Гельминтозы плотоядных городской популяции

Заиченко, Игорь Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Гельминтозы плотоядных городской популяции
ВАК РФ 03.02.11, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Гельминтозы плотоядных городской популяции"

005045013

На правах рукописи

4/1

Заиченко Игорь Владимирович

ГЕЛЬМИНТОЗЫ ПЛОТОЯДНЫХ ГОРОДСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ (РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ДИАГНОСТИКА, ЛЕЧЕНИЕ)

03.02.11 — паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

3 1 удя 1Ш

Ставрополь — 2012

005045013

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет»

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Оробец Владимир Александрович

Колесников Владимир Иванович

доктор ветеринарных наук, профессор ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет», профессор кафедры паразитологии, ветсанэкспертизы, анатомии и патанатомии имени профессора С.Н. Никольского

Тохов Юрий Мухамедович

доктор биологических наук, ФКУЗ «Ставропольский научно исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора, заведующий лабораторией медицинской паразитологии

Ведущая организация:

ГНУ «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт» Россельхозакадемии

Защита диссертации состоится «15» июня 2012 г. в 13-00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.062.02 при ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» по адресу: 355017, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический, 12

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет». Автореферат размещен на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» http://www.stgau.ru

Автореферат разослан « / » ^ЛлСг-с

2012г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Дьяченко Юлия Васильевна

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Известно, что изучение видового состава гельминтов у собак и кошек, распространения гельшпггозов, экстенсивности и интенсивности инвазии, а также возрастной и сезонной динамики необходимо в познании эпизоотологии гельминтозов домашних плотоядных животных и эпидемиологии инвазионных болезней в каждой климато-географической зоне. Это является основой в разработке интегрированных мер наступательной профилактики и терапии опасных зоонозов (В В. Горохов, 2001, 2003; H.H. Дарченкова, 2002; и др.)

В России по данным, Е.С. Березиной (2000), Н.В Федорова (2005), A.B. Будовского (2005), P.A. Пешкова (2007), Ю.И. Власенко (2007) и др. среди гельшпггозов собак и кошек в крупных городах преобладают такие, как токсокароз, дипилидиоз, токсаскаридоз и унцина-риоз. Из возбудителей вышеперечисленных гельшпггозов плотоядных, три вида представляют серьезную опасность не только для дефинитивного хозяина, но и для человека. Поэтому, изучение сашггарно-эиидемиологической и эиизоотологической ситуации по основным гельмшгтозам собак и кошек является актуальной проблемой.

Ведущую роль в сохранении и распространешш гельшпггозов несомненно играет почва, поэтому необходимо знать видовой состав возбудителей, интенсивность ее контаминации яйцами гельминтов. Эти показатели влияют на создание и поддержание потенциального риска в заражениях населения зоонозами (P.A. Пешков, 2010).

К сожаленшо, дегельминтизация и сегодпя остается основным и главным средством в профилактике гельшпггозов, основным приемом обеспечивающим разрыв эпизоотической цепи. Поэтому, разработка, фармакологическая и клиническая оценка, внедрение в ветеринарную практику новых средств, усовершенствование существующих методов профилактики и лечения гельшпггозов плотоядных является актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Целесообразность и эффективность проведения дегельминтизации определяется в основном копроскопическими исследованиями (Котельников, 1984; Н.В. Демидов, 1987; D.E. Jacobs, 1994; I.B. Wood, 1995 и др.). Сравнительная оценка некоторых методов копрологаче-ской диагностики представлена в работах В.М. Хренова (1978), JI.C. Кац (1981), MX. Лут-фуллина, (2002), Г.Г. Горшкова (2004), G.Cruigoli (2004), A.A. Pereckiene (2007), Д.Г. Латы-пова (2010), Е.А. Васильевой (2010) В. Levecke (2011) и др. На сегоднягшшй день, по-прежнему, существуют определенные трудности в выборе наиболее эффективного и простого в применении метода количественной диагностики гельшпггозов, который мог бы широко использоваться в ветеринарной практике. Таким образом, изучение гельминтофауны собак и кошек на территории города Пятигорска, изыскание эффективных методов диагностики, средств терапии и профилактики инвазии является актуальной задачей, что и послужило основой для выбора темы наших исследований.

Цель ■■ задачи исследования. Изучить распространение гельминтозов плотоядных города Пятигорска и разработать новую лекарственную форму албендазола в виде суспензии для лечения собак и кошек.

Для достижешш данной цели били поставлены следующие задачи:

• Определить видовой состав гельминтов, паразитирующих у кошек и собак в

климато-географических условиях г. Пятигорска

• Изучить степень распространения яиц гельминтов в почве города Пятигорска

• Провести сравнительную оценку модификаций метода гельминтоовоскопии по

Макмастеру.

• Разработать и изучить фармако-токсикологнческие свойства новой лекарствен-

ной формы антигельминтного препарата на основе албендазола.

Научная новизна.

Впервые изучена гельминтофауна плотоядных н степень контаминации почвы г. Пятигорска яйцами гельминтов. Впервые проведена сравнительная оценка диагностической

эффективности модификаций метода Макмастера с искусственной закладкой яиц гельминтов.

Разработано новое лекарственное средство на основе албендазола. Изучены фармакологические п токсикологические свойства препарата и установлена оптимальная лечебно-профилактическая доза и схема применения при нематодозах плотоядных. Подана заявка на патент № 2011122303: «Препарат для лечения гельминтозов животных», с положительным результатом формальной экспертизы от 08.06.2011г.

Практическая значимость.

Определен и предложен для применения в ветеринарной практике эффективный и удобный метод количественной диагностики гельминтозов.

Разработана и предложена для ветеринарной практики новая лекарственная форма албендазола для лечения гельминтозов плотоядных.

Результаты исследовагам по оценке методов диагностики гельмшггозов внедрены в Научно-диагностическом и лечебном ветеринарном центре СтГАУ.

Новая лекарственная форма албендазола внедрена в Пятигорскую городскую станцию по борьбе с болезнями животных.

Материалы диссертации по изучению фауны гельминтов плотоядных, методов их диагностики, используются в учебном процессе по паразитологии и инвазионным болезням на факультете ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет».

Апробация работы.

Основные положения диссертации были представлены на ежегодных отчетных научных конференциях на факультете ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет» в 2009 - 2012 гг., на международной научно-практнческой конференции «Актуальные проблемы совремешюй ветеринарии» посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (г. Краснодар, 2011 г.), на научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2010 г.), на международной наз'чно-практической конференции «Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опьгт, проблемы и пути их решения» посвященной Всемирному году ветеринарии в ознаменование 250-летия профессш1 ветершгарного врача (г. Ульяновск, 2011 г.).

Личный вклад соискателя.

Диссертационная работа является результатом трехлетних исследований автора. Изучение видового состава и распространенности гельминтозов плотоядных, показателей загрязненности почв яйцами гельмшггов города Пятигорска, тестировать методов диагностики, а также разработка и фармако-токсикологаческая оценка новой лекарственной формы албендазола выполнены соискателем лично.

Диссертационная работа выполнена под научным руководством доктора ветеринарных наук, профессора Оробец В.А., который оказывал научно-методическую помощь в проведении исследований и в анализе полученных результатов.

Основные положения, выносимые иа защиту:

- Эшпоото логическая ситуация по гельминтозам плотоядных в г. Пятигорске характеризуется широким распространением гельминтозов среди животных и высокой степенью контаминировання почвы яйцами гельмшггов.

- Достоверная оценка количественных методов диагност!пси гельминтов осуществляется с использованием искусственной закладки яиц гельминтов.

- Новая лекарственная форма албендазола безопасна в применешш и высокоэффективна при нематодозах плотоядных.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ в изданиях краевого, регионального и федерального уровня, 3 из которых в рецензируемых изданиях, входящих в «Перечень рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования основных научных результатов диссертации».

Объем н структура диссертации.

Диссертация изложена на 119 страницах компьютерного текста, состоит из 4 глав, выводов, практических предложений. Список использованной литературы включает 197 источников, нз которых 94 зарубежных авторов. Диссертационная работа иллюстрирована 18 таблицами и 12 рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа была выполнена в период с 2009 по 2012 годы на кафедре терапии и фармакологии ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный уштерситет», в Региональном научно-диагностическом и лечебном ветеринарном центре СтГАУ, кафедре органической и физической химии ФГБОУ ВПО СевКавГТУ, кафедре паразитологии и рыболовства факультета агробиологии продуктов питания и природных ресурсов Чешского университета естественных наук в Праге, Пятигорской станции по борьбе с болезнями животных и на базе питомников города Пятигорска.

В лабораторных и производственных испытаниях использовано 20 белых лабораторных крыс, 75 белых мышей, 15 кроликов, 80 собак и 40 кошек различной породы. Контрольные и опытные группы формировались с учетом принципа аналогов. В опытах использовали клинически здоровых животных.

Для изучения распространения гельминтозов плотоядных были исследованы фекалии от 121 собаки и 107 кошек, приведенных владельцами для клшшческого обследования в Пятигорскую станцию по борьбе с болезнями животных из всех адмгашстративных районов города. Среди собак 29 было в возрасте 1-6 месяцев, 31 в возрасте 6-12 месяцев, 34 в возрасте 1-5 лет и 27 в возрасте более пяти лет. Среди кошек 21 была в возрасте 1-6 мес, 29 в возрасте 6-12 месяцев, 35 в возрасте 1-5 лет и 22 в возрасте более пяти лет.

Пробы фекалий исследовали копрологическим методом диагностики Макмастера (Роэпстарф и Нансен, 1998). Видовую принадлежность гельшштов определяли с использованием атласа «Дифференциальная диагностика гельминтозов по морфологической структуре яиц и личинок возбудителей» (А. А. Черепанов, 2001).

Для изучеши загрязнения почвы яйцами гельшштов г. Пятигорска исследовали114 проб почвы. Пробы отбирали из парковых зон города (п=36), из спальных районов (п=30), из районов частного сектора (п=18) и из пригородных зон (п=30). Пробы почвы отбирали из глубины 2-5 см, в количестве 50-100 гр., металлической лопаткой, преимущественно, из тех мест, куда не попадают прямые солнечные лучи.

Исследования проб почвы проводили по методу А.И. Корчагина (Г.А. Котельников, 1984). Видовую принадлежность гельшштов определяли с использованием атласа «Дифференциальная диагностика гельшштозов по морфологической структуре яиц и личинок возбудителей» (А.А. Черепанов, 2001).

В сравнительной оценке методов кол1гчествешюй диагностики гельминтов использовали три модификации метода Макмастера - техника Макмастер модифицированная Вет-целем (1951), Зайчеком (1978), Роепсторфом и Нансеном (1998). Эти модификации отличаются разшгчным весом исследуемых фекалий, коэффициентом разбавления, наличием или отсутствием дополнительного центрифугирования, временем и скоростью центрифугирования, различными флотационными жидкостями, временем флотации, количеством подсчитываемых ячеек камеры Макмастера и используемыми коэффициентами умножения.

Яйца гельшштов были получены из фекалий лабораторных крыс {Rattus norvegicus) экспериментально зараженных яйцами Hymenolepis diminuta. Для проверки чувствительности и точности данных методов были выбраны определенные концентрации яиц: низкая (20 яиц в грамме), средняя (50 - 200 яиц в грамме) и высокая (500 яиц в грамме). Подготовили по 32 пробирки Эппендорфа для каждой из следующих концентраций яиц: 20, 50, 100, 200 и 500 яиц в грамме. Перед оцепкой определяли число яиц в двух случайно выбранных пробирках. Незараженные паразитами фекалш! были собраны от здоровых крыс, которых разводили в

течение нескольких лет на животноводческом объекте Чешского университета естественных наук в Праге. Фекалии были собраны в полиэтиленовые мешки и хранились в холодильнике до опыта при температуре 4°С. Перед оценкой каждого метода, точное количество яиц было добавлено в незараженные фекалии, после чего образец исследовался. Чтобы свести к минимуму влияние человеческого фактора, который может привести к погрешности результатов, только один специалист исследовал все образцы с использованием трех выбранных методов.

Для микроскопического исследования всех образцов фекалий (для каждого из исследованных методов), была использована счетная камера Макмастера, усовершенствованная MAFF (1986) (LET Optomechanika Praha). Все образцы были исследованы с помощью микроскопа Olympus ВХ51 на среднем увеличении ЮОх.

Нормальность данных, полученных от каждого метода была протестирована отдельно, используя методику Шапиро-Вилк (S. Shapiro, 1965).

Учитывая результаты испытаний нормальности, использовали непараметрический тест Крускала-Уоллнса (W.H. Kruskal, 1952) для оценки различий между тремя методами. Для статистического анализа использовали программму Statistica версии 9 (StatSoft, Inc, 2009). Для сравнения точности и чувствительности методов, рассчитали отношения образцов, которые позволяют обнаружить точное количество яиц, относительно допустимого предела ±10% и ±20% соответственно.

Для создания суспензш! албендазола использовали солюбилизатор Solutol HS 15, углевод бета-циклодекстрин и биполярный апротонный растворитель диметилсульфоксид. Данные компоненты смешивали с албендазолом в различных пропорциях и использованием разных условий (технологий). Полученные суспензии измеряли на анализаторе размера частиц Partica LA-950.

Перед испытанием новой лекарственной формы албендазола на целевых животных, провели доклинические испытания на лабораторных животных.

Определение острой токсичности, ускоренное определение кумулятивного эффекта и изучение раздражающего действия проводили согласно «Методических указаний по опре-делешпо токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (Л.П. Малашш и др., 1988). По классу опасности препарат классифицировали согласно ГОСТ 12.1.007-76. По кумулятивным свойствам препарат классифицировали согласно «Классификации химических веществ по степени кумуляции» (JI.H. Медведь, 1964).

Для изучения влияния новой лекарственной формы албендазола на клинпко-гематологические показатели использовали кроликов серебристой породы в возрасте 4 месяцев (п=10) и щенков собак разных пород в возрасте 3-4 месяца. Опыт по изучению влияния новой лекарственной формы албендазола на клшшко-гематологические показатели крови кроликов проводили в виварпп Ставропольского государственного аграрного университета. Животных разделили на 2 группы по 5 голов в каждой. Животные обеих групп находились в одинаковых условиях содержания и кормления. Кроликам первой группы препарат вводили перорально однократно в терапевтической дозе (10 мг/кг по ДВ). Вторая группа служила контролем, им препарат не вводили. В опыте по изучению влияния новой лекарственной формы албендазола на клинико-гематологические показатели собак использовали 4 группы животных по 5 голов в каждой. Собакам первой группы препарат вводили перорально однократно в терапевтической дозе (10 мг/кг по ДВ). Животным второй группы препарат вводили в двукратной дозе (20 мг/кг по ДВ), третьей группе в трехкратной дозе (30 мг/кг по ДВ). Четвертая группа служила контролем, им препарат не вводили. Животные всех групп находились в одинаковых условиях содержашю и кормления.

После введения препарата проводили ежедневное клиническое обследование животных из опытных и контрольной групп. Отмечали общее состояние животных, осматривали видимые слизистые оболочки, наблюдали за состоянием опорно-двигателыгого аппарата, а также измеряли температуру тела.

Пробы для гематологических и биохимических исследований сыворотки крови собак отбирали до и на 1, 5 и 10-и день после назначения препарата. Утром до кормления у живот-

пых производили взятие крови, определяли вес, измеряли температуру, пульс, частоту дыхания, а также учитывали общее состояние животных, аппетит, жажду. Данные, полученные в процессе наблюдений, сравнивали с исходным! (до применения препарата).

Биохимические исследования крови проводили на приборе Chemwell Combi V 1.03 (USA) с использованием тест - наборов фирмы Cormay, и полуавтоматическом биохимическом анализаторе StatFax 1904.

Гематологические исследования проводили на приборе Automated Veterinary Hematology Analyzer PCE-90 VET.

Данные, получешпле при поведешш опытов, подвергались биометрической обработке на ПК с помощью программы «Биостат» по общепринятым методам (В.Ю. Урбах, 1975).

Для и'¡учения морфологических изменений внутренних органов кроликов, после применения новой лекарственной формы албендазола, проводили убой животных методом тотального кровопускания на 31 день после введения препарата. После убоя от животных опытной и контрольной группы отбирали кусочки сердца, печени, почек, которые фиксировали в 10% нейтральном водном растворе формалина. После фиксации отобранный материал заливали в парафин по общепринятой методике. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм делали на санном микротоме, которые затем окрашивали: гематоксилином и эозином. На содержание жира срезы изготавливали на замораживающем микротоме и окрашивали Суданом-3.

Для подбора оптимальной терапевтической дозы новой лекарствешюй формы албендазола использовали щенков в возрасте 4-11 мее спонтанно инвазированных токсокара-ми. Животных разделили на 4 группы по 5 в каждой. Щенкам первой группы препарат вводили в дозе 5 мг/кг, второй - 7,5 мг/кг, третей - 10 мг/кг и четвертой - 15 мг/кг по ДВ.

В опыт для сравнительной оценки терапевтической эффективности новой лекарственной формы албендазола подобрали 10 собак спонтанно инвазированных Т. canis и 10 - Т. vulpis. Всех животных разделили на 4 равноценные группы. В качестве препарата сравнения использовали 10% «Альвет-суспензию» (ЗАО «Нита-Фарм»), Новую лекарственную форму албендазола и «Альвет-суспензию» вводили индивидуально пероралыю в дозе 10мг/кг по ДВ. Аналогичный опыт проводили на кошках спонташю инвазированных Т. mystax и U. stenocephala.

После дегельминтизации вели наблюдения за клиническим состоянием животных. Диагноз ставился по результатам копроовоскопических исследований методом Макмастера. При этом учитывали количество яиц гельшштов в 1г. фекалгш животных при использовании счетной камеры «McMaster» до, через 3, 7 и 12 дней после введения препаратов.

Эффективность препаратов рассчитывали в опыте типа «критический тест» согласно Руководству, одобренному «Всемирной Ассоциацией за прогресс ветеринарной паразитологии» (D.E. Jacobs, 1994).

Статистическую обработку полученных результатов проводили методами вариационной статистики Ю.С. Малета и В В. Тарасова (1982).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Распространение гельминтов г. Пятигорска.

Результаты исследований показали (табл. 1), что паразитофауна собак г. Пятигорска представлена семью основными видами возбудителей: Toxocara canis, Trichocephalus vulpis, Toxascaris leonina, Ancvlostoma caninum, Uncinaria stenocephala, Dipylidium caninum, Echinococcus granulosus. Экстенсивность инвазии обследованных собак составила 59,5% , то есть из 121 животного оказались инвазированны 72.

Из них 32 собаки были инвазированны Toxocara canis; 19 собак Trichocephalus vulpis; 9 Toxascaris leonina; 4 - Ancylostoma caninum; 4 - Uncinaria stenocephala; 2 - Dipylidiwn caninum; 1 - Echinococcus granulosus.

Таблица 1 - Распространение гельминтозов городской популяции плотоядных

г. Пятигорска

Возбудитель 1-6 мес 6-12 1-5 5 и > Итого ЭИ, %

мес лет лег заражено

Toxocara canis 14 9 6 3 32 26,4

Trichocephalus vulpis 6 7 5 1 19 15,7

Toxascaris leonina 3 3 2 1 9 7,4

M Ancylostoma caninum 1 2 1 1 5 4,1

£4 я Uncinaria stenocephala 2 2 4 3,3

ю о Dipvlidium caninum 1 1 2 1,7

и Echinococcus granulosus 1 1 0,9

Итого заражено 25 24 17 6 72 59,5

Исследовано проб 29 31 34 27 121

ЭИ, % 86,2 77,4 50 22,2 59,5

Toxocara mystax 10 8 6 2 26 24,3

Toxascaris leonina 3 4 1 8 7,5

Uncinaria stenocephala 1 4 2 7 6,6

Capillaria putorii 1 2 2 1 6 5,6

э Dipylidium caninum 1 2 1 4 3,7

и Другие 2 2 4 3,7

Итого заражено 14 18 17 6 55 51,4

Исследовано проб 21 29 35 22 107

ЭН, % 66,7 62,1 48,6 27,2 51,4

У кошек в этой местности встречаются следующие виды эндопаразитов: Toxocara mystax, Toxascaris leonina, Uncinada stenocephalus, Capillaria putorii и Dipylidium caninum. 51,4% исследованных кошек заражены гельмшггоза.\ш. В гельминтофауне домшшруют ток-сокароз (24,3%), субдошпшгпгымн являются токсаскаридоз (7,5%) и упдинариоз (6,6%), редко встречаются капилляриоз (5,6%) и дипилидноз (3,7%), а другие (Mesocestoides lineatus, Ancylostoma caninum, Hidatidera taeniformis) - очень редко (3,7%).

Результаты изучения возрастной динамики имели существенные колебания экстенсивности инвазии (ЭИ). Наивысшая ЭИ отмечалась у животных в возрасте от 1 до 6 месяцев - 82,2 % у собак и 66,7% у кошек. Затем данный показатель изменялся в зависимости от возраста животных: от 6 до 12 месяцев - 77,4 % у собак и 62,1 у кошек, от 1 года до 5 лет - 50 % у собак и 48,6% у кошек, 5 лет и более - 22,2 % у собак и 27,2% у кошек.

Токсокароз преобладал как у щенков, так и у котят до года, а у животных старше 5 лет он встречался реже. В то врет как унцинариоз доминировал у животных в возрасте от 1 до 5 лет.

3.2. Загрязнение проб почвы г. Пятигорска.

Исследования показали (табл. 2), что 73,7% проб почвы содержат яйца гельминтов (п=84) в том числе 41% (п=46) яиц токсокар, 39% (п=44) яиц стронгилоид, 37,5% (п=42) яиц унцинарий и 25%(п=28) яйца других гельминтов (Ascaris sp, Hymenolepis sp, Mesocestoides sp, и др.). В спальных районах загрязнены яйцами гельминтов 93,3% проб, в парках, лесопосадках вдоль улиц 77,7%, в пригородных зонах города 73,3% и 33,3% в частном секторе (табл. 4).

В пригородной зоне яйца токсокар были обнаружены в 53,3% проб, в парках и общественных местах в 44,4% проб, в спальных районах 33,3% проб и в частном секторе 11,1% проб.

Наибольшее число положительных проб загрязненных яйцами унцинарий (55,5%) было обнаружено в парковых зонах города. Таким образом, лучшие условия для развития унцинарий имеют районы с разнообразным ландшафтом и богатой растительностью.

Высоюш уровень загрязнеши наблюдался в центральных районах города с современными жилыми микрорайонами и курортно-бальпеологическими учреждениями: район горы Пост (25 я/г почвы) и Пикет, Цвепшка (21 я/г почвы), Студенческого города (28 я/г почвы), в центральном парке (19-22 я/г почвы) и центральном проспекте Кирова. В жилом микрорайоне Белая Ромашка загрязнение было меньше (11 я/г почвы). Аналогичный уровень наблюдался в западной части города с административными зданиями, промышленными предприятиями и в зоне жилой застройки Новопятигорского озера (15 я/г почвы) и поселков Винсады (12 я/г почвы), Золотушка (17 я/г почвы), Новая Пролетарка (18 я/г почвы).

В районах с жилой застройкой Скачки, Свободы, Бештау, Новопятигорск и поселок Горячеводский, загрязнение было низкое или вообще не наблюдалось (0- 10 я/г почвы).

Таблица 2 - Уровень загрязнения почвы яйцами гельминтов в разных районах г. Пятигорска, %

Паразиты Районы г. Пятпгорска

Районы с индивидуальной застройкой, % (п=18) Спальные ранопы,% (п=30) Парки п места отдыха, % (п=36) Пригородные зопы,% (п=30)

Тохосага эр 11,1 (п=2) 33,3 (п=10) 44,4 (п=16) 53,3 (п=16)

81гопя11о1с1ея эр 11,1 (п=2) 40 (п=12) 50 (п=18) 33,3 (п=10)

ипсшапа Бр 11,1 (п=2) 13,3 (п=4) 55,5 (п=20) 53,3 (п=16)

Другие 22,2 (п=4) 33,3 (п=10) 11,1 (п=4) 33,3 (п=10)

3.3. Сравнительная оценка методов копрологичекской диагностики гельмиптозов.

В общей сложности было рассмотрено 450 образцов фекалий, с использованием трех модификащш метода Макмастера. Чувствительность и точность методов приведены в таблице 3. При концентращш от 20 до 100 яиц в грамме, все тестируемые методы имели несколько отрицательных результатов. При более высоких концентрациях, только метод Роеп-сторфа и Нансена (1998) позволял обнаружить яйца во всех образцах. Чувствительность в сравниваемых методах варьировала в обоих допустимых пределах (±10% и ±20%) от 0% (при концентращш 20 янц) до 100% (при высокой концентращш).

Методом Роепсторфа и Нансена (1998) при низкой концентрации (20 яиц в грамме) обнаружены яйца в 70% образцов в обоих допустимых пределах. Методом Ветцеля (1978) и Зайчека (1951) при той же концентращш не обнаруживали яйца в 87% и 40% проб, и все результаты не попадали в допустимые пределы. Коэффициент вариации был более 100% в обоих последних методах. Метод Ветцеля (1951) значительно отличается от других методов при этой концентращш.

При концентращш 50 яиц в грамме методом Ветцеля (1951) не обнаружены яйца в 57% исследованных образцов. Метод Зайчека (1978), в той же концентращш и пределе допустимости, показал аналогичные методу Ветцеля (1951) результаты. 17% проб исследованных методом Роепсторфа и Нансена (1998) выходят за рамки допустимого предела ±20% при датой концентращш.

Половина образцов, исследованных при концентращш 100 яиц в грамме методом Роепсторфа и Нансена (1998) была в рамках допустимого предела ±10%, и 90% образцов были в рамках предела ±20%. Метод Ветцеля (1951), при этой концентращш, по-прежнему показывал результаты, которые выходили за рамки обоих допустимых пределов.

В концентрации 200 и 500 яиц в грамме всеми тестируемыми методами обнаружены яйца в пробах. На этом уровне 97% исследованных образцов с использованием метода Роеп-сторфа и Нансена (1998) были в пределах выбранных лимитов допустимости. Методы Зайче-ка (1978) и Ветцеля (1951) были подобны в концентрации 200 янц (в пределе ±10%), хотя результаты оценки метода Зайчека (1978) были лучше в два раза, когда предел допустимости увеличился до ±20%. При концентрации 500 яиц, метод Зайчека (1978) позволял регистрировать большее число яиц, чем метод Ветцеля (1951), в то время как метод Роепсторфа и Нансена (1998) показал 100% результат.

После сравнения трех выбранных методов, очевидно, что метод Макмастера, модифицированный Роепсторфом и Нансеном (1998), является наиболее достоверным и точным для обнаружения яиц гельминтов. Этот метод является быстрым, менее трудоемким, и имеет низкий предел обнаружения (20 яиц в грамме).

Таблица 3 - Результаты оценки трех модификаций метода Макмастера

Действительное кол-во яиц в гр. Модификации Макмастера Пробы, в которых не обнаружены пина, (%) Допустимый предел

±10% ±20%

20 Ветцель 87 0 0

20 Зайчек 40 0 0

20 Роепсторф и Нансен 27 70 70

50 Ветцель 57 0 0

50 Зайчек 30 0 0

50 Роепсторф и Нансен 0 0 83

100 Ветцель 17 0 0

100 Зайчек 7 40 40

100 Роепсторф и Нансен 0 53 90

200 Ветцель 0 37 37

200 Зайчек 0 30 67

200 Роепсторф и Нансен 0 97 100

500 Ветцель 0 23 43

500 Зайчек 0 33 57

500 Роепсторф и Нансен 0 100 100

3.4.Разработка и фармако-токснкологнческая оценка новой лекарственной формы албепдазола

3.4.1. Разработка повой лекарственной формы албепдазола.

Максимальную стабильную суспензию албендазола и наименьший размер частиц получили при использовашш следующей технологии приготовления:

1. В 1,3 мл воды растворили 60 мг 8о1Шо1 НБ 15 и 1,68 г. бета-циклодекстрина.

2. В 2х мл диметилсульфоксида растворили 50 мг ЭоЫЫ Н8 15 и 250 мг албендазола.

3. Смешали обе взвеси при перемешивании и нагревашш. (Оптимальная температура для растворешы албендазола - 80°С).

4. Процесс нагревания длился в течении часа, после чего получили 5% суспензию албендазола.

Результаты измерения размера частиц полученной суспензии показали, что средний диаметр частиц (> 97%) новой лекарственной формы в пределах 713 нм.

3.4.2. Определение острой токсичности повой лекарственной формы албендазола.

Для нахождения минимально токсичных доз (максимально переносимых) при перо-ральном введении препарата использовали 25 лабораторных мышей. Стартовая доза составила 1200 мг/кг массы тела и в группе 1, в которой она применена, не происходило изменений в поведении и симптомов ухудшения их физиологического состояния. В группах 2-4, в которых вводились дозы 1400, 1600 и 1800 мг/кг соответственно, также никаких видимых отклонений и летальных исходов не отмечено. Доза 2000 мг/кг введенная мышам группы 5 и не вызвала смерти ни одного из пяти животных, но наблюдались кратковременные периоды возбуждения, которые сменялись периодами глубокого угнетения, причем это угнетение продолжалось 2,5±0,5 часа, а после данного промежутка времени все мыши в группе пришли в нормальное состояние и принимали корм и воду. Так как при испытании дозы равной 2000 мг/кг были обнаружены явления, указывающие на отравление лабораторных животных и наступление токсического эффекта препарата, но при этом гибели не отмечено, эта доза была принята в качестве максимально переносимой (МВД) и стартовой для проведения эксперимента по определению летальных доз при пероралыюм введении (табл. 4).

Ш5о препарата = (4400 х 30) + (5200 х 30) + (6000 х 20) +(6800 х 20) / 200 = 544000 / 200 = 2720 мг/кг.

Величины 1.Пк; и 1Л)81 определили графически на основании доз в мг и соответствующих пробитов. На основании полученных данных в остром опыте построили пробитный график, на оси абсцисс отложили пробиты, на оси ординат - дозы эффекта, нашли связующие их точки в системе координат и провели через них линию. На графике нашли величины 1Т>16 и 1.084, причем первой соответствует пробит 4, второй пробит 6.

Таблица 4 - Схема опыта и результаты изучения острой токсичности лекарственной формы албендазола на белых мышах

Количество жи- Пало Выжило

Л® груп- Доза препа- вотных в группе живот- живот- Леталь- Про-

пы рата, иг/кг на начало опыта, ных, ных, ность, % биты

гол гол гол

1 2000 10 0 10 0 3,04

2 2400 10 3 7 30 4,48

3 2800 10 6 4 60 5,25

4 3200 10 8 2 80 5,84

5 3600 10 10 0 100 6,96

51Л) при расчете острой токсичности = (3400 - 2200) / (30 х 2) = 1200 / 60 = 20;

В результате изучения острой токсичности новой лекарственной формы албендазола (табл. 5) установлено, что препарат относится к умерешга опасным для теплокровных животных веществам и позволяет, в соответствии с ГОСТ 121.007-76, отнести ее к III классу опасности.

Таблица 5 - Острая токсичность новой лекарственной фор™ албендазола при однократном введении (мг/кг).

Параметры токсичности

Тип введения МПД 1Х>16 1.О;0 1-138, 1ЛЗкю 51.0=0

пероральное 2000 2200 2720 3400 3600 ±20

3.4.3. Ускорение определение кумулятивпого эффекта.

1 этап. Первые 4 для проведения эксперимента иовзто лекарственную форму албендазола вводили в дозе равной 1/10 от 1Х>5о установленной в опыте по определению острой токсичности. Учитывая, что средняя масса крыс при взвешивании до опыта составила примерно 139 г (± 4 г) доза эквивалентная 1/10 от 1Х>5о составила 37,8 мг на 1 животное или 272 мг/кг живой массы. Крысам контрольной группы ввели по 0,77 мл воды для инъекций на одно животное. При введении препарата в этой дозе в течение четырех дней никаких отклонений в поведении, приеме корма и видимых изменений состояния не наблюдалось.

2 этап. На пятые сутки опыта увеличили дозу вводимого препарата в 1,5 раза, - до 56,7 мг на одну крысу или 408 мг/кг живой массы и в таком количестве вводили препарат на протяжении четырех дней. В это время контрольной группе животных, вводили по 1,1 мл воды для инъекций. На протяжешш четырех дней не наблюдали отклонений аппетита, поведения животных, а также изменений видимых слизистых оболочек и состояния шерстного покрова.

3 этап. На этом этапе дозу препарата увеличили в два раза от исходной, и она составила 113,4 мг на 1 животное из опытной группы или 816 мг/кг живой массы. До 10 дня проведения опыта заметных изменений между поведением и внешним видом крыс из опытной и контрольной группы не отмечалось.

4 этап. С 15 суток проведения эксперимента препарат вводили в дозе, равной 1360 мг/кг. С этого же дня, у животных заметно снизился аппетит и поедаемость корма, животные стали малоподвижны, они, в основном, сидели в углах клетки, сбившись в кучи. На 17 день стала заметна потеря эластичности шерстного покрова в опытной группе, он был взъерошен, крысы потеряли в весе, в среднем отставая от контрольных на 16 г. На 19 сутки пало одно животное из первой группы. У остальных крыс состояние осталось неизменным.

На 20 сутки после введения введения препарата опытным крысам, у большинства были заметны нарушение координации движений, снижения частоты дыхания, тремор. Это возбуждение длилось у разных животных от 4 до 13 минут. На 21 сутки пало два животных, общее состояние крыс из опытной группы было угнетенным, они практически не поедали корм. На 22 сутки погибли еще две крысы. Так как на 22 день после седьмого введения препарата в дозе 1360 мг/кг живой массы в сумме погибла половина животных из опытной группы, опыт по ускоренному определешпо кумулятивного эффекта был завершен, препарат опытпым животным больше не вводили. Суммарную дозу, введенную одному животному за первые 22 дней эксперимента, определили как среднесмертельную при многократном введении. Состояние животных' из контрольной группы на протяжении всего опыта было без видимых изменений.

Коэффициент кумуляции рассчитывали по следующей формуле:

ЛД 50 остр те К - коэффициент кумуляции;

ЬО50хр - летальная средняя доза при многократном введении; ЬВ50остр - средняя летальная доза при однократном введении. ЬП50хр = 272х 4 +408 х 4 + 816 х 6 + 1360 х 7 =17136 мг/кг

^ 272x4+408x4+816x6+136(к7 _

лкум=---=6,3

2720

Исходя из полученных результатов опыта по ускоренному определению коэффициента кумуляции, новую лекарственную форму албендазола можно отнести по степени кумуляции к 4 группе (по Л.Н. Медведю, 1964) то есть к веществам, обладающим слабовыражен-ной кумуляцией.

3.4.4. Изучение раздражающего действия препарата.

После введения препарата наблюдали незначительное возбуждение, которое длилось около шшуты. Кролики проявляли двигательную активность, по при этом не наблюдалось развития зуда и попыток расчесывания лапками глаз. Через 5 минут, покраснения конъюнктивы отмечено не было, а через 30 мшит у трех животных в правом глазе отмечалось незначительное изменение цвета (ко1гъюшсгпва приобрела слабый бледно-розовый оттенок), что может свидетельствовать о небольшом увеличении кровотока. В левом глазу изменений'цвета конъюнктивы не зарегистрировано.

Осмотр животных производили через 12 часов после введения, через сутки и через двое суток. Видимых различии между состоянием левых и правых глаз у опытных кроликов при этом не наблюдали.

Препарат не оказывал раздражающего действия при накожных аппликациях и не вызывал аллергических реакции. Исходя из этого, сделан вывод, что изучаемый препарат не обладает ни раже иным раздражающим действием и его можно применять животным.

3.4.5. Изучение влияния препарата на клннпко-гематологпческие показатели собак.

После введешм препарата в общем состояшш животных заметных изменений не было. Щенки принимали корм, были активны. Температура тела у подопытных и контрольных за весь период наблюдений (10 дней) находилась в пределах физиологической нормы. Со стороны сердечной деятельности и органов дыхания изменешш не обнаружено.

В результате проведенных исследований установлено, что динамика изменения общего белка, альбуминов, креатшпша, холесгерипа крови собак в обеих группах носит качественно сходный характер. Содержание форменных элементов крови, гематокрит и уровень гемоглобина у щенков, получавши новую лекарственную форму албендазола, не имели существенных изменешш и находилось в пределах нормы колебания. В группе животных, получивших трехкратную терапевтическую дозу, установлена достоверная разница в количестве эритроцитов, концентрации гемоглобина и билирубина между данной группой и контрольной, тем не менее, показатель находились в пределах референтных значений (табл. 6).

Таблица 6 - Биохимические и гематологические показатели собак после применения новой лекарственной формы

албендазола (п=5)

£ и 1 Т о. и и Т; Биохимические показатели сыворотки крови Гематологические показатели

Время после прш нив, дней Группа № 2 * 84 В Ч и - ч © о В О ^ Е& Я « ё " 5 о е. И" я ^ д Общин белок, г/л Альбумины, г/л в -5 в .Л в ч о я р и 3 а, Й а в Общий билнру-»1111, мкмоль/л Холестерин, ммоль/л Эритроциты (ГШС), 10,2/л Лейкоппты (\УВС), 109/л Гемоглобин (НСВ), г/л Гематокрит (НСТ), %

1 10 48,1±1,5 29,1±3,5 93,0±8,7 6,3±0,5 3,9±0,3 6,3±0,2 7,5±0,3 125,0±6,4 45,3±4,2

о 2 20 53,3±2,3 32,4±3,4 82,4±7,4 6,2±0,7 4,1±0,5 6,2±0,6 7,6±0,5 131,4±5,2 45,1±4,6

ч 3 30 51,»±3,1 28,8±3,1 89,9±9,2 5,9±0,4 3,8±0,4 6,7±0,4 7,8±0,4 129,9±7,3 46,5±3,9

4 0 49,1 ±3,5 33,4±3,4 92,3±8,3 6,1±0,5 4,3±0,3 6,1±0,5 8.1±0.5 132,3±7,3 46,2±3,4

1 10 52,1±4,5 31,2±2,5 90,0±5,3 5,9±0,7 4,1 ±0,3 6,4±0,2 7,8±0,2 129,2±5,6 47,1±4,2

2 20 55,2±3,4 30,9±2,4 85±6,2 6,8±0,6 4,2±0,4 6,2±0,3 7,9±0,3 130,5±3,1 45,2±5,2

3 30 52,9±1,1 29,3±2,3 87,2±7,1 8,3±0,5* 3,9±0,2 5,7±0,3* 7,4±0,5 120,3±8,1* 44.1±4,1

4 0 56,1±2,1 32,5±3,2 95,1 ±8,3 6,5±0,8 4.2±0,2 6,5±0,2 8,0±0,4 131,8±5,8 45,3±3,6

1 10 55,2±2,3 30,2±1,5 89,8±6,2 5,8±0,4 4,2±0,5 6,5±0,2 7,6±0,3 (25,2±6,8 45,6±5,6

V) 2 20 53,5±2,7 33,2±3,1 89,3±6,4 6,4±0,7 4,3±0,3 6,6±0,2 7,8±0,4 133,4±5,6 48,3±6,7

3 30 54,2±4,3 30,3±2,4 87,8±7,2 7.7±0,6* 4,1±0,3 6,2±0,4* 8,1±0,3 122,4±3,2* 44.0±3,8

4 0 53,4±2,1 32,2±2,1 97,1±5,8 6,4±0,5 3,9±0,4 6.8±0,3 8,0±0,3 129,4±4,9 46,7±4,7

1 10 49,3±2,3 32.3±2,5 95,4±5,2 5,3±0,7 3,7±0,4 6,1±0,4 7,8±0,4 129,5±7,6 46,3±5,3

о 2 20 58,5±4,7 31,6±1,9 86,4±7,9 6,2±0,8 4,2±0,6 6,2±0,3 7,9±0,3 135,4±4,6 45,6±4,5

т* 3 30 56,2±2,3 29,2±2,3 85,2±4,2 5,9±0,6 3,9±0,5 6.4±0,2 8,0±0,4 128.1±4,6 46,2±3,6

4 0 52,4±4,2 31,3±1,2 93,2±8,8 6,1 ±0,8 3,6±0,3 6,5±0,3 8,1 ±0,2 127,4±8,1 46,6±2,9

* Примечание р<- 0,05 разница статистически достоверна между данной группой н контрольной.

Копрологические исследования показали отрицательные результаты на всем протяжении опыта

Результаты экспериментальных исследований свидетельствуют о том, что новая лекарственная форма албендазола, не влияет на физиологическое состояние организма собак при применешш ее в техкратной терапевтической дозе (30 мг/кг по ДВ).

3.4.6. Изучение морфологических изменений внутренних органов кроликов после применения повой лекарственной формы албендазола.

При осмотре печени после убоя не было замечено каких либо отличии во внешнем виде органа. Печень была темно-коричневого цвета, плотной консистешцш с выраженным рисунком дольчатого строения. При гистологическом исследовании, в опьпных и контрольной группах четко выражено дольчатое строение органа, в больппшстве долек балочная структура сохранена.

В цитоплазме гепатощггов как опытных, так и контрольных животных обнаруживалась зернистость и образование единичных вакуолей, заполненных капельками жира.

Почки по внешнему виду во всех группах не имели явно выраженных отличий, они были бобовидной формы, коричневого цвета, упругой консистенции, граница коркового и мозгового слоев четко выражена При гистологическом исследовании не было обнаружено заметных морфологических отличий между группами кроликов. Было видно набухание и увеличение объема некоторых клеток эпителия извитых канальцев и наличие в их просвете белковой массы. В прямых канальцах просвет был четко выражен, в нем было видно незначительное количество белковой массы, клетки эпителия имели однородную цитоплазму и четко выраженные границы.

Сердце у кроликов в обеих группах внешне не имело явно выражешгых патологических изменений, миокард был упругой консистенции, красного цвета, рисунок волокнистого строения четко выражен, эндо- и эпикард гладкие, блестящие, прозрачные. При гистологическом исследовании кардномиоцнты имели четко выраженные границы, их цитоплазма были равномерно окрашена, поперечно-полосатая исчерченность четко выражена.

3.4.7. Изучение терапевтической эффективности новой лекарствеппой формы албендазола.

Подбор оптимальной терапевтической дозы новой лекарственной формы албендазола проводили при лечении одного из наиболее распространенных гельминтозов собак — токсо-карозе. Препарат испытывали в дозах 5; 7,5; 10 и 15 мг/кг по ДВ (табл. 7).

Таблица 7. Результаты определения терапевтической дозы новой лекарственной формы ал-

Кол-во животных Доза по ДВ (мг/кг) Среднее кол-во япц токсокар в 1 г фекалий, экз. ИЭ, %

до опыта после лечения

5 5 248±22.6 84±16,7 66,1

5 7,5 248±10,9 36±16,7 84,7

5 10 236±16,7 0 100

5 15 264±16,7 0 100

Через 10 дней после дегельминтизащш у собак получавших препарат в дозе 10 мг/кг по ДВ яиц гельминтов в фекалиях не обнаружили. Примените препарата в дозах 5 и 7,5

мг/кг обеспечило соответственно 66,1 и 84,7% снижение интенсивности выделения яиц гельминтов.

В связи с тем, что терапевтическая эффективность при применении антигельминтно-го препарата, в дозе 10 мг/кг массы тела животного и 15 мг/кг массы тела, между собой не отличались а эффективности новой лекарственной формы албендазола в дозе 5, и 7,5 мг/кг массы тела была достаточно низкой, дальнейшее изучение терапевтической эффективности проводили в дозе 10 мг/кг массы тела животного.

В результате проведённых исследований было установлено, что в дозе 10 мг/кг массы тела при токсокарозе новая лекарственная форма албендазола и «Альвет-суспензия» проявили 99 % интенсэффективность как у собак так и у кошек (табл. 8).

При трихоцефалезе собак и унщшариозе кошек новая лекарственная форма показала 95,6 и 97,4% интенсэффективность. В то время как «Альвет-суспензия» при данных заболе-вашгях показала 95,5 и 97,5% интенсэффективность.

Согласно «Всемирной ассоциации за прогресс ветеринарной паразитологии» новую лекарственную форму албендазола можно классифицировать как эффективную при унщшариозе кошек (97,4%) и трихоцефалезе собак (95,6%) и высокоэффективную при токсокарозе собак и кошек (99%).

При наблюдении за животными отмечено, что собаки хорошо переносили препараты. Побочного действия препарата на организм не установлено.

Табица 8 - Терапевтическая эффективность новой лекарственной формы албендазола в сравнении с Альвет-Суспешней в дозах 10мг/кг

ДВ (п=5)

Вид животного Вид ге.тьмнига Кол-во ниц и личинок в 1г. фекалии, экз. через .... дней после назначения препарата Результаты дегельминтизации

До назначения препарата 3 дня 7 дней 12 дней Кол-во животных, свободных от гельминтов ИЭ, %

Новая лекарственная форма албендазола

Собаки Тохосага саше 216±16,7 92±22 16±16,7 2±4,5 4 99

Собаки ТпсИоссрЬаЫз уи1р1з 180±31,6 104±16,7 32±11 8±11 3 95,6

Кошки Тохосага пн51ах 206±22,8 88±22,8 12±10,9 2±4,5 4 99

Кошки Шстапа 81епосерЬа1а 152±17,9 92±17,9 48±22,8 4±8,9 4 97,4

Лльвст-суспеизня

Собаки Тохосага саше 214±19,5 88±17,9 12±26,8 2±4,5 4 99

Собаки Тпс1юсер11а1и8 уи1р1з 176±26 100±20 2б±17,8 8±17 4 95,5

Кошки Тохосага п^ах 216±1б,7 82±12,5 16±16,7 2±4,5 4 99

Кошки Шсшапа 81епосерЬа1а 160±14,1 79±14,2 20±14,1 4±8,9 4 97,5

4. ВЫВОДЫ

1 Гельминтофауна собак г. Пятигорска представлена 7 видами возбудителей: Toxocara canis, Trichocephalus vulpis, Toxascaris leonina, Ancylostoma caninum, Uncmaiia stenoeephala, Dipylidium caninum, Echinococcus granulosus. Экстенсивность инвазии собак составила 59 5%. Среди гельмингозов преобладал токсокароз с ЭИ 26,4%.

2 ' Гельминтофауна кошек представлена следующими видами эндопаразитов: Toxocara mystax, Toxascaris leonina, Uncmaria stenoeephala, Capillaria putorii и Dipylidium caninum. 51,4% исследованных кошек заражены гельминтами. Наивысшая ЭИ обнаружена при

токсокарозе - 24,3%. _„,

3 Установлен высокий уровень конташшащга почвы яицами гельшпггов (,/i, / /о проб) В 41% образцов почвы обнаружены яйца токсокар, в 39% яйца стронгилоид, в 37,5% -унцииарий и в 25% - других гельминтов (Ascaris sp, Hymenolepis sp, Mesocestoides sp.). Высокая интенсивность загрязнения наблюдалась в центральных районах города с современными жилыми микрорайонами и курортно-бальнеологическими учреждениями

4. Определено, что наиболее точным методом количественной диагностики гель-минтозов является метод Макмастера модифицированный Роепсторфом и Нансеном (1998).

5 Новая лекарственные форма албендазола по своим токсикологическим характеристикам относятся к умеренно опасным для теплокровных животных веществам (LDso -2720), обладающим слабовыраженной кумуляцией, в соответствии с ГОСТ 121.007-76, отне-

сится их к III классу опасности.

6 Результаты гематологических и биохимических показателей сыворотки крови свидетельствуют"о том, что новая лекарственная форма албендазола, не влияет на физиологическое состояние организма животных при использовании его в терапевтической дозе (10 мг/кг по ДВ).

7. В результате патоморфологических и патогистологических исследований не обнаружено существенных изменений в почках, сердце и печет! животных, получавших испытуемый препарат, по сравнению с таковыми у животных в контроле.

8 Новая лекарственная форма албендазола, согласно «Всемирной ассоциации за прогресс ветеринарной паразитологии», является эффективной при унщшариозе кошек (97,4%) и трихоцефалезе собак (95,6%) и высокоэффективной при токсокарозе собак и кошек (99%) в терапевтической дозе (10мг/кг по ДВ).

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Учитывать выявленные особенности инвазированности плотоядных и об-семененности почвы г.Пятигорска при организащш и проведении противогельминтозных

лечебно профилактических мероприятий.

2. Для количественной диагностики зараженности животных гельминтами использовать метод Макмастера в модификации Роепсторфа и Нансена (1998).

3. Рекомендуем однократное пероралыюе применение новой лекарственной формы албендазола в дозе 10 мг/кг по ДВ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Заиченко, И.В. Гельмиитофауна города Пятигорска и усовершенствование мер борьбы / H.A. Оробец, И.В. Запченко// Российский паразптологичсскнн журнал. -2011.-№ 1.-е. 112-116

2. Запченко, И.В. Загрязненность проб почвы городских и пригородных районов Пятигорска яйцами гельминтов / И.В. Запчеико, В.А. Оробец, Д.Ю. Деркачев // Ветеринария кубапи. - 2011. - №6. - С. 27-28.

3. Zaichenko, I. Which McMaster egg counting technique is the most reliable? / J. Vadlejch, M. Petrtyl, I- Zaichenko, Z. Cadkovä,I. Jankovskä, I. Langrovä, M. Moravec / Parasitology Research. - 2011. - V.109. - №5. - P.1387-1394.

4. Заиченко, И.В. Распространение эндопаразитов у плотоядных г. Пятигорска / И.В. Заиченко, В.А. Оробец // Современные методы диагностики, профилактики и терапии заразных и незаразных болезней животных: сборник научных статей по материалам международной научно-практической конференции, Ставрополь, АГРУС, 2009. - С. 48-49

5. Заиченко, И.В. Эффективность повой лекарственной формы Албендазола при токсокарозе собак / И.В. Заиченко, В А. Оробец., A.B. Серов // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: сборник научных трудов по материалам 74-й научно-практической конференции, Ставрополь, АГРУС, 2010. - С.20-21

6. Заиченко, И.В. Определение острой токсичности и изучение раздражающего действия новой лекарственной формы бензнмидазола / В.А. Оробец, И.В. Заиченко // Теория и практика борьбы с паразитарными заболеваниями: сборник материалов докладов научной конференции г. Москва, - 2010. -№11. -С. 331-335.

7. Заиченко, И.В. Внимание! Бродячие животные / И.В. Заиченко, А.И. Абросимов // Периодагческий научно-практическш! журнал: Ветеринарная служба Ставрополья Ставрополь - 2010 - №2 - С.32-33

8. Заиченко, И.В. Применение препарата колларгола при гельминтозах собак /И.В. Заиченко, В.А. Оробец // Ветеринарная медицина 21 века: инновации, опыт, проблемы и пути их решешш: материалы международной научно-практической конференции г Ульяновск.-2011. - №1.-С. 219-222.

9. Заиченко, И.В. Характеристика качественных методов флотации / И.В. Заиченко // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний сельскохозяйственных животных: сборник научных трудов по материалам 75-й научно практической конференции, Ставрополь, АГРУС, 2011. - С 37-41.

10. Заиченко, И.В. Влияние новой лекарственной формы албендазола на организм кроликов / И.В. Заичепко, В В. Михайленко, В.А. Оробец // Теория и практика борьбы с паразитарными заболеваниями: материалы докладов научной конференции, Москва, 2011 -Вып12.-С. 210-211.

11. Заиченко, И.В. Влияние новой лекарственной формы албендазола на клшшко-гематологические показатели организма кроликов / В.А. Оробец, И.В. Заиченко / Актуальные проблемы современной ветеринарии: материалы международной научно-практической конференции посвященной 65-летпю ветеринарной науки Кубани, Краснодар 2011 №1 -С.74-77

Типография «Седьмое небо» Подписано в печать 12.05.2012 г. Заказ № 529 Формат 60x84/16. Объем 1,3 п.л. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Заиченко, Игорь Владимирович

Введение.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Распространение гельминтов.

1.2 Загрязнение почвы яйцами гельминтов.

1.3 Методы копрологической диагностики гельминтозов.

1.4 Конструирование лекарственных форм на основе албендазола.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Особенности климато-георгафической зоны.

3.2. Распространение гельминтозов плотоядных г. Пятигорска.

3.3. Загрязнение проб почвы г. Пятигорска яйцами гельминтов.

3.4. Сравнительная оценка методов копрологической диагностики гельминтозов.

3.5. Разработка новой лекарственной формы албендазола.

3.6. Токсикометрическая оценка новой лекарственной формы албендазола.

3.6.1. Определение острой токсичности новой лекарственной формы албендазола.

3.6.2. Ускоренное определение кумулятивного эффекта новой лекарственной формы албендазола.

3.6.3. Определение раздражающего действия новой лекарственной формы албендазола.

3.7. Изучение влияния новой лекарственной формы албендазола на клиникогематологические показатели.

3.7.1. Изучение влияния новой лекарственной формы албендазола на клинико-гематологические показатели кроликов.

3.7.2. Изучение влияния новой лекарственной формы албендазола на клинико-гематологические показатели собак.

3.8. Изучение морфологических изменений внутренних органов кроликов после применения новой лекарственной формы албендазола.

3.9. Изучение терапевтической эффективности новой лекарственной формы албендазола.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Гельминтозы плотоядных городской популяции"

Актуальность темы.

Известно, что изучение видового состава гельминтов у собак и кошек, распространения гельминтозов, экстенсивности и интенсивности инвазии, а также возрастной и сезонной динамики необходимо в познании эпизоотологии гельминтозов домашних плотоядных животных и эпидемиологии инвазионных болезней в каждой климато-географической зоне. Это является основой в разработке интегрированных мер наступательной профилактики и терапии опасных зоонозов (В.В. Горохов, 2001, 2003; H.H. Дарченкова, 2002; и др.)

В России по данным, Е.С. Березиной (2000), Н.В Федорова (2005), A.B. Будовского (2005), P.A. Пешкова (2007), Ю.И. Власенко (2007) и др. среди гельминтозов собак и кошек в крупных городах преобладают такие, как токсокароз, дипилидиоз, токсаскаридоз и унцинариоз. Из возбудителей вышеперечисленных гельминтозов плотоядных, три вида представляют серьезную опасность не только для дефинитивного хозяина, но и для человека. Поэтому, изучение санитарно-эпидемиологической и эпизоотологической ситуации по основным гельминтозам собак и кошек является актуальной проблемой.

Ведущую роль в сохранении и распространении гельминтозов несомненно играет почва, поэтому необходимо знать видовой состав возбудителей, интенсивность ее контаминации яйцами гельминтов. Эти показатели влияют на создание и поддержание потенциального риска в заражениях населения зоонозами (P.A. Пешков, 2010).

К сожалению, дегельминтизация и сегодня остается основным и главным средством в профилактике гельминтозов, основным приемом обеспечивающим разрыв эпизоотической цепи. Поэтому, разработка, фармакологическая и клиническая оценка, внедрение в ветеринарную практику новых средств, усовершенствование существующих методов профилактики и лечения гельминтозов плотоядных является актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Целесообразность и эффективность проведения дегельминтизации определяется в основном копроскопическими исследованиями (Котельников, 1984; Н.В. Демидов, 1987; D.E. Jacobs, 1994; I.B. Wood, 1995 и др.). Сравнительная оценка некоторых методов копрологической диагностики представлена в работах В.М. Хренова (1978), JI.C. Кац (1981), М.Х. Лутфуллина, (2002), Г.Г. Горшкова (2004), G.Cringoli (2004), A.A. Pereckiene (2007), Д.Г. Латыпова (2010), Е.А. Васильевой (2010) В. Levecke (2011) и др. На сегодняшний день, по-прежнему, существуют определенные трудности в выборе наиболее эффективного и простого в применении метода количественной диагностики гельминтозов, который мог бы широко использоваться в ветеринарной практике. Таким образом, изучение гельминтофауны собак и кошек на территории города Пятигорска, изыскание эффективных методов диагностики, средств терапии и профилактики инвазии является актуальной задачей, что и послужило основой для выбора темы наших исследований.

Цель и задачи исследования. Изучить распространение гельминтозов плотоядных города Пятигорска и разработать новую лекарственную форму албендазола в виде суспензии для лечения собак и кошек.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

• Определить видовой состав гельминтов, паразитирующих у кошек и собак в климато-географических условиях г. Пятигорска

• Изучить степень распространения яиц гельминтов в почве города Пятигорска

• Провести сравнительную оценку модификаций метода гельминтоовоскопии по Макмастеру.

• Разработать и изучить фармако-токсикологические свойства новой лекарственной формы антигельминтного препарата на основе албендазола.

Научная новизна.

Впервые изучена гельминтофауна плотоядных и степень контаминации почвы г. Пятигорска яйцами гельминтов. Впервые проведена сравнительная оценка диагностической эффективности модификаций метода Макмастера с искусственной закладкой яиц гельминтов.

Разработано новое лекарственное средство на основе албендазола. Изучены фармакологические и токсикологические свойства препарата и установлена оптимальная лечебно-профилактическая доза и схема применения при нематодозах плотоядных.

Практическая значимость.

Результаты исследования по оценке методов диагностики гельминтозов внедрены в Научно-диагностическом и лечебном ветеринарном центре СтГАУ.

Апробация работы.

2009 - 2012 гг., на международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии» посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани (г. Краснодар, 2011 г.), на научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2010 г.), на международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения» посвященной Всемирному году ветеринарии в ознаменование 250-летия профессии ветеринарного врача (г. Ульяновск, 2011 г.).

Личный вклад соискателя.

Диссертационная работа является результатом трехлетних исследований автора. Изучение видового состава и распространенности гельминтозов плотоядных, показателей загрязненности почв яйцами гельминтов города Пятигорска, тестирование методов диагностики, а также разработка и фармако-токсикологическая оценка новой лекарственной формы албендазола выполнены соискателем лично.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Эпизоотологическая ситуация по гельминтозам плотоядных в г. Пятигорске характеризуется широким распространением гельминтозов среди животных и высокой степенью контаминирования почвы яйцами гельминтов.

Достоверная оценка количественных методов диагностики гельминтов осуществляется с использованием искусственной закладки яиц гельминтов.

- Новая лекарственная форма албендазола безопасна в применении и высокоэффективна при нематодозах плотоядных.

Публикации.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 119 страницах компьютерного текста, состоит из 4 глав, выводов, практических предложений. Список использованной литературы включает 197 источников, из которых 94 зарубежных авторов. Диссертационная работа иллюстрирована 18 таблицами и 12 рисунками.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Заиченко, Игорь Владимирович

5. ВЫВОДЫ

1. Гельминтофауна собак г. Пятигорска представлена 7 видами возбудителей: Toxocara canis, Trichocephalus vulpis, Toxascaris leonina, Ancylostoma caninum, Uncinaria stenocephala, Dipylidium caninum, Echinococcus granulosus. Экстенсивность инвазии собак составила 59,5%. Среди гельминтозов преобладал токсокароз с ЭИ 26,4%.

2. Гельминтофауна кошек представлена следующими видами эндопаразитов: Toxocara mystax, Toxascaris leonina, Uncinaria stenocephala, Capillaria putorii и Dipylidium caninum. 51,4% исследованных кошек заражены гельминтами. Наивысшая ЭИ обнаружена при токсокарозе - 24,3%.

3. Установлен высокий уровень контаминации почвы яйцами гельминтов (73,7% проб). В 41% образцов почвы обнаружены яйца токсокар, в 39% яйца стронгилоид, в 37,5% - унцинарий и в 25% - других гельминтов (Ascaris sp, Hymenolepis sp, Mesocestoides sp.). Высокая интенсивность загрязнения наблюдалась в центральных районах города с современными жилыми микрорайонами и курортно-бальнеологическими учреждениями.

4. Определено, что наиболее точным методом количественной диагностики гельминтозов является метод Макмастера модифицированный Роепсторфом и Нансеном (1998).

5. Новая лекарственные форма албендазола по своим токсикологическим характеристикам относятся к умеренно опасным для теплокровных животных веществам (LD50 = 2720), обладающим слабовыраженной кумуляцией, в соответствии с ГОСТ 121.007-76, отнесится их к III классу опасности.

6. Результаты гематологических и биохимических показателей сыворотки крови свидетельствуют о том, что новая лекарственная форма албендазола, не влияет на физиологическое состояние организма животных при использовании его в терапевтической дозе (10 мг/кг по ДВ).

7. В результате патоморфологических и патогистологических исследований не обнаружено существенных изменений в почках, сердце и печени животных, получавших испытуемый препарат, по сравнению с таковыми у животных в контроле.

8. Новая лекарственная форма албендазола, согласно «Всемирной ассоциации за прогресс ветеринарной паразитологии», является эффективной при унцинариозе кошек (97,4%) и трихоцефалезе собак (95,6%) и высокоэффективной при токсокарозе собак и кошек (99%) в терапевтической дозе (10мг/кг по ДВ).

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Учитывать выявленные особенности инвазированности плотоядных и обсемененности почвы г.Пятигорска при организации и проведении противогельминтозных лечебно профилактических мероприятий.

3. Рекомендуем однократное пероральное применение новой лекарственной формы албендазола в дозе 10 мг/кг по ДВ.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В работе была изучена гельминтофауна домашних плотоядных и показатели зараженности ими. Впервые изучено загрязнение почвы в разных районах города (спальные районы, парковые зоны и места отдыха, районы с индивидуальной застройкой и др.). Впервые проведена сравнительная оценка методов количественной диагностики гельминтов Макмастера, используя искусственную закладку яиц. Разработана новая лекарственная форма албендазола в виде суспензии для профилактики и лечения гельминтозов плотоядных и изучены ее фармако-токсикологические свойства. Определена ее антгельминтная эффективность при токсокарозе и трихоцефалезе и унцинариозе. Материалы изучения видового состава гельминтов собак и кошек, показатели экстенсивности инвазии, показатели загрязненности почвы, показатели эффективности копрологических методов количественной диагностики гельминтов, ' фармако-токсикологические свойства и антгельминтная эффективность новой лекарственной формы албендазола представляют интерес для практических специалистов и используются, в учебном процессе по паразитологии и инвазионным болезням на факультете ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Ставропольский государственный аграрный университет». Материалы диссертации по изучению методов количественной диагностики яиц гельминтов используются в «Региональном научно-диагностическом и лечебном ветеринарном центре» г. Ставрополя.

Как видно из обзора литературы, кишечные гельминтозы собак и кошек имеют широкое распространение. Это целиком и полностью подтверждается результатами наших исследований по городу Пятигорску.

Результаты исследований показали, что гельминтофауна плотоядных г. Пятигорска представлена девятью основными видами возбудителей: Toxocara canis; Toxocara mystax; Trichocephalus vulpis;

Toxascaris leonina;

Uncinaria stenocephala;

Ancylostoma caninum;

Capillaria putorii

Dipylidium caninum;

Echinococcus granulosus;

Среди гельминтозов доминируют токсокароз и трихоцефалез, субдоминантными являются токсоскаридоз, анкилостомоз и унцинариоз. Аналогичные результаты были у большинства авторов, занимающихся данным вопросом в других городах России (Н.В. Есаулова, 2001; А.Г. Соколов, 2003; Н.В. Михина 2008; Д.Ю. Игнатова, 2007; Власенко, 2007; Н.В. Зонина, 2009; А.С. Журавлев, 2009 и др.). Проведенные нами исследования выявили, что инвазированность токсокарозом оказалась высокой как в популяции кошек, так и в популяции собак г. Пятигорска. Токсокароз плотоядных животных является наиболее распространенным и изученным геогельминтозом, занимающим доминирующие положение в структуре гельминтозов. Н.В. Зонина (2009) объясняет это тем, что в крупных городах наблюдается большая скученность животных на маленькой территории, и мезоклимат города способствует созданию оптимальных условий для развития пропагативных стадий гельминтов.

Согласно полученным результатам наблюдалась определенная закономерность в отношении возрастной восприимчивости к гельминтозам: инвазированность регистрировалась в возрасте от 1-го месяца до 6-ти всего у 82,2% у собак и 66,1% у кошек. У животных от 6 до 12 месяцев - 77,4% у собак и 62,1% у кошек, от 1 года до 5 лет - 50% у собак и 48,6% у кошек, 5 лет и более - 22,2% у собак и 27,2% у кошек.

В сравнении с кошками (51,4%) популяция собак (59,5%) более заражена гельминтами. Можно отметить, что трихоцефалез более свойственен популяции собак.

Таким образом, качественные и количественные показатели зараженности животных в г. Пятигорске гельминтами являются реальными показателями биологической опасности не только для домашних плотоядных животных, но и для человека.

Обследование почв города Пятигорска показало, что загрязнение центральных районов выше, чем загрязнение почвы в пригородной зоне и зоне с индивидуальными застройками. Аналогичные результаты были замечены M.Y. Noor Azian и др. (2008), у которых в городских районах (90%) загрязнение почвы яйцами гельминтов было выше чем в сельской местности (18,3%), и другими авторами (J. Jansen, 1993; W.N. Minnaar, 2002; Н. Mizgajska-Wiktor, 2007; A. Perec-Matysiak, 2008; A.J. Cassenote, 2011). Это может быть связано с увеличением количества бродячих собак, которые испражняются вблизи жилых районов. Собаки также могут посещать общественные места и парковые зоны, особенно в ночное время, для совершения дефекации, поскольку эти места не защищены ограждением. Поэтому, особое место в эпизоотологии гельминтозов уделяется бродячим собакам и кошкам, которые не регистрируются и обследование которых практически исключено. Численность этих животных высока, и они свободно передвигаются на большие расстояния, что приводит к значительному загрязнению окружающей среды яйцами гельминтов, и повышению риска заражения людей (Р. А. Пешков, 2010). Каждое зараженное животное с испражнениями выделяет огромное количество яиц гельминта (до 200 тыс. в сутки). Тем не менее, прямой контакт с зараженным животным не рассматривается как потенциальный риск, поскольку яйца токсокар становятся заразными после нахождения в почве не менее 2 недель. Поэтому, заражение людей токсокарозом, более вероятно от загрязненной окружающей среды (P.A. Overgaauw, 1994). Однако, ряд авторов пишут обратное (Д.Г. Тищенко, и др. 2005), описывая опасность прямого заражения человека Toxocara canis после контакта с зараженными собаками, так как шерсть от собак обсеменена яйцами гельминтов на различных стадиях развития. Эти авторы утверждают, что контакт с собаками является основным путем заражения человека. Кошки поражаются токсокарозом значительно реже, чем собаки, вследствие чего случаи обнаружения у человека личинок Т. mystax встречаются значительно реже, чем Т. canis.

Уровень загрязнения почвы парковых зон яйцами Тохосага, в нашем исследовании (15,2±3,2 яица/ЮОг) сопоставим с данными, опубликованными M.R.R. de Ybanez и др. (2001), которые в парках восточной Испании обнаружили 16,7 яиц/1 ООг почвы. Аналогичный результат был у К.Е. Ludlam и T.R. Platt (1989), которые определили среднюю концентрацию - 14 яиц/1 ООг в почве из парков в США. N. В Бразилии, в городе Сальвадор N. Alcántara и др. (1989), также отметили преобладание яиц Тохосага в почве парков и скверов.

Низкий уровень загрязнения яйцами гельминтов почвы в районах с индивидуальной застройкой может быть связан с несколькими причинами: меньшим количеством бродячих собак и кошек, поскольку, собаки в частном секторе в основном содержатся на цепи, или в закрытых вольерах возле домов. Условия окружающей среды и тип почвы могут быть еще одним фактором. В центральных районах и парках почва является рассыпчатой, хорошо гумуссированной, содержит много органических веществ, в то время как в сельской местности и в частном секторе она может быть уплотненной (M.Y. Noor Azian, 2008). Несомненно, уровень загрязнения почвы, так же зависит от места взятия пробы (S. Dubna, 2006). В нашем исследовании образцы почвы из жилых зон были более загрязнены яйцами гельминтов, чем образцы взятые у дорог или газонов окружающих данную территорию.

Мы так же согласны с утверждением И.М. Зубаревой (2001), что лучшие условия для развития унцинарий имеют районы с разнообразным ландшафтом и богатые растительностью, поскольку наибольший процент положительных проб с этим паразитом был обнаружен нами в парковых зонах города (со средней интенсивностью загрязнения 20 яиц/1 ООг).

Взрослые и дети должны быть осведомлены о возможных путях заражения через почву и загрязненные овощи. Кроме того, загрязнение почвы должно быть приостановлено путем дегельминтизации домашних животных, сбора кала после дефекации собак, отлова бродячих собак и кошек.

Из вышеизложенного следует, что в г. Пятигорске циркулируют заболевания, общие для человека и домашних плотоядных - это токсокароз, трихоцефалез, дипилидиоз, унцинариоз, эхинококкоз. Токсокароз, трихоцефалез и унцинариоз доминируют над другими гельминтозами, в результате чего создается постоянная опасность заражения этими гельминтами людей, особенно детей с ослабленной иммунной системой. Полученный комплекс данных, характеризующий паразитарные системы в условиях города Пятигорска, можно использовать для управления параметрами гельминтозного загрязнения и повышения биобезопасности окружающей среды на территории города и его пригородов.

Точное обнаружение паразитарных элементов, а также диагностика паразитов имеют ключевое значение в ветеринарной паразитологии. Из-за своей простоты, скорости и специфики, микроскопия по-прежнему остается основным диагностическим методом во многих лабораториях. Мы провели сравнение 3-х модификаций метода Макмастера с использованием искусственной закладки яиц.

После сравнения 3 выбранных методов, очевидно, что метод Макмастера, модифицированный Роепсторфом и Нансеном (1998), является наиболее достоверным и точным для обнаружения яиц гельминтов. Этот метод является быстрым, он имеет низкий предел обнаружения (20 яиц), и менее трудоемким. Кроме того, в связи с центрифугированием, суспензии фекалий достаточно прозрачны при подсчете. Единственным недостатком является необходимость большего количества флотационной жидкости (54 мл на 1 образец). Модификация Зайчека (1978) должна обеспечивать лучшие результаты из-за низкого коэффициента умножения, двух шагов центрифугирования и низкого коэффициента разбавления. Хотя коэффициент разбавления может быть единственной причиной недостаточной эффективности этого метода. Наличие мусора в рассматриваемой суспензии делает исследование образца более трудным и некоторые паразитарные элементы могут быть пропущены. Этот метод точен только при наличии концентрации более 100 яиц в грамме. Третий сравниваемый метод, модифицированный Ветцелем (1951), самый простой, и дает худшие результаты. Низкая достоверность и точность этого метода вызвана высоким коэффициентом умножения и отсутствием центрифугирования. Этот метод дает точные результаты только в концентрации более 200 яиц в грамме.

Результаты нашего исследования соответствуют мнению Т.Н.М. Мез (2001, 2003) и А. Регесклепе (2007). Метод Макмастера (Роепсторфа и Нансена, 1998), в котором вес тестируемой пробы составил 4 г и использовался самый низкий коэффициент умножения (20) из всех испытанных методов (33 и 67), был лучшим методом количественной диагностики яиц в фекалиях во всех концентрациях. Его предполагаемая предельно низкая концентрация обнаружения составляет 20 яиц в грамме, хотя в этом пределе только в 70% проб были обнаружены яйца. При более высоких концентрациях 200 и 500 яиц, точность этого метода была почти 100%.

Результаты наших исследований частично не совпадают с результатами некоторых авторов. Так же как и у в. Спг^оН (2004), А. Регесклепе (2007), самая высокая точность наблюдалась при использовании коэффициента разбавления 1:14 (Роепсторф и Нансен, 1998). В то время как, самая низкая точность была замечена в методе Ветцеля (1951), который использует отношение 1:30. Метод Зайчека (1978) использует низкий коэффициент разбавления (1:5) и, следовательно, он должно быть наиболее точным. Тем не менее, при некоторых концентрациях, этот метод дает аналогичные результаты как метод с соотношением 1:30. Это, возможно, связанно с большим количеством мусора, который мешает четкому микроскопическому исследованию. Человек, который исследует пробу, может незаметить яйцо и вероятность ошибки возрастает.

Методы, которые требуют центрифугирования можно считать более сложными и трудоемкими, а их результаты являются более точными (А. РегесЫепе, 2007). Аналогичные результаты очевидны в нашей работе. Два метода Роепсторфа и Нансена (1998) и Зайчека (1978), которые используют центрифугирование, являются более точными, чем метод Ветцеля (1951), без центрифугирования.

Мы согласны с мнением О. Спг^оП (2010), что флотационный раствор влияет на качество флотационного метода. С другой стороны, мы считаем, что при рассмотрении всех методологических факторов, влияющих на точность, раствор флотации имеет меньшее значение. Флотационной жидкостью используемой в методе Макмастера (Роепсторфа и Нансена, 1998) является насыщенным раствором хлорида натрия с глюкозой (плотность 1,Зкг/м3). Метод с этой флотационной жидкостью оказался самым точным из всех протестированных модификаций, а при использовании только насыщенного раствора хлорида натрия (Ветцель, 1951) с плотностью 1,2кг/м3 результаты были гораздо ниже. в. Спп§оН и др. (2004) пишут, что лучший объем исследуемой суспензии примерно 1 мл. Количество яиц в грамме, рассчитанное в результате выбора любого другого объема, будет завышено, и тем самым дает неточные результаты. По нашим данным, 0,3 мл будет достаточным для получения достоверных результатов. Точность метода Ветцеля, которая рассматривала больший объем исследуемой суспензии (0,45 мл), оставляет желать лучшего.

Таким образом, очень трудно индивидуально оценивать факторы, влияющие на точность методов флотации. В том случае, если количество диагностируемых фекалий достаточное и выбран низкий коэффициент умножения, но применяются другие непропорциональные факторы (высокий коэффициент разбавления, низкая ОЦС или отсутствие центрифугирования, плохая флотационная жидкость и т.д.) результаты могут быть не точными.

Ряд других факторов может повлиять на результаты подсчета яиц: цикл развития паразита, физиологическое состояние хозяина или технические навыки человека выполняющего диагностику (L.C. Gasbarre, 1996; М. Eysker, 2000; A.A Pereckiene, 2007; М. Gates, 2009). Некоторые авторы скептичны, когда речь идет об использовании результатов количественной диагностики яиц. М. Eysker и H.W. Ploeger (2000) пишут, что в большинстве случаев, подсчет яиц в фекалиях не отражает точной степени инвазии нематодами, поэтому для оценки степени тяжести заболевания его следует использовать с большой осмотрительностью. Тем не менее, подсчет яиц имеет важное значение для определения эффективности антгельминтика. По мнению L.C. Gasbarre (1996), показатели яиц в грамме не всегда точно отражают инвазию паразита, но они играют важную роль в определении вероятности заражения других животных в популяции. Отчасти, мы согласны с упомянутыми выше авторами. Определение степени инвазированности паразитами, используя подсчет яиц в фекалиях, имеет свои недостатки, но, тем не менее, на сегодняшний день, он является основным методом количественной диагностики гельминтозов.

Пополнение арсенала препаратов и их усовершенствование при нематодозах и цестодозах собак представляет важную экономическую и ветеринарную проблему. При разработке новых антигельминтиков нередко в погоне за высокой эффективностью недостаточно внимания уделяется изучению их безвредности для организма животных (А.И. Кротов, 1990; А.О. Осмонов, 1999). По этой причине многие из них не находят применения в ветеринарной практике. Указанные факты являются основанием интенсивного поиска во многих научных центрах мира новых антигельминтных средств и их лекарственных форм для борьбы с гельминтозами животных и подробного изучения их фармако-токсикологических свойств. (М. Арзыбаев, 2005).

В этой связи, нами на основе албендазола была разработана новая лекарственная форма и изучены ее фармако-токсикологические свойства.

Перед испытанием новой лекарственной формы албендазола на целевых животных, нами были проведены доклинические испытания на лабораторных животных.

Изучение острой токсичности проводили на белых мышах. Изучение раздражающих и кожно-резорбтивных свойств, проводили на кроликах. Кумулятивные свойства изучали на белых крысах.

Результаты исследований, по определению острой токсичности, показали, что новая лекарственные форма албендазола по своим токсикологическим характеристикам (1Т)5о=:2740) относится к умеренно опасным для теплокровных животных веществам, что позволяет, в соответствии с ГОСТ 121.007-76, отнести ее к III классу опасности. Исходя из полученных результатов проведенного опыта по ускоренному определению коэффициента кумуляции, новую лекарственную форму албендазола можно отнести по степени кумуляции к 4 группе (по Л.Н. Медведю, 1964) то есть к веществам, обладающим слабовыраженной кумуляцией.

Результаты гематологических и биохимических показателей крови кроликов, после применения лекарственной формы в терапевтической дозе (10 мг/кг по ДВ), свидетельствуют о том, что новая лекарственная форма албендазола, не влияет на физиологическое состояние организма кроликов.

Исходя из результатов эксперимента, по изучению раздражающего действия препарата, можно сделать вывод, что изучаемый лекарственная форма не обладает выраженным раздражающим действием.

В результате патоморфологических и патогистологических исследований не обнаружено существенных изменений в изученных органах и тканях животных, получавших испытуемый препарат, по сравнению с таковыми у животных в контроле.

Результаты гематологических и биохимических показателей крови собак, после применения лекарственной формы в терапевтической дозе (10 мг/кг по ДВ), в двукратной дозе (20 мг/кг по ДВ) и трехкратной дозе (30 мг/кг по ДВ), свидетельствуют о том, что новая лекарственная форма албендазола, не влияет на физиологическое состояние организма собак, даже при применении ее в трехкратной дозе.

Сравнительный анализ терапевтической эффективности альвет-суспензии и новой лекарственной формы албендазола позволил установить, что использованные препараты при однократной дегельминтизации собак и кошек проявили 95,5-99%-ную интенсэффективность при токсокарозе, трихоцефалезе и унцинариозе.

Согласно «Всемирной ассоциации за прогресс ветеринарной паразитологии» новую лекарственную форму албендазола можно классифицировать как эффективную при унцинариозе кошек (97,4%) и трихоцефалезе собак (95,6%) и высокоэффективную при токсокарозе собак и кошек (99%).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата ветеринарных наук, Заиченко, Игорь Владимирович, Ставрополь

1. Акбаев, М.Ш. Ветеринарная гельминтология. Под ред. Акбаева М.Ш. М.: Колос, 1998. С. 82-106.

2. Акимова, С. А. Токсокароз и токсаскароз плотоядных в Нижнем Поволжье: Эпизоотология, патогенез и лечение: дис. .канд. вет. наук / С.

3. A.Акимова.- Иваново, 2006.-165с.

4. Арзыбаев, М. Разработка антигельминтных средств из местного сырья и изучение их фармако-токсикологических свойств: дис. .док. вет. наук / М. Арзыбаев. Москва, 2005. - 311с.

5. Архипов, И. А. Гельминтозы собак и кошек в крупных мегаполисах России / И.А. Архипов, Д.А. Авданина, C.B. Лихотина // Ветеринария. 2006. - № 3. - С. 33-38.

6. Архипов, И.А. Антигельминтики: фармакология и применение / И.А. Архипов // М.: Россельхозакадемия. 2009. - 406с.

7. B.Х. Фазылов// Паразитология в XXI веке проблемы, методы, решения: Материалы IV Всероссийского Съезда Паразитологического общества при Российской академии наук. Санкт Петербург, 2008. - №1. - С. 63-66.

8. Бене, Ф. Выбор антигельминтных средств при гельминтозе у плотоядных / Бене. Ф. // Ветеринар. 1999. - № 5. - С. 4-9.

9. Березина, Е.С. Распространение токсокароза в популяции домашних плотоядных и человека на территории России / Е.С. Березина, Д.В. Лобкис, О.Ю. Старостина // Ветеринарная патология. 2011. - №3. - С. 111115.

10. Березкина, C.B. Лекарственные формы ветеринарных антгельминтиков (разработка, испытание и внедрение): дис. .док. вет. наук./ C.B. Березкина. Москва, 1992. -318с.

11. Беспалова, Н. С. Этиопатогенетическая терапия гельминтозов :На примере токсокароза собак: дис. . .док. вет. наук / Н. С Беспалова.- Нижний Новгород, 2003. -418с.

12. Бобылев, Р. В., Грядунова Г. П., Иванова Л. А. Технология лекарственных форм. М.: «Медицина», 1991, т. 2

13. Бондаренко, B.C. Динамика распространения смешанной инвазии гельминтозов собак и меры борьбы с ними / B.C. Бондаренко // Ветеринария. 1994.-№3.-С.57-60.

14. Будковской, A.B. Паразитарные заболевания собак при разных типах содержания и назначения и усовершенствование терапии гельминтозов: дис. .канд. вет. наук /A.B. Будковской. Москва, 2005. -149с.

15. Васильева, Е. А. Эпизоотология трематодозов крупного рогатого скота и совершенствование системы противотрематодозных мероприятий в Республике Алтай: дис. .канд. вет. наук. / Е.А.Васильева. Новосибирск, 2010.- 147с.

16. Видеркер. М.А. Биобезопасность окружающей среды при формировании гельминтофаунистических комплексов паразитарных систем в Ульяновской области: дис. .канд. биол. наук / М.А. Видеркер. Ульяновск, 2005. - 171с.

17. Вислобоков, В. А. Стронгилоидоз лошадей в центральном районе Нечерноземной зоны Российской Федерации : биология возбудителя,эпизоотология, патогенез, лечение и профилактика: дис. .канд. ветер, наук / В. А. Вислобоков. Иваново, 2009. - 150с.

18. Воличев, А.Н. Эколого-эпизоотологические аспекты профилактики основных паразитозов домашних плотоядных в условиях мегаполиса Москвы: дис. .канд. вет. наук / А. Н. Воличев. Москва, 2000. -158с.

19. Власенко, Ю.И. Гельминтозы плотоядных Краснодарского края и меры борьбы с ними: дис. .канд. вет. наук / Ю. И. Власенко. Ставрополь, 2007. - 63с.

20. Гаджиев, И.Г. Гельминтозы собак на территории Терско-Кумской низменности и совершенствование мер борьбы: дис. .канд. вет. наук / Гаджиев И. Г. Махачкала, 2011. - 148с.

21. Гаджиев, И.Г. Фауна гельминтов домашних и диких псовых (Canidae) в равнинном поясе Дагестана / И.Г. Гаджиев, A.M. Атаев, М.Г. Газимагомедов // Российский паразитологический журнал. 2010. - №4. - С. 12-16.

22. Гармаш, С.И. Акценты патогенеза гельминтозов собак / С.И. Гармаш, И.Г. Гламаздин // Паразитология и инвазионные болезни животных: Материалы XVI Московского международного ветеринарного конгресса, МГУПБ, Москва, 2008. С. 69-71.

23. Герке, B.C. Опасность инфицирования человека toxocara canis при контакте с зараженными собаками // B.C. Герке, А.Н. Герке, Д.Г. Тищенко // Ветеринар. 2005. - № 1. - С. 15.

24. Глазунов, Н.В. Основные паразитарные болезни свиней и меры борьбы с ними: дис. .канд. вет. наук / Н.В. Глазунов. Нижний Новгород, 2006. - 138с.

25. Головнина, О.В. Эпизоотологический мониторинг при экто- и эндопаразитозах плотоядных: дис. .канд. вет. наук./ О.В Головнина. -Нижний Новгород, 2010. 173с.

26. Горшкова, Г.Г. Дикроцелиоз крупного рогатого скота в Республике Татарстан: Эпизоотология, диагностика и терапия: дис. .канд. вет. наук / Г.Г. Горшкова. Казань, 2004. - 167с.

27. Горохов, В.В. К методологии мониторинга при паразитарных болезнях/ В. Горохов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции, ВИГИС, Москва, 2001.-С. 66-68.

28. Горохов, В. В. Общие проблемы эпизоотологии гельминтозов // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: Материалы докладов научной конференции, ВИГИС, Москва, 2003. Вып.4. - С.125-127.

29. Гузеева, М.В. Роль и место редких гельминтозов в паразитарной патологии в России: автореф. дис. .канд. мед. наук. / М.В. Гузеева. -Москва, 2009. 25с.

30. Давыдова, И.В. Клинико-иммунологическая оценка переносимости терапии албендазолом больных цистным эхинококкозом: дис. . .канд. мед. наук / И.В. Давыдова. Москва, 2007. - 144с.

31. Дарченкова, H.H. Картографический метод в медицинской паразитологии / H.H. Дарченкова // М.-Курск, 2002. 80с.

32. Даугалиева, Э.Х. Изучение патологических и иммунологических сдвигов при смешанных инвазиях / Э.Х. Даугалиева, М.Г. Моисеенко // Болезни овец и меры борьбы с ними в Казахстане. Алма-Ата. 1975. -С. 139141.

33. Демидов, Н.В. Фасциолез // Справочник по ветеринарной гельминтологии / Под ред. Ершова B.C. М.: Колос, 1964. С. 40-53.

34. Дронова, Ю.Ю. Основные гельминтозы плотоядных и кроликов и совершенствование мер борьбы с ними: дис. .канд. вет. наук / Ю.Ю. Дронова. п. Родники, Московской обл, 2006. - 123с.

35. Есаулова, Н.В. Гельминтофауна домашних и диких плотоядных в условиях Центральной зоны Нечерноземья и усовершенствование мерборьбы с основными гельминтозами: дис. .канд. вет. наук / Н. В. Есаулова. -Москва, 2001. 182с.

36. Енгашев, C.B. Разработка и внедрение новых лекарственных форм ветеринарных препаратов для борьбы с паразитарными болезнями: дис. .док. вет. наук / С.В Енгашев. Саратов, 2002. - 338с.

37. Еремеева, O.P. Микстинвазии крупного рогатого скота и их профилактика в Северо-Западной зоне Российской Федерации: дис. .канд. вет. наук./ O.P. Еремеева. Иваново, 2001. - 149с.

38. Жабров, A.B. Гельминтозы собак на урбанизированных территориях Среднего Поволжья: эпизоотология и меры борьбы: дис. .канд. вет. наук / A.B. Жабров. Нижний Новгород, 2002. - 153с.

39. Жарова, В.В. //Вопросы медицинской паразитологии. М. 1976. -С. 36-38.

40. Журавлев, A.C. Фауна гельминтов собак Кабардино-Балкарской республики и усовершенствование мер борьбы с опасными зоонозами: дисс. .канд. вет. наук / A.C. Журавлев. Ставрополь, 2009. - 124с.

41. Запарий, С. П. Урбанические очаги токсокароза в крупном промышленном центре Западной Сибири: дис. .канд. биол. наук / С.П. Запарий. Тюмень, 2003. - 122с.

42. Зонина, Н.В. Гельминтофаунистический комплекс домашних плотоядных животных на территории Ульяновской области: дис. .канд. биол. наук / Н. В. Зонина. Ульяновск, 2009. - 125с.

43. Зрячкин, Н.И. Гельминтозы (патогенез, клиника, диагностика, лечение, диспансеризация и профилактика) / Н.И. Зрячкин // Учебно-методическое пособие, СГМУ. Саратов. - 2006. - 26 с.

44. Зубарева, И.М Основные гельминтозы домашних плотоядных в крупных городах :На примере г. Новосибирска: дис. .канд. вет. наук / И.М. Зубарева. Новосибирск, 2001. - 176с.

45. Игнатова, Д.Ю. Эпизоотологический мониторинг при паразитозах собак: эпизоотологические параметры паразитозов собак: дис. .канд. вет. наук / Д. Ю.Игнатова. Нижний Новгород, 2007. - 149с.

46. Каспранова, Г.Ф. Зараженность собак токсокарозом в Башкирской АССР. Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных: Сборник научных трудов, Ленинград, 1989.-Т.1. С. 71-74.

47. Кац, Л.С. Усовершенствование метода прижизненной диагностики трематодозных заболеваний / Науч.-тех. Бюллетень, Новосибирск, 1981. Вып.50. - С.31-34.

48. Кашковская Л.М. Зараженность почвы яйцами гельминтов в г. Саратове / Л. М. Кашковская, В. А. Сидоркин, А. В. Горбунов // Энтомологический сборник. 2007. - №6. - С. 105-107.

49. Кротов, А.И. Пути и методы изыскания новых антигельминтиков // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 1990. - № 3. - С. 5253.

50. Козырева, Т.Г. Эколого-эпидемиологические основы профилактики токсокароза в Дальневосточном регионе России: на примере Хабаровского Края: дис. .канд. биол. наук. / Т.Г. Козырева. Москва, 1999. - 129с.

51. Кондрахин, И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики / И.П. Кондрахин. М.: Колос, 2004. - 520с.

52. Корякин, Р.В. Моно- и микстинвазии плотоядных в условиях Приволжского федерального округа: Эпизоотологический Надзор, меры борьбы: дис. .канд. веет, наук./ Р.В. Корякин. Нижний Новгород, 2004. -147с.

53. Кондратьева, Т.С. Технология лекарственных форм. / Т.С. Кондратьева, JI.A. Иванова, Ю.И. Зеликсон //- М.: «Медицина», 1991, т. 1, с. 38-44; 159; 232-251

54. Котельников, Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. М.: Колос, 1984. 208с.

55. Кузьмин, A.A. Антгельминтики в ветеринарной медицине. — М.: Аквариум, 2000.-144 с.

56. Кукушкин, Ю.Н. Диметилсульфоксид — важнейший апротонный растворитель // Соросовский образовательный журнал, 1997. №9. - С. 54-59.

57. Кучеря, Т.В. Клинико-эпидемиологические аспекты лямблиоза у детей: дис. . .канд. мед. наук / Т.В. Кучеря. Москва, 2008. - 139с.

58. Латыпов Д.Г. Гельминтозы крупного рогатого скота в республике татарстан (эпизоотология диагностика терапия) дис. .док. вет. наук / Д.Г. Латыпов. Москва, 2010. - 336с.

59. Лутфуллин, М.Х. Метод Щербовича для диагностики трематодозов / М.Х. Лутфуллин, Д.Г. Латыпов, Г.Г. Горшкова, P.P. Тимербаева // Ветеринарный консультант. 2002. - №11. - С. 14-15.

60. Магомедов, O.A. Эпизоотология эзофагостомоза, буностомоза и нематодироза овец и меры борьбы с ними в Прикаспийском регионе: дис. .док. вет. наук / O.A. Магомедов. Москва, 2007. - 301с.

61. Малета, Ю.С. Математические методы статистического анализа в биологии и медицине / Ю.С. Малета, В.В. Тарасов // М.: Изд-во МГУ, 1982. - 179с.

62. Маланин, А.П. Ветеринарные препараты /А.П. Маланин, А.П. Морозов, A.C. Селиванова. М.: Агропромиздат, 1988. 312 с.

63. Мигачева, Л.Д. Методические рекомендации по использованию устройства для подсчета яиц гельминтов / Л.Д. Мигачева, Котельников Г.А. // М. ВИГИС, 1987. С. 81-83.

64. Михин, А.Г. Токсокароз собак (эпизоотология, иммунодиагностика, патоморфология, лечение): дис. .канд. вет. наук. /Е.А. Михин. Н.Новгород, 2004. - 119с.

65. Михина, Н.В. Эпизоотология, патоморфология и усовершенствование терапии гельминтозов кошек: дис. .канд. вет. наук / Н.В. Михина. Москва, 2008. - 142с.

66. Мужжавлев, Е.Ф. Динамика гематологических и некоторых биохимических показателей крови овец при диктокаулезе, мюллериозе и смешанной инвазии / Е.Ф. Мужжавлев // Инвазионные болезни сельскохозяйственных животных. Иваново. - 1991. - С.53.

67. Новик, Т.С. Механизм действия антгельминтиков. / Новик Т.С., Ястреб В.Б.// Материалы восьмого международного конгресса по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных. Москва. 2000. -С.168-172.

68. Новикова, Т.В. Важнейшие инвазионные болезни мелких домашних животных в условиях Европейского Севера России: дис. .док. вет. наук / Т.В Новикова. Санкт-Петербург, 2006. - 248с.

69. Никитина, Е.А. Токсокароз собак в г. Воронеже (эпизоотология, терапия, профилактика): дис. .канд. вет. наук / Е.А. Никитина. Иваново, 2004. - 117с.

70. Осмонов, А.О. Фармако-токсикологическая и антигельминтная характеристика новых антигельминтиков: автореф. дис. .док. вет. наук / А.О. Осмонов. Бишкек, 1999. - 51с.

71. Петров, Б.Ф. Биохимические показатели и микрофлора желчи и содержимого кишечника овец при дикроцелиозе / Б.Ф. Петров, Б.Г. Абалихин // Ветеринария. 1983. - № 3. - С.45-47.

72. Пешков, Р. А. Гельминтофауна собак и кошек в условиях г. Москвы / Р. А. Пешков // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями: матер, докл. науч. конф. Москва, 2007. Вып.8. - С.277-278

73. Пешков, Р. А. Эпизоотологическая ситуация по токсокарозу у плотоядных и гельминтологическая оценка внешней среды в мегаполисе Москва: дис. .канд. вет. наук/P.A. Пешков. Москва, 2010. - 138с.

74. Пивоваров, Ю.П., Королин В.В., Зиневич JI.C. Гигиена и основы экологии человека: учебник для студ. высш. мед. учеб. заведений. Ростов-на-Дону. 2002. 121с.

75. Романенко, H.A. Санитарная паразитология. //Москва, 2001.168с.

76. Санин, A.B. Парадоксы дегельминтизации, или Третий лик Януса / A.B. Санин, И.К. Васильев, В.Ю. Санина // Ветеринарный доктор. 2007.-№10. - С.13-14

77. Селиванов, H.A. Цестодозы желудочно-кишечного тракта собак и их влияние на гематологический статус организма/Н.А. Селиванов// Вестник сельскохозяйственной науки. 1999. - №4. - С. 199-202

78. Сидельковская, Ф.П. Химия N-винилпирролидона и его полимеров. «Наука», Москва. - 1970. - 150с.

79. Сидоркин, В.А. Грозное оружие против гельминтов // Ветеринария Поволжья, 2002. № 1. С.22-24.

80. Сидоркин, В.А. Кишечные гельминтозы собак г. Саратова / В. А. Сидоркин, J1. М. Кашковская, A.B. Горбунов // Ветеринария. 2008. - № 4. -С.30-32.

81. Синев, Д.Н. Справочное пособие по аптечной технологии лекарств. / Д.Н. Синев, Л. Г. Марченко, Т. Д. Синева // Изд. 2-е, перераб. и доп. СПб: Издательство СПХФА, Невский Диалект, 2001. - 316с.

82. Слопов, П.А. Иммуноферментный метод диагностики токсокароза собак, сероэпизоотологический мониторинг и терапия: дис. .канд. вет. наук / П.А. Слопов. Рязань, 2009. - 114с.

83. Соколов, А.Г. Эпизоотология ассоциативных инвазий зверей в Ямало- Ненецком автономном округе / А.Г. Соколов // Сб. науч. тр. ВНИИВЭА, Тюмень. 2003 -Вып.44 - С. 172-176.

84. Трусова, А.В. Аляриоз плотоядных в Центральном районе Нечерноземной зоны Российской Федерации: дис. .канд. вет. наук / А.В.Трусова.- Иваново, 2009. 119с

85. Тумольская, Н.И. Албендазол новые возможности лечения гельминтозов / Н.И. Тумольская // ММА им. И. М.Сеченова ИМПиТМ им. Е. И. Марциновского МЗ РФ. Новые лекарства. - 2003. - № 4

86. Урбах, В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях / М: Медицина 1975 г. - 297с.

87. Фадеева, О.В. Гельминтофауна собак и кошек г Тюмени / О.В. Фадеева // Инновации молодых ученых сельскому хозяйству России: материалы докладов всероссийской конференции ФНГУ, Москва, 2006 -№4(2).-С. 115-118.

88. Фадеева, О.В. Токсокароз домашних плотоядных г.Тюмени: дис. .канд. вет. наук / О.В. Фадеева. Тюмень, 2007. - 127с.

89. Федорова, Н.В. Гельминтозы домашних плотоядных животных г. Тюмени эпизоотология, патогистология, терапия: дис. .канд. вет. наук / Н.В. Федорова. Тюмень, 2007. - 117с.

90. Федорова, Н.В Проблема токсокароза в современном городе / Н.В. Федорова // Естествознание и гуманизм: сборник научных трудов, Томск, 2005. № 3. - Том 2,- С.71-72.

91. Хренов, В.М. Усовершенствование копроскопической диагностики гельминтозов жвачных и свиней: автореф. дис. .канд. вет. Наук / В.М. Хренов. Москва, 1978. - 24с.

92. Черепанов, A.A. Атлас. Дифференциальная диагностика гельминтозов по морфологической структуре яиц и личинок возбудителей / A.A. Черепанов, A.C. Москвин, Г.А Котельников, В.М. Хренов //-М.: Колос, 2001. 76с.: ил.

93. Шахбиев, Х.Х. Анкилостомоз и унцинариоз у плотоядных: дис. .канд. вет. наук. /Х.Х. Шахбиев. Грозный, 2010. - 129с.

94. Шамхалов, В.М. Разработка методов терапии и профилактики токсокароза собак / В.М. Шамхалов // Матер, научн.-практ. конф. Даг. ГСХА. Махачкала. - 1998. - с. 276 - 278.

95. Шишканова, JI.B. Токсокароз на юге России: дис. .канд. биол. наук /JI.B. Шишканова. Москва, 2011. - 153с.

96. Шинкаренко, А.Н. Экология паразитов и меры борьбы с вызываемыми или заболевания в Нижнем Поволжье: дис. .канд. вет. наук / А.Н. Шинкаренко. Волгоград, 2005.- 269с.

97. Юсупов, А.О. Гельминтозы овец в горном поясе Кабардино-Балкарской Республики и разработка методов интегрированной химиотерапии: дис. .канд. вет. наук / А.О. Юсупов. Махачкала, 2011. -147с.

98. Якубов, В.Н. Морфологические показатели крови при туберкулезе и фасциолезе крупного рогатого скота / В.Н. Якубов, В.П. Лучко, В.М. Лемеш / Достижение ветеринарной науки и передового опыта животноводству. Минск, 1980. - Вып.5. - С. 18-20.

99. Abo-shehada, M.N. Prevalence of Toxocara ova in some schools and public grounds in Northern and Central Jordan / M.N. Abo-shehada // Parasitology. 1989. -№83.-P. 67-71.

100. Antolovai, D. Circulation of Toxocara spp. in suburban and rural ecosystems in the Slovak Republic / D. Antolovai, K. Reiterovai, M. Miterpaikovai, M. Stanko, P. Dubinskyi // Vet. Parasitol. 2004. - № 126. -P.317-324

101. Alonso, J.M. Contamination of soils with eggs of Toxocara in a subtropical city in Argentina/ J.M. Alonso, M. Stein, M.C. Chamorro, M.V. Bojanich // J Helminthol. 2001. - №75(2). - P. 165-168.

102. Anaruma, F. F. Human toxocariasis: A seroepidemiological survey in the municipality of Campinas (SP), Brazil / F.F. Anaruma, P.P.Chieffi, C.R Silveira Correa // Rev.Inst. med. trop. 2002. - V.44. - № 6. - P.303-307.

103. Aydenizöz Ozkayhan, M. Soil contamination with ascarid eggs in playgrounds in Kirikkale, Turkey / M. Aydenizöz Ozkayhan // J Helminthol. -2006.-№80(1).-P.15-8.

104. Broussard, J.D. Optimal Fecal Assessment / J.D. Broussard // Clin. Tech. Small Anim. Pract. 2003. - №18. - P 218-230.

105. Borg, O.A. Prevalence of infection ova of Toxocara species in public places. / O.A. Borg, A.W. Woodruff// Br Med J. 1973. - №4. - P.470-472.

106. Borecka, A. Prevalence of intestinal nematodes of dogs in the Warsaw area, Poland / A. Borecka // Helminthologia. 2005. - №42. - P 35-39.

107. Beugnet, F. Detection of Toxocara spp. ova and Ancylostoma spp. larvae in soil in Noumea, New Caledonia. / F. Beugnet, R. Gadat // Rev. Med. Vet. 1993. -№144. - P. 523-525.

108. Breza, M. The improvement of the swine faeces coproovoscopic examination methodology using a new flotation solution and mucagel / M. Breza // Vet. Cas. 1959. - №8. - 569-576.

109. Capuano, D.M. Environmental contamination by Toxocara sp. Eggs in Ribeirao Preto, Sao Paulo State, Brazil. / D.M. Capuano, M. Rocha Gde. // Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 2005. - № 47(4). - P.223-226.

110. Castillo, J.A. Preparation and characterization of albendazole beta-cyclodextrin complexes / J.A. Castillo, J Palomo-Canales, J.J. Garcia, J.L. Lastres, F. Bolas, J.J. Torrado // Drug Dev Ind Pharm. 1999. - V.25. - №.12. - P. 12411248.

111. Chiodini, P.L. New Diagnostics in Parasitology / P.L. Chiodini //.Infect. Dis. Clin. 2005. -№19. - P267-270.

112. Cringoli, G. FLOTAC: new multivalent techniques for quantitative copromicroscopic diagnosis of parasites in animals and humans / G Cringoli, L. Rinaldi, M.P. Maurelli, J. Utzinger //Nat. Protoc. 2010. - № 5. - P.503-515.

113. Daniel-Mwambete, K. The effect of solubilization on the oral bioavailability of three benzimidazole carbamate drugs / K. Daniel-Mwambete, S. Torrado, C. Cuesta-Bandera, F. Ponce-Gordo, J.J. Torrado // Int J Pharm. 2004. -V.19. -№272(1-2). -P.29-36.

114. Diaz, D. Complexation and Solubility Behavior of Albendazole with Some Cyclodextrins / D. David, Ma. J. Bernad Bemad, J.G. Mora, C.M. Escobar Llanos // Pharmaceutical Development and Technology. 1998. - V.3. - № 3. -P.395-403.

115. Dada, B.J.O. Prevalence of Toxocara sp eggs in some public grounds and highway rest areas in Kansas / B.J.O. Dada, W.D. Lindquist // J Helminthol. -1979. №53. - P.145-146.

116. Eysker, M. Value of present diagnostic methods for gastrointestinal nematode infections in ruminants / M. Eysker, H.W. Ploeger // Parasitology. -2000.-№120.-P. 109-119.

117. Fars Alanazi, K. Improvement of Albendazole Dissolution by Preparing Microparticles Using Sprav-Drvinq Technique / K. Fars Alanazi, Mahmoud El-Badry, O. Mahrous Ahmed, A. Ibrahim Alsarra // Scientia Pharmaceutica. 2007. - №75. - P.63-79.

118. Fok, E. Prevalence of intestinal parasites in dogs in some urban and periurban areas of Hungary / E. Fok, V. Szatmari, K. Busak, F. Rozgonyi // Vet. Quart. 2001. - № 123. - P.96-98.

119. Ferre, P. Prevalence of Toxocara eggs in sand pits in eight public parks in Toulouse / P. Ferre, P. Dorchies // Rev. Med. Vet. 2000. - №151. - P. 501-506.

120. Gates, M. Comparison of passive fecal flotation run by veterinary students to zinc-sulfate centrifugation flotation run in a diagnostic parasitology laboratory. / M. Gates, T.J. Nolan // J Parasitol. 2009. - №95. - P. 1213-1214

121. Garcia-Rodriguez, JJ, Torrado J, Bolas F. Improving bioavailability and anthelmintic activity of albendazole by preparing albendazole-cyclodextrincomplexes / J J. Garcia-Rodriguez, J. Torrado, F. Boläs // Parasite. 2001. - V.8. -№2.- 188-90.

122. Gasbarre, L.C. Reliability of a single fecal egg per gram determination as a measure of individual and herd values for trichostrongyle nematodes of cattle./ L.C. Gasbarre, E.A. Leighton, D. Bryant // Am J Vet Res. 1996. - №57. - P. 168171.

123. Grundlach, J.L. Contamination of selected urban and rural environments with Toxocara eggs. / J.L. Grundlach, A.B. Sadzikowski, K. Tomczuk // Med. Weter. 1996. - №52. - P.395-396.

124. Grygierczyk, D, Kwiatkowski S, Sodowska H. Soil contamination with Toxocara spp. Eggs in the Katowice area and its environs / D. Grygierczyk, S. Kwiatkowski, H. Sodowska // Wiad Parasitol. 2003. - №49(1). - P.57-60.

125. Habluetzel A. An estimation of Toxocara canis prevalence in dogs environmental egg contamination and risk of human infection in the Marche region of Italy. / A. Habluetzel, G. Traldi, S. Ruggieri, et al // Vet Parasitol. 2003. -№133. -P 234-52.

126. Harmon, A.F. Realtime PCR for quantifying Haemonchus contortus eggs and potential limiting factors / A.F. Harmon, Z.B. Williams, D.S. Zarlenga, M.B. Hildreth // Parasitol Res. 2007. - №101. - P.71-76.

127. Henriksen, S.A. A simple flotation and McMaster method. / S.A. Henriksen, K.A. Aagaard //Nord. Vet. Med. 1976. - №28. - P.392-397.

128. Jansen, J. Toxocara eggs in public parks and sand-boxes in Utrecht. / J. Jansen, F. van Knapen, M. Schreurs, T. van Wijngaarden // Tijdschr. Diergeneesk. 1993. - №118. -P.611-614.

129. Karamon, J. Modified flotation method with the use of Percoll for the detection of Isospora suis oocysts in suckling piglet faeces / J. Karamon, I. Ziomko, T. Cencek, J. Sroka // Vet Parasitol. 2008. - № 156. - P.324-328.

130. Kalaiselvan, R. Inhibition of albendazole crystallization in poly(vinylpyrrolidone) solid molecular dispersions / R. Kalaiselvan, G.P. Mohanta, P.K. Manna, R. Manavalan // Pharmazie. 2006. - V.61. - №7.- P.618-624.

131. Kohri, N. Improving the oral bioavailability of albendazole in rabbits by the solid dispersion technique / N. Kohri, Y. Yamayoshi, H. Xin, K. Iseki, N. Sato, S. Todo, K. Miyazaki // J Pharm Pharmacol. 1999. - № 2. -V51. - 159-64.

132. Klapec T. Contamination of soil with geohelminth eggs on vegetable organic farms in the Lublin voivodeship, Poland / T. Klapec // Wiad Parazytol. -2009. №55(4). - P.405-409.

133. Kruskal, W.H. Use of ranks in one-criterion variance analysis. / W. H. Kruskal, W. A. Wallis // Journal of the American Statistical Association. 1952. -V.47. -№260. -P.583-621.

134. Leonardi, D. High efficacy of albendazole-PEG 6000 in the treatment of Toxocara canis larva migrans infection / D. Leonardi, C. Echenique, M.C. Lamas, C.J. Salomon // J Antimicrob Chemother. 2009. - V.64. - №2. -P.375-378.

135. Loh, A.G. Tests on the centrifugal flotation technique and its use in estimating the prevalence of Toxocara in soil samples from urban and suburban areas of Malaysia / A.G. Loh, D.A. Israf// J Helminthol. 1998. - №72. - P.39-42.

136. Ludlam, K.E. The relationship of park maintanence and accesibility to dogs to the presence of Toxocara spp. ova in the soil / K.E. Ludlam, T.R. Piatt// Am. J. Public Health. 1989. - №79. - P.633-634.

137. MAFF. Fisheries and Food, Reference Book: Manual of Veterinary Parasitological Laboratory Techniques, Ministry of Agriculture, HMSO, London. -1986. -V.418. P.5.

138. Maikai, B.V. Public health implications of soil contaminated with helminth eggs in the metropolis of Kaduna, Nigeria / B.V. Maikai, J.U. Umoh, O.J. Ajanusi, I. Ajogi // J Helminthol. 2008. - №82(2). - P. 113-118.

139. Mallick, S. Preparation, physicochemical characterization and drug release studies of albendazole soliddispersions / S. Mallick, A. Sahoo, S.S. Mitra // Boll Chim Farm. 2003. - V.142. - №4. - P.180-186.

140. Morison, D.A. Technical variability and required sample size of helminth egg isolation procedures: revisited. / Morison D.A. // Parasitol. Res. -2004. № 94. - P.361-366.

141. Mes, T.H.M Technical variability and required sample size of helminth egg isolation procedures / T.H.M Mes // Vet Parasitol. -2003. №115. - P 311-320.

142. McKenna, N.Z. The diagnostic value and interpretation of faceal egg counts in sheep. / N.Z. McKenna//Vet. J. 1981. - №29. - P.129-132.

143. Morgan, E.R. Effects of aggregation and sample size on composite faecal egg counts in sheep. / E.R. Morgan, L. Cavill, G.E. Curry, R.M. Wood, E.S.E. Mitchell // Vet Parasitol. 2005. - №131. - P.79-87.

144. Minnaar, W.N. Helminthes in dogs from a pre-urban resource-limited community in free state province, South Africa / W.N. Minnaar, R.C. Krecek, L.J. Fourie // Vet Parasitol. 2002. - №107. - P. 343-349.

145. Mizgajska, H. Toxocariasis in dogs and contamination of soil with Toxocara spp. eggs in the Poznan region / H Mizgajska, T. Luty // Przegl Epidemiol. 1998. - №52(4). - P.441-446.

146. Mizgajska, H. Soil contamination with Toxocara spp. Eggs in the Krakôw area and two nearby villages / H. Mizgajska // Wiad Parazytol. 2000. -№46(1). - P.105-110

147. Mizgajska-Wiktor, H. A comparison of soil contamination with Toxocara canis and Toxocara cati eggs in rural and urban areas of Wielkopolska district in 2000-2005 / H. Mizgajska-Wiktor, W. Jarosz // Wiad Parazytol. 2007. - №53(3). - P.219-225.

148. Motazedian, H. Prevalence of helminth ova in soil samples from public places in Shiraz / H. Motazedian, D. Mehrabani, S.H. Tabatabaee, A. Pakniat, M. Tavalali // East Mediterr Health J. 2006. - №12(5). - P.562-565.

149. Nichols, J., Obendorf, D.L.,. Application of a composite faecal egg count procedure in diagnostic parasitology / J. Nichols, D.L. Obendorf // Vet. Parasitol. 1994. - №52. -P.337-342.

150. Overgaauw, P.A.M. Toxocarosis in dogs and cats / P.A.M. Overgaauw//Vet. Quart. 1994. - №16. - P. 15-16.

151. Oge, S. Prevalence of Toxocara spp. Eggs in the soil of public parks in Ankara, Turkey. / S. Oge, H. Oge // Dtsch Tierarztl Wochenschr. 2000. - № 107(2).-P.72-75.

152. O'Lorcain, P. Prevalence of Toxocara canis ova in public playgrounds in the Dublin area of Ireland / P O'Lorcain // J Helminthol. 1994. - №68. - P.237-241.

153. Perec-Matysiak, A. The evaluation of soil contamination with geohelminth eggs in the area of Wroclaw, Poland / A. Perec-Matysiak, J. Hildebrand, G. Zalesny, A. Okulewicz, A. Fatula // Wiad Parazytol. 2008. -№54(4).-P.319-323.

154. Rinaldi, L. Passalurus ambiguus: new insights into copromicroscopic diagnosis and circadian rhythm of egg excretion / L. Rinaldi, T. Russo, M. Schioppi, S. Pennacchio, G. Cringoli // Parasitol Res. 2007. - №101. - P.557-561.

155. Roepstorff, A. Epidemiology, diagnosis and control of helminth parasites of swine / A. Roepstorff, P. Nansen // FAO Animal Health Manual. -1998. 191pp.

156. Roepstorff, A. Natural Ascaris suum infections in swine diagnosed by coprological and serological (ELISA) methods / A Roepstorff / Parasitol Res. -1998. -№84. -P 537-543.

157. Rokicki, J. Contamination of playgrounds in Gdansk city with parasite eggs / J. Rokicki, A.P. Kucharska, J. Dzido, D. Karczewska // Wiad Parazytol. -2007. №53(3). - P.227-30.

158. Sager, H. Coprological study on intestinal helminths in Swiss dogs: temporal aspects of anthelminthic treatment / H. Sager, Ch. Steiner Moret, F. Grimm, P. Deplazes, M.G. Doherr, B. Gottstein // Parasitol. Res. 2006. - №98. -P.333-338.

159. Shapiro, S.S. An analysis of variance test for normality (complete samples) / S.S. Shapiro, M.B. Wilk // Biometrika. 1965. - №52(3-4). - P.591-611.

160. Svobodovae V. Comparison of a proof of Giardia intestinalis cysts with the presence of specific antibodies in dogs and cats / V. Svobodovae, M. Svoboda, J. Konvalinkovae // Vet. Med. Czech. 1995. - №40. - P. 141- 146.

161. Theodorides, V.J. Anthelmintic Activity of Albendazole Against Liver Flukes, Tapeworms, Lung and Gastrointestinal Roundworms/ V.J. Theodorides, R.J. Gyurik, W.D. Kingsbury, R.C. Parish // Experientia. 1976. -V.32. - P.702-703.

162. Torrado, S. Formulation parameters of Albendazole solution / S. Torrado, S. Torrado, J.J. Torrado, R. Cadorniga // International Journal of Pharmaceutics. 1996. - V.140. - №1. - P.45-50.

163. Vanparijs, O. Helminth and protozoan parasites in dogs and cats in Belgium / O. Vanparijs, L. Hermans, L. Van der Flaes // Vet. Parasitol. -1991. -№38. -P.67-73.

164. Ward, M.P. Evaluation of a composite method for counting helminth eggs in cattle faeces / M.P. Ward, M. Lyndal-Murphy, F.C. Baldock // Vet. Parasitol. -1997. №73. - P. 181-187.

165. Wetzel, E. Verbesserte McMaster-Kammer zum Auszahlen von Wurmeiern / E. Wetzel // Tierarztl Umsch. 1951. - №6. - P.209-210.

166. Woskowicz, M. Polyoxyethylenated methyl esters of rape oil fatty acids as non-ionic surfactants in a model drug form with albendazole / M. Woskowicz , M.M. Zgoda // Polim Med. 2005. - V.35. - №4. - P. 25-38.

167. Zajicek, D. Comparison of the efficiency of two quantitative ovoskopic methods (article in Czech) / D. Zajicek // Vet Med. 1978. - №23. -P.275-280.

168. Zhang, X.N. Preparation of albendazole polybutycyanocrylate nanoparticles and study on its pharmaceutical properties and tissue distribution / X.N. Zhang, Q. Zhang, H. Wen, G.Q. Wang, D.J. Sun // Yao Xue Xue Bao. -2003. V.38. - №6. - P.462-466.

169. Zibaei, M. Soil contamination with Toxocara spp. Eggs in the public parks from three areas of Khorram Abad, Iran / M. Zibaei, F. Abdollahpour, M. Birjandi, F. Firoozeh // Nepal Med Coll J. 2010. - №12(2). - P.63-65.

Информация о работе

Заиченко, Игорь Владимирович
кандидата ветеринарных наук
Ставрополь, 2012
ВАК 03.02.11

Диссертация

Гельминтозы плотоядных городской популяции - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы