Характеристика метаболических, клеточных и иммунологических показателей препаратов пуповинной крови

Тороповский, Андрей Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика метаболических, клеточных и иммунологических показателей препаратов пуповинной крови
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Характеристика метаболических, клеточных и иммунологических показателей препаратов пуповинной крови"

На правах рукописи

003454169

ТОРОПОВСКИЙ Андрей Николаевич

ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТАБОЛИЧЕСКИХ, КЛЕТОЧНЫХ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ПРЕПАРАТОВ ПУПОВИННОЙ

КРОВИ

03.00.04 - биохимия 14.00.29 - гематология и переливание крови

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

О 5 ДЕК 2008

УФА - 2008

003454169

Работа выполнена в Государственном образовательном

учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научные руководители:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор

Кандидат медицинских наук

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Гильмиярова Фрида Насыровна Тюмина Ольга Владимировна

Шараев Петр Низамиевич Никуличева Валентина Ивановна

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «19» декабря 2008 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Автореферат разослан «_»_2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор Мирсаева Г.Х.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящий момент внимание трансплантологов все больше привлекает пуповинная кровь. Являясь альтернативой костному мозгу, она содержит высокую концентрацию гемопоэтических стволовых клеток. Впервые трансплантация гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови была произведена в 1988 году, и ежегодно доля таких пересадок среди всех трансплантаций гемопоэтических стволовых клеток увеличивается. Это связано с наличием ряда преимуществ гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови: образцы пуповинной крови, находящиеся в банках крови, уже тестированные и типированные по HLA-системе, могут быть сразу использованы для трансплантации; увеличивается вероятность нахождения редких HLA-типов трансплантатов для этнических меньшинств (Стрижаков А.Н. с соавт., 2003; Егоров В.В., с соавт.; Garritsen Н. et al, 2003; Hosono S. et al., 2004); значительно снижается риск передачи некоторых латентных инфекций, большая возможность использования не полностью совместимых по HLA-системе трансплантатов, чем при использовании костного мозга (Румянцев А.Г., Масчан А.А., 2003; Rocha V, et al., 2004).

Одним из продуктов, получаемых при лроцессинге пуповинной крови, является плазма пуповинной крови. В литературе имеются единичные сведения, характеризующие применение плазмы пуповинной крови в качестве лекарственного средства (Васильев В.В.,

2006). Однако в литературе отсутствуют данные, характеризующие метаболические свойства данного препарата.

Неизученной остается связь клеточных и метаболических показателей, характеристики жизнеспособности клеток пуповинной крови с групповой принадлежностью по системе ABO, хотя в крови взрослых людей выявлены определенные закономерности (Гильмиярова Ф.Н. с соавт., 2007; Зубова И.А., 2007; Карслян Л.С.,

2007).

В последнее время появились работы о генетически детерминированных особенностях иммунного ответа на патогенные агенты (Хаитов P.M., 2000, Зарецкая Ю.М., 2002). Согласно современным представлениям, система HLA не только играет роль при трансплантации, но также осуществляет такие важнейшие функции, как взаимодействие всех иммунокомпетентных клеток организма, распознавание своих и чужеродных, в том числе измененных собственных клеток, запуск и реализацию иммунного ответа по тому или иному типу (Steven G.E. Marsh et al., 2000). Кроме того, получены данные, характеризующие предрасположенность человека к определенным заболеваниям в зависимости от генов HLA-системы (Thomson et al, 2007).

В связи с тем, что HLA- типирование является

обязательным этапом в банкировании пуповинной крови, собранная в результате база данных станет источником для определения региональных популяционных особенностей распределения данных генов.

Все это делает актуальным подробное изучение показателей метаболизма препаратов плазмы пуповинной крови, определение количественных и качественных характеристик клеток препарата пуповинной крови, изучение на популяционном уровне особенностей генотипа HLA и выявление связи изучаемых параметров с генетически детерминированным признаком - группой крови по системе ABO.

Цель работы заключается в создании метаболического, иммунологического паспорта препаратов пуповинной крови с описанием клеточного состава.

Задачи исследования:

1. Изучить ключевые показатели белкового, углеводного,

липидного, электролитного обменов в препарате плазмы пуповинной крови.

2. Определить количественные и качественные характеристики

эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, уровень гемоглобина препарата пуповинной крови

3. Оценить жизнеспособность лейкоцитов и гемопоэтических

клеток (CD34+).

4. Определить факторы, влияющие на жизнеспособность

лейкоцитов, лимфоцитов и гемопоэтических клеток.

5. На популяционном уровне оценить характер распределения

генов HLA-системы (A-, B-, DRB1 локусы) у жителей Самарской области

6. Систематизировать и сопоставить метаболические и клеточные

показатели препаратов пуповинной крови с групповой принадлежностью по системе ABO.

Научная новизна

Впервые получена системная характеристика количественных и качественных показателей клеточного состава препарата пуповинной крови. Новым является блок данных о ключевых показателях бел нового, жирового, углеводного, электролитного обменов препарата плазмы пуповинной крови.

Показано, что такой генетически детерминированный фактор, как группа крови, не имеет корреляции с клеточными и метаболическими показателями препаратов пуповинной крови.

Установлено, что гемопоэтические клетки пуповинной крови (CD34+) наиболее защищены от влияния факторов внешней среды и

демонстрируют наибольшую жизнеспособность среди

остальных клеток пуповиной крови.

Впервые на популяционном уровне определен характер распределения генов HLA-системы у жителей Самарской области. Преобладают следующие гены: А*02 - 27,81%, А*03 - 15,18%, А*24 -10,6%; В*07 - 12,72%, В*35 - 11,39%, В*44 - 8,9%; DRB1*01 -14,19%, DRB1*15 - 14,06% и DRB1*13 - 13,44%. Установлено, что частота встречаемости гена В*27, являющегося маркером многих заболеваний соединительной ткани, составляет 5,37%Частотные характеристики популяции в отношении генов системы HLA позволят прогнозировать частоту встречаемости идентичных доноров для их направленного поиска, планировать вопросы, связанные с организацией банков крови и костного мозга, пересадкой органов и тканей, а также применять эти характеристики как контрольные при изучении ассоциаций с заболеваниями.

Научно-практическая значимость

На основании полученных новых данных, раскрывающих особенности метаболизма в пуповинной крови, разработан метаболический «паспорт» препарата плазмы пуповинной крови, который позволит определять стратегию клинического применения данного препарата.

Практически значимыми для различных отраслей медицины являются новые данные, характеризующие специфику структурно -функциональных особенностей клеточного состава препарата пуповинной крови.

Обнаруженные в результате исследования корреляционные зависимости показателей жизнеспособности клеток препарата пуповинной крови и факторов, влияющих на процесс обработки, позволяют скорректировать сбор и заготовку препаратов для повышения их качества.

Полученная характеристика HLA-генотипа жителей Самарской области позволяет сделать вывод о распространенности генетических маркеров предрасположенности к различным заболеваниям, вычисление типичных и редких HLA-аллелей имеет большое значение для планирования и развития регистра доноров стволовых клеток.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Для препарата плазмы пуповинной крови характерно повышенное содержание глюкозы и натрия и пониженная концентрация всех остальных изучаемых показателей метаболизма в сравнении с кровью новорожденных; отсутствие значимой связи между показателями метаболизма и групповой принадлежностью крови по системе ABO.

2. Особенности клеточного состава препарата пуповинной крови:

- характерно низкое абсолютное количество эритроцитов, гемоглобина и снижение гематокрита, повышенное содержание лейкоцитов и тромбоцитов;

- региональная специфика клеточного состава

- отсутствие группоспецифических особенностей количества и качества клеток;

3. Факторы, влияющие на жизнеспособность клеток пуповинной крови.

4. Характеристика генотипа HLA-системы жителей Самарской области.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ

Результаты диссертационного исследования используются в работе Государственного учреждения здравоохранения Самарской области «Клинический центр клеточных технологий», в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Результаты исследований были представлены на форуме "Лабораторная медицина: фундаментальные основы и современные технологии" (Самара, 2006); Ежегодной Всероссийской и международной научной конференции «Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении» (Москва, 2007); XII Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара,

2007); международной конференции «International Society for Cellular Therapy Annual Meeting» (Miami, Florida, 2008); Всероссийской конференции с международным участием «Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток» (Самара,

2008), совместном заседании кафедры общей, бионеорганической и биоорганической химии и кафедры фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой Самарского государственного медицинского университета (Самара, 2008).

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано 15 работ, в том числе 7 в изданиях, рекомендованных ВАК.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной

описанию объектов и методов исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

Диссертация изложена на 146 страницах, иллюстрирована 42 рисунками, содержит 48 таблиц. В работе использовано 217 источников, из них 63 отечественных и 154 зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования

Исследования проводились на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой СамГМУ и в ГУЗ СО «Клинический центр клеточных технологий».

Объектами изучения являлись препарат пуповинной крови и препарат плазмы пуповинной крови. Под препаратом пуповинной крови в настоящей работе понимается концентрат лейкоцитарных клеток пуповинной крови человека. Препарат плазмы пуповинной крови содержит вещества, применяемые в процессе обработки пуповинной крови (антикоагулянт CPDA - цитрат-фосфат-декстран-аденин и HES - гидроксиэтилкрахмал).

Всего обследовано 1231 препарат пуповинной крови и 177 препаратов плазмы пуповинной крови, проведено генотипирование 899 образцов пуповинной крови по А-локусу, 904 образцов по локусу В и 807-по DRB1.

Получение препаратов пуповинной крови

Пуповинную кровь получали при физиологических родах доношенных новорожденных. После допуска к донорству беременная женщина подписывала информированное согласие. Пуповинная кровь собиралась in utero в промежутке времени между вторым и третьим периодами родов после пережатия и отсечения пуповины. Часть пуповины, отходящая от плаценты, двукратно обрабатывалась спиртовым раствором йода, а затем 70% спиртом. Затем в пуповинную вену вводилась игла от системы с гемаконом, содержащим антикоагулянт (CPDA) в объеме 30 мл. Пуповинная кровь стекала в гемакон под действием силы тяжести. В целях предотвращения образования сгустков, содержимое гемакона тщательно перемешивалось, собирался весь объем крови, оставшийся в пуповине и плаценте. Сбор пуповинной крови осуществляли в течение 2-10 минут после родов. В банке пуповинной крови обработка проводилась, если объем полученного материала составлял более 40 мл, а количество лейкоцитов - более 9х 108.

Обработку крови осуществляли в стерильном боксе по методу Рубинштейна (Rubinstein Р et al., 1995). В кровь добавлялся

гидроксиэтилкрахмал (15% от массы крови). Разделение крови на фракции проводилось с помощью центрифуги CellSep фирмы Sanyo (Япония). После первого центрифугирования (428 оборотов/мин, 7 минут) на плазмоэкстракторе удалялась плазма (препарат плазмы пуповинной крови). Затем производилось второе центрифугирование (1220 оборотов/мин, 13 минут), после чего с использованием плазмоэкстрактора получали концентрат клеток объемом 20 мл (препарат пуповинной крови).

До обработки из гемакона брали аликвоту крови (1 мл) для выделения ДНК и переводили в криопробирку. Эритроциты и плазма в равном объеме по 2 мл смешивались в стеклянной пробирке и передавались в лабораторию для определения группы крови и резус-фактора. Из пакета с концентратом клеток собирали аликвоту объемом 0,5 мл для тестирования клеточного состава, подсчета количества CD34+ клеток и определения их жизнеспособности.

Группы крови по системе ABO определяли перекрестным способом и Цоликлонами методом прямой агглютинации на плоскости, резус - фактор - с помощью Цоликлона анти-D Супер.

Общий анализ крови. Для исследования клеточного состава препарата пуповинной крови использовался гематологический анализатор Pentra 60С+ французской фирмы АВХ с коммерческими реактивами этой же фирмы. Изучались следующие параметры: количество лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов, содержание гемоглобина, гематокрит, средний объем эритроцита, среднее содержание гемоглобина в эритроците, средняя концентрация гемоглобина в эритроците, ширина распределения эритроцитов по объему, средний объем тромбоцитов, количество лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов и базофилов.

Изучение показателей метаболизма в препарате плазмы пуповинной крови проводили на биохимическом анализаторе фирмы Olympus (Япония). Содержание общего белка определялось биуретовым методом по конечной точке по образованию окрашенного комплекса с ионами меди в щелочной среде. Содержание общего билирубина определялось колориметрическим методом по конечной точке. Концентрация креатинина определялась модифицированным методом Яффе. Концентрацию глюкозы определяли гексокиназным методом. Содержание мочевины определялось ферментативным, кинетическим методом. Содержание мочевой кислоты определялось фенантролиновым методом. Концентрацию холестерина определяли ферментативным методом по конечной точке. Концентрацию калия, натрия, хлоридов, кальция определяли потенциометрическим методом.

Исследование белковых фракций производилось методом

электрофореза на автоматическом анализаторе Olympus Hait (Япония).

Исследование количества и жизнеспособности CD34+ клеток

производилось на проточном цитофлюориметре BD FACS Canto. Для подсчета количества CD34+ клеток использовались моноклональные антитела CD34/45, меченые фикоэритрином и

флюоресцеинизотиоционагом фирмы Becton Dickinson (США). Для определения жизнеспособности — витальный флюоресцентный краситель 7AAD (7-амино-актиномицин D) той же фирмы. Определение производили одноплатформенным методом с применением пробирок TruCount (Becton Dickinson, США).

Использовались 50 мкл крови, применялась методика «без отмывки» - эритроциты лизировались в течение 10 минут.

Интерпретация показателей флюоресценции производилась по модифицированному нами протоколу ISCHAGE в программе FACS Diva 5.0 (рис. 1,2). _

Рис. 1. Диаграмма с гейтом Рис. 2. Диаграмма с гейтом С034+ лимфоцитов. жизнеспособных лейкоцитов.

НЬА-типнрование выполняли на генетическом уровне по трем локусам - А, В, DRBI. Для проведения ПЦР ДНК выделялась с использованием адсорбционного метода на колонках Nucleo-Spin фирмы Macherey-Nagel (Германия). Центрифугирование производили на центрифуге Hettich 32R (Германия).

Далее ДНК использовалась для проведения ПЦР с применением праймеров локусов А. В. DRB1 HLA-системы фирмы One Lambda (США). Амплификация 95 образцов ДНК проводилась одновременно в 96-луночном планшете (96-я лунка - негативный контроль) на амплификаторе ThermocyclerTl фирмы Biometra (Германия). Контроль амплификации проводился методом электрофореза с использованием готовых гелей фирмы «ДНК-технология» (Россия). Далее выполнялась гибридизация амплифицированной ДНК на микросферах фирмы One

Lambda (США). Затем образцы анализировались на аппарате Luminex 100™ (США).

Интерпретация результатов проводилась в программе HLA-Visual 2.0 фирмы OneLambda (США), результат получали в виде NMDP-кода со средним уровнем разрешения.

Статистическая обработка

Предварительные расчёты осуществлялись в программе MS EXCEL 2003 с последующим статистическим анализом в Пакете прикладных программ STATISTICA 6.0. По результатам проведённого предварительного статистического анализа признаков было установлено, что наиболее адекватным способом статистического анализа в данном случае является методология непараметрического анализа. В исследовании лишь некоторые признаки имели нормальное распределение, большинство же данных не имело нормального распределения или было представлено в процентах. Поэтому полученные результаты были описаны с использованием таких статистических характеристик, как медиана (Me) и квартили (Q1 - Q3); также приводятся среднее арифметическое (М), максимум и минимум, 95 % интервал. Одной из задач данного исследования являлось определение различий между изучаемыми показателями в зависимости от группы крови. Для выполнения этой задачи использовался графический метод (диаграммы размаха, отражающие положение медианы, максимумов и минимумов, интерквартильный размах), а также непараметрические методы - медианный тест и критерий Крускал-Уоллиса. Для определения зависимости жизнеспособности лейкоцитов от изучаемых параметров использовался критерий Спирмена (Гланц С., 1999).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В проведённом нами исследовании были изучены ключевые показатели белкового, углеводного, липидного, электролитного обменов в препарате плазмы пуповинной крови, определены клеточные показатели препарата пуповинной крови (количественные и качественные характеристики эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, уровень гемоглобина); установлены количество и жизнеспособность лейкоцитов и гемопоэтических клеток (CD34+) в пуповинной крови; определены факторы, влияющие на жизнеспособность клеток пуповинной крови; определено отсутствие влияния групповой принадлежности по системе ABO на изучаемые параметры.

В доступной литературе отсутствуют сведения, характеризующие метаболические показатели препарата плазмы пуповинной крови, поэтому в таблице 1 представлены обобщенные полученные нами данные показателей метаболизма в препарате пуповинной крови в сравнении со значениями показателей

метаболизма в крови новорожденных (Мазурин А.В.,

Воронцов И.М., 2001).

Таблица 1 - Показатели метаболизма препарата плазмы пуповшшон крови

Показатель 2 Оч 1> с Мах Ниж квартиль Верх квартиль Кровь новорожденно

Общий белок, г/л 27,75 27,228,31 27,50 16,60 39,20 25,20 30,50 4765

Альбумин, % 68.45 68,0868,82 68,60 58,80 73,70 67,20 70,20

альфа]-глобулин, % 2,68 2,622,73 2,70 1,70 4,40 2,50 2,90

Алъфа2-глобулин, % 5,08 4,985,17 5,00 2,60 7,20 4,70 5,40

Бета-глобулин, % 5,92 5,816,03 5,80 4,20 11,10 5,50 6,20

Гамма-глобулин, % 17,48 17,0817,88 17,70 5,50 22,60 16,60 19,00

Глюкоза, ммоль/л 43,89 42,645,18 43,81 18,30 64,78 39,02 49,36 1,74,7

Мочевая кислота, ммоль/л 0,122 0,120,128 0,115 0,054 0,259 0,097 0,146 0,140,29

Мочевина, ммоль/л 2,018 1,9062,129 1,940 0,810 7,050 1,570 2,270 2,54,5

Креатинин, ммоль/л 59,70 58,5560,86 59,05 40,10 84,00 53,90 65,10 35110

Холестерин, ммоль/л 0,646 0,6180,673 0,640 0,230 1,000 0,510 0,770 1,64,9

Триглицериды, ммоль/л 0,138 0,1250,151 0,120 0,009 0,510 0,090 0,170 0,20,86

Общий билирубин, мкмоль/л 12,00 11,4512,56 11,70 4,80 19,80 9,40 14,40 До 102,6

Железо, мкмоль/л 13,12 12,4813,76 13,10 4,13 28,20 10,55 15.20 5,019,0

Калий, ммоль/л 4,17 4,054,3 4,10 2,36 7,50 3,70 4,60 4,76,6

Натрий, ммоль/л 188,0 186,2189,8 189,0 122,0 211,6 182,9 195,0 135155

Хлор, ммоль/л 69,81 68,6770,96 69,55 55,50 95,00 64,80 73,40 96107

Анализируя полученные данные, мы обратили внимание на высокие цифры, характеризующие содержание глюкозы - 43,81 (39,02- 49,36) ммоль/л. Столь значительное повышение данного показателя связано с тем, что при получении препаратов пуповинной крови применяются углеводсодержащие вещества, необходимые в данном процессе: антикоагулянт CPDA (цитрат-фосфат-декстран-аденин) и гидроксиэтилкрахмал. Количество антикоагулянта составляет всегда 30 мл (антикоагулянт находится в гемаконе для сбора крови), процентное содержание его примеси непостоянно и зависит от объема собираемой крови в роддоме. Количество гидроксиэтилкрахмала составляет 15% от массы пуповинной крови с антикоагулянтом.

Повышенное содержание натрия - 189,0 (182,9-195,0) ммоль/л также связано с применением антикоагулянта, поскольку в нем использованы натриевые соли.

Также обращает на себя внимание снижение содержания остальных показателей метаболизма по отношению к крови новорожденных. Нами выявлено содержание общего белка, равное 27,50 (25,20-30,50) г/л, количество мочевой кислоты составило 0,115 (0,097-0,146) ммоль/л, концентрация мочевины - 1,940 (1,570-2,270) ммоль/л, холестерина - 0,640 (0,510-0,770) ммоль/л, триглицеридов - 0,120 (0,090-0,170) ммоль/л, общий билирубин также демонстрирует невысокие цифры - 11,70 (9,4014,40) мкмоль/л. Содержание микроэлементов, за исключением натрия, также снижено: железо - 13,10 (10,55-15,20) мкмоль/л, калий - 4,10 (3,70-4,60) ммоль/л, хлор - 69,55 (64,80-73,40) ммоль/л.

Как было отмечено выше, доноры проходили тщательный дородовый скрининг, пуповинная кровь собиралась только при нормально протекающих родах без всяких осложнений, поэтому можно считать, что пуповинная кровь собиралась исключительно у здоровых детей, рожденных от здоровых матерей. Снижение же всех основных показателей метаболизма можно объяснить разведением плазмы используемыми веществами, необходимыми в процессе обработки.

Изучая клеточные элементы препаратов пуповинной крови, мы получили следующие данные (таблица 2).

Таблица 2 - Клеточные характеристики препарата пуповинной

крови

Параметр М 95% Ме Мт Мах Е1иж. кварт иль Верх Квар тиль

Эритроциты, х10|2/л 1,95 1,852,05 1,88 0,22 5,07 1,55 2,22

Ширина распределения эритроцитов по объему, % 11,64 11,511,78 11,70 9,10 15,40 11,10 12,20

Средний объем эритроцита, фл 106,7 105,9 107,5 106,0 95,0 124,0 103,0 110,0

Содержание гемоглобина, г/л 67,2 63,770,7 64,0 8,0 184,0 52,0 77,0

Средняя концентрация гемоглобина в одном эритроците, г/дл 32,28 32,17 32,39 32,40 28,90 34,40 31,90 32,70

Среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, пг 34,45 34,19 34,71 34,20 31,30 40,30 33,20 35,60

Количество лейкоцитовх10" 15,54 15,16 15,93 14,10 0,60 56,90 10,80 18,50

Количество моноцитов* 10* 2,22 2,152,29 2,00 0,10 9,70 1,50 2,70

Количество лимфоцитов х10' 5,05 4,935,18 4,60 0,20 27,30 3,50 6,00

Количество тромбоцитов *10'/л 1124 10751174 1075 323 2355 918 1288

Средний объем тромбоцитов, фл 7,13 7,057,21 7,00 6,00 8,80 6,80 7,40

Мы провели сравнение основных клеточных показателей пуповинной крови до обработки и после, т.е. в препарате пуповинной крови (табл. 3).

Таблица 3 - Сравнительная характеристика клеточных показателен препарата пуповинной крови с клеточными

показателями пуповинной крови

Показатели До обработки В препарате

Эритроциты хЮ12/л 3,19 1,88

Гемоглобин, г/л 110,2 64,0

Гематокрит, % 33,43 21,04

Тромбоциты, хЮ9/л 252 1075

Лейкоциты, хЮ9/л 13,89 73,18

После обработки отмечается снижение количества эритроцитов (с 3,19хЮ,2/л до 1,88х10|2/л), гемоглобина (с 110,2 г/л до 64,0 г/л), гематокрита (с 33,43% до 21,40%), наблюдается значительное повышение содержания лейкоцитов (с 13,89*109/л до 73,18><109/л) и тромбоцитов (с 252x10% до 1075хЮ9/л).

В результате исследования количества гемопоэтических клеток, их жизнеспособности и жизнеспособность лейкоцитов нами выявлено, что наиболее защищенными от влияния факторов внешней среды при сборе, транспортировке и обработке, являются гемопоэтические (С034+) клетки. Их жизнеспособность по медиане составила 99,32% (98,64-99,60%). Лимфоциты демонстрируют наименьшую жизнеспособность - 90,4% (84,9-93,9). Лимфоциты как объект исследования жизнеспособности были выбраны, потому что по морфологии гемопоэтические (С034+) клетки неотличимы от лимфоцитов. Таким образом, мы установили, что нельзя судить о жизнеспособности гемопоэтических клеток исходя из количества живых лейкоцитов, и даже лимфоцитов.

Количество гемопоэтических жизнеспособных клеток в препарате пуповинной крови по результатам нашего исследования составило 3,20 (1,95-5,01) млн в одном препарате (табл. 4).

Таблица 4 - Характеристика гемопоэтических (С034+) клеток препарата пуповинной крови

Показатели М 95% Ме Мт Мах Ниж квартиль Верх квартиль

Количество гемопоэтических (СТО4+) клеток (х]06) 3,96 3,79-4,13 3,24 0,20 25,67 1,98 5,06

Количество жизнеспособных гемопоэтических (СР34+ 7ЛЛ1Э-) клеток (х106) 3,92 3,75-4,08 3,20 0,20 25,50 1,95 5,01

Жизнеспособность гемопоэтических (СИ34+ 7ААО-) клеток (%) 98,75 98,66-98,86 99,32 75,99 100,00 98,64 99,60

Жизнеспособность лейкоцитов, % 93,6 93,3-94,1 94,8 63,8 99,7 92,3 96,7

Жизнеспособность лимфоцитов, % 87,8 87,1-88,5 90,4 48,2 98,9 84,9 93,9

Мы провели сравнение значений клеточного состава препарата пуповинной крови с данными, полученными в исследовании Е.В. Бояковой, 2006 (табл. 5). Приведенные сведения показывают, что препарат пуповинной крови, полученный в Самарской области, имеет в среднем в два раза большую клеточность, что может быть связано с более высокими требованиями к качеству пуповинной крови, заготавливаемой в Самаре. Стандартами для банков пуповинной крови не установлены требования по содержанию клеточных элементов в препарате, существует лишь рекомендованное минимальное количество клеток на килограмм массы реципиента.

Таким образом, при совпадении по системе НЬА, препарат пуповинной крови Самарского региона имеет преимущество для клинического применения.

Таблица 5 - Сравнительные данные клеточных показателей

препарата пуповинной крови

Параметры Наши данные Результаты Е В Бояковой (2006)

Лейкоциты, 10л3/мкл § О | 3 о ■§■ 4 т < о 2 X Я О X о Количество СО 34+ клеток на мкл в концентрате 1 | Лейкоциты, 10л3/мкл Лимфоциты, 10л3/мкл V, ГП < О £ 3 о X о Количество СО 34+ клеток на мкл в , концентрате

Кол-во 1242 1241 942 1242 1013 1013 1012 618

Среднее 70,92 23,06 10,17 180,85 39,00 13,1 5.2 100

Медиана 63,90 20,89 9,19 146,70 41,06 14,27 5,58 78

Минимум 8,30 1,57 0,10 12,64 8,00 2.6 0.6 9

Максимум 239,00 122,36 42,22 1199,48 106,00 43,7 24,6 714

Ст отклон 31,06 10,29 4,94 133,65 15,86 6,38 2,71 79

Ст ошибка 0,88 0,29 0,16 3.79 0,48 0,19 0,08 3

При выявлении причин, влияющих на жизнеспособность клеток пуповинной крови, нами было изучено влияние нескольких факторов (см. табл. 6)

Таблица 6 - Коэффициенты корреляции жизнеспособности лейкоцитов, лимфоцитов и изучаемых факторов

Показатель Лейкоциты Лимфоциты

Коэф коррел р-уровень Коэф коррел р-уровень

Количество беременностей 0,04 0,38 0,01 0,76

Возраст матери 0,11 0,01 -0,02 0,59

Возраст отца 0,09 0.05 -0.03 0,46

Масса крови -0,14 0,00 033 0,00

Масса новорожденною -0,09 0,03 0,08 0,05

Рост новорожденного -0,07 0,07 0,08 0,04

Срок гестации -0,13 0,00 0,10 0,01

Количество лейкоцитов -0,08 0,05 0,12 0,00

Количество лимфоцитов -0,05 0,18 -0,05 0,23

Время от взятия до обработки крови -0,44 0,00 -0,14 0,00

Из этих показателей только масса крови и время от взятия до обработки показали значимое влияние на жизнеспособность клеток, а именно: обнаружена слабая отрицательная корреляционная связь между жизнеспособностью лейкоцитов и временем от взятия до обработки крови (г=-0,44 р<0,01, см. рис. 3); имеется слабая положительная корреляционная связь между жизнеспособностью лимфоцитов и массой крови (г=0,33 р<0,01, см. рис. 4).

Рис. 2. Зависимость жизнеспособности лейкоцитов пуповинной крови от времени от взятия до обработки крови

Рис. 3. Зависимость жизнеспособности лимфоцитов пуповинной крови

от массы крови

Таким образом, для оптимизации процесса обработки в банке пуповинной крови можно рекомендовать набирать максимальное количество пуповинной крови в роддоме и максимально быстро начинать обработку крови (как видно из рисунка 5, при интервале времени от взятия крови до обработки, равном 10 часам, жизнеспособность лейкоцитов снижается на 5%).

В соответствии с задачей исследования мы провели статистический анализ для выявления связи групповой принадлежности препарата по системе ABO с изучаемыми параметрами, результаты представлены в таблице 7.

Таблица 7 - Уровни значимости непараметрических критериев для проверки гипотезы о связи изучаемых параметров с групповой

принадлежностью препарата по системе ABO

Изучаемый показатель Уровень значимости (р) для критериев

Крускал-Уоллиса Медианный тест

Общий белок 0,8704 0,9799

Альбумин 0,2457 0,2375

Альфа 1-глобулин 0,4076 0,2403

Альфа2-глобулии 0,1442 0,1244

Вота-глобулин 0,0930 0,0652

Гамма-глобулин 0,4639 0,6373

Глюкоза 0,4911 0,6230

Мочевина 0,8866 0,5057

Мочевая кислота 0,9244 0,6270

Креатинин 0.8977 0,4233

Общий билирубин 0,8445 0,8760

Холестерин 0,4566 0,5553

Триглицериды 0,9226 0,6784

Калий 0,3640 0,0970

Хлор 0,5580 0,4207

Железо 0,6968 0,5263

Нагрнй 0,3454 0,4898

Эритроциты 0,0890 0,7420

Гемоглобин 0,0760 0,3400

Гематокрит 0,4460 0,1202

Средний объем эритроцита 0,3321 0,1213

Среднее содержание гемоглобина в эритроците 0,1176 0,0754

Средняя концентрация гемоглобина в эритроците 0,1754 0,0550

Ширина распределения эритроцитов 0,7683 0,8555

Тромбоциты 0,7591 0,1905

Средний объем тромбоцита 0,7820 0,9679

Лейкоциты 0,5429 0,6938

Лимфоциты 0,7143 0,5511

Моноциты 0,3870 0,9893

СЭ34+ клетки 0,3816 0,2498

С034+ 7ААО- клетки 0,3945 0,2016

Жизнеспособность СШ4+ клеток 0,3270 0,1358

Таким образом, статистический анализ полученных данных позволяет сделать вывод о том, что значимой связи групповой принадлежности пуповинной крови по системе АВО с клеточными и метаболическими параметрами препаратов пуповинной крови в нашем исследовании не выявлено.

При определении характера распределения генов HLA-системы у жителей Самарской области получена следующая картина. Количество гомозигот по локусу А составило 136 (15,13%), по локусу В - 60 (6,64%), по локусу DRB1 - 83 (10,29%). Всего нам встретилось 17 аллельных вариантов А-локуса НЬАсистемы. Наиболее часто встречающиеся гены А локуса: А*02 - 500 случаев (27,81%), А*03 -273 (15,18%) и А*24 - 191 (10,6%). Самыми редкими оказались гены А*6 - 12 случаев (0,67%), А*69 - 4 (0,32%) и А*74 - 1 случай (0,06%). Количество неоднозначных типирований (ambiguity) по локусу А составило: А*01/03 - 20 случаев (1,11%); А*74/32 - 2 случая (0,11%). При анализе данных обращают на себя внимание четыре локуса (А*02, А*03, А*24 и А*01), составляющие совместно 63,9%.

Количество гомозигот по В-локусу составило: 60 (6,64%). Всего у жителей Самарской области установлено 29 аллельных вариантов данного локуса.

Выявлены наиболее часто встречающиеся гены этого локуса: В*07 - 230 случаев (12,72%), В*35 - 206 (11,39%) и В*44 - 161 (8,9%). Реже всего встречались следующие гены: В*47, В*54 и В*53 - каждый по 1 случаю (по 0,06%). Частота встречаемости гена В*27, являющегося маркером многих заболеваний соединительной ткани, составила 5,37% (97 случаев). По частоте этот аллель занимает восьмое место. В отличие от локуса А, количество аллелей, частота которых превышает 10%, составило всего два (В*07 и В*35). Сумма частот их встречаемости равна 24,12%. Количество неоднозначных типирований в сумме равно 19, что составляет 1,05% от всех типирований локуса В.

Локус DRB1 демонстрирует наименьшую полиморфность. Количество аллельных вариантов составило 13. При типировании по DRB1 локусу ни разу не встретилось ни одного неоднозначного результата. В данном локусе самыми распространенными оказались гены DRB1*01 - 229 случаев (14,19%), DRB1*15 - 227 (14,06%) и DRB1*13 - 217 (13,44%). Меньше всего представлены следующие гены: DRB1*12 - 33 случая (2,04%), DRB1*10 - 27 (1,67%) и DRB1*09 - 24 (1,49%). Количество гомозигот этого локуса составило 83 (10,3%). Число аллелей, имеющих частоту встречаемости выше 10% равно шести, их совместная частота составила 77,3%.

ВЫВОДЫ

1. Изучены ключевые показатели белкового, углеводного, липидного, электролитного обменов в препарате плазмы пуповинной крови: характерно высокое содержание глюкозы -43,81 (39,02-49,36) ммоль/л и натрия - 189,0 (182,9-195,0) ммоль/л, более низкий уровень всех остальных изученных показателей метаболизма (общего белка, мочевой кислоты, мочевины, креатинина, холестерина, триглицеридов, общего билирубина, железа, калия, хлора) по отношению к референтным значениям сыворотки новорожденного.

2. Получены следующие показатели клеточного состава препаратов пуповинной крови: эритроциты: 1,88 (1,55 - 2,22) х1012/л, лейкоциты: 73,2 (46,25-86,1) *109/л, тромбоциты: 1075 (918-1288) хЮ9/л, уровень гемоглобина составил 64,0 (52,077,0) г/л, абсолютное количество лейкоцитов с учетом объема препарата: 14,10(10,80-18,50) хЮ8

3. Количество гемопоэтических (CD34+) клеток в препарате пуповинной крови составляет по медиане 3,24х] О6 (интерквартильный размах от 1,98x106 до 5,06х 10б), гемопоэтические клетки демонстрируют высокую жизнеспособность - 99,32% по медиане (98,64 - 99,60).

4. Обнаружена слабая отрицательная корреляционная связь между жизнеспособностью лейкоцитов и временем от взятия до обработки крови(г = -0,44; р<0,01); имеется слабая положительная корреляционная связь между жизнеспособностью лимфоцитов и массой крови(г = 0,33; р<0,01).

5. Впервые на популяционном уровне получена характеристика HLA-генотипа жителей Самарской области. Преобладают следующие гены: А*02 - 27,81%, А*03 - 15,18%, А*24 -10,6%; В*07 - 12,72%, В*35 - 11,39%, В*44 - 8,9%; DRB1*01 -14,19%, DRB1*15 - 14,06% и DRB1*13 - 13,44%.

6. При систематизации и сопоставлении полученных данных не выявлено статистически значимой специфики метаболизма, клеточных показателей, показателей жизнеспособности клеток в препаратах пуповинной крови и препаратах плазмы пуповинной крови в зависимости от групповой принадлежности по системе ABO.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для получения оптимального количества жизнеспособных клеток в препарате пуповинной крови необходимо набирать максимально возможное количество пуповинной крови в

роддоме и начинать ее обработку в течение 10

часов после сбора.

2. Применять данные, характеризующие распределение генов HLA-системы в Самарской области для создания общероссийского регистра доноров костного мозга и пуповинной крови, учитывать особенности Самарского региона при формировании запроса на подбор донора, а также для изучения наследственных HLA-ассоциированных заболеваний.

3. Использовать полученные значения показателей содержания клеток в препарате пуповинной крови при планировании клинического применения препарата пуповинной крови.

4. Для определения групповой принадлежности препаратов пуповинной крови по системе ABO рекомендуется использовать способ определения с помощью Цоликлонов. В связи с незрелостью системы группоспецифичных антигенов и антител применение перекрестного способа определения группы крови нецелесообразно.

5. Для оценки качества препаратов пуповинной крови определять жизнеспособность гемопоэтических (CD34+) клеток.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Тюмина, О. В. Анализ лабораторного скрининга при банкированни пуповинной крови [Текст] / О. В. Тюмина, Г. И. Гусарова, В. В. Павлов, М. Н. Жарков, С. Е. Волчков, А. Н. Тороповский, Н. Н. Краснова, И. А. Нижегородцева, В. А. Россиев, В. Г.Савченко // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. - 2006. - № 1. - С. 72-73.

2. Тюмина, О. В. Высокие технологии в практике здравоохранения Самарской области [Текст] / О. В. Тюмина, С. Е. Волчков, А. Н. Тороповский // Вестник Самар. гос. ун-та. Естественнонауч. сер. - 2006. - № 6/2 (46). - С. 5-18.

3. Тюмина, О. В. Внедрение оптимальных методов обработки и тестирования пуповинной крови [Текст] / О. В. Тюмина, А. Н. Тороповский, С. Е. Волчков, Л. М. Трусова // Вестник Самар. гос. ун-та. Естественнонауч. сер. - 2006. - № 6/2. - С. 18-25.

4. Тороповский, А. Н. Выявляемость инфекционных агентов у женщин-доноров пуповинной кровн в Самарской области [Текст] / А. Н. Тороповский, О. В. Тюмина, С. Е. Волчков, Л. М. Трусова // Изв. Самар. науч. центра Рос. академии наук.

Спец вып. «XII конгресс «Экология и здоровье

человека». - 2007. - Т. 1. - С. 87-89.

5. Korymasov, Е. Randomized double blind placebo-controlled research of efficiency of treatment patients with lower limb arteriosclerosis obliterans by autologous transplantation of bone marrow progenitor cells [Text] / E. Korymasov, O. Tyumina, V. Rossiev, A. Kazantscev, S. Volchkov, A. Toropovskiy // Cytotherapy. - 2008. - Vol. 10. - P. 236.

6. Toropovskiy, A. The influence of different factors on cord blood cells viability [Text] / A. Toropovskiy, O. Tyumina, L. Trusova, S. Volchkov, P. Boriskin // Cytotherapy. - 2008. - Vol. 10. - P. 158.

7. Тороповский, A.H. Молекулярно-генетические методы в практике здравоохранения [Текст] / А. Н. Тороповский, Ю.В. Мякишева, О.В. Сазонова, О.А. Кизирова, Ю.В. Первова, Т.А. Колесова, Г.М. Баишева, И.О. Павлова, О.М. Родькина,

A.А. Мингачева // Клиническая лабораторная диагностика -2008 -№ 9 С. 41

8. Мякишева, Ю. Влияние силисторонга на функциональную активность пейсмекеров мозга [Текст] / Ю. В. Мякишева, О. А. Кизирова, О. JI. Карташова, Е. Н. Глазкова, Г. М. Баишева, Н.

B. Спиридонова, И. Ф. Сидорова, Ю. В. Первова, С. Р. Нуретдинова, И. А. Зубова, JL С. Карслян, И. О. Павлова, А. Н. Тороповский // Здоровье и образование в XXI веке : материалы VII междунар. науч.-практ. конф., 23-26 нояб. 2006 г. - М., 2006.-С. 356-357.

9. Тюмина, О. В. Работа банка пуповинной крови в Самарской области [Текст] / О. В. Тюмина, С. Е. Волчков, JI. М. Трусова,

A. Н. Тороповский, П. В. Борискин // Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении : материалы ежегод. Всерос. и междунар. науч. конф., 30-31 мая 2007 г. / РАМН; Рос. гос. мед. ун-т. - М., 2007. - С. 40.

10. Тюмина, О. В. Организация банка пуповинной крови в Самарской области [Текст] / О. В. Тюмина, С. Е. Волчков, JI. М. Трусова, П. В. Борискин, А. Н. Тороповский // Вопросы управления качеством медицинской помощи. - 2007. № 1-2 (7-8).-С. 57-61

11. Тороповский, А. Н. Жизнеспособность клеток пуповинной крови при долгосрочном криохранении [Текст] / А. Н. Тороповский, О. В. Тюмина, С. Е. Волчков, Л. М. Трусова, П.

B. Борискин // Актуальные вопросы последипломного образования и здравоохранения : материалы межрегион, науч.-практ. конф., посвящ. 25-летию Ин-та последипломного образования Самар. гос. мед. ун-та. - Самара, 2008. - С. 216217.

12. Гусякова, О. А. Влияние пероксида водорода на процессы межмолекулярного взаимодействия, лежащие в основе лигандных технологий лабораторной диагностики [Текст] / О. А. Гусякова, О. А. Кизирова, А. А. Мингачева, А. Н. Тороповский, Т. Ю. Евсеева, О. М. Родькина // Актуальные вопросы последипломного образования и здравоохранения : материалы межрегион, науч.-практ. конф., посвящ. 25-летию Ин-та последипломного образования Самар. гос. мед. ун-та. -Самара, 2008. - С. 206-207.

13. Тороповский, А. Н. Оценка качества клеток пуповинной крови при обработке и криохранении [Текст] / А. Н. Тороповский, О. В. Тюмина, С. Е. Волчков, JI. М. Трусова, П. В. Борискин // Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток : материалы Всерос. конф. с междунар. участием, 1820 июня 2008 г. - Самара, 2008. - С. 226-228.

14. Корымасов, Е. А. Исследование эффективности трансплантации аутологичных прогенеторных клеток костного мозга больным с облитерирующим атеросклерозом артерий нижних конечностей [Текст] / Е. А. Корымасов, О. В. Тюмина, А. М. Аюпов, Г. В. Михеев, В. А. Россиев, А. В. Казанцев, С. Е. Волчков, А. Н. Тороповский // Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток : материалы Всерос. конф. с междунар. участием, 18-20 июня 2008 г. -Самара, 2008. - С. 189-191.

15. Гильмиярова, Ф. Н. Особенности метаболического и клеточного состава крови, ассоциированные с групповой принадлежностью в системе ABO, в норме и патологии [Текст] / Ф. Н. Гильмиярова, Ю. В. Мякишева, О. А. Кизирова, О. А. Гусякова, В. М. Радомская, О. В. Сазонова, И. А. Зубова, И. Ф. Сидорова, И. О. Павлова, Н. В. Непомнящая, О. М. Родькина, А. А. Мингачева, Ю. Д. Машкова, Т. А. Колесова, Е. Е. Воронцова, Т. Ю. Евсеева, А. Н. Тороповский, Е. А. Рыскина, Е. С. Липатова, М. П. Коблова, Р. Р. Сагдеев, Ж. Ж. Икласова // Астрахан. мед. журн. - 2008. - Т. 3, № 3 (прилож.). - С.76-79.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Тороповский, Андрей Николаевич

ВВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. Обзор литературы.

1.1 Пуповинная кровь — альтернативный источник стволовых клеток

1.2. Генетически детерминированные антигены клеток человека и их связь с различными параметрами крови.

1.3. Современное представление о системе HLA.

ГЛАВА II. Материалы и методы исследования.

2.1. Объект исследования.

2.2. Методы исследования.

2.3. Статистическая обработка результатов исследования.

ГЛАВА III. Характеристика метаболических показателей препарата плазмы пуповинной крови с различной групповой принадлежностью по системе АВО.

ГЛАВА IV. Количественная характеристика клеточных элементов в препарате пуповинной крови с различной групповой принадлежностью по системе АВО.

4.1 Параметры эритроцитов.

4.2 Параметры лейкоцитов.

4.3 Параметры тромбоцитов.

4.4 Количество и выживаемость лейкоцитов и гемопоэтических (CD34+ клеток).

ГЛАВА V. Популяционная характеристика HLA-системы жителей самарской области.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика метаболических, клеточных и иммунологических показателей препаратов пуповинной крови"

В настоящий момент внимание трансплантологов все больше привлекает пуповинная кровь. Являясь альтернативой костному мозгу, она содержит высокую концентрацию гемопоэтических стволовых клеток. Впервые трансплантация гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови была произведена в 1988 году, и ежегодно доля таких пересадок среди всех трансплантаций гемопоэтических стволовых клеток увеличивается. Это связано с наличием ряда преимуществ гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови: образцы пуповинной крови, находящиеся в банках крови, уже тестированные и типированные по HLA-системе, могут быть сразу использованы для трансплантации; увеличивается вероятность нахождения редких HLA-типов трансплантатов для этнических меньшинств (Стрижаков А.Н. с соавт., 2003; Егоров В.В., с соавт.; Garritsen Н. et al, 2003; Hosono S. et al., 2004); значительно снижается риск передачи некоторых латентных инфекций, большая возможность использования не полностью совместимых по HLA-системе трансплантатов, чем при использовании костного мозга (Румянцев А.Г., Масчан А.А., 2003; Rocha V, et al., 2004).

Одним из продуктов, получаемых при процессинге пуповинной крови, является плазма пуповинной крови. В литературе имеются единичные сведения, характеризующие применение плазмы пуповинной крови в качестве лекарственного средства (Васильев В.В., 2006). Однако в литературе отсутствуют данные, характеризующие метаболические свойства данного препарата.

Неизученной остается связь клеточных и метаболических показателей, характеристики жизнеспособности клеток пуповинной крови с групповой принадлежностью по системе АВ0, хотя в крови взрослых людей выявлены определенные закономерности (Гильмиярова Ф.Н. с соавт., 2007; Зубова И.А., 2007; Карслян Л.С., 2007).

В связи с тем, что HLA-типирование является обязательным этапом в банкировании пуповинной крови, собранная в результате база данных станет источником для определения региональных популяционных особенностей распределения данных генов.

Цель настоящего исследования заключается в создании метаболического, иммунологического паспорта препаратов пуповинной крови с описанием клеточного состава. Задачи:

1. Изучить ключевые показатели белкового, углеводного, липидного, электролитного обменов в препарате плазмы пуповинной крови.

2. Определить количественные и качественные характеристики эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, уровень гемоглобина препарата пуповинной крови

3. Оценить жизнеспособность лейкоцитов и гемопоэтических клеток (CD34+).

4. Определить факторы, влияющие на жизнеспособность лейкоцитов, лимфоцитов и гемопоэтических клеток.

5. На популяционном уровне оценить характер распределения генов HLA-системы (А-, В-, DRB1 локусы) у жителей Самарской области

6. Систематизировать и сопоставить метаболические и клеточные показатели препаратов пуповинной крови с групповой принадлежностью по системе АВО.

Научная новизна

Впервые получена системная характеристика количественных и качественных показателей клеточного состава препарата пуповинной крови. Новым является блок данных о ключевых показателях белкового, жирового, углеводного, электролитного обменов препарата плазмы пуповинной крови.

Установлено, что гемопоэтические клетки пуповинной крови (CD34+) наиболее защищены от влияния факторов внешней среды и демонстрируют наибольшую жизнеспособность среди остальных клеток пуповиной крови.

Впервые на популяционном уровне определен характер распределения генов HLA-системы у жителей Самарской области. Преобладают следующие гены: А*02 - 27,81%, А*03 - 15,18%, А*24 - 10,6%; В*07 - 12,72%, В*35 -11,39%, В*44 - 8,9%; DRB1*01 - 14,19%, DRB1*15 - 14,06% и DRB1*13 -13,44%. Установлено, что частота встречаемости гена В*27, являющегося маркером многих заболеваний соединительной ткани, составляет 5,37%Частотные характеристики популяции в отношении генов системы HLA позволят прогнозировать частоту встречаемости идентичных доноров для их направленного поиска, планировать вопросы, связанные с организацией банков крови и костного мозга, пересадкой органов и тканей, а также применять эти характеристики как контрольные при изучении ассоциаций с заболеваниями.

Научно-практическая значимость

Практически значимыми для различных отраслей медицины являются новые данные, характеризующие специфику структурно - функциональных особенностей клеточного состава препарата пуповинной крови.

Основные положения, выносимые на защиту:

2. Особенности клеточного состава препарата пуповинной крови:

- региональная специфика клеточного состава

- отсутствие группоспецифических особенностей содержания изученных показателей клеточности;

3. Факторы, влияющие на жизнеспособность клеток пуповинной крови.

4. Характеристика генотипа HLA-системы жителей Самарской области.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены на форуме "Лабораторная медицина: фундаментальные основы и современные технологии" (Самара, 2006); Ежегодной Всероссийской и международной научной конференции «Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении» (Москва, 2007); XII Всероссийском конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2007); международной конференции «International Society for Cellular Therapy Annual Meeting» (Miami, Florida, 2008);Всероссийской конференции с международным участием «Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей и клеток» (Самара, 2008), совместном заседании кафедры общей, бионеорганической и биоорганической химии и кафедры фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой Самарского государственного медицинского университета (Самара, 2008).

Внедрение результатов в практику. Результаты диссертационного исследования используются в работе Государственного учреждения здравоохранения Самарской области «Клинический центр клеточных технологий», в учебном процессе на кафедре фундаментальной и клинической биохимии с лабораторной диагностикой Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 15 работ, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию объектов и методов исследования, трех глав собственных данных, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Тороповский, Андрей Николаевич

Результаты исследования, полученные Зубовой И.А. (Зубова И.А., 2007), демонстрируют особенности клеточного состава крови в зависимости от групповой принадлежности по системе АВО.

У мужчин с O(I) группой крови обнаружена тенденция к снижению количества эритроцитов и гемоглобина в единице объема крови, эритроциты при этом имеют самый низкий показатель анизоцитоза; отмечается наименьшее относительное содержание палочкоядерных форм лейкоцитов. Наибольшими оказались относительное содержание базофилов и лимфоцитов, выявленные при подсчете лейкоцитарных формул. У женщин с O(I) группой крови отмечается наименьшее количество лейкоцитов, а также тенденция к относительной и абсолютной лимфопении. Наибольшими показателями являются средний объем эритроцитов и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, относительное содержание нейтрофилов, средних клеток за счет базофилов и эозинофилов (достоверно), количество тромбоцитов.

Мужчины с А(П) группой крови имеют наименьшее значение следующих параметров: гематокрит, средний объем эритроцитов, среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, относительное количество нейтрофилов за счет сегментоядерных форм лейкоцитов, количество тромбоцитов. Наибольшее значение при этом наблюдается при подсчете относительного и абсолютного содержания лимфоцитов и средних клеток. У лиц женского пола с А(П) группой крови наименьшими являются показатель анизоцитоза и относительного содержания палочкоядерных форм лейкоцитов; достоверно снижены средний объем тромбоцитов, показатели ширины распределения тромбоцитов по объему и соотношения крупных тромбоцитов (тенденция к появлению мелких тромбоцитов). Обнаружено наибольшее содержание эритроцитов и гемоглобина в единице объема крови, лейкоцитов за счет абсолютного количества нейтрофилов.

У мужчин с В(Ш) группой крови обнаружены наименьшие значения относительного содержания лимфоцитов и средних клеток, достоверно снижена скорость оседания эритроцитов. Наибольшими оказались следующие параметры: количество эритроцитов и их средний объем, гематокрит, количество лейкоцитов за счет абсолютного и относительного содержания нейтрофилов (палочкоядерных и сегментоядерных), эозинофилов, средний объем тромбоцитов, показатели ширины распределения тромбоцитов по объему и соотношения крупных тромбоцитов; достоверно увеличены содержание гемоглобина и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, средняя концентрация гемоглобина в одном эритроците, относительное содержание моноцитов. Лица женского пола с B(III) группой крови имеют наименьшие показатели эритроцитов и их среднего объема, гематокрита, гемоглобина и среднего содержания гемоглобина в одном эритроците, абсолютного и относительного содержания средних клеток за счет эозинофилов и моноцитов, а также количества тромбоцитов. Наибольшие значения при этом выявлены для значения анизоцитоза эритроцитов и средней концентрации гемоглобина в одном эритроците, относительного содержания сегментоядерных форм нейтрофилов; достоверно увеличен средний объем тромбоцитов и показатель соотношения крупных тромбоцитов (тенденция к появлению крупных тромбоцитов).

У мужчин с AB(IV) группой крови наименьшими оказались следующие параметры: количество лейкоцитов за счет снижения абсолютного содержания нейтрофилов, лимфоцитов и средних клеток, относительного содержания эозинофилов, базофилов и моноцитов; средний объем тромбоцитов, показатели ширины распределения тромбоцитов по объему и соотношения крупных тромбоцитов; достоверно снижен показатель средней концентрации гемоглобина в одном эритроците. Наибольшими при этом являются показатели анизоцитоза и скорости оседания эритроцитов, количество тромбоцитов. Женщины с AB(IV) группой крови имеют наименьшее значение средней концентрации гемоглобина в одном эритроците, базофилов, абсолютного и относительного содержания нейтрофилов за счет сегментоядерных форм лейкоцитов, скорости оседания эритроцитов. Наибольшие показатели при этом отмечаются для гематокрита, палочкоядерных форм нейтрофилов, абсолютного и относительного содержания лимфоцитов, ширины распределения тромбоцитов по объему; достоверно увеличено относительное содержание моноцитов.

Таким образом, данные литературы свидетельствуют о связи различных показателей крови (метаболических, клеточных) с группой крови по системе АВО, что предрасположенность к развитию ряда болезней может зависеть от принадлежности к определенной группе крови и наличия или отсутствия резус-фактора. Вместе с тем, различия в адаптивных возможностях лиц с разными группами крови системы АВО не носят фатального характера, а доля влияния групповой принадлежности крови на частоту их связи с болезнями составляет от 10 до 30% от влияния всех факторов (Айала Ф., Кайгер Д., 1988; Потемкин В.В. с соавт., 2006). Соотносительная роль генетических и средовых факторов неоднозначна не только для развития каждой болезни, но и для заболевания каждого человека, обладающего уникальным полиморфизмом эритроцитарных, лейкоцитарных и других систем антигенов. Использование комплексного подхода к предрасположенности болезней с учетом генетического фона и влияния факторов внешней среды позволит разработать адекватную стратегию и тактику профилактических мероприятий полигенных, мультифакториальных заболеваний человека и сформировать группы клинического риска.

Что касается препаратов пуповинной крови и препаратов плазмы пуповинной крови, то к настоящему времени в доступной литературе отсутствуют сведения о связи каких-либо метаболических и клеточных показателей с групповой принадлежностью этих препаратов по системе АВО.

1.3. Современное представление о системе HLA

Около ста лет назад биологи, интересующиеся раком, начали изучать опухоли, которые иногда спонтанно возникают у домашних мышей. Так как каждая опухоль погибала со смертью мыши, в которой она росла, исследователи стали думать о трансплантации опухолей от больной к здоровой мыши. Таким образом, они надеялись продлить свои исследования, ограниченные продолжительностью жизни одной мыши. В большинстве этих экспериментов пересаженные опухоли не росли у здоровых мышей-реципиентов, а отторгались в результате иммунного ответа. Однако при использовании инбредных линий мышей успешная трансплантация и размножение опухолей стали возможными. Исследователи предположили, что приживление и отторжение ростков опухоли контролируют один или более генетических факторов.

Эти исследования породили важный вопрос, связаны ли наблюдаемые эффекты только с опухолями, или же все это присуще и нормальным тканям? Позже было показано, что пересаженные здоровые ткани подвергаются таким же типам отторжения, как и трансплантируемые опухоли. Дальнейшие исследования феномена стали возможными благодаря выведению высоко инбредных линий мышей, полностью гомогенных генетически. Было показано, что трансплантации тканей внутри одной инбредной линии происходили успешно, в то время как трансплантаты между различными линиями мышей отторгались. В дальнейшем проводились эксперименты по скрещиванию различных линий для определения количества генетических локусов, которое способствует отторжению тканей. Был получен ответ, что один локус обуславливал очень сильный эффект, в то время как 10-20 других локусов также вносили свой, меньший вклад. Группа этих генетических факторов была названа локусами гистосовместимости, из-за того, что она детерминируют тканевую совместимость. Доминантный локус назван Главным Комплексом Гистосовместимости или МНС, а остальные локусы названы Минорным

Комплексом Гистосовместимости.

Было показано, что гены главного комплекса гистосовместимости, ответственные за отторжение тканевого ростка, кодируют полиморфные гликопротеины на поверхности клетки, различающиеся у разных линий мышей. Когда мыши одной линии получали трансплантат или иммунизировались клетками от второй линии, они начинали производить аллоантитела против гликопротеинов МНС этой линии. В таком серологическом контексте МНС-гликопротеины проявляли себя как аллоантигены и были названы главными антигенами гистосовместимости. Систематический анализ аллоантител, генерируемых при иммунизации с привлечением различных комбинаций линий мышей, позволил серологам установить несколько независимых систем аллоантигенов мышей. Среди них комплекс главных антигенов гистосовместимости был второй обнаруженной системой после МНС и назван он Н-2 (histocompatibility antigen 2) (Klein J., 1975).

Использование сходных серологических методов позволило успешно установить главные антигены гистосовместимости у человека. Среди источников человеческих аллоантител были пациенты, подвергшиеся нескольким гемотрансфузиям, добровольцы, преднамеренно иммунизированные, и многократно рожавшие женщины, которые произвели антитела против отцовских антигенов, экспрессируемых внутриматочно их детьми. При изучении людей и мышей были установлены 2 различных класса антигенов гистосовместимости: антигены МНС I класса и антигены МНС II класса. МНС антигены I класса присутствуют на большинстве типов клеток млекопитающих, тогда как антигены МНС II класса привязаны к небольшому количеству типов клеток, преимущественно к трем типам: В-лимфоцитам, макрофагам и дендритным клеткам.

Изучение антигенов гистосовместимости почти полностью сконцентрировалось на клетках крови. Из-за того, что антигены I класса экспрессируются на большинстве клеток крови мышей, а антигены II класса экспрессирует гораздо меньше клеток, первые были открыты гораздо раньше последних. Антигены I класса могут быть хорошо изучены при использовании относительно больших популяций клеток, тогда как идентификация и анализ антигенов II класса требует методов выделения небольшого количества отдельных клеточных типов, обычно В-лимфоцитов. У мышей, как эритроциты, так и лейкоциты экспрессируют антигены I класса. Т.к. эритроциты — это самые многочисленные клетки селезенки и крови, Н-2 антигены в большинстве случаев изучались при помощи серологических методов, базирующихся на эритроцитах. С другой стороны, человеческие эритроциты лишены антигенов I класса, которые обязательно экспрессируются на лейкоцитах. По этой причине МНС антигены I класса человека стали называть Антигенами Лейкоцитов Человека (HLA). Названием HLA в настоящее время обозначаются оба класса аллоантигенов (I и II). Для краткости, название антигенов или молекул HLA класса I может выглядеть как «антигены класса I» или «молекулы класса I», то же самое и для антигенов/молекул HLA класса II. (Hackel Е. and Mallory D., 1982).

Структурные различия молекул I и II классов, экспрессируемых донорами и реципиентами - это главные стимулы отторжения и других аллореактивных иммунных ответов при клинических трансплантациях. Основа этих различий -обильный и сложный генетический полиморфизм, который доказывает, что люди наследуют и экспрессируют различные комбинации аллелей I и II класса. Протеин, кодируемый аллелью, называется аллотипом. Комбинация аллотипов I и II класса, экспрессируемых человеком, называется HLA-типом. Традиционно HLA-тип устанавливался при помощи серологических исследований, производимых на живых лимфоцитах, выделенных из периферической крови. Эти исследования оценивают антигенные различия между возможными аллотипами и описывают HLA-тип в виде серий антигенов. Когда для изучения HLA вариаций начали пользоваться биохимическими методами и методами молекулярной биологии, стали очевидными ограничения серологических методов. Это привело к замене серологических методов более точными и жесткими методами, основанными на оценке аллельных последовательностей в препаратах геномной ДНК. В этом отношении практика клинического HLA типирования находится в периоде становления и развития. Поэтому, все еще принято определять I класс серологически, тогда как II класс чаще определяют при анализе геномной ДНК. (Browning М. and McMichael А., 1996).

Гены, кодирующие HLA аллоантигены человека I и II класса, расположены близко друг к другу на коротком плече хромосомы 6. Эта часть генома составляет главный комплекс гистосовместимости человека (МНС) и называется HLA-комплекс (Campbell, R.D. and Trowsdale, J., 1997).

В HLA-комплекс входит около четырех миллионов пар ДНК, и он имеет размер, сравнимый с целым геномом бактерии Е. coli. В HLA-комплексе различают три составляющих отдельных региона, (рис. 1). class II region —class III region -*■ <-class I regionn

DP DM DQ DR complement ВС E A G F

IIIII I W II I I II

I I I I 1

0 12 3 4 centromere relative position (megabases) telomere

Рис. 1. Упрощенная карта HLA-комплекса. Показано разделение HLA-комплекса на регионы класса I, II и III. В регионах I и II класса показаны только относительные позиции генов, кодирующих функциональные изотипы I и II классов. В регионе Шкласса показаны только относительные позиции генов, кодирующих С2, С4 компоненты комплемента и фактор В. Каждый из этих регионов содержит дополнительные гены, не отображенные на рисунке. . (по Steven G.E. Marsh et al. The HLA FactsBook, 2000)

Около центромеры 6-ой хромосомы находится регион II класса, содержащий гены II класса; регион I класса, содержащий гены I класса находится ближе к теломере короткого плеча 6-ой хромосомы. (Trowsdale J., 1996). Регион, расположенный между ними, называется регионом III класса. В нем содержится около 75 генов, кодирующих различные протеины, некоторые из них кодируют С4, С2 компоненты комплемента и фактор В (Aguado, В. et al., 1996).

Как в I, так и во II регионах содержатся гены, отличные от генов I и II классов и которые структурно не родственны им. Однако есть некоторые исключения, когда эти гены II региона выполняют иммунологическую функцию, близкую к функции гликопротеинов I и II класса. С другой стороны, I регион содержит большое количество генов, продукты которых выполняют функции, совершенно не похожие на функции гликопротеинов I и II классов. Единственные гены, получившие официальное название HLA, входящие в HLA-комплекс, это те, которые кодируют аллоантигены I и II класса, либо гены и псевдогены HLA-комплекса, близко родственные им.

Главные гены I класса — это те, которые кодируют тяжелые цепи (а-цепи) шести изоформ I класса: HLA-A, -В, -С, -Е, -F и-G. Кроме них существуют еще HLA-H, -J, -К и -L, которые являются нефункционирующими псевдогенами, близко родственными нуклеотидной последовательности функциональных генов I класса (табл. 1, рис. 2).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Тороповский, Андрей Николаевич, Уфа

1. Абдулкадыров, К. М. Получение и клиническое применение периферических гемопоэтических стволовых клеток из пуповинной крови Текст. / К. М. Абдулкадыров, Н. А. Романенко, Н. Н. Старков // Вопр. онкологии. - 2000. - Т. 46, № 5. - 513-520.

2. Авербах, М. М. Иммуногенетика инфекционных заболеваний Текст. / М. М. Авербах, А. М. Мороз, А. Апт и др. - М. : Медицина, 1985. - 253 с.

3. Айала, Ф. Современная генетика Текст. / Ф. Айла, Д. Кайгер. - М. : Мир, 1988.-321 с.

4. Акопян, А. В. Иммунологические и иммуногенетические аспекты периодической болезни Текст. / А. В. Акопян, Л. П. Алексеев, Р. М. Хаитов // Иммунология. - 1998. - № 1. - 4 - 6.

5. Алтухов, Ю. П. Генетические процессы в популяциях Текст. / Ю. П. Алтухов. - М . : Наука, 1983.-231 с.

6. Барсегянц, Л. О. О корреляции между антигенами системы АВО и некоторыми заболеваниями Текст. / Л. О. Барсегянц // Судебно-медицинская экспертиза. — 1997. — Т. 40, № 2. — 24-25.

7. Бочков, Н. П. Генетика человека : наследственность и патология Текст. / Н. П. Бочков. - М.: Медицина, 1978. - 234 с.

8. Боякова, Е. В. Состав лейкоцитарного пула и гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови доношенных новорожденных Текст. : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.29 / Е. В. Боякова. - М . , 2006. - 36 с.

9. Владимирская, Е. Б. Пуповинная кровь — альтернативный источник стволовых клеток для трансплантации Текст. / Е. Б. Владимирская, Н. В. Замораева, М. Волынин // Педиатрия. - 1997. - № 4. - 9-12.

10. Гармонов, Ю. Аналитические методы исследования генетического полиморфизма организма человека Текст. / Ю. Гармонов, М. И. Евгеньев, И. Е. Зыкова // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2004. - № 1. - 3.

11. Гланц, Медико-биологическая статистика Текст. / Гланц. - М. : Практика, 1999.-459 с.

12. Гребенщиков, Л. В. Значение групповой принадлежности крови в диагностике наиболее распространенных ЛОР заболеваний Текст. : автореф. дис... канд. мед. наук : 14.00.04 / Л. В. Гребенщиков. — СПб., 2001. - 2 3 с.

13. Гришина, В. В. Система сбора и фракционирования стволовых клеток пуповинной крови Текст. / В. В. Гришина, Е. В. Тимохина, Л. Ю. Андреева // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2004. - Т. 3, № 6. -С. 50-54.

14. Громнацкий, Н. И. Тромбоцитарный гемостаз у больных артериальной гипертонией с метаболическим синдромом Текст. / Н. И. Громнацкий, И. Н. Медведев // Международный медицинский журнал. - 2002. - № 5. - 413-415.

15. Дерюгина, Е. И. Моноклональные антитела к группоспецифическим антигенам системы АВ0 человека Текст. : дис. ... докт. мед. наук : 14.00.14 / Е. И. Дерюгина. - М., 1990. - 225 с.

16. Донсков, И. Антигены эритроцитов Текст. : справ, по переливанию крови и кровезаменителей / И. Донсков. - М. : Медицина, 1982. — 94 с.

17. Донсков, И. Группы крови в биологии человека — факты и предположения Текст. / И. Донсков // Гематология и трансфузиология. — 2001. — Т. 46, № 5. — С . 32-33.

18. Донсков, И. Группы крови системы Rhesus. Теория и практика Текст. / И. Донсков. - М. : ВИНИТИ РАН, 2005. — 392 с.

19. Дранник, Г. Н. Генетические системы крови человека и болезни Текст. / Г. Н. Дранник, Г. М. Дизик. - Киев : Здоровье, 1990. - 196 с.

20. Дуткевич, И. Г. К истории открытия групп крови Текст. / И. Г. Дуткевич // Трансфузиология. — 2002. —Т. 3, № 1. — 49-53.

21. Карслян, Л. Гемотрансмиссивные вирусные инфекции : выявляемость, специфика метаболизма, связь с групповой принадлежностью крови Текст. : дис. ... канд. мед. наук : 14.00.46 / Л. Карслян. - Саратов, 2007. - 176 с.

22. Косяков, П. Н. Изоантигены и изоантитела в норме и патологии Текст. / П. Н. Косяков. - М . : Медицина, 1974. - 360 с.

23. Кулапина, О. И. Показатель проницаемости мембран эритроцитов при тонзиллярной патологии Текст. / О. И. Кулапина, В. Ф. Киричук, И. А. Зайцева и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2006.- № 6. - 53.

24. Мазурин, А. В. Пропедевтика детских болезней Текст. / А. В. Мазурин, И. М. Воронцов. - 2-е изд. - М. : Фолиант, 2001. - 928 с.

25. Медик, В. А. Специальные вопросы методологии статистического анализа в биомедицинских исследованиях Текст. / В. А. Медик, Б. Б. Фишман // Проблемы управления здравоохранением. - 2004. - № 14. - 78-82.

26. Мешалкин, Е. Н. Группы крови АВ0 и Rh у больных с сердечно-сосудистой патологией Текст. / Е. Н. Мешалкин, Г. Н. Окунева, Ю. А. Власов // Кардиология. - 1981. - № 4. - 46-50.

27. Микулич, А. И. Характер полиморфизма групп крови и популяционно- генетическая изменчивость современного населения БССР Текст. / А. И. Микулич // Проблемы эволюции морфологии человека и его рас. - М., 1986. - С . 152-159.

28. Песков, А. Биологические маркеры раннего развития пневмокониозов Текст. : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.05 / А. Песков. -Новосибирск, 2000. - 23 с.

29. Петров, Р. В. Иммуногенетика и искусственные антигены Текст. / Р. В. Петров, Р. М. Хаитов, Р. И. Атаулланов. - М. : Медицина, 1983. - 225 с.

30. Петров, Р. В. Иммунология Текст. / Р. В. Петров. - М. : Медицина, 1987. - 415 с.

31. Петров, Р. В. Иммунология и иммуногенетика Текст. / Р. В. Петров. - М. : Медицина, 1976. — 336 с.

32. Потемкин, В. В. Метаболические показатели и структура мембран эритроцитов при ожирении и метаболическом синдроме у женщин Текст. / B. В. Потемкин, Ю. Троицкая, А. Г. Максина // Российский медицинский журнал. - 2006. - № 1. - 35.

33. Прокоп, О. Группы крови человека Текст. / О. Прокоп, В. Геллер ; пер. с нем. А. Гладких. - М. : Медицина, 1991. - 512 с.

34. Рагимов, А. А. От К. Ландштейнера к трансфузионной медицине Текст. / А. А. Рагимов // Гематология и трансфузиология. — 2001. —Т.46, № 5. — C. 33.

35. Реброва, О. Ю. Статистический анализ медицинских данных Текст. : применение пакета прикладных программ «STATISTICA» / О. Ю. Реброва. -М. : Медиа сфера, 2003. - 312 с.

36. Столяров, Е. А. Остановка кровотечения. Острая кровопотеря. Переливание крови и ее компонентов Текст. / Е. А. Столяров, Б. Д. Грачев, А. И. Косов и др. - Самара, 2005. — 136-157.

37. Стрижаков, А. Н. Пуповинная кровь — источник стволовых клеток Текст. / Стрижаков А. Н., Д. М. Мхеидзе, Е. В. Тимохина, В. В. Гришина // Вопросы гинекологии, акушерства и перинатологии. - 2003. - Т. 2, № 4. - 33-37.

38. Таборидзе, И. И. Ассоциация групп крови системы АВО с дисплазией тазобедренного сустава Текст. / И. И. Таборидзе, Л. Т. Аладашвили, Э. Ф. Лордкипанидзе // Ортопедия, травматология и протезирование. - 1991. - № 8. - 23-26.

39. Техническое руководство американской ассоциации банков крови Текст. : пер. с англ... — Милан : Европейская школа трансфузионной медицины, 2000. - 1056 с.

40. Тимофеев, А. А. Значение некоторых гематологических показателей при острых одонтогенных воспалительных заболеваниях челюстей Текст. / А. А. Тимофеев // Проблемы аллергии. - Львов, 1983. — 74-75.

41. Тустановский, А. А. Изучение внутриклеточных антигенов стрептококка в аспекте ревматологии Текст. / А. А. Тустановский // Современные проблемы ревматологии. - М., 1985. - 34-43.

42. Фрейдин, М. Б. Геномные основы подверженности инфекционным заболеваниям Текст. / М. Б. Фрейдин, И. А. Гончарова, А. А. Рудко // Молекулярная медицина. - 2006. - № 3. - 39.

43. Хаитов, Р. М. Система генов HLA и регуляция иммунного ответа Текст. / Р. М. Хаитов, Л. П. Алексеев // Аллергия, астма и клиническая иммунология. -2000.-№ 8.-С. 7-16.

44. Чертиков, И. Л. Моноклональные антитела для тестирования групп крови человека системы АВ0 Текст. / И. Л. Чертиков, Е. И. Дерюгина, Н. Н. Дризе и др. // Научно-технический прогресс в службе крови страны. — Рязань, 1987. - С . 16-17.

45. Шабалин, В. Н. Клиническая иммуногематология Текст. / В. Н. Шабалин, Л. Д. Серова. - М. : Медицина, 1988. - 312 с.

46. Юрасов, Ю. Выделение гемопоэтических стволовых клеток из пуповинной крови для трансплантации Текст. / Ю. Юрасов, Е. Б. Владимирская, А. Г. Румянцев // Гематология и трансфузиология. - 1997. - № 2.-С. 10-15.

47. Abi Rached. The МНС big bang Text. / Abi Rached // Immunol. Rev. - 1999. - Feb. (№167) .-C. 33-44.

48. Aguado, B. Characterization of a human MHC class III region gene product with S-thioesterase activity Text. / B. Aguado // Biochem. J. - 1999. - Aug., 1 (341). - P . 679-689.

49. A1-Hilli, F. The ABO and Rh blood group in Bahrain, Arabian Gulf Text. / F. Al- Hilli // Hum. Boil. - 1985. - Vol. 57, № 3. - P. 236-242.

50. Anstee, D. J. Blood-group active surface molecules of the human red blood cell Text. / D. J. Anstee // Vox. Sang. — 1990. — Vol. 58. — P. 1-20.

51. Arguello, J. R. High resolution HLA class I typing by reference strand mediated conformation analysis (RSCA) Text. / J. R. Argtiello // Tissue Antigens. - 1998. -Jul . (№52) .-P. 57-66.

52. Avent, N. D. Human erythrocyte antigen expression : its molecular bases Text. / N. D. Avent // Br. J. Biomed Sci. - 1997. - Vol. 54, № 1. - P. 16-37.

53. Bahrain, S. New polymorphic microsatellite markers in the human MHC class II region Text. / S. Bahrain // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1994. - Vol. 91. - P. 6259-6263.

54. Ball, S. The human chromosome 19 linkage group FUT1 (H), FUT2 (SE), LE,

55. U, PEPD, СЗ, APOC2, D19S7 and D19S9 Text. / S. Ball, N. Tongue, A. Gibaud, et al //Ann. Hum. Genet. - 1991. -Vol. 55. - P . 225-233.

56. Ballen, K. New trends in umbilical cord blood transplantation Text. / K. Ballen // Blood. - 2005. - Vol.105, № 10. - P. 3786-3792.

57. Beck, S. Report of the Fourth International Chromosome 6 Workshop 1999 Text. / S. Beck, J. Trowsdale // Immunol. Rev. - 1999. - Vol. 167. - P. 201-210.

58. Bender, K. Haplotype analysis of the linkage group HLA-A:HAL-B:Bf and its bearing on the interpretation of the linkage disequilibrium Text. / K. Bender, A. Mayerova, R. Frank, С Hiller, T. Wienker // Hum Genet. - 1977. - Apr., 15 (№ 36).-P. 191-196.

59. Bennet, E. Genomic cloning of the human histo-blood group ABO locus Text. / E. Bennet, R. Steffensen, H. Clausen, et al // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1995. - Vol. 206. - P. 318-325.

60. Bensinger, W. 1. Should we purge? Text. / W. Bensinger // BMT. - 1998. - Vol. 21.-P. 113-115.

61. Bertolono, K. Placental blood collection Text. : effects on newborn (letter) / K. Bertolono, M. Battaglia, С Delulio et al // Blood. - 1995. - Vol. 85. - P. 3351-3352.

62. Bodmer, J . G. Nomenclature for factors of the HLA system, 1996 Text. / J. G. Bodmer J.G., S G. Marsh, E. D. et al // Tissue antigens. - 1997. - Vol. 49. - P. 297-321.

63. Bodmer, W. F. Models and mechanisms for HLA and disease association Text. / W. F. Bodmer // J. Exp. Med. - 1980. - № 152. - P . 353-357.

64. Browning, M. HLA and MHC : Genes, Molecules and Function Text. / M. Browning, A. McMichael. - Oxford : Bios Scientific Publishers, 1996. - 438 p.

65. Broxmeyer, H. E. Cord blood biology, immunology, banking and clinical transplantation Text. / H. E. Broxmeyer // AABB Press. - Bethesda, MD, 2004. -P.

66. Broxmeyer, H. E. Human umbilical cord and placental blood transplantation Text. / H. E. Broxmeyer // Marrow and stem processing for transplantation / eds. 1.. С Lasky, P. I. Warkentin. - Bethesda, 1995. - P. 191-200.

67. Buckner, C. D. Marrow harvesting from normal donors Text. / C. D. Buckner, R. A. Clift, J. E. Sanders et al // Blood. - 1984. - Vol. 6. - P. 630-634.

68. Bunce, M. Molecular HLA typing - the brave new world Text. / M. Bunce // Transplantation. - 1997. -Vol. 64. - P. 1505-1513.

70. Burt, R. K. Adoptive immunotherapy after hematopoietic stem cells transplantation Text. / R. K. Burt, C. Link, A. Traynor // Curr. Opin. Oncol. -1998.-Vol. 10.-P. 525-532.

71. Cairo, M. S. Placental and/or umbilical cord blood : an alternative source of hematopoietic stem cells for translpantation Text. / M. S. Cairo, J. E. Wagner // Blood. - 1977. - Vol. 90. - P. 4665-78.

72. Calabi, F. The CD1 system Text. / F. Calabi, A. Bradbury // Tissue Antigens. - 1991.-Vol. 3 7 . - P . 1-9.

73. Campbell, R.D. Text. / R. D. Campbell, J. Trowsdale // Immunol. Today. — 1997.-Vol. 18 .-P. 43.

74. Carpenter, C. B. HLA class I DNA typing in organ transplantation Text. / B. Carpenter // Tissue Antigens. - 1997. - Vol. 50. - P. 322-325.

75. Cherif-Zahar. Localization of the human Rh blood group gene structure to chromosome region 1 p34.3-lp36.1 by in situ hybridization Text. / Cherif-Zahar // Hum. Genet. — 1991. — Vol. 86. — P. 398^00.

76. Confer, D. L. Bone marrow and peripheral blood stem cells donors Text. / D. L. Confer, D. F. Stroncek // Hematopoietic cell transplantation. — Boston, 1998. - P. 421-430.

77. Cotton, R. Detection of single base changes in nucleic acids Text. / R. Cotton // Biochem. J. - 1989. - Vol. 263. - P . 1-10.

78. Craven, M. Transfusion of fetal cord blood cells : an improved of hematopoietic stem cells transplantation? Text. / C. M. Craven, K. Ward // J. Reprod. Immenol. - 1999. - Vol. 42. - P. 59-77.

79. Dausset, J. Biological importance of the MHC complex Text. / J. Dausset // Developments in Immunology, Clinical Immunology and Allergology (Elsevier). -1981.-Vol. 14.-P. 113-120.

81. Dausset, J. Physiology and pathology of the HLA complex Text. / J. Dausset // Ann Immunol. (Paris). - 1977. - Jan-Mar. (№ 128). - P. 363-369.

82. Deeg, H. J. Malignancies after hematopoietic stem cells trans-platation : many questions, some answers Text. / H. J. Deeg, G. Socie // Blood. - 1998. - Vol. 91. - P . 1833-1844.

83. Denning-Kendall, P. Optimal processing of human umbilical cord blood for clinical banking Text. / P. Denning-Kendall, C. Donaldson, A. Nicol et al // Exp. -Hematol. - 1996. - Vol. 24(12). - P. 1394-1401.

84. Donaldson, C. Optimal cryopreservation of human umbilical cord blood Text. / C. Donaldson, W. J. Armitage, P. A. Denning-Kendall et al // Bone Marrow Transplant. - 1996. - Vol. 18 (4). - P. 725-773.

85. Dupont, B. "Phototyping" for HLA : the beginning of the end of HLA typing as we know it Text. / B. Dupont // Tissue Antigens. - 1995. - Vol. 46. - P. 353-354.

86. Dupont, B. Immunology of hematopoietic stem cell transplantation : a brief review of its history Text. / B. Dupont // Immunological Reviews. — 1997. —Vol. 157.-P. 5-12.

87. Eichler, H. Engraftment capacity of umbilical cord blood cells processed by either whole blood preparation and filtration Text. / H. Eichler, S. Kern, C. Beck et al // Stem Cells. - 2003. - Vol. 21. - P. 208-216.

88. Feder, J. N. A novel MHC class I-like gene is mutated in patients with hereditary haemochromatosis Text. / J. N. Feder et al // Nature Genet. - 1996. -Vol. 13 .-P. 399-408.

89. Ferguson-Smith, M. Localisation of the human ABO: Np-1: AK-1 linkage group by regional assignment of AK-1 to 9q 34 Text. / M. Ferguson-Smith, D. Aitken, C. Turleau et al // Human Genetics. - 1976. - Vol. 34. - P. 35-43.

90. Gerencer, M. The HLA antigens in women with recurrent abnormal pregnancies of unknown etiology Text. / M. Gerencer, A. Kastelan, A. Drazancic, V. Kerhin-Brkljacic, M. Madjaric // Tissue Antigens. - 1978. - Sep., 12(3). - P. 223-227.

91. Ghickman, E. Cord blood banking and transplant in Europe Text. / E. Ghickman, V. Rocha, С Chastang // Eurocord ; Vox Sang. - 1998. - Vol. 74 (suppl.).-P. 95-101.

92. Gluckan, E. Hematopoietic recon-stitution in a patient with Fanconi's anemia by means of umbilical cord from an HLA - identical sibling Text. / E. Gluckan, H. E. Broxmeyer, A. D. Auerbach et al // N. Engl. J. Med. - 1989. - Vol. 321. - P. 1184-1178.

93. Gluckman, E. Jut come of cord blood transplantation from related and unrelated donors Text. / E. Gluckman, V. Rocha, A. Boyer-Chammard et al // N. Engl. J. Med. - 1997. -Vol. 337. - P . 373-381.

94. Grewal, S. S. Unrelated donor hematopoietic cell transplantation: marrow or umbilical cord? Text. / S. S. Grewal, J. N. Barker, S. M. Davies, J. E. Wagner // Blood. - 2003. -Vol. 101, № 11. - P. 4233-4244.

95. Hackel, E. Theoretical Aspects of HLA Text. / E. Hackel, D. Mallory // American Assotiation of Blood Banks. 1982. - Arlington-VA.-P. 1-141.

96. Haley, N.R. Conference report : ethical issues in cord blood banking Text. / N. R. Haley, J. Sugarmann, L. Harvath // Transfusion. - 1998. - Vol. 38. - P. 867-873.

97. Hansen, J. Development of registries of HLA-typed volunteer marrow donors Text. / J. Hansen // Tissue Antigens. - 1996. - Vol. 47. - P. 460-463.

98. Hansen, J. A. Hematopoietic stem cells transplants from unrelated donor Text. / J. A. Hansen, E. Petersdorf, P. J. Martin, C. Anasetty // Immunol. Rev. -1997.-Vol. 157.-P. 141-51.

99. Harris, D. T. Experience in autologous and allogeneic cord blood banking Text. / D. T. Harris // J. Hematother. - 1996. - Vol. 5. - P. 123-128.

100. Hashimoto, K. A gene outside the human MHC related to classical HLA class I genes Text. / K. Hashimoto et al // Science. - 1995. - Vol. 269. - P. 693-695.

101. Hoffman, R. Ex vivo expansion of human hematopoietic stem cells : Implications for modern blood bank Text. / R. Hoffman, E. Rozler, J. Chute et al // Vox sang. - 1998. - Vol. 74 (suppl.). - P. 259-264.

102. Hosono, S. Autologous cord blood transfusion in an infant with a huge sacrococcygeal teratoma Text. / S. Hosono, H. Mugishima, Y. Nakano et al // J. Perinat. Med. - 2004. - Vol. 32. - P. 187-189.

103. Howell, W.M. The HLA system : an update and relevance to patients-donor matching strategies in clinical transplantation Text. / W. M. Howell, C. Navarrete // Vox Sang. - 1996. - Vol. 71. - P. 6-12.

104. Jin, N. R. Marrow harvesting for autologous marrow transplantation Text. / N. R. Jin, R. S. Hill, F. B. Peterson et al // Exp. Ytmatol. - 1985. - Vol. 13. - P. 879-884.

105. Junghans, R. P. Finally! The Brambell receptor (FcRB). Mediator of transmission of immunity and protection from catabolism for IgG Text. / R. P. Junghans // Immunol. Res. - 1997. - Vol. - P. 16, 29-57.

106. Kandil, E. The human gene encoding the heavy chain of the major histocompatibility complex class I-like Fc receptor (FCGRT) maps to 19ql3.3 Text. / E. Kandil et al // Cytogenet. Cell Genet. - 1996. - Vol. 73, 97-98.

107. Kasahara, M. The chromosomal duplication model of the major histocompatibility complex Text. / M. Kasahara // Immunol. Rev. - 1999. - P. 167, 17-32.

108. Keethesan, N. Effect of cryopreservation on the immunogenicity of umbilical cord blood cells Text. / N. Keethesan, C. Whiteman, A. Malczewski et al // Transfusion and Apheresis Science. - 2004. - Vol. 30. - P. 47-54.

109. Kinmond, S. Umbilical cord clamping and preterm infants : a randomized trail Text. / S. Kinmond, Т. С Aitchison, B. M. Holland et al // Br. Med. J. - 1993. -Vol. 306.-P. 172-175.

110. Klein, J. Biology of the Mouse Histocompatibility Complex Text. / J. Klein. - Berlin : Springer-Verlag, 1975. - 620 p.

111. Krausa, P. Genes, Molecules and Function Text. / P. Krausa, M. Browning // Bios Scientific Publishers. - Oxford, 1996. - P. 113-137

112. L. B. The biology and clinical used of blood stem cells Text. / L. В., D. N. Haylock, P. J. Simmons, С A. Juttner // Blood. - 1997. -Vol. 89. - P. 2233-2258.

113. Laroche, V. To wash or not to wash? : an analysis of standard umbilical cord blood processing methods Text. / V. Laroche, D. McKena, G. Moroff et al // Abstracts of ISCT conference. - Dublin, 2004.

114. Leitman, S. T. Hematopoietic progenitor cells Text. / S. T. Leitman, E. J. Read // Semin. Hematol. - 1996. - Vol. 33. - P. 341-358.

115. Little, A. M. Current methodologies of human leukocyte antigen typing utilized for bone marrow donor selection Text. / A. M. Little A.M. et al // Curr. Opin. Hematol. - 1998. - Vol. 15. - P. 419-442.

116. Locatelli, R. Factors associated with out come after cord blood transplantation in children with acute leukemia Text. / R. Locatelli, V. Rocha, C. Chastang et al // Blood. - 1999. - Vol. 93. - P. 3662-3679.

117. Long, E. O. HLA recognition by NK cells Text. / E. O. Long // Plenary report at ASHI 23rd Annual Meeting. - Atlanta : Georgia, 1997. - Oct., 14-19. - P. 43-44.

118. McCullough, J. Proposed policies and procedures for the establishment of a cord blood bank Text. / J. McCullough, M. E. Clay et al // Blood Cells. -1994. -Vol. 20. - P. 609-629.

119. McAIpine, P. Report of the nomenclature committee and the catalog of mapped genes Text. / P. McAIpine, T. Shows, C. Boucheix et al // Cytogenet. Cell Genet. - 1989. -Vol . 51. - P . 13-66.

120. McCredie, K. Cells capables of colong formation in the peripheral blood of man Text. / K. McCredie, E. M. Herch, E. J. Freireich // Science. - 1971. - Vol. 171.-P. 293-294.

121. Meagher, R. S. Techniques of harvesting and cryopreser-vation of stem cells Text. / R. S. Meagher, R. H. Herzig // Hematol. Oncol. Clin. N. A. - 1993. - Vol. 7 . - P . 501-533.

122. Molaro, G. L. Biochemika degli antigeni grup — polmatiki eritrocitari Text. / G. L. Molaro // Riv. emoter. ed. immunoematol. - 1987. - Vol. 34, № 1. - P. 1 -27.

123. Mytilineos, J. HLA class I DNA typing of 215 "HLA-A, -B, -DR zero mismatched kidney transplants Text. / J. MYtilineos et al // Tissue Antigens. -1997.-Vol. 5 0 . - P . 355-358.

124. Newton, I. Toward cord blood banking: density-separation and cry ©preservation of cord blood progenitors Text. / I. Newton, P. Charbord, J. P. Schaal, P. Herve // Exp. Hematol. - 1993. - Vol. 21(5). - P. 671-674.

125. Oh, W. Cord blood banking for potentional future transplantation : subject review Text. / W. Oh, M. S. Cairo, F. Desposito et al // Pediatrics.-1999. - Vol. 104, № 1 . - P . 116-118.

126. Ohwada, C. Second cord blood transplantation (CBT) with reduced-intensity conditioning for graft failure after the first CBT for AML Text. / C. Ohwada // Bone Marrow Transplant. - 2004. - Vol. 34 (11). - P. 999-1000 .

127. Okimoto, K. HLABw54 (Bw22-J, J-l) antigen in juvenile onset diabetes mellitus in Japan Text. / K. Okimoto, T. Juji, S. Ishiba, H. Maruyama, H. Tohyama, K. Kosaka // Tissue Antigens. - 1978. - May, 11. - P. 418-422.

128. OHe, O. HLA class I and II high resolution typing by PCR-SSP Text. / O. Olle // Sixteenth European Histocompability Conference, Strasbourg, 19-22 March. - Strasbourg, 2002. - P. 46.

129. Osoba, A. O. Medical treatment of sexually transmitted diseases in developing countries Text.. Part II. Other venereal diseases / A. O. Osoba // West Afr. J. Pharmacol. Drug Res. - 1979. -Vol. 5(1). - P. 37-44.

130. Parham, P. Genomic Organization of the MHC : structure, origin and function Text. / P. Parham // Immunol. Rev. - 1999. - Vol. 167. - P. 1-379.

131. Paxson, C. L. Collection and use of autologous fetal blood Text. / C. L. Paxson // Am. J. Obstet. Gynecol. - 1979. - Vol. 134. - P. 708-710 .

132. Querol, S. Effect of red blood cell content on progenitor function after Cryopreservation of cord blood buffy-coat products Text. / S. Querol, C. Azqueta, J. Garsia // Abstracts of EBMT Conference. - Montreux, 2002.

133. Race, R. The ABO blood groups Text. / R. Race, R. Sanger // Blood Groups in man. -Blackwell Scientific publications, 1975. - P . 8-91.

134. Regidor, C. Umbilical cord blood banking for unrelated transplantation: evaluation of cell separation and storage methods Text. / C. Regidor, M. Posada, D. Monteagudo et al // Exp. Hematol. - 1999. - Vol. 27, № 2. - P. 380-385.

136. Riegert, P. Genomics, isoforms, expression, and phylogeny of the MHC class I-related MR1 gene Text. / Riegert P. et al // J. Immunol. - 1998. - Vol. 161. -P. 4066-4077.

137. Rocha, V. Umbilical cord blood transplantation Text. / V. Rocha // Curr. Opin. Hematol. - 2004. - Vol. 11, № 6. - P. 375-385.

138. Rowley, S. D. Effect of exposure without cryopreservation on hematopoietic progenitor cells Text. / S. D. Rowley, G. L. Anderson // Bone Marrow Transplantation. - 1993. - Vol. 11. - P. 389-393.

139. Rowling, P. A. Summery current use outcome of blood and marrow transplantation. Milwan Kee Text. / P. A. Rowling // WI : AKMTR Newsletter. -1996.-Nov.

140. Rozemuller, E. H. Sequencing-based typing reveals new insight in HLA- DPA1 polymorphism Text. / E. H. Rozemuller et al // Tissue Antigens. - 1995. -Vol. 4 5 . - P . 57-62.

141. Rubinstein, P. Out comes among 562 recipients of placental-blood transplants from unrelated donors Text. / P. Rubinstein, C. Carrier, A. Ccarada van et al // N. Engl. J. Med. - 1998. - Vol. 339. - P. 1565-1577.

142. Rubinstein, P. Processing and cryopreservation of placental/umbilical blood for unrelated bone marrow reconstitution Text. / P. Rubinstein, L. Dobrila, R. E. Rosenfield, J. W. Adamson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1995. - Vol. 92. - P. 10119-10122.

143. Rubinstein, P. Processing and cryopreservation of placental/umbilical blood for unrelated bone marrow reconstitution Text. / P. Rubinstein, L. Dobrila, R. E. Rosenfield, J. W. Adamson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1995. - Vol. 92. - P. 10119-10122.

144. Rubinstein, P. Stored placental blood for unrelated bone marrow reconstitution Text. / P. Rubinstein, R. E. Rosenfield, J. W. Adamson, E. Stevens //Blood. - 1993. -Vol. 81. - P . 1679-1690.

145. S. G. E. Marsh. Nomenclature for factors of the HLA system, update December 2001 Text. / S. G. E. // European Journal of Immunogenetics. - 2002. - Vol. 29, № 2 (April). - P. 117.

146. Schaison, G. Recommendations on the use of colony-stimulating factors in children : condusion of a European panel Text. / G. Schaison, О. B. Eden, G. Heme et al // Euro. J. Pediatr. - 1998. - Vol. 157. - P. 955-966.

147. Scheltinga, S. A. A generic sequencing based typing approach for the identification of HLA-A diversity Text. / S. A. Scheltinga et al // Hum. Immunol. - 1997. - Vol. 57. - P. 120-128.

148. Schenkel-Bruner, H. Human blood groups Text. / H. Schenkel-Bruner // Chemical and Biochemical Basis of Antigen Specificity. - New York, 2000. - P. 30-293.

149. Schepers, K. G. Incidence of bacterial contamination of bone marrow graft Text. / K. G. Schepers, J. M. Davis, S. D. Rowley // Prog. Clin. Biol. Res. -1992. - Vol. 377. - P. 379-384.

151. Shiina, T. Genome sequencing analysis of the 1.8 Mb entire human MHC class I region Text. / T. Shiina et al // Immunol. Rev. - 1999. - Vol. 167. - P. 193-199.

152. Singhal, S. Reimmunization after blood or marrow stem cells transplantation Text. / S. Singhal, J. Mehta // BMT. - 1999. - Vol. 23. - P. 637-646.

153. Steven, G. E. Marsh. The HLA FactsBook Text. / G. E. Steven Marsh, P. Parham, 1.. D. Barber. -N. Y.: Academic Press, 2000. - 398 p.

154. Strauss, R. G. Red blood cells transfusion in the neonate Text. / R. G. Strauss // J. Clin. Perinatol. - 1995. - Vol. 22. -P . 641-655.

155. Stroncek, D. Experiences of the first 493 unrelated marrow donors in the NMDP Text. / D. Stroncek, P. V. Holland, G. Bartch et al // Blood. - 1993. -Vol. 8 1 . - P . 1940-1946.

156. Stroneek, D. L. Composition of peripheral blood progenitor cell components collected from healthy donors Text. / D. L. Stroneek, M. E. Clay, J. Smith et al // Transfusion. - 1997. - Vol. 37. - P. 411-417.

157. Tanaka, Т. Second transplantation from HLA 2-loci-mismatched mother for graft failure due to hemophagocytic syndrome after cord blood transplantation Text. / T. Tanaka et al // Int. J. Hematol. - 2004. - Vol. 80, № 5. - P. 467-469.

158. Theunissen, K. Fully automated and reproducible cord blood processing using the Biosafe Sepax and Coolmix Devices Text. / K. Theunissen, M. Boogaerts, L. 1.auweryns et al // Abstracts of ASH Conference. - San Diego, 2003.

159. Thoma, S. J. Stem cell processing with an automated system Text. / S. J. Thoma, R. Bosse, J. Schultz et al // Abstracts of EBMT Conference. - Montreux, 2002.

160. Thomson, G. A review of theoretical aspects of HLA and disease associations Text. / G. Thomson // Theor. Popul. Biol. - 1981. - Oct., 20 (2). - P. 168-208.

161. Thomson, G. Conditional genotype analysis : detecting secondary disease loci in linkage disequilibrium with a primary disease locus Text. / G. Thomson, A. M. Valdes // BMC Proc. - 2007. - Dec, 18. - P. 163.

162. Thorsby, E Biological function of HLA Text. / E. Thorsby // Tissue Antigens. - 1978. -Apr., 11(4). - P. 321-329.

163. Tichelli, A. Automated volume reduction of cord blood using the Sepax system Text. / A. Tichelli, A. Gubelmann, С Schmolck et al // Materials of symposium onPBSC transplantation. - Mulhouse, 1999.

164. Tiercy, J. M. Selection of unrelated donors for bone marrow transplantation is improved by HLA class II genotyping with oligonucleotide hybridization Text. / J. M. Tiercy et al // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1999. - Vol. 88. - P. 7121-7725.

165. Tomas, E. D. Technique for human marrow grafting Text. / E. D. Tomas, R. Storb // Blood. - 1970. - Vol. 36. - P. 507-515.

166. Trachtenberg, E. A. DNA-based HLA typing for cord blood stem cell transplantation Text. / E. A. Trachtenberg, H. A. Erlich // J. Hematother. - 1996. -Vol. 5.-P. 295-300.

167. Trowsdale, J. "Both man & bird & beast" : comparative organization of MHC genes Text. / J. Trowsdale // Immunogenetics. - 1995. - Vol. 41. - P. 1-17.

168. Trowsdale, J. In HLA and MHC : Genes, Molecules and Function Text. / J. Trowsdale ; eds. M. Browning, A. McMichael // Bios Scientific Publishers. -Oxford, 1996.-P. 23-38.

169. Trowsdale, J. Both man & bird & beast : comparative organization of MHC genes // Immunogenetics. — 1995. - Vol. 41. - P. 1-17.

170. Tsuji, K. HLA 1991. Proceedings of the Eleventh International Histocompability Workshop and Conference Text. / K. Tsuji, M. Aizava, T. Sasazuki // Oxford University Press. - 1992. - Vol. I, II.

171. Ueyama, H. Molecular cloning and chromosomal assignment of the gene for human Zn-alpha 2-glycoprotein Text. / H. Ueyama et al // Biochemistry. - 1993. -Vol. 3 2 . - P . 12968-12976.

172. Venditti, C. P. Class I gene contraction within the HLA-A subregion of the human MHC Text. / С P. Venditti, M. J. Chomey // Genomics. - 1992. - Vol. 14.-P. 1503-1509.

173. Wagner J. E. Allogenic sibling umbilical cord blood transplantation in children with malignant and non-malignant disease Text. / J. A. Wagner, N. A. Kernan, M. Steinbuch et al // Lancet. - 1995. - Vol. 346. - P. 214-219.

174. Watt, S. M. Stem cell medicine: Umbilical cord blood and its stem cell potential Text. / S. M. Watt, M. Contreras // Seminars in fetal and neonatal medicine. - 2005. - Vol. 10. - P. 209-220.

175. Wolff, S. Second hematopoietic stem cell transplantation for the treatment of graft failure, graft rejection of relapse after allogenic transplantation Text. / S. Wolff// Bone Marrow Transplant. - 2002. - Vol. 29. - P. 545-552 .

176. Woods, E. A theoretically optimized method for cord blood stem cell cryopreservation Text. / E. Woods, J. Liu, K. Pollok et al // Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research. - 2001. - Vol. 12 (3). - P. 341-350.

177. Xiao, H. H. Freeze-drying of mononuclear cells and whole blood of human cord blood Text. / H. H. Xiao, Т. С Hua, J. Li et al // Cryoletters. - 2004. - Vol. 25 (2).-P. 111-120.

178. Yamamoto, F. Immunogenetics of the histo-blood group ABO Text. / F. Yamamoto // Tissue antigens. - 2008. - Vol. 71, № 4 (April). - P. 277 - 278.

179. Yamamoto, F. Molecular genetic basis of the histo-blood group ABO system Text. / F. Yamamoto, H. Clausen, T. White et al // Nature. - 1990. - Vol. 345. -P. 229-233.

180. Yamamoto, F. Molecular Genetic of the ABO histo-blood group system Text. / F. Yamamoto // Vox. Sang. - 1995. - Vol. 69. - P. 1-7.

181. Yao, A. С Distribution of blood between infant and placental after bieth Text. / A. С Yao, M. Minian, J. Bind // Lancet. - 1969. - Vol. 2. - P. 871-873.

182. Yasutake, M. Stem cell collection filter system for human placental/umbilical cord blood processing Text. / M. Yasutake, M. Sumita, S. Terashima et al // Vox Sang. - 2001. - Vol. 80 (2). - P. 101-105.

Информация о работе

Тороповский, Андрей Николаевич
кандидата медицинских наук
Уфа, 2008
ВАК 03.00.04

Диссертация

Характеристика метаболических, клеточных и иммунологических показателей препаратов пуповинной крови - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы