Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Функционирование НАДФ-изоцитратдегидрогеназы и аконитатгидратазы в миокарде крысы в условиях активации свободнорадикального окисления при ишемии

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Медведева, Лилия Владимировна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИИ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Этиологические факторы ишемии миокарда и её основные формы.

1.2. Особенности метаболизма миокарда в условиях нормы и ишемии.

1.2.1. Общая характеристика метаболизма кардиомиоцитов в норме.

1.2.2. Характеристика изменений метаболизма миокарда при ишемии.

1.3. Изменения ультраструктурной организации кардиомиоцитов при ишемии.

1.4. Активные формы кислорода в метаболизме миокарда в норме и при ишемии.

1.4.1. Активные формы кислорода и источники их генерации в миокарде.

1.4.2. Роль активных форм кислорода в инициации пероксидного окисления липидов.

1.4.3. Механизмы образования активных форм кислорода в патогенезе ишемии.

1.4.4. Значение активных форм кислорода в метаболизме миокарда.

1.4.5. Регуляция образования активных форм кислорода. Характеристика некоторых типов антиоксидантных и прооксидантных систем миокарда.

1.5. Аконитатгидратаза.

1.5.1. Структурно-функциональные свойства аконитатгидратазы.

1.5.1.1. Катализируемая реакция.

1.5.1.2. Изоформы и внутриклеточная локализация.

1.5.1.3. Участие в метаболических процессах миокарда.

1.5.1.4. Молекулярная масса и структура аконитатгидратазы.

1.5.2. Очистка и физико-химические свойства аконитатгидратазы.

1.5.2.1. Способы выделения и очистки аконитатгидратазы.

1.5.2.2. Спектральные свойства аконитатгидратазы.

1.5.3. Кинетические и регуляторные свойства.

1.5.3.1. Кинетические параметры каталитического действия.

1.5.3.2. Регуляция активности аконитатгидратазы.

1.6. НАДФ-изоцитратдегидрогеназа.

1.6.1. Структурно-функциональные свойства НАДФ-изоцитратдегидрогеназы

1.6.1.1. Катализируемая реакция и функции.

1.6.1.2. Множественные молекулярные формы.

1.6.1.3. Выделение и очистка НАДФ-изоцитратдегидрогеназы.

1.6.1.4. Молекулярная масса и структура.

1.6.2. Кинетическое поведение и регуляция активности.

1.6.2.1. Влияние температуры и рН среды.

1.6.2.2. Кинетические параметры каталитического действия.

1.6.2.3. Регуляторные свойства НАДФ-изоцитратдегидрогеназы.

ЭКСШРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ ИМЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Моделирование экспериментальной ишемии миокарда у крыс.

2.2.2. Выделение субклеточных органелл из сердца крыс.

2.2.3. Оценка оксидативного статуса клеточных органелл миокарда крыс

2.2.3.1. Оценка интенсивности свободнорадикальных процессов и антиокси-дантной активности миокарда методом хемилюминесцеции.

2.2.3.2. Определение интенсивности процессов пероксидного окисления липидов спектрофотометрическим методом.

2.2.3.3. Определение концентрации ^токоферола.

2.2.3.4. Определение концентрации цитрата.

2.2.4. Определение активности ферментов.

2.2.5. Определение количества белка.

2.2.6. Выделение и очистка изоформ аконитатгидратазы и НАДФ-изоцитратде-гидрогеназы из субклеточных фракций миокарда крыс в норме и при ишемии.

2.2.6.1. Фракционирование сульфатом аммония.

2.2.6.2. Гель-фильтрационная хроматография.

2.2.6.3. Ионообменная хроматография

2.2.7. Аналитический электрофорез.

22.8. Определение молекулярной массы.

2.2.9. Исследование физико-химических, кинетических характеристик и регуляции активности ферментов в условиях нормы и ишемии.

2.2.10. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. ОЦЕНКА ОКСИДАТИВНОГО СТАТУСА МИОКАРДА КРЫС В НОРМЕ

И ПРИ ИШЕМИИ.

ГЛАВА 4. АКТИВНОСТЬ И СУБКЛЕТОЧНАЯ ЛОКАЛИЗАЦИЯ АКОНИТАТГИДРАТАЗЫ И НАДФ-ИЗОЦИТРАТДЕГИДЮГЕНАЗЫ В КАРДИОМИОЦИТАХ КРЫС В УСЛОВИЯХ НОРМЫ И ИШЕМИИ.

4.1. Исследование субклеточной локализации ферментов.

4.2. Исследование изоферментнош спектра аконитатгидратазы и НАДФизоцитратдегидрогеназы методом электрофореза в полиакриламидном геле.

ГЛАВА 5. ОЧИСТКА И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ИЗОФОРМ АКОНИТАТГИДРАТАЗЫ И НАДФ-ИЗОЦИТРАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ ИЗ НОРМАЛЬНОГО И ПОДВЕРГНУТОГО ИШЕМИИ МИОКАРДА КРЫС.

5.1. Очистка и разделение изоформ аконитатгидратазы и НАДФ-изоцитратдегидрогеназы из цитоплазматической и митохондриальной фракций миокарда контрольных и подвергнутых ишемии крыс.

5.2. Физико-химические свойства.

52.1. Молекулярная масса.

5.2.2. Спектральные свойства.

5.2.3. Исследование термостабильности аконитатгидратазы и НАДФизоцитратдегидрогеназы в норме и при ишемии.

ГЛАВА 6. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КИНЕТИЧЕСКИХ И РЕГУЛЯТОРНЫХ СВОЙСТВ АКОНИТАТГИДРАТАЗЫ И НАДФ-ИЗОЦИТРАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В УСЛОВИЯХ НОРМЫ И ИШЕМИИ.

6.1. Кинетические параметры каталитического действия.

6.1.1. Влияние концентрации субстратов и кофакторов на скорость реакций, катализируемых аконитатгидратазой и НАДФ-изоцитратдегидрогеназой.

6.1.2. Влияние pH на активность аконитатгидратазы и НАДФ-изоцитратдегидрогеназы.

6.1.3. Влияние температуры на активность ферментов.

6.2. Регуляторные свойства.

6.2.1. Регуляция пероксидом водорода и ионами Fe2+.

6.2.2. Регуляция компонентами глутатаонредуктазной/глутатионпероксидаз-ной системы.

6.2.3. Регуляция некоторыми метаболитами промежуточного обмена.

6.2.4. Регуляция адениннуклеотидами.

6.2.5. Регуляция катионами двухвалентных металлов.

ГЛАВА 7. ОЦЕНКА АКТИВНОСТИ НАД-, НАДФ-ШОЦИТРАТДЕЩЦЮ1БНАЗЬ1, АКОНИТАТГИДРАТАЗЫ И ИНТЕНСИВНОСТИ ПЕЮКСИДНОГО ОКИСЛЕНИЯ

ЛИПИДОВ В СЫВОРОТКЕ ЛЮДЕЙВ НОРМЕ И ПРИИШЕМИИ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функционирование НАДФ-изоцитратдегидрогеназы и аконитатгидратазы в миокарде крысы в условиях активации свободнорадикального окисления при ишемии"

Актуальность проблемы Изучение молекулярных основ, ответственных за регуляцию клеточного обмена, является фундаментальной проблемой биохимии. Исследование каталитических свойств и механизмов регуляции активности ферментов, обеспечивающих протекание ключевых анаболических и катаболических процессов в условиях патологии, способствует прояснению молекулярных аспектов патогенеза заболеваний и представляет собой одно из актуальных направлений медицинской биохимии. Ишемия миокарда является в настоящее время одним из наиболее распространённых патологических состояний, занимающих первое место по количеству осложнений, приводящих к легальному исходу или инвалцдизации больного. По данным Всемирной Организации Здравоохранения уровень летальности от шпемической болезни сердца (ИБС) ежегодно составляет 3,0-8,8% населения /1/. Ежегодно регистрируется -1,5 млн. случаев инфаркта миокарда, а начиная с 1970 г. в Европе наблюдается тенденция к росту заболеваемости инфарктом на 12-16%, что свидетельствует о том, что данная патология представляет собой важную социальную проблему.

В основе патогенеза ишемии лежит комплекс обменно-функциональных и структурных нарушений миокарда, возникающих вследствие редукции коронарного кровотока, среди которых решающее значение имеет развитие дисбаланса между повышенным образованием активных форм кислорода (АФК) и функционированием антиоксидантной системы (АОС) кардиомиоцитов. Это приводит к развитию оксидативнош стресса, который в настоящее время рассматривается в качестве ключевого неспецифического звена в этиологии различных заболеваний сердечнососудистой системы, связанных с ишемией /2-4/. АФК (02*-, ОН*, Н202 и др.), вырабатывающиеся в больших количествах в ходе свободнорадикальнош окисления (СЮ) и пероксидного окисления липидов (ПОЛ), вызывают структурные повреждения клеток миокарда при ишемии и неврозе /5-7/. В то же время, накопление восстановленных форм переносчиков электронтранспортной цепи (ЭТИ), субстратов цикла трикарбоновых кислот (ЦЖ), ионов двухвалентных металлов, особенно, Ре2+, Си24", Еп2+ и Са2+ и изменение энергетического потенциала кардиомиоцитов (АТФ/АДФ, НАД(Ф)/НАД(Ф)Н) в условиях оксидативнош стресса приводит к вторичной выработке АФК, вызывающей более глобальные сдвиги в метаболизме клеток /8-12/. Определение характера взаимосвязи между интенсификацией процессов СЮ и определёнными метаболическими изменениями в субклеточных компаргментах миокарда млекопитающих на уровне отдельных ферментных систем имеет первостепенное значение для выявления биохимических основ развития состояния стресса и дезадаптации при возникновении ишемии. Актуальность изучения функционирования НАДФ-изоцитратдещдрогеназы (К.Ф. 1.1.1.42; НАДФ-ИДГ) и аконшшгидратазы (аконитаза, К.Ф. 4.2.1.3; АГ) в условиях ишемии связана с развитием новой концепции теории СРО и антиоксиданшой защиты (АОЗ) /13/, базирующейся на системном подходе анализа АОС. Согласно этой концепции АОС рассматривается как многоуровневая система, в которой взаимосвязь отдельных компонентов осуществляется за счёт последовательных метаболических перестроек, сопряжённых с участием различных ферментных систем, не являющихся аншоксиданшыми. В настоящее время накоплен обширный фактический материал о влиянии антиоксидантов различных классов на ингибирование отдельных стадий СЮ в физиологических и патологических условиях. Однако закономерности функционирования ферментов, обеспечивающих сопряжение важнейших метаболических процессов и в то же время участвующих в регуляции СЮ посредством изменения уровня антиоксиданшого потенциала клетки, остаются не ясны. В этой связи изучение особенностей каталитического действия АГ и НАДФ-ИДГ в условиях гиперпродукции АФК, регулирующих уровень таких важнейших антиоксидантов, как цитрат и восстановленный глугатион, которые участвуют в утилизации наиболее реакционноспособных АФК - ОН*, Н2О2, способствует расшифровке механизмов сопряжения в функционировании ферментативного и неферментативного звена АОС в тканях млекопитающих при лимитировании СЮ. Однако несмотря на то, что имеется значительная научная информация о ряде аспектов функционирования ферментов метаболизма цитрата и изоцитрата, указывающая на их кардинальную роль в интеграции процессов клеточного обмена в норме, работы по сравнительному изучению их регуляции активности при повышенной выработке АФК ранее не проводились. Таким образом, выяснение возможного вклада АГ и НАДФ-ИДГ в обеспечение АОЗ при развитии ишемического повреждения ткани миокарда может способствовать решению актуальной проблемы биохимии, связанной с исследованием взаимосвязи функционирования ферментов окислительного метаболизма и процессов СЮ.

Цели и задачи исследования. Целью диссертационной работы является исследование интенсивности процессов СЮ и характеристика каталитических свойств и регуляции активности АГ и НАДФ-ИДГ в кардиомиоцитах в норме и при ишемии. Были поставлены следующие задачи:

1. оценка интенсивности процессов СЮ в цитоплазматической и митохондриальной фракциях миокарда крыс в норме и при ишемии;

2. определение активности и исследование субклеточной локализации АГ и НАДФ-ИДГ в кардиомиоцитах крыс в условиях нормы и ишемии;

3. разработка методов разделения изоформ и получения высокоочищенных препаратов цитоплазматической и митохондриальной АГ и НАДФ-ИДГ из нормального и подвергнутого экспериментальной ишемии миокарда крыс;

4. определение кинетических параметров каталитического действия цитоплаз-матической и митохондриальной АГ и НАДФ-ИДГ в условиях нормы и ишемии;

5. сравнительная характеристика каталитических свойств и регуляции активности АГ и НАДФ-ИДГ из цитоплазмы и митохондрий нормального и ишемизированнош миокарда;

6. определение уровня цитрата и а-токоферола в цитоплазме и митохондриях миокарда контрольных и подвергнутых ишемии крыс;

7. создание гипотетической модели участия АГ и НАДФ-ИДГ в регуляции процессов СЮ в миокарде с учётом особенностей функционирования данных ферментов при ишемии.

Научная новизна. Впервые изучены особенности функционирования ключевых ферментов метаболизма цитрата и изоцитрата - АГ и НАДФ-ИДГ, в условиях повышенной интенсивности процессов СРО при ишемии миокарда Показана адаптивная реакция данных ферментных систем к оксидативному стрессу, проявляющаяся в изменении их активности и регуляторных свойств по отношению к некоторым метаболитам. Выявлены механизмы, обеспечивающие модификацию активности АГ и НАДФ-ИДГ в условиях ишемии. Исследована роль различных метаболитов в изменении активности исследуемых ферментов, свидетельствующая об их важном значении для функционирования отдельных звеньев АОС - ГР/ГП-сисгемы и регуляции уровня цитрата. Полученные данные способствуют выяснению вклада АГ и НАДФ-ИДГ в элиминацию первичных АФК, гиперпродукция которых в условиях ишемии происходит в результате сбоев в ЭТЦ и изменения скорости протекания ЦТК, а также в значительной степени, потенциируется Fe . Результаты, полученные в ходе исследований, позволяют предполагать участие данных ферментов в опосредованной детоксикации компонентов реакции Фентона.

На основе анализа особенностей регуляции активности АГ и НАДФ-ИДГ в условиях ишемии впервые разработана гипотетическая модель участия ферментов метаболизма цитрата и изоцитрата в лимитировании процессов СЮ. Предполагаемые в данной модели механизмы контроля интенсивности реакции Фентона за счёт изменения каталитических активностей АГ и НАДФ-ИДГ проясняют возможную роль исследуемых ферментов в поставке восстановительных эквивалентов для ГР/ГП-системы и регуляции содержания цитрата в цитоплазматической и митохондриальной фракциях кардиомиоцитов. Определение рож различно локализованных форм ферментов в регуляции уровня цитрата и активности ГР/ГП-сисгемы, получившее отражение в этой схеме, имеет существенное значение для выявления новых элементов взаимосвязи между отдельными звеньями ферментативной и неферментной АОС и различными метаболическими путями при ишемии.

Практическая значимость. Изучение особенностей функционирования в условиях ишемии специфически компартментализованных форм АГ и НАДФ-ИДГ, регулирующих образование цитрата, изоцитрата и НАДФН, позволило углубил, и систематизировать современные представления о роли ферментативных и неферментных механизмов контроля уровня таких первичных АФК, как ОН* и H2Q2 на молекулярном и клеточном уровнях Исследование особенностей метаболической регуляции АГ и НАДФ-ИДГ при патологии может способствовать решению задач по выявлению условий оптимального функционирования ферментов метаболизма цитрата и изоцитрата и пролонгации выживаемости ишемизированнош миокард а, а также поиску эффективных методов фармакологической коррекции обнаруженных метаболических сдвигов.

Разработанные способы разделения и получения гомогенных ферментных препаратов митохондриальных и цитоплазматических АГ и НАДФ-ИДГ из нормального и ишемизированного миокарда крысы могут применяться в научно-исследовательской практике при выделении других ферментов из различных тканей млекопитающих, а также при моделировании биохимических процессов in vito для изучения кинетики сопряжённых реакций в полиферментных системах. Полученные элекгрофоретически гомогенные препараты АГ и НАДФ-ИДГ могут использоваться в лабораторной медицине и в качестве реагентов для определения концентраций цитрата и НАДФН в сыворотке крови.

Апробация работы. Основные результаты исследований, выполненные в период 1998-2002 г.г. были представлены на 18 Международом Конгрессе биохимии и молекулярной биологии "Beyond the Genome" (Бирменгем, США, 2000); 34 Международном конгрессе физиологических наук (Кристбург, Новая Зеландия, 2001); 27 Конгрессе Федерации Европейских биохимических сообществ (Лиссабон, Португалия, 2001); П Международном симпозиуме "Проблемы биохимии, радиационной и космической биологии" (Москва, Дубна, 2001), Ш съезде Биохимического общества (Санкт-Петербург, 2002), на Всероссийском симпозиуме "Клеточная биология на пороге XXI века" (Санкт-Петербург, 2001) и Всероссийской конференции "Современные проблемы экспериментальной и клинической медицины" (Воронеж, 2001), на П Конгрессе специалистов клинической и лабораторной диагностики России (Москва, 2000), на П Российской конференции "Физика в биологии и медицине" (Екатеринбург, 2001), на Межрегиональной конференции "Физиология и психофизиология мотиваций" (Воронеж, 2001), V и VI Пущинских конференциях молодых учёных "Биология - наука 21го века" (Пущино, 2001,2002) и научных сессиях Воронежского госуниверситета (Воронеж, 1998,2001,2002).

Публикации, Результаты работы изложены в 22 публикациях -13 статьях и 9 тезисах. На защиту выносятся следующие положения:

1. При ишемии миокарда у крыс, вызванной путём окклюзии левой коронарной артерии, происходит значительная интенсификация СРО и активация АОС, сопровождаемая повышением уровня цитрата, возрастанием активности НАДФ-ИДГ и снижением АГ-актавности как в цитоплазматической, так и в митохондриальной фракциях кардиомиоцитов.

2. Исследования, проведённые с использованием гомогенных ферментных препаратов цитоплазматической и митохондриальной АГ и НАДФ-ИДГ, выделенных из нормального и ишемизированного миокарда крыс, свидетельствуют о существенных модификациях механизмов мегабайтной регуляции активности и ряда кинетичеких параметров каталитического действия в условиях активации СЮ при ишемии.

3. При ишемии миокарда у крыс наблюдается изменение чувствительности НАДФ-ИДГ к ингибированию Н202 и продуктами ГР/ГТ1ч;истемы - восстановленным глутатионом и НАДФН Происходит снижение степени синергизма при ингибирующем

12 действии Fe и Н2О2 на фермент по сравнению с нормой. Для обеих изоформ НАДФ-ИДГ из ишемизированного миокарда выявлено менее значительное торможение активности

АТФ, Са2+ и 2-оксоглутаратом, в то время как степень подавления ффментативной активности в присутствии цитрата и малага, была более выражена при ишемии. По-видимому, модификация ряда регуляторных свойств НАДФ-ИДГ в условиях ишемии может способствовать повышению внутриклеточного уровня НАДФН, что позволяет предполагать возможность сопряжения НАДФ-ИДГ-реакции и функционирования ГР/ГП-системы.

4. Для цитогшазмашческой и митохоцдриальной АГ кардиомиоцитов в условиях ишемии характерны существенные изменения в регуляции активности под действием H2Q2, восстановленного, окисленного глутатиона, АДФ, АТФ, а также малага и 2-оксоглугарата, которые могут способствовать угнетению функционирования фермента и накоплению цитрата, осуществляющего хелашое связывание Fe2+ при повышенной выработке АФК.

5. На основе анализа особенностей функционирования АГ и НАДФ-ИДГ при ишемии предложена гипотетическая схема, отражающая участие исследуемых ферментов в регуляции АОС кардиомиоцитов посредством изменения уровня цитрата и восстановленного глутатиона в условиях активации СЮ.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 250 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной часта и обсуждения результатов (7 глав), заключения, выводов, списка литературы (430 источников) и приложения. Иллюстративный материал включает 72 рисунка и 12 таблиц. В приложении содержится 46 рисунков и 5 таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Медведева, Лилия Владимировна

Результаты исследования зависимости активности НАДФ-ИДГ от концентрации ионов водорода показали, что оптимум рН для реакции, катализируемой цитоплазматической и мигохондриальной НАДФ-ИДГ из миокарда крысы лежит в пределах 7,0-7,2 и 7,4-7,7 (рис. 17 А приложения, кривые 1а, 16), что мало отличается для данного фермента из других органов крысы /322, 350/. Оптимальное значение рН для мигохондриальной изоформы обнаруживает также сходство с рН-оптимумом фермента из миокарда свиньи (7,5-7,8) /356/. В условиях ишемии оптимум рН для НАДФ-ИДГ, также как и в случае АГ немного ниже и составляет 6,7-7,0 и 7,2-7,4 (рис. 17 А приложения, кривые 2а, 26). Тот факт, что рН-оптимумы АГ и НАДФ-ИДГ реакций в митохондриях сдвинуты в более щелочную область, по-видимому, связан с различием рН цитоплазмы и митохондриального матрикса, которые в физиологических условиях несколько отличаются - 7,01 ± 0,04 и 7,38 ± 0,01 /5, 12/. Небольшое снижение рН оптимумов исследуемых ферментов в субклеточных

0,10 к к 0,05 & т т о ф

1а X

16:

9х

4 5 а *

26 т

И-«

6,0 6,5 7,0 7,5 8,0 8,5 9,0 рН

-0,5 -1,0

50 -1,5

ГС

-2,0 £ -2, ^

I 1 " Ъ

Ч" т Г

1аг 16

7,0

4 ?

7,5 8,0 8,5 рН

Рис. 13. Зависимость скорости реакции, катализируемой аконитатгидратазой из цитоплазматической (а) и митохондриальной (б) фракций нормального (1) и подвергнутого ишемии (2) миокарда крыс от концентрации ионов водорода (А). Определение рК функциональных групп (Б) фракциях ишемизированного миокарда может быть следствием локальных сдвигов рН, возникающих в результате накопления восстановительных эквивалентов при угнетении окислительного фосфорилирования, нарушении гидролиза АТФ и интенсификации гликолиза в динамике ишемической альтерации кардиомиоцитов /12, 44/. В этой связи следует отметить, что характерной видовой особенностью реакции миокарда крыс на перевязку коронарной артерии является более интенсивное нарастание регионарного метаболического ацидоза /417/.

Величины рК функциональных групп АГ, рассчитанные из зависимости lgV-pH, составляют 7,6 и 8,2 для цитоплазматической формы в норме (рис. 13 Б). На активность АГ из цитоплазмы ишемизированного миокарда влияют ионогенные группы с рК 7,5 и 7,7. Функционирование митохондриальной АГ как в условиях нормы, так и при ишемии зависит от ионогенных групп с рК 7,6 и 8,4 (рис. 13 Б). Полученные значения рК функциональных групп для исследованных изоформ АГ близки к рК SH-груплы цистеина (8,3-8,6) и а-аминогруппы (7,6-8,4) /400/. Возможно, что в условиях ишемии ионизационное состояние активного центра цитоплазматической АГ в меньшей степени контролируется SH-группами цистеина, чем в норме. Величины рК ионогенных групп для цитоплазматической (6,8; 7,5) и митохондриальной НАДФ-ИДГ (7,5; 8,0) в норме находятся в пределах рК а-аминогрупп (7,6-8,4), а также имидазольной группы гисгидина (5,6-7,0) и а-аминогрупп цисгина (6,5-8,5) /400/. При ишемии на функционирование НАДФ-ИДГ в цитоплазме и митохондриях миокарда существенное влияние оказывают группы с рК 6,6; 6,9 и 6,8; 7,5 соответственно (рис. 17 Б приложения). Небольшие отличия в величинах рК функциональных групп исследуемых ферментов в условиях ишемии могут быть связаны с конформационными сдвигами в их молекулах, охватывающими область, существенную для катализа /12,406/.

Таким образом, наряду с изменением кинетических параметров действия АГ и НАДФ-ИДГ в цитоплазме и митохондриях миокарда в условиях ишемии отмечены небольшие сдвиги значений их рН опшмумов. Несоответствие рН огггамумов для ферментов, выделенных из нормального и ишемизированного миокарда, наряду с изменением степени сродства к субстратам, может определять возможность смещения равновесия АГ- и НАДФ-ИДГ-реакций, влияя на скорости "прямой" и "обратной" реакций.

6J Вшдаш тшпержурм ш жгашоеть ферментов

На рисунке 18 а приложения представлена зависимость скорости реакции, катализируемой АГ из цигоплазматической и митохондриальной фракций нормального и подвергнутого ишемии миокарда крыс, от температуры. Из данной зависимости видно, что цитоплазматическая и митохондриальная изоформы имеют одинаковый температурный оптимум при 40 °С, который обнаруживает сходство с оптимальными значениями температуры дня активности АГ из миокарда свиньи (45°С) /280/. Энергия активации, рассчитанная из графика Аррениуса в интервале температур 10-40 °С составляет 10462 и 9386 кал дня цигоплазматической и митохондриальной изоформы соответственно (рис 18 б приложения). Полученные величины энергии активации близки к значениям данной характеристики для изоформ АГ из Bacillus cereus, составляющим 9200 и 16100 кал /281/. Максимальная активность АГ, выделенной из цитоплазмы и митохондрий ишемизированного миокарда, проявляется при 35 °С. В условиях ишемии в диапазоне температур 10-35 °С происходит снижение энергии активации обеих изоформ АГ до 8434 и 7577 кал соответственно (рис. 186 приложения).

Результаты зависимости начальной скорости НАДФ-ИДГ-реакции из цигоплазматической и митохондриальной фракций миокарда от температуры показали, что в норме фермент характеризуется достаточно высокими значениями температурных оптимумов-45 и 50 °С (рис. 14 а). При ишемии отмечается уменьшение оптимальных значений температуры для активности как цигоплазматической, так и митохондриальной формы НАДФ-ИДГ до 40 °С. График Аррениуса в интервале температур 0-40 °С имеет выпуклую форму с изломом при 30 °С и показывает, что более высоким значениям температуры в этой области соответствует меньшая энергия активации /400/. Энергия активации, определённая для интервала температур 10-30 °С и 30-40 °С составляет 5392 и 2733 кал для цигоплазматической и 5936 и 1820 кал для митохондриальной формы (рис. 14 б, фрагмент А,Б, кривые 2). Для НАДФ-ИДГ, выделенной из цитоплазмы и митохондрий нормального миокарда, подобного излома не наблюдалось, и величины энергии активации были несколько ниже - 7223 и 7756 кал соответственно. Возможной причиной отклонений в зависимости Аррениуса для НАДФ-ИДГ из субклеточных фракций ишемизированного миокарда может быть протекание процесса денатурации фермента в две последовательные элементарные стадии /400/. В частности, предполагается, что при повышении температуры может и • я к 3 о А А

30 40 50 Температура, °С а 00

315 325 335 345 1/Т -10 б

-5

10 20 30 40 50 60 70 Температура, °С

315 325 335 345 1/Т . 10 5 б

Рис. 14. Зависимость скорости реакции, катализируемой НАДФ-изоцитратдегидрогеназой из цитоплазматической (А) и митохондриальной (Б) фракций нормального (1) и подвергнутого ишемии (2) миокарда крыс от температуры (а). График Аррениуса в интервале температур 10^45 °С в условиях нормы (1) и 10-40°С при ишемии (2) для цитоплазматической формы (А) и в интервале 10-50 °С в условиях нормы (1) и 10^40 °С при ишемии (2) для митохондриальной формы (Б) фермента (б) происходить диссоциация олигомерных ферментов на субъединицы меньшей молекулярной массы и, что реакция, катализируемая субъединицами, характеризуется менее высокой энергией активации /400, 412/. Было также высказано предположение, что образование излома на графике Аррениуса при температурах выше и ниже критических связано с изменением сродства фермента к субстратам или ингибиторам и скорости "прямой" и "обратной" реакций /400/. Так, появление излома в диапазоне предденатурационных температур (18 °С) ранее было показано для прямой реакции фумаратгидратазы при рН 6,35. Характерно, что для реакции, протекающей в обратном направлении, изменения наклона не наблюдалось. Выпуклая форма температурной зависимости (при 16 °С) в координатах Аррениуса была также установлена для АТФ-азы миозина при использовании субстратов, содержащих 6-аминогруппу, связывание которой с ферментом сопровождалось существенными конформационными сдвигами /400/. В ряде работ изменение наклона графика Аррениуса объясняется существованием фермента в двух формах, обладающих различной активностью, Е^. и переходящих друг в друга под влиянием температуры. Так, при изучении поведения уреазы в слабовосстановленной среде излом отмечался при 22 °С; выше этой температуры наблюдали энергию активации, характерную для восстановленной (8700 кал), а ниже -для окисленной формы (11700 кал) /400, 406/. В этой связи следует отметить, что температурная зависимость реакции, катализируемой НАДФ-ИДГ из сердечной мышцы быка, в интервале температур 5-35 °С также обнаруживает конформационный переход, соответствующий излому на графике Аррениуса при 18 °С /358/. Было показано, что этот конформационный сдвиг появляется в результате изменения объёма фермент-субстратного комплекса при изменении плотности гидратной оболочки вблизи некоторых функциональных групп /359/. Не исключено, что подобный эффект может проявляться и для НАДФ-ИДГ из ишемизированного миокарда крыс при 30 °С.

Анализ выше приведённых данных позволяет заключить, что изменение наклона графика Аррениуса и величин энергии активации для НАДФ-ИДГ из клеток ишемизированного миокарда отличаются от значений данных показателей при тепловой денатурации, сопровождающейся разрывом слабых связей, и по всей вероятности, наиболее близки к изменениям величин энергий активаций, показанных для конфомеров, переходящих из восстановленной в окисленную форму.

121

6-2, Регршсрш© свойства 6.2.1, Регуляция иероксидом водорода и ионами Ре2+'

Известно, что основным механизмом образования наиболее агрессивной из первичных АФК - ОН*-радикала, участвующего в инициации СРО и, в частности, ПОЛ в цитоплазме и митохондриях млекопитающих, служит процесс взаимодействия Бе2" и Н202, описываемый реакциями Фентона и Хабера-Вайса. В этой связи было исследовано влияние ионов и Н2О2 на активность изоформ АГ и НАДФ-ИДГ, выделенных из миокарда, функционирующего в условиях нормы и ишемии.

Результаты изучения влияния ионов ¥е2+ на активность АГ из миокарда крыс показали, что данные ионы являются активаторами фермента в условиях нормы и ишемии. Активирующий эффект данных ионов был также показан для АГ из других животных объектов. В большинстве работ отмечается, что ионы Бе способствуют значительному увеличению активности и стабильности препаратов АГ из различных тканей животных в концентрации до 1 ммоль /257,269,272,285/. Изучение механизма активации АГ из миокарда свиньи под действием ¥е2+ методами рентгено-струкгурного анализа и флуоресценции позволило установить, что при этом происходит изоморфное включение в ЗРе-48-кластеры неактивной части молекул фермента в соотношении 1 г Ре на моль бежа, сопровождаемое медленным конформационным сдвигом /220,221,271,279/.

Сравнительное исследование регуляции активности специфически

94компартментализованных форм АГ ионами Бе показало, что в норме цитоплазматическая форма фермента более чувствительна к активирующему действию Бе2+ по сравнению с митохондриальной, (ЬСа для цитоплазматической и мигохондриальной АГ = 0,027 и 0,167 мМ) (рис. 19 приложения). Были выявлены также различия в степени активации АГ из цитоплазматической и митохондриальной фракций сердечной мышцы контрольных и подвергнутых ишемии крыс в присутствии Ге2+. Так, Ка для цитоплазматической АГ из ишемизированного миокарда составляет 0,120 мМ, что в 4,4 раза превышает данный показатель в норме. Митохондриальная АГ в условиях ишемии характеризуется величиной Ка 0,450 мМ (табл. 7), что выше этого параметра в норме в 2,7 раза. Таким образом, в условиях ишемии для активации обеих изоформ АГ требуется, по-видимому, большая внутриклеточная концентрация ионов Ре2+. В

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Оценка оксидативного статуса миокарда подвергнутых ишемии крыс выявляет значительное увеличение уровня свободнорадикального и пероксидного окисления как в цитоплазме, так и в митохондриях с преимущественной активацией данных процессов в цитоплазматической фракции. Сдвиги в оксидативной системе миокарда при ишемии сопровождаются возрастанием уровня цитрата и изменением характера внутриклеточной локализации й-токоферола, отражающими изменение функционального состояния отдельных звеньев АОС миокарда, участвующих в детоксикации Ре2+, Н2С>2 и ОН*-радикалов. В литературе имеются данные о снижении под действием эндогенного цитрата уровня ОН*-радикалов, образующихся при разложении H2Q2 в реакции Фентона за счёт хелатирования цитратом ионов Fe"T /11, 13/. Накопление цитрата при иншбировании АГ-реакции в митохондриях, по-видимому, могло бы также способствовать снижению вероятности образования Н202 и других АФК, генерируемых при неполном восстановлении 02 в ЭТЦ в результате торможения начального этапа ЦГК /44, 95, 96/. Определение активности ферментов метаболизма цитрата и изоцитрата в ишемизированном миокарде выявило снижение активности АГ в цитоплазматической и митохондриальной фракции в 2,3 и 2,6 раза, сопровождаемое повыл пешем в этих клеточных комггаршентах НАДФ-ИДГ '-активности, в 1,8 и 2,5 раза по сравнению с нормой. В то же время было обнаружено возрастание активности НАДФ-ИДГ при увеличении уровня продуктов ПОЛ в сыворотке людей с ишемией миокарда в течение первых 5 суток посшнфаркшош периода. Ранее в некоторых работах была показана активация НАДФ-ИДГ в цитоплазме клеток головного мозга, мозжечка и печени крыс при гипоксии и ишемии /310,312,314,315/. В цитоппазматической фракции нейронов спинного мозга кроликов была установлена взаимосвязь между степенно повышения НАДФ-ИДГ-активносга и повреждающим действием ишемии /313/. В литературе также имеются единичные данные о нарушении утилизации цитрата в миокарде и цитоппазматической фракции мозга крыс /251, 252/ и угнетении активности АГ в лёгких крыс в условиях ишемии и пшероксии, а также в сердце человека при инфаркте /184, 256/. Следовательно, обнаруженные эффекты могут иметь место на субклеточном уровне три ишемическом повреждении различных тканей млекопитающих.

Изучение субклеточной локализации АГ и НАДФ-ИДГ в кардиомиоцигах крыс в условиях нормы и ишемии, при различных способах солюбизации с помощью дифференциального центрифугирования, а также ионообменной хроматографии и электрофореза в ПААГ показало, что изменение активности исследуемых ферментов после окклюзии происходит не из-за перераспределения их количества между клеточными компарментами или индукции дополнительных изоформ, отличающихся по электрофоретическим и хроматографическим свойствам. Сравнительная характеристика каталитических свойств АГ и НАДФ-ИДГ из нормального и ишемнзированного миокарда позволила выявить наряду со сходными физико-химическими характеристиками исследуемых ферментов (Rj-, молекулярная масса, спектральные и хроматографические свойства) существенные различия в кинетических параметрах и устойчивости к действию температуры. Показана меньшая термостабильность АГ и НАДФ-ИДГ в условиях окислительного стресса. В то же время отсутствие отличий в интенсивности светорассеяния и изменениях активности исследуемых ферментов, а также спектрах поглощения АГ из нормального и ишемнзированного миокарда, подвергнутых 20-минутной инкубации при 20 °С, по сравнению с исходными значениями свидетельствует о том, что изменение активности АГ и НАДФ-ИДГ при физиологических температурах, по-видимому, не сопровождается существенными структурными нарушениями их молекул. Изучение кинетических параметров каталитического действия исследуемых ферментов позволило установить, что падение АГ-активности при ишемии может быть обусловлено, в частности, снижением скорости реакции превращения цитрат в изоцитрат, сопровождаемым уменьшением сродства фермента к обоим субстратам. Это позволяет предположить о возможной взаимосвязи мевду изменением кинетических параметров АГ-реакции и повышением содержания цитрата в субклеточных компаргментах миокарда крыс при ишемии. Сравнительный анализ значений К*, и для реакции, катализируемой НАДФ-ИДГ из нормального и ишемизированного миокарда, показал, что активация фермента при ишемии может быть сопряжена с увеличением скорости реакции в результате его более эффективного

2| взаимодействия с изоцитратом и Мп', в то время как соответствующие кинетические параметры для НАДФ, существенно не изменяются. Методом гель-хроматографии установлено, что снижение активности АГ и активация НАДФ-ИДГ при ишемии скорее всего не связана с изменением субъединичной структуры, и следовательно, действием ассощшивно-диссоциативного механизма регуляции активности в результате изменения концентрации субстратов. Принимая во внимание различную чуствительность изоформ НАДФ-ИДГ к интибирующему действию 2-оксоглутарата, а также данные о неодинаковом распределении этого метаболита и ионов Мп24" в цитоплазмашческой и мигохондриалшой фракциях миокарда /291, 360/, можно предполагать, что выявленные различия в величинах К„ по отношению к Мп21" могут также иметь значение для регуляции скорости протекания прямой и обратной реакций. В то же время, сравнительный анализ ряда каталитических и регуляторных свойств специфически компаршентализованных форм НАДФ-ИДГ и АГ из миокарда крыс по отношению к интермедиагам ЦГК, ГР/ГП-системы, а также Н2а, Ре* и Са24' в условиях нормы и ишемии свидетельствует о существенных модификациях механизма метаболшной регуляции активности этих ферментов в условиях активации СЮ.

Тот факт, что модификация активности АГ и НАДФ-ИДГ при ишемии сопряжена с изменением кинетических параметров их каталитического действия и регуляции активности под действием ряда икгермедиатов клеточного обмена, свидетельствует о том, что скорость утилизации цитрата и образования НАДФН на этапе данных ферментативных реакций существенно зависит от уровня исследуемых метаболитов в клеточных компаргментах миокарда. Это позволяет предполагать существование возможного контроля со стороны данных метаболитов над уровнем образования Ре', Н202, ОН* и других АФК за счёт изменения содержания таких антиоксидантов как цитрат и восстановленный глутатион. С другой стороны, вовлечённость цитрата, изоцитрага, 2-оксоглугарата, НАДФН/НАДФ, восстановленного и окисленного глугатиона в регуляцию активности НАДФ-ИДГ и АГ и существование определённых различий в характер регуляции в условиях нормы и ишемии указывают на возможность модификации активности данных ферментов под действием изменений концентраций цитрата и продуктов ГР/ГП-системы, лимитирующих уровень АФК в условиях оксидативного стресса Полученные нами сведения о различиях кинетических и регуляторных свойств АГ и НАДФ-ИДГ в условиях нормы и ишемии дают возможность предложить следующую гипотетическую схему механизма регуляции уровня АФК, и в первую очередь Н2Ог и ОН*-радакалов, образуемых в ходе реакции Фентона, с участием данных ферментов в условиях активации СЮ (рис. 27). Согласно этой схеме сопряжение АГ и НАДФ-ИДГ-реакций при лимитировании уровня Н2О2 и Ре осуществляется главным образом через локальные изменения концентраций цитрата и восстановленного глугатиона в субклеточных компаршентах миокарда. Первым этапом в последовательной цепи метаболических событий при ишемии, по-видимому, является повышение внутриклеточной концентрации Ге2+ от ~5 до ~10 рМ /425/, приводящее в условиях повышенного образования Н2СЬ, во-первых, к увеличению вероятности протекания реакции Фентона и разветвления реакций ПОЛ, а во-вторых - к менее выраженной активации АГ под действием данных ионов. Изменение регуляторных свойств АГ по отношению к Бе2* и Н2От, по-видимому, не сопровождается существенными структурными повреждениями, находящими отражение в спектрах поглощения фермента, однако, проявляется в изменении каталитической активности и кинетических параметров его действия. В частности, эти изменения могут приводить к снижению сродства фермента по отношению к цитрату и изоцитрату, а также сдвигам температурного и рН-оптимума реакции превращения цитрата, что способствует нарушению его утилизации (2 этап). Модификация кинетических параметров НАДФ-ИДГ-реакции в этих условиях сопряжена с увеличением сродства фермента к изоцитршу и Мп . Таким образом, в условиях повышенной выработки Ре2^ Н2Ог, интенсификации реакций Фентона и ПОЛ создаются предпосылки, с одной стороны, для накопления цитрата и изоцитрага в результате угнетения активности АГ, а с другой - для ускоренной утилизации изоцитрата (3 этап) и увеличения уровня образования НАДФН в НАДФ-ИДГ-реакции (4 этап). Накопление цитрата, осуществляющего хелатное связывание Ре2*, снижает интенсивность протекания реакции Фентона и процессов ПОЛ в клеточных компаргментах миокарда. Повышенный уровень НАДФН, образующийся благодаря активации НАДФ-ИДГ-реакции, приводит к увеличению относительного содержания восстановленного глутатиона - субстрата ГР/ГТТ-системы (5 этап), который в кардиомиоцитах крыс совместно с а-токоферолом участвует в детоксикации компонентов реакции Фентона - Н2О2 и ОН*-радикала. Повышение активности и неодинаковая чувствительность НАДФ-ИДГ из цитоштазматической и митохондриальной фракций нормального и ишемизированного миокарда к регулирующему действию восстановленого, окисленного глуташона и НАДФН, наряду с данными о ключевой роли НАДФ-ИДГ в восполнении клеточного пула НАДФН в миокарде крыс /36/ свидетельствуют в пользу того, что функционирование этого фермента может быть сопряжено с работой ГР/ГП-системы. Результаты изучения субклеточной локализации НАДФ-ИДГ в миокарде крыс позволяют предположить, что НАДФ-ИДГ может играть решающую роль в поставке НАДФН для ГР/ГП-системы цитоплазмы кардиомиоцитов. Переход восстановленого глутатиона в окисленную форму при рекомбинации с Н2О2 связан с окислением НАДФН до НДДФ+, который может непосредственно использоваться в качестве кофактора в НАДФ-ИДГ-реакции (6 этап). Увеличение же уровня НАДФ" при детоксикации Н2О2 в митохондриях может также приводить к снижению повышенного уровня НАДН через трансшдрогеназную реакцию, оказывая "вторичный" ангаоксвдантный эффект. Образующийся в ходе этой реакции НАДФН, по-видимому, может также включаться в активацию ГР/ГП-системы (7 этап), выступая в качестве существенного альтернативного источника восстановительных эквивалентов в клетке, дополняя генерирование НАДФН с помощью НАДФ-ИДГ, активность которой в митохондриях составляет только 15% от общей. Сравнительное изучение метаболической регуляции АГ и НАДФ-ИДГ под действием ионов Ре2' и Н2С>2 и определение типа совместного действия ингибиторов позволяют предполагать, что активность исследуемых ферментов может существенно изменяться в зависимости от интенсивности реакции Фентона в субклеточных компаргментах кардиомиоцитов. По-видимому, это может иметь значение для сопряжения между функционированием АГ и а триюр лиспот малонип-Со укцинат

•НАДН зсч/идарал/ митохондриал ь н ы й ^¿трикс гпюхозо-6-фосфат—глюкоза фруктозо-1,б-6исфосфат фосфоенолпируеат , труват ^ июцитрат

2-оксоглутарат оксапоацетат фруктозо-6-фосфат • I

Й I

ЛАДФН + На ш цитоплазма

НАДФН+ надф

А IV ис. 27. Гипотетическая схема возможного участия аконитатгидратазы и НАД<^>-изо-цитратдегидрогеиазы в регуляции уровня АФК: I - повышение содержания Бе и интенсификация реакции Фентона; II - снижение сродства АГ к цитрату и изоцитрату; Ш - увеличение сродства НАДФ-ИДГ к изоцитрату и интенсификация НАДФ-ИДГ-реакции; IV - повышение уровня НАДФН; V - повышение содержания восстановленного глутатиона и активация глутатионредуктазной/шутатионпероксидазной системы; VI - повышение уровня НАДФ и активация НАДФ-ИДГ.

Регуляторные эффекты обозначены стрелками:! г - - ингибирование;фм- активация; - изменение сродства фермента к субстрату; - антиоксидантный эффект;Ч^- хелатирующий эффект. Значками отмечены метаболиты, участвующие в регуляции активности АГ (Л) и НАДФ-ИДГ Р) в норме и при ишемии:® - активирующий эффект одинаковой степени выраженности в норме и при ишемии;® - усиление активирующего эффекта при ишемии; ® - ослабление степени активации фермента под действием метаболита в условиях ишемии; © - ингибирующий эффект одинаковой степени выраженности в норме и при ишемии; О - усиление ингибирую-щего эффекта при ишемии;@-ослабление степени ингибирования в условиях ишемии.

Ферменты: СДГ - сукцинатдегидрогеназа; 2-01Д1 - 2-оксоглутаратдегидрогеназа; МДГ - малатдегидрогеназа.

НАДФ-ИДГ на уровне метаболических превращений цитрата и НАДФН, обеспечивающих ферментативные и неферментативные механизмы поддержания стационарного уровня АФК в миокарде млекопитающих.

Тот факт, что регуляция активности исследуемых ферментов находится под контролем концентрации не только Ре , Н2Ог и субстратов ГР/ГП-системы, но и ряда других метаболитов, концентрация которых, как правило, изменяется при ишемии /12,44, 96 136, 421, 422, 425, 427, 428/, позволяет сделать предположение, что направленность участия НАДФ-ИДГ и АГ в регуляции антиоксидантного потенциала клеток определяется конкуренцией процессов, приводящих к активации или иншбированию данных ферментных систем в зависимости от содержания в клеточных компартментах восстановленного глутатиона, цитрата и других метаболитов, вовлечённых в регуляцию их активности т бИм. Полученные данные дают основание предполагать, что увеличение сродства НАДФ-ИДГ к субстратам и кофакторам, отсутствие торможения ферментативной активности восстановленным глутатионом и менее сильное ингибирующее действие Н2С>2, НАДФН, 2-оксоглутарата и а также снижение степени синергизма при ингибировании смесью и Н2Ог, по видимому, могут способствовать стимуляции функционирования фермента в условиях повышенного уровня свободнорадикальных процессов, что может иметь значение для обеспечения НАДФН ГР/ГП-системы кардиомиоцитов. В тоже время более значительные ингибирующие эффекты цитрата и малата на активность НАДФ-ИДГ в условиях ишемии по сравнению с нормой, определяют возможность менее выраженной активации фермента при снижении интенсивности СРО за счёт других механизмов АОЗ. В частности, предполагается, что при значительном увеличении содержания цитрата, по-видимому, достаточном для ограничения уровня свободных ионов Бе , способных вовлекаться в реакцию Фентона, этот метаболит может способствовать снижению активности НАДФ-ИДГ, как бы предотвращая включение последующего звена - ГР/ГП-системы, учавствующей в утилизации продукта этой реакции. Транспорт цитрата сопряжён через клеточные мембраны с переносом малага /199,200/, накопление которого в субклеточных компартментах миокарда в результате нарушения утилизации цитрата в АГ-реакции при ишемии также может вносить вклад в угнетение НАДФ-ИДГ-активности. При интенсификации функционирования ГР/ГП-системы в результате повышения уровня АФК, накопление восстановленного глутатиона может вызывать менее выраженное повышение активности АГ относительно исходной в норме, способствуя накоплению цитрата, который осуществляет хелатное связывание ионов Ре2\ В том случае, если активация ГР/ГП-системы оказывается недостаточной для подавления свободнорадикальных процессов, то более выраженное в условиях ишемии торможение АГ-активности под действием окисленного глутатиона также может способствовать снижению скорости утилизации цитрата и, следовательно, вероятности протекания реакции Фентона в кардиомиоцитах. Увеличение соотношения АТФ/АДФ, под контролем которого находится регуляция активности специфически компартментализованных форм АГ, также способствует угнетению активности фермента, что может иметь значение для пролонгации накопления цитрата при переходе к необратимой стадии ишемии. При возрастании концентрации АДФ, согласно полученным данным, может также происходить повышение активности НАДФ-ИДГ в цитоплазме и ингибирование активности фермента в митохондриях, где НАДФ-ИДГ предположительно участвует в тонкой регуляции ЦГК через трансщцрогеназную реакцию /306/. Возможно, это приводит к восполнению цитоплазматического пула НАДФН в кардиомиоцитах, который, помимо увеличения эффективности функционирования ГР/ГП-системы, может расходоваться на синтез аминокислот и липидов при последующем восстановлении повреждённых в результате ишемической альтерации субклеточных структур /12,37,45-48/.

Таким образом, для специфически компартментализованных форм АГ и НАДФ-ИДГ характерно существование разнообразных и тонких механизмов регуляции активности под действием ряда интермедиатов клеточного обмена, способных обеспечивать изменение ферментативной активности в условиях ишемии. Полученные данные позволяют предполагать, что изменение интенсивности протекания реакций, катализируемых АГ и НАДФ-ИДГ, при ишемии миокарда может влиять на интенсивность СРО путём регуляции уровня цитрата и восстановленного глутатиона за счёт модификации параметров каталитического действия и механизмов метаболитной регуляции активности данных ферментов.

1. Выявлено, что при ишемии в цитоплазматической и митохондриальной фракциях кардиомиоцитов крыс имеет место значительное повышение уровня СРО, сопровождающееся возрастанием содержания цитрата в 1,5 и 1,6 раз, а также увеличением НАДФ-ИДГ- и снижением АГ-активности в 1,8 и в 2,5 раз; 2,3 и в 2,6 раза соответственно.

2. Изменение активностей АГ и НАДФ-ИДГ не сопровождается перераспределением их активностей между клеточными ком партментам и миокарда. Основное количество цитрата, АГ и НАДФ-ИДГ-активностей (-63, 65 и 85% соответственно) содержится в цитоплазме кардиомиоцитов как в условиях нормы, так и при ишемии; остальная часть - связана с митохондриальной фракцией.

3. С использованием гомогенных ферментных препаратов показано, что цитоплазматическая и митохондриальная АГ и НАДФ-ИДГ из миокарда крысы различаются по электрофоретической подвижности, термостабильности, температурным и рН-оптимумам, сродству к субстратам, а также регуляции активности под действием адениннуклеотидов и пирувата.

4. АГ и НАДФ-ИДГ, выделенные из нормального и ишемизированного миокарда наряду со сходными физико-химическими свойствами (молекулярная масса, элекгрофоретические, хроматографические, спектральные характеристики) характеризуются существенными отличиями, проявляющимися в изменении сродства ферментов к субстратам и меньшей термостабильности при ишемии. На графике Аррениуса для изоформ НАДФ-ИДГ из ишемизированного миокарда, обнаруживается излом при 30 °С.

5. Для цитоплазматической и митохондриальной АГ и НАДФ-ИДГ из ишемизированного миокарда характерна меньшая чувствительность к ингибирующему действию Н202, а для НАДФ-ИДГ - и к совместному влиянию Ре2+ и 11202. При ишемии степень синергизма при подавляющем действии Ре2+ и Н202 на НАДФ-ИДГ снижается по сравнению с нормой. Для обеих изоформ АГ из ишемизированного сердца крысы отмечается менее выраженное повышение активности под действием ионов Ре2+.

160

6. Выявлены различия в регуляции активности ферментов из нормального и ишемизированного миокарда окисленным глутатионом. Восстановленный глутатион и НАДФН оказывают менее выраженный ингибиругощий эффект на НАДФ-ИДГ из сердца крыс, подвергнутых экспериментальной ишемии, в то время как активация АГ при ишемии в присутствии восстановленного глутатиона была в значительной степени снижена.

7. Сравнительное изучение регуляции активности ферментов, выделенных из нормального и ишемизированного миокарда, интермедиатами клеточного обмена выявило более сильное подавление активности как АГ, так и НАДФ-ИДГ при ишемии под действием цитрата, малата и АДФ. В то же время, различно локализованные формы исследуемых ферментов при ишемии были более устойчивы к ингибирующему действию 2-оксоглутарата и ионов Са2+ , а в случае НАДФ-ИДГ и АТФ.

8. Установлено, что имеет место повышение активности НАДФ-ИДГ в сыворотке крови людей при ишемии миокарда в первые пять суток после инфаркта, сопровождающееся увеличением уровня процессов ПОЛ.

9. С учётом выявленных особенностей функционирования АГ и НАДФ-ИДГ при ишемии предложена гипотетическая схема механизма регуляции интенсивности СРО с помощью данных ферментов путём воздействия на уровень цитрата и восстановленного глутатиона в клетке.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Медведева, Лилия Владимировна, Воронеж

1. Ruuge Е.К., Ledenev A.N., Lakomkin V.L. Free radical metabolites in myocardium during ishemia and reperphusion / E.K. Ruuge, A.N. Ledenev, V.L. Lakomkin // Amer. J. Physiol. -1991. V. 261. N4. - P. 81-86.

2. Lerch R., Tamm C., Papageorgioi I., Benzi R. Myocardial fatty acid oxidation during ischemia and reperfusion / R. Lerch, C. Tamm, L. Benzi //Mol. and Cell. Biochem. -1992.-V. 116. N1-2.-P. 103-109.

3. Olinescu R., Pqpovici D., Hertogjie J., Hulea S. Estimation of oxidative stress in cardiovascular diseases / R. Olinescu, D. Pqpovici, J. Hertoghe // Rev. roam. med. interne. -1994. -V. 32. N2. -P. 129-136.

4. Poole-Wilson P. Mechanism of cell death in heart muscule after hypoxia or ishemia // Myocardial ishemia ami protection/P. Poole-Wilson,- New York, 1983.-P. 123-130.

5. Nakasava H, Arreyo C., Ichimori K. Ishemk-reperfiision injury and toxicity of free radicals / H. Nakasava, C. Aireyo, K. Ichimori // J. Mol and Cell. Caidiol. -1990. -V. 22. N2. -P. 13.

6. Duncan E., Onodera Т., Ashrat M. Production of hydroxyl radicals and their disassociation from myocardial cell injury during calcium paradox / E. Duncan, T. Onodera, M. Ashrat//Free Radical Biol, and Med. -1992. -V. 12. N1. -P. 11-18.

7. Zhao Y., Jiang W. Shengwuhuaxue yu shenqwuli xueba / Y. Zhao, W. Jiang // Acta. Biochim. et Biophys sin. -1995. -V. 27. N6. -P. 610-615.

8. Осипов А.Н., Азизова Ю.А., Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и их роль в организме / А.Н. Осипов, Ю.А. Азизова, ЮЛ. Владимиров // Успехи биологической химии, 1990. -Т. 31. N2. -С. 180-208.

9. Гацура В.В. Фармакологическая коррекция энергетического обмена шпемизированного миокарда / В.В. Гацура М.: Антекс, 1993. - 254 с.

10. Skulachev V.P. Membrane-linked systems, preventing superoxide formation / V.P. Skulachev // Bioscience Reports. -1997. V. 17. N3. - P. 347-366.

11. Большая медицинская энциклопедия: Изд-е 3: В 20 т. / Под ред. Б.В. Петровского. -М.: Сов. энциклопедия, 1978. Т. 9. - С. 463^69.

12. Хитров Н.К., Пауков B.C. Адаптация сердца к гипоксии / Н.К. Хитров. М.: Медицина, 1991.-238 с.

13. Jennings R.B. Myocardial ishemia Observations, definitions and speculations / R.B. Jennings //Ed. J. Mol. Cell. Cardiol. -1970. V.l. -P. 45-349.

14. Keul J., Doll E., Keppler D. Energy metabolism of heart muscule / J. Keul. Baltimore: University Park Press, 1972. - P. 313.

15. Краткая медицинская энциклопедия: Изд-е 2: В 3 т. / Под ред. акад. Петровского Б.В. -М.: Сов. энциклопедия, 1989. -Т. 1. С. 545-547.

16. Саноцкая Н.В. Утилизация кислорода тканью сердечной мышцы при гипоксии миокарда // Оксибиотические и аноксибишические процессы при экспериментальной и клинической патологии/Н.В. Саноцкая.-Киев, 1975.-С. 186.

17. Гасилин B.C. Хронические формы ишемической болезни сердца / B.C. Гасилин. -М.: Медицина, 1976. -168 с.

18. Алкепёров MA, Мамедов ИИ. Ишемическая болезнь сердца (метаболические• процессы) / MA Алкепёров. Баку: Азербаджан. гос. изд-во, 1990. -142 с.

19. Сыркин AJI Инфакт миокарда / A.JI Сыркин. М.: ООО Мед. информац. агенство, 1998.-398 с.

20. Сапожков АВ. Фармакологическая регуляция коллатерального кровообращения при острой ишемии и инфаркте миокарда: Автореф. дис. . докт. мед. наук / Сапожков АВ. Харьков, 1974. - 38 с.

21. Raunskow L. An elevated serum cholesterol level is secondary, not causal, in coronary heart disease / L. Raunskow // Med. Hypotheses. 1991. V. 36. N3. - P. 238-241.

22. Opie L.H. Myocardial energy metabolism / L.H. Opie // Adv. Cardiol. 1974. - V. 12. -P. 70-83.

23. Neely J., Morgan H. Utilization of carbohydrate and fatty acids in the heart / J. Neely, H. Morgan// Ann. Rev. Physiol. -1973. V. 35. -P.413452.

24. Сакс В А, Розенпгграух JIB. Энергетика клеток миокарда / В.А. Сакс, ЛВ. Розенштраух // В А Сакс: Руководство по физиологии / В.А. Сакс. Я, 1980. - Т. 1. .-С. 36-50.

25. Page ЕА, McCallister L.P. A quantitative electron microscopic description of heart muscule cells / E.A. Page, L.P. McCallister // Amer. J. Cardiol. -1973. V. 31. - P. 172181.

26. Bing R, Siegel A., Ungar I., Gilbert M Metabolism of human heart; Studies on fat, ketone and amino acid metabolism / R Bing, A. Siegel, I. Ungar // Amer. J. Med. 1954. -V. 16.-P. 504-515.

27. Куприянов В.В., Сеппет Э.К., Сакс В.А. Образование креатинфосфата, сопряжённое с гликолитическими реакциями в цитозоле клеток миокарда / В.В Куприянов, Э.К. Сеппет, В.А. Сакс // Биохимия. -1978. -N8. С. 1468-1477.

28. Розанов А. Я., Трещинский А. И., Хмелевский Ю. В. Ферментативные процессы и их коррекция при экстремальных состояниях / АЛ. Розанов. Киев: Здоров'я, 1985.-208 с.

29. Оли Л. X. Физиология и патология сердца: (Обмен веществ и энергии в миокарде). -М., 1988.-С. 7-63.

30. Мейес П. Окисление и биосинтез жирных кислот / П. Мейес // Биохимия человека / Марри Р., Греннер Д., Мейес П. и др. -М.: Мир, 1993. С. 225-255.

31. Does the pentose cycle plays a major role for NADPH supplay in the heart? / R. Pfeifer, G. Rarl, R. Scholze//Biol. Chem. Hopj>Seyler.-1986.-V. 367. N10.-P. 1061-1068.

32. Morgan НЕ., D.C., Broadus A. Regulation of protein synthesis in heart muscule / H.E. Morgan, D.C. Earl, A. Broadus //J. Biol. Chem. -1971. -V. 246. -P. 2152-2162.

33. Klein H, Schaper J., Pushman S. Loss of canine myocardial adenine nucleotide determines the transition from reversible to irreversible ishemic damage of myocardial cells / H Klein, J. Schaper, S. Pushman//Bas. Res. Cardiol. -1981. -V. 76. -P. 612-621.

34. Neely J., Fevray D. Metabolic products and myocardial ishemia / J. Neely, D. Fevray // Amer. J. Pathol. -1981. -V. 102. -P. 282-291.

35. Kubler W., Spieckerman P.G. Regulation of glycolysis in the ishemic and anoxic myocardium / W. Kubler, P.G. Spieckerman// J. MoL Cell CanHoL -1970. -V. 1. -P. 351-377.

36. Lassers В., Kaijser L., Curlson L. Myocardial lipid and carbohydrate metabolism in healthy fasting man at rest: studies during continous infusion of 3 H-palmitate / B. Lassers, L. Kaijer, L. Curlson // Europ. J. Clin Invest -1972. V. 2. - P. 348-358.

37. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца / Ф.З.Меерсон. М.: Медицина, 1984. - 268 с.

38. Фетисова Т.В., Фролькис Р.А. Биохимия инфаркта миокарда / Т.В. Фетисова. -Киев: Здоров'я, 1976. -166 с.

39. Sobel В., Corr P. Biochemical mechanisms potentially responsible for lethal arrhythmias induced by ishemia: the lysolipid hypothesis / B. Sobel, P. Corr // Adv. Cardiol. 1979. -V. 26.-P. 76-85.

40. Suzuki S., Kamikawa Т., Kobayashi A., Yamazaki N. Effects of /-carnitine on tissuelevels of free fatty acids, acyl CoA and acylcarnitine in ishemic heart / S. Suzuki, T. Kamikawa, A, Kobayashi//J. Molec. Cell. Cardiol. -1980.-V. 12. Suppl. 1. -P. 163.

41. Katz A, Messineo F. Lipid-membrane interactions and the pathogenesis of ishemic damage in the myocardium / A. Katz, F. Messineo // Circulât Res. -1981. V. 48. N1. - P. 1 -16.

42. Wu Mei-Lin, Tasi Ke-Li, Wang Seu-Mei Mechanism of hydrogen peroxide and hydroxyl free radical-induced intracellular acidification in cultured rat cardiac myoblasts / Mei-Lin Wu, Ke-Li Tasi, Seu-Mei Wang //Circuit. Res. -1996. -V. 78, N4. -P. 564-572.

43. Дженнингс Р.Б., Ганот Ч.Е. Структурные изменения в миокарде при острой ишемии / Р.Б. Дженнингс, Ч.Е. Ганот // Метаболизм миокарда: Материалы 1-го сов.-америк. симпозиума/Науч.ред.Е. Чазов.-М.:Медицина, 1975.-С. 325-351.

44. Меерсон Ф.З., Коган В.Е., Козлов Ю.П. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе ишемического повреждения и антиоксидантная защита сердца / Ф.З. Меерсон, В.Е. Коган, ЮЛКозлов//Кардиология. -1982. -N2.-C. 81-93.

45. Орлов JLJL, Шилов А. М., Ройтберг Г. Е. Сократительная функция и ишемия миокарда/ JLJL Орлов. -М.: Наука, 1987. -247 с.

46. Ashenbrenner V., Zar R., Cutiletta A. F., Rabinowitz M. Eifect of hypoxia on degradation of mitochondrial components in rat cardiac muscule / V. Ashenbrenner, R. Zar, A.F. Cutiletta//Amer. J. Physiol. -1971. -V. 221. -P. 1418-1425.

47. Regulation of protein synthesis in heart muscule. Ш. Effect of anoxia on protein synthesis / L.S. Jefferson, E.B. Wolpert, K.E. Gider, H.E. Morgan // J. Biol. Chera 1971. - V. 246.-P. 2171-2178

48. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика / Ф.З. Меерсон. -М.: Наука, 1981. -278 с.

49. Малюк В.И. Энергетический обмен миокарда при пороках сердца и метаболическая коррекция его нарушений: Автореф. дис. . докт. мед. наук / Малюк В.И. Киев, 1977. - 46 с.

50. Толейкис А.И., Дагис А.И., Прашкявичюс AJK. Влияние ишемии миокарда на фосфолипидный состав сердечной ткани и митохондрий / А.И. Толейкис, А.И. Дагис, А.К. Прашкявичюс // Вопр. мед. химии. -1982. -N4. С. 64-67.

51. Minatoguchi Н., Secita S., Yokoyama М., Katagiri Т. Regional changes in mitochondrial respiration in acute myocardial ishemia / H. Minatoguchi, S. Secita, M. Yokoyama // Jap. Heart J. -1984. -V. 25. -P. 609-621.

52. The sequence and correlation of the changes in several parameters of energy metabolism induced by ishemic insult in heart muscule / T. Nagatomo, H. Satoh, T. Sugai // Jap. Heart J. -1984.-V. 25.-P. 239-251.

53. Гацура B.B. Энергетический обмен миокарда при острой ишемии и его фармакологическая коррекция / В.В. Гацура // Успехи физиол. наук., 1981. -N1. -С. 97-118.

54. Ашмарин И.П Элементы патологической физиологии и биохимии / И.П. Ашмарин.- М.: Изд-во МГУ, 1997.-С. 109-129.

55. Hamilton D.H., Whalen D.A. Early phase of irreversible myocardial cell injury / D.H. Hamilton D. H., DA Whalen // Fed. Proc. -1972. V. 31. - P. 627.

56. Wollenberger A., Krause E. Metabolic control characteristics of the acutely ishemic myocardium / A. Wollenberger, E. Krause // Amer. J. CaidioL -1968. V. 22. - P. 349-359.

57. Braash W., Gudbjarnason S., Puri P. Early changes in energy metabolism in the myocardium following acute coronary artery occlusion in anesthetized dogs / W. Braash, S. Gudbjarnason, P. Puri // Circulat Res. -1968. -V. 25. -P. 429-439.

58. Гацура B.B., Пичугин B.B., Сурменков А.А. Катетеризация вен сердца и исследование некоторых расстройств метаболизма ишемизированного миокарда/ В.В. Гацура, В.В. Пичугин, А. А. Сурменков // Кардиология. -1974. -N 4. С. 72-77.

59. Gevers W. Generation of protone by metabolic processes in heart cells // W. Gevers // J. Molec. Cell. Caidiol. -1977. -V. 9. P. 867-873.

60. Wilkie D. The control of glycolysis in living muscule studies by nuclear magnetic resonance on other techniques / D. Wilkie // Biochem Soc. Trans. -1983. V. 12. - P. 244-247.

61. Gardner P.R, Fridovich I. Superoxide sensitive of the Escherichia coli aconitase / P. R Gardner, I. Fridovich// J. ofBiol. Chem -1991. -V. 266. N29. -P. 19328-19333.

62. Матюшин И.Ф., Бояринов Г.А., Богдарн Ю.А. Метаболизм жирных кислот в миокарде в норме и при ишемии / И.Ф. Матюшин, Г.А. Бояринов, Ю.А. Богдарн // Вопр. мед. химии. -1984.-N5.-С. 2-13.

63. Williamson J., Rich Т. Mitochondrial function in normal and hypoxic states of the myocardium / J. Williamson, T. Rich // Adv. myocardiology. New York, 1983. V.4. P. 271-285.

64. Frommer J.P. Lactic acidosis / J.P. Frommer // Med. Clin. -1983. V. 67. - P. 815-829.

65. Bailey J., Williams S., Radda G., Gadian D. Activity of phosphorylase in total global ishemia in the rat heart / J. Bailey, S. Williams, G. Radda // Biochem. J. 1981. - V. 196. -P. 171-181.

66. Johnston D., Albert! K. Acid-base balance in metabolic acidosis / D. Johnston, K. Albert! // Clin. Endocrinol. Metab. -1983. V. 12. - P. 267-286.

67. Гацура B.B. Проблема повышения жизнеспособности ишемизированного миокарда в экспериментальном освещении / В.В. Гацура // Кардиология. 1975. -N2. -С.114-124.

68. Чазов Е.И. Молекулярные основы сердечной недостаточности / Е.И. Чазов // Кардиология. -1975. -N10. С. 12-16.

69. Митохондрии. Биохимические функции в системе клеточных органелл / Ясайтис А.А., Бакеева J1.E., Кулене В.В. и др. М.: Наука, 1969. - С. 60.

70. Ленинджер А. Митохондрия. Молекулярные основы структуры и функции / А. Ленинджер. М.: Мир, 1966. - 30 с.

71. Regulatory functions of biological membranes / Azzone G.F., Rossi E., Scarpa A. -Amsterdam-London^-N. Y.: Elsevier, 1968. P. 236.

72. Дагис А.И., Толейкис А.И., Прашкявичюс А. К. Изучение целостности мембранных структур клеток сердца при ишемии / А.И. Дагис, А.И. Толейкис, А.К. Прашкявичюс // Вопр. мед. химии. -1988. -N5. С. 80-83.

73. Ескунов П.Н., Семченко В.В., Полуэктов Л.В. Сгереологический анализ ультраструктуры миокарда в постреанимационном периоде / ПН. Ескунов, В.В.

74. Семченко, Л.В.Полуэктга//Бюлл.эксперим. биол.имед.~ 1981.-N12.-C. 734-736.

75. Саркисов Д. С. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций /Д.С. Саркисов. М.: Медицина, 1987. - 446 с.

76. Мхатрян Л.С. Биоантиоксиданты в противоишемической защиге Са -транспортирующих мембранных систем миокарда / Л.С. Мхатрян // Биоантиоксидант: П Всесоюз. конф. Черноголовка, 1986. - Т. 2. - С. 32-33.

77. Zoratti М., Szabo I. The mitochondrial permeability transition / M. Zoratti, I. Szabo // Biochim Biophys. Acta. -1995. -V. 1241. -P. 139-176.

78. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / К). А. Владимиров. М.: Наука, 1973. - 252 с.

79. Sawada М., Sester W., Carlson J. Superoxide radical formation and associated biochemical alterations in the plasma membrane of brain, heart and liver during the lifetime of the rat /

80. M. Sawada, W. Sester, J. Carlson // J. Biochem. -1992. V. 48. N3. - P. 296-304.

81. Скулачёв В. П. Возможная роль активных форм кислорода в защите от вирусных инфекций / В.П. Скулачёв // Биохимия. -1998. Т. 63. N12. - С. 107-110.

82. Skulachev V.P. Role of uncoupled and non-coupled oxidations in maintenance of safely low levels of oxygen and its one-electrone reductants / V.P. Skulachev // Quant. Rev. Biophys. -1996. -V. 29. -P. 169-203.

83. Konstantinov A.A., Kunz W.S., Kamensky Yu.A. Chemiosmotic Proton Circuits in Biological Membranes / A.A. Konstantinov. -N.Y.: Addison-Wesley, 1981.-P. 123-146.

84. Кашкаров К.П., Васильева E.B., Рууге 3JC. Генерация супероксидных радикалов дыхательной цепью митохондрий изолированных кардиомиоцитов / К.П. Кашкаров, Е.В. Васильева, Э.К. Рууге // Биохимия. -1994. Т. 59. N 6. - С. 813-816.

85. Poole-Wilson P. Measurement of myocardial intracellular pH in pathological states / P. Poole-Wilson//J. Mol. Cell. Cardiol. -1978. -V. 10. -P. 511-526.

86. Метелица Д.И. Активация кислорода ферментными системами / Д.И. Метелица М.: Наука, 1982. - С. 52-67.

87. Boveris A., Oshino N., Chance В. The cellular productions of hydrogen peroxide / A. Boveris, N. Oshino, B. Chance // Biochem. J. -1972. V. 128. -P. 617-6302.

88. Nohl H., Hegner D. Do mitochondria produce oxygen radicals in vivo? / H. Nohl, D. Hegner // Europ. J. Biochem. -1978. V. 82. - P. 563-567.

89. Nohl H., Jordan W. The metabolic fate of mitochondrial hydrogen peroxide / H. Nohl, W. Jordan// Europ. J. Biochem. -1980. -V. 111. -P. 203-210.

90. Boveris A., Cadenas E. Mitochondrial production of superoxide anions and its relationship to the antimycin insensitive respiration / A. Boveris, E. Cadenas // FEBS Lett -1975.-V. 54.-P. 311-314.

91. Chance В., Sies H., Boveris A. Hydroperoxide metabolism in mammalian organs / B. Chance, H. Sies, A. Boveris // Physiol. Rev. -1979. V. 59. N3. - P. 527-605.

92. Loschen G., Flohe L., Chance B. Respiratory chain linked H2O2 production in pigeon heart mitochondria/G. Loschen, L. Flohe, B. Chance //FEBS Lett -1971. -V. 18. -P. 261-264.

93. Ericinska M., Wilson D.F. Cytochrome с oxidase: A synopsis / M. Ericinska, D.F. Wilson // Arch. Biochem. Biophys. -1978. V. 188. N1. - P. 1-14.

94. Boveris A., Cadenas E., Stoppani OJVi. Rate of ubiquinone in the mitochondrial generation of hydrogen peroxide / A. Boveris, E. Cadenas, O.M. Stoppani // Biochem J.1976. -V.156.- Р. 435-444.

95. Nohl Н, Hegner D., Summer К. Responses of mitochondrial superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase activities to aging /Н. Nohl, D. Hegner, K. Summer // Mech. Ageing and Develop.- 1979.-V. 11. N3.-P. 145-151.

96. Boveris A., Chance B. The mitochondrial generation of hydrogen peroxide: General properties and effect of hyperbaric oxygen / A Boveris, B. Chance // Biochem J. -1973. -V.134.-P. 707-711.

97. Jacobs A, WorwoodM. Metals andthe liver/A Jacobs.-N.Y.: Decker, 1981.-P.3-51.

98. Oberley W., Buettner G.R. The effect of iron on the distribution of superoxide and hydroxyl radicals as seen by spin trapping and on the superoxide dismutase assay / W. Oberley, G.R Buettner//Photochem. and Photobiol. -1978. -V. 28. N45. -P. 693-695.

99. Slater T.F. Recent advances in biochemical pathology: Toxic liver injury / T.F. Slater. -London: Prion Press, 1976.-P. 1-283.

100. Скулачёв В. II Феноптоз: запрограммировав смерть организма / В.П. Скулачёв // Биохимия. -1999. Т. 64. N12. - С. 1679-1688.

101. Каган В.Е. Молекулярные механизмы повреждения биомембран при перекисном окислении липидов (Острая ишемия органов и ранние постишемические растройства) /В.Е. Каган. М.: Наука, 1978. - С. 108-109.

102. Иванов ИИ. Эстафетные механизмы в процессах перекисного окисления липидов биологических мембран / И.И. Иванов // Успехи биол. химии. М., 1984. Т.25. -С. 110-124.

103. Williams G.H Advances in free-radical chemistry / G.H Williams. London, 1980. -V. 6.-P. 1-63.

104. Савов B.M., Диденко B.B., Досмагамбегова P.C. Перекисное окисление липидов в миокарде при экспфиментальном инфаркте / ВМ Савов, В.В. Диденко, Р.С. Досмагамбегова // Науч. докл. высшей школы биол. наук. М., 1985. -N5. - С. 30-33.

105. Ganguly N. К., Nalini К., Wahi S. Free radicals in myocardial injury: experimental and clinical studies / N.K. Ganguly, K. Nalini, S. Wahi // Mol. Cell. Biochem 1992. -V. 111.-P. 71-76.

106. Коган AX., Лосев Н.И., Бирюков Ю.В. О роли лёгких в регуляции генерации АФК лейкоцитами в норме и патологии / А.Х. Коган, НИ. Лосев, Ю.В. Бирюков // Пат. физиол. экспер. теор.-М., 1991. -N1. С. 46-50.

107. Babior B.M. The respiratoiy burst of phagocytes / B.M. Babior // J. Clin. Invest -1984. -V. 73. P. 599-601.

108. Gabbing TM. Effects of oxygen tension and pH on the respiratoiy bares of human neutrophils/Т.М. Gabbing//Blood-1979.-V. 53.-P. 1133-1139.

109. Wahi S., Kave N., Ganguly N.K. Neutrophil oxigen free radical production proportionates with the degree of myocardial ishemia / S. Wahi, N. Kave, N.K. Ganguly // Can. J. Cardiol. -1991. -N.7.-P. 229-233.

110. Varani J., Ward P.A. Mechanisms of neutrophil-dependent endothelial cell injury /J. Varani, P.A. Ward II Biol. Signals. -1994. V. 3. N1. - P. 14.

111. Koenderman L., Bruijnzeel P. Increased sensitivity of the chemoattractant-induced chemiluminescence in eosinophils isolated from atopic individuals / L. Koenderman, P. Bruijnzeel // Immunology. -1987. V. 67. - P. 534-536.

112. Chemiluminescence response ofphagocytizing human monocytes / R.D. Nelson, E.L. Mills, R.L. Simmons // Infect hnmun. -1976. V. 14. - P. 129-134.

113. Allen R.C., Loose L.D. Phagocytic activation of luminal-dependent chemiluminescence in rabbit alveolar and peritoneal macrophages /RC. Allen, L.D. Loose//Biochem. Biophys. Res. Commun. -1976. -V. 69. -P. 245-252.

114. Mills E.L., Gerard JM., Filipovich D. The chemiluminescence response of human platelets /EL Mills, JM Gerard, D. Filipovich//J. Clin. Invest -1978. -V. 61. -P. 807-814.

115. Worner P. Arachidonic acid-induced chemiluminescence of human platelets: contrabution of the prostaglandin and lipoxygenase pathways / P. Worner // Thromb. Haemost -1981. -V. 46. -P. 484-489.

116. Nohl H., Breuninger V., Hegner D. Influence of mitochondrial radical formation on energy-linked respiration / H. Nohl, V. Breuninger, D. Hegner // Eur. J. Biochem, 1978. -V. 90. N2.-P. 385-390.

117. Вартанян JI.O. Некомпенсированное изменение в активности СОД и скорости образования супероксидных радикалов в различных субклеточных органеллах при ишемии / Л.О. Вартанян //Биоантиоксидант: III Всесоюз. конф. М., 1989. - Т.1. -С. 38-39.

118. Guarneru G., Muskari С. Ventura С. Effect of ishemia on heart submitcchondrial superoxide production / G. Guarneru, C. Muskari, C. Ventura // Free Radicals Res. Communs. -1985 V. 1. N2. - P. 123-128.

119. Кольтовер B.K. Надёжность митохондриальных электронтранспоршых мембран и роль супероксидных радикалов в старении / В.К. Кольтовер // Хим. физ. -1996. Т.15. N1. - С.101-106.

120. McCord JM., Roy R S. The pathophisiology of superoxide: roles in inflammation and ischemia / J.M. McCord, R.S. Roy // Can. J. Physiol, and Pharmacol. 1982. - V.60. N11.-P.1346-1352.

121. Коган AX., Кудрин АН., Николаев C.M. Свободнорадикальное перекисное окисление липидов и патогенез коронароокклюзионного инфаркта миокарда / А.Х. Коган, АН. Кудрин, С.М. Николаев // Свободнорадикальное окисление в норме и патологии. М, 1976. С. 68-78.

122. Гуткин Д.В., Петрович Ю.А Активность антиоксидантных ферментов миокарда при его ишемии / Д.В. Гуткин, Ю.А. Петрович // Бюл. эксперим. биол. и мед. -1982. Т. 1. - С. 33-35.

123. Rao P., Cohen М., Mueller Н. Production of free radicals and lipid peroxides in early experimential myocardial ishemia / P. Rao, M. Cohen, H. Mueller // J. Mol. and Cell. Cardiol.-1983.-V. 15. N10-P. 713-716.

124. Bellavite P., Berton B. The superoxidoforming enzymatic system of phagocytes / P. Bellavite, B. Berton // Free Radical Biol. Med -1988. -N4. P. 225-261.

125. Klebanoff SJ., Clark RA. The neutrophil: function and clinical disorders / SJ. Klebanoff. Amsterdam: North-Holland, 1978.-313 p.

126. Bannister J. V. The generation of hydroxyl radicals following superoxide production by neutrophilNADPHoxidase/ J. V. Bannister//FEBS Lett -1982-V. 150. -P. 300-302.

127. Kogan A., Grachyov S., Sumarokov A Phagocytare Free radical-dependentautoagressive diseases/ A. Kogan, S. Grachyov, A. Sumarokov // Oxidative stress and Redox Regulation: Cellular Signaling. AIDS. Cancer and other diseases. Paris, 1996. -P. 300.

128. Braunwald E., Rutherford J. D. Reversible ishemic ventricular dysfunction: evidence for the "hibernating myocardium" / E. Braunwald., J.D. Rutherford // Amer. Coll. Cardiol. -1986. -N8.-P. 1467-1470.

129. Meerson F. Z. The failing heart. Adaptation and deadaptation / F. Z. Meerson. N. Y.: Raven press, 1983.-P. 67-127.

130. Noronha-Dutra A.A, Steen E.M., Woolf N. The correlatuion between catecholamine and lipid peroxidation induced damage in heart cells / A.A. Noronha-Dutra, E.M. Steen, N. Woolf//Basic. Res. Cardiol. -1985. -V. 80. -P. 133-136.

131. Амосова K.M., Афонина Г.Т., Мостбауер Г.В. nepe6ir вшьнорадикальних процеалв у Kposi при р1зних Bapiamax шфаркта мюкарда / К.М Амосова, Г.Т. Афонина, Г.В. Мостбауер // Укр. кардюл. журн. -1994. -N4. С. 36.

132. Башкатова В.Г. Процессы пероксидного окисдения липидов у больных инфарктом миокарда / В.Г. Башкатова // Биоантиоксидант: П Всесоюз. конф. -Черноголовка, 1989. Т.1. - С. 38-39.

133. Prikryl P., Rysanek К., Tovarek J. Psychosomatic stress and lupoperoxides of human platelet-rich plasma / P. Prikryl, К Rysanek, J. Tovarek // Activ. nerv. super. -1980. V.22. N4.-P. 300-301.

134. Muzukami M., Aono J., Sakai K. Experimential myocardial infarction: effects of a lipid peroxide, 13-hydroxy linoeleie acid on coronary circulation in rats / M. Muzukami, J. Aono, K. Sakai//Arther. Forsch. -1984.-V. 34. N5.-P. 569-571.

135. Смирнова Л.М., Борец В.М. Перекисное окисление липидов и активность АТФ-аз у больных ишемической болезнью сердца / JIM. Смирнова, В.М. Борец // Здравоохр. Белоруссии. -1983. -N6. С. 34-37.

136. Dousset J.C., Trouilh М., Foglietti MJ. Plasma malonaldehyde liecols during myocardial infardial infarction / J.C. Dousset, M. Trouilh, M J. Foglietti // Clin, chim acta. -1983. V. 129. N3. - P.319-322.

137. Романишин Я.М., Кшах M.B., Чиж В.Д. Перекисное окисление липидов у больных инфарктом миокарда, осложненным кардиогенным шоком / Я.М. Романишин, М.В. Кшах, В.Д Чиж // Укр. Кардюл. журнал. -1994. N4. - С. 48.

138. Prifiil В., Lochman J. Patofyziologicky vyrman lipopenoxidupri tkanove insshemit / B. Priful, J. Lochman // Cas lek. cesk. -1984. -V. 123. N8. P. 229-232.

139. Якушев B.C., Лившиц Р.И. Влияние гистидина на содержание малонового диальдегида в тканях при экспериментальном инфаркте миокарда / B.C. Якушев, Р.И. Лившиц // Вопр. мед. химии. -1976. Т. 22. N4. - С. 476-478.

140. Serban M.G., Nita V. Lipid proxidation and change of plasma lipids in amte ischemic stroce / M.G. Serban, V. Nita // Rev. roum. med. interne. -1994. V. 32. N1. - P. 51-56.

141. Коган AX, Лосев ПИ, Кудрин АН Об образовании краевой "прооксидантной" зоны в и её роли в усилении ПОЛ в области ишемизированнош миокарда / АХ Коган, НИ Лосев, АН Куприн //Бкшл. экспер. биол. и мед. -1986. -N5. -С. 538-539.

142. Колчинская А. 3. Представление о вторичной тканевой гипоксии и механизмах её развития // Вторичная тканевая гипоксия. Киев, 1983. С. 30-43.

143. Коган АХ., Кудрин А.Н., Кактурский Свободнорадикальные перекисные механизмы патогенеза ишемии и инфаркта миокарда и их фармакологической регуляции / АХ Коган, АН. Кудрин, JI.B. Кактурский // Пат. физиол. экспер. теор. -1992,-N2.-С. 5-15.

144. Hess M.L., Manson N.H., Okabe E. Involvement of free radical in the pathophysiology of ishemic heart disease /M.L. Hess, N.H. Manson, E. Okabe // Can. J. Physiol. -1982. V. 60. - P. 1382-1389.

145. Рудж B.I., Ярема P.I., Варна O.H. Стан перекисного окисления лшщв у хворгх на есенщальну гшертензюэ з кризовым nepe6iroM i рвним стипенем гшертрофи л1вого шлуночка / B.I. Рудж, P.I. Ярема, О.Н. Варна // Укр. кардюл. журн. -1994. -N5-6.-С. 27-31.

146. Игнатьева Л.П, Лиходеева В.А Влияние гипоксии различного генеза на содержание а-токоферола в сердечной мышце и головном мозге / Л.П Игнатьева, В.А. Лиходеева // БиОантиоксидант: Ш Всесоюз. конф. -М.: АН СССР, 1989. Т. 1. - С. 126.

147. Давыдов Б.В. Перекисное окисление липидов и мобилизация а-токоферола при экспериментальном инфаркте миокарда / Б.В Давыдов // Биоашиоксидант: Ш Всесоюз. конф. -М.: АН СССР, 1989. -Т. 2. -С. 209-210.

148. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов / М.:1. Медицина, 1989.-368 с.

149. Козлов Ю.П Свободнорадикальное окисление липидов в биомембранах в норме и при патологии / Ю.П. Козлов // Биоантиокислители. М., 1975. С. 5-14.

150. Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.К Человек и противоокислительные вещества /Ж.И. Абрамова Л.: Наука, 1985. - 230 с.

151. Folkers К., Watanabe Т., Kajl М. Critigue of CoQ in biochemical and biomedical research and in ten years of clinucal research on cardiovascular disease / K. Folkers, T. Watanabe, M. Kajl//J. Mol. Med. -1977. -N2.-P. 431460.

152. Бурлакова Е.Б. Роль липидов в процессе передачи информации в клетке /Е.Б. Бурлакова //Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М., 1981. С. 23-24.

153. Мейес П. Метаболизм ненасыщенных жирных кислот и эйкозаноидов / П. Мейес // Биохимия человека / Марри Р., Греннер Д., Мейес П. М др. М.: Мир, 1993.-С. 38-246.

154. Hallivell В. Free radicals, antyoxidants and human disease: where are we now? / B. HalliveMJ. Lab. Clin. Med -1992. -V. 119. P. 598-620.

155. Johnston RJB., Godzik C.A. Increased superoxide-anion production by immunically activated and chemically elicted macrophages / R.B. Johnston, C.A. Godzik // Exp. Med, 1978.-V. 148.-P. 679-684.

156. Шинкаренко H.B. Химическая основа поведения синглетного кислорода в организме человека / Н.В. Шинкаренко // Вопр. мед. химии. -1986. N5. - С. 2-7.

157. Миронова Г.Д. Метгемоглобин и перекисные соединения в митохондриях / Г.Д. Миронова //Митохондрии.-М.: Наука, 1971.-С. 169-173.

158. Eyer P., Hertle Н, Kiese М.Т. Kinetics of ferrihemoglobin formation by some reducing agents and the role of hydrogen peroxide / P. Eyer, H. Hertle, M.T. Kiese // Mol. Pharmacol. -1975. -V. 11. -P. 326-334.

159. Schoncich J. The induction of chromosomal aberrations by hydrogen peroxide in strains of ascites tumors in mice / J. Schoncich // Mut. Res. -1967. V. 4. - P. 385-388.

160. Gardner P.R., Nguyen D.M., White C. W. Aconitase is a sensitive and critical target of oxygen poisoning in cultured mammalian cells and in rat lungs / P.R. Gardner, D.M. Nguyen, C.W. White //Proc. Nat Acad Sci. -1994. -V. 91. N25. P. 12248-12252.

161. Gong H. В., Han Q. D. Shengli Xuebao / H.B. Gong, Q.D. Han // Acta Physiol. Sin. -1996.-V.l 18. N1.-P. 48-52.

162. Любицкий О.Б. Определение антиоксидантной активности биологических жидкостей хемилюминесцентным методом: Автореф. дис. . канд. биол. наук / Любицкий О.Б. -Воронеж, 1996. -25 с.

163. Мейес П. Физиологически важные липиды / П. Мейес // Биохимия человека / Марри Р., Греннер Д., Мейес П. М др. -М.: Мир, 1993. -С. 151-162.

164. Rao P., Cohen М., Mueller Н. Oxygen radicals and their scavenging systems / P. Rao. -N.Y.: Elsevier, 1983. -V. 15. P. 357-360.

165. Korshunov S., Skulachev V.P., Starkov A.A. High potential actuates a mechanism of production of reactive oxygen species in mitochondria / S. Korshunov, V.P. Skulachev, A.A Starkov // FEBS Lett -1997. -V. 416. P. 15-18.

166. Skulachev V.P. Mitochondrial physiology and pathology; concept of programmed death of organelles, cells and organisms / V.P. Skulachev // MoL Aspects of Medicine. -1999.-N20.-P. 139-184.

167. Лукьянова Л.Д., Балмуханов B.C., Уголев AT. Кислородзависимые процессы в клетке и её функциональное состояние / Л. Д Лукьянова. М.: Наука, 1982. - 301 с.

168. Thayer W.S. Adriamycin-stimulated superoxide formation in submitochondrial particles / W.S. Thayer//Chem. Biol. Interact -1977. -V. 19. P. 265-278.

169. Floche L., Schlegel W. Glutathion-peroxidase. IV. Intrazellulare Verteilung des Glutathion-Peroxidase-Systems in der Rattenleber / L. Floche, W. Schlegel // Phys. Chem Hopp-Seyler. -1971. -V. 352. P. 1401-1410.

170. Lawrence R.A., Burk R.F. Species, tissue and subcellular distribution of non Se-dependent glutathione peroxidase activity / R.A. Lawrence, R.F. Burk // J. Nutr. -1978. -V. 108.-P. 211-215.

171. Каган В.Е., Савов В.М., Диденко В.В. Кальций и перекисное окислениелипидов в мембранах митохондрий и микросом сердца / В.Е. Каган, В.М. Савов,

172. B.В. Диденко // Бюлл. эксперим. биол. и мед. -1983. Т. 95. N4. - С. 46-48.

173. Baldwin J.E., Krebs H. The evolution of metabolic cycles / J.E. Baldwin, H. Krebs // Nature. -1981. -V. 291. N5814. -P. 381-382.

174. Robinson B.H., Olei J. Citrate transport in guinea pig heart mitochondria / B.H Robinson, J. Olei // Can. J. Biochem -1975. V. 53. N5. - P. 643-647.

175. Gamble J. L. Transport of potassium and sodium with citrate across the mitochondrial membrane / J. L. Gamble // Biochim. Biophys. Acta. -1973. V. 323. N2. - P. 240-250.

176. Bremer J., Davis E. Ruoroacetylcamitine: metabolism and metabolic effects in mitochondria /J. Bremer, E. Davis //Biochim. Biophys. Acta -1973. -V. 326. N2. -P. 262-271.

177. Baverel G., Martin M., Pellet M. Roles citrate dans le metabolism intermeriane / G. Baverel, M Martin, M. Pellet //Lyon med. -1973. -V. 230. N19. -P. 673-680.

178. Checma-Dhadli S., Halperin M.L. Effect of palmitoyl-CoA and ß-oxidation of fatty acids on the kinetics of mitochondrial citrate transporter / S. Checma-Dhadli, M.L. Halperin//Can. J. Biochem. -1976. -V. 54. N2. -P. 171-177.

179. Berton G., May P. Computer simulation of metalion eqilibria in biofluids / G. Berton, P. May//J. CheirL Soc. Trans.- 1978.-V.37.N11.-P. 1433-1438.

180. Tanaka M., Tabuchi T., Tanara Ya Hunon погей кагаку кайсиб Nippon nogei Kagaioi Kaishi / M. Tanaka, T. Tabuchi, Ya Tanara // J. Agr. Chem. Soc. Jap. -1973. V.47, N10. -P. 617-622.

181. Ещенко H.Д. Путилина Ф.С. Митохондрии / Н.Д. Ещенко, М.: Наука, 1974.1. C. 104-108.

182. Якобсон М.Г., Антонов А.Р., Головатюк AB., Ефремов AB. и др. Содержание железа и параметры антиоксиданшой активности крови у крыс с наследственной артериальной гипертензией при экспериментальном инфаркте миокарда / М.Г.

183. Якобсон, А.Р. Антонов, А.В. Головатюк // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2001. -Т. 132. N1.-С. 502-505.

184. Eberly D., Clanke R., Kaplowitz N. Rapid oxidation in vitro of endogenous and exogenous glutathione in bile of rats / D. Eberly, R. Clanke, N. Kaplowitz // J. Biol. Chem -1981. -V. 256, N5. -P. 2115-2117.

185. Hanson K.R. The absolute stereochemical source of citric acid biosynthesis // Proc. Nat Acad Sci. -1963. V. 50. N5. - P. 981-988.

186. Rose I.A., O'Connel E.L. Mechanism of aconitase reaction / I.A., Rose, E.L. O'Connel//J. Biol. Chem -1967. -V. 4. N8. -P. 1870-1879.

187. Ronault T.A., Stout C.D., Koptain S. B. Structural relationship between an iron-regulated RNA-binding protein and aconitase: functional implications / T.A. Ronault, C.D. Stout, S.B. Koptain//Cell.-1991.-V. 64, N5.-P. 881-883.

188. Lauble H., Kennedy M., Beincert H., Stout D. Crystall structures of aconitase with isocitrate and nitroisocitrate bound / H. Lauble, M. Kennedy, H. Beincert // Biochemistry. -1992. -V. 31. N10. -P. 2735-2748.

189. Glusker J. P. Mechanism of aconitase action reduced from crystallographie studies of its substrates / J. P. Glusker // Mol. Biol. -1968. V. 38. N2. - P. 149-162.

190. Izhend L., Kennedy M., Beinert H. Mutational analysis of active site residues in pig heart aconitase / L. Izhend, M. Kennedy, H. Beinert // J. Biol. Chem 1992. -V. 267. N11.-P. 7895-7903.

191. Strouse S. C13 NMP studies of ferrous citrates in acidic and alkaline solutions.1.plication concerning the active site of aconitase / S. Strouse // J. Amer. Chem. Soc. -1977. V. 99. N2. - P. 572-580.

192. Kennedy M.C., Beinert H., Lauble H. Studies on aconitase by spectroscopy, crystallography and mutagenesis / M.C. Kennedy, H. Beinert, H. Lauble // J. Jnorg. Chem. -1991. -V. 43, N2-3. P. 234-240.

193. Основы биохимии / Уайт А, Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р. и др. М.: Мир, 1981.-Т.1.-С. 398-417.

194. Dickman S.R, Speyer J. Factors affecting the activity of mitochondrial and soluble aconitase / S.R Dickman, Speyer J. // J. Biochem. -1964. -V. 206. N1. P. 67-75.

195. Slaughter CA, Mophinson D.A., Harris H. The distribution and properties of aconitase isozymes in man / C.A. Slaughter, DA. Mophinson, H. Harris // Ann. Hum. Genet -1977. -V. 40. N4. -P. 385-401.

196. Kennedy S., Rauner R, Gawron O. On pig heart aconitase / S. Kennedy, R Rauner, O. Gawron // Biochem. Biophys. Res. Communs. -1972. -V. 42. N74. P. 740-745.

197. Sholze H. Studies on aconitase species from Saccharomyces cerevisiae, porcine and bovine heart, obtained by a modified isolation method / H Sholze // Biochim. Biophys. Acta. -1983. -V. 746. -P. 133-137.

198. Kocn A.Z., Goodman M. Aconitase hydratase isozymes subcellular location, tissue distribution and possible subunit structure / A.Z. Kocn, M. Goodman // Biochim. Biophys. Acta. -1969. -V. 191. N3. -P. 698-701.

199. Povey S., Slaughter C. A., Wilson D.E., Jermley LP. et al. Evidence for the assignment of the localisation AKb AK3 and ACONS to chromosome 9 in man / S. Povey, CA Slaughter, D.E Wilson//Hum. Genet -1976. -V. 39. N4. -P. 413-422.

200. Cunningham L., Gruer M.J., Guest J.R. Transcriptional regulation of the aconitase genes (acnA and acnB) of Escherichia coli / L. Cunningham, M.L. Gruer, J.R. Guest // Microbiology. -1997. -V. 143. -P. 3795-3805.

201. Halperin M.L., Checma-Dhadli S., Taylor W.M., Fritz U.B. Role of the citrate transporter in the control of fatty acid synthesis / M.L. Halperin, S. Checma-Dhadli, W.M. Taylor// Adv. Enzyme Regulat -1975. -V. 13. -P. 435^45.

202. Gruer MJ., Bradbury AJ. Construction and properties of aconitase mutants of Escherichia coli IND. Gruer, AJ. Bradbury // Microbiology. -1997. -V. 143. N6. -P. 1837-1846.

203. Murakami K., Yoshino M. Inactivation of aconitase in yeast exposed to oxidative stress / K Murakami, M. Yoshino // Biochem. MoL BioL Int -1997. -V. 41, N3. P. 481-486.

204. Gardner P.R, Fridovich I. Inactivation-reactivation of aconitase in Escherichia coli / PJL Gardner, I. Fridovich//J. Biol. Chem. -1992. V. 267. N13. -P. 8757-8763.

205. Lichochev S.I., Frodovich I. How does superoxide dismutase protect against tumor necrosis factor: A hypothesis informed by effect of superoxide on "free"-iron / S.I. Lichochev, I. Frodovich // Free Radical Biol. Med. -1997. -V. 23, N4. -P. 668-671.

206. Zheng L., Kennedy M. C., Blondin G. A, Beinert H et al. Binding of Cytosolic Aconitase to the Iron Responsive Element of Porcine Mitochondrial Aconitase mRNA

207. L. Zheng, M.C. Kennedy, G.A. Blondin // Arch. Biochem. Biophys. 1992. - V. 299. -P. 356-360.

208. Melefors O. Translational regulation in vivo of the Drosophila melanogaster mRNA encoding succinate dehydrogenase iron protein via iron responsive elements / O. Melefors//Biochem Biophys. Res. Commun. -1996. -V. 221. N2. -P. 437-441.

209. Hanson E.S, Foot L.M Hypoxia post-translationally activates iron-regulatory protein / E.S. Hanson, LM. Foot // J. Biol. Chem -1999. -V. 274. N2. P. 5947-5052.

210. Hanson E.S, Leibold E.A Regulation of iron regulatory protein during hypoxia and hypoxia/reoxygenation / E.S. Hanson, E.A. Leibold // J. Biol. Chem 1998. -V. 273. N1.-P. 7588-7593.

211. Guo B.Y., Leibold E.A Iron regulates cytoplasmic levels of a novel iron-responsive element binding protein without aconitase activity / B.Y. Guo, E.A. Leibold // J. Biol. Chem -1994. V. 269. N2. - P. 24252-24260.

212. Mumby S., Koizumi M., Taniguchi N., Gutteridge J. Reactive iron species in biological fluids activate the iron-suiphur cluster of aconitase / S. Mumby, M. Koizumi, N. Taniguchi//BiochimBiophys. Acta.-1998.-V. 1380. N1.-P. 102-108.

213. Freminet A. Carbohydrate and acid metabolism during acute hypoxia in rats blood andheart metabolites / A. Freminet // Сотр. Biochem. and Physiol. -1981. V. 70. N3. - P. 427-430.

214. Бойко А. Содержание лимонной кислоты и АТФ-цитратлиазная активность в тканях крыс с различной естественной устойчивостью к гипербарической гипоксии / А. Бойко // Укр. биохим. журн. -1981. Т. 53. N2. - С. 115-118.

215. Heisen I. Daily plasma citrate rhytms in man during freoding and fastine /1. Heisen // Scand. Clin. Lab. -1984. -V. 41. N3. -P. 281-287.

216. Manjula T.S., Shyamala D.S. Effect of aspirin on heart mitochondrial enzymes in experimental myocardial infarction in rats / T.S, Manjula, D.S. Shyamala // Biochem. Arch. -1993. -V. 9. N 2. -P. 101-109.

217. Gawron O.S., Kennedy M.C., Rauner R.A. Properties of pig heart aconitase / O.S. Gawron, M.C. Kennedy, R.A. Rauner//Biochem. J. -1974. -V. 143. N3. -P. 717-722.

218. Ogata H. Nakamura S. Purification of aconitase / H. Ogata, S. Nakamura // Bull. Yamaguchi Med Sci. -1975. -V. 22. N2. P. 239-252.

219. Gruer M.J., Artymiuk P.J., Guest J.R The aconitase family: Three structural variations on a common theme / MJ. Gruer, P.J. Artymiuk, J.R. Guest // Trends Biochem. Sci. -1997. V. 22. N1. - P. 3-6.

220. Robbins A.H, Charles D.S., Piszkiewicz D., Gawron O. et al. Single crystals of the iron-sulfur enzyme aconitase / A.H. Robbins, D.S. Charles, D. Piszkiewicz // J. Biol. Chem. -1982. -V. 257. N15. P. 9061-9063.

221. Hentze M.W., Argos P. Homology between IRE-BP, a regulatory RNA-binding protein, aconitase, and isopropylmalate isomerase / M.W. Hentze, P. Argos // Nucleic Acids Res.-1991.-V. 19.-P. 1739-1740.

222. Zheng L., Andrews P.C., Hermodson M.A., Dixon J.E. et al. Cloning and structural characterization of porcine heart aconitase / L. Zheng, P.C. Andrews, M.A. Hermodson // J. Biol. Chem. -1990. -V. 265. N5. P. 2814-2827.

223. Emptage M.H. Inactivation of aconitase and similar Fe-S containing enzymes by divalent metals M.H. Emptage // 5Л Intern. Conf. Bioinorg. Chem.: Inorg. Chem. -1991.-V. 43. N2-3. -P. 255.

224. Peters RA., Shorthouse M. Aconitase, a complex with two active centers / R A. Peters M. Shorthouse //Nature. -1969. -V. 221. N518. -P. 774-775.

225. Johnson P.G., Waheed A, Jones L., Glaid A.L. Identification of an essential residue of pig heart aconitase / P.G. Johnson, A. Waheed, L. Jones // Biochem Biophys. Res. Communs. -1977. -V. 74. N2. -P. 384-389.

226. Plank D.W., Kennedy M.C., Beinert FL, Howard J.B. Cysteine labeling studies of heart aconitase containing a 4Fe, a cubane 3Fe or a linear 3Fe cluster / D. W. Plank, M.C. Kennedy, H. Beinert// J. Biol. Chem. -1989. V. 264. N34. -P. 20385-20393.

227. Uecyama N., Nakamura A Metalloenzymes and synthetic polymer complexes. Catalytic reaction by multielectron transfer / N. Uecyama, A Nakamura // High polym. -1990.-V.39.N3.-P. 198-201.

228. Robbins A.H, Stout C.D. Structure of activated aconitase: formation of the 4Fe-4S. cluster in the crystal / A.H. Robbins, C.D. Stout // Proc. Nat Acad Sci. 1989. - V. 86, N10.-P. 3639-3643.

229. Villafranca JJ., Mildvan A. The mechanism of aconitase action I. Preparation, physical properties of the enzyme, and activation by iron / J. J. Villafranca, A. Mildvan // J. Biol. Chem -1971. -V. 246. N3. -P. 772-779.

230. Piszkiewiez D., Gawron O., Sutherland J. C. Analysis of the iron-sulfur cluster of aconitase by natural and magnetic circular dicbroism / D. Piszkiewiez, O. Gawron, J.C. Sutherland//Biochemistiy. -1981. -V. 20. N2. -P. 363-366.

231. Kent T., Dreyer J., Kennedy M.C., Huynh B. et al. Mossbauer studies of beef heart aconitase: evidence for facile interconversions of iron-sulfur cluster / T. Kent, J. Dreyer, M.C. Kennedy //Proc. Nat Acad. Sci. -1982. -V. 79. N4. -P. 1098-1100.

232. Beinert H., The high potential iron-sulfur cluster of aconitase is a binuclear iron-sulfur cluster / H. Beinert, D.M. Kurtz, RH. Holm, F.L. Ruricka // J. Biol. Chem -1979. V. 254. N12.-P. 4967-4969.

233. Morrison J.F. Purification and some properties of aconitase / J.F. Morrison // Biochem

234. J. -1953.-V. 55. N1.-P. 75-81.

235. Susuki T., Yamazaki O., Nam K., Ahiyama S. et al. The aconitase of yeast Cristallization and general properties of yeast / T. Susuki, O. Yamazaki, K. Nara // J. Biochem. -1975. V. 77. N2. - P. 367-372.

236. Melzi E., Gian L., Moratti R. Simultaneous purification of aconitate hydratase and isocitrate dehydrogenase from mitochondria / E. Melzi, L. Gian, R. Moratti // Atti. Acad. Naz. Lincei. -1980. V. 69. N1-2. - P. 87-94.

237. Susuki T., Yamazaki O., Nara K., Ahiyama S. et al. Cristallization and reconstitution of yeast aconitase / T. Susuki, O. Yamazaki, K. Nara // Agr. Biol. Chem. 1973. - V. 37. N9.-P. 2211-2212.

238. Bennett В., Gruer M .J., Guest J.R., Thomson AJ. Spectroscopic characterisation of an aconitase (AcnA) of Escherichia coli / B. Bennett, MJ. Gruer., J.R // Eur. J. Biochem. -1995.-V. 233.-P. 317-326.

239. Ramsay R Evidence that the activation of aconitase involves a conformational change R. Ramsay//Biochem. J.-1982.-V. 203. N1.-P. 327-330.

240. Cortes E., Viniegra S. Citrate determination with aconitase immobilized on solid support/Е. Cortes, S. Viniegra//Int J. Biochem. -1985. -V. 17. N1. -P. 131-134.

241. Agrawa P.K., Gard G.K., Gollakota KG. Studies on two isozymes of aconitase from Bacillus cereus. I. Partial purification and stability / P.K. Agrawa, G.K. Gard, K.G. Gollakota//Biochem Biophys. Res. Communs. -1975. -V. 67. N2. P. 645-652.

242. Crassostrea V., Shoukry M. Aconitase from the ouster / V. Crassostrea, M. Shoukry // Сотр. Biochem. Physiol. -1982. -V. 72. N2. -P. 321-324.

243. Treton В., Heslot H. Etude de guelgues properties de l'aconitase de la levure Saccharomycopsis lipofytica / B. Treton, H. Heslot //Agr. Biol. Chem. 1978. - V. 42. N6.-P. 1201-1206.

244. Мельничук ДА, Скорик JIB., Шольц X. Роль углекислоты в регуляции ' функционирования реакций ЦТК в тканях животных / Д.А. Мельничук, Л. В.

245. Скорик, X. Шольц // Цикл трикарбоновых кислот и механизмы его регуляции: Объед. симпоз. биохим. обществ СССР и ГДР. -М., 1977. С. 57.

246. GluskerJ. P. Aconitase/J.P. Glusker// Enzymes. -1971. V.5.-P. 41439.

247. Eanes R J., Kun E. Inhibition of Дver aconitase isozymes by (-) erythro-fluorocitrate / RJ. Eanes, E Кип//Mol. Pharmacol. -1974. -V. 10. N1. -P. 130-139.

248. Stollings W.C., Monti C.T., Belvedere J.F. Absolute configuration of the isomer of fluorocitrate that inhibits aconitase / R.K. Preston, W.C. Stollings, С. T. Monti // Arch. Biochem Biophys. -1980. -V. 203. N1. P. 65-70.

249. Ruffo A. Reactivate du glyoxylate et regulation du cycle citrigue dans leg tissues animaux / A. Ruffo // Bull. Soc. Chem Biol. -1967. -V. 49. N5.-P.461-476.

250. Gunther S., Carsiotis M., Plaut G.W. The enzymatic properties of isocitric dehydrogenase / S. Gunther, M. Carsiotis, G.W. Plaut // J. Biol. Chem -1957. -V. 226. N20.-P. 977-991.

251. Colman R.F. Mechanism for the oxidative decarboxylation of isocitraie: implications for control /R.F. Colman // Adv. Enzyme Regulat. -1975. -V. 13.-P. 413-433.

252. Шевченко М.И., Гулий М.Ф. Роль ионов

253. Mn у ршноваз1 NADP-залежшх Ьоцитратдегщрогеназ / М.И. Шевченко, МФ. Гулий // Укр. биохим. журн. 1973. -Т. 45. N6.-С. 718-723.

254. Leary MN., Limburg J.A. Isotope effect studies of the role of metal ions in isocitrate dehydrogenase / M.N. Leary, J A Limburg // Biochemistry. 1977. - V. 16. N6. - P. 1129-1135.

255. Erlich R.S., Colman R.F. Coenzyme binding by native and chemically modified pig heart triphosphopyridine nucleotide- dependent isocitrate dehydrogenase / R.S. Erlich, R.F. Colman//Biochemistiy. -1975. -V. 14. N22. -P. 5008-5016.

256. Полторак O.M., Чухрай E.C. Физико-химические основы ферментативного катализа/ Полторак О.М. М.: Высшая школа, 1971.-С. 130-145.

257. Carlier M.F., Pantaloni D. Coenzyme binding by triphosphopyridine nucleotide-dependent isocitrate dehydrogenase from beef liver. Equilibrium and kinetics studies M.F. Carlier, D. Pantaloni//Biochemistry.-1976. -V. 15. N21. -P. 4703-4712.

258. Carlier M. F. Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate linked isocitrate dehydrogenase. Catalytic activation by the reduced coenzyme product of the reaction M.F. Carlier// Biochemistry. -1976. -V. 15. N8. -P. 1761-1766.

259. Mactarlane N., Matheus P., Dalziel K. The purification and properties of NADPdependent isocitrate dehydrogenase from ox heart mitochondria / N. Mactarlane, P. Matheus, K. Dalziel //Eur. J. Biochem. -1977. -V. 74. N3. -P. 553-559.

260. Dalziel K. Kinetics of oxidative decarboxylases / K. Dalziel // Dyn. Biochem. Syst Proc. Nat Res. New York-London, 1984. P. 65-81.

261. Heller W., Oldenhott P., Stolz C. Metabolic changes in the blood patients with brain injury and hypoxia/W. Heller, P. Oldenhott, C. Stolz //Resuscitation. -1974. -V. 3. N3. -P. 215-222.

262. Falholt K., Dohn K., Lund В., Falholt W. Enzyme pattern in hypoxic skeletal muscule /К. Falholt, K. Dohn, B. Lund //J. Mol. Cell. Cardiol. -1974. -V. 6. N4. -P. 349-359.

263. Гидранович В.И. Обмен углеводов в эндокринных железах крупного рогатого скота при промышленном ведении животноводства / В.И. Гидранович // Сельскохоз. биология. -1983. -N2. С. 110-113.

264. Galvez S., Gadal P. On the function of the NADP-dependent isocitrate dehydrogenase isoenzymes in living organisms / S. Galvez, P. Gadal // Plant Science. -1995. V. 105. -P.1-11.

265. Popova T.N., Pinheiro de Carvalho M.A.A. Citrate and isocitrate in plant metabolism / T.N. Popova, M.A.A. Pinheiro de Carvalho // Biocbim, Biophys. Acta. 1998. - V. 1364. N3.-P. 307-325.

266. Sazanov L.A., Jackson J.B. Proton-translocating transhydrogenase and operate in a substrate cycle activity in mitochondria / L.A. Sazanov, J.B. Jackson // FEBS Lett -1994. -V. 344. N2-3. -P. 109-116.

267. Скулачёв В Л. Аккумуляция энергии в клетке / В.П. Скулачёв. М.: Наука, 1969.-440 с.

268. Скулачёв В.П Трансформация энергии в биомембранах / В.П. Скулачёв В.П. -М.: Наука, 1972.-203 с.

269. Harvis P., Gloster S. The effects of acute hypoxia on lipid syntesis in the rat heart / P. Harvis, S. Gloster //Cardiology. -1972. -V. 56. -P. 4347.

270. Pastuszko A., Gromek A. Effect of free atty acids on the activity of NADP-dependentisocitrate dehydrogenase in normal and pathological conditions / A. Pastuszko, A.

271. Gromek // Bull. Acad. Pol. Sei. -1976. V. 24. N7. - P. 415-422.

272. Gromek A., Pastuzko A Localization of mitochondrial NADP-dependent Isocitrate Dehydrogenase at norm and ishemia / A. Gromek, A. Pastuzko // J. Neurochem. 1977. -V. 28. N2.-P. 429-433.

273. Jonadet M., Turchini J., Villie F. Change of some enzyme activity during the experimental ishemia at rat Hie effect of ATP / M. Jonadet, J. Turchini, F. Villie // Circ. Soc. Biol. -1976. V. 170. N2. - P. 375-382.

274. Ещенко Н.Д., Голубев АГ., Осадчая ДМ. Содержание пиридиннуклеотидов и активность ИДГ и МДГ в головном мозге и печени после воздействия гипоксии / Н.Д. Ещенко, А.Г. Голубев, JI.M. Осадчая // Труды Горьков. мед. ин-та. Горький, 1975.-Вып. 63.-С. 55-58.

275. Abuel F.R, Moore J.S. The radiation inactivation of NADP-specific pig heart isocitrate dehydrogenase / F.R. Abuel, J.C. Moore // Int. J. Radiat Biol. 1982. - V. 41. N5.-P. 575-581.

276. Tateishi J., Sreiner M., Baldini M.G. Studies on lipid peroxides in platelets. Effect on physiologic platelet function / J. Tateishi, M. Sreiner, MG. Baldini // J. Lab. Clin. Med.1973.-V. 81.N4. -P. 587-602.

277. Rarnanathan R, Misra U.K. Radioprotection of lipogenesis from glucose and activities of pyridine nucleotide dehydrogenases in liver of y-irradiated female rats by cystamine / R Rarnanathan, U.K. Misra//bit J. Radial Biol. -1975. -V. 28. N1. -P. 35-43.

278. Hulstaert C.E., Gijzel W.P., Hardonk M.J. Cellular membranes and membranes-linked enzymes at E-vitamin lack / C.E. Hulstaert, W.P. Gijzel, MJ. Hardonk // Lab. Invest -1975.-V.33.N2.-P. 176-186.

279. Islam M., Joyce L., Bell L., Baron D.N. Purification and comparative properties of isoenzymes of NADP-isocitrate dehydrogenase from rat heart mid liver / M. Islam, L. Joyce, L. Bell // Biochem. J. -1972. V. 129. N5. -P. 1003-1011.

280. Mikulski P., Angielski S., Rogulski J. Metabolism of tricarboxylic acid cycle in rat kidney medulla in vitro / P. Mikulski, S. Angielski, J. Rogulski //Amer. J. PhysioL -1972.-V. 223. N3.-P. 485-491.

281. Fox D J. Contribution of cytoplasmic enzymes to apparent heterogeneity of rat brain mitochondria / DJ. Fox // Arch. Entwicklungsmech. Organism -1973. V. 172. N1. -P. 75-79.

282. Rafalowska U., Ursula A., Ksiezak M., Chance B. Subcellular localization of enzymes oxidizing citrate in the rat brain / U. Rafalowska, A. Ursula, M. Ksiezak // J. Neurochem -1976. -V. 27. N3. -P. 813-815.

283. Попова Т.Н. Изоцитратдегидрогеназы: форма, локализация, свойства и регуляция / Т.Н. Попова // Биохимия. -1993. Т. 58. N12. - С. 1861-1879.

284. Yadav RN. Isocitrate Dehydrogenase activity and its regulation by estradiol in tissues of rats of various ages /RN. Yadav //CelL Biochem. Fund -1988. V. 6. N3. -P. 197-202.

285. Chabas A, Briones P., Sabater J. Prenatal development of isocitrate and glucose-6-phosphate dehydrogenases in the human brain / A. Chabas, P. Briones, J. Sabater // Brain Res.-1979.-V. 176. N1.-P. 180-184.

286. Уилкинсон Дж. Множественные молекулярные формы других дегидрогеназ / Дж. Уилкинсон // Уилкинсон Дж: Изоферменты / Дж. Уилкинсон. ML: Мир,1968.-C. 133-137.

287. Wang Y.M., King S.M., Eys J.V. Isocitrate metabolism in normal and glucoso-6-phosphate dehydrogenase deficient red cells / Y.M. Wang, S.M. King, J.V. Eys // Biochem. Med. -1974. V. 11. N4. - P. 327-337.

288. Siebert G., Dubuc J., Warner R.C., Plaut G.W. Hie preparation of isocitric dehydrogenase from mammalian heart / G. Siebert, J. Dubuc, R.C. Warner // J. Biol. ChenL -1957. V. 226. N20. - P. 965-975.

289. Rafalowska U., Pastuszko A., Gromek A. Characterystyca niektoiych wlasnosci isocytrynianowej dehydrogenazy NADP-zaleznej w moszgy szczura/U. Rafalowska, A. Pastuszko, A. Gromek A. // Neurol. Neurochir. Pol. -1974. -V. 8. N5. P. 673-676.

290. Rafalowska U., Pastuszko A. Molecular weight of NADP-dependent isocitrate dehydrogenase from rat brain cytosol under normoxia an hypoxia / U. Rafalowska, A. Pastuszko //Neurochem. Res. -1979. V. 4. N2. -P. 241-247.

291. Dlihgworth J.A., Tipton KF. Purification and properties of the NADP-dependent isocitrate dehydrogenase from pig liver cytoplasm / J.A. Dlihgworth, K.F. Tipton // Biochem. J. -1970. -V. 118. N2. -P. 253-258.

292. Mauck L., Colman RF. Alkylation of cystenyl residues of pig heart NADP-specific isocitrate dehydrogenase by iodacetate / L. Mauck, RF. Colman // Biochim Biophys. Acta. -1976. V. 429. N2. -P. 301-315.

293. Seelig, G.F., Colman, RF. Characterization of the physico-chemical and catalytic properties of human heart NADP-dependent isocitrate dehydrogenase / G.F. Seelig, R.F. Colman // Arch. Biochem. Biophys. -1978. V. 188. N2. - P. 394-409.

294. Seelig G.F., Colman RF. Human heart TPN-specific isocitrate dehydrogenase. Purification by a rapid three pricedure / G.F. Seelig, RF. Colman // J. Biol. Chem. -1977.-V. 252. N11.-P. 3671-3678.

295. Hackers M.L., Harris B.A., Poulsen L.L. Purification and crystallization of NADP-specific isocitrate dehydrogenase from Ecsherkhia coli using polyethylene glycol

296. M.L. Hackers, В A Harris, L.L. Poulsen // Biochim. Biophys. Acta. 1977. - V. 481. N2.-P. 340-347.

297. Fukumdo N., Imagawa S., Sahara T. Purification and characterization of monomelic isocitrate dehydrogenase with NADP+-specifity from Vibrio parahaemolyticus Y-4 / N. Fukunado, S. Imagawa, T. Sahara // J. Biochem. -1992. V. 112. N6. - P. 849-855.

298. Muro-Paster MJ., Florencio FJ. Purification and properties of NADP-isocitrate dehydrogenase from the unicellular cyanobacterium Synechocystis sp. / MJ. Muro-Paster, F J. Florencio // Eur. J. Biochem. -1992. V. 203. N1-2. - P. 99-105.

299. Huang Y.C. Haselbeck RJ., McAlister-Henn Lee jY-ethylmaleimide profiling of yeast NADP-dependent isocitrate dehydrogenase / Y.C. Huang, RJ. Haselbeck, Lee McAlister-Henn // Arch. Biochem. Biophys. -1995. V. 316. N1. - P. 485-492.

300. Magar E., Robbins J.E. The subunits of porcine heart TPN-specific isocitrate dehydrogenase/Е. Magar, J.E. Robbins //Biochim Biophys. Acta. -1969. -V. 191. N1. -P. 173-176.

301. Jennings G. Т., Sadlieir J. W., Stevenson P.M. Purification and properties of NADP-dependent isocitrate dehydrogenase from the corpus luteum / G.T. Jennings, J. W. Sadlieir, P.M. Stevenson//Biochim. Biophys. Acta. -1990. -V. 103. N2. -P. 219-227.

302. Таранда НИ, Виноградов B.B., Струмило CA Очистка и свойства НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеназы из коры надпочечников быка / НИ. Таранда, В.В. Виноградов, CA Струмило //Укр. биохим. журн. -1987. Т. 59. N1.-C. 24-29.

303. Haselbeck RJ., Colman RF., McAlister-Hen Lee Isolation and sequence of a cDNA encoding porcine mitochondrial NADP-specific isocitrate dehydrogenase / RJ. Haselbeck, RF. Colman, Lee McAlister-Hen // Biochemistry. -1992. V. 31. N27. - P. 6219-6223.

304. Hurley J.H, Thorsness P.E., Ramalingam V. Structure of a bacterial enzyme regulated by phosphorylation, isocitrate dehydrogenase / J.H. Hurley, P.E. Thorsness, V. Ramalingam // Proc. Nat Acad. Sei. -1989. V. 86. N22. - P. 8635-8639.

305. Rafalowska U., Pastuszko A., Gromek A. The effect of pyridine nucleotides on the activity of of NADP-dependent isocitrate dehydrogenase from rat brain cytosol / U. Rafalowska, A Pastuszko, A. Gromek//FEBS Lett. -1974. -V. 42. N1. -P. 20-22.

306. Little C., Holland P. Sulfhydril groups and the concerted inhibitions of NADP-linked isocitrate dehydrogenase / C. Little, P. Holland // Can. J. Biochem. 1972. - V. 50. N10. -P. 1109-1113.

307. Dean AM., Lee M.H., Koshland D.E. Phosphorylation inactivates Escherichia coli of isocitrate dehydrogenase by preventing isocitrate binding / AM. Dean, M.H. Lee, D.E. Koshland//J. Biol. Chem. -1989. -V. 264. N34. -P. 20482-20486.

308. Colman RF. Role of metal ions in reactions catalyzed by pig heart triphosphopyridine nucleotide isocitrate dehydrogenase. EEflect on catalytic properties and reactivity of amino acid residues/RJF. Colman//J. Biol. Chem. -1972. -V. 247. N1. P. 215-223.

309. Colman RF. A glutamil residue in the active site of triphosphopyridine nucleotide-dependent isocitrate dehydrogenase of pig heart / R.F. Colman // J. Biol.Chem. -1973. -V. 248. N23. -P.8137-8143.

310. Colman, R.F. Effect of modification of a methionyl residue on the kinetic and molecular properties of isocitrate dehydrogenase / R.F. Colman //J. Biol. Chem -1968. -V. 243. N10.-P. 2454-2464.

311. Seelig G.F., Colman RF. Alkylation of methionine in human heart TPN-dependent isocitrate dehydrogenase / G.F. Seelig, RF. Colman // J. Biol. Chem 1979. - V. 254. N4.-P. 1191-1195.

312. Fan C.C., Lin J.P., Plaut G.W. Effects of temperature diphosphopyridine nucleotide-linked isocitrate dehydrogenase from bovine heart / C.C. Fan, J.P. Lin, G.W. Plaut // J. Biol. Chem. -1975. -V. 250. N6. P. 2022-2027.

313. Low P.S., Somero G.N. Activation volumes in enzymic catalysis: their sources and modification by low molecular weight solutes / P.S. Low, G.N. Somero // Proc. Nat Acad ScL-1975.-V.72. N8. -P. 3014-3018.

314. Гулий М.Ф., Шевченко M.I. Кшетична характеристика НАДФ-залежних ооцитратдегщрогеназ / М.Ф. Гулий, M.I. Шевченко // Укр.бюхм. журн. 1973.1. Т. 45. N5.-C. 515-522.

315. Londesborough J.C., Dalziel К. Determination of the stability constant of the magnesium-ion complex of isocitrate / J.C. Londesborough, K. Dalziel // Eur. J. Biochem. -1971. -V. 23. N1. -P. 194-197.

316. Rippa M., Signorini M., Dallochio F. A role for the pyridine nitrogen of reduced triphosphopyridine nucleotide in the mechanism of action of isocitrate dehydrogenase / M. Rippa, M. Signorini, F. Dallochio // FEBS Lett -1974. -V. 39. N1. -P. 24-26.

317. Ramachandran N., Durbano M., Colman R.F. Kinetic isotope effects in the NAD and NADP-specific isocitrate dehydrogenase of pig heart / N. Ramachandran, M. Durbano, R.F. Colman//FEBS Lett -1974. -V. 49. N1. -P.129-133.

318. Carlier M. F. Etude physicochimique d'une isocitrate dehydrogenase. Modulation de activia enzybatique par les substrates et les coenzymes: Dissert Doctor, sci phys. Univ / Carlier M. F. Paris, 1976. -18 p.

319. Northrop D.B., Glenand W. The kinetics of pig heart triphosphopyridine nucleotide dependent isocitrate dehydrogenase. П. Deodent and multiple inhibition studies / D.B. Northrop, W. Glenand // J. Biol. Chem. -1974. V.249. N9. - P. 2928-2931.

320. Ingebretsen O.C. Mechanizm of the inhibitory effect of glyoxylate plus oxaloacetate and oxalomalate on the NADP-specific isocitrate dehydrogenase / O.C. Ingebretsen // Biochim. Biophys. Acta. -1976. V. 452. N2. - P. 302-303.

321. Farrel H.M. Effect of long-chain acyl-coenzyme fatty acid on the activity of the soluble form of isocitrate dehydrogenase from lacting bovine mammaly gland / H.M. Farrel // Arch. Biochem. Biophys. -1995. V. 321. N1. - P. 199-208.

322. Ripla В., Vijay K., Rameah C. Metal-metal interaction inhibits the NADP-specific isocitrate dehydrogenase activity in at brain / B. Ripla, K. Vijay, C. Rameah // Biochem. Soc. Trans. -1992. -V. 20. N4. -P. 837-854.

323. Ingebretsen O.C., Sanner T. Activation of NADP-specific isocitrate dehydrogenase by chelating agents / O.C. Ingebretsen, T. Sanner // Arch. Biochem. Biophys. 1976. - V. 176. N2.-P. 442-448.

324. Шаркова Е.В. Ферменты превращения цитрата и изоцитрата в сердечной и скелетной мышцы эмбрионов и взрослых кроликов / Е.В. Шаркова // Вопр. мед. химии. -1980. Т. 26. N5. - С. 695-698.

325. Dlihgworth J.A., Tipton K.F. Substrate independence of molecular weight of triphosphopyridine nucleotidespecific isocitrate dehydrogenase / J.A. Dlihgworth, K.F. Tipton//J. Biol. Chem -1972. -V. 247. N20.-P. 6727-6729.

326. Браунвальд Ю., Мароко LLP., Либби П. Уменьшение размера инфаркта после коронарной окклюзии / Ю. Браунвальд, П.Р. Мароко, П. Либби // Метаболизм миокарда: Материалы 1-го сов.-америк. симпозиума / Науч. ред. Е. Чазов. М.: Медицина, 1975.-С. 391-397.

327. Иргашев Ш. Б. Структурно-функциональнью изменения в правом желудочке миокарда после перевязки левой нисходящей коронарной артерии и некоторые пути их фармакологической коррекции / Ш.Б. Иргашев // Ишемическая болезнь сердца Ташкент, 1981. —С. 56-58.

328. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии / Г.А. Кочетов М.: Высшая школа, 1980. - 270 с.

329. Guilbault G.G. Handbook of enzymatic methods of analysis / G.G. Guilbault New York: Marcel Dekker, 1976. - 300 p.

330. Журавлёва А.И. Биохемшпоминесценция / А.И. Журавлёва M.: Наука, 1983. -С. 222-240.

331. Косолапов В.А., Островский О.В., Спасов А.А. Хемилюминесцентные методы в оценке свободнорадикальных реакций / В.А. Косолапов, О.В. Островский, А.А. Спасов // Клиническая и лабораторная диагностика. -1999. Т. 9. - С. 41.

332. Азизова О.А., Пирязев АН, Шерстнев М.П., Дриницина С.В. и др. Хемилюминесцентнаая оценка антиоксид антного статуса больных атеросклерозом / О.А. Азизова, А.П. Пирязев, М.П Шерстнев // Бюлл. эксперим. биол. и мед. -2001. Т. 131. N5. - С. 524-526.

333. Стальная И.Д. Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот / И.Д. Стальная // Орехович В.Н.: Современные методы в биохимии / В.Н. Орехович. М.: Медицина, 1977. - С. 63-64.

334. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью 2-тиобарбшуровой кислоты / И.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили // Орехович В.Н.: Современные методы в биохимии / В.Н. Орехович. М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.

335. Спиричев В.Б., Матусис И.И., Бронштейн JLM. Методы определения витамина Е / В.Б. Спиричев, ПИ. Матусис, J1M. Бронштейн // Островский Ю.М. Экспериментальная витаминология / Ю.М. Островский. Минск: Наука и техника, 1979.-С. 36-37.

336. Афанасьев В. Г., Зайцев B.C., Вольфсон Т. И. К микрометоду определения лимонной кислоты в сыворотке крови с помощью фотоэлекгроколориметра / В. Г. Афанасьев, B.C. Зайцев, Т. И. Вольфсон // Лаб. дело. -1973.—N1. —С. 115-116.

337. Wolfson S.K., Williams-Ashman H.G. Isocitric and 6-phosphogluconic dehydrogenase in human blood serum / S.K. Wolfson, H.G. Williams-Ashman // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -1957. -V. 96. -P. 231-234.

338. Chosh S.K., Swarup M.S., Chatfeijea J.B. A rapid clinical method for the estimation of activity of aconitase in blood / S.K. Chosh, M.S. Swarup, J.B. Chatfeijea // Acta Haematol. -1968. V.40. N1-2. -P. 104-109.

339. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R. Protein measurement with the Folin-Phenol reagent / O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr A.L // J. Biol. Chem -1951.-V. 194. N1. P.265-271.

340. Детерман Г. Гель-хроматография / Г. Детерман. М.: Мир, 1970. - 252 с.

341. Уильяме Б., Уилсон К. Методы практической биохимии / Б. Уильяме. М.:1. Мир, 1978.-С. 153-158.

342. Tietz N.W. Fundamentals of Clinical Chemistiy / N.W. Tietz. Philadelphia: W.B. Saundres Co, 1976. - P. 235.

343. Справочник биохимика / Досон P., Эллиот Д., Эллиот У., Джонс К. М.: Мир, 1991.-543 с.

344. Остерман JI А. Хроматография бежов и нуклеиновых кислот / JI.A. Остерман. -М.: Наука, 1985.-536 с.

345. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli //Nature. -1970. V. 227. - P. 680-685.

346. Мешкова Н.П., Северин C.E. Практикум по биохимии / Н.П. Мешкова. -1970. -V. 38.-Р. 285-288.

347. Келети Т. Основы ферментативной кинетики / Т.М. Келети. М.: Мир, 1990. -350 с.

348. Dixon М., Webb Е.С. Enzymes / М. Dixon. New York: Acad Press Inc., 1979. - P. 350-354.

349. Курганов Б.И. Аллосгерические ферменты /Б.И. Курганов. М.: Наука, 1978. -248 с.

350. Ллойд Е., Ледерман У. Справочник по прикладной статистике / Е. Ллойд. М.: Финансы и статистика, 1990. - 525 с.

351. Kaneshige J. Studies on citrate metabolism in liver injuries / J. Kaneshige // Okayama Adamed, 1975. V. 29. - P. 18.

352. Харбури Г.А., Маркс Р.Г. Цитохромы Ъ и с / Г.А. Харбури, Р.Г. Маркс // Неорганическая биохимия, 1978. Т.2. - С. 339-396.

353. Александров ВЛ. Функциональные изменения конформации бежов иденатурация / В.Я. Александров // Реактивность клеток и белки. Л., 1985. С. 127139.

354. Черницкий Е.А., Мажуль В.М., Конев С.В. Исследование конформационных переходов в уреазе / Е.А. Черницкий, В.М. Мажуль, С.В Конев // Биофизика. -1968. Т. 14. N3.-С. 414-420.

355. Myer Y.P. Confomation of cytochromes. Ш. Effect of urea, temperature, extrinsic ligands, and pH variation on the coonformation of horse heart ferricytochrome с / Y.P. Myer // Biochemistry. -1968. V. 7. - P. 765-776.

356. Some factors in the interpretation of protein denaturation / W. Kauzmann // Adv. Proc. Chem 1959. -V. 14. - P. 1-63.

357. Жоли M. Физическая химия денатурации белков / М. Жоли. М: Мир, 1968. -364 с.

358. Samejima Т., Miyahara Т., Takeda A. On the acid denaturation of porcine erythrocyte catalase in relation to its subunit structure / T. Samejima, T. Miyahara, A. Takeda//J. Biochem -1981. -V. 89. N4. -P. 1325-1332.

359. Жуковский А.П., Халоимов А.И., Ровнов H.B., Раев А.Н Термостабильность структуры бежов в нативном состоянии и механизм ее поддержания / А.П. Жуковский, А.И. Халоимов, Н.В. Ровнов // Биофизика. 1987. - Т.32. - С. 583587.

360. Конев С.В., Катибников М.А., Бондарин В.А. Люминесцентное исследование влияния температуры на конформационное состояние фибриногена / С.В. Конев, М.А. Катибников, В.А. Бондарин // Биофизика. -1975. Т. 20. N4. - С. 586-590.

361. Cohen J.S., Fisher W.R., Schochter A.N. Spectroscopic studies on the conformation of cytochrome с and apocytochrome с / J.S. Cohen, W.R. Fisher, A.N. Schochter // J. Biol. Chem. -1974. -V. 249. P. 1113-1118.

362. Weidner G., Steffan В., Brakhage A.A. The Aspergillus nidulans lysF gene encodes homoaconitase, an enzyme involved in the fungus spesific biosynthesis pathway / G.

363. Weidner., В. Steffaii, A.A. Brakhage // Mol. Gen Genet. 1997. - V. 225. N3. -P.237-247.

364. Гацура B.B., Сидоренко А.Ф. Коронарный метаболический ацидоз и проблема его фармакологической коррекции / В.В. Гацура, А.Ф. Сидоренко // Успехи физиол. наук. -1986. N4. - С. 38-56.

365. Розумна Н.М. Окисления ргзных субстратш та стан Mrroxgiu серця за racipoi кислево1 недосгаточноси / Н.М Розумна // Укр. 6ioxiM. журн. 1974. - Т. 46. N3. -С. 295-299.

366. Villifranca J J The mechanism of aconitase action. Evidence for an enzyme isomerisation by studies of inhibition by tricarboxylis acids / J J. Villifranca // J. Biol. Chem -1974. -V. 249. N19. -P. 6149-6155.

367. Скулачёв В.П. Трансформация энергии в биомембранах / В.П Скулачёв. М.: Наука, 1972.-203 с.

368. Kammermeier Н., Schmidt P., Jungling Е. Free energy chance of ATP-hydrolysis: a causal factor of early hypoxic failure of the myocardium / H. Kammermeier, P. Schmidt., E. Jungling // J. Molec. Cell. Cardiol -1982. V. 14. - P. 267-277.

369. Zimmer H, Ibel H. Ribose accelerates the repletion the ATP pool during recovery from reversible ishemia of rat myocardium / H. Zimmer, К Ibel // J. Molec. Cell. Cardiol. -1984. V. 16. - P. 283-286.

370. Пауков В. С., Фролов В. А. Элементы теории патологии сердца / B.C. Пауков. М.: Медицина, 1982. - 270 с.

371. Хашен Р., Шейх Д. Очерки по патологической биохимии / Р. Хашен. М.: Медицина, 1981.-С. 139.

372. Козлов А.В., Шинкаренко Л.И., Владимиров Ю.А., Азизова О.А. Роль эндогенного свободного железа в активации перекисного окисления липидов при ишемии / А.В Козлов., Л.И. Шинкаренко, Ю.А. Владимиров // Бюл. эксперим. биол. -1985. -Т. 1. -С. 38-40.

373. Бабаджанов С.Н Изменение содержания цинка в органах кроликов с экспериментальным атеросклерозом / С.Н. Бабаджанов // Ишемическая болезнь сердца. Ташкент, 1981. С. 23-26.

374. Shen А.С., Jennings R. В. Myocardial calcium and magnesium in acute ishemic injury / A.C. Shen, R. B. Jennings // Amer. J. Pathol. -1972. V. 67. N3. - P. 417-434.199

375. Solaro R. J. The role of calcium in the contraction of the heart / R. J. Solaro // Calcium blockers: Mechanism of action and clinical application 1982. - V. 11. N9. -P. 21-35.

376. Якушев B.C., Миронова E.B., Курилка В.И. Баланс кальция при некрозе миокарда и значение стресса в его нарушении / B.C. Якушев, Е.В. Миронова, В.И. Курипка // Вопр.мед. химии. 1987. - Т. 33. N1. - С. 25-29.

377. Синицын С.П. Динамика содержания Са в сердечной мышце при остром инфаркте миокарда и его коррекция / С.П. Синицын // Акт. вопр. дальнейшего совершенствования диагностики, профилактики и лечения сердечно-сосудистой системы. Челябинск, 1986. С. 19-23.