Физиологические маркеры крови овец и коз : теоретические и прикладные аспекты их применения

Марзанов, Нурбий Сафарбиевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Физиологические маркеры крови овец и коз : теоретические и прикладные аспекты их применения
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Физиологические маркеры крови овец и коз : теоретические и прикладные аспекты их применения"

РГ6 ОД

всероссийский научно - исследовательский РГ6 ОД ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА

( BIflit )

на правах рукописи

'. МАРЗАНОВ НУРБИЙ САФАРБИЕВИЧ

Физиологические маркеры крови овец и коз: теоретические и прикладные аспекты их применения

. 03.00.13 - Физиология человека и животных 03.00.15 - Генетика

АВТОРЕ Ф Е PAT

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Дубровицы, 1994-

Работа выполнена и отделе технологии производства продуктов овцеводства Всероссийского научно - исследовательского института

отвотноводства

Научные консультанты : доктор е.- х. наук,профессор - йиряков A.M. . доктор е.- х. наук

Хамицаев P.C.

Официальные оппоненты : заслуженный деятель науки Российской Федерации} доктор биологических наук, профессор Алиев A.A., доктор биологических наук, профессор Баикеев Е.Д., доктор.биологических наук, профессор Асланян М.М.

, Ведущее учреждение - Всероссийский НИИ племенного дела

Защита диссертации состоится " " ¡V 1994 г.

в ¡0^ часов на заседании Специализированного Совета Д.020.16.02 пек защите диссертаций при Всероссийском научно -исследовательском институте гигаотноводства по адресу : 142012, Московская область, Подольский район, п. Дубровицы

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан •¿У" III 1994 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета

кандидат биологических наук Емыгин И.И.

1. ОБЩАЯ ХЛРАКТЕРКСТТЖА РАБОТЫ

1.1. Легальность теми.. История интенсивного изучения групп крови, полиморфных белков и ферментов крови, полиморфизма ДНК в популяциях животных насчитывает более 30 лет. Успехи данных исследований обусловили в последнее время развитие особого направления в животноводстве - маркерзависимой селекции - оценке потенциальных возможностей '(продуктивных и племенных) животных по их внутренним морфофизиологическим особенностям, заложив в свою очередь, новое направление в биологичес-stofi пауке сельскохозяйственных животных - физиологической генетики.

К физиологическим маркирующим системам Roychoudhury А.К., Nei М. (1938) относят семь близких типов биохимического .полиморфизма крови:

1)внутривидовые серологические различия по, антигенам эритроцитов;

2)полкморфные локусы белков и ферментов; 3)антигены главного комгчекса rsicTOOOBMecTiaiQCTii; 4)полиморфные системы ДНК; 5)антигены тромбоцитов; 5)&члотипы- белков сыворотки крови; 7)биохимически активные образования (комплексы) между продуктами отмеченных выше систем.

Система крови является важнейшим механизмом адаптации организма и жяддьи фактором, направленным на сохранение его антигенного гомеоста-за. Эта способность обеспечивает структурную и функциональную целостность организма, охраняющую его генетическую индивидуальность в онтогенезе. Следует отметить, что роль отмеченных аллоалтигенов плазмы и цругах .клеточных структур крови до последнего времени окончательно не ¡юна,' одна!«) их огромное количество и разнообразие заставляет предполагать о той важной функции, которую они выполняют в организме.

В настоящее время эти субстанции.используют для маркирования тех ;uni иных генотипов, а поэтому их часто называют "генетическими марке-эа\ш", что не соответствует полностью их генетической и фенотипической &УШЩШ1 (Еорсгдин Э.К.,1931).

Вместе • с ?ен отбытие и изучение генетических систем в крови Фупного рогатого скота, •.' свиней, лошадей явилось традиционным и одним {3 вакнейпт направлений в иммунобиологии (Матоушек И. ,1964; Тихонов '¿.Hi ,1257; 1990; Магуроз A.M. ,1980; Дубровская P.M. ,1988). Группы крои полиморфные сисх&ыы Оелкоз, ферментов и ДНК успешно применяются в :ёлегадап в качестве маркс-роп количественных признаков, объективного тактродя родословных ¡глвстиык, маркирования пород, линий, повышения Я!зкеспособкоста молодняка при отборе стрессоустойчивых и резистентных зссбей, при изучении микроэволюциошшх процессов.

В овцеводстве и козоводстве использование физиологических марке-юз необходима как для экспертизы достоверности происхождения, так и шучения генетической структуры популяций овец и коз различного проис-

- г -

хождения, что позволит в конечном счете разработать концепцию генетического мониторинга, совершенствования продуктивных качеств у мелкой рогатого скота, оказания содействия в сохранении сокращающихся и исчезающих пород. Учитывая большое разнообразие пород овец (более 600) ! коз (более 150),. научный поиск и разработка методов и специальных путей применения физиологических маркеров для повышения эффективное!! селекционной работы в обеих отраслях приобретает особую актуальность Препятствием -внедрению применения генетических систем в овцеводстве : козоводстве является слабая изученность физиологических маркеров и от сутствие организационных форм по их использованию.

1.2.Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являете изучение физиологических маркеров (полиморфизм белков, ферментов, ДНК лимфоцитарных антигенов и групп крови) у овец и коз, установлени внутри- и межпородной генетической изменчивости и на этой основе-раз работка ряда прикладных аспектов по использованию маркирующих систе крови ь овцеводстве и козоводстве. Для достижения указанной цели был поставлены следующие конкретные задачи: 1.Обобщить имеющуюся информа цию по физиологическим маркерным системам крови у овец и коз. 2.Изу чить особенности антителообразования у различных пород овец и коз зависимости от влияния различных' факторов; создание и стандартизация Международных сравнительных испытаниях Банка сывороток-реагентов дi определения, групп крови у овец и коз. 3.Проследить характер изменен! частоты аллелей во времени у различных генераций и некоторых поре овец. 4.Провести описание адлелофонда на основании анализа частот ai тигенов, аллелей, генотипов групп крови, типов белков и ДНК и выяви: генетические причины этой гетерозиготности. 5.Оценить уровень средш г'омо- и гетерозиготности генома у различных пород овец. Дать интез ральную генетическую характеристику изменчивости изученных нами пор« и помесей в сравнении с данными по другим группам животных. б.Кспол:

. зовать группы крови и другие полиморфные системы в оценке генеалог: ческих связей и доли влияния овец одних пород на формирование други 7.Разработать теоретические и прикладные аспекты совершенствования м тодов отбора и оценки баранов-производителей с использованием маркир ющих систем крови.

1.3.Научная новизна. В результате полевых и лабораторных исслед ваний, а также теоретических обобщений в настоящей работе впервые:

- разработан комплекс методов по изготовлению сывороток-реаге тов, создан Банк реагентов для определения групп крови овец по 7 сг темам крови и у коз соответственно выявляющие 28 эритроцитарных ант генов. Организовано их изготовление для научных и производственных i лей, их хранение в условиях ультранизких температур подобно метод! хранения кроличьего комплемента;

- предложена совершенно новая классификация эритроцитарных анти-енов у овец, применение которой облегчает получение сывороток-реаген-ов. Проведены исследования и получены новые данные по общности эрит-оцитарных и лимфоцитарных антигенов овец, коз, крупного рогатого ско-а. Описан онтогенез и специфичность экспрессии антигенных факторов 7 истем групп крови овец;

- изучен полиморфизм, характер наследования физиологических мар-еров у овец;получены сведения о распространении антигенов,генотипов и ллельных вариантов ряда систем групп крови и полиморфных белков среди истопородных овец и коз. Установлены данные об уровне генетической зменчивости исследованных групп животных,оценены генетические рассто-нпя ме;:ду жми. Полученные данные использованы как источник информа-ИН при контроле достоверности происхождения ягнят;

- разработаны алгоритмы и составлены программы "Генетические рас-тояпия" на IBM PC для выбора оптимальных параметров оценки генетичео-,пх дистанций «езкду различными породили я помесями овец по маркерным енам с использованием о-ти статистических методов. Данная программа :меет важное значение для изучения- теоретических и прикладных вопросов рогнозировааия гетерозиса при скревиванкн разных пород хивоткых.

1.4. Теоретическая н пргктжескоя зтачкноегь. Проведенные исследо-ания позволили получить данные об злделофонде овец и коа различных ород, которые имеют теоретическое значение при систе атпке пород, лукат источником информации об их генетической структуре и составляют ;атериалы учета аллелофонда основных популяций овец в СНГ.

Разработанный метод контроля достоверности происхождения ягнят юказал, 'что для раскрытия полкой ситуации о состоянии племенных запи-:ей достаточно анализа крови у 20-30% молодняка з больших отарах 600-800 овцематок),от 20 до 50% - в небольших стадах (200-500 голов), 'стакозлеко, что количество недостоверных запиОей приходится на ложное ¡тцовстзо, вскрыты причины ошибок,определено оптимальное время выявле-шя достоверности происхождения ягнят с учетом становления в онтогене->э антигенов групп крови.Разработаны принципы использования групп кро-1И для оценки баранов-производителей по [сачеству потомства, что сдела-го возможным сокращение срока оценки и уменьшение значительных затрат [а испытание баранов непдемешюго назначения.

Полученные и исследованные реагенты выявляют 22. антигенов 7 систем групп крови овец и 28 факторов коз. Как показати результаты Между-¡ародных сравнительных тестоз (1980 и 1935 г.г.), мы обладаем диагнос-гию'мами к 14 известным маркерам, 5 ачтисывороток выявляют новые анти-'эны-подтипы (А&2, Bd2, Вег, Db, Ma), приготовлено 3 новые с номерными )бозначениями сыворотки (Midi,2 ,з)• Все эти реагенты могут эффективно

использоваться в решении научных и практических Еопросов.

На основе проведенных исследований разработаны ТУ-46-12-39-84"Сб воротки моноспецифические для определения групп крови овец","Временна инструкция по изготовлению и контролю сывороток моноспецифических дл определения групп крози у овец" и "Временное наставление по применени моноспецифических сывороток", которые введены в действие с 05.09.84 г и являются основным документом для приготовления,хранения и реализаци реагентов. С целью внедрения методов по использованию физиологически маркеров в практике овцеводства разработаны и изданы три методически рекомендации, информационный листок и монография.

1.5.Апробация работы.Результаты настоящего исследования были пре дсхавяены на ЗЗй ежегодной конференции в Европейской Ассоциации по жи вотноводству (Ленинград,1982);в Трудах Головного Селекционно-генетиче ского ценгра(198б);19 и 21й международных конференциях по группам кро ви и биохимическому.полиморфизму животных(Финляндия,1986¡Италия,1988) Зм Всесоюз.школе-семинаре по генетике и селекции животных(Бийск,1989) 6-7м съездах генетиков и селекционеров Республики Молдова (1990-1991) Трудах НП0"Тевит" (1991-1992); на 1-ой Международной конференции по частной генетике сельскохозяйственных животных (Аскания-Нова,1993).

1.6. Публикация.Материалы диссертационной .работы опубликованы ! монографии "Иммунология и иммуногенетика овец и коз",в научных журналах: "Доклады ВАСХНИЛ", "Цитология и генетика",' "Известия АН Молдавской ССР", научно-производственных журналах "Сельское хозяйство Молдавии", "Зоотехния",в сборниках научных трудов международного обществ* по генетике животных. По теме диссертации опубликовано 44 работы.Наиболее полно отражает содержание диссертации 11 научных работ,цитируемые в автореферате.

1.7.Структура работы.Диссертация изложена Ш 34 & страницах, содержит &Ч таблицы, 6" рисунков, состоит из введения,'^. глав, выводов, практических предложений и списка литературы ДО/названия,в том числ< И2 на .иностранном языке). Основная часть результатов получена самостоятельно, а также при участии аспирантов П.И.Люцканова.С.М.Имбаева, работавших под руководством автора.Вклад других авторов отражен в публикациях по теме диссертации. Всем коллегам автор приносит благодарное« за участие'в совместных работах.

2.МАТЕРИАЛЫ И ЫЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Материалы для исследования 18 различных пород и помесей, овец I двух пород коз собраны в течение 1976-1993 годов. ' Всего проанализировано крови у 8084 овец, 339 коз, 61 коровы и 1 яка, полученной из хозяйств республик России, Молдовы, Казахстана и Украины.

За период проведения работы было иммунизировано 554 и реиммунизи-эовано 262 головы овец. В каждой серии иммунизации разрабатывали опре-¡еленные методические подходы,обеспечивающие, рациональное использова-гие овец-продуцентов.Проверку полученных."сырых"сывороток проводили на 10-100 овцах,аттестованных в Польше и Франции,а затем собственными ди-1гностикумами,прошедшими международные сверки в ФРГ(1980),Ита-:ии(1985). . ' .

Исследованы сыворотки крови от 1031 головы овец, 196 коз, 57 ко-ов и 1 яка на наличие естественных антител анти-1? и анти-0, выявляйте антигены системы. Кровь 95 ягнят была исследована при изучении тановления антигенности у овечьих эритроцитов(40 ягнят), а у осталь-ых - становления титра анти-1? антисыворотки. У 5 триад коз изучали тановлеиие и наследование анти-0 реагента. С помощью ингибиционного еста у этих же животных определялся титр антигенов К и О.

С целью установления времени феиотипической экспрессии остальных мтроцитарных антигенов овец в течение постнатального онтогенеза жи-зтных исследовали в возрасте 1, 3, 5, 10, 20, 30, 60, 90 дней.

. Полиморфные типы трансферрика, карбоангидразы, зстеразы, преаль-гмина, ". (Зс-белка, амилазы,',гемоглобина устанавливали методом электро-зреза в полиакриламидиом и крахмальном гелях (Глазка В.И.,1985; Передни Л.Л. ,1991; Анфикогенова Т.А.И др.,1981). - • •

, Определение 7 "лм,:фошп'арных антигенов и 13 сплитов А локуса ВоЬА скота,, овец и . коз и читку серологических реакций проводи"!.по Слеп-•нко А. Р. и др. (1988).

. Проверку баданов по ячеству потомства проводили методом сверс-иц в соответствии с "Инструкцией по проверке баранов тонкорунных и лутонкорунных пород по качеству потомства" (М.,1979), на основе три: отец-мать-потомск.

Аллели и генотипы животных по. группам'крови устанавливали семей-м'/анализом, антигенных факторов, выявленных у родителей и их потом-в, а по полй.юрфним белкам и ферментам - непосредственно пс резуль-гам электрофоретических тестов. ' ' ..'.'.

. 'При анализе систем групп крови частоту антигенных факторов еычис-ш по йивотовскому Л.А.. Машурову А.М.(1974), а частоты/генов и ге-гипов для электрофоретических"локусов и диаллельных систем Б, М, 'руппкровй определяли путем простого "подсчета аллелей и генотипов формуле;.выведенной из уравнения Харди-Вайнберга, а в сложных,(А, В, - по формулам Бернштейна Ф. (1930), Апс(ег550п и. (1985) . Для оценки 1ЧИмости1 отклонений : наблюдаемых • частот генотипов от теоретически щаемых из закона Харди-Вайнберга использовали критерий х2. при 1М', применяли в некоторых случаях методику Айяла Ф. (1984) "Предосте-ения по использованию х2".

.Показатель степени гомозиготности в исследованных популяциях овец

определяли по Матоушеку И.(1964), число эффективных аллелей - пс Robertion А.(1956). Уровень генетического сходства при сравнении nopoí определяли по формуле Maijala К., Lindstrom G.(1966), уточненно! Rendel J.(1967), а также по Животовскому Л.4.(1979).

Для анализа структуры и степени подразделенности популяций кара-•кульской породы использовали F-статистики Райта и В-статистига ..HeH:Fis. Fit, Fst. Gst. а также величину генного потока (Nem). Эти параметры вначале расчитывали для каждого локуса, а затем усредняли.

Генетические расстояния (D) между изученными породами и помесями овец рассчитывали по шести формулам: Серебровского A.C.(1970); Nei M. (1975); Rogers J.S.(1972); Hedrick P.W.(1975); Cavalli-Sforza L.L., Edwards W.F.(1967); Prevosti A. et al.(1975). Поскольку все уравнения давали идентичные дендрограммы, в работе приводятся данные только пс Серебровскому A.C.(1ь70). Вычисление показателей дистанции (D) проводили на персональном компьютере IBM PC по программам "Генетические расстояния", разработанные с приоритетным участием автора диссертации.

Для анализа ДНК методом геномной дактилоскопии были взяты образцу крови у следующих пород: финский ландрас, линкольн, тексель, ромнимари и романовская. Основными методами исследования являлись рестриктный анализ, блот-гибридизация по Саузерну, клонирование в фаге М13, секве-нирование (Маниатис Т.и др., 1934).

Цифровые материалы обрабатывали общепринятыми 'методами (Меркурьева Е.К.,1977,1983; Плохинский H.A.,1980; Носов В.Н.,1990) с применением персонального компьютера IBM PC. ' 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1.Совершенствование существующих и разработка новых методов"получения сывороток-реагентов к эритроцитам крови овец и коз. Традиционные приемы получения "сырых" сывороток-полуфабрикатов для изготовления монсспецифических реагентов предусматривают отбор доноров и реципиентов из числа тестированных по группам крови животных донорского стада.

Обычно донорские стада (100-200 гол.) формировали из 1,5-летних и старо животных разных пород сначала в Ставрополе, а затем совместно с МНШЖиВом, Ивановским СХИ, СибНШТИЖем, КазНИИКом, УНИИЖем"Аскания-Но-ва". Так как некоторые антигенные факторы у изученных пород встрбчают-ся в 8и - 100% (Bb, Bf, Cb и Mb - у кавказской породы; Ma - у каракульских и романовских овец), на данных породах не удавалось получать реагенты i > э ?и антигены.

Соглаок накопленному опыту лучше, если антигенный состав эритроцитов крови oíец донорского стада подтвержден в одном из научно-исследовательских цензов Международной организации по генетике животных (МОГЖ). Такая . ¡'тесгация овец с нашим участием была проведена в 1978

оду во Франции, а в 1979 году во Еремя стажировки в Пол1ской Респуб-ике (Краков, Институт Зоотехники). Одновременно были проверены и равнены с польскими реагентами наши моноспецифические сыворотки.

За период с 1976 по 1992 г.г. было проведено 25 иммунизации и ре-ммунизаций, из них 2 на 186 оренбургских и таджикских козах, а оста-ьные как внутри, так и межпородные на овцах с общим числом 806 голов.

Первым этапом определения групп крови и полиморфных систем белков вляется отбор образцов крови и ее,консервирование. Для этого испэль-овали различные консерванты и антикоагулянты. Наибольший эффект был олучен при использовании консерванта по прописи Яковлева B.C. и др. 1982 г.): натрий лимоннокислый трехзамещенный-100 г; глюкоза-20-40 г; рициллин ветеринарный-1 флакон; дистиллированная вода-2000 мл.

Предложен микрометод постановки серологических реакций, который озволил производить 300 тестов в день вместо 150, экономия расходов орогостоящих сывороток составила в 2-4 раза меньше, уменьшилось соот-этственно на столько же и количество расходуемого комплемента. Было оказано, что активность выработавшихся антител при введении 20 мл ан-игена имела некоторые преимущества по сравнению с 10 мл цельной крози.

При внутрикожной и внутримышечной иммунизации, как наиболее прэс-ах и безопасных способов, зачетного преимущества какого-либо из этих гтодов не было установлено. У овец и коз-реципиентов без ущерба для »с здоровья брали 0,5-0,6 л, а у более крупных- 0,8-1 л крови. При не-5ходимости через 10-14 дней проводили повторный забор крови.

При иммунизации титры антител в сыворотке крови нарастали посте-энно, а при реиммунизации - скачкообразно. Реимму;.лзация оказалась Мективной при получении сывороток крови против средних и слабых ан-дгенов, которые в первом цикле иммунизации вызывали образование именных антител со слабым титром. Одновременно повышалась реактивность животных: большинство особей из группы продуцентов с низким титром 1тител (Н-1:16) после реиммунизации переходили в группу высокотитраж-JX* (1:32-1:1024).

Болтное значение при прочих равных условиях проведения иммуниза-1И имеет способ введения антигена. Одним из таких способов является гьекцйи его с неспецифическими иммуностимуляторами. В качестве имму-эстимуляторов изучали действие адъюванта Фрейнда, сульфозина и стаби-гаированной лимфы (табл.1).

Анализ табл.1 показывает, что в-процессе иммунизации наибольший !ельный вес реактивных животных (85%, Р<0.05) был получен в первой )уппе, где испол?.зовался адъювант Фрейнда, затем идут группы с сульгином (75%,Р<0.05), комбинированный способ (55%) и стабилизированной шфой (50%) против 35% в контроле.При сопоставлении всех методов вве-;ния антична оказалось: при первом из них больше животных с титром

1. Иммунологическая реактивность овец в зависимости от введения иммуностимуляторов

Г 1 - - ............ "■ 1------ ■ 1Крат- 1 • 1 ; "■ "■ " • 1 • 1...... |Кол-во|Кол-во ж-х1%реа-|%реактив-

р I Методы Iность |к-х Iобразовав. ¡ктив- |ных ж-х с

У |введе- | обра- (антитела с|ных ¡титром 1:

п I кия |зовав.|титром 1: ж-х |32 и выше

п I иммунизации I иммуно- |анти- 132 и выше |к общему

ы 1 стимулятора 1 тела 1 | 1 1 1 |кол-ву им- |муниз. ж-х 1

1 Внутримышечный метод с

адъювантом Фрейнда 1 • - 17 14 85л 70**

2 Внутримышечный метод с

сульфоэином 1 ' 15 И 75л 55*

3 Внутримышечный метод со

стабилизированной лимфой 4 10 10 50 50*

4 Комбинированный метод 11 8 55 40

5 Внутримышечный метод

иммунизации (контроль) 7 • 4 ' . 35 20

*)Р<0,05 по сравнению с контролем;**)Р<0,001 по сравнению с контролем-

антител 1:32 и выше (70%,Р<0,001), чем при втором (55%,Р<0,05) и третьем (50%,Р<0,05), в четвертом оно составило 40%, а в пятом - 20%.

Адъювант Фрейнда, сульфоэин и стабилизированная лимфа являются наиболее эффективны!,и средствами для стимуляции иммуногенеза при изо-иммунизациях овец эритроцитарными антигенами. Комбишфованный ■ метод дал также неплохой результат по сравнению с Еьшеупомянутым'"способом, но оказался худа, чем метод, где применялись иммуностимуляторы.

С увеличением возраста кивотиого-реципиаита возрастала как общая численность реактивных особей, так и продуцентов с еысоким титром антител: в 4-х мес. возрасте реципиентов с высоким титром оказалось 58%, в 8-ми мес.- 63%, и 12-ти ыес.- 75%. При анализе значения, пола по реактивности установлено наиболее целесообразным испольвование разнополых животных при подборе пар донор-реципиент. Иымунологически более активными оказались женские особи (94.4%) против 87,5% у Мужских особей. к тому же взрослые животные легче переносят иммунизации и от них можно получить больше "сырой" сыворотки. •

Иммунизация овец (22 гол.) в разные сроки беременности не наносила вреда здоровью матери и ягненка. Более интенсивный иммунный ответ на 5-10%) у суягных овцематок на чужеродные антигены при иммуниза-

ции свидетельствовал о повышенной их сенсибилизации и реактивности в период беременности.

При внутри- и межпородной изоиммунизациях содержание гормонов Тз, Т4 у реципиентов по отношению к контролю достоверно уменьшалось (соответственно Р<0,01 .и Р<С,001), причем при втором снижение отмечалось более значительно чем при первом (соответствено Р<0,01 и Р<0,05). Однако у овец-реципиентов группы "кавказская - романовская" был значительно выше уровень адренокортикотропного гормона (АКТГ) и кортизола, чем у группы "романовская - романовская" (соответственно Р<0,001 и 0,01) и (Р<0.001), что, по-вид!шому, связано со стрессовой реакцией, испытываемой животными в ответ на введение эритроцитов чужеродной крови. Отсюда и наиболее выраженная реакция со стороны тиреоидной и адре-наловой систем при межпородной иммунизации овец.

У доноров обеих групп обнаруживалось достоверно низкое содержание гормонов тиреоидного ряда, инсулина и более высокий (в 3 раза) уровень АКТГ, что. по-видимому, явилось результатом значительно!', потери крови.

Нами изучена антигенность 17 кровяных факторов, по которым лме-1ась возможность подобрать нужные сочетания пар донор-реципиент для голучения соответствующих антител. В результате проведенных исследова-шй (табл.2) выявлено 4 эритроцитарных фактора (Аа,АЬ,ВЬ,Са) с высокой «тивностыо, вызвавших синтез соответствующих антител от общего числа «идаемых в 80-100Z случаев (I группа), 4 фактора (Bd.Be2.Bl.Cb) со редней активностью, проявивших действие в ЗП-797. случаев (II группа), факторов (Bc.Bu.Bei.Ma.Da) с.низкой активностью (III группа). Эффек-ивность антигенных факторов 3 группы составила 0-29%. Два антигена R

0 (R-система), выявляемые с помощью естественных антител были отне-гны к IV группе. В V группу были отнесены антигены I-системы (I и 1), ютив которых не найдены соответствующие антитела как у нас в стране. ík и за рубежом. На 14 антигенов (ВГ. Bh, Mb, PLB-15, -17, -25/1,

i/2. Fs, F6, Fió. F19. F26, F30. F41). несмотря на разнообразный и огократшй подбор необходимых животных, получить антитела не уда-сь. Результаты по классификации антигенных структур получены экспе-ментальным путем на основе направленной иммунизации животных. Так, пи для получения антисывороток против антигенов I группы достаточно

1 инъекций, то для получения сывороток против антигенов И и III /пп-5-8, а иногда и 10 инъекций.

Неспособность "слабых" антител вырабатываться одновременно с шьными" при воздействии на организм продуцента соответствующими ан~ ■енами по-видимому связана с их конкуренцией между собой. У ое ц она исит в некоторой степени и \ от гетерогенности полиморфных систем , Aes, Hb). У коз оренбургской породы такая корреляция отсутствует за низкой, гетерогенности белковых систем (Am, Tf и Alb). Полученные

- 10 -

2.Различная иммуногенность эритроцитарных антигенов при иммунизации овец

I группа, высокая .

.(80-100%)_|

антител

II группа, средняя 30-737.)_ антител

—1-1—

о|вы- 1% ж|ра- |об| и|бо- |ра| д|та- |зо1 а|лось|ва| л| |вш1 о| |их| с| |ся| Ы I

J_I_и

_,-т—

о|вы- IX

х | Р'З- | об

и|бо- |ра

д|та- |го а|лось|ва

л| |вш

о| |их

с| |ся

Ы ! _]_'

111. группа, | . IV группа низкая(0,292)I

V группа

сим вол анти-гена

антител

~г

-I сиы}-

-г

сим

о|еы- |% |вод|о|еы- 1% |вод

и|ра~ |об|ал-|ж|ра- |об|ал-

и|бо- |ра|тн-|и|бо- |ра|ти-

д|та- |ео|ге-|д|та- |ео|ге-а|лось|ва|на |а|лось|ва|на

л1 |вш| |л) |еш|

о|. |их| |о| ¡их|

с| |ся| |с| !ся!

I I

I I |Ь| II

антител

1-1,.

—1-1—:

о|вы- |% ра- |об п1бо- |ра д|та- ¡во а|лос1)|ва л| |ва о| |их с| |ся Ы Г

II I

Аа 32 32 100 В<1 10 3 30 Вс 5 АЬ 21 21 100 Ве2 27 20 74,1 25 ВЬ 18 15 83,3 В1 17 7 41,2 Ве131 Са 22 20 90,9 СЬ 21 11 52,4 1Ла 21

■ Ба 15

от овец:

1 20 й 1031 100 9,7 I 15

2 8 от ¡фупного 1 7 3' 0,? рогатого скота:

О О

о о

6 £8,6 3 20

57 3 от яка: 1 1 от коз: 106 5 от коз: О 19& 20

5,3 100 2,6 10:2

материалы исследований констатируют гипотезу о той, что 1г-ге1ш, контролирующие силу иммунного ответа, оказались не сцепденнши с геналп полиморфных систем. ; ' - .

Для идентификации гомологии антигенных структур овец, коз ц [фупного рогатого скота, били испытаны 53 ыоноспёцзгфическиэ сыворотка крупного рогатого скота, 42 тест-сывороток коз, 12 реагентов овец и одна сыворотка яка. Проведение сравнительного анализа сьшороток-реа-гентов 4-х видов лшачных на донорских стадах обоих видов мелкого рогатого скота позволило установить, эквивалентность антигенов Н и Са овец и1? и 0г-20 у коз, а также I? овец, коз и J скота и яка. Большинство ка 12 овечьих реагентов перекрестно реагировали с эритроцитами коз, исключение составляли ареактивные анти-АЬ, анти-Оа и анти-0. Щюведенныв

- и -

збсорбцш! козьими эритрощ1тачи подтвердили, .что анти-12, Р', Е'г. Чг фуинсго рогатого сгата содержали антитела одного типа.

. По' лимфощгсгрпш фшегор&ч I класса не установлена общность анти-'еиов у коз, спец и крупного рогатого скота'. Всего в опыте было ис-гользавано 7 сггаоротск-реагептов н 13 сплитов Л-системы Во1Д, соот-ютствуюаш'о Моздуиародикм стандартам. ■'

. Нами показало» что'сыворотки для изучения 1?-систекы трудно полу-саитсп з услогдж Молдовы, Северного .-Кавказа''и Таджикистана и не [редставляэт особой трудности в условиях Сибири, - средней полосы Рос-¡ни. [{зпболсс" енсскис титры анти-(? и анти-0 отмечались на конец лета и :ачало осени, а илкнсшсна - на зимние месяцы. -

Реакция агюяшякздяя у 55 ягнят различный пород с алти-1? выявляюсь только через 1" часов после .приема молозива, лучше она проявляюсь в 2-х месячном возрасте. Начиная"с момента первых родов.отмечает-я превращение части еати-Я агглютишагов я''гемолизиныа другая часть родслглс-т оставаться и в .'более старшем возрасте в виде агглютининов, ршгаа данного явдешш яокз не известна, .'хотя -здесь.' возможно влияние' ок'.-впеглв« усксвиЛ (пвгауелыпго вещества-в кормах и на пастбище) так .Физиологического состояния-исследуемой .особи (беременность,роды, из-знеппэ. гермопальггаго статуса) при соответствующей гепет!меской пред-

■ мэтодсы-анйакку/спсго ссрещиванпя .подтверждено, предположение о эл5гс:я1.гоаетической' оскоги в образовали.-!-актя-О-антител у. №ь. Что геаэтел ещ-з коз, то ситиген-О, выявляемый у ез&ц, отсутствует у дан-зго'-зида., "Это'ПозЕолпог'' говорить о-наличии Е? системы у коз;, пдентич-эй крупного рогатого'скота и яка, • при которой Я и 3 доминируют над дяесьз«! аллэлпи! и наоборот,., ••.отэтраетен К системе овец, где генетика злее; слохная - по': отиакюс» л. другим' видам апаящ«.- • Все :зто. показывает 5пзость антигенов-, я, аитоекзоротог: дггшой системы у коз, овец, крупно)' рогатого ежота^икка, яо*я у '-последних- 'двух видов. анти-Л реагент зебуе? более кагтеллген очкетки о? 'гетерофильных - антител, при соот-гтеггзукщзм.их кспольгойзж:« ка-овцах;. .

.Лити-О'сызоро'лса-реггент [гами не была выявлена ни разу- в виде 'Гдаткниноа'» тогда как- П-сатксыворотка встречается в виде, данных ан-¡тел в 2-3 раза чаще, чем V качестве гемолизинов. , Как установлено, коротки.,с анти-К выявлялись' у гшвоткых только в присутствии О или 1 ¡тигена п ни разу не были выявлены у особей с I? антигеном;... : ' ■V. .-.Бактерии'Шйг'а,, как и рад, других бактерий; обладают парциальным ан-¡геном," входящим в состав групповой-субстанции Н антигена крови чело-гл. Возможно овечий антиген- О является парциальным антигеном у коз, ¡скольку спонтанная аитисыЕоротка анти-0 обнаруживается только в их юви. Подобная'картина была ранее устано'вленй>^иуеп. Т:с.Ч1979) в от-

- 12 -

ношении антигенов F5 и Fe В-системы овец.

"Для изучения систем A,B,C,D,M групп крови овец обычно использовали 22 изоиммунных антитела с учетом требований Международного общества по генетике домашних животных (МОГЖ) (Nguyen Т.е.,1373). Международная сверка полученных нами моноспецифических сывороток с реагентами ведущих лабораторий мира в 1980 и 1985 годах, а также во время поездки на. стажировку в Польшу (1979)подтвердила наличие в нашем наборе следующих диагностикумов: анти-Аа, -Ab, -Bb,-Bd,-Bc,-Bg.-Be,-Bl,-Ca,-Cb.-Ma,-Da.

Кроме описанных сывороток, к известным антигенам крови были получены новые антисыворотки, выявляющие подтипы Аа, Be, Bd, Da и Ma, а также экспериментальные реагенты к новым факторам, условно обозначенные Midi, Mld2, Mlda (Mid-Молдова). Моноспецифичность этих сывороток-реагентов доказана на основе абсорбций и семейного анализа, они будут представлены на ближайшей Международной сверке реагентов.

На основе проведенных исследований разработаны ТУ-46-12-39-84 "Сыворотки моноспецифические для определения групп крови овец", "Временная инструкция по изготовлению и контролю сывороток моноспецифических для определения групп крови у овец" и "Временное наставление по применению моноспецифических сывороток", которые введены в действие с 05.09.84 г. и являются основными документами для приготовления, хране- . ния и реализации реагентов.

3.2. Применение физиологических маркеров: теоретическиеи щшяад-ныо аспекты

3.2. ^Становление антигенного статуса а онтогенезе и его вттят при определении происхождения ягнят. Исследование возрастной динамики становления антигенного статуса было проведено на 40 ягнятах, по пять ягнят 1-, 3-, 5-, 10-, 20-ти дн. и 1-, 2-, 3-х мес. возраста, путем сопоставления их антигенного состава эритроцитов с таковыми отца и матери, а также путем определения ингибиционных титров сывороток/ полученных в первый день рождения на растворимые антигены.

Антигены Аа.АЬ (А-система), Bb,Be, Be, Bi (В-систеыа), Са.СЬ (С-система), Da (D-система) можно определять практически сразу после рождения. В среднем R антиген выявлялся на 20-й, О антиген - на 31-й день (R-система), а Ма антиген (М-система) на 45-й день жизни ягнят..Титры, растворимых фкторов R и 0 не оказывали определенного влияния на сте- 7 пень реакции после их оседания на эритроциты. Полученные результаты по формированию рритроцитарных антигенов, типов гемоглобина,трансферрина, . альбумина и преальбумина ягнят говорят об оптимальном времени для определения полиморфных систем возраст 2 месяца и более после рождения. ;

При .проведении генетического контроля происхождения животных в j племенных стадах стран СНГ типы белков и групп крови аттестованных баранов-производителей, овцематок и молодняка заносили в,индивидуальные

■карточки. Потом были составлены карты семейно-генетического анализа, определены аллельно-фенотипические сочетания.групп крови и полиморфных систем, а затем по ним проведен анализ происхождения. Всего проанализировано 1233 семейные группы, из которых 1208 триад и 25 диад, т.е.происхождение 98%; животных проверяли на основе полного семейного анализа. Часть результатов экспертизы происхождения показаны в табл.3. Приведенные данные свидетельствуют о возрастании процента ошибок- с увеличением числа овец в стаде.

3.Контроль достоверности происхождения ягнят из различных хозяйств -1—:—--

Наименование хозяйств

Состав

триад

т.ч.

потомки

бара- овце- ' .потом- достоверн. недостоверн.

1 1 нов гол. маток гол. КОВ гол. гол. % гол. %

1 ГПЗ"Победа" | 5 175 175 127 72,7 48 27,3

к-аТигант" I 3 38 76 66 86,8 10 13,2

МПВН , I 7 232 287 225 78,4 62 21,6

ГПЗ"Большевик" | 4 308 308 242 68,5 66 31,5

С-8"ВОЛГОДОНОВСКИЙ" | 3 114 . 150 145 96,7 5 3,3

0ПХ"Задя" | 20 . 366 ■ 442 414 93,7 28 6,3

Итого: | 42 1233 1438 1219 82,8 219 17,2

С учетом всех полученных данных, определение достоверности происхождения ягнят показало, что отЗ.З до 60% ягнят рождалось не от назначенных баданов-производителей. В связи с этим предложено делить исследуемые отары на три группы в зависимости от процента недостоверности: 1)не превышае?10%; 2)от10 до30%; 3)более 30% для тонкорунных пород. Считается достаточным для полного раскрытия ситуации исследование 20-30% молодняка в отаре с большим поголовьем (600-800 овцематок), а там,'где стада небольшие (200-500 голов) (Молдова, Средняя полоса России, Прибалтика) - 30-50%.

В условиях структуры и ведения овцеводства Республики Молдова рекомендуется:. баранов для опыта надо брать таких, у которых потомство не менее 10 ягнят. При установлении недостоверности происхождения ниже 10% все исключенные животные бракуются, остальных используют в качестве племенных.

Если недостоверность выше 10%, то необходимо проводить след> .ише мероприятия: а)при исключении происхождения в пределах 10,1-20% ъа недостоверные ягнята не используются в селекционной работе, а тех, которые соответствуют племзаписям, пускают з оборот как племенных или на

плёмпрода'ку; б) при исключении недостоверного потомства вше 20% всех исследованных животных выводят из племенного стада.

Стада, в которых недостоверность больше 10%, на следующий год снова исследуют. При повторном превышении недостоверности происхождения стадо переводится в товарное на один год, если процент недостоверности составляет 10,1-20% исследуемых животных, и три года, если процент исключенных животных выше 20%.

Разрешающая способность генетического метода зависит не только от количества исследуемых полиморфных систем, но и от степени внутреннего разнообразия популяций. Чем больше подобное разнообразие популяций,тем меньше вероятность встречи в ней особей, имеющих одинаковые варианты групп крови и белков, и тем выше эффективность генетического контроля.

3.2.2.Эффективность использования ^изшлогичесгаз паркеров прк экспертизе происхождения озац. Расчеты эффективности применения каждой из 7 локусов групп крови и ряда белковых систем при контроле достоверности происхождения овец приведены в табл.4.

Данные табл.4 по полиморфизму белков крови получены совместно с Глазко В.И.(УААН), Перелыгиным A.A.(ЩИТ РАН), а также взяты из работ Бонецкой М.Д., Гафарова P.C.(1988,1990), Иовенко В.Н. (1987), Амбрось-евой Е.Д. (1993) , Nguyen Т.С. et al. (1992).

Из данных табл.4 видно, с увеличением числа используемых при контроле происхождения систем и контролирующих их. аллелей возрастает вероятность исключения ошибочных записей, nprf этом заметный эффект дает сочетание многоаллельных локусов. В локусах групп крови и полиморфных белков, где имеют рецессивные аллели (Д, М, I, R, Es), разрешающая способность вь-.е, чем в "закрытых" диадлельных системах, где оба алле-ля фенотипически проявляются одновременно. Она же была выше в системах групп крови, где число гетерозигот значительно превышало гомозигот.

В системе А групп крови, включающей 4 аллеля, в II породах овец эффективность контроля достоверности происхождения колебалась от 2,1% (у тексельской), до 46,3% (кавказской). Исключение составила по данной системе романовская порода, у которой она была "пустой". Разницу в. 44,22% между двумя отмеченными популяциями можно объяснить'Анализируя частоты генов полиморфных систем крови. Частоты аллелей Атсистемы у кавказской породы представлены их максимальным числом,; тогда как у тексельской породы только двумя аллелями. Поэтому естественно у кавказской, а также киргизской и асканийской пород вероятность исключения ошибочных записей довольно высока. Невысокий процент у рамбулье связан с тем, что эта порода разводится уже 32 поколения в себе и имеет только два аллеля как и тексельская. Подобные показатели частот'аллелей у этих овец и по С-системе групп крови, минимальные данные отмечались у

4. Эффективность (X) контроля достоверности записей происхождения различных пород овец по комплексу маркирующих систем крови

Породы овец

Кав-1Испан|Рамбу-|Киргиз|Аска-|Тек-Щи- (Ост- |Северо-|Рома-|Кара-каз-|мери-|лье (екая |ний- |сель|гай-iфриз-(казахе.|нов- |калпак. ская|нос | |. |ская | |ская|ская ¡кросс- ¡екая |сур (п- |(п- |(п- |(п- |(п- |(П- |(n- | (п- | бредная | (n- | (п-205)1200) |81) |144) |104) |265)|195)|323) |(п-284)|32) |150)

А 45.3 21,7 9,3 33,4 33,4 2,1 28,2 18,3 20,8 0 18,5

В 54,3 57,2 17,3 66,2 38,5 56,6, 24,8 38,2 23,7 19,5 16,2

С 35,0 28,7 28,6 21,5 36,2 28,5 •25,2. 32,7 25,2 17,8 34,3

М 5,8 8,2 0 11,8 16,8 18,6 18,1 17,4 18,1 17,6 15,7

D 28,7 14,8 18,6 11,8' 14,0 12,2 17,0 7,7 13,4 16,7 8,3

R 18,7 18,4 17,6 17,2 16,6 17,3' 18,4 16,5 13,9 16,4 17,2

I 18,4 0 0 4,1 18,7 10,4 16,6 13,4 18,7 0 8,2

р301б.5 13,4 0 • - - - • - - - -

&сло аллелей:

25 ; 21 14 34 20 27 20 23 20 25 16

Збщая эффективность:

94,1 86,8 64,1 89>1 87,3 86,9 81,3 81,3 77,5 62,9 73,6

rf 34,1 50,4- 36,7 34,2 41,5 40,5 51,6 26,5 50,4 30,4 32,1

\Ь 10,4 17,4 16,6 16,5 7,7 10,8 12,7 - - 16,5 6,9

lesl8,7 - - 10,1 17,0 - 17,7 - - - 15,5

¡а 1,3 1,8 7,7 - - - - - - - -

'S - - 11,4 - 10,0 12,1 17,2 -

Т ' - - ' - - - 32,0 - - - 23,6 -

ic - . - - . - - - 8,9 - - -

р - - - - - 6,0 - - -

йсло.аллелей:

И 9 7- 8 10 11 10 11 7 12 8

бщая эффективность:

52,6 59,8 51,3 50,6 55,2 68,0 65,2 43,4 56,4 63,2 46,6

уммарное число аллелей:

36 30 21 42 30 38 30 34 27 27 24

/ммарная эффективность:

Э6.9 94,7 82,5 94,6 94,3 94,8 93,5 89,4 90,2 86,4 85.fi

змановской-IV,8%, а максимальные у аекакийской породы-36,2%.По систе-? В групп крепи, включавис-й от 4 до ;ллел«й, вероятность исключе-

ния ложного отцовства достигала от 17,3% у рамбулье до 66,2% у овец киргизской породы.

Из полиморфных систем максимальные данные отмечали по трансферри-ну. Наиболее эффективными оказались аллели А, В, С, О, Е. и Р. В процентном отношении максимальные результаты получены у испанского мериноса (50,5%) и цигайской породы (51,6%), минимальные - у остфри-зов(26,5%).

Эффективность контроля достоверности происхождения овец по двух-аллельным системам М, О, И, I с рецессивным аллелем была невысокой и у отдельных пород составляла всего 0,0-18,6%. Однако,при соответствующем распределении частот как групп крови, так и полиморфных белков, в этих системах эффективность контроля достоверности может повышаться. Так, в кавказской породе овец, имеющей распределение частот аллелей в системе О групп крови Э3, - 0,238, Б"- 0,762, величина этого показателя возрастает до 28,7%.Как только величина-вероятности исключения ошибочных записей ' возрастает до 80% и более, увеличить ее становится труднее. Например, хотя сама по себе система трансферрина и эффективна (51,6%), обшую вероятность исключения у овец цигайской породы с 66,2% она увеличивает вместе с гемоглобином и арилэстеразой только до 93,5%.

Эффективность контроля достоверности происхождения у овец при одновременном использовании всех 7 систем групп крови, а также наиболее полиморфных систем белков и ферментов крови достаточно высокая и колеблется от 82,5 до 96,9%. ■> '

3.2.3. Определение типа зиготности у ягнят близнецов. Для определения зиготности и эритроцитарного мозаицизма нами были установлены группы крови и белки у 209 ягнят двойневого происхождения из них 93 однополых и 116 разнополых, а также у 22 ягнят тройневого происхождения. Всего исследовано 231 головы или 93 однополых и 138 разнополых

ягнят (табл.5).

5. Показатели зиготности у овец из различных пород

Исследовано | из них

ягнят |дизиготных монозиготных

Однополых 93 85 8

Разнополых 138 138 -

в т.ч. двоен однополых 93 85 8

разнополых 116 116 . - '

троен однополых - ■ - -

разнополых 22 22 ' -

Исследование этих животных тестом на мозаичность с помощью групп

1Ф0В11 ' и полиморфных систем но показало ни в одном случае частичного гемолиза и смешанных типов Оелкэв&ч систем, что говорит сб отсутствии ягнят-йозаикоа. Вместо с тем у четырех пар ягкят было установлено на-'личие^монозиготиости (0,04%).

3.2.4. Опрсдолзшга досхшгряосх:: 'щйзггсгеадэшга пптаг; получен путам жргзисплантацкн эмбриеиоз. В овцеводстве пересадка эмбрионов применяется для быстрого распространения животных экзотических пород, импорт которых затруднен и максимального использования высокопродуктивных овцематок в качестве матерой-доноров.

Для внесения з племенную книгу пгнят, полученных путем пересадки зигот, требуется знать достоверность их происхождения. Кроме того, Исследование физиологических маркеров крози овцы-донора необходимо по следующим причинам: 1. Вследствие большого числа ожидаемого потомства. 2.Чтобы исключить путаницу на предприятии искусственного осеменения во время временного хранения, транспортировки или глубокого замораживания эмбрионов. 3.Чтобы иметь данные по происхождению, и в тех случаях, когда невозможно с уверенностью исключить'овцу-реципиента (Рлс.1)..

1. О Донор: Аа, АЬ, СЬ, КЬВ, СаЗ, г/ 1. АЬ, О, НЬВ, СаЗ.ТГВО

1.12 3 1

II, Рещткенты: 1. АЬ, СЬ, О, КЬЗ, Cas, TfBD

2. Да, АЬ, Ве, СЬ, Da, НЬВ, CaS, TfBD

. 3. Да, АЬ, СЬ, О, НЬЗ, Cas, TfDD

Л. Аа, АЬ, СЬ