Характеристика ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus на воздействие факторов водной среды

Шостак, Елена Ивановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus на воздействие факторов водной среды
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus на воздействие факторов водной среды"

На правах рукописи

ШОСТАК Елена Ивановна

ХАРАКТЕРИСТИКА ОТВЕТНЫХ РЕАКЦИЙ АКТИНОБАКТЕРИЙ РОДА ЯНОВОСОССШ НА ВОЗДЕЙСТВИЕ ФАКТОРОВ ВОДНОЙ СРЕДЫ

03.00.07 - «Микробиология»

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Оренбург - 2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургской государственной медицинской академии Министерства здравоохранения Российской Федерации»

Научный руководитель: Заслуженный работник высшей школы,

доктор биологических наук, профессор Соловых Галина Николаевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Карташова Ольга Львовна

кандидат биологических наук Карнаухова Ирина Владимировна

Ведущая организация: Челябинская государственная

медицинская академия

Защита состоится «23» декабря 2004 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного Совета Д 208.066.01 в ГОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации» по адресу: 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Оренбургской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан ноября 2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор н. В. Немцева

¿00 6 - » ^/vy

21/&09

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Сукцессионные изменения в бактериальных сообществах водных экосистем определяются степенью их экологической толерантности к биотическим и абиотическим факторам среды. Выживание бактерий в условиях водоёма основано на их ответных реакциях во взаимоотношениях с природными и антропогенными факторами водной среды, в основе которых лежат как специфические (через среду обитания), так и неспецифические (проявляющиеся в разной динамике роста и размножения популяций бактерий) механизмы регуляции этих взаимоотношений (Пшеничное и др., 1975; Бухарин, Литвин, 1997).

Особое место в бактериальных сообществах водоёмов занимают алкно-трофные родококки, обладающие функциональным разнообразием и характерным комплексом реализуемых стратегических приёмов выживания. Изучение данной группы микроорганизмов приобретает всё большую экологическую значимость на фоне современного кризиса окружающей среды, когда увеличивается число местообитаний, в которых организмы находятся в экстремальных условиях (Ившина, 1997).

Попадая в условия открытого водоёма или ёмкости биологической очистки, родококки на разных этапах своего существования встречаются с широко распространённым у гидробионтов ферментом- лизоцимом (Tripp, 1961; Ломакин, 1990; Соловых, 1995; Карнаухова, 2001), и хотя накоплено достаточно много данных об антимикробном действии этого фермента (Бухарин, Васильев, 1974; Купер, 1980; Подборное, Бердыев, 1991), но до сих пор не достаточно полно изучен вопрос об ответных реакциях актинобактерий рода Rhodococcus sensu stricto к действию данного природного фактора.

Исходя из полученных данных о существовании в условиях водного биоценоза взаимодействий „моллюски - бактерии", основанных на способности гидробионтов за счёт антибактериальных факторов воздействовать на микроорганизмы и данных о наличии у моллюсков лизоцима (Карнаухова, 2000), представлялось логичным оценить воздействие лизоцима моллюсков на ак-тинобактерии рода Rhodococcus sensu с целью оценки их потенциальной способности адаптироваться к биотическим факторам природных водоёмов.

В условиях природного биоценоза актинобактерии испытывают воздействия не только биотических, но и антропогенных факторов среды, в том числе тяжёлых металлов (Илялетдинов, 1984; 1989), и хотя в процессе эволюции живые организмы приспособились к наличию тяжёлых металлов в окружающей среде и выработали определённые механизмы регуляции к их усвоению, но в условиях растущего техногенного загрязнения остаются некоторые допустимые количества поглощения тяжёлых металлов, выше которых регуляторные механизмы уже не справляются с проявлением негативного воздействия на организм,

спорным вопрос о наличии ifлаз\аяфаю«яивост1

Cftet«p4ypr mine

л, Тр ии ал

атуре остается до сих пор к металлам у представите -

лей рода Rhodococcus sensu stricto вида R. ruber. Всё выше сказанное (недостаточная изученность вопросов адаптации родококков к условиям природных водоёмов, их биологических характеристик, обеспечивающих функционирование актинобактерий в биотопах водоёмов и возможность интродукции родококков в открытые водные экосистемы с целью активизации процессов самоочищения), свидетельствует об актуальности углубленного изучения особенностей ответных реакций бактерий к воздействиям природного фактора гидробиоценоза - лизоцима и антропогенного фактора - тяжёлых металлов, обеспечивающих их адаптацию в условиях водоёма и ещё большую значимость этот вопрос приобретает потому, что актинобактерии этого рода являются наиболее разрабатываемыми в прокариотологии био-технологически перспективной группой микробов (Finnerti, 1992; Wahust, Fewson, 1994).

Цель исследования - изучение особенностей ответных реакций бактерий рода Rhodococcus на воздействие природного - лизоцима и антропогенного -тяжёлые металлы факторов водной среды, обеспечивающих их адаптацию в условиях водоёма.

Задачи исследования.

1. Изучить распространённость лизоцимного и антилизоцимного факторов у бактерий рода Rhodococcus, выделенных из природных водных источников.

2. Провести оценку характера ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus к лизоциму моллюска Unió pictorum и тяжёлым металлам.

3. Оценить роль антилизоцимной активности актинобактерий рода Rhodococcus в механизмах ответных реакций родококков на воздействие лизоцима моллюска U. pictorum.

4. Обосновать методические подходы к охране водоёмов от антропогенного загрязнения тяжёлыми металлами.

Научная новизна. Обнаружено наличие лизоцимной и антилизоцимной активностей у штаммов родококков, принадлежащих к б видам. Выявлен широкий диапазон толерантности видов R. ruber, R. luteus, R. erythropolis, R. rhodnii, Я rhodochrous и R. egui к природному фактору - лизоциму моллюска U. pictorum: лизоцимчувствительность, лизоцимустойчивость и лизоцимза-висимость. Показано, что в механизмах ответных реакций актинобактерий к воздействиям лизоцима играет роль антилизоцимная активность, то есть выявлена система лизоцим моллюска U. pictorum - антилизоцимная активность актинобактерий рода Rhodococcus. Уровень АЛА определяет степень чувствительности и устойчивости родококков к лизоциму: отсутствие АЛА или её низкий уровень - 2 мкг/мл - определяет чувствительность, а уровень 6-8 мкг/мл - устойчивость и зависимость к лизоциму. Установлено, что маркером высокой чувствительности к лизоциму моллюска U. pictorum у родококков является отсутствие АЛА или её низкий уровень (2 мкг/мл).

Выявлен разный характер ответных реакций актинобактерий вида R. ruber к антропогенному воздействию тяжёлых металлов, проявляющийся в изменении динамики роста и последовательности прохождения фаз развития микробной популяции.

Выделены устойчивые к загрязнениям водной среды цинком, кадмием и свинцом штаммы вида R. ruber (ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221, ИЭГМ 222, ИЭГМ 338, ИЭГМ 347) и показана их способность к аккумуляции этих металлов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные данные расширяют знания о биологических свойствах актинобактерий рода Rhodococcus (лизоцимной и антилизоцимной активностей) и представления о характере и механизмах ответных реакций на природные (лизоцим) и антропогенные (тяжёлые металлы) воздействия водной среды, обеспечивающих их сохранение в водных биоценозах, что позволяет использовать научно - обоснованные подходы к формированию микробных сообществ водоёма.

Практическое значение исследования заключается в возможности использования показателя персистенции бактерий — антилизоцимной активности, как маркера в оценке степени чувствительности родококков к природному фактору гидробионтов - лизоциму.

Выявленные штаммы вида R. ruber, устойчивые к действию металлов и способные к их аккумуляции, позволили разработать методические приёмы охраны водоёмов от загрязнения цинком, кадмием и свинцом.

Разработан новый способ микробиологической очистки сточных вод промышленных предприятий от ионов цинка, свинца и кадмия, основанный на использовании штаммов вида R. ruber, аккумуляторов: ИЭГМ 219 - Zn и Cd; ИЭГМ 220 - Cd; ИЭГМ 221 - Zn; ИЭГМ 222 и ИЭГМ 338 РЬ и Cd; ИЭГМ 347 - Zn и РЬ (патент Российской Федерации на изобретение № 2216525 от 20 ноября 2003 г).

Способ позволяет снизить степень антропогенного загрязнения природных водоёмов тяжёлыми металлами.

Внедрение результатов исследования в практику. Способ микробиологической очистки сточных вод промышленных предприятий от ионов тяжёлых металлов: цинка, кадмия и свинца внедрён в работу лаборатории городских очистных сооружений г. Оренбурга (акт внедрения №5 от 31.04.2004г.), Центра Госсанэпиднадзора (акт внедрения №7 от 30.05.2004г.), в работу научно-производственной фирмы «Экобиос» (акт внедрения НПФ «Экобиос» №9 от 28.05.2004г.) и комитета по экологии администрации Оренбургской области (акт внедрения №6 от 30.03.2004г.), в лабораторию очистных сооружений Ириклинской ГРЭС (акт внедрения №2 от 27.02.2004г.).

Данные исследования применяются в системе вузовского образования студентов на кафедрах экологии ОГУ (акт внедрения №6 от 21.03.2004г.), Оренбургском государственном аграрном университете (акт внедрения № 11

от 28.04.2004г.) и Оренбургскомй государственной медицинской академии (акт внедрения №7 от 16.03.2004г.).

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на региональных научно-практических конференциях молодых учёных: Оренбург, 1997, 1999; на конференции молодых учёных и студентов „Охрана природы и здоровья человека", Оренбург, 1997; на III межрегиональной конференции памяти Д. Соловых „ Проблемы медицины, биологии, экологии и новые научные технологии в XXI век", Оренбург, 2000; V Международной научной конференции „Проблемы загрязнения окружающей среды", Пермь - Волгоград, 2001; VI Путинской школе-конференции молодых ученых, Пущино, 2002; I Всероссийской научно-практической конференции с международным участием „Биоэлементология", Оренбург, 2004.

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, из них 2 журнальные статьи и получен патент на изобретение.

Положения, выносимые на защиту.

1. Ответные реакции бактерий рода Rhodococcus на факторы водной среды характеризуются изменениями динамики роста бактериальной популяции, которая определяется нарушениями времени её генерации и последовательностью прохождения фаз развития.

2. В механизмах резистентности актинобактерий рода Rhodococcus к биотическому фактору - лизоциму моллюска U. pictorum участвует антилизо-цимная активность, уровень которой является маркером степени чувствительности к лизоциму.

3. Предложен новый методический подход к очистке водоёмов от антропогенного загрязнения тяжёлыми металлами, основанный на использовании штаммов вида R. ruber, являющихся активными аккумуляторами цинка, кадмия и свинца.

Объём и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 156 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, главу по материалам и методам исследования, четыре главы собственных исследований, заключение, выводы, приложение. Указатель литературы содержит 123 отечественных и 51 зарубежный источник литературы. Текст иллюстрирован 10 таблицами и 28 рисунками.

Связь работы с научными программами.

Диссертационное исследование выполнено в Оренбургской Государственной медицинской академии в соответствии с открытым планом научно-исследовательской работы в рамках научного направления „Экология человека и гигиена окружающей среды" (№ госрегистрации 01.9.60 013235 ).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.

Материалом для исследования послужили 58 штаммов актинобактерий рода Rhodococcus из Региональной профилированной коллекции микроорга-

низмов Института экологии и генетики микроорганизмов г. Перми (Каталог штаммов..., 1994), принадлежащих к шести видам: R. ruber, R. luteus, R. erythropolis, R. rhodnii, R. rhodochrous и R. egui. Лизоцимную и антилизо-цимную активности изучали по методам разработанным О.В. Бухариным с соавторами (1984; 1992; 1997).

Ферментный препарат - лизоцим моллюска U. pictorum получали из го-могенатов ткани моллюска методом специфической сорбции на хитине (Черкасов, Кравченко, 1968; 1969). Концентрирование и очистка фермента осуществлялась в концентраторах фирмы „Amicon" (USA) трёх типовrCentricon-30, Centricon-10, Centriplus YM-3. Концентрацию белка в экстрактах и элюа-тах определяли по методу Лоури (Lowry et. al., 1951).

Литическую активность препарата определяли турбидиметрически с использованием суспензий обработанных хлороформом (Бухарин и др., 1997) клеток М. lysodeikticus. За единицу активности преперата принимали падение оптической плотности суспензии на 0.001 за одну минуту. Вычисляли бакте-риолитическую активность в 1мл препарата (ед/мл) и в пересчете на количество белка (ед/мг белка), используя в качестве стандарта препарат лизоцима фирмы «Ферейн» при концентрации белка 1 мкг/мл.

Для выращивания и культивирования исследуемых штаммов использовалась минеральная Киевская среда (Малашенко и др., 1973), в которую в качестве источника углерода и энергии добавлялся ацетат аммония в концентрации 2 г/л (Пешкур, 2002).

Для оценки чувствительности исследуемых штаммов к лизоциму моллюска U. pictorum, выращенную 3-х суточную культуру при 28°С на 1.5 % мя-сопептонном агаре исследуемого штамма переносили в Киевскую среду с добавлением ацетата аммония для получения взвеси культуры, которую разливали в пробирки: 1-я контрольная - содержала 10 мл полученной взвеси без лизоцима, а во 2-ю опытную пробирку вносили 9 мл взвеси культуры и добавляли 1 мл лизоцима моллюска U. pictorum, где присутствие фермента приводило к бактериолитическому действию в отношении исследуемых микробных клеток, эквивалентному эффекту препарата яичного лизоцима фирмы «Ферейн», содержащего белок в концентрации 1 мкг/мл. Из контрольной и опытной пробирок определялось исходная численность бактерий ОМЧисх. После суточного сокультивирования бактерий с полученным препаратом лизоцима и без него производили посев на ОМЧ как из контрольной Пробирки (ОМЧк24), ТЭК И ИЗ ОПЫТНОЙ - (ОМЧ„24).

Расчет прироста (убыли) бактериальных клеток в культуре за сутки, (%): (б — а). 100% со - процент прироста (убыли) бактериальных т'0//" клеток в культуре,

а — исходное содержание бактериальных клеток в культуре,

б - конечное содержание бактериальных клеток в культуре.

Экспериментальная оценка чувствительности родококков к ионам тяжёлых металлов осуществлялась в процессе 72-х часового сокультивирования исследуемых штаммов с определёнными металлами: цинком, кадмием, свинцом и медью. Для решения данной задачи 3-х суточная выращенная культура штамма сокультивировалась с разными металлами, при разных их концентрациях (выше ПДК, равной ПДК и ниже ПДК) на жидкой Киевской среде с ацетатом аммония в качестве источника углерода и энергии. Контролем служила культура, культивируемая в таких же условиях без металлов. Оценку динамики роста культуры как в контроле, так и в опыте осуществляли через 18, 24, 48 и 72 часа по общему микробному числу (ОМЧ) жизнеспособных клеток родококков, которые давали рост на агаризованной Киевской среде.

Оценка содержания металлов проводилась с помощью атомно-адсорбционного спектрофотометра АББШ в лицензированной химической лаборатории ВНИИМС г. Оренбурга. О способности родококков к биоаккумуляции исследуемых металлов судили по степени исчезновения иона из культуральной жидкости и по наличию его в микробной массе. О поглощающей способности родококков судили по степени исчезновения цинка, кадмия, свинца и меди из среды, определяемой по формуле:

(Снач - Скон). 100%, где С нач - исходная, Скон - конеч-

©>%= ТГ пая концентрация металлов в среде

культивирования родококков.

