Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Иммуноферментный анализ антибиотиков и принципы его использования для лекарственного мониторинга и контроля продуктов питания

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Колосова, Анна Юрьевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Общая характеристика антибиотиков хлорамфеникола и гентамицина

1.1. Хлорамфеникол

1.2. Гентамицин

ГЛАВА 2. Методы иммунохимического анализа гентамицина

2.1. Радиоиммунологический анализ гентамицина

2.2. Флуороиммуноанализ гентамицина

2.3. Иммуноферментный и другие методы иммуноанализа гентамицина

ГЛАВА 3. Методы определения хлорамфеникола в различных биологических объектах

3.1. Методы анализа хлорамфеникола в продуктах питания

3.1.1. Физико-химические методы анализа хлорамфеникола

3.1.2. Иммунохимический анализ хлорамфеникола

3.1.2.1. Получение и свойства специфических антител

3.1.2.2. Иммунохимические методы определения остаточных количеств хлорамфеникола в продуктах питания

3.2. Методы анализа хлорамфеникола в сыворотке крови человека

ГЛАВА 4. Материалы и методы

4.1. Материалы и оборудование

4.2. Методы исследования

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 5. Влияние структуры иммунореагентов и схем проведения анализа на характеристики ИФА хлорамфеникола 60 5.1. Получение и изучение свойств иммунореагентов: конъюгатов хлорамфеникола с белками и поликлональных антисывороток

5.2 Влияние структуры и состава иммунореагентов на основные характеристики твердофазного ИФА хлорамфеникола

5.3. Сравнительное изучение трех схем проведения твердофазного иммуноферментного анализа хлорамфеникола

5.4. Определение среднечисловой константы диссоциации комплексов хлорамфеникола с поликлональными антителами методом твердофазного иммуноферментного анализа

ГЛАВА 6. Разработка и оптимизация твердофазного иммуноферментного анализа хлорамфеникола в сыворотке крови человека

6.1. Изучение сорбционного поведения антигена на полистироловой поверхности; оптимизация метода ИФА хлорамфеникола

6.2. Твердофазный ИФА хлорамфеникола в сыворотке крови человека

ГЛАВА 7. Твердофазный иммуноферментный анализ хлорамфеникола в продуктах питания животного происхождения

7.1. Влияние компонентов образца на иммуноферментный анализ хлорамфеникола в молоке

7.2. Применение метода ИФА для определения хлорамфеникола в мясе и яйцах

7.3. Корреляция результатов определения хлорамфеникола в молоке методами ИФА и ВЭЖХ

ГЛАВА 8. Разработка и оптимизация твердофазного иммуноферментного анализа гентамицина в сыворотке крови человека

8.1. Получение и свойства реагентов для ИФА гентамицина

8.2. Оптимизация условий проведения иммуноферментного анализа гентамицина

8.3. Твердофазный ИФА гентамицина в сыворотке крови человека

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммуноферментный анализ антибиотиков и принципы его использования для лекарственного мониторинга и контроля продуктов питания"

В настоящее время антибиотики широко применяются в медицинской практике для лечения различных инфекционных заболеваний. Многие антибиотики (такие как хлорамфеникол, аминогликозиды) обладают узким терапевтическим диапазоном и выраженным побочным действием, что делает потенциально опасным их бесконтрольное применение ввиду возможного проявления токсических эффектов. В целях оптимизации терапии необходимо проведение клинического мониторинга антибиотиков в связи с индивидуальными различиями в их фармакокинетике. Осуществление лекарственного мониторинга обеспечивает выбор адекватной индивидуальной дозы и схемы применения антибиотиков, повышает эффективность и безопасность лечения. Данные факты свидетельствуют о необходимости непрерывного контроля за содержанием антибиотиков в организме больных.

Некоторые антибиотики (например, хлорамфеникол) находят широкое применение не только в клинической, но и в ветеринарной практике и животноводстве в качестве лечебных и профилактических средств, вследствие чего возникла проблема возможного загрязнения продуктов питания животного происхождения остаточными количествами антибиотиков. Вместе с тем попадание в организм человека антибиотиков с пищевыми продуктами крайне нежелательно, поскольку они могут оказывать токсический эффект, чаще всего в виде возникновения аллергических реакций, дисбактериозов и других неблагоприятных явлений. Все это дает основание для самого тщательного контроля пищевых продуктов на наличие в них остатков антибиотиков.

Микробиологические и физико-химические методы, используемые для анализа антибиотиков, имеют ряд недостатков, в частности для них характерны недостаточные чувствительность, специфичность и надежность микробиологические методы), а также трудоемкая и длительная пробоподготв&ка (физико-химические методы). Поэтому актуальной является задача разработки высокоспецифичных, чувствительных, надежных, точных, относительно простых и быстрых методов определения антибиотиков, таких как иммунохимические методы анализа. В последнее время твердофазный иммуноферментный анализ получил широкое распространение для осуществления лекарственного мониторинга и антибиотикотерапии, а также для контроля продуктов питания. При разработке иммунохимических методов анализа одним из ключевых моментов является получение, характеристика и выбор реагентов. Однако, имеющиеся в литературе данные по изучению влияния структуры и состава реагентов на основные характеристики иммуноанализа антибиотиков носят фрагментарный характер. Вопрос, касающийся выбора иммунореагентов определенной структуры и оптимизации условий проведения анализа в зависимости от конкретного объекта недостаточно изучен.

Целью работы является изучение влияния структуры и состава иммунореагентов на чувствительность, предел обнаружения и специфичность иммуноферментного анализа антибиотиков на примере хлорамфеникола; разработка твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) хлорамфеникола и оптимизация метода для определения этого антибиотика в сыворотке крови человека и продуктах питания животного присхождения; разработка тест-системы для количественного определения гентамицина методом ИФА в сыворотке крови человека.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи: получить и охарактеризовать иммунохимические реагенты - конъюгаты хлорамфеникола и гентамицина с белками и поликлональные антитела к этим антибиотикам; изучить влияние структуры иммуногенов и конъюгатов для сорбции на твердой фазе на специфичность, предел обнаружения и чувствительность ИФА хлорамфеникола, подобрать сочетания иммунореагентов для разработки метода; исследовать влияние различных параметров и подобрать оптимальные условия проведения ИФА хлорамфеникола в сыворотке крови человека и продуктах питания животного происхождения, а также ИФА гентамицина в сыворотке крови; определить аналитические характеристики разработанных методик и провести корреляционные испытания результатов определения хлорамфеникола и гентамицина в реальных объектах с другими аналитическими методами.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Колосова, Анна Юрьевна

выводы

1. С использованием иммуногенов различной структуры получены и охарактеризованы поликлональные антисыворотки, специфичные к хлорамфениколу. Показано, что при использовании иммуногена, синтезированного из сукцината хлорамфеникола, были получены более высокоаффинные антитела, чем против иммуногена, полученного из диазопроизводного антибиотика (значения среднечисловых констант диссоциации комплекса хлорамфеникола с антителами в растворе составили 5.6х10"9 и 5.4х10"8 М, соответственно).

2. Синтезированы различные по структуре и составу конъюгаты хлорамфеникола с овальбумином для сорбции на твердой фазе и изучено влияние их структуры и состава на чувствительность и специфичность твердофазного ИФА хлорамфеникола. Показано, что конъюгат хлорамфеникола с овальбумином, синтезированный из сукцината хлорамфеникола (соотношение белок: антибиотик - 1:5) является оптимальным по составу и обеспечивает достижение наиболее высокой чувствительности анализа. При этом антисыворотки, полученные против иммуногена, синтезированного из сукцината хлорамфеникола, обладали специфичностью лишь по отношению к конъюгатам хлорамфеникола с овальбумином, гомологичным иммуногену по структуре, тогда как антисыворотки, полученные против иммуногена, синтезированного из диазопроизводного хлорамфеникола, - как гомо-, так и гетерологичным.

3. Разработан и оптимизирован метод твердофазного ИФА для количественного определения хлорамфеникола в сыворотке крови человека и определены его аналитические характеристики. Метод позволяет определять антибиотик в линейном диапазоне 15-500 нг/мл в сыворотке крови, разведенной в 100 раз. Проведена корреляция результатов определения концентрации хлорамфеникола в сыворотке крови больных людей методами ИФА и высокоэффективного капиллярного электрофореза. Коэффициент корреляции составил 0.973.

4. Проведено изучение влияния матрикса различных образцов на результаты твердофазного ИФА хлорамфеникола. Подобраны и оптимизированы условия проведения иммуноферментного анализа остаточных количеств антибиотика в продуктах питания животного происхождения (молоке, мясе, яйцах); определены аналитические характеристики метода. Предел обнаружения составляет 0.08 нг/мл хлорамфеникола в молоке или экстракте мяса (яиц), разведенном в 100 раз. Корреляционными испытаниями с методом ВЭЖХ (коэффициент корреляции 0.975) подтверждено, что разработанный метод позволяет надежно определять хлорамфеникол в концентрациях, соответствующих ПДУ.

5. С использованием иммуногенов, синтезированных двумя различными способами, получены и охарактеризованы поликлональные антисыворотки против гентамицина. Разработана и оптимизирована иммуноферментная тест-система для количественного определения гентамицина в сыворотке крови и выпущена опытная партия наборов реагентов в ЗАО "НПП Иммунотех". Линейный диапазон определяемых концентраций составляет 0.5-15 нг/мл гентамицина в сыворотке, разведенной в 1000 раз. Коэффициент корреляции результатов определения гентамицина в сыворотке крови с помощью разработанного метода твердофазного ИФА и поляризационного флуороиммуноанализа составил 0.943.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Колосова, Анна Юрьевна, Москва

1. Н.С. Егоров, Основы учения об антибиотиках. 1994, Москва: МГУ.

2. В.А. Гусель, И.В. Маркова, Справочник педиатра по клинической фармакологии. 1989, Ленинград: Медицина.

3. D.E. Holt, The identification and characterisation of chloramphenicol-aldehyde, a new human metabolite of chloramphenicol. Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet., 1995. 20(1): p. 35-42.

4. G.J. Burckart, F.F. Barrett, R. Delia Valle, M.C. Meyer, Chloramphenicol dosage and pharmacokinetics in infants and children. J. Clin. Pharmacol., 1983. 23(2-3): p. 106-112.

5. P.J. Ambrose, Clinical pharmacokinetics of chloramphenicol and chloramphenicol succinate. Clin. Pharmacokinet., 1984. 9(3): p. 222-238.

6. Д.Б. Меламед, B.K. Кирничная, M. Киселев, Загрязненность молока и молочных продуктов антибиотиками и химические методы их контроля: Обзорная информация. 1990, Москва: АгроНИИТЭИММП.

7. D.P. Schwartz, F.E. McDonough, Practical screening procedure for chloramphenicol in milk at low parts per billion level. J. Assoc. Off. Anal. Chem.,1984. 67(3): p. 563-565.

8. Д.Б. Меламед, Л. Костюковский, Антибиотики в пищевых продуктах. Мед. реф. ж., 1985. Разд.УП(9): с. 40-46.

9. В.К. Кирничная, Д.Б. Меламед, Определение левомицетина в пищевых продуктах, в Сборник научных трудов. 1989, Институт питания РАМН: Москва, с. 128-131.

10. Е.Н. Allen, Review of chromatographic methods for chloramphenicol residues in milk, eggs, and tissues from food-producing animals. J. Assoc. Off. Anal. Chem.,1985. 68(5): p. 990-999.

11. Производство антибиотиков, ред. C.M. Навашин. 1970, Москва.

12. J.E. Lewis, J.C. Nelson, Н.А. Elder, Radioimmunoassay of an antibiotic: gentamicin. Nature New Biology, 1972. 239: p. 214-216.

13. W.A. Mahon, J. Ezer, T.W. Wilson, Radioimmunoassay for Measurement of Gentamicin in Blood. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1973. 3(5): p. 585-589.

14. B.S. Gendeh, H. Said, A.G. Gibb, N.S. Aziz, N. Kong, Z.M. Zahir, Gentamicin ototoxicity in continuous ambulatory peritoneal dialysis. J. Laryngol. Otol., 1993. 107(8): p. 681-685.

15. A.J. Munro, J. Landon, E.J. Shaw, The basis of immunoassays for antibiotics. Journal of Antimicrobial Chemotherapy, 1982. 9: p. 423-432.

16. R.A.A. Watson, E.J. Shaw, C.R.W. Edwards, 125I-based radioimmunoassay for serum gentamicin, in Chemotherapy. 1976, Plenum: New York. p. 107-110.

17. A. Broughton ,J.E. Strong, Radioimmunoassay of iodinated gentamicin. Clinica Chemica Acta, 1976. 66. p. 125-129.

18. R.A.A. Watson, J. Landon, E.J. Shaw, D.S. Smith, Polarisation Fluoroimmunoassay of Gentamicin. Clinica Chemica Acta, 1976. 73: p. 51-55.

19. A.T.P. Уильямз, Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ, в Новые методы иммуноанализа, ред. У.П. Коллинз, 1991, Мир: Москва, с. 138-149.

20. Б.М. Бекбергенов, В.Г. Житников, Иммуноанализ на основе прямого измерения поляризации флюоресценции при изучении фармакокинетики антибиотиков. Антибиотики и химиотерапия, 1988. 33(1): с. 72-76.

21. O.S. Tayeb, А.Т. el-Tahawy, S.I. Islam, Comparison of the fluorescence polarization immunoassay and the microbiological assay methods for the determination of gentamicin concentration in human serum. Ther. Drug Monit., 1986. 8(2): p. 232-235.

22. T. Fujimoto, Y. Tsuda, R. Tawa, S. Hirose, Fluorescence polarization immunoassay of gentamicin or nitilmicin in blood spotted on filter paper. Clin. Chem., 1989. 35(5): p. 867-869.

23. M. Zaninotto, S. Secchiero, C.D. Paleari, A. Burlina, Performance of a fluorescence polarization immunoassay system evaluated by therapeutic monitoring of four drugs. Ther. Drug Monit., 1992. 14(4): p. 301-305.

24. L.O. White, A.P. MacGowan, A.M. Lovering, H.A. Holt, D.S. Reeves, D. Ryder, Assay of low trough gentamicin concentrations by fluorescence polarization immunoassay. J. Antimicrob. Chemother., 1994. 33(5): p. 1068-1070.

25. S.A. Brown, D.R. Newkirk, R.P. Hunter, G.G. Smith, K. Sugimoto, Extraction methods for quantitation of gentamicin residues from tissues using fluorescence polarization immunoassay. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1990. 73(3): p. 479-483.

26. E.J. Shaw, R.A.A. Watson, J. Landon, D.S. Smith, Estimation of serum gentamicin by quenching fluoroimmunoassay. Journal of Clinical Pathology, 1977. 30: p. 526-531.

27. E.J. Shaw, R.A.A. Watson, D.S. Smith, Continuous-flow fluoroimmunoassay of serum gentamicin, with automatic sample blank correction. Clinical Chemistry,1979. 25(2): p. 322-324.

28. В.Б. Гаврилов, C.A. Еремин, A.M. Егоров, Сравнительный анализ иммунохимического определения гентамицина по поляризации и тушению флуоресценции. Антибиотики и химиотерапия, 1992. 37(9): с. 36-39.

29. J.F. Burd, R.C. Wong, J.E. Feeney, R.J. Carrico, R.C. Boguslaski, Homogeneous reactant-labelled fluorescent immunoassay for therapeutic drugs exemplified by gentamicin determination in human serum. Clinical Chemistry, 1977. 23(8): p. 1402-1408.

30. J.D. Place, S.G. Thompson, H.M. Clements, R.A. Ott, F.C. Jensen, Gentamicin substrate-labelled fluorescent immunoassay containing monoclonal antibody. Antimicrob. Agents Chemother., 1983. 24(2): p. 246-251.

31. A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова, Теория и практика иммуноферментного анализа. 1991, Москва: Высшая школа.

32. С.М. O'Donnell, J. McBride, S. Suffin, A heterogeneous fluorescence immunoassay for gentamicin using a second antibody separation. J. Immunoassay,1980. 1(3): p. 375-383.

33. P. Varma-Nelson, J.E. Nelson, S.M. Belknap, Particle concentration fluorescence immunoassay of gentamicin. Ther. Drug Monit., 1991. 13(3): p. 260-262.

34. P.J. Wills ,R.A. Wise, Rapid, simple enzyme immunoassay for gentamicin. Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 1979. 16(1): p. 40-42.

35. T.D. O'Leary, R.M. Ratcliff, T.D. Geary, Evaluation of an enzyme immunoassay for serum gentamicin. Antimicrob. Agents Chemother., 1980. 17(5): p. 776-778.

36. H. Sakata, M. Takimoto, Y. Fujita, T. Kitsutaka, Evaluation of enzyme multiplied immunoassay technique for gentamicin assay. Comparison with bioassay. Jpn. J. Antibiot., 1982. 35(5): p. 1229-1232.

37. D.J. Pohlod, L.D. Saravolatz, M.M. Somerville, Comparison of enzyme-multiplied immunoassay technique with fluorescence polarization immunoassay for determination of gentamicin and tobramycin levels in serum. J. Clin. Microbiol.,1984. 20(5): p. 866-868.

38. M.A. Pesce ,S.H. Bodourian, Enzyme immunoassay of gentamicin with use of a centrifugal analyzer. Clin. Chem., 1981. 27(8): p. 1460-1462.

39. H.M. Heick, A.M. Mackenzie, F. Chan, C. Golas, A. Mohammed, Enzyme immunoassay of gentamicin with the Abbott ABA-100 analyzer. Clin. Biochem., 1982. 15(4): p. 217-218.

40. R.H. Glew ,R.A. Pavuk, Comparison of the Beckman Auto ICS and the Syva Autolab 6000for determination of gentamicin levels in serum. J. Clin. Microbiol.,1985. 21(1): p. 8-11.

41. J. Bearman, J. Ellis, S. Mortlock, Serum gentamicin levels: a comparison between the Syva Solaris(R) and the Syva QST(R) analysers. Brit. J. Biomed. Sci., 1995. 52(2): p. 102-105.

42. J.C. Standefer ,G.C. Saunders, Enzyme immunoassay for gentamicin. Clin. Chem., 1978. 24(11): p. 1903-1907.

43. B. Mattiasson, K. Svensson, C. Borrebaeck, S. Jonsson, G. Kronvall, Non-equilibrium enzyme immunoassay of gentamicin. Clin. Chem., 1978. 24(10): p. 1770-1773.

44. J. Ara, Z. Gans, R. Sweeney, B. Wolf, Dot-ELISA for the rapid detection of gentamicin in milk. J. Clin. Lab. Anal., 1995. 9(5): p. 320-324.

45. D. Phaneuf, E. Francke, H.C. Neu, Rapid, reproducible enzyme immunoassay for gentamicin. J. Clin. Microbiol., 1980. 11(3): p. 266-269.

46. S.T. Selepak, F.G. Witebsky, E.A. Robertson, J.D. MacLowry, Evaluation of five gentamicin assay procedures for clinical microbiology laboratories. J. Clin. Microbiol., 1981. 13(4): p. 742-749.

47. L. Nilsson, Correlation of bioluminescent assay of gentamicin in serum with agar diffusion assay, latex agglutination inhibition card test, enzyme immunoassay, and fluorescence immunoassay. J. Clin. Microbiol., 1984. 20(3): p. 396-399.

48. C.K. Kim ,K.M. Park, Liposome immunoassay (LIA) for gentamicin using phospholipase C. J. Immunol. Methods, 1994. 170(2): p. 225-231.

49. A.H. Lau ,E. Chow-Tung, Comparison of a fluorescent immunoassay with an enzyme immunoassay and a radioimmunoassay for gentamicin. Am. J. Hosp. Pharm., 1984. 41(12): p. 2647-2650.

50. J.H. Ngui-Yen, T. Hofmann, M. Wigmore, J.A. Smith, Comparative evaluation of three methods for measuring gentamicin and tobramycin in serum. Antimicrob. Agents Chemother., 1981. 20(6): p. 821-825.

51. H.A. Holt, L.O. White, K.A. Bedford, K.E. Bowker, D.S. Reeves, A.P. MacGowan, An evaluation of three new immunoassays for determination of serum gentamicin concentrations. J. Antimicrob. Chemother., 1994. 34(5): p. 747-754.

52. W. Hospes, R.J. Boskma, J.R. Brouwers, Comparison of anffPLC method with a RIA, EMIT and FIA method for the assay of serum gentamicin with extensive statistical evaluation. Pharm. Weekbl., 1982. 4(2): p. 32-37.

53. J.C. Rotschafer, C. Morlock, L. Strand, K. Crossley, Comparison of radioimmunoassay and enzyme immunoassay methods in determining gentamicin pharmacokinetic parameters and dosages. Antimicrob. Agents Chemother., 1982. 22(4): p. 648-651.

54. А. Костюковский, Д.Б. Меламед, Методы определения антибиотиков в пищевых продуктах. Мед. реф. ж., 1985. Разд.У11(5): с. 29-36.

55. Е. Neidert, P.W. Saschenbrecker, F. Tittiger, Thin layer chromatographic/bioautographic method for identification of antibiotic residues in animal tissues. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1987. 70(2): p. 197-200.

56. D.SJ. Masterson, Colorimetric assay for chloramphenicol using 1-Naphthol. J. Pharm. Sci., 1968. 57(2): p. 305-308.

57. S.M. Hassan, F. Belal, M. Sharaf El-Din, M. Sultan, Spectrophotometry determination of some pharmaceutical important nitro compounds in their dosage forms. Analyst, 1988. 113: p. 1087-1089.

58. JI. Костюковский, Д.Б. Меламед, Функциональный микроанализ хромато-спектрометрическими методами. Успехи химии, 1985. 54(2): с. 337-363.

59. J.P. Abjean, Screening of chloramphenicol residues in pork muscle by planar chromatography. J. AOAC Int., 1994. 77(5): p. 1101-1104.

60. D. Arnold, A. Somogyi, Trace analysis of chloramphenicol residues in eggs, milk and meat: comparison of gas chromatography and radioimmunoassay. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1985. 68(5): p. 984-990.

61. J.M. Wal, J.C. Peleran, G.F. Bortes, High performance liquid chromatographic determination of chloramphenicol in milk. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1980. 63(5): p. 1044-1048.

62. N. Haagsma, C. Schreuder, E. Rensen, Rapid sample preparation method for the determination of chloramphenicol in swine muscle by high-performance liquid chromatography. J. Chromatogr., 1986. 363(2): p. 353-359.

63. P. Ristuccia, Liquid chromatographic assays of antimicrobial agents. J. Liquid Chromatogr., 1987. 10(2): p. 241-276.

64. C. van de Water, N. Haagsma, Determination of chloramphenicol in swine muscle tissue using a monoclonal antibody-mediated clean-up procedure. J. Chromatogr., 1987. 411: p. 415-421.

65. C. van de Water, D. Tebbal, N. Haagsma, Monoclonal antibody-mediated cleanup procedure for the high-performance liquid chromatographic analysis of chloramphenicol in milk and eggs. J. Chromatogr., 1989. 478: p. 205-215.

66. R.M.L. Aerts, H.J. Keukens, G.A. Werdmuller, Liquid chromatographic determination of chloramphenicol in meat: interlaboratory study. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1989. 72: p. 570-576.

67. A.R. Long, L.C. Hsieh, A.C. Bello, M.S. Malbrough, C.R. Short, S.A. Barker, Method for the isolation and liquid chromatographic determination of chloramphenicol in milk. J. Agric. Food Chem., 1990. 38: p. 427-429.

68. V.M. Moretti, C. Van de Water, N. Haagsma, Automated high-performance liquid chromatographic determination of chloramphenicol in milk and swine muscle tissue using on-line immunoaffinity sample clean-up. J. Chromatogr., 1992. 583: p. 77-82.

69. G.O. Korsrud, J.M. Naylor, G.D. Salisbury, J.D. MacNeil, A comparison of three bioassay techniques for the detection of chloramphenicol residues in animal tissues. J. Agric. Food Chem., 1987. 35: p. 556-559.

70. C.J. Singer, S.E. Katz, Microbiological assay for chloramphenicol residues. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1985. 68(5): p. 1037-1041.

71. R.N. Hamburger, Chloramphenicol-specific antibody. Science, 1966. 152: p. 203-205.

72. R.N. Hamburger, J.H. Douglass, Chloramphenicol-Specific Antibody. II. Reactivity to analogues of chloramphenicol. Immunology, 1969. 17(4): p. 587-591.

73. T.D. Brock, Chloramphenicol. Exp. Chemotherapy, 1964. 3: p. 119.

74. M.C. Rebstock, H.M. Crooks, J. Controulis, Q.R. Bartz, Chloramphenicol (Chloromycetin). IV. Chemical Studies. J. Amer. Chem. Soc., 1949. 71: p. 2458.

75. R. Hack, E. Martlbauer, G. Terplan, Production and Characterization of a Monoclonal Antibody to Chloramphenicol. Food and Agricultural Immunology, 1989. 1: p. 197-201.

76. U. Samarajeeva, C.I. Wei, T.S. Huang, M.R. Marshall, Application of immunoassay in the food industry. Crit. Rev. Food Sei. Nutr., 1991. 29(6): p. 403-434.

77. S.S. Gazzaz, B.A. Rasco, F.M. Dong, Application of immunochemical assays to food analysis. Crit. Rev. Food Sei. Nutr., 1992. 32(3): p. 197-229.

78. E. Martlbauer, E. Usleber, E. Schneider, R. Dietrich, Immunochemical detection of antibiotics and sulfonamides. Analyst, 1994. 119(12): p. 2543-2548.

79. J.C. Campbell, R.P. Mageau, B. Schwab, R.W. Johnston, Detection and quantitation of chloramphenicol by competitive enzyme-linked immunoassay. Antimicrob. Agents Chemother., 1984. 25(2): p. 205-211.

80. C. van de Water, N. Haagsma, Sensitive Streptavidin-Biotin Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Rapid Screening of Chloramphenicol Residues in Swine Muscle Tissue. J. Assoc. Off. Anal. Chem., 1990. 73(4): p. 534-540.

81. C. van de Water, N. Haagsma, A Sensitive Streptavidin-Biotin Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Rapid Screening of Residues of Chloramphenicol in Milk. Food and Agricultural Immunology, 1990. 2: p. 11-19.

82. J.F.M. Nouws, J. Laurensen, M.M.L. Aerts, Monitoring milk for chloramphenicol residues by an immunoassay (Quik-card). The Veterinary Quarterly, 1988. 10: p. 270-272.

83. J. Laurensen, J.F.M. Nouws, Monitoring of chloramphenicol residues in muscle tissues by an immunoassay (La Carte test). Vet. Q., 1990. 12(2): p. 121-123.

84. C. van de Water, N. Haagsma, Analysis of chloramphenicol residues in swine tissues and milk: comparative study using different screening and quantitative methods. J. Chromatogr., 1991. 566(1): p. 173-185.

85. W.B. Burton, A. Cunningham, H. Yamazaki, A Novel Immunofluorescence Capillary Electrophoresis Assay System for the Determination of Chloramphenicol in Milk. Food and Agricultural Immunology, 1994. 6: p. 409-417.

86. W.M. Sischo, Quality milk and tests for antibiotic residues. J. Dairy Sci., 1996. 79(6): p. 1065-1073.

87. J. de Louvois, A. Mulhall, R. Hurley, Comparison of methods available for assay of chloramphenicol in clinical specimens. J. Clin. Pathol., 1980. 33(6): p. 575-580.

88. J.H. Jorgensen, G.A. Alexander, Rapid bioassay for chloramphenicol in the presence of other antibiotics. Am. J. Clin. Pathol., 1981. 76(4): p. 472-475.

89. R. Daigneault, M. Guitard, An enzymatic assay for chloramphenicol with partially purified chloramphenicol acetyltransferase. J. Infect. Dis., 1976. 133(5): p. 515-522.

90. A.L. Smith, D.H. Smith, Improved enzymatic assay of chloramphenicol. Clin. Chem., 1978. 24(9): p. 1452-1457.

91. A.F. Weber, K.E. Opheim, J.R. Koup, A.L. Smith, Comparison of enzymatic and liquid chromatographic chloramphenicol assays. Antimicrob. Agents Chemother., 1981. 19(2): p. 323-325.

92. H.C. Morris, J. Miller, R.S. Campbell, P.M. Hammond, D.J. Berry, C.P. Price, A rapid, enzymatic method for the detection of chloramphenicol in serum. J. Antimicrob. Chemother., 1988. 22(6): p. 935-944.

93. S. Yamato, H. Sugihara, K. Shimada, An enzymatic assay of chloramphenicol coupled with fluorescence reaction. Chem. Pharm. Bull., 1990. 38(8): p. 2290-2292.

94. L.R. Robinson, R. Seligsohn, S.A. Lemer, Simplified radioenzymatic assay for chloramphenicol. Antimicrob. Agents Chemother., 1978. 13(1): p. 25-29.

95. J.G. Schwartz, D.T. Casto, S. Ayo, J.J. Carnahan, J.H. Jorgensen, A commercial enzyme immunoassay method (EMIT) compared with liquid chromatography and bioassay methods for measurement of chloramphenicol. Clin. Chem., 1988. 34(9): p. 1872-1875.

96. A.K. Чарыков, Математическая обработка результатов химического анализа. 1984, Ленинград: Химия.

97. И.Е. Ковалев, О. Полевая, Биохимические основы иммунитета к низкомолекулярным соединениям. 1985, Москва.

98. О. Полевая, И.В. Залинова, Н.П. Данилова, Л.И. Дуранова, И.Е. Ковалев, Синтез и иммунотропная активность конъюгата холестерина с белком. Химико-фармацевтический журнал, 1978. 12(6): с. 35-41.

99. Иммунологические методы, ред. Г. Фримель. 1987, Москва: Медицина.

100. G.L. Long, J.D. Winefordner, Limit of Detection. A Closer Look at the IUPAC Definition. Anal. Chem., 1983. 55(7): p. 712A-724A.

101. B. Friguet, A.F. Chaffotte, A. Djavadi-Ohaniance, M.E. Goldberg, Measurements of True Affinity Constant in Solution of Antigen-Antibody Complexes by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. J. Immunol. Methods, 1985. 77: p. 305-319.

102. P. Tijssen, Practice and Theory of Enzyme Immunoassay, in Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, R.H. Burdon and P.H. Knippenberg, Editors. 1985, Eds. Elsevier Verlag: Amsterdam.

103. Б.Б. Дзантиев, Некоторые закономерности иммунохимического анализа методом последовательного насыщения. Прикладная биохимия и микробиология, 1988. 24(вып.6): с. 830-838.

104. Б.Б. Ким, Физико-химические закономерности взаимодействия пероксидазы хрена с поликлональными и моноклональными антителами. Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук. 1990, Москва.

105. Н. Fiebig, Н. Ambrosius, Valenz und affinitat von anti-dinitrophenyl-antikorpem. Acta Biol. Med. Germ., 1975. 34: p. 1681-1695.

106. М.П. Черников, Протеолиз и биологическая ценность белков (казеины как собственно пищевые белки). 1975, Москва.