Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика роста суспензионной культуры клеток Polyscias filicifolia Bailey при различных способах культивирования

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Клюшин, Андрей Геннадьевич

Введение.

Обзор данных литературы

Динамика роста культивируемых клеток высших растений в цикле периодического выращивания.

Факторы, влияющие на рост культивируемых клеток.

1.2.1 Генетические особенности объекта.

1.2.2 Факторы культивирования.

1.2.3 Режимы культивирования.

1.3 Особенности выращивания культивируемых клеток высших растений в биореакторах.

1.4 Рост суспензионной культуры клеток высших растений при выращивании в режимах, отличающихся от периодического.

1.5 Рост суспензионных культур клеток высших растений при масштабировании процесса выращивания.

1.6 Краткое описание семейства АгаИасеае.

1.7 Ро/уяс/о?/ШЫ/оНа, как объект с точки зрения физиологии и биотехнологии.

1.8 Методы определения уровня синтеза вторичных метаболитов (биологически активных веществ).

Глава 2 Материалы и методы исследования

2.1 Объект исследования.

Глава 1. 1.

2.2 Характеристики используемых биореакторов.

2.3 Анализ роста культуры.

2.4 Определение компонентов питательной среды.

2.5 Анализ биологической активности.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ а 3 Получение суспензионной культуры клеток из каллуса. а 4 Оптимизация гормонального состава питательной среды для получения максимального роста и биологической активности биомассы. а 5 Характеристика роста суспензионной культуры в различных режимах выращивания

5.1 Периодический режим выращивания

5.1.1 Выращивание в колбах.

5.1.2 Выращивание в барботажном биореакторе.

5.1.3 Выращивание в биореакторах с механическим перемешиванием.

5.2 Оптимизация концентрации сахарозы в среде для выращивания суспензионной культуры клеток Ро1узс1аяА1Ш/оИа в периодическом режиме.

5.3 Исследование роста при масштабировании процесса выращивания.

5.4 Исследование роста при режимах культивирования, отличающихся от периодического.

5.4.1 Полупроточный режим культивирования.

5.4.2 Проточный режим культивирования.

Глава 6 Исследование биологической активности биомассы, полученной при разных способах культивирования.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика роста суспензионной культуры клеток Polyscias filicifolia Bailey при различных способах культивирования"

Актуальность темы. В настоящее время наблюдается значительное повышение интереса медицинской науки и практики к фитопрепаратам.

Культура клеток высших растений является альтернативным способом получения растительного сырья для медицины, ветеринарии, парфюмерии и пищевой промышленности. Суть его состоит в получении биомассы клеток растений в стерильных контролируемых условиях в биореакторах большого объема.

Одним из объектов пристального внимания медицины и биотехнологии в последнее время являются растения семейства Аралиевых (Araliaceae). Растения этого семейства распространены в основном в тропической зоне. Некоторые из них обладают уникальными свойствами и представляют интерес как источник ценных биологически-активных веществ. В нашей стране природных условий для культивирования большинства ценных растений из семейства Аралиевых нет и поэтому работы по введению таких растений в культуру in vitro представляют значительную ценность. Polyscias filicifolia - один из ценных видов аралиевых для использования в медицине. Его используют как тонизирующее и противовоспалительное наружное средство жители мест естественного произрастания этого растения. В настоящее время в результате ряда исследований выявлены другие ценные свойства экстракта из листьев интактного растения и биомассы, полученной in vitro.

Исследование культур клеток высших растений позволяет решать не только практические задачи, но и фундаментальные проблемы. В частности, изучать процессы вторичного метаболизма, проблемы 6 — деления клеток и регулирования клеточного цикла, процессы дедифференцировки и морфогенеза in vitro. При этом выращивание клеток высших растений в биореакторах предоставляет исследователю принципиально новые возможности, прежде всего - параметрическое контролирование и регулирование процесса культивирования.

Более того, использование проточных режимов культивирования позволяет целенаправленно воздействовать на структуру популяции клеток высших растений in vitro и производить отбор клеток по признаку максимально интенсивной и/или устойчивой пролиферации.

Таким образом, изучение процесса роста суспензионной культуры клеток Polyscias filicifolia имеет как практическое, так и теоретическое значение. До последнего времени исследований культуры клеток этого растения с целью биотехнологического производства проведено не было.

Целью работы являлось изучение закономерностей процесса роста суспензионной культуры клеток Polyscias filicifolia в биореакторах различной конструкции и в разных режимах выращивания, а также разработка технологии получения биомассы в биореакторах полупромышленного объема.

Исходя из цели были поставлены следующие задачи исследования.

1. Получить разные линии суспензионной культуры клеток Polyscias filicifolia (в том числе с различной степенью агрегированности) и изучить характеристики роста культуры в колбах на качалке.

2. Исследовать рост культуры клеток Polyscias filicifolia с разной степенью агрегированности в биореакторах разного объема и различным типом перемешивания. Определить оптимальный тип 7 — биореактора для получения максимальной продуктивности по биомассе.

3. Изучить рост культуры клеток Polyscias filicifolia в разных режимах культивирования - периодическом, полу проточном, проточном (в режиме хемостата).

4. Провести масштабирование процесса выращивания культуры клеток

Polyscias filicifolia до биореакторов полупромышленного объема (до 630 литров). Провести наработку биомассы для изучения биологической активности и медико-биологических испытаний.

5. Проанализировать биологическую активность биомассы, полученной в разных условиях. Оптимизировать питательную среду для получения максимальной биологической активности биомассы. Научная новизна.

Получен ряд линий суспензионной культуры клеток Polyscias filicifolia- перспективного лекарственного растения.

Впервые изучены ростовые характеристики суспензионной культуры клеток полисциаса в различных биореакторах, отличающихся типом перемешивания. Показано, что одним из существенных факторов, влияющих на эффективность выращивания суспензионной культуры клеток в биореакторах с механическим перемешиванием является степень агрегированное™ культуры.

Исследовано влияние концентрации сахарозы в питательной среде на ростовые характеристики данного суспензионного штамма.

Впервые изучены характеристики роста и продуктивности культуры клеток Polyscias filicifolia при выращивании в различных режимах. Показана перспективность полупроточного режима культивирования для создания эффективной биотехнологии получения биомассы культуры клеток Polyscias filicifolia. 8 —

Оптимизирована питательная среда по гормональному составу для получения высокой биологической активности биомассы Практическая ценность.

Получена суспензионная культура клеток с хорошими ростовыми характеристиками, что необходимо для создания рентабельной технологии получения биомассы. Проведено выращивание полученной культуры в биореакторах большого объема - вплоть до полупромышленных. НПК "Биофармтокс" (С-Петербург) на основе биомассы культуры клеток Polyscias filicifolia разработана пищевая добавка "ВИТАГМАЛ", обладающая антитератогенным, тонизирующим и адаптогенным свойствами. Таким образом разработана система полупромышленного получения биомассы культуры клеток Polyscias filicifolia в биореакторе 0,63 м для производства препарата "Витагмал".

Положения, выносимые на защиту.

1. Полученная линия суспензионной культуры клеток имеет характеристики, достаточные для создания промышленной технологии получения биомассы.

2. Оптимизация режимов культивирования для создания рентабельного производства биомассы. Для культуры клеток Polyscias filicifolia оптимальным является полупроточный режим.

3. Условия масштабирования процесса выращивания до биореактора о полупромышленного объема (0,63 м ).

Апробация работы.

Основные положения работы были доложены на: 1. Congress on In Vitro Biology. "1997 Meeting of the Society for In Vitro Biology", Washington, 1997. 9 —

2. Втором международном симпозиуме "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования", Пущино, 1997.

3. Седьмой международной конференции "Биология клеток растений in vitro, биотехнология и сохранение генофонда", Москва, 1997.

4. "Втором международном симпозиуме по биотехнологии растений", Киев, 1998.

5. "7th International Meeting of Young Scientists in Horticulture", Lednice, Chech Republic, 1999.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 5 работ, одна статья принята к публикации в журнале "Биотехнология"№ 3, 2000 г .

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, шести глав: обзор данных литературы, объекты и методы исследования, результаты и обсуждение (4 главы), а также выводов и списка цитируемой литературы.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Клюшин, Андрей Геннадьевич

96 — Выводы.

1. Получены две хорошо растущие суспензионные культуры клеток лекарственного растения Ро1узс1а8 йИ^ГоНа с разной степенью агрегированности: менее 1 мм диаметр агрегатов у мелкоагрегированной и более 1 мм у крупноагрегированной. При выращивании в колбах в периодическом режиме они имели следующие ростовые характеристики: удельная скорость роста в экспоненциальной фазе 0,27 сут"1, продуктивность по биомассе- 0,6 г/л сут., экономический коэффициент- 0,56)

2. Впервые проведено выращивание суспензионной культуры клеток Р.

АИЫ/оИа в биореакторах разной конструкции. Показано, что в биореакторах с механическим перемешиванием значимым фактором является степень агрегированности культуры клеток. Мелкоагрегированная культура сохраняла высокие ростовые характеристики как в барботажных биореакторах, так и в биореакторах с механическим перемешиванием (|а = 0.3 сут"1, У=0.6, П=1 г/л сут.). Для крупноагрегированной суспензии наблюдалось значительное снижение ростовых характеристик в начальные фазы роста.

3. Осуществлено выращивания культуры клеток Р. уШЫ/оИа в полупроточном и проточном режиме (хемостат). В полупроточном режиме культивирования получена продуктивность по биомассе 1,5 г/л в сутки, что в 1,5 раза выше, чем при периодическом культивировании. Установлено, что в хемостатном режиме оптимальная скорость разбавления составляет 0,2-0,25 сут"1. При этом продуктивность культуры по биомассе составляет 2 г/л за сутки, что в 2 раза выше, чем в периодическом режиме культивирования.

Осуществлено масштабирование выращивания культуры клеток Р. АИЫ/оИа до биореакторов полупромышленного объема (0,63 м3). Проведено 5 циклов выращивания в этом биореакторе с удовлетворительными ростовыми характеристиками (максимальная продуктивность= 0,95 (г/л)*сут., максимальная удельная скорость роста= 0,3 сут"1, экономический коэффициент= 0,5). В ряде случаев происходило ухудшение ростовых характеристик, но их значения были не ниже, чем в колбах. В результате наработано 25 кг. биомассы, которая была использована для медико-биологических испытаний препарата "Витагмал".

Совместно с НПК "Биофармтокс" проведена оценка биологической активности биомассы, полученной при разных способах культивирования. Показано, что биомасса суспензионной культуры клеток Р. АНЫ/оНа, обладает большей активностью по сравнению с биомассой каллусной культуры (в 2-3 раза).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Клюшин, Андрей Геннадьевич, Москва

1. Александров В .Я. Клетки, макромолекулы и температура. Л.: Наука, 1975, - 330 с.

2. Бондарев Н.И., Особенности процессов роста и образования дитерпеновых стевиол-гликозидов в культурах стевии ( Stevia rebaudiana Bertoni) in vitro. // Дисс. канд. биол. наук- М.: ИФР РАН, 1998, с. 140.

3. Бутенко Р.Г. Физиология клеточных культур, состояние и перспективы. // Физиол. растений, 1978, т. 25, вып. 5, с. 1009 -1024.

4. Бутенко Р.Г. Выращивание клеток высших растений в суспензионной культуре.// Изв. АН СССР, Сер. биол., 1977, N 5, с. 697 709.

5. Бутенко Р.Г. Выращивание клеток высших растений в суспензионной культуре.// Изв. АН СССР, Сер. биол., 1977, N 5, с. 697 709.

6. Данилов A.B., Зайцева Г.В., Константинова В.А, Александрова И. В., Амбросов В.А, Влияние интенсивности массообмена на рост суспензионной культуры клеток женьшеня., Физиология растений, 1981, том 28, вып. 5, с. 1072-1077

7. Долгих Ю.И. Генетическая изменчивость по признаку температурочувствительности в культуре клеток женьшеня. // Автореф. дис. канд. биол. наук.- М.:Ин-т общей генетики АН СССР, 1986,- 19 с.

8. Долгих Ю.И., Шамина З.Б. Определение ростовых параметров с целью разработки модели для негативной селекции. // Физиол. растений, 1982, т. 29, N 2, с. 400 406.

9. Иванов В.Б. Клеточные основы роста растений. М.: Наука, 1974, - 223 с.

10. Иерусалимский Н.Д. Основы физиологии микробов. М.: Изд-во АН СССР, 1963,- 315 с.

11. Кандараков О.Ф., Воробьев A.C., Носов A.M. Биосинтетические характеристики популяции клеток Dioscorea deltoidea при проточном культивировании. // Физиология растений, 1994, т.41, №6, с. 913-917

12. Кандараков О.Ф., 1995. Дисс. канд. биол. наук. Ростовые и биосинтетические характеристики клеточных популяций Dioscorea deltoidea при различных режимах культивирования- М.: МГУ, 1995, с. 158.

13. Каранова С.Л., Шамина З.Б. Изучение суспензионной культуры клеток Dioscorea deltoidea Wall. // Физиол. растений, 1977, т. 24, вып. 3, с. 486 490.

14. Каухова И.Е., Воллосович А.Г., Цыганова В.А. Выбор питательной среды для глубинного культивирования тканей раувольфии змеиной. // Растит, ресурсы, 1981, т. 17, вып. 2, с. 217 -224.

15. Кефели В.И. Рост растений и природные регуляторы. // Физиол. растений, 1978, т. 25, вып. 5, с. 975 989.)

16. Ковалев А.Г., Обручева Н.В. Характеристика начального этапа сигмоидной кривой роста корня. // Физиол. растений, 1976, т. 23, вып. 2, с. 340 346.

17. Константинова H.A., Александрова И.В. Изменение pH среды в процессе роста суспензионной культуры Panax ginseng С.А. Меу. // В кн.: Тезисы докладов III Всесоюз. конф. по культуре клетокрастений. Ред. Бутенко Р.Г., Абовян, 1979, с. 30 31.

18. Курсанов A.JL, 1976, Транспорт ассимилятов в растении., М.,1. Наука

19. Липский А.Х., Дисс. канд. биол. наук. Физиология роста культур клеток растений в биореакторах (периодические режимы).- М.: ИФР РАН, 1993, с. 162.

20. Манаков М.Н., Кузнецов А.Е., Марквичев Н.С., Свитцов A.A. Мембранные биореакторы в биотехнологии. // Биотехнология. 1988, т.4, N.2, с. 165-175.

21. Перт С.Дж., Основы культивирования микроорганизмов и клеток. -М: Мир, 1978,-331 с.

22. Печуркин Н.С. Популяционная микробиология.- Новосибирск: Наука, 1978,-274с.

23. Слепян Л.И., Джабаева Л.А., Лощилина И.А., 1975, Химическое и фармакологическое изучение биомассы культуры тканей Polyscias filicifolia Bailey. Сообщение 2., Растительные ресурсы, XI, с. 523528.

24. Смоленская И.Н, Носов A.B., Ралдугина Г.Н., Суспензионная культура клеток кормовых бобов., Физиол. растен., 1988, 35, 6, 1229- 1237.

25. Смоленская И.Н., Ралдугина Г.Н. Культура протопластов из суспензии клеток сахарной свеклы. // Физиол. растений, 1981, т. 28, вып. 5, с. 1022- 1029.

26. Уильямсон М. Анализ биологических популяций. М.:Мир, 1975,-271 с.

27. Урманцева В.В., 1985, канд. дисс.

28. Холодова В.П. Рост и метаболизм углеводов в культуре ткани растений.// В кн.: "Культура клеток растений", под ред. Бутенко Р.Г., М., "Наука", 1981, с. 51 68.

29. Чернявская Т.Н., Холодова В.П. Выращивание клеток сахарной свеклы методом суспензионных культур.// Физиол. растений, 1977, т. 24, вып. 4, с. 867 873.

30. Agier С., Bister-Miel F., Guignard J.L. Etude de la vitesse moyenne de croissance d'une suspension cellulaire de Silene alba; influence de macroelements du milieu de culture. // Bull. Soc. Bot. Fr. Lett. Bot, 1983, V. 130, N 4-5, p. 291 300.

31. Bailyss M., Gould A.R., Studies on the growth in culture of plant cells., XVIII. Nuclear cytology of Acer Pseudoplatanus suspensuon cultures. J. Exp. Bot. 1974, 25, 87, 772-783.

32. Balague C., Wilson G. Growth and alkaloid biosynthesis by cell suspensions of Catharanthus roseus in a chemostat under sucrose and phosphate limiting conditions. // Physiol. Veg.,1982 V.20, N 3, p.515-522.

33. Barbel Grieb, Ulbrih Gross, Eva Pleschka, Birgit Arnholdt-Schmitt, Karl-Hermann Neumann, Embriogenesis of photoaututrophic cell cultures of Daucus carota L., Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 1994,38, pp. 115-122

34. Bayliss M. W. The duration of the cell cycle of daucus carota L. in vivo and in vitro. Exp. Cell Res., 1975, 92, 1, 31-38

35. BertolaM.A., Klis F.M. Continuous cultivation of glucose-limited Bean cells (Phaseolus vulgaris L.) in a Modified Bacterial fermenter.// J. of Exp. Bot., 1979, V.30 N 119, p. 12231231.

36. Bezdek M., Vyskot B., DNA synthesis in cytikinin autotrophic tobacco cells. Effect ofbromodeoxyuridine, fluorodeoxyuridine and kinetin. Planta, 1981, 152,3,215-224.

37. Bister-Miel F., Guignard J.L., Bury M., Agier C. Action compensatrice de la glutamine sur la croissance des cellules vegetels in vitro lors de la carence en phosphore.// Bull. Soc. Bot. Fr. Lett. Bot., 1985, V. 132, N 1, p. 5 14.

38. Chattopadhyay S., Datta S.K., Mahato S.B. 1994. Production of L-DOPA from cell suspension culture of Mucuna pruriens f. pruriens. Plant Cell Rep. 13, 519-522.

39. Chu J., Lark K.G., Cell cycle paramétrés of soybean (Glycine max L.) cells growing in suspension culture: suitabily of the system for genetic studies., Planta, 1976, 132, 3, 259-268.

40. Crosti P., Fluorescence activated analysis by glow cytometry of the DNA content in cell from Daucus carota L. cultures. Giorn. Bot. Ital. , 1985, 119, 1-2, Suppl. 2, 156-157

41. Davies P.O.L., Rees H., Mitotic cycles in Triticum species. Geredity, 1975,35,3,337-345.

42. Drapeau D., Blanch H.W., Wilke C.R. Growth kinetics of Dioscorea deltoidea and Catharanthus roseus in batch culture.// Biotech. Bioeng., 1986, V. 28, p. 1555 1563.

43. Ducos J.P., Pareilleux A. Effect of aeration rate and influence of pCO in large-scale cultures of Catharanthus roseus cells. // Appl. Microbiol. Biotechnol., 1986, V. 25, N 2, p. 101 105.

44. Eriksson T. Studies on the growth requirements and growth measurements of cell cultures of Haplopappus gracilis, // Physiol. Plantarum, 1965, V.18, N 4, p. 976 993.

45. Eriksson T. Duration of the mitotic cycle in cell cultures of Haplopappus graciluis // Physiol, plantarum., 1967, V. 20, N 3, p. 348 -354.

46. Fowler M.W. Commercial applications and economic aspects of mass plant cell culture. // In: Plant biotechnology. Eds. Mantell S.H., Smith H., Cambridge University Press, Cambridge, 1983, p. 3 -38.

47. Fujita Y. Industrial production of shikonin and berberine.// In:

48. Gopalsamy N., Gueho J., Julien H.R., Owadally A.W., Hostettmann K., 1990, Molluscicidial saponins of Polyscias dichrooostachia. Phytochemistry, Vol. 29, No 3, pp. 793-795

49. Gould A.R., Controll of the cell cycle in cultured plant cells. C.R.C. Crit. Rev. Plant Sci., 1984,1,4,315-344

50. Biotechnol. 1989, V.30 , p. 270-275.

51. Hartmann T., Prinzipen des pflanzlichen Sekundastoffechsels.// Plant Syst. & Evol. 1985, V. 150, N 1/2, P 15-34.)

52. Henshaw G.G., Jha K.K., Mehta A.R., Shakeshaft D.J., Street H.E. Studies on the growth in culture of plant cells. I. Growth patterns in batch propagated suspension cultures. // J. Exp. Bot., 1966, V. 17, N 51, p. 362-377.

53. Kamimura S., Akutsu M. Cultural conditions on growth of the cell culture of Papaver bracteatum. // Agr. and Biol. Chem., 1976, V. 40, N 5, p. 899 -906.

54. Kim D.J., Chang H.N. Effect of growth hormone modifications on shikonin production from Lithospermum erithrorizhon cell cultures with in situ extinction. // Biotech. Letters, 1990, V. 12, N 4,p. 289 294.

55. King P.J. Studies on the growth in culture plant cells. // J.Exp. Bot.,1977, V. 28, N 102, p. 142.

56. King P.J., Mansfiteld K.J., Street H.E. Control of growth and cell division in plant cell suspension cultures.// Can. J. Bot. 1973, V. 51, N 11, p. 1807- 1823.

57. King P.J., Street H.E., Growth patterns in cell cultures. Plant tissue and cell culture, 1977, ed. H.E. Street, Berkley-Loss Angeles, Univ. of Calif. Press., pp. 307-387

58. Mantell S.H., Matthews J.A., McKee R.A. Principles of plant biotechnology. An introduction to genetic engeneering in plants. Blackwell, Oxford, 1985, 269 p.

59. Martin S.M. Mass culture systems for plant cell suspensions. // In: Plant Tissue Culture as a Source of Biochemicals. Ed. Staba E.J., C.R.C. Press Inc., Boca Raton, Florida, 1980, p. 149-166.

60. Matanguihan, Konstantinov, Yoshida, 1996, Bioprocess engineering, vol. 11, issue 6, p. 213-222

61. Matsumoto T., Okunishi K., Noguchi M. Defined medium for gall cells of tobacco in suspension culture. // Agr. Biol. Chem., 1976, V. 40, N7, p. 1335 1339.

62. Maurel B., Pareilleux A. Carbon dioxide fixation and growth of heterotrophic cell suspensions of Catharanthus roseus. // J. Plant Physiol., 1986, V. 122, N 4, p. 347 355.

63. Monod J., Recherches sur la Croissanse des Cultures Bacteriennes. 2nd edn., Hermann, Paris, 1942.

64. Muir W.H., Hildebrandt A.C., Raiker A.J. Plant tissue culture produced from singl isolated cells. // Science, 1954, V.l 19, N 3103, p. 877 878.

65. Nash D.T., Davies M.E. Some aspects of growth and metabolism of Paul's Scarlet rose cell suspensions. // J. Exp. Bot., 1972, V. 23, N 74, p. 75-91.

66. Obata-Sasamoto H., Komamine A., 1983. Effect of culture conditionsllOon DOPA accumulation in a callus culture of Stizolobium hassjoo. J. Med. Plant Res. 49., 120-123.

67. Paphassarang S., Raynaud J., Lussignol M., 1988, Pharmazie, 44, 296

68. Redel G.P., 1974, Fructose effect in higher plants. Ann. Bot., vol. 38, N 155, pp. 287-297

69. Rennenberg H. Glutathione in conditioned media of tobacco suspension cultures. // Phytochemistry, 1976, V. 15, N 10, p. 1433 -1434.

70. Rokem J.S., Goldberg I. Secondary metabolites from plant cell suspension cultures: methods for yield improvment. // In: Advances in Biotechnological Processes 4. Ed. Mizrahi A., A.R. Liss, New York, 1985, p. 241 -274.

71. Rose D., Martin S.M. Parameters for growth measurment in suspension cultures of plant cells.// Can. J. Bot., 1974, V.52, p. 903 -912.

72. Rose D., Martin S.M. Growth of suspension cultures of plant (Ipomoea sp.) cell at various temperatutes. // Can. J. Bot., 1975, N 4, p. 315 325.

73. Sahai O.P., Shuler M.L. On the nonideality of chemostat operation using plant cell suspension cultures.// Can. J. of Botany, 1982V.60,N 5, p. 692-700.

74. Sakato K., Misawa M. Effects of chemical and physical conditions on growth of Comptotheca acuminata cell cultures. // Agr. Biol. Chem., 1974, V. 38, N3, p. 491 -497.

75. ScraggA.H., Allan E.J., Leckie F. Effect of shear on the viability of plant cell suspensions. // Enzyme Microb. Technol., 1988, V. 10, p. 361 367.

76. Slater J.H. Microbial growth dynamics. // In: Comprehensive1. Ill —biotecnology. V. I. The principles of biotechnology: Scientific fundamentals. (Vol. eds. Bull A.T., Dalton H.), Pergamon Press, NY, 1985, p. 189-213.

77. Smart N.J., Fowler M.W. An airlift column bioreactor suitable for large-scale cultivation of plant cell suspensions. // J. Exp. Bot., 1984, V. 35, N 153, p. 531 537.

78. Sparvoli E., Gay H., Kauffmann B.P., Duration of the mitoticcycle of Haplopappus gracilis. Cariologia, 1966, 19, 1-2, 65-71

79. Street H.E. Applications of cell suspension cultures.//In: Applied and Fundamental Aspects of Plant Cell, Tissue, and Organ Culture., Eds. Reinert J., Bajaj Y.P.S., Springer-Verlag, Berlin, 1977, p. 649 -667.

80. Stuart R., Street H.E. Studies on the growth in cuture of plant cells. X. Further studies on the conditioning of culture media by suspensions of Acer pseudoplatanus L. cells.// J. Exp. Bot. 1971, V. 22, N 70, p. 96 -106.

81. Takayama S., Misawa M., Ko K., Misato T. // Effect of culture conditions on the growth of Agrostemma gitago cells in suspension culture and the concomitant prodaction of an anti-plant virus substance. // Physiol. Plant., 1977, V. 41, N 4, p. 313 320.

82. Tal B., Rokem J.S., Goldberg I. Factors affecting growth and product formation in plant cells grown in continuous culture. // Plant Cell Rep., 1983, V. 2, N 4, p. 219 222.

83. Tanaka H. Large-scale cultivation of plant cells at high density: A review.//Process Biochem., 1987, V. 22, N 1, p. 106-113.

84. Tanaka H., Semba H., Jitsufuchi T., Harada H. The effect of physical stress on plant cells in suspension cultures. // Biotech. Letters, 1988, V. 10, N7, p. 485-490.112 —

85. Teasdale R.D, Richards D.K. Study of a factor produced by suspension-cultured Pinus radiata cells which enhances cell growth at low inoculum densities. // Plant Cell Tissue Org. Cult., 1991, V. 26, N l,p. 53 59.

86. Tulecke W, Nickell L.G. Production of large amounts of plant tissue by submerged culture. // Science, 1959, V. 130, p. 863 864.

87. Veliky J.A., Martin M. A fermentor for plant cell suspension culture. // Can. J. Bot., 1970, V. 16, p. 223 226.

88. Verma R.S., The duration of G1 S, G2 and mitosis at different temperaturesin Zea mays L. as measured with 3H-thymidine. Cytologia, 1980, 45, 1-2, 327-333.

89. Wilson G, Matron P. Growth and anthraquinone biosynthesis by Galium mollugo L. cells in batch and chemostat culture.// J. of Exp. Bot, 1978, V.29,N 111, p. 837-851.

90. Wilson G. A simple and inexpensive design of chemostate enabling113 —steady-state growth of Acer pseudoplatanus L. cells under phosphate-limiting conditions. // Ann. Bot., 1976, V. 40

91. Wilson S.B., King P.J., Street H.E. Studies on the growth in culture of plant cells. XII. A versatile system for the large scale batch or continuous culture of plant cell suspensions. // J. Exp. Bot., 1971, V. 22, N70, p. 177-207.

92. Zenk M.H. The impact of plant cell culture on industry. // In: Frontiers of plant tissue culture 1978. Ed. Thorpe T. A., University of Calgary, Calgary, 1978, p. 1 13.