Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Функциональные характеристики тормозных постсинаптических токов нейронов поля CA1 в срезах гиппокампа

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Функциональные характеристики тормозных постсинаптических токов нейронов поля CA1 в срезах гиппокампа"

На правах рукописи

Кожемякин Максим Борисович

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ТОРМОЗНЫХ ПОСТСИНАПТИЧЕСКИХ ТОКОВ НЕЙРОНОВ ПОЛЯ CAI В СРЕЗАХ ГИППОКАМПА

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2005

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте мозга Российской Академии Медицинских Наук

Научный руководитель:

Член-корреспондент РАМН, профессор Владимир Георгиевич Скребицкий

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Ара Саакович Базян кандидат биологических наук Владимир Иванович Майоров

Ведущая организация:

Институт биофизики клетки РАН, г.Пущино

Защита состоится «^ » октября 2005г. в 15 часов 30 минут на заседании диссертационного совета Д 501.001.93 при Московском государственном университете им. М.В.Ломоносова по адресу. 119992, Москва, Ленинские горы, д.1, корп. 12, МГУ, Биологический факультет, ауд. М-1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ им .М.В .Ломоносова.

Автореферат разослан 2 сентября 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук

Б.А.Умарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Изучение синаптических механизмов тормозной передачи является одной из актуальных проблем современной нейрофизиологии. Накоплен большой материал, свидетельствующий о том, что торможение имеет специфику в разных отделах мозга, что определяет характерные черты участия различных мозговых структур в интегративной деятельности мозга в норме и патологии. Эта специфика определяется набором тормозных интернейронов и структурой и локализацией пре-и постсинаптических рецепторов. В гиппокампе, структуре, изучению которой посвящена наша работа, торможение принимает участие в формировании синаптической пластичности, лежащей в основе обучения и памяти. С другой стороны, нарушение баланса возбудительных и тормозных процессов в гиппокампе ведет к возникновению ряда тревожных состояний и к развитию эпилептических судорог.

Таким образом, актуальность работы обусловлена как стремлением к раскрытию фундаментальных механизмов высшей нервной деятельности, так и к анализу ряда патологических явлений. Для анализа последних в работе были использованы вещества, являющиеся анксиолитиками и антиконвульсантами (диазепам и зольпидем).

Работа проведена на переживающих срезах гиппокампа с использованием электрофизиологической регистрации ионных токов отдельных нейронов методом patch-clamp в конфигурации «целая клетка». Этот метод дает возможность анализировать синаптические токи, возникающие в клетках как спонтанно, так и при электрической стимуляции разных синаптических входов. Он открывает широкие возможности для изучения действия разных модуляторов тормозной синаптической передачи, включая вещества, используемые в клинической практике.

Используемые в данной работе методики, позволяют на основе анализа функциональных свойств ГАМКд ТПСТ делать качественные заключения о свойствах ГАМКд рецепторов на отдельном нейроне, с сохранением синаптических связей близких к естественным. Помимо этого, применение оригинального метода быстрой аппликации на срез, описанного в данной работе, позволяет избежать некоторых типичных артефактов в работах с пер

«дом jir

применение

СПе

методики регистрации токов низкоомными электродами в режиме

фиксации потенциала (пэтч-кламп в конфигурации целая клетка), позволяет регистрировать трансмембранные токи от одного нейрона с минимальными искажениями и таким образом является надежным инструментом для исследования функциональных свойств рецепторов. Такая методика позволяет свести к минимуму возможные расхождения между результатами, полученными в данной модели, in vitro, и свойствами рецепторов in vivo.

Работа посвящена изучению свойств ГАМКд ТПСТ пирамидных нейронов поля СЛ1 гиппокампа, возникающих как спонтанно за счет выделения медиатора из терминалей тормозных интернейронов так и вызванных стимуляцией разных синаптических входов. В работе поставлена проблема гетерогенности ГАМК-А рецепторов в пределах одного пирамидного нейрона. В основе ее может лежать различие в субъединичном составе рецепторов. С целью проверки этой возможности было использовано нескольких модуляторов активности ГАМКд рецепторов, обладающих селективностью к наличию в их составе определенных субъединиц, в том числе композиций субъединиц зависящих от возраста животного.

Цель работы

Целью данной работы являлось исследование ГАМКд ТПСТ нейронов поля CAI, возникающих при стимуляции разных синаптических входов. Была поставлена задача выяснить наличие функциональной гетерогенности в пределах одного нейрона. Для характеристики ГАМК-А рецепторов использовались вещества, селективно реагирующих на присутствие определенных субъединиц в рецепторе. Основные задачи исследования.

1) Используя метод фиксации потенциала клетки среза гиппокампа мозга крысы и систему быстрой аппликации веществ, исследовать функциональных

характеристики постсинаптических токов, вызываемых в нейронах поля CAI

i

стимуляцией разных синаптических входов.

2) Провести сравнительное исследование модуляции ТПСП веществами, которые избирательно взаимодействуют с ГАМКд рецепторами, имеющими различный субъединичный состав (хлорид лантана, зольпидем, диазепам). Выявить

особенности модуляции ТПСП этими препаратами и дать количественную оценку их эффектов.

3) Проанализировать полученные результаты о различии свойств нативных рецепторов в свете литературных данных по фармакологии рекомбинантных рецепторов. Сопоставить полученные результаты с литературными данными о распределении различных подтипов субъединиц ГАМКД рецепторов в гиппокампе мозга крысы с целью выявления наиболее вероятной субьединичной композиции этих рецепторов в исследованных нейронах . Научная новизна работы.

Методом фиксации потенциала нейрона в срезе гиппокампа проведено систематическое исследование функциональных свойств ГЛМКд-зависимых ТПС Г в поле CAI при стимуляции двух разных синаптических входов. Изучено действие на ТПСТ трех модуляторов ГАМКер! ической передачи: ионов хлорида лантана ( La1*), зольпидема и диазепама.

Впервые показано, что La3" увеличивает амплитуду ТПСТ, существенно не меняя их кинетические параметры. Впервые установлено, что La3'-зависимая потенциация имеет входоспецифический характер - она проявляется при стимуляции str. oriens и отсутствует при стимуляции str.radiatum. Это наблюдение дает основание предположить наличие на мембране нейрона ГАМК-А рецепторов с разными свойствами, что, возможно, определяется их разным субъединичным составом.

Впервые проведено сопоставление действия на ТПСТ ионов La''*, диазепама и золпидема при стимуляции разных синаптических входов. Выявлен ряд сходств и различий в характере влияния этих веществ на амплитуду и кинетические параметры ТПСТ.

Впервые показано, что La3+ модулирует амплитуду и частоту спайк-зависимых миниатюрных спонтанных потенциалов (мини-ТПСТ), что указывает на то, что в его эффектах присутствует пресинаптический компонент

Впервые показано, что характер влияние ионов La3+ на мини-ТПСТ зависит от возраста животного и различается в возрастных группах 14-17 и 18- 21 суток. Эти различия зависят, очевидно, от степени созревания тормозных связей в поле CAI гиппокампа.

Научно-практическая ценность.

Научно-практическая значимость работы определяется прежде всего тем, что в ней детально разработана тест-система, дающая возможность оценивать характер действия на отдельные нервные клетки различных фармакологических веществ, как широко используемых в медицине, так и проходящих преклинические испытания. Разработанная методика поочередной стимуляции разных синаптических входов к одной клетке, дает возможность связать различия в действии веществ с неоднородностью субъединичного состава рецепторов на одной клетке.

В настоящей работе эти различия продемонстрированы для диазепама и зольпидема - двух веществ, широко используемых как анксиолитики и снотворные. Представленные данные помогают глубже разобраться в механизмах их действия.

Используемые в работе срезы мозга, дают возможность анализировать кинетику миниатюрных токов, отражающих спонтанное выделение медиатора из нервных окончаний. Кинетические характеристики миниатюрных токов, связанные с такими свойствами ионных каналов как скорость открывания и закрывания, десенсетизация, деактивация и др., являются также важным инструментом анализа механизмов действия разных веществ. Нами были выявлены различия в кинетических характеристиках ионных токов, связанные с возрастом животного, что возможно позволит внести вклад в понимание возрастных аспектов пластичности в гиппокампе. Апробации работы.

Основные результаты работы были доложены на 30Ih Annual Meeting of Society for Neuroscience (New Orlean, 2000); на 11th Annual Meeting of Society for Neuroscience (San Diego 2001); на XVIII Съезде Физиологического общества имени И.П. Павлова (Казань 2001); на 8th ECNP Regional meeting, (Moscow, 2005); на заседании Ученого совета ГУ НИИ мозга РАМН (май 2005).

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, из них 1 статья в международном журнале. Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, изложения и обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой

литературы. Работа изложена на 126 страницах и включает 47 рисунков и 12 таблиц. Список цитированной литературы включает 259 источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Данная работа проводилась на переживающих срезах гиппокампа мозга крысы in vitro. Регистрация токов производилась методом пэтч-кламп (в конфигурации целая клетка), при фиксированном потенциале клетки, в сочетании с оригинальной методикой быстрой аппликации веществ на срез (быстрая смена базового раствора). В работе были использованы крысы линии Wistar обоего пола в возрасте 14- 22 дней. Все процедуры по приготовлению срезов, а также их инкубация проводились в растворе следующего состава (в мМ)- NaCl 125, KCl 5, СаСЬ 1.5, MgCb 1.5, NaH3P04 1.25, NaHCO, 25, глюкоза 10. Срезы находились в инкубационной камере при комнатной температуре (t =19-25"С). Раствор насыщался карбогеном (95% CK 5% С02), что способствовало поддержанию постоянного уровня pH (рН=7.4-7.5) и насыщению инкубационного раствора кислородом. Регистрацию токов проводили при комнатной температуре (22-24°С). методом "patch-clamp" в конфигурации "целая клетка", с помощью микроэлектродов, изготовленных из твердого боросиликатного стекла и заполненных ''внутриклеточным" раствором следующего состава (мМ): KCl 140; СаСЬ 1; MgCL 4; HEPES 10; EGTA 5. Растворы веществ-модуляторов приготавливались из маточных растворов с концентрацией 10 мМ. При этом для LaCl3, (-)-бикукуллина метбромида, АПВ в качестве растворителя использовалась дистиллированная вода, тля зольпидема - 96% водный раствор этилового спирта, для растворения CNQX использовалась ДМСО. Сопротивление микроэлектродов составляло 2-5 Мом Регистрируемые токи оцифровывали с частотой 500 Гц и записывали на жесткий диск компьютера. Использованная в данной работе оригинальная система аппликации была разработана в нашей лаборатории. Стимуляция нейронов проводилась посредством раздражения афферентных входов импульсами гока, длительностью 100 микросекунд и силой тока от 0.1 до 4 наноампер. Для генерации электрической последовательности такого вида использовался ТТЛ (цифровой) выход АЦП, синхронизованный с программой оцифровки и записи ПСТ на жесткий диск компьютера Использовались стеклянные монополярные микропипегки,

изготавливаемые так же, как и регистрирующие микроэлектроды, с сопротивлением до 1 Мом. При стимуляции нейронов поля СА1 стимулирующий пектрод располагался либо в область апикальных дендритов (str.radiatum) либо в область базальных дендритов (str.oriens). Для преобразования импульсов напряжения в токовые и подачи стимулирующей последовательности на электрод, применялась система оптической развязки (NIHKON KOHDEN Izolator SS-201J (Япония)) При поочередной стимуляции нейронов СА1 также использовались монополярные стеклянные электроды, и система подведения импульсов тока оставалась той же. Однако стимуляция str.radiatum и str.oriens поочередно раздражались импульсами (ЮОмксек) с частотой 0.05 герца, соответственно. Таким образом, в целом срез получал импульсы с прежней частотой 0.1 герц Обработку данных и статистический анализ проводили с помощью программ Excel ( Microsoft Corporation ) и Prizm ( ver3 GraphPad Software, San Diego, CA ). Для непрерывных записей использовалась программа TIDA (ver.3.1., НЕКА, Германия), в этом случае оцифрованные данные конвертировались в ASSC1 формат (числовой), и анализировались при помощи программы PeacCount ( Германия ).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Лантан потенциирует ГАМК ТПСТ в нейронах СА1, и по-разному влияет на ТПСТ, вызванные стимуляцией str.radiatum и str.oriens.

Наши эксперименты показали, что ионы La1+ потенцируют амплитуду ГАМК ТПСТ, в нейронах поля СА1 гиппокампа. В начальных экспериментах, проводимых без блокады НМДА рецепторов, действие La3* также проявлялось в потенциации ТПСТ. хотя и в меньшей степени, чем при блокаде рецепторов, обуславливающих вход в клетку катионов. Эти данные, полученные нами на срезах, соответствуют результатам исследований, проводимых в нашей лаборатории на изолированных нейронах ряда областей мозга, в том числе и гиппокампа с прямой аппликацией вещества к поверхности нейрона [Колбаев.2002; Скребицкий 2003; Чечулина 2005]. Дальнейшие исследования показали, что потенциация вызванных ГАМК ТПСТ имеет входоспецифичность (Рис.1).

Рис. 1 Действие LaCI3 на ГАМК ТПСТ в нейронах CAI при ритмической стимуляции (0.1гц).

А Б

Str.radiatum

у—- ^— у— Y— У—

300

^ 200 100

UCIjIÍOOMKM)

Str.oriens

100 пА I

О 5 4 0 1 9 20 МИН

100 мсек

Г~

гг^

200. 100.

• * TÍVtt-

pie» vv>f

О 5 10 16 20 МИН

2

О о

в

LaCI3(100MKM)

ТТТТ N=16

О о *

у

— - i •*

t& -f?

№9

Оч 200

| 150

Str.RADIATUM N=16

100 50 О

99.43 ± 16.0% p=0.9722

146.4 ± 17.9% p=0.0323

(А) - суперпозиции 20 ТПСТ на различных стадиях эксперимента с 5-минутным интервалом при стимуляции (0.1гц) втгас^ашт или зи-.олепв соответственно (* -ТПСТ при аппликации хлорида лантана); (Б) - кривые, демонстрирующие динамику изменений амплитуд в течение всего эксперимента (каждая точка на графике демонстрирует амплитуду ТПСТ в конкретный моменО; (В) - диграммы суммарных изменений амплитуд ТПСТ; (Г) - сравнительные диаграммы изменений амплитуд в зависимости от области стимуляции.

В тех случаях, когда ТПСТ вызывались стимуляцией зй-.опепя, аппликация ЬаС13, как правило, увеличивала амплитуду ответа на 30-70% (в среднем 150±18% от контроля, р<0.05, п=14). Стимуляция str.radiat.um, наоборот, при аппликации ЬаС13 не вызывала существенных изменений амплитуд (96±12% от контроля,

p<0.05, n= 21). На Рис.1 (Г) приведена диаграмма сравнительных изменений амплитуды ТПСТ при действии ионов La3+ в зависимости от области стимуляции, выраженные в процентах к контролю. Такое сравнение позволило выявить достоверность увеличения амплитуд при раздражении str.oriens (р=0.0323<0.05 в первые 5 минут аппликации); при этом отличия ТПСТ при раздражении str.radiatum остались незначительными (р=0.9722>0.05). Результаты экспериментов (Рис.2) подтвердили первоначальные данные о различном действии La3+ в пределах одного нейрона: присутствие ионов La3+ вызывало увеличение амплитуды ответов на раздражение str.oriens (150% от контроля) и практически оставляло без изменения ответы на str.radiatum (96%). Полученные данные Lav при поочередной стимуляции str.radiatum и str.oriens на одной клетке могут свидетельствовать о правильности предположения о различных свойствах ГАМКд рецепторов в различных дендритах одного нейрона. Несмотря на относительно хорошую изученность морфологии пирамид CAI, основная трудность в интерпретации данных состоит, в том, что можно лишь с относительной вероятностью говорить о том, аксоны каких интернейронов стимулируются. Можно высказать некоторые предположения: в str.radiatum стимулируются колатерали Шафера, волокна «двухслойных» клеток (bistratified cells), волокна корзинчатых клеток и звездчатых клеток лакунозно-молекулярного слоя, в то время как в str.oriens- волокна мультиполярных нейронов, аксо-аксонные нейроны [Buhl et al 1994] и собственные аксоны пирамид CAI. Есть данные иммуноцитохимии, что синапсы, образуемые аксо-аксонными клетками, волокна которых проходят в str.oriens, и заканчиваются на аксонном холмике, содержат а2-субъединицу Возможно, что она определяет обнаруженные различия входов. Однако для подтверждения данного предположения нужны дальнейшие морфо- физиологические эксперименты. Имеются данные о том, что тормозные входы к пирамидам CAI имеет послойно-специфическую организацию [J.L. Fisher, R.L. Macdonald 1997; R. Makelaet al 1999; G. Sperk et al 1997]. Кроме того, показано, что кинетика ТПСТ зависит от ламинарной позиции стимулирующего входа [S.Nurse, J.C.Lacaille 1997].

Рис.2 Действие LaCb на ГАМК ТПСТ в нейронах CAI при поочередной стимуляции str.radiatum и str.oriens.

КОНТРОЛЬ 4UCI-

STR. RADIATUM

В

• КОНТРОЛЬ

i V

/ LaCI^

/ 50мсек

STR. ORIENS

ЮОпА

ПА 300.

200100 0

LaCI3(100MKM)

•V^" * . 3 о,* "

ю

15

20 мин

• STR. RADIATUM О STR. ORIENS

STR. RADIATUM

STR. ORIENS

150.2±15.5% (p=0.0076)

(А) - Сопоставление суперпозиций 20-ти последовательных ТПСТ в контроле и при аппликации для str.radiatum. и str.oriens соответственно; (Б) - кривые, демонстрирующие динамику изменений амплитуд в течение всего эксперимента (каждая точка на графике демонстрирует значение амплитуды ТПСТ в конкретный момент); (В) -сравнительная диаграмма действия LaCh на амплитуду ГАМК ТПСТ нейронов CAI в зависимости от области стимуляции.

Экспрессия подтипов постсинаптических ГАМКд рецепторов различна для различных тормозных входов. Это показано как в физиологических [М. Banks 1998; G.Sperk et al 1997], так и в иммуногистохимических исследованиях (T.F.Freund, G.Buzsaki 1996; J. Kardos 1999]. Наконец, функциональная организация тормозных синапсов в отношении захвата медиатора имеет также входоспецифичность [D. Engeletal 1998].

На сегодняшний день известно, что пирамиды СА1 экспрессируют различные субъединицы ГАМКЛ рецептора, включающие al, a2, a4, a5, ß2, ß3, у2 и 6 [G.Sperk et al 1997,1998]. В свете исследований экспрессии разных субъединиц [Е.А. Barnard 1998; N. Brown et al 2002; A. Demuro et al 2000; J.L. Fisher, R.I.. Macdonald 1997; N. Hajos et al 2000; M.S. Im et al 1992; Makela et al 1999; S. Nurse, J.C. Lacaille 1997], известно, что они могут образовывать рецепторы как чувствительные так и нечувствительные к ионам La3+, что может служить объяснением обнаруженного нами различия в его действии на разные синаптические входы.

Другим объяснением может являться различная насыщенность постсинаптических рецепторов разных входов. Дело в том, что эффекты La1 конкурентны, т.е. они исчезают при высокой концентрации ГАМК [N. Saxena et al 1997]. Так что при высокой «занятости» постсинаптических рецепторов модулирующее действие La,T может отсутствовать вне зависимости от субъединичной комбинации рецепторов. Действительно, некоторые исследователи [N. Hajos et al 2000] продемонстрировали разную «занятость» постсинаптических Г'АМКл, рецепторов в разных типах клеток, определяющую различия в свойствах этих рецепторов. Однако, наши данные о действии зольпидема указывают на то, что синапсы в str.radiatum далеки от насыщения. Следует учесть и еще одно обстоятельство: все приведенные выше соображения касались постсинаптического действия ионов La1", однако, нельзя исключить, что в их действии присутствует и пресинаптический компонент. Действительно, известно, что ионы La1+ блокирует Га2" каналы [Gregory et al., 2001; Kukkonen et al., 2001; Bootman et al., 2002] в пресиналтической мембране. Приведенные ниже данные о том, что ионы La1* усиливают спайк-зависимые миниатюрные ТПСП (сТПСП) и не увеличивают амплитуду спайк-независимых (в присутствии ТТХ) мТПСТ также говорит в пользу присутствия прёсинаптического компонента в его действии. О том же свидетельствуют наши'данные о том, что La3+ не вызывает достоверных изменений времени нарастания и спада ТПСТ, независимо от области стимуляции

2. Действие ионов Ьа3+ зависит от возраста животного

Наряду с описанной выше вызванной активностью, нами было зарегистрировано 21 нейронов, в которых анализировались спонтанные миниатюрные токи, обусловленные выделением медиатора из терминалей аксонов. Средняя частота миниТПСТ составляла 2.76гц, средняя амплитуда 68.5пА. Аппликация тетродотоксина (ТТХ) в концентрации 0.1 мкМ приводила к значительному подавлению амплитуд миниТПСГ, так что количественная обработка данных делалась затруднительной. Факт подавления амплитуды миниТПСТ ТТХ говорит о том, что они были обусловлены приходом спонтанных спайков. сохраняющихся в срезе, т.е. спайк-зависимыми (сТПСТ).

Рис.3 Изменения миниТПСТ при аппликации ТТХ

КОНТРОЛЬ ТТХ ( 0.1 мкМ )

Анализ влияния Ьа1+ на спошанные ТПСТ (сТПСТ), проведенный в данной работе, показал, что на различных стадиях постнатального развития животного ионы Ьач" оказывают различное действие. Во всех случаях, когда возраст животного был 14-17 суток (Р14-17), Ьа1+ увеличивал амплитуды ГАМК сТПСТ (спайк-зависимых ТПСТ) на 10% (р<0.05, п=12) (Рис.4). В тоже время, если возраст животного составлял Р18-21, аппликация Ьа3" напротив приводила к уменьшению амплитуд на 14% (р<0.05, п=9). Вклад в описанный эффект могут вносить как пресинаптические, так и постсинаптические составляющие.

По данным современной литературы, у животных Р14-17 в ГАМКа рецепторах преобладает наличие комплекс субъединиц а1(2),|31, напротив в

возрасте PI 7-25, зарегистрировано преимущественное присутствие

композиции аЗ(5), ß2-3, у. [Brooks-Kayal 1998]. Дополнительным свидетельством того, что ионы Lav оказывают выраженное постсинаптическое влияние, зависимое от возраста, могут служить изменения в кинетике сТПСТ, зарегистрированные в наших экспериментах Мы зарегистрировали более значительное увеличение т (время спада) сТПСТ при аппликации Т.аСЬ (42%) для Р14-17 по сравнению с возрастной группой Р18-21 (18%). Эти данные (Рис.4) говорят прежде всего о том, что в группе PI4-17 LaCb вызывает увеличение продолжительности открытого состояния 1 АМК рецепторов (Рис.4).

Рис.4 Возрастные особенности действия ионов La3+ на ГАМК сТПСТ

Амплитуда

Частота

к с:

о

X

о

150 100 50] 0

*

120; 100 80

140 120 100 80

100 50

а

□ 14 -17 сутки (N=12)

□ 18-21 сутки (N=9)

*р<0.001 *р<0.01 *р<0.05

Анализ модуляции частоты сТПСТ при действии La1 показал, что ее хвеличение в iруине PI8-21 (на 40%) значительно превосходит увеличение в группе Р14-17 (Рис.4), при этом следует отметить, что для двух исследуемых возрастных групп частоты сТПСТ в контроле значительно отличались (Р14-17 - 1.53±0.15гц; PI8-21 - 3 54±0.29гц ). По данным литературы в возрасте до 20 суток эффективность ГАМКергической синаптической передачи прежде всего ограничена медленными кинетическими процессами и насыщенностью постсинаптических ГАМКд рецепторов [Juttner et al. 2001], что в значительной степени подтверждается нашими результатами. Известно, что эффект потенциации ГАМК ТПСТ при действии La3+ проявляется лишь для а 1-содержащих рецепторов [Fisher et al. 1997b; Neelands et al.

1999b; Saxena et al. 1997], в то время как показано [Lopez-Tellez JF 2004; Okada et al 2000], что содержание al в пирамидах гиппокампа относительно низко при рождении и увеличивается npoi рессивно до взрослой жизни По данным [Okada et al 2000] переключение между превалирующими концентрациями ctl/a2 субъединиц в ГАМКА рецепторах происходит чрезвычайно быстро и именно на 16-18 день после рождения. Также известно, что а5 субъединица, присутствие которой обуславливает уменьшение ГАМК ГГ1СТ при помощи ионов La1', в пирамидах CAI в возрасте POPI 0 локализована в основном в телах нейронов и только с увеличением возраста (Р10-Р25) начинает появляется в дендритах [Ramos 2004, Garrett 1990]. Похожее возрастное соотношение показано и для а.З. Существуют доказательства, что содержание а2 самое высокое в более молодой ткани (показано на нейронах различных структур мозга, в том числе и в i иппокампе [Davis et al.2000,Cheng et al.2001].

Напротив, группы объединяющие а5-субъединицы с al по мере взросления становятся более редкими, поскольку содержание а5-субъединицы зависит от возраста. Эти данные были продемонстрированы для нейронов CAI [Hutcheon 2004] В целом, авторы этих исследований указывают, что композиционное регулирование ГАМКд рецептора является как синаптическим, так и экстрасинаптическим, отражая сложные клеточные механизмы взаимосвязи.

Однако объяснение действия La'~, основанное только на многообразии вариантов а субъединиц, было бы неполным. Есть данные, что модуляция ионами La' выражена в рекомбинантных ГАМКд рецепторах за счет аб и/или (3 субъединицы [Saxena, MacDonald, 1994,1997]. Исследования, проведенные на модифицированных (мутантных) нейронах мозга крысы [Bailey 2002] показывают, что содержание [31 субъединицы в ГАМКд рецепторе самое высокое при рождении, быстро уменьшается, и достигает минимума в возрасте от 10 до 17 суток. По мнению некоторых авторов [Cheng et al. 2001], именно наличие субъединиц |3(1-2) в ГАМК рецепторе обеспечивает меньшую пиковую амплитуду и более быстрый спад по сравнению с контролем для токов, вызванных аппликацией веществ, обладающих способностью увеличивать ответ на ГАМК. В то же время исследования выделенных нейронов гиппокампа и клеток в культурах клеток [Scotti

2001, 2002, Hutcheon В 2004] показали, что удельный вес групп рецептора, которые содержали 02/3 субъединицы, был постоянен для Р10-20, при этом наличие комплекса, содержащего у2 субъединицу, колебалось и достигало максимума в 20-й день (данные получены на культурах гиппокампальных клеток).

Поскольку все наши исследования проводились на срезах, нельзя исключить и влияния глии, которое с возрастом оказывает большее влияние на синаптическую передачу. Некоторые исследователи показали, что для гиппокампа пик содержания транспортеров GAD65 и GAD67 (содержащихся в больших количествах в асфоцитах) приходится на 17-20 день [Ramos В 2004]. Вместе с тем, на культурах гиппокампа показано, что именно астроциты потенциируюг ГАМКд-зависимые токи в пирамидальных нейронах [Liu Q.Y. 1996].

3. Модулирующее действие диазепама и зольпидема на токи, вызываемые ГАМК.

Нами было показано, что аппликация диазепама и золпидема оказывает различное действие на ГАМК ТПС'Г пирамид CAI, вызванные стимуляцией различных синаптических входов (Рис.5) Сравнительный анализ влияния диазепама и золпидема показал:

Во-первых, золпидем потенцировал амплитуду ГАМКд ТПСТ при стимуляции обоих входов, в то время, как диазепам увеличивал, в основном, амплитуды ТПСТ, вызванные стимуляцией str.radiatum В данной серии экспериментов увеличение амплитуды ГАМКд ТПСТ при аппликации диазепама и золпидема были достоверны, однако наблюдались различия в их действии при стимуляции str.oriens и str.radiatum. Для диазепама увеличение амплитуд составило 206.8±11% относительно контроля (п=5, рЮ.0006), а для золпидема - 238.2±36% (гг~5, р=0.0186).

Во-вторых, показано, что при стимуляции str.radiatum диазепам достоверно увеличивает tr (время нарастания), при этом для ТПСТ, вызванных стимуляцией str.oriens, значимых различий для действия диазепама и золпидема не наблюдалось (для обоих веществ наблюдалось увеличение tr на 19-25%).

Рис.5 Пример сравнительного действия диазспама и золпидема на ГАМК ТПСТ, в зависимости от области стимуляции

^г.ВДОЯАТиМ контроль

л

диазепам

г контроль

з^.отЕыз . контроль

диазепам

,_180 пА

100 мсек

; контроль

золпидем

золпидем

__] 50 пА

100 мсек

300 с 200 100

Б

ДИАЗЕПАМ (0.01 мкМ)

10

15

20 Мин

150, < 100 С 50 О

ЗОЛПИДЕМ ( 0.1 мкМ )

0 5 10 15 20

8и. РасИаШт Мин Опеле

£Е зоо

вЬ'.РАШАТиМ О 200

100

X о

О зоо

** 200

81г.СЖ1ЕЫ8 н 100

I—II ДИАЗЕПАМ (п=10) ***р<0.001

СИЗ ЗОЛПИДЕМ (п=10) **р<0.01

*р<0.05

(А) - наложение суперпозиций 20 последовательных ТПСТ (в контроле и при аппликации) при стимуляции (0 1 гц) яйчгасИатт или в^-опеля соответственно. (Б) -кривые, демонстрирующие динамику изменений амплитуд в течение всего эксперимента (каждая точка на графике демонстрирует амплитуду ТПСТ в конкретный момент); (В, Г, Д) - сравнительные диграммы суммарных изменений амплитуд ТПСТ, где (В) - диаграммы изменений амплитуд, (Г) - времени нарастания, (Д) - времени спада в зависимости от области стимуляции

В

ДА

д

150 150 я.

100 100

50 *** 50 <г-

0 А 0 и

150 ** 150 **

100 100 3-

50 50

0 га 0

Мы показали, что tr для вызванных ГАМК ТПСТ при аппликации диазепама достоверно изменялось в сторону увеличения (примерно на 19%) только при стимуляции str.oriens (п=5, р=0.0310), в то время как аппликация золпидема приводила к значительному уменьшению tR , независимо от области стимуляции, и составило в случае стимуляции str.radiatum -30.6±6% (п=5, р=0 0003<0 05). а в случае str.oriens -36 46±7% (п=5. р=0.0008<0.05).

Феномен дифференцированного изменения тк для ТПСТ в присутствии диазепама или золпидема описан в литературе. Гак в работе [PonomarenkoA. et al 2004] показано, чю нейроны гиппокампа области CAI дифференцированно чувствительны к диазепаму и золпидему В этой работе исспедовались высокочастотные спонтанные ГАМК ТПСТ (так называемые «ripples», 200гц), связанные с эпилептогенезом. Оказалось, что золпидсм, рассматриваемый авторами как al-избирательный агент, увеличивает продолжительность высокочастотных осциляций ГАМК ТПСТ, в то время как диазепам понижает частоту колебаний для «ripples» и уменьшает их амплитуду и продолжительность. Наши результаты дополняют эти данные для вызванных ТПСТ в нейронах CAI. Они свидетельствуют

0 том, что аппликация золпидема приводила к значительному уменьшению xR, независимо от области стимуляции Это означает, что значительный вклад в эффект зотпидема могут вносить быстрые ГАМК ТПСТ, отражающие увеличение фронта нарастания ГПСТ и, следовательно, уменьшение Tr

Данные о дифференцированном изменении времени спада (т), полученные в наших экспериментах, также свидетельствуют о различиях в строении

1 АМКА рецепторов в базальных и апикальных дендритах нейронов CAI. Мы показали, что т ТПСТ при аппликации диазепама и золпидема увеличивалось во всех случаях, однако при этом составляло для диазепама, в среднем на 19% больше, чем в контроле (р<0.0001 для str.radiatum, и р=0.0008 для str.oriens), а для золпидема 9 4% (р=0.0098 для str.radiatum). При этом достоверных изменений т при действии золпидема и стимуляции str.oriens не наблюдалось (р-0.0697>0.05), имелась тенденция к незначительному увеличению (на 8.4%). Анализ современных работ, направленных на изучение гетерогенности ГАМК рецепторов гиппокампа показал, что данные об изменениях физиологических параметров ТПСТ, анализируемые с

точки зрения наличия композиций различных субъединиц в различных типах нейронов во многом противоречивы. Так исследования одиночных СГ-каналов нейронов новой коры [Marie D et а! 2001] и нейронов гиппокампа [Liu QY et al. 2000] (при помощи комплекса методов иммуноцитохимии и RT-PCR) показали, что за короткое и длительное открывание СГ канала ГАМКд рецептора ответственны два вида рецепторов содержащие а4р1у2 (для коротких, быстрых) и a5piy2 (длительных, медленных). Здесь же показано, что быстрые ТПСП (100гц) корзинчатых интернейронов гиппокампа, одинаково зависимы от диазепама и золпидема, в то время как медленные (3-10гц) чувствительны к золпидему на 50% меньше чем к диазепаму. На основе своих данных авторы делают вывод о том, что al-субъединица доминирует в тормозных синапсах корзинчатых клеток, снабженных механизмом быстрой передачи, напротив в синапсах с медленной передачей вовлечены а2/3-субъединицы. Исследования активности «bistratified cells» гиппокампа ( волокна которых, по всей вероятности, мы стимулируем ), показали, что амплитуда миниатюрные спонтанных ГАМК ТПСП не увеличивались при аппликации золпидема, тогда как диазепам ее сильно потенцировал. Авторы полагают, что синапсы этих клеток включают а5-содержашие рецепторы [Thomson AM et al. 2000].

Таким образом нам представляется правомерным на основании наших данных о действии диазепама и золпидема на ГАМКд ГПСТ нейронов поля CAI сделать вывод о различном качественном составе ГАМКд рецепторов в их апикальном и базальных дендри rax.

ВЫВОДЫ

1. Синаптически активируемые тормозные токи в нейронах гиппокампальных срезов мозга являются мишенью для ряда веществ (ионов La3+, золпидема и диазепама), которые модулируют их амплитуды и временное течение. Модуляция имеет входоспецифический характер.

2. Ионы La3+ потенциирует амплитуду ТПСТ, вызванных стимуляцией stronens, и не изменяет амплитуду ТПСТ, вызванных стимуляцией strradiatum. Временные характеристики ТПСТ не меняются ни в первом, ни во втором случае Различия в действии La3+ на эти входы можно связать с различиями в субъединичного состава постсинаптических рецепторов.

3. Диазепам и золпидем потенциируют амплитуду ТПСТ как при стимуляции str.oriens, так и str.radiatum. Однако (в отличие от ионов La3'), потенциация ответов в str.radiatum выражена сильнее для обоих веществ. При этом золпидем вызывает более выраженное увеличение амплитуд и сокращает время нарастания ТПСТ.

4. В нейронах срезов гиппокампа хорошо выражены миниатюрные ТПСТ. Их средняя частота 2.76гц, средняя амплитуда 68.5пА. Действие La3+ состоит в изменении амплитуды и частоты спайк-индуцированных ТПСТ (сТПСТ) и в отсутствии в изменений этих параметров у спонтанных ТПСТ (мТПСТ), что говорит о том, что наряду с посгсинаптическим компонентом в эффекте действия La31' присутствует и пресинаптический компонент.

5. Характер действия ионов La3" на сТПСТ зависит от возраста животного:

а) в возрастной группе 14-17 суток La3+ увеличивают их амплитуду и незначительно уменьшает частоту;

б) в возрастной группе 18-21 суток действие La3+ приводит к уменьшению амплитуд сТПСТ и значительному снижению их частоты Различия, видимо, связаны со сроками созревания тормозных связей в нейронах CAI.

6. Тормозные связи пирамидных нейронов поля CAI гиппокампа различаются в зависимости от их локализации на разных частях нейрона, субъединичного состава постсинаптических рецепторов и степени их зрелости. Все эти характеристики создают тонкую настройку пирамидных нейронов, обеспечивающую их участие в интегративной активности гиппокампа.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ

1. V.G.Skrebitsky, S.N.Kolbaev, M.B.Kozhemyakin, I.N.Sharonova «Lanthanum-induced modulation of GABA-gated currents in rat brain isolated neurons and slice preparation.»

Abstracts, Society for Neuroscience, 30th Annual Meeting, New Orleans, La November 49, 2000 №26,part 2

2. М.Б. Кожемякин, В. Г. Скребицкий, А.Драгун «Характеристика тормозных постсинаптических токов (ТПСП) в нейронах срезов Гиппокампа и зубчатой фасции.»

В материалах XVIII съезда физиологического общества имени И.П.Павлова 2001г.

3 V.G.Skrebitsky, A.Draguhn, M.B.Kozhemyakin «Lanthanum differentially modulates 1PSCS induced in CA1 pyramids by stratum oriens and stratum radiatum stimulation.»

Abstract, Nociety for Neuroscience,31th Annual Meeting, San Diego, La November, 2001

4. M.B. Kozhemiakin a, A. Draguhn b, V.G. Skrebitsky «Layer-specific potentiation of evoked IPSCs in rat hippocampal CA1 pyramidal cells by lanthanum» Brain Research Bulletin 64 (2004) p97-101.

5 I.N.Sharonova, V.S.Vorobjev, S.N.Kolbaev, M.B.Kozhemyakin, V.G.Skrebitsky «Electrophysiological characteristics of single neuron responses to anxiolitic drugs in different brain structures»

Abstract of the 8th ECNP Regional meeting, Moscow april 14-16,2005.

i

Принято к исполнению 08/08/2005 Исполнено 25/08/2005

Заказ № 972 Тираж: 150 экз

ООО «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095) 747-64-70 www.autoreferat.ru

»15415

РНБ Русский фонд

2006-4 18364

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кожемякин, Максим Борисович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1.Классификация рецепторов ГАМК.

1.1.1. ГАМКА-рецепторы.

Структурная организация.

Функциональные свойства.

1.1.2. ГАМКв-рецепторы.

1.1.3. ГАМКс-рецепторы.

1.1.4. «Нетипичные» ГАМК рецепторы.

1.2.Субъединичная композиция ГАМКергических рецепторов в различных нейронах гиппокампа.

1.3.Организация синаптических связей гиппокампа.

1.4.Тормозные постсинаптические токи и потенциалы.

1.4.1 .Механизм генерации и функциональные свойства ионотропных

ТПСТ.

1.4.2.Особенности ГАМК ТПСТ гиппокампальных нейронов.

1.4.3.Влияние различных модуляторов на ТПСТ.

1.4.4.Действие ионов различных металлов.

1.4.5.Влияние глии.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 .Приготовление срезов.

2.2.Конструкция инкубационной камеры.

2.3.Конструкция регистрационной камеры.

2.4.Изготовление микроэлектродов.

2.5.Идентификация клеток.

2.6.Рабочая установка для регистрации токов от переживающих срезов мозга.

2.7.Порядок проведения опытов.

2.8.Система быстрой аппликации растворов.

2.9.Система раздражения.

2.10.Приготовление растворов веществ.

2.11 .Вычленение ГАМКа ТПСТ.

2.12.Анализ вызванных ГАМК ТПСТ в режиме фиксации потенциала.

2.13.Анализ спонтанных ГАМКа ТПСТ.

2.14.Стастический анализ.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1.Модуляция вызванных ТПСТ различными фармакологическими веществами: лантан, диазепам, золпидем.

3.1.1. Влияние ионов трехвалентного лантана на ТПСП.

3.1.2. Влияние диазепама и золпидема на ТПСТ.

3.1.2.1.Влияние диазепама и золпидема на ТПСТ, вызванные раздельной стимуляцией str.radiatum или str.oriens.

3.1.2.2.Влияние диазепама и золпидема на ТПСТ, вызванные поочередной ритмической стимуляцией str.radiatum и str.oriens.

3.2. Миниатюрные токи и их модуляция.

3.2.1.Природа миниатюрных токов пирамид СА1.

3.2.2. Модуляция ГАМК сТПСТ в нейронах СА1.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ И ВЫВОДЫ.

4.1 .Методические особенности исследования.

4.1.1.Выбор объектов и методов исследования.

4.1.2.Селективные модуляторы.

4.1.3.Природа ГАМКа активируемого тока.

4.2.Модулирующее действие хлорида лантана, зольпидема и диазепама на

ГАМК ТПСТ.

4.2.1.Общая характеристика.

4.2.2.Модулирующее действие лантана.

4.2.2.1.Лантан потенциирует ГАМК ТПСТ в нейронах СА1, и по-разному влияет на ТПСТ, вызванные стимуляцией str.radiatum и str.oriens.

4.2.2.2. Действие лантана, зависит от возраста животного.

4.2.3.Модулирующее действие диазепама и зольпидема на токи, вызываемые

ГАМК.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональные характеристики тормозных постсинаптических токов нейронов поля CA1 в срезах гиппокампа"

Изучение синаптических механизмов тормозной передачи является одной из актуальных проблем современной нейрофизиологии. Накоплен большой материал, свидетельствующий о том, что торможение имеет специфику в разных отделах мозга, что определяет характерные черты участия различных мозговых структур в интегративной деятельности мозга в норме и патологии. Эта специфика определяется набором тормозных интернейронов и структурой и локализацией пре- и постсинаптических рецепторов. В гиппокампе, структуре, изучению которой посвящена наша работа, торможение принимает участие в формировании синаптической пластичности, лежащей в основе обучения и памяти. С другой стороны, нарушение баланса возбудительных и тормозных процессов в гиппокампе ведет к возникновению ряда тревожных состояний и к развитию эпилептических судорог.Таким образом, актуальность работы обусловлена как стремлением к раскрытию фундаментальных механизмов высшей нервной деятельности, так и к анализу ряда патологических явлений. Для анализа последних в работе были использованы вещества, являющиеся анксиолитиками и антиконвульсантами (диазепам и зольпидем).Работа проведена на переживающих срезах гиппокампа с использованием электрофизиологической регистрации ионных токов отдельных нейронов методом patch-clamp в конфигурации «целая клетка». Этот метод дает возможность анализировать синаптические токи, возникающие в клетках как спонтанно, так и при электрической стимуляции разных синаптических входов. Он открывает широкие возможности для изучения действия разных модуляторов тормозной синаптической передачи, включая вещества, используемые в клинической практике.Цель работы.Целью данной работы являлось исследование ГАМКд ТПСТ нейронов СА1, основанное на аппликации веществ селективно реагирующих на присутствие определенных субъединиц в ГАМКд рецепторе. в работе показана функциональная неоднозначность разных синаптических входов к одной пирамидной клетке поля СА1 гиппокампа, выявлена различная кинетика изменений тормозных постсинаптических токов (ТПСТ) при действии ряда модуляторов тормозной передачи, обнаружена возрастная зависимость их эффектов.Задачи.Были поставлены следующие задачи: 1) Используя метод фиксации потенциала на клетке, находящейся в живом срезе гиппокампа, и систему быстрой аппликации веществ, исследовать функциональных характеристики постсинаптических токов, вызываемых ГАМК в нейронах СА1 срезов гиппокампа мозга крысы. Дать количественную оценку свойств ГАМК ТПСП в исследованных нейронах.2) Провести сравнительное исследование модуляции ТПСП веществами, которые избирательно взаимодействуют с ГАМКд рецепторами, имеющими различный субъединичный состав (хлорид лантана, зольпидем, диазепам). Выявить особенности модуляции ТПСП этими препаратами и дать количественную оценку их эффектов.3) Проанализировать полученные результаты о различии свойств нативных рецепторов в свете литературных данных по фармакологии рекомбинантных рецепторов. Сопоставить полученные результаты с литературными данными о распределении различных подтипов субъединиц ГАМКд рецепторов в гиппокампе мозга крысы с целью выявления наиболее вероятной субъединичной композиции этих рецепторов в исследованных нейронах при помощи всестороннего анализа ТПСП. Научная новизна полученных результатов.Методом фиксации потенциала проведено систематическое исследование функциональных свойств ГАМКд-зависимых ТПСТ нейронов поля СА1 гиппокампа в зависимости от присутствия субъдинично-селективных веществ.Сравнительная оценка кинетических параметров ГАМКл-зависимых ТПСП позволяет утверждать, что ГАМКд рецепторы различных частей исследуемых нейронов имеют различные физиологические характеристики, что, вероятно, связано с различным субъединичным составом этих рецепторов. Показано, что функциональные свойства различных популяций ГАМКд рецепторов, находящихся в базальных и апикальных дендритах пирамид СА1, различны.Исследовано модулирующее действие ЬаС1з на спонтанные ГАМКд ТПСТ в 21 нейронах. Показано, что свойства спонтанных ТПСТ зависят от возраста животного.Всего работа содержит данные об исследовании 64 пирамидальных нейронов поля С А1 гиппокампа.Научно-практическая значимость.Научно-практическая значимость работы определяется прежде всего тем, что в ней детально разработана тест-система, дающая возможность оценивать характер действия на отдельные нервные клетки различных фармакологических веществ, как широко используемых в медицине, так и проходящих преклинические испытания. Разработанная методика попеременной стимуляции разных синаптических входов к одной клетке, дает возможность связать различия в действии веществ с неоднородностью субъединичного состава рецепторов на одной клетке. В настоящей работе эти различия продемонстрированы для диазепама и зольпидема - двух веществ, широко используемых как анксиолитики и снотворные. Представленные данные помогают глубже разобраться в механизмах их действия.Используемые в работе срезы мозга, дают возможность анализировать кинетику миниатюрных токов, отражающих спонтанное выделение медиатора из нервных окончаний. Кинетические характеристики миниатюрных токов, связанные с такими свойствами ионных каналов как скорость открывания и закрывания, десенсетизация, деактивация и др., являются также важным инструментом анализа механизмов действия разных веществ. Нами были выявлены различия в кинетических характеристиках ионных токов, связанные с возрастом животного, что возможно позволит внести вклад в понимание возрастных аспектов пластичности в гиппокампе.1. Литературный обзор Тормозные постсинаптические токи являются непосредственным отражением биофизических процессов тормозной синаптической передачи.Поскольку главным тормозным нейромедиатором в центральной нервной системе млекопитающих является гамма-аминомасляная кислота (ГАМК), литературный обзор включает в себя разделы посвященные описанию структуры ГАМК рецепторов, их физиологических свойств и, собственно, описанию функциональных свойств ГАМКергических постсинаптических токов. Кроме того в обзор включены данные о структуре и связях гиппокампа, его нейронном составе и модуляции тормозных связей различными веществами.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Кожемякин, Максим Борисович

выводы

1. Синаптически активируемые тормозные токи в нейронах гиппокампальных срезов мозга являются мишенью для ряда веществ (ионов, золпидема и диазепама), которые модулируют их амплитуды и временное течение. Модуляция имеет входоспецифический характер.

2. Ионы лантана La3+ потенциируют амплитуду ТПСТ, вызванных стимуляцией str.oriens, и не изменяет амплитуду ТПСТ, вызванных стимуляцией str.radiatum. Временные характеристики ТПСТ не меняются ни в первом, ни во втором случае. Различия в действии La3+ на эти входы можно связать с различиями в субъединичного состава постсинаптических рецепторов.

3. Диазепам и золпидем потенциируют амплитуду ТПСТ как при стимуляции str.oriens, так и str.radiatum. Однако (в отличие от La3+), потенциация ответов в str.radiatum выражена сильнее для обоих веществ. При этом золпидем вызывает более выраженное увеличение амплитуд и сокращает время нарастания ТПСТ.

4. В нейронах срезов гиппокампа хорошо выражены миниатюрные ТПСТ. Их средняя частота 2.76Гц, средняя амплитуда 68.5пА. Действие La3+ состоит в изменении амплитуды и частоты спайк-индуцированных ТПСТ (сТПСТ) и в отсутствии в изменений этих параметров у спонтанных ТПСТ (мТПСТ), что говорит о том, что наряду с постсинаптическим компонентом в эффекте действия ионов La3+ присутствует и пресинаптический компонент.

5. Характер действия La3+ на сТПСТ зависит от возраста животного: а) в возрастной группе 14-17 суток ионы La3+ увеличивает их амплитуду и незначительно уменьшает частоту; б) в возрастной группе 18-21 суток действие ионов La3+ приводит к уменьшению амплитуд сТПСТ и значительному снижению их частоты. Различия, видимо, связаны со сроками созревания тормозных связей в нейронах СА1.

6. Тормозные связи пирамидных нейронов поля СА1 гиппокампа различаются в зависимости от их локализации на разных частях нейрона, субъединичного состава постсинаптических рецепторов и степени их зрелости. Все эти характеристики создают тонкую настройку пирамидных нейронов, обеспечивающую их участие в интегративной активности гиппокампа.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кожемякин, Максим Борисович, Москва

1. А. В. Ссемьянов Торможение в ЦНС: типы ГАМК-рецепторов и механизмы тонического ГАМК-опосредованного тормозного действия, Нейрофизиология 2002.Т. 34, № 1

2. Шульговский, В. В. "Физиология центральной нервной системы"., М. (1997): МГУ, 397с.

3. Дж.Николс, А.Р.Мартин, Б.Дж.Валасс, П.А.Фукс. От нейрона к мозгу. М.Едиториал УРСС, 2003.

4. Alger В.Е. and Nicoll R.A. Pharmacological evidence for two kinds of GABA receptor on rat hippocampal pyramidal cells studied in vitro. J.Physiol (Lond), 1982,328,125-141.

5. Amaral DG. Introduction: what is where in the medial temporal lobe? Hippocampus. 1999;9(1): 1-6.

6. Amaral DG. Emerging principles of intrinsic hippocampal organization. Curr Opin Neurobiol. 1993 Apr;3(2):225-9.

7. Andrade, R., Malenka, R. C., and Nicoll, R. A. "A G protein couples serotonin and GABAB receptors to the same channels in hippocampus." Science (1986), 234(4781), 1261-5.

8. Anwyl, R. "Modulation of vertebrate neuronal calcium channels by transmitters." Brain Res Brain Res Rev(1991), 16(3), 265-81.

9. Angelotti, T. P. and MacDonald, R. L. "Assembly of GABAA receptor subunits: alpha 1 beta 1 and alpha 1 beta 1 gamma 2S subunits produce unique ion channels with dissimilar single-channel properties." J.Neurosci(1993). 13(4), 1429-1440.

10. Araque A., Parpura V., Sanzgiri K.P., Haydon P.G. Tripartite synapses: glia, the unacknowledged partner . Trends in Neurosci. 1999. V.22. N.5. P.208-215

11. Arbilla, S., Allen, J., Wick, A., and Langer, S. Z. "High affinity 3H.zolpidem binding in the rat brain: an imidazopyridine with agonist properties at central benzodiazepine receptors." Eur.J Pharmacol. (1986) 130(3), 257-263.

12. Bellocchio, E. E., Reimer, R. J., Fremeau, R. Т., Jr., and Edwards, R. H. "Uptake of glutamate into synaptic vesicles by an inorganic phosphate transporter." Science(2000), 289(5481), 957-60.

13. M. Banks, T.-B. Li, R.A. Pearce, The synaptic basis of GAB A-A, slow, J. Neurosci. 18 (1998) 1305-1317.

14. Barnard, E. A., Darlison, M. G., Fujita, N., Glencorse, T. A., Levitan, E. S., Reale, V., Schofield, P. R., Seeburg, P. H., Squire, M. D., and Stephenson, F. A. "Molecular biology of the GABAA receptor." Adv.Exp.Med.Biol. (1988) 236, 31-45.

15. Barnard, E. A., Darlison, M. G., and Seeburg, P. H. "Molecular biology of the GABAA receptor: the receptor/channel superfamily." Trends Neurosci. (1987) 10(12), 502-509.

16. Bateson, A. N., Lasham, A., and Darlison, M. G. "gamma-Aminobutyric acidA receptor heterogeneity is increased by alternative splicing of a novel beta-subunit gene transcript." J Neurochem. (1991) 56(4), 1437-1440.

17. Bianchi, M. Т., Haas, K. F., and MacDonald, R. L. "Structural determinants of fast desensitization and desensitization-deactivation coupling in GABAa receptors." J.Neurosci. (2001)21(4), 1127-1136.

18. Ben-Ari Y, Cherubini E. Zinc and GABA in developing brain. Nature. 1991 Sep 19;353(6341):220. No abstract available.

19. С. Bernard, R. Cossart, J. C. Hirsch, et al., "What is GABA-ergic inhibition? How is it modified in epilepsy?" Epilepsia, 41, No. 6, S90-S95 (2000).

20. Blair, L. A., Levitan, E. S., Marshall, J., Dionne, V. E., and Barnard, E. A. "Single subunits of the GAB A A receptor form ion channels with properties of the native receptor." Science. (1988) 242(4878), 577-579

21. Bootman MD, Petersen OH, Verkhratsky A. The endoplasmic reticulum is a focal point for co-ordination of cellular activity. Cell Calcium. 2002 Nov-Dec;32(5-6):231-4/

22. Bormann, J. "Electrophysiology of GAB A A and GABAB receptor subtypes." Trends Neurosci. (1988) 11(3), 112-116.

23. Bormann, J. "The 'ABC' of GAB A receptors." Trends Pharmacol Sci, (2000) 21(1), 16-9.

24. Bormann, J., Hamill, O. P., and Sakmann, B. "Mechanism of anion permeation through channels gated by glycine and gamma-aminobutyric acid in mouse cultured spinal neurones." J.Physiol. (1987) 385, 243-286.

25. Bormann, J., and Feigenspan, A. "GABAC receptors." Trends Neurosci, (1995). 18(12), 5159.

26. S. G. Brickley, S. G. Cull-Candy, and M. Farrant, "Development of a tonic form of synaptic inhibition in rat cerebellar granule cells resulting from persistent activation of GABAA receptors," J. Physiol., 497, No. 3, 753-759 (1996).

27. Brown, N., Kerby, J., Bonnert, T. P., Whiting, P. J., and Wafford, K. A. "Pharmacological characterization of a novel cell line expressing human alpha(4)beta(3)delta GABA(A) receptors." Br.J.Pharmacol. (2002). 136(7), 965-974.

28. Brooks-Kayal, A. R., Shumate, M. D., Jin, H., Rikhter, T. Y., and Coulter, D. A. "Selective changes in single cell GABA(A) receptor subunit expression and function in temporal lobe epilepsy." Nat Med, (1998) 4(10), 1166-72.

29. Buhl EH, Halasy K, Somogyi P. Diverse sources of hippocampal unitary inhibitory postsynaptic potentials and the number of synaptic release sites. Nature. 1994 Apr 28;368(6474):823-8. Erratum in: Nature 1997 May 1 ;387(6628): 106.

30. Burt, D. R. and Kamatchi, G. L. "GABAA receptor subtypes: from pharmacology to molecular biology." FASEB J. (1991). 5(14), 2916-2923.

31. Buzsaki G, Eidelberg E. Direct afferent excitation and long-term potentiation of hippocampal interneurons.J Neurophysiol. 1982 Sep;48(3):597-607. No abstract available.

32. J. N. Cammack, S. V. Rakhilin, and E. A. Schwartz, "A GABA transporter operates asymmetrically and with variable stoichiometry," Neuron, 13, No. 4, 949-960 (1994).

33. Chang, Y., Wang, R., Barot, S., and Weiss, D. S. "Stoichiometry of a recombinant GABAA receptor." J Neurosci. (1996). 16(17), 5415-5424.

34. Cheng Q, Burkat РМ, Kulli JC, Yang J. GABA(C) rho(l) subunits form functional receptors but not functional synapses in hippocampal neurons. J Neurophysiol. 2001 Nov;86(5):2605-15

35. Chebib, M. and Johnston, G. A. "GABA-Activated ligand gated ion channels: medicinal chemistry and molecular biology." J Med.Chem. (2000) 43(8), 1427-1447.

36. Couve, A., Moss, S. J., and Pangalos, M. N. "GABAB receptors: a new paradigm in G protein signaling." Mol Cell Neurosci, (2000). 16(4), 296-312.

37. Colquhoun, D. and Sakmann, B. "Fluctuations in the microsecond time range of the current through single acetylcholine receptor ion channels." Nature. (1981). 294(5840), 464-466.

38. Coombs J.S.,Eccles J.С. and Fatt P.The inhibitory suppression of reflex discharges from motoneurones. J Physiology 1955 Nov 28;130(2):396-413.

39. R. Cossart, R. Tyzio, C. Dinocourt, et al., "Presynaptic kainate receptors that enhance the release of GAB A on CA1 hippocampal interneurons," Neuron, 29, No. 2, 497-508 (2001).

40. R. Cossart, C. Dinocourt, J. C. Hirsch, et al., "Dendritic but not somatic GABA-ergic inhibition is decreased in experimental epilepsy," Nat. Neurosci., 4, No. 1, 52-62 (2001).

41. Costa, E. "From GABAA receptor diversity emerges a unified vision of GABAergic inhibition." Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol. (1998). 38, 321-350.

42. A. Couve, S. J. Moss, and M. N. Pangalos, "GABAB receptors: a new paradigm in G protein signaling," Mol. Cell Neurosci., 16, No. 4, 296-312 (2000).

43. Curtis CG, Powell GM, Stone SL. Perfusion of the isolated rat liver. J Physiol. 1971 Mar;213(2): 14P-15P.

44. Davies, P. A., Hanna, M. C., Hales, T. G., and Kirkness, E. F. "Insensitivity to anaesthetic agents conferred by a class of GABA(A) receptor subunit." Nature. (1997). 385(6619), 820823.

45. Davis AM, Penschuck S, Fritschy JM, McCarthy MM.Developmental switch in the expression of GABA(A) receptor subunits alpha(l) and alpha(2) in the hypothalamus and limbic system of the rat. Brain Res Dev Brain Res. 2000 Jan 3;119( 1): 127-38.

46. A. Demuro, A. Martinez-Torres, R. Miledi, Functional and pharmacological properties of GABArhol delta 51 receptors, Neurosci. Res. 36 (2000) 41-146.

47. Draguhn, A., Verdorn, T. A., Ewert, M., Seeburg, P. H., and Sakmann, B. "Functional and molecular distinction between recombinant rat GABAA receptor subtypes by Zn2+." Neuron. (1990). 5(6), 781-788.

48. D. Engel, D. Schmits, T. Gloveli, U. Heinemann, A. Drahuhn, Ch. Frahm, Laminar difference in GABA uptake and GAT-1 expression in rat CA1, J. Physiol. 512 (1998) 643-649.

49. Eghbali, M., Gage, P. W., and Birnir, B. "Pentobarbital modulates gamma-aminobutyric acid-activated single- channel conductance in rat cultured hippocampal neurons." Mol Pharmacol, (2000). 58(3), 463-9.

50. Enz, R., Brandstatter, J. H., Hartveit, E., Wassle, H., and Bormann, J. "Expression of GABA receptor rho 1 and rho 2 subunits in the retina and brain of the rat." Eur J Neurosci, (1995) 7(7), 1495-501.

51. Enz, R., and Cutting, G. R. "GABAC receptor rho subunits are heterogeneously expressed in the human CNS and form homo- and heterooligomers with distinct physical properties." Eur J Neurosci, (1999). 11(1), 41-50.

52. Faure-Halley C, Graham D, Arbilla S, Langer SZ. Expression and properties of recombinant alpha 1 beta 2 gamma 2 and alpha 5 beta 2 gamma 2 forms of the rat GABAA receptor.Eur J Pharmacol. 1993 Aug 15;246(3):283-7

53. Essrich, C., Lorez, M., Benson, J. A., Fritschy, J. M., and Luscher, B. "Postsynaptic clustering of major GABAA receptor subtypes requires the gamma 2 subunit and gephyrin." Nat Neurosci, (1998). 1(7), 563-71.

54. Fisher, J. L., Zhang, J., and MacDonald, R. L. "The role of alphal and alpha6 subtype amino-terminal domains in allosteric regulation of gamma-aminobutyric acida receptors."

55. Mol.Pharmacol. (1997). 52(4), 714-724.

56. R. S. Fisher and В. E. Alger, "Electrophysiological mechanisms of kainic acid-induced epileptiform activity in the rat hippocampal slice," J. Neurosci., 4, No. 5, 1312-1323 (1984).

57. Fedorov NB.The development of the system of recurrent inhibition in hippocampal field CAI in the early postnatal period. Biull Eksp Biol Med. 1990 Nov; 110(11):451-2.

58. Feigenspan, A., and Bormann, J. "Differential pharmacology of GABAA and GABAC receptors on rat retinal bipolar cells." Eur J Pharmacol, (1994). 288(1), 97-104.

59. Freund TF, Antal M. GABA-containing neurons in the septum control inhibitory interneurons in the hippocampus.Nature. 1988 Nov 10;336(6195):170-3.

60. Freund, T. F., and Buzsaki, G. "Interneurons of the hippocampus." Hippocampus, 6(4), 347470. (1996).

61. Freund, T. F., and Gulyas, A. I. "Inhibitory control of GABAergic interneurons in the hippocampus." Can J Physiol Pharmacol, (1997). 75(5), 479-87.

62. Fykse, E. M., and Fonnum, F. "Amino acid neurotransmission: dynamics of vesicular uptake." Neurochem Res, 21(9), 1053-60. (1996).

63. Ganguly, K., Schinder, A. F., Wong, S. Т., and Poo, M. "GABA itself promotes the developmental switch of neuronal GABAergic responses from excitation to inhibition." Cell, 105(4), 521-32. (2001).

64. Garrett KM, Saito N, Duman RS, Abel MS, Ashton RA, Fujimori S, Beer B, Tallman JF, Vitek MP, Blume AJ. Differential expression of gamma-aminobutyric acidA receptor subunits. Mol Pharmacol. 1990 May;37(5):652-7

65. Gold MR, Martin AR. Characteristics of inhibitory post-synaptic currents in brain-stem neurones of the lamprey. J Physiol. 1983 Sep;342:85-98.

66. Graham D, Faure C, Besnard F, Langer SZ. Pharmacological profile of benzodiazepine site ligands with recombinant GAB A A receptor subtypes. Eur Neuropsychopharmacol. 1996 May;6(2):l 19-25.

67. Gregory CA, Rigg GP, Illidge CM, Matthews RC. Quantification of Escherichia coli genomic DNA contamination in recombinant protein preparations by polymerase chain reaction and affinity-based collection. Anal Biochem. 2001 Sep 1;296(1):114-21.

68. Greka, A., Koolen, J. A., Lipton, S. A., and Zhang, D. "Cloning and characterization of mouse GABA(C) receptor subunits." Neuroreport, 9(2), 229-32. (1998).

69. Hablitz JJ, Lebeda FJ. Role of uptake in gamma-aminobutyric acid (GABA)-mediated responses in guinea pig hippocampal neurons.Cell Mol Neurobiol. 1985 Dec;5(4):353-71.

70. Hackam, A. S., Wang, T. L., Guggino, W. В., and Cutting, G. R. "Sequences in the amino termini of GABA rho and GABA(A) subunits specify their selective interaction in vitro." J Neurochem. 70(1), 40-46. (1998).

71. Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, В., and Sigworth, F. J. "Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches." Pflugers Arch. 391(2), 85-100. (1981).

72. N. Hajos, Z. Nusser, E.A. Rancz, T.F. Freund, I. Mody, Cell type and synapse-specific variability in synaptic GABA-A receptor occupancy, Eur. J. Neurosci. 12 (2000) 810-818.

73. Heaulme, M., Chambon, J. P., Leyris, R., Wermuth, C. G., and Biziere, K. "Characterization of the binding of 3H.SR 95531, a GABAA antagonist, to rat brain membranes." J.Neurochem. 48(6), 1677-1686. (1987).

74. Higashima M, Kinoshita H, Koshino Y. Differences in the effects of Zolpidem and diazepam on recurrent inhibition and long-term potentiation in rat hippocampal slices. Neurosci Lett. 1998 Apr 3;245(2):77-80.

75. Higashima M, Kinoshita H, Yamaguchi N, Koshino Y. Differences in enhancing effects of Zolpidem and benzodiazepine drugs on recurrent inhibition in rat hippocampal slices Psychopharmacology (Berl). 1997 Jun;131(4):394-8.

76. Hill, D. R., Bowery, N. G., and Hudson, A. L. (1984). "Inhibition of GABAB receptor binding by guanyl nucleotides." J Neurochem, 42(3), 652-7.

77. Hille B. Ionic Channels of excitable membranes. 2nd Ed.Sinauer, Sunderland, MA. 1992

78. Hedblom, E. and Kirkness, E. F. "A novel class of GABAA receptor subunit in tissues of the reproductive system." J Biol.Chem. 272(24), 15346-15350. (1997).

79. Herb, A., Wisden, W„ Luddens, H„ Puia, G., Vicini, S„ and Seeburg, P. H. "The third gamma subunit of the gamma-aminobutyric acid type A receptor family." Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 89(4), 1433-1437. (1992).

80. Hevers, W. and Luddens, H. "The diversity of GABAA receptors. Pharmacological and electrophysiological properties of GABAA channel subtypes." Mol.Neurobiol. 18(1), 35-86. (1998).

81. Hevers, W. and Luddens, H. "Pharmacological heterogeneity of gamma-aminobutyric acid receptors during development suggests distinct classes of rat cerebellar granule cells in situ." Neuropharmacology. 42(1), 34-47. (2002).

82. Horenstein, J., Wagner, D. A., Czajkowski, C., and Akabas, M. H. "Protein mobility and GABA-induced conformational changes in GABA(A) receptor pore-lining M2 segment." Nat.Neurosci. 4(5), 477-485. (2001).

83. Humphrey, P. P. and Barnard, E. A. "International Union of Pharmacology. XIX. The IUPHAR receptor code: a proposal for an alphanumeric classification system." Pharmacol.Rev. 50(2), 271-277. (1998).

84. Hutcheon B, Fritschy JM, Poulter MO. Organization of GABA receptor alpha-subunit clustering in the developing rat neocortex and hippocampus. Eur J Neurosci. 2004 May;19(9):2475-87.

85. Im, M. S., Hamilton, B. J., Carter, D. В., and Im, W. B. (1992). "Selective potentiation of GABA-mediated CI- current by lanthanum ion in subtypes of cloned GABAA receptors." Neurosci.Lett. 144(1-2), 165-168.

86. Im, W. B. and Pregenzer, J. F. "Interaction of La3+ with GABAA receptors in rat cerebrocortical membranes as detected with 35S.t-butylbicyclophosphorothionate binding." Eur J Pharmacol. 245(2), 111-117. (1993).

87. Inomata, N., Tokutomi, N., Oyama, Y., and Akaike, N. "Intracellular picrotoxin blocks pentobarbital-gated CI- conductance." Neurosci Res. 6(1), 72-75. (1988).

88. Ishizuka N, Weber J, Amaral DG. Organization of intrahippocampal projections originating from С A3 pyramidal cells in the rat. J Comp Neurol. 1990 May 22;295(4):580-623.

89. Jechlinger, M., Pelz, R., Tretter, V., Klausberger, Т., and Sieghart, W. "Subunit composition and quantitative importance of hetero-oligomeric receptors: GABAA receptors containing alpha6 subunits." J Neurosci. 18(7), 2449-2457. (1998).

90. Jackson, M. F., Esplin, В., and Capek, R. "Activity-dependent enhancement of hyperpolarizing and depolarizing gamma-aminobutyric acid (GABA) synaptic responses following inhibition of GABA uptake by tiagabine." Epilepsy Res, 37(1), 25-36. (1999a).

91. Jackson, M. F., Esplin, В., and Capek, R. "Inhibitory nature of tiagabine-augmented GABAA receptor-mediated depolarizing responses in hippocampal pyramidal cells." J Neurophysiol, 81(3), 1192-8. (1999b).

92. Johnston, G. A. "GABAA receptor pharmacology." Pharmacol Ther, 69(3), 173-98. (1996).

93. Jones, M. V. and Westbrook, G. L. "The impact of receptor desensitization on fast synaptic transmission." Trends Neurosci. 19(3), 96-101. (1996).

94. K. A. Jones, B. Borowsky, J. A. Tamm, et al., "GABA(B) receptors function as a heteromeric assembly of the subunits GABA(B)R1 and GABA(B)R2," Nature, 396, No. 6712, 674-679 (1998).

95. Kardos, J. and Guidotti, A. "Desesitization of GABA-stimulated 36.СГ influx in cerebellar granule cell.", New York: Raven Press, ed. by Biggio, G. et. al., pl61-174. (1988).

96. M. P. Kavanaugh, J. L. Arriza, R. A. North, et al., "Electrogenic uptake of gamma-aminobutyric acid by a cloned transporter expressed in Xenopus oocytes," J. Biol. Chem., 267, No. 31, 22007-22009 (1992).

97. Khan, Z. U., Gutierrez, A., and De Bias, A. L. "The alpha 1 and alpha 6 subunits can coexist in the same cerebellar GABAA receptor maintaining their individual benzodiazepine-binding specificities." J Neurochem. 66(2), 685-691. (1996a).

98. Khan, Z. U., Gutierrez, A., Miralles, C. P., and De Bias, A. L. "The gamma subunits of thenative GABAA/benzodiazepine receptors." Neurochem.Res. 21(2), 147-159. (1996b).t

99. Kim, Y., Glatt, H., Xie, W., Sinnett, D., and Lalande, M. "Hupian gam'riia-aminobutyric acid-, type A receptor alpha5 subunit gene (GABRA5): characterization and structural organization of the 5' flanking region." Genomics. (1997) 42(3), 378-387.

100. Kirkness, E. F. and Fraser, С. M. "A strong promoter element is located between alternative exons of a gene encoding the human gamma-aminobutyric acid-type A receptor beta 3 subunit (GABRB3)." J Biol.Chem. (1993)268(6), 4420-4428.

101. Klausberger, Т., Ehya, N., Fuchs, K., Fuchs, Т., Ebert, V., Sarto, I., and Sieghart, W. "Detection and binding properties of GABA(A) receptor assembly intermediates." J Biol.Chem. (2001a) 276(19), 16024-16032.

102. Klausberger, Т., Sarto, I., Ehya, N., Fuchs, K., Furtmuller, R., Mayer, В., Huck, S., and Sieghart, W. "Alternate use of distinct intersubunit contacts controls GABAA receptor assembly and stoichiometry." J Neurosci. (200lb)21(23), 9124-9133.

103. Kleshchevnikov AM, Fedorov NB, Voronin LL. Suppression of the "fast" IPSP when superimposed on the "slow" IPSP as a possible cause of priming in the mouse hippocampus. Neirofiziologiia. 1990;22(6):730-9.

104. Kofuji, P., Wang, J. В., Moss, S. J., Huganir, R. L., and Burt, D. R. "Generation of two forms of the gamma-aminobutyric acidA receptor gamma 2-subunit in mice by alternative splicing." J Neurochem. (1991)56(2), 713-715.

105. S.N. Kolbaev, Modulation of GABA-activated currents in rat isolated cerebellar neurons by lanthanum ions, Bull. Exp. Biol. Med. 133 (2002) 44-47.

106. Kolbaev SN, Sharonova IN, Vorob'ev VS, Skrebitskii VG. Mechanisms of tacrine modulation of the GABA-activated currents in the isolated cerebellar neurons. Biull Eksp Biol Med. 1999 May;127(5):539-42.

107. Korpi, E. R., Kuner, Т., Kristo, P., Kohler, M., Herb, A., Luddens, H., and Seeburg, P. H. "Small N-terminal deletion by splicing in cerebellar alpha 6 subunit abolishes GABAA receptor function." J Neurochem. (1994) 63(3), 1167-1170.

108. Korpi, E. R., Kuner, Т., Seeburg, P. H., and Luddens, H. "Selective antagonist for the cerebellar granule cell-specific gamma-aminobutyric acid type A receptor." Mol Pharmacol. (1995)47(2), 283-289.

109. Koulen, P., Brandstatter, J. H., Enz, R., Bormann, J., and Wassle, H. "Synaptic clustering of GABA(C) receptor rho-subunits in the rat retina." Eur J Neurosci. (1998)10(1), 115-127.

110. Kukkonen JP, Lund PE, Akerman KE. 2-aminoethoxydiphenyl borate reveals heterogeneity in receptor-activated Ca(2+) discharge and store-operated Ca(2+) influx. Cell Calcium. 2001 Aug;30(2): 117-29.

111. Kuner, R., Kohr, G., Grunewald, S., Eisenhardt, G., Bach, A., and Kornau, H. C. "Role of heteromer formation in GABAB receptor function." Science, (1999)283(5398), 74-7.

112. Lacaille-JC; Mueller-AL; Kunkel-DD; Schwartzkroin-PA . Local circuit interactions between oriens/alveus interneurons and CA1 pyramidal cells in hippocampal slices: electrophysiology and morphology,J-Neurosci. 1987 Jul; 7(7): 1979-93, (1987)

113. Lacaille-JC; Schwartzkroin-PA. Stratum lacunosum-moleculare interneurons of hippocampal CA1 region. I. Intracellular response characteristics, synaptic responses, and morphology, J-Neurosci. 1988 Apr; 8(4): 1400-10, (1988a)

114. Laurie, D. J., Seeburg, P. H., and Wisden, W. "The distribution of 13 GABAA receptor subunit mRNAs in the rat brain. II. Olfactory bulb and cerebellum." J Neurosci. (1992)12(3), 1063-1076.

115. Lavenex P, Amaral DG. Hippocampal-neocortical interaction: a hierarchy of associativity. Hippocampus. 2000;10(4):420-30.

116. Levitan, E. S., Blair, L. A., Dionne, V. E., and Barnard, E. A. "Biophysical and pharmacological properties of cloned GABAA receptor subunits expressed in Xenopus oocytes." Neuron. (1988) 1(9), 773-781.

117. Li, M. and De Bias, A. L. "Coexistence of two beta subunit isoforms in the same gamma-aminobutyric acid type A receptor." J Biol.Chem. (1997) 272(26), 16564-16569.

118. Liu Q.Y., Schaffner A.E., Li Y.X., Dunlap V., Barker J.L. Up-regulation of GABAA current by astrocytes in cultured embryonic rat hippocampal neurons. J. Neurosci. 1996. V.16. N.9. P.2912-2923.

119. Liu QY, Schaffner AE, Chang YH, Marie D, Barker JL. Persistent activation of GABA(A) receptor/Cl(-) channels by astrocyte-derived GABA in cultured embryonic rat hippocampal neurons.J Neurophysiol. 2000 Sep;84(3): 1392-403.

120. Lorente de No Studies on the structure of the cerebral cortex.II. Continuation of the study of the ammonic system.J. Psyhol.Neurol(Leipzig), (1934)v.46,l 13-117

121. Lopez-Tellez JF, Vela J, del Rio JC, Ramos B, Baglietto-Vargas D, Santa-Maria C, Ruano D, Gutierrez A, Vitorica J. Postnatal development of the alphal containing GABAA receptor subunit in rat hippocampus. Brain Res Dev. 2004 Jan 31; 148(1): 129-41.

122. Louiset, E., McKernan, R., Sieghart, W., and Vaudry, H. "Subunit composition and pharmacological characterization of gamma-aminobutyric acid type A receptors in frog pituitary melanotrophs." Endocrinology. (2000) 141(3), 1083-1092.

123. Luddens, H., Seeburg, P. H., and Korpi, E. R. "Impact of beta and gamma variants on ligand-binding properties of gamma-aminobutyric acid type A receptors." Mol.Pharmacol. (1994)45(5), 810-814.

124. Ma, J. Y. and Narahashi, Т. "Differential modulation of GABAA receptor-channel complex by polyvalent cations in rat dorsal root ganglion neurons." Brain Res. (1993a)607(l-2), 222232.

125. Ma, J. Y. and Narahashi, Т. "Enhancement of gamma-aminobutyric acid-activated chloride channel currents by lanthanides in rat dorsal root ganglion neurons." J Neurosci. (1993b)13(l 1), 4872-4879.

126. MacDonald, R. L. and Twyman, R. E. "Kinetic properties and regulation of GABAA receptor channels." Ion Channels. (1992) 3, 315-343.

127. Macdonald, R. L., and Olsen, R. W. "GABAA receptor channels." Annu Rev Neurosci, (1994)17,569-602.

128. Magleby KL, Stevens CF. The effect of voltage on the time course of end-plate currents. J Physiol. 1979 May;223(l): 151-71.

129. Malherbe, P., Draguhn, A., Multhaup, G., Beyreuther, K., and Mohler, H. "GABAA-receptor expressed from rat brain a- and b- subunit cDNAs displays potentiation by benzodiazepine receptor ligands." Brain Res.Mol.Brain Res. (1990a) 8(3), 199-208.

130. Malherbe, P., Sigel, E., Baur, R., Persohn, E., Richards, J. G., and Mohler, H. "Functional expression and sites of gene transcription of a novel alpha subunit of the GABAA receptor in rat brain." FEBS Lett. (1990b)260(2), 261-265.

131. Mamalaki, C., Barnard, E. A., and Stephenson, F. A. "Molecular size of the gamma-aminobutyric acidA receptor purified from mammalian cerebral cortex." J Neurochem. (1989)52(1), 124-134.

132. Margrie, A. Meyer, A. Caputi, H. Monyer, M. T. Hasan, A.T. Schaefer, W. Denk, M. Brecht Neurotechnique Targeted Whole-Cell Recordings in the Mammalian Brain In Vivo. Neuron, Vol. 39, 911-918, September 11, 2003

133. Mehta, A. K. and Ticku, M. K. (1999). "An update on GABAA receptors." Brain Res Brain Res Rev. 29(2-3), 196-217.

134. Mertens, S., Benke, D., and Mohler, H. "GABAA receptor populations with novel subunit combinations and drug binding profiles identified in brain by alp." J Biol.Chem. (1993) 268(8), 5965-5973.

135. R. Miles, K. Toth, A. I. Gulyas, et al., "Differences between somatic and dendritic inhibition in the hippocampus," Neuron, 16, No. 4, 815-823 (1996).

136. Mintz, I. M., and Bean, B. P. "GABAB receptor inhibition of P-type Ca2+ channels in central neurons." Neuron, (1993)10(5), 889-98.

137. Misgeld-U; Deisz-RA; Dodt-HU; Lux-HD. The role of chloride transport in postsynaptic inhibition of hippocampal neurons, Science. 1986 Jun 13; 232(4756): 1413-5(1992)

138. Misgeld-U; Frotscher-M. Postsynaptic-GABAergic inhibition of non-pyramidal neurons in the guinea-pig hippocampus, Neuroscience. 1986 Sep; 19(1): 193-206

139. U. Misgeld, M. Bijak, and W. Jarolimek, "A physiological role for GABAB receptors and the effects of baclofen in the mammalian central nervous system," Prog. Neurobiol., 46, No. 4, 423-462(1995).

140. Y. Momose-Sato, K. Sato, A. Hirota, et al., "Optical characterization of a novel GABA response in early embryonic chick brainstem," Neuroscience, 80, No. 1, 203-219 (1997).

141. Mohler, H., and Fritschy, J. M. (1999). "GABAB receptors make it to the top—as dimers." Trends Pharmacol Sci, 20(3), 87-9. 300001323.

142. Momose-Sato, Y., Sato, K., Hirota, A., Sakai, Т., Yang, X. S., and Kamino, K. (1997). "Optical characterization of a novel GABA response in early embryonic chick brainstem." Neuroscience, 80(1), 203-19.

143. Monyer, H. and Jonas, P. (1995). "Polymerase Chain Reaction Analisis of Ion Channel Expression in Single Neurons of Brain Slices." "Single-Channel Recording", 2nd edition., New York: Plenum Press, ed. by Sakmann, B. et. al. p360-361

144. Mott, D. D., and Lewis, D. V. (1994). "The pharmacology and function of central GABAB receptors." Int Rev Neurobiol, 36, 97-223.

145. Nayeem, N., Green, T. P., Martin, I. L., and Barnard, E. A. (1994). "Quaternary structure of the native GABAA receptor determined by electron microscopic image analysis." J Neurochem. 62(2), 815-818.

146. Neelands, T. R. and MacDonald, R. L. (1999b). "Incorporation of the pi subunit into functional gamma-aminobutyric Acid(A) receptors." Mol.Pharmacol. 56(3), 598-610.

147. Neher E, Sakmann B, Steinbach JH. The extracellular patch clamp: a method for resolving currents through individual open channels in biological membranes.

148. Pflugers Arch. 1978 Jul 18;375(2):219-28.

149. S. Nurse, J.C. Lacaille, Do GABAA and GABAB inhibitory postsynaptic responses originate from distinct interneurons in the hippocampus? Can. J. Physiol. Pharmacol. 75 (5) (1997) 520-525.

150. Nutt, D. J. and Malizia, A. L. (2001). "New insights into the role of the GABA(A)-benzodiazepine receptor in psychiatric disorder." Br.J Psychiatry. 179, 390-396.

151. Obata, Т., Morelli, M., Concas, A., Serra, M., and Yamamura, H. I. (1988). "Modulation of GABA-stimulated chloride influx into membrane vesicles from rat cerebral cortex by benzodiazepines.", New York: Raven Press, ed. by Biggio, G. et. al pi 75-187.

152. M Okada, К Onodera,C Van Renterghem,l W Sieghart, T Takahashi. Functional Correlation of GABAA Receptor a Subunits Expression with the Properties of IPSCs in the Developing Thalamus. The Journal of Neuroscience, March 15, 2000, 20(6):2202-2208

153. Olsen, R. W„ Bergman, M. O., Van Ness, P. C., Lummis, S. C., Watkins, A. E., Napias, C., and Greenlee, D. V. (1981). "gamma-Aminobutyric acid receptor binding in mammalian brain. Heterogeneity of binding sites." Mol.Pharmacol. 19(2), 217-227.

154. Opacka-Juffry, J., Hirani, E., Dawson, G. R., Luthra, S. K., and Hume, S. P. (1999). "Evaluation of methyl-3H.L655,708 and [ethyl-3H]RY80 as putative PET ligands for central GABA(A) receptors containing alpha5 subunit." Nucl.Med.Biol. 26(7), 743-748.

155. T. S. Otis, K. J. Staley, and I. Mody, "Perpetual inhibitory activity in mammalian brain slices generated by spontaneous GABA release," Brain Res., 545, Nos. 1/2, 142-150 (1991).

156. Pan, Z. H., Zhang, D., Zhang, X., and Lipton, S. A. (2000). "Evidence for coassembly of mutant GABAC rhol with GABAA gamma2S, glycine alphal and glycine alpha2 receptor subunits in vitro." Eur J Neurosci, 12(9), 3137-45.

157. Payne, J. A., Rivera, C., Voipio, J., and Kaila, K. (2003). "Cation-chloride co-transporters in neuronal communication, development and trauma." Trends Neurosci. 26(4), 199-206.

158. K. L. Perkins and R. K. Wong, "Ionic basis of the postsynaptic depolarizing GABA response in hippocampal pyramidal cells," J. Neurophysiol., 76, No. 6, 3886-3894 (1996).

159. Perreault-P; Avoli-M . Effects of low concentrations of 4-aminopyridine on CA1 pyramidal cells of the hippocampus, J-Neurophysiol. 1989 May; 61(5): 953-70.

160. Persohn, E., Malherbe, P., and Richards, J. G. (1992). "Comparative molecular neuroanatomy of cloned GABAA receptor subunits in the rat CNS." J Comp Neurol. 326(2), 193-216.

161. Pirker, S., Schwarzer, C., Wieselthaler, A., Sieghart, W., and Sperk, G. (2000). "GABA(A) receptors: immunocytochemical distribution of 13 subunits in the adult rat brain." Neuroscience. 101(4), 815-850.

162. Ponomarenko A A, Korotkova TM, Sergeeva OA, Haas HL Multiple GABAA receptor subtypes regulate hippocampal ripple oscillations Eur J Neurosci. 2004 Oct;2Q(8):2141-8.

163. J. С. Poncer, R. A. McKinney, В. H. Gahwiler, et al., "Either N- or Ptype calcium channels mediate GABA release at distinct hippocampal inhibitory synapses," Neuron, 18, No. 3, 463-472(1997).

164. Pritchett, D. В., Luddens, H., and Seeburg, P. H. (1989). "Type I and type II GABAA-benzodiazepine receptors produced in transfected cells." Science, 245(4924), 1389-92.

165. Qian, H., and Ripps, H. (1999). "Response kinetics and pharmacological properties of heteromeric receptors formed by coassembly of GABA rho- and gamma 2-subunits." Proc R Soc Lond В Biol Sci, 266(1436), 2419-25.

166. Mol.Pharmacol. 45(6), 1061-1070.

167. Quirk, K., Whiting, P. J., Ragan, С. I., and McKernan, R. M. (1995). "Characterisation of delta-subunit containing GABAA receptors from rat brain." Eur.J Pharmacol. 290(3), 175181.

168. Ramos B, Lopez-Tellez JF, Vela J, Baglietto-Vargas D, del Rio JC, Ruano D, Gutierrez A, Vitorica J. Expression of alpha 5 GABAA receptor subunit in developing rat hippocampus. Brain Res Dev Brain Res. 2004 Jul 19; 15 l(l-2):87-98.

169. Rastogi SK, Ticku MK. Anticonvulsant profile of drugs which facilitate GABAergic transmission on convulsions mediated by a GABAergic mechanism. Neuropharmacology. 1986 Feb;25(2):175-85.

170. Rempel-Clower NL, Zola SM, Squire LR, Amaral DG. Three cases of enduring memory impairment after bilateral damage limited to the hippocampal formation. J Neurosci. 1996 Aug 15;16(16):5233-55.

171. Rivera, C., Voipio, J., Payne, J. A., Ruusuvuori, E., Lahtinen, H., Lamsa, K., Pirvola, U., Saarma, M„ and Kaila, K. (1999). "The K+/C1- co-transporter KCC2 renders GABA hyperpolarizing during neuronal maturation." Nature, 397(6716), 251-5.

172. A. Rodriguez-Moreno, О. Herreras, and J. Lerma, "Kainate receptors presynaptically downregulate GABA-ergic inhibition in the rat hippocampus," Neuron, 19, No. 4, 893-901 (1997).

173. Ruano, D., Benavides, J., Machado, A., and Vitorica, J. (1993). "Regional differences in the enhancement by GABA of 3H.zolpidem binding to omega 1 sites in rat brain membranes and sections." Brain Res. 600(1), 134-140.

174. P. A. Salin and D. A. Prince, "Spontaneous GABAA receptormediated inhibitory currents in adult rat somatosensory cortex," J. Neurophysiol., 75, No. 4, 1573-1588 (1996).

175. Sakurai, S. Y„ Kume, A., Burdette, D. E., and Albin, R. L. (1994). "Quantitative autoradiography of 3H.t-butylbicycloorthobenzoate binding to the gamma-aminobutyric acid receptorA complex." J Pharmacol.Exp.Ther. 270(1), 362-370.

176. Sarto, I., Klausberger, Т., Ehya, N. Mayer, В., Fuchs, K., and Sieghart, W. (2002). "A novel site on gamma 3 subunits important for assembly of GABA(A) receptors." J Biol.Chem. 277(34), 30656-30664.

177. Saxena, N. C. and MacDonald, R. L. "Assembly of GABAA receptor subunits: role of the delta subunit." J Neurosci. 14(11 Pt 2), 7077-7086. (1994)

178. Scanziani, M. (2000). "GABA spillover activates postsynaptic GABA(B) receptors to control rhythmic hippocampal activity." Neuron, 25(3), 673-81.

179. Schmid, G., Bonanno, G., and Raiteri, M. "Functional evidence for two native GABAA receptor subtypes in adult rat hippocampus and cerebellum." Neuroscience. 73(3), 697-704. (1996).

180. Schmid, L., Bottlaender, M., Fuseau, C., Fournier, D., Brouillet, E., and Maziere, M. "Zolpidem displays heterogeneity in its binding to the nonhuman primate benzodiazepine receptor in vivo." J Neurochem. 65(4), 1880-1886. (1995).

181. Schonrock, В., and Bormann, J. (1993). "Functional heterogeneity of hippocampal GABAA receptors." Eur J Neurosci, 5(8), 1042-9.

182. A. Schousboe, "Pharmacological and functional characterization of astrocytic GABA transport: a short review," Neurochem. Res., 25, Nos. 9/10, 1241-1244 (2000).

183. Schwartzkroin P, Wester К Long-lasting facilitation of a synaptic potential following tetanization in the in vitro hippocampal slice, Brain Res, 89, 107-119, (1975)

184. Scotti AL, Reuter H. Synaptic and extrasynaptic gamma -aminobutyric acid type A receptor clusters in rat hippocampal cultures during development.Proc Natl Acad Sci USA. 2001 Mar 13;98(6):3489-94. Epub 2001 Mar 06

185. Scotti E,Brunig I, Sidler C, Fritschy JM. Intact sorting, targeting, and clustering of gamma-aminobutyric acid A receptor subtypes in hippocampal neurons in vitro.J Comp Neurol. 2002 Jan 28;443(l):43-55.

186. Sieghart, W. "Structure and pharmacology of gamma-aminobutyric acidA receptor subtypes." Pharmacol.Rev. 47(2), 181-234. (1995).

187. Sigel, E., Baur, R., Trube, G., Mohler, H., and Malherbe, P. "The effect of subunit composition of rat brain GABAA receptors on channel function." Neuron. 5(5), 703-711. (1990).

188. Sharonova IN, Vorobjev VS, Haas HL. Interaction between copper and zinc at GABA(A) receptors in acutely isolated cerebellar Purkinje cells of the rat. Br J Pharmacol. 2000 Jun;130(4):851-6

189. Semyanov A. Cell type specificity of GABA(A) receptor mediated signaling in the hippocampus. Curr Drug Targets CNS Neurol Disord. 2003 Aug;2(4):240-7. Review.

190. Semyanov A, Kullmann DM. Relative picrotoxin insensitivity distinguishes ionotropic GABA receptor-mediated IPSCs in hippocampal interneurons. Neuropharmacology. 2002 Sep;43(4):726-36.

191. Semyanov A, Morenkov E, Savin A, Godukhin O. In vivo hippocampal kindling occludes the development of in vitro kindling-like state in CA1 area of rat hippocampal slices. Epilepsy Res. 2000 Jan;38(l):75-85.

192. Sem'ianov AV. Glutamate- and Gaba-mediated extrasynaptic diffuse signaling in the hippocampus Zh Vyssh Nerv Deiat Im I P Pavlova. 2004 Jan-Feb;54(l):68-84.

193. V.G. Skrebitsky, S.N. Kolbaev, I.N. Sharonova, V.S. Vorobjev, Lanthanum modulation of GABAA receptor-mediated currents in acutely isolated cerebellar Purkinje cells of the rat, Eur. J. Neurosci. 26412 (Suppl. 11) (2000) 41

194. Soghomonian, J. J., and Martin, D. L. (1998). "Two isoforms of glutamate decarboxylase: why?" Trends Pharmacol Sci, 19(12), 500-5.

195. J. J. Soghomonian and D. L. Martin, "Two isoforms of glutamate decarboxylase: why?" Trends Pharmacol. Sci., 19, No. 12, 500-505 (1998).

196. Sperk, G., Schwarzer, C., Tsunashima, K„ Fuchs, K„ and Sieghart, W. (1997). "GABA(A) receptor subunits in the rat hippocampus I: immunocytochemical distribution of 13 subunits." Neuroscience, 80(4), 987-1000.

197. SPENCER WA, KANDEL ER,. Electrophysiological properties of an archicortical neuron. Ann N Y Acad Sci. 1961 Sep 6;94:570-603. No abstract available.

198. Stell, В. M. and Mody, I. "Receptors with different affinities mediate phasic and tonic GABA(A) conductances in hippocampal neurons." J Neurosci. 22(10), RC223(l-5) (2002)

199. Stephenson, F. A. (1995). "The GABAA receptors." Biochem.J. 310 ( Pt 1)1-9.

200. S. Takamori, J. S. Rhee, C. Rosenmund, et al., "Identification of a vesicular glutamate transporter that defines a glutamatergic phenotype in neurons," Nature, 407, No. 6801, 189194 (2000).

201. Tietz EI, Kapur J, Macdonald RL. Functional GABAA receptor heterogeneity of acutely dissociated hippocampal CA1 pyramidal cells. J Neurophysiol. 1999 Apr;81(4): 1575-86.)

202. Thalmann-RH. Blockade of a late inhibitory postsynaptic potential in hippocampal CA3 neurons in vitro reveals a late depolarizing potential that is augmented by pentobarbital, Neurosci-Lett. 1988 Dec 19; 95(1-3): 155-60(1988)

203. Toyoshima, C. and Unwin, N. (1988). "Ion channel of acetylcholine receptor reconstructed from images of postsynaptic membranes." Nature. 336(6196), 247-250.

204. Thomson AM, Bannister AP, Hughes DI, Pawelzik H. Differential sensitivity to Zolpidem of IPSPs activated by morphologically identified CA1 interneurons in slices of rat hippocampus. Eur J Neurosci. 2000 Feb;12(2):425-36.

205. Tretter, V., Ehya, N., Fuchs, K., and Sieghart, W. (1997). "Stoichiometry and assembly of a recombinant GABAA receptor subtype." J Neurosci. 17(8), 2728-2737/

206. Twyman, R. E., Green, R. M., and MacDonald, R. L. (1992). "Kinetics of open channel block by penicillin of single GABAA receptor channels from mouse spinal cord neurones in culture." J Physiol. 445, 97-127.

207. Unwin, N. (1993). "Nicotinic acetylcholine receptor at 9 A resolution." J Mol.Biol. 229(4), 1101-1124.

208. Vorobjev VS, Sharonova IN, Sergeeva OA, Haas HL. Modulation of ATP-induced currents by zinc in acutely isolated hypothalamic neurons of the rat. Br J Pharmacol. 2003 JuI;139(5):919-26.

209. Verdoorn, T. A., Draguhn, A., Ymer, S., Seeburg, P. H., and Sakmann, B. (1990). "Functional properties of recombinant rat GABAA receptors depend upon subunit composition." Neuron. 4(6), 919-928.

210. Wardle RA, Poo MM Brain-derived neurotrophic factor modulation of GABAergic synapses by postsynaptic regulation of chloride transport. J Neurosci. 2003 Sep 24;23(25):8722-32.

211. Wegelius, K., Pasternack, M., Hiltunen, J. O., Rivera, C., Kaila, K., Saarma, M., and Reeben, M. (1998). "Distribution of GABA receptor rho subunit transcripts in the rat brain." Eur.J Neurosci. 10(1), 350-357.

212. Wisden, W., Laurie, D. J., Monyer, H., and Seeburg, P. H. "The distribution of 13 GABAA receptor subunit mRNAs in the rat brain. I. Telencephalon, diencephalon, mesencephalon." J Neurosci. 12(3), 1040-1062.(1992).

213. Wohlfarth, К. M., Bianchi, M. Т., and MacDonald, R. L. "Enhanced neurosteroid potentiation of ternary GABA(A) receptors containing the delta subunit." J.Neurosci. 22(5), 1541-1549. (2002).

214. Wegelius K., Pasternack M., Hiltunen J. O., Rivera, C., Kaila, K., Saarma, M., and Reeben, M. "Distribution of GABA receptor rho subunit transcripts in the rat brain." Eur J Neurosci, 10(1), 350-7. (1998).

215. Wotring, V. E., Chang, Y., and Weiss, D. S. "Permeability and single channel conductance of human homomeric rhol GABAC receptors." J Physiol, 521 Pt 2, 327-36. (1999).

216. Xu, M., and Akabas, M. H. "Identification of channel-lining residues in the M2 membrane-spanning segment of the GABA(A) receptor alphal subunit." J Gen Physiol, 107(2), 195-205. (1996).

217. Zhang, D., Pan, Z. H., Awobuluyi, M., and Lipton, S. A "Structure and function of GABA(C) receptors: a comparison of native versus recombinant receptors." Trends Pharmacol Sci, 22(3), 121-32. .(2001).

218. Zhang, H. G., Lee, H. J., Rocheleau, Т., ffrench-Constant, R. H., and Jackson, M. B. "Subunit composition determines picrotoxin and bicuculline sensitivity of Drosophila gamma-aminobutyric acid receptors." Mol Pharmacol, 48(5), 835-40. (1995b).

219. Yoon, K. W., Covey, D. F., and Rothman, S. M. "Multiple mechanisms of picrotoxin block of GABA-induced currents in rat hippocampal neurons." J Physiol. 464423-439. (1993).

220. Zhang, D., Pan, Z. H., Awobuluyi, M., and Lipton, S. A. "Structure and function of GABA(C) receptors: a comparison of native versus recombinant receptors." Trends Pharmacol.Sci. 22(3), 121-132. (2001).

221. Zhorov, B. S. and Bregestovski, P. D. "Chloride channels of glycine and GABA receptors with blockers: Monte Carlo minimization and structure-activity relationships." Biophys.J. 78(4), 1786-1803. (2000)

222. Zhu, W. J., Wang, J. F., Corsi, L., and Vicini, S. "Lanthanum-mediated modification of GABAA receptor deactivation, desensitization and inhibitory synaptic currents in rat cerebellar neurons." J Physiol. 511 ( Pt 3), 647-661. (1998).