 2004

Орлус 83,8 67,6 40,5 27,0 16,2 13.5 13,5 8,1

Батрак 90,0 47,5 40,0 20,0 0 0 0 0

Filby 84,8 10,9 8,7 0 0 0 0 0

Аз 26 91,9 8.1 8,1 8,1 8,1 5,4 2,7 2,7

Аз 92-2210 94,4 11,8 8,3 5,6 5,6 5.6 2,8 2,8

Аз 93-1964 94,4 16,7 16,7 8,3 8,3 5,6 5.6 5,6

Зарянка 83,9 16,5 14,8 13,9 12,2 0 0 0

В дальнейшем наиболее стабильно процесс субкультивирования каллусных тканей протекал у селекционных линий Аз 26, Аз 92-2210, Аз 93-1964 и сорта Орлус. У сорта Орлус, выживаемость каллусов при длительном пассировании оказалась самой высокой.

Нами показана возможность культивирования in vitro каллусных культур гороха более 8 лет.

4.2.Морфогенез в длительно культивируемых каллусных культурах гороха

Длительное субкультивирование каллусных клонов показало, что для успешной индукции морфогеннных процессов в каллусных тканях гороха наиболее эффективным оказалось сочетание в питательной среде 5.0 мг/л БАП и 0,2 мг/л НУ К (обозначенная нами MS])- В данном случае в каллусных тканях закладывалось неограниченно большое количество побеговых почек, и активно формировались рсгенерантные побеги. Морфо1енная аюивность каллусных клонов приведена в таблице 5.

Однако, при продолжительном культивировании (более 5 пассажей) каллу сньгх тканей на среде способность к недифференцированному росту снижалась до минимума, следовательно, снижались и темпы регенерации.

Таблица 5

Морфогенная активность каллусных тканей гороха. _(число побегов/ экспланг, пассаж)_

Сорт, линия среда М8| среда М5|2

2-3 пассаж 5-6 пассаж 2-3 пассаж 5-6 пассаж

Орлус 2,9±1,0 1,5±0,8 2,7±0,7 0,5±0,3

Батрак 3,0±1,0 1.7±0,4 1.6±1,2 0,4±0.3

Зарянка 3,7*0,5 1,5±0,2 3.1±0.4 0,8±0.6

Аз 26 3,1 ±0,4 1,4±0,2 3,0±0,4 0,5±0,3

Аз 92-2210 2,9±0,4 1,4±0,2 2.6±0,4 0,4±0,3

Аз 93-1964 3,5±1,7 1,1 ±0,6 3.2±1.5 0,9±1,3

Повышение концентрации НУК до 2,0 мг/л при неизменной концентрации БАП - 5.0 мг/л (среда обозначена МБ^) способствовало пролиферации каллусной ткани. Длительное культивирование на среде МЧ 12 приводило к снижению интенсивности процессов морфогенеза и преобладанию процессов недифференцированного роста Оптимальным оказалось чередование циклов культивирования каллусной ткани гороха на средах М8| и Мвп через 3-4 пассажа Предложенная схема не является идеальной, но мы пытались сохранить два диаметрально направленных процесса: морфогенез и недифференцированный рост С использованием этой схемы в длительно пассируемых кал-чусных тканях устанавливалась относительно равновесная система, обеспечивающая активные пролиферашвный и регенерационный процессы.

Сформировавшиеся регенерантные побеги декапитировали от каллусной ткани, доращивали на среде МЯ4 в течение месяца, а затем переносили на среды для ризогенеза.

4 3. Получение корнесобственных регенерантных растений в длительно пассируемой каллусной культуре

Основная культуральная среда для индукции ризогенеза включала минеральные соли и витамины среды В5, с уменьшенной вдвое концентрацией основных компонентов, 30 I /л сахарозы, 6 г/л агара и дополненную НУК в концентрации 1,0-1,5 мг/л.

К настоящему времени нами получены растения-регенеран!ы Яо из длительно культивируемых каллусных клонов всех семи изученных генотипов гороха (табл 6) В длительно пассируемой культуре каллусов максимальное

количество регенерангных линий получено у сорта Орлус Нами впервые получены корнесобственные растения-регенеранты в культуре каллусов гороха культивируемых т vitro более семи лет

Таблица 6

Выживаемость растений-регенеран гов R0, попученных из каллусных клонов _____гороха______

Сорт, линия Время т vitro, сутки Число растений-регенерантов, Ro Выживаемость, %

высаженных в почву адаптированных

Орлус 90-2880 306 107 35,3

Батрак 90-1440 66 22 33,3

Filby 90-360 16 5 31,2

Аз 26 90-1880 67 18 26,9

Аз 92-2210 90-720 24 7 29,2

Аз 93-1964 90-2880 87 25 28,7

Зарянка 90-720 15 6 40,0

У растений R0 наблюдались значительные морфологические изменения по таким признакам, как: длина стебля, размер листьев, число междоузлий, число бобов, число семян с растения, масса семян с растения. Основная часть регенерантов R0 имела укороченный стебель, длина которого составляла 1015 см. Растения быстро зацветали, образуя один-два продуктивных узла, на которых формировалось один-два боба, число семян в бобе колебалось о i од-ног о до двух. Другие регенерантные растения R«, наоборот, имели нормальную морфологию и характеризовались мощным развитием, обильно цвели и завязывали семена.

4 4.Морфобиологические особенности регенерат них растений гороха

В 1999-2001 годах в условиях полевого опыта был проведен сравнительный морфологический анализ 55 регенерантных линий, представляющих собой поколения Ri-R^ Анализируемые признаки включали показа!ели роста, развития и продуктивности Регенерантные линии отличались большей вы-равненностью основных хозяйственно полезных признаков по сравнению с исходными сортами. Это позволяет предполагать высокую степень гомози-готности полученных нами линий.

В течение трех лет изучено 12 линий, полученных из каллусов. к>льти-вируемых in vitro 90-540 суток. В 1999-2000 годах регенерантные линии R,-R, изучались в условиях мелкоделяночного опыта при ручном посеве Большин-

ство линий превысили исходные сорта по многим количественным признакам Такие результаты могу г быть объяснены значительным краевым эффектом мелкоделяночного эксперимента или влиянием последействий высоких доз регуляторов роста. В 2001 году мы смогли изучить эти линии в селекционном питомнике второго года в четырехкратной повторности (табл. 7).

Регенерантные линии сорта Орлус не отличались от исходного сорта ни по одному из изученных признаков.

Таблица 7

Характеристика некоторых регенерантных линий , 2001 г_

Линия, сорт Длина стебля, см Число Масса семян, г Масса 1000 семян, г

продуктивных узлов бобов семян

Орлус 74,4 4,0 7,0 22,3 5,4 239,4

Л 28-1,1*4 75,4 4,1 7,1 24,0 5,7 239,7

Л 28-2, 73,2 4,1 7,2 25,0 5,8 233,5

НСР05 6,7 0,9 1,7 8,0 1,8 13,2

Батрак 81 68,4 3,1 5,8 22,1 4,9 227,5

Л 13-1-2, 1*4 62,1х 2,8 5,0х 17,6х 4,2 235,9

Л 13-2-1, 1*4 61,4х 2,8 5,1 18.2х 4,1 227,4

Л 13-2-2, 1*4 63,0х 2,5х 4,6х 16,8х 3,9х 235,1

Л 13-2-3, 1*4 62,5х 3,1 5,7 19,9 4.5 228.7

Л 25-1,1*3 63,6х 2,9 4,9х 16,8х 4,2 251,9х

Л 25-2,1*з 64,0 2,7х 4,5х 15,3х 3,9х 259,8х

НСРоз 4.5 0,4 0,7 3,4 1,0 22,8

Зарянка 81 81,7 81,7 5,7 23,1 5,4 233.6

Л 1-1, 1*4 74,6х 74,6х 5,1 21,3 5,2 240,8

Л 9-1-1,1*5 85,9 85,9 5,5 20,1 4.9 242,5

Л 9-1-2,1*4 82,5 82,5 6,7 23,8 5,5 231,1

Л 9-2.1*< 86,7х 86,7х 5,7 21,1 5,2 243,8

НСРо. 4,9 4,9 1,9 8,1 2,9 15,5

Некоторые регенерантные линии обнаружили достоверные отклонения от контроля. Регенерантные линии сорта Батрак характеризовались меньшей длиной стебля, и соответственно числом продуктивных узлов и рядом других признаков. Наибольший интерес представляют линии Л 25-1 и Л 25-2, кою-

рые достоверно превысили контроль по массе 1000 семян. Эти линии выделены из каллусных клонов, продолжительность пассирования которых превысила 540 дней.

Среди регенерантных линий сорта Зарянка выделилась линия J1 9-2, которая в течение трех лет изучения превышала исходный сорт по длине стебля, а в 2004 году по продуктивности зеленой массы (38,9 т/га) достоверно превысила исходный сорт (33,2 т/га).

В 2000-2001 годах проведен анализ регенерантных линий, полученных из длительно пассируемых каллусов гороха (550-1400 суток). Установлено, что с повышением времени культивирования in vitro может возрастать степень изменчивости, в том числе и генотипической Причем, эти изменения далеко не всегда оказываются полезными.

Среди линий сортов Орлус и Батрак значительную долю составляли линии, превысившие исходный сорт по основным хозяйственно ценным признакам. Для линий генотипа Аз 26 отмечена обратная закономерность. Ни одна из изученных линий сорта Filby достоверно не отличалась от исходного сорта по изученным признакам.

В 2003 году среди растений-регенерантов Ro генотипа Аз 93-1964 было выделено растение с не характерным для образца расположением листьев на стебле. На трех нижних узлах формировались тройчатосложные листья Такой лист свойственен многим представителям семейства Fabaceae (клеверу, фасоли, сое). В последующих узлах находились листья с усиками, на которых формировались о iдельные мелкие листочки. В генеративной зоне образовывались листья типа усиковая акация с удлиненными листочками Прилистники на растении были очень крупными, в отличие от исходного генотипа Лз 93-1964, у которого они были редуцированы.

Таким образом, можно говорить о получении сомаклональных вариантов по массе 1000 семян, типу листа, длине стебля в культуре длительно пассируемых каллусов гороха.

5. Селекция каллусов гороха in vitro на устойчивость к осмотическому

стрессу

5.1. Определение сублетальных и летальных концентраций селективного

фактора

Практическая значимость, использования сомаклональных вариантов повышается, если отбор генотипов ведется с использованием селективных сред. Важной задачей селекции гороха является создание сортов, устойчивых

к засухе Поэтому, разработка селективных систем для отбора засухоустойчивых генотипов гороха имеет актуальное значение. Полиэтиленгликоль (ПЭГ) в составе питательной среды может служить адекватным селективным агентом. отражающим реакцию целых растений на засуху. Работы по клеточной селекции гороха на осмоустойчивость в культуре in vitro неизвестны.

Материалом для о I бора устойчивых к действию осмотическою стресса линий гороха служили длительно пассируемые морфогенные каллусные ткани гороха генотипов Орлус и Аз 93-1964. Концентрация полиэтиленгликоля в питательной среде составляла 10...35%.

Изученные генотипы характеризовались сходной реакцией на присутствие селективною фактора в питательной среде. При 10% концентрации ПЭГ происходило увеличение прироста каллусной массы гороха в сравнении со стандартной средой на 7-8 % (рис. 1). Вследствие чего использование среды с 10% концентрацией селективного фактора для отбора в последующих пассажах нецелесообразно Реакция каллусной ткани на увеличение концентрации ПЭГ в среде выражалась в замедлении темпов роста При повышении концентрации ПЭГ до 35% наблюдалась гибель всех инокулированных экс-плантов. Таким образом. 35% концентрация ПЭГ в питательной среде является летальной для каллусных тканей гороха Наибольшие различия между генотипами по интенсивности роста в присутствии селективного фактора выявлены на средах с содержанием ПЭГ 15 ..20%.

120

ч ч я

о.

Орлус Аз 93-1964

10 15 20 25 30

Концентрация ПЭГ, %

Рис. 1. Зависимость прироста каллуса гороха от содержания полиэтиленгликоля в среде

5.2. Субкультивирование каллусных линий гороха на селективных средах

Для отбора истинно толерантных к действию осмотического стресса клеток использовали принцип длительного субкультивирования на средах с ПЭГ в концентрациях 15-30%

При длительном пассировании в присутствии 15% ПЭГ число растущих каллусов изученных генотипов уменьшилось незначительно. При повышении концентрации ПЭГ до 20% и продолжительности субкультивирования число растущих каллусов резко снижалось (рис. 2). К концу шестого пассажа выживаемость каллусов сорта Орлус составила 30%, генотипа Аз 93-1964 - 14% Особенно резкая элиминация каллусов происходила на средах с высоким содержанием селективного фактора. В присутствии 25% ПЭГ в питательной среде выживаемость каллусов сорта Орлус в пятом пассаже снизилась до 2,5%. Подобная реакция наблюдалась и при 30% концентрации ПЭГ. При дальнейшем субкультивировании в присутствии 25...30% ПЭГ наблюдали некроз и гибель всех каллусных клонов. Генотип Аз 93-1964 характеризовался большей чувствительностью к осмотическому стрессу, у которого на средах с 30% концентрацией ПЭГ жизнеспособность каллусов сохранялась только в течение четырех пассажей.

—•—Б!

-тк-Э! + 20%ПЭГ —*—+ 30% ПЭГ

--Ш-Б! +15% ПЭГ -Ш-Э! +26% ПЭГ

—•— Э1 31 +15% ПЭГ

—Б1 + 20%ПЭГ —Б1 +25% ПЭГ

-*— 51 + 30% ПЭГ

Рис. 2 Выживаемость каллусных клонов гороха при субкультивировании на селективных средах с ПЭГ-6000

Посгте трех пасеажей на селективных средах каллусные клоны делили на тве части. Одну использовали для дальнейшего субкулыивирования в селективных условиях, другую - для индукции органогенеза и получения рас-тений-регенерантов

5.3. Индукция стабильного морфогенеза у толерантных косметическому стрессу каллусных линий гороха

Индукция регенерационных процессов осуществлялась на среде МЯ]2 (5,0 мг/л БАП + 2.0 мг/л НУК). Среда использовалась для увеличения массы каллусной ткани, поскольку изначально на селективных средах культивировались маленькие инокулюмы. Для получения регенерантных побегов каллусы переносили на среду (5.0 мг/л БАП + 0,2 мг/л НУК).

Каллусы, отселектированные на средс, содержащей 15% ПЭГ. были зеленого цвета, интенсивно разрастались на регенерационных средах, образуя регенерантные побеги. Каллусы, отобранные на среде с 20% концентрацией ПЭГ. имели более низкие темпы роста на регенерационных средах. Большая часть каллусов была буровато-зеленого цвета без зачатков побегов. На сохраняющихся зеленых морфогенных участках образовывались регенерантные побеги, которые очень слабо росли. Большое количество каллусов не теряло способности к неорганизованной пролиферации каллусной массы, но побегов не образовывало.

Каллусные клоны, отобранные на питательных средах, содержащих 25. 30% ПЭГ. на регенерационных средах бурели и некротизировались. Наблюдалась гибель всех отобранных каллусов изученных генотипов.

Определен коэффициент корреляции между массой исходного эксплан-та и относительным ростом каллуса (г = -0,80...-0,85) у разных генотипов, отселен ированных на средах с ПЭГ, что указывает на очень тесную отрицательную корреляцию между изученными признаками. Следовательно, чем меньше масса исходного экспланта, тем выше относительный рост каллуса.

Наибольшее число регенерантных побегов обоих генотипов было получено из каллусных линий, отселектированных в течение 3 и 4 пассажей на среде с 15% содержанием ПЭГ. В целом получено 38 растений-регенерантов ^ К(, в системах с ПЭГ у сорта Орлус и 5 растений у генотипа Аз 93-1964. Реге-

нерантные растения всех генотипов цвели и формировали семена. Таким образом, отбор осмоусгойчивых каллусных линий целесообразно проводить на 100-150 сутки субкультивирования при концентрациях ПЭГ 15-20%

5 4 Морфофизиологическая оценка регенерантных линий гороха на засухоустойчивость

В 2004 году в условиях смоделированной почвенной засухи был проведен морфофизиологический анализ растений-регенерантов Я? сорта Орлус.

полученных в селекгивных средах с ПЭГ-15% после трех пассажей и расте-ний-регенерантов. не подвергавшихся действию ПЭГ. В качестве контроля высевались семена сорта Орлус, полученные в полевых условиях.

Анализ динамики потери воды растениями гороха в течение 6 часов за-вядания не выявил существенных различий между исходным сортом и потомством растений-регенерантов. отселектированных на средах с ПЭГ. по показателю водоотдачи при оптимальном уровне увлажнения почвы (70% ПВ). В условиях почвенной засухи (35% ПВ) потери воды, у отселектированных на средах с ПЭГ регенерантов гороха, были несколько ниже в сравнении с контролем (рис.3).

Ш Орлус - ■ Орлус И2 □ Орлус (ПЭГ)

Рис. 3 Потери воды (%) растениями гороха при завядании (35% ПВ)

В условиях почвенной засухи произошло увеличение массы и объема корневой системы у всех изученных растений практически в два раза. При этом у регенерантов, отобранных на среде с ПЭГ, доля рабочей адсорбирующей поверхности корневой системы оказалась выше, чем у контроля.

Структурный анализ элементов урожая показал, что растения-регенеранты, отселектированные на средах с ПЭГ, отличались меньшей длиной стебля и меньшим числом непродуктивных узлов в сравнении с кошроль-ными. В условиях 35% влажности почвы отмечена 1енденция к повышению числа продуктивных узлов, числа бобов и семян у растений-регенерантов, выявлено существенное повышение продуктивности семяобразования.

Таким образом, в условиях смоделированной почвенной засухи выявлена тенденция превосходства по ряду морфофизиологических показателей, характеризующих засухоустойчивость, у регенерангов, отобранных на селективных средах с ПЭГ.

6. Микроразмножение форм гороха in vitro

Для сохранения и ускоренною размножения ценною селекционного материала отрабатывались условия микроразмножения. Регенерация растений досшгалась в два последовательных этапа:

- индукция многочисленных побеюв на питательных средах;

- корнеобразование у изолированных побегов.

На среде без регуляторов роста регенерантные побеги формировались, но скорость роста была достаточно низкой и, как правило, формировался один побег на эксплант (табл. 8). Наиболее активно формирование побего-вых почек и побегов отмечалось на среде МЯ2 с повышенным содержанием циюкининов (4,5 мг/л БАП + 0,02 мг/л НУК).

Таблица 8

п H ж Зарянка Орловчанин

г; С Су bí n Среда число побегов длина побе- число вторичных число побегов длина побегов. число вторичных

с гов, мм эксплантов мм эксплан-

тов

)S 3 MS3 1,1±0,1 ïl,3±l,4 - 0,9±0,1 20,4±1,6 -

a 3" S m o. MR4 3,3±0,2 >9,9*1.9 18,2 2,5±0,3 23,0±1,7 15,5

С MS2 5,1 ±0,4 18,2±0,9 5,1 3,8±0,3 15,5±1,3 3,7

Вторичный MR4 3,9±0.4 >7,4±1,5 21,8 2,6±0,2 21,9±2,9 14,3

MS2 4,8±0,5 13,4±0.7 15,0 3,4±0,4 16,8±2,4 17,3

11а среде MR^ (1,0 мг/л БАП + 0,25 мг/л ИМК), с уменьшенной концен-Iрацией цитокининов, отмечалось образование меньшего числа побеюв. в среднем формировалось от 2,5 побегов на эксплант у сорта Орловчанин, до 3.3 - > сорта Зарянка. Следует отметить тот факт, что образовавшиеся побеги обладали активным ростом, были лучше сформированы и по морфологическим признакам имели явное преимущество перед peí енерантными побегами, сформированными на среде MS2 Сформировавшиеся регенерантные побеги использовали как вторичные экспланты К пятому пассажу из одного первич-

ного экспланта было получено от 150 до 450 регенерантных побегов. Эффективность ризогенеза у изученных сортов была достаточно высокой и составляла от 56% у сорта Орловчанин до 64% у сорта Зарянка.

Методика микроразмножения была апробирована на генотипах гороха посевного и гороха красивого.

Выводы

1. Определен оптимальный состав среды для индукции каллусогенеза у гороха. Индукция каллусогенеза у гороха наиболее эффективно протекает на питательной среде КГ3 содержащей 0,66 мг/л БАП + 5,0 мг/л НУК. Эффективность каллусогенеза определяется сортовой и тканевой специфичностью экспланта.

2. Оптимизированы составы сред для индукции морфогенеза у гороха Подтверждены данные о решающей роли цитокининов при индукции морфо-генетических процессов в каллусных тканях гороха.

3. Установлена взаимосвязь между морфологической структурой каллуса и его регенерационной способностью. Показано, что плотный, компактный каллус отличается пониженной морфогенной активностью. Максимальный морфогенный потенциал отмечен у рыхлого глобулярного каллуса.

4. В длительно пассируемых каллусных тканях гороха для обеспечения активных пролиферативных и регенерационных процессов, эффективно чередование циклов культивирования на средах MSi (с низким содержанием НУК - 0,2 мг/л) и MS,2 (с более высоким содержанием НУК - 2,0 мг/л), через 3-4 пассажа (при неизменной концентрации БАП-5.0 мг/л). Выявлены генотипи-ческие различия по способности к длительному субкультивированию каллусных тканей.

5. Разработаны условия получения корнесобственных регенерантных растений гороха в длительно пассируемой культуре каллусов на ризогенных средах в присутствии ауксинов. Для индукции ризогенеза предпочтительно использовать НУК в концентрации 1,0-1,5 мг/л.

6. Регенерантные линии Rj - R« большинства изученных сортов отличаются большей выравненностью (меньшим значением коэффициента вариации) по сравнению с исходным сортом.

7. Выделены сомаклонапьные варианты по массе 1000 семян, типу листа. длине стебля. Частота появления сомаклональных вариантов несколько возрастает с увеличением продолжительности культивирования in vitro.

8. Разработана схема отбора осмоустойчивых линий гороха, включающая отбор каллусов на средах с полиэтиленгликолем в концентрации 15-20%

в течение 3-4 пассажей, индукцию морфогенеза и получение корнесобствсн-ных растений-регенерантов.

9 Выявлена отрицательная корреляционная зависимость (г = -0,80 -0,85) между массой исходного экспланта и относительным ростом каллуса при индукции процессов морфогенеза у каллусных линий гороха, отселекти-рованных на средах с ПЭГ.

10 В условиях смоделированной почвенной засухи выявлено преимущество по ряду морфофизиологических показателей, характеризующих засухоустойчивость. регенерантных линий гороха сорта Орлус. отселектирован-ных на осмоустойчивость в каллусной культуре.

11 Адаптирована методика ускоренного клонального микроразмножения гороха применительно к различным генотипам гороха.

Предложения и рекомендации для селекции

1 Рекомендуется использовать методы клонального микроразмножения для сохранения коллекционного и ценного селекционного материала.

2 Рекомендуется использовать систему длительно пассируемых каллусных тканей для расширения спектра исходного материала в селекции гороха.

3. Рекомендуется использовать в селекции линии JT 25-1 и Л 25-2 сорта Батрак, выделенные по массе 1000 семян В качестве ценного исходного материала при селекции сортов гороха зерноукосного направления рекомендуется использовать линию Л 9-2 сорта Зарянка

4 Для создания исходного материала, характеризующегося повышенной засухоустойчивостью, рекомендуется проводить отбор на селективных средах с ПЭГ Использовать регенерантные линии гороха сорта Орлус, отсе-лектированные на средах с ПЭГ, в качестве исходного материала при селекции на засухоу стойчивость.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Соболева Г В.. Кострубин М.М., Нагорнюк М.В , Варлахов М.Д. Микроразмножение ценных форм гороха в культуре ин витро // Биологические основы интенсивного растениеводства. - Орел, 1993. - С.82.

2. Соболева Г.В. Микроразмножение гороха красивого (Pisum formo-sum) в культуре ин витро // Регуляция роста и развития растений. - М , 1995. -С 221.

3 Соболева Г В Микроразмножение гороха в культуре in vitro II Актуальные пробтемы биотехнологии в растениеводстве и ветеринарии - М , 1996.-С.75.

4. Соболев А.Н , Соболева Г В.. Легкобит М.П. Изучение методов кло-нального микроразмножения гороха ин витро // Актуальные проблемы естествознания в средней и высшей школе. - Орел, 1997. -Ч.З - С 14-15.

5. Соболева Г.В., Зеленое А.Н. Длительное субкультивирование кал-лусных тканей гороха с высоким морфогенетическим потенциалом // Генетика и селекция растений. — Орел, 1999. - С.27.

6. Соболева Г.В. Получение длительно пассируемых каллусных культур гороха Pisum sativum L. // Тезисы докладов IV съезда общества физиологов России. - М., 1999. - Т.2. - С.700.

7. Соболева Г.В. Возможности использования культуры тканей in vitro в селекции гороха посевного Pisum sativum L. //1 Межд. науч конф «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии»'. - М , 2000 -С.40-41.

8 Soboleva G. The qvestion of regeneration in long term callus culture of pea (Pisum sativum L.) // 4 European Conference on Grain Legumes. - Cracow. 2001.-P.156.

9. Soboleva G.V. Plant regeneration in somatic tissue culture of pea Pisum sativum // I International congress. «Biotechnology - state of the art and prospects of development». - M., 2002. - P.128.

10. Soboleva G.V. Selection of osmotic-resistant callus clones of pea (Pisum sativum L.) // VIII Intern, conf. «The Biology of Plant Cells In Vitro and Biotechnology». - Saratov, 2003. - P.290-291.

11 Soboleva G.V. Raising of Pea callus lines (Pisum sativum L ), resistant to osmotic stress // II International congress «Biotechnology — state of the art and prospects of development». - M., 2003. - P.228-229.

12 Соболева Г.В. Получение устойчивых к осмотическому стрессу каллусных линий гороха посевного (Pisum sativum L.) // Физиологические аспекты продуктивности растений. - Орел, 2004. -4.1. -С.140-144.

П.Соболева Г.В., Зеленов А.Н. Морфогенез и регенерация растений в длительно пассируемой каллусной культуре гороха посевною Pisum sativum L. // Научное обеспечение производства зернобобовых и крупяных культур. -Орел, 2004. -С.213-219.

14. Соболева Г.В. Разработка метода отбора in vitro осмоустойчивых каллусных линий гороха посевного (Pisum sativum Г.) // II Межд науч. конф. «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии». - М, 2004. - С.70-73.

15. Soboleva G. Obtaining of osmoresistant callus lines of sowing pea (Pisum sativum 1, ) // Biotechnology and Agriculture and the Food Industry. -N-Y: Nova Science Publishers, Inc , 2004. - ISBN 1-59454-119-1. - P.89-94

Издательство ОрелГАУ, 2005, Орел, Бульвар Победы, 19. Заказ 21/05. Тираж 100 экз.

110S13

РНБ Русский фонд

2006-4 7946

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Соболева, Галина Викторовна

Общая характеристика работы

1. Обзор литературы

1.1. Методы культивирования изолированных клеток и тканей растений

1.2. Сомаклональная изменчивость

1.3. Применение методов культуры тканей в селекции растений

1.4. Методы регенерации in vitro гороха

2. Условия, материал и методика проведения исследований

2.1. Место проведения исследований и почвенно-климатические условия

2.2. Исходный материал

2.3. Методика проведения исследований

3. Индукция процессов каллусогенеза и морфогенеза в каллусных тканях гороха

3.1. Индукция процессов дедифференциации и каллусогенеза

3.2. Индукция процессов морфогенеза в каллусной ткани гороха 57 3.3 Индукция процессов ризогенеза гороха

4.1 Длительное субкультивирование каллусных тканей гороха

4.2 Морфогенез в длительно культивируемых каллусных культурах гороха

4.3. Регенерация корнесобственных растений регенерантов Rq

4.4. Морфобиологические особенности регенерантных растений гороха

5. Селекция каллусов гороха in vitro на устойчивость к осмотическому стрессу 97 5.1 Определение сублетальных и летальных концентраций селективного фактора

5.2 Субкультивирование каллусных линий на селективных средах

5.3. Индукция стабильного морфогенеза у толерантных к осмотическому стрессу каллусных линий гороха

5.4. Морфофизиологическая оценка регенерантных линий гороха на засухоустойчивость 112 6. Микроразмножение форм гороха in vitro 122 Выводы 131 Предложения и рекомендации для селекции 133 Литература

Введение Диссертация по биологии, на тему "Использование культуры тканей in vitro в селекции гороха"

Интенсификация сельскохозяйственного производства ставит перед селекционерами сложные задачи по созданию новых сортов, отличающихся высокой урожайностью, устойчивостью к болезням и вредителям, стрессовым факторам внешней среды, высокой пластичностью. Для создания таких сортов необходим поиск и привлечение современных достижений науки, ускоряющих и повышающих результативность селекционного процесса. Одним из наиболее динамично развивающихся направлений, ориентированных на создание нового исходного материала для селекции, является использование биотехнологических методов.

Культура клеток и тканей in vitro в настоящее время находит применение в широком диапазоне биологических исследований. Это стало возможным в результате разработки технологий культивирования тканей и клеток с последующей регенерацией из них фертильных растений. Подобные технологии отстают в своем развитии применительно к такой экономически важной зернобобовой культуре как горох.

При культивировании клеток и тканей гороха на искусственных средах имеются многочисленные доказательства появления генетической изменчивости, как на клеточном уровне, так и у растений-регенерантов

Гостимский С.А., 1987). Одновременно наблюдается и генетическая стабильность регенерантов, полученных из каллусной культуры, подтвержденная анализом генетических маркеров (Демченко С.И. и др., 1977).

Изучение этих вопросов во многом определит дальнейшее использование культуры клеток и тканей in vitro для целей селекции. В методическом аспекте изучение означенных вопросов предполагает создание системы культивирования каллусных тканей, сохраняющих высокий морфогенетический потенциал в течение длительного времени, получение растений-регенерантов и их всестороннее изучение.

Цель настоящей работы состояла в разработке методов культивирования тканей гороха in vitro, получении регенерантных растений с последующей их морфологической оценкой.

В задачи исследований входило:

- определение оптимальных составов питательных сред для индукции каллусогенеза, морфогенеза и ризогенеза в культуре соматических тканей гороха;

- разработка эффективной системы активного пролиферационного и регенерационного процессов в длительно культивируемых каллусных тканях;

- разработка условий получения растений-регенерантов в культуре длительно пассируемых каллусов гороха;

- разработка метода отбора устойчивых к действию осмотического стресса каллусных линий гороха;

- апробация методики клонального микроразмножения на сортах гороха селекции ВНИИЗБК;

Научная новизна. Впервые разработан метод длительного субкультивирования каллусов гороха с последующим получением корнесобственных растений - регенерантов. Выявлена сомаклональная изменчивость растений-регенерантов по массе 1000 семян, форме листа и длине стебля. Разработан метод отбора in vitro устойчивых к осмотическому стрессу каллусов гороха. Получены осмоустойчивые регенерантные линии гороха.

Практическая значимость работы. Определены направления использования культуры тканей in vitro в селекционных программах. В целях сохранения и ускоренного размножения ценного селекционного материала рекомендуется метод микроразмножения. Для расширения спектра исходного материала в селекции гороха рекомендуется использовать систему длительно пассируемых каллусных тканей. Разработана схема селекции in vitro гороха на осмоустойчивость. Выделены ценные для селекции генотипы гороха.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на научных конференциях: «Биологические основы интенсивного растениеводства» (Орел, 1993), «Регуляторы роста и развития растений» (Москва, 1995), «Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» (Москва, 1996, 2000, 2004), IV съезде общества физиологов России «Физиология растений - наука III тысячелетия» (Москва, 1999), I и II международных конференциях «Биотехнология -состояние и перспективы развития» (Москва, 2002, 2003), VIII международной конференции «Биология культуры клеток in vitro и биотехнология» (Саратов, 2003), «Физиологические аспекты продуктивности растений» (Орел, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, из них 5 на английском языке.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Соболева, Галина Викторовна

выводы

1. Определен оптимальный состав среды для индукции каллусогенеза у гороха. Индукция каллусогенеза у гороха наиболее эффективно протекает на питательной среде КГз содержащей 0,66 мг/л БАЛ + 5,0 мг/л НУК. Эффективность каллусогенеза определяется сортовой и тканевой специфичностью экспланта.

2. Оптимизированы составы сред для индукции морфогенеза у гороха. Подтверждены данные о решающей роли цитокининов при индукции морфогенетических процессов в каллусных тканях гороха.

4. В длительно пассируемых каллусных тканях гороха для обеспечения активных пролиферативных и регенерационных процессов, эффективно чередование циклов культивирования на средах М81 (с низким содержанием НУК - 0,2 мг/л) и М812 (с более высоким содержанием НУК - 2,0 мг/л), через 3-4 пассажа (при неизменной концентрации БАП-5,0 мг/л). Выявлены генотипические различия по способности к длительному субкультивированию каллусных тканей.

5. Разработаны условия получения корнесобственных регенерантных растений гороха в длительно пассируемой культуре каллусов на .ризогенных средах в присутствии ауксинов. Для индукции ризогенеза предпочтительно использовать НУК в концентрации 1,0-1,5 мг/л.

6. Регенерантные линии ^ - большинства изученных сортов отличаются большей выравненностью (меньшим значением коэффициента вариации) по сравнению с исходным сортом.

7. Выделены сомаклональные варианты по массе 1000 семян, типу листа, длине стебля. Частота появления сомаклональных вариантов несколько возрастает с увеличением продолжительности культивирования in vitro.

8. Разработана схема отбора осмоустойчивых линий гороха, включающая отбор каллусов на средах с полиэтиленгликолем в концентрации 15-20% в течение 3-4 пассажей, индукцию морфогенеза и получение корнесобственных растений-регенерантов.

9. Выявлена отрицательная корреляционная зависимость (г = -0,80 -0,85) между массой исходного экспланта и относительным ростом каллуса при индукции процессов морфогенеза у каллусных линий гороха, отселектированных на средах с ПЭГ.

10. В условиях смоделированной почвенной засухи выявлено преимущество по ряду морфофизиологических показателей, характеризующих засухоустойчивость, регенерантных линий гороха сорта Орлус, отселектированных на осмоустойчивость в каллусной культуре.

11. Адаптирована методика ускоренного клонального микроразмножения гороха применительно к различным генотипам гороха.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИИ

1. Рекомендуется использовать методы клонального микроразмножения для сохранения коллекционного и ценного селекционного материала.

2. Рекомендуется использовать систему длительно пассируемых каллусных тканей для расширения спектра исходного материала в селекции гороха.

3. Рекомендуется использовать в селекции линии Л 25-1 и Л 25-2 сорта Батрак, выделенные по массе 1000 семян. В качестве ценного исходного материала при селекции сортов гороха зерноукосного направления рекомендуется использовать линию Л 9-2 сорта Зарянка.

4. Для создания исходного материала, характеризующегося повышенной засухоустойчивостью, рекомендуется проводить отбор на селективных средах с ПЭГ. Использовать регенерантные линии гороха сорта Орлус, отселектированные на средах с ПЭГ, в качестве исходного материала при селекции на засухоустойчивость.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата сельскохозяйственных наук, Соболева, Галина Викторовна, Орел

1. Азизходжаев А., Даминова Д.М. Культура генеративных органов при отдаленной межвидовой гибридизации хлопчатника // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. — М.: Наука, 1991. -С.117-119.

2. Артамонов В.И. Биотехнология агропромышленному комплексу. -М.: Наука, 1989.-158 с.

3. Атанасов А.И. Биотехнология в растениеводстве. Новосибирск, 1993.-242 с.

4. Аш O.A., Кузнецова О.И., Хартина Г.А., Гостимский С.А. Изучение регенерации растений из длительно культивируемого каллуса // The Biology of plant cells in vitro and biotechnology. Saratov, 2003. - P.30-31.

5. Багрова A.M., Хартина Г.А., Епихов B.A. Получение длительно культивируемых морфогенных каллусов и регенерантов овощных и зерновых сортов гороха // Биология культивируемых клеток и биотехнология. -Новосибирск, 1988. С.272-273.

6. Багрова A.M., Ежова Т.А., Хартина Г.А., Гостимский С.А. Получение длительно культивируемых морфогенных каллусов и анализ сомаклональной изменчивости у регенерантов зерновых и овощных сортов гороха // Вестник МГУ. Сер 16. биология, 1991. - №1. - С.28-33.

7. Батыгина Т.Б. Эмбриогенез и морфогенез половых и соматических зародышей // Физиология растений. 1999. - Т.46. - № 6. - С.888-898.

8. Батыгина Т.Б., Васильев В.Е., Маметьева Т.Б. Проблемы морфогенеза in vivo и in vitro. Эмбриоидогенез у покрытосеменных растений // Ботанический журнал. 1978. - Т.63. - № 1. - С.87-111.

9. Белянская С.Л., Исханов С.К., Шамина З.Б. Влияние стрессовых факторов на культуру клеток и проростки риса // Физиология растений. -1991.-Т.38. -№6.-С. 1218-1226.

10. Белянская C.JI., Шамина З.Б. Получение и характеристика клонов риса, резистентных к стрессовым факторам // Физиология растений. 1993. -Т.40. - №4. - С.681-685.

11. Белянская C.JL, Шамина З.Б., Кучеренко JI.A. Морфогенез в клонах риса, резистентных к стрессовым факторам // Физиология растений. 1994. -Т.41. - №4. — С.573-577.

12. Бессонова В.П. Моделирование процессов каллюсо- и ризогенеза на базе регенерации у изолированных семядолей гороха // Автореф. дис. . .канд. биол.наук. Днепропетровск, 1970. - 22 с.

13. Бессонова В.П., Михайлов О.Ф. Некоторые особенности митоза, геномные и хромосомные изменения в каллусе изолированных семядолей гороха // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. — С. 144-149.

14. Брайт С., Джарретт В., Нельсон Р., Крейссен Г., Карп А. Модификация хозяйственных признаков с использованием технологии in vitro II Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. - С.234-246.

15. Бургутин А.Б. Микроклональное размножение винограда // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. С.216-221.

16. Бутенко Р.Г. Культура изолиролванных тканей и физиология морфогенеза растений М.: Наука, 1964. - 270 с.

17. Бутенко Р.Г. Тотипотентность растительной клетки и культура тканей // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М., 1970. - С.84-92.

18. Бутенко Р.Г. Гормональная регуляция дифференцировки растительной клетки в культуре in vitro II Рост и гормональная регуляция жизнедеятельности растений. Иркутск, 1974. - С.66-83.

19. Бутенко Р.Г. Экспериментальный морфогенез и дифференциация в культуре клеток растений М.: Наука, 1975. - 51 с.

20. Бутенко Р.Г. Использование культуры тканей растений в сельскохозяйственной науке и практике // Сельскохозяйственная биология. -1979. Т.14. - №3. - С.306-315.

21. Бутенко Р.Г. Индукция морфогенеза в культуре тканей растений // Гормональная регуляция онтогенеза растений. М.: Наука, 1984. - С.42-54.

22. Бутенко Р.Г. Клеточные технологии в селекционном процессе // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии. -Л., 1986. С.29-38

23. Бутенко Р.Г. Клеточные технологии в сельскохозяйственной науке и практике // Основы сельскохозяйственной биотехнологии. М.: Агропромиздат, 1990. - С. 154-236.

24. Бутенко Р.Г. Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе М.: ФБК-Пресс, 1999. - 160 с.

25. Бутенко Р.Г., Гостимский С.А. Изменчивость генома растительной клетки при культивировании в условиях in vitro II Биотехнология. — 1985. -№2. С.79-85.

26. Бутенко Р.Г., Джардемалиев Ж.К., Гаврилова Н.Ф. Каллусообразующая способность эксплантов из разных органов разных сортов озимой пшеницы // Физиология растений. 1986а. - Т.ЗЗ. - Вып.2. -С.350-355.

27. Бутенко Р.Г., Джардемалиев Ж.К., Гаврилова Н.Ф. Регенерация растений из каллусных тканей, полученных из разных органов озимой пшеницы // Физиология растений. 1986в. - Т.ЗЗ. - Вып.5 .- С.837-842.

28. Бутенко Р.Г., Шамина З.Б., Фролова Л.В. Индуцированный органогенез и характеристика растений, полученных в культуре тканей табака // Генетика. 1967. - №3. - С.29-38.

29. Быкова Е.В., Лев C.B. Генотипические особенности процесса каллусогенеза у хлопчатника // Генетика. 1988. - т.24. - №7. - С. 1317-1370.

30. Васильчук Н.С., Дьячук Т.И., Тучин C.B. Биотехнологические методы в селекции пшеницы и ячменя достижения и перспективы // Достижения науки и техники АПК. - 2003. - №10. - С.34-38.

31. Внучкова В. А., Попова И. А. Использование метода культивирования гороха in vitro в практической селекции // Сельскохозяйственная биология. 1987. - № 3. - С.8-10.

32. Высоцкий В.А. О генетической стабильности при клональном микроразмножении плодовых и ягодных культур // Сельскохозяйственная биология. 1995. - № 5. - С.57-63.

33. Высоцкий В.А., Упадышев М.Т., Соломонова Ф.Н. Особенности регенерации растений изолированными пыльниками и листовыми дисками ягодных культур in vitro II Сельскохозяйственная биология. 1998. - №3. -С.44-50.

34. Гапоненко А.К. Перспективы использования культуры клеток растений в селекции // Успехи современной генетики. М.: Наука, 1987. -Вып. 14. - С.64-74.

35. Гапоненко А.К., Маликова Н.И., Охрименко Т.Н., Созинов A.A. Получение сомаклональных линий у злаков (Triticum aestivum и Hordeum vulgare L.) II Доклады АН СССР. 1985. - №6. - С.1471-1475.

36. Гапоненко А.К., Мунтян М.А., Маликова Н.И., Созинов A.A. Регенерация растений различных генотипов пшеницы Triticum aestivum L. in vitro II Доклады АН СССР. 1984. - T.278. - № 5. - C.1231-1235.

37. Гирко B.C. Методы клеточной селекции в селекционных программах зерновых культур // Вестник сельскохозяйственной науки. -1972.-№ 7-12.-С.85-88.

38. Глеба Д.М., Глеба Ю.Ю. Мутации и эпигенетические изменения в культуре клеток и протопластов высших растений // Цитология и генетика. -1978. т. 12. - №5. . С.458-469.

39. Гостимский С.А. Изменчивость генома растительной клетки при культивировании в условиях in vitro II Стабильность и изменчивость генома. -М.: Наука, 1985. С. 16-26.

40. Гостимский С.А. Генетическая изменчивость клеток растений при культивировании // Успехи современной генетики. М.: Наука, 1987.-Вып.14. - С 48-63.

41. Гостимский С.А., Багрова A.M., Ежова Т.А. Обнаружение и цитогенетический анализ изменчивости, возникающей при регенерации растений из культуры тканей посевного гороха // Доклады АН СССР. 1985. - Т.283. - № 4. - С.1007-1011.

42. Гостимский С.А., Ежова Т.А., Багрова A.M. Генетический анализ сомаклональных изменений у посевного гороха // Биология культивируемых клеток и биотехнология Новосибирск, 1988. - 4.2. - С.271-272.

43. Давоян Э.И. Мутагенез в культуре ткани риса и получение на его основе нового исходного материала // Генетика. 1983. - Т. 19. - №10. -С.1714-1719.

44. Давоян Э.И. Генетическая детерминированность процессов каллусообразования и индукции регенерантов в культуре тканей риса // Генетика. 1987. -Т.23. - № 2. - С.303-310.

45. Давоян Э.И., Сметанин А.П. Получение каллуса и регенерация растений риса // Физиология растений. 1979. - Т.26. - Вып.2. - С.323-329.

46. Данилина А.Н. Особенности соматического эмбриогенеза в культуре ткани моркови // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. - С.112-118.

47. Демченко С.И., Шпинькова Т.Б., Аветисов В.А. О стабильности генетических маркеров при дедифференцировке растительной клетки in vitro

48. Химический мутагенез и создание сортов интенсивного типа. М.: Наука, 1977. C.2Ö5-211.

49. Джигадло E.H., Джигадло М.И., Ряполова И.Н. Микроклональное размножение сортов сливы и клоновых подвоев // Физиологические аспекты продуктивности растений. Орел, 2004. С.259-262.

50. Дмитриева H.H. Особенности метаболизма белка и нуклеиновых кислот в процессе дедифференциации клеток сердцевинной паренхимы стебля табака // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. С.101-106.

51. Дмитриева H.H. Проблема регуляции морфогенеза и дифференциации в культуре клеток и тканей растений // Культура клеток растений. М. : Наука, 1981. С. 113-124.

52. Долгих Ю.И. Результаты и перспективы использования клеточной селекции для создания перспективных форм растений // Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. -M., 2004. С.114-115.

53. Долгих Ю.И., Ларина С.М., Шамина З.Б., Пустовойтова Т.Н. Засухоустойчивость растений кукурузы, полученных из устойчивых к осмотическому действию полиэтиленгликоля клеточных линий // Физиология растений. 1994. - Т.42. - №6. - С.853-858.

54. Долгих Ю.И., Ларина С.М. Шамина З.Б. Селекция на осмоустойчивость кукурузы in vitro и характеристика растений регенерантов //Физиологиярастений.- 1994.-Т.41. -Ш.-С.114-117.

55. Долгих Ю.И., Ларина С.Н., Болонкина Ю.В. Анализ изменчивости регенерантов инбредной линии кукурузы А 188 // Генетика. 1992. - Т.28. -№6. -С.74-81.

56. Долгих Ю.И., Пустовойтова Т.И., Жданова Н.Е. Соотношение эндогенных фитогормонов в незрелых зародышах компетентных и некомпетентных к соматическому эмбриогенезу. линий кукурузы // Физиология растений. 1999. - Т.46. - № 6. - С.861-864.

57. Долгих Ю.И., Степанова А.Ю., Гладков Е.А., Осипова Е.С. Получение растений, толерантных к неблагоприятным условиям окружающей среды, методом клеточной селекции // Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. М., 2004. - С.136-138.

58. Долгих Ю.И., Шамина З.Б. Современные представления о причинах и механизмах сомаклональной изменчивости // Молекулярные механизмы генетических процессов. М.: Наука, 1991. - С. 123-127.

59. Доспехов Б.А. Методика полевого опыта М.:Колос, 1985.- 351с.

60. Дьячук Т.Н., Дьячук П.А. Культура пыльников злаков: современное состояние, проблемы, перспективы // Сельскохозяйственная биология. -1989. №5. - С.3-10.

61. Егоров Н.С., Олескин A.B., Самуилов В.Д. Биотехнология. Проблемы и перспективы. М.: Высшая школа, 1987. - Кн.1. - 159 с.

62. Ежова Т.А., Багрова A.M., Гостимский С.А. Побегообразование в каллусах из верхушек стеблей, эпикотилей, междоузлий и листьев различных генотипов гороха // Физиология растений. 1985. - Т.32. - Вып.З. - С.513-520.

63. Ежова Т.А., Багрова A.M., Михайлова-Крумова А. Анализ сомаклональной изменчивости в каллусных культурах и регенерантах гороха // Тез. докл. V съезда ВОГиС. М., 1987. - Т.4. - Ч.З. - С. 133-134.

64. Ежова Т.А., Багрова A.M., Хартина Г.А., Гостимский С.А. Цитогенетический анализ длительно культивируемых каллусов и полученных из них регенерантов гороха (Pisum sativum L.) // Цитология и генетика. 1988. - Т.22. - № 4. - С.22-26.

65. Ежова Т.А., Багрова A.M., Хартина Г.А., Гостимский С.А. Изучение наследуемости сомаклональных изменений у регенерантов посевного гороха (Pisum sativum L.) // Генетика. 1989. Т.25. - № 5. - С.878-885.

66. Ежова Т.А., Гостимский С.А. Современные методы селекции высших растений на устойчивость к гербицидам (обзор) // Сельскохозяйственная биология. 1989. - №1. - С.25-35.

67. Ежова Т.А., Тихвинская Н.С., Багрова A.M., Васильев И.Р., Маторин Д.Н., Гостимский С.А. Получение толерантных к гербицидам форм растений методом селекции in vitro II Доклады АН СССР.- 1990а. Т.310. -№4. -С.987-989.

68. Еникеев Х.К., Высоцкий В.А., Плотникова Г.А. Развитие, зародышей вишни и черешни в культуре in vitro изолированных на ранних фазах эмбриогенеза // Сельскохозяйственная биология. 1984. - №11. - С.46-48.

69. Загорска H.A., Шамина З.Б., Бутенко Р.Г. Изучение растений-регенерантов, полученных в культуре тканей табака // Генетика. 1971. - Т.7. - №3. - С.23-29.

70. Захленюк О.В., Алексеева И.В., Чернецкий В.П., Кунах В.А. Влияние кинетина и глиацидина на культуру тканей табака // Культура клеток растений и биотехнология. М., 1986. - С.37-41.

71. Захленюк О.В., Кунах В.А. Цитоплазматические и цитогенетические эффекты производных аденина в культуре тканей Haplopappus gracilis II Физиология растений. 1987. - Т.34. - №3. - С.584-594.

72. Здруйковская-Рихтер А.И. Культура изолированных зародышей и пути ее применения в биологических исследованиях // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. - С.20-30.

73. Здруйковская-Рихтер А.И. Морфогенетические процессы в тканях изолированных зародышей ранних стадий развития плодовых деревьев // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С.124-128.

74. Здруйковская-Рихтер А.И., Бабасюк М.С. Некоторые итоги исследований по культуре изолированных зародышей, генеративных органов и тканей растений // Бюлл. Никит. Ботан. Сада. 1981. - Т.З. - № 46. - С.88-91.

75. Зеленов А.Н. Создание и генетический анализ нетрадиционной формы гороха хамелеон // Нетрадиционное растениеводство, экология и здоровье.-Симферополь, 1998. - С.355-356

76. Зеленов А.Н. Селекция гороха на высокую урожайность семян // Автор, дис. .докт. с./х. наук. Брянск, 2001. - 60с.

77. Игнатова С.А., Овсюк Т.Н., Лукьянюк С.Ф. Создание фузариозоустойчивого материала люцерны с использованием биотехнологических приемов // Билогия культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С. 13 7-141.

78. Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В., Полищук В.Е. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений Киев: Наукова Думка, 1980. -487с.

79. Каллак Х.И., Кыйвеэр А.Ю. Цитогенетическая и морфогенетическая реакция растительных культур тканей на отсутствие экзогенных регуляторов роста в питательной среде // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С.128-133.

80. Каллак Х.И., Ярвекюльг Л.Я. О морфологической и цитогенетической разнокачественности каллуса гороха // Цитология и генетика. 1968. Т.2. №5. С. 408-414.

81. Каллак Х.И., Ярвекюльг Л.Я. О цитогенетической характеристике каллуса гороха // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. - С.140-144.

82. Карабаев М.К., Джардемалиев Ж.К. Культивируемые клетки пшеницы и кукурузы. Морфогенез и толерантность // Физиология растений. -1994. Т.41. - № 6. - С.807-814.

83. Картель Н.А., Манешина Т.В. Регенерация растений ячменя в культуре каллусной ткани // Физиология растений. 1977. - Т.25. - В.2. -С.283-287.

84. Касаева К.А. Применение биотехнологических методов в селекции растений. М.} 1989. - 57 с.

85. Катаева Н.В., Аветисов В.А. Клональное размножение растений в культуре ткани //Культура клеток растений. М.: Наука, 1981. - С. 137-150.

86. Катаева Н.В., Бутенко Р.Г. Клональное микроразмножение растений. М.:Наука, 1983. - 97 с.

87. Кацы Е.И. Участие ауксинов в регуляции экспрессии генов бактерий и растений // Генетика. 1977. - Т.ЗЗ. - С.565-576.

88. Кириллова Г.А. Явление гаплоидии у покрытосеменных растений // Генетика. 1966. - №2. - С. 137-147.

89. Киселев Е.П., Анненков Б. Особенности и перспективы использования методов биотехнологии в селекции картофеля на Дальнем Востоке // Сельскохозяйственная биология. 1989. - №5. - С. 11-16.

90. Ковалев В.М. Технологии будущего в селекции // Сельскохозяйственная биотехнология. М.: Воскресенье, 2000. - Т.1. -С.228-240.

91. Ковалева Т.А., Шамина З.Б., Бутенко Р.Г. Цитологическое изучение культуры ткани раувольфии (Rauwolfia Serpentina Benth) // Генетика. 1968. -Т.4. - № 5. - С.5-13.

92. Копертех Л.Г., Бутенко Р.Г. Тестирование на солеустойчивость растений-регенерантов пшеницы // Доклады РАСХН. 1997. - №1. - С.21-22.

93. Кострубин М.М. Клональное микроразмножение гороха Pisum sativum L. в культуре тканей in vitro II Селекция и технология возделывания зерновых бобовых и крупяных культур Орел, 1994. - С.39-47.

94. Костюченко Д. А. Биотехнологические приемы расширения исходного материала для селекции люпина // Автор, дис. .канд. с./х. наук. -Орел., 2004.- 18с.

95. Косулина Л.Г. Особенности процесса регенерации в каллусной культуре зрелых зародышей пшеницы (Triticum Aestivum L.) II Сельскохозяйственная биология. 1995. - № 1. - С.78-84.

96. Кренке Н.П. Регенерация растений М-Л.: Издательство АН СССР, 1950.-672 с.

97. Кубалакова М., Гавел Л. Использование культур тканей в процессе селекции у Lilium L. // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С.206-209.

98. Кунах В.А. Особенности культуры изолированных тканей растений как клеточной популяции в связи с перспективой применения ее в генетике и селекции // Экспериментальная генетика растений. Киев: Наукова Думка, 1977.-С.112-123.

99. Кунах В.А. Изменчивость числа хромосом в онтогенезе высших растений // Цитология и генетика. 1978. -Т. 12. - №2. - С. 160-173.

100. Кунах В.А. Цитогенетическая изменчивость клеточных популяций в культуре изолированных тканей растений // Тканевые и клеточные культуры в селекции растений. М.: Колос, 1979. - С.38-51.

101. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений и факторы, регулирующие этот процесс // Цитология и генетика. 1980. - Т. 14. -№1. —С.73-81.

102. Кунах В.А. Особенности структурного мутагенеза в популяциях культивируемых клеток растений // Успехи современной генетики. М.: Наука, 1984. - №12. - С.30-62.

103. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений.

104. Изменчивость в онтогенезе. // Биополимеры и клетка 1994. - Т. 10. - №6. -С.5-35.

105. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений.

106. Изменчивость в онтогенезе // Биополимеры и клетка. 1995. - Т.Н. - №6. -С.5-40.

107. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений.

108. Каллусообразование in vitro II Биополимеры и клетка. 1997. - Т. 13. - №5. -С.362-371.

109. Кунах В.А. Геномная изменчивость соматических клеток растений.

110. Изменчивость в процессе дедифференцировки и каллусообразования in vitro II Биополимеры и клетка. 1998. - Т. 14. - №4. - С.298-319.

111. Кунах В.А. Изменчивость растительного генома в процессе дедифференцировки и каллусообразования in vitro И Физиология растений. -1999. Т. 46. - №6. - С.919-929.

112. Кунах В.А., Алпатова JI.K. Роль фитогормонов в изменчивости числа хромосом в культуре тканей Haplopappus Gracilis И Докдады АН СССР. 1979. - Т.245. - №4. - С.967-969.

113. Кунах B.A., Алхимова Е.Г., Войтюк Л.И. Изменчивости числа хромосом в каллусных тканях и регенерантах гороха // Цитология и генетика. 1984а. - Т. 18. - № 1. - С.20-25.

114. Кунах В.А., Войтюк Л.И., Алхимива Е.Г. Алпатова Л.К. Получение каллусных тканей и индукция органогенеза у Pisum sativum L. // Физиология растений. 1984b. - Т.31. - Вып.З. - С.542-548.

115. Кунах В.А., Зосимович В.П. Влияние кинетина на уровень и типы аббераций хромосом в культуре тканей Haplopappus gracilis П Генетика. -1977. ТЛЗ. - №8. - С.1355-1365.

116. Кунах В.А., Сидоренко П.Г., Зосимович В.П. Влияние кинетина на репродукцию клеток различной плоидности // Успехи полиплоидии. Киев: Наукова думка, 1977. - С.203-215.

117. Кунах В.А., Чечнева Т.Н., Моргун В.В. Получение каллусных тканей из разных по генотипу растений кукурузы // Физиология растений. -1980. Т.27. - Вып.2. - С.399-403.

118. Кучеренко Л.А. Условия получения растений-регенерантов в культуре тканей риса // Сельскохозяйственная биология. 1984. - №4. - С.70-72.

119. Кучеренко Л.А. Подходы к разработке технологии массовой регенерации растений in vitro II Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С.232-243.

120. Кучеренко Л.А. О некоторых параметрах технологии регенерации риса in vitro II Сельскохозяйственная биология. 1994. - № 1. - С.74-76.

121. Кучеренко Л.А., Мамаева Г.Г. Каллусогенез и органогенез в культуре ткани различных сортов риса // Сельскохозяйственная биология. -1980. Т.15. - № 3. - С.384-386.

122. Кучеренко Л.А., Харченко П.Н., Ковалева E.H. Использование методов биотехнологии в селекции риса // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии. Л., 1986. - С.94-98.

123. Кучко A.A., Маруненко И.М. Культура изолированных пыльников картофеля // Сельскохозяйственная биология. 1983. - №5. - С. 16-19.

124. Кучко A.A., Маруненко И.М. Особенности морфогенеза в каллусной ткани различных сортов картофеля // Теоретические и прикладные аспекты биотехнологии. Киев, 1991. - С.9-14.

125. Левенко Б.А., Новожилов О.В., Сергеева Л.Е. Клеточная селекция в получении новых форм растений // 5 съезд ВОГиС. — М., 1987. Т.1. - С.156.

126. Левенко Б.А., Юркова Г.Н., Кунах В.А., Легенда B.C. Поведение пыльников пшеницы и ржи в изолированной культуре // Экспериментальная генетика растений. Киев, 1977.-С. 123-131.

127. Левенко Б. А., Юркова Г.Н., Кунах В. А. Культивирование пыльников.томатов in vitro. Сообщ 1. Изучение условий каллусообразования // Апомиксис и цитоэмбриология растений. 1978. - Вып.4. - С. 67-68

128. Ли М., Ван Г., Лин Ц. Кальций способствует адаптации культивируемых клеток солодки к водному стрессу, индуцированному полиэтиленгликолем // Физиология растений. 2004. - Т.51. - №4. - С.575-581.

129. Лилов Д., Изворска Н. Состояние и дальнейшее развитие работы с культурами in vitro II Международный агропромышленный журнал. 1990. -№2. - С.72-78.

130. Литовкин К.В., Игнатова С.А. Влияние генотипа на морфогенез в культуре тканей ячменя // Матер. II Междунар. Конф. «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии». М., 2000. - С.31-33.

131. Лукьянюк С.Ф., Игнатова С.А. Метод гаплоидии в селекции зерновых культур // Сельскохозяйственная биология. 1983. - №5. — С.8-15.

132. Лутова Л.А., Бондаренко Л.В., Бузовкина И.С., Левашина Е.А., Тиходеев О.Н., Ходжайова Л.Т., Шарова Н.В., Шишкова С.О. Влияние генотипа растения на регенерационные процессы // Генетика. 1994. - Т.30. -№ 8. - С.1065-1074.

133. Лутова Л.А., Забелина Е.К. Каллусо- и побегообразование у различных форм гороха Pisum sativum L. в условиях in vitro И Генетика. — 1988. Т.24. - N2 9. - С. 1632-1640.

134. Лутова Л.А., Козырева О.Г. Генетика морфогенеза в культуре растительных тканей // Вестник Ленингр. Ун-та. Л., 1986. - № 10. - С. 113118.

135. Ляпкова Н.С. Изучение спонтанных и индуцированных мутаций, возникающих в длительно культивируемых каллусных тканях гороха // Автор, дисс. .канд. биол. наук. -М, 1990. 18с.

136. Макашева Р.Х. Горох. Л.гКолос, 1973. - 312с.

137. Макашева Р.Х. Горох. Культурная флора СССР. Зерновые бобовые культуры. 4.1 // Л.: Колос, 1979. - 325с.

138. Маруненко И.М., Кучко A.A., Бутенко Р.Г. Физиологические аспекты получения гаплоидов картофеля методом культуры пыльников // Физиология растений. 1988. -Т.35. - №1. - С.136-143.

139. Мезенцев A.B. Индуцированный каллусо- и морфогенез в культуре ткани люцерны и возможности его регуляции // Сельскохозяйственная биология. 1980. - Т.15. - № 3. - С.379-383.

140. Мезенцев A.B., Карелина H.A. Влияние генотипических особенностей люцерны на каллусообразование и соматический эмбриогенез при различных условиях культивирования тканей // Генетика. — 1982. Т. 17. - С.999-1003.

141. Мелик-Саркисов О.С., Аветисов В.А. Перспективы клеточной биотехнологии в картофелеводстве // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии. Л., 1986. - С.81-87

142. Мелик-Саркисов О.С., Чережанова Л.В., Овчинникова В.Н. Экзогенные фитогормоны как фактор цитогенетической изменчивости клеток картофеля в культуре in vitro II Сельскохозяйственная биология. -1994. №1. - С.69-73.

143. Методические указания по изучению коллекции зерновых бобовых культур // -Л., 1975. 59с.

144. Миляева Э.М., Константинова Т.Н., Баврина Т.В., Аксенова Н.П. Способность различных тканей стебля табака Трапезонд к образованию каллусов и почек// Доклады АН СССР. 1972. - Т.201. - № 1. - С.242-245.

145. Митрофанова О.В. Разработка биотехнологии ускоренного размножения в стерильной культуре цветочных растений на безвирусной основе // Состояние и развитие сельскохозяйственной биотехнологии. Л., 1986. - С.101-104.

146. Михайлов О.Ф., Бессонова В.П. Цитогистологическая картина дифференцировки новообразований в каллусе изолированной семядоли гороха // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. М.: Наука, 1970. — С.123-127.

147. Михайлов О.Ф., Бессонова В.П. Органогенез в культуре изолированных семядолей гороха // Украинский ботанический журнал. -1971. № 28. — С.367-371.

148. Михайлова-Крумова А.Б., Гаврилюк И.П., Азаркович М.И., Бутенко Р.Г. Исследование сомаклональных вариаций белков семян гороха // Физиология растений. 1991. - Т.38. - Вып.З. - С.521-529.

149. Морель Ж. Борьба с вирусными болезнями растений с помощью культивирования тканей // Сельскохозяйственная биология. 1967. - Т.2. -№4. - С.622-628.

150. Морозова С.Е. Продолжительность сохранения, регенерационной способности у каллусов пшеницы // Биология культивируемых клеток и биотехнология растений. М.: Наука, 1991. - С.256-260.

151. Муравлев A.A., Шелагина В.В. Способы отбора каллусных клонов ярового рапса, устойчивого к водному стрессу // Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии. М., 2000. - С. 187-188.

152. Мурашко JI.H., Фадеева Т.С. Изучение характера регенерации у различных форм гороха // Вестник Ленингр. Ун-та. — 1973. № 15. - С. 132140.

153. Нам И.Я., Заякин В.В., Вовк В.В., Казаков И.В. Оптимизация метода клонального микроразмножения для ускорения селекции межвидовых ремонтантных форм малины // Сельскохозяйственная биология. 1998. - №3. -С.51-55.

154. Новоселова A.C., Мазин В.В. Использование методов биотехнологии в селекции многолетних бобовых трав // Состояние и перспективы развития сельскохозяйственной биотехнологии. Л., 1986. -С.61-67.

155. Носов A.M. Культура клеток высших растений уникальная система, модель, инструмент // Физиология растений - 1999. - Т.46. - №6. — С.837-844.

156. Носов A.M. Культура клеток высших растений: от теории к практике// Биология в школе. 2004. - №5. - С.4-8.

157. Омельянчук H.A., Шумный В.К. Изучение особенностей культивирования in vitro у различных видов овсов // Известия АН СССР. Сер.биол.наук. 1986. - №6. - С.71-76.

158. Павловская Н.Е., Голышкин Л.В., Голышкина Л.В., Парахин Н.В., Коломейченко В.В., Яшин И.С. Введение в сельскохозяйственную биотехнологию. Орел, 1998. - 204с.

159. Плотников В. А. Использование метода культуры молодых зародышей для ускоренного развития ЦМС-аналогов подсолнечника // Цитология и генетика. 1983. - Т. 17. - №6. - С.42-46.

160. Понтович В.Э. Ткани репродуктивных органов в культуре in vitro II Культура изолированных органов, тканей и клеток растений М.: Наука, 1970. - С.7-20.

161. Практикум по физиологии растений (под ред. Третьякова H.H.) // -М.гАгропромиздат, 1990.-271 с.

162. Рахимбаев И.Р., Тивари III., Кударов Б.Р. Экспериментальная гаплоидия в культуре пыльников и микроспор зерновых злаков // Сельскохозяйственная биология. — 1990. №3. — С.44-55.

163. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск: Вышэйшая школа. - 320с.

164. Румянцева Н.И., Сергеева Н.В., Хакимова Д.Э. Органогенез и соматический эмбриогенез в культуре двух видов гречихи // Физиология растений. 1989. - Т.З 6. - № 1. - С. 187-194.

165. Сассон А. Биотехнология: свершения и надежды. М.: Мир, 1987. -411с.

166. Селянинов Г.Г. Мировой агроклиматический справочник. Л.: Гидрометеоиздат, 1937.— 419с.

167. Сидоренко П.Г., Кунах В.А. Характер изменчивости кариотипа в популяции клеток ткани Haplopappus gracilis при длительном пассировании // Цитология и генетика. 1970. - Т.4. - № 3. - С.235-240.

168. Сидоров В.А., Сидорова Н.В. Сомаклональная изменчивость -источник генетического разнообразия у растений // Цитология и генетика. -1987. Т.21. - №3. - С.230-236.

169. Симоненко Ю.В., Глеба Ю.Ю., Кучук Н.В. «Двойная трансформация». Получение трансгенных фосфинотрицательных растений коммерческих линий гороха // Физиология растений. — 1999. Т.46. - № 6. -915-918.

170. Скаукрофт У.Р. Сомаклональная изменчивость: миф о клональном единообразии // Мобильность генома растений. М.: Агропромиздат, 1990. -С.228-260.

171. Смирнов В.А., Смирнова В.В. О генетической детерминированности каллусогенеза у томатов // Цитология и генетика. 1985. — Т. 10. - №2. -С.110-114.

172. Соболева Г.В. Микроразмножение кормовых бобов в культуре in vitro II Совершенствование селекции и технологии возделывания зерновых бобовых и крупяных культур. Орел, 1992. - С. 147-151.

173. Соболева Г.В., Зеленов А.Н. Морфогенез и регенерация растений в длительно пассируемой каллусной культуре гороха посевного Pisum sativum L. // Научное обеспечение производства зернобобовых и крупяных культур. — Орел, 2004.-С. 213-219.

174. Соболева Г.В., Кострубин М.М. Ризогенез in vitro у регенерантных побегов люпина изменчивого (L. mutabilis) // Бюллетень НТИ ВНИИЗБК. — Орел, 1993. №.37. - С.23-26.

175. Суворова Г.Н. Культивирование in vitro незрелых зародышей гречихи // Совершенствование селекции и технологии возделывания зерновых бобовых и крупяных культур. Орел, 1992. - С. 140-147.

176. Суриков И.М. Воробьева Г.А. Получение межродовых гибридов Lycopersicon esculentum Mill х Solanum licopersicoides Dun.// Доклады ВАСХНИЛ. 1987. - №1. - C.l 1-13.

177. Терновский М.Ф., Бутенко Р.Г., Моисеева И.Е. Применение культуры ткани для преодоления барьера несовместимости видов и бесплодия межвидовых гибридов // Генетика. 1972. - Т.8. - №1. - С.38-45.

178. Терновский М.Ф., Шинкарева И.К., Ларькина Н.И. Получение межвидовых гибридов табака путем опыления семяпочек in vitro II Генетика. 1976. - Т. 11. - №10. — С.40-45.

179. Тиссера Б. Эмбриогенез, органогенез и регенерация растений // Биотехнология растений: культура клеток М.: Агропромиздат, 1989. - С.97-127.

180. Тихвинская Н.С. Высокая частота морфогенетических изменений у регенерантов гороха, полученных из длительно культивируемых каллусов // Биология культивируемых клеток и биотехнология. Новосибирск, 1988. -4.1. - С. 121.

181. Тураев А., Шамина З.Б. Оптимизация состава среды для культивирования пыльников хлопчатника // Физиология растений. 1986. -Т.ЗЗ. - Вып.З. - С.565-571.

182. Фролова JI.B. Особенности популяций культивируемых клеток // Культура клеток растений М.: Наука, 1981. - С.5-16.

183. Фролова JI.B. Цитогенетическая изменчивость и автоселекция растительных клеток в условиях in vitro II Биотехнология. М.: Наука, 1984. - С.272-277.

184. Фролова JT.B., Шамина З.Б. Цитогенетическая характеристика культуры тканей растений из семейств бобовых // Цитология и генетика. -1974.- т.VIII- №5.- С.413-418.

185. Хавкин Э.Е., Забродина М.В. Наследуемые изменения в спектрах пероксидаз и эстераз у сомаклонов кукурузы // Физиология растений. 1994. -Т.41.-№6.-С.859-867.

186. Хасси Г. Размножение сельскохозяйственных культур in vitro II Биотехнология сельскохозяйственных растений. М.: Агропромиздат, 1987. -С.105-133.

187. Чайлахян М.Х., Бутенко Р.Г., Кулаева О.Н. Терминология роста и развития высших растений — М., 1982. — 54с.

188. Чернышева В.Г., Долгих Ю.И., Шамина З.Б. Влияние генетических характеристик исходных растений на морфогенный . потенциал каллусных клеток кукурузы // Доклады АН СССР. 1988. - Т.ЗОО. - № 1. - С.227-229.

189. Чеченева Т.Н., Труханов В.А. Генетическая обусловленность каллусообразования и регенерационной способности у кукурузы // Цитология и генетика. 1994. - т.28. - №5. - С.46-50.

190. Шамина З.Б. Генетика и цитология культуры ткани и растений-регенерантов // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений. -M.: Наука, 1970. -С.129-136.

191. Шамина З.Б. Генетическая изменчивость растительных клеток in vitro II Культура клеток растений. Киев: Наукова думка, 1978. - С.65-68.

192. Шамина З.Б. Андрогенез и получение гаплоидов в культуре пыльников и микроспор // Культура клеток растений. М.: Наука, 1981. -С.124-137.

193. Шамина З.Б. Мутаганез и селекция на уровне соматических клеток растений // Биотехнология. 1984. - С.260-266.

194. Шамина З.Б. Особенности генетической изменчивости соматических клеток растений // Биотехнология. 1987. - Т.З. - №3. - С.361-364.

195. Шамина З.Б., Бутенко Р.Г., Тарасов В.А. Цитологическое изучение культуры ткани табака // Генетика. 1966. - №1. - С.70-76.

196. Шамина З.Б., Фролова Л.Ф. Цитогенетическое изучение культуры ткани гаплопаппуса при длительном культивировании // Культура изолированных органов, тканей и клеток растений М.: Наука, 1970. - С. 149155.

197. Шамина З.Б., Чернышева В.Г., Хавкин Э.Е., Орлова М.И. Изоферментный анализ сомаклональных вариантов кукурузы // Доклады ВАСХНИЛ. 1990. - №7. - С.14-17.

198. Юркова Г.Н., Левенко Б.А. Изолированная культура пыльников злаков (литературный обзор) // Экспериментальная генетика растений. -Киев: Наукова Думка, 1982 С.46-65.

199. Юркова Г.Н., Левенко Б.А., Птичникова И.Б. Получение культур тканей ряда видов бобовых и злаков // Экспериментальная генетика растений. Киев: Наукова Думка, 1977. - С.131-138.

200. Яговенко Т.В. Расширение спектра исходного материала для селекции люпина с использованием методов культуры тканей // Автор, дис. .канд. биол. наук.-М., 1998. 18с.

201. Alimgazinova B.S. State of agricultural plant biotechnology in Kazakhstan // The biology of plant cell in vitro and Biotechnology. Saratov, 2003. -P.18-19.

202. Ammirato P.V. Embryogenesis // Handbook of plant cell culture. V. Techniques for propagation and breeding. -N-Y, 1983. Vl.-P.82-123.

203. Atanassov A.J., Mehandjiev A.D. In vitro induced morphogenesis in pea embryos // Comptes rendus de I'Academie bulgare des Sciences. 1979. - V.32. -No.l. -P.l 15-118.

204. Bajaj Y.P.S., Dhanju M.S. Regeneration of plants from apical meristem tips of some legumes // Curr. Sci. 1979. - V.48. - P.906-907.

205. Bayliss M.V. Chromosomal variation in plant tissue in culture // Inter. Rev. Cytol. Suppl.- 1980. P.l 13-144.

206. Bliznyuk L.G., Kondratskaya I.P. Biotechnological methods of the Meadow clover selection // The biology of plant cell in vitro and Biotechnology. -Saratov, 2003. P.48-49.

207. Bressan R.A., Hasegawa A.K., Handa Resistance of cultured higher plant cells to polyethylene glycol-induced water stress // Plant science letters. 1981. -V.21. -P.23-30.

208. Cardi Т., Adamo F., Filippone E. In vitro rooting of differentiated shoots in various genotypes of pea // Genet. Breed. 1991. - V.45. - No. 1. - P.67-69.

209. Chaleff R.S. Isolation of ergonomically useful mutants from plant cell cultures // Science. 1983. - V. 219. - No.4585. - P.676-682.

210. D'Amato F. Cytogenetics of plant cell and tissue cultures and their regenerates // Critical reviews in plant Sciences. 1985. - V.3. - P.73-112.

211. De K.K., Roy S.C. Morphogenetic investigation on pea under in vitro conditions // Bulletin of the Torrey botanical club. 1985. - V.l 12.- No.4.-P.363-367.

212. Devreux M. Regeneration of numerous shoots by in vitro culture of young pea embryos // The Pisum Newsletter. 1970. - V.2. - P. 12.

213. Edallo S., Zucchinali C., Perzenzin M., Salamini F. Chromosomal variation and frequency of spontaneous mutation associated with in vitro culture and plant regeneration in maize // Maydica, 1981. - V. 26, - P.39-56.

214. Eliasson L., Arebland K.K. Auxin effects on rooting in pea cuttings // Physiologia plantarym. 1984. - V.61. - P.293-297.

215. Evans D.A. Somaclonal variation // Plant biology. -1987. No.4. - P.59-69.

216. Evans D.A. Somaclonal variation genetic basis and breeding applications // Trends Genet. - 1989. - V.5. - No.2. - P.46-50.

217. Evans D.A., Sharp W.R. Single gene mutations in tomato plants regenerated from tissue culture // Science. 1983. - V.221. - P.949-951.

218. Evans D.A., Sharp W.R., Bravo J.E. Cell culture methods for crop improvement // Handbook of plant cell culture. -N-Y-L., 1984a. V.2. -P.47-68.

219. Evans D., Sharp W.R., Medina-Filho H. Somaclonal and gametoclonal variation // Amer. J. Bot. 1984b. - V.71. - No.6. - P.759-774.

220. Ezhova T.A. Genetic control of plant cell morphogenesis in an in vitro culture // The Biology of plant cells in vitro and biotechnology. Saratov, 2003. -P.96-97.

221. Filippone E., Cardi T. Exploitation for breeding of in vitro culture of pea explants // Genetic manipulation in plant breeding. 1986. - P.461-463.

222. Freytag A.H., Rao-Arelli A.P., Anand S.C., Wrather J.A., Owens L.D. Somaclonal. variation in soybean plant regenerated from tissue culture // Plant cell Reports. 1989. - V.8. -No.4. - P.199-202.

223. Gamborg O.L., Constabel F., Shyluk LP. Organogenesis in callus from shoot apical of Pisum sativum L. // Physiologia Plantarum. 1974. - V.30. -P.125-128.

224. Gamborg O.L., Eveleigh D.E. Culture methods and detection of glucanases in cultures of wheat and barley // Can. J. Biochem. 1968. - V.46. — No.5. -P.417-421.

225. Griga M. The study of in vitro regeneration systems in pea, Horse bean and soybean // Autoref. Kandidata boil.ved. Brno, 1990. - 28p.

226. Griga M. Direct somatic embryogenesis from shoot apical meristems of pea, and thidiazuron-induced high conversion rate of somatic embryos // Biologia Plantarum. 1998. - V.41. - No.4. - P.481 -495.

227. Griga M. Morphological alterations in sterile mutant of Pisum sativum L. obtained via somatic emdryogenesis // Biologia Plantarum. 2000. - V.43. - No. 2. — P.161-165.

228. Griga M., Stejskal J., Beber K. Analysis of tissue culture derived variation in pea (Pisum sativum L.) - preliminary results // Euphytica. - 1995. -V.85.-P.335-339.

229. Griga M., Stejskal J., Klenoticova H. Plant regeneration in soybean, pea and faba bean via somatic embryogenesis // Conference europeenne sur les proteagineux. Angers, 1992. - P.107-108.

230. Griga M., Tejklova E., Novak F. In vitro propagation of pea by axillary and adventitious bud technique // Proc. Intern. Symp. Plant Tissue Cell Cult. -Olomouc, 1984a. P.507-508.

231. Griga M., Tejklova E., Novak F.J. Hormonal regulation of growth of Pea {Pisum sativum L.) shoot apices in vitro culture // Rostl. Vyr. Olomouc, 1984b. -V.30.-No.5.-P.523-530.

232. Griga M., Tejklova E., Novak F.} Kubalakova M. In vitro clonal propagation of Pisum sativum L. // Plant Cell Tissue Organ Cult. 1986. - V.6. -P.95-104.

233. Gosal S.S., Bajaj Y. Establishment of callus tissue cultures and the induction of organogenesis in some grain-legums // Crop Improv. 1979. - V.6. -P. 154-160.

234. Handa A.K., Bressan R.A., Handa S.} Hasegawa P.M. Clonal variation for tolerance to polyethylene glycole-induced water sterss in culturel tomato cells //Plant Physiol., 1983. V.72. - P.645-653.

235. Haskins R.H., Kartha K.K. Freeze preservation of pea meristems: cell survival // Canad. J. Bot. 1980. - V.58. - P.833-840.

236. Heinz D.J., Krishnamurthi M., Nickell L.G., Maretzki A. Cell, tissue and organ culture in sugarcane improvement // Plant cell, tissue and organ culture. —N-Y-L., 1977.-P 3-17.

237. Herlt M., Jacobsen H.-J., Rasche A., Ingensiep H.W. Quantitative results of a screening experiment for estimating optimal conditions for callus induction in Pisum II The Pisum Newsletter. 1978. - V. 10. - P.20-22.

238. Hildebrandt A.C., Wilmar J.C., Johns H., Riker A.J. Growth of edible chlorophyllous plant tissues in vitro // Am. J. Bot. 1963. - No.50. - P.248-254.

239. Hussey G., Gunn H.V. Plant production in pea (Pisum sativum L. cvs. Puget and Upton) from long-term callus with superficial meristems // Plant Science Letters. 1984.-V.37.-P.143-148.

240. Ingensiep H.W., Herlt M., Jacobsen H.-J. Callus induction in pre-incubated pea embryos under different hormonal condition // The Pisum Newsletter. 1977. - V.9. - P. 16-17.

241. Jackson J., Hobbs S. Rapid multiple shoot production from cotyledonary node explants of pea {Pisum sativum L.) // In vitro Cellular Developmental biology. 1990. - V.26. - No.8. - P.835-838.

242. Jacobsen H.-J. Callus induction in pea epicotyls // The Pisum Newsletter. 1976. -V.8. — P.28.

243. Jacobsen H.-J. Biotechnology applied to grain legumes-current state and prospects // 1 Conference europeenne sur les proteagineux. Angers. - 1992. -P.99-103.

244. Jacobsen H.-I., Ingediep H.M., Herlt M., Raul M.L. Tissue culture studies in Pisum sativum II Plant cell cultures: Results and Perspectives. 1980. -P.319-324.

245. Jacobsen H.-J., Kysely W. Induction of somatic embryos in pea Pisum sativum L. \ll Plant Cell Tissue Organ Cult. 1984. - V.3. - P.319-324.

246. Jacobsen H.-J., Kysely W. Induction of in vitro regeneration via somatic embryogenesis in pea (Pisum sativum L.) and bean (Phaseolus vulgaris .) // Genetic manipulation in plant breeding. 1986. - P.445-448.

247. Jacobsen H.-J., Salha A.A. Genotype-dependent callus growth in pea // The Pisum Newsletter. 1984. - V.16. - P.27-28.

248. Kallak H., Koiveer A. Induction of morphogenesis in meristems of different cultivars of Pisum sativum L. // Plant Sci. 1990. - V.67. - No.2. -P.221-226. .

249. Kartha K.K., Gamborg O.L., Konstabel F. Regeneration of Pea (Pisum sativum L.) plants from shoot apical meristems // Z. Pflanzenphysiol. 1974. -P. 172-176.

250. Kartha K.K., Leung N.L., Gamborg O.L. Freeze-preservation of pea meristems in liquid nitrogen and subsequent plant regeneration // Plant Science Letters. 1979. - V.15. - P.7-15.

251. Kartha K.K. Culture of shoot meristems Pea // Cell culture and somatic cell genetics of plants. -1984. V.l. - C. 106-110.

252. Kosturkova G., Rodeva R., Mehandjiev A. In vitro selection sestems for Ascochyta Pisi filtrates and herbicide tolerance on pea // 4th European Conference on Grain Legumes. Cracow, 2001. Part II.-P.158-159.

253. Kubalakova M., Tejklova E., Griga M. Some factors affecting root formation an in vitro regenerated pea shoots // Biol. Plant. 1988. - V.30. - P. 179184.

254. Kysely W. Induction of somatic embryos in pea, Pisum sativum L. II The Pisum Newsletter. 1985. - V.17. - P.38-39

255. Kysely W. et al. Plant regeneration via somatic embryogenesis in pea (Pisum sativum L.) // Plant Cell Reports. 1987. - V.6. - P. 305-308.

256. Kysely W., Jacobsen H.-J. Somatic embryogenesis from pea embryos and shoot apices II Plant Cell Tissue Organ Cult. 1990. - V.20. -No.l. - P.7-14.

257. Larkin P.J., Ryan S.F., Brettell R.I., Scowcroft W.R. Heritable somaclonal variation in wheat // Theor. Appl. Genet. 1984. - V.67. - No.4. -P.443-455.

258. Larkin P.J., Scowcroft W.R. Somaclonal variation a novel source of variability from cell culture for plant improvement // Theor. Appl. Genet. - 1981. -V.60. - P. 197-214.

259. Larkin P.J., Scowcroft W.R. Somaclonal variation and crop improvement // Genetic engineering of plant an agricultural perspective. -Canberra, 1983. -P.289-314.

260. Lee M., Phillips R.L. The chromosomal basis of somaclonal variation // Ann. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol. 1988. - V.39.

261. Loiseau J., Marche C., Le Deunff Y Effects of auxins, cytokinins, carbohydrates and amino acids on somatic embryogenesis induction from shoot apices of pea // Plant Cell Tissue Organ Cult. 1995. - V.41. -P.267-275.

262. Maliga P. Isolation and characterization of mutants in plant cell culture // Annual review of plant physiology. 1984. - V.35. - P.519-542.

263. Maliga P. Isolation, characterization and utilization of mutant cell lines in higher plants II Inter. Rev. Cytol. Suppl.- 1980. P.225-250.

264. Malmberg R.L. Regeneration of gene lines of Pisum sativum from callus cultures II The Pisum Newsletter. 1979a. - V.l 1. - P.21-22.

265. Malmberg R.L. Regeneration of whole plants from callus culture of diverse genetic lines of Pisum sativum L. // Planta. 1979b. - V.146. - No.2. -P.243-244.

266. Malmberg R.L. The inheritance of the ability to regenerate plants from cell cultures of Pisum sativum L. A Preliminary analysis // The Pisum Newsletter. 1982. - V. 14. - P.39-40.

267. McCoy T., Phillips R., Rines H. Cytogenetic analysis of plant regenerated from oat (Avena sativa) tissue culture; high frequency of partial chromosome loss // Canad. J. Genet, and Cytol. 1982. - V.24. - P.37-50.

268. Molkanova O.I., Vetchinkina E.M., Suchkova N.K. Conservation of valuable plant genofond by tissue cultures // The biology of plant cell in vitro and Biotechnology. Saratov, 2003. - P.210-211.

269. Mroginski L.A., Kartha K.K. Regeneration of Pea (Pisum sativum L. cv. Century) plants by in vitro culture of immature leaflets // Plant Cell Reports. -1981. V. 1. — P.64-66.

270. Mroginski L.A., Kartha K.K. Tissue culture of legumes for crop improvement // Plant Breeding Reviews. 1984. - V.2. - P.215-264.

271. Murashige N., Skoog F. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures // Physiol. Plant. 1962. -V.15. - No. 13. -P.473-497.

272. Murashige T. Manipulation of organ culture in plant tissue cultures // Botanical Bulletin Academia Sinica. 1974a. - V.18. - P. 1-24.

273. Murashige T. Plant propagation through tissue cultures // Annual review of plant physiology. 1974b. - V.25. - P.135-166.

274. Natali L., Cavallini A. Regeneration of Pea {Pisum sativum L.). Plantlets by in vitro culture of immature embryos // Plant Breeding. 1987a. - V.99 (2). -P. 172-176.

275. Natali L., Cavallini A. Nuclear cytology of callus and plantlets regenerated from pea (Pisum sativum L.) meristems // Protoplasma- 1987b-V.141.-P.121-125.

276. Negrutti J., Beeftink F., Jacobs M. Arabidopsis thaliana as a model system in somatic cell genetics. 1. Cell and tissue culture. Plant Sci. Lett., 1975. - V.5. - No.5. — P.293-304.

277. Neskovic M., Radojevic L. Nutritional and hormonal requirements of meteor pea callus tissue // Acta Bot. Croat. 1975. - V.34. - P.43-51.

278. Nielsen S.V.S., Poulsen G.B., Larsen M.E. Regeneration of shoots from pea {Pisum sativum L.) hypocotyls explant // Physiologia plantarym. 1991. -V.82. -P.99-102.

279. Ogihara Y. Tissue culture in Hawarthia // Theor. and Appl. Genet. -1981. V.60. - No.6. - P.353-364.

280. Ozcan S., Barghchi M., Firtc S., Draper J. Efficient adventitious shoot regeneration and somatic embryogenesis in pea // Plant Cell Tissue Organ Cult. -1993.- V.34. -P.271-277.

281. Popovich E.A. Some aspects micropropagation of ornamental plants // The biology of plant cell in vitro and Biotechnology. Saratov, 2003. - P.258-259.

282. Ram J. A medium for the production of Pea {Pisum sativum ) callus // The Pisum Newsletter. 1977. - V.9. - P.48.

283. Ramsay G. Regeneration in grain legume tissue culture // Grain Legumes. 1993.-No.2.-P.16-17.

284. Rubluo A. et a 1. Plant regeneration from Pea leaflets cultured in vitro and genetic stability of regenerants // Plant Physiol. 1984. - V.l 17. - No.2. - P.119-130.

285. Rubluo A., Mroginski L.A., Kartha K.K. Morphogenetic responses of pea leaflets cultured in vitro // Plant Tissue Culture. Tokyo, 1982. - P. 151-152.

286. Russel L., Malmberg R. Regeneration of whole plant from callus culture of diverse genetic lines of Pisum sativum L. // Planta. 1979.- V.146. - No.2. -P.243-244.

287. Sacristan M.D., Melchers G. The cariological analysis of plant regenerated from tumorous and other callus culture of tobacco // Mol. And Gen. Genet. 1969. - V.105. -No.4. - P.317-333.

288. Scowcroft W., Larkin P. Somatoclonal variation and genetic improvement of crop plant // Ciba Found. Symp. Canberra, 1983. - P. 177-193.

289. Sharma G., Bello L., Sapra V. Genotypic differences in orgnogenesis from callus often triticale lines // Euphytica. 1980. - V.29. -No.3. - P.751-758.

290. Shepard J., Bidney D., Shahin E. Potato protoplasts in crop improvement in crop plants // Giba Found. Symp. Canberra, 1983. - P. 177-193.

291. Skirvin R. Natural and induced variation in tissue culture // Euphytica.-1978. V.27. - No.2. - P.241-266.

292. Skirvin R.M., Janick J. Tissue culture induced variation in scented Pelargonium spp //J. Amer. Soc. Hort. Sci. - 1976. - V.101. - P.281-290.

293. Skoog F., Miller C. Chemical regulation of growth and organ formation in plant tissues cultured in vitro II The biological action of growth substances. -1957.-No.ll.-P. 118-131

294. Smith R.H., Bhaskahan S., Miller F.R. Screening for drought tolerance in Sorghum using cell culture//IN VITRO Cell Develop. Biology, 1985. V.21, No. 10. -P.541-545.

295. Stafford A., Davies D.R. The culture of immature pea embryos // Annals of Botany. 1979.-V.44.-No.3. - P.315-321.

296. Steiskal J., Griga M. Somatic embryogenesis and plant regeneration in Pisum sativum L. // Biol. Plant. 1992. - 34. - P. 15-22.

297. Tetu T., Sangwan R.S., Sangwan-Noreel B.S. Direct somatic embryogenesis and organogenesis in cultured immature embryos Pisum sativum L. // J. Plant Physiol. 1990. - V. 137. - P. 102-109.

298. Tisserat B., Esan E.B., Murashige T. Somatic embryogenesis in angiosperms // Horticultural reviews. 1978. - No. 1. - P. 1-78.

299. Torrey J.G., Shigemura J. Growth and controlled morphogenesis in pea root callus tissue grown in liquid media // Amer. J. Bot. 1957. - V.44. P.334-344.

300. Ulrich S.E., Edmiston J.M., Kleinhofs A., Kudrna D.A. , Maatougui M. Evaluation of somaclonal variation in Bayley // Cereal Res. Commun. 1991. -V. 19. - No. 1-2. - P.245-260.

301. Van Doorne L.E., Marshall G., Kikwood R.C. Development of herbicide tolerance in pea. II. Regeneration via somatic embryogenesis // Aspects of Applicol Diology. Wellesbourne, 1991. - P.271-274.

302. Van Doorne L.E., Marshall G., Kikwood R.C. Somatic embryogenesis in pea (Pisum sativum L.) effect of explant, genotype and culture condition // Ann. Appl. Biol. - 1995. - V.126. - P. 169-179.

303. Wiesner I., Wiesnerova D., Griga M., Posvec Z. Evalution of pea somaclones by protein and DNA markers //4th European Conference on Grain Legumes. Cracow, 2001. Part II.-P. 151-151.

304. Zimmerman J. Somatic embryogenesis: A model for early development in higher plant // The Plant Cell. 1993. - V.5. - No.10. - P.1411-1423.

Информация о работе

Соболева, Галина Викторовна
кандидата сельскохозяйственных наук
Орел, 2005
ВАК 03.00.23

Диссертация

Использование культуры тканей in vitro в селекции гороха - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы