Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Фолликулгенез и гормональный статус коров-доноров эмбрионов при индуцировании суперовуляции

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Фолликулгенез и гормональный статус коров-доноров эмбрионов при индуцировании суперовуляции"

Украинская Академия Аграрных Наук Украинский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт животноводства

На правах рукописи

MACO АНАТОЛИЙ АЛЕКСЕЕВИЧ

УДК 591.15.16

ФОЛЛИКУЛОГЕНЕЗ И ГОРМОНАЛЬНЫЙ СТАТУС КОРОВ-ДОНОРОВ ЭМБРИОНОВ ПРИ ИНДУЦИРОВАНИИ СУПЕРОВУЛЯЦИИ

03.00.13 - Физиология человека и яивотных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

г.Харьков - 1991г.

Работа выполнена в лаборатории (центре) трансплантации эмбрионов сальскохозяйственых кивотных Украинского научно-исследовательского ордена Трудового Красного Знамени института животноводства.

Нааучный руководитель: БУГРОВ Алексей Дмитриевич, доктор биологических наук.

Официальные оппоненты: Р03Г0НИ Иван Иванович, доктор биологических наук, профессор; ПИВОВАР Александр Константинович, кандидат биологических наук.

Ведущее предприятие: Каменец-Подольский сельскохозяйственный институт.

Защита состоится "14" ^Ц^СЦУ!- ЮЭЗ-г. в ^О часов на заседании специализированного Совета Д.020.10.02 при Украинском научно-исследовательском ордена Трудового Красного Знамени институте животноводства (312120. г.Харьков, п/о Кулиничи).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат .разослан "Ь " 199Ч г.

Ученый секретарь специализированного Совета кандидат биологических наук

Соловьева Т.Л.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Метод трансплантации эмбрионов позволяет более эффективно использовать выдающихся коров путем получения от. них нескольких оплодотворенных ' яйцеклеток в одну индуцированную, охоту и пересадки их менее продуктивным животным (Л.К.Эрнст,-Н.И.Соргев, 1989 ). ' • ,

Использование гормональных препаратов позволяет получать множество овуляций, а, следовательно, и эмбрионов ■ от. одаой самки. Однако, еще. нэ вскрыты закономерности проявления этой реакции не гонадотропшш, не установлены их оптимальные дозы.

Отсутствие объективных методов контроля за ответной реакцией животного на экзогенный гонадотропин не позволяет отдать предпочтение той или иной схеме гормональной обработки.' Антагонизм эстрогенов и прогестерона в связи с реакцией яичников приводит к накоплении такого количества гормонов в кроьи животных, что уровень резко отличается от нормального (Ы.И.Прокофьев, 1983). В этой связи, представляет интерес познание стагуса гонадотропных и половых гормонов на разных этапах процесса сутюровуляции и особенно при разработке новых, комплексных гормональных препаратов и схем их введения.

Недостатком гипофизарных гонадотрошшов является короткий ( до 5-6 часов) период полураспада, что требует многократного.их введения. Проводились попытки разработки различных форм препарата ФСГ с целью пролонгации его действия. На сегодняшний день противоречивые данные литературы свидетельствуют об отсутствии такого препарата (Ф.И.Осташко и др., 1988).

Процессы, протекающие в яичниках коров-доноров, в частности, рост фолликулов и их развитие под воздействием гормональных препаратов изучены еще недостаточно.

Цель и задачи исследования. Цель настоящего исследоводил заключается в усовершенствовании и разработке наиболее эффективных способов гормонального вызывания суперовуляции у коров-доноров. Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

1. Разработать объективный способ оценки реакции супероаулящш.

2. Провести сравнительную оценку методов вызывания множественной овуляции у коров, используя различные дозы и типы гонадотропинов. '

3. Разработать способ гормональной обработки доноров путем

пролонгирования фоллшулрстимулирущ/х препаратов, , 4. Сравнить гормональный профиль доноров при использовании различных способов вызывания суперовуляции.

, 5.. Количественно и качественно оценить рост и развитие фолликулов у коров-доноров при спонтанном половом цикле и при гормональной обработке. . . .. .

Научная новизна работы. состоит в комплексном физиологическом, эндокринологическим, фармакологическом подходе к усовершенствованию и разработке методов вызывания суперовуляции у коров-доноров. Дане полная характеристика и показана объективная роль оценки реакции суперозуляции под воздействием различных типов и доз гонад-отропинов. Теоретически обоснована и предложена комплексная форма фоллтсулостимулирущего гормона пролонгированного действия, обладающая более физиологическими свойствами по сравнению с имею-пдамися на данный период времени схемами. Впервые на животных, обработанных гормональными препаратами пролонгированного действия, определено изменение гормонального фона ( уровня прогестерона и эстрадиола 170 ) от начала гормональной обработки и до момента извлечения эмбрионов. Усовершенствован способ оценки роста и развития фолликулов в яичниках коров-доноров под воздействием фоллику-лостимулирувдих гормонов и при спонтанном течении полового цикла.

Основные положения диссертации:

- выбор оптимальной схемы гормональной обработки коров доноров, используя препараты фоллигон в дозе.3000 ИЕ и ФСГ-п в дозвх 50 мг и 32 мг;

- объективная оценка реакции суперовуляции под воздействием гормональных препаратов;

- разработка комплексной формы фолликулостимулирующего гормона о поливалентным металлом (цинком) и полимером (ПВП);.

' - определение гормонального фона у коров-доноров в период обработки фолликулостимулирувдими гормонами пролонгированного действия;

- изучение роста и развития фолликулов в яичниках животных с начала, гормональной обработки и до момента овуляции.

.' ! '. Основные положения диссертации научно обоснованы и подтверждены результатами практической работы^ а также анализом отечественных и зарубежных исследований.

Практическая значимость работы. Полученные данные по оценке реакции суперовуляции вызванной разными дозами и типами гонадотро-

иинов позволяют объективно проводить учет реакции при супороьуля-ции коров-доноров и способствуют выбору оптимальной в физиологическом отношении схемы гормональной обработки для. получения максимального числа полноценных эмбрионов. Это позволит получать более стабильные результаты и поеысит аффективность трансплантации.

Разработанный способ удлинения действия фодликулостимулирующих гормонов позволяет сократить введение препарата для суперовуляции животного с 8-10 до 1-3, что уменьшит стресс причиняемый данной манипуляцией животному, значительно понизит трудоемкость процесса.

Полученные новые данные о гормональных изменениях в крови коров -доноров под воздействием комплексного фолликулостимулирущего гормона пролонгированного действия являются основой для нового направления разработок простых и эффективных методов изучения гипофиз арных гонадотропинов с.заданными гормональными свойствами по временным интервалам.

Разработанный способ изучения фолликулогенеза при физиологическом течении полового цикла и под воздействием гснадотропинов позволяет изучить изменения, происходящие в яичниках коров, и являются базой для проведения исследований в данной области. .

Апробация и публикации. Материалы диссертации представлены и. доложены:

- 2-й - республиканской научно-производственнойконференции (16-17 декабря 1988г.„ г.Львов ).

- на республиканской научной конференции "Состояние и перспективы развития биотехнологии в аивотноводсгве ( 21-22 сентября 1988г., г.Харьков ).

"- в сборнике научных исследований "Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота" (Жодино,, 1989 г.).

- на Всесоюзном совещании " Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных" (1989 г., Алма-Ата ).

- на ежегодных симпозиумах "Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота" ( 1987-1990 г.г.).

Всего по результатам исследований опубликовано 6 научных работ

Объем диссертационной работы: Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, содержит 31. таблицу, 2 графика..

.Список литература включает 141 источник , в том числа, 80 иностранных.

2.МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Дирсертвционная работа выполнена в лаборатории (центре) трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных Украинского НИИ животноводства .

Исследования проводились с 1986 по 1991 год на коровах симментальской, Лебединской, красной степной, черношстрой и краснопестрой голштинофрмзской пород в возрасте от 3-х до 10 лет кивой массой 500-650 кг.

* При выборе хивотнях для экспериментов учитывали общее состояние коров, упитанность , состояние матки, яичников, наличие в них фолликула, либо желтого тела, их степени развития. В опытах использовались животные' с правильным чередованием половых циклов с яичниками размером от 1,5 до 5,0 см.

При разработке эффективных схем и способов гормонального вызывания суперовуляции использовали три типа гонадотропинов: стандартный препарат СЖК- фоллигон (Голландия), фоллитрогош (Каунас) и гипофизарный гормон ФСГ-п (США). Гормональную обработку животных начинали с 10 дня полового цикла. Осеменение доноров проводили ректоцервикальным методом с интервалом 12 часов в тело матки, начиная через 48 часов после введения эстрофана. Вымывание эмбрионов осуществляли на 7 день после первого осеменения.

На день извлечения эмбрионов оценку качества реакции суперовуляции проводили ректальным методом и путем визуального осмотра яичников через разрез в области вымени.

Исследования по разработке способов пролонгации ФСГ-п проводились вначале на лабораторных животных, а затем на коровах. В качестве пролонгатора использовали хлористый цинк и полившшлпирролидон.

С момента начала гормональной обработки.и до дня извлечения эмбрионов у. коров-доноров брали кровь один раз в сутки для определения уровня прогестерона и эстрадиола 17р. Уровень этих гормонов в крови определяли радиоиммунологическим методом с помощью набора "Стерон-п-125-1" и "Стерон-е-125-1.

Наблюдения за изменениями, происходящими в яичниках коров-доноров с момента начала гормональной обработки и до овуляции проводили через фистулу , поставленную в области правой голодной ямки используя эзофагогастродуоденоскоп типа ЭГДБ-ВО-4.

Весь цифровой материал, получанный в результате эксперименталь-

ной работы, был статистически обработан с применением биометрических методов ( А.А.Плохинский, 1969, В.С.Асатиани, 1969).

3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1.Эффективность применения препаратов ФСГ-п и фоллигона ( стандартного препарата ГСЖК ) для вызывания суперовуляции у коров-доноров эмбрионов.

В первой серии опытов проведена сравнительная оценка подсчета желтых тел ( Ж.Т), фолликулов (Ф) и лютеинизировавших фолликулов (Л.Ф) путем ректальной пальпации й осмотра яичников после разреза в области вымени и подтягивания их на поверхность.

Прооперировано по 10 коров, обработанных препаратом ФСГ-п в дозе 32 мг, 50 мг, и фоллигоном в дозе 3000 НЕ. Результаты исследований приведены в таблице I, 2 и 3.

Из данных таблиц I видно, что при ректальном исследовании яичников совпадений с визуальным методом не наблюдалось во всех 10 случаях. Ошибка в подсчете Н.Г. составляле от +2 до -45.ит. В целом при ректальной пальпации реакция была завышена на 4 и занижена на 75 Ж.Т.

По количеству Л.Ф.при ректальной пальпации результат был занижен во всех случаях и, в целом, в правых и левых яичниках у животных не было выявлено 23 Л.Ф.

При подсчете количества фолликулов совпадение было в трех случаях, в двух случаях результат был завышен и это составило 5 Ф. ,а в остальных 4 - занижен- что составило II ф .

Анализируя данные таблицы 2, можно заметить, что при сравнении ректального и визуального методов оценки реакции яичников у животных, в трех случаях результат был завышен и это составило 6 К.Т., а в остальных девяти результат был занижен и это составило 36 ж.Т. Количество 1.Ф.совпадало в одном случае , а в остальных девяти - результат был занижен и это составило 31 Л.Ф. Ноличестеб Ф. совпадало в трех случаях , в одном случае реакция была завышена и это составило 4 Ф., а в остальных шести случаях результат был занижен и это составило 18 Ф. По общему количеству Л.Ф., выявленных двумя методами, наблюдались достоверные различия (Р<0,02). :

Из данных таблицы 3 видно, что ,в целом, при ректальной паль-

Таблица I. Результата ректального(Р) и визувльйого '(В) методов оценки полЗэвуляции после обработки коров ФСГ-п в дозе 32 мг.

. N : Инв.Н Правый яичник Левый яичник Всего +к визуаль-

п/п доно- ж.Т . ЛФ .Ф . х.т . Л.Ф . Ф. я.т|л Ф Ф жт "!л ф| Ф ному методу

ра

Р В р в Р В Р В р в Р В ректально визуально Ж.Т ЛФ Ф

I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 II 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23

500а 6 9 г .1 1 1 4 10 - 1 2 1 10 1 3 19 2 2 • -9 ■-1 +1

2. 0098 4 5 - 1 2 7 7 - 1 ■ 1 1 11 - 2 12 1 3 -1 -I -1

3. 0055 7 7 - 1 1. 2 10 9 - 2 - 1 17 - *1 16 3 3 +1 -3 -2

~~4? 502? 2 4 - I 2 - 4 10 1 1 . 2 - б 1 4 14 2 ~ -8 -I +4

5. 5018 1 1 -• 1 - - 2 1 1 - 4 3 - - 2 2 4- +1 -г -4

6. 5026 4 2 - 2 2 3 8 1? - 2 4 12 - 4 14 2 7 -2 -2 -3

7. 5032 9 12 2 - - 6 10 1 2 1 2 15 1 1 22 4 2 -7 -3 -1

8. 3824 5 6 - 1 - 3 5 1 2 1 1 8 1 1 ' 11 3 1 -3 -2 -

9. 7625 10 35 I 2 г 10 30 - 4 2 - 20 - 2 65 . 6 2 -45 -6 -

10. 3652 4 5 - 1 - 12 9 - 1 - - 16 - - 14 2 - +2 -2 -

Всего 52 86, 1 12 7 10 66 103 3 15 11 14 18 4 18 189 27 24 +4 -23 +5

В среднем на I жи- 5,2 8,6 0,1 1,2 0,7 1.0 6,3 10,30,3 1,5 1,1 1.4 1.8 0,4 1,8 18,9 2,7 2,4 -75 -11

вотное £ 0,9 3.1 0,0 0,3 0,1 0,2 1.1 0,0 0 0,3 0,4 0,5 1.7 0 0,3 5,4 0,4 0,5

Таблица 2. Результаты ректального(Р) и визуального (В) методов оценки полиовуляции после обработки коров ФСГ-п в дозе 50 мг.

N Инв.Ы Правый яичник Левый яичник Всего +к визуаль-

п/п доно- Ж.Т . ЛФ ф Ж.Т.. Л.Ф . Ф. 1.т1л Ф Ф ЖГ |л <j ф ному методу

ра I

Р В Р В- р В Р В Р В Р В ректально визуально Ж.Т ЛФ Ф

I 2 3 4 5 6 7 8 9 10 II 12 13 14 15 ie 17 18 19 20 21 22 23

5002 Ь 4 - 2 I 1 3 Э I I - I Ü 1 I Ч 3 2 +1 -I

2. 5009 8 10 I 2 2 I 6 7 - - • I 14 i 2 17 2 2 -3 -I -

3. 5023 4 4 - 2 - - 2 3 - - - 1 6 - 7 2 1 -1 -2 -1

4. 7246 4 7 - I 4 4 4 4 - - 3 8 8 - 7 II I 12 -3 -I -5

5006 4 2 - Б 2 I 4 2 - 7 3 - 8 - 5 4 12 I +4 -12 +4

6. 5019 2 2 - - - - 2 I - - - - 4 - - 3 - +1 -

7. 5022 5 15 - I I 4 .3 14 I 3 I I 8 i 2 29 4 5 -21 -3 -3

8. 5050 3 5 - 2 2 2 4 6 - 2 2 2 7 - 4 II 4 4 ' -4 -4 -

9. 5031 6 8 I 3 I ' 2 3 3 - I 2 7 9 i 3 -II 4 9 -2 -3 -6

10. 5027 5 6 - 2 I 2 4 5 I 2 I 2 9 i 2 II 4 4 -2 -3 -2 .

Всего 46 63 2 20 ^ 14 17 35 48 3 16 12 23 81 5 26 III 36 40 +6 -36 -31 +4 . -18

В среднем на I жи- 4,6 6, 3 0,2 2,0 1,4 1,7 3,5 4,8 0,3 1,6 1,2 8.1 0,5 2,6 11,1 3,6 4,0

вотное г. 0,5 1,2 0,0 0,0 0,3 0,2 0,3 0,4 1,2 0,0 0,8 0,3 0,8 0,0 0,6 2,4. 1,0 1.2

Таблица 3. Результаты ректального (Р) и визуального (В) методов оценки полиовуляции после обработки коров фоллигоном в дозе 3000 И.Е.

N Инв.И фавнй яичник Левый яичник Всего +к визуаль-

п/п доно- А.Т . ЛФ Ф Ж.Т . Л.Ф . Ф. я.т|л Ф Ф ЖТ |л ф! Ф ному методу •

ра - '

р В Р в Р В Р В Р в Р В ректвльно визуально Ж.Т ЛФ ф.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 II 12 13 14 15 16 17' 18 19 20 21 22 23

1. БОи г 2 - 1 — г- 3 4 - 4 - - 5 - - 6 5 2 -I -5 -2

2. 5043 3 3 - 5 7 5 6 - 4 • 5 8 а - 10 9 4 15 -1 -4 -5

'з. 5039 8 6 - - 2 4 5 8 - - . 2' 3 13 4 14 - 7 -1 -3

4. 5021 ■ 3 3 - I 3 3 6 9 - - 3 4 9 - 6 12 I 7 -3 -1 -1

5. 5041 3 7 - 1 3 3 4 6 - 2 2 6 7 - 5 13 3 9 -6 -3 -4

6. 7631 7 13 1 5 6 14 7 •10 г 6 3 7 14 3 9 23 11 21 -9 -8 -12

7. 5015 8 13 1 3 1 3 5 5 - 1 1 2 13 I 2 18 4 5 -5 -3 -3

8. 5033 5 6 - 1 1 5 4 7 - 2 2 4 9 - 3 13 3 9 -4 -3 -6

9. 5035 4 7 I 2 6 6 8 1 3 3 4 10 2 3 15' 5 10 -4 -3 -7

10. 5025 6 6 - 2 2 4 • 5 7 - 2 2 2 11 - 4 13 4 6 -2 -4 -2

Всего 49 66 3 16 23 51 50 70 3 24 23 40 99 6 46 136 40 91 -3.6 -34 -45

В среднем на I жи- 4.9 6.6 0,3 1.6 2,3 5.1 5,0 7,0 0,3 2,4 2,3 4,0 9,9 0,6 4,6 13,6 4,0 9.1

вотное 1 0,7 1,2 0,0 0,5 0,6 1.1 0,4 0,6 0 0,3 0,4 0.7 0,9 0,2 0,9 1,4 1.0 1,7

пации обоих яичников результат по Ж.Т. во всех случаях был зани жен и это составило 3G Ж.'IV Количество Л.Ф. совпадало в одном случае, а в остальных девяти - результат был занижен и это составило 34 Л.Ф. Общее количество Ф. при ректальной пальпации было определено на 45 меньше, чем при визуальном наблюдении. Ответная реакция на гонадотропин в левых и правых яичниках была почти равной.

Наблюдались достоверные различия по общему количеству Ж.Т. при ректальном и визуальном исследовании (Р<0,05), а также по количеству Л.Ф. (Р<0,05), .

Анализируя данные, приведенные в таблицах 1,2 и 3, можно заметить, что лучшая реакция на экзогенный гонадотропин получена при обработке животных ФСГ-п в дозе 32 мг. При этой схеме обработки в среднем на одно животное было получено 18,9 Ж.Т., в то время как при ректальной пальпации было выявлено 11,0. Число Л.Ф. на одно животное при двух методах оценки составило 2,8 и 0,4 , а число ф. 2,7 и 1,8, соответственно.

Немного ниже результаты были при вызывании суперовуляции у коров фоллигоном в дозе 3000 ИЕ. В среднем на одно животное, при ви-визуалыюм наблюдении, приходится 13,6 Ж.Т.,тогда как ректальным методом было обнаружено только 8,1. Число Л.Ф. было 3,6 и'0,5, а Ф. 4,0 и 2,6, соответственно.

Статистически достоверные различия в пользу визуального подсчета по Л.Ф.установлены после обработки коров-доноров ФСГ в дозе 32 мг и 60 мг, а также К.Т., Л.Ф. и Ф. после обработки животных фоллигоном в дозе 3000 ИЕ.

Важным показателем эффективности гормональной обработки коров-доноров является количество полноценных 8мбрионов на донора. (Табл.4). Из материалов таблицы 4 видно, что.в группах из 10 животных при обработке ФСГ-п в дозах 32 мг и 50 мг реагировало суперовуляцией по 9 животных, а в группе, где обработку проводили фоллигоном в дозе 3000 U.E., реагировали все животные. Количество овуляций по каждой из групп составило 187, 108 и 136, соответственно.

После обработки животных ФСГ-п в дозе 32 мг извлечено наибольшее количество эмбрионов и яйцэклеток - 99 , это на 41 больше, чем во второй группе и на 22 , чем в третьей. Количество извлеченных эмбрионов и яйцеклеток от овуляций в процентном отноше-

шш по всем трем группам было одинаковым и составило больше половины. Самое высокое число эмбрионов и яйцеклеток на донора было в первой группе опытных животных и составило 9,9, что на 4,1 больше чем во второй группе г на 2,2, чем в третьей группе. Среднее число эмбрионов х яйцеклеток на положительного по извлечения донора составило 12,4; 7,2; 8,5 по каадой из трех групп, соответственно. Полноценных эмбрионов на положительного донора было больше в первой груше животных на 2,9, чем во второй и на 5,1, чем в третьей.

Таблица 4. Количество и качество эмбрионов в зависимости от типа и дозы гонадотропина.

ПОКАЗАТЕЛИ | ПРЕПАРАТ

ФСТ-П-32МГ ФСГ-П-50МГ Фоллигон 3000НЕ

1. Обработано животных, гол. -

2.Положительно прореагировало

на суперовуляцию, гол. .

3.В процентном отношении от обработанных

4.Количество овуляций,ж.т.

5.Среднее число овуляций на пр реагировавшего донора, шт.

6. Извлечено эмбрионов и яйцеклеток, шт.

7. Процент от числа овуляций, X

8.Среднее число эмбрионов

' и яйцеклеток на донора, шт.

9. Количество положительных по извлечению доноров; гол.

10. Процент от числа обработанных , % .

ни» донора, от

12. В том числе полноц., шт.

да генерированных, яйцеклеток, шт.

10 10 10

9 9 10

90*3 187 9013 108 100 136

0— 20,811,0 12,011¿7 . 15,113,0

99 53x3,6 58 53,714,8 77 56,614,2

9,9±1,6 5,812,7 7,712,3

8 8 9

80+4 л. 8014 90+3

12,4*1,4 7,2+3,6 . 8,5*2,2

шт.

7,5+1,5 3,0*1,2 1,9*1,0

4,6*3,5 1,4+0,6 1,2+0,5

2.4*1,9 2,7*1,1 3,4*0,

Наименьшее количество дегенерировашых эмбрионов и яйцеклеток -1,4 и 1,2 - было извлечено .во второй группе животных, а наиболъ-йее количество -2,7 и 3,4 - в третьей группе .

Статистически достоверно вше количество полноценных эмбрионов

Таблица 5. Состояние яичников у коров на день извлечения эмбрионов.

Препарат ' Доза К-во юга-х п Реакция ж.т. Размере а»в»д) Масса яичников Масса ж.т. яичников

большего шт. меньшего ' шт. большего см3 меньшего см3 большего . г меньшего г большего г меньшего г

да - 32 мг I " 10 4 42 Й4 4Й.У 4Й.4 17,7

I . 12 2 160.9 165 67,4 58.1 29.3 . 10

I 35 30 гбо 234 124 10? 88 75

I 9. 5 48. 36 25 21,5 19,5 12

I 12 , 10 90 67,5 63,8 61 а 26,2 22,1

ВСЕГО 5 7В 51 . 326,5 285,2 180,7 126

В среднем на 1 ж-е 15,6 10,2 65,3 57,0 36,1 25,2

ФСГ - 50 мг I "4 7 74,6 60' 17,6 15,9 9.5 9

I г I 68,7 75 15,6 13,5 54 2

I 15 14 68,2 63 50 Э5<0 24 19

I .5 6 110,2 110 53 44 13 15

8 3 ' 153 93,7. 58 49,5 17 5

всего 5 34 31 . 194,2 157,9 68.9 50

В среднем на I ж-е 6,8 6,2 38,8 31 ¿5 13,7 10

Фоллигон I 6 Э 213,? 224 95 76,4 25.4 11.7

3000 ИЕ I 9 3 97.5 43,7 43 21 27 11

6 7 91 52,5 44 < 28 13 11

I 13 10 350 285 126 . 116 51 46

I 13 5 200 105 86 '44 39 21

ВСЕГО 5 47 28 294 285,4 155.4 100,7

В среднем т I Я-в 9,4 .5,6 78.8 57.08 31.0 20,1

на положительного донора между I и 3 грушами ( Р<0,05 ).

Таким образом, количество и качество эмбрионов находится в прямой зависимости от типа и дозы гонвдотропина . Самой результативной на наш взгляд является доза препарата ФСГ-Н 32 мг, которой обрабатывали животных первой опытной группы.

. В наших исследованиях мы проанализировали ответную реакцию пра-.вого и левого яичников на введение экзогенных гормонов.

После вызывания полиовуляции препаратом ФСГ-п в дозе 32 мг число индуцированных к росту Ф., в среднем на донора, было на 1,7 больше в левом яичнике, а после обработки ФСГ-п в дозе 50 мг на 1,2 больше в правом .В группе животных, обработанных фоллигоном общое количество Ф. было одинаковым в правых и левых яичниках .Между левыми ' и правыми яичниками не выявлено достоверных различий по количеству индуцированных к росту Ф. во всех группах.(Р>0,05}

Наряду, с изучением реакции суперовуляции и ее оценки, нами проводились исследования с целью определения макрофункционалышх свойств яичников. Для этого определяли линейные показатели ( длину, ширину и высоту ) яичников, массу яичников и Я.Т. Основным показателем по которому проводилась идентификация на болышш и меньшие, была масса яичников ( Табл. 5).

Наш установлено, что весьма высокая степень корреляции г=0,93±0,1 (Р<0,001) наблюдалась между реакцией Ж.Т. и массой яичника . Корреляционная зависимость г=0,92^0,1 (Р<0,001> наблюдалась между размером и массой яичника и г=0,8-1-0,15 (Р<0,001) - между массой яичника и массой Я.Т. яичника.

С увеличением реакции возрастает и масса яичников за счет увеличения-массы К.Т. яичника, а не за счет размера его строчы.

Н

3.2 Прологация действия фолликулостимулирущих гормонов ПОлившпштнрро лидоном и Хлористым цинком и изменения уровней прогестерона и астрадиола 17р в крови коров во время вызывания полиовуляции данными препаратами.

В последующей серии опытов была проведена попытка разработки фоллзшулостимулирунцего гормона пролонгированного действия с целью сокращения кратности его вЕвдения.В качестве пролонгатора исполь-зоваля полквжшшрро ладой (ПВП) с г^О.З различной процентной концентрации и соли цинка (гпС1 ). Комплексный препарат вСГ-п+ПВП вво -

дили от 1 до 4 раз за обработку, а препарат ФСГ-п+цинк один раз общей дозой 50 мг. Контролем служила группа хивотны, обработанных ФСГ-п в дозе 32 мг по четырехдневной схеме. С момента введения про-парата до дня извлечения омбрионов проводилось определение уровней прогестерона и эстрадиола 17(3 в крови коров-доноров. Полученные результаты приведены в таблице б и подтвзрадены графиками I и 2.

В начале исследований проводилось четырехразовое введение комплексного препарата за обработку. Положительно прореагировало суперовуляцией 83,ЗЖ животных как в контрольной, так и в опытной группп. Общее количество полученных эмбрионов и яйцеклеток было равны:/ 66 п 66 шт. Количество полноценных эмбрионов в среднем нэ донора в опытной груше животных было на 4,2 меньше чем в контрольной. Приведенные данные свидетельствуют о том, что предложенная .схема гормональной обработки животных ФСГ-п с 5% ПВП пролонпгрованного действия является достаточно эффективной. Недостатком данной схемы является то, что при значительном выходе эмбрионов ' более 3/4 от общего количества были дегенорнрованныв и яйцеклетки. По нашему мнению низкий выход полноценных эмбрионов и нали'ие большого количества Ф. в яичниках вызвано чрезмерным удлинением действия1 ФСГ продотированного ГВП при 4-х кратной обработке.

В следующих опытах мы уменькили кратность взедегам пролонгированного ФСГ-п до одного ^азв. Опыт проводили на 12 коровах. Гормональный препарат пролонгированного действия При однократном введешга вызывал овуляцию у 66,7 % езшотных, в то время как в контроле реагировало 83,ЗЖ.

В результате обследования яичзпшов подопытных животных било обнаружено в среднем 8,75 Ж.Т.на донора. Среднее число зародышей при этом составило 8,(£-2,1, из которых только 3,0*1,5 были полноценными, 3,25» 1,0 -дегенерированные и 1,7510,9 -яйцеклетки.

Однократное и четырехкратное введеше <ССГ с 5% ПВП но дало желаемых результатов, как и использование 2,5%, 10% концентраций ПВП и изменение рекимов введения препарата, поэтому в следующем опыте ФСГ- п с 5% ПВП вводили один раз в день три дня подряд. Видно, что 29% опытных животных не реагировали на введение препарата суперовуляциой, что нэ 12,3$ больше контроля. Количество Ж.Т. [1а полок!тельного по извлечете донора составило 8,5, тогда как в контроле' было 10,5 . ' '

Таблица 6. Рввкцшг полговуляцин и качество эмбрионов после введения препаратов ФСТ-п

хфавоигщюванного действия .

1КЖДЗАТЕЛИ ФСГ-П 32 мг контроль одноразовое введение с 5» ПВП Четырехра-зовое введет» С Трехразовое введение с Двухразовое введение с Одноразовое введение с

51 ПВП 5Ж ПВП 5« ПВП : ЦИНКОМ

Обработано животных , гол. 6 . 12 6 17 6 14

Положительно прореагировало на суперовуляцив, гол. 5 8 5 12 5 9

В процентном отношения от 83,3-15 66,7-13,6 83,3115 71,6112,6 83;3*15 83,3±15

прореагировавших, гол. 1

Положит, по извлечению, гол. 5 1 8 1 5 1 10 5 9

В процентном отношении от ,

' прореагировавших, % 100 100 100 83,3 100 100

Получено эмбрионов всего, шт. 65 64 66 1 121 • 51 76

На одно животное ., шт. 13,0±3,3 8,0±2,1 13.2±4,2 12,1+2,4 Г0,2±1,4 6,411,8

В том числе: полноценных, шт. 7,8-2,7 3,0*1,5 3,6±2,2 6,1±2,1 3,4+2,1 13,3+1,4

дегенерированных, шт. 2,8±1,2 •3,25*1,0 7,8+'4,2 3,8±1,1 6,1±1,9 3 ,4+0,9

яйцеклеток , шт. 2,4-0,7 I,75-0,9 1,8+0,9 2,3±0,9 0,7±0,2 1,710,6

Жетых тел на донора, шт. 10,8±1,5 8,75-0,1 9,611,9 8,5±1,0 7,5±2,0 11,3+2,2

От 10 положительных по извлечению доноров опытной группы получено Оолое 120 эмбрионов и яйцеклеток. Количество полноценных эмбрионов на донора составило 6,1 или на 1,7 меньше контроля ,а. дегенерированных эмбрионов было, на 1,0 больше . По количеству яйцеклеток заметных различий между группами не наблюдалось.

Получение на наш взгляд положительных результатов при трехкратном введении ФСГ-п с 5% ПВП посетило основанием для сокращения количества введений препарата с трех раз до двух. Препарат вводили на 10 и 12 дни полового цикла в дозах 30 мг и 20 мг ФСГ-п с 5% ПВП. Однако в этом случае результаты были ниже.

Наряду с использованием в качестве пролонгаторз ПВП в одной группе животных было проведено испытание комплексного ФСГ-п, где в качестве пролонгатора использовался хлористый цинк.

В опытной груше только 64% животных реагировало положительно па суперовуляцию , что на 19,ЗЖ меньше контроля. Реакция яичников на одного положительного донора составила 11,3 Ж.Т., что на 0,5 больше контроля, однако, количество полноценных рмбрионов било на 4,5 меньше контроля.

Таким образом, на основании приведенных данных видно, что препарат пролонгированного действия ФСГ-п с 5% ПВП при трехкратном введении по своему биологическому действию подобен препарату ФСГ-п, введение которого осуществляют по общепринятой схеме.

Не наблюдалось статистически достоверных различий по уровню этрадиола 17р в крови между опытными и контрольной группами на протяжени всего периода исследований, что свидетельствует о сходном действии комплексных препаратов пролонгированного действия с препаратом ФСГ-п при 8 разовом его введении. Высокий уровень зстра-эстрадиола Г/р перед началом охота в группе живо тяга при тррхкряпюй обработке комплексным препаратом свидетельствует о росте болттого количества фолликулов. На наш взляд это является положите л; вит* показателем для дальнейшей полиовуляции.

Изменение уровня прогестерона в кроки коров контролытзй и ега.'тгтях групп происходит аналогично до наступлютая тцуцлрораяпей охоты, з затем в контрольной группе происходит ого высокий подъем, в cтJ¡ичиo от опытных, г до возрастание концентрации прогестерона происходит более 'платно. В некоторых группах га Я-3 дня до момента язвления зкСр'/.оксв происходит понижение уроьня прогестерона, чте является н&с!лагспр;!Я"лшм показателем для выхода качественных эмбрионов.

График I.

0,9 0,85 0,8 0,75 ^0,7 |0,65 * 0.6 0,55 ^0,5 «0,45 ¿0,4 £0.35

оо.з

0,25 0,2 0Д6 0,1

16 14 13 12 II 10 9 8 7 6 Ь 4 3

г \

X

о

о.

ОТ 1-4

«1

§

с

гТ ^ч ^

.•ий-.

10 II 12 13 0 1 2 3 4 5 6 7 ДНИ цикла

График 2.

■И-«'

о »•А ^ V*

10 II 12 13 О I 2 3 4 5 6 Г дни цикл*

Из полученных данных видно, что динимика изменения уровней эстрадиола и прогестерона в крош животных контрольной и опытных групп близка по своему развитию.

3.3. Рост фолликулов в яичниках коров после индуцированной охоты и в период гормональной обработки животного.

Наблюдения за изменениями, происходящими в яичниках коров при спонтанном половом цикле и под воздействием гормонов, проведены на трех грушах животных. Контрольная группа животных фолликулости-мулируюцим гормонами не обрабатывалась. Первую опытную группу животных обрабатывали ФСГ-п в дозе 50 мг по 4-х дневной схеме., Вторую опытную группу животных обрабатывали ССГ-п пролонгированного действия по 3-х дневной схеме(.Табл. 7) Общая доза ФСГ-п составляла 50 мг.

Физиологический рост Ф выражается в увеличении объема пузырька за счет клеточных элементов и накопления жидкости. Величина Ф. служила критерием определения степени его зрелости.

Рост Ф. в яичниках контрольной группы наступает после подавления проствгландином функции Ж.Т. и происходит неравномерно. К моменту начала охоты созревает у животного один шм два Ф. .которые на наш взгляд могут овулиро; зть.

Рост Ф. в яичниках коров, обработанных ФСГ-п, происходит равномерно и к моменту овуляции созревают в основном Ф., находящиеся к началу обработки животного в корковом слое яичника. Ф размером более 3 мм, которые имелись в яичниках коров на дёнь обработки и те, рост которых происходил на третий и последующие дни с начала обработки', не овулируют. В этой группе обработанных животных из 78 Ф., рост которых наблюдался после введения гормона, ко даю начала охоты количество Ф. размером от 12 до 15 мм было 75 или 96«. В груша животных обработанных 4СГ-П пролонгированного действия из СО, начавших развитие, Ф. достигли размера 12-15 мм к началу охоты все 60 или 1001.

Мы не наблюдали видимых различий в росте Ф.в яичниках коров, обработанных ФСГ-п в дозе 50 мг и препаратом пролонгированного действия.

Общее количества Ф. диаметром 12-15 мм, которые на наш взгляд могут оЕулировать, было в контрольной группе на- день напала охоты

Таблица 7. Рост фолликулов в яичниках хоров посла обработки препаратом ФСГ-п пролонгированного действия.

Инв. N - _ количество фолликулов на день наблюдения, п - »

г Размер

п/п животного фолликула,мм 10 II 12 13 .0

I 3880 .3 _ 11 - 100* . Э - 25* - 3 - 17,6*

6 - - '- , • 9 - 75* - 1 - 5,8*

9 - 5-41,6* -

12 - - - 5 - 41,6* 1 - 5,8*

15 . - - 2 - 16,6* 12 - 70,6*

Т 3930 " " : ~ 29 - 72,5« 12 - 23.2* 1 | ; г

6 . . - 10 - 25,0« ' 29 - 57,758 14 - 28,5* /г

9. - 1-2,5* 11-21.1* 16-32.6* 12-24*

12 - - - 19 - 38.7* 15 - 30*

15 - - - 23 - 46%

3 7278 ' 5 -. 9 - 100* 3 - 30* - 6 - 25*

6 .. 6 - 60* 5, - 29,4* -

9 1 - 10* 17 - 70,6* 9 - 37,5* '

12 - - - 9 - 37,5*

- 15. - - - -

ВСЕГО 60 74 83 91

В среднем на I животное 20 24,7 27,6 30,3

-214 или 8% от обща го количества , а во второй и третьей груше- 75 и 60, что составляет 75% и 65,93, соответственно.

Необходимо отметить, что для полного развития от начала роста множества фолликулов под воздействием гормональных препаратов и да овуляции проходит 4-дня, в то время как развитие 1-2 ф. при иэду-ищювашшой охоте происходят за 2-3 дня .

Полученные данные дают основание лолагать, что рост фолликулов в яичниках коров-доноров после обработки комплексным препаратом (ФСГ-п с 5% ПВП ) при трехразовом его ведении сходен с их ростом при восьмиразовом введении ФСГ-п общей дозой 50 мг.

ВЫВОДЫ.

1. Визуальный способ оценки реакции суперовуляции. показал, что ректальные исследования не отражают действительного состояния яичников на введение экзогенного гонадотропина.

2. Наибольшее количество полноценных эмбрионов и минимальное . число фолликулов и лютеинизировавпшх фолликулов обеспечила 4-х дневная схема введения ФСГ-п в дозе 32 мг, по сравнению с обработкой животных ФСГ-п в дозе 50 мг и фоллигоном в дозе 3000 ИЕ.

3. Поливинилпирролидон с т}= 0,3 пролонгирует фолликулостимули-рующее действие препарата Ф^Г-п и позволяет получить полноценные эмбрионы при уменьшении числа введения препарата.

4. Максимальное количество полноценных эмбрионов получено при использовании препарата ФСГ-П+5Ж ПВП сТрехразовым его введением за обработку.

5. Существует прямо пропорциональная зависимость между реакцией суперовуляции и массой яичников и нет зависимости мевду реакцией;

и размерами яичников.

6. Прогестерон у животных,.обработанных комплексным препарата* пролонгированного действия, находится на одном уровне до начала ' охоты, что и у животных, обработанных по стандартной схеме, в затем аналогично увеличивается, но имеет меньшее абсолютное значение.

7.Пик эстрадиола за 12-24 часа до начала охотн является благоприятным показателем для полиовуляции.

8 Рост фолликулов в яичниках коров с индуцированной охотой наблюдается с момента введения простаглавдина. При 4-х дневной ' обработке ФСГ-п в дозе 50 мг и трехразового введения лролонги|*>-

венного ФСГ-п в этой же дозе их рост наблюдается с момента начала введения гормоне.

9. Общее количество фолликулов на день начала охоты после обработки донора фолликулостимулирущими гормонами пролонгированного действия в два раза превышает количество фолликулов, находящихся

в яичниках необрабатываемых животных. Причем число предовуляторных фолликулов выше в 20-30 раз.

10. Количество предовуляторных фолликулов, обнаруженых в яичниках коров на день начала охоты, находится в прямой зависимости от числа антральных фолликулов, имеющихся в яичниках на день введения фолликулостимулирупцего гормона.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1.Прк оценке ответной реакции животных доноров наряду с ректальным методом необходимо использовать визуальный метод, т.к. ов является более объективным.

2.Для снижения трудоемкости гормональной обработки доноров рекомендуем использовать трехразовое введение комплексного препарата ФСГ.-п с 5% ПВП.

3. Для более полного представления об изменениях, протекащих в яичниках коров, как ори спонтанном половом цикле, так и во время гормональной обработки рекомендуем использовать визуальный ( с помощью езофагогастродуоденоскопа) способ наблюдения.

-О-

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Сравнительная оценка полиовуляции у коров-доноров визуальным и «шльпаторным методами //Респ.науч.конф. "Состояние и перспективы развития биотехнологии в животноводстве ( Тезисы докладов) 21-22 сентября.- г.Харьков, 1988.- С.53.(в соавторстве).

2. Техническое оснащение украинской технологии трансплантации эмбрионов //ИРеспубликанская научно-производственная конференция ( Тезисы докладов )16-17 декабря.- г.Львов, 1988.С.13. ( в соавторстве)

3. Изучение полиовуляции у коров-доноров//Трансплантация вибрионов крупного рогатого скота. Жодино, 1989.-С.97-98.(в соавторства).

4 . Пролонгация фоллликулостимулирупдих гормоноБ//Научно-производственная конференция " Новые методы селекции и биотехнологии в животноводстве" Часть II. г. Киев, 1991.- С.67-69.< в соавторстве).

5. Пролонгация лекарственных форм фолликулостимулирупцего гормона //Научно-технический бюллетень * 57.НИИ животноводства Л и П УССР Харьков-1991г.-С.63-66.(в соавторстве).

6.Экспериментальное моделирование пролонгированных лекарствен-них форм.//Научно-технический бюллетень * 57 НИИ животноводства Л и П УССР. Харьков- 1991г.- С.66-72.(в соавторстве).