Одновременно регистрировали количество металла, поглощенного клеточной биомассой. Для этого суспензию клеток осаждали центрифугированием (2000 g, 20 мин), тщательно (до отсутствия металлов в промывных водах) отмывали 0.5 %-ым раствором №С1, затем разрушали ультразвуком с помощью низкочастотного диспергатора УЗДН-А (22 кГц, 0.44 А, 15 мин в условиях обязательного охлаждения суспензии). Гомогенаты клеток центрифугировали при 2000 g в течение 20 мин. Полученные супернатанты анализировали на присутствие ионов металлов. Коэффициент биоаккумуляции рассчитывали как соотношение количества (мкМоль/г) внутриклеточного металла к количеству (мкМоль/мл) металла в культуральной среде (Пешкур, 2002).

Расчёт времени генерации культур за сутки производили по формуле, предложенной Д.З. Гак (1975).

Математическая обработка результатов исследования проведена методом факторного анализа (Харман, 1988; Драйпер, Смит, 1973; Иберла, 1980), корреляционного анализа, методами параметрического (¿-критерий Стью-дента) и непараметрического (критерий Вилкоксона) сравнения. Компьютерная обработка материалов осуществлялась на кафедре „Информационные системы в экономике" (зав. кафедрой - профессор В.И. Чепасов) Оренбургского государственного университета.

Результаты исследования и их обсуждение.

В основе формирования микробных биоценозов лежит явление бактериального антагонизма, одним из механизмов которого является продукция специфических антагонистически активных веществ (антибиотиков, бакте-риоцинов, лизоцима и др.). Среди факторов экологической значимости в межмикробном взаимодействии многие авторы называют лизоцим, действующий на полисахариды клеточной стенки бактерий (Багнюк, Закордонец, 1980; Реброва, Горохов, 1983; Бухарин и др., 1985; Соловых, 1995). Лизоци-мактивные штаммы микроорганизмов вытесняют из экологической ниши лизоцимчувствительные, но не менее важную роль в биоценотических отношениях играет и умение бактерий им противодействовать. Одним из механизмов микробного «противодействия» является секреция веществ, инакти-вирующих защиту хозяина и обеспечивающая тем самым микроорганизму возможность персистировать в биоценозе.

Одним из главных маркеров бактериальной персистенции микроорганизмов в биоценозе О. В. Бухарин (1992), Г. Н. Соловых (1995), Н. В. Немцева (1998), Фабарисова Л. Г. (2000), Е. М. Нефедова (2001) называют антилизо-цимную активность. Экспериментально доказано, что антилизоцимный признак бактерий способствует их внутриклеточному паразитированию в эука-риотических клетках хозяина. Поэтому на первом этапе работы было проведено исследование ЛА и АЛА активностей у актинобактерий рода Rhodococcus sensu stricto.

Анализ наличия лизоцимного и антилизоцимного признаков у 58-ми штаммов, шести видов актинобактерий рода Rhodococcus (R. ruber, R, luteus, R. erythropolis, R. rhodnii, R. rhodochrous, R. egui) и Rhodococcus sp. показал большую гетерогенность этого рода по лизоцимному и антилизоцимному признакам (рис. 1).

У 77.6±5.1% бактериальных штаммов родококков не было зафиксировано экспрессии лизоцимной активности, но широко была выражена антилизо-цимнсш активность (ЛА~, АЛА+), которая у разных штаммов этой группы варьировала от 2 до 8 мкг/мл. Наибольшее число штаммов (31.0±2.2%) проявляли уровень ант илизоцгшно й активности в 6 мкг/мл, а самая низкая ан-тилизоцимная активность 2 мкг/мл была выражена у 10.3±1.5% штаммов. Среди исследованной группы родококков высоким было число штаммов, имеюших уровень антилизоцимной активности 4 и 8 мкг/мл (17.3±1.7% и 19.0+1.8%).

Вторую группу составили штаммы, у которых присутствовал лизоцимный признак, но отсутствовал антилизоцимный - 3.5±0.5% (ЛА+, АЛА~).

В третью группу родококков вошли (объединены) штаммы, у которых одновременно были выражены как лизоцимная, так и антилизоцимная активности (ЛА+, АЛА+), их процент был значительно ниже и составил среди исследованных штаммов 8.6+0.7%. В большем количестве в этой группе были

Рис.1. Структура популяции бактерий рода Rhodococcus по экспрессии лизоцимного (J1A) и антилизоцимного

(АЛА) признаков.

I- а-ЛА(-), AJ1A(2) V- DD- ЛА(+), АЛА(-) [Х- Ш ЛА(-), АЛА(-)

II- ЛА(-), АЛА(4) VI- И-ЛА(+),АЛА(2) ^

III- Д-ЛА(-),АЛА(б) VII- ЕЦ-ЛА(+), АЛА(б)

IV- Щ -ЛА(-), АЛА(8) VIII- И"ЛА(+), АЛА(8)

1-Я ruber: ИЭГМ 92, ИЭГМ 384, ИЭГМ 386; R. erylkropolis: ИЭГМ 257; А rhodochrous: ИЭГМ 653, ИЭГМ 654; П ruber :ИЭГМ 377, ИЭГМ 383, ИЭГМ 385; A luteus: ИЭГМ 39, ИЭГМ 175, ИЭГМ 277; Я erythropolis: ИЭГМ 23, ИЭГМ 25, ИЭГМ 180, ИЭГМ 203; III-Ä. ruber : ИЭГМ 222, ИЭГМ 325, ИЭГМ 347, ИЭГМ 376, ИЭГМ 380, ИЭГМ 382; Я luteus : ИЭГМ 38, ИЭГМ 278; Я erythropolis : ИЭГМ 22, ИЭГМ 26, ИЭГМ 183, ИЭГМ 190, ИЭГМ 192, ИЭГМ 199, ИЭГМ 211, ИЭГМ 214, ИЭГМ 265; Rhodococcus sp.: ИЭГМ 743; IV A ruber : ИЭГМ 71, ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221, ИЭГМ 348; Я luteus : ИЭГМ 35, ИЭГМ 37; Я erythropolis : ИЭГМ 184, ИЭГМ 187, ИЭГМ 191. ИЭГМ 200; V-A ruber : ИЭГМ 83; Я erythropolis : ИЭГМ 202; VI-Ä rhodnn: ИЭГМ 555; УП-Ä ruber : ИЭГМ 338; A luteus : ИЭГМ 40, ИЭГМ 178; VIII-A ruber : ИЭГМ 90; IX-А luteus : ИЭГМ 36, ИЭГМ 171, ИЭГМ 173; A erythropolis: ИЭГМ 179, ИЭГМ 189; A egui ИЭГМ 715.

представлены штаммы с уровнем анттизоцимной активности 6 мкг/мл (5.2±1.7%).

В то время как у 10.3±1.5% изученных штаммов не отмечалось экспрессии как лизоцимного, так и анттизоцимного признаков (ЛА~, АЛА").

Таким образом, проведенный анализ показал, что как правило при экспрессии анттизоцимного и лизоцимного признаков наблюдалась обратная зависимость: присутствие антилизоцимной активности исключало экспрессию лизоцимной активности и наоборот - присутствие лизоцимной исключало антилизоцимную; значительно реже прослеживалась либо одновременная экспрессия обоих признаков, либо отсутствие экспрессии как лизоцимного, так и анттизоцимного признаков.

Установление факта широкого распространения у родококков разного | уровня антилизоцимной активности и обнаруженная способность гидробио-нтов продуцировать лизоцим (Tripp, 1961; Ломакин, 1990; Соловых и др., 1995; Карнаухова, 2000), определило следующий этап исследования: постановку эксперимента по изучению характера и механизмов ответных реакций родококков на воздействие лизоцима моллюска U. pictorum, с целью определения степени их чувствительности к воздействию биотических факторов среды, а через призму решения этого вопроса оценить потенциальные возможности выживания актинобактерий в условиях водных сообществ биоценоза и сохранения его способности к самоочищению за счёт микробной деструкции и аккумуляции поступающего антропогенного загрязнения.

В эксперименте использовали ферментный препарат лизоцима пресноводного двустворчатого моллюска U. pictorum, который получали из гомоге-натов его тканей.

Эффективность сорбции на хитине, бактериолитический эффект в отношении М. lysodeikticus, результаты использования электрофоретических исследований и метода "gel overlay technique" доказывали наличие в полученном препарате белковой фракции идентифицированной как лизоцим пресноводного двустворчатого моллюска U. pictorum, который и был использован нами в дальнейшем эксперименте для оценки чувствительности родококков к его действию.

В результате проведенных исследований и анализа их результатов по характеру ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus на воздействие лизоцима все исследованные штаммы родококков были разделены на три группы: первая - лизоцимчувствительные, к ним отнесены 43.1±3.5%: из которых высокочувствительных было - 13.7+1.5% и слабочувствительных - 29.4±1.9%; ко второй группе отнесены 6.9±1.5% штаммов, устойчивых к лизоциму и к третьей - 50±4.1% лизоцимзависимых штаммов (р<0.05).

которые, по-видимому, обеспечивают межпопуляционные взаимодействия актинобактерий рода КИойососсш с гидробионтами в водном биоценозе.

Проведенный анализ ответных реакций актинобактерий рода Шос1ососсш к воздействию лизоцима моллюска и. рШогит показал, что характер ответных реакций у лизоцимзависимых, лизоцимустойчивых и лизоцимчувствительных родококков был различен.

Для лизоцимзависимых штаммов прослежено два типа ответных реакций на воздействие лизоцима: 1 - когда в присутствии лизоцима (опыт) наблюдался прирост бактериальной популяции, по сравнению с их ростом в контроле (рис. 2) и индекс стимуляции роста для таких штаммов составил 2.86Ю.4, что обусловлено укорочением времени генерации бактерий до 1.18± 0.11 (рис. 3);

%омч

200

150 100 50 0 -50 -100

Рис. 2. Изменение общего микробного числа бактерий рода Шо<1ососст в присутствии лизоцима моллюска и. рШогит (М+т).

Лиэоцимзависимые: | 1-го типа; лизоцимчувствительные: [ Ш-высокочувствительные;

I И-го типа; I 1У-слабочувствительные;

У-лизоцимустойчивые. индекс стимуляции; индекс торможения.

_ контроль опыт с лизоцимом

2 - когда в присутствии лизоцима рост микробной популяции замедлялся, но меньше, чем в контроле - индекс торможения роста составил 1.43±0.01, что вызвано укорочением скорости генерации бактериальной популяции, но в 2.5 раза меньшим, чем при первом типе зависимости - 2.93±0.07 (р<0.05).

Время, час

5-------НЕ

\ I II III IV V

Примечание' *-достоверностьотличий р<0 05.

Рис. 3. Изменение времени генерации бактерий рода Rhodococcus в присутствии лизоцима моллюска U. pictorum (М+ш).

Лизоцимзависимые: Г 1-го типа; лизоцимчувствительные: Г Ш-высокочувствительные;

111-го типа; I IV-слабочувствительные;

V- лизоцимустойчивые. ц контроль; |~j опыт с лизоцимом.

На основе проведённого анализа к лизоцимзависимым штаммам, с первым типом ответных реакций отнесены 41.4 % штаммов: 12.1% штаммов вида R. ruber (ИЭГМ 71, ИЭГМ 90, ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221, ИЭГМ 325, ИЭГМ 347), 10.3% штаммов R. luteus (ИЭГМ 35, ИЭГМ 37, ИЭГМ 38, ИЭГМ 40, ИЭГМ 178, ИЭГМ 278), 17.3% штаммов R. erythropolis (ИЭГМ 26, ИЭГМ 184, ИЭГМ 190, ИЭГМ 192, ИЭГМ 199, ИЭГМ 200, ИЭГМ 203, ИЭГМ 211, ИЭГМ 214, ИЭГМ 265) и штамм Rhodococcus sp. ИЭГМ 743 (1.7%). Наибольшее число штаммов с данным типом ответных реакций, то есть когда отмечался активный прирост бактериальной популяции в присутствии лизоцима, было отмечено у штаммов вида R. erythropolis (рис. 4).

Для 8,6 % штаммов этого рода лизоцимная зависимость проявлялась по второму типу ответных реакций, то есть под влиянием лизоцима замедлялся рост популяции микроорганизмов, но меньше, чем в контроле. Эта группа родококков была представлена 5.2% штаммов вида R. ruber (ИЭГМ 338, ИЭГМ 376, ИЭГМ 382) и 3.4% штаммов вида R. erythropolis (ИЭГМ 22 и ИЭГМ 183).

На 42.8% штаммов лизоцим оказывал выраженное угнетающее действие, что свидетельствует об их чувствительности к нему. Однако механизмы проявления чувствительности у бактерий рода Rhodococcus были различными, а поэтому все чувствительные штаммы разделены на две подгруппы-, высокочувствительные и слабочувствителъные к лизоциму моллюска U. pictorum.

1,7

3 3,4

J 5.2

]5,2

Ш 1,7

I 5,2

3HH3 3.4

'•"■"■ ' .1 10,4

8,6

Слабочувствительные

—

Высокочувствительные — 13 7%

Штаммы рода Rhodococcus R rhodochrous R. rhodnii R erythropolis R iuteus R ruber R egui R erythropolis R iuteus R ruber R. erythropolis R ruber R erythropolis R ruber Rhodococcus sp. R erythropolis R iuteus R ruber

Рис. 4. Оценка степени чувствительности бактерий разных видов рода Rhodococcus к лизоциму моллюска Unió piciorum .

Лизо циму сто йчивыеЧ

Лизоцимзависимые___

второго типа Q86%

К высокочувствительным было отнесено 13.7% исследованных штаммов, у которых снижение общего микробного числа популяции в присутствии лизоцима моллюска превышало 50% по сравнению с их численностью в контроле, а индекс торможения роста популяции для них составил 3.35±0.02, что объясняется удлинением времени генерации данных бактерий с 1.50+0.12 до 5.10Ю.23 часа, то есть в 3.4 раза. Такими оказались 3.4% штаммов вида R. ruber ИЭГМ 83, ИЭГМ 92; 5.2% штаммов вида R. Iuteus ИЭГМ 36, ИЭГМ 171, ИЭГМ 173; 3.4% штаммов вида R. erythropolis ИЭГМ 179, ИЭГМ 189 и R. egui ИЭГМ 715 (1.7%) (рис. 4).

К слабочувствительным отнесено 29.4% исследованных культур, из которых 8.6% штаммов R. ruber (ИЭГМ 377, ИЭГМ 383, ИЭГМ 384, ИЭГМ 385 и ИЭГМ 386); 5.2% R. Iuteus (ИЭГМ 39, ИЭГМ 175, ИЭГМ 277); 10.4% R. erythropolis (ИЭГМ 23, ИЭГМ 25, ИЭГМ 180, ИЭГМ 202, ИЭГМ 203, ИЭГМ 257); 3.5% штаммов R. rhodochrous (ИЭГМ 653, ИЭГМ 654) и штамм R. rhodnii ИЭГМ 555 (1.7%). Для данных штаммов снижение прироста общего микробного числа в присутствии лизоцима не превышало 50% по сравнению с контролем, а индекс торможения их роста составил 2.70±0.11, в то время

как скорость размножения в присутствии лизоцима моллюска у слабочувствительных штаммов удлинялась с 2.710.13 до 3.26±0.22 часа (р<0.05), то есть в 1.35 раза.

На 6.9% штаммов лизоцим не оказывал заметного действия, так как наблюдался практически одинаковый прирост культур как в контроле (82±3.1%), так и в присутствии лизоцима (79±2.6%), который составил 1.04± 0.1 раза (рис. 2), что обусловлено одинаковой интенсивностью скорости генерации бактерий у этих штаммов: в опыте и в контроле она составила 0.95Ю.02 (рис. 3). Полученные данные позволили штаммы видов R. ruber ИЭГМ 222, ИЭГМ 348, ИЭГМ 380 (5.2%) и R. erythropolis ИЭГМ 191 (1.7%) отнести к лизоцимустойчивым, поскольку динамика роста и скорость размножения микроорганизмов этой группы как в контроле, так и в присутствии лизоцима моллюска была аналогичной (р<0.05) (рис. 2, 3).

Таким образом, проведённая оценка степени чувствительности разных видов родококков к лизоциму моллюска U. pictorum показала, что лизоцим-ная зависимость встречалась чаще у штаммов видов R. ruber и R. erythropolis (38.3% из 49.7% лизоцимзависимых штаммов). Лизоцимустойчивость у изученных штаммов была выявлена только у двух видов родококков: R. ruber и R. erythropolis, хотя их процент был невысоким (6.9%). Чувствительность к лизоциму проявлялась у большего числа изученных видов родококков: R. ruber, R. erythropolis, R. luteus, R. rhodnii и R. rhodochrous, но наиболее высокий процент штаммов был представлен видами R. ruber, R. erythropolis и R. luteus, которые составили 36.2% от общего числа лизоцимчувствительных (44.1%).

Чтобы убедиться, что выявленные различия в чувствительности к лизоциму различных видов родококков не случайны, для исследованных штаммов родококков рассматривалась матрица факторных нагрузок индивидуальных значений ОМЧ, полученных на среде МПА и на среде МПА+лизоцим. В группах лизоцимчувствительных и лизоцимзависимых штаммов родококков оказались характеризующими как положительные, так и отрицательные суммы квадратов факторных нагрузок. Математическая модель экологической толерантности штаммов родококков представлена линейной дискриминант-ной функцией: F(x) = aj .Xi+аг. хг+ ... + a n . хт+ ... ±с, где F(x) - дискрими-нантная функция, характеризующая тип штамма; х- исследуемые показатели; с- поправочная константа; а - коэффициенты факторных нагрузок. Сумма квадратов факторных нагрузок, а также внутренняя взаимосвязь исходных параметров, объединившихся в факторах, позволили оценить структуру ли-зоцимчувствительности, лизоцимзависимости и лизоцимустойчивости исследуемых штаммов, а также предположить, что влияние лизоцима моллюска Unió pictorum на разные группы родококков может быть связано с разным характером динамики развития популяций микроорганизмов.

Таким образом, проведённый анализ ответов и характера ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus показал, что:

1 - фенотипически ответные реакции в процессах взаимодействия акти-нобактерий рода Шойососсш с лизоцимом гидробионтов в водном биоценозе проявляются в изменении динамики роста популяции и времени её генерации;

2 - по характеру ответа родококков на воздействие лизоцима можно выделить: лизоцимзависимые, лизоцимустойчивые и лизоцимчувствитель-ные, которые разделены на слабочувствителъные и высокочувствительные штаммы, что свидетельствует о фенотипически неодинаковом отношении тестируемых видов к природному биотическому фактору - лизоциму моллюска II. рюгогит и широких возможностях их межпопуляционных взаимоотношений в гидробиоценозах в системе лизоцим гидробионта - ответная реакция актинобактерий рода МюсИососст.

Полученные данные о том, что в естественных природных водоёмах ро-дококки, контактируя с гидробионтами обладающими лизоцимом имеют разную степень чувствительности к нему и установление факта наличия у данных бактерий АЛА-признака, а также результаты полученные методом факторного анализа по оценке лизоцимчувствительности, лизоцимзависимо-сти и лизоцимустойчивости родококков, позволили заключить, что ведущие факторы с наибольшей суммой квадратов факторных нагрузок в исследуемых группах имеют связи с так называемым фактором „носительства", то есть они объединяются с видом родококков, обладающим персистентной характеристикой - уровнем антилизоцимной активности. Всё это определило актуальность следующего этапа исследования: оценить роль антилизоцимной активности родококков в механизмах их ответов на воздействия лизоцима гидробионтов водного биоценоза (рис.5).

% штаммов 40

35 30 25 20 15 10 5 0

34 9*

щ щш^ШШ

ШУИ 10 6» 1111111

■ | 36 В361 1 9 ■Вшш

Примечание' '-достоверность отличий р<0 05^

111

Рис 5 Уровень АЛА актинобактерий рода КИос1ососс1а и степень их чувствительности к лизоциму моллюска V р1с(огит

Ш1 0 мкг/мл; б 1,9 мкг/мл; ■ 2 мкг/мл; Ш I - лшоцимэависимые. II - люоцимустоПчнвыс, лизшшмчунствшсльиыс Г)11 - высокочувствительные, уУ - с.1абочувствип-лы1ыс

4 мкг/мл; □ б мкг/мл, Н 8 мкг/мл,

Как видно из данных, представленных на рисунке 5 для лизоцимзависи-мых и лизоцимустойчивых штаммов родококков уровень АЛА был достаточно высоким и колебался от 6 до 8 мкг/мл, однако нами не выявлены различия в уровнях антилизоцимной активности для лизоцимзависимых и лизоцимустойчивых штаммов. Для лизоцимчувствительных штаммов родококков уровень АЛА был значительно ниже и находился в пределах от 0 до 2-4 мкг/мл. Проведённый анализ показал, что для высокочувствительных штаммов уровень антилизоцимной активности не превышал 0-2 мкг/мл, а иногда и отсутствовал вовсе, в то время как для слабочувствительных он был выше и составлял 2-4 мкг/мл. Анализ уровня антилизоцимной активности родококков и степени их чувствительности к лизоциму моллюска Unió pictorum позволяет сделать вывод о том, что низкий уровень антилизоцимной активности или её отсутствие, не обеспечивает устойчивости родококков к воздействию биотического фактора гидробиоценоза - лизоциму гидробионтов, и как следствие, к „персистированию" этих штаммов в микробиоценозах водоёмов, в то время как высокий уровень антилизоцимной активности способствует устойчивости штаммов к лизоциму гидробионтов, а следовательно, и к сохранению их в водном биоценозе.

Подтверждением полученных выводов явились результаты математической обработки результатов с помощью факторного анализа. Установлена прямая корреляционная зависимость между уровнем экспрессии факторов толерантности штаммов рода Rhodococcus - антилизоцимной активностью и степенью их чувствительности к лизоциму. Для лизоцимчувствительных штаммов не выявлено линейных связей между параметрами, так как коэффициенты парной корреляции оказались в промежутке 0,3<|гху|<0,5. В группу лизоцимустойчивых штаммов родококков отнесены те, для которых получены линейные связи параметров с коэффициентами парной корреляции |гху|>0,75. Согласно факторному анализу для лизоцимзависимых штаммов наблюдалась слабая линейная зависимость с коэффициентами парной корреляции 0,5<|гху|<0,75.

С помощью метода факторных нагрузок подтверждены маркеры чувствительности к лизоциму моллюска U. pictorum у алканотрофных родококков (отсутствие АЛА или её низкий уровень - 2-4 мкг/мл).

Таким образом, полученные данные позволяют сделать вывод о том, что уровень антилизоцимной активности у родококков определяет степень их резистентности к лизоциму гидробионтов (моллюска U. pictorum) водных экосистем.

Среди абиотических факторов среды антропогенной природы, наибольшую опасность для экологического состояния водоёмов представляют в настоящее время тяжёлые металлы и р. Урал не является исключением в этом отношении.

Помимо биотических факторов, бактерии воды испытывают воздействие и абиотических факторов водного биоценоза. Ретроспективный анализ лите-

ратурных данных о качестве воды реки Урал (Быстрых, 2000; Боев и др., 2002) и собственные исследования показали, что уровень загрязнения воды в реке выше ПДК по большинству показателей, в том числе по содержанию цинка на 53.1% (р>0.05), кадмия на 39.7% (р>0.05), меди на 16.2% (р>0.05), свинца на 11.7% (р>0.05), что свидетельствует об актуальности изучения характера устойчивости и типов ответных реакций актинобактерий вида R. ruber на токсические воздействия тяжёлых металлов, с целью оценки потенциальных возможностей сохранения этих бактерий в биоценозе в условиях антропогенного загрязнения металлами. Полученные знания о возможных ответах и приспособленности бактерий к антропогенным факторам среды, должны учитываться для прогнозирования сукцессионных изменений в экосистемах и вопросах охраны водоёмов от антропогенного прессинга.

Из литературных данных известно, что при действии токсических веществ гибель организмов наступает, как правило, не мгновенно, так как организм обладает некоторой приспособленностью к внезапным, резким изменениям условий внешней среды (Строганов, 1979). Согласно „универсального закона действия токсического фактора" каждый из токсикантов обладает определённым механизмом действия и обуславливает специфический механизм реагирования (ответные реакции) водных организмов в ответ на антропогенное загрязнение среды (Строганов, 1975), поэтому гид-робионты, в том числе и бактерии воды, их популяции, обнаруживают, по-видимому неодинаковую чувствительность и устойчивость к действию тяжёлых металлов (цинка, кадмия, свинца и меди) и проявляют разные „механизмы реагирования" в форме разных ответных реакций на эти воздействия.

Для оценки чувствительности к данным металлам были взяты 12 штаммов вида R. ruber (ИЭГМ 71, ИЭГМ 83, ИЭГМ 90, ИЭГМ 92, ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221, ИЭГМ 222, ИЭГМ 325, ИЭГМ 338, ИЭГМ 347, ИЭГМ 376), у которых оценивался характер ответных реакций на воздействие металлов через призму универсального закона действия токсического фактора на развитие микропопуляций родококков (Строганов, 1940; 1979).

Проведенный анализ типов ответных реакций чувствительных и нечувствительных к действию металлов штаммов показал, что чувствительность к металлам чаще регистрировалась после длительного контакта с металлами (48-72 часа), что проявлялось в переходе динамики развития микробной популяции в фазу безразличия в этот период, против фазы стимуляции в контроле (рис.ба), либо уходу микропопуляции через 48~72часа в фазу депрессии (рис.66). Для некоторых штаммов чувствительность к металлам проявлялась в нарушении динамики фаз развития популяции только в первые 18-24 часа контакта с металлом, а затем развитие культуры шло в той же последовательности, что и в контроле (рис.бв). При этом, во всех описанных случаях мы наблюдали ответную реакцию штаммов в первые минуты контакта с токсическим металлом, которая проявлялась либо в повышении численности

микропопуляции (рис.ба), либо в её снижении в первые минуты контакта с металлом в опыте (рис.6 б,в), против контроля, то есть без контакта с металлом.

О 20 40 60 №

Время, не

--♦--■Контроль ■ Кадмий

0 20 Bpctfuc « •«•#•• -Контроль ......й Цинк

'Контроль -

Рис. 6. Разные типы ответных реакций актинобактерий вида Rhodococcus ruber на присутствие тяжёлых металлов (чувствительность).

В характере ответных реакций нечувствительных штаммов чаще наблюдалось повторение прохождения фаз в той же последовательности, что и в контроле (рис. 7а), в то время как у некоторых штаммов устойчивость к металлам выражалась в том, что культура переходила в фазу стимуляции к концу эксперимента, которая отсуствовала в контроле (рис. 76).

6) 3000

---Контроль

-А—Цинк

Свинец X—Медь

40 60 Время, час - Контроль-И— Медь

Рис. 7. Разные типы ответных реакций актинобактерий вида Rhodococcus ruber на присутствие тяжёлых металлов (устойчивость).

Анализ ответных реакций одного и того же штамма к разным металлам как у чувствительных так и нечувствительных штаммов показал, что для некоторых из них был выявлен одинаковый тип ответов ко всем исследованным металлам (рис. 8а), в то время как у других штаммов к каждому металлу была своя ответная реакция, о чём свидетельствует различная последовательность прохождения фаз под действием разных металлов (рис. 86).

Время, час

—Свинец —Кадмий —А— Цинк X Медь Рис. 8. Разные типы ответных реакций актинобактерий вида R. ruber.

Исследования воздействия разных концентраций одного и того же металла на один и тот же штамм показал, что иногда наблюдалась одинаковая ответная реакция штамма на воздействие разных концентраций металлов. Однако, у некоторых штаммов проявлялась высокая чувствительность к превышению ПДК по металлам, о чём свидетельствовал переход динамики роста популяции в глубокую фазу депрессии в присутствии этой концентрации металла (рис. 9 а, б).

а)

зооо

2500 »

2000

"Й1500 О х

1000

500 ■ -

—■— выше ПДК —*— равн ПДК —X— ниже ПДК - - ♦ - - контроль

Рис. 9. Ответные реакции родококков на разные концентрации металлов.

Все исследованные штаммы вида R. ruber в результате проведённого эксперимента и анализа их результатов показали, что чувствительными к меди были ИЭГМ 71, ИЭГМ 90, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221*, ИЭГМ 325 и ИЭГМ 376, а не чувствительными ИЭГМ 83, ИЭГМ 92, ИЭГМ 219, ИЭГМ 222, ИЭГМ 338 и ИЭГМ 347; чувствительными к кадмию - ИЭГМ 71*, ИЭГМ 83*, ИЭГМ 90, ИЭГМ 221*, ИЭГМ 325 и ИЭГМ 347, а не чувствительными ИЭГМ 92, ИЭГМ 219, ИЭГМ 222, ИЭГМ 220, ИЭГМ 338 и ИЭГМ 376; чувствительность к цинку проявили штаммы ИЭГМ 71 и ИЭГМ 222, а не чувствительными к нему оказались ИЭГМ 83, ИЭГМ 90, ИЭГМ 92, ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221, ИЭГМ 325, ИЭГМ 338, ИЭГМ 347 и ИЭГМ 376; чувствительными к свинцу были ИЭГМ 90 и ИЭГМ 325, а не чувствительными ИЭГМ 71, ИЭГМ 83, ИЭГМ 92, ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221, ИЭГМ 222, ИЭГМ 338, ИЭГМ 347 и ИЭГМ 376 (*- штамм чувствительный при превышении ПДК).

В последнее время появились работы и патенты, указывающие на участие бактерий в очистке загрязнённых металлами промышленных вод (Стуканов , 1988; Илялетдинов, Алиева, 1990). Известен ряд работ, свидетельствующих об участии родококков в аккумуляции цезия (Tomioka et al., 1992).

Таблица 1.

Чувствительность штаммов вида R. ruber к тяжёлым металлам.

Металлы Штаммы вида A ruber

ИЭГМ 71 ИЭГМ 83 ИЭГМ 90 ГОШ 92 ИЭГМ 219 ИЭГМ 220 ИЭГМ 221 ИЭГМ 222 ИЭГМ 325 ИЭГМ 338 ИЭГМ 347 ИЭГМ 376

Медь + - + - - + - + - - +

Свинец - - + - - - - - + - - -

Цинк + - - - - - - + - - - -

Кадмий +♦ +* + - - - +♦ - + - + -

Примечание. + - чувствительный, +*- чувствительный при превышении ПДК, - - не чувствительный.

Таблица 2.

Аккумуляция меди, свинца, цинка и кадмия актинобактериями вида R. ruber из водной среды (% извлечения).

Степень извлечения металлов, % Штаммы вида R. ruber

ИЭГМ 71 ГОШ 83 ИЭГМ 90 ГОШ 92 ГОШ 219« ГОШ 220** ГОШ 221" ГОШ 222** ИЭГМ 325 ГОШ 338** ГОШ 347** ГОШ 376

Медь - 16±2 19±1 - 16±2 - 23±1 - 24±2 23±2 19±1 -

Свинец - 40±2 - 24±2 - - - 60±3** - 75±4** 77±4** -

Цинк - 33±3 - - 75±3** - 6Ш" - 21±2 - 78±3** 12±1

Кадмий 40±3 - - - 72±4** 8&Ü** 11±1 49±2** - 80±4** - 6±1

Примечание. ** - штаммы, обладающие наиболее высокой способностью к аккумуляции металлов, использованные в предложенном способе.

В работе Пешкур (2002) показано, что активными биоаккумуляторами цезия являются коллекционные штаммы Л erytrhopolis ИЭГМ 270, R. fascians ИЭГМ 173, R. „longus" ИЭГМ 32, ИЭГМ 69 и R. ruber ИЭГМ 326, относящихся к алканотрофным родококкам. Данные факты о выраженной способности представителей вида R ruber к извлечению из среды ионов цезия определили следующий этап исследования: оценить способность исследованных штаммов вида R ruber к аккумуляции цинка, кадмия, свинца и меди. Результаты проведенных исследований представлены в таблице 2.

Анализ полученных данных об убыли содержания металлов из среды культивирования и их обнаружения в микробной массе свидетельствует о том, что исследуемые штаммы аккумулировали свинец от 24±2 до 77±4%, при этом наиболее активными были актинобактерии вида R. ruber ИЭГМ 222, ИЭГМ 338 и ИЭГМ 347, которые аккумулировали из среды 75-77±4% данного металла. К биоаккумуляции цинка были способны 6 штаммов родо-кокков, извлекающие из среды от 12±1 до 78±3% металла, но наиболее активными аккумуляторами данного металла оказались штаммы R. ruber ИЭГМ 219, ИЭГМ 221, ИЭГМ 347, которые извлекали из среды 61-7813% металла. К аккумуляции кадмия проявили способность 7 исследованных штаммов родокков, а наиболее эффективно его извлекали штаммы R. ruber ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 222, ИЭГМ 338 (49-85±2%). Аккумуляция исследуемыми штаммами меди была низкой, так как процент её извлечения из среды не превышал 24±2%.

Полученные данные выявили наиболее активные биоаккумуляторы цинка, кадмия и свинца из коллекционных штаммов вида R. ruber Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН г. Перми (ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221, ИЭГМ 222, ИЭГМ 338 и ИЭГМ 347), процент аккумуляции металлов у которых колебался от 49±2 до 85±3%.

Установленный факт позволил разработать методические подходы к охране водоёмов от антропогенного загрязнения цинком, кадмием и свинцом при разработке «Способа микробиологической очистки сточных вод промышленных предприятий от ионов тяжёлых металлов: цинка, кадмия и свинца» (патент Российской Федерации № 2216525 от 20 ноября 2003 г). В заявляемом способе при обезвреживании промышленных стоков от цинка, кадмия и свинца используется бактериальное сообщество родококков, состоящее из штаммов вида R. ruber, наиболее активных аккумуляторов этих металлов: ИЭГМ 219 аккумулирует цинк и кадмий, ИЭГМ 220 аккумулирует кадмий, ИЭГМ 221 аккумулирует цинк, ИЭГМ 222 и ИЭГМ 338 аккумулируют свинец и кадмий, ИЭГМ 347 аккумулирует цинк и свинец. Использование подобного сообщества позволяет извлекать из сточных вод одновременно несколько металлов.

ВЫВОДЫ.

1. Выявлено наличие лизоцимного и антилизоцимного признаков у разных видов актинобактерий рода Rhodococcus. Показно, что как правило при экспрессии антилизоцимного и лизоцимного признаков наблюдалась обратная зависимость: присутствие антилизоцимной активности исключало экспрессию лизоцимной активности (ЛА~, АЛА*) и наоборот - присутствие лизоцимной исключало антилизоцимную (ЛА+, АЛА"); значительно реже прослеживалась либо одновременная экспрессия обоих признаков (ЛА+, АЛА+), либо их полное отсутствие (ЛА~, АЛА").

2. В ответ на воздействие лизоцима моллюска Unió pictorum у актинобактерий рода Rhodococcus происходят изменения в динамике роста бактерий и скорости их размножения; по характеру ответных реакций все исследованные штаммы разделены на лизоцимчувствительные - 43.1% (среди '« которых высокочувствительных - 13.7% и слабочувствительных - 29.4%), лизоцимустойчивые (6.9%) и лизоцимзависимые (50%).

3. Степень устойчивости актинобактерий рода Rhodococcus к лизоциму моллюска Unió pictorum определяется уровнем антилизоцимной активности родококков, что соответствует уровню 6-8±0.3 мкг/мл.

4. Ответные реакции актинобактерий рода Rhodococcus к воздействию цинка, кадмия, свинца и меди проявляются через изменения последовательности фаз развития микробной популяции. У нечувствительных к металлам штаммов отмечена стимуляция роста, тогда как у чувствительных штаммов под воздействием металлов наблюдалось безразличие или подавление роста.

5. Установлена разная степень чувствительности актинобактерий вида R. ruber к разным металлам и их концентрациям. Выявлены штаммы вида R. ruber устойчивые к металлам и показана их способность к аккумуляции этих металлов: штамм R. ruber ИЭГМ 219 - цинк и кадмий; штамм R. ruber ИЭГМ 220 - кадмий; штамм R. ruber ИЭГМ 221 - цинк; штаммы R. ruber ИЭГМ 222 и ИЭГМ 338 -свинец и кадмий; штамм R. ruber ИЭГМ 347 - цинк и свинец.

6. Предложен способ охраны водоёмов от антропогенного загрязнения, основанные на микробиологической очистке сточных вод промышленных предприятий от ионов цинка, кадмия и свинца с использованием сообщества штаммов вида R. ruber (патент Российской Федерации № 2216525 от 20 ноября 2003 г).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Осадчая Н.Д. Режим микроэлементов в воде Ириклинского водохранилища. / Н.Д. Осадчая, Е.И. Ушакова // Конференция молодых учёных и специалистов: Тез. докл. - Оренбург, 1997.- С. 142-143.

2. Ушакова Е.И. Исследование гидрохимического режима реки Урал. / Е.И. Ушакова // Областная научная конференция памяти Д. Соловых: Тез. докл. - Оренбург, 1997.- С. 62-63.

3. Ушакова Е.И. Оценка чувствительности водных алканотрофных бактерий к лизоциму. / Е.И. Ушакова, Н.Д. Осадчая // Конференция молодых учёных и специалистов: Тез. докл. - Оренбург, 1999. - С. 146-147.

4. Соловых Г.Н. Анализ чувствительности алканотрофных родококков к лизоциму. / Е.И. Ушакова, Г.Н. Соловых // 3 региональная научно-практическая конференция областного благотворительного фонда памяти Дмитрия Соловых: Тез. докл. - Оренбург, 2000. - С. 55-56.

5. Ушакова Е.И. Лизоцимчувствительность алканотрофных родококков и формирование их биоценоза под влиянием лизоцима гидробионтов./ Е.И. Ушакова // 5 международная конференция „Проблемы загрязнения окружающей среды": Тез. докл.-Волгоград - Пермь, 2001. - С. 76.

6. Ушакова Е.И. Лизоцим гидробионтов и его роль в формировании биоценоза алканотрофных микроорганизмов. / Е.И. Ушакова, Г.Н. Соловых, Н.Д. Осадчая // Всероссийская научно-практическая конференция: Оренбург, 2001. -Т.2. -С. 223-225.

7. Соловых Г.Н. Лизоцим гидробионтов и его роль в способности водоёмов к процессу самоочищения. / Г.Н. Соловых, Е.М. Нефедова, Ушакова Е.И. и др.// Гигиена и санитария.- 2002. - №5. С. 24-26.

8. Соловых Г.Н. Влияние кадмия на антилизоцимную активность родококков. / Г. Н. Соловых, Е.И. Ушакова// Конференция молодых учёных и специалистов: Тез. докл. - Оренбург, 2000. - С. 176-177.

9. Ушакова Е.И. Лизоцимная чувствительность родококков как фактор формирующий их микробиоценоз. / VI Пущинская школа-конференция молодых ученых „Биология - наука XXI века": Тез. докл.- Пущино, 2002. -Т. 3. - С. 69

10. Шостак Е.И. Алканотрофные микроорганизмы и их роль в процессах биологической очистки водных биоценозов от кадмия, свинца и цинка. / Е.И. Шостак, Г.Н. Соловых, И.Ю. Иванова // Вестник Оренбургского государственного университета, прилож. „Биоэлементология", Оренбург, 2004. - №-4. С. 100-101.

11. Соловых Г.Н., Ушакова Е.И., Ившина ИД., Раимова Е.К. „Способ микробиологической очистки сточных вод промышленных предприятий от ионов тяжёлых металлов: цинка, кадмия и свинца". Бюл. № 32,2003,16 с.

Шостак Елена Ивановна Характеристика ответных реакций актинобактерий рода Ююйососст на воздействие факторов водной среды

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Оригинал макет сверстан в программе Уеге&а. Подписано в печать 17.11.04. Формат А4. Гарнитура «Тайме». Тираж 100 экз.

РНБ Русский фонд

2006-4 23564

19 m 2004

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шостак, Елена Ивановна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ С БИОТИЧЕСКИМИ И АБИОТИЧЕСКИМИ ФАКТОРАМИ

СРЕДЫ.

1.1. Лизоцим - как антимикробный фактор природных биоценозов.

1.2. Антропогенные факторы среды - тяжёлые металлы

1.3. Роль микроорганизмов в аккумуляции тяжёлых металлов в биосфере.

1.4. Биология актинобактерий рода Rhodococcus sensu stricto.

1.4.1. Биологические и физиологические особенности.

1.4.2. Систематическое положение.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Рабочая коллекция, бактериальные штаммы, используемые в экспериментальных исследованиях

2.2. Определение численности и уровня активности ан-тилизоцимных бактерий.

2.3. Определение численности и уровня активности ли-зоцимных микроорганизмов.

2.4. Получение препарата лизоцима моллюска U. picto-гит.

2.5. Определение чувствительности исследуемых штаммов родококков к лизоциму моллюска U. pictorum

2.6. Атомно-адсорбционный метод определения содержания токсичных элементов (меди, цинка, кадмия и свинца).

2.7. Методика определения содержания металлов в микробной массе.

2.8. Метод оценки чувствительности родококков к ионам тяжёлых металлов: меди, цинка, кадмия и свинца.

2.9. Расчёт времени генерации.

2.10. Способ оценки чувствительности актинобактерий вида R. ruber на воздействие металлов.

2.11. Статистическая обработка результатов.

2.11.1. Метод корреляционного и регрессионного анализа.

2.11.2. Метод факторного анализа.

ГЛАВА 3. ОЦЕНКА РАСПРОСТРАНЁННОСТИ ЛИЗОЦИМНОЙ

И АНТИЛИЗОЦИМНОЙ АКТИВНОСТЕЙ У АКТИНОБАКТЕРИЙ РОДА RHODOCOCCUS

ГЛАВА 4. ЛИЗОЦИМ МОЛЛЮСКА UNIO PICTORUM И ТИПЫ

ОТВЕТНЫХ РЕАКЦИЙ К НЕМУ АКТИНОБАКТЕРИЙ РОДА RHODOCOCCUS SENSU STRICTO.

4.1. Характеристика типов ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus sensu stricto на воздействия лизоцима моллюска U. pictorum.

4.2. Оценка степени чувствительности актинобактерий рода Rhodococcus к лизоциму моллюска U. pictorum с использованием математического анализа.

4.3. Заключительный обзор о типах ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus на воздействия лизоцима моллюска U. pictorum.

ГЛАВА 5. ОЦЕНКА СТЕПЕНИ УСТОЙЧИВОСТИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ АКТИНОБАКТЕРИЙ ВИДА R. RUBER

НА ВОЗДЕЙСТВИЕ ТЯЖЁЛЫХ МЕТАЛЛОВ.

5.1. Ответные реакции актинобактерий вида R. ruber на воздействие абиотических факторов водной среды тяжёлых металлов).

5.2. Способность актинобактерий вида R. ruber к аккумуляции цинка, кадмия, свинца и меди.

5.3. Методика выращивания Rhodococcus ruber, используемых для очистки сточных вод от ионов тяжелых металлов: цинка, кадмия и свинца.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus на воздействие факторов водной среды"

Сукцессионные изменения в бактериальных сообществах водных экосистем определяются степенью их экологической толерантности к биотическим и абиотическим факторам среды. Выживание бактерий в условиях водоёма основано на их ответных реакциях во взаимоотношениях с природными и антропогенными факторами водной среды, в основе которых лежат как специфические (через среду обитания), так и неспецифические (проявляющиеся в разной динамике роста и размножения популяций бактерий) механизмы регуляции этих взаимоотношений (Пшеничное Р.А. и др., 1975; Бухарин О.В., Литвин В.Ю., 1997).

Особое место в бактериальных сообществах водоёмов занимают алка-нотрофные родококки, обладающие функциональным разнообразием и характерным комплексом реализуемых стратегических приёмов выживания. Изучение данной группы микроорганизмов приобретает всё большую экологическую значимость на фоне современного кризиса окружающей среды, когда увеличивается число местообитаний, в которых организмы находятся в экстремальных условиях (Ившина И.Б., 1997).

Попадая в условия открытого водоёма или пруды биологической очистки, родококки на разных этапах своего существования встречаются с широко распространённым у гидробионтов ферментом — лизоцимом (Tripp М. R., 1961; Ломакин М.С., 1990; Соловых Г.Н., 1995; Карнаухова И.В., 2001), и хотя накоплено достаточно много данных об антимикробном действии этого фермента (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974; Купер Э., 1980; Подборное В.Е., Бердыев А.Н., 1991), но до сих пор не достаточно полно изучен вопрос об ответных реакциях актинобактерий рода Rhodococcus sensu stricto к действию данного природного фактора.

И.В., 2000), представлялось логичным оценить воздействие лизоцима моллюсков на актинобактерии рода Rhodococcus sensu с целью оценки их потенциальной способности адаптироваться к биотическим факторам природных водоёмов.

В условиях природного биоценоза актинобактерии испытывают воздействия не только биотических, но и антропогенных факторов среды, в том числе тяжёлых металлов (Илялетдинов А.Н., 1984; 1989), и хотя в процессе эволюции живые организмы приспособились к наличию тяжёлых металлов в окружающей среде и выработали определённые механизмы регуляции к их усвоению, но в условиях растущего техногенного загрязнения остаются некоторые допустимые количества поглощения тяжёлых металлов, выше которых регуляторные механизмы уже не справляются с проявлением негативного воздействия на организм, тем более, что в литературе остаётся до сих пор спорным вопрос о наличии плазмид устойчивости к металлам у представителей рода Rhodococcus sensu stricto вида R. ruber. Всё выше сказанное (недостаточная изученность вопросов адаптации родококков к условиям природных водоёмов, их биологических характеристик, обеспечивающих функционирование актинобактерий в биотопах водоёмов и возможность интродукции родококков в открытые водные экосистемы с целью активизации процессов самоочищения), свидетельствует об актуальности углубленного изучения особенностей ответных реакций бактерий к воздействиям природного фактора гидробиоценоза - лизоцима и антропогенного фактора - тяжёлых металлов, обеспечивающих их адаптацию в условиях водоёма и ещё большую значимость этот вопрос приобретает потому, что актинобактерии этого рода являются наиболее разрабатываемыми в прокариотологии биотехнологически перспективной группой микробов (Finnerti W., 1992; Wahust К., Fewson Т.Е., 1994).

Цель исследования - изучение особенностей ответных реакций бактерий рода Rhodococcus на воздействие природного - лизоцима и антропогенного - тяжёлые металлы факторов водной среды, обеспечивающих их адаптацию в условиях водоёма.

Задачи исследования. 1. Изучить распространённость лизоцимного и антилизоцимного факторов у бактерий рода Rhodococcus, выделенных из природных водных источников.

2. Провести оценку характера ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus к лизоциму моллюска Unio pictorum и тяжёлым металлам.

3. Оценить роль антилизоцимной активности актинобактерий рода Rhodococcus в механизмах ответных реакций родококков на воздействие ли-зоцима моллюска U. pictorum.

4. Обосновать методические подходы к охране водоёмов от антропогенного загрязнения тяжёлыми металлами.

Научная новизна. Обнаружено наличие лизоцимной и антилизоцимной активностей у штаммов родококков, принадлежащих к 6 видам. Выявлен широкий диапазон толерантности видов R. ruber, R. luteus, R. erythropolis, R. rhodnii, R. rhodochrous и R. egui к природному фактору - лизоциму моллюска U. pictorum: лизоцимчувствительность, лизоцимустойчивость и лизоцим-зависимость. Показано, что в механизмах ответных реакций актинобактерий к воздействиям лизоцима играет роль антилизоцимная активность, то есть выявлена система лизоцим моллюска U. pictorum - антилизоцимная активность актинобактерий рода Rhodococcus. Уровень АЛА определяет степень чувствительности и устойчивости родококков к лизоциму: отсутствие АЛА или её низкий уровень - 2 мкг/мл - определяет чувствительность, а уровень 6 - 8 мкг/мл - устойчивость и зависимость к лизоциму. Установлено, что маркером высокой чувствительности к лизоциму моллюска U. pictorum у родококков является отсутствие АЛА или её низкий уровень (2 мкг/мл).

Практическое значение исследования заключается в возможности использования показателя персистенции бактерий - антилизоцимной активности, как маркера в оценке степени чувствительности родококков к природному фактору гидробионтов - лизоциму.

Способ позволяет снизить степень антропогенного загрязнения природных водоёмов тяжёлыми металлами.

Центров Госсанэпиднадзора (акты внедрения от 05.02.2004г. и 20.04.2004г), научно-производственной фирмы «Экобиос» (акт внедрения от 28.05.2004г.) и комитета по природоохранной деятельности и мониторингу окружающей среды (акт внедрения от 20.03.2004г.).

Данные исследования применяются в системе вузовского образования студентов на кафедрах общей биологии Оренбургского государственного университета (акт внедрения от 15.12.2004г.), экологии Оренбургского государственного аграрного университета (акт внедрения от 29.04.2004г.) и биохимии с курсом физической и коллоидной химии Оренбургской государственной медицинской академии (акт внедрения от 11.03.2004г.) и включены в лекционный курс для студентов биологического и химического факультетов Оренбургского государственного педагогического университета (акт внедрения от 22.04.2004г.).

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на региональных научно-практических конференциях молодых учёных: Оренбург, 1997, 1999; на конференции молодых учёных и студентов „Охрана природы и здоровья человека", Оренбург, 1997; на III межрегиональной конференции памяти Д. Соловых „ Проблемы медицины, биологии, экологии и новые научные технологии в XXI век", Оренбург, 2000; V Международной научной конференции „Проблемы загрязнения окружающей среды", Пермь - Волгоград, 2001; VI Пущинской школе-конференции молодых ученых, Пущино, 2002; I Всероссийской научно-практической конференции с международным участием „Биоэлементо-логия", Оренбург, 2004.

Положения, выносимые на защиту.

2. В механизмах резистентности актинобактерий рода Rhodococcus к биотическому фактору — лизоциму моллюска U. pictorum участвует ан-тилизоцимная активность, уровень которой является маркером степени чувствительности к лизоциму.

3. Предложен новый способ очистки водоёмов от антропогенного загрязнения тяжёлыми металлами, основанный на использовании штаммов вида R. ruber, являющихся активными аккумуляторами цинка, кадмия и свинца.

Объём и структура диссертационной работы.

Диссертация изложена на 156 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, главу по материалам и методам исследования, три главы собственных исследований, заключение, выводы, приложение. Указатель литературы содержит 123 отечественных и 51 зарубежный источник литературы. Текст иллюстрирован 10 таблицами и 28 рисунками. Связь работы с научными программами.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Шостак, Елена Ивановна

ВЫВОДЫ.

1. Выявлено наличие лизоцимного и антилизоцимного признаков у разных видов актинобактерий рода Rhodococcus. Показно, что как правило при экспрессии антилизоцимного и лизоцимного признаков наблюдалась обратная зависимость: присутствие антилизоцимной активности исключало экспрессию лизоцимной активности (ЛА~, AJIA+) и наоборот — присутствие лизоцимной исключало антилизоцимную (JIA+, АЛА-); значительно реже прослеживалась либо одновременная экспрессия обоих признаков (ЛА+, АЛА+), либо их полное отсутствие (ЛАГ, АЛА").

2. В ответ на воздействие лизоцима моллюска Unio pictorum у актинобактерий рода Rhodococcus происходят изменения в динамике роста бактерий и скорости их размножения; по характеру ответных реакций все исследованные штаммы разделены на лизоцимчувствительные - 43.1% (среди которых высокочувствительных - 13.7% и слабочувствительных - 29.4%), ли-зоцимустойчивые (6.9%) и лизоцимзависимые (50%).

3. Степень устойчивости актинобактерий рода Rhodococcus к лизоциму моллюска Unio pictorum определяется уровнем антилизоцимной активности родококков, что соответствует уровню 6-8±0.3 мкг/мл.

4. Ответные реакции актинобактерий рода Rhodococcus на воздействие цинка, кадмия, свинца и меди проявляются через изменения последовательности прохождения фаз развития микробной популяции. У нечувствительных к металлам штаммов отмечена стимуляция роста, тогда как у чувствительных штаммов под воздействием металлов наблюдалось безразличие или подавление роста.

222 и ИЭГМ 338 - свинец и кадмий; штамм R. ruber ИЭГМ 347 - цинк и свинец.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Попадая в условия открытого водоёма или пруды биологической очистки, родококки на разных этапах своего существования встречаются с широко распространённым у гидробионтов ферментом, и хотя накоплено достаточно много данных об антимикробном действии этого фермента, но до сих пор не достаточно полно изучен вопрос об ответных реакциях актинобактерий рода Rhodococcus sensu stricto к действию данного природного фактора.

Исходя из полученных данных о существовании в условиях водного биоценоза взаимодействий „моллюски - бактерии", основанных на способности гидробионтов за счёт антибактериальных факторов воздействовать на микроорганизмы и данных о наличии у моллюсков лизоцима, представлялось логичным оценить воздействие лизоцима моллюсков на актинобактерии рода Rhodococcus sensu с целью оценки их потенциальной способности адаптироваться к биотическим факторам природных водоёмов.

В условиях природного биоценоза актинобактерии испытывают воздействия не только биотических, но и антропогенных факторов среды, в том числе тяжёлых металлов, и хотя в процессе эволюции живые организмы приспособились к наличию тяжёлых металлов в окружающей среде и выработали определённые механизмы регуляции к их усвоению, но в условиях растущего техногенного загрязнения остаются некоторые допустимые количества поглощения тяжёлых металлов, выше которых регуляторные механизмы уже не справляются с проявлением негативного воздействия на организм, тем более, что в литературе остаётся до сих пор спорным вопрос о наличии плазмид устойчивости к металлам у представителей рода Rhodococcus sensu stricto вида R. ruber. Всё выше сказанное (недостаточная изученность вопросов адаптации родококков к условиям природных водоёмов, их биологических характеристик, обеспечивающих функционирование актинобактерий в биотопах водоёмов и возможность интродукции родококков в открытые водные экосистемы с целью активизации процессов самоочищения), свидетельствует об актуальности углубленного изучения особенностей ответных реакций бактерий к воздействиям природного фактора гидробиоценоза - лизоцима и антропогенного фактора — тяжёлых металлов, обеспечивающих их адаптацию в условиях водоёма и ещё большую значимость этот вопрос приобретает потому, что актинобактерии этого рода являются наиболее разрабатываемыми в прокариотологии биотехнологически перспективной группой микробов.

В основе формирования микробных биоценозов лежит явление бактериального антагонизма, одним из механизмов которого является продукция специфических антагонистически активных веществ (антибиотиков, бакте-риоцинов, лизоцима и др.). Среди факторов экологической значимости в межмикробном взаимодействии многие авторы называют лизоцим, действующий на полисахариды клеточной стенки бактерий. Лизоцимактивные штаммы микроорганизмов вытесняют из экологической ниши лизоцимчувст-вительные, но не менее важную роль в биоценотических отношениях играет и умение бактерий им противодействовать. Одним из механизмов микробного «противодействия» является секреция веществ, инактивирующих защиту хозяина и обеспечивающая тем самым микроорганизму возможность перси-стировать в биоценозе.

Одним из главных маркеров бактериальной персистенции микроорганизмов в биоценозе О. В. Бухарин (1992), Г. Н. Соловых (1995), Н. В. Немце-ва (1998), J1. Г. Фабарисова (2000), Е. М. Нефедова (2001) называют антили-зоцимную активность. Экспериментально доказано, что антилизоцимный признак бактерий способствует их внутриклеточному паразитированию в эу-кариотических клетках хозяина. Поэтому на первом этапе работы было проведено исследование JIA и АЛА активностей у актинобактерий рода Rhodococcus sensu stricto.

Анализ наличия лизоцимного и антилизоцимного признаков у 58-ми штаммов, шести видов актинобактерий рода Rhodococcus (R. ruber, R. luteus, R. erythropolis, R. rhodnii, R. rhodochrous, R. egui) и Rhodococcus sp. показал большую гетерогенность этого рода по лизоцимному и антилизоцимному признакам. У 77.6±5.1% бактериальных штаммов родококков не было зафиксировано экспрессии лизоцимной активности, но широко была выражена антилизоцгшная активность (JIA~, АЛА+), которая у разных штаммов этой группы варьировала от 2 до 8 мкг/мл. Наибольшее число штаммов (31.0±2.2%) проявляли уровень антгшизоцгшной активности в 6 мкг/мл, а самая низкая антилизоцгшная активность 2 мкг/мл была выражена у 10.3±1.5% штаммов. Среди исследованной группы родококков высоким было число штаммов, имеюших уровень антилизоцгшной активности 4 и 8 мкг/мл (17.3±1.7% и 19.0+1.8%).

Вторую группу составили штаммы, у которых присутствовал лглзоцим-ный признак, но отсутствовал антилизоцгшный - 3.5±0.5% (J1A+, AJIA"). В третью группу родококков вошли (объединены) штаммы, у которых одновременно были выражены как лизоцимная, так и антилизоцгшная активности (J1A+, AJIA+), их процент был значительно ниже и составил среди исследованных штаммов 8.6±0.7%. В большем количестве в этой группе были представлены штаммы с уровнем антилизоцимной активности 6 мкг/мл (5.2+1.7%).

В то время как у 10.3±1.5% изученных штаммов не отмечалось экспрессии как лизоцимного, так и антилизоцимного признаков (ЛА~, АЛА-).

Таким образом, проведенный анализ показал, что как правило при экспрессии антилизоцимного и лизоцимного признаков наблюдалась обратная зависимость: присутствие антилизоцимной активности исключало экспрессию лизоцимной активности и наоборот — присутствие лизоцимной исключало антилизоцимную; значительно реже прослеживалась либо одновременная экспрессия обоих признаков, либо отсутствие экспрессии как лизоцимного, так и антилизоцимного признаков.

Установление факта широкого распространения у родококков разного уровня антилизоцимной активности и обнаруженная способность гидробионтов продуцировать лизоцим, определило следующий этап исследования: постановку эксперимента по изучению характера и механизмов ответных реакций родококков на воздействие лизоцима моллюска U. pictorum, с целью определения степени их чувствительности к воздействию биотических факторов среды, а через призму решения этого вопроса оценить потенциальные возможности выживания актинобактерий в условиях водных сообществ биоценоза и сохранения его способности к самоочищению за счёт микробной деструкции и аккумуляции поступающего антропогенного загрязнения.

Эффективность сорбции на хитине, бактериолитический эффект в отношении М. lysodeikticus, результаты использования электрофо-ретических исследований и метода "gel overlay technique" доказывали наличие в полученном препарате белковой фракции идентифицированной как лизоцим пресноводного двустворчатого моллюска U. pictorum, который и был использован нами в дальнейшем эксперименте для оценки чувствительности родококков к его действию.

В результате проведенных исследований и анализа их результатов по характеру ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus на воздействие лизоцима все исследованные штаммы родококков были разделены на три группы: первая - лизоцимчувствительные, к ним отнесены 43.1±3.5%: из которых высокочувствительных было - 13.7±1.5% и слабочувствительных - 29.4±1.9%; ко второй группе отнесены 6.9±1.5% штаммов, устойчивых к лизоциму и к третьей - 50±4.1% лизоцимзависимых штаммов (р<0.05).

Анализ ответных реакций родококков на воздействие лизоцима показал существование специфических (антилизоцимная активность) и неспецифических (скорость размножения и динамика роста бактерий) форм ответа, которые, по-видимому, обеспечивают межпопуляционные взаимодействия актинобактерий рода Rhodococcus с гидробионтами в водном биоценозе.

Проведенный анализ ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus к воздействию лизоцима моллюска U. pictorum показал, что характер ответных реакций у лизоцимзависимых, лизоцимустойчивых и лизоцимчувствительных родококков был различен.

Для лизоцимзависимых штаммов прослежено два типа ответных реакций на воздействие лизоцима: 1 - когда в присутствии лизоцима (опыт) наблюдался прирост бактериальной популяции, по сравнению с их ростом в контроле и индекс стимуляции роста для таких штаммов составил 2.86±0.4, что обусловлено укорочением времени генерации бактерий до 1.18± 0.11;

На 42.8% штаммов лизоцим оказывал выраженное угнетающее действие, что свидетельствует об их чувствительности к нему. Однако механизмы проявления чувствительности у бактерий рода Rhodococcus были различными, а поэтому все чувствительные штаммы разделены на две подгруппы: высокочувствительные и слабочувствительные к лизоциму моллюска U. pictorum.

К высокочувствительным было отнесено 13.7% исследованных штаммов, у которых снижение общего микробного числа популяции в присутствии лизоцима моллюска превышало 50% по сравнению с их численностью в контроле, а индекс торможения роста популяции для них составил 3.35±0.02, что объясняется удлинением времени генерации данных бактерий с 1.50±0.12 до 5.10±0.23 часа, то есть в 3.4 раза. Такими оказались 3.4% штаммов вида R. ruber ИЭГМ 83, ИЭГМ 92; 5.2% штаммов вида R. luteus ИЭГМ

36, ИЭГМ 171, ИЭГМ 173; 3.4% штаммов вида R. erythropolis ИЭГМ 179, ИЭГМ 189 и R. egui ИЭГМ 715 (1.7%).

К слабочувствительным отнесено 29.4% исследованных культур, из которых 8.6% штаммов R. ruber (ИЭГМ 377, ИЭГМ 383, ИЭГМ 384, ИЭГМ 385 и ИЭГМ 386); 5.2% R. luteus (ИЭГМ 39, ИЭГМ 175, ИЭГМ 277); 10.4% R. erythropolis (ИЭГМ 23, ИЭГМ 25, ИЭГМ 180, ИЭГМ 202, ИЭГМ 203, ИЭГМ 257); 3.5% штаммов R. rhodochrous (ИЭГМ 653, ИЭГМ 654) и штамм R. rhodnii ИЭГМ 555 (1.7%). Для данных штаммов снижение прироста общего микробного числа в присутствии лизоцима не превышало 50% по сравнению с контролем, а индекс торможения их роста составил 2.70±0.11, в то время как скорость размножения в присутствии лизоцима моллюска у слабочувствительных штаммов удлинялась с 2.710.13 до 3.26±0.22 часа (р<0.05), то есть в 1.35 раза.

На 6.9% штаммов лизоцим не оказывал заметного действия, так как наблюдался практически одинаковый прирост культур как в контроле (82±3.1%), так и в присутствии лизоцима (79±2.6%), который составил 1.04± 0.1 раза, что обусловлено одинаковой интенсивностью скорости генерации бактерий у этих штаммов: в опыте и в контроле она составила 0.95±0.02. Полученные данные позволили штаммы видов R. ruber ИЭГМ 222, ИЭГМ 348, ИЭГМ 380 (5.2%) и R. erythropolis ИЭГМ 191 (1.7%) отнести к лизоциму-стойчивым, поскольку динамика роста и скорость размножения микроорганизмов этой группы как в контроле, так и в присутствии лизоцима моллюска была аналогичной (р<0.05).

Чтобы убедиться, что выявленные различия в чувствительности к лизоциму различных видов родококков не случайны, для исследованных штаммов родококков рассматривалась матрица факторных нагрузок индивидуальных значений ОМЧ, полученных на среде МПА и на среде МПА+лизоцим. В группах лизоцимчувствительных и лизоцимзависимых штаммов родококков оказались характеризующими как положительные, так и отрицательные суммы квадратов факторных нагрузок. Математическая модель экологической толерантности штаммов родококков представлена линейной дискриминант-ной функцией: F(x)= ai .Х!+а2 . х2+ . + a n . хт+ . ±с, где F(x) - дискрими-нантная функция, характеризующая тип штамма; х- исследуемые показатели;' с- поправочная константа; а — коэффициенты факторных нагрузок. Сумма квадратов факторных нагрузок, а также внутренняя взаимосвязь исходных параметров, объединившихся в факторах, позволили оценить структуру ли-зоцимчувствительности, лизоцимзависимости и лизоцимустойчивости исследуемых штаммов, а также предположить, что влияние лизоцима моллюска Unio pictorum на разные группы родококков может быть связано с разным характером динамики развития популяций микроорганизмов.

1 - фенотипически ответные реакции в процессах взаимодействия актинобактерий рода Rhodococcus с лизоцимом гидробионтов в водном биоценозе проявляются в изменении динамики роста популяции и времени её генерации;

2 - по характеру ответа родококков на воздействие лизоцима можно выделить: лизоцимзависимые, лизоцимустойчивые и лизоцимчувствитель-ные, которые разделены на слабочувствительные и высокочувствительные штаммы, что свидетельствует о фенотипически неодинаковом отношении тестируемых видов к природному биотическому фактору - лизоциму моллюска U. picrorum и широких возможностях их межпопуляционных взаимоотношений в гидробиоценозах в системе лизоцим гидробионта — ответная реакция актинобактерий рода Rhodococcus.

Полученные данные о том, что в естественных природных водоёмах родококки, контактируя с гидробионтами обладающими лизоцимом имеют разную степень чувствительности к нему и установление факта наличия у данных бактерий AJIA-признака, а также результаты полученные методом факторного анализа по оценке лизоцимчувствительности, лизоцимзависимости и лизоцимустойчивости родококков, позволили заключить, что ведущие факторы с наибольшей суммой квадратов факторных нагрузок в исследуемых группах имеют связи с так называемым фактором „носительства", то есть они объединяются с видом родококков, обладающим персистентной характеристикой - уровнем антилизоцимной активности. Всё это определило актуальность следующего этапа исследования: оценить роль антилизоцимной активности родококков в механизмах их ответов на воздействия лизоцима гидробионтов водного биоценоза.

Для лизоцимзависимых и лизоцимустойчивых штаммов родококков уровень АЛА был достаточно высоким и колебался от 6 до 8 мкг/мл, однако нами не выявлены различия в уровнях антилизоцимной активности для лизоцимзависимых и лизоцимустойчивых штаммов. Для лизоцимчувствительных штаммов родококков уровень АЛА был значительно ниже и находился в пределах от 0 до 2-4 мкг/мл. Проведённый анализ показал, что для высокочувствительных штаммов уровень антилизоцимной активности не превышал 0-2 мкг/мл, а иногда и отсутствовал вовсе, в то время как для слабочувствительных он был выше и составлял 2-4 мкг/мл. Анализ уровня антилизоцимной активности родококков и степени их чувствительности к лизоциму моллюска Unio pictorum позволяет сделать вывод о том, что низкий уровень антилизоцимной активности или её отсутствие, не обеспечивает устойчивости родококков к воздействию биотического фактора гидробиоценоза - лизоциму гидробионтов, и как следствие, к „персистированию" этих штаммов в микробиоценозах водоёмов, в то время как высокий уровень антилизоцимной активности способствует устойчивости штаммов к лизоциму гидробионтов, а следовательно, и к сохранению их в водном биоценозе.

Подтверждением полученных выводов явились результаты математической обработки результатов с помощью факторного анализа. Установлена прямая корреляционная зависимость между уровнем экспрессии факторов толерантности штаммов рода Rhodococcus — антилизоцимной активностью и степенью их чувствительности к лизоциму. Для лизоцимчувствительных штаммов не выявлено линейных связей между параметрами, так как коэффициенты парной корреляции оказались в промежутке 0,3<|гху|<0,5. В группу лизоцимустойчивых штаммов родококков отнесены те, для которых получены линейные связи параметров с коэффициентами парной корреляции |гху|>0,75. Согласно факторному анализу для лизоцимзависимых штаммов наблюдалась слабая линейная зависимость с коэффициентами парной корреляции 0,5<|гху|<0,75.

Помимо биотических факторов, бактерии воды испытывают воздействие и абиотических факторов водного биоценоза. Ретроспективный анализ литературных данных о качестве воды реки Урал и собственные исследования показали, что уровень загрязнения воды в реке выше ПДК по большинству показателей, в том числе по содержанию цинка на 53.1% (р>0.05), кадмия на 39.7% (р>0.05), меди на 16.2% (р>0.05), свинца на 11.7% (р>0.05), что свидетельствует об актуальности изучения характера устойчивости и типов ответных реакций актинобактерий вида R. ruber на токсические воздействия тяжёлых металлов, с целью оценки потенциальных возможностей сохранения этих бактерий в биоценозе в условиях антропогенного загрязнения металлами. Полученные знания о возможных ответах и приспособленности бактерий к антропогенным факторам среды, должны учитываться для прогнозирования сукцессионных изменений в экосистемах и вопросах охраны водоёмов от антропогенного прессинга.

Из литературных данных известно, что при действии токсических веществ гибель организмов наступает, как правило, не мгновенно, так как организм обладает некоторой приспособленностью к внезапным, резким изменениям условий внешней среды. Согласно универсального закона действия токсического фактора'' каждый из токсикантов обладает определённым механизмом действия и обуславливает специфический механизм реагирования (ответные реакции) водных организмов в ответ на антропогенное загрязнение среды, поэтому гидробионты, в том числе и бактерии воды, их популяции, обнаруживают, по-видимому неодинаковую чувствительность и устойчивость к действию тяжёлых металлов (цинка, кадмия, свинца и меди) и проявляют разные „механизмы реагирования" в форме разных ответных реакций на эти воздействия.

Проведенный анализ типов ответных реакций чувствительных и нечувствительных к действию металлов штаммов показал, что чувствительность к металлам чаще регистрировалась после длительного контакта с металлами (48—72 часа), что проявлялось в переходе динамики развития микробной популяции в фазу безразличия в этот период, против фазы стимуляции в контроле, либо уходу микропопуляции через 48—72часа в фазу депрессии. Для некоторых штаммов чувствительность к металлам проявлялась в нарушении динамики фаз развития популяции только в первые 18-24 часа контакта с металлом, а затем развитие культуры шло в той же последовательности, что и в контроле. При этом, во всех описанных случаях мы наблюдали ответную реакцию штаммов в первые минуты контакта с токсическим металлом, которая проявлялась либо в повышении численности микропопуляции, либо в её снижении в первые минуты контакта с металлом в опыте, против контроля, то есть без контакта с металлом.

В характере ответных реакций нечувствительных штаммов чаще наблюдалось повторение прохождения фаз в той же последовательности, что и в контроле, в то время как у некоторых штаммов устойчивость к металлам выражалась в том, что культура переходила в фазу стимуляции к концу эксперимента, которая отсуствовала в контроле.

Анализ ответных реакций одного и того же штамма к разным металлам как у чувствительных так и нечувствительных штаммов показал, что для некоторых из них был выявлен одинаковый тип ответов ко всем исследованным металлам, в то время как у других штаммов к каждому металлу была своя ответная реакция, о чём свидетельствует различная последовательность прохождения фаз под действием разных металлов.

Проведённый анализ ответных реакций на воздействия цинка, кадмия, свинца и меди показал, что штаммы вида R. ruber характеризуются широким диапазоном чувствительности и нечувствительности к данным металлам. Все исследованные штаммы вида R. ruber в результате проведённого эксперимента и анализа их результатов показали, что чувствительными к меди были ИЭГМ 71, ИЭГМ 90, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221*, ИЭГМ 325 и ИЭГМ 376, а не чувствительными ИЭГМ 83, ИЭГМ 92, ИЭГМ 219, ИЭГМ 222, ИЭГМ 338 и ИЭГМ 347; чувствительными к кадмию - ИЭГМ 71*, ИЭГМ 83*, ИЭГМ 90, ИЭГМ 221*, ИЭГМ 325 и ИЭГМ 347, а не чувствительными ИЭГМ 92, ИЭГМ 219, ИЭГМ 222, ИЭГМ 220, ИЭГМ 338 и ИЭГМ 376; чувствительность к цинку проявили штаммы ИЭГМ 71 и ИЭГМ 222, а не чувствительными к нему оказались ИЭГМ 83, ИЭГМ 90, ИЭГМ 92, ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221, ИЭГМ 325, ИЭГМ 338, ИЭГМ 347 и ИЭГМ 376; чувствительными к свинцу были ИЭГМ 90 и ИЭГМ 325, а не чувствительными ИЭГМ 71, ИЭГМ 83, ИЭГМ 92, ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 221, ИЭГМ 222, ИЭГМ 338, ИЭГМ 347 и ИЭГМ 376 (*- штамм чувствительный при превышении ПДК).

В последнее время появились работы и патенты, указывающие на участие бактерий в очистке загрязнённых металлами промышленных вод. Известен ряд работ, свидетельствующих об участии родококков в аккумуляции цезия. В работе Пешкур Т. А. (2002) показано, что активными биоаккумуляторами цезия являются коллекционные штаммы R. erytrhopolis ИЭГМ 270, R. fascians ИЭГМ 173, R. „longus" ИЭГМ 32, ИЭГМ 69 и R. ruber ИЭГМ 326, относящихся к алканотрофным родококкам. Данные факты о выраженной способности представителей вида R. ruber к извлечению из среды ионов цезия определили следующий этап исследования: оценить способность исследованных штаммов вида R. ruber к аккумуляции цинка, кадмия, свинца и меди.

Анализ полученных данных об убыли содержания металлов из среды культивирования и их обнаружения в микробной массе свидетельствует о том, что исследуемые штаммы аккумулировали свинец от 24±2 до 77±4%, при этом наиболее активными были актинобактерии вида R. ruber ИЭГМ 222, ИЭГМ 338 и ИЭГМ 347, которые аккумулировали из среды 75-77±4% данного металла. К биоаккумуляции цинка были способны 6 штаммов родококков, извлекающие из среды от 12±1 до 78±3% металла, но наиболее активными аккумуляторами данного металла оказались штаммы R. ruber ИЭГМ 219, ИЭГМ 221, ИЭГМ 347, которые извлекали из среды 61-78±3% металла. К аккумуляции кадмия проявили способность 7 исследованных штаммов родокков, а наиболее эффективно его извлекали штаммы R. ruber ИЭГМ 219, ИЭГМ 220, ИЭГМ 222, ИЭГМ 338 (49-85+2%). Аккумуляция исследуемыми штаммами меди была низкой, так как процент её извлечения из среды не превышал 24±2%.

139

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шостак, Елена Ивановна, Оренбург

1. Алёхина Г.П. Лизоцимная и антилизоцимная активность альгофлоры вводных биоценозах: Автореф. дисс . канд. биол. наук / Г.П. Алёхина-Оренбург, 1996. 24 с.

2. Аристархова В.И. Нокардиоподобные микроорганизмы / В.И. Аристархова.-М.: Наука, 1989.-248 с.

3. Багнюк В. М. Исследование экологической роли литических бактерий в активном иле. / В. М. Багнюк, О. А. Закордонец // Доклады АН СССР — 1980. -№ 4. -С. 1018-1021.

4. Балашова В.В. Микроорганизмы, окисляющие железо и марганец / В.В. Балашова, Г. А. Дубинина. В кн.: Хемосинтез. М.: Наука, 1989.- С. 101122.

5. Банникова О.М. Микробиологические превращения соединений фосфора и металлов в природных и сточных водах: Автореф. дисс . канд. биол. наук / О. М. Банникова Пермь, 1998. - 114 с.

6. Иммунофлуоресцентный анализ / П.С. Барбан, Р.А. Пшеничнов, А.Н. Пантюхина и др. Свердловск: УрО АН СССР, 1988. - 175 с.

7. Батраков С.Г. Липиды микобактерий / С.Г. Батраков, В.Б. Муратов, Л.Д. Бергельсон // Биоорганическая химия. 1981. - Т. 7, № 7. - С. 1075-1086.

8. Бирюкова С.В. Влияние продуктов жизнедеятельности С/, perfingens на его рост и размножение / С.В. Бирюкова // Вакцины и сыворотки; Киев: Здоровя. 1974. - С. 150-154.

9. Боев В.М. Гигиеническая характеристика влияния антропогенных и природных геохимических факторов на здоровье населения Южного Урала. / В.М. Боев // Гигиена и санитария. 1998. - № 6. - С. 3-8.

10. Оценка канцерогенной нагрузки в промышленных центрах / В.М. Боев, В.В. Быстрых, В.Ф. Куксанов и др. // Вестник Санкт-Петербургской медицинской академии им. И.И. Мечникова. 2001.- № 2. - С. 173-174.

11. Боев В.М. Химические канцерогены среды обитания и злокачественные новообразования / В.М. Боев, В.Ф. Куксанов, В.В. Быстрых. М.: Медицина, 2002. - 344 с.

12. Бойченко Е.А. Значение металлов в окислительно-восстановительных реакциях / Е.А. Бойченко // Успехи соврем, биологии,-1974.-62, № 1.-С. 4.

13. З.Борисов С.Д. Антилизоцимная активность менингококков и её применение в диагностике менингококковой инфекции: Автореф. дис . канд. мед. наук / С.Д. Борисов. Челябинск, 1988. - 38 с.

14. Воронин A.M. Эволюция плазмид резистентности к антибиотикам. Механизмы синтеза антибиотиков / A.M. Воронин. М: Наука, 1986 - С. 54-68.

15. Браун У.И. Растворимость фосфатов и других умеренно растворимых соединений / У.И. Браун.- В кн.: Фосфор в окружающей среде. М.: Мир, 1977.-С. 231-272.

16. Проточные биокаталитические реакторы с иммобилизованными ферментами и клетками в биотехнологии // А.Н.Булыгин, С.А.Рощин, М.А. Са-марцев и др. / Сер. Процессы и аппараты микробиологических производств. М.: ЦБНТМ Минмедбиопрома, 1987.- 29 с.

17. Бухарин О. В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине / О.В. Бухарин, Н.В. Васильев,-Томск: Изд-во Томск, ун-та, 1974. -208 с.

18. Метод определения антилизоцимной активности микроорганизмов. / О. В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов, А.П. Малышкин и др. // Журн. микробиол., эпи-демиол. и иммун. 1984. - №2. - С. 27-29.

19. Бухарин О.В. Лизоцим микроорганизмов / О.В. Бухарин, Н.В. Васильев, Б.Я. Усвяцов.-Томск: Изд-во Томск, ун-та, 1985.-214 с.

20. Бухарин О.В. Чашечный метод цилиндриков для определения лизоцим-ной активности диплококков /О.В.Бухарин, Л.И. Прянишникова, Б.Я. Усвяцов, Томск, 1985. - с. 18.

21. Бухарин О.В. Персистенция бактерий: Актовая речь /О.В. Бухарин-Оренбург, 1992. 32 с.

22. Бухарин О. В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий / О.В. Бухарин // Приложение к журн. микробиол., эпидемиол. и иммун. 1994. -С. 4-13.

23. Фотометрическое определение антилизоцимной активности микроорганизмов. / О.В. Бухарин, А.В. Валышев, Н.Н. Елагина и др. / ЖМЭИ. -1997,№4.-С. 117-120.

24. Бухарин О.В. Патогенные бактерии в природных экосистемах / О.В. Бухарин, В.Ю. Литвин. Екатеринбург, 1997. - 270 с.

25. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин.- М.: Медицина, 1999. 365 с.

26. Вайсман И.Ш. Предпосылки комплексной оценки физиологического состояния бактерий и их популяций / И.Ш. Вайсман // ЖМЭИ, 1984. № 4. -С. 3-8.

27. Ван-Везер Дж.Р. Соединения фосфора: В кн. Фосфор в окружающей среде. /Дж.Р. Ван-Везер. М.: Мир, 1977. - С. 195-203.

28. Васильев В.Б. Сбалансированный рост популяции бактериальных клеток на сложном субстрате и формирование бактериального сообщества активного ила / В.Б. Васильев, В.А. Вавилин. // Изв. РАН. Сер. биол., 1992. -№2.-С. 184-196.

29. Верхартский Н.С. Численные методы и применение метода множественной корреляции / Н.С.Верхартский, В.Н.Булатов, И.Н. Коваленко.-М.: Высшая школа, 1986. 132 с.

30. Гак Д.З. Бактериопланктон и его роль в биологической продуктивности водохранилищ / Д.З. Гак.- М.: Наука, 1975. 254 с.

31. Галаев И.Ю. Новые методы аффинной очистки белков / И.Ю. Галаев, Б. Маттиассон // Биохимия. 1997. -Т. 62, вып. 6. - С. 669-676.

32. Глазачева JI.E. Клеточные приспособления Rhodococcus rhodochrous и Rhodococcus ruber, усваивающих пропан и н-бутан / Л.Е.Глазачева, И.Б.Ившина, А.А.Оборин // Микробиология. 1990. - Т. 59. Вып. 2. - С. 301-306.

33. Гольтерман Г.Л. Вертикальные движения фосфата в пресных водах / Г.Л. Гольтерман. Фосфор в окружающей среде. М., 1977. - С.552-585.

34. Горленко В.М. Экология водных микроорганизмов / В.М. Горленко, Г.А. Дубинина, С.А. Кузнецов. М.: Наука, 1977. - 288 с.

35. Горшков В.А. Предотвращение загрязнения поверхностных вод шахтными водами: Автореф. дис .д-ра техн. наук / В.А. Горшков. Пермь, 1995.-61 с.

36. Драйпер Н. Прикладной регрессионный анализ / Н. Драйпер, Г. Смит. -М.: Статистика, 1973. 265 с.

37. Зверева Л.В. Идентификация бактерий рода Rhodococcus и их применение в практике поддержания специализированного фонда алканотрофных родококков / Л.В. Зверева, М.В.Бердичевская, Л.В .Рыбалка // Микробиология. 1995. - Т 64, вып. 1 . - С. 118-128.

38. ИберлаК. Факторный анализ / К. Иберла.-М.: Статистика, 1980.- 185 с.

39. Иванова Т.Н. Содержание токсичных элементов в некоторых видах растительного сырья / Т.Н. Иванова, А.А. Павловская, В.М. Кузьмин // Гигиена и санитария. 1997. - №1. - С. 21-23.

40. Ившина И.Б. Бактерии рода Rhodococcus грунтовых вод района нефтяных месторождений Пермского Предуралья / И.Б. Ившина, А.А. Оборин, О.А. Нестеренко //Микробиология.-1981.-Т.50, вып. 4.-С. 709-717.

41. Ившина И.Б. Биология бактерий рода Rhodococcus, усваивающих пропан и н-бутан: Автореф. дис .канд. биол. наук / И.Б. Ившина. Киев, 1982. -215 с.

42. Ившина И.Б. Электронно-микроскопическое изучение факультативных газоиспользующих Rhodococcus rhodochrous / И.Б. Ившина, О.А. Нестеренко, Л.Е. Глазачева и др.// Микробиология. -1982. Т. 51, вып. 3. - С. 477-481.

43. Ившина И.Б. Способы получения специфических иммунных сьюороток против бактерий рода Rhodococcus / И.Б. Ившина // Микробиол. журн. — 1986.-Т. 48, №2.-С. 8-13.

44. Ившина И.Б. Биосинтез свободных аминокислот родококками / И.Б. Ившина, Г.И. Безматерных / Биосинтез вторичных метаболитов: Тезисы докл. Всесоюзн. конф. -Пущино, 1987. С. 33-34.

45. Ившина И.Б. Пропанокисляющие родококки / И.Б. Ившина, Р.А. Пшеничное, А.А. Оборин.- Свердловск: УНЦ АН СССР, 1987. 125 с.

46. Ившина И.Б. Новые экологически безопасные биосурфактанты родококков / И.Б. Ившина, Д. Филп, М.С. Куюкина и др./ Матер. Междун. конф., посвящ. памяти акад. А. А. Баева. 20-22 мая 1996. -Москва, 1996. С. 161.

47. Ившина И.Б. Бактерии рода Rhodococcus (иммунодиагностика, детекция, биоразнообразие): Автореф. дис. . д-ра биол. наук / И.Б. Ившина. Пермь, 1997. 98 с.

48. Ильин В.Б. Химические элементы в системе почва-растения / В.Б. Ильин, М. Д. Степанова Новосибирск, 1982. - 91 с.

49. Илялетдинов А.Н. Микробиологические превращения металлов / А.Н. Илялетдинов.- Алма-Ата: Наука, 1984. 268 с.

50. Илялетдинов А.Н. Биоаккумуляция и осаждение металлов микроорганизмами / А.Н. Илялетдинов. Биогеотехнология металлов. Практическое руководство. М., 1989. - С. 352-375.

51. Илялетдинов А.Н. Микробиология и биотехнология очистки промышленных сточных вод / А.Н. Илялетдинов, P.M. Алиева.- Алма-Ата: Гылым, 1990.-224 с.

52. Каграманова К.А. Сравнительная характеристика методов определения активности лизоцима / К.А. Каграманова, З.В. Ермольева // Антибиотики. 1966. - Т. 11, № 10. - С. 9117-9119.

53. Каравайко Г.И. Микроорганизмы и их роль в биотехнологии металлов / Г.И. Каравайко. Биогеотехнология металлов. Практическое руководство. -М., 1989.-С. 11-50.

54. Карнаухова И.В. Лизоцимный фактор пресноводного двустворчатого моллюска Unio pictorum: выделение, характеристика, функции: Дисс. . канд. биол. наук / И.В. Карнаухова. Оренбург, 2000. - 110 с.

55. Катаева И.В. Интенсификация процесса биологической очистки шахтных вод / И.В. Катаева.- Биологическое самоочищение и формирование качества воды. М., 1975. - С. 156-162.

56. Каталог штаммов Региональной профилированной коллекции алканотрофных микроорганизмов. / Под ред. И.Б. Ившиной. Ин-т экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН. М.: Наука, 1994.-163 с.

57. Коганова З.И. Структура и функция лизосом / З.И. Коганова, С.И. Долин-ская.-М., 1986.-С. 94-95.

58. Козырева Г.И. Хемотаксономическая характеристика алканотрофных родококков / Г.И. Козырева, И.Б. Ившина // Физиология и биохимия микроорганизмов: Труды УрО РАН. Ин-т экологии и генетики микроорганизмов. Екатеринбург: УрО РАН, - 1992. - С. 45-53.

59. Кореневский А.А. Взаимодействие ионов серебра с клетками Candida utilis / А.А. Кореневский, В.В. Сорокин, Г.И. Каравайко // Микробиология. -1993. Т. 62, вып. 6. - С. 1085-1092.

60. Кореневский А.А. Взаимодействие ионов редкоземельных элементов с клетками Candida utilis / А.А. Кореневский, В.В. Сорокин, Г.И. Каравайко // Микробиология. -1997. Т. 66, № 2. -С. 198-205.

61. Коровина В.П. Изучение механизма регуляции численности популяций в эксперименте на культурах бактерий / В.П. Коровина, JI.A. Сазонова, И.Ш. Вайсман // Экология, 1974. № 6. -С. 5-9.

62. Коронелли Т.В. Липиды микобактерий и родственных микроорганизмов/ Т.В. Коронелли.- М.: Изд-во МГУ, 1984. 168 с.

63. Коронелли Т.В. Полярные липиды углеводородокисляющих бактерий / Т.В. Коронелли, Т.И. Комарова, С.Г. Юфеева и др.// Микробиология. 1993. Т. 62, вып. 2. - С. 231-237.

64. Кузнецов С.И. Микробиологические процессы в водоёмах и в озёрах / С.И. Кузнецов, А.И. Саралов, Т.Н. Назина.- М.: Наука, 1985. 213 с.

65. Кунаев И.С. Биохимия высокомолекулярных полифосфатов / И.С. Кула-ев.- М.: МГУ, 1975. 246 с.

66. Купер Э. Сравнительная иммунология / Э. Купер.-М.: Мир, 1980.-422 с.

67. Куюкина М.С. Антибиотикочувствительность алканотрофных родококков и возможные пути формирования их неспецифической антибиотикорези-стентности: Автореф. дис . канд. биол. наук / М.С. Куюкина Пермь, 1997.-174 с.

68. Ланчини Д. Антибиотики / Д. Ланчини, Ф. Паренти-М: Мир, 1985.-272 с.

69. Лебедев B.C. Роль трансмембранного потенциала в Си2+-индуци-рованном нарушении барьерных свойств цитоплазматической мембраны Escherichia coli / B.C. Лебедев, Е.Ю. Дейнега, О.С. Савлук и др.// Биол. мембраны. -1989. -Т. 6, № 12. С. 1313- 1316.

70. Левченко Л.А. Получение и свойства Au-белка из клеток Micrococcus luteus, осуществляющих трансформацию коллоидного золота / Л.А. Левченко, А.П. Садков, Н.В. Ларионцева // Докл. Рос. АН. 1993. - Т. 333, №3 . - С.392-394.

71. Левченко Л.А. Роль клеточных структур в трансформации коллоидного золота клетками Micrococcus luteus / Л.А. Левченко, А.П. Садков, С.А. Маракушев и др. //Биол. мембраны. -1997. -Т. 14, № 1. -С.105-108.

72. Ломакин М.С. Иммунобиологический надзор / М.С. Ломакин. М.: Медицина, 1990. - 256 с.

73. Лукиных Н.А. Очистка городских сточных вод от биогенных веществ: обзорная информация / Н.А. Лукиных, Э.С. Разумовский, Н.А. Залетова и др. ЦБНТИ Минжилкомхоза РСФСР. - 1989. - 42 с.

74. Малашенко Ю.Р. Особенности углеродного питания микроорганизмов, растущих на природном газе/ Ю.Р. Малашенко, В.А. Романовская, В.Н. Богаченко и др./ Микробиология. 1973. - Т. 42, вып. 3. - С. 403-408.

75. Малышева А.Г. Закономерности трансформации органических соединений в окружающей среде / А.Г. Малышева // Гигиена и санитария. 1997, № 3. - С. 3-6.

76. Маракушев С.А. Геомикробиология и биохимия золота / С.А. Маракушев. М.: Наука, 1991. - С. 80-96.

77. Марченко Н.Д. Исследование плазмидного состава штаммов Rhodococcus opacus / Н.Д. Марченко // Рукопись ВИНИТИ.- 1990.- № 642, вып. 90.- 4 с.

78. Немцева Н.В. Антилизоцимный признак в микробиологической характеристике речных альгобактериальных сообществ / Н.В. Немцева, Г.П. Алёхина // ЖМЭИ.- 1996. № 3. - С. 93-96.

79. Немцева Н.В. Микробиологическая характеристика биоценотических взаимоотношений гидробионтов и её значение в санитарной оценке водоёмов: Автореф. дис .доктора мед. наук / Н.В. Немцева. Челябинск, 1998.-69 с.

80. Нестеренко О.А. Жирнокислотный состав некоторых Корине- и нокар-диоподобных бактерий / О.А. Нестеренко, Л.В. Андреев, Т.М. Ногина и др. // Микробиол. журн. 1980. - Т. 42, № 3. - С. 288-293.

81. Нефедова Е.М. Роль лизоцима гидробионтов в процессах самоочищения водоёмов: Дис. . канд. биол. наук / Е.М. Нефедова Оренбург, 2001. -175 с.

82. Никитин Д.И. Условия среды и цикл развития олиготрофных почвенных микроорганизмов / Д.И. Никитин, Л.В. Андреев, О.М. Котова. Онтогенез микроорганизмов. М.: Наука, 1979. - С. 217-234.

83. Пешкур Т.А. Оптимальные условия эффективного извлечения цезия бактериями рода Rhodococcus / Т.А. Пешкур // Сб. Охрана природы и здоровья человека. Оренбург: ОГМА, 2000. С. 50-52.

84. Пешкур Т.А. Аккумуляция цезия актинобактериями рода Rhodococcus: Автореф. дис. . канд. биол. наук. / Т.А. Пешкур.- Пермь, 2002 22 с.

85. Плакунов В.К. Биохимические основы устойчивости микроорганизмов к антибиотикам / В.К. Плакунов, М.Д. Лопатик // Успехи микробиологии. -1970.- №6. -С. 211-225.

86. Подборнов В.М. Защитные механизмы иксоидных клещей и их прокор-мителей / В.М. Подборнов, А. Бердыев Ашхабад: Ылым, 1991. - 240 с.

87. Прыткова О.В. Комплексная эколого-гигиеническая характеристика антропогенных химических факторов промышленного города: Автореф. дисс. . канд. биол. наук / О.В. Прыткова.-Оренбург,1998 С. 23.

88. Пшеничное Р.А. Микробная популяция саморегулируемая система / Р.А. Пшеничнов, М.В. Колотов, С.Я. Барихин // Экология и популяц. генетика микроорг. - Свердловск, 1975. - С. 3-13.

89. Реброва Р.Н. О лизоцимной активности грибов рода Candida. / Р.Н. Реб-рова, В.Н. Горохов // Журн. Микробиол. 1983. - № 3. - С. 45-46.

90. Розанова Е.П. Современные представления о сульфатвосстанавливающих бактериях / Е.П. Розанова, Т.Н. Назина // Хемосинтез. -М.: Наука, 1989. -С. 199-228.

91. Русаков Н.В. Оценка опасности промышленных отходов, содержащих тяжелые металлы / Н.В. Русаков, Л.Х. Мухамбетова, Н.В. Пиртахия // Гигиена и санитария. 1998. - № 4. - С. 27-29.

92. Рыбальский Н.Г. Иммобилизованные клетки / Н.Г. Рыбальский, И.Г. Чаплина,- М.: ВНИИПИ, 1990. 108 с.

93. Самсонова А.С. Утилизация диметилтерефталата Rhodococcus erythropolis / А.С. Самсонова, З.М. Слизень // Докл. АН БССР. 1989. -Т. 33, №5. -С. 467-470.

94. Смирнова В.В. Структурно-функциональная роль жирно-кислотного компонента бактериальных липидов и связанные с ней аспекты чувствительности и устойчивости бактерий к антибиотикам /В.В. Смирнова, З.П.

95. Васюренко, JI.H. Чуркина / Антибиотики и мед. биотехнология. 1987. — Т 32, №5. - С. 365-371.

96. Саралов А.И. Накопление полифосфатов в начальной фазе роста Acinetobacter calcoaceticus и Rhodococcus maris / А.И. Саралов, М.В. Бер-дичевская, О.М. Банникова // Микробиология.- 1995. -Т. 64, № 4. -С. 446452.

97. Семёнов А.М. Культивирование и физиология роста олиготрофных микроорганизмов / A.M. Семёнов // Итоги науки и техники. Сер. Микробиология.- 1991. -Т. 24. С. 149-179.

98. Сидоренко Г.И. Никель. Гигиенические аспекты охраны окружающей среды / Г.И. Сидоренко, А.И. Ицкова. М., 1980.- 246 с.

99. Соломенный А.П. Трансформация оксианионов теллура фосфатаккуму-лирующей бактерией Acinetobacter calcoaceticus: Автореф. дис. канд. биол. наук / А.П. Соломенный. Пермь, 1998. -25 с.

100. Соловых Г.Н. Функциональная система „лизоцим-антилизоцим" у гидробионтов и её роль в формировании водных биоценозов / Г.Н. Соловых, Н.В. Немцева/Приложение ЖМЭИ.- 1994.- С. 95-98.

101. Соловых Г.Н. Система лизоцим- антилизоцим микроорганизмов в формировании водных сообществ пресных водоёмов: Дисс . д-ра биол. наук / Г.Н. Соловых. Челябинск. - 1995. -216 с.

102. Ю.Страйер Л. Биохимия / Л. Страйер. М.: Мир, 1984.- Т.1.- 287 с.

103. Ш.Строганов Н.С. Токсикология водных животных в связи с действием сточных промышленных вод на водоём / Н.С. Строганов // Зоол. журн. — 1940. Т. 19, № 4. - С. 566-579.

104. Строганов Н.С. Некоторые общие вопросы анализа действия оловоорга-нических соединений на гидробионтов / Н.С. Строганов // Оловооргани-ческие соединения и жизненные процессы гидробионтов. 1975. - С. 241259.

105. П.Строганов Н.С. Моделирование возможных изменений экосистемы при загрязнениях по чувствительности гидробионтов к токсикантам / Н.С. Строганов // Влияние загрязняющих веществ на гидробионтов и экосистемы водоёмов. Л., 1979. - С. 142-149.

106. Стуканов В.А. Биотехнология очистки промышленных вод от разных примесей культурами ацидофильных микроорганизмов / В.А. Стуканов // Тез. конф. „Микробиологические методы защиты окружающей среды".-Пущино, 1988.-С. 120.

107. Фабарисова JI.Г. Разработка способа микробиологического контроля температуры тепловых сбросов электростанций в водоёмы-охладители: Дисс. .канд. биол. наук / Л.Г. Фабарисова Оренбург, 2000. - 149 с.

108. Харман Г. Современный факторный анализ / Г. Харман. М.: Статистика, 1980. -146 с.

109. Хочачка П. Стратегия биохимической адаптации / П. Хочачка, Дж. Со-меро.- М.: Мир, 1977.- 398 с.

110. Челомин В.П. Биохимические механизмы адаптации мидии Mytilus tros-sulus к ионам кадмия и меди / В.П. Челомин, Н.Н. Бельчева, М.В. Захар-цев // Биология моря. 1998. - Т. 24, № 5. - С. 319-325.

111. Черкасов И.А. О некоторых особенностях сорбционного взаимодействия лизоцима с хитином / И.А. Черкасов, Н.А. Кравченко // Биохимия. 1968. -Т. 33, вып. 4.-С. 761-765.

112. Черкасов И.А. Усовершенствованный способ выделения лизоцима методом фермент-субстратной хроматографии / И.А. Черкасов, Н.А. Кравченко // Биохимия. 1969. - Т. 33, № 5. - С. 1089-1091.

113. Шихова Н.С. Накопление тяжелых металлов ассимиляционными органами древесных пород / Н.С. Шихова // Вестник ДВО РАН.-1994. -№ 4-5. -С. 143-148.

114. Шихова Н.С. Биогеохимическая оценка состояния городской среды / Н.С. Шихова // Экология.- 1997.- № 2. С. 146-149.

115. Шлегель Г. Общая микробиология / Г. Шлегель. М.: Мир, 1989. - 567 с.

116. Appeldoorn К.J. Biological phosphate removal from wastewater by Acine-tobacter / K.J. Appeldoorn, C.F. Bonting, M.N. Deinema // Forum. Microbiol. -1989. -Vol. 12, N 1-2. -P. 108-112.

117. Auwray J. Dephosphatation biologigue des eaus residuaires de la ville de Metz etude pilote de facibilite // J. Auwray, P. Haignere, A. Le Riche // Techn. Sci., Meth. -1992. -N 2. P.61-68.

118. Baldi F. Microsial transformation of metals in relation to the biogeochemical cycle / F. Baldi // Chemistry of Aquatic Systems; Lokal fiid Global Perspectives. Brussels and Luxemburg. 1994.- P. 121-152.

119. Bayer M.E. Lanthanide accumulation in the periplasmic space of Escherichia coli В / M.E. Bayer, M.H. Bayer // J. Bacteriol. -1991.-Vol. 173, N 1. P. 141149.

120. Bern D. Biochemical and serological characteristics of Rhodococcus egui isolates from animals and humans / D. Bern, C. Lammler // J. Ved.- 1994. Vol. 41.-P. 161-165.

121. Beveridge T.J. Interactions of metal ions with components of bacterial cell-walls and their biomineralisation / T.J. Beveridge // Metal-microbe interact: Symp. cell Biol. Group Soc. Gen. Microbiol., Oxford, Apr. -1988. Oxford ets. -1989.-P. 65-83.

122. Briglia M. Rhodococcus percolatus sp. nov., a bacterium degrading 2,4,6-trichlorophenol / M. Briglia, F.A. Rainey, E. Stackebrandt et al // Int. J. Syst. Bacteriol. 1996.- Vol. 46. - P. 23-30.

123. Brownel G.H. Genetics of the nocardioform bacteria / G.H. Brownel, K.F. Denniston // The Biology of Actinomycetes // Edit.: M. Goodfellow, M. Mordarski, S. T. Williams. New York: Academic.-1984. - P. 201-208.

124. Caraco N.F., Cole J.J., Likens G. Evidence for sulfate-controlled phosphorus release from sediments of aquatic-systems /N.F. Caraco, J.J. Cole, G. Likens // Nature. -1989. -Vol. 341, N 6240. -P. 316-318.

125. Colden R.W. Field and Laboratory Microbiol / R.W. Colden // Ecology. New York, 1972.-P. 368-371.

126. Dabbs E.R. Plasmid-borne resistance to arsenate, arsenite, cadmium and chloramphenicol in a Rhodococcus species / E.R. Dabbs, G.J. Sole // Mol. Gen. Genet. (MGG). 1988. - Vol. 211. - P. 148-154.

127. Deinema M.H. Some physiological characteristics of Acinetobacter spp. accumulating large omounts of phosphate / M.H. Deinema, M. Van Loodstrecht, A. Scholten//Wat. Sci. Technol. -1985. -Vol. 17. -P. 119-125.

128. During K. The nonenzymatic microdicidal activity of lysozymes / K. During, P. Porsch, A. Mahn et al // FEBS letters. 1999. - Vol. 449, issue 2-3. - P. 93100.

129. Finnerti W. The biologi and genetics of the genus Rhodococcus / W. Finnerti // Annu. Rev. Microbiol. -1992. -Vol. 46. -P. 193-218.

130. Friis N. Biosorption of uranium and lead by Streptomyces longwoodensis / N. Friis, P. Myers-Keith // Biotechnol. Bioeng. -1986. Vol.28. - P. 21-28.

131. Goodfellow M. Introduction to chemosystematiks / M. Goodfellow, D.E. Minnikin // Chemical Methods in Bacterial Systematics / Soc. Appl. В acteriol. -1985.-Vol.20. P. 1-15.

132. Goodfellow M. Genus Rhodococcus. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology / M. Goodfellow // Edit.: J. G. Holt. Baltimore etc.: William and Wil-kins Company.- 1989. - Vol. 4. - 2648 p.

133. Goodfellow M. The actinomycete-genus Rhodococcus'. a home for the „rhodochrous" complex / M. Goodfellow, G. Alderson // J. Gen. Microbiol. -1977.-Vol. 100, N 1. P. 99-122.

134. Harold F.M. Inorganic poliphosphate in biologi: Structure, metabolism and function / F.M. Harold // Bacteriol. Rev. -1966.- Vol. 30. P. 772-794.

135. Howard A.G. Protein binding of cadmium, zink, copper in environmentally insulted limpets Patella vulgata / A.G. Howard, G. Nickey // J. Chromatography. -1975. -Vol. 104. P. 457-459.

136. Hultmark D. Immure reaction in Drosophila and other insects: a model for innate immunity / D. Hultmark // Trends in Genetics. 1993. - Vol. 9, N 5. - P. 178-182.

137. Jarlier V. Mycobacterial cejj wall: Structure and role in natural resistance to antibiotics / V. Jarlier, H. Nikado // FEMS Microbiol. Lett.-1994.-Vol. 123. — P. 11-18.

138. Kuyucak N. Biosorbents for recovery of metals from industrial solutions / N. Kuyucak, B. Volesky // Biotechnol. Lett.-1988.-Vol. 10, N. 2. P. 137-142.

139. Lechevalier M.P. Biology of actinomicetes not belonging to genus Streptomy-ces / M.P. Lechevalier, H. Lechevalier // Biology of Industrial Microorganisms / Edit.: A. L. Demein, N. A. Solomon. Menlo Park, CA: Benjamin/ Cum-mings.-1985.-P. 315-358.

140. Lehrer R.I. Ultrasensitive assays for endogenous antimicrobial polipeptides / R.I. Lehrer, M. Rosenman, S. Harwig et al // Yournal of Immounological Mehtods. 1991.-N 137.-P. 167-173.

141. Liu J. Fluiditi of the lipid domain of cell wall from Mycobacterium chelonae / J. Liu, E.Y. Rosenberg, H. Nicado // Proc. National Academy of Sciences USA. 1995. -Vol. 92, N 24.-P. 11254-11258.

142. Minnikin D.E. Lipids: complex lipids, their chemistry, biosynthesis and roles / D.E. Minnikin // The bioligy of the Mycobacteria / Edit.: Ratledge, Stanford. — 1982.-Vol. l.-P. 95-184.

143. Morgan P. Hydrocarbon degradation in soijs and methods for soil biotreat-ment / P. Morgan, R.J. Watkinson // CRC Crit. Biotechnol. 1989. - Vol. 8. -P. 305-333.

144. Mullen M.D. Bacterial sorption of heavy metals / M.D. Mullen, D.C. Wolf, F.G. Ferris et al // Appl. Environ Microbiol. -1989.- Vol. 55, N 12. P 31433149.

145. Postgate J.R. The sulfate-reducing bacteria. 2nd ed / J.R. Postgate // Cambridge: Cambridge Univ. press. -1984. -208 p.

146. Prescott J.F. Use of a virulence-associated protein-based enzyme-linked immunosorbent assay for Rhodococcus equi serology in horses / J.F. Prescott, A.S. Fernandez, V.M. Nicholson // Equine Vet. J. 1996. - Vol. 28. - P. 344349.

147. Quan S. Nocardioform arsenic resistance plasmid characterization and improved Rhodococcus cloning vectors / S. Quan, E.R. Dabbs // Plasmid. 1993. -Vol. 29,N l.-P. 74-79.

148. Rainey F.A. Polyphasic evidence for the transfer of Rhodococcus roseus to Rhodococcus rhodochrous / F.A. Rainey, J. Burghatdt, R. Kroppenstedt et al // Int. J. Syst. Bacterid. 1995. - Vol. 45. - P. 101-103.

149. Russel A.D. Understanding antibacterial action and resistance. / A.D. Russel, I. Chopra // Edit.: V. Y. Rubinstein. Ellis Horwood Limited, New York etc. -1990.-246 p.

150. Skujins J. Metal ion availabity during biodegradation of Waste oil in semi-arid soils / J. Skujins, S.O. McDonald, W.G. Knight // Environ. Biogeochem. Proc. Sth. Int. Symp. JSEB, Stockholm,1-5 June, 1983. Stockholm. 1983. - P. 341-350.

151. Sorkhoh N.A. Sterols and diacylglycerophosphocholines in the lipids of the hydrocarbon- utilizing prokaryote Rhodococcus rhodochrous / N.A. Sorkhoh, M.A. Ghannoum, A.S. Ibrahin et al // J. Appl. Bacteriol. 1990. - Vol. 69. - P. 856-863.

152. Soto A. Evaluation of API Coryne System for identifying coryneform bacteria / A. Soto, J. Zapardiel, F. Soriano // J. Clin. Pathol. 1994. - Vol. 47. - P. 756759.

153. G.W. Strandberg, S.E. Shumate, J.R. Parrot // Appl. Environ. Microbiol. -1981.- Vol. 41, N 1. P. 237-245.

154. Tolley M.N. Lanthanum accumulation from acidic solutions using Citrobacter sp. immobilized in a flow-throungh bioreactor / M.N. Tolley, L.F. Strachan, L.E. Macaskie // J. Industr. Microbiol.-1995.-Vol. 14. P. 271-280.

155. Tomioka N. Cesium accumulation and growth characteristics of Rhodococcus erythropolis CS98 said Rhodococcus sp. strein CS402 / N. Tomioka,

156. H.Uchiyama, O.Yagi//Appl. Env. Microbiol.-1994.-Vol. 60.-P. 2227-2231.

157. Tripp M.R. The fate of foreign materials experimentally introduced into the sneil, Australorbis glabratus / M.R. Tripp // J. Parasitol. 1961. - Vol. 47. - P. 745-753.

158. Tsezos M.The mechanism of uranium biosorption by Rhizopus arrhizus /М. Tsezos, B. Volesky //Biotechnol. Bioeng. -1982. -Vol. 24. P. 385-401.

159. Vogt D. Phosphatverringerung in den Berliner Genwassern / D. Vogt, D. Jahn // Wasser und Boden. -1989. -Bd. 41, N 4. S. 231-234.

160. Warhurst A.W. Biotransformations catalyzet by the genus Rhodococcus / A.W. Warhurst, C.A. Fewson // Crit. Rev. Biochem. 1994. - Vol. 46. - P. 151-160.

161. Witzel K.-P. A numerical taxonomic comparison of oligocarbophilic and saprophytic bacterial isolated from Lake Plusse / K.-P. Witzel, K. Moaledy, HJ. Overbeck // J. Appl. Bacteriol. -1982. Bd. 95, H. 1/4. - S. 507-520.

162. Wood H.G. Biological aspects of inorganic poliphosphates / H.G. Wood, J.A. Clark // Ann. Rew. Microbiol. -1988. -Vol. 17. P. 235-260.

Информация о работе

Шостак, Елена Ивановна
кандидата биологических наук
Оренбург, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Характеристика ответных реакций актинобактерий рода Rhodococcus на воздействие факторов водной среды - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы