hobo-элемент как фактор нестабильности генома Drosophila melanogaster в клетках генеративных и соматических тканей

Коваленко, Людмила Викторовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
hobo-элемент как фактор нестабильности генома Drosophila melanogaster в клетках генеративных и соматических тканей
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "hobo-элемент как фактор нестабильности генома Drosophila melanogaster в клетках генеративных и соматических тканей"

На правах рукописи УДК 575.1:575.11: 575.224.4:595.773.4

003064365

КОВАЛЕНКО ЛЮДМИЛА ВИКТОРОВНА

Аобо-ЭЛЕМЕНТ КАК ФАКТОР НЕСТАБИЛЬНОСТИ ГЕНОМА ВгозорЫЫ melanogaster В КЛЕТКАХ ГЕНЕРАТИВНЫХ И СОМАТИЧЕСКИХ ТКАНЕЙ

03.00.15-генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 3 А В Г 2007

Новосибирск 2007

003064565

Работа выполнена в Лаборатории генетики популяций Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск.

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Захаров Илья Кузьмич Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Бугров Александр Геннадьевич Институт систематики и экологии животных СО РАН, г. Новосибирск

доктор биологических наук Омельянчук Леонид Владимирович Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Ведущее учреждение: Кафедра генетики биологического факультета

Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова, г. Москва

Защита диссертации состоится 19 сентября 2007 года на утреннем заседании диссертационного совета Д-003.011.01 в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале Института по адресу: проспект акад. Лаврентьева 10, г. Новосибирск, 630090. тел/факс: (383)3331278, e-mail: dissov@bionet.nsc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан августа 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

А.Д. Груздев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Мобильные генетические элементы (МЭ) являются важными объектами исследования современной генетики. Они распространены повсеместно и составляют существенную часть геномной ДНК многих изученных организмов. МЭ способны увеличивать число своих копий в геноме хозяина, и, благодаря определенной структурной организации, могут перемещаться как в пределах одной хромосомы, так и между хромосомами. МЭ существенно влияют на структуру генома, встраиваясь в гены или окрестности генов и вызывая генные мутации, являясь причиной хромосомных перестроек, изменяя - как понижая, так и повышая - уровень активности генов (Kidwell, Lisch, 1997). Возникающие мутационные изменения могут не сказываться на жизнеспособности организма. В редких случаях мутационные изменения могут иметь адаптивное значение, однако, чаще всего, мутации вредны для организма и приводят к стерильности или гибели особей.

Перемещения МЭ у дрозофилы происходят преимущественно в клетках зародышевого пути. Попытки выявить активность МЭ в клетках соматических тканей долгое время не были успешными, и сохранялось представление о том, что перемещения МЭ у дрозофилы ограничены половыми клетками (Thompson et al., 1977; Engels, 1979; Bingham et ai, 1982; McEIvvain, 1986). Большая часть этих работ была проведена с использованием генетических методов и моделей на линиях Drosophila melanogaster при Р-М-гибридном дисгенезе. Молекулярными методами было подтверждено, что перемещения Р-элемента в клетках соматических тканей заблокированы за счет особенностей сплайсинга (Laski et al., 1986). Для hobo-элемента так же предполагается тканеспецифичная регуляция продукции транспозазы, но на уровне транскрипции (Calvi, Gelbart, 1994). В ряде работ были описаны случаи перемещения ретротранспозонов в соматических тканях у высших организмов (Georgiev et al., 1990; Kim, Belyaeva, 1991; Driver, McKechnie, 1992). Что касается транспозонов, до сих пор сохраняется неясность в вопросе о возможности их перемещения в соматических клетках у Drosophila melanogaster. Выявление возможности и изучение особенностей транспозиций МЭ в соматических клетках имеет большое значение, поскольку в ряде работ описан повреждающий эффект соматических перемещений Р-элемента (Engels et. al., 1987; Woodruff, 1992). Более того, соматические мутации представляют собой потенциальную угрозу малитизации клеток.

hobo относится к классу транспозонов. Наряду с Р- и /-элементами, hobo-элемент обусловливает гибридный дисгенез у D. melanogaster (Bingham, 1982; Blackman et al., 1987; Yannopoulos et al., 1987; Bucheton, 1990). Считается, что hobo-элемент внедрился в геном Drosophila melanogaster в прошлом столетии и, в связи с этим, очень активен и вызывает большое количество мутаций (Kidwell et al., 1983; Pascual, Periquet, 1991).

Исследование активности /гобо-злемснта мы проводили на линиях популяции Drosophila melanogaster Умани, где была обнаружена вспышка мутабильности по гену yellow, которая продолжалась с 1982 по 1991 гг. (Захаров, Голубовский, 1985; Голубовский и др., 1987; Захаров, Скибицкий, 1995). Причиной вспышки явился hobo-элемент, который внедрился в регуляторную область гена yellow, и в

результате событий, таких как инверсии, реинверсии, делеции ДНК, происходивших между копиями hobo-элементов в гене yellow и его окрестностях, у мух наблюдалась высокая частота мутирования от нормального фенотипа к мутаигтному и обратно (Грачева и др., 1998; Захаренко и др., 2004). Было показано, что помимо сайта в гене yellow существуют и другие сайты гибридизации hobo в геноме уманских линий (Захаренко и др., 2000, Захаренко и др., 2004), однако оставался открытым вопрос об активности hobo в других точках его локализации в геноме.

Изучение особенностей поведения в геномах разных линий D. melanogaster широко распространенного в природных популяциях fobo-элемента является актуальным, поскольку МЭ имеют существенное значение в формировании генетической изменчивости.

Цели и задачи работы. Целью данной работы является исследование транспозиционной активности hobo-элемента в клетках генеративных и соматических тканей в линиях Drosophila melanogaster, выделенных из природной популяции Умани в период вспышки мутаций по теку yellow.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Описать распределение полноразмерных и делегированных копий hobo-элементов в геноме D. melanogaster в природной популяции Умани в динамике за период 1979-2004 гг.

2. Оценить уровень нестабильности генов в Х-хромосомах линии у2'717 D. melanogaster Умани, используя метод рецессивных, сцепленных с полом летальных мутаций.

3. Провести исследование транспозиционной активности /гобо-элементов в ряду последовательных поколений в линии у2'717 D. melanogaster и у производных этой линии на основе анализа паттерна сайтов локализации hobo в Х-хромосомах самцов.

4. Выявить наличие/отсутствие транспозиционной активности hobo в клетках соматических тканей hobo-содержащих линий D. melanogaster с использованием методов (1) соматических мутаций и рекомбинаций на клетках крыла и (2) флуоресцентной in .гйн-гибридизации на политенных хромосомах клеток слюнных желез.

5. Изучить влияние радиации, как внешнего мутагенного фактора, на картину распределения йобо-элемснтов в политенных хромосомах в mmmy7'7 D. melanogaster.

Научная новизна работы. Для генетически нестабильных линий Drosophila melanogaster, выделенных из природной популяции Умани, впервые получены цитогенетические данные о распределении и транспозиционной активности /гобо-элемента в гене yellow и других локусах Х-хромосомы, которые дополняют проведенные • ранее молекулярно-генетические исследования локусспецифической нестабильности гена yellow. Показано, что нестабильность гена yellow исследованных /"^-производных, вызванная активностью hobo-

элемента, является маркером активности hobo- и Р-элементов в других локусах X-хромосомы.

Впервые описано, что в У~7/7-Х-хромосоме при проведении скрещиваний с самками со сцепленными Х-хромосомами (у 7'7-Х-хромосома наследуется патрнлинейно), наряду с межаллельными переходами в локусе yellow наблюдается увеличение числа копий hobo. В ряду j/"7'7-производных, отмечена особешюсть в поведении hobo-элементов - преобладание частоты инсерций над частотой эксцизий hobo в Х-хромосомах.

В выделенной из природной популяции Drosophila melanogaster /^-лшши, не подвергавшейся воздействиям, индуцирующим транспозиции МЭ, обнаружена способность hobo к перемещениям в клетках соматических тканей.

Положения, выносимые на защиту. В результате проведенного исследования показано, что /гобо-элемент проявляет высокую активность в клетках соматических и генеративных тканей уманских линий Drosophila melanogaster и обусловливает их генетическую нестабильность. Супернестабильность локуса yellow служит маркером активности hobo- и Р-элементов в Х-хромосоме в целом. Транспозиционная активность /гобо-элементов исследованных систем после индуцирующих транспозиции скрещиваний способна сохраняться в течение многих десятков поколений и каждое новое скрещивание вызывает увеличение числа и частоты транспозиций hobo в Х-хромосомах.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты развивают теоретическое представление о закономерностях поведения hobo в геноме дрозофилы, а также дополняют картину происходящих с hobo-элементом процессов в локусе yellow и в геноме линий уманской популяции Drosophila melanogaster.

В работе получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что hobo-элемент способен проявлять транспозиционную активность в клетках соматических тканей Drosophila melanogaster, выделенных из природной популяции.

Полученные результаты вносят вклад в представления об особенностях поведения транспозонов в соматических и генеративных тканях Drosophila melanogaster. Результаты работы следует учитывать в исследованиях, посвященных изучению активности МЭ у дрозофилы.

Результаты используются в курсе "Эволюционное учение" ФЕН НГУ.

Структура и объем диссертации. Диссертация содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты, обсуждение, выводы и список литературы. Работа изложена на 116 страницах, включает 27 рисунков и 11 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Линии мух. В работе изучали линии, выделенные из природной популяции Drosophila melanogaster Умани (Украина) с 1979 по 2004 гг., а также серию

производных линий, полученных от уманской линии у2'717. При анализе использовали следующие лабораторные линии: C(I)DX,ywf/Y\ Мёллер-5 - In (1) scsn sc8™, scsi sc8 w" В; маркерные линии mwh и ßr3/TM3\ линии-доноры полноразмерного hobo-элемента - линию Uc-1 iy59b z w'/Y), предоставленную Дж. Лимом, и линию Uc-1-U (y+w N*/Y), - рекомбинант по Х-хромосоме, полученный в результате скрещиваний между линиями Uc-1 и )?~743*рп cvvfB, нестабильной по гену yellow (рекомбинант получен Л.П. Захаренко); линию C(l)DXyf,iz2 (л2), которая имеет Р-цитотип; линию-донора полноразмерного Р-элемента - Harwick, нормальные лабораторные линии Oregon R и Canton S.

Процедура получения производных линий. Серия производных линий была получена от линии у (рис. 1). Каждая новая производная линия брала начало от вновь возникающего фенотипически мутантного/нормалыюго по гену yellow самца путем последующего скрещивания с самками со сцепленными Х-хромосомами C(I)DX,ywf/Y. Таким образом, самцы всех производных линий имеют одну и ту же Х-хромосому, ведущую свое происхождение от исходного самца линии У"7'7 (производные линии были получены М.А. Волошиной).

yJ 717 (Умзнь 1983)

yJ 717(15) (11.1996) у* 717а (11. 1996) у1 717а1 (01.1597)

у* 717alk (03.1997)

yJ 717alk3 (09.1998) у* 717alk3-2 (02.1998)

Рис. 1. Схема получения производных линий D. melanogaster от исходной линии у2'717 из Умани. В скобках указан месяц и год получения производной линии. Фенотипы: у2 - желтое тело, коричневые щетинки; у1 - желтое тело, желтые щетинки; у1' - средний вариант между у2 и у1; у+ - серое тело.

Метод Мёллер-5 или РЦПЛМ для обнаружения и учета рецессивных летальных мутаций в Х-хромосоме. Девственных самок Мёллер-5 скрещивали с самцами контрольной (Canton S) и опытной (уг~7'7) линий. Фенотипически нормальных самок Fj, гетерозиготных по Х-хромосоме, индивидуально скрещивали с самцами Мёллер-5. Если в Х-хромосоме самца-родителя летальная мутация не возникала, то в F2 в каждой семье должны быть представлены все 4 класса потомков в соотношении 1:1:1:1. Если же самка из F] несла летальную мутацию, то в данной семье в F2 нормальные самцы отсутствовали (Медведев, 1968).

Тест на соматические мутации и рекомбинации (SMART) В тесте использовалась линия, несущая маркерную мутацию multi wing hairs (mwh\ 3 - 0,3),

расположенную на самом конце ЗЬ-хромосомы, поэтому любые одиночные рекомбинации, происходящие в этом плече, можно выявить при анализе количества щетинок на клетках крыла имаго. Препараты делали из крыльев мух Fi, полученных при скрещивании самок линии mwh с самцами анализируемых линий.

Облучение мух. Из потомков одной самки линии у2"7'7 сформировали группы, которые подвергали -/-облучению на установке 60Со по следующей схеме: дозой 30 Гр (группа 30-1) и 3 Гр (группа 3-1) однократно, дозой 30 Гр (группа 30-4) и 3 Гр (группа 3-4) четыре поколения подряд. В каждом поколении для облучения отбирали самцов и девственных самок в 1-3-дневном возрасте. После облучения 1-го самца и 3-х самок помещали в пробирку, так формировали 30-40 семей в каждой группе. В опытных группах 3-1 и 30-1 анализировали личинок Р\ в группах 3-4 и 30-4 - личинок F4. В группе 30-5/ц мух облучали 5 поколений подряд дозой 30 Гр (облучение этой группы проводила М. Перепелкина), анализ проводили спустя И поколений. В этом эксперименте была взята массовая культура линии у2'717, отдельных семей не формировали.

Мечение ДНК зондов. В качестве зондов использовали клонированную ДНК полноразмерной копии /гобо-элемента в составе плазмиды PsB4, предоставленную Дж. Лимом, а так же клонированную ДНК Р-элемента (pTurbo), предоставленную С. Демаковым. Мечение зондов проводили с помощью метода ник-трансляции. ДНК hobo-элемента метили biodUTP («Медиген» Россия), ДНК Р-элемента -дигоксигенином (Roche Diagnostics GmbH, Германия). Реакцию проводили с помощью набора для ник-трансляции («Медиген» Россия) в реакционной смеси объемом 50 мкл, включающей: 1х буфер, dATP, dCTP, dGTP по 0,08 мМ каждого, biodUTP - 0,04 мМ (для hobo) или 1 нМ digoxigenin-11-dUTP (для Р), ДНК-полимераза I Е. coli - 10 единиц, ДНКаза I — 4нг, ДНК PsB4 или pTurbo — 1-2мкг. Смесь инкубировали при 16°С в течение 2 час. Реакцию останавливали добавлением 1 мкл 0,5М EDTA.

Флуоресцентная in .»'///-гибридизация. Приготовление давленых препаратов слюнных желез личинок Drosophila melanogaster осуществляли по описанной ранее методике (Biemont et al., 2002). Процедуру гибридизации выполняли по стандартному протоколу, состав гибридизационного раствора: 50 % формамид, 10% декстран-сульфат, 4xSSC (0,6М NaCl; 0,6М цитрат натрия), lxDenhardt (0,1 г фикола, 0,1 г поливинилпирролидона, 0,1 г BS А и до 10 мл Н20), 0,1 M фосфатный буфер (Na2HP04-NaH2P04, рН=7,6) и меченая ДНК зонда. Меченую ДНК добавляли из расчета 20 нг на препарат.

Для окрашивания хромосом использовали краситель DAPI с антифейдом (Vectashield, Vector). Микроскопический анализ препаратов проводили на микроскопе Axioskop-2 Plus. Ввод цифровой информации осуществляли с помощью черно-белой CCD-камерыVC44 (PCO:) с матрицей 756 на 581 пикселя, PC (Pro, 500МН, 128 MB, 11 GB). Использовали пакеты программного обеспечения ISIS3 (/« Situ Imaging System) компании MetaSystems GmbH.

ПЦР-аналнз. Выделение ДНК из мух производили в соответствии с методикой (Bender et al., 1983). ПЦР-реакцию проводили в общем объеме 25 мкл, конечные концентрации веществ в растворе: магний хлористый - 4 мМ, праймеры-1 мМ, dNTP - 0,4 мМ каждого, 1х буфер Taq-ДНК-полимераза (1,5 мМ MgCl2, 65 мМ Трис-HCl, рН=8,9, 16 мМ (NH02SO.,, 0,05% Твин 20), Гл?-полимераза 0,04

ед/мкл; геномную ДНК добавляли из расчета 20-50 in- на пробу. Для /гобо-элемента использовали праймеры (gcgccatacataatgattg (5'-праймер) и ctattgcgagttgtttag (3'-праймер) Параметры ПЦР реакции: начальная денатурация 94°С, 3 мин., последующая денатурация 94°С, 30 сек., отжиг 54°С, 30 сек., синтез 72°С, 1мин. 40 сек., циклов 35, элонгация 72°С, 5 мин. Для Р-элемента использовали праймеры gagaggaaaggttgtgtgcggacga (прямой), gcttgcaataagtgcgagtgaaagg (обратный); параметры ПЦР реакции: начальная денатурация 94°С, 3 мин., последующая денатурация 94°С, 1 мин., отжиг 65°С, 1 мин., синтез 72°С, 2 мин., циклов 29, элонгация 72°С, 5 мин. (Sentry, 1994).

Статистическая обработка данных. Для подсчета достоверности различий между числом обнаруженных рецессивных летальных мутаций в контроле и опыте, а так же достоверности различий между частотой мутирования на клетку крыла в конггроле и опыте применяли метод %2. Достоверность различий между частотой эксцизий и инсерций hobo- и Р-элементов в Х-хромосомах D. melanogaster оценивали методом Фишера (Васильева, 2004).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Анализ популяции Drosophila melanogaster Умани на наличие/отсутствие hobo- и Р-элементов. ПЦР-анализ линий D. melanogaster, выделенных из уманской популяции с 1979 по 2004 гт., на наличие полноразмерных и делегированных копий Аобо-элементов показал, что полноразмерный hobo присутствует в геноме большей части исследованных линий, набор делегированных производных /гобо-элемента в каждой линии уникален. В выборке 1979 г. присутствуют дефектные hobo-последовательности, следовательно, до начала периода вспышки мутабильности по гену yellow, которая была зафиксирована с 1982 по 1991 гг., в популяции Умани уже присутствовали делегированные Aoio-элементы.

С помощью FISH-анализа проведена оценка количества и распределения hobo в Х-хромосомах уманских линий. Особи этой популяции различаются между собой как по количеству /юбо-элементов, так и по сайгам их локализации в X-хромосомах. Среднее количество /гобо-элементов в Х-хромосомах разных линий составило 10,2, что является высоким по сравнению с данными для других популяций. Так, среднее число hobo на Х-хромосому для популяции Drosophila melanogaster Бийска составляет 2,7, для популяций Азербайджана - 4,8 (Biemont et al., 1988; Кожемякина, Фурман, 1995). По длине Х-хромосомы /гобо-элеметы распределены, в целом, равномерно, хотя можно указать "горячие" точки локализации hobo - районы 4EF, 7ВС, 7D и 12EF. Районы 7ВС и 12 EF, согласно литературным данным, являются районами интеркалярного гетерохроматина (Zhimulev et al., 1982; Кожемякина, Фурман, 1995). Ранее было показано, что "горячие" точки локализации йобо-элемента примерно в 70 % приходятся на районы интеркалярного гетерохроматина, что говорит о предпочтительном встраивании hobo в гетерохроматиновые участки хромосом (Кожемякина, Фурман, 1995).

ПЦР-анапиз ДНК уманских линий D. melanogaster показал, что большая часть исследованных линий не содержит полноразмерного Р-элемента. Для всех исследованных линий уманской популяции характерно присутствие четко

выраженного сигнала, соответствующего размеру 1 тпн. Данные последовательности являются, вероятнее всего, ЯР-элементами - делегированными производными Р-элемента, широко распространенными в современных популяциях D. melanogaster (Black et al., 1987; Biemont et al, 1990b; Itoh et al., 2004).

Оценка линии у2"777 с помощью теста РСПЛМ. Оценивали активность hobo-элемента в нестабильной уманской линии у1'717 D. melanogaster по частоте возниюговения летальных мутаций в Х-хромосомах (табл. 1).

Таблица 1. Частота возникновения рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций в линии у2"7'7 из уманской популяции О. melanogaster.

Линия Проанализировано Выявлено летальных мутаций

гамет число частота (хЮ"3)

Oregon R (контроль) 787 1 1,2

/7;7(опыт) 3296 12 3,6

* Результаты получены при участии М.П. Перепелкиной.

В линии у2'717 частота возникновения легальных мутаций составила З,6х10"3; в контрольной линии Oregon R - 1,2х10"3. Разница в частоте возникновения рецессивных сцепленных с полом летальных мутаций между линиями статистически недостоверна, метод (р< 0,05). Это свидетельствует о том, что, либо /гобо-элемент не активен в У'7'7-линии, либо его перемещения не зарегистрированы, поскольку не затрагивают важных генов. Таким образом, с помощью данного теста, нам не удалось подтвердить наличие активности hobo в

2-717

линииу

Анализ распределения hobo- и Р-элементов в Х-хромосомах линии у2'7'7 и ее производных. С помощью флуоресцентной гибридизации in situ выявляли картину распределения и оценивали частоту транспозиций hobo- и /"-элементов в Х-хромосомах линий у2'717 и фенотипически нормальных и мутантных у2'7 7-производных Проведенный семейный анализ показал, что у каждой новой производной линии количество копий hobo на Х-хромосоме увеличивается (рис. 2).

Рис. 2. Число сайтов гибридизации hobo на Х-хромосомах в ряду у2" 7,7-производных линий. 1-у2-7'7, 2.у2-717(,5>,

h-у*'717", 4-у2'717"1, , 2-717а1кЗ , . ll-717alk3-2

b-y , о-у

линии

Так, если на у2' 1'- Х-хромо сомах 9 сайтов гибридизации /Ыю-злемента, то на X-хромосоме производной линии y!''7!'"-tJ-^ которая появилась примерно через пятнадцать поколений от момента получения первой производной, число сайтов гибридизации hobo увеличилось в 3 раза (рис. 3). При сравнении рисунков

Рис. 3. In situ-гибридизация

Ао0о-элементов на X-

2.717

хромосомах линии у

и производной линии

И-ЬШьз-г

(изображение инвертировало).

2-1П

а) линия у

б)линия у '

2-717

распределения hobo в Х-хромосомах производных линий и исходной линии у ' частота перемещения /»¿»-элемента у производных достигает 1,2x10~э на сайт, на Х-хромосому, за поколение (рис. 4),

12 10 -8 -6 4 2 О

4,7

3,5

\г 11,6

7,3 8.3

?д Tfi 13: ■ Ж

0,7 0,7 .0,6

2 3 4 5

Линии

□ инсерции ' ■ эксцизии ¡

Рис. 4. Анализ динамики fej^o-элементов в Х-хромосомах производных линий а сравнении с исходной линией v2'71' D. mulanogaster. I-у2'717. 2-у1'7''7"3', Ъ-у^7'7"

. 2-7 17а 1 . 2-7Па!к) , 1Ю17з1Ш? п » ji «i t

4-у , 5-у , 6-у . Различие между частотой эксцизий и инсерций hobo

статистически достоверно: **-(Р>0,99); *** --<Р>0,999) (сравнение проводили внутри каждой линии); указана частота на сайт, на X-хромосому, за поколение.

Из 9 сайтов гибридизации hobo, присутствующих на У" '-Х-хромосоме, 8 сайтов сохраняются у всех проанализированных производных. Таким образом, "старые" сайты hobo проявляют высокую консервативность, при росте числа hobo-инсерций у у2"' -производных. Появляющиеся ноные сайты локализации

hobo так же обладают высокой устойчивостью - частота инсерций hobo в четырех линиях из пяти с высокой достоверностью превышает частоту эксцизий при сравнении сайтов локализации hobo на Х-хромосомах самцов производных линий с исходной линией у2"7'7 (рис. 4). Сходная ситуация описана для элемента Stalker - показано, что эксцизии этого МЭ происходят намного реже инсерций (Georgiev et al., 1990). Несмотря на то, что и Р- и Лобо-элементы имеют сходный механизм перемещения, в большинстве исследованных нами линий разницы между частотой Р-эксцизий и Р-инсерций не обнаружено. Заметим, что Stalker -ретротранспозон, а Р и hobo — транспозоны. Вероятно, механизм перемещения не играет определяющей роли в образовании инсерций и эксцизий МЭ.

В двух производных линиях - у2'717"1113 и у"-717а1к3-2^ обнаружена крупная инверсия Х-хромосомы - In(l)lB; 13CD, фланкированная /гобо-элементами и образовавшаяся, вероятнее всего, при рекомбинации между двумя разнонаправленными hobo (Sheen et al., 1993; Lim, Simmons, 1994, Gray, 2000). Для линии у '-7,7aIk3-2 характерны следующие свойства: (1) наличие эктопических контактов на Х-хромосоме и между хромосомами; (2) длительная нестабильность hobo, о которой свидетельствуют различия по распределению сайтов hobo-гибридизации на Х-хромосомах у всех взятых для анализа личинок; (3) сниженная продолжительность жизни мух (Захаренко, неопубликованные данные). Все эти события, возможно, связаны с возрастанием числа сайтов hobo в Х-хромосомах этой линии. Предполагается, что различия в местах расположения и числе мобильных элементов могут коррелировать с жизнеспособностью (Гвоздев, Кайданов, 1986). Также считается, что при скоплении большого числа МЭ одного семейства могут активизироваться процессы эктопической рекомбинации между этими МЭ, расположенными в негомологичных участках хромосом, что может приводить к снижению жизнеспособности организмов (Montgomery et al., 1987; Charlesworth et al., 1992). Возможно, эктопическая рекомбинация и инверсии являются защитными механизмами, "включающимися" в ответ на увеличенное число /юбо-элементов на Х-хромосоме.

Подобная картина нестабильности описана в работах, где в системе скрещиваний, активизировавших транспозиции hobo и Stalker, наблюдали большое количество мутаций по разным локусам, были выявлены случаи аномальной рекомбинации и различные хромосомные перестройки (Буфф и др., 1992, 1993). Авторы считают, что существует общий механизм дестабилизации генома дрозофилы, вовлекающий процессы рекомбинаций и транспозиций МЭ и именно /гоЬо-элементу может принадлежать решающая роль в запуске процесса дестабилизации. Возможно, что и в случае .^"'-производных серия последовательных скрещиваний привела к общей дестабилизации генома, с которой могут быть связаны наблюдаемые нами хромосомные перестройки, эктопическая рекомбинация, нестабильность hobo- и Р-сайтов гибридизации.

Почему же скрещивания между самцами линии у2'717 и самками линии C(I)DX,ywf/Y могли привести к дестабилизации генома и можно ли отнести данные скрещивания к дисгенным? С помощью ПЦР-анализа мы выявили наличие полноразмерного hobo-элемента в геноме самок линии C(I)DX,ywf/Y, в то время как самцы исходной линии у1'717 и её производных не имеют полноразмерного hobo. Поскольку генетический состав аутосом у самок и самцов общий, полноразмерная

копия или копии /гобо-элементов должны быть в составе C(IJDX,ywf-xpouocoM, которые передаются только дочерям. Возможно, в цитоплазме яиц самок присутствует транспозаза в виде готового продукта и этим объясняется индукция транспозиций hobo у самцов. Есть данные, что для системы Н-Е, в отличие от Р-М системы гибридного дисгенеза, направление скрещивания не имеет значения (Blackman et al, 1987; Lim, 1988, Bazin, Higuet, 1996; OHare et al., 1998). Следовательно, hobo-гибридный дисгенез может иметь место уз/'7,7-ггроизводиых.

Анализ распределения Р-элементов в Х-хромосомах производных линий выявил, что общее количество сайтов гибридизации Р-элементов в ряду производных изменяется незначительно (рис. 5). Однако, при сравнении картины локализации Р-элемента в Х-хромосомах исследуемых производных линий и исходной линии у2'717, частота Р-транспозиций у производных достигает 7хЮ"3 на сайт, на Х-хромосому, за поколение, что превышает спонтанный уровень.

Рис. 5. Число сайтов гибридизации Р на Х-хромосомах в ряду у2' -производных линий.

1 -у1-1", 2-у2-717"5', Ъ-у*'717а, 4-у2'717"1,

у2-717а!кЗ ll-7I7alk3-2

По результатам ПЦР-анализа, ни у самцов линии у2'717 и производных линий, ни у самок линии C(I)DX,ywf/Y, не выявлено полноразмерного Р-элемента, хотя делегированные Р-последовательности в геноме этих линий присутствуют. Причина перемещения Р-элементов в исследуемых линиях остается неясной. Можно предположить, что делегированные Р-последовательности способны каким-то образом компенсировать друг друга и могут восстанавливать способность к продуцированию транспозазы - но это мало вероятно, или же возможна кросс-индукция Р-транспозиций транспозазой какого-либо другого МЭ. Хотя для Р-элемента данных по кроссмобилизации не приводилось, такая возможность не исключена (Sundararajan et al., 1999). Было обнаружено, что hobo-транспозаза способна взаимодействовать с терминальными последовательностями не только /юбо-элемента, но и Яегае^-элемента.

Анализ линий Drosophila melanogaster на активность Aoéo-элемента в клетках соматических тканей. Для того чтобы выявить наличие активности hobo в клетках соматических тканей, мы изучали характер влияния полноразмерных копий Аобо-элемента на частоту образован™ соматических мозаиков на клетках крыла и анализировали их распределение в хромосомах линий Drosophila melanogaster.

Соматические мозаики на клетках крыла Drosophila melanogaster. В эксперименте было проведено скрещивание самцов из линий Uc-1 и Uc-1-U, содержащих полноразмерный и делегированные варианты АоЬо-элементов, с

самками маркерной линии тмк, не имеющими полноразмерной копии коЬп-элемента. У гетерозигот тм!Ь/т\\>И+(ис'1'1^(опыт) по сравнению с гетерозиготами тмЬ/т\м}1(0ге®'"^ и тмЬ/гт>}\^ (контроль) частота мутантных пятен на крыльях увеличена (р>0,05) (табл. 2). Если принимать во внима!ше только большие пятна, что на практике дает возможность с большей вероятностью отличать морфоз от мутации, то при таком подсчете гетерозиготы тм/Ь/т\мк+(ис','и> (опыт) достоверно отличаются от гетерозигот контрольных линий т\чЪ/тм1гг(0кеапП), ¡тмИ/тм/И*(Са"""в>, т-мЬ/пт}-?®1"™1^ и гтчМш/У?', а также - гетерозиготы /mvMmvй+íU:"/', от гетерозигот контрольных линий тм/Утм/г^"0™*11' и ттчУт\ч1г(112)

(табл. 2).

Таблица 2. Частота мутантных пятен типа ту/к на крыльях В. melanogaster у гетерозигот различного типа, содержащих (опыт) и не содержащих (контроль) полноразмерную копию /гобо-элемента в геноме.

Генотип потомков Б] Число проанали-зиртванных крыльев Число мутантных пятен, состоящих из Общее число обнаруженных мутаций # Частота мутаций на клетку хНГ

одной клетки двух клеток более чем двух клеток

Контроль

птУткЬ+(Оге10гК> 100 4 0 2 6° (2*) 2,5 (0,8)

т\МптЬ*(с°топВ) 100 7 0 1 8 (1**; *) 3,3 (0,4)

тучУт^У(т 100 6 3 0 9(3) 3,7(1,2)

тм>Утч-У("ап"с1') 100 7 1 0 8 (1**; *) 3,3 (0,4)

100 б 1 0 7° 2,9 (0,4)

Опыт

ту/Ут\Ж*(ис~'~и> 100 7 4 5 16°(9*) 6,5 (3,7)

100 6 3 4 13 (Г) 5,3 (2,9)

# Здесь и в следующей колонке в скобках указано число (или частота) больших мутантных пятен; *, 0 или *- различие с соответствующим контролем статистически достоверно при уровне значимости р>0,05; ** - различие с соответствующим контролем статистически достоверно при уровне значимости р>0,01.

Таким образом, скрещивание самцов из линий, содержащих полноразмерную копию /гобо-элемента, с самками тестерной линии тл\'к в большинстве случаев приводит к повышению частоты возникновения соматических мозаиков у гетерозигот-потомков по сравнению с вариантами скрещиваний самцов из контрольных линий с самками тжк. Поскольку в геноме самцов опытных линий присутствует полноразмерный /гобо-элемент, то, возможно, скрещивание этих самцов с самками маркерной линии ткИ, не содержащими в геноме полноразмерного /гобо-элемента, вызывает у гетерозигот обыкновенно свойственный гибридному дисгенезу комплекс специфических нарушений, сопровождающийся возникновением разрывов ДНК. Восстановление этих

разрывов может осуществляться с помощью рекомбинационно-опосредованной репарации, которая осуществляется по матрице интакгной молекулы с идентичной или сходной последовательностью ДНК (Lankenau, Gloor, 1998; Lambert et al., 1999; Paques, Haber, 1999; Чмуж и др., 2006). Следовательно, увеличение частоты рекомбинационных событий, фиксируемое нами с помощью метода SMART, может быть косвенным свидетельством активности йойо-элемента в клетках соматических тканей.

Соматический мозаицизм среди клеток слюнных, желез Drosophila melanogaster. С помощью флуоресцентной in ¿йи-гибридизации изучали соматический мозаицизм среди клеток слюнных желез по распределению hobo-элемента в линиях у*"846 и у2'717. Было обследовано 39 Х-хромосом личинок линии у2-846 и 450 хромосом (X, 2 и 3) личинок линииУ'7,7(табл. 3).

Таблица 3. Мозаицизм в распределении коЪо-элементов в хромосомах слюнных желез личинок линий у2' 7 \\ушГ>гозорЫ1а melanogaster.

Линия Число проанализированных препаратов Общее число проанализированных хромосом Число препаратов с мозаицизмом Частота перемещения hobo

J-846 9 39 4 3,5х10'2*

у2-717 150 450 0 0

* - указана частота на сайт, на Х-хромосому. •

В линии у2'546 в клетках одной и той же слюнной железы сайты гибридизации ДНК йобо-элемента на Х-хромосомах различаются. Например, на одном из препаратов наблюдается различие по локализации йобо-элемента между ядрами по районам Х-хромосомы: 1А и 9А (рис. 6). Так, в районе 1А Х-хромосомы ядра № 1 метки нет (рис. 66), а в том же районе в ядре № 2 она есть (рис. 6г). В ядре № 3 в районе 9А Х-хромосомы метка есть (рис. бе), но она отсутствует в том же районе 9А в ядре № 2 (рис. 6г). В районе 1В Х-хромосомы все проанализированные ядра имеют метку, но в одном из ядер в этом же районе присутствует дополнительная копия /гобо-элемента. В этом допрлнительном сайте метка представлена только на половине ширины Х-хромосомы (рис. бе). Частота перемещения hobo в клетках слюнных желез личинок линии у2'846 составила 3,5x10'2 на сайт, на Х-хромосому (табл. 3). Кроме различий между ядрами внутри особей, регистрируются различия среди особей одной семьи по распределению /гобо-элемента в Х-хромосомах линии у2'846. Причина такой нестабильности линии у2неизвестна. Линия у2'846 была получена в 1989 г. из Умани от оплодотворенной в природе самки, и, впоследствии, никаким индуцирующим перемещения МЭ воздействиям не подвергалась. ПЦР-анализ выявил в этой линии наличие полноразмерной копии Аобо-элемепта. Вероятно, для высокой транспозиционной активности /гобо-элемента в клетках соматических и генеративных тканей линии у2'846 достаточно присутствия активной копии hobo.

Различий между ядрами в распределении /мбо-эпемента r хромосомах линии у'71' не выявлена (табл. 3), Шйноразмерной копии hobo-элемента в этой линии не обнаружено.

Наряду с работами, в которых сообщается о том, что активность три не поз of юн в клетках соматически* и генеративных тканей различается (Thompson el at., \9П\ Engeis, 1979; Bingham et at,. 1Ш: f.aski et at,, ¡986; McElwain, 1986. Calvi, Gelbart, 1994), так же есть единичные исследования, s

i^jÜ^ áP Ф "Í % 18 д

* ■ JSfí" . jp» j б" ... ^ Щрщ е

Рис. 6. Различия по распределению tobo-элемента в X-хромосом ах между ядрами слюнной железы одной личинки из линии >,М4Й Drosophtía melanogaster. я, в, д - окраска DAPI, б, г, е - in situ-тя бршшзация ДНК hob о-элемента (изображение инвертировано), я, G - адрч № I. На рис. п стрелки указывают на районы X-хромосомы: 1А (справа) и JB (слева). В районе 1А метки нет, в районе 1В метка хорошо заметна, в, i" - ядро № 2. На рис. г стрелки указывают на районы X-хромосомы; 1-й (слева) и 9-й (справа). В ! -м районе хорошо заметны две полосы гибридизации: в 1А (нижняя) и 1В (верхняя). В районе 9А метка отсутствует, д, с - ядро № 3 . На рис. е стрелки указывают на районы Х-хромосомы 1 В (нижние) и 9А (верхняя), ß i ß два сайта гибридизации, в одном из которых метка представяещ только из половине ширины Х-хромосомы В районе 9А метка присутствует,

которых косвенно показана активность транс по зон or в соматических тканях (Lim, 1981; Yannopoiilos el a!., 1983; Geyz, van Schaik, 1991), Прямые доказательства йо&сьтраншозиций в клетках соматических тканей были получены при изучении нестабильной мутаторной линии (МЛ), хотя, по мнению авторов, обнаруженное явление может быть специфичным для исследованной линии, и вызвано нарушениями каких-либо регуля горных механизмов, запрещающих транспозиции МЭ (Ким, Беляева, 1991). Наши результаты свидетельствуют о возможности соматических транспозиций hobo-элемента в линии у~~ы6 и, таким образом, дополняют данные о соматической активности hobo.

Исследование влияния радиации на картину распределения hobo-элементов в хромосомах линии у1'717. Для оценки влияния радиации, как внешнего мутагенного фактора, на стабильность картины распределения hobo в лиши у1'717, из потомков самки этой линии мы сформировали экспериментальные группы и воздействовали на них разными дозами у-облучения (табл. 4). В группе 30-4 обнаружены эксцизии двух сайтов hobo-элементов: в одном из гомологов X-хромосомы в районе 19В и в ЗЯ-плече в районе 86 С. Частота эксцизий составила 7,5 х 10"4 на сайт, на геном, за поколение, что не превышает описанную в литературе спонтанную частоту транспозиций МЭ - порядок величин lO'MO"5 (Harada et al„ 1990; Maside et al., 2000).

Известно, что у-облучение может индуцировать транспозиции ретротранспозонов (Забанов и др., 1995; Шоханов и др., 1997). Однако, самое мощное воздействие на активность МЭ может происходить в системах гибридного

Таблица 4. Частота коЬо-эксцизионных событий в хромосомах слюнных желез личинок линии у2'717 О. melanogaster при воздействии разными дозами у-облучения.

Группы X (9 сайтов hobo) 2R (5 сайтов hobo) 3R (9 сайтов hobo) частота событий*

изучено семей число событий изучено семей число событий изучено семей число событий

Контроль 20 0 19 0 19 0 0

3-1 38 0 0 - 0 - 0

30-1 40 0 0 - 0 - 0

3-4 34 0 30 0 30 0 0

30-4 32 1 28 0 28 1 7,5x10"4

30-5/, 1 2 0 0 - 0 - 0

* - указана частота на сайт, на геном, за поколение.

дисгенеза - оно оказывается на порядок величин выше, чем при у-облучении или температурном воздействии (Mackay, 1987; Гришаева, Иващенко, 1997; Васильева и др., 1997). Полученные в нашей работе результаты согласуются с этими данными: в У"7'7-Х-хромосоме в результате индуцирующих скрещиваний частота перемещений hobo высокая, в то время как используемые дозы радиационного воздействия не повлияли на частоту событий (табл. 4). Отсутствие транспозиций hobo в линии у1'717 закономерно, поскольку, по данным ПЦР-анализа, в геноме линии у2'7'7 отсутствует полноразмерная копия hobo. Наблюдаемые нами эксцизии hobo-элементов в группе 30-4 могли появиться в результате гомологичной рекомбинации или репликативно, когда ДНК-полимераза "проскакивает" шпильку, образованную терминальными повторами последовательности мобильного элемента. Возможно, низкая частота эксцизионных событий в нашем эксперименте связана с недостаточно большой выборкой материала. Также, это может быть связано с типом мобильного элемента: в большинстве работ изучено воздействие радиации на ретротранспозоны. О влиянии радиации на эксцизии транспозонов известно, что в клетках Е. coli при у-облучении происходит возрастание частот элиминации транспозона ТпЮ в зависимости от дозы облучения (Журавель,

Борейко, 2002). Также, у-радиация может оказывать влияние на эксцкзии Р-элемента в соматических тканях эмбриона (Handler, Gomez, 1997).

В ряде работ было выявлено влияние отсроченных эффектов радиации на геном. Существует мнение, что индуцируемая радиацией дестабилизация генома дрозофилы имеет отдаленные процессы действия (Шоханов и др., 1997; Ратнер и др.. 2001). В нашей работе отсроченного вОЗдейс®ИЯ используемых до?, у-радиапии на распределение hobo не обнаружено (табл. 11). В группе 30-5/ц использовали массовую культуру, а не семейные скрещивания, как в других ipynnax, поэтому особи е поврежденными радиационным воздействием геномами могли не выжить или не оставить потомства, а также, поскольку мы оценивали эффект радиационного воздействия спустя одиннадцать поколений, повреждения могли быть утрачены.

ПДР-анализ геномной ДНК мух в группе 30-4 позволил выявить появление двух дополнительных полос на уровне 550 и 750 пн, которых нет в других ipynnax, что. возможно, говорит о возникновении новых вариантов дефекте«.* hobo-последовагедьностей (рис. 7).

Рис. 7. ПЦР-анализ линии у2"'1' до и после облучения разными дозами ^-радиации с прайм ерами на ОКР /гайо-элемента 1) маркер молекулярной массы (100 пн - 1,5 тин); 2) у1'717 (ЗО-5/ц); 3) у~7П (3-4); 4) у'7'7 (30-4); 5) у2'717; 6) у+ »' Щ содержит полноразмерный йобо-элемент; 7) РяВ4, содержит клонированный нолноразм ерн ы й коЬо-эле мент в составе вектора; 8)-Х /Л'жШ1. Стрелка указывает на положение ПЦР-продукта полноразмерной копии кооо-эле мента.

Причиной появления новых вариантов делегированных hobo могла послужить рекомбинация между /го ¿вд-последовательности ми, поскольку известно, что радиационное воздействие способно увеличивать частоту рекомоиианионных событий.

выводы

1. Показано, та в популяции Drosophila melanogaster Умани распространены как полноразмерные, так и делегированные hobo- и Р-элементы и наблюдается полиморфизм между особями, как по количеству hobo-эжментод, так и по сайгам их распределения в Х-хромоеомах. Обнаружено, что /и ¿»-элемент присутствовал в популяции Умани и До начала вспышки мутабилыюсти по тънуyellow (до 1982 г.).

2. Установлено, что транспозиционная активность /гобо-элементов после

индуцирующих транспозиции скрещиваний способна сохраняться в течение

десятков поколений и каждое новое скрещивание вызывает увеличение числа

„ , , v 2-717

копии и частоты транпозиции hobo в Х-хромосомах производных линни у

3. Выявлено, что наблюдаемая у мутантных производных лишш у Drosophila melanogaster Умани локус-специфическая /гобо-обусловленная нестабильность гена yellow сопровождается hobo- и Р-транспозиционными событиями в других локусах Х-хромосомы. Следовательно, супернестабильность локуса yellow служит маркером активности hobo- и Р-элементов в Х-хромосоме в целом.

4. Получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что hobo-элемент способен проявлять транспозиционную активность в клетках соматических тканей. Во-первых, выявлена взаимосвязь между присутствием в геноме активного /гойо-элемента и повышением частоты рекомбинаций на клетках крыла (тест SMART) Drosophila melanogaster. Во-вторых, с помощью метода FISH, продемонстрировано перемещение hobo-элемента в клетках соматических тканей у Drosophila melanogaster и получена оценка частоты /гойо-транспозиций - 3,5x10"2 на сайт, на X-хромосому.

5. Показано, что при отсутствии каких-либо воздействий, индуцирующих транспозиции мобильных элементов, в у -Х-хромосоме гены стабильны в клетках генеративных тканей (метод РСПЛМ), и наблюдается постоянная картина распределения йо&о-элементов в клетках генеративных и соматических тканей (метод FISH). В геноме линии у происходят транспозиции /гобо-элемента в клетках соматических и генеративных тканей без дополнительной индукции, таким образом, для высокой транспозиционной

Г 2-846

активности «ооо-элемента в геноме линии у , по-видимому, достаточно наличия его полноразмерной копии.

6. При однократном и многократном воздействии у-радиацией дозой 3 Гр и 30 Гр не обнаружено изменений в картине распределения hobo-элементов в хромосомах линии у Drosophila melanogaster.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Kovalenko L.V., Zakharenko L.P., Zakharov I.K. Possible influence of hobo mobile element on the frequency of somatic mutations in the wing cells of Drosophila melanogaster // Drosophila Inform. Serv. 2002. № 85. P. 72-75.

2. Захаренко Л.П., Перепелкина М.П., Коваленко Л.В., Захаров И.К. Нестабильность генома Drosophila melanogaster в природе и под влиянием у-радиации / В кн.: Медицинские и экологические эффекты ионизирующего излучения. Материалы 2 Международной научно-практической конференции, 20-21 мая 2003 г. Северск - Томск. // Северск-Томск, 2003. С. 55-57.

3. Захаренко Л.П., Коваленко Л.В., Захаров И.К. Причины высокой мутабильности в гене yellow у Drosophila melanogaster из Умани / В кн.: 3 съезд ВОГиС, Генетика в 21 веке: современное состояние и перспективы развития. Москва, 6-12 июня 2004 г. Т. 2. - Москва. 2004. Т. 2. С. 200.

4. Zakharenko L., Kovalenko L., Zakharov I. The Drosophila melanogaster hobo transposon moves like a retrotransposon // In: Genome Instability and Repair, Sagerbrush Inn and Conference Center. Taos, New Mexico, USA. March 15-20, 2005. - Keystone Symposia. 2005. P. 72.

5. Васильева Л.А., Кикнадзе И.И., Киселёва E.B., Гундерина JIM., Истомина А.Г., Голыгнна В.В., Ваулин О.В., Воронин Д.А., Илинский Ю.Ю., Захаренко Л.П., Коваленко Л.В. и др. Механизмы генетической изменчивости популяций и видов Díptera // Динамика генофондов растений, животных и человека. Отчётная конференция. Москва. 2005. С. 35-36.

6. Коваленко Л.В., Захаренко Л.П., Захаров И.К. Транспозиции hobo-элемента в соматических клетках Drosophila melanogaster II Генетика. 2006. Т. 42. № 2. С. 177184.

7. Коваленко Л.В., Захаренко Л.П., Волошина МА. и др. Поведение транспозонов hobo и Р в нестабильной линии yellow2'1п Drosophila melanogaster и ее производных после скрещиваний с лабораторной линией // Генетика. 2006. Т. 42. № 6. С. 748-756.

8. Захаренко Л.П., Коваленко Л.В., Перепелкина М.П., Захаров И.К. Влияние у-радиащш на шщукцию транспозиций /¡обо-злемента у Drosophila melanogaster II Генетика. 2006. Т. 42. № 6. С. 763-767.

9. Васильева Л.А., Захаренко Л.П., Коваленко Л.В. и др. Механизмы генетической изменчивости популяций и видов Díptera: Мобильные генетические элементы в популяциях и в опыте II Программа фундаментальных исследований РАН. № 11. "Биоразнообразие и динамика генофондов". Подпрограмма 2. "Динамика генофондов". Сборник материалов. - М: ФИАН. 2007. С. 24-25.

Подписано к печати 27.07.2007

Формат бумаги 60 х 90 1/16. Печ. л. 1. Уч. изд. л. 0,7.

Тираж 100 экз. Заказ 78.

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр. ак. Лаврентьева, 10.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Коваленко, Людмила Викторовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. ИНСЕРЦИОННЫЙ МУТАГЕНЕЗ.

1.1.1. МУТАЦИОННЫЙ ПРОЦЕСС.

1.1.2. ОТКРЫТИЕ МЭ.

1.1.3. ВЛИЯНИЕ МЭ НА НЕСТАБИЛЬНОСТЬ ГЕНОМА.

1.1.3.1. Классификация МЭ.

1.1.3.2. Структурная организация транспозонов Р и hobo.

1.1.3.3. Свойства МЭ.

1.1.3.4. МЭ в системе гибридного дисгенеза.

1.1.3.5. Механизмы перемещения МЭ.

1.1.3.6. Регуляция транспозиций и количества МЭ в

Р-М и Н-Е системах гибридного дисгенеза.

1.1.4. ВЛИЯНИЕ РАЗЛИЧНЫХ ФАКТОРОВ НА ПЕРЕМЕЩЕНИЕ МЭ.

1.2. МЭ В ПРИРОДНЫХ ПОПУЛЯЦИЯХ.'.

1.3. ГЕНЕТИЧЕСКАЯ НЕСТАБИЛЬНОСТЬ В ЛИНИЯХ ИЗ ПРИРОДЫ.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. МАТЕРИАЛЫ.

2.1.1. Линии мух.

2.2. МЕТОДЫ.

2.2.1. Процедура получения производных линий.

2.2.2. Метод Мёллер-5 или РЦПЛМ для обнаружения и учета рецессивных летальных мутаций в Х-хромосоме.

2.2.3. Тест на соматические мутации и рекомбинации (SMART).

2.2.4. Облучение мух.

2.2.5. Методика приготовления давленых препаратов слюнных желез личинок

D. melanogaster.

2.2.6. Мечение ДНК зондов.

2.2.7. Флуоресцентная in s/ta-гибридизация.

2.2.8. Выделение ДНК.

2.2.9. ПЦР-анализ.

2.2.10. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Анализ популяции D. melanogaster Умани на наличие/отсутствие hobo- и Р-элементов.

3.2. Оценка линии .у2"777 с помощью теста РСПЛМ.

3.3. Анализ распределения hobo- и Р-элементов в Х-хромосомах линии У"777 и ее производных.

3.4. Анализ линий D. melanogaster на активность hobo-элемента в клетках соматических тканей.

3.5. Исследование влияния радиации на карину распределения /го£о-элементов в хромосомах линии у2'717.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. hobo- и Р-элементы в популяции D. melanogaster Умани.

4.2. Рецессивные'летальные мутации в у " -Х-хромосоме.

4.3. Распределение hobo- и Р-элементов в Х-хромосомах

D. melanogaster.

4.4. Активность hobo-элемента в клетках соматических тканей D. melanogaster.

4.5. Воздействие радиации на поведение hobo-элемента в линии у

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "hobo-элемент как фактор нестабильности генома Drosophila melanogaster в клетках генеративных и соматических тканей"

Актуальность >

Мобильные элементы являются необычайно интересными и важными объектами исследования современной генетики. МЭ распространены повсеместно и составляют существенную часть геномной ДНК многих изученных организмов. Так, геном кукурузы на 50% состоит из транспозонов, а в геноме человека, при их общем уровне содержания 30% насчитывается свыше 4 млн. отдельных копий (Kidwell, Lisch, 1997). Транспозиционная активность МЭ вызывает до 80% спонтанных мутаций и является основной причиной их возникновения (Хесин, 1984).

МЭ имеют определенную структурную организацию, благодаря которой могут перемещаться в геноме как в пределах одной хромосомы, так и между хромосомами. МЭ имеют способность увеличивать число копий в геноме хозяина, вызывать мутации, встраиваясь в гены или окрестности генов, служить причиной хромосомных перестроек, влиять на фертильность особей и даже приводить организм к гибели. Достаточно неожиданной оказалась способность мобильных элементов изменять - как понижать, так и повышать - уровень активности близлежащих генов. Изучение первичной последовательности МЭ выявило, что в их структуре есть большое количество регуляторных сайтов и сигнальных последовательностей, а это означает, что МЭ могут очень интенсивно воздействовать на работу гена, не разрушая сам ген (Гвоздев, 19986). Возникающие мутации могут не сказываться на жизнеспособности организма, если они возникли в гене, который отвечает, например, за формирование фенотипического признака. В редких случаях мутационные изменения могут иметь адаптивное значение и особи с такими мутациями получают преимущество перед другими сородичами для выживания и оставления потомства. Однако, чаще всего, мутации вредны для организма и приводят к стерильности или гибели особи.

Вопрос о том, какова роль МЭ, являются ли они паразитами или выполняют ряд важнейших функций в геноме, до сих пор не решен. Мобильные элементы долгое время рассматривались как представители так называемой эгоистичной ДНК, перед которой стоит единственная цель - размножиться в геноме и паразитировать на нем. Эта точка зрения предполагает, что геном вынужден бороться с эгоистичной ДНК и ограничивать ее размножение.

В то же время не лишены основания представления о том, что естественному отбору подвергаются не только хозяйские гены, но и эгоистичная ДНК. Нельзя исключить, что в результате естественного отбора представители паразитической ДНК будут использованы для нужд генома,' если появятся полезные функции этих эгоистичных фрагментов ДНК. Такое предположение начинает получать подтверждения. Показано, что МЭ могут выполнять ряд полезных функций в геноме хозяйской клетки. МЭ незаменимы при выполнении таких функций как V(D)J рекомбинация в клетках иммунной системы млекопитающих, в поддержании теломер у дрозофилы и в процессе репарации двунитевых разрывов ДНК у дрожжей (Kidwell, Lisch, 1997). Ряд исследований показал, что МЭ участвуют в реакции на стрессовые воздействия (Strand, McDonald, 1985; Junakovic et al., 1986; Ратнер и др., 1992; Аникеева и др., 1994; Забанов и др., 1995; Ратнер, Васильева 1996; Васильева и др., 1997; Шоханов и др., 1997; Handler, Gomez, 1997; Ратнер и др., 2001; Бубенщикова и др., 2002; Журавель, Борейко, 2002; Васильева и др., 2003). Исходя из этого, можно предположить, что МЭ играют важную роль в геноме как контролирующие элементы. Из стрессовых воздействий наиболее мощное влияние на индукцию транспозиций оказывают внутригеномные процессы: изогенизация, аутбридинг, гибридный дисгенез. гоЬо-элемент относится к классу транспозонов. Он является одним из трех мобильных элементов, наряду с?- и /-элементами, обусловливающих гибридный дисгенез у D. melanogaster (Bingham, 1982; Blackman et al, 1987; Yannopoulos et al, 1987; Bucheton, 1990). Перемещения МЭ при гибридном дисгенезе у дрозофилы происходят преимущественно в клетках зародышевого пути. Причина различной активности МЭ в клетках соматических и генеративных тканей подробно изучена у /'-элемента и заключается в особенностях тканеспецифичного сплайсинга транспозазной пре-м-РНК (Laski et al, 1986; Siebel, Rio, 1990). Однако в ряде работ были описаны случаи перемещения ретротранспозонов в соматических клетках у высших организмов (Georgiev et al., 1990; Kim, Belyaeva, 1991; Driver, McKechnie, 1992). Что касается транспозонов, существуют единичные данные, прямо или косвенно свидетельствующие о соматической активности этих элементов (Lim, 1981;

Yannopoulos et al, 1983; Geyz, van Schaik, 1991; Ким, Беляева, 1991), однако, в целом, вопрос об активности транспозонов в соматических клетках у Drosophila melanogaster остается -открытым. Выявление возможности и изучение особенностей транспозиций МЭ в соматических клетках имеет большое значение, поскольку в ряде работ описан повреждающий эффект соматических перемещений Р-элемента (Engels et. al, 1987; Woodruff, 1992). Более того, соматические мутации представляют собой потенциальную угрозу малигнизации клеток.

Таким образом, изучение особенностей поведения в геномах разных линий D. melanogaster широко распространенного в природных популяциях hobo-элемента является актуальным, поскольку МЭ имеют существенное значение в формировании генетической изменчивости.

Цели и задачи исследования

Целью данной работы является исследование транспозиционной активности Аобо-элемента в клетках генеративных и соматических тканей в линиях Drosophila melanogaster, выделенных из природной популяции Умани в период вспышки мутаций по гену yellow.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

3. Провести исследование транспозиционной активности Аобо-элементов в ряду последовательных поколений в линии у2'7'7 D. melanogaster и у производных этой линии на основе анализа паттерна сайтов локализации hobo в Х-хромосомах самцов.

4. Выявить наличие/отсутствие транспозиционной активности hobo в клетках соматических тканей /гобо-содержащих линий D. melanogaster с использованием методов (1) соматических мутаций и рекомбинаций на клетках крыла и

2) флуоресцентной in ^/^-гибридизации на политенных хромосомах клеток слюнных желез.

5. Изучить влияние радиации, как внешнего мутагенного фактора, на картину распределения /гобо-элементов в политенных хромосомах в линии у2'717 D. melanogaster.

Научная новизна работы.

Для генетически нестабильных линий Drosophila melanogaster, выделенных из природной популяции Умани, впервые получены цитогенетические данные о распределении и транспозиционной активности /го&о-элемента в гене yellow и других локусах Х-хромосомы, которые дополняют проведенные ранее молекулярно-генетические исследования локусспецифической нестабильности гена yellow.

7 7/7

Показано, что нестабильность гена yellow исследованных у" -производных, вызванная активностью /гобо-элемента, является маркером активности hobo- и Р-элементов в других локусах Х-хромосомы.

Впервые описано, что в У~7/7-Х-хромосоме при проведении скрещиваний с самками со сцепленными Х-хромосомами (/~7/7-Х-хромосома наследуется патрилинейно), наряду с межаллельными переходами в локусе yellow наблюдается увеличение числа копий hobo. В ряду У"7;7-производных, отмечена особенность в поведении /гобо-элементов - преобладание частоты инсе^ций над частотой эксцизий hobo в Х-хромосомах.

В выделенной из природной популяции Drosophila melanogaster у2~т-пшт, не подвергавшейся воздействиям, индуцирующим транспозиции МЭ, обнаружена способность hobo к перемещениям в клетках соматических тканей.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные результаты развивают теоретическое представление о закономерностях поведения hobo в геноме дрозофилы, а также дополняют картину происходящих с /ю&о-элементом процессов в локусе yellow и в геноме линий уманской популяции Drosophila melanogaster.

В работе получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что /jofo-элемент способен проявлять транспозиционную активность в клетках соматических тканей Drosophila melanogaster, выделенных из природной популяции.

Результаты используются в курсе "Эволюционное учение" ФЕН НГУ.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Коваленко, Людмила Викторовна

ВЫВОДЫ

1. Показано, что в популяции Drosophila melanogaster Умани распространены как i полноразмерные, так и делегированные hobo- и Р-элементы и наблюдается полиморфизм между особями, как по количеству /гобо-элементов, так и по сайтам их распределения в Х-хромосомах. Обнаружено, что hobo-элемент присутствовал в популяции Умани и до начала вспышки мутабильности по гену yellow (до 1982 г.).

2. Установлено, что транспозиционная' активность hobo-элементов после индуцирующих транспозиции скрещиваний способна сохраняться в течение десятков поколений и каждое новое скрещивание вызывает увеличение числа

- и и V 2'717 копии и частоты транспозиции hobo в Х-хромосомах производных линии у

3. Выявлено, что наблюдаемая у мутантных производных линии у 717 Drosophila melanogaster Умани локус-специфическая /гобо-обусловленная нестабильность гена yellow сопровождается hobo- и ^-транспозиционными событиями в других локусах Х-хромосомы. Следовательно, супернестабильность локуса yellow служит маркером активности hobo- и Р-элементов в Х-хромосоме в целом.

4. Получены экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что hobo-элемент способен проявлять транспозиционную активность в клетках соматических тканей. Во-первых, выявлена взаимосвязь между присутствием в геноме активного Аобо-элемента и повышением частоты рекомбинаций на клетках крыла (тест SMART) Drosophila melanogaster. Во-вторых, с помощью метода FISH, продемонстрировано перемещение Ло&о-элемента в клетках соматических тканей у Drosophila melanogaster и получена оценка частоты /гобо-транспозиций - 3,5х10"2 на сайт на Х-хромосому.

5. Показано, что при отсутствии каких-либо воздействий, индуцирующих транспозиции мобильных элементов, в у 7/7-Х-хромосоме гены стабильны в клетках генеративных тканей (метод РСПЛМ), и наблюдается постоянная картина распределения hobo-элементов в клетках генеративных и соматических

2 846 тканей (метод FISH). В геноме линии у происходят транспозиции hobo-элемента в клетках соматических и генеративных тканей без дополнительной индукции, таким образом, для высокой транспозиционной активности hobo

2-846 элемента в геноме линии у , по-видимому, достаточно наличия его полноразмерной копии. 6. При однократном7 и многократном воздействии у-радиацией дозой 3 Гр и 30 Гр не обнаружено изменений в картине распределения hobo-элементов в хромосомах линии у ?П Drosophila melanogaster.

100

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Коваленко, Людмила Викторовна, Новосибирск

1. Аникеева Н.В., Забанов С.А., Васильева Л.А., Ратнер В.А. Влияние теплового шока на транспозиции МГЭ Dm412 в трех изогенных линиях Drosophila melanogaster //Генетика. 1994. Т. 30. № 2. С. 212-217.

2. Бубенщикова Е.В., Антоненко О.В., Васильева Л.А., Ратнер В.А. Индукция транспозиций МГЭ 412 раздельно тепловым и Холодовым шоком в сперматогенезе у самцов дрозофилы // Генетика. 2002. Т. 38. № 1. С.46-55.

3. Буфф Е.М., Петрук С.Ф., Герасимова Т.И. Множественная нестабильность в системе взаимодействия мобильных элементов hobo и Сталкер у Drosophila melanogaster ПГенетика. 1993. Т. 29. № 11. С. 1784- 1792.

4. Буфф Е.М., Симонова О.Б., Петрук С.Ф.; Герасимова Т.И. Участие мобильного элемента hobo в транспозиционных событиях в системе продленной нестабильности у Drosophila melanogaster II Генетика. 1992. Т. 28. № 12. С. 7379.

5. Васильева Л.А. Статистические методы в биологии. Новосибирск: Институт цитологии и генетики СО РАН, 2004. 127 с.

6. Васильева Л.А, Ратнер В.А, Антоненко О.В., Лопухова Е.Д., Бубенщикова Е.В. Индукция транспозиций МГЭ 412 различными дозами паров этанола в изогенной линии Drosophila melanogaster II Генетика. 2003. Т. 39. № 5. С. 717720.

7. Васильева Л.А., Ратнер В.А., Бубенщикова Е.В. Стрессовая индукция транспозиций ретротранспозонов дрозофилы: реальность явления, характерные особенности и возможная роль в быстрой эволюции // Генетика. 1997. Т. 33. № 8. С. 1083-1093.

8. Гвоздев В.А., Кайданов Л.З. Геномная изменчивость, обусловленная транспозициями мобильных элементов, и приспособленность особей Drosophila melanogaster II Журнал общей биологии. 1986. Т. 47. № 1. С. 51-63.

9. Гвоздев В.А. Подвижная ДНК эукариот. Часть 1. Структура, механизмы перемещения и роль подвижных элементов в поддержании целостности хромосом // Соросовский образовательный журнал. 1998а. № 8. С. 8-14.

10. Гвоздев В. А. Подвижная ДНК эукариот. Часть 2. Роль в регуляции активности генов и эволюции генома // Соросовский образовательный журнал. 19986. № 8. С.15-21.

11. Голубовский .М.Д., Захаров И.К., Соколова О.А. Анализ нестабильности аллелей гена yellow, выделенных из природной популяции дрозофил в период вспышки мутабильности // Генетика. 1987. Т. 23. № 9. С. 1595-1603.

12. Голубовский М.Д., Иванов Ю.Н., Захаров И.К., Берг P.JI. Исследование синхронных и параллельных изменений генофондов в природных популяциях плодовых мух Drosophila melanogaster II Генетика. 1974. Т. 10. № 4. С. 72-83.

13. Грачева Е.М., Захаров И.К., Волошина М.А., Георгиев П.Г., Голубовский М.Д. Вспышки мутаций тот yellow в природной популяции Drosophila melanogaster связаны с инсерцией транспозона hobo II Генетика. 1998. Т. 34. № 4. С. 462-468.

14. Гришаева Т.М., Иващенко Н.И. Проблемы структурно-функционального взаимодействия в системах гибридного дисгенеза // Успехи современной биологии. 1997. Т. 117. Вып. 1. С. 52-67.

15. Дубинин Н.П. Эволюция популяций и радиация. Москва: Атомиздат, 1966. 743 с.

16. Жимулев И.Ф. Общая и молекулярная генетика. Новосибирск: Сибирское университетское издательство, 2003.479 с.

17. Журавель Д.В., Борейко А.В. Закономерности эксцизии транспозона Th 10 в клетках rec-мутантов Е. coli при у-облучении // Радиационная биология. Радиоэкология. 2002. Т. 42. № 6. С. 636-638.

18. Забанов С.А., Васильева JI.A., Ратнер В.А. Индукция транспозиций МГЭ 412 при помощи у-облучения в изогенной линии Drosophila melanogaster // Генетика. 1995. Т. 31. № 6. С.798-803.

19. Захаренко Л.П., Юоваленко Л.В., Перепелкина М.П., Захаров И.К. Влияние у-радиации на индукцию транспозиций /го&с-элемента у Drosophila melanogaster II Генетика. 2006. Т. 42. № 6. С. 763-767.'

20. Захаров И.К. Генетика природных популяций Drosophila melanogaster: колебание мутабильности и концентрации аллелей гена singed в природных популяциях//Генетика. 1984. Т. 22. № 8. С. 1295-1304.

21. Захаров И.К., Голубовский М.Д. Возвращение моды на мутацию yellow в природной популяции Drosophila melanogaster г. Умани // Генетика. 1985. Т. 21. №8. С. 1298-1305.

22. Захаров И.К., Скибицкий Е.Э. Генетика нестабильных аллелей генов X-хромосомы, выделенных в период вспышки yellow-мутацш 1982-1991 гг. в природной популяции Drosophila melanogaster Умани // Генетика. 1995. Т. 31. №8. С. 1079-1084.

23. Иванов Ю.Н., Голубовский М.Д. Повышение мутабильности и появление мутационно-нестабильных аллелей локуса singed в популяциях Drosophila melanogasterII Генетика. 1977. Т. 13. № 4. С. 655-666.

24. Иващенко Н.И., Гришаева Т.М., Богданов Ю.Ф. Влияние у-облучения на гониальные клетки Drosophila melanogaster в разных условиях гибридного дисгенеза // Генетика. 1990. Т. 26. № 11. С. 1969-1979.

25. Иващенко Н.И., Гришаева Т.М. Особенности индуцированного мутагенеза в системах гибридного дисгенеза у Drosophila melanogaster II Генетика. 2002. Т. 38. №10. С. 1351-1356.

26. Ким А.И., Беляева Е.С. Прямая демонстрация транспозиций мобильного элемента МДГ4 в половых и соматических клетках нестабильной мутаторной линии Drosophila melanogaster II Доклады Академии наук СССР. 1991. Т. 314. № 4. С.965-968.

27. Коваленко JI.B., Захаренко Л.П., Захаров И.К. Транспозиции /го&о-элемента в соматических клетках Drosophila melanogaster II Генетика. 20066. Т. 42. № 2. С. 177-184.

28. Кожемякина Т.А., Фурман Д.П. Детерминанты гибридного дисгенеза в природной популяции дрозофил Алтая // Генетика. 1995. Т. 31. № 9. С. 12251232.

29. Лейбович Б.А. Мобильные элементы дрозофилы в природных популяциях Азербайджана. Генетика. 1990. Т. 26. № 2. С. 241-248.

30. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. Москва: Мир, 1984.479 с.

31. Медведев Н.Н. Практическая генетика. Москва: Наука, 1968.294 с.

32. Пасюкова Е.Г., Гвоздев В.А. Особенности распределения мобильных генетических • элементов в Х-хромосомах особей из природных популяций Drosophila melanogaster II Генетика. 1986. Т. 22. № 12. С. 2813-2819.

33. Ратнер В.А., Бубенщикова Е.В., Васильева Л.А. Пролонгация индукции транспозиций МГЭ 412 после у-облучения в изогенной линии Drosophila melanogaster IIГенетика. 2001. Т. 37. № 4. С. 485-493.

34. Ратнер В.А., Васильева Л.А. Индукция транспозиций и эксцизий мобильных генетических элементов у дрозофилы в процессе изогенизации // Генетика. 1996. Т. 32. № 7. с. 933-944.

35. Ратнер В.А., Забанов С.А., Колесникова О.В., Васильева Л.А. Анализ множественных транспозиций МГЭ Dm412, индуцированных тяжелым тепловым шоком, у дрозофилы // Генетика. 1992. Т. 28. № 3. С. 68-86.

36. Хесин Р.Б. Непостоянство генома. Москва: Наука, 1984.472 с.

37. Шапошников М. Роль мобильных элементов генома в формировании клеточного ответа на облучение // 2002; (http ://ib .kom is с .ru/ad d/ol d/t/ru/i r/vt/02-55/04.html).

38. Шоханов C.O., Щербата Г.Р., Черник Я.И. Геномная изменчивость лабораторных линий и природных популяций Drosophila melanogaster при действии рентгеновского излучения // Генетика. 1997. Т. 33. № 1. С.25-30.

39. Чмуж Е.В., Шестакова Л.А., Волкова B.C., Захаров И.К. Разнообразие механизмов .-действия ■ и функций ферментативных систем репарацииповреждений ДНК у Drosophila melanogaster // Генетика. 2006. Т. 42. № 4. С. 462-476.

40. Юрченко Н.Н., Коряков Д.Е., Захаров И.К. Возникновение рецессивных летальных мутаций в производных от нестабильной AZ-хромосомы Drosophila melanogaster II Генетика. 1995. Т. 31. № 9. С. 1218-1224.

41. Anxolabehere D., Ни К., Nouaud D., Periquet G., Ronsseray S. The geographical distribution of P-M hybrid dysgenesis in' Drosophila melanogaster И Genet. Sel. Evol. 1984. V. 16. P. 15-26.

42. Anxolabehere D., Ни К., Nouaud D., Periquet G. The distribution of the P-M system in Drosophila melanogaster strains from the People's Republic of China // Genet. Sel. Evol. 1990. V. 22. P. 175-188.

43. Anxolabehere D., Kidwell M.G., Periquet G. Molecular characteristics of diverse populations are consistent with the hypothesis of a recent invasion of Drosophila melanogaster by mobile P elements // Mol. Biol. Evol. 1988 V. 5. No. 3. P. 252-269.

44. Anxolabehere D., Nouaud D., Periquet G., Tchen P. P-element distribution in Eurasion populations of Drosophila melanogaster: a genetic and molecular analysis // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1985. V. 82. P. 5418-5422.

45. Ashburner M. Drosophila: a laboratory handbook. New York: Cold Spring Harbor Laboratory, 1989. 1331 p.

46. Bartolome C., Maside X., Charlesworth B. On the abundance and distribution of transposable elements in the genome of Drosophila melanogaster II Mol. Biol. Evol. 2002. V. 19. No. 6. P. 926-937.

47. Bazin C., Denis В., Сару P., Bonnivard E., Higuet D.Characterization of permissivity for hobo-mediated gonadal dysgenesis in Drosophila melanogaster II Mol. Gen. Genet. 1999. V. 261. No. 3. P. 480-486.

48. Bazin C., Higuet D. Lack of correlation between dysgenic traits in hobo system of hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster // Genetical Research. 1996. V. 67. P.219-226.

49. Bender W., Spierer P., Hogness D.S. Chromosomal walking and jumping to isolate DNA from the Ace and rosy loci and the bithorax complex in Drosophila melanogaster //J. Mol. Biol. 1983. V. 168. No. 1. P. 17-33.

50. Berg R.L. A further study of the rate of abnormal abdomen (aa) in geographically isolated D. melanogaster population // Drosophila Inform. Serv. 1973. V. 50. P. 92.

51. Berg R.L. A Simultaneous mutability rise at the singed locus in two out of three Drosophila melanogaster populations study in 1973 // Drosophila Inform. Serv. 1974. No. 51. P. 100.

52. Berg R.L. Mutability changes in Drosophila melanogaster populations of Europe, Asia and North America and probable mutability changes in human populations in the USSA//Jap. J. Genetics. 1982. V. 57. P. 171-183.

53. Biemont C., Aouar A., Arnault C.Genome reshuffling of the copia element in an inbred line of Drosophila melanogaster II Nature. 1987. V. 329. No. 6141. P. 742744.

54. Biemont C., Arnault C., Heizmann A. Massive changes in genomic locations of P elements in an inbred line of Drosophila melanogaster II Naturwissenschaften. 1990a. V. 77. No. 10. P. 485-488.

55. Biemont C., Gautier C., Heizmann A. Independent regulation of mobile element copy number in Drosophila melanogaster inbred lines // Chromosoma. 1988. V. 96. P. 291-294.

56. Biemont C., Ronsseray S., Anxolabehere D., Izaabel H., Gautier C. Localization of P elements, copy number regulation, and cytotype determination in Drosophila melanogaster II Genet. Res. 1990b. V. 56. No. 1. P. 3-14.

57. Bingham P.M., Chapmen C.H. Evidence that white-blood is a novel type of temperature-sensitive mutation resulting from temperature-dependent effects of a transposon insertion on formation of white transcript // The EMBO J. 1986. V 5. P. 3343-3351.

58. Bingham P.M., Kidwell M.G., Rubin G.M. The molecular basis of P-M hybrid dysgenesis: the role of the P-element, a P-strain-specific transposon family // Cell. 1982. V. 29. P. 995-1004.

59. Bishop J.M. The molecular genetics of cancer// Science. 1987. V. 235. P. 305-311.

60. Black D.M., Jackson M.S., Kidwell M.G., Dover G.A. KP elements repress P-induced hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster 11 The EMBO J. 1987. V. 6. No. 13. P. 4125-4135.

61. Blackman R.K., Grimaila R., Koehler M.M., Gelbart W.M. Mobilization of hobo elements residing within the decapentaplegic gene complex: suggestion of a new hybrid dysgenesis system in Drosophila melanogaster II Cell. 1987. V. 49. No. 4. P. 497-505.

62. Blackman R.K., Koehler M.M, Grimaila R., Gelbart W.M. Identification of a fully-functional hobo transposable element and its use for germ-line transformation of Drosophila. The EMBO J. 1989. V. 8. No. 1. P. 211-217.

63. Blumenstiel J.P., Hartl D.L., Lozovsky E.R. Patterns of insertion and deletion in contrasting chromatin domains // Mol. Biol. Evol. 2002. V. 19. No.12. P. 2211-2225.

64. Bonnivard E., Bazin C., Higuet D. High polimorphism of TPE repeats within natural populations of Drosophila melanogaster: a gradient of the 5TPE hobo element in Western Europe // Mol. Biol. Evol. 2002. V. 19. No. 12. P. 2277-2284.

65. Bonnivard E., Higuet D., Bazin C. Characterization of natural populations of Drosophila melanogaster with regard to the hobo system: a new hypothesis on the invasion// Genet. Res. 1997. V. 69. P. 197-208.

66. Bregliano J.C., Picard G., Bucheton A., Pelisson A., Lavige J.M., L'Heritier P. Hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster И Science. 1980. V. 207. P. 606-611.

67. Bregliano J.C., Kidwell M.G, Hybrid dysgenesis determinants / In: Mobile Genetic Elements (ed.: Shapiro J.A.) // London: Academic Press, Inc. 1983. P. 363-410.

68. Bryan G.J., Jacobson J.W., Hartl D.L. Heritable somatic excision of a Drosophila transposon//Science. 1987. V. 235. No. 4796. P. 1636-1638.

69. Bucheton A. I transposable element and I-R hybrid dysgenesis in Drosophila II Trends in Genet. 1990. V. 6. No. 1. P. 16-21.

70. Chain A.C., Zollman S., Tseng J.C., Laski F.A. Identification of a cis-acting sequence required for germ line-specific splicing of the P element ORF2-ORF3 intron // Mol. Cell Biol. 1991. V. 11. No. 3. P. 1538-1546.

71. Capy P., Bazin C., Higuet D., Langin T. Dynamics and evolution of transposable elements // USA. New York: Landes Bioscience. 1998. 197 p.

72. Calvi B.R., Gelbart W.M. The basis for germline specificity of the hobo transposable element in Drosophila melanogaster II The EMBO J. 1994. V. 13. P. 1636-1644.

73. Calvi B.R., Hong T.J., Findley S.D., Gelbart W.M. Evidence for a common evolutionary origin of inverted repeat transposons in Drosophila and plants: hobo, Activator, and ТатЗ I/ Cell. 1991. V. 66. No. 3. P. 465-471.

74. Charlesworth В., Jarne P., Assimacopoulos S. The distribution of transposable elements within and between chromosomes in a population of Drosophila melanogaster. III. Element abundances in heterochromatin // Genet Res. 1994. V. 64. No. 3. P.183-197.

75. Charlesworth В., Langley C.H. The evolution of self-regulated transposition of transposable elements // Genetics. 1986. V. 112. P. 359-383.

76. Charlesworth В., Lapid A., Canada D. The distribution of transposable elements within and between chromosomes in a population of Drosophila melanogaster. II. Inferences on'the nature of selection against elements // Genet. Res. 1992. V. 60. P. 115-130.

77. Cohen S.N. Transposable genetic elements and plasmid evolution // Nature. 1976. V. 263. No. 5. P. 731-738.

78. Corces V.G., Geyer P.K. Interactions of retrotransposons with the host genome: the case of the gypsy element of Drosophila II Trends in Genet. 1991. V. 7. No. 3. P. 8690.

79. De Vries H. Die mutationstheorie. Bd. I. Veit&Comp. / Leipzig.

80. Di Franco C., Galuppi D., Junakovic N. Genomic distribution of transposable elements among individuals of an inbred Drosophila line // Genetica. 1992. V. 86. No. 1-3. P. 1-11.

81. Dimitri P. Constitutive heterochromatin and transposable elements in Drosophila melanogaster II Genetica. 1997. V. 100. No. 1-3. P. 85-93.

82. Dimitri P., Corradini N., Rossi F., Mei E., Zhimulev I.F., Verni F. Transposable elements as artisans of the heterochromatic genome in Drosophila melanogaster II Cytogenet. Genome Res. 2005. V. 110. No. 1-4. P. 165-172.

83. Dimitri P., Junakovic N., Area B. Colonization of heterochromatic genes by transposable elements in Drosophila И Mol. Biol. Evol. 2003. V. 20. No. 4. P. 503512.

84. Driver C.J., McKechnie S.W. Transposable elements as a factor in the aging of Drosophila melanogaster И Ann. N.-Y. Acad. Sci. 1992. V. 673. P. 83-91.

85. Eggleston W.B., Rim N.R., Lim J.K. Molecular characterization of /zo&o-mediated inversions in Drosophila melanogaster I I Genetics. 1996. V. 144. P. 647-656.

86. Emerson R.A. The inheritance of a recurring somatic variation in variegated ears of maize//Am. Nat.V. 48. P. 87-115.

87. Engels W.R., Benz W.K., Preston C.R., Graham P.L., Phillis R.W., Robertson H.M. Somatic effects of P element activity in Drosophila melanogaster: pupal lethality // Genetics. 1987. V. 117. P.745-757.

88. Engels W.R. Extra-chromosomal control of mutability in Drosophila melanogaster II Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1979. V. 76. P. 4011-4015.

89. Engels W.R. Germline hypermutability in Drosophila and its relation to hybrid dysgenesis and cytotype // Genetics. 1981. V. 98. P. 565-587.

90. Engels W.R., Johnson-Schlitz D.M., Eggleston W.B., Sved J. High-frequency P element loss in Drosophila is homolog dependent // Cell. 1990. V. 62. No. 3. P. 515525.

91. Engels W.R. The P family of transposable elements in Drosophila II Ann. Rev. Genet. 1983. V. 17. P. 315-344.

92. Finnegan D.J. Eukariotic transposable elements and genome evolution // Trends in Genet. 1989 V. 5. P. 103-107.

93. Fridell R.A., Pret A.M., Searles L.L. A retrotransposon 412 insertion within an exon of the Drosophila melanogaster vermilion gene is spliced from the precursor RNAI I Genes Dev. 1990. V. 4. P. 559-566.

94. Georgiev P.G., Kiselev S.L., Simonova O.B., Gerasimova T.I. A novel transposition system in Drosophila melanogaster depending on the Stalker mobile genetic element // The EMBO J. 1990. V. 9. P. 2037-2044.

95. Gerasimova T.I., Matjunina L.V., Mizrokhi L.J., Georgiev G.P. Successive transposition explosions in Drosophila melanogaster and reverse transpositions of mobile dispersed genetic elements. The EMBO J. 1985. V. 4. P. 3773-3779.

96. Gershenson S. Additional data on putative insertion mutations in wild populations of D. melanogaster II Drosophila Inform. Serv. 1980. No. 55. P. 46

97. Geyz C., van Schaik N. Somatic mutation in the wings of Drosophila melanogaster females dysgenic due to P-elements when reared at 29°C // Mutation Research. 1991. V. 248. P. 187-194.

98. Gloor G.B., Preston C.R., Johnson-Schlitz D.M., Nassif N.A., Phillis R.W., Benz W.K., Robertsons H.M., Engels W.R. Type I Repressors of P Element Mobility // Genetics. 1993. V. 135. P. 81-95.

99. Golubovsky M.D., Ivanov Yu.N., Green M.M. Genetic instability in Drosophila melanogaster. putative multiple insertion mutations of the singed bristle locus // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1977. V. 74. P. 2973.

100. Graf U. Analysis of the relationship between age of larvae at mutagen treatment and frequency and size of spots in the wing somatic mutation and recombination test in Drosophila melanogaster II Experientia. 1995. V. 51. P. 168-173.

101. Graf U., Frei H., Kagi A., Katz A.J., Wurgler F.E. Thirty compounds tested in the Drosophila wing spot test // Mutat. Res. 1989. V. 222. P. 359-373.

102. Graf U., van Schaik N., Wurgler F.E. Drosophila genetics: a practical course. Berlin: Springer-Verlag, 1992. 239 p.

103. Gray Y.H.M. It takes two transposons to tango // Trends in Genet. 2000. V. 16. No. 10. P. 461-468.

104. Greene В., Waiko R., Hake S. Mutator insertions in an intron of the maize knotted gene result in dominant suppressible mutations // Genetics. 1994. V. 138. No. 4. P. 1275-1285.

105. Guerreiro M.P.A., Biemont C. Changes in the chromosomal insertion pattern of the copia element during the process of making chromosomes homozygous in Drosophila melanogaster // Mol. Gen. Genet. 1995. V. 246. P. 206-211.

106. Handler A.M., Gomez S.P. P element excision in Drosophila is stimulated by gamma-irradiation in transient embryonic assays // Genet. Res. 1997. V. 70. No. 1. P. 75-78.

107. Harada К., Yukushiro К., Mukai Т. Transposition rates of movable genetic elements in Drosophila melanogaster II Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1990. V. 87. No. 8. P. 3248-3252. •

108. Hoogland C., Biemont C. Chromosomal distribution of transposable elements in Drosophila melanogaster. test of the ectopic recombination model for maintenance of insertion site number // Genetics. 1996. V. 144. P. 197-204.

109. Ho Y.T., Weber S.M., Lim J.K. Interacting hobo transposons in an inbred strain and interaction regulation in hybrids of Drosophila melanogaster // Genetics. 1993. V. 134. No. 3. P. 895-908.

110. Itoh M., Fukui Т., Kitamura M., Uenoyama Т., Watada M., Yamaguchi M. Phenotypic stability of the P-M system in wild populations of Drosophila melanogaster II Genes Genet. Syst. 2004. V. 79. No. 1. P. 9-18.

111. Johnson-Schlitz D.M., Lim J.K. Cytogenetics of Notch mutations arising in the unstable X chromosome Uc of Drosophila melanogaster II Genetics. 1987. V. 115. No, 4. P. 701-709.

112. Junakovic N., di Franco C., Barsanti P., Palumbo G., Transpositions of copia-like elements can be induced by heat shock // J. Mol. Evol. 1986. V. 24. P. 89-93.

113. Kaidanov L.Z., Bolshakov V.N., Tzygvintzev P.N., Gvozdev V.A. The sources of genetic variability in highly inbred long-term selected strains of Drosophila melanogaster II Genetica. 1991. V. 85. No. 1. P. 73-78.

114. Karlik C., Fyrberg E.A. An insertion within the variably spliced Drosophila tropomyosin gene blocks accumulation of only one encoded isoform // Cell. 1985. V. 41. P. 421-433.

115. Kazazian H.H.Jr. Mobile elements: drivers of genome evolution // Science. 2004. V. 303. P. 1626-1632.

116. Kidwell M.G. Evolution of hybrid dysgenesis determinants in Drosophila melanogaster II Proc. Natl Acad. Sci. USA.' 1983. V. 80. No. 6. P. 1655-1659.

117. Kidwell M.G. Hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster. Nature and inheritance of? element regulation // Genetics. 1985. V. 111. P. 337-350.

118. Kidwell M.G. Hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster: the relationship between the P-M and I-R systems // Genet. Res. 1979. V. 33. P. 205-217.

119. Kidwell M.G., Kidwell J.F., Sved J.A. Hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster: a syndrome of aberrant traits including mutation, sterility and male recombination//Genetics. 1977. V. 86. P. 813-833.

120. Kidwell M.G., Kimura K., Black D.M. Evolution gybrid dysgenesis potential following P element contamination in Drosophila melanogaster II Genetics. 1988. V. 119. P. 815.

121. Kidwell M.G., Lisch D. Transposable elements as sources of variation in animals and plants // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1997. V. 94. No. 15. P. 7704-7711.

122. Kidwell M.G., Novy J.B., Feeley S.M. Rapid unidirectional change of hybrid dysgenesis potential in Drosophila //J. Heredity. 1981. V. 72. No. 1. P. 32-38.

123. Kim A.I., Belyaeva E.S. Transpositions of mobile elements gypsy (mdg4) and hobo in germ-line and somatic cells of genetically unstable mutator strain of Drosophila melanogaster И Mol. Gen. Genet. 1991. V. 229. P. 437-444.

124. Kim J.M., Kim W. Identification of a full-size hobo element and deletion-derivatives in Korean populations of Drosophila melanogaster II Mol. Cells. 1999. V. 9. No. 2. P. 127-132.

125. Kloeckener-Gruissem В., Freeling M. Transposon-induced promoter scrambling: a mechanism for the evolution of new alleles // Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. No. 6. P. 1836-1840.

126. Kloeckener-Gruissem В., Vogel J.M., Freeling M. The TATA box promoter region of maize Adhl affects its organ-specific expression // The EMBO J. 1992. V. 11. No. l.P. 157-166.

127. Krogulski A. Usefulness of the fruit fly for asseement of mutagenicity of benzene, acetaldehyde and formaldehyde // Rocz. Panstw. Zakl. Hig. 1994. V. 45. P. 151-155.

128. Ladeveze V., Aulard S., Chaminade N., Periquet G., Lemeunier F. hobo transposons causing chromosomal breakpoints // Proc. Biol. Sci. 1998 V. 265. No. 1402. P. 1157-1159.

129. Lambert S., Saintigny Y., Delacote F., Amiot F., Chaput В., Lecomte M., Huck S., Lopez B.B.S. Analysis of intrachromosomal homologous recombination in mammalian cell, using tandem repeat sequences // Mutat. Res. 1999. V. 433. No. 3. P. 159-168.

130. Laski F.A., Rio D.C., Rubin G.M. Tissue specificity of Drosophila P element transposition is regulated at the level of mRNA splicing // Cell. 1986. V. 44. No. 1. P. 7-19.

131. Lawrence P.A., Johnston P., Morata G. Methods of marking cells / In: Drosophila: A practical approach (Ed.: Roberts D.B.) // IRL Press. Oxford, Washington DC, 1986. P. 229-242.

132. Lewin B. Genes VII // New York: Oxford University Press, 2000. P. 457-505.

133. Lewis R., O'Hare K., Rubin G. Effects of transposable element insertions on RNA encoded by the white gene of Drosophila II Cell. 1984. V.36. P. 471-481.

134. Lim J.K. Intrachromosomal rearrangements mediated by hobo transposons in Drosophila melanogaster I I Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1988. V. 85. No. 23. P. 9153-9157.

135. Lim J.K., Simmons M.J. Gross chromosome rearrangements mediated by transposable elements in Drosophila melanogaster I I BioEssays. 1994. V. 16. P. 269275.

136. Lim J.K. Site-specific intrachromosomal rearrangements in Drosophila melanogaster. cytogenetic evidence for transposable elements // Cold Spring Harbor Sympos. Quant. Biol. 1981. V. 45. P. 553-560.

137. Lindsley D.L., Zimm G.G. The genome of Drosophila melanogaster II San Diego; New York; Boston; London: Academic Press, Inc. 1992. 1133 p.

138. Mackay T. Transposable element-induced polygenic mutations in Drosophila melanogaster II Genet. Res. 1987. V. 49. P. 225.

139. Margulies L., Briscoe D.I., Wallace S.S. The relationship between radiation-induced and transposon-induced genetic damage during Drosophila spermatogenesis // Mutat. Res. 1987. V. 179. No. 2. P. 183-195.

140. Margulies L., Griffith C.S., Dooley J.C.,-Wallace S.S. The interaction between X-rays and transposon mobility in Drosophila: hybrid sterility and chromosome loss // Mutat. Res. 1989. V. 215. No. 1. P. 1-14.

141. Maside X., Assimacopoulos S., Charlesworth B. Rates of movement of transposable elements on the second chromosome of Drosophila melanogaster II Genet. Res. 2000. V. 75. P. 275-284.

142. McClintock B. Controlling elements and the gene // Cold Spring Harbor Sympos. Quant. Biol. 1956. V. 21.197 p.

143. McElwain M.C. The absence of somatic effects of P-M hybrid dysgenesis in Drosophila melanogaster II Genetics. 1986. V. 113. P. 897-918.

144. McGinnis W., Shermoen A.W., Beckendorf S.K. A transposable element inserted just 5' to a Drosophila glue protein gene alters gene expression and chromatin structure // Cell. 1983. V. 34. P. 75-84.

145. Montgomery E., Charlesworth В., Langley С. H. A test for the role of natural selection in the stabilization of transposable element copy number in a population of Drosophila melanogaster 11 Genet. Res. 1987. V. 49. P. 31-41.

146. Moore J.K., Haber J.E. Capture of retrotransposon DNA at the sites of chromosomal double-strand breaks //Nature. 1996. V. 383. No. 6601. P. 644-646.

147. Nowell P.C. How many human cancer genes? // J. Natl. Cancer Inst. 1991. V. 83. No. 15. P. 1061-1064.

148. O'Hare K., Rubin G.M. Structure of P transposable elements and their sites of insertion and excision in the Drosophila melanogaster genom // Cell. 1983. V. 34. P. 25-35.

149. О Hare K., Tam J.L., Lim J.K., Yurchenko N.N., Zackarov I.K. Rearrangements at hobo element inserted into the first intron of the singed gene in the unstable sn49 system of Drosophila melanogaster II Mol.'Gen. Genet. 1998. V. 257. No. 4. P. 452460.

150. Paques F., Haber J.E. Multiple pathways of recombination induced by double-strand breaks in Saccharomyces cerevisiae // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1999. V. 63. No. 2. P. 349-404.

151. Pascual L., Periquet G. Distribution of hobo transposable elements in natural populations of Drosophila melanogaster II Mol. Biol. Evol. 1991. V. 8. No. 3. P. 282-296.

152. Pasyukova E.G., Belyaeva E.S., Ilyinskaya L.E., Gvozdev V.A. Outcross-dependent transpositions of copia-Wkt mobile genetic elements in chromosomes ofan inbred Drosophila melanogaster stock // Mol. Gen. Genet. 1988. V. 212. P. 281286.

153. Periquet G., Hamelin M.H., Bigot Y., Ни K. Presence of the deleted hobo element Th in Eurasian populations of Drosophila melanogaster II Genet. Sel. Evol. 1989a. V.21.P. 107-111.

154. Periquet G., Hamelin M.H., Bigot Y., Lepissier A. Geographical and historical patterns of distribution of hobo elements in Drosophila melanogaster populations // J. Evol. Biol. 1989b. V. 2. P. 223-229.

155. Periquet G., Hamelin M.H., Kalmes R., Eeken J. hobo elements and their deletion-derivative sequences in D. melanogaster and in its sibling species D. simulans, D. mauritiana and D. Sechellia/I Genet. Sel. Evol. 1990. V. 22. P. 393-402.

156. Periquet G., Ronsseray S., Hamelin M.H. Are Drosophila melanogaster populations under a stable geographical differentiation due to the presence of P elements? // J. Heredity. 1989c. V. 63. P. 47-58.

157. Plasterk R.H. Molecular mechanisms of transposition and its control // Cell. 1993. V. 74. P. 781-786.

158. Rio D.C., Laski F.A., Rubin G.M. Identification and immunochemical analysis of biologically active Drosophila P element transposase // Cell. 1986. V. 44. No. 1. P. 21-32.

159. Rio D.C. Regulation of Drosophila P element transposition // Trends in Genet. 1991. V. 7. No. 9. P. 282-287.

160. Roberts D.B. Basic Drosophila care and techniques / In: Drosophila: A practical approach (Ed.: Roberts D.B.) // IRL Press. Oxford, Washington DC. P. 1986. P. 138.

161. Ronsseray S., Lehmann M., Periquet G. Comparison of the regulation of P elements in M and M1 strains of Drosophila melanogaster И Genet. Res. 1989. V. 54. No. l.P. 13-21.

162. Searles L.L., Ruth R.S., Pret A.M., Fridell R.A., Ali A.J. Structure and transcription of the Drosophila melanogaster vermilion gene and several mutant alleles//Mol. Cell Biol. 1990. V. 10. P. 1423-1431.

163. Sentry J.W., Kaiser K. Application of inverse PCR to site-selected mutagenesis of Drosophila II Nucl. Acids Res. 1994. V. 22. No. 16. P. 3429-3430.

164. Sheen F., Lim J.K., Simmons MJ. Genetic instability in Drosophila melanogaster mediated by hobo transposable elements // Genetics. 1993. V. 133. No. 2. P. 315334.

165. Siebel C.W., Rio D.C. Regulated splicing of the Drosophila P transposable element third intron in vitro: somatic repression // Science. 1990 V. 248. No. 4960. P. 1200-1208.

166. Spradling A.C. Transposable elements and the evolution of heterochromatin // Soc. Gen. Physiol. Ser. 1994. V. 49. P. 69-83.

167. Strand D.J., McDonald J.F. copia is transcriptionally responsive to environtmental stress // Nucl. Acids Res. 1985. V. 13. P. 4401-4410.

168. Streck R.D., MacGaffey J.E., Beckendorf S.K. The structure of hobo transposable elements and their insertion sites // The EMBO J. 1986. V. 5. No. 13. P. 3615-3623.

169. Sundararajan P., Atkinson P.W., O'Brochta D.A. Transposable element interactions in insects: crossmobilization of hobo and Hermes // Insect Mol. Biol. 1999. V. 8. No. 3. P. 359-368.

170. Tanda S., Gorces V.G< Retrotransposon-induced overexpression of a homeobox gene causes defects in eye morphogenesis in Drosophila II The EMBO J. 1991. V. 10. P. 407-417.

171. Tengs S.-C., Kim В., Gabriel A. Retrotransposon reverse-transcriptase-mediated repair of chromosomal breaks // Nature. 1996. V. 383. No. 6601. P. 641-644.

172. Thompson J.N., Woodruff R.C., Schaefer G.B. An apparent lack of somatic chromosome breakage in male recombination lines of Drosophila melanogaster II Genetics (Suppl). 1977. V. 86. P. 64-65.

173. Vasilyeva L.A., Bubenshchikova E.V., Ratner V.A. Heavy heat shock induced retrotransposon transpositions in drosophila // Genet. Res. 1999. V. 74. No. 2. P. 111-119.

174. Wieshaus E., Nusslein-Volhard Ch., Looking at embryos / In: Drosophila: A practical approach (Ed.: Roberts D.B.) // IRL Press. Oxford, Washington DC. 1986. P. 199-227.

175. Woodruff R.C. Transposable DNA elements and life history traits. I. Transposition of P DNA elements in somatic cells reduces the lifespan of Drosophila melanogaster II Genetica. 1992. V. 86. P. 143-154.

176. Yannopoulos G., Stamatis N., Monastirioti M., Hatzopoulos P., Louis C. hobo is responsible for the induction of hybrid dysgenesis by strains of Drosophila melanogaster bearing the male recombination factor 23.5 MRF // Cell. 1987. V. 49. P. 487-495.

177. Yannopoulos G., Stamatis N., Zacharopoulou A., Pelecanos M. Site-specific breaks induced by the male recombination factor 23.5 MRF in Drosophila melanogaster II Mutation Research. 1983. V. 108. P. 185-202.

178. Zachar Z., Davison D., Garza D. A detailed developmental and structural study of the transcriptional effects of insertion of the copia transposon into the white locus of Drosophila melanogaster II Genetics. 1985. V. 111. P. 495-515.

179. Zerges W., Louis C., Schedl P. Two non-gypsy rudimentary mutations and their suppression by mutations of suppressor of Hairy-wing in Drosophila II Mol. Gen. Genet. 1992. V. 235. No. 2-3. P. 441-449.

180. Zhimulev I.F., Semeshin V.F., Kulichkov V.A., Belyaeva E.S. Intercalary heterochromatin in Drosophila I. Localization and general characteristics // Chromosoma. 1982. V. 87. P. 197-228.

Информация о работе

Коваленко, Людмила Викторовна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2007
ВАК 03.00.15

Диссертация

hobo-элемент как фактор нестабильности генома Drosophila melanogaster в клетках генеративных и соматических тканей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы