Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика и диагностическое значение белков смешанной слюны при депрессивных расстройствах

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Характеристика и диагностическое значение белков смешанной слюны при депрессивных расстройствах"

Р Г Б ОД

- 1 Уд? 2000

На правах рукописи

ГРИГОРЬЕВ ИГОРЬ ВЛАДИМИРОВИЧ

ХАРАКТЕРИСТИКА И ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ БЕЛКОВ СМЕШАННОЙ СЛЮНЫ ПРИ ДЕПРЕССИВНЫХ РАССТРОЙСТВАХ

03.00.04 — биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Смоленск - 2000

Работа выполнена в Витебском государственном медицинском-университете и в Институте биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова (г. Москва).

Научный руководитель — доктор биологических наук, профессор А.А.Чиркин. Научный консультант — доктор медицинских наук, профессор А.А. Кирпиченко.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук профессор Кухта В.К. кандидат медицинских наук доцент Забросаева Л.И.

Ведущая организация — Российский государственный

Защита состоится 23 марта 2000 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета К 084.34.01 в Смоленской государственной медицинской академии (214019, г. Смоленск, ул. Крупской, 28).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Смоленской государственной медицинской академии.

медицинский университет.

Автореферат разослан «_» февраля 2000 г.

Учёный секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор

А.С. Соловьёв

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одной из важных проблем современной биохимии является отсутствие достаточно чувствительных методов объективной диагностики нарушений высшей нервной деятельности и, в частности, депрессивных расстройств. Особое значение эта проблема приобретает в связи с интенсивным ростом числа пациентов с различными формами депрессии. Предполагается, что в первые десятилетия XXI века депрессия выйдет на второе место после сердечно-сосудистых заболеваний как причина утраты трудоспособности среди населения. Около 15% населения развитых стран когда-либо на протяжении своей жизни имели классические формы депрессивных расстройств (А.Б.Холмогорова, Н.Г.Гаранок, 1998). С другой стороны, считается, что от наиболее трудно выявляемой формы депрессии, так называемой скрытой, страдают в тот или иной период жизни до 25% населения земного шара (А.Оеше1, 1973). Причём ситуация с пациентами, болеющими скрытыми формами депрессии, создаёт не только медицинскую, но и серьёзную экономическую проблему, т.к. такие больные (из-за частых ложно соматических симптомов) отнимают много времени: проходят всевозможные дорогостоящие обследования, получают разные виды лечения, занимают место в стационаре, пока, наконец, часто спустя месяцы и годы, не попадут на консультацию к психиатру. Позднее распознавание подобных состояний таит в себе также и определённую опасность, ибо больные скрытой депрессией часто обнаруживают тенденцию к суицидам (В.Ф.Десятников, 1979).

В настоящее время на практике для диагностики депрессивных расстройств используется преимущественно клинический опыт врача-психиатра и при необходимости специальные психологические тесты, однако эти подходы так или иначе подвержены определённому влиянию субъективных оценок пациента и врача. Существующий биохимический метод с использованием дексаметазонового теста имеет значительные недостатки (относительно невысокие чувствительность и специфичность; длительность теста; ннвазивность и др.), что затрудняет его внедрение в практику.

В этой связи продолжается поиск таких биологических маркеров, которые могли бы эффективно отражать состояние психики человека. Большое внимание исследователей в последние годы привлекает изучение корреляционных зависимостей между биохимическим составом слюнного секрета и особенностями психической деятельности. Так, обнаружено, что различные виды психологического стресса изменяют содержание разных биохимических веществ в слюне человека (Т.Окишига е( а1., 1997; А-СЬ*/ е1 а1., 1997; 8.5ш1Ш-НапгаЬап, 1997). Эта данные подтверждают, что слюна является чутким индикатором текущего состояния нервной системы. Как известно, этот факт был впервые зафиксирован ещё" в начале XX века в опытах академика И.П. Павлова.

В целом ряде работ российских учёных было показано, что депрессивные расстройства сопряжены со значительными сдвигами в активности вегетативной нервной системы (В.П.Протопопов, 1948; В.М.Каменская, 1982). Последняя, как известно, регулирует функционирование слюнных желёз (А.Г.Бабаева, Е.А.Шубникова, 1979). Поэтому представляет большой научный и практический интерес исследовать качественные и количественные изменения в биохимическом составе слюны и произвести отбор показателей, которые могли бы быть носителями информации о депрессивном состоянии психики человека.

В этом отношении слюна является очень удобным объектом для таких наблюдений по причине целого ряда преимуществ: неинвазивность метода, возможность взятия проб в любое время, неограниченная частота взятия проб и т.п.).

Как известно, важнейшими элементами секреторной деятельности слюнных желёз являются вещества белковой природы. До сих пор при изучении психической активности оценивались уровни только отдельных веществ слюны белковой природы (Т.Окишига с1 а!., 1997; A.Clow с1 а1., 1997; З.ЗткЬ-НапгаЪап, 1997). Мы предполагаем, что гораздо более плодотворным может быть наблюдение одновременно целого ряда белковых компонентов в виде картины белкового спектра слюны. С технической точки зрения это также выгодно, т.к. анализ белкового спектра слюны можно эффективно проводить с помощью традиционных

методов белковой химии и, в частности, вертикального электрофореза в полиакриламидном геле.

Цель исследования. Целью настоящей работы является отбор определённых показателей белкового спектра смешанной слюны (БССС), наиболее эффективно отражающих наличие депрессивных расстройств.

Основные задачи исследования. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить особенности белкового спектра смешанной слюны у здоровых лиц в относительно нейтральном психоэмоциональном состоянии и на фоне полярных эмоций.

2. Исследовать особенности белкового спектра смешанной слюны у пациентов с депрессивными расстройствами.

3. Определить возможность количественной оценки белковых компонентов смешанной слюны, уровень которых наиболее показательно меняется на фоне депрессивных расстройств.

Научная новизна исследования. Обнаружено, что изменение психоэмоционального состояния (ПЭС) у здоровых лиц определённым образом отражается на картине БССС. При этом полярные ПЭС имеют свои характерные картины БССС: позитивные ПЭС сопровождаются обогащением БССС белковыми фракциями, негативные - обеднением.

Показано, что у пациентов с депрессивным синдромом, независимо от того, является ли основная причина патологического состояния психической или соматической природы, наблюдается устойчивое и стереотипное обеднение БССС относительно здорового контроля.

Установлено, что наиболее эффективно и достоверно наличие депрессивного расстройства отражается на уровне белковой фракции БССС с молекулярной массой (ММ) в области 55 кДа, концентрация которой отчётливо уменьшается в ответ на депрессию. С помощью методов аналитической биохимии показано, что эта фракция формируется как минимум двумя белками, пролин-обогащённым белком и амилазо-подобным белком. Показано, что наиболее целесообразным методом оценки уровня фракции 55 кДа является денситометрия БССС.

Практическая ценность работы. Предложен высокоинформативный метод для изучения психической активности человека с помощью средств аналитической биохимии. Предложен эффективный биохимический метод для определения наличия депрессивного расстройства. Простота метода позволяет говорить о том, что он может найти важное приложение в медицинской практике.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Белковый спектр смешанной слюны подвержен существенному влиянию психоэмоционального состояния.

2. Депрессивные эпизоды у здоровых людей сопровождаются снижением концентрации белковых фракций и их количества в БССС.

3. Белковый спектр смешанной слюны у пациентов с аффективными расстройствами при психических и соматических заболеваниях значительно обеднён фракциями.

4. Уровень белковой фракции смешанной слюны с молекулярной массой 55 кДа является наиболее эффективным показателем депрессивного расстройства.

Апробация работы. Результаты исследования доложены на конференциях Витебского государственного медицинского института (Про-блеммы современной медицины и фармации, февраль 1998 г.; Медицинская наука и её связь с практическим здравоохранением, ноябрь 1998 г.); республиканской конферейции, посвященной 65-летию Витебского государственного медицинского института (ноябрь 1999 г.); 2-й международной конференции "Неиквазивная диагностика" (июнь 1997 г., Москва); 2-м международном конгрессе "Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении" (июль 1998 г., Москва).

По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 87 страницах машинописи и состоит из введения, общей характеристики работы, обзора литературы, объектов и методов исследования, трёх разделов с описанием собственных исследований и обсуждением результатов, выводов и научно-практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 6 таблицами и 18 рисунками. Список литературы состоит из 156 источников, в том числе 27 на русском и 129 на иностранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Для решения поставленных задач было обследовано 175 больных с наличием депрессивного расстройства и 70 практически здоровых лиц обоего пола в возрасте от 18 до 55 лет, которые были сформированы в три основные и три дополнительные группы.

Основные группы. Группа контроля (60 человек), была образована из людей без существенной психической и физической патологии. Группа больных с психогенными аффективными расстройствами (с наличием депрессивного синдрома разной степени и формы) была сформирована из 80 человек со следующими клиническими диагнозами (согласно Международной классификации болезней МКБ-10): 9 пациентов с депрессией, 3-е психопатией, 68-е неврастенией. Большинство больных этой группы имели также различные соматические нарушения: язву желудка или двенадцатиперстной кишки, гастрит, камни в желчном пузыре, нарушения функций печени, запоры, кариес и др. Группа больных ревматоидным артритом (РА) была составлена из 80 человек (среди них - 20 человек с I степенью активности заболевания, 40 человек со II степенью и 20 человек с III степенью). Ревматоидный артрит был выбран нами по той причине, что на фоне этой патологии у больных наблюдается, как правило, выраженное депрессивное расстройство.

Дополнительные группы. Группа пациентов с реактивным артритом из 10 человек (аналог группы контроля). Группа из 9 тяжело больных с хронической почечной недостаточностью (ХПН) в терминальной стадии (с выраженным депрессивным синдромом). Группа из 6 хирургических больных желчно-каменной болезнью (с выраженным депрессивным синдромом). Отдельно был изучен один случай обморока, вызванного эмоциональным стрессом, у женщины из основной группы контроля.

У всех больных лиц были собраны пробы смешанной слюны в первые три дня после их поступления в стационар (натощак, утром, путём обычного сплевывания в стерильный химический стакан, объём собираемой среды до 200 мкл). После чего слюна центрифугировалась 10 мин при 10000 об/мин и хранилась в морозильной камере при -20°С. БССС каждого исследованного лица визуализировался с помощью элек-

трофореза в полиакриламидном геле по методу U.K.Laemmli (1970) и затем анализировался на медицинском денситометре ДМ-1 на длине волны 580 им.

Измерение содержания белка в пробах проводили по методу M.M.Bradford (1976).

Качественную оценку активности амилазы слюны проводили по стандартной методике окрашивания йодом раствора крахмала. Оптическую плотность образцов измеряли в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 630-690 нм против воды.

Выделение белковой фракции (реперных белков) с ММ 55 кДа из образцов смешанной слюны проводили с помощью гель-фильтрации на колонке, заполненной TSK-3000, при комнатной температуре и с использованием буфера, содержавшего 5 мМ HEPES (рН 7,4), 1 мМ MgCI2, 1 мМ дитиотрейтола. Локализацию выделяемого белка с ММ 55 кДа в полученных после гель-фильтрации фракциях определяли с помощью электрофореза в 12% полиакриламидном геле. Окончательную очистку выделенного белка 55 кДа проводили на колонке Vydex 300-5-С4.

Аминокислотный анализ N-конца (16 аминокислотных остатков) очищенного белка осуществлялся автоматическим образом с помощью секвенатора "Applied Biosystems 470А Protein Sequincer".

Полученную аминокислотную последовательность тестировали с использованием сети ИНТЕРНЕТ в электронных библиотеках данных PubMed (адрес - hUp://vega.crbm.cm-s-mop.fr/bin/nph-fasta_query.pl) и BLASTR (адрес - http://www.ncbi.nlm.nih.gov/cgi-bin/BLAST/nph-blast), которые контролируются Национальным центром биотехнологической информации США.

Психологические особенности личности больных РА оценивали с помощью Миннесотского анкетного теста многостороннего исследования личности (традиционно используется латинская абревиатура -ММР1), адаптированного И. Н. Гильяшевой и соавт. (1984). Для построения профиля личности использовали три оценочные шкалы (L, F, К), позволяющие определить достоверность выбора, сделанного пациентом, и десять клинических шкал - 1-9, 0. Шкалы ММР1 валидизирова-лись по группам больных. Первая шкала ипохондрии, вторая - депрес-

сии, третья - конверсиошшой истерии, четвертая - асоциальной психопатии, шестая - паранояльности, седьмая - психастении, восьмая - ши-зоидности, девятая - гипомании. Пятая шкала (мужских и женских черт характера) была валидизирована по группам только здоровых мужчин и женщин. Нулевая шкала валидизирована по группе лиц, уклоняющихся от межличностных контактов и социальных обязанностей, и группе лиц, стремящихся к широким контактам и общественной деятельности. Полученные личностные профили оценивали в Т-баллах. Важно отметить, что профиль методики многостороннего исследования личности не зависит от нозологической принадлежности заболевания, а определяется психопатологическим синдромом.

Для всех групп, кроме пациентов с желчно-каменной болезнью, был определен усредненный психологический профиль с помощью MMPI, из которого непосредственно использовались шкала 2, отражающая тревожно-депрессивные особенности, и шкала 9, позволяющая оценить преобладание депрессии или тревоги.

Результаты исследования были статистически обработаны с вычислением среднего значения и его ошибки. Для этой цели использована функция "Описательная статистика" в программе "Ехсе1-7".

Результаты исследования и их обсуждение

При анализе БССС практически здоровых людей было обнаружено, что белковый спектр смешанной слюны имеет сложную картину, в формирование которой может включаться до 40 белковых фракций с разной ММ в диапазоне от 20 до 200 кДа. Оптическая плотность отдельных фракций составляла от 0,04 до 0,40 единиц. Исследование показало, что наиболее насыщенной белковыми фракциями во всём этом диапазоне является слюна у тех здоровых лиц, которые находятся: а) в своём естественном (нормальном) состоянии, характеризующемся обычной трудовой активностью и отсутствием каких-либо ярко выраженных отрицательных психологических факторов (мыслей или/и чувств); б) в состоянии с высокой активностью сознания, например, в процессе творческой работы. В последнем случае БССС наиболее богат фракциями с высоким уровнем белков в них (с оптической плотностью > 0,15 единиц).

Значительно более бедную по составу картину имеют БССС в случае депрессивных эмоций, при этом заметно снижается содержание белков с ММ выше 35 кДа.

Для оценки естественных изменений БССС в течение длительных промежутков времени, была изучена слюна у отдельно взятых людей. Обнаружено, что картина БССС является довольно устойчивой и может сохранять свои характерные для данного человека особенности на протяжении не только нескольких часов, но и недель и месяцев.

Как правило, значительные изменения картины БССС наблюдались только после кардинальной перемены ПЭС, например, после общения с другими людьми.

В этой серии опытов, при сравнительном анализе БССС разных людей, было обнаружено, что белковая фракция с ММ около 55 кДа наиболее сильно изменяла свою концентрацию по сравнению с другими фракциями.

Для оценки особенностей БССС здоровых людей в отсутствии изменений ПЭС нами были обследованы четыре человека. Каждый из них в отдельности, находясь в изолированном помещении, в течение 20 минут собирал через определённые промежутки времени (0, 1,5, 10, 15, 20 мин) пробы своей смешанной слюны. При этом доноры старались исключать из своего сознания любые мысли и эмоции, которые могли бы сколь-либо существенно изменить их ПЭС.

Оказалось, что в течение 20 минут БССС испытуемых не претерпевал значительных качественных изменений. Только в областях с ММ вблизи 30 и 130 кДа наблюдались некоторые колебания уровня белков, не имевшие достоверного характера.

Таким образом, в отсутствии психогенных факторов в течение 20 минут не были обнаружены какие-либо существенные качественные перемены в картине БССС.

Для изучения влияния полярных ПЭС (позитивных и негативных) на БССС нами была обследована группа из семи практически здоровых человек (двое мужчин и пять женщин) в возрасте от 20 до 40 лет.

Для формирования позитивного ПЭС (активная доброжелательность), непосредственно сразу после взятия контрольной пробы, каждо-

му в отдельности испытуемому предлагалось мысленно сосредоточиться на искреннем пожелании счастья близкому человеку. После трёх минут такой концентрации собиралась опытная проба.

В результате серии опытов было обнаружено, что под действием такого позитивного ПЭС наблюдалось обогащение БССС белковыми соединениями (р<0,05).

Было обнаружено, что на фоне позитивных ПЭС могут формироваться два вида изменений в БССС: 1) резкое увеличение содержания белка по всему спектру; 2) увеличение уровня белка в отдельных фракциях, количество последних могло быть от единицы до двух десятков.

При исследовании влияния негативных ПЭС на картину БССС испытуемому предлагалось сразу после взятия контрольной пробы мысленно сосредоточиться на наиболее волнующей его личной проблеме. Эта проблема определялась во время специального предварительного общения с каждым исследуемым лицом отдельно, и основной её особенностью должен был быть максимально угнетающий характер, т.е. она должна была вызывать подавленное настроение (депрессивное состояние). Спустя три минуты сосредоточения на таком внутреннем психогенном факторе отбирался опытный образец слюны.

При исследовании особенностей белкового спектра проб слюны, полученных в тестированной группе людей, было обнаружено, что на фоне такого, искусственно созданного, подавленного настроения наблюдается существенное обеднение белкового состава, при этом наиболее значительно уменьшается содержание фракции в области с ММ 55 кДа.

Мы также исследовали один случай, уникальность которого выражалась в том, что женщина из группы контроля, БССС которой наблюдался в течение года, кратковременно (примерно на 5-10 мин) потеряла сознание после эмоционального стресса. Были проанализированы белковые спектры ее слюны за день до обморока, спустя один час после и через один день. В норме (за день до случившегося) оптическая плотность фракции 55 кДа составляла 0,16 единиц; через час после обморока данная фракция отсутствовала (оптическая плотность фракции 55 кДа -0,04 единицы) - исследуемая отмечала субъективное ощущение "плывущего или мутного сознания"; на следующий день фракция 55 кДа

появилась в белковом спектре снова с показателем оптической плотности 0,17 единиц - исследуемая свидетельствовала, что чувствует восстановление работоспособности сознания.

Сравнительный анализ БССС здоровых лиц показал, что белковая фракция с ММ в области 55 кДа является наиболее крупной в электро-форетической картине БССС в подавляющем большинстве исследованных случаев (98,5%). Вместе с тем, уровень этой фракции в разных случаях может изменяться очень сильно, на один-два порядка. Её оптическая плотность колеблется в широком диапазоне от 0,04 до 0,40 единиц, что соответствует изменению концентрации от < 0,01 до > 1 мг/мл.

Полученные результаты позволяют сделать предположение, что настроение человека, или характер активности его сознания, является одним из важнейших факторов, который может приводить к быстрому изменению картины белкового спектра смешанной слюны. В частности позитивные психоэмоциональные состояния (на основе активной доброжелательности) приводят к увеличению уровня фракции 55 кДа, а негативные (подавленные состояния сознания) - к её существенному снижению.

Короткое время (десятки секунд - минуты), в течение которого могут иметь место кардинальные изменения состава БССС, даёт основания предполагать, что в регуляцию секреторного процесса вовлекается нервная система. По всей видимости, при изменении ПЭС происходит активация или ингибирование специальных внутриклеточных механизмов, которые регулируют выброс секреторных гранул, содержащих определённые белки, из слюнных желёз в ротовую полость.

На втором этапе был проведён сравнительный анализ картин БССС между группой контроля и пациентами, имеющими депрессивный синдром на фоне патологии разной природы. Одновременно с помощью теста ММР1 проводилась количественная оценка выраженности депрессии во всех группах.

В таблице 1 представлен усреднённый психологический профиль группы практически здоровых лиц. Он характеризуется небольшими пиками на первой, пятой и девятой шкалах, что указывает на наличие

нормальных стремлений к заботе о своём здоровье и активное преодоление трудностей.

БССС контрольной группы характеризовался высоким уровнем фракции с ММ 55 кДа. Среднее значение оптической плотности этой фракции было 0,17±0,02 (табл. 2).

Усреднённый психологический профиль группы (I) пациентов с аффективными заболеваниями представлен в таблице 1. Шкала депрессии (70,0±4,8) достоверно выше (Р<0,05), чем в контроле (44,4±1,7). Профиль имеет пики на второй, шестой (68,4±3,1) и восьмой (73,1+3,4) шкалах. Сочетание пиков на шестой и второй шкалах выражает одновременное существование депрессивных тенденций и аффективной ригидности. Значительное понижение пика на девятой шкале (59,0±2,0) относительно второй шкалы (70,0±4,8) указывает на наличие хорошо выраженного депрессивного состояния. Существование пика на восьмой шкале говорит о стремлении возложить на окружающих вину за нарушение межличностных отношений, жизненные трудности и эмоциональные конфликты.

БССС в этой группе имеет значительно сниженный уровень фракции с ММ 55 кДа относительно контроля. Также заметно общее обеднение белковыми фракциями всего спектра. Средняя оптическая плотность фракции 55 кДа для данной группы (табл. 2) составила 0,10±0,01, что достоверно ниже, чем в контроле (Р<0,05).

Усреднённый психологический профиль группы (II) больных ревматоидным артритом характеризуется следующими основными параметрами (таблица 1). Шкала вторая, отражающая депрессивные тенденции, имеет достоверно (Р<0,05) более высокое относительно контроля значение (64,3+1,4), хотя и ниже аналогичной шкалы в группе с аффективными заболеваниями (70,0+4,8). Значительное понижение пика на девятой шкале (54,3±1,3) по сравнению со второй шкалой указывает на наличие достаточно ярко выраженного депрессивного состояния. Кроме этого профиль группы II имеет небольшой пик на восьмой шкале аналогично группе I, а также максимальный пик на первой шкале (70,0±1,8), связанной с беспокойством за соматическое здоровье.

Таблица 1. Усреднённые психологические профили исследованных групп_

1 2 3 4 5 6 7 8 9 0

Контроль 51,1 ±1,5 44,4 ±1,7 48,2 ±1,8 48,4 ±1,8 54,7 ±1,9 46,8 ±1,2 48,1 ±1,6 49,7 ±1,7 56,6 ±1,8 47,0 ±1,8

Аффективные заболевания 61,7 ±2,9« 70,0 ±4,8* 63,1 ±1,9* 61,6 ±2,0* 55,0 ±2,0 68,4 ±3,1* 66,3 ±2,9* 73,1 ±3,4* 59,0 ±2,0* 54,0 ±2,4

Ревматоидный артрит 70,0 ±1,8* 64,3 ±1,4* 63,4 ±1,3* 54,5 ±1,7* 52,2 ±1,7 60,6 ±1,5* 61,3 ±1,2* 62,3 ±1,3 54,3 ±1,3 50,9 ±1,3*

ХПН 76.7 ±8,2* 57,9 ±5,9* 59,9 ±4,5* 66,9 ±5,2* 55,6 ±6,9 67,6 ±8,2* 52,3 ±5,6 62,4 ±3,1* 57,6 ±4,2 43,0 ±2,7

Реактивный артрит 54,2 ±3,8 49,7 ±4,8 49,2 ±3,4 55,0 ±1,9 46,7 ±4,4 55,4 ±4,4 52,4 ±4,4 52,5 ±4,2 60,5 ±3,4 42,2 ±3,5

* - значения, которые достоверно (Р<0,05) отличаются от контроля.

Картина БССС в группе II оказалась подобна наблюдаемой в первой группе - существенно пониженный уровень фракции 55 кДа и, как правило, общее обеднение спектра белковыми фракциями. Средняя оптическая плотность фракции 55 кДа составила 0,13±0,01, что несколько выше, чем в группе I, но достоверно ниже (Р<0,05), чем в контроле (таблица 2).

Для добавочной проверки предположения, что депрессивные расстройства сопровождаются уменьшением содержания белка в БССС и особенно в фракции 55 кДа, были исследованы три небольшие дополнительные группы, описанные в разделе «Материалы и методы исследования».

Было обнаружено, что пациенты с реактивным артритом имеют картину БССС подобную контрольной группе, причем средняя оптическая плотность фракции 55 кДа составила 0,16+0,03 единиц. Это согласовы-

валось с показаниями теста ММР1, согласно которому данная группа не имела выраженной депрессии (среднее значение шкалы 2 было равно 49,8±4,8 баллов).

Больные ХПН имели в значительной степени обеднённый БССС со средней оптической плотностью фракции 55 кДа 0,09±0,01 единиц. Значение шкалы депрессии составило 57,9±5,9 баллов. Такое же значение на 9 шкале ММРГ (57,6±4,2 баллов) указывало на одинаковую выра-

Таблица 2. Средние значения оптической плотности фракции 55 кДа в слюне обследованных групп_

Средняя

Группы оптическая плотность фракции 55 кДа в белковых спектрах слюны

Контрольная 0,18 ± 0,02

Афферентные расстройства 0,10 ±0,01*

Ревматоидный артрит 0,13 ±0,01*

Хроническая почечная 0,09 ±0,01*

недостаточность

Реактивный артрит 0,16 ±0,03

Желчно-каменная болезнь 0,08 ± 0,01 * (до операции) 0,10 ± 0,01 * (после операции)

* - значения, которые достоверно (Р<0,05) отличаются от контроля.

женнность как депрессии, так и тревоги, что соответствует субъективному переживанию пациентами тяжести данного заболевания.

Пациенты с желчно-каменной болезнью имели во всех случаях значительно обеднённый БССС. Перед операцией (за один день или непосредственно в день операции) оптическая плотность фракции 55 кДа была 0,08±0,01, а на следующий день после операции - 0,10+0,01 единиц. Психологический профиль личности этих пациентов не оценивался с помощью теста ММР1 по этическим причинам, но очевидно, что, экстраполируя полученные показатели БССС, можно косвенно судить о наличии тревожно-депрессивного состояния у данной группы лиц.

Результаты, полученные при исследовании групп больных с наличием депрессивных расстройств, позволяют сделать следующие заключения.

Усреднённые профили основных опытных групп (аффективные расстройства и РА), сформированные с помощью многопрофильного теста ММР1, показали, что эти группы для исследования подобраны корректно, так как уровень шкалы депрессии в обоих случаях достоверно и значительно превышает контроль, при этом наблюдается соответствующее понижение девятой шкалы профилей, указывающее на преобладание депрессии над тревогой.

В белковых спектрах слюны групп пациентов с депрессией (на фоне аффективных заболеваний, РА, ХПН и желчно-каменной болезни) обнаружено достоверное значительное снижение уровня фракции с ММ 55 кДа, которое хорошо согласуется с показаниями шкалы депрессии теста ММР1. Кроме этого часто имело место обеднение спектра белковыми фракциями по сравнению с контролем, что, по нашему мнению, может служить дополнительным признаком подавленного психоэмоционального состояния.

Наличие (в опытных группах) лиц, как с существенными соматическими патологиями, так и без них, даёт основания предполагать, что изменения белкового спектра слюны имели место именно в связи с психоэмоциональными особенностями (депрессивным расстройством) пациентов.

При этом следует отметить, что если в случае практически здоровых изменение картины БССС связаны, вероятнее всего, с регуляцией (активация или ингибирование) механизмов выброса секреторных гранул с определёнными белками из клеток слюнных желёз, то в случае пациентов с депрессией, которая в отличие от обычных настроений является относительно долго длящимся состоянием, обеднённый состав смешанной слюны может быть следствием ингибирования процессов синтеза определённых белков внутри секреторных клеток слюнных желёз.

Результаты, полученные при изучении как здоровых лиц, так и пациентов с депрессивным расстройством, позволяют говорить о том, что уровень белковой фракции с ММ в области 55 кДа в смешанной слюне

может быть наиболее эффективным индикатором наличия депрессии по сравнению с другими характеристиками белкового спектра.

Для изучения возможности прямого измерения содержания или активности белков, составляющих фракцию с ММ 55 кДа, были проведены исследования их природы.

С помощью гель-фильтрации смешанной слюны на колонке ТБК-3000 было обнаружено, что из области вблизи 55 кДа хорошо изолируется одна белковая полоса.

После дополнительной очистки выделенного белка на хроматогра-фической колонке Уус1ех 300-5-С4было проведено определение первичной структуры (16 аминокислотных остатков) его И-конца с помощью автоматического сиквенатора. Обнаружено, что аминокислотный состав имеет высокую степень гомологии (75%) с определёнными участками первичной структуры белков, относящихся к семейству пролин-обогащённых (ПО) белков слюны человека (рисунок 1).

1 10 55 кДа БРРСдсдОРРСгдОРОО

ПО-пептид SPPG KPQGPPPQGGNQ

Рис. 1. Аминокислотная последовательность N-концов белка с ММ 55 кДа и ПО-пепггида из слюны человека.

Сравнение полученной последовательности с имеющейся в компьютерных библиотеках данных информацией показало, что только основной ПО-пептид (длиной в 61 аминокислоту), синтезируемый околоушными железами, содержит аналогичную последовательность именно на своём N-конце (A.Bennick, 1987). Возможно, что этот пептид является предшественником выделенного нами белка - хорошо известно о существенных модификациях, происходящих в слюне с ПО-белками после секреции в ротовую полость и приводящих к увеличению их молекулярной массы (A.Amano, 1994).

ПО-белки представляют собой гетерогенную группу, включающую более чем 20 белков, которые составляют примерно 70% всех белков человеческой слюны. Они характеризуются большим содержанием про-лина (25-42%), глицина (16-22%) и глутаминовой кислоты/глутамина (15-28%). ПО-белки классифицируются на кислые, основные и гликози-лированные.

Известно, что ПО-белки связывают ионы Са2\ сильно ассоциируются С гидроксиаппатитами, подавляют кристаллизацию кальцин фосфатных солей в слюне (A.Bennick, 1987), ингибируют герпесвирусную инфекцию, препятствуют формированию колоний различных бактерий в ротовой полости (A.Amano, 1994). Эти данные определённо свидетельствуют о важной роли ПО-белков в местном иммунитете.

Наши исследования показали, что у практически здоровых лиц содержание белка в фракции 55 кДа составляло 40-50 % от общего белка в смешанной слюне. Уровень общего белка в слюнном секрете всех изученных лиц изменялся в широком диапазоне - от 0,8 до 1,6 мг/мл. Это может быть обусловлено разными причинами: разницей в уровне общего белка в вырабатываемом секрете; различной активностью протеоли-тических процессов в слюне; преобладанием в слюнном секрете низкомолекулярных белковых веществ, слабо выявляющихся в использованном методе анализа. При этом не было обнаружено достоверной разницы в уровне общего белка в смешанной слюне между группами контроля и пациентов. Наблюдаемое обеднение БССС в опытных группах отражает уменьшение уровня белков только в диапазоне с ММ от 20 до 200 кДа, тогда как вещества белковой природы с ММ < 20 кДа практически не визуализируются в использованном электрофоретическом методе, хотя последние составляют значительную часть слюны.

Измерение амилазной активности в пробах, полученных после гель-фильтрации смешанной слюны, показало её присутствие в белковой фракции с ММ 55 кДа, что подтвердило аналогичный результат K.K.Thomsen et al. (1981). При оценке амилазной активности в смешанной слюне контрольной группы и у пациентов с депрессивными расстройствами между ними не было обнаружено достоверных отличий и существенной корреляции с изменением уровня фракции с ММ 55 кДа.

Это может быть объяснено присутствием в слюне нескольких изофер-ментов амилазы с разными молекулярными массами.

Результаты наших исследований позволяют сделать вывод, что использование количественной оценки белков, идентифицированных в фракции с ММ 55 кДа (пролин-обогащённый белок и амилаза), а также общего белка смешанной слюны для определения депрессивных состояний является нецелесообразным, т.к. выделение и очистка пролин-обогащённого белка представляют собой трудоёмкий и сложный процесс (то же самое и иммуноферментная его оценка), а активность амилазы и уровень общего белка не имеют достоверных отличий между контрольной и опытной группами. Таким образом, наиболее эффективным способом определения уровня фракции 55 кДа является измерение её оптической плотности после электрофореза проб смешанной слюны.

Для корректного использования предложенного нами метода исследования ПЭС необходимо учесть следующие важные моменты. Проведение анализов должно быть строго стандартизировано. Предпочтительно, чтобы прибор для электрофореза имел характеристики, аналогичные или близкие к оборудованию ведущих производителей в этой области: размеры полиакриламидного геля 8x10 см; толщина геля 0,75 мм; использовался 12%-й полиактриламидный гель.

Выводы

1. У конкретного человека в состоянии покоя белковый спектр смешанной слюны постоянен в интервале часы-месяцы. В 98,5% случаев преобладают белки с молекулярной массой в области 55 кДа. Белковый спектр смешанной слюны имеет специфические индивидуальные особенности.

2. Белковый спектр смешанной слюны в течение непродолжительного времени (секунды, минуты) может изменяться, отображая индивидуальные состояния психики: при позитивных психоэмоциональных состояниях увеличением, а при негативных психоэмоциональных состояниях уменьшением фракции с молекулярной массой 55 кДа.

3. У больных с наличием депрессивного синдрома выявлена стереотипная реакция белкового спектра смешанной слюны, включающая

уменьшение белков с молекулярной массой 55 кДа и обеднение белкового спектра.

4. Белковая фракция смешанной слюны с молекулярной массой 55 кДа включает пролин-обогащённый белок и белок с амилазной активностью.

5. Для диагностики депрессивных расстройств целесообразно использовать метод электрофореза белков смешанной слюны с последующим определением оптической плотности белковой фракции с молекулярной массой 55 кДа.

Научно-практические рекомендации

1. Анализ белкового спектра смешанной слюны может иметь важное значение для определения групп риска в отношении аффективных заболеваний, в частности депрессий. В этой связи метод может быть рекомендован для использования при массовых профилактических обследованиях населения, а также при поступлении пациентов в клиники психиатрического и общего профиля. Существенным при этом являются возможности метода: простота взятия проб смешанной слюны, проведение анализа одновременно нескольких десятков образцов, относительно высокая скорость получения предварительного результата (3-4 часа) и простота его оцекки.

2. Метод может быть ценным при необходимости объективного наблюдения за психоэмоциональным состоянием пациентов, находящихся на стационарном лечении.

3. Изучение особенностей белкового спектра смешанной слюны может быть рекомендовано для фундаментальных исследований психики человека как высокоинформативный метод.

4. Метод может быть рекомендован для внедрения в учебный процесс в медицинских ВУЗах (кафедры биохимии, психиатрии, физиологии, эндокринологии), так как позволяет исключительно наглядно демонстрировать влияние психики на физиологию в организме человека.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Григорьев И.В., Гриц Д.Н., Трофимова Т.Г. и др. Психоэмоциональная компонента в регуляции секреторной деятельности слюнных желйз // Актуальные вопросы современной биологии и медицины: Сб. научных трудов. - Витебск, 1997. - С. 64-67.

2. Григорьев И.В. Использование слюны для диагностики психоэмоционального состояния // Тез. межд. конф. Неинвазивная диагностика. - Москва, 1997. - С. 47.

3. Григорьев И.В., Чиркин A.A. Слюна как предмет лабораторной диагностики // Медицинские новости /Беларусь/. - 1998. - № 6. - С. 34-37.

4. Григорьев И.В., Чиркин A.A. Роль биохимического исследования слюны в диагностике заболеваний // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - № 6. - С. 1820.

5. Григорьев И.В., Новикова И.А., Уланова Е.А. и др. Некоторые биохимические показатели смешанной слюны у больных ревматоидным артритом И Теоретические и практические аспекты медицины: Сб. научных трудов. - Витебск, 1998. - С. 36-38.

6. Григорьев И.В., Артамонов И.Д. Использование слюны человека для оценки депрессивных состояний // Паллиативная медицина и реабилитация в здравоохранении.: Тез. докл. 2-го межд. коигр. - Москва, 1998. С. 47.

7. Григорьев И.В. Депрессивное состояние психики значительно уменьшает содержание белковой фракции с молекулярной массой 50-55 кДа в смешанной слюне человека // Проблеммы современной медицины и фармации: Tel докл. конф. - Вите век, 1998.-С.64.

8. Григорьев И.В. Депрессивное состояние психики снижает уровень пролин-обогащённого белка в слюпе человека // Медицинская наука и её связь с практическим здравоохранением: Тез. докл. конф. - Витебск, 1998. - С. 27.

9. Уланова Е.А., Григорьев И.В., Новикова И.А. Тревожные расстройства как психологические особенности личности больных ревматоидным артритом // Терапевтический архив. - 2000 (в печати).

10. Новикова И.А., Григорьев И.В., Уланова Е.А. Исследование смешанной слюны как мониторинг больных ревматоидным артритом // Республиканская конференция, посвященная 65-летиюВГМИ: Тез. докл. -Витебск, 1999.-С. 71.

11. Григорьев И.В., Уланова Е.А. Белковый спектр слюны при депрессивных состояниях у пациентов с некоторыми патологиями // Вопросы экспериментальной биологии и медицины: Сб. научных трудов. - Витебск, 1999. - С. 15-17.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Григорьев, Игорь Владимирович

Введение.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Слюна как предмет лабораторной диагностики.

1.1.1. Биохимический состав слюны.

1.1.2. Механизмы регуляции состава слюны.

1.1.3. Использование слюнного секрета для диагностических целей

1.1.4. Влияние психики на состав слюны.

1.2. Депрессивные расстройства и методы их тестирования.

1.2.1. Характеристика депрессивных расстройств.

1.2.2. Методы тестирования депрессивных заболеваний.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Анализ белкового спектра смешанной слюны.

2.1.1. Получение препаратов смешанной слюны.

2.1.2. Электрофорез белков смешанной слюны.

2.1.3. Денситометрический анализ электрофореграмм.

2.2. Количественная оценка общего белка в слюне.

2.3. Оценка активности амилазы.

2.4. Выделение реперных белков.

2.5. Определение природы реперных белков.

2.5.1. Аминокислотный анализ реперного белка.

2.5.2. Определение природы белка.

2.6. Количественная оценка содержания реперных белков в слюне.

2.7. Тестовая оценка депрессивных состояний.

2.8. Статистическая обработка данных.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Особенности белкового спектра смешанной слюны у здоровых лиц.

3.1.1. Разнообразие белковых спектров смешанной слюны.

3.1.2. Динамика белкового спектра смешанной слюны отдельного человека в течение дня.

3.1.3. Белковый спектр смешанной слюны в отсутствии изменений психоэмоционального состояния.

3.1.4. Влияние полярных психоэмоциональных состояний на белковый спектр смешанной слюны.

Позитивные психоэмоциональные состояния.

Негативные психоэмоциональные состояния.

3.1.5. Характеристика белкового спектра смешанной слюны после обморока.

3.1.6. Обсуждение и предварительные выводы.

3.2. Особенности белкового спектра смешанной слюны пациентов с депрессивным синдромом.

3.2.1. Характеристики основной контрольной группы.

3.2.2. Характеристика основных групп пациентов с депрессией.

Аффективные расстройства.

Ревматоидный артрит.

3.2.3. Характеристика дополнительных групп.

Реактивный артрит.

Хроническая почечная недостаточность.

Желчно-каменная болезнь.

3.2.4. Обсуждение и предварительные выводы.

3.3. Характеристика белков, формирующих в смешанной слюне фракцию с молекулярной массой 55 кДа.

3.3.1. Выделение белковой фракции 55 кДа.

3.3.2. Очистка и определение природы белков, формирующих фракцию 55 кДа.

3.3.3. Количественная оценка содержания пролин-обогащённого белка в фракции 55 кДа и общего белка в смешанной слюне.

3.3.4. Измерение амилазной активности.

3.3.5. Обсуждение и предварительные выводы.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика и диагностическое значение белков смешанной слюны при депрессивных расстройствах"

Актуальность проблемы. Одной из важных проблем современной биохимии является отсутствие достаточно чувствительных методов объективной диагностики нарушений высшей нервной деятельности и, в частности, депрессивных расстройств. Особое значение эта проблема приобретает в связи с интенсивным ростом числа пациентов с различными формами депрессии. Предполагается, что в первые десятилетия XXI века депрессия выйдет на второе место после сердечно-сосудистых заболеваний как причина утраты трудоспособности среди населения. Около 15% населения развитых стран когда-либо на протяжении своей жизни имели классические формы депрессивных расстройств (Холмогорова А.Б., Гаранок Н.Г., 1998). С другой стороны, считается, что от наиболее трудно выявляемой формы депрессии, так называемой скрытой, страдают в тот или иной период жизни до 25% населения земного шара (Demel А., 1973). Причём ситуация с пациентами, болеющими скрытыми формами депрессии, создаёт не только медицинскую, но и серьёзную экономическую проблему, т.к. такие больные (из-за частых ложно соматических симптомов) отнимают много времени: проходят всевозможные дорогостоящие обследования, получают разные виды лечения, занимают место в стационаре, пока, наконец, часто спустя месяцы и годы, не попадут на приём к психиатру. Позднее распознавание подобных состояний таит в себе также и определённую опасность, ибо больные скрытой депрессией часто обнаруживают тенденцию к суицидам (Десятников В. Ф., 1979).

В настоящее время на практике для диагностики депрессивных расстройств используется преимущественно клинический опыт врача-психиатра и при необходимости специальные психологические тесты, однако эти подходы так или иначе подвержены определённому влиянию субъективных оценок пациента и врача. Существующий биохимический метод с использованием дексаметазонового теста имеет значительные недостатки (относительно невысокие чувствительность и специфич6 ность; длительность теста; инвазивность и др.), что затрудняет его внедрение в практику.

В этой связи продолжается поиск таких биологических маркеров, которые могли бы эффективно отражать состояние психики человека. Большое внимание исследователей в последние годы привлекает изучение корреляционных зависимостей между биохимическим составом слюнного секрета и особенностями психической деятельности. Так, обнаружено, что различные виды психологического стресса изменяют содержание разных биохимических веществ в слюне человека (Okumura Т. et al., 1997; Clow A. et al., 1997; Smith-Hanrahan S., 1997). Эти данные подтверждают, что слюна является чутким индикатором текущего состояния нервной системы. Как известно, этот факт был впервые зафиксирован ещё в начале XX века в опытах академика И.П.Павлова.

В целом ряде работ российских учёных было показано, что депрессивные расстройства сопряжены со значительными сдвигами в активности вегетативной нервной системы (Протопопов В.П., 1948; Каменская В.М., 1982). Последняя, как известно, регулирует функционирование слюнных желёз (Бабаева А.Г., Шубникова Е.А., 1979). Поэтому представляет большой научный и практический интерес исследовать качественные и количественные изменения в биохимическом составе слюны и произвести отбор показателей, которые могли бы быть носителями информации о депрессивном состоянии психики человека.

В этом отношении слюна является очень удобным объектом для таких наблюдений по причине целого ряда преимуществ: неинвазивность метода, возможность взятия проб в любое время, неограниченная частота взятия проб и т.п.

Как известно, важнейшими элементами секреторной деятельности слюнных желёз являются вещества белковой природы. До сих пор при изучении психической активности оценивались уровни только отдельных веществ слюны белковой природы (Okumura Т. et al., 1997; Clow А. et al., 1997; Smith-Hanrahan S., 1997). Мы предполагаем, что гораздо бо7 лее плодотворным может быть наблюдение одновременно целого ряда белковых компонентов в виде картины белкового спектра слюны. С технической точки зрения это также выгодно, т.к. анализ белкового спектра слюны можно эффективно проводить с помощью традиционных методов белковой химии и, в частности, вертикального электрофореза в полиакриламидном геле.

При этом представляется целесообразным изучить особенности белкового спектра не «чистой», а смешанной слюны, или ротовой жидкости, что является существенным по следующим причинам: а) смешанная слюна несёт в себе, так сказать, интегрированный результат, отражающий особенности функционирования разных слюнных желёз, что позволяет иметь возможность получения наибольшей биологической информации при анализе именно этого вида слюны; б) использование смешанной слюны является более удобным , чем слюны отдельных желёз, в медицинской практике (отсутствие необходимости в специальных приспособлениях для взятия чистой слюны, максимальная стерильность для пациента и врача при взятии проб и т.д.).

Цель исследования. Целью настоящей работы является отбор определённых показателей белкового спектра смешанной слюны (БССС), наиболее эффективно отражающих наличие депрессивных расстройств.

Основные задачи исследования. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить особенности белкового спектра смешанной слюны у здоровых лиц в относительно нейтральном психоэмоциональном состоянии (ПЭС) и на фоне полярных эмоций.

2. Исследовать особенности белкового спектра смешанной слюны у пациентов с депрессивными расстройствами.

3. Определить возможность количественной оценки белковых компонентов смешанной слюны, уровень которых наиболее показательно меняется на фоне депрессивных расстройств. 8

Научная новизна исследования. Обнаружено, что изменение ПЭС у здоровых лиц определённым образом отражается на картине БССС. При этом полярные ПЭС имеют свои характерные картины БССС: позитивные ПЭС сопровождаются обогащением БССС фракциями, негативные - обеднением.

Показано, что у пациентов с депрессивным синдромом, независимо от того, является ли основная причина патологического состояния психической или соматической природы, наблюдается устойчивое обеднение БССС относительно здорового контроля.

Установлено, что наиболее эффективно и достоверно наличие депрессивного расстройства отражается на уровне фракции БССС с молекулярной массой (ММ) в области 55 кДа, концентрация которой отчётливо уменьшается в ответ на депрессию. С помощью методов аналитической биохимии обнаружено, что в формировании этой фракции принимает участие пролин-обогащённый белок. Показано, что наиболее целесообразным методом оценки уровня фракции 55 кДа является определение её оптической плотности после электрофореза слюны.

Практическая ценность работы. Предложен высокоинфомативный метод для изучения психической активности человека с помощью средств аналитической биохимии. Предложен эффективный биохимический метод для определения наличия депрессивного расстройства. Простота метода позволяет говорить о том, что он может найти важное приложение в медицинской практике.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Белковый спектр смешанной слюны подвержен существенному влиянию психоэмоционального состояния.

2. Депрессивные эпизоды у здоровых людей сопровождаются снижением концентрации фракций и их количества в белковом спектре смешанной слюны. 9

3. Белковый спектр смешанной слюны у пациентов с аффективными расстройствами при психических и соматических заболеваниях значительно обеднён фракциями.

4. Уровень белковой фракции смешанной слюны с молекулярной массой 55 кДа является наиболее эффективным показателем депрессивного расстройства.

По теме диссертации опубликовано 11 работ.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 87 страницах машинописи и состоит из введения, общей характеристики работы, обзора литературы, объектов и методов исследования, трёх разделов с описанием собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и научно-практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 6 таблицами и 18 рисунками. Список литературы состоит из 153 источников, в том числе 28 на русском и 125 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Григорьев, Игорь Владимирович

ВЫВОДЫ

1. У конкретного человека в состоянии покоя белковый смешанной состав слюны постоянен в интервале часы-месяцы. В 98,5% случаев преобладают белки с молекулярной массой в области 55 к Да. Белковый состав смешанной слюны имеет специфические индивидуальные особенности.

2. Белковый состав смешанной слюны в течение непродолжительного времени (секунды, минуты) может изменяться, отображая индивидуальные состояния психики: при при позитивных психоэмоциональных состояниях увеличением, а при негативных психоэмоциональных состояних уменьшением белковой фракции с молекулярной массой 55 кДа.

3. У больных с наличием депрессивного синдрома выявлена стереотипная реакция белкового спектра смешанной слюны, включающая уменьшение белков с молекулярной массой 55 кДа и обеднение белкового спектра.

4. Белковая фракция смешанной слюны с молекулярной массой 55 кДа включает пролин-обогащённый белок и белок с амилазной активностью.

5. Для диагностики депрессивных расстройств целесообразно использовать метод электрофореза белков смешанной слюны с последующим определением оптической плотности белковой фракции с молекулярной массой 55 кДа.

70

Научно-практические рекомендации

1. Анализ белкового спектра смешанной слюны может иметь важное значение для определения групп риска в отношении аффективных заболеваний, в частности депрессий. В этом отношении метод может быть рекомендован для использования при массовых профилактических обследованиях населения (диспансеризации), а также при поступлении пациентов в клиники психиатрического и общего профиля. Существенным при этом являются возможности метода: простота взятия проб смешанной слюны, проведение анализа одновременно нескольких десятков образцов, относительно высокая скорость получения предварительного результата (3-4 часа) и простота его оценки.

2. Метод может быть ценным при необходимости объективного наблюдения за психоэмоциональным состоянием пациентов, находящихся на стационарном лечении.

3. Изучение особенностей белкового спектра смешанной слюны может быть рекомендовано для фундаментальных исследований психики человека как высокоинформативный метод.

4. Метод может быть рекомендован для внедрения в учебный процесс в медицинских ВУЗах (кафедры биохимии, психиатрии, психологии, эндокринологии) как исключительно наглядно демонстрирующий влияние психики на физиологию в организме человека.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Григорьев, Игорь Владимирович, Смоленск

1. Артемонова Р.Н. Возрастные особенности белкового состава слюны в норме // Стоматология. - 1978. - Т. 57. - № 4. - С. 93-94.

2. Бабаева А. Г., Шубникова Е. А. Структура, функция и адаптивный рост слюнных желез. М.: Московский университет, 1979. - 190 с.

3. Березин Ф.Б., Мирошников М.П., Рожанец Р.Б. Методика многостороннего исследования личности в клинической медицине и психогигиене. М.: Медицина, 1976. - 186 с.

4. Грошиков М.И., Староселъцева JI.K., Пожарицкая М.М. Исследование белковых фракций слюны при пародонтозе // Стоматология. 1977. -Т. 56, №5. - С. 28-31.

5. Десятников В.Ф. Соматовегетативные маски депрессии. // Клиническая медицина. 1979. - Т.9. - С. 100-104.

6. Десятников В.Ф., Сорокина Т.Т. Скрытая депрессия в практике врачей. Минск: Вышейшая школа, 1981. - 240 с.

7. Заболотных В.А., Иезуитова Н.Н., Кассиль В.Г. Пищеварение в полости рта. Руководство по физиологии. Физиология пищеварения. -Л.: 1974-С. 136-155.

8. Кадиров Ш.К., Бутабаев М.Т., Давронов Л.В. Эмоциональное напряжение и спектр ферментов слюнных желёз // Тез. Всесоюзной науч. конф. Нейрогуморальные механизмы регуляции висцеральных систем. -Томск, 1989.-С. 45-46.

9. Каменская В.М., Михайлова Е.С. Изучение соотношений электроэнцефалографических и вегетативных показателей в стрессовой ситуации у больных с различными типами депрессий // Журн. невропатологии и психиатрии. 1982. - Т. 82, № 9. - с. 57-62.

10. Каплан Г.И., Сэдок Б.Дж. Клиническая психиатрия. Из синопсиса по психиатрии. 2 т. Пер. с анг. М.: Медицина, 1994. - 672 с.72

11. Лаврецкая Э.Ф., Тенидиева В.Д., Лаврецкая Г.И. Гормональный профиль больных при депрессиях // Журн. невропатологии и психиатрии. 1987. - Т. 87, № 4. - С. 555-558.

12. Левицкий А.П. Пищеварительные ферменты слюнных желёз: Авто-реф. дис. канд. биол. наук. Одесса, 1974. -21 с.

13. Луканина С.К. Дексаметазоновый тест и клиника депрессивных состояний (обзор) // Журн. невропатологии и психиатрии. 1986. - Т. 86. -№ 9. - С. 1417-1427.

14. Лукаш И.А., Внуков В.В., Кучеренко А.О. и др. Свободнорадикаль-ные процессы в слюне людей при эмоциональном стрессе // Физиология человека. 1997. - Т. 23, № 6. - С. 106-109.

15. Маркова М.Н., Смирнова Л.К., Прохорова И.С. Исследование межсистемных гормональных взаимосвязей у больных депрессией // Журн. невропатологии и психиатрии. 1989. - Т. 89, № 4. - С. 105-110.

16. Наикин А.Н., Михайлов А.А., Кустикова Ю.Г. и др. Использование слюны для изучения в иммунодефицитном анализе поствакционально-го и постинфекционного иммунитета к гриппу // Вопр. вирусологии. -1993.-Т. 38,№5.-С. 201-204.

17. Пожарицкая М.М., Старосельцева Л.К., Грошиков М.И. Исследование белковых фракций слюны человека // Стоматология. 1975. - Т. 54, №5. -С. 14-17.

18. Пожарицкая М.М., Старосельцева Л.К., Князева А.П. Белковые фракции слюны у больных синдромом Шегрена // Стоматология. -1985.-Т. 64,№4.-С. 13-14.

19. Покидова Н.В., Бабаян С.С., Журавлёва Т.П., Ермольева З.В. Химические и физико-химические свойства лизоцима человека // Антибиотики. 1974. - Т.19. - С. 721-724.73

20. Протопопов В.П. Соматическая характеристика маниакально-депрессивного психоза // Невропатология и психиатрия. 1948. - Т. 4. -С. 57-64.

21. Саградян A.JI. Изменение общего белка и белковых фракций в секрете слюнных желёз у больных вирусным гепатитом // Сообщ. АН Груз. ССР. 1975. - Т. 80, № 1. - С. 209-212.

22. Сукманский О.И. Биологически активные вещества слюнных желез. -Киев: Здоровье, 1991. 111 с.

23. Татаринов Ю.С., Тагорова А.К., Терентьев А.А. Иммунологическое определение бета-глобулина в семинальной плазме человека // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1990. - Т. 110. - С. 469-71

24. Темирбаев М.А., Хасенова Б.Д. Электрофоретическое исследование белков секрета слюнных желёз человека // Здравоохранение Казахстана. -1982.-№ 8. С. 51-54.

25. Удут В.В., Наумов С.А., Карпов А.Б. и др.// Вопр. онкологии. -1992. -Т. 38, №2. -С. 177-181.

26. Шараев П.Н., Рябов В.И., Гумиярова Г.К. и др. Определение свободной и связанной форм сиаловых кислот в биологических объектах // Клиническая лабораторная диагностика. 1993. - Т. 4. - С. 44-46.

27. Aguirre A., Testa-Weintraub L.A., Banderas J.A. et al. Sialochemistry: a diagnostic tool? // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1993. - V. 4, № 3.4. p. 343. 350.74

28. Akiyama К., Kimura H. Isolation of a new actin-binding protein from human seminal plasma. // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - V. 1040. - P. 206-210.

29. Amano A., Sojar N.T., Lee J.Y. et al. Salivary receptors for recombinant fimbrillin of Porphiromonas gingivalis. // Infect. Immun. 1994. - V. 62, № 8.-P. 3372-3380.

30. Azen E.A., Kim H.S., Goodman P. et al. Alleles at the PRH1 locus coding for the human salivary-acidic prolin-rich proteins Pa, Db, and PIF // Am. J. Hum. Genet. 1987. - V. 41. - P. 1035-1047.

31. Babu J.P., Beachey E.H., Hasty D.L. et al. Isolation and characterization of a 60-kilodalton salivary glycoprotein with agglutinating activity against strains of Streptococcus mutans // Infect. Immun. 1986. - V. 51. -P. 405-413.

32. Babu J.P., Beachey E.H., Simpson W.A. Inhibition of the interaction of Streptococcus sanguis with hexadecane droplets by 55- and 60-kilodalton hydrophobic proteins of human saliva // Infect. Immun. 1986. - V. 53, № 2. - P. 278-284.

33. Babu J.P., Dabbous M.K., Abraham S.N. Isolation and characterization of a 180-kiloDalton salivary glycoprotein which mediates the attachment of Actinomyces naeslundii to human buccal epithelial cells // J. Periodontal. Res. 1991.-V. 26.-P. 97-106.

34. Baum В .J., Dai Y., Hiramatsu Y. et al. Signalling mechanisms that regulate saliva formation. // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1993. - V. 4. - P. 379384.

35. Ben-Aryeh H., Gordon N., Szargel R. et al. Whole saliva in systemic lupus erythematosus patients // Oral. Surg. Oral. Med. Oral. Pathol. 1993. -V. 75. - P. 696-699.

36. Bennick A. Structural and genetic aspects of proline-rich proteins // J. Dent. Res. 1987. - V. 66. - P. 457.75

37. Bergler W., Petroianu G., Metzler R. Disminucion del factor de cre-cimiento epidermico en la saliva en pacientes con carcinoma de la orofar-inge // Acta Otorinolaringol. Esp. 1992. - V. 43. - P. 173-175.

38. Bradford M.M. Rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantitative of protein utilizing dry binding // Anal. Biochem. -1976.-P. 248-254.

39. Brummer-Korvenkontio H., Lappalainen P., Reunala Т., Palosuo T. Detection of mosquito saliva-specific IgE and IgG4 antibodies by immunoblot-ting // J. Allergy Clin. Immunol. 1994. - V. 93. - P. 551-555.

40. Clow A., Patel S., Najafi M. The Cortisol response to psychological challenge is preceded by a transient rise in endogenous inhibitor of monoamine oxidase // Life Sci. 1997. - V. 61, № 5. - P. 567-575.

41. Dasberg H, Assael M. // Dis. Nerv. Syst. 1968. - V. 29. - P. 399-404.

42. Da-Silva M.V., Dias-Camargo E., Vaz A.J., Batista L. Immunodiagnosis of human leptospirosis using saliva // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. -1992. V. 86, №5.-P. 560-561.

43. Davies R.H., Harris В., Thomas D.R. et al. Salivary testosterone levels and major depressive illness in men // Br. J. Psychiatry. 1992. - V. 161. - P. 629-632.

44. Demel H. Maskedepression. Stutigard-Vienna, 1973. - P. 247-252.

45. Demuth D.R., Davis C.A., Corner A.M. et al. Cloning and expression of a Streptococcus sanguis surface antigen that interacts with a human salivary agglutinin // Infect. Immun. 1988. - V. 56. - P. 2484-2490.

46. Edman P. Protein sequence determination. Berlin: Springer, 1975. - P. 232-279.

47. Evans P., Bristow M., Hucklebridge F. et al. The relationship between secretory immunity, mood and life-events // Br. J. Clin. Psychol. 1993. - V. 32. - P. 227-236.

48. Fekete Z., Korec R., Feketeova E. et al. Salivary and plasma insulin levels in man // Biochem. Mol. Biol. Int. 1993. - V. 30. - P. 623-629.

49. Fisher S.J., Prakobphol A., Kajisa L., Murray P.A. External radiolabel-ling of components of pellicle on human enamel and cementum // Arch. Oral. Biol. 1987. - V. 32. - P. 509-517.

50. Gasior-Chrzan В., Falk E.S. Lysozyme and IgA concentrations in serum and saliva from psoriatic patients // Acta Derm. Venereol. 1992. - V. 72. -P. 138-140.

51. Gehris T.L., Kathol R.G. Comparison of time-integrated measurement of salivary corticosteroids by oral diffusion sink technology to plasma Cortisol // Endocr. Res. 1992. - V. 18. - P. 77-89.

52. Goldberg D. G., Tappin D. M., Cameron S. et al. Saliva and HIV testing // Lancet. 1993. - V. 341, № 8841. - P. 382.

53. Grander D.A., Weisz J.R., Kauneckis D. Neuroendocrine reactivity, internalizing behavior problems, and control-related cognitions in clinic-referred children and adolescents // J. Abnorm. Psychol. 1994. V. 103, № 2. - P. 267-276.

54. Haeckel R., Hanecke P. The application of saliva, sweat and tear fluid for diagnostic purposes // Ann. Biol. Clin. Paris. 1993. V. 51, № 10-11. - P. 903-910.

55. Hajeer A.H., Balfour A.H., Mostratos A., Crosse B. Toxoplasma gondii: detection of antibodies in human saliva and serum // Parasite Immunol. -1994-V.16.-P. 43-50.77

56. Hakeem V., Fifield R., al-Bayaty H.F. et al. Salivary IgA antigliadin antibody as a marker for coeliac disease // Arch. Dis. Child. 1992. - V. 67, № 6. - P. 724-727.

57. Hasty D.L., Simpson W.A. Effects of fibronectin and other salivary macromolecules on the adherence of Escherichia coli to buccal epithelial cells // Infect. Immun. 1987. - V. 55. - P.2103-2109.

58. Henskens Y.M., van-der-Weijden F.A., van-den-Keijbus P.A. et al. Effect of periodontal treatment on the protein composition of whole and parotid saliva // J. Periodontal. 1996. - V. 67. - P. 205-212.

59. Ichikawa S., Tsukano K., Ito A. et al. Studies on the usefulness of saliva for detection of antibodies to HIV-1 // Kansenshogaku Zasshi. 1993. - V. 67, № 10.-P. 1031-1037.

60. Ino M., Ushiro K., Ino C. et al. Kinetics of epidermal growth factor in saliva//Acta Otolaryngol. Suppl. Stockh. 1993. - V. 500. - P. 126-130.

61. Isemura S., Saitoh E., Sanada K. Characterization of a new cysteine proteinase inhibitor of human saliva, cystatin SN, which is immunologically related to cystatin S // FEBS Lett. 1986. - V. 198. - P. 145-149.

62. Jensen J.L., Xu Т., Lamkin M.S. et al. Physiological regulation of the secretion of histatins and statherins in human parotid saliva // J. Dent. Res. -1994.-V. 73.-P. 1811-1817.78

63. Jenzano J.W., Su H.W., Featherstone G.L., Lundblad R.L. Molecular diversity of tissue kallikrein in human saliva // Agents. Actions. Suppl. -1992.-№38.-P. 137-144.

64. Kajisa L., Prakobphol A., Schiodt M., Fisher S.J. Effect of plasma on composition of human enamel and cementum pellicle // Scand. J. Dent. Res. 1990.-V. 98.-P. 461-471.

65. Kanehisa J., Doi S., Yamanaka Т., Takeuchi H. Salivary flbronectin in man: an immunoblotting, radioimmunoassay and immunohistochemical study // Arch. Oral. Biol. -1991. V. 36. - P. 265-272.

66. Kauffman D., Hofmann Т., Bennick A., Keller P. Basic proline-rich proteins from human parotid saliva: complete covalent structures of proteins IB-1 and IB-2 // Biochemistry. 1986. - V. 25. - P. 2387-2392.

67. Kauffman D., Wong R., Bennick A. Basic prolin-rich proteins from human parotid saliva: complete covalent structure of protein IB-9 and partial structure of protein IB-6, members of a polymorphic pair // Biochemistry. -1982.-V. 21.-P. 6558.

68. Kim H.S., Maeda N. Structures of two Haelll-tipe genes in the human salivary proline-rich protein multigene family // J. Biol. Chem. 1986. - V. 261.-P. 6712-6718.

69. Kirkpatrick S.W., Campbell P.S., Wharry R.E., Robinson S.L. Salivary testosterone in children with and without learning disabilities // Physiol. Be-hav. 1993. - V. 53. - № 3. - P. 583-586.

70. Kirschbaum C., Wust S., Hellhammer D. // Psychosom. Med. 1992. -V. 54, № 6. - P. 648-657.

71. Kirstila V., Tenovuo J., Ruuskanen O. et al. Salivary defense factors and oral health in patients with common variable immunodeficiency // J. Clin. Immunol. 1994. - V. 14. - P. 229-236.

72. Kishimoto E., Hay D.I., Kent R. Polymorphism of submandibular-sublingual salivary proteins which promote adhesion of Streptococcus mu79tants serotype-c strains to hydroxyapatite I I J. Dent. Res. 1990. - V. 69. - P. 1741-1745.

73. Kraines S. Mental depression and their treatment. New York, 1957. -112 p.

74. Kugler J., Hess M., Haake D. Secretion of salivary immunoglobulin A in relation to age, saliva flow, mood states, secretion of albumin, Cortisol, and catecholamines in saliva // J. Clin. Immunol. 1992. - V. 12. - P. 45-49.

75. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. - V. 227. - P. 680-684.

76. Lamkin M.S., Oppenheim F.G. Structural features of salivary function // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1993. - V. 4, № 3-4. - P. 251-259.

77. Levine M.J., Reddy M.S., Tabak L.A. et al. Structural aspects of salivary glycoproteins // J. Dent. Res. 1987. - V. 66. - P. 436-441.

78. Lundy F.T., Al-Hashimi I., Rees T.D., Lamey P.J. Evaluation of major parotid glycoproteins in patients with burning mouth syndrome // Oral. Surg. Oral. Med. Oral. Pathol. Oral. Radiol. Endod. 1997. - V. 83. - P. 252258.

79. Lyons K.M., Azen E.A., Goodman P.A., Smithies O. Many protein products from a few loci: assignment of human salivary proline-rich proteins to specific loci // Genetics. 1988. - V. 120. - P. 255-265.

80. Mackinnon L.T., Hooper S. Mucosal (secretory) immune system responses to exercise of varying intensity and during overtraining // Int. J. Sports Med. 1994. - V. 3. - P. 179-183.

81. Maeda N., Kim H.S., Azen E.A., Smithies O. Differential RNA splicing and post-translational cleavages in the human salivary proline-rich protein gene system // J. Biol. Chem. 1985. - V. 260. - P. 11123-11130.

82. Makela M., Salo Т., Uitto V.J., Larjava H. Matrix metalloproteinases (MMP-2 and MMP-9) of the oral cavity: cellular origin and relationship to periodontal status // J. Dent. Res. 1994. - V. 73. - P. 1397-1406.80

83. Martin R.B., Guthrie C.A. Pitts C.G. Emotional crying, depressed mood, and secretory immunoglobulin A // Behav. Med. 1993. - V. 19, № 3. - P. 111-114.

84. Mayer-Gross W., Slater E., Roth M. // Clinical psychiatry. London, 1954.-96 p.

85. Mednieks M.I., Epstein P.M., Hachisu R. et al. Cyclic AMP-reactive proteins in human saliva // Arch. Oral. Biol. 1994. - V. 39. - P. 869-875.

86. Medof M.E., Walter E.I., Rutgers J.L., Knowles D.M., Nussenzweig V. Identification of the complement decay-accelerating factor (DAF) on epithelium and glandular cells and in body fluids // J. Exp. Med. 1987. - V. 165. P. 848-864.

87. Minakata K., Asano M. New protein inhibitors of cysteine proteinases in human saliva and salivary glands // Hoppe. Seylers Z. Physiol. Chem. -1984. V. 365, № 3. - P. 399-403

88. Moghissi K.S. Ovulation detection // Endocrinol. Metab. Clin. North. Am. 1992. - P. 21, № 1. - p. 39-55.

89. Mogi M., Harada M., Kage T. et al. Two-dimensional electrophoresis of human salivary proteins from patients with sialoadenopathy // Arch. Oral. Biol. 1993. - V. 38, № 12. - P. 1135-1139.

90. Moran M.J., Santos J.L., Fontanellas A. et al. Salivary porphyrin concentration in porphyria cutanea tarda // J. Dermatol. Sci. 1993. - V. 6, № 2. -P. 155-158.

91. Muller F., Holberg-Petersen M., Rollag H. et al. Nonspecific oral immunity in individuals with HIV infection // J. Acquir. Immune. Defic. Syndr. 1992.-V. 5, № i. p. 46-51.

92. Musumeci V., Cherubini P., Zuppi C. et al. Aminotransferases and lactate dehydrogenase in saliva of diabetic patients // J. Oral. Pathol. Med. -1993.-V. 22, №2.-P. 73-76.81

93. Neuhaus T.J., Shah V., Barratt T.M. Salivary excretion of endogenous proteins in nephrotic syndrome in children // Pediatr. Nephrol. 1997. - V. 11, №4. -P. 411-414.

94. Nieuw-Amerongen A.V., Strooker H., Oderkerk C.H. et al. Changes in saliva of epileptic patient // J. Oral. Pathol. Med. 1992. - V. 21, № 5. - P. 203-208.

95. Nigg H.N., Wade S.E. Saliva as a monitoring medium for chemicals // Rev. Environ. Contam. Toxicol. 1992. - V. 129. - P. 95-119.

96. Oberg S.G., Izutsu K.T., Truelove E.L. Human parotid saliva protein composition: dependence on physiological factors // Am. J. Physiol. 1982. V. 242, №3.-G231-236.

97. Ogawa Y., Hong S.S., Toyosawa S. et al. Imunoelectron microscopy of carbonic anhydrase isozyme VI in human submandibular gland: comparison with isozymes I and II // J. Histochem. Cytochem. 1993. - V. 41, № 3. - P. 343-351.

98. Oho Т., Rahemtulla F., Mansson R. В., Hjerpe A. Purification and characterization of a glycosylated proline-rich protein from human parotid saliva // Int. J. Biochem. 1992. - V. 24, № 7. - P. 1159-1168.

99. Okumura Т., Nakajima Y., Matsuoka M. et al. Study of salivary catecholamines using fully automated column-switching high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. Biomed. Appl. 1997. - V. 694, № 2. -P. 305-316.

100. O'Sullivan J.M., Cannon R.D., Sullivan P.A. et al. Identification of salivary basic prolin-rich proteins as receptors for Candida ablicans adhesion // Microbiology. 1997. - V. 143. - P. 341.

101. Parris W.C., Sastry B.V., Kambam J.R. et al. Immunoreactive substance P in human saliva. A possible marker of chronic pain // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1993. - V. 694. - P. 308-310.82

102. Perinpanayagam H.E., Van-Wuyckhuyse B.C., Ji Z.S., Tabak L.A. Characterization of low-molecular-weght peptides in human parotid saliva // J. Dent. Res. 1995. - V. 74, № 1. - P. 345-350.

103. Piacentini S.C., Thieme T.R., Beller M., Davidson S.L. Diagnosis of hepatitis A, B, and С using oral samples // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1993.- V. 694. - P. 334-336.

104. Pikula D.L., Harris E.F., Dasiderio D.M. et al. Methionine enkephalin-like, substance P-like, and beta-endorphin-like immunoreactivity in human parotid saliva // Arch. Oral. Biol. 1992. - V. 37, № 9. - P. 705-709.

105. Piotrowski J., Czajkowski A., Murty V.L. et al. Identification of human salivary protease activity toward mucin: differences with caries // Bio-chem. Int. 1992. - V. 28, № 5. - P. 939-947.

106. Pollit J. // Practitioner. 1958. - V. 1081. - P. 72-78.

107. Price P.A., Rice J.S., Williamson M.K. Conserved phosphorylation of serines in the Ser-X-Glu/Ser (P) sequences of the vitamin K-dependent matrix Gla protein from shark, lamb, rat, cow, and human // Protein Sci. 1994. - V. 3, № 5. - P. 822-830.

108. Rahim Z.H., Yaakob H.B. Electrophoretic detection of salivary alpha-amylase activity // J. Nihon. Univ. Sch. Dent. 1992. V. 34, № 4. - P.273-277.

109. Rammasubbu N., Reddy M.S., Bergey E.J. et al. Large-scale purification and characterization of the major phosphoproteins and mucins of human submandibular-sublingular saliva // Biohem. J. 1991. - V. 280. - P. 341-352.

110. Rathman W.M., van-den-Keybus P.A., van-Zeyl M.J. et al. Localization of mucin, cystatin-like 14 kD protein and 20 kD glycoprotein in the human submandibular gland// J. Biol. Buccale. 1990. - V. 18, № 1. - P. 19-27.83

111. Robberecht P., De Neef P., Vandermeers A. et al. Presence of heloder-min-like peptides of the VIP-secretin family in mammalian salivary glands and saliva //FEBS. Lett.- 1985.-V. 190,№ l.-P. 142-146.

112. Robinovitch M.R., Iversen J.M., Resnick L. Anti-infectivity activity of human salivary secretions toward human immunodeficiency virus // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1993. - V. 4, № 3-4. - P. 455-459.

113. Rose J.E., Levin E.D., Benowitz N. Saliva nicotine as an index of plasma levels in nicotine skin patch users // Ther. Drug. Monit. 1993. - V. 15, №5.-P. 431-435.

114. Rudney J.D. Does variability in salivary protein concentrations influence oral microbial ecology and oral health? // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. -1995.-V. 6, №4.-P. 343-367.

115. Russel M.W., Mansson-Rahemtulla B. Interaction between surface protein antigens of Streptococcus matants and human salivary components // Oral. Microbiol. Immunol. 1989. - V. 4, № 2. - P. 106-111.

116. Scannapieco F.A., Torres G., Levine M.J. Salivary alpha-amylase: role in dental plaque and caries formation // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1993. -V. 4,№34. .p. 301-307.

117. Scerbo A.S., Kolko D.J. Salivary testosterone and Cortisol in disruptive children: relationship to aggressive, hyperactive, and internalizing behaviors // J. Am. Acad. Child. Adolesc. Psychiatry. 1994. - V. 33, № 8. - P. 11741184.

118. Schenkels L.C., Veerman E.C., Nieuw Amerongen A.V. Biochemical composition of human saliva in relation to other mucosal fluids // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1995. -V. 6, № 2. - P 161-175.

119. Schlesinger D.H., Hay D.I. Complete covalent structure of a prolin-rich phosphoprotein, PRP-2, an inhibitor of calcium phosphate crystal growth from human parotid saliva // Int. J. Peptide Protein Res. 1986. - V. 27. - P. 373-379.

120. Schramm W., Smith R.H., Craig P.A., Grates H.E. Testosterone concentration is increased in whole saliva, but not in ultrafiltrate, after tooth-brushing // Clin. Chem. 1993. - V. 39, № 3. - P. 519-521.

121. Schwartz S.S., Zhu W.X., Sreebny L.M. Sodium dodecil sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis of human whole saliva // Arch. Oral. Biol. 1995. - V. 40, № 10. - P. 949-958.

122. Sharaev P.N., Riabov V.I., Gumiarova G.Kh. et al. Determination of free and bound forms of sialic acids in biologic objects // Klin. Lab. Diagn. -1993.-V. 4.-P. 44-46.

123. Shern R.J., Fox P.C., Li S.H. Influence of age on the secretory rates of the human minor salivary glands and whole saliva // Arch. Oral. Biol. -1993. V. 38, № 9. - P. 755-761.

124. Shiba A., Shiba K.S., Suzuki K. Analysis of salivary proteins by thin layer sodium dodecylsulphate polyacrylamide gel electrophoresis // J. Oral. Rehabil. 1986. - V. 13, № 3. - P. 263-271.

125. Shinkai S., Watanabe S., Kurokawa Y. Salivary Cortisol for monitoring circadian rhythm variation in adrenal activity during shiftwork // Int. Arch. Occup. Environ. Health. 1993. - V. 64, № 7. - P. 499-502.

126. Slomiany B.L., Piotrowski J., Czajkowski A. et al. Control of mucin molecular forms expression by salivary protease: differences with caries // Int. J. Biochem. 1993. - V. 25, №> 5. - P. 681-687.

127. Smith-Hanrahan C. Salivary kallikrein output during the stress response to surgery // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1997. - V. 75, № 4. - P. 301-304.

128. Spielman A.I., D'Abundo S., Field R.B., Schmale H. Protein analysis of human von Ebner saliva and a method for its collection from the foliate papillae//J. Dent. Res. 1993. - V. 72, № 9. - P. 1331-1335.85

129. Spielman A.I., Zeng X.N., Leyden J.J., Preti G. Proteinaceous precursors of human axillary odor: isolation of two novel odor-binding proteins // Experientia. 1995. - V. 51, № 1. - P. 40-47.

130. Sprindrich J., Sprindrichova D. Human saliva protein patterns in polyacrylamide gel // Scripta Medica. - 1970. - V. 43, № 3-4. - C. 123-131.

131. Stark K., Warnecke C., Brinkmann V. et al. Sensitivity of HIV antibody detection in saliva // Med. Microbiol. Immunol. Brl. 1993. - V. 182, № 3. - P. 147-151.

132. Takeuchi T. Human amylase isoenzymes separated on concovalin A-sepharose // Clin. Chem. 1979. - V. 25, № 8. - P. 1406-1410.

133. Thomsen K.K., Vuust J., Lund T. Isolation and characterization of al-pha-amilase messenger RNA from bank vole parotid glands // Eur. J. Bio-chem. 1981. - V. 117, № 1.-P. 81-86.

134. Tobin G., Ekstrom J. Parasympathetic NANC-secretion of saliva in the mink, and effects of substance P and VIP // Regul. Pept. 1992. - V. 39, № l.-P. 95-101.

135. Tomana M., Zikan J., Kulhavy R. et al. Interactions of galactosyltrans-ferase with serum and secretory immunoglobulins and their component chains // Mol. Immunol. 1993. - V. 30, № 3. - P. 277-286.86

136. Uitto V.J., Suomalainen К., Sorsa Т. Salivary collagenase. Origin, characteristics and relationship to periodontal health // J. Periodontal. Res. -1990.-V. 25, №3.-P. 135-142.

137. Usdin G.L. Practical lectures in psychiatry for the medical practitioner.- England: Springfield III, ch. C.Thomas, 1966. 86 p.

138. Vanden-Abbeele A., Courtois P., Pourtois M. The antiseptic role of saliva // Rev. Beige. Med. Dent. 1992. - V. 47, № 3. - P. 52-58.

139. Vanden-Abbeele A., Courtois P., Pourtois M. Peroxidase activity loss after filtration and centrifugation of whole saliva. Influence of citrate // J. Biol. Buccale. 1992. - V. 20, № 2. - P. 91-96.

140. Veerman E.C., Ligtenberg A.J., Schenkels L.C. et al. Binding of human high-molecular-weight salivary mucins (MG1) to Hemophilus parain-fluenzae // J. Dent. Res. 1995. - V. 74, № 1. - p. 351-357.

141. Vissink A., Panders A.K., Nauta J.M. et al. Applicability of saliva as a diagnostic fluid in Sjogren's syndrome // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1993. - V. 694. - P. 325-329.

142. Wong R.S.C., Hofmann Т., Bennick A. The complete primary structure of a proline-rich phosphoprotein from human saliva // J. Biol. Chem. 1979.- V. 254, № 11. p. 4800-4808.

143. Wu A.M., Csako G., Herp A. Structure, biosynthesis, and function of salivary mucins // Mol. Cell Biochem. 1994. - V. 137, № 1. - P. 39-55.

144. Yan Q., Bennick A. Identification of histatins as tanin-binding proteins in human saliva // Biochem. J. 1995. - V. 311. - P. 341-347.

145. Yongg M., Stanford J. The dexamethasone supressi test for the detection, diagnosis, and management of depression // Arch. Int. Med. 1984. -V. 100.-P. 309-312.

146. You X.Y., Jiang J., Yin F.Z. Preliminary observation on human saliva alpha-fetoprotein in patients with hepatocellular carcinoma // Clin. Med. J. Engl. 1993. - V. 106, № 3. - P. 179-182.87

147. Zhang Z.Q. An assay method for herpes simplex virus type 1 sero-prevalence survey-detection of antibody in saliva by avidin-biotin complex enzyme-linked immunosorbent assay (ABC-ELISA) // Microbiol. Immunol. 1993. - V. 37, № 10. - P. 773-777.