Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Характеристика аллелофонда и дифференциация пород и популяций медоносной пчелы с использованием микросателлитов

ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Характеристика аллелофонда и дифференциация пород и популяций медоносной пчелы с использованием микросателлитов"

На правах рукописи

ФОРНАРА Маргарет Сержевна

ХАРАКТЕРИСТИКА АЛЛЕЛОФОНДА И ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ПОРОД И ПОПУЛЯЦИЙ МЕДОНОСНОЙ ПЧЕЛЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРОСАТЕЛЛИТОВ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Специальность: 03.02.07 - ГЕНЕТИКА

б ДЕК 2012

А.

Дубровицы - 2012

005056615

005056615

Работа выполнена в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики животных Государственного научного учреждения Всероссийского научно-исследовательского института животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук

Научные руководители: доктор биологических наук,

профессор, академик РАСХН Зиновьева Наталия Анатольевна

доктор сельскохозяйственных наук, профессор, академик РАСХН [Кривцов Николай Иванович]

Официальные оппоненты: кандидат биологических наук, заместитель

директора по научной работе ГНУ НИИ пчеловодства Бурмистрова Лилия Александровна

доктор биологических наук, профессор, зав. иммуногенетической лабораторией ОАО «Московское» по племенной работе Букаров Нурмагомед Гаджикулиевич

Ведущее учреждение: ФГБОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина.

Защита состоится «18» декабря 2012 года, в 10 часов, на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 006.013.03 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Россельхозакадемии.

Адрес института: 142132 Московская область, Подольский район, пос. Дубровицы, ГНУ ВИЖ, т/факс (4967) 65-11-01

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГНУ ВИЖ.

И.В. Гусев

Актуальность темы. Медоносная пчела (Apis mellifera L.) является наиболее распространенным представителем рода Apis, обитающим на территории России. С использованием многокомпонентного анализа морфометрических признаков A. mellifera подразделяют на четыре эволюционные ветви (Ruttner, 1978, Ruttner, 1988), объединяющие 26 подвидов (Ruttner, 1992, Sheppard et al., 1997, Sheppard, Meixner, 2003, Meixner et al., 2010), а по некоторым данным (Engel, 1999), 28 подвидов (пород). Ряд подвидов, например, А. т. mellifera, по результатам морфометрического анализа (Cornuet J.M. et al., 1975, 1978) подразделяются на дифференцированные локальные популяции.

Развитие ДНК-технологий открыло новые возможности в дифференциации подвидов и более мелких таксономических единиц (популяций, экотипов) медоносной пчелы. С использованием мтДНК (Smith D.R., 1991, Garnery L. et al., 1992), a в последующем микросателлитов (МС) (Estoup А., 1995, Franck P. et al., 2000) было подтверждено разделение А. mellifera на эволюционные ветви с некоторой перегруппировкой североафриканских подвидов между ветвями. Использование МС позволило дифференцировать африканские и западноевропейские подвиды (Estoup A. et al., 1995), доказать гибридное происхождение пчел Пиренейского полуострова А. т. ibérica (De La Rua P. et al., 2002, 2003), установить тенденцию возрастания генетической гомогенности существующих экотипов у иберийских пчел (А. т. iberiensis) Пиренейского полуострова (Canovas F. et al., 2010). Исследования российских популяций медоносной пчелы по МС, в большинстве случаев, ограничены анализом 2-4 локусов (Ильясов Р.А., 2006, Шареева З.В., 2009).

Целью настоящей работы явилась оценка состояния аллелофонда и степени дифференциации пород и популяций медоносной пчелы, обитающих в России, с использованием микросателлитов. Для достижения цели работы были поставлены и решены следующие задачи:

1. Разработать мультилокусную систему анализа микросателлитов медоносной пчелы, включающую семь локусов; изучить ее функциональные и потребительские свойства.

2. Дать характеристику аллелофонда среднерусской, карпатской, серой горной кавказской пород медоносной пчелы и дальневосточных пчел по локусам А024, А88, А113, АР043, НВ-С16-05, НВ-ТНЕ-03, НВ-С16-01.

3. Провести оценку степени генетической консолидации и дифференциации изучаемых пород медоносной пчелы на основании анализа их микросателлитных профилей.

4. Выполнить исследование аллелофонда и изучить внутрипородную дифференциацию различных популяций медоносной пчелы среднерусской и карпатской пород.

5. Изучить аллелофонд микросателлитов у пчел типа «Приокский» в сравнении с исходными породами (среднерусской и серой горной кавказской), участвующими в его формировании.

Научная новизна исследований. Дана характеристика аллелофонда среднерусской, карпатской и серой горной кавказской пород медоносной пчелы

различного происхождения по семи локусам микросателлитов. Проведен анализ наблюдаемой и ожидаемой степеней гетерозиготности, показателей F-статистики, как в целом по панели микросателлитов, так и по отдельным локусам. Выполнен анализ степени генетической дифференциации пород и внутрипородных популяций, охарактеризованы генеалогические связи между ними. Оценена степень интродукции исходных пород в популяции медоносной пчелы типа «Приокский».

Практическая значимость. Разработана мультилокусная система генетического анализа медоносной пчелы по микросателлитам, включающая семь маркеров (А024, А88, Al 13, АР043, НВ-С16-05, НВ-ТНЕ-03 и НВ-С16-01). Показана высокая результативность тест-системы в проведении генетической экспертизы происхождения. Выполнено построение ДНК-профилей и дана характеристика генетической и генеалогической структуры пород медоносной пчелы, разводимых в России: среднерусской, карпатской и серой горной кавказской пород и дальневосточных пчел. Показана возможность дифференциации вышеназванных пород медоносной пчелы на основании анализа их микросателлитных профилей.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены и обсуждены на Международной конференции «ЕС-Россия: 7-я Рамочная программа в области биотехнологии, сельского, лесного, рыбного хозяйства и пищи», г. Уфа, 29.09.-05.10.2010 г.; на конгрессе «Биотехнология: состояние и перспектив развития», г. Москва, 21.-24.03.2011 г.; на ежегодных научных конференциях Центра биотехнологии и молекулярной диагностики ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии (2009-2012).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Предложена мультилокусная система генетического анализа медоносной пчелы, основанная на исследовании полиморфизма 7 локусов микросателлитов, и лабораторный регламент на ее производство.

2. Показана результативность системы в проведении генетической экспертизы происхождения пчел.

3. Установлены различия в аллельных профилях пчел среднерусской, карпатской, серой горной кавказской пород по семи микросателлитам.

4. Выполнена оценка степени генетической дифференциации изучаемых пород и внутрипородных популяций медоносной пчелы.

5. Оценена степень интродукции аллелофонда исходных пород в популяции медоносной пчелы типа «Приокский».

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, в т.ч. 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация написана на 144 страницах, состоит из разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты и обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы, содержит 39 таблиц и 33 рисунка. Список литературы включает 167 источников, в т.ч. 127 на иностранном языке.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводили в период с 2009 по 2012 гг. в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики животных государственного научного учреждения Всероссийского научно-исследовательского института животноводства Российской академии сельскохозяйственных наук по схеме, представленной на рисунке 1.

Разработка мультилокусной системы анализа микросателлитов

медоносной пчелы (7 локусов)

* * \1/ v

А024 А088 НВ-ТНЕ-03 НВ-С16-01 НВ-С 16-05 АР043 А113

Сравнительныеисследованияаллелофонда различных пород пчёл

Среднерусская (3 популяции) 13 семей, п=191

Карпатская (3 популяции) 16 семей, п=184

Серая горная

кавказская (1 популяция) 7 семей, п=113

Дальневосточная (1 популяция), 10 семей, п=90

Оценка изменчивости аллелофондапчбл при создании новых типов

Приокский тип (п=88) Среднерусская (п=65) Серая горная кавказская (п=70)

Рис. I. Схема исследований Объектами исследований служили медоносные пчелы Apis Mellifera. Изучаемая выборка Apis Mellifera была представлена 9 популяциями, в т.ч. пчелами среднерусской породы из Республики Татарстан (8 семей, п=90),

Красноярского края (2 семьи, п=33) и Архангельской области (3 семьи, п=68); карпатской породы Майкопского типа (8 семей, п=95), Закарпатья (5 семей, п=61) и Украины (3 семьи, п=28), разводимых во ФГУП ППХ «Майкопский», серой горной кавказской породы из коллекции ГНУ НИИП и дальневосточной пчелы Новосибирской области из коллекции ГНУ СибНИИЖ. Для оценки изменчивости аллелофонда при создании типов в выборку включали пчел типа «Приокский» (п=88) из коллекции ГНУ НИИП.

В качестве материала для исследований были использованы рабочие пчелы, законсервированные в 96% этиловом спирте. Выделение ДНК проводили с помощью колонок фирмы Nexttec (Германия), с использованием набора реагентов для выделения ДНК DIAtom™ DNA PreplOO и с помощью перхлоратного метода (Зиновьева H.A. и др., 2002).

Анализ ДНК и постановку ПЦР проводили согласно «Методическим рекомендациям ...» (Зиновьева H.A. и др., 1998). Определение микросателлитного профиля пчел проводили с использованием ДНК-анализатора с лазерным детектором ABI3130x1 по методикам Центра биотехнологии и молекулярной диагностики ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии. Для идентификации аллелей использовали программу GeneMapper (ver. 4.0). Данные об аллелях каждой особи суммировали в электронной таблице MS Excel.

Статистическую обработку данных проводили по стандартным методикам (Вейр Б., 1995, Меркурьева Е.А., 1970, Животовский Л.А., 1991).

Расчет популяционно-генетических параметров (среднее число и число эффективных аллелей на локус, степень наблюдаемой и ожидаемой гетерозиготности, анализ распределения популяций по Paetkau D. (2004), показатели F-статистики) выполняли с использованием программного обеспечения GenAlEx (ver. 6.4).

Степень дифференциации популяций оценивали на основании значений Fst (Weir, Cockerham, 1984) и Rst (AMOVA) (Slatkin M., 1995) при парном сравнении, а так же генетических дистанций по Nei М. (1983), средних значений коэффициента Q в соответствующих кластерах (Pritchard J.K. et al., 2000). Для проведения анализа использовали программное обеспечение Structure (ver.2.3.1). Обсчет данных проводили без введения предварительной информации о популяционной принадлежности особей для числа популяций (K-кластеров) от 2 до 3 с параметрами, описанными ранее (Raffaele D'O., 2007). При генетической дифференциации пчел типа «Приокский» (п=88) в качестве групп сравнения были использованы рабочие пчелы среднерусской (п=65) и серой горной кавказской пород (п=70), предварительно оцененные по генетической принадлежности к соответствующей породе (Q=98,6±0,14 и 99,0±0,05, соответственно).

Разработку лабораторного регламента на производство тест-системы анализа полиморфизма семи локусов микросателлитов медоносной пчелы осуществляли согласно ОСТ 9365-001-076-95. Кроме того, при оформлении регламентов учитывали требования ОСТ 64-02-003-2002.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 3.1. Разработка мультилокусной тест-системы анализа микросателлитов медоносной пчелы

Разработанная тест-система основана на амплификации семи локусов МС с использованием праймеров, меченных їїАМ или Кб в (табл. 1).

Табл. 1. Спектр локусов для включения в тест-систему для мультиплексного анализа микросателлитов медоносной пчелы

Номер в Номер Размер аллеля

Локус генном хромо- Мини- Макси-

банке сомы мальный мальный

А024 - 7 (СТ)п 95 115

А088 А.Г509283Л 8 (СТ)10ТС(ССТТ)2(СТТТ )З...(ООА)7 133 159

НВ-ТНЕ-03 - 13 (ТА) п (ТС)] 2 174 212

НВ-С16-01 - 16 (ОАЬ 248 326

НВ-С16-05 - 1 (ТСЪ 65 89

АР043 АШ9329.1 3 (СТ)24 127 175

А113 А^09290.1 6 (ТС)2С(ТС)2ТТ(ТС)5ТТ (ТС)8ТТ(ТС)5Ш1И(ТС)2.5.8.5 200 240

Результаты капиллярного электрофореза продуктов семи выбранных локусов МС, амплифицируемых в одной реакции, показаны на рисунке 2.

Примечание: названия локусов приведены над пикограммами, названия аллелей приведены под пикограммами.

Рис. 2. Результаты капиллярного электрофореза продуктов мультилокусной ПЦР семи локусов МС медоносной пчелы

Разработан лабораторный регламент с изложением технологического процесса (ТП) производства тест-системы, который включает 13 стадий вспомогательных работ, 15 стадий ТП и 3 стадии подготовительных работ. При описании основных стадий ТП в качестве меры количества сырья использовали единицы объема от конечного продукта, что позволяет рассчитать необходимое количество сырья для производства любого числа наборов тест-систем. Кроме того, был охарактеризован материальный поток для производства 10 наборов тест-систем. Регламентом запланировано 5 контрольных точек ТП, предусматривающих последовательный контроль на пяти стадиях технологического процесса.

Функциональные характеристики и потребительские свойства разработанной тест-системы обобщены в таблице 2.

Табл. 2. Функциональные и потребительские свойства тест-системы

анализа микросателлитов медоносной пчелы

Показатель Значение Показатель Значение

Число локусов 7 Ые 3,47±0,44

Число реакций 1 Р1 9,7*10""

Мультиплексность 7 РХ1 99,51

Специфичность, %' 99,8 РХ2 92,95

Иа 7,33±0,83 РХЗ 99,906

Иа>5% 3,88±0,49 о,% 92,1±1,8

Примечание: доля генотипированных локусов, %; Ыа - среднее число аллелей на локус; N¿25% - среднее число информативных аллелей на локус; ЛГе -среднее число эффективных аллелей на локус; Р1 - вероятность совпадения генотипов животных; РХ1 - точность подтверждения происхождения по обоим родителям; РХ2 точность подтверждения происхождения по одному родителю; РХЗ - точность исключения родителей; <2 - средний уровень исключения при определении породной принадлежности, %

3.2. Характеристика аллелофонда медоносной пчелы по микросателлитам 3.2.1. Анализ аллельных профилей

Среднее число аллелей на локус МС варьировало от 7,9±2,2 у пчел серой горной кавказской породы до 12,4±2,7 у пчел карпатской породы. Относительно высокий уровень генетического разнообразия у пчел среднерусской породы был обусловлен, в основном, наличием редких аллелей, на что указывает практически равное число эффективных аллелей у пчел среднерусской и серой горной кавказской пород (3,2±0,5 и 3,4±1,1, соответственно). Наибольшее число эффективных аллелей при среднем уровне генетического разнообразия (10,4±1,9 аллелей на локус) было выявлено в популяции дальневосточных пчел - 5,5±1,0.

Число аллелей в отдельных локусах варьировало от 3 в локусах А024 и А088 у пчел серой горной кавказской породы до 26 в локусе НВ-С16-01 у пчел карпатской породы. Наиболее информативными в наличии аллелей, типичных для каждой из пород, оказались локусы А088, А113, НВ-С16-05 и НВ-ТНЕ-03. Было идентифицировано 20 приватных аллелей, в том числе 7 в среднерусской,

8 - в карпатской, 3 — в серой горной кавказской породе, 2 — в дальневосточной популяции с частотой встречаемости от 0,3 до 8,0%.

Расчет информационного индекса Шеннона (I) показал, что наибольшее генетическое разнообразие МС установлено у дальневосточных пчел (1,83±0,18), наименьшее - у серых горных кавказских (1,24±0,26). Значения показателя I у пчел среднерусской и карпатской пород занимали промежуточное положение - 1,50±0,16и 1,64±0,23, соответственно.

3.2.2. Анализ уровней гетерозиготности и показателей F-статистики

В трех из четырех исследованных породах пчел отмечен дефицит гетерозигот: 20,2% - в среднерусской породе, 12,4% - в карпатской породе и 20,5% - у дальневосточной пчелы. На существенный дефицит гетерозигот указывают так же высокие положительные значения индекса Fis - 0,313,0,168 и 0,255, соответственно (табл. 3).

Табл. 3. Фактическая и ожидаемая степени гетерозиготности

у исследованных пород медоносной пчелы

Порода Степень гетерозиготности Разница Но-Не Fis

Фактическая, Но Ожидаемая, Не

Среднерусская 0,447±0,059 0,649±0,049 -0,202 0,313±0,068

Карпатская 0,583±0,042 0,707±0,046 -0,124 0,168±0,052

Серая горная кавказская 0,599±0,043 0,582±0,074 0,016 -0,023±0,015

Дальневосточная 0,581±0,012 0,786±0,030 -0,205 0,255±0,055

Минимальная степень гетерозиготности (0,396) отмечена в локусе ИВ-СП 6-05 с вариациями от 0,251 до 0,547 в зависимости от породы, максимальная - в локусе НВ-С16-01 (0,671) с вариациями от 0,820 до 0,915.

Проведенный расчет индекса Л/ показал, что 88,3% всего разнообразия обусловлено внутрипородными различиями и только 11,7% приходится на межпородные различия. Минимальные межпородные различия отмечены для локуса АР043 (4,7%), максимальные - для локуса А088 (25,9%).

3.2.3. Анализ степени генетической консолидации изучаемых пород медоносной пчелы

Наибольшей степенью генетической консолидации характеризовалась серая горная кавказская порода, в которой 100% изучаемых особей были отнесены к собственной породе, наименьшей - дальневосточные пчелы, среди которых только 76,7% относились к собственной популяции (табл. 4). Анализ распределения особей среднерусской породы, отнесенных по генотипу к другим породам, показал, что большинство из них (9,9%) были генетически сходны с дальневосточными пчелами. В карпатской породе приблизительно равная доля таких особей была распределена между серой горной кавказской и дальневосточной породами (6,5 и 8,7%, соответственно). В популяции дальневосточных пчел большинство генетически «чужих» особей относились к карпатской породе (13,3%).

Табл. 4. Результаты анализа генетической принадлежности особей к __популяции (по Paetkau Р., 2004)_

Порода Доля особей (%), отнесенных к соответствующей породе

БИ. КАШ5 БОК ОУ

БЯ 86,9 2,6 0,5 9,9

КАИР 1,1 ' :83,7 6,5 8,7

БСТС - - ; юо,о .

БУ 6,7 13,3 3,3 - : 76,7

Примечание: порода (популяция) пчел: 5Л - среднерусская, КАИР -карпатская; БОК-серая горная кавказская; /Ж- дальневосточная

Выявлены существенные различия в степени консолидации различных популяций среднерусской породы (табл. 5). 100% особей популяции Республики Татарстан и 97,0% особей красноярской популяции были генетически отнесены к среднерусской породе, в то время как в архангельской поплуяции лишь 64,7% были отнесены к среднерусской породе. Аналогичные данные получены на карпатской породе: 100% особей украинской популяции и 98,4% особей закарпатской популяции были генетически отнесены к карпатской породе, в то время как в майкопской поплуляции - лишь 69,5% особей.

Табл. 5. Результаты анализа генетической принадлежности особей

различных популяций среднерусской и карпатской пород

Популяция Доля особей (%), отнесенных к соответствующей породе

БЯ КАЯР

БЯ ТАТ 100,0 - - -

БЯ КЯАБЫ • 97,0 . - - 3,0

БЯ АЯКН "... 64,7 7,4 1,5 26,4

КАИР МАУ 2,1 ,693 12,6 15,8

КАИР Ъ - 98,4 - 1,6

КАЯР иКЛ - 100,0 -

Примечание: популяции среднерусской породы пчел: 8Я_ТАТ -Республика Татарстан, SR._K.RASN - Красноярский край, БЯ АЯКН -Архангельская область; популяции карпатской породы пчел: КАЯР_МАУ -майкопская, КАВР—закарпатская, КАЯР_иКЯ-украинская популяции.

Установлены существенные различия в степени генетической консолидации отдельных семей всех исследованных популяций медоносной пчелы.

3.2.4. Оценка степени дифференциации пород медоносной пчелы

Анализ генетических дистанций между исследуемыми породами пчел, рассчитанных по М. (1983), показал, что наибольшей генетической удаленностью характеризуется среднерусская порода. Карпатская и серая горная кавказская породы более близки друг к другу, что проявляется на генеалогическом дереве в формировании ими единого кластера. Популяция дальневосточных пчел наиболее близка карпатской породе (табл. 6).

Табл. 6. Генетические расстояния между исследуемыми породами

медоносной пчелы, рассчитанные по N61 М. (1983)

Порода Генетические дистанции по

КАИР БУ

*

КАИР 0,713 *

БвК 0,708 0,393 ♦

БУ 0,360 0,148 0,339 *

Примечание: порода пчел: 57? - среднерусская, КАЯР - карпатская; БОК - серая горная кавказская; ИУ- дальневосточная.

Генетические расстояния между исследуемыми популяциями медоносной пчелы, рассчитанные по М. (1983), представлены в таблице 7 и в виде дендрограммы на рисунке 3.

Табл. 7. Генетические расстояния мезвду исследуемыми популяциями _медоносной пчелы, рассчитанные по N61 (1983)._

Порода Генетические дистанции по

ей С сл Н КЯАБМ АЯКН КАЯР МАУ а' < ^ N КАЯР икя БОС > а

БЯ ТАТ *

БИ КЯАБМ 0.182 *

БЯ АЫКН 0,212 0,280 *

КАЯР МАУ 0,573 1,041 0,369 #

КАЯР Ъ 1,220 1,994 0,685 0,261 *

КАИР ЦКЯ 1,443 1,583 0,830 0,353 0,231 *

БйК 0,715 1,247 0,639 0,200 0,744 0,812 *

БУ 0,477 0,689 0,209 0,123 0,268 0,466 0,339 *

Примечание: популяции среднерусской породы: 8Я_ТАТ - Республика Татарстан, Б^ШАБЫ - Красноярский край, БК АЖН - Архангельская область; популяции карпатской породы: КАЯР_МАУ - майкопская, КАШ* г -закарпатская, КАЯР_17КЯ — украинская; БОК - серая горная кавказская порода; /Ж - дальневосточная порода.

Как следует из данных таблицы 7, внутрипопуляционные различия между региональными популяциями среднерусской породы составили 0,182-0,280, карпатской породы - 0,231-0,353. Вместе с тем, отмечалась близость архангельской популяции среднерусской породы дальневосточным пчелам (0,209). Серая горная кавказская порода, в свою очередь, оказалась генетически наиболее близка майкопской популяции карпатской породы (0,200) по сравнению с другими породами (0,715-1,247). Дальневосточные пчелы характеризовались наибольшей близостью к майкопской популяции карпатской породы (0,123), при этом степень генеалогических различий между ними была меньше, чем между внутрипородными региональными популяциями, как среднерусской, так и карпатской пород.

Оівіаісе

©оо ®о<э„о _і-1-1-1-1-1-1-1

каяр_мау

ОУ

кжр_г

КАИРСКИ

в^АЯКН

БІ^ККАЗМ

5Я_ТАТ

Примечание: популяции среднерусской породы пчел: БЯ_ТАТ — Республика Татарстан, БЯКЕАБИ - Красноярский край, ЗЯ АЯКН -Архангельская область; популяции карпатской породы пчел: КАИР_МА У -майкопская, КАПР И - закарпатская, КАИР_иКК - украинская; БОС - серая горная кавказская порода; БУ-дальневосточная порода. Рис. 3. Дендрограмма филогенетического родства исследуемых популяций медоносной пчелы (по 1983)

Полученные экспериментальные данные являются вкладом в характеристику генофонда пород медоносной пчелы, разводимых в Российской Федерации.

3.3. Характеристика аллелофонда внутрипородных популяций медоносной пчелы по микросателлитам Внутрипородную изменчивость микросателлитов оценивали в популяциях медоносной пчелы среднерусской и карпатской пород, представленных тремя географически изолированными популяциями.

3.3.1. Среднерусская порода медоносной пчелы Установлено, что среднее число аллелей на локус МС было минимальным в красноярской популяции (4,6±0,6), максимальное - в архангельской популяции (9,6±1,9). Популяция Республики Татарстан, характеризуясь относительно высоким уровнем генетического разнообразия (7,6±1,7), имела

практически равное число эффективных аллелей на локус с красноярской популяцией (2,8±0,7 против 2,4±0,4). Это говорит о том, что относительно высокий уровень генетического разнообразия татарской популяции был обусловлен, в основном, наличием редких аллелей.

Во всех исследованных популяциях отмечен дефицит гетерозигот: от 7,6% в татарской популяции до 24,5% в архангельской популяции. На это указывают так же высокие положительные значения индекса Fis - от 0,102 до 0,330, что свидетельствует о заинбредированности популяций.

Показано, что наибольшей степенью генетической консолидации характеризовалась красноярская популяция (100%), наименьшей архангельская популяция (91,2%). В татарской популяции 96,7% особей генетически представляли собственную популяцию (табл. 8).

Табл. 8. Результаты анализа генетической принадлежности особей

различных популяций среднерусской породы (по Paetkau Р., 2004)

Порода Доля особей (%), отнесенных к соответствующей породе

SR ТАТ SR KRASN SR ARKH

SR ТАТ 96,7 1,1 2,2

SR KRASN - 100.0

SR ARKH 2,9 5,9 = 9.1;2

Примечание: популяции среднерусской породы: 8Я_ТАТ- татарская, SR._K.RASN - красноярская, 5ЯАЯКН -архангельская

Анализ генетических дистанций, рассчитанных по Nei M. (1983) показал, что наибольшей генетической близостью характеризуются татарская и красноярская популяции (0,182), что в структуре генеалогического дерева отражается в формировании ими общего кластера. Архангельская популяция более близка татарской популяции (0,212) по сравнению с красноярской популяцией (0,280). Относительная генетическая изолированность архангельской популяции, по всей видимости, обусловлена наличием в ней «крови» дальневосточных и карпатских пчел (см. табл. 5).

3.3.2 Карпатская порода медоносной пчелы

Среднее число аллелей на локус МС было минимальным в украинской популяции - 5,7±1,3, максимальное разнообразие отмечено в майкопской популяции - 11,7±2,4. Последнее нашло отражение в более высоком среднем числе эффективных аллелей на локус: 5,1±1,2 против 3,1±1,1 в закарпатской популяции и 2,4±0,3 - в украинской популяции.

Во всех исследованных популяциях отмечен дефицит гетерозигот: от 5,2% - в майкопской популяции до 9,2% - в украинской популяции. О дефиците гетерозигот свидетельствуют так же положительные значения индекса фиксации Fis - от 0,071 до 0,205.

Наибольшей консалидированностью характеризовалась закарпатская популяция, 96,7% особей которой были генетически отнесены к собственной популяции, наименьшей - украинская популяция (85,7%) (табл. 9).

Табл. 9. Результаты анализа генетической принадлежности особей

различных популяций карпатской породы (по Рае1каи Р., 2004)

Порода Доля особей (%), отнесенных к соответствующей породе

КАИР МАУ КАИР Ъ КАЙР ЦКЯ

КАЛР МАУ 88,4 8,4 3,2

КАИР Ъ 1,65 96,7 1,65

КАИР 1ЖЯ 10,7 3,6 85.7

Примечание: популяции карпатской породы: КАИР МА У — майкопская, КАЯР_2~ закарпатская, КАИР_иКК-украинская.

Проведенные расчеты генетических дистанций по №1 М. (1983) показали, что наибольшей близостью характеризуются закарпатская и украинская популяции (0,231), что в структуре генеалогического дерева отражается в формировании ими общего кластера. Майкопская популяция более близка закарпатской популяции (0,261) по сравнению с украинской популяцией (0,353). Относительная генетическая изолированность майкопской популяции, по всей видимости, обусловлена наличием в ней «крови» серых горных кавказских и дальневосточных пчел (см. табл. 5).

3.4. Характеристика аллелофонда среднерусской породы медоносной пчелы типа «Приокский»

Анализ аллельных профилей популяции медоносной пчелы типа «Приокский» показывает, что среднее число аллелей на локус МС варьирует от 5 в локусе А024 до 17 в локусе НВ-С16-01. Среднее число аллелей на локус составляет 7,48±1,02, число информативных аллелей - 3,62±0,71, число эффективных аллелей — 3,38±0,56. Установлено более высокое генетическое разнообразие пчел типа «Приокский» по сравнению с исходными породами: среднее число аллелей на локус составляет 9,57±1,88 против 6,86±1,55 и 6,00±1,84 у пчел среднерусской и серой горной кавказской пород, соответственно. По всей видимости, более высокое генетическое разнообразие пчел типа «Приокский» является следствием объединения аллелофонда двух относительно генетически удаленных пород.

Детальный анализ аллельных профилей позволяет проследить интродукцию аллелей исходных пород у пчел типа «Приокский» и показывает, что повышение аллельного разнообразия связано с объединением аллелофонда обеих пород. Указанием на участие двух пород пчел в создании изучаемого типа являются промежуточные значения частот встречаемости большинства аллелей микросателлитов.

Анализ наблюдаемой гетерозиготно сти показывает практически отсутствие различий между пчелами типа «Приокский» и серой горной кавказской породы (0,583 против 0,581). Однако высокое генетическое разнообразие типа «Приокский» находит отражение в заметно повышенном уровне ожидаемой гетерозиготности (0,711 против 0,529), следствием чего является существенный дефицит гетерозигот (Р1з=0,177±0,089) против избытка гетерозигот в популяции серой горной кавказской породы (р!5=-0,084±0,025).

По всей видимости, выявленный дефицит гетерозигот при высоком уровне генетического разнообразия в типе «Приокский» является следствием использования инбридинга с целью закрепления желательных экстерьерных и хозяйственно-полезных признаков (табл. 10).

Табл. 10. Фактическая и ожидаемая степени гетерозиготности у пчел типа _«Приокский» в сравнении с исходными породами_

Популяция Степень гете розиготности Разница Но-Не

Фактическая, Но Ожидаемая, Не

Тип «Приокский» 0,583±0,066 0,711±0,051 -0,128 0,177±0,089

Среднерусская порода 0,385±0,088 0,472±0,101 -0,087 0,116±0,101

Серая горная кавказская порода 0,581±0,096 0,529±0,081 0,051 -0,084±0,025

Использование в качестве критерия оценки индекса показывает, что внутрипопуляционные различия составляют 92,1% в общей изменчивости, в том числе 87,4% - различия между индивидуумами и 3,7% - различия внутри индивидуумов, в то время как на межпопуляционные различия приходится 7,9% общей изменчивости (1^=0,079 при р=0,01).

Примечание: ось X- коэффициент подобия, ед., ось К- распределение отдельных особей (п=88) в порядке снижения значения £>.

Рис. 4. Результаты анализа популяционной принадлежности особей в группе пчел типа «Приокский» по РгксЬагс! Б. е1 а). (2000)

Проведенный кластерный анализ по Pritchard D. с соавторами (2000) при к=2 показал, что доли «крови» среднерусской и серой горной кавказской пород в типе «Приокский» составляют, соответственно, 29,6±3,5 и 71,4±3,5% с вариациями у отдельных особей от 0,6 до 98,7 и от 1,3 до 99,4% (рис. 4 А). При к=3 среднее значение Q в типе «Приокский» составило 72,9±3,3% с вариациями у отдельных особей от 0,9 до 98,8%, при этом у 58 из 88 исследованных особей (65,9%) значение критерия Q было выше 75%, что является указанием на их генетическую изолированность. 46,6% особей были отнесены к собственной популяции при Q>90% (рис. 4 Б).

Расчет генетических дистанций по Nei В. (1983) показал большую близость типа «Приокский» популяции серых горных кавказских пчел (0,256) по сравнению с популяцией среднерусской породы (0,350). Генетические дистанции между серыми горными кавказскими и среднерусскими пчелами составили 1,055. Анализ значений Rst при парном сравнении изучаемых популяций показал межпопуляционные различия в микросателлитных профилях типа «Приокский» с серой горной кавказской и среднерусской породами на уровне 10,8 и 2,2% (р=0,01), соответственно. Различия между серой горной кавказской и среднерусской породами при этом составили 17,2% (р=0,01). Принимая во внимание селекционную стратегию создания типа, показатель Rst, по всей видимости, является более объективным в оценке различий между данными популяциями. Полученные нами данные указывают на формирование собственного уникального аллелофонда типа, однако процесс генетической консолидации типа пока не завершен.

4. ВЫВОДЫ

1. Разработана мультилокусная система анализа полиморфизма микросателлитов, включающая семь локусов А024, А88, А113, АР043, НВ-С16-05, НВ-ТНЕ-03, НВ-С16-01. Установлена вероятность совпадения генотипов пчел Р1=9,7*10"п. Разработан лабораторный регламент на ее производство. Показана результативность тест-системы в проведении генетической экспертизы происхождения (Р1Х=99,5%, РЗХ=99,9%) и определении породной принадлежности. Среднее значение принадлежности особи к собственной популяции составило Q=92,l±l,8%.

2. Выполнено исследование аллелофонда 9 популяций медоносной пчелы, в т.ч. пчел среднерусской породы из Республики Татарстан (8 семей, п=90), Красноярского края (2 семьи, п=33) и Архангельской области (3 семьи, п=68); карпатской породы Майкопского типа (8 семей, п=95), Закарпатья (5 семей, п=61) и Украины (3 семьи, п=28), разводимых во ФГУП 111IX «Майкопский», серой горной кавказской породы из коллекции НИИ пчеловодства Россельхозакадемии и дальневосточной пчелы из коллекции ГНУ СибНИИЖ Новосибирской области, с использованием разработанной системы. Установлено, что:

а) Число аллелей в отдельных локусах варьировало от 3 в локусах А024 и А088 у пчел серой горной кавказской породы до 26 в локусе НВ-С16-01 у пчел карпатской породы. Среднее число аллелей на локус микросателлитов

варьировало от 7,9±2,2 у пчел серой горной кавказской породы до 12,4±2,7 у пчел карпатской породы.

б) в трех породах отмечен дефицит гетерозигот: 20,2% - в среднерусской породе, 12,4% - в карпатской породе и 20,5% - у дальневосточной пчелы, на что так же указывают высокие положительные значения индекса Fis - 0,313, 0,168 и 0,255, соответственно.

3. Выполнена оценка степени генетической консолидации и дифференциации изучаемых пород и популяций медоносной пчелы. Установлено, что:

а) наибольшей консолидированностью характеризовалась серая горная кавказская порода пчел: 100% изучаемых особей этой породы были генетически отнесены к собственной породе. Наименьшей генетической консолидированностью характеризовались дальневосточные пчелы: 76,7% были генетически отнесены к собственной породе. У среднерусской и карпатской пород, соответственно, 86,9 и 83,7% особей генетически представляли собственные популяции.

б) наибольшей генетической удаленностью характеризуется среднерусская порода (генетические дистанции по Nei M. 0,360-0,713). Карпатская и серая горная кавказская породы генетически более близки друг к другу (0,393), что проявляется на генеалогическом дереве в формировании ими единого кластера. Дальневосточная популяция пчел наиболее близка карпатской породе (0,148) и приблизительно равноудалена от среднерусской (0,360) и серой горной кавказской пород (0,339).

4. Установлены различия в аллельном разнообразии, степени генетической консолидации и дифференциации внутрипородных популяций медоносной пчелы среднерусской и карпатской пород.

5. Анализ аллельных профилей семи МС популяции медоносной пчелы типа «Приокский» (п=88) показал его более высокое генетическое разнообразие по сравнению с исходными породами, участвующими в выведении типа: среднее число аллелей на локус составляет 9,57±1,88 против 6,86±1,55 и 6,00±1,84 в группах пчел среднерусской и серой горной кавказской пород, соответственно, что, по-видимому, является следствием объединения аллелофонда двух относительно генетически удаленных пород. Показана большая близость популяции типа «Приокский» среднерусской породе: степень интродукции среднерусской породы составляет 29,6±3,5 против 71,4±3,5% серой горной кавказской породы с вариациями у отдельных особей от 0,6 до 98,7 и от 1,3 до 99,4%.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Молекулярно-генетическим лабораториям рекомендуем использовать предложенную нами мультилокусную систему анализа семи микросателлитов (А024, А88, А113, АР043, НВ-С16-05, НВ-ТНЕ-03, НВ-С16-01) для оценки состояния и динамики популяций медоносной пчелы.

Племенным пчеловодческим предприятиям для генетической экспертизы пород и популяций медоносной пчелы рекомендуем использовать генетические профили по микросателлитам.

Список опубликованных работ по теме диссертации

В журналах, рекомендованных ВАК РФ.

1. Кривцов, Н.И. Дифференциация основных пород пчел с использованием микросателлитов / Н.И. Кривцов, H.A. Зиновьева, A.B. Бородачев, В.И. Лебедев, М.С. Форнара // Вестник Рязанского Государственного Агротехнологического Университета им. П.А. Костычева. -2011.-Рязань.-С. 23-27.

2. Кривцов, Н.И. Характеристика аллелофонда трех пород медоносной пчелы России с использованием микросателлитов / Н.И. Кривцов, Е.А. Гладырь, В.В. Волкова, М.С. Форнара, В.И. Лебедев, Н.А Зиновьева // Проблемы биологии продуктивных животных. — 2011. - № 1. - С. 41-45.

3. Зиновьева, H.A. Оценка изменчивости аллелофонда микросателлитов при создании специализированных линий медоносной пчелы среднерусской породы / H.A. Зиновьева, Н.И. Кривцов, М.С. Форнара, Е.А. Гладырь, A.B. Бородачев, В.А. Бородачев, A.C. Березин, В.И. Лебедев // Достижения науки и техники АПК.-2011.-№ 10.-С.51-52.

4. Зиновьева, H.A. Микросателлиты как инструмент для оценки динамики аллелофонда при создании приокского типа среднерусской породы медоносной пчелы Apis mellifera / Н.А.Зиновьева, Н.И. Кривцов, М.С. Форнара, Е.А. Гладырь, A.B. Бородачев, С.А. Березин, В.И. Лебедев // Сельскохозяйственная биологиях. -2011. -№ 6. - С. 75-79.

5. Кривцов, Н.И. Биологические, морфологические и генетические особенности пчел разных видов / Н.И.Кривцов, A.B. Бородачев, В.И Лебедев, Н.А Зиновьева, М.С. Форнара, Е.А. Гладырь // Пчеловодство. - 2012. - № 1. — С. 14-17.

В других изданиях.

6. Кривцов, Н.И. Создание мультиплексных ДНК-диагностикумов на основе микросателлитов для геномной дактилоскопии в пчеловодстве / Н.И. Кривцов, A.B. Бородачев, Е.А. Гладырь, В.В. Волкова, М.С. Форнара, H.A. Зиновьева // Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в АПК России / РАСХН. - 2010. - Москва - С. 230-235.

7. Форнара, М.С. Оценка информативности тест-системы анализа микросателлитов медоносной пчелы / М.С: Форнара, Е.А. Гладырь, В.В. Волкова, Н.И. Кривцов, H.A. Зиновьева // Сборник материалов Международной конференции: «ЕС - Россия: 7-я Рамочная программа в области биотехнологии, сельского, лесного, рыбного хозяйства и пищи» (29 сент. - 5 окт. 2010). - 2010. - Уфа. - БашГАУ. - С. 317-320.

Издательство ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии Тел. (4967)65-13-18 (4967)65-15-97

Сдано в набор 15.11.2012. Подписано в печать 16.11.2012. _Заказ № 57. Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз._

Отпечатано в типографии ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика аллелофонда и дифференциация пород и популяций медоносной пчелы с использованием микросателлитов"

Актуальность темы. Медоносная пчела (Apis т. mellifera L.J является наиболее распространенным представителем рода Apis, обитающим на территории России. С использованием многокомпонентного анализа морфометрических признаков A. mellifera подразделяют на четыре эволюционные ветви (Ruttner, 1978, Ruttner, 1988): А (Южная и Центральная Африка), М (Северная Африка и Западная Европа), С (Север Средиземноморья, Центральная и Восточная Европа) и О (Средиземноморье, Средний и Ближний Восток), объединяющие 26 подвидов (Ruttner, 1992, Sheppard et al., 1997, Sheppard, Meixner, 2003, Meixner et al., 2010), а по некоторым данным (Engel, 1999), 28 подвидов (пород). Ряд подвидов, например, А. т. mellifera, по результатам морфометрического анализа (Cornuet J.M. et al., 1975, 1978) подразделяются на дифференцированные локальные популяции.

Россия обладает богатым генетическим потенциалом пород и популяций пчел. Однако, за последнее время во многих регионах страны из-за отсутствия t, четкой, ^ программы f породного $ районирования / пчел / сокращается^ численность^ чистопородных семей, а также создается угроза полной утраты генофонда ряда пород в результате неконтролируемой метизации (Бородачев A.B., Савушкина Л.Н., 2007, Гранкин H.H., 2008, Кривцов Н.И., 2001, 2008, Николаенко А.Г., Поскряков В.Г., 2000, Поздняков В.Н. и др., 2000).

Например, в Западном Приуралье наблюдается значительная метизация с южными породами (Колбина JI.M., Непейвода С.Н., 2009), что приводит к снижению всех хозяйственно ценных показателей исходных пород. (Saltykova E.S. et al., 2005). Но при этом необходимо отметить, что в России еще сохранились резервы генофонда Apis mellifera L., которые можно использовать для восстановления популяции на границах его естественного ареала (Кривцов Н.И., 2008, Колбина JI.M., Непейвода С.Н., 2009, Сокольский С.С., Савушкина Л.Н., 2006, Юмагужин Ф. Г., 2003).

Для достижения цели работы были поставлены и решены следующие задачи:

1. Разработать мультилокусную систему анализа микросателлитов медоносной пчелы, включающую семь микросателлитных локусов; изучить ее функциональные и потребительские свойства.

2. Дать характеристику аллелофонда среднерусской, карпатской, серой горной кавказской пород медоносной пчелы и дальневосточных пчел по микросателлитным локусам А024, А88, А113, АР043, НВ-С16-05, НВ-ТНЕ-03, НВ-С16-01.

3. Дать оценку степени генетической консолидации и дифференциации изучаемых пород медоносной пчелы на основании анализа их микросателлитных профилей.

4. Выполнить исследование аллелофонда и изучить внутрипородную дифференциацию различных популяций медоносной пчелы среднерусской и карпатской пород. у 5. Изучить аллелофонд пчел типа «Приокский» в сравнении с исходными породами (среднерусской и серойгорной: кавказской), участвующими в его формировании.

Научная новизна исследований. Дана характеристика аллелофонда среднерусской, карпатской и серой горной кавказской пород медоносной пчелы различного происхождения по семи локусам микросателлитов. Проведен анализ наблюдаемой и ожидаемой степеней гетерозиготности, показателей F-статистики, как в целом по панели микросателлитов, так и по отдельным локусам. Выполнен анализ степени генетической дифференциации пород и внутрипородных популяций, охарактеризованы генеалогические связи между ними. Оценена степень интродукции исходных пород в популяции медоносной пчелы типа «Приокский».

Практическая значимость. Разработана мультилокусная система генетического анализа медоносной пчелы по микросателлитам, включающая семь маркеров (А024, А88, А113, АР043, НВ-С16-05, НВ-ТНЕ-03 и НВ-С16-01). Показана высокая результативность тест-системы в проведении генетической экспертизы происхождения. Выполнено построение ДНК-профилей и дана характеристика генетической и генеалогической структуры пород медоносной пчелы, разводимых в России: среднерусской, карпатской и серой горной кавказской пород и дальневосточных пчел. Показана возможность дифференциации вышеназванных пород медоносной пчелы на основании анализа их микросателлитных профилей.

Апробация работы. Результаты исследований были доложены и обсуждены:

• на Международной конференции с элементами научной школы для молодежи «ЕС-Россия:7-ая Рамочная программа в области биотехнологии, сельского, лесного, рыбного хозяйства и пищи», г. Уфа, 29 сентября - 5 октября 2010 г.;

• на Конгрессе «Биотехнология: состояние и перспектив развития-2011г.», t 1 Москва, 21-24 марта 2011г. . V.< ч. t М v • , ' * f .

• на ежегодных отчетах Центра биотехнологии ' и молекулярной диагностики ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии (2009-2012).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Предложена мультилокусная система генетического анализа медоносной пчелы, основанная на исследовании полиморфизма 7 локусов микросателлитов, и лабораторный регламент на ее производство.

2. Показана результативность системы в проведении генетической экспертизы происхождения пчел.

3. Установлены различия в аллельных профилях пчел среднерусской, карпатской, серой горной кавказской пород по семи микросателлитам.

4. Выполнена оценка степени генетической дифференциации изучаемых пород и внутрипородных популяций медоносной пчелы.

5. Оценена степень интродукции аллелофонда исходных пород в популяции медоносной пчелы типа «Приокский».

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в т.ч. 5 статей в журналах, рекомендованных бюллетенем ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация написана на 144 страницах, состоит из разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты и обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы, содержит 39 таблиц и 33 рисунка. Список литературы включает 167 источников, в т.ч. 127 на иностранном языке.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Форнара, Маргарет Сержевна, п. Дубровицы Московской обл.

1. Билаш, Г.Д. К методике изучения экстерьерных признаков у медоносных пчёл / Г.Д . Билаш., В.Т. Желтякова // Сб. Достижения науки и передовой опыт в пчеловодстве. - М.: Колос. - 1966. - с. 15-16.

2. Билаш, Г.Д. Селекция пчел / Г.Д. Билаш, Н.И. Кривцов // М.: Агропромиздат. -1991. с. 304.

3. Бородачев, A.B. Состояние генофонда среднерусских пчел / A.B. Бородачев, J1.H. Савушкина // Пчеловодство.-2007. №5. - с. 12-14.

4. Вейр, Б. Анализ генетических данных /Б.Вейр // пер. с англ. Д.В. Зайкина, А.И. Пудовкина, А.Н. Татаренкова. М.: Мир, 1995. 400 с.

5. Глазко, В.И. Проблемы использования ДНК-технологий у животных. /В.И. Глазко// Сельскохозяйственная биология. 1998. - № 4. - С. 33-42.

6. Гранкин, H.H. Тип среднерусских пчел «Орловский» /H.H. Гранкин // Пчеловодство. 2008. - №4. - с. 8-9.

7. Животовский, Л.А. Популяционная биометрия./Л.А. Животовский// М.: Наука, 1991.-271 с.

8. Саттаров, В.Н. ДНК-анализ в пчеловодстве / В.Н. Саттаров, А.Г. Николенко, М.Г. Мигранов // Пчеловодство. 1989. - №3. - С. 14 - 15.

9. Сокольский, С.С. Сохранение генофонда серых горных кавказских пчел / С.С. Сокольский, Л.Н. Савушкина. // Пчеловодство. 2006. - №2. - С. 17 -18.

10. Чугунова, Л.Г. Препарат из трутневого расплода и физиологическая работоспособность при гипотиреозе / Л.Г. Чугунова, Л.А . Бурмистрова., А.Н. Рябков // Пчеловодство. 1999. - № 2. - С. 52.

11. Чудинов, О.С. Оптимизация RAPD-технологии для изучения генетического полиморфизма ДНК-генома различных пород пчел. / О.С. Чудинов, В.Н. Поздняков, А.Б. Абрамова, В.Т. Какпаков, Р.Б. Козин // Сельскохозяйственная биология.- 1999.- №6.- С.47-56.

12. Шареева З.В. Изучение генетической структуры северной части ареала башкирской популяции Apis Mellifera Mellifera L / З.В. Шареева, P.A. Ильясов, Н.Г. Кутлин, A.B. Поскряков, А.Г. Николенко.// Вестник ОГУ. 2009. -№6. - С. 427-428.

13. Шекшуев, А.Я. Характеристика морфобиологических и хозяйственно полезных признаков простых и сложных гибридов пчёл. /А.Я. Шекшуев// Пчеловодство. 1965. - №8. - С. 25-26.

14. Юмагужин, Ф. Г. Охрана и селекция бурзянской пчелы. /Ф.Г. Юмагужин // Пчеловодство и апитерапия. 2003. - №1. - С. 22.

15. Allendorf, F.W. The problems with hybrids: setting conservation guidelines./ F.W Allendorf, R.F Leary, P Spurell, J.K. Wenburg// Trends in Ecology and Evolution. 2001. - № 16. - P. 613-622.

16. Anglany P. Heteroduplex formation in polymerase chain reaction./ P. Anglany, L. Picci, C. Camporese, P Zacchello // Am.J.Hum. Genet. 1995. - № 47. - P. 169-170.

17. Arias, M.C. Molecular philogenetics of honey bee subspecies (Apis mellifera L.) inferred from mitochondrial DNA sequence / M.C. Arias, W.S. Sheppard.// Molecular philogenetics and evolution. 1996. - V. 5. - V. 3. P. - 557-566.

18. Becker, J. Combined mapping of AFLP and RFLP markers in barley/ J. Becker, P. Vos, M. Kuiper, F. Salamini and M. Heun // Mol. Gen.Genet. 1995. 249. -P.65-73.

19. Blanchetot, A. Genetic relatedness in honeybees as astablished by DNA fingerprinting. / A. Blanchetot// Journal of Heredity. 1991. - № 82.- P. - 391-396.

20. Boehringer Mannheim: PCR Applications Manual. Germany: Boehringer Mannheim GmbH, Biochemica, 1995. 194 p.

21. Brown, W.M. Mitochondrial DNA sequences of primates: tempo and mode of evolution / W.M. Brown, E.M. Prager, A. Wang, A.C. Wilson // J. Mol. Evol. 1982. -V. 18. P. -225-239.

22. Bunn, C.L. Cytoplasmic Inheritance of Chloramphenicol Resistance in Mouse Tissue Culture Cells / C.L. Bunn, C.W. Douglas, J.M. Eisenstadt. // PNAS. -1974.-V. 71.-P. 1681-1685.

23. Bunn, C.L. Cytoplasmic Inheritance of Chloramphenicol Resistance in Mouse Tissue Culture Cells / C.L. Bunn, C.W. Douglas, J.M. Eisenstadt. // PNAS. -1974.-V. 71.-P. 1681-1685.

24. Cann, R.L. Mitochondrial DNA and Human Evolution / R.L. Cann, M Stoneking, A.C. Wilson // Nature. 1987. - V. 325. - P. 31-36.

25. Canovas, F. Microsatellite variability reveals bee-keeping influences on Iberian honeybee populations / F. Canovas, P. De la Rua, J. Serrano, J. Galian // Apidology. -2010. V. 8.-P. 17.

26. Carlson, D.A. Identification of Africanized and European honeybees using extracted hydrocarbons/ D.A. Carlson, A.B Bolten // BuU.Entomol. Soc.Am. 1983. -№30. -P. 32-35.

27. Clarke, K.E. The Africanization of honeybees (Apis mellifera L.) of the Yucatan: A study of a massive hybridization event across time / K.E. Clarke, T.E. Rinderer, P. Franck, J.G. Quezada-Euan, B.P. Oldroyd // Evolution. 2002. - №56. - P. 1462-1474.

28. Clary, D.O. The mitochondrial DNA molecule of Drosophila yakuba: nucleotide sequence, gene organization, and genetic code / D.O. Clary, D.R. Wolstenholme // J. Mol. Evol. 1985. - V.22. - P. 252-271.

29. Collins, A.M. Colony defense by Africanized and European honeybees / A.M. Collins, T.E. Rinderee, J. Harbo, A.B. Bolten // Science. 1982. - № 218. - P. 7274. , ; ■ ,

30. Comuet, J.-M.'L. Reproduction, genetique et selection de Tabelle! /J.-M. L Comuet // Bull. Tech. Apicol. 1983. - V. 10. - P. 13-36.

31. Corley, J. Sperm utilization in honey bees as detected by M13 fingerprints. / Corley J., M. Rabinovich, M. Seigelchiefer, J. Zorzopulos, E. Corley // DNA Fingerprinting: State of the Science,1993. P. 355-362.

32. Cornuet, J.-M. Population genetics / J.-M. Cornuet // Bee Genetics and Breeding: Academic Press Orlando, FL. 1986. - P. 235-254.

33. Cornuet, J.-M. Etude biometrique de deux populations d'abeilles cevenoles / J.-M. Cornuet, J. Fresnaye, P. Lavie // Apidologie. 1978. - 9. - P. 41-55.

34. Cornuet, J.M. Discrimination et classification de populations d'abeilles P partir de caracteres biometriques / J.M. Cornuet, J. Fresnaye, L. Tassencourt // Apidologie. 1975. -№ 6. - P. 145-187.

35. Cornuet, J.M. Putative origin and function of the intergenic region between COI and COII of Apis mellifera L. mitochondrial DNA / J.M. Cornuet, L. Garnery, M. Solignac // Genetics. 1991. - V. 128. - P. 393-403.

36. Cornuet, J.-M. Etude biometrique decolonies d'abeilles d'Espagne et du Portugal / J.-M. Cornuet, J. Fresnaye. //Apidologie. 1989. - V. 20. - P. 93-101.

37. Crozier, R.H. Genetical structure of social insect populations / R.H. Crozier // Evolution of Social Behavior: Hypotheses and Empirical Tests. 1980. -P. 129-146.

38. Crozier, R.H. The COI and COII region of honey-bee mitochondrial DNA: evidence for variation in insect mitochondrial rates / R.H. Crozier, Y.C. Crozier, A.G. Mackinlay // Mol. Biol. Evol. 1989. - V. 6. - P. 399-411.

39. Crozier R.H. The cytochrome b and ATPase genes of honeybee mitochondrial DNA / R.H. Crozier, Y.C. Crozier // Mol. BioL Evol. 1992. - V. 9. - P. 474-482.

40. De la Rúa, P. Microsatellite analysis of non-migratory colonies of Apis mellifera ibérica from south-eastern Spain / P. De la Rúa., J. Galián, J. Serrano, R.F.A. Moritz //J. Zool. Syst. Evol. Res. 2002. - №40. - P. 164-168.

41. De Salle ,R Tempo and mode of sequence evolution in mitochondrial DNA of Hawaiian Drosophila / R. De Salle, T. Freedman, E.M. Prager, A.C. Wilson.// J. Mol. Evol. 1987. - V. 26. - P.157-164.

42. Desjardins, P. Sequence and gene organizationof the chicken mitochondrial genome. A novel gene order in higher vertebrates / P. Desjardins, R. Moráis // J. Mol. Biol. 1990. - V. 212. - P. 599-634.

43. Engel, M.S. The taxonomy of resent and fossil honey bees (hymenoptera: Apidae; Apis) / M.S. Engel // J. Hym. Res. 1999. - №8 (2). - P. 165-196.

44. Estoup, A. Precise assessement of the number of matings and of relatedness in honey bee colonies / A. Estoup, M. Solignac, J.M. Cornuet // Proc. R. Soc. Lond. B. Biol. Sei. 1994. -№ 258. P. 1-7.

45. Estoup, A. Characterization of (GT)n and (CT) microsatellites in two insect species: Apis mellifera and Bombus Terrestris i A. Estoup, M. Solignac, M. Harry, J.-M. Cornuet / Nucleic Acids Res. 1993. - № 21. - P. 1427-1431.

46. Fondrk, M.K., Page R.F., Hunt Paternity analysis of worcer honey bees using Random Amplified Polimorphic DNA / M.K. Fondrk, , R.F. Page // Naturwissenschaften. 1993. - № 80. - P. 226-231.

47. Franck, P. Genetic diversity of the honeybee in Africa: microsatellite and mitochondrial data / P. Franck, L. Garnery, A. Loiseau., B. P. Oldroyd, H. R. Hepburn., M. Solignac, J.-M. Cornuet // Heredity. 2001. - V. 86. - P. 420-430.

48. Franck, P. Molecular conformation of a fourth lineage in honeybees from Middle-East / P. Franck, L. Garnery, M. Solignac, J.-M. Cornuet.// Apidologie. -2000b.-Vol. 31.-P. 167-180.

49. Franck, P. The origin of west European subspecies of honeybees (Apis mellifera): new insights from microsatellite and mitochondrial data / P. Franck, L. Garnery, M. Solignac, J.-M. Cornuet // Evolution. 1998. - Vol. 52. - P. 1119-1134.

50. Garnery, L. Evolutionary history of the honeybee Apis mellifera inferred from mitochondrial DNA analysis / L. Garnery, J.-M.Cornuet, M. Solignac // Mol.Ecol. 1992. - №1. - P. 145-154.

51. Garnery, L. Genetic biodiversity of the West European honey bee (Apis mellifera mellifera and Apis mellifera iberica). I. Mitochondrial DNA / L. Garnery, P. Franck, E. Baudry // Genetics, Selection and Evolution. 1998a. - V. 30. - P. 31-47.

52. Garnery, L. Mitochondrial DNA variation in Moroccan and Spanish honey bee populations / L. Garnery, E.H. Mosshine., B.P. Oldroyd, J.-M. Cornuet.// Mol. Ecol. 1995.-V. 4. - P.465-471.

53. Garnery, L. A simple test using restricted PCR-amplified mitochondrial DNA to study the genetic structure of Apis mellifera L / L. Garnery, M. Solignac, G. Celebrano, L-M. Cornuet // Experientia. 1993. - V. 49. - P. 1016-1021.f r

54. Haberl, M. Tri- and tetranucleotide microsatellite loci in honey bees (Apisi

55. Hall, H. G. DNA" differences found between Africanized and European honeybees / H. G. Hall // Proc.Natl.Acad.Sci. 1986. - № 83. - P.4874-4877.

56. Hall, H. G. Further characterization of nuclear DNA RFLPs markers that distinguish African and European honeybees / H. G. Hall // Arch Insect Biochem Physiol. 1992. - № 19. - P. 163-175.

57. Hall, H.G. Genetic characterization of honeybees through DNA analysis. In: The African Honey Bee / H. G. Hall /Westview Press. Boulder. CO. 1991. - P. 4573.

58. Hall, H.G. Parental analysis of introgressive hybridization between African and European honeybees using nuclear DNA RFLPs / H. G. Hall // Genetics. 1990. -V. 125.-P. 611-621.

59. Hall, H.G. Distinguishing African and European honeybee matrilines using amplified mitochondrial DNA / H.G. Hall, D.R. Smith // Proc. Natl. Acad. Sci:U.S.A. -1991.-V. 88.-P. 4548-4552.

60. Harrison, R.G. Animal mitochondrial DNA as a genetic marker in population and evolutionary biology / R.G. Harrison // Trends Ecol. Evol. 1989. - V. 4.-P. 6-11.

61. Hill, M. PCRbased fingerprinting using AFLPs as a tool for studying genetic relationships in Lactuca spp / M. Hill, H. Witsenboer, M. Zabeau, P. Vos, R. Kesseli, R. Michelmore // Theor. Appl. Genet. 1996. - V.93. -P.1202-1210.

62. HsuChen, C.-C, A cluster of four transfer RNA genes in mosquito mitochondrial DNA / C.-C. HsuChen, D.T. Dubin // Biochem. Int. 1984. - V. 8. - P. 385-391.

63. Hunt, G.J. A lineage map of the honey bee, Apis mellifera, based on RAPD markers / G.J. Hunt, R.E. Page //Genetics. 1995. - V. 139. - P. 1371-1382.

64. Itenov, K. Nucleotide sequence differences in the honey-bee subspecies Apis mellifera mellifera and Apis mellifera ligustica / K. Itenov, B.V. Pedersen // Tidsskrift for planteavl. Bind. 1991. - V. 95. - P. 101-103.

65. Jamieson, A. Comparisons of three probability formulae for parentage exclusion / A. Jamieson, St.C.S. Taylor // Animal Genetics.-1997. V 28. P. 397-400

66. Janssen^ P." Evaluation of the DNA fingerprinting method AFLP as a new tool in bacterial taxonomy / P. Janssen, R. Coopman, G. Huys, J.Swings, M. Bleeker, P. Vos, M. Zabeau, K. Kersters // Microbiology. 1996, - V.142. - P. 1881-1893.

67. Jensen, A.B. Honeybee conservation: a case story from Lasso Island, Denmark / A.B. Jensen, B.V. Pedersen // Sustainable Bee Breeding. Northern Bee Books. Mytholmroyd. Hebden Bridge. 2004 (in press).

68. Jermstad, K.D. Development of random amplified polymorfic DNA markers for genetic mapping in Pacific yew (Taxus brevifolia) / Jermstad K.D // Can.J.For.Res. 1996. V. - 26. P. 497-503.

69. Kambhampati, S. Random amplified polimorphic DNA of mosquito species and populations (Diptera, Culicidae): techniques, statistical analysis and applications. / S. Kambhampati, C.W. Black, K.S. Rai // J. Med.Entomol. 1992. - V. 29.-P. 936-945.

70. Kauhausen-Keller, D. Morphometrical control of pure race breeding of honeybee (Apis mellifera L.) / D. Kauhausen-Keller, R. Keller // Apidologie, 1994. -V. 25. P. 133-143

71. Kaya, Z. Linkage mapping in red pine (Pinus brutia Ten.) using random amplified polimorphic DNA (RAPD) genetic markers / Z. Kaya, D.B. Neale // Silvae Genet. 1995. - V. 44. P. 110-116.

72. Lobo, J. A. Morfometric, isozymand mitochondrial variability of African honeybees in Costa Rica / J. A. Lobo // Heredity. 1995. - V. 75. - P. 133 - 141.

73. Lobo, J.A. Highly polymorphic DNA markers in an Africanized honey bee population in Costa Rica / J.A. Lobo,.// DNA Genetics and Molecular Biology. 2000. -V. 23 M.2.-P. 317-322.

74. Maier, D. 1996. The use of AFLP fingerprinting for the detection of genetic variation infungi / D.Majer, R. Mithen, B.G. Lewis, P. Vos and R;P. Oliver // Mycological Res. 1996. - V. 100. - P. 1107-1111.

75. Maul, V. Morphometric studies with pure bred stock of Apis mellifera carnica Pollmann from Hessen / V. Maul, A. Hähnle // Apidologie. 1994. - V. 25. P. 119-132.

76. Meixner, M.D. Mitochondrial DNA polymorphisms in honey bee subspecies from Kenya / M.D. Meixner, M.C. Arias, W.S. Sheppard.// Apidologie. -2000.-V. 31.-P. 181-190.

77. Meixner, M.D. Asymmetrical distribution ofmitochondrial DNA polymorphism between 2 introgressing honey bee subspecies // M.D. Meixner, W.S. Sheppard, J. Poklukar // Apidologie. 1993. - V. 24. - P. 147-153.

78. Moritz, R.F. Oligonucleotide DNA fingerprintingdiscriminates seper- and half-systers in honeybee colonies (Apis mellifera L.) / R.F. Moritz., M.S. Meusel, M. Haberl // Naturwissenschaften. 1991. - V. - 78. - P. 422-424.

79. Mullis, K. Specific enzymatic amplification ofDNAw vitro: the polymerase chain reaction / K. Mullis, F. Faloona, S. Scharf, R. Saiki, G. Horn, H. Erlich / Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1986. - V. 51. - P. 263-273.

80. Nagamine, C M. A PGR artifact: generation of heteroduplex / CM. Nagamine, K. Chan, Y.F. Chris Lau // Am.J.Hum.Genet. 1989. - V. 45, - P. 337-339.

81. Nagley, P. Coordination of gene expression in the formation of mammalian mitochondria / P. Nagley // Trends Genet. 1991. - V. 7. P. 1-4.

82. Nei, M. Genetic polymorphism and the role of mutation in evolution / M. Nei, R. Koehn // Evolution Genes and Proteins. 1983. - P. 165- 90.

83. Okimoto, R. The mitochondrial genomes of two nematodes, Caenorhabditis elegans and Ascaris suum / R. Okimoto, J.L. Macfarlane, D.O. Clary D.R. Wolstenholme//Genetics.- 1992.-V. 130.-P. 471-498.

84. Oldroyd, B.P. Colony relatedness in agregations of Apisdorsata Fabricius (Heminoptera, Apidae) / B.P. Oldroyd, K.E. Osborne, M. Mardan // Insects sociaux. -2000. V. 47. - P. 94-95.

85. Oldroyd, B.P. Genetic characterization of the bees of Kangaroo island, South Australia / B.P. Oldroyd., W.S. Sheppard, J.A. Syelzer // J. Apicult. Res. 1992. -V.3.-P. 141-148.

86. Paar, J. Genetic structure of an Apis dorsata population: the significance of migration and colony aggregation / J. Paar., B.P. Oldroyd, E. Huettinger, G. Kastberger // Journal of Heredity. 2004. - V. 95. - №2. - P. 119-126.

87. Palmer, M.R. Turkish honeybees: genetic variation and evidence for a fourth lineage of Apis mellifera mtDNA / M.R. Palmer, D.R. Smith, O. Kaftanoglu.// J. Hered. -2000. V. 91. - P. 42-46.

88. Paetkau, D. Genetic assignment methods for the direct, real time estimation of migration rate: a simulation-base exploration of accuracy and power / D. Paetkau., R. Slade., M. Burdens // Molecular Ecology. 2004. - V. 13. - P. 55 - 65.

89. Peakall, R. Mark-recapture by genetic tagging reveals restricted movements by bush rats, Rattus fuscipes, in a fragmented landscape / R. Peakall, D. Ebert, R. Cunningham, D.B. Lindenmayer // Journal of Zoology. 2006. - V. 268. P. 207-216.

90. Peer, D.F. Further studies on the mating range of the honey bee / D.F. Peer // Canadian Entomologist. 1957. - V. 89. - P. 108-110.

91. Pinto, A M. Temporal pattern of Africanization in feral honeybee population from Texas inferred from mitochondrial DNA / A.M. Pinto, W.L. Rubink, R.N. Coulson, J.C. Patton, S.J. Johnston // Evolution. 2004. - V. 58. - P. 1047-1055.

92. Polazhek, B. A new, simple method for rearing diploid drones in the honeybee (Apis mellifera L.) / B. Polazhek, P. Neuman, B. Schricker, R.F.A. Moritz // Apidology. 2000. - V. 31. - P.525-530.

93. Pritchard, J. K. Inference of population structure using multilocus genotype«V'ty ^."Vf;. r , ^ .VmSY"' .Vv.'M .v. 'V„(„ 1.data / J. K. Pritchard, Ml Stephens, P. Donnelly // Genetics. 2000. - V. 155. - P. 945959.

94. Quezada-Euan, J.J.G. Hybridization Between European And Africanized Honeybees In Tropical Yucatan, Mexico. II. Morphometric, allozymic and mitochondrial DNA variability in feral colonies / J.J.G. Quezada-Euan // Apidologie. -2000.-V. 31.-P. 443-453.

95. Raffaele, D'O. Genetic characterization of Italian honeybees, Apis mellifera ligustica, based on microsatellite DNA polymorphisms / D'O. Raffaele, M. Alberto, L. Marco., F.A.M. Robin // Apidologie. 2007. - V.38. - P. 207-217.

96. Rowe, D.J. Seven polymorphic microsatellite loci in honeybees (Apis mellifera) / D.J. Rowe, T.E. Rinderer, J.A. Stelzer, B.P. Oldroyd, R.H. Crozier // Insectes sociaux. 1997, - V. 44. - P. 85 - 93.

97. Ruttner ,F. Biogeography and taxonomy of honey bees / F. Ruttner / Berlin: Spinger-Verlag, 1988. 288 p.

98. Ruttner, F. Geographical Variability and Classification / F. Ruttner // Bee Genetics and Breeding. Academic Press. 1986. - P. 23-56.

99. Ruttner, F. Naturegeschichte der Honigbienen / F. Ruttner // Miinchen, Ehrenwirth, 1992. 358 p.

100. Ruttner, F.L. Biometricalstatistical analysis of the geographic variability of Apis mellifera L. / F.L. Ruttner, L. Tassencourt, J. Louveaux // Apidologie. 1978. - V. 9.-P. 363-381.

101. Saiki, R.K. Primer directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase / R.K. Saiki, D.H. Gelfand, S. Stoeffel, S. Scharf, G.T. Higuchi, K.B. Mullis, H.A. Erlich. //Science. 1988. - V. 239. - P. 487-491.

102. Satta, Y. Analysis of nucleotide substitutions of mitochondrial DNAs in Drosophila melanogaster and its sibling species / Y. Satta, H. Ishiwa, S.I. Chigusa.// Mol. Biol. Evol. 1987.-V.4.-P. 638-650.

103. Schiff, N.M. Genetic analysis of commercial honey bees (Hymenoptera: Apidae) from the southeastern United States / N.M. Schiff, W.S. Sheppard // J. Econ. Entomol. 1995. -V.88.-№5.-P. 1216-1220.

104. Sheppard, W.S. New allozyme variability in Italian honeybees. /W.S. Sheppard, S.H Berlocher // J. Hered. 1985. - V. 76. - P. 45-48.

105. Sheppard, W.S. In search of a better bee / W.S. Sheppard, T.R. Unruh // Goodfruit grower. 2001. - V. 52. - P. 24-26.

106. Sheppard, W.S. Identification of African derived bees in the Americas: a survey of methods / W.S. Sheppard, D.R. Smith // Annals of the Entomological society of America. 2000. V. - 93. - №2. - P. 159-176.

107. Sheppard, W.S. Gene flow between African and Europaen-derived honey bee populations in Argentina / W.S. Sheppard, T.E. Rinderer, J.A. Mazzoli, J.A. Stelzer, H. Shimanuki // Nature. 1991a. - V. 349. P. 782-784.

108. Sheppard, W.S. Hybrid status of honey bee populations near the historic origin of Africanization in Brazil / W.S. Sheppard, A.E.E. Soares, D. DeJong, H. Shimanuki // Apidologie. 1991b. - V. 22. - P. 643-652.

109. Sheppard, W.S. Apis mellifera ruttneri, a new honey bee subspecies from Malta / W.S. Sheppard, M.C. Arias, A. Grech, M.D. Meixner// Apidologie. 1997. - V. 28.-P. 287-293.

110. Slatkin, M. A measure of population subdivision based on microsatellite allele frequencies / M. Slatkin // Genetics. 1995. - V. 139. - P. 1463.

111. Smith, D.R. Polymorphisms in mitochondrial DNA of European and Africanized honeybees {Apis mellifera) II / D.R. Smith, W.M. Brown / Experientia. -1988.-Vol. 44.-P. 257-260.

112. Smith, D.R. Neotropical Africanized honey bees have African mitochondrial DNA / D.R. Smith, O.R. Taylor, W.M. Brown //Nature. 1989.-V. 339.-P. 213-215.

113. Suazo, A. Modification of the AFLP Protocol Applied to Honey Bee (Apis melliferaL.) DNA / A. Suazo, H.G. Hall // BioTechniques. 1999. - V. 26. - P.704-709.

114. Suazo, A. Differences between African and European honey bees (Apis mellifera) in Random Amplified Polimorphic DNA (RAPD) / A. Suazo, R. McTieman, H.G. Hall // Journal of Heredity. 1998. - V. 89. - P. 32-36.

115. Suzuki, N. Sequence analysis of the rice dwarf phytoreovirus segment S3 transcript / N. Suzuki, Y. Watanabe, T. Kusano, Y. Kitagawa.// Virology. 1990. - V. 179. P. 455-459.

116. Sylvester, H.A. Electroforetic identification Africanized honeybees / H.A. Sylvester.// J. Apic. Research. 1982. - V . 21. - P . 93-97.

117. Tares, S. Characterization of an unusually conserved Alu highly reiterated DNA sequence family from the honeybee. Apis mellifera / S. Tares, J.-M. Comuet, P. Abad // Genetics. 1993. - V. 134. - P. 1195-1204.

118. Valdes, A.M. Allele friequencies at microsatellite loci: the stepwise mutation model revised / A.M. Valdes, M. Slatkin, N.B. Freiner // Genetics. 1993. - V 133.-P. 737-749.

119. Viard, F. Variation of microsatellite size homoplasy across electromorphs, loci and populations in three invertebrate species / F. Viard, P. Franck, M.-P. Dubois, A. Estoup, P. Jarne // J. Mol. Evol. 1998. - Vol. 47. - P. 42-51.

120. Vos, P. AFLP analysis / P. Vos, M, Kuiper // DNA Markers: Protocols, Applications, and Overviews. 1997. - P. 115-131

121. Wallace, D.C. Mitochondrial DNA variation in human evolution and disease / D.C. Wallace, M.D. Brown, M.T. Lott // Gene. 1999. - V. 238. - P. 211-230.

122. Weber, J.L. Mutation of humanshot tandem repeats / J.L. Weber, C. Wrong // Hum.Mol.Genet. 1993. - V. 2. - P. 1123-1128.

123. Weir, B.S. Estimating F-statistics for the analysis of population structure / B.S. Weir, C.C. Cockerham // Evolution. 1984. - V. 38. - P. 1358-1370.

124. Welch, J. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers / J. Welch, M. McClelland //Nucleic Acid Res. 1990. - V. 15. - № 6. - P. 7213 - 7218.

125. Williams, J.G.K. Genetic Analysis using RAPD markers / J.G.K. Williams, M. K. Hanafeu, J. A. Rafalski // Methods in Enzymology. 1993. - V. 218. - P. 704740.

126. Wilson, A.C. Mitochondrial clans and the age of our common mother / A.C Wilson, M. Stoneking, R.L. Cann, E.M. Prager, S.D. Ferris, L.A. Wrischnik, R.G Higuchi // Human Genetics. Springer. Berlin. -1987. P. 158-164.

127. Wolstenholme, D.R. Bizarre tRNAs inferred from DNA sequences of mitochondrial genomes of nematode worms / D.R. Wolstenholme, J.L. Macfarlane., R. Okimoto, D.O. Clary, J.A. Wahleithner // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. -1987. V . 84. -P. 1324-1328.

128. Woodward, J. Ligurian bees / J. Woodward // American bee journal. -1993.-V. 133.-P. 124-125.