Функциональные и микрореологические свойства лейкоцитов при экзогенном перегревании в опытах in vivo и in vitro

Зубарева, Екатерина Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Функциональные и микрореологические свойства лейкоцитов при экзогенном перегревании в опытах in vivo и in vitro
ВАК РФ 03.03.01, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Функциональные и микрореологические свойства лейкоцитов при экзогенном перегревании в опытах in vivo и in vitro"

Зубарева Екатерина Владимировна

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ И МИКРОРЕОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ЭКЗОГЕННОМ ПЕРЕГРЕВАНИИ В ОПЫТАХ IN VIVO И IN VITRO

03.03.01 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

1 3 ОКТ 2011

Ярославль-2011

4856922

Работа выполнена на кафедре анатомии и физиологии живых организмов Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Белгородский государственный национальный исследовательский университет».

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Фёдорова Марина Зотовна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Викулов Александр Демьянович

кандидат биологических наук, доцент Дигурова Ирина Ивановна

Ведущая организация: Учреждение Российской академии образования

«Институт возрастной физиологии»

Защита диссертации состоится «27» октября 2011 года в «_» часов

на заседании диссертационного совета Д 212.307.02 по защите докторских и кандидатских диссертаций при Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ярославский государственный педагогический университет им. К.Д. Ушинского» по адресу: 150000, Ярославль, Которосльная наб., д. 46-в, ауд. 203.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ярославского государственного педагогического университета им. К.Д. Ушинского (150000, г. Ярославль, ул. Республиканская, д. 108).

Автореферат разослан «_» сентября 2011 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

—И.А. Осетров

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования.

Значительный интерес к исследованию морфофизиологических характеристик лейкоцитов обусловлен тем, что белые клетки крови выполняют в организме комплекс важных функций. Лейкоциты принимают участие как в осуществлении специфических защитных реакций, к которым относится продукция и секреция антител иммунокомпетентными клетками (лимфоцитами) (Тяжелова В.Г., 2003; Козинец Г.И. и др., 2001), так и в реализации механизмов неспецифической защиты, включающих фагоцитарную активность нейтрофилов (Игнатов П.Е., 2002; Yap В., 1999). Циркуляция в крови лимфоцитов, чьей функцией является постоянный иммунологический контроль антигенного состава собственного и поступающего извне чужеродного материала (Тяжелова В.Г., 2003), и движение по капиллярному руслу полиморфноядерных клеток, а также их активация, адгезия к эндотелию и миграция в ткани, оказывают значительное влияние на формирование местного микрососудистого сопротивления и вносят вклад в регуляцию перфузии органов (РедчицЕ.Г., Парфенов A.C., 1989; Иванов К.П., Мельникова H.H., 2004). При этом особенности микрореологических характеристик и физиологической активности лейкоцитов определяются морфофункциональным статусом белых клеток крови, в формировании которого важную роль играют такие показатели как объём, резерв плазмалеммы и пластичность, поддерживающиеся на относительно постоянном уровне и являющиеся индикатором состояния клетки (Иванов К.П., Мельникова H.H., 2004; Wehner F., TinelH., 2000; Wehner F. et al„ 2003; Lang F., 2007; McManus M.L. et al., 1995; BeckF.X. et al., 1998; Ebner H.L. et al., 2005; Davis C.E. et al., 2004). Активация лейкоцитов происходит в условиях развивающегося в организме инфекционного процесса, зачастую сочетающегося с лихорадкой (характеризующейся повышением температуры тела), и сопровождается изменением морфофизиологических характеристик клеток (Hartzfeld-Charbonnier A.S. et al., 2007; Park H.G. et al., 2005; Hanson D.F., 1993; Ostberg J.R, RepaskyE.A., 2006; Murapa P. et al., 2007; RiceP. et al., 2005; Chen Q. et al., 2006; Zheng H. et al., 2003). Для ответа на вопрос как изменятся функциональные и реологические свойства лейкоцитов при повышении температуры окружающей среды, и каковы механизмы возможных изменений, было предпринято изучение действия тепловой нагрузки на клетки крови на двух моделях: in vivo и in vitro.

Несмотря на большое количество работ по изучению клеточных механизмов адаптации к действию активного физического модулятора функционального состояния организма стрессорной природы - гипертермии (Васильев Н.В., 1992; КинштД.Н., КинштН.В., 2006; Баллюзек Ф.В. и др., 2001; КурпешевО.К. и др., 2005; Жаврид Э.А. и др., 1997), эта проблема остаётся актуальной для современной физиологии. Исследование динамики морфометрических показателей и реактивности клеток в условиях экзогенного

перегревания в опытах in vivo и in vitro позволяет оценить влияние клеточных изменений на адаптивные возможности организма в целом (Moseley P.L., 1997; ГоричеваВ.Д, 2000) и раскрыть механизмы лечебного и повреждающего действия гипертермии (Козлов Н.Б., 1990; Сувернев A.B. и др., 2009). Экзогенное перегревание рассматривается в качестве одного из перспективных методов профилактики и терапии ряда заболеваний, в частности в онкологической (Сувернев A.B. и др., 2009; Клишковская А.Ф., 2007; Fiorentini G., Szasz А., 2006; Atanackovic D. et al., 2006; J. van der Zee, 2002), вирусологической и аллергологической области медицинской практики (Сувернев A.B. и др., 2009), поэтому изучение реакций клеток крови на действие теплового фактора приобретает особую значимость.

Целью диссертационной работы была сравнительная оценка функциональных и микрореологических свойств лейкоцитов в условиях действия экзогенной гипертермии на клетки крови в опытах in vivo и in vitro.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1)дать сравнительную оценку динамики физиологических свойств (общих и специфических) лейкоцитов крови в условиях действия интенсивной тепловой нагрузки на организм и охарактеризовать сопутствующие им изменения на организменном уровне;

2) выявить особенности изменений функциональных и микрореологических свойств лейкоцитов при действии экзогенной гипертермии на организм;

3) оценить сходства и различия в изменении геометрических и физиологических характеристик лимфоцитов под влиянием экзогенной гипертермии в опытах in vivo и in vitro;

4) установить особенности динамики морфофункциональных характеристик лимфоцитов при действии на кровь тепловой нагрузки.

Научная новизна исследования.

Впервые показано, что в условиях действия интенсивной тепловой нагрузки на организм на фоне стресс-индуцированной гиперплазии коры надпочечников и изменения клеточного состава красного костного мозга, происходит специфический сдвиг лейкоцитарной формулы крови, сопровождающийся лимфоцитозом, моноцитозом, нейтропенией. Получены новые данные о том, что гипертермия вызывает повышение эффективности осморегуляторных реакций и осмотической стойкости лейкоцитов крови. Впервые установлено, что экстремальная экзогенная гипертермия организма приводит к регуляторному уменьшению объёма лимфоцитов, снижению пластичности и экономному использованию клетками мембранного резерва в условиях гипотонии.

при температуре физиологической нормы (37°С) вызывает увеличение объёма и пластичности лимфоцитов. Действие тепловой нагрузки (37°С, 42°С) на клетки крови сопровождается использованием лимфоцитами функционального мембранного резерва уже в юоосмолярных условиях.

Теоретическая и практическая значимость исследования.

Полученные данные об изменении морфофункциональных свойств лейкоцитов крови в условиях экзогенной гипертермии расширяют и углубляют существующие представления о клеточных механизмах адаптации организма к действию тепловой нагрузки. Выявленные в ходе исследования изменения морфологических параметров и функциональных свойств лейкоцитов, инкубированных в условиях температуры физиологической нормы (37°С) в опытах in vitro, следует учитывать при проведении клинических процедур, предусматривающих извлечение порции крови и возвращение её в организм (гемодиализ, плазмаферез).

Результаты исследования могут быть использованы для преподавания курсов «Физиология клетки», «Физиология крови», «Физиология экстремальных состояний», «Экологическая физиология», а также при написании учебно-методических пособий.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Направленность адаптационных реакций лейкоцитов крови в условиях действия интенсивной тепловой нагрузки на организм, характеризующаяся повышением эффективности регуляции объёма клеток, их осмотической стойкости и локомоционной активности, опосредована как физическим действием температуры, так и развивающейся у животного стресс-реакцией, подтверждением которой служат неспецифические морфологические изменения со стороны надпочечников и клеточного состава костного мозга.

2. В условиях экстремального перегревания организма происходит компактизация структур лимфоцитов крови, сопровождающаяся уменьшением их объёма, пластичности и снижением использования функционального резерва плазмалеммы.

3. Инкубация клеток крови при температуре физиологической нормы (37°С) и повышенной температуре (42°С) приводит к увеличению их пластичности и объёма за счёт использования мембранного резерва не только в гипотонической, но и в изотонической среде.

Апробация результатов работы.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), 25th Conference of the European Society for Microcirculation (Budapest, Hungary, 2008), IV Всероссийской конференции (с международным участием) «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» (Москва, 2009), XIV Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2009), VII Международной научной конференции «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику)» (Ярославль, 2009), XXI Съезде

Физиологического общества им. И.П. Павлова (Калуга, 2010), Международной научно-практической конференции «Здоровье в XXI веке - 2010» (Тула, 2010), Всероссийской научной конференции молодых учёных «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2010).

Объём и структура диссертации. Диссертация содержит 156 страниц текста компьютерного набора, 17 таблиц, 70 рисунков, 12 формул. Рукопись состоит из введения, четырёх глав основной части (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования, обсуждение результатов исследования), выводов и библиографического списка, включающего 241 источник (71 отечественную и 170 зарубежных публикаций).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Организация исследования

При изучении действия экзогенной гипертермии на морфофункциональные свойства белых клеток крови в опытах in vivo и in vitro были использованы животные-альбиносы вида Крыса серая (Rattus norvegicus) (самцы) (65 особей), массой 300-350 грамм, поделённые на три группы.

Первая группа - «Контроль» - интактные животные (25 особей).

Вторая группа - «Перегревание животного» (25 особей). Крыс подвергали длительному тепловому воздействию в камере объёмом 0,8 м3, с автоматизированным воздухообменом и относительной влажностью 50-60%, при температуре 38°С в течение 120 минут (Фёдорова М.З. и др., 2000). По окончании действия тепловой нагрузки измеряли ректальную температуру животного, брали кровь. Для оценки развития в организме стресс-реакции изучали лейкоцитарную формулу крови, клеточный состав костного мозга и изменения в надпочечниках по общепринятым методикам.

Кровь крыс третьей группы (15 особей) использовали для изучения влияния экзогенной гипертермии на свойства лейкоцитов в опытах in vitro. При этом кровь животных делили на две части равного объёма. Одну пробирку с кровью выдерживали в термостате при температуре 37°С - группа «Экспозиция крови (37°С)», а другую пробирку - при температуре 42°С - группа «Экспозиция крови (42°С)>>. Время инкубации в обоих случаях составляло 30 минут.

Кровь для исследований у крыс брали путём декапитации после дачи лёгкого эфирного наркоза. В качестве антикоагулянта использовали гепарин в концентрации 10ед./мл. Из крови получали суспензию лейкоцитов. Для этого кровь центрифугировали в течение 10 минут при 1500 об ./мин. Затем собирали лейкоцитарное кольцо и обогащённую лейкоцитами часть плазмы. Примесь эритроцитов в суспензии разрушали 0,83% раствором хлорида аммония (Дуглас С.Д., КуиП.Г., 1983; Зимин Ю.И., РедькинА.П., 1987) и дважды отмывали клетки изотоническим раствором хлорида натрия.

Методы исследования функциональных свойств лейкоцитов Локомоционную активность лейкоцитов оценивали в тест-системе миграции клеток под агарозой (Дуглас С.Д., Куи П.Г., 1983) в модифицированном варианте (Фёдорова М.З., Левин В.Н., 1997). Ареал спонтанного распространения клеток служил критерием самопроизвольной миграции. Площадь распространения лейкоцитов в присутствии супернатанта дрожжевых клеток - стимулированной миграции.

Для изучения поглотительной способности лейкоцитов использовали методику фагоцитоза нейтрофилами дрожжевых клеток (Дуглас С.Д., Куи П.Г., 1983). Определяли фагоцитарную активность (ФА) и фагоцитарный индекс (ФИ) нейтрофилов (Пат. № 2143693 (РФ)).

С целью получения данных по осмотической стойкости, резервным возможностям мембраны и осморегуляторным реакциям лейкоцитов использовали модифицированный комплексный метод (Фёдорова М.З., Левин В.Н., 1997).

При исследовании морфометрических характеристик клеток методом полуконтактной атомно-силовой микроскопии на воздухе площадь поверхности клетки определяли путём сложения площади кривой поверхности шарового сегмента (Выгодский М.Я., 2006) и площади его основания, представляющего собой проекцию клетки на подложку: S = (2-3t-R-h + S') , где S - площадь поверхности клетки (мкм2); л - число пи; R - радиус основания сферического сегмента (мкм); h - высота (мкм); S' - площадь проекции клетки на подложку (мкм2). Коэффициент уплощённости лимфоцитов вычисляли по формуле: Ку = S'/h, где Ку - коэффициент уплощённости (отн.ед.); S' - площадь проекции клетки на подложку (мкм2); h - высота (мкм).

Мембранный резерв лейкоцитов оценивали как разницу между площадью поверхности клетки, инкубированной в течение 1 минуты в сильно гипотоническом растворе, и соответствующим показателем в изотонической среде. С целью сравнения использования резерва плазмалеммы клетками животных контрольной и опытных групп определяли долю используемого мембранного резерва в общей площади поверхности лимфоцитов в гипоосмолярной среде. Осмотическую стойкость лейкоцитов высчитывали как долю клеток, оставшихся в сильно гипотоническом растворе после инкубации суспензии лейкоцитов в этой среде в течение часа, от количества клеток в изотоническом растворе. Регуляторные реакции лейкоцитов оценивали по кинетике набухания клеток в течение 60 секунд при инкубации в умеренно гипотоническом растворе и способности восстанавливать исходный размер в течение 1 часа в той же среде (Фёдорова М.З., Левин В.Н., 1997).

Методы статистической обработки данных Итоговые результаты были получены методами вариационной статистики. С помощью компьютерных программ Excel 7.0 и Statistica 6.0 вычисляли значение средней арифметической выборочной совокупности (М) и стандартной ошибки среднего значения (т). Оценивали нормальность распределения количественных значений признака и с помощью непарного

(двухвыборочного) t-критерия Стьюдента и двухвыборочного критерия Вилкокеона определяли достоверность различий между значениями признаков сравниваемых групп.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

СИСТЕМНЫЕ И КЛЕТОЧНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ, ВОЗНИКАЮЩИЕ В РЕЗУЛЬТАТЕ ДЕЙСТВИЯ НА ОРГАНИЗМ ИНТЕНСИВНОЙ ТЕПЛОВОЙ НАГРУЗКИ (ОПЫТЫ IN VIVO)

Проявление реакции на экзогенную гипертермию на системном уровне Экспериментально установлено, что действие на организм животного экзогенной гипертермии интенсивностью 38°С в течение 120 минут приводит к нарушению процессов терморегуляции и увеличению температуры тела крысы, в среднем, на 5°С. По мнению ряда авторов, определённый вклад в повышение температуры тела может вносить развивающаяся у животного в условиях экзогенной гипертермии стресс-реакция (KokoV. et al., 2004; Kluger M.J. et al., 1990), которая приводит к росту температуры тела крысы, в среднем на 1,4°С (Kluger M.J. et al., 1990). О том, что продолжительное действие интенсивной тепловой нагрузки на организм животного опосредует запуск стресс-реакции, свидетельствуют морфологические изменения в надпочечниках: относительное увеличение коркового слоя надпочечников (с 70,7±0,7% до 77,1±0,7%, р<0,01), снижение митотического индекса клеток пучковой зоны коры надпочечников (с 0,12±0,01%о до нуля, р<0,01) и увеличение диаметра ядер клеток пучковой зоны (с 5,10±0,01 мкм до 5,50±0,02 мкм, р<0,01). Известно, что кроме надпочечников, органы тимико-лимфатической системы и клеточный состав крови также обладают высокой чувствительностью к действию любого стрессорного фактора и отвечают на него определёнными морфофункциональными изменениями (Мельник Б.Е., КаханаМ.С., 1981; СельеГ., 1979). Сдвиг лейкоцитарной формулы костного мозга является неспецифическим и носит стрессорный характер (табл. 1) (Горизонтов П.Д. и др., 1983).

Таблица 1

Лейкоцитарная формула костного мозга

Группа Л,% М,% Н,% Э, % Б, %

Контроль 21,17± 1,19 4,67±0,33 65,83±1,28 8,33±0,33 0

Перегревание 44,17±1,40 1,50±0,43 52,50±0,72 1,83±0,54 0

животного * * * *

Примечание: (М ± ш); Л - лимфоциты, М - моноциты, Н - нейтрофилы, Э - эозинофилы, Б - базофилы; * - достоверность различий по сравнению с группой «Контроль» (^критерий Стьюдента, р<0,01).

Действие экзогенной гипертермии на организм приводит к снижению количества лейкоцитов в крови животных с 17,9Т09/л до 9,2Т09/л, и

специфическому изменению соотношения разных пулов белых клеток крови животного (табл. 2).

Таблица 2

Лейкоцитарная формула крови

Группа Л,% М, % н, % Э,% Б, %

Контроль 69,20±1,20 2,00±0,06 28,20±1,10 0,40±0,05 0,20±0,03

Перегревание животного 78,50±0,90 * 2,50±0,10 * 18,10±0,90 * 0,60±0,06 0,30±0,05

Примечание: (М ± ш); Л - лимфоциты, М - моноциты, Н - нейтрофилы, Э - эозинофилы, Б - базофилы; * - достоверность различий по сравнению с группой «Контроль» (t-критерий Стьюдента, р<0,01).

Морфологические изменения надпочечников, лимфоцитоз, моноцитопения, нейтропения и эозинопения в красном костном мозге экспериментальных животных, являясь индикаторами развития в организме стресс-реакции (Горизонтов П.Д. и др., 1983), свидетельствуют о значительной интенсивности действующего фактора (Селье Г., 1979). В то время как характерные для экзогенной гипертермии лимфоцитоз, моноцитоз и нейтропения в крови указывают на специфику влияющего на организм раздражителя. При этом снижение процентного содержания нейтрофилов в крови в условиях перегревания организма может быть опосредовано выходом клеток во внесосудистое пространство с целью устранения повреждённых в результате тепловой нагрузки элементов.

Динамика морфометрических характеристик и функциональных свойств белых клеток крови при действии интенсивной тепловой нагрузки на организм Изменения морфометрических характеристик лимфоцитов крови, исследованных методом полуконтактной АСМ, представлены на рисунке 1 и в таблице 3.

Рисунок 1. Сканограммы лимфоцитов крови (СЗМ «ИНТЕГРА Вита» (фирмы НТ-МДТ, Россия)): 1 - группа «Контроль», 2 - группа «Перегревание животного»; А - 0,9% ЫаСЛ;

Б - 0,2% №С1, 1 мин.

Таблица 3

Морфометрические характеристики лимфоцитов в растворах хлорида натрия различной осмолярности

Группа Показатель, единица измерения Раствор, время инкубации

И СГ, 1 мин

Контроль D, мкм 8,00 ±0,35 10,12 ±0,76°

h, мкм 1,14 ± 0,19 1,11 ±0,10

V, мкм3 54,94 ± 9,20 87,35 ± 11,94

S, мкм2 79,97 ± 5,63 119,80 ±3,37°

Перегревание животного D, мкм 6,62 ±0,37* 7,21 ± 0,49 *

h, мкм 0,94 ± 0,07 0,89 ± 0,09 *

V, мкм"1 33,45 ±4,59 34,14 ±3,96*

S, мкм2 52,96 ±5,44 * 63,51 ±6,36*

Примечание: И - изотонический раствор (0,9% NaCl); СГ - сильно гипотонический раствор (0,2% NaCl); D - диаметр (M±m); h - высота (М±т); V - объём (М±т); S - площадь поверхности (М±т); * - достоверность различий по сравнению с контролем; - то же по сравнению с 0,9% NaCl; критерий Вилкоксона (р<0,05).

В результате действия на организм интенсивной тепловой нагрузки объём лимфоцитов в изотонической среде становится меньше на 39,1%, в сильно гипотоническом растворе - на 60,9%, по сравнению с соответствующими показателями клеток группы «Контроль». Экзогенная гипертермия приводит к снижению использования клетками мембранного резерва в гипотонической среде. У лимфоцитов контрольной группы доля используемого мембранного резерва в гипоосмолярных условиях составляет 33,2%, у лимфоцитов группы «Перегревание животного» данный показатель сокращается до 16,6%.

Экзогенная тепловая нагрузка вызывает также уменьшение распластанности лейкоцитов, что проявляется в снижении величины коэффициента уплощённости (табл. 4).

Таблица 4

Коэффициент уплощённости лимфоцитов крови (отн.ед.)

Группа Раствор, время инкубации

И СГ, 1 мин

Контроль 74,1±21,8 109,7±38,6

Перегревание животного 39,4±4,9 64,2±14,7

Примечание: (М±ш); И - изотонический раствор (0,9% NaCl); СГ -сильно гипотонический раствор (0,2% NaCl).

Экзогенная гипертермия повышает эффективность осморегуляторных реакций клеток. При этом как лимфоциты, так и нейтрофилы крови животных, подвергавшихся действию интенсивной тепловой нагрузки, в условиях умеренно гипотонической среды достигают больших размеров, по сравнению с клетками контрольных животных. В то же время лейкоциты животных экспериментальной группы более полно восстанавливают исходный размер после длительной инкубации в умеренно гипотонической среде, по сравнению с клетками животных группы «Контроль» (рис. 2, 3).

Рисунок 2. Диаметр лимфоцитов (М±т), инкубированных в растворах хлорида натрия различной осмолярности; И - изотонический раствор (0,9% NaCl), УГ - умеренно гипотонический раствор (0,45% NaCl); * - достоверность различий с группой «Контроль»; ° - то же по сравнению с 0,9% NaCl;а - то же по сравнению с 0,45% NaCl, инкубация в течение 1 минуты; t-критерий Стьюдента (р<0,05).

Рисунок 3. Диаметр нейтрофилов (М±т), инкубированных в растворах хлорида натрия различной осмолярности; И - изотонический раствор (0,9% NaCl), УГ - умеренно гипотонический раствор (0,45% NaCl); * - достоверность различий по сравнению с группой «Контроль»; ° - то же по сравнению с 0,9% NaCl;а - то же по сравнению с 0,45% NaCl, инкубация в течение 1 минуты; t-критерий Стьюдента (р<0,05).

Действие интенсивной тепловой нагрузки на организм сопровождается повышением осмотической резистентности лейкоцитов с 69,0 % до 84,0 % (р<0,05).

Экзогенная гипертермия стимулирует локомоционные реакции белых клеток крови, повышая площадь спонтанной (на 39,6%) и стимулированной (на 30,7%) миграции лейкоцитов (рис. 4), а также фагоцитарную активность (с 12,7±0,9 % до 20,0±1,0%, р<0,01) и фагоцитарный индекс нейтрофилов (с 1,09±0,03 отн.ед. до 1,12±0,03 отн.ед.) (рис. 5).

11,5

8,8 6,7

4,8

Контроль Перегревание

животного

□ Sen. aScm.

Рисунок 4. Площадь спонтанной и стимулированной миграции лейкоцитов под агарозой (M±m): Sen. - площадь спонтанной миграции клеток под агарозой (мм2), Sct. - площадь миграции клеток под агарозой, стимулированной дрожжевым супернатантом (мм2); * - достоверность различий по сравнению с группой «Контроль» (t-критерий Стьюдента, р<0,01).

% зо-

25 20 15 10 -5 0 -

Контроль

1,5 отн.ед.

1,4 1,3 1,2

ФА,

1,1 1

-ФИ, опт. с

Перегревание животного

Рисунок 5. Показатели, характеризующие поглотительную способность нейтрофилов (М±т): ФА - фагоцитарная активность нейтрофилов (%); ФИ - фагоцитарный индекс (отн.ед.); * - достоверность различий по сравнению с группой «Контроль» (t-критерий Стьюдента,

р<0,01).

Таким образом, экзогенная гипертермия приводит к изменению участия цитоплазматической мембраны в клеточных реакциях (поддержание постоянства объёма, осморегуляция, осмотическая резистентность, пластичность, локомоционная активность и поглотительная способность). При этом регистрируемое в условиях действия тепловой нагрузки повышение функциональной активности и осмотической стойкости лейкоцитов крови сочетается с компактизацией клеточных структур и переходом клеток на «сберегающий» тип реагирования, о чём свидетельствует более экономное использование ими мембранного резерва в условиях гипотонии.

ПРЯМОЕ ДЕЙСТВИЕ ТЕПЛОВОЙ НАГРУЗКИ НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ЛИМФОЦИТОВ (ОПЫТЫ IN VITRO) Исследования полуконтактным методом АСМ геометрии лимфоцитов, инкубированных в различных температурных условиях, показали, что экспозиция крови в среде с повышенной температурой приводит к увеличению объёма клеток (рис. 6, табл. 5). Лимфоциты группы «Экспозиция крови (37°С)» в изотоническом растворе больше на 39,9%, в сильно гипотоническом растворе -на 13,3%, по сравнению с соответствующими объёмами клеток крови животных группы «Контроль». Инкубация клеток при температуре 42°С приводит к увеличению объёма лимфоцитов на 96,9% в изотоническом растворе и на 26,0% в сильно гипотоническом, по сравнению с соответствующими объёмами клеток интактных животных.

мкм 0,8 , Ь Jbd п шшшшшяшш 1.А Щ 0,4 В Шшшшт ^ Ч - - v 1 Б JUL

0 2 4 6 8 10 мкм мкм „ . мкм 0,8 '* ЕУШь. I- 0 щшшшшшшяшяш 0 2 4 6 8 10 мкм 2.Б JL ^шш^шшщшщ

0 2 4 6 8 10 12 14 мкм мкм мкм 1.2 - _ II 1кЛ z о JHHHHSEHBHHB 0 2 4 6 8 10 12 мкм 0 2 4 6 8 10 12 14 мкм З.Б 0 2 4 6 8 10 12мкм

Рисунок 6. Сканограммы лимфоцитов крови (СЗМ ИНТЕГРА Вита (фирмы НТ-МДТ, Россия)): 1 - «Контроль», 2 - «Экспозиция крови (37°С)>>, 3 - «Экспозиция крови (42°С)»; А - 0,9% №С1; Б - 0,2% №С1, 1 мин.

Таблица 5

Морфометрические характеристики лимфоцитов в растворах хлорида натрия различной осмоляриости

Группа Показатель, единица измерения Раствор, время инкубации

И СГ, 1 мин

Контроль D, мкм 8,00 ± 0,35 10,12 ±0,76°

h, мкм 1,14 ±0,19 1,11 ±0,10

V, мкм3 54,94 ± 9,20 87,35 ± 11,94

S, мкм"* 79,97 ±5,63 119,80 ±3,37°

Экспозиция крови (37°С) D, мкм 12,02 ± 0,61 * 12,31 ±0,54 *

h, мкм 0,66 ±0,13 * 0,85 ± 0,09 *

V, мкм3 76,85 ± 18,72 98,94 ± 12,28

S, мкм^ 141,55 ± 13,86* 155,21 ± 10,80 *

Экспозиция крови (42°С) D, мкм 9,55 ±0,41 *' 11,91 ±0,70°

h, мкм 1,52 ±0,15 ' 0,99 ± 0,35

V, мкм3 108,21 ± 12,02* 110,05 ±32,84

S, мкм^ 118,27 ±8,17* 150,72 ± 15,49

Примечание: И - изотонический р-р (0,9% NaCl); СГ - сильно гипотонический р-р (0,2% NaCl); D - диаметр (М±ш); h - высота (M±m); V - объём (M±m); S -площадь поверхности (М±т); * - достовфность различий по сравнению с контролем; ° - то же по сравнению с 0,9% NaCl; * - то же по сравнению с группой «Экспозиция крови (37°С)»; критерий Вилкоксона (р<0,05).

Экспозиция клеток крови в условиях действия тепловой нагрузки сопровождается снижением доли используемого мембранного резерва клетками в гипоосмолярных условиях - до 8,8% для лимфоцитов группы «Экспозиция крови (37°С)» и до 21,5% для лимфоцитов группы «Экспозиция крови (42°С)». Однако под влиянием экзогенной гипертермии на клетки крови запускаются физико-химические процессы, которые приводят к использованию резерва плазмалеммы уже в изоосмолярных условиях. В таблице 6 приведены значения коэффициента уплощённости клеток крови.

Таблица 6

Коэффициент уплощённости лимфоцитов крови (отн.ед.)

Группа Раствор, время инкубации

И СГ, 1 мин

Контроль 74,1±21,8 109,7±38,6

Экспозиция крови (37°С) 254,5±59,8 * 209,5±50,0 *

Экспозиция крови (42°С) 56,5±11,6 * 225,4±61,8 0

Примечание: (М±ш); И - изотонический р-р (0,9% NaCl); СГ - сильно гипотонический р-р (0,2% NaCl); * - достоверность различий по сравнению с контролем; ° - то же по сравнению с 0,9% NaCl; * - то же по сравнению с группой «Экспозиция крови (37°С)»; критерий Вилкоксона (р<0,05).

В ходе проведённого исследования установлено, что действие повышенной температуры на лимфоциты в опытах in vitro, как и экспозиция клеток крови в условиях температуры физиологической нормы, опосредует увеличение объёма и площади поверхности лимфоцитов. В случае возвращения клеток в кровоток подобный характер изменений может вызывать увеличение микрососудистого сопротивления и нарушение естественной перфузии органов. Кроме того, возникающее в результате экзогенного перегревания крови повышение распластанности лейкоцитов может снизить их локомоционную способность. Полученные в эксперименте данные подтверждают высокую физиологическую значимость исследуемых показателей, относительное постоянство которых в живом организме поддерживается благодаря работе соответствующих функциональных систем.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, при действии на организм интенсивной тепловой нагрузки происходит не только стимуляция функциональных свойств, обеспечивающих реализацию защитных реакций, но и активация механизмов, стабилизирующих геометрические показатели лейкоцитов. Эти изменения развиваются на фоне общей стресс-реакции и обусловленных тепловым воздействием сдвигов клеточного состава белой крови. В условиях экзогенной гипертермии организма происходит компактизация структур лимфоцитов, сопровождающаяся снижением объёма, пластичности клеток и более экономным использованием ими мембранного резерва в среде с пониженной осмолярностью. Экспозиция клеток крови в условиях температуры физиологической нормы (37°С) и при повышенной температуре (42°С) в опытах in vitro исключает возможность регуляции морфофизиологических характеристик клеток гуморальными факторами, вырабатывающимися в организме. То есть увеличение объёма лимфоцитов и расправление складок плазмалеммы, формирующих мембранный резерв, в изоосмолярной среде, которое происходит при экзогенном перегревании крови, является следствием активации внутриклеточных механизмов регуляции функционального состояния лейкоцитов.

ВЫВОДЫ

1. В условиях экзогенного перегревания животных с повышением ректальной температуры до ~42°С, на фоне стресс-опосредованных изменений в надпочечниках, клеточном составе красного костного мозга и характерного при тепловой нагрузке сдвига лейкоцитарной формулы крови, происходит активация как специфических функций лейкоцитов (увеличение спонтанной и стимулированной миграционной активности, поглотительной способности

нейтрофилов), так и общих физиологических свойств (осмотической резистентности и эффективности осморегуляторных реакций).

2. Действие экзогенной гипертермии на организм приводит к уменьшению объёма (на 39,1% в изотоническом растворе, на 37,9% в сильно гипотоническом растворе), пластичности лимфоцитов крови и опосредует более экономное использование клетками функционально значимого мембранного резерва в условиях гипотонии, «сберегаемого» для реализации защитных реакций.

3. Наблюдающееся под влиянием интенсивной тепловой нагрузки в опытах in vivo снижение значений морфометрических показателей лимфоцитов (объёма, площади поверхности и распластанности), свидетельствует об активации функциональных свойств клеток и изменении их микрореологического статуса.

4. Изменения геометрических характеристик и физиологических свойств лимфоцитов в условиях экзогенной гипертермии в опытах in vitro отличаются от регистрируемых при перегревании организма.

5. Экспозиция цельной крови в опытах in vitro при температуре диапазона физиологической нормы и при повышенной температуре приводит к увеличению значений геометрических параметров лимфоцитов (объёма, площади поверхности) и стимулирует использование клеткой мембранного резерва уже в изотонической среде.

6. Инкубация лимфоцитов при температуре физиологической нормы в условиях in vitro вызывает повышение пластичности клеток и увеличение их объёма на 39,9% в изотонической среде и дополнительно на 40,2% после экспозиции в течение 1 минуты в сильно гипотонической среде.

7. Экспозиция клеток крови в опытах in vitro при повышенной температуре (42°С) приводит к увеличению объёма лимфоцитов на 96,9% (р<0,05) в изотонической среде, а также к повышению распластанности клеток и дополнительному возрастанию их объёма на 3,4% в гипотонической среде.

Всего по материалам диссертационного исследования опубликовано

11 работ.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зубарева, Е.В. Сравнительная оценка «мембранного резерва» клеток крови земноводных и млекопитающих / М.З.Фёдорова, C.B. Надеждин, С.И. Головко, Е.В. Зубарева // Журнал эволюционной биохимии и физиологии. - 2007. - Т. 43. - № 5. - С. 419-422. (Издание рекомендовано ВАК).

2. Зубарева, E.B. Использование атомно-силовой микроскопии для оценки морфометрических показателей клеток крови / М.З. Фёдорова, H.A. Павлов, Е.В. Зубарева, C.B. Надеждин, В.В. Симонов, H.A. Забиняков, Е.С. Тверитина // Биофизика. - 2008. - Т. 53. - Вып. 6. - С. 1014-1018. (Издание рекомендовано ВАК).

3. Zubareva, E.V. Influence of ecological factors on the use of blood lymphocytes membrane reserve in the in vitro experiments / M.Z. Fedorova, N.A. Pavlov, E.V. Zubareva, V.V. Simonov // Journal of Vascular Research. - 2008. - Vol. 45. -Suppl. 2.-P. 96.

4. Зубарева, E.B. Оценка действия тепловой нагрузки на морфофункциональные характеристики лимфоцитов крови в опытах in vivo и in vitro / E.B. Зубарева, М.З. Фёдорова, C.B. Надеждин, H.A. Павлов // Научные ведомости Белгородского государственного университета. Серия Естественные науки. - 2011. - № 3 (98). - Вып. 14. - С. 155-162. (Издание рекомендовано ВАК).

5. Зубарева, Е.В. Использование мембранного резерва лимфоцитами в условиях экзогенной гипертермии / C.B. Надеждин, H.A. Павлов, Е.В. Зубарева // VI Сибирский физиологический съезд. Тезисы докладов. -Барнаул: Принтэкспресс, 2008. - В 2 томах. T. I. - С. 167-168.

6. Зубарева, Е.В. Динамика геометрических характеристик лимфоцитов крови при разной температуре в опытах in vivo и in vitro / C.B. Надеждин, М.З. Фёдорова, H.A. Павлов, Е.В. Зубарева, В.В. Симонов // Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов в клинику) [Текст] / Материалы международной научной конференции. - Ярославль: Изд-во ЯГПУ им. К.Д. Ушинского, 2009. - С. 59.

7. Зубарева, Е.В. Клеточные реакции на изменение температуры окружающей среды в опытах in vitro / М.З. Фёдорова, C.B. Надеждин, Е.В. Зубарева, H.A. Павлов, В.В. Симонов // Материалы XIV Международного симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации». - М.: РУДН, 2009. -С. 423-424.

8. Зубарева, Е.В. Использование нанотехнологий в изучении микрореологических свойств клеток крови / М.З. Фёдорова, C.B. Надеждин, Е.В. Зубарева, H.A. Павлов // Материалы IV Всероссийской конференции «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии». - М., 2009. - С. 548-549.

9. Зубарева, Е.В. Динамика морфометрических и функциональных свойств лейкоцитов в условиях интенсивной тепловой нагрузки / Е.В. Зубарева, H.A. Павлов // Материалы международной научно-практической конференции «Здоровье в XXI веке - 2010». - Тула: Изд. «Тульский полиграфист», 2010.-С. 128-129.

Ю.Зубарева, Е.В. Функциональные свойства лимфоцитов в условиях экзогенной гипертермии / М.З. Фёдорова, C.B. Надеждин, Е.В. Зубарева,

М.И. Москаленко // XXI Съезд Физиологического общества им. И.П. Павлова. Тезисы докладов. - М. - Калуга: Типография ООО «БЭСТ-принт», 2010. - С. 639.

П.Зубарева, Е.В. Морфофункциональные изменения лейкоцитов при адаптации организма к экзогенной гипертермии / Е.В. Зубарева, H.A. Павлов // Медицинский академический журнал. - 2010. -№5. - Т. 10. - С. 14.

Подписано в печать 13.09.2011. Гарнитура Times New Roman. Формат 60x84/16. Усл. п. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 181. Оригинал-макет подготовлен и тиражирован в ИПК НИУ «БелГУ» 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Зубарева, Екатерина Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.:.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Экзогенная гипертермия как экстремальный фактор.

1.2. Морфофункциональные свойства лейкоцитов крови

1.2. Г. Особенности объяснения морфофункциональных свойств клеток с позиций мембранной теории и гипотезы ассоциации-индукции

1.2.2. Морфометрические характеристики и микрореологические свойства белых клеток крови

1.2.3. Осморегуляторные реакции лейкоцитов крови

1.2.4. Фагоцитарная активность белых.клеток крови.

1.3. Действие тепловой нагрузки на морфофункциональные характеристики клеток крови

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Описание объекта, моделей исследования и серий эксперимента

2.2. Методы оценки развития стресс-реакции в организме.

2.3. Методы-исследования функциональных свойств и морфологических показателей белых клеток крови

2.3.1. Изучение локомоционной активности лейкоцитов

2.3.2. Оценка адгезионной способности белых клеток крови

2.3.3. Исследование поглотительной способности нейтрофилов.

2.3.4. Изучение осмотической стойкости, мембранного резерва и осморегуляторных реакций лейкоцитов крови.

2.4. Методы микроскопирования и анализа полученных изображений, использовавшиеся при изучении морфофункциональных свойств клеток

2.4.1. Метод световой микроскопии.

2.4.2. Метод сканирующей электронной микроскопии.

2.4.3. Метод полуконтактной атомно-силовой микроскопии.

2.5. Методы статистической обработки данных.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Оценка системных изменений и клеточных реакций, возникающих в результате действия на организм интенсивной тепловой нагрузки (опыты in vivo)

3.1.1. Системные реакции на экзогенную гипертермию.

3.1.2. Изменение морфометрических показателей лейкоцитов в условиях экзогенной гипертермии

3.1.2.1. Сравнительная оценка геометрических характеристик лимфоцитов, полученных различными методами микроскопии.

3.1.2.2. Результаты исследования морфометрических показателей нейтрофилов методами полуконтактной атомно-силовой и световой микроскопии.

3.1.3. Влияние экстремального перегревания организма на функциональные и микрореологические свойства лейкоцитов крови

3.1.3.1. Результаты изучения этапов фагоцитарного процесса' лейкоцитов крови крыс

3.1.3.2. Оценка осморегуляторных реакций и осмотической стойкости лейкоцитов с использованием функциональных проб.

3.1.3.3. Результаты изучения резерва плазмалеммы и пластичности лимфоцитов.

3.1.3.4. Результаты исследования мембранного резерва нейтрофилов

3.2. Изменение функциональных и микрореологических свойств лимфоцитов крови при прямом действии тепловой нагрузки на клетки (опыты in vitro).

3.2.1. Сравнительная характеристика морфометрических показателей лимфоцитов.'.

3.2.2. Динамика пластичности лимфоцитов и использования клетками мембранного резерва в условиях гипотонии.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

4.1. Сравнительная оценка различных методов изучения изменений морфометрических характеристик и функциональных свойств белых клеток крови.

4.2. Анализ действия интенсивной экзогенной тепловой нагрузки на организм (опыты in vivo)

4.2.1. Реакция организма на действие интенсивной тепловой нагрузки.

4.2.2. Динамика морфометрических характеристик и функциональных свойств белых клеток крови при действии интенсивной тепловой нагрузки на организм

4.3. Оценка прямого действия тепловой нагрузки на морфофункциональные характеристики лимфоцитов опыты in vitro)

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональные и микрореологические свойства лейкоцитов при экзогенном перегревании в опытах in vivo и in vitro"

Актуальность исследования.

Значительный интерес к исследованию морфофизиологических характеристик лейкоцитов обусловлен тем, что белые клетки крови выполняют в организме комплекс важных функций. Лейкоциты принимают участие как в осуществлении специфических защитных реакций, к которым относится продукция и секреция антител иммунокомпетентными клетками (лимфоцитами) (Тяжелова В:Г., 2003; КозинецГ.И. и др., 2001), так и в реализации механизмов неспецифической защиты, включающих фагоцитарную активность нейтрофилов (Игнатов П.Е., 2002; Yap В., 1999). Циркуляция в. крови лимфоцитов, чьей функцией является- постоянный иммунологический контроль антигенного состава собственного' и поступающего извне чужеродного материала, (Тяжелова»В:Г., 2003); и движение по капиллярному руслу полиморфноядерных клеток, а также их активация; адгезия к эндотелию и миграция в ткани, оказывают значительное влияние на формирование местного микрососудистого» сопротивления- и вносят вклад в регуляцию ■ перфузии органов (Редчиц Е.Г., Парфенов А.С., 1989; Иванов К.П., Мельникова H.H., 2004). При этом особенности микрореологических характеристик и физиологической активности лейкоцитов определяются морфофункциональным статусом белых клеток крови, в формировании которого важную роль играют такие показатели как объём, резерв плазмалеммы и пластичность, поддерживающиеся на относительно постоянном уровне и являющиеся индикатором состояния клетки (Иванов К.П., Мельникова H.H., 2004; Wehner F., TinelH., 2000; Wehner F. et al., 2003; Lang F., 2007; McManus M.L. et al., 1995; BeckF.X. et al., 1998; Ebner H.L. et al., 2005; Davis C.E. et al., 2004). Активация лейкоцитов происходит в условиях развивающегося в организме инфекционного процесса, зачастую сочетающегося с лихорадкой (характеризующейся повышением температуры тела), и сопровождается изменением морфофизиологических характеристик клеток (Hartzfeld-Charbonnier A.S. et al, 2007; ParkH.G. et al, 2005; Hanson D.F., 1993; Ostberg J.R., RepaskyE.A., 2006; Murapa P. et al, 2007; Rice P. et al, 2005; Chen Q. et al, 2006; Zheng H. et al, 2003). Для ответа на вопрос как изменятся функциональные и реологические свойства лейкоцитов при повышении температуры окружающей среды, и каковы механизмы возможных изменений, было предпринято изучение действия тепловой нагрузки на клетки крови на двух моделях: in vivo и in vitro.

Несмотря на большое количество работ по- изучению клеточных механизмов адаптации к действию активного физического модулятора функционального состояния организма стрессорной природы— гипертермии , (Васильев Н.В., 1992; КинштД.Н., КинштН.В., 2006; БаллюзекФ.В. и др., 2001; КурпешевО.К. и др., 2005; ЖавридЭ.А. и др., 1997), эта проблема остаётся актуальной для современной, физиологии. Исследование динамики морфометрических показателей и реактивности клеток в условиях экзогенного перегревания в опытах in vivo и in vitro позволяет оценить влияние клеточных изменений на адаптивные возможности организма в целом (Moseley P.L., 1997; ГоричеваВ.Д, 2000) и раскрыть механизмы лечебного и повреждающего действия гипертермии (Козлов Н.Б., 1990; Сувернев A.B. и др., 2009). Экзогенное перегревание рассматривается в качестве одного из перспективных методов профилактики и терапии ряда заболеваний, в частности в онкологической- (Сувернев A.B. и др., 2009; Клишковская А.Ф., 2007; Fiorentini G., Szasz А., 2006; Atanackovic D. et al., 2006; J. van der Zee, 2002), вирусологической и аллергологической области медицинской практики (Сувернев A.B. и др., 2009), поэтому изучение реакций клеток крови на действие теплового фактора приобретает особую значимость.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1) дать сравнительную оценку динамики физиологических свойств (общих и специфических) лейкоцитов крови в условиях действия интенсивной тепловой нагрузки на организм и охарактеризовать сопутствующие им изменения на организменном уровне;

2) выявить особенности изменений функциональных и 4 микрореологических свойств лейкоцитов при действии экзогенной гипертермии на организм;

3) оценить сходства и различия в изменении геометрических и физиологических характеристик» лимфоцитов под влиянием экзогенной гипертермии в опытах in vivo и in vitro;

Научная новизна исследования.

Впервые показано, что в условиях действия интенсивной тепловой нагрузки на организм на фоне стресс-индуцированной гиперплазии коры надпочечников и изменения клеточного состава красного костного мозга, происходит специфический^ сдвиг лейкоцитарной формулы крови, сопровождающийся лимфоцитозом, моноцитозом, нейтропенией. Получены новые данные о том, что гипертермия вызывает повышение эффективности осморегуляторных реакций и осмотической стойкости лейкоцитов крови. Впервые установлено, что экстремальная экзогенная гипертермия организма приводит к регуляторному уменьшению объёма лимфоцитов, снижению пластичности и экономному использованию клетками мембранного резерва в условиях гипотонии.

Впервые выявлены особенности изменений функциональных свойств и геометрических параметров лейкоцитов, подвергавшихся экспозиции в средах разной осмоляльности в опытах in vitro. Показано, что инкубация клеток крови при температуре физиологической нормы (37°С) вызывает увеличение объёма и пластичности лимфоцитов. Действие тепловой нагрузки

37°С, 42°С) на клетки крови сопровождается использованием лимфоцитами функционального мембранного резерва уже в изоосмолярных условиях.

Теоретическая и практическая значимость исследования.

Полученные данные об изменении морфофункциональных свойств лейкоцитов крови в условиях экзогенной гипертермии расширяют и углубляют существующие представления о клеточных механизмах адаптации организма к действию тепловой нагрузки. Выявленные в ходе исследования изменения морфологических параметров и функциональных свойств лейкоцитов, инкубированных в условиях температуры физиологической нормы (<37°С) в опытах in vitro, следует учитывать, при проведении клинических процедур, предусматривающих извлечение порции крови и возвращение её в организм (гемодиализ, плазмаферез).

Результаты исследования могут быть использованы для* преподавания курсов «Физиология клетки», «Физиология крови», «Физиология экстремальных состояний», «Экологическая физиология», а также при написании учебно-методических пособий.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

Апробация результатов работы.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на VI Сибирском физиологическом съезде (Барнаул, 2008), 25th Conference of the European Society for. Microcirculation (Будапешт, Венгрия; 2008), IV Всероссийской конференции (с международным, участием) «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой; хирургии» (Москва, 2009), XIV Международном симпозиуме «Эколош-физиологические проблемы адаптации» (Москва; 2009); Международной научной конференции «Гемореология и микроциркуляция (от функциональных механизмов:; в клинику)» (Ярославль, 2009); XXI Съезде Физиологического: общества им. И.Г1. Павлова (Калуга, 2010), Международной научно-практической конференции :«Здоровье в XXI веке - 2010» (Тула, 2010), Всероссийской научной! конференции молодых учёных «Проблемы биомедицинской- науки третьего тысячелетия» (Санкт-Петербург, 2010).

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Зубарева, Екатерина Владимировна

ВЫВОДЫ

1. В условиях экзогенного перегревания животных с повышением ректальной температуры до ~42°С, на фоне стресс-опосредованных изменений в надпочечниках, клеточном составе красного костного мозга и характерного при тепловой нагрузке сдвига лейкоцитарной формулы крови, происходит активация1 как специфических функций лейкоцитов (увеличение спонтанной и стимулированной миграционной активности, поглотительной способности нейтрофилов), так и общих физиологических свойств (осмотической резистентности и эффективности осморегуляторных реакций).

2. Действие экзогенной гипертермии на организм приводит к уменьшению объёма (на 39,1% в изотоническом растворе, Hat 37,9% в сильно гипотоническом растворе), пластичности* лимфоцитов крови и опосредует более экономное использование клетками функционально значимого мембранного резерва в условиях гипотонии, «сберегаемого» для реализации защитных реакций.

3. Наблюдающееся, под влиянием интенсивной тепловой1 нагрузки* в опытах in vivo снижение значений морфометрических показателей лимфоцитов (объёма; площади поверхности* и распластанности), свидетельствует об активации функциональных свойств клеток и изменении их микрореологического статуса.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Зубарева, Екатерина Владимировна, Белгород

1. Автандилов, Г.Г. Проблемы патогенеза и патологоанатомической диагностики болезней в аспектах морфометрии / Г.Г. Автандилов. — М.: Медицина, 1984. 288с.

2. Агаджанян, H.A. Адаптация и резервы организма / H.A. Агаджанян. — М.: Физкультура и спорт, 1983. — 176с.

3. Агаджанян, H.A. Экологическая физиология человека/ H.A. Агаджанян, А.Г. Марачев, Г.А. Бобков. М.: Издательская фирма «КРУК», 1998. -416 с.

4. Алексеев, H.A. Клинические аспекты лейкопений, нейтропений и функциональных нарушений нейтрофилов / H.A. Алексеев. — СПб: Фолиант, 2002. 416с.

5. Баллюзек, Ф.В. Управляемая гипертермия/ Ф.В. Баллюзек, М.Ф. Баллюзек, В.И. Виленский, С.И. Горелов, С.А. Жигалов,

6. A.A. Иванов, С.Н. Кузьмин, Г.А. Определяков. — СПб.: Невский диалект,2001.- 128 с.

7. Блиндарь, В.Н. Функциональная характеристика зрелых нейтрофилов периферической крови больных хроническим миелолейкозом /

8. B.Н. Блиндарь, Г.Н. Зубрихина, И.Н. Михайлова, Е.С. Захарова, Т.Н. Заботина, А.Г. Туркина, Н.Д. Хорошко, О.М. Вотякова, М.А. Волкова, А.Ю. Барышников // Гематология и трансфузиология.2002. Т.47. - №2. — С. 13-16.

9. Васильев, Н.В. Система крови и неспецифическая резистентность в экстремальных климатических условиях / Н.В. Васильев, Ю.М. Захаров, Т.И. Коляда. Новосибирск: Наука, 1992. - 257с.

10. Венчиков А.И. Основные приемы статистической обработки результатов наблюдений в области физиологии/ А.И. Венчиков, В.А. Венчиков. — М.: «Медицина», 1974. 153 с.

11. Виноградов, В.В. Стресс: Морфобиология коры надпочечников / В.В. Виноградов. — Мн.: Беларусская навука, 1998. — 319с.

12. Воробьёва, Н.Ф. Реакция крови и подкожной рыхлой соединительной ткани белых крыс при общем перегревании организма и при перегревании на фоне введения природных цеолитов / Н.Ф. Воробьева // Бюллетень СО РАМН. 2007. - №1 (123). - С. 76-79.

13. Выгодский, М.Я. Справочник по элементарной математике / М.Я. Выгодский. М.: АСТ: Астрель, 2006. - 509 с.

14. Гаркави, Л.Х. Адаптационные реакции и резистентность организма / Л.Х. Гаркави, Е.Б. Квакина, М.А. Уколова. — Ростов, на Дону: Изд-во Ростовского университета, 1990. — 224с. /

15. Гаркави, Л.Х. Активационные реакции и активационная терапия / Л.Х. Гаркави, Е.Б. Квакина, Т.С. Кузьменко. М.: ИМЕДИС, 1998. -565 с.

16. Геннис, Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции / Р. Геннис. М.: Мир, 1997. - 624с.

17. Горизонтов, П.Д. Стресс и система' крови- / П.Д. Горизонтов, О.И. Белоусова; М.И. Федотова. -М.: Медицина, 1983. -240с.

18. Горичева, В.Д. Функциональные свойства и реактивность лейкоцитов крови в условиях гипертермии: дис. . к.б.н. / В.Д. Горичева. -Ярославль: ЯГПУ им. К.Д. Ушинского, 2000. — 133 с.

19. Гусарова, Г.А., Экзоцитоз и транслокация- на клеточную поверхность белков теплового шока 70КДА в- популяциях лимфоидных клеток: дис. . к.б.н. /Г.А. Гусарова. Москва, 2003. — 121 с.

20. Дуглас, С.Д. Исследование фагоцитоза в клинической практике / С.Д. Дуглас, П.Г. Куи. М.: Медицина, 1983.-112с.

21. Евдонин, A.JI. Внеклеточный белок теплового шока 70 и его функции / A.JI. Евдонин, Н.Д. Медведева // Цитология. — 2009. — Том.51. — №2. — С.130-137.

22. Жаврид, Э.А. Гипертермия и гипергликемия в онкологии / Э.А. Жаврид, С.П. Осинский, С.З. Фрадкин. — Киев: Наукова думка, 1997. 256 с.

23. Зимин, Ю.И. Угнетение нестимулированными лимфоцитами спонтанной миграции лейкоцитов под агаром / Ю.И. Зимин, А.П. Редькин // Иммунология. 1987. - №1. - С. 71-73.

24. Иванов, К.П. Роль лейкоцитов в динамике микроциркуляции в норме и при патологии / К.П. Иванов, H.H. Мельникова // Гематология и трансфузиология. 2004. - №1. - С. 3-13.

25. Иванов, К.П. Физиология терморегуляции: руководство по физиологии / К.П. Иванов, О.П. Минут-Сорохтина, Е.В. Майстрах и др. Л.: Наука, 1984.-470 с.

26. Игнатов, П.Е. Иммунитет и инфекция / П.Е. Игнатов. М.: Время, 2002. -352с.

27. Каппуччинелли, П. Подвижность живых клеток / П. Каппуччинелли. — М.: Мир, 1982. 124с.

28. Киншт, Д.Н. Общая управляемая гипертермия: теория, практика, моделирование процессов / Д.Н. Киншт, Н.В: Киншт. Владивосток: Дальнаука, 2006. - 194 с.

29. Козинец, Г.И. Кровь и инфекция* / Г.И. Козинец, В.В. Высоцкий,

30. B.М. Погорелов, A.A. Еровиченков, В.А. Малов. — М.: Триада-фарм, 2001.-456 с.

31. Козлов, Н.Б. Гипертермия: биохимические основы патогенеза, профилактики, лечение / Н.Б. Козлов. — Воронеж: Изд-во Воронежского государственного университета, 1990. — 104 с.

32. Кузьмичева JI.B. Морфологические и функциональные изменения лимфоцитов в процессе краткосрочной адаптации: дис. . д.б.н. / JI.B. Кузьмичева. — Саранск, 2005. 278 с.

33. Кулаева, О.Н. Белки теплового шока и устойчивость растений к стрессу / О.Н. Кулаева // Соросовский образовательный журнал. — 1997. — №2. —1. C. 5-13.

34. Курпешев, O.K. Экспериментальные основы применения гипертермии в онкологии / O.K. Курпешев, Т.В. Лебедева, П.В. Светицкий, Ю.С. Мардынский, H.A. Чушкин. Ростов-на-Дону: Изд-во «НОК», 2005.- 164 с.

35. Линг, Г. Физическая теория живой клетки: незамеченная революция / Г. Линг. СПб.: Наука, 2008. - 376 с.

36. Мацнер, Я. Исследование функций нейтрофилов в клиническоймедицине. I. Миграция нейтрофилов / Я. Мацнер // Гематология итрансфузиология. 1993. - №8. - С. 42-45.

37. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1983. - 256 с.

38. Медико-биологические аспекты действия на организм высокой внешней температуры. Сборник научных трудов / Под ред. Н.Б. Козлова. -Смоленск: СГМИ, 1989. 100 с.

39. Медицинские лабораторные технологии / Под ред. Карпищенко А.И. — СПб.: Интермидика, 2002. 408 с.

40. Мельник, Б.Е. Медико-биологические формы стресса / Б.Е. Мельник, М.С. Кахана. Кишинев: «Штиинца», 1981. - 176 с.

41. Модуль обработки изображений: Справочное руководство. — М., Зеленоград: ЗАО «Нанотехнология-МДТ», 2006; Электронный ресурс: www.ntmdt.comf

42. Новосёлов, С.С. ШаперонывреакцииклетокК562 натепловой стресс: дис.к.б.н. / С.С. Новосёлов. Санкт-Петербург, 2004; - 100'с.

43. Орлов, С.Н. Механизмы активации транспорта; ионов при* изменении объёма клетки / С.Н. Орлов, Т.Г. Гурло // Цитология. 1991. - Т.ЗЗ. -№ 11.-С. 101-110.

44. Пат: №' 2143693 (РФ) Способ определения' фагоцитарной активности лейкоцитов / Коган А.Х., .Стремоухов A.A., Болевич С., Гадаев И.Ю., Лаптева О.Н. 27.12.1999. — Режим: доступа: http://ru-patentinfo/2Г/40-44/21 43 693 ;htmli, .

45. Пат.: № 2145084' (РФ) Способ определения адгезивности клеток, периферической крови / Школовой С.В:, Школовой В.В. 27.01.2000. -Режим доступа: http://ru-patent.info/21/45-49/2145084.html.

46. Перцов, С.С. Влияние мелатонина на состояние тимуса, надпочечников и селезенки у крыс при острой стрессорной нагрузке / С.С. Перцов // Бюллетень,экспериментальной биологии шмедицины. — 2006. — Т.Г41. -№3. С. 263-266. •

47. Петри, A.i Наглядная статистика в медицине / А. Петри, К. Сэбин. М.: Издательский дом ГЭОТАР - МЕД, 2003. - 143 с.48; Пигаревский, В:Е. Зернистые лейкоциты и их свойства / В.Е. Пигаревский. -М.: Медицина, 1978. 128 с.

48. Пшенникова, M.F. Синтез белков теплового шока (HSP70) в лейкоцитах крови как показатель устойчивости к стрессорным повреждениям /

49. М.Г. Пшенникова, О.М. Зеленина, C.B. Круглое, Д.А. Покидышев, М.В. Шимкович, И.Ю. Малышев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2006. - Т. 142. - №12. - С. 614-617.

50. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. М.: МедиаСфера, 2002. - 312 с.

51. Редчиц, Е.Г. Реологические свойства, лейкоцитов. и их участие в микроциркуляции крови / Е.Г. Редчиц, A.C. Парфенов // Гематология и трансфузиология. 1989. - №12. - С. 40-45:

52. Рокицкий, П.Ф. Биологическая, статистика / П.Ф. Рокицкий. — Минск: «Вышэйш: школа», 1973. — 320 с.

53. Рябов Г.А. Синдромы- критических состояний / Г.А.Рябов: М.: Медицина, 1994. -368 с.

54. Свешников, П.Г. Роль белков теплового шока вг развитии реакций врожденного- иммунитета / П.Г.Свешников, В.В. Малайцев, В.И'. Киселев // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2007. №5. - С. 97-106.

55. Селье, Г. Отрессбез дистресса / Г. Селье. — М:: Прогресс, 1979. 123 с.

56. Смирнова, Е.А. Перестройка тубулинового и- виментинового компонентов цитоскелета при действии гипотонии- на L-клетки / Е.А. Смирнова*// Цитология и генетика. — 1988. — Т.22'. — №К — С. 32-35.

57. Смирнова; Е.А. Устойчивость разных типов клеток к гипотонии / Е.А. Смирнова; H.H. Казачкина, В .И: Гребенщикова; Ю.С. Ченцов // Цитология. 1987. - Т.29. - №Г. - С. 47-53.

58. Сувернев, А'.В. Пути практического использования интенсивного теплолечения (Второе сообщение) / A.B. Сувернев, Г.В. Иванов, И.В. Василевич, В.Н. Гальченко, Р.П. Алейников, С.Ю. Новожилов. -Новосибирск: Академическое изд-во «Гео», 2009. 109 с.

59. Талаева, Т.В. Механизмы взаимодействия клеток крови и сосудистой стенки в реализации воспалительного и иммунного ответов /

60. T.B. Талаева // Украшський ревматолопчний журнал. — 2001. № 3-4 (56). - С.45-52.

61. Тарасенко, Т.Н. Анализ роли белков теплового шока 70 КДА в популяции Т-лимфоцитов: дис. . к.м.н. / Т.Н. Тарасенко. Москва, 2003.-112 с.

62. Учение о растворах. Протолитические и гетерогенные равновесия (учебно-методическое пособие) / Под ред. профессора Т.Н. Литвиновой. Краснодар: ГОУ ВПО «КГМУ», 2009. - 162 с.

63. Фёдорова, М.З. Функциональные свойства и реактивность лейкоцитов крови при измененных состояниях организма, вызванных факторами различной природы: Дис. . д-ра биол. наук / М.З. Фёдорова. — Ярославль, 2002 293 с.

64. Фёдорова, М.З. Метод комплексного исследования геометрии, площади поверхности, резервных возможностей мембраны и осморегуляции лейкоцитов крови / М.З. Федорова, В.Н. Левин // Клиническая лабораторная диагностика. 1997. - №11. - С. 44-46.

65. Фёдорова, М.З. Реактивность лейкоцитов крови при различных функциональных нарушениях / М.З. Фёдорова. Ярославль: Изд-во ЯГПУ, 2001.-68 с.

66. Фёдорова, М.З. Функциональная активность и механические свойства лейкоцитов крови крыс при внешней тепловой нагрузке / М.З. Федорова, В.Н. Левин, В.Д. Горичева // Российский физиологический журнал им. И.С. Сеченова. 2000. - №12. - С. 1624-1629.

67. Физиология- адаптационных процессов / Под ред. Ф.З. Меерсон. — М.: Наука. 1986. - 635 с.

68. Физиология терморегуляции: руководство по физиологии / К.П. Иванов,

69. О.П. Минут-Сорохтина, А.С. Барер, И:С. Кандрор, ,В.А. Константинов, Ю.В. Лупандин, Е.В. Майстрах, А.Д. Слоним, Ф.Ф. Султанов, В1В. Хаскин, Л.К. Чередниченко, М.А. Якименко. Л.: Наука, 1984. -470 с.

70. Экологическая физиология человека. Адаптация человека к экстремальным условиям среды / Под ред. О.Г. Газенко, А.Г. Кузнецова. М.: Наука, 1979. - 704 с.

71. Электронный ресурс: http://www.rmi.cz/editor/image/ produktysoubory/SPM%20in%20general.pdf

72. Электронный ресурс: icj.ru/2008-01-09.html.

73. Электронный ресурс: http ://www.ntmdt.ru/spm-principles/view/semicontact-mode.

74. Aderem, A. Mechanisms-of phagocytosis in macrophages / A. Aderem, D.M. Underhill // Annual Review of Immunology. 1999. - Vol.17. - P.593-623.

75. Aderem, A. Phagocytosis and the inflammatory response / A. Aderem // The journal of infectious deseases. 2003. - Vol.187. - Suppl. 2. - P. 340-345.

76. Adragna, N.G. Regulation of K-Cl cotransport: from function to genes / N.C. Adragna, M.D. Fulvio, P.K. Lauf // Journal of membrane biology. -2004. Vol.201. - P.109-137.

77. A1 Habori, M. In vitro effect of fenugreek extracts on intestinal sodium-dependent glucose uptake and hepatic glycogen phosphorylase A /

78. M. A1 Habori, A. Raman, M.J. Lawrence, P. Skett // Int J Exp Diabetes Res. -2001.- Vol.2. -P.91-99.

79. Allen; L.A. Mechanisms of phagocytosis/ L.A. Allen, A. Aderem// Gurr. Opin. Immunol. 1996: - Vol.8. - Issue 1. - P.36-40.

80. Arancia, G. Effect of hyperthermia on the plasma membrane structure of Chinese hamster V-79* fibroblasts: a quantitative freeze-fracture study/ G. Arancia, W. Malorni, G. Mariutti, P. Trovalusci // Radiation research. -1986.-Vol. 106;-Issue l.-P:47-55.

81. Barbee, K.A. Distribution'of shear stress on the surface of aligned and non-aligned endothelial monolayers / K. A. Barbee, T. Mundel, R. Lai, P.F. Davies // Adv. Bioeng. 1995. - Vol.28. -P.349-350.

82. Barbee, K.A. Shear stress-induced reorganizationof the surface topography of living endothelial cells imaged by atomic force microscopy/ K.A. Barbee, P.F. Davies, R. Lai // Circ. Res. 1994. - Vol.74. -P.l63-171.

83. Beck, F.X. Cellular response to osmotic stress in the renal medulla/ F.X. Beck, A. Burger-Kentischer, E. Miiller // Pflugers Archiv European journal of physiology. 1998. - Vol.436. -P.814-827.

84. Beck, S.C. Stabilization of protein synthesis in thermotolerant cells during heat shock / S.C. Beck, A. De Maio // The Journal of Biological Chemistry. -1994. Vol.269. - No.34. - P.21803-21811.

85. Beckmann, M. Atomic force microscopy 'of peritoneal macrophages after particle phagocytosis/ M. Beckmann, H.-A. Kolb, F. Lang// Membrane biology. 1994. - Vol.140. -P.197-204.

86. Ben-Sasson, S. Osmotic behavior of normal and leukemic lymphocytes / S. Ben-Sasson, R. Shaviv, Z. Bentwich, S. Slavin, F. Doljanski // Blood. — 1975. Vol.46. - P.891-899.

87. Blaustein, M.P. Cellular physiology / M.P. Blaustein, J.P.Y. Kao, D.R. Matteson. — Printed in United States of America: Elsevier, Inc. The Mosby Physiology Monograph Series, 2004. 319 p.

88. Borgnia, M. Cellular and1 molecular biology of the aquaporin water channels/ M. Borgnia, S. Nielsen, A. Engel, P.' Agre // Annu. Rev. Biochem. — 1999. -Vol.68. -P.425-458.

89. Bouchama, A. Heat stroke / A. Bouchama, J.P. Knochel // The New England journal'of medicine. -2002. Vol.346. -No.25. -P.1978-1988.

90. Bowler, K. Heat death- and cellular heat injury / K. Bowler // Journal of thermal biology. 1981. - Vol.6. - Issue 4. -P.171-178.

91. Brenner, I. Stress hormones and the immunological responses to heat and exercise /' I. Brenner, P.N. Shek, J. Zamechik, RJ; Shephard // Int J Sports Med. 1998. - Vol. 19(2). — P.130-143.

92. Bretscher, A. Microfilament structure and function in the cortical skeleton / A. Brescher // Annu. Rev. Cell. Biol. 1991. - Vol.7. - P.337-374.

93. Brown, M.J. Rigidity of circulating lymphocytes is primarily conferred-by vimentin intermediate filaments / M.J. Brown, J.A. Hallam, E. Colucci-Guyon, S. Shaw // The Journal of Immunology. 2001. - Vol.166. - P.6640-6646.

94. Carton, I. Hypotonicity induces membrane protrusions and actin remodeling via activation of small GTPases Rac and Cdc42 in Rat-1 fibroblasts / I. Carton, D. Hermans, J. Eggermont // Am J Physiol Cell Physiol. 2003. -Vol.285. -P.C935-C944.

95. Chan, C.K. Volume regulation in leukocytes: Requirement for an intact cytoskeleton / C.K. Chan, G.P. Downey, S. Grinstein, A. Sue-A-Quan, B. Czaban // Journal of cellular physiology. 1995. - Vol.163. - P. 96-104.

96. Charkoudian, N. Skin blood flow in adult human thermoregulation: how it works, when it does not, and why / N. Charkoudian // Mayo Clinic Proceedings. Mayo Clinic. 2003. - Vol. 78, No. 5. - P.603-612.

97. Coakley, W.T. Hyperthermia effects on the cytoskeleton and on« cell morphology / W.T. Coakley // Symposia of the society for experimental biology. 1987. - Vol. 41. -P.187-211.

98. Coris, E.E. Heat illness in athletes: the dangerous combination of heat, humidity and exercise / E.E. Coris, A.M. Ramirez, D.J: Van Durme // Sports Medicine. 2004. - Vol. 34. - P.9-16.

99. Coss, R.A. Effects of hyperthermia om dividing Chinese hamster ovary cells and' on microtubules in vitro / R.A. Coss, W.C. Dewey, J.R. Bamburg // Cancer Res. 1982. - Vol.42. -No.3. -P.1059-1071.

100. Coughlin, M.F. Pseudopod projection and cell spreading of passive leukocytes in response to fluid shear stress / M.F. Coughlin, G.W. Schmid-Schonbein // Biophysical journal. 2004. - Vol. 87. - No. 3. - P. 2035-2042.

101. Craig, E. Heat shock proteins: molecular chaperones of protein biogenesis / E.Craig, B.D. Gambill, R. J. Nelson // Microbiological Reviews. 1993. -Vol.57. — No.2. — P.402-414.

102. Critchley, D.R. Integrin-mediated cell adhesion: the cytoskeletal connection / D.R. Critchley, M.R. Holt, S.T. Bany, H. Priddle, L. Hemmings, J. Norman // Biochem. Soc. Symp. 1999. - Vol.65. - P.79-99.

103. Dai, J. Membrane tension in swelling and shrinking molluscan neurons / J. Dai, M.P. Sheetz, X. Wan, C.E. Morris // The journal of neuroscience. -1998. Vol.18. - No. 17. - P.6681-6692.

104. Dallman, M.F. Stress, feedback and facilitation in the hypothalamus pituitary adrenal axis / M.F. Dallman, S.F. Akana, K.A. Scribner, M.J. Bradbaury, C.D. Walker, A.M. Strack, C.S. Casio // J. Neuroendocrinol. 1992. - Vol.4. -P.517-526.

105. Davis, C.E. A novel method for measuring dynamic changes in cell volume / C.E. Davis, JJ. Rychak, B. Hosticka, S.C. Davis, J. Edward John III, A.L. Tucker, P.M. Norris, J.R. Moorman // Journal of Applied Physiology.2004. Vol.96. - P.1886-1893.

106. Deng, Z. Applications of atomic force microscopy in biophysical chemistry of cells / Z. Deng, V. Lulevich, F.T. Liu, G.Y. Liu // The journal of physical chemistry: B. 2010. - Vol.114. - Noil8. - P.5971-5982.

107. Desjardins, M. Molecular characterization of phagosomes / M. Desjardins, J.E. Celis, G. van Meer, H. Dieplinger, A. Jahraus, G. Griffiths, L.A. Huber // The journal of biological chemistry. 1994. - Vol.269. - No.51. - P.32194-322001

108. Dynlacht, J.R. Heat-induced changes in. the membrane fluidity of Chinese hamster ovary cells measured by flow cytometry / J.R. Dynlacht, M.H. Fox // Radiat Res. 1992. - Vol. 130. - No. 1. - P.48-54.

109. Evans, E. Nano-to-microscale mechanical switches and fuses mediate adhesive contacts between leukocytes and the endothelium / E. Evans, V. Heinrich, A. Leung // Journal of chemical information and modeling.2005. Vol. 45. - P. 1482-1490.

110. Evans, S.S. Fever-range hyperthermia dynamically regulates lymphocyte delivery to high endothelial venules/ S.S. Evans, W.-C. Wang, M.D. Bain, R. Burd, J.R. Ostberg, E.A. Repasky// Blood. 2001. - Vol.97. - P.2727-2733.

111. Feder M.E. Heat-shock proteins, molecular chaperones, and the stress response: evolutionary and ecological physiology / M.E. Feder, G.E. Hofmann // Annual review of physiology. 1999. - Vol.61. - P.243-282.

112. Fenteany, G. Cytoskeletal remodeling in leukocyte function / G. Fenteany, M. Glogauer // Current opinion in hematology. 2004. - Vol.11. - P. 15-24.

113. Fiorentini, G. Hyperthermia today: electric energy, a new opportunity in cancer treatment / G. Fiorentini, A. Szasz // J. Cancer. Res. Ther. 2006. -Vol.2.-Issue 2. -P.41-46.

114. Foskett, J.K. Ionic mechanisms of cell volume regulation of leukocytes / J.K. Foskett, S. Grinstein // Annual review of physiology. 1990. - Vol. 52. -P. 399-414.

115. Gaehtgens, P. Adhesion molecules: the path to a new understanding of acute inflammation'/ P. Gaehtgens, B. Walzog // News in physiological sciences. — 20001-Vol.15.-P. 107-113.

116. Garcia-Perez, A. Renal medullary organic osmolytes / A. Garcia-Perez, M.B. Burg // Physiol. Rev. 1991. - Vol.71. - P. 1-45.

117. Gautier, H. Body temperature regulation in the rat / H. Gautier // Journal ofthermal biology. 2000. - Vol.25. - Issue 4. - P.273-279. ,i

118. Goetz, D J. Leukocyte adhesion: an exquisite balance of hydrodinamic and molecular forces / D.J. Goetz, D.F.J. Tees // News of physiology sciences. -2003.-Vol.18.-P. 186-190.

119. Goldsbury, C.S. Introduction to atomic force microscopy (AFM) in biology / C.S. Goldsbury, S. Scheuring, L. Kreplak // Current Protocols in Protein Science. 2002. - Unit 17.7

120. Gordon, C J. Thermal biology of the laboratory rat / C.J. Gordon // Physiology and behavior. 1990. - Vol.47. -P.963-991.

121. Grahn, D. The physiology of mammalian temperature homeostasis / D. Grahn, H.C. Heller // TraumaCare. The Official Publications of ITACCS. International trauma-care. 2004. - Vol. 14. - No.2. - P.52-61.

122. Greenberg, S. Signal transduction of phagocytosis / S. Greenberg // Trends in cell biology. 1995. - Vol.5. - Issue 3. -P.93-99.

123. Groulx, N. Membrane reserves and hypotonic cell swelling / N. Groulx, F. Boudreault, S.N. Orlov, R. Giygorczyk // J. Membrane Biol. 2006. -Vol.214.-P.43-56. "

124. Giiler, A.D. Heat-evoked activation of the ion channel; TRPV4 / A.D. Guler, H. Lee, T. Iida, I. Shimizu, M. Tominaga, M. Caterina // The journal of neuroscience. 2002. - Vol. 22. - Issue 15. - P.6408-6414.

125. Hanson, D.F. Fever and the immune response. The effect of physiological temperatures on primary murine splenic T-cell responses in vitro/ D.F. Hanson // The journal of immunology. 1993. - Vol.151. - Issue 1. -P.436-448.

126. Heat shock proteins and the cellular stress response: Reference guide // Режим доступа: http://www.assaydesigns.com/corp/images/literature/flier-heat-shock.pdf

127. Herant, M. Mechanics of neutrophil phagocytosis: behavior, of the cortical tension / M. Herant, V. Heinrich, M. Dembo // Journal' of cell science. — 2005. -Vol.118.-P.1789-1797.

128. Hidvegi, E.J. Effect of altered membrane lipid composition and procaine on hyperthermic killing of ascites tumor cells / E.J. Hidvegi, M.B. Yatvin, W.H. Dennis, E. Hidvegi // Oncology. 1980. - Vol. 37, Issue 5. - P.360-363. >

129. Hoffman, E.K. Amino acid transport and cell volume regulation in Ehrlich ascites tumor cells / E.K. Hoffman, I.H. Lambert // J. Physiol. 1983. — Vol.338.-P.613-625.

130. Hoffman, E.K. Physiology of cell' volume regulation in vertebrates / E.K. Hoffman, I.H. Lambert, S.F. Pedersen // Physiol. Rev. 2009. - Vol.89. -P. 193-277.

131. Hoffman, E.K. The role of volume-sensitive ion transport systems in regulation! of epithelial »transport / E.K. Hoffman,»T. Schettino, W.S. Marshall // Comparative biochemistry and' physiology, Part A. 2007. - Vol.148: -P.29-43.

132. Hoffstein, S.T. Fibronectin is a< component of the surface coat of human neutrophils / S.T. Hoffstein, G. Weissmann, E. Pearlstein // Journal of cell science. 1981. - Vol.50. - P. 315-327.

133. Hoh, J.H. Surface morphology and mechanical properties of MDCK monolayers by atomic force microscopy / J.H. Hoh, C.A. Schoenenberger // J. Cell Sci. 1994. - Vol.107. -Р.И05-1114.

134. Hôrber, J.K. Scanning probe evolution in biology / J.K. Hôrber, M.J. Miles // Science. -2003. Vol.302. -No.5647. -P.1002-1005.I

135. J. van der Zee Heating the patient: a promising approach? / J. van der Zee // Annals of oncology. 2002. - Vol.13. - P. 1173-1184.

136. Janmey, P.A. Biophysical properties of lipids and dynamic membranes/ P.A. Janmey, P.K.J. Kinnunen // Trends in cell biology. 2006. - Vol. 16. -No. 10 — P.538-546.

137. Javid, B. Structure and function: heat shock proteins and adaptive immunity / B. Javid, P.A. MacAry, P.J: Lehner // The Journal of Immunology. 2007. -Vol.179.-P.2035-2040.

138. Karjalainen, J. Fever and cardiac rhythm / J. Karjalainen, M. Viitasalo // Arch Intern Med. 1986. - Vol. 146. - P. 1169-1171.

139. Kasas, S. Observation of living cells using the atomic force microscope / S. Kasas, V. Gotzos, M.R. Celio // Biophys. J. 1993. - Vol.64. - P.539-544.

140. Katschinski, D.M. On heat and cells and proteins / D.M Katschinski // News of physiological sciences. 2004. - Vol.19. - P. 11-15.

141. Kelley, K.W. Stress and immune function: a bibliographic review / K.W. Kelley // Annales de Recherces Vétérinaires. Annals of Veterinary Research. 1980. - Vol. 11, No. 4. - P.445-478.

142. King, L.S. Pathpphysiology of the aquaporin water channels / L.S.King, P. Agre // Annu. Rev. Physiol. 1996. - Vol.58. - P.619-648.

143. Kluger, M.J. Stress-induced rise of body temperature in rats is the same in warm and cool environments / M J. Kluger, N.C. Long, A.J. Vander // Physiology and behavior. 1990. - Vol.47. -No.4. - P. 773-775.

144. Koko, V. Effect of acute heat stress on rat adrenal glands: a morphological and stereological study / V. Koko, J. Djordjevias, G. Cvijise, V. Davidovias // The Journal of Experimental Biology. 2004. - Vol.207. - P.4225-4230.

145. Krasik, E.F. Adhesive dynamics simulation of neutrophil arrest with deterministic activation / E.F. Krasik, K.L. Yee, D.A. Hammer // Biophysical journal. 2006. - Vol.31. - No. 4. - P. 1145-1155.

146. Kregel, K.C. Molecular biology of thermoregulation. Invited review: Heat shock proteins: modifying factors in physiological stress responses and acquired thermotolerance / K.C. Kregel // J. Appl. Physiol. 2002. - Vol.92. -P.2177-2186.

147. Kwiatkowska, K. Signaling pathways in phagocytosis / K. Kwiatkowska, A. Sobota // Bioessays. 1999. - Vol.2 K - Issue 5. - P.422-431.

148. Kwon, H.M. Cell volume regulated transporters of compatible osmolytes / H.M. Kwon, J.S. Handler // Current opinion in cellular biology. 1995. -Vol.7. -P.465-471.

149. Lambert, I.H. Regulattion of the cellular content of the organic osmolyte taurine in mammalian cells / I.H. Lambert // Neurochem. Res. 2004. — Vol.29.-P.27-63.

150. Lang, F. Functional' significance of cell volume regulatory mechanisms /

151. F.Lang, G.L.Busch, M. Ritter, H. Volkl, S. Waldegger, E. Gulbins, D. Haussinger // Physiological reviews. 1998. - Vol.78. - No.l. - P.247-307. b.

152. Lang, F. Mechanisms and significance of cell volume regulation / F. Lang // Journal of the American college of nutrition. — 2007. — Vol.26. No.5. — P.613S-623S.

153. Lang,F. The diversity of volume regulatory mechanisms / F.Lang,

154. G.L. Busch, H. Volkl // Cell Physiol Biochem. 1998. - Vol.8. - P. 1-45.

155. Laszlo, A. The effects of hyperthermia on mammalian cell structure and function / A. Laszlo // Cell. Prolif. 1992. - Vol.25. - P.59-87.

156. Leon, L.R. Heat stress induces a biphasic thermoregulatory response in mice / L.R. Leon, D.A. DuBose, C.W. Mason // Am. J. Physiol. Regu. Integr. Gomp. Physiol. 2005. - Vol.288. - P.R197-R204.

157. Lepock, J.R. How do cells respond to their thermal environment? / J.R. Lepock // International journal of hyperthermia. — 2005. Vol. 21, Issue 8. -P:681-687.

158. Li, G.C. Heat shock proteins, thermotolerance, and their relevance to clinical hyperthermia / G.C. Li, N.F. Mivechi, G. Weitzel // Int J Hyperthermia. — 1995. Vol. 11.- No.4. - P.459-488.

159. Livingstone, C.J. Lipid dynamics and lipid-protein interactions in rat hepatocyte plasma membranes / C.J. Livingstone, D: Schachter // The journal of biological chemistry. 1980. - Vol. 255, No.22. -P.10902-10908.

160. Luby-Phelps, K. Physical properties of cytoplasm / K. Luby-Phelps // Curr. Opin. Cell. Biol. 1994. - Vol.6. - P.3-9.

161. Ma, T. Aquaporin water channels in gastrointestinal* physiology / T. Ma, A.S. Verkman // Journal of physiology. 1999. - Vol.517.2. -P.317-326.

162. Macario, A.J.L. Heat shock proteins and molecular chaperones: implications for- pathogenesis, diagnostics, and therapeutics / A.J:L. Macario // International Journal of Clinical and Laboratory Research. — 1995. — Vol.25. -No.2. P.59-70.

163. Machesky, L.M. Signaling to actin dynamics / L.M. Machesky, R.H.-Insall// The journal of cell biology. 1999. - Vol.146. - No.2. -P.267-272.

164. Makarevich, A.V. The effect of hyperthermia in vitro on vitality of rabbit preimplantation embryos / A.V. Makarevich, L. Olexikova, P. Chrenek, E. Kubovicova, K. Freharova, J. Pivko // Physiol. Res. 2007. - Vol.56. -P.789-796.

165. Mandell, G.L. Effect of temperature on phagocytosis by human polymorphonuclear neutrophils / G.L. Mandell // Infection and Immunity. — 1975. Vol.12. —No.l. — P. 221-223.

166. Marinelli, R.A. Aquaporin water channels in liver: their significance in bile formation / R.A. Marinelli, N.F. LaRusso // Hepatology. 1997. - Vol.26. -No.5. — P.1081-1084.

167. Matveev, V.V. "Fathers" and "sons" of theories in cell physiology: the membrane theory / V.V. Matveev, D.fN. Wheatley // Cellular and Molecular Biology. 2005. - Vol.51. - P.797-801.

168. Maunsbach, A.B: Aquaporin-1 water channel expression in human kidney /

169. Mc Manus, M.L. Cell volume regulation'in normal' and pathological state / M.L. Mc Manus // The New England-Journal-.of Medicine. 1995. - Vol.9! -P. 1260.

170. McManus, M.L. Regulation of cell volume in health and disease/ M.L. McManus, K.B. Churchwell, K. Strange // The new England journal* of medicine. 1995. - Vol.333. -No.19. -P.1260-1266.

171. Mege, J.-L. Inhibition of granulocyte adhesion by pentoxifilline / J.-L. Mege,

172. B. Eon, P. Saux, C. Martin, M. Lenoble, C. Foa, C. Capo, P. Bongrand // Pentoxifilline and analogues: Effects of leukocyte function. Proceedings of the workshop. Saint Paul de-Vence, France. — 1989. - P. 17-23.

173. Mongin, A.A. Mechanisms of cell volume regulation and possible nature of the cell volume sensor / A.A. Mongin, S.N. Orlov // Pathophysiology. 2001. - Vol.8.-P.77-88.

174. Moran, D.S. Heat intolerance: does gene transcription contribute? / D.S: Moran, L. Eli-Berchoer, Y. Heled, L. Mendel, M. Schocina, M. Horowitz // J. Appl. Physiol. 2006. - Vol.100. - P.1370-1376.

175. Moseley, P. Stress proteins and the immune response / P. Moseley // Immunopharmacology. 2000. - Vol.48. - Issue 3. - P.299-302.'

176. Moseley, P.L. Heat shock proteins and heat adaptation of the whole organism / P.L. Moseley // Journal of applied physiology. — 1997. Vol.83. - Issue 5. -P. 1413-1417.

177. Muys, J.J. Cellular transfer and AFM imaging of cancer cells using Bioimprint / J.J. Muys, M.M. Alkaisi, D.O.S. Melville, J. Nagase, P: Sykes, G.M. Parguez, J.J. Evans // Journal of nanobiotechnology. — 2006. — Vol.4. — No.l.-P. 1-10.

178. Nakayama, T. Thermally induced salivary secretion in anesthetized rats / T. Nakayama, K. Kanosue, H. Tanaka, T. Kaminaga // Pfltigers Archiv: European journal of physiology. 1986. - Vol. 406, No. 4. -P351-355.

179. Nishida, T. Correlation between cell killing effect and cell membrane potential after heat treatment: analysis using fluorescent dye and- flow cytometry / T. Nishida, K. Akagi, Y. Tanaka // Int. J. Hyperthermia. 1997. -Vol. 13(2). -P.227-234.

180. Oberleithner, H. Living renal epithelial cells imaged by atomic force microscopy / H. Oberleithner, A. Schwab, W. Wang, G. Giebisch, F. Hume, J. Geibel // Nephron. 1994. - Vol.66. - P.8-13.

181. Oehler, R. Cell type-specific variations in the induction of hsp70 in human leukocytes by feverlike whole body hyperthermia / R. Oehler, E. Pusch, M. Zellner, P. Dungel, N. Hergovics, M. Homoncik, M.M. Eliasen,

182. Ostberg, J.R. Emerging evidence indicates that physiologically relevant thermal stress regulates dendritic cell function / J.R. Ostberg, E.A. Repasky // Cancer Immunol. Immunother. 2006. - Vol.55. - No.3. - P.292-298.

183. Osterloh, A. Heat- shock proteins: linking danger and pathogen recognition / A. Osterloh, M. Breloer // Med. Microbiol. Immunol. 2008. - Vol.197. -P.l-8.

184. Park, H.G. Cellular* responses to mild heat stress / H.G.Park, S.I. Han, S.Y. Oh, H.S. Kang // Cell. Mol. Life Sci. 2005. - Vol.62. - P. 10-23.

185. Pedersen, S.F. The cytoskeleton and cell volume regulation / S.F. Pedersen, E.K. Hoffman, J.W. Mills // Comparative Biochemistry and Physiology Part A: Molecular & Integrative Physiology. - 2001. - Vol.130. - Issue 3. - P.385-399.

186. Raucher, D. Characteristics of a membrane reservoir buffering membrane tension / D. Raucher, M.P. Sheetz // Biophysical Journal. 1999. - Vol.77. -P. 1992-2002.

187. Rivero, F. The role of cortical cytoskeleton: F-actin crosslinking properties protect against osmotic stress, ensure cell size, cell shape and motility, and contribute to phagocytosis and development/ F. Rivero, B. Koppel,

188. B. Peracino, S. Bozzaro, F. Siegert, C.J. Weijer, M. Schleicher, R. Albrecht, A. A. Noegel// Journal of Cell Science. 1996. - Vol.109. - P.2679-2691.

189. Roti Roti, J.L. Cellular responses to hyperthermia (40-46°C): Cell killing and molecular events / J.L. Roti Roti // International Journal of Hyperthermia. — 2008. Vol.24. - No. 1. -P.3-15.

190. Sakurada, S. Relationship between body core and peripheral temperatures at the onset of thermoregulatory responses in rats / S. Sakurada, O. Shido, K. Fujikake, T. Nagasaka // The Japanese Journal of Physiology. 1993. -Vol. 43, No. 5. — P.659-667.

191. Samstag, Y. Actin- cytoskeletal dynamics in T lymphocyte activation and migration / Y. Samstag, S.M. Eibert, M. Klemke, G.H. Wabnitz // Journal of leukocyte biology. 2003. - Vol. 73. - P.' 30-48.

192. Sarkadi, B. Ionic events during the volume response of human peripheral blood lymphocytes to, hypotonic media / B. Sarkadi, Esther Mack, A. Rothsthein // J Gen Physiol. 1984. - Vol.83. - P.497-512.

193. Schaus, S.S. Cell viability and probe-cell membrane interactions of XR1 glial cells imaged by atomic force microscopy / S.S. Schaus, E.R.Henderson // Biophysical journal-. 1997. - Vol;73>. -P.1205-1214.

194. Schmid-Schonbein, G.W. Leukocyte biophysics. An invited review / G.W. Schmid-Schonbein // Cell Biochemistry and Biophysics. 1990. -Vol. 17. -No. 2. —P.107-135.

195. Schmitt, E. Intracellular and extracellular functions of heat shock proteins: repercussions in cancer therapy / E. Schmitt, M. Gehrmann, M. Brunei, G. Multhoff, C. Garrido // Journal of Leukocyte Biology. 2007. - Vol.81 (1): 15. — P.15-27.

196. Sengupta; K. Spreading of neutrophils: from activation to migration / K. Sengupta, H. Aranda-Espinosa, L. Smith, P. Janmey, D. Hammer // Biophysical journal. 2006. - Vol.96. - No. 12. - P. 4638-4648.

197. Shao, J.-Y. Effect of temperature on tether extraction, surface protrusion, and cortical tension of human neutrophils / Jl-Y. Shao; B. Liu; C.J. Goergen // Biophysical journal. 2007. - Vol. 93. - P: 2923-2933.

198. Sierra, J.M. Translational regulation of the heat shock response / J.M. Sierra, J.M. Zapata // Molecular biology reports. 1994. - Vol.19. - P.211-220.

199. Sonna, L.A. Molecular» biology of thermoregulation: Invited review: Effects of heat and cold stress on mammalian gene, expression»/ L.A. Sonna, J. Fujita, S.L. Gaffin, C.M. Lilly // J. Appl. Physiol. 2002. - Vol.92. - P.1725-1742.

200. Stossel, T.P. Nonmuscle actin binding proteins / T.P. Stossel, C. Chaponnier, R.M. Ezzell, J.H. Hartwig, P.A. Janmey, D.J. Kwiatkowski, S.E. Lind, D.B. Smith, F.S. Southwick, H.L. Yin, K.S. Zaner // Annu. Rev. Cell. Biol. -1985.-Vol.1.-P.353-402.

201. Strange, K. Cellular volume homeostasis / K. Strange // Adv Physiol Educ. -2004. Vol.28. - P.155-159.

202. Stuart, J. Blood rheology / J. Stuart, M.W. Kenny // J. Clin. Pathol. 1980. -Vol.33.-P.417-429.

203. Sukhorukov, V.L. Hypotonically induced changes in the plasma membrane of cultured mammalian cells / V.L. Sukhorukov, W.M. Arnold, U. Zimmermenn // J. Membr. Biol. 1993. - Vol.132. - P.27-40.

204. Sung, K.-L.P. Influence of physicochemical factors on rheology of human neutrophils / K.-L.P. Sung, G.W. Schmid-Schonbein, Rl Skalak,

205. G.B. Schuessler, S. Usami, S. Chien // Biophys. J. 1982. - Vol.39. - P.101-106.

206. Tarner, I.H. The effect of mild whole-body hyperthermia on systemic levels of TNF-alpha, IL-lbeta, and IL-6 in patients with ankylosing spondylitis,/ I.H. Tarner, U. Muller-Ladner, C. Uhlemann, U. Lange // Clin. Rheumatol: — 2009. Vol.28. - P.397-402.

207. Ting-Beall, H.P. Volume and osmotic properties of human neutrophils /

208. H.P. Ting-Beall, D. Needham, R.M. Hochmuth // Blood. 1993. - Vol. 81. -P.2774-2780.

209. Tomanek L. The heat-shock response: its variation, regulation and ecological importance in intertidal gastropods (genus Tegula) / L. Tomanek // Integ. And Сотр. Biol. 2002. - Vol.42. - P.797-807.

210. Tran-Son-Tay, R. Rheological modeling of leukocytes / R. Tran-Son-Tay, H.-C. Kan, H.S. Udaykumar, E. Damay, W. Shyy // Med. Biol. Eng. Comput. -1998. Vol.36. - P.246-250.

211. Ushiki, T. Atomic force microscopy in histology and cytology / T. Ushiki, J. Hitomi, S. Ogura, T. Umemoto, M. Shigeno // Archives of histology and cytology. 1996. - Vol.59. -No.5. -P.421-431.

212. Verkman, A.S. Water transport across mammalian cell membranes /

213. A.S. Verkman, A.N. Hoek, T. Ma, A. Frigeri, W.R. Skach, A. Mitra,

214. B.K. Tamarattoo, et al. // Am. J. Physiol. 1996. - Vol.270. - P.C10-C30.

215. Vestweber, D. Adhesion and signaling molecules controlling the transmigration of leukocytes through endothelium / D. Vestweber // Immunological reviews. 2007. - Vol.218. - P. 178-196.

216. Vicente-Manzanares, M. The leukocyte cytoskeleton' in cell migration^ and immune interactions/ M. Vicente-Manzanares, D. Sancho, M. Yanez-Mo, F. Sanchez-Madrid // International review of cytology. — 2002. Vol.216, No.233.-P. 89.

217. Wan, X. Responses of neurons to extreme osmotic* stress / X. Wan, J.A. Harris, C.E. Morris // J. Membr. Biol. 1995. - Vol. 145. - P.21 -31.

218. Wehner, F. Cell volume regulation: osmolytes, osmolyte* transport, and signal* transduction / Wehner F., Olsen H., Tinel H., Kinne-Saffran E., Kinne R.K.H: // Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. 2003. - Vol.148. - P.l-80.

219. Wehner,'F. Osmolyte and Na+ transport balances of rat hepatocytes as a function of hypertonic stress / F. Wehner, H. Tinel // Pflugers Arch — Eur. J. Physiol.- 2000. Vol.441. - P. 12-24.

220. Wilkinson, P.C. The locomotor capacity of human lymphocytes and its enhancement by cell growth / P.C. Wilkinson // Immunology. — 1986. -Vol.57.-P.281-289.

221. Wu, Y. Membrane surface nanostructures and adhesion property of T lymphocytes exploited by AFM / Y. Wu, H. Lu, J. Cai, X. He, Y. Hu, H. Zhao, X. Wang // Nanoscale Res Lett. 2009. - Vol.4. - P.942-947.

222. Yu, Y. Simultaneous tether extraction contributes to neutrophil rolling stabilization: a model study / Y. Yu, J.-Y. Shao // Biophysical journal! 2007. -Vol.92.-No.2.-P. 418-429.

223. Zou, Q. Control issues in high-speed AFM for biological applications: collagen imaging example / Q. Zou, K.K. Leang, E. Sadoun, M.J. Reed, S. Devasia // Asian journal of control. 2004. - Vol.6. -No.2. -P.164-178.

Информация о работе

Зубарева, Екатерина Владимировна
кандидата биологических наук
Белгород, 2011
ВАК 03.03.01

Диссертация

Функциональные и микрореологические свойства лейкоцитов при экзогенном перегревании в опытах in vivo и in vitro - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы