Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Функциональная активность субклеточных структур печени крыс при действии бутилкаптакса и пути ее коррекции

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Функциональная активность субклеточных структур печени крыс при действии бутилкаптакса и пути ее коррекции"

ТАШКЕНТСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЭДАШШ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им.В.И.ЛЕНИНА

На правах рукописи

РУСТАМОВ Равшан Джулиевич

ФУИКЦЙОЕШНАЯ АКТИВНОСТЬ СУБКЛЕТОЧНЫХ СТРУКТУР ПЕЧЕНИ КРЫО ПРИ ДЕЙСШЙ БУТШПШ1ГАКСА И ПУШ ЕЕ КОРРЕКЦИИ

03,00.13 - Физиология человека и животршс: 14.00.17 - Нормальная физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских, наук

ТАШКЕНТ - 1ЭЭ2г.

Диссертационная работа выполнена в лаборатории структурной организации биологических мембран Института биохимии АН ЕУз

Научный руководитель: Доктор биологических наук, профессор

А.К.1

Официальные оппоненты: Доктор биологически наук

Р.Н.АХМЕРОВ

Доктор медицинских наук, профессор П.И.ТАШХОДЕАЕВ .

Ведущая организация: Ташкентский педиатрический медицинский

институт Минздрава Республики Узбекистан

Защита состоится 1992 Г. в Ж чаоов

на заседании специализированного совета Д 067,02.08 при Ташкентском ордена Трудового Красного Знамени государственном университете им. В.И.Лвнжна /г.Ташкент, 700095, Вузгородок, ТашГУ, биологический факультет/.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ТапйТ им. Б.И.Лешша.

- РЪ

Автореферат разослан " < "_£■' _1992 г

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук,

доцент фу^) _ Л.С.КЛЕМЕШЕВА

!

[ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

i

' Актуальность пш&демц. Многообразное использование пестицидов б сельском хозяйстве вызывает необходимость изучить влияние их на физиологические, структурно-функциональные и биохимические процессы в организме человека и животных для определения механизма токсического действия этих соединений и создание на этой основе новых методов защити и коррекции вызываемых ими патологических процессов.

При анализе токсического действия пестицидов особое место отводится их влиянию на структурно-функциональные параметры субклеточных структур, в первую очередь - на митохондриальные и шкросомальные фракции, поскольку многочисленные данные литературы свидетельствуют, что именно эти субклеточные структуры - наиболее вероятные мишени их действия (Меркурьева, 1982). Многие пестициды взаимодействуют с липидной частью плазматических И внутриклеточных мембранСН.Ьи, levin, 1974; Murakami, Pukani, 1979) и подвергаются их свободнорадикальному окислению (Bua Jaunes, 1983).

Несмотря на наличие большого арсенала средств и способов лечения не прекращается поиск эффективных путей коррекции структурно-функциональных нарушений печени при болезнях химической этиологии. Изыскание новых терапевтических средств направлено прежде всего на поиск и использование новых ингибиторов свободнорадикальных реакций в биомембранах. Наряду с природными антиоксидантами важное место занимает синтез и использование новых соединений, обладающих такими свойствами.

Нет необходимости доказывать, что выяснение этих вопросов будут иметь значение дяя медицины и животноводства.

Сказанное выше свидетельствует об актуальности выявления особенностей структурно-функциональных изменений митохондрий и макросом печени при отравлении бутилкаптаксом и его коррекции антиоксидантом Пэгинолом С-2000 и представляет интерес для решения ряда современных физиологических и биохимических проблем мембранологии.

Печь и задачи исследования; - выявить особенности структурно-функциональных изменений митохондрий и микросом печени при отравлении бутилкаптаксом и коррекции его с Пэгинолом C-2ÜQ0.

»

В соответствии с этим были поставлены задачи:

- определить сущность физиологических и структурно-биохимических изменений в митохондриях и микросомах печени крыс при отравлении бутилкаптаксом;

- провзсти сравнительный морфофункциональный анализ с выявлением закономерностей структурных перестроек в процессе восстановления токсически пораженной печени при использовании антиоксиданта Пэгинола С-2000.

Научная новизна работа:

1. Впервые показало, что бутилкаптале вызывает сдвиги в функциональных параметрах митохондриальной и микросомальной фракций печени. Введение Пэгинола С-2000 восстанавливает лишь сукцинатный путь окисления субстратов в митохондриях, и не влияет на монооксигеназную систему макросом печени.

2. Бутилкаптакс вызывает значительные изменения фосфоли-пидного состава и процессов свободнорадакального окисления лияидов мембран исследуемых субклеточных структур. Действие бутилкаптакса частично предотвращается введением Пэгинола С-2000.

3. Введение животным бутилкаптакса отрицательно влияет на структурно-функциональные особенности митохондрий и микро-сом печени. Пэпшол С-2000 приводит к нормализации ультраструктуры гепатоцитов.

Практическая ценность. Представленные в работе данные необходимы дои понимания механизма токсического действия пестицидов на клэгочном и субклеточном уровнях. Результаты исследований свидетельствуют о целесообразности использования антиоксидантов при лечении отравления пестицидами.

Апробация результатов работ. Материалы диссертации докладывались на Республиканском совещании по актуальной проблеме биосферы Узбекистана (Ташкент, 1985)', на I Конференции биохимиков Узбекистана (Ташкент,1986), на Советско-Финляндском симпозиуме по биологии развития "Клеточная дифференцировка и экспрессия генов" (Ташкент, 1988), на У Конференции биохимиков Республик Средней Азии и Казахстана ( Ташкент, 1991), на Объединенном семинаре лабораторий клеточной биологии, структурной организации биологических мзмбран, радиационной биотехнологии Института биохимии АН РУз.

Публикации. По теме диссертации имеется 8 публикаций.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, двух глав (Материалы и методы исследования, Результаты и их обсуздение), заключения и выводов. Список использованной литературы включает 257 источников, в том числе 101 отечественных и 156 зарубежных. Текст иллюстрирован 9 таблицами и 17 рисувками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В экспериментах использовали крысз самцов Вистар массой 160-180 гр.Животных разделили на группы: 1-ая - контрольная получила физиологический раствор j 2-ая (опытная) - раствор бутилкаптакса (производный бензоизотиозола) 1Д0 ДД50 из расчета 1300 мг/кг масон j 3-ю группу животных после затравки бутилкаптаксом подвергали лечению, включающему 30 мг/кг Пэ-гинола С-2000 (синтетического водорастворимого антиоксидак-та). Затравку животных бутилкаптаксом производили в течение 5 суток специальным зондом внутрижелудочно. Пэгинол 0-2000 вводили через чао после затравки, затем животных забивали на I, 3 и 7-е сутки.

Митохондрии выделяли из печени методом дифференциального центрифугирования (Parsona, Sinson, 1967), микросомы - центрифугированием жюшатохондряалыюго еупернатаяга при ID5Q00 g в точение 1,5 ч на центрифуге VAG-60I.

Дыхание и окислительное фосфорилирование митохондряй исследовали полярографическим методом (Chance, Williams, 1955), НАД'Н-окоидазную и оукцинатоксидазную активность митохондрий определяли по методу ï.Hatefi et al., (1962) в модификации Рахимова и Алматова (1977)", ротенонечувствительнуи и ротенон-чувствительную 11АД*Н-онсидазкую активность - по методу L.Erna-ter et al. (1963), цитохром-с-оксидазную активность - по методу D.C.Whaxtcm et D.S.Griffetha (1961), содержание цитохро-ма Р-450 в микросомах - по методу Т.Омура и Р.Сато (1964), интенсивность перекионого окисления ли надов (ГОЛ) в митоховдри-ях и микросомах - по содержанию малонового диальдегида (МДА). Активность сутароксиддиснутазн (СОД) измеряли по ингибирова-

нш восстановленного синего нятротетразолия в ксантин-ксанти~ ноковдазяой системе (iridovi.cn, 1У74), глутатионпероксидазы (Ш) - по окислагаш НАД'Н в реакции восстановления окисленного глутатиопа (сыу еъ л., 197В), глутатион-з трансфоразы (ГТ) по образованию коныогатов глутатиона с 1-бром-2,4-дянит-робанзолом (ему ег »1., 1976). Лишда экстрагировали по методу Фолча (1957) и фракционировали методом горизонтальной тонкослойной хроматографии (Каргалсшов, 1Э81). Дня электронно-макроскопических исследований образцы тканей печени фиксировали в 2,5/2-ном раствора глютаральдегида на ОД М фосфатном буфера (рЯ=г7,4) с последующей дофиксацией в 1%-аом раствора ОЮ4. После обезвоживания материал заливали в смесь эпон-арал-дат. Ультратонкиа срезы получали на ультратома ькв-5 (Швеция). Препараты контрастировали ураннлацетатом и цитратом свинца, аатем исследовали в электронном микроскопе "ниАШГ-бОШ" в отделе патологической анатомии филиала ШЩХ АМН СССР г. Ташкента,

РЕЗУЛЬТАТЫ ЙССЖДОВШ® И ИХ. ОБСУЖДЕНИЕ

Вцвянро Патанол^ С-йООО на шиднпа а окислительное йос-формирование митохондрий печени крыс, затравленных бгтилкап-ЗВШЫ,

Данные исоладовшшя скорости окисления и параметров окислительного фосфориларования в митохондриях, выделенных из печени трех групп животных, приведены в табл.1.

При интоксикации крыс дозой бутилкаптакса 1Д0 ЛД^ окисление сукшшата и ¿-кетоглутарата во веек метаболических состояниях достоверно снижается, что приводит к уменьшению величавы ДК к коэффициента АД5/0.

В следующей серии экспериментов выявлено, что при введении Пзгянола 0-2000 в организм ваграаяенных животных сукцгшат-ный путь окислительного ^сформирования митохондрий печени почти полностью восстанавливается. Однако при использовании ' аь-кетоглугарата в качества субстрата значения измеряемых параметров были нижа, чаш в митохондриях нормальных крыс. Так, если при действии только бутилкаптакса скорость окисления' ¿-кетоглутарата в состоянии Уд, ^ и уменьшалась соотвэг-

Втаянив Пэгинола С-2000 на дыхание и окислительное ^сформирование митохондрий печени крыс, затравленных 6f-пшсаптакоом ( М ¿м, Н=8~12)

Показатель

!

Контроль J Бутилкаптакс

; Бугилкаптадо +

Нэпшоя С-2000

Сукцинат

* ч 40 t г 34 38 ±3

ч v3 120 ¿4 98 ±3**** I0S ¿8**

4Г ¿2 35 ¿2* 37 -4*

160 ±6 126 152 ¿9

Ж 2,93 to, 00 2,ео ¿0,07 + 2,92 ¿0,09

№/0 1,94 ¿0,05 1,73 ±0,04* 1,89 ¿0,08

oL- Кетоглутарат

v4

да дк

т/о

24 t Г 20 20 ¿1**

68 ±2 54 ±3"* 46 +

24 ¿1 21 ±1* IS ¿2*

66 54 ¿4* 42

2,71 ¿0,07 2,57 ¿0,09 2,42 ¿0,07****

2,75 ¿0,08 2,42 ¿0,07*** 2,24 ¿О.Об'****

Примечание. Состав среды инкубации: 0,12 М KCi, 5 мМ КН2Р04, 10 Ш трис-ПС1-<5уфзр, рН=7,4. В качество субстратов окисления использовали сукцинат (10 кМ) и^-котоглутарат (Ю Ш). № по 200 мхМ, ИИ - 50 мкМ. Скорость дыхания выражали в наноатом кислородаДиш-мг балка.

* - Достоверность различий Р<0,05 но отношению к контролю;

**Р< 0,02 ; ***Р< 0,01 ; ****£< 0,001. Скорость дакания митохондрий в различных метаболических состояниях (до добавления АД&, v3- в присутствии А£<В, V4- после но черпания АДЗ, УДНФ~ СК°Р0СГЬ дас-зния б разобщенном состояния) регистрировали полярографическим методом. Отношетю АД5/0 и днхатольний

контроль (ДО пь'ражзлч по Чаясу-Вялммсу (1955).

ственно на I?; 12,5 и 18,2$ от контроля, то с Пэгияолом С-2000 - на 29,3} 20,8 и 36,При этом, если ДК и коэффициент АДФ/О с бутилкаптаксом уменьшались всего соответственно на 5,2 и 11,25? по сравнению с контролем, то совместно о Пэги-нолом С-2000 - на 10,7 и 18,б£,

Результаты исследований позволяют предположить существование некоторых особенностей компенсаторно-приспособительных процессов, происходящих в митохондриях печени при воздействии бутилкаптаксом и Пэгинолом С-2000: если бутилкаптакс подавлял дыхание и окислительное фосфоршшрование митохондрий при использовании сукцината и оС-кетоглутарата в качестве субстрата окисления, то при введении Пэгинола С-2000 сукцинатный путь восстанавливался. На наш взгляд, при действии Пэгинола С-2000 происходило переключение дыхательной цепи с окисления по НАД-Н-завлсимому пути на сукцинатный путь (Кондрапева, 1972), чем и достигался нормальный уровень функционирования АТФ-син-тэзируищей системы митохондрий.

Влияние Пэгинола С-2000 на активность оксидазных систеь; цембран митохондрий печени крыс, затравленных бутилкаптаксом.

Установлено, что активность НАД-Н-оксидазной системы дыхательной цепи митохондрий печени крыс, затравленных бутилкаптаксом, снижается наиболее заметно по сравнению с другими ферментными системами (табл.2). Так если активность ротенон-чувствительной НАД-Н-оксидазной системы уменьшается на 27,4$ от уровня контроля, то активность рогеноннечувствательной НАД'Н-оксидаэы, сукцинатоксидазы и цнтояром-с-оксидазы - всего соогветствешо на 16,7; 15,6 и 12,4,«. На основании изложенного можно заключить, что ври введении животным бутилкаптакса в структуре митохондрий развиваются два вида нарушений: первое проявляется в изменении структурного сопряжения между отдельными участками дыхательной цепи, второе обусловлено нарушением дыхательной цепи, в том числе и более устойчивой цигохрок--д-оксидазы и ротеноннечувствательной НАД-Н-оксидазы.

Результаты исследования влияния Пэгинола С-2000 на окся-дазную систему дыхательной цепи митохондрий печени крыс, затравленных бутилкаптаксом, показали, что активность НАД-Н-окси-

Влияние Дзгдаола С-2000 на активность полиферментных систем мембранных фракций митохондрий печени крыс после 5-днешого введения бутилкадтакса ( М -ш, п=7-Э)

Показатель

Субстрат к добавка

Активность,наноатом яислорода/мик-кг белка

~ [Г | Бутилкаптакс

Контроль ! Бутшисадтакс ! +

| Пзгинол С-2000

г

НАД-Н-сцгсидага

Сукшнатоксидаза

1шгохроы-с~оксидаза Ротзноячувотвктедьна НАд-Н-оясидаза Ротеноннечувствитель ная ИАД-Н-оксидаза

НАД-Н 74 ¿5 55 ±А*** 49 ±5***

НАД-Н + цитохром с 185 ±8 153 ±э** 143 ±7***

ДА Ш X 94

Сукцпнат 135 ±7 П4 ±6* 132 ±8

С утишат # цитохром £ 155 ±9 170 ±10 159 ±П

ДА 20 5Б 27

Аскорбат + цитохроы £ 210 ¿9 184 ± 7* 195 ±10

НАД'Н Б2 45 36

ЕАД-л + ротенон 12 ±1 10 + т — X II ±1

*- Достоверность различий Р< 0,05 по отношению а контролю; **Р< 0,02 ; ***?< 0,01; ****р< 0,001.

дазной системы остается пониженной и почти не отличается от тех жа показателей у отравленных животных. Активность цито-хром-е-оксидазной системы приближается к контролю, а сукци-нагоксидазяоЁ системы почти но отличается от контроля,

Такш образом, введение животным бутилкавтакса приводит к ингибированию скоростей переноса электронов в различных фрагментах дыхательной цепи митохондрий печени крыс. Причем наиболее глубокое шотбирование происходит, по ИАД«Н-оксидаз-ной ветва дыхательной цепи митохондрий. Введение Пзпшола С-20С0 в организм отращенных животных приводит к нормализации только сукцшштоксидазной систеш дыхательной цепи митохондрий печали.

Другой фактор, сЕидбтельствущаЁ об изменении компактности внутренней мембраны митохондрий - изменение прошщаемости мембран т1тохондрий для экзогенного цитохрома с. Известно, что цитохром с может вигачаться в фосфолипиды мембран, образуя о шмл связи электростатического характера (Г/апе^сЬ

аХ.. 1974) и вызывая повышение скорости переноса электронов в дыхательной цепи (Алпатов и соавт., 1982).

Мы установили, что добавление цитохрома £ активирует НАД'Н- и сукцинагоксидазные системы, В митохондриях, выделенных из печени животных, получивших бутилкаптакс, прирост НАД'Н-оковдазной активности под влиянием цитохрома с был менее значительным, в то время как активность сукцинатоксидазы не изменялась.

Введение животным бутилкаптакса и Пэгинола С-2000 приводило к снижении прироста активности суадинатоксидазной системы цигохромом что свидетельствует об улучшении компактное-' ти мембран митохондрий (Алматов, 1982, 1990; 1\гапеисЬ еь а1., 1974), Поэтому наибольшие диффузионные затруднения при включении цитохрома о в структуру мембран наблюдались в опытах с животными, дополнительно получавшими Пзгинол С-2000. Возможно, у этих животных за счат более прочных структурных взаимоотношений между белками и фосфолипидаш достигается компактная ' структура мембран митохондрий.. ' . '

Следовательно, на основании данных наших исследований можно заключить, что при введении в организм -животных бугал-калтакса в структуре митохондрий печени образзются "скрытые

повреждения", проявляющиеся в ингибировашга скоростей окисления и синтеза АТО, в нарушении доступа цитохрома о к соответствующим участкам мембран митохондрий. Поело введения Погано— ла С-2000 в митохондриях печони экспериментальных животных оа счет повышения скорости окислении сукцинага повышалась эффективность синтеза АТФ.

Влияние Пзгирола С-^000 иа содержание цитохрома Р-450 в инкроермалыпде Фракциях печени кръта. затоавттеншх бутил-каптаксом.

Один из основных путей детоксикации ксенобиотиков -окислительная деградация. Начальный этап этого пути превращения - гидрокешгарования осуществляется цитохром P-450-зависи-мой монооксигеназной системой.

Результаты исследований показал (табл.З), что через сутки после 5-даевноЙ затравки дозой I/IO ДДвд бугилкапгакса содержание цитохрома Р-450 в микросомах печени снижается на 45^.

Таблица 3

• Влияние Пэгинола С-2000 на содержание цитохрома Р-450 в микросомальной фракция печени крыс после 5-даевиого ввдения I/IO ЛЛдо бупшкадтакса (М ±м, П=9-П)

! Удержание цитохрома Р-450, Фракция ! нмоль/мг белка

Контроль 0,9 ¿0,11

Еуэтшаптакс 0,5 ±0,08 (Р<0,05)

Бутилкаптакс + Пэгинол С-2000 0,6 ±0,07 (Р<0,02)

Примечание. Р - достоверность различий по отношении к контролю.

По-видимому, снауение содержания цитохрома Р-450 в микросомах печени при отравлении бутяшсангаксом связано с усилением ПОЛ (Арчаг.св, 1975), а также с нарушением фосфолипидаого обмена.

При сочетанием действии бутялкасгакса с Погинолом С-2000, тагам обнаружено сшташэ сочетания цитохрома Р-450.3озмозко это обусловлено том,что гидроксглируицая система ондошпзматичоского ретигсулуиа гоггенп выполняет гакитиз» функцию, участвуя в бао-

трансформации не только ксенобиотйков(пастицидов, инсектицидов, канцерогенов), но и большого класса лекарственных веществ (Лукиенко, Буша, 1986).

Таким образом, результаты наших исследований показали, что Пэгшол С-2000 не влияет на содержание цитохрока Р-450 в мияросомальных фракциях, печени при отравлении бутилкаптаксом.

Влияние Пэгинола С-2000 на уровень малонового диальдеги-да у митохошюиадьдой и микросомальной фракции печени крыс. Затравленных бутил^адтаксом.

Перекиси липидов относятся к самостоятельной группе метаболитов, которым отводится значительная роль в патогенезе различных заболеваний (Майоре, 1979 ; Виноградов, 1932). Установлено, что в 1-е сутки после пятидневной затравки в митохондриях и микросомах печени крыс усиливается как ферментативное, так и аскорбат-зависимов ПОЛ (соответственно на 3,5 ; 3,7 и 3 ; 1,7 раз) (рис.1). Болзе значительное образование продуктов ферментативного'ПОЛ в макросомах, видимо, происходит вследствие индукции окисления радакальннли продуктами деструкции ферментативно образованных гидропероксидов. На 3-й сутки выявлено онижение в митохондриях НАД»Н-зависимого и аскорбат-зави-симого ПОЛ на 0,7 и 0,6 раза по сравнению с митохондриями крыс, забитых в 1-е сутки» Аналогичное снижение аскорбат-зави-симого ПОЛ на 3-й сутки выявлено и в случае микросомальной фракции по сравнении с микросомами печени затравленных крыс, забитых в сутки, но остается высоким по отношению к контролю как в митохондриях, так и мшросомах печени.

Установлено, что ферментативное ГОЛ в микросомах на 3-й сутки усиливается по сравнению с микросомами печени крыс, забитых в 1-е сутки. Увеличение НАД*Н-зависимого ПОЛ в микросомах, видимо, можно объяснить тем, что субстратом при ферментативном ПОЛ в юкросомах являются не любые лолиненасшиешше жирные кислоты, как при нефермантагивном процессе, а лишь ШЕК-ацилн фосфслигшдов, локализованные вблизи компонентов цепи иероноса электронов (Лаикик, 1985). На 7-е сутки наблюдается угнетение аскорбат-зависимого и ферментативного ПОЛ п мшросомах по сравнению с 3-ми сутками, однако оно нз достигало контрольных вэлгчин. Обнаружено также атаеиие аскорбат-

Влияние Пэгинола С-2000 на фосфолипидный состав мито-хондриальной и микросомальной фракций тэчэни крыс после пятидневного введения 1/10 ЛДд0 йутилкаптакса от общего количества фосфолипидов ( М ±м, п=8-10)

Фосфолипидн' 1 | Контроль 1 ! Бутилкаптакс 1м 1 " »■ ; Бутилкаптакс + Пэгалол С-2000 1 <Р2>

Митохондрии

ФХ 40,40±1,72 51,24 ±2,70* 37,00 ±1,81***

ФЗ 23,22±1,60 13,56 ±0,94*** 21,00±1,42***

гаг 14Д0±0,91 6,90±0,38*** Ю,0Э±0,78**

ФИ 5, СБ ±0,60 3,38 ±0,22* 9,51 ±0,56***

СФ 3,39±0,38 7,00±0,64*** 6,30±0,34

ФС 1,20±0,07 0,80 ±0,03*** 1,00±0,06*

ФК 1,11 ±0,05 • 0,73 ±0,03** 1,48±0,09***

ЛФЭА. 6,48 ±0,42 9,24 ±0,67** 7,70 ±0,84

ЛФХ 1,60±0,22 3,06 ±0,42** 2,72±0,Н

лкл 2,04 ±0,24 2,42 ±0,35. 1,58±0,09*

ЛФК 1,40± 0,09 Г, 67 ±0,11* Г,63±0,07

Мидросош

ФХ 46,82 ±3,10 61,56±3,42** 48,89±2,90**

ФЭ 21,62 ±1,24 П,00±0,95*** 21,21±1,54****

кзг 1,10 ±0,06 0,61 ±0,01*** 1,.00±0,05****

ФИ. 8,44 ±0,53 3,90±0,41*** 6,80±0,51****

СФ 2,21 ±0,10 2,60±0,12*** 3,40±0,42

ФС 4,65 ±0,34 3,34±0,23** 4,90± 0,44***

ФК 2,33 ±0,22 1,71 ±0,08**** 1,91 ±0,20

ЛФЭЛ 6,80 ±0,70 8,74± 0,50* 5,Б4 ± 0,67**

жх 1,63 ±0,13 2,34±0,21 2,90£ 0,32

лкл 0,80 ±0,01 1,13 ±0,08*** 0,80 ± 0,03***

ЛФЕ ЗД0±0,П 2,87± 0,20 2,36 ±0,33

■Примечание. Достоверность различий Р|- по отношении к контролю,, 1'р ~ по отношении к Р^ ; *Р< 0,05 ; **Р< 0,02 } ***Р£0,С1 Г*+*"'Р< 0,001.

IB.

фосфоливдцов микросомальной фракции печени, в частности -ЛФЭА и ЛКЛ, а содержание ЛФХ возрастает по сравнению с контролем.

При действии бутилкаптакса в митохондриях, и макросомах печени повышает«! общее содержание лизоформ фосфолипидов (соответственно на 42 и 22%), а при введении антиоксиданта отмечается полная коррекция их в шкросомальных фракциях и снижение в митохондриальной фракции, но уровня контроля не достигает.

Таким образом, затравка животных бутилкаптаксом приводит к снижению содержания отдельных фракций фосфолипидов в митохондриях и микросомах печени и повышению содержания лизоформ фосфолипидов. При введении живота™ Пэгинола С-2000 как антиоксиданта происходит частичное восстановление липидных компонентов мембран митохондрий и шкросом печени затравленных крыс.

Влияние бутилкаптакса в сочетании с Пэгинолом С-2000 на структуру гепатоцитов крыс.

Как было сказано выше, бутилкаптакс вызывает значительные функциональные изменения в субклеточных фракциях печени крыс.

Для полной характеристики токсического влияния этого препарата и подкрепления результатов морфологического контроля мы исследовали ультраструктуру гепатоцитов крыс,, затравленных бутилкаптаксом в сочетании с введением в организм Пэгинола С-2000.

В 1-е сутки после пятидневного введения бутилкаптакса ультраструктура гепатоцитов крыс характеризуется набуханием митохондрий, просветлением их матрикса, исчезновением крист, мостами очаговым расплавлением наружной мембраны. Эти изменения свидетельствуют о низкой функциональной активности митохондрий (Бекетова, Семакова, 1982, Г98Э), Наблюдается также уменьшение гранулярной эндоплазматической сети и повышение содержания свободных рибосом н гликогена. Увеличение содержания гликогена по данным Л.Е.Панина с соавт., свидетельствует "о реконструктивной функции" лизосом, реализующихся в экстремальных условиях. Отмечается также увеличение липидных в1ж0-чошш в цитоплазме гепатоцитов. По мнению Е.Б.Буряаковой (I?8Э■), Л.Т.Маная (1990), мировые капли в цитоплазме клегок -

результат нарушения метаболических процессов перекисного окисления липидов.

На 3-й сутки после пятидневного введения в организм крыс 1/10 ЛДзд бутилкаптакса в ультраструктурз гепатоцитов отмечается некоторое восстановление наблюдаемых изменений, но не функциональной активности.

На 7-е сутки происходит гипертрофия митохондрий и их полиморфизм с однородным матриксом и более выраженными кристами. Эндоплазматический рзтикулум развит умеренно, о равномерно распределенными на поверхности рибосомами.

В следующей серии опытов мы исследовали влияние Пэгинола С-2000 на ультраструктуру гепатоцитов крыс, затравленных бутилкаптаксом. Электронно- микроскопическая структура печени отличалась от таковой при отравлении бутилкаптаксом: митохондрии окрутлой и овальной формы с электронно-плотным матриксом, окружены многочисленными профилями зернистой эндоплазма-тической сети, свободными рибосомами, что, по данным А.Ф.Блю-гера (1988), свидетельствует о их высокой биоэнергетической и синтетической активности.

На 3-й сутки при введении в организ?^ Пэгинола С-2000 на фоне пятидневного отравления бутилкаптаксом ульграсгруктура клеток печени не отличалась от гепатоцитов интактных животных.

Таким образом, на основании электронно-микроскопических исследований можно заключить, что при введении в организм животных бутилкаптакса в клетках и субклеточных структурах гепатоцитов крыс происходит' выраженные деструктивные изменения, подтверждажцие низкую функциональную и антитоксическую активность этих структур. Структурные нарушения гепатоцитов'восстанавливаются на 7-е сутки после пятидневного отравления бутилкаптаксом.

При введении Пэгинола С-2000 в организм животных, затравленных бутилкаптаксом, деструктивные изменения выражены меньше, отмечается более высокий уровень функциональной и антитоксической активности. Ультраструктура гепатоцитов восстанавливается на 3-й сутки при введении в организм затравленных

20.

животных Пэгинола 0-2000. ■

В основе изменений клеточного метаболизма при действии бутилкаптакса лежит усиление CP ПОЛ, что в свою очередь приводит к структурно-функциональныы нарушениям. Пэгинол С-2000, введенный на фоне отравления бутилкапгаксом ингибирует CP ПОЛ, и там самым нормализует содержание некоторых фракций фосфолишдов мембран митохондрий и шкросом,и в результата чего достигается нативносгь субклеточных структур.

ВЫВОДУ

1. Бутилкаптакс приводит к ингибированию скорости переноса электронов и окислительного фо сформирования в митохондриях печени. При совместном введении животным этого препарата и Пэгинола С-2000 восстанавлаваются скорость окисления сукцината и эффективность окислительного фосфорилирования митохондрий.

2. Установлено, что при введении животным бутилкаптакса происходит ингибирование активности полиферментных систем дыхательной цепи митохондрий, причем наиболее глубокое по НАД'И-оксидазной ветви дыхательной цепи митохондрий,

3, При введении бутилкаптакса наблюдается снижение содержания цитохрома Р-450 в микросомах печени, а введение Пэгинола С-2000 не влияет на содержание цитохрома Р-450.

4, Введение бутилкаптакса приводит к интенсификации ферментативного а неферментагивдого ПОЛ в митохондриях и микросомах: печени крыс. Пэгинол С-2000 сникает образование МДА по неферменгативному пути ПОЯ на 3-й сутки в митохондриях и микросомах печени и на 7-е сутки до НАДШ.Н-зависимому пути.

5, При введении бутилкаптакса в 1-е сутки отмечается ингибирование СОД, ГГ и активация ГП в митохондриях и микросомах печени, В следующие сроки изучаемые показатели постепенно возвращаются к контрольному уровню. Введение Пэгинола С-2000 на фоне отравления бутилкаптакаом вызывает восстановление активности ферментов, . -

6. Бутилкаптакс, введенный в организм животных приводит к снижению содериадия. ФЭА, КЛ, Ш, ФС и ФК в митохондриях и

в микросомах печени и увеличению уровня ФХ и лизоформ фосфо-лишщов. При введении животным Пэгинола C-200Ü как антиокси-данта почти полностью восстанавливается содержание ФХ, 40 А, 3G и частично М, ЛФЭА и ЯФХ мембран митохондрий и микросом печени крыс.

7. Показано, что введение бутилкаптакса приводит к нарушению ультраструктуры гепатоцитов: набухание митохондрий, просветление матрикса, исчезновение крист, очаговое расплавление наружной мембраны митохондрий. Умвгвиается гранулярная эндоплазматическая сеть, повышается содержание свободных рибосом и гликогена. Сочетание введения бутилкаптакса и Пэгинола С-2000 приводит к нормализации структур митохондрий и микросом печени крыс.

Список работ опубликованных по теме диссертации

1. Ферментативное перекисное окисление липидов биологических мембран при действии бутифоса/М.М.Джураева, А.В.Исакова, Р.Д,Руста?,10в, А.К.Мирахмедов//Актуальные проблемы биосферы в Узбекистане. Тезисы докладов республиканского совещания. Ташкент;Фан. 1985. С. 51.

2. Изменение конформации хроматина и активности митохондри-альных ферментов под влиянием пестхшддов/А.К.Мирахмедов, Г.А.Сагатова, А.А.Арипджанов, Ы.А.Иноятова, Р.Д.Рустамов и др.//Онтогенез. 1983, Т. 19. С. 441,.

3. Влияние бутилкаптакса на активность антиокислительных ферментов митохондрий и микросом печени крыс/Р.Д.Рустамов, А. К.Мирахмедов, М.Ы.Джураева, Я.Р.Халматова//Цокл. УзССР. 1989. Я 2. С. 54-56.

4. Фосфолипидный состав мембран митохондрий и шкросом печени крнс в норме и под влиянием бутютсалтакса/А.К.Мирахмедов, Р.Д.Рустамов, К.Т.Алматов, Х.М.Ееканов//Узб.биол.журн. 1389. К 4. С. 6-8.

5. Butilcaptax influence on the activities cf antioxidative enzymes in rat liver mitochondria and nicroaomes/M.M.Dju-raeva, H.D.Rustaraov, A.K.Miraihmedov, D.S.TuJtchieva//

The 20th Keeting of the federation of European Biochemical Societies!Abstracts.-Hungarian,Budapest. P. 160. 1990.

6, The effect of benaoiBOthiosol on cell organoids/A.K.Wi-rakhmedov, Ai.W.Dguraeva, H.D.Kustamov, D.S.Tuychieva// She third European congress on cell biology¡Abstracts. -I'irenze. Italy. 1990. P. 261.

7, Влияние бутилкаптакса на окислительное фосфорилирование и активность полкферментных систем мембран митохондрий печени крыс/А .К,Миразшедов, Р.Д.Рустамов, К.Т.Алматов, X. Агзамов//%тологш, 1991. Т. 33. № 4. С. 89-94,

8, Влияние бутилкаптакса и дроппа на некоторые биохимические показатели субклеточных структур печени эмбрионов и беременных крнсД.С.Туйчиева, Р.Д.Рустамов, М.П.Ибрагим-ходааева и др./Дзб.биол.курн. 1992. й 1. С. 6-9.

Подписано к печати 23.03.92г. Заказ 56 Обьем I п/л. Тираж 120 экз.

Отпечатано на ротапринте iBAH Республика Узбекистан гЛамент ул.Муминова 13