Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Функциональная морфология стенки тонкой кишки и ее соединительной ткани телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Функциональная морфология стенки тонкой кишки и ее соединительной ткани телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности"

На правах рукописи

УСОВА ЕКАТЕРИНА АЛЕКСАНДРОВНА

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ СТЕНКИ ТОНКОЙ КИШКИ И ЕЕ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ ТЕЛЯТ КРАСНО-ПЕСТРОЙ ПОРОДЫ НА ЭТАПЕ НОВОРОЖДЕННОСТИ

06.02.01 - Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

3 ОКТ 2013

Саранск - 2013

005533899

Работа выполнена на кафедре клинической диагностики, внутренних незаразных болезней и патологии животных ФГБОУ ВПО « Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия им. П.А.Столыпина» и на кафедре морфологии и физиологии животных ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор,

Защита диссертации состоится « 12 » октября 2013 г. в 12 _ часов на заседании диссертационного совета Д.212.117.15 при ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва» (430904, г. Саранск, р. п. Ял га ул. Российская, 31

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке имени М.М. Бахтина ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва» по адресу: 430005, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

Объявление о защите и автореферат диссертации опубликованы на официальном сайте Мордовского государственного университета им. Н.П. Огарева www.mrsu.ru. и на Интернет-сайте ВАК : И«р://уак..ed.gov.ru

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

заслуженный деятель науки РФ Тельцов Леонид Петрович доктор биологических наук, профессор Шубина Ольга Сергеевна (Мордовский государственный педагоги ческий институт им. М.Е. Евсевьева, зав. кафедрой, г. Саранск); доктор биологических наук, профессор Великанов Валериан Иванович (Нижегородская сельскохозяйственная академия, зав. кафедрой, г. Нижний Нов город.

ФГБОУ ВПО «Ивановская государственная сельскохозяйственная академия им. академика Д.К. Беляева», г. Иваново.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совет;

Т.А. Романова

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

1. -ЫН2- аминные группы белков

2. ВКСА - внутриклеточный сетчатый аппарат

3. Г(б) - гиалуронидаза бактериальная

4. Г(с) - гиалуронидаза стрептококковая

5. Г(т) - гиалуронидаза тестикулярная

6. ГК - гиалуроновая кислота

7. ГХИ - гистохимические исследования

8. ГАГ - гликозаминогликаны

9. Гц - гистиоциты (макрофаги)

10..ДНК РНАза-дезоксирибонуклеаза 11 .-5-8- - дисульфидные группы белков

12.ИА - индекс апоптоза

13.-СООН- - карбоксильные группы белков

14.Кл - клетка

15.КВ - коллагеновые волокна

16.г - коэффициент корреляции

17.ЛМИ - люминисцентно-микроскопические исследования

18.МВ - межклеточное вещество

19.Мкл - мезенхимные клетки

20.МИ - митотический индекс 21 .РВ - ретикулярные волокна

22. РН Аза-рибонуклеаза

23.СТ - соединительная ткань

24.СГК - средний гистохимический коэффициент

25.СФК- средний флуоресцентный коээфициент

26.-БН- - сульфгидрильные группы белков

27.ТС - толуидиновый синий

28.ТХУ - трихлоруксусная кислота

29.ФИ - фагоцитарный индекс ЗСШаО-хлорид натрия

31 .ЩФ - щелочная фосфатаза

32.ЭВ - эластические волокна

ЗЗ.ЭПР - эндоплазматический ретикулум

34.ЦЯО - цитоплазменно-ядерное отношение

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность работы. Познания морфофункционального развития органов пищеварения у сельскохозяйственных животных необходимы для разработки рационов полноценного кормления, обеспечивающего получение в среднем от одной коровы 5-7 тыс. кг молока в год, жирностью 3,8-4,0 %, а также для получения 1100-1300 г среднесуточного привеса на откорме крупного рогатого скота (Эрнст, 2004; Дунин, 2009,2013).

Особый интерес представляют исследования соединительной ткани (CT) и крови организма, в связи с изучением клеточной дифференцировки, иммунологии, радиационной биологии, трансплантации органов и тканей (Серов, Шехтер,1981; Горышина, 1990; Данилов, 1997; Тельцов,2013). Наряду с механической, опорной функций, она участвует в важнейших процессах внутреннего обмена, как в поддержании гомеостаза, в биологической защите, трофике всех тканей и органов, депонировании и в транспортировке различных веществ (Юрина, Радостина,1990;Серов,2009). По меткому выражению К. Meyer (1963), «почти все проблемы биологии и медицины связаны с деятельностью рыхлой волокнистой CT».

Сведения о строении клеточных дифферонов и межклеточного вещества (MB) соединительной ткани приведены в известных монографиях и научных работах: H.A. Юрина, А.И. Радостина (1990), М. Kusche (1990), H.B. Бережков (1991), М.П. Пальцев, A.A. Иванов (1995), Р.К. Данилов с соавтор. (1997), П.П. Потехин (1999), Ю.И. Афанасьев, Н.П. Омельяненко (2001), И.Я. Бозо, Р.В. Деев, Г.П. Пинаев (2010).

Однако, эти работы, посвященные выяснению общебиологических проблем развития CT, выполнены чаще всего на коже лабораторных животных (крыса, мышь, хомячок) ( Радостина, 1985; Заварзин, 1988; Афанасьев, 1989; Данилов с соавтор., 1997). CT стенки тонкой кишки домашних животных, и в частности крупного рогатого скота, остаются недостаточно изученной. Развитию CT стенки тонкой кишки плодов коров разных пород посвящены работы: Л.П. Тельцова (1969, 1984), В.Г. Ульянова (1969), Л.К. Хаби-буллиной (1972), И.В. Добрыниной (1999); в постнатальном онтогенезе -Ю.Т. Техвер (1974), А.Ф. Рыжих, Л.К. Хабибуллиной (1978), Л.П. Тельцова с соавтор. (1995, 1997; 2013), Н.Б. Бертеневой (2002). Развитие CT стенки тонкой кишки у телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности не изучено. Нет гистохимических сведений о локализации и динамике полисахаридов, нуклеиновых кислот, белков, белковых групп, аминокислот в клеточных дифферонах (фибробластах, фиброцитах, макрофагах, ретикулярных, плазматических, тучных и др. клетках) и в межклеточном веществе CT стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста. Официально красно-пестрая порода крупного рогатого скота зарегистрирована в РФ 16.09.1998 г. 50 % поголовья этой породы находится в Мордовии (Прудов, Бальцанов, 1994; Дунин, Бальцанов, Рыжова,2010).

1.2. Цель и задачи исследования. Целью работы является изучение закономерностей развития стенки тонкой кишки и её соединительной ткани телят красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста (на этапе новорожденности). В задачи исследования входило:

1. Изучить возрастную и сравнительную морфологию (архитектонику) стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы новорожденного этапа развития.

2. Изучить возрастную морфологию клеточных дифферонов соединительной ткани стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы на новорожденном этапе развития.

3.Изучить цитохимию и провести люминисцентно-микроскопические исследования нуклеиновых кислот, белков, белковых групп, аминокислот, углеводов клеток соединительной ткани стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности.

Работа выполнена на кафедре клинической диагностики, незаразных болезней и ветсанэкспертизы ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» и в лаборатории «Гистофизиология» кафедры морфологии и физиологии животных Аграрного института Мордовского госуниверситета им. Н.П. Огарева (зав. лаборатории проф. Л.П. Тельцов). Работа является самостоятельным разделом комплексной темы «Механизмы морфогенеза и закономерности индивидуального развития организмов (в норме и патологии)». № госрегистрации 01200704777. Тема рекомендована президиумом РАН как фундаментальное направление в России (Поиск,2003). Комплексного изучения органов пищеварения (двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок) телят этой породы не проводилось. Эти исследования необходимы для практики, так как гибель новорожденных телят от заболеваний органов пищеварения высока (Денисов, Чикирин,2006; Сулейманов,2011).

Научная новизна. Впервые представлена возрастная архитектоника стенки и динамика слизистой оболочки тонкой кишки телят красно-пестрой породы новорожденного этапа развития. Полученные сведения являются морфофункциональным статусом или «нормой» для этой породы на этапе новорожденности. Прослежена динамика ядра и цитоплазмы, цитоплазмен-но-ядерные отношение (ЦЯО) клеточных дифферонов СТ: ретикулярных клеток, адвентициальных клеток, фибробластов, макрофагов, лимфоцитов, плазмоцитов, лаброцитов СТ кишечной стенки. Впервые установлена взаимосвязь между митотическим индексом (МИ) и индексом апоптоза (ИА) клеточных дифферонов СТ, изучена локализация и возрастная динамика поли-сахаридного, нуклеопротеидного, белкового обмена клеточных дифферонов СТ и межклеточного вещества стенки тонкой кишки телят крупного рогатого скота красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста.

1.4. Научно-практическая значимость работы. Полученные сведения расширяют имеющиеся представления: по возрастной архитектонике стенки двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок телят на этапе новорожденности; по специфичности развития СТ собственной пластинки и подслизистой основы слизистой оболочки, мышечной и серозной оболочек;

по дифференцировке ретикулярных клеток, фибробластов, макрофагов, лимфоцитов, эозинофилов, плазмобластов, плазмоцитов, лаброцитов; по динамике ядра и цитоплазмы, ЦЯО; МИ и ИА клеточных дифферонов СТ; по локализации и возрастной динамике полисахаридного, нуклеопротеидного, белкового обмена клеточных дифферонов и межклеточного вещества СТ стенки тонкой кишки. Установленная закономерность возрастной динамики и архитектоники развития клеточной стенки и клеток СТ является показателем нормы для данной породы. Они необходимы как сравнительный материал, для диагностики различных заболеваний кишечной стенки телят красно-пестрой породы крупного рогатого скота.

Ряд положений диссертации являются фундаментальными и могут использоваться для написания учебных руководств, пособий и в учебном процессе на ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетах.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Возрастная архитектоника стенки и слизистой оболочки тонкой кишки, динамика развития клеточных дифферонов СТ у телят красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста.

2.Морфология клеточных дифферонов СТ стенки тонкой кишки на этапе новорожденности.

3. Цитохимическая и люминисцентно-микроскопическая характеристика полисахаридного, нуклеопротеидного, белкового обмена клеточных дифферонов СТ кишечной стенки телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности.

1.5. Реализация результатов исследования. Основные положения диссертации опубликованы в 8 работах, в том числе 2 - в журнале рекомендованном ВАК Минобразования РФ. Материалы исследования используются в научных и учебных целях в Московской, Санкт-Петербургской, Казанской академиях ветеринарной медицины; в Саратовском, Омском, Алтайском, Воронежском, Краснодарском аграрном университетах; в Брянской, Ульяновской, Костромской сельскохозяйственной академиях и в Мордовском госуниверситете.

1.6. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на н.-пр. конф. « Ветеринарная медицина XXI в.» (Ульяновск,2011,2012;) на Ога-ревских чтениях (Саранск, 2011, 2012), и на 9-ом Конгрессе морфологов (Самара, 2012).

1.7. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 143 страницах компьютерного текста и включает разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список использованной литературы. Список включает 282 источника, в том числе 63 зарубежных. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 42 рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены на 5 плодах 9-месячного возраста и 18 телятах красно-пестрой породы крупного рогатого скота в возрасте от рождения до 15-суточного возраста и 3 взрослых животных 5 лет. Сбор материала проводился в ООО ПР «Агросоюз-Левженский», ООО «Александров», в плем-заводе «Атьминский» Республики Мордовия и в личных подворьях этих хо-зяйств.Сбор материала проводился совместно с преподавателями и аспирантами кафедры морфологии и физиологии животных Мордовского ГУ им. Н.П.Огарева.

Материалом исследования служили кусочки двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок (тонкая кишка или тонкий кишечник)(табл. 1).

После обескровливания животного, вскрытия брюшной полости, органы осматривались на объект патологии, записывались характерные признаки и регистрационные параметры. Тонкий кишечник извлекался из брюшной полости, отбирался материал (кусочки) для фиксации в 12,0 % растворе формалина и в жидкости Карнуа для гистологических, люминесцентно-микроскопических исследований (ЛМИ) и гистохимических исследований (ГХИ). Кусочки брали из разных мест: в двенадцатиперстной - из краниального, медиального (в местах впадения протоков поджелудочной железы и печени) и каудального участков; в тощей - из краниального, медиального и каудального участков; и в подвздошной - из краниального, медиального и каудального участков.

Уплотнение материала проводили путем заливки в парафин (Меркулов, 1969; Кононский, 1976; Семченко, 2006). При проведении гисто- и цитологических исследований учитывалась возможность возникновения объективных и субъективных артефактов (Войно-Ясенецкий, Жаботинский, 1970).

Для изучения возрастных структурных изменений соединительной ткани (СТ) кишечной стенки срезы окрашивали гематоксилин-эозином . Арги-рофильные (ретикулярные) волокна соединительной ткани импрегнировали по Футу. Эластические волокна СТ окрашивали по Вейгерту, коллагеновые -по Маллори и Ван-Гизону. Клеточные элементы крови и тучные клетки (лаб-роциты) выявляли по Романовскому-Гимза , плазмобласты и плазмоциты -по Унна-Паппенгейму (реакция по Браше). Для фибробластов, макрофагов и ретикулярных клеток устанавливали митотический индекс (МИ) и индекс апоптоза (ИА) из тысячи клеток (%о)

Гистохимическими методами исследования выявляли: РНК и ДНК пи-ронин-метиловым по Браше, по Фельгену-Розенбеку; основные и кислые белки окрашивали водным раствором бромфенолового синего (Елисеев, 1967) и сулемабромфеноловым синим - по Бонхегу; гистоновые группы белков - по Альферту и Гешвинду; тирозин в белках - реакцией Морели-Сислея в модификации Лилли и Миллона; аргинин - реакцией Сакагуша в модификации Бэкера; триптофан - реакцией Адамса (Пирс, 1962; Лилли, 1969; Кононский, 1976; Луппа, 1980).

Таблица 1.

Схема исследований развития стенки тонкой кишки и её соединительной ткани у телят от рождения до 15 - суточного возраста

Сульфгидрильные (-8Н-) группы белков определяли реакцией по Бар-нетту и Зелигману, дисульфидные (-Б-Б-) - реакцией с надмуравьиной кислотой и альциановым синим по Адамсу и Слоперу. Совместное выявление этих групп белков проводили реакцией по Барнетту-Зелигману. Аминогруппы (-ЫН2-) белков выявляли по Ясума и Ичикава и по Берстону, карбоксильные (-СООН-) группы - по Барнетту-Зелигману (Пирс, 1962; Кононский, 1976;Семчеко,2006)

Гликоген и гликопротеины выявляли ШИК-реакцией (ШИФФ-, или РАЗ-реакцией) по Шабадашу. Для подтверждения выявляемых Шик-позитивных веществ проводили последовательно ацетилирование и деаце-тилирование по Лилли (1969). Углеводные компоненты протеогликанов -гликозаминогликаны (ГАГ) - выявляли 0,1 % водным раствором толуиди-нового синего (ТС) при разных значениях рН (2,2, 4,2, 5,0, 7,0,), коллоидным железом - по Хэйлу, основным коричневым - по Шубичу (1966, 1979, 1982), альциановым синим — по Стидмену (Виноградов, 1971). Сульфатирование проводили реакцией по Елисееву (1967).

Срезы для ЛМИ флуохромировали в растворах акридинового оранжевого (АО) в разведениях 1:1000 и 1:10000 (при рН 2,2,4,2, 5,0, 7,0). Для идентификации полинуклеотидов, белков, полисахаридов в клетках и межклеточном веществе (МВ) при ЛМИ использована рабочая схема, предложенная Л.П. Тельцовым (1997). В основу этой схемы положен трехкратный контроль (Зеленин, 1967; Черногрядская и соавт., 1978).

В процессе изучения динамики роста кишечной стенки, ее оболочек, собственной пластинки слизистой оболочки стенки двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок проводили измерения на 1, 2, 5, 10, 15 сутки. Проводили цитометрию клеток СТ: ретикулярных клеток, фибробластов, макрофагоцитов, лимфоцитов, плазмоцитов и лаброцитов. Измеряли ядро и цитоплазму клеток, вычисляли площадь ядра, всей клетки и выводили цито-плазменно- ядерное отношение (ЦЯО). Определяли митотический индекс (МИ) и индекс апоптоза (ИА) из 1000 клеток в миллипроцентах (%о).

Цифровые данные обрабатывались статистическими методами исследования. Определяли среднюю арифметическую (М) и среднее арифметическое отклонение (± ш). В необходимых случаях вычисляли коэффициент корреляции (г) (Автандилов, 1992). Результаты математической обработки заносили в протоколы, на основании которых составляли таблицы. Сравнительная коррелятивная оценка полученных данных гистологическими, цитохимическими, люминесцентно-микроскопическими и биометрическими методами исследования проводилась с учетом возрастных индивидуальных особенностей здоровых телят.

Для объективного сопоставления получаемых результатов гисто- и цитохимических, а также ЛМИ выводился средний гистохимический коэффициент (СГК) и средний флуоресцентный коэффициент (СФК) для каждой группы клеток по формуле: СГК или СФК 5а + 46 + Зв + 2г + 1д + Ое/п, где буквы а, б, в, г, д, е - означают количество клеток с определенной интенсивностью окраски или свечения; цифры 5,4, 3, 2, 0 - степень интенсивности ок-

рашивания реакции или свечения; п - общее количество подсчитанных клеток этой группы. Отсутствие окраски обозначали 0. Степень интенсивности окрашивания и флуоресценции определяли по пятибалльной системе: следы окраски - 1 (одним баллом); слабая окраска (можно установить примерную локализацию - два балла; умеренная окраска - три балла; хорошая окраска -четыре балла; очень интенсивная окраска - пять баллов). Для определения наивысшей интенсивности окраски, первоначально просматривали все препараты всех возрастов и самую интенсивную окраску принимали за пять баллов. Затем сопоставляли окраску с самой интенсивной. Результаты заносили в баллах в тетрадь. Для выявления СГК и СФК использовали препараты от пяти животных, а от каждого блока по одной методике просматривали 10-20 серийных срезов. СГК и СФК выводили из 50-100 клеток одинаковой попу-ляционной группы. Суммированный результат переводился в проценты для сравнения и для гистограмм.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Морфология стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы на этапе новорожденное™

Проведенные гистологические, цитологические, гистохимические, люми-нисцентномикроскопические, биометрические исследования стенки тонкой кишки у телят красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста показали, что в строении двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок имеются отличия [1, 3] Особенность строения выражается: а) по возрастной архитектонике кишечной стенки; б) по динамике роста оболочек и асинхрон-ность развития их слоев кишечной стенки двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок; в) по высоте кишечных складок; г) по высоте и ширине ворсинок; д) по глубине внедрения и ширине кишечных крипт; е) по возрастной локализации дуоденальных желез; ж) по динамике роста толщины мышечной оболочки; з) по динамике роста серозной оболочки; и) по относительному росту в процентах по Броди (Б2) кишечной стенки, ее оболочек; к) по напряженности прироста по суткам в процентах по Броди (Б 0 оболочек и всей кишечной стенки [2,4, 5, 6]. На специфичность строения тонкой кишки телят красной степной породы у новорожденных телят указывают в своих работах Л.П. Тельцов, В.А. Чегина, Л.П. Антошина (1989); а телят черно-пестрой породы - Л.П. Антошина, Л.П. Тельцов, Т.А. Романова (1993), Л.П. Антошина (1996), В. А. Столяров (2001), у телят костромской породы - Е.О. Михайлевская (2010, 2012), у телят красно-пёстрой породы - И.Г. Музыка (2011).

Установлено, что стенка двенадцатиперстной кишки до 5 - 7 суток, а тощей и подвздошной кишок у телят до 7 - 10 суток после рождения, особенно слизистая оболочка, подвергаются значительной деструкции и перестройке. Поэтому генетически обусловленная перестройка кишечной стенки, в связи со сменой питания, требует тщательного соблюдения правил кормле-

ния и содержания телят в этом возрасте. Отклонения от норм содержания и кормления матерей (коров) ведут к различным заболеваниям, в том числе таких широко распространенных как диарея новорожденных телят (Щербаков, 1983; Сисягин, 1990; Ким, 1992; Сулейманов 2011. Исследования Л.П. Тель-цова, П.А. Ильина, И.Р. Шашанова (1992), Л.П. Антошиной (1996) и исследования Л.П. Тельцова, Н.Б. Бертеневой, (2002) показали, что этап новорожденное™ для развития организма телят относится к критической фазе. Проведенные исследования (Сидорова, Тельцов, 2010) показали, что этап новорожденное™ характеризуется: а) сменой питания, дыхания и терморегуляции организма (Боголюбский, 1968; Шмидт, 1968; Техвер, 1974; Аршавский, 1967,1982; Тельцов, Ильин, Столяров, 1993); б) активным приспособлением к условиям гравитации (Эрнст, Лиманов, 1976); в) проявлением безусловных и приобретением условных рефлексов (Малашко,1993); г) снижением в первые сутки массы тела новорожденных, а затем интенсивным ростом (Тельцов, 1984); д) адаптационной перестройкой состава периферической крови (Чеги-на, 1993); е) сменой ферментативной активности тонкой кишки (Grant et al., 1989; Антошина, Тельцов, Щербаков, 1992; Тельцов, Ильин, Столяров, 1993; Музыка, 2011); ж) формированием иммунологической защиты (Игнатьев, 1990; Belak et al., 1990; Федоров, 1991; Ройт, 1991; Тельцов, Столяров , 1994).

Полученные сведения по динамике роста толщины стенки, ее оболочек, ворсинок, крипт, складок, дуоденальных желез тонкой кишки у телят красно-пестрой породы являются показателями нормального развития («норма») для телят этой породы. Отклонения от средней арифметической (М) в пределах менее ± 38 является показателем индивидуальной изменчивости, а отклонения за пределами ± 35 является показателем патологии (Меркулова, 1990). Как показали исследования В.Г. Ульянова (1969), у больных диспепсией телят симментальской породы толщина слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки у новорожденных телят уменьшается до 550 мкм; слизистая оболочка в тощей кишке - до 517,0 мкм, в подвздошной - до 606,0 мкм.

Сопоставляя полученные данные, с имеющимися в литературе (Ульянов, 1969; Хабибуллина, 1972; Техвер, 1974; Рыжих, Хабибуллина, 1978; Тельцов, 1984; Кононский, 1992; Тельцов, Ильин, Столяров, 1993; Уханаева, 1993; Столяров, 2001) по динамике роста ворсинок, крипт, дуоденальных желез, оболочек и стенки тонкой кишки у новорожденных телят разных пород, можно отметить некоторые породные отличия [4, 5]. По данным Л.К. Хаби-буллиной (1972) и А.Ф. Рыжих, Л.К. Хабибуллиной (1978), у телят холмогорской породы высота ворсинок несколько меньше, а глубина залегания крипт поверхностнее, чем у телят черно-пестрой породы (Антошина, 1996). К сожалению, сведений о породных отличиях строения кишечной стенки у новорожденных телят пока недостаточно. Наши данные о динамике развития тонкой кишки у телят красно-пестрой породы новорожденного этапа получены впервые. Эти сведения необходимы как для студентов техникумов и вузов зооветеринарного профиля, так и для практических врачей и для работников животноводства.

Особый интерес для сравнительного анализа и эволюционной морфологии, физиологии представляют фундаментальные данные - отношения количества крипт к количеству ворсинок в разных отделах тонкой кишки в возрастном аспекте на условно принятую единицу измерения (на 550 мкм длины слизистой оболочки). Установлено, что для двенадцатиперстной кишки соотношение крипт к ворсинкам составляет: у новорожденных телят до приема молозива 8,6:5,5, или 1,56; 1 сут -8,6:5,0 или 1,72; 3 сут - 8,9:4,5 или 1,97; 5 сут - 9,2:4,0 или 2,3; 10 сут -10,2:4,8 или 2,12; 15 сут - 11,3:5,2 или 2,17; а у взрослых это соотношение равно - 9,2:3,57 или 2,57. Для тощей кишки эти показания составляют соответственно: у новорожденных - 11,4:5,84 или 1,95; 1 сут -11,4:5,84 или 1,95; 3 сут - 11,6:5,4 или 2,14; 5 сут - 12,0:5,0 или 2,4; 10 сут - 13,2:5,4 или 2,44; 15 сут - 15,6:6,0 или 2,6; а у взрослых животных -12,9:4,31 или 2,99. Для подвздошной кишки эти показатели: у новорожденных - 10,4:5,8 или 1,79; 1 сут - 10,6:5,8 или 1,82; 3 сут -11,0:5,4 или 2,03; 5 сут - 11,8:5,0 или 2,36; 10 сут - 13,6:5,2 или 2,61; 15 сут - 14,4:5,4 или 2,66; а у взрослых животных - 11,7:3,82 или 3,04. Необходимо учитывать, что эти данные получены на плоскостных гистологических препаратах и только частично отражают истинное соотношение количества ворсинок и крипт в данном возрасте при трехмерном измерении. Однако, они могут быть маркёром строения стенки тонкой кишки для животных разных пород.

Толщина стенки двенадцатиперстной кишки вне складок у телят от рождения до 15 суток увеличивается от 2127,3±130,2 мкм до 2722,6±236,6 мкм, т.е.на 595,3 мкм, а в области складок - от 3198,7±144,3 мкм до 3453,6±342,2 мкм, т.е. на 59,3 мкм. Слизистая оболочка вне складок увеличивается на 167,4 мкм, а в области складок -на 317,6 мкм, мышечная оболочка - на 406,3 мкм, серозная - на 209,4 мкм. Для тощей кишки эти показатели соответственно: толщина стенки вне складок увеличивается на 510,9 мкм, а в области складок - на 54,0 мкм, слизистой оболочки - на 148,6 и на 688,3 мкм. Для подвздошной - толщина стенки увеличивается на 615,5 и на 558,1 мкм, слизистой оболочки - на 160,6 и на 131,8 мкм. Биометрические исследования показали, что толщина стенки двенадцатиперстной кишки вне складок у 15-суточных телят, по сравнению с толщиной стенки у взрослых животных (5 лет) составляет 88,7 %, слизистая оболочка - 92,9 %, мышечная - 96,2 %, серозная - 84,5 % (рис. 1). Аналогичные данные по тощей кишке: 95,1; 106,5; 77,0; 83,2 % (рис.2) и по подвздошной: 92,3; 98,2; 94,2; 78,3 % (рис. 3).

Изучая одновременно относительный рост в процентах по Броди (Б2) (за весь исследуемый срок к 5-летнему возрасту) и интенсивность прироста в % по Броди (Б,) за короткий промежуток времени (сутки) установлены повышенный и пониженный темпы роста. Повышенный рост толщины стенки двенадцатиперстной кишки наблюдается: у телят на 1 и на 10 сут, а пониженный - на 15 сутки ; слизистой оболочки: повышенный рост - у новорожденных телят и на 10 сутки, а пониженный - на 1 , 5 и 15 сутки. Для мышечной оболочки повышенный рост установлен: у новорожденных, на 1, на 5 и 15 сутки, а пониженный - на 10 сутки; для серозной оболочки: повышенный -

Плоды 9 мое

□ Стенка вне складок О Мышечная оболочка

в Слизистая оболочка О Серозная оболочка

Рис. 1. Относительный рост (в %) толщины стенки и ее оболочек двенадцатиперстной кишки (вне складок) у телят красно-пестрой породы

Рис. 2. Относительный рост (в %) толщины стенки и ее оболочек тощей кишки (вне складок) у телят красно-пестрой породы

3«

г!Г

60 -ДО - 20 - 11 -п г]| — | — I I

Плоды 9 мес 1 сутк* 5 суткр Ю сутк 15 сутки

Е С с м тенка вне ск ышечная об л а; ШОК оч кг С В Сл □ Се изистая оболочка розная оболочка

Рис. 3. Относительный рост (в %) толщины стенки и ее оболочек подвздошной кишки (вне складок) у телят красно-пестрой породы

на 5 и 10 сутки, а пониженный - на 1 сутки. Относительный рост в % по Броди стенки тощей кишки повышен: на 15 сутки; а понижен - на 1 и 5 сутки; для слизистой оболочки наблюдается повышенный рост на 5 сутки, а пониженный - на 1 и 10 сутки; для мышечной оболочки- повышенный рост -на 5 сутки, а пониженный - на 1 сутки; для серозной оболочки - повышенный - на 5 и 10 сутки, а пониженный - на 1 и 5 сутки.

Повышенный рост в процентах по Броди (Б^ стенки подвздошной кишки выявлен: у телят на 5 сутки, а пониженный - на 1 и 15 сутки ; для слизистой оболочки - повышенный рост наблюдается у на 10 сутки; а пониженный - на 1 и 5 сутки ; для мышечной оболочки - повышенный на 1 и 10 сутки, а пониженный - на 5 сутки; для серозной - повышенный рост установлен у телят на 10 сутки, а пониженный - на 5 сутки. Эти данные свидетельствуют не только о различной динамике развития стенки двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок, но и о различной динамике развития составляющих оболочек [1 -6]. Асинхронность роста оболочек и структур тонкой кишки обусловлена различной локальной функциональной нагрузкой. Установлено, что перестройка архитектоники стенки двенадцатиперстной кишки наблюдается у телят красно-пестрой породы в возрасте до 5 - 7 суток, а стенки тощей и подвздошной кишок позже - до 7 - 10 суток. Этот возраст можно отнести к критической фазе развития стенки тонкой кишки телят красно - пестрой породы. Сведения по развитию стенки и ее оболочек тонкой кишки у телят этой породы получены впервые.

3.2. Морфология соединительной ткани стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности

Исследования соединительной ткани (СТ) стенки тонкой кишки телят от рождения до 15-суточного возраста показали, что в собственной пластинке слизистой оболочки она развивается по типу ретикулярной, а в подслизистой основе, в мышечной и серозной оболочках СТ развивается по типу рыхлой волокнистой неоформленной ткани. Аналогичную закономерность архитектонике стенки тонкой кишки у телят черно-пестрой породы от рождения до 6-месячного возраста описывают Л.П. Тельцов, И.В. Добрынина (2002). Установлено, что СТ стенки двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок имеют специфические отличия по набору и количеству клеточных дифферо-нов, строению межклеточного вещества (МВ).У телят на этапе новорожденности в СТ ворсинок происходит увеличение количества фибробластов в 1,3 раза и макрофагов - в 1,1 раза. Количество лимфоцитов увеличивается в 1,5 раза, плазмоцитов и лаброцитов увеличивается незначительно. Количество клеток в поле зрения микроскопа при 600-кратном увеличении (ок. 15 х об. 4 в СТ области крипт фибробластов и макрофагов увеличивается в 2,4 раза, лимфоцитов - в 1,5 раза. Количество плазмоцитов и лаброцитов не увеличивается, а ретикулярных клеток - снижается в 1,3 раза (табл.2). Иная динамика количества клеток в СТ области подслизистой основы. Количество фибробластов увеличивается в 2,4 раза, лимфоцитов - в 1,4 раза, макрофагов в

СТ в 1,4 раза, плазмобластов - в 1,6 раза, эозинофилов - в 2,1 раза, лаброци-тов - в 1,5 раза. Количество плазмоцитов остается без изменения. Эти данные по СТ стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы получены впервые. Они свидетельствуют не только о локальной дифференцировке СТ стенки кишечника, но и различной функции выполняемой СТ в области ворсинок и в области крипт (Наттегееп, 1980; Яопе\у, ЬгИуеуу-БгесоП, 1982; Тельцов, 1984).

Таблица 2. - Динамика клеток соединительной ткани слизистой оболочки стенки тощей кишки у телят красно-пестрой породы

на этапе новорожденности_

№ по поряд ку Объект исследования Возраст животных

плоды 9-мес возраста телята 1 суток телята 5 суток телята 10 суток телята 15 суток

1 Ретикулярные клетки 120-170 90-140 120-140 90-120 140-160 80-120 130-150 80-100 120-140 70-90

2 Макрофаги 50-90 50-80 60-100 70-90 70-100 60-80 75-100 100-120 80-100 80-110

3 Фибробласты 50-90 90-120 50-90 90-120 75-110 100-120 80-110 100-115 85-110 90-120

4 Лимфоциты 40-60 20-40 60-80 40-60 60-80 50-70 40-100 50-80 60-100 60-90

5 Плазмоциты 10-20 20-40 15-30 25-45 15-30 20-40 15-30 20-40 25-30 25-30

6 Лаброциты 10-12 20-30 12-16 25-40 20-30 35-50 20-30 35-40 20-30 35-40

Примечание: В числителе - количество клеток СТ в области ворсинок. В знаменателе - количество клеток СТ в области крипт. Среднее количество клеток в поле зрения микроскопа при 600-кратном увеличении (Ок. 15 х об. 40).

Структурной основой агрегированных лимфоузелков являются ретикулярные клетки и аргирофильный волокнистый остов (Дзигилевич, 1974; Тельцов, 1984; Добрынина, 1999; Столяров, 2001). Количество стромальных (ретикулярных) клеток в процентах снижается у телят от 1 суток до 15-суточного возраста от 16,4 ± 0,5 до 14,1 ± 1,0 %. У взрослых (5 лет) животных количество их в лимфоузелках составляет 12,0 ± 1,1 %. В процентном соотношении к другим клеточным популяциям количество бластов (всех видов, - больших лимфоцитов, нейтрофилов, эозинофилов, лаброцитов, макрофагов) повышается. По мнению К.М. Батуева (1974), показателем морфологической зрелости фолликул стенки кишки является процентное соотношение среднего продольного диаметра к среднему интервалу между фоллику-

лами. Это соотношение у 15 - сут. телят составляет 9,0. По данным Л.П. Тельцова, И.В. Добрыниной (2002) линейный коэффициент соотношения достигает уровня взрослых животных к 2 - 4-месячному возрасту телёнка и стабилизируется к 6-месячному возрасту.

Развитие клеточных дифферонов СТ стенки тонкой кишки (фибробла-стов, макрофагов, ретикулярных клеток, лимфоцитов, плазмобластов, лабро-цитов) происходит детерминировано, асинхронно и интегрировано (Быков, 1999; 2000). Для каждого клеточного дифферона свойственно: определенная возрастная динамика роста площади ядра и цитоплазмы их цитоплазменно-ядерного отношения (ЦЯО), митотический индекс (МИ), индекс апоптоза (ИА) (Проценко, Шпак, Доценко, 1987; Тельцов, Добрынина, 2002). Площадь ядра фибробласта на этапе новорожденное™ колеблется от 28,2 ± 1,9до 29,2 ± 2,0 кв. мкм., а у взрослых животных площадь ядра фибробласта 23,0 ± 2,1 кв. мкм. Площадь клетки колеблется от 91,2 ± 9,0 до 87,9 ± 8,6 кв. мкм. За исследуемый срок площадь фибробласта и ЦЯО не снижаются. Площадь ядра макрофагов почти не изменяется (от 25,4 ± 3,0 до 24,6±2,4 кв. мкм), как площадь клетки (от 110,0 ± 10,0 до 118,5 ±5,6 кв. мкм. У взрослых животных площадь макрофагов составляет 124,0 ±12,1 кв. мкм, ЦЯО - 4,0. Площадь ядра ретикулярной клетки колеблется от 34,7 ± 3,4 до 38,4 ± 4,0 кв. мкм., а площадь клетки - от 74,1±7,1 до 80,4 ±6,2 кв. мкм., ЦЯО не снижается.

Площадь ядра лимфоцита увеличивается незначительно от 13,8 ± 0,2 до 14,5 ± 0,9 кв. мкм., но не достигает размеров площади ядра лимфоцита у взрослых (5 лет) животных (21,2 ± 2,1 кв. мкм.). Площадь лимфоцита не увеличивается от 34,2 ±1,8 до 34,3 ± 3,7 кв. мкм., и уровня величины лимфоцита у взрослых животных не достигает (52,6 ± 4,6 кв. мкм.). ЦЯО колеблется по месяцам от 1,3 до 1,4. Площадь ядра плазмоцита до 15-суточного возраста теленка снижается от 21,9 ± 2,1 до 18,0 ± 0,9 кв. мкм. (Р<0,05). У взрослых животных площадь плазмоцита составляет 22,8 ± 2,1 кв. мкм. Площадь плазмоцита резко снижается у телят на 1 сутки до 65,9±7,0 кв. мкм, на 5 сутки -до 56,9±2,6 кв. мкм и остается на этом уровне до 15 суток (56,6 ± 4,2 кв. мкм). У взрослых площадь плазмоцита достигает до 67,8 ± 5,2 кв. мкм. ЦЯО колеблется от 2,0 до 2,2. Площадь ядра лаброцитов достоверно не изменяется (от 29,2±1,4 до 30,1 ± 3,1 кв. мкм), как и площадь клетки лаброцита (от 128,1±8,5 до 130,9 ± 7,0 кв. мкм.). ЦЯО колеблется от 3,2 до 3,3. У взрослых животных ЦЯО лаброцитов составляет 3,1. Предполагаем, что на этапе новорожденное™ функционирует другая популяция клеток СТ , по сравнению со взрослыми животными.

Митотически делящиеся (МИ) фибробласты, макрофаги чаще выявляются в СТ около стенки сосудов. У телят на этапе новорожденное™ количество делящихся фибробластов снижается от 8,0 ± 0,4 %о до 4,0 ± 0,2 %о (р<0,05), а индекс апоптоза (ИА) фибробластов увеличивается от 0,6 ± 0,02 до 0,9 ± 0,04 %о (Р<0,05). Поэтому отношение МИ к ИА изменяется в пределах от 10,0 до 6,6 (Р<0,05). МИ макрофагов снижается от 10,4 ± 0,5 до 3,0 ± 0,3 %о, (Р<0,05) а ИА возрастает у телят до 15-суточного возраста от 0,9±0,01до 1,1±0,09 %о (Р<0,05). Отношение МИ к ИА макрофагов снижается

от 10,4 до 3,0 (Р<0,05). МИ возрастает ретикулярных клеток до 15-суточноговозраста от 6,0 ± 0,5 до 12,4 ± 1,2 %о (Р<0,05), как и ИА - от 1,0 ±0,2 до 1,5 ± 0,1 %о (Р<0,05). Отношение МИ к ИА ретикулярных клеток возрастает от 6,6 до 8,2(Р<0,05) . Эти сведения подтверждают интенсивную перестройку клеточных дифферонов CT стенки тонкой кишки в раннем постна-тальном онтогенезе [6, 8].

У телят до 15 суток количество коллагеновых волокон (КВ) в межклеточном веществе (MB) кишечной стенки увеличивается. В подслизистой основе КВ формируются пучки из коллагеновых волокон. В собственной пластинке слизистой оболочки интенсивно окрашиваются аргирофильные волокна. Накопление основных и кислых белков в MB соединительной ткани стенки тонкой кишки происходит до 15-суточного возраста. В MB собственной пластинки происходит снижение аминных групп белков на этапе новорожденное™, а сульфгидрильных, дисульфидных и карбоксильных - повышение.

Соотношение энтероцитов к клеткам «мигрантов» в эпителиальном слое стенки кишки у телят красно-пестрой породы на этапе новорожденное™ снижается от 7,8:1 до 4,3:1 (Р<0,05) и остается на этом уровне у взрослых животных (4,1:1). Соотношение группы «мигрантов» со специфическими свойствами к утратившим специфическое строение изменяется в пользу первой. « Мигранты» лимфоциты чаще выявляются в базальной области энтероцитов (I зона) на ворсинке 72,8 %, в крипте - 95,6% от числа «мигрантов» лимфоцитов разных зон. В области ядер энтероцитов (II зона) лимфоцитов «мигрантов» меньше: на ворсинке - 16 %, в крипте - 3,8 %, а в апикальной области энтероцитов (III зона) соответственно- 10,4 % и 0,6 %. «Мигранты» эозинофилы выявляются во всех зонах: на ворсинке I зона - 62,4 %, II зона -26,3 %, III зона - 11,3 %; в криптах соответственно - 78,6 %, 18,4 %, 3,0 %. Глобулярные лейкоциты выявляются, в основном, в I зоне. Количество лаб-роцитов «мигрантов» в эпителии области ворсинок и крипт до 15-сут. возраста животных уменьшается. Располагаются они в ворсинке: I зона - 38,4 %, II зона - 50,1 %, III зона - 12,5 %, а в крипте -1 зона - 37,5 %, II зона - 38,4 %, III зона - 24,1 % от количества всех «мигрантов» лаброцитов. При постановке цитохимических реакций и ЛМИ клетки «мигранты» имеют картину, как и аналогичные клетки CT, за исключением повышенного содержания в «мигрантах» РНП, кислых белков и сульфгидрильных групп белков. Клетки «мигранты», утратившие специфическое строение, выявляются в виде одних ядер с полоской светлой цитоплазмой. Такие «мигранты» находятся между энтероцитами во всех трех зонах: в ворсинке - 56,0 %, 20,4 %, 23,6 %; в крипте - 68,4 %, 12,8 %, 19,8 %. В десквамированных эпителиальных «шнурах» дегенерирующих ворсинок всегда выявляются клетки «мигранты». Об этом указывает в своих работах Л.И. Аруин (1982), Л.П.Тельцов (1984), В.А.Столяров,2001; Т.А.Романова, (2010),

Процесс миграции клеток CT в кишечную полость обусловлен не только завершением жизненного цикла и избавлением от них организма. Во-первых, процесс миграции клеток является защитной функцией внутренней

среды организма (Зуфаров и др. 1974); во-вторых, это взаимодействие эпителия и СТ, сохраняющее гомеостаз кишечной стенки (Кнорре, 1971; Сур-вилло и др. 1974; Заварзин, 1976; Саркисов, 1977; Щелкунов, 1977); в третьих, опосредованное участие «мигрантов» в пищеварительном процессе (Бе-лоножко, 1969; Давлетова, 1974; Тельцов, 1984). Как показали исследования К.А. Зуфарова и др. (1974), введение микробов в просвет кишки крыс вызывает усиленную миграцию клеток СТ в эпителиальный пласт. При этом в эпителиальных «мигрантах» увеличивается количество лизосомоподобных образований. Эозинофильные гранулы выходят из эозинофилов и распадаются как МВ, так и в энтероцитах (Зуфаров и др., 1974). Миграция лейкоцитов и макрофагов в эпителий, очевидно, сопровождается фагоцитозом проникающих микроорганизмов, а лаброцитов и базофилов - связана с инактивацией биогенных аминов и др. токсических продуктов. Процесс миграции клеток СТ, по мнению К.А. Зуфарова и др. (1974), стимулирует образование энтеро-цитами лизосом, а продукты распада - проницаемость цитоплазматических мембран, пиноцитоз и фагоцитоз (Вагпе1, 1971). Экструзия эпителия вершины ворсинки и эмиграция клеток СТ сопровождается обогащением кишечного содержимого нуклеопротеидами, белками, белковыми группами и аминокислотами, а также внутриклеточными ферментами. Как показали исследования Л.П. Тельцова (2009), высокой активностью щелочной фосфатазы (ЩФ) обладают «мигранты» лимфоциты и десквамированный эпителий. Поэтому, можно предположить, что «мигранты», создавая определенную среду кишечного содержимого, способствует всасыванию содержимого и принимают участие в межуточном обмене, в целом, всей пищеварительной системы, и, в частности, в тонкой кишке.

3.3. Цитохимия и люминисцентно-микроскопические исследования клеток соединительной ткани стенки тонкой кишки телят красно - пестрой породы на этапе новорожденное™

Цитохимическими (ЦХИ) и люминесцентно-микроскопическими исследованиями (ЛМИ) установлена локализация и интенсивность реакции в клетках СТ ДНК и РНК, углеводов, белков, белковых групп, аминокислот (аргинин, тирозин, триптофан).

ДНК интерфазных фибробластов, макрофагов, лимфоцитов, ретикулярных клеток, плазмоцитов и плазмобластов, лаброцитов выявляются в виде равномерно распределенных гранулярных и нитчатых образований в ядре и в ядрышках и в небольших количествах - в цитоплазме. Интенсивность реакций на ДНК в различных клеточных дифферонах СТ неодинакова. Реакция на ДНК высокая в ядрах лимфоцитов, макрофагов, тучных клеток, плазмобластов, дифференцирующихся ретикулярных клеток лимфоузелков (Рис.4). Несколько слабее реакция на ДНК ядер адвентициальных клеток [7].

Рис. 4. Рис. 5.

Рис. 4. Лимфатический узелок стенки подвздошной кишки 15-суточного возраста. Реакция по Браше. Об. 100, ок. 10 1 - лимфоцит, 2 -плазмоцит, 3-ретикулярная клетка.

Рис. 5 Соединительная ткань собственной пластинки стенки тощей кишки телят 15 -суточного возраста. Люминисцентно-микроскопические исследования. Акридиновый оранжевый рН=7,0. Об. 40, ок.10 1- крипты, 2- лимфоцит, 3- плазмоцит.

Гистохимическими и люминисцентно-микроскопическими исследованиями установлено, что РНК в клетках СТ выявляются в виде крупных пи-ронинофильных гранул в ядре и в цитоплазме. Интенсивность реакции на РНК и свечение цитоплазмы красно-бурым цветом при рН 2,2 - 4,2 АО в разведении 1:1000 или 1:10000 при люминесцентно-микроскопическом исследовании плазмоцитов, тучных клеток, адвентициальных, ретикулярных клеток и лимфоцитов свечение их менее интенсивное (Рис.5). Ядра клеток СТ при ЛМИ светятся светло-желтым цветом, а цитоплазма красным, красно-бурым или буро-красным цветом, в зависимости от рН флуорохрома АО от 2,2 до 7,0 при разведении 1:1000 или 1:10000. Свечение ядер клеток СТ в исследуемый этап остается без изменений, а интенсивность цитоплазмы плазмоцитов, макрофагоцитов, фибробластов и лаброцитов увеличивается. Контрольные реакции с дезоксирибонуклеазой при разведении АО 1:10000 рН = 2,2, 4,2 и 5,0, 7,0 снижает свечение ядра: ретикулярных клеток от 3,6 до 0,5 баллов СФК, тучных клеток - от 4,2 до 0,5 баллов СФК, плазмоцитов от 4,0 до 0,5 баллов СФК, макрофагов от 4,2 до 0,5 баллов, лимфоцитов от 4,3 до 0,5 баллов СФК. Контрольные реакции с рибонуклеазой, трихлоруксусной кислотой, Шифф-аурамином и ДНКазой, ТХУК + Шифф-АУ свидетельствуют о локализации ДНК и высокой стабильности двухцепочной ДНК в ядре.Увеличение интенсивности свечения в цитоплазме клеток СТ связано с

накоплением в ней одноцепочной РНК. Это положение подтверждается контрольными реакциями с РНАзой, ТХУК, Шифф-АУ и ДНКазой + Шифф-АУ, ТХУК +Шифф-АУ, прикоторых происходит снижение интенсивности свечения в цитоплазме клеток СТ до 0,5 баллов СФК, изменение цветности свечения от красно-бурого до темно-зеленого.

Во всех клеточных дифферонах СТ происходит увеличение синтеза основных, кислых и гистоновых белков, а также аминокислот аргинина, тирозина, триптофана [7]. Содержание тирозина повышенно в плазмоцитах, триптофана - в эозинофилах, а аргинина - в макрофагах и фибробластах. Сульф-гидрильные, дисульфидные, карбоксильные белков также достигают максимальной реакции в клетках СТ к 15-суточному возрасту телят. Реакция на белковые группы интенсивнее в цитоплазме лаброцитов, плазмоцитов, фиб-робластов и макрофагов [7].

Цитохимические исследования показали, что содержание гликозами-ногликанов (ГАГ) и протеогликанов в фибробластах у телят от рождения до 15 суток повышается. Юные лаброциты СТ стенки тонкой кишки отличаются от зрелых слабой РАЗ-позитивной реакцией, у -метахромазией, окраской альциановым синим (АС), интенсивной реакцией гранул по Шубичу и Хейлу. Гранулы цитоплазмы зрелых лаброцитов метахроматичны, РАЗ-позитивны, выступают четко. Они интенсивно окрашиваются АС, по Романовскому и реактивом по Хейлу. Соотношение юных и зрелых лаброцитов в СТ стенки тонкой кишки с возрастом изменяется. У 15-суточных телят соотношение их равно как 1,5:1, а у 5-летних животных - как 0,2:1.

Идентификация ГАГ при ЛМИ проводилась по схеме проф. Тельцова (1997) ферментативным гидролизом (а - амилазой), сульфатированием, метилированием (мягким) с последующим деметилированием, метилированием (жестким) споследующим деметилированием при рН = 2,2 АО и рН = 4,2 и реакциями с хлоридом натрия 0,3 М раствором, 0,6 М раствором, 0,8 М раствором. Контроль с а - амилазой показал, что в ретикулярных, тучных клетках, плазмоцитах, фибробластах, макрофагах, лимфоцитах гликоген не обнаружен. Контроль с тестикулярной гиалуронидазой свидетельствует о наличии в исследуемых клетках гиалуроновой кислоты (ГК), хондроитина (X), хондроитин - 4 - сульфата (ХС - 4), хондроитин - 6 - сульфата (ХС - 6). Сульфатирование усиливает свечение этих соединений, что свидетельствует о наличии их в ядре и в цитоплазме. Наибольшее количество этих веществ выявляется в гранулах цитоплазмы тучных клеток, а у остальных клеток - в оболочке клетки и ядра. Мягкое метилирование отщепляет сульфатные группы, блокирует карбоксильные ГАГ, поэтому свечение ГК, X, ХС - 4, ХС - 6 исчезает. Деметилирование восстанавливает свечение ГК. Жесткое метилирование сопровождается десульфатацией, энтерификацией карбоксильных групп ГАГ. После деметилирования карбоксильные группы не восстанавливаются, поэтому свечения несульфатированных ГАГ и сульфатированных ГАГ не происходит. Для подтверждения истинной локализации и идентификации полисахаридов проведены реакции с 0,3 М, 0,6 М и 0,8 М растворами хлорида натрия. При реакции с 0,3 М раствором исчезает свечение ГК, но со-

храняется с сульфатированными ГАГ, при реакеции с 0,6 М раствором сохраняется свечение гепарина (Г), но свечение ГК, X, ХС - 4, ХС - 6 исчезает. Контроль с 0,8 М раствором хлорида натрия сохраняет свечение несульфати-рованных и сульфатированных ГАГ и протеогликанов.

Проведенные исследования по развитию СТ стенки тонкой кишки у телят красно-пестрой породы на раннем постнатальном онтогенезе ( от рождения до 15-сут. возраста) позволяют сделать следующие обобщения. Первое. Исследования проведены на телятах новой, не изученной красно-пестрой породы на этапе новорожденности в сложный, ответственный, специфический отрезок времени онтогенеза. Установлено, что в этом этапе происходит: а) увеличение количественного и качественного состава клеточных дифферонов СТ. Причем, клеточный состав в каждой популяции строго соответствует определенному этапу развития, б) процесс формирования в межклеточном веществе, коллагеновых (КВ), аргирофильных (АВ) и эластических волокон (ЭВ) различный. Этот процесс лабильный и имеет возрастной специфический обмен синтеза КВ и коллагеновых пучков в МВ. Второе. Специфический обмен кишечной стенки двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок свидетельствует о наличии критической фазы развития стенки и ее соединительной ткани. Критической фазе развития СТ кишечной стенки свойственно: а) изменения показателей площади ядер и всей клетки, ЦЯО клеточных дифферонов СТ; б) изменения количественных показателей МИ, ИА и отношения МИ к ИА клеток СТ; в) специфичность динамики нуклеопротеидного, белкового и углеводного обмена клеткок СТ; г) резкое снижение соотношения количества энтероцитов к клеткам «мигрантам» от 8,6:1 до 4,8:1 (Р<0,05) при увеличении количества «мигрантов»; д) цитохимическая перестройка межклеточного вещества СТ.

ВЫВОДЫ

1. Представлена архитектоника и возрастная динамика стенки и ее оболочек двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок телят красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста. Выявлена асинхрон-ность развития стенки, оболочек и их структур, что является морфофунк-циональным статусом или «нормой» для данной породы.

2.Слизистая оболочка стенки тонкой кишки у телят в возрасте от рождения до 5 - 7 суток подвергается значительной деструкции и перестройке. Эта генетическая перестройка связана со сменой питания и характеризует критическую фазу развития органа: 1) перестройкой стенки, оболочек и их структур; 2) асинхронностью развития клеточных дифферонов соединительной ткани; 3) увеличением митотического индекса и индекса апоптоза клеток соединительной ткани; 4) цитоплазменно-ядерным отношением клеточных дифферонов соединительной ткани; 5) возрастной динамикой цитохимических реакций на рибонуклеиновую кислоту, на содержание основных и кислых белков, белковых групп, аминокислот и полисахаридов в клетках соединительной ткани.

3. Соединительная ткань собственной пластинки слизистой оболочки тонкой кишки у телят на этапе новорожденности развивается преимущественно по типу ретикулярной, а в подслизистой основе, в мышечной и в серозной оболочках - по типу рыхлой волокнистой неоформленной. Соединительная ткань стенки двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок телят на этапе новорожденности имеет отличия по набору и количеству клеточных дифферонов. Развитие клеточных дифферонов СТ стенки тонкой кишки: фибробластов, макрофагов, ретикулярных клеток, лимфоцитов, плаз-мобластов, плазмоцитов и лаброцитов происходит детерминированно, асинхронно и интегрированно. Клетки «мигранты» соединительной ткани выявляются в эпителии кишечной стенки у плодов крупного рогатого скота. Соотношение энтероцитов к клеткам «мигрантам» в стенке тонкой кишки телят от рождения до 15-суточного возраста снижается от 7,8:1 до 4,3:1 (Р<0,05) при увеличении количества «мигрантов».

4. Цитохимическими, люминисцентно-микроскопическими методами исследования установлены локализация и возрастная динамика в клеточных дифферонах - ретикулярных, адвентициальных клетках, фибролбластах, макрофагах, лимфоцитах, плазмобластах, плазмоцитах и лаброцитах содержани-ия нуклеиновых кислот, основных и кислых белков, сульфгидрильных, ди-сульфидных, карбоксильных, аминных групп белков, аминокислот - тирозина, аргинина и триптофана и полисахаридов - гиалуроновой кислоты, хонд-роитина, хондроитин -А- сульфата, хондроитин -6- сульфата и гепарина.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Сведения об архитектонике стенки телят красно-пестрой породы двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок, слизистой оболочки, а также о динамике роста толщины стенки, ее оболочек, ворсинок, крипт получены впервые и рекомендуется использовать их в учебном процессе на кафедрах анатомии, гистологии, физиологии и патологической анатомии, при написании учебников, учебных пособий по сравнительной анатомии и гистологии.

2. Результаты исследований соединительных ткани стенки тонкой кишки от рождения до 15-суточного возраста телят может быть использованы в практической ветеринарии как морфофункциональный статус или «норма» при диагностике различных болезней органов пищеварения.

3. Цитологические, цитометрические, цито- и гистохимические исследования клеточных дифферонов и межклеточного вещества соединительной ткани стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы являются фундаментальными, они могут быть использованы в экспериментальных изысканиях, как сравнительный материал при изучении соединительной ткани кишечной стенки млекопитающих животных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи, опубликованные в журналах, рекомендованных ВАК РФ

1. Усова, Е. А. Морфогенез стенки тощей кишки телят красно-пестрой породы этапа новорожденности / Е. А. Усова // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - Ульяновск, 2012. - №2 (18). - С. 53 -56.

2.Усова, Е. А. Особенности микроархитектоники подвздошной кишки телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности / Е. А. Усова, Л. П. Тельцов // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - Ульяновск, 2013. - №2 (22). - С. 39 - 43.

Публикации в других научных и научно-практических изданиях

3.Усова, Е. А. Морфология тонкой кишки телят красно-пестрой породы новорожденного этапа развития/ Е. А. Усова, Н. В. Тутарова, Л. П. Тельцов II Материалы научно-практической конференции «Ветеринарная медицина XXI века: инновация, опыт, проблема и пути их решения». - Ульяновск, 2011. — № 2.-С. 45-48.

4.Усова, Е. А. Гистология стенки двенадцатиперстной кишки телят красно-пестрой породы этапа новорожденности II Е. А. Усова, И. Г. Музыка, Л. П. Тельцов // Материалы научно-практической конференции «Ветеринарная медицина XXI века: инновация, опыт, проблема и пути их решения». Ульяновск, 2011.-№2.-С. 41 -44.

5.Усова, Е. А. Морфогенез тонкой кишки телят красно-пестрой породы новорожденного этапа развития / Е. А. Усова, Н. В. Тутарова, Л. П. Тельцов // Материалы VII Международной научно-практической конференции, посвященной памяти профессора С. А. Лапшина «Ресурсосберегающие экологические безопасные технологии получения сельскохозяйственной продукции». - Саранск, 2011.-С. 219-224.

6.Усова, Е. А. Гистогенез стенки двенадцатиперстной кишки телят красно-пестрой породы этапа новорожденности / Е. А. Усова, И. Г. Музыка, Л. П. Тельцов // Материалы VII Международной научно-практической конференции , посвященной памяти профессора С. А. Лапшина «Ресурсосберегающие экологические безопасные технологии получения сельскохозяйственной продукции». - Саранск, 2011. - С. 225- 229.

7.Усова, Е. А. Динамика ДНК, РНК, белков, белковых групп в клетках соединительной ткани стенки тонкой кишки у телят / Е. А. Усова, Л. П. Тельцов, А. А. Степочкин // Материалы Международной научно-практической конференции посвященной памяти профессора Э. Ф. Ложкина «Механизмы и закономерности индивидуального развития организма млекопитающих», -Караваево, Костромская ГСХА, 2013. - С. 181 - 184.

8.Усова, Е. А. Морфология соединительной ткани стенки тонкой кишки у телят красно-пестрой породы новорожденного этапа развития / Е. А. Усова, А. А. Степочкин, Л. П. Тельцов // Материалы V Международной научно-

практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения», - Ульяновск, 2013. - Т. 2.-С. 155- 162.

Лицензия - 020402 25.12.97 Подписано в печать 6.09.2013 Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная Гарнитура Тайме Печать офсетная, Усл.печ.л. 1,5 Тираж 100 Заказ 32 Адрес издателя: 432017, г. Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Усова, Екатерина Александровна, Ульяновск

Ульяновская государственная сельскохозяйсвенная академия им. П.А. Столыпина и Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева

На правах рукописи УДК 634.064.6:591.434:591.82

04201362127

усова екатерина александровна

функциональная морфология стенки тонкой кишки и ее соединительной ткани телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности

06.02.01 - диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Тельцов Леонид Петрович

Ульяновск-2013

. Л/

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

1. -ЫН2- аминные группы белков

2. ВКСА - внутриклеточный сетчатый аппарат

3. Г(б) - гиалуронидаза бактериальная

4. Г(с) - гиалуронидаза стрептококковая

5. Г(т) - гиалуринидаза тестикулярная

6. ГК - гиалуроновая кислота

7. ГХИ - гистохимические исследования

8. ГАГ - гликозаминогликаны

9. Гц - гистиоциты (макрофаги)

10. ДНК РНАза-дезоксирибонуклеаза

11 .-Б-Б- - дисульфидные группы белков

12.ИА - индекс апоптоза

13.-СООН- - карбоксильные группы белков

14. К л - клетка

15.КВ - коллагеновые волокна

16.г - коэффициент корреляции

17.ЛМИ - люминисцентно-микроскопические исследования

18.МВ - межклеточное вещество

19.Мкл - мезенхимные клетки

20.МИ - митотический индекс 21 .РВ - ретикулярные волокна

22.РНАза-рибонуклеаза

23.СТ - соединительная ткань

24.СГК - средний гистохимический коэффициент

25.СФК - средний флуоресцентный коээфициент

26.-БН- - сульфгидрильные группы белков

27.ТС - толуидиновый синий

28.ТХУ - трихлоруксусная кислота

29.ФИ - фагоцитарный индекс

30.№С1-хлорид натрия

31 .ЩФ - щелочная фосфатаза

32.ЭВ - эластические волокна

ЗЗ.ЭПР - эндоплазматический ретикулум

34.ЦЯО - цитоплазменно-ядерное отношение

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность темы................................................................4

1.2. Цель и задачи исследования.....................................................5

1.3. Научная новизна...................................................................6

1.4. Научно-практическая значимость работы....................................6

1.5. Реализация результатов исследования........................................7

1.6. Апробация работы.................................................................8

1.7. Структура и объем диссертации................................................8

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Развитие стенки тонкой кишки и ее соединительной ткани в онтогенезе..............................................................................9

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материал и методы исследования..............................................29

3.2.Морфология стенки тонкой кишки телят

красно-пестрой породы на этапе новорожденности.............................33

3.3 .Морфология соединительной ткани стенки тонкой кишки

телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности......................65

3.4.Цитохимия и люминисцентно-морфологические исследования клеток соединительной ткани стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности..............................72

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ..........................101

ВЫВОДЫ.................................................................................115

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ...............................................117

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ................................118

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность работы. Познания морфофункционального развития органов пищеварения у сельскохозяйственных животных необходимы для разработки рационов полноценного кормления, обеспечивающего получение в среднем от одной коровы 5-7 тыс. кг молока в год, жирностью 3,8-4,0 %, а также для получения 1100-1300 г среднесуточного привеса на откорме крупного рогатого скота (Эрнст, 2004; Дунин, 2009,2013).

Особый интерес представляют исследования соединительной ткани (CT) и крови организма, в связи с изучением клеточной дифференцировки, иммунологии, радиационной биологии, трансплантации органов и тканей (Серов, Шехтер,1981; Горышина, 1990; Данилов,1997; Тельцов,2013). Наряду с механической, опорной функций, она участвует в важнейших процессах внутреннего обмена, как в поддержании гомеостаза, в биологической защите, трофике всех тканей и органов, депонировании и в транспортировке различных веществ (Юрина, Радостина,1990;Серов,2009). По меткому выражению К. Meyer (1963), «почти все проблемы биологии и медицины связаны с деятельностью рыхлой волокнистой CT».

Сведения о строении клеточных дифферонов и межклеточного вещества (MB) соединительной ткани приведены в известных монографиях и научных работах: H.A. Юрина, А.И. Радостина (1990), М. Kusche (1990), H.B. Бережков (1991), М.П. Пальцев, A.A. Иванов (1995), Р.К. Данилов с соавтор. (1997), П.П. Потехин (1999), Ю.И. Афанасьев, Н.П. Омельяненко (2001), И.Я. Бозо, Р.В. Деев, Г.П. Пинаев (2010).

Однако, эти работы, посвященные выяснению общебиологических проблем развития CT, выполнены чаще всего на коже лабораторных животных (крыса, мышь, хомячок) ( Радостина, 1985; Заварзин, 1988; Афанасьев, 1989; Данилов с соавтор., 1997). CT стенки тонкой кишки домашних животных, и в частности крупного рогатого скота, остаются недостаточно изученной. Развитию CT стенки тонкой кишки плодов коров разных пород посвящены работы: Л.П. Тельцова (1969, 1984), В.Г. Ульянова (1969), Л.К. Хаби-

буллиной (1972), И.В. Добрыниной (1999); в постнатальном онтогенезе -Ю.Т. Техвер (1974), А.Ф. Рыжих, Л.К. Хабибуллиной (1978), Л.П. Тельцова с соавтор. (1995, 1997; 2013), Н.Б. Бертеневой (2002). Развитие СТ стенки тонкой кишки у телят красно-пестрой породы на этапе новорожденное™ не изучено. Нет гистохимических сведений о локализации и динамике полисахаридов, нуклеиновых кислот, белков, белковых групп, аминокислот в клеточных дифферонах (фибробластах, фиброцитах, макрофагах, ретикулярных, плазматических, тучных и др. клетках) и в межклеточном веществе СТ стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста. Официально красно-пестрая порода крупного рогатого скота зарегистрирована в РФ 16.09.1998 г. 50 % поголовья этой породы находится в Мордовии (Прудов, Бальцанов, 1994; Дунин, Бальцанов, Рыжова,2010).

1.2. Цель и задачи исследования. Целью работы является изучение закономерностей развития стенки тонкой кишки и её соединительной ткани телят красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста (на этапе новорожденности). В задачи исследования входило:

1. Изучить возрастную и сравнительную морфологию (архитектонику) стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы новорожденного этапа развития.

2. Изучить возрастную морфологию клеточных дифферонов соединительной ткани стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы на новорожденном этапе развития.

3.Изучить цитохимию и провести люминисцентно-микроскопические исследования нуклеиновых кислот, белков, белковых групп, аминокислот, углеводов клеток соединительной ткани стенки тонкой кишки телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности.

Работа выполнена на кафедре клинической диагностики, незаразных болезней и ветсанэкспертизы ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им.П.АСтолыпина» и в лаборатории «Гистофизиология» кафедры морфоло-

гии и физиологии животных Аграрного института Мордовского госуниверситета им. Н.П. Огарева (зав. лаборатории проф. Л.П. Тельцов). Работа является самостоятельным разделом комплексной темы «Механизмы морфогенеза и закономерности индивидуального развития организмов (в норме и патологии)». № госрегистрации 01200704777. Тема рекомендована президиумом РАН как фундаментальное направление в России (Поиск,2003). Комплексного изучения органов пищеварения (двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок) телят этой породы не проводилось. Эти исследования необходимы для практики, так как гибель новорожденных телят от заболеваний органов пищеварения высока (Денисов, Чикирин,2006; Сулейманов,2011).

Научная новизна. Впервые представлена возрастная архитектоника стенки и динамика слизистой оболочки тонкой кишки телят красно-пестрой породы новорожденного этапа развития. Полученные сведения являются морфофункциональным статусом или «нормой» для этой породы на этапе новорожденности. Прослежена динамика ядра и цитоплазмы, цитоплазмен-но-ядерные отношение (ЦЯО) клеточных дифферонов СТ: ретикулярных клеток, адвентициальных клеток, фибробластов, макрофагов, лимфоцитов, плазмоцитов, лаброцитов СТ кишечной стенки. Впервые установлена взаимосвязь между митотическим индексом (МИ) и индексом апоптоза (ИА) клеточных дифферонов СТ, изучена локализация и возрастная динамика поли-сахаридного, нуклеопротеидного, белкового обмена клеточных дифферонов СТ и межклеточного вещества стенки тонкой кишки телят крупного рогатого скота красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста.

1.4. Научно-практическая значимость работы. Полученные сведения расширяют имеющиеся представления: по возрастной архитектонике стенки двенадцатиперстной, тощей и подвздошной кишок телят на этапе новорожденности; по специфичности развития СТ собственной пластинки и подслизистой основы слизистой оболочки, мышечной и серозной оболочек; по дифференцировке ретикулярных клеток, фибробластов, макрофагов, лимфоцитов, эозинофилов, плазмобластов, плазмоцитов, лаброцитов; по динами-

ке ядра и цитоплазмы, ЦЯО; МИ и ИА клеточных дифферонов СТ; по локализации и возрастной динамике полисахаридного, нуклеопротеидного, белкового обмена клеточных дифферонов и межклеточного вещества СТ стенки тонкой кишки. Установленная закономерность возрастной динамики и архитектоники развития клеточной стенки и клеток СТ является показателем нормы для данной породы. Они необходимы как сравнительный материал, для диагностики различных заболеваний кишечной стенки телят красно-пестрой породы крупного рогатого скота.

Ряд положений диссертации являются фундаментальными и могут использоваться для написания учебных руководств, пособий и в учебном процессе на ветеринарных, зооинженерных и биологических факультетах.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Возрастная архитектоника стенки и слизистой оболочки тонкой кишки, динамика развития клеточных дифферонов СТ у телят красно-пестрой породы от рождения до 15-суточного возраста.

2.Морфология клеточных дифферонов СТ стенки тонкой кишки на этапе новорожденности.

3. Цитохимическая и люминисцентно-микроскопическая характеристика полисахаридного, нуклеопротеидного, белкового обмена клеточных дифферонов СТ кишечной стенки телят красно-пестрой породы на этапе новорожденности.

1.5. Реализация результатов исследования. Основные положения диссертации опубликованы в 8 работах, в том числе 2 - в журнале рекомендованным ВАК Минобразования РФ. Материалы исследования используются в научных и учебных целях в Московской, Санкт-Петербургской, Казанской академиях ветеринарной медицины; в Саратовском, Омском, Алтайском, Воронежском, Краснодарском аграрном университетах; в Брянской, Ульяновской, Костромской сельскохозяйственной академиях и в Мордовском госуниверситете.

1.6. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на н.-пр. конф. « Ветеринарная медицина XXI в.» (Ульяновск,2011,2012;) на Ога-ревских чтениях (Саранск, 2011,2012), и на 9-ом Конгрессе морфологов (Самара, 2012).

1.7. Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 143 страницах компьютерного текста и включает разделы: общая характеристика работы, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, список использованной литературы. Список включает 282 источника, в том числе 63 зарубежных. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 42 рисунками.

2.1 Развитие стенки тонкой кишки и ее соединительной ткани в онтогенезе

Описание архитектоники стенки тонкой кишки взрослых животных крупного рогатого скота дано в монографии Ю.Т. Техвера (1974). По его мнению, в стенке кишечника различают четыре оболочки: слизистую, под-слизистую, мышечную и серозную. Слизистая оболочка состоит из эпителиального слоя (epithelium mucosae), собственного слоя слизистой (lamina propria) и из мышечного слоя слизистой оболочки (laminamus muscularis mucosae). Слизистая оболочка тонкой кишки формирует кишечные ворсинки (villi intestinales), которые обнаруживаются у плодов 2-5-месячного возраста (Тельцов, 1984; Бирих, Удовин, 1994; Столяров, 2001; Романова,2010), как в тонкой, так и в толстой кишке (Здоровинин, 2007). Ворсинки в толстой кишке у плодов крупного рогатого скота сохраняются до 6,5-7,5-месячного возраста (Тельцов, Здоровинин, Красовитова, 2001), а позднее подвергаются атрофии, принимая участие в формировании истинных для толстой кишки крипт. Кишечные крипты (glanorulae s. cryptae intestinales) в тонкой кишке формируются у плодов коровы, начиная с 3-3,5-месячного возраста (Хаби-буллина, 1972; Тельцов, Ильин, Столяров, 1993).

Соединительная ткань (CT) кишечной стенки, в структурном отношении, представляет собой сложное образование из рыхлой соединительной ткани (со специфическими свойствами), кровеносных и лимфатических капилляров, сосудов и агрегированных лимфоузелков (Серов, 1981). Совместно с кишечным эпителием, нервной и мышечной тканями CT формирует собственную пластинку слизистой оболочки, а с нервными элементами - подсли-зистую основу слизистой оболочки стенки тонкой кишки. Совместно с мышечной и нервной тканями она образует мышечную, а с мезотелием - серозную оболочку. Обеспечивая транспорт метаболитов в кишечной стенке, CT выполняет сложную трофическую, защитную, пластическую, кроветворную

и иммунобиологическую функции (Горизонтов, 1968; Хрущов,1976). Интерес к исследованиям рыхлой соединительной ткани СТ и крови организма резко возрос в 70-х годах XX столетия, в связи с изучением клеточной дифферен-цировки, клеточной иммунологии, радиационной биологии, трансплантации органов и тканей (Елисеев, 1961; Петров, Зарецкая, 1970; Barnet, 1971; Круг-ликов, 1975; Чертков, Фриденштейн, 1977; Радостина, 1985; Горышина, 1990; Данилов, 1997 и др.).

Однако, классическим объектом исследования оставалась по-прежнему рыхлая соединительная ткань кожи лабораторных животных (крыса, мышь, хомячок) (Шанин, 1964; Митин, 1966; Фукс, Фукс, 1968; Laborjt, 1969; Хрущев, 1969; Kohn, 1978; Borysenco, 1984). Поэтому соединительная ткань стенки тонкой кишки человека и домашних животных, не являлась объектом выяснения общебиологических проблем и остается до сих пор недостаточно изученной (Антипов, 1996).

Генетически СТ тонкой кишки является производной мезенхимы (Мах-imow, 1906; Заварзин, 1947; Елисеев, 1961; Hammersen, 1980; Шаповалов, 1981). У эмбриона коровы 18-20-суточного возраста соединительная ткань кишечника представлена мезенхимными клетками (Тельцов, Ильин, Столяров, 1993). Первичные кровеносные капилляры, первичные клетки крови, эндотелий капилляров выявляются в мезенхимном слое стенки тонкой кишки у эмбрионов 20-34-суточного возраста (Добрынина, 1999). В этом возрасте зародыша очевидно, возможно еще интаваскулярное кроветворение из местных мезенхимных клеток. На это указывают А.А. Максимов (1918), W. Knoll (1927), Ю.Н. Шаповалов (1981), А.А. Заварзин (1976, 1985) и др., проводившие исследования по эмбриональному кроветворению.

У новорожденных телят строма ворсинок тонкой кишки представлена тонковолокнистой соединительной и ретикулярной тканью. Из клеточных элементов выявляются лимфоциты, фибробласты, макрофаги, плазмобласты и лаброциты (Столяров, 2001). В межклеточном веществе СТ интенсивно окрашиваются аргирофильные и коллагеновые волокна (Шишков, 1966; Улья-

нов, 1969; Хабибуллина, 1972; Рыжих, Хабибуллина, 1978). По данным А.Ф. Рыжих, Л.К. Хабибуллиной (1978), содержание в межклеточном веществе (МВ) соединительной ткани слизистой оболочки кишечника у новорожденных телят нейтральных ГАГ возрастает, а гликозаминогликанов (ГАГ) типа гиалуроновой кислоты, не обнаруживается. Строма ворсинок стенки тонкой кишки телят 1-1,5-мес. возраста состоит из неоформленной соединительной ткани. В центре ворсинки проходит центральный лимфатический капилляр. Клеточный состав СТ разнообразный. Интенсивно окрашиваются лимфоциты, плазмоциты (Хабибуллина, 1972; Рыжих, Хабибуллина, 1978; Гистология, 1997). У взрослых животных строма слизистой оболочки «является своеобразной ретикулярной тканью, которая очень богата различными элементами - фибробластами, плазмоцитами, макрофагами, лимфоцитами, эозинофи-лами, лаброцитами» (Техвер, 1974). В межклеточном веществе слизистой оболочки интенсивно окрашиваются коллагеновые волокна (Садовская, 1968). Как справедливо отмечает Ю.Т. Техвер (1974), общее количество тех или иных клеток СТ зависит от вида животного, его возраста, от функционального состояния органа, от расположения крипт, ворсинок, меж- и под-криптальной стромы, подслизистой основ и серозной оболочки.

По данным биопсии (Билич, 1993; Широкова, 2001) у взрослых людей соотношение клеток СТ в двенадцатиперстной кишке в области ворсинок: 44,4% зрелые фибробласты; 13,3%о - макрофаги и 8,9%о - тучные клетки. Соотношение этих клеток в СТ области крипт : 40,9% зрелых фибробластов; 14,5% - макрофагов и 11,1% - тучных клеток. Как показали исследования Н.Ю.Широковой (2001) воспалительно-деструктивный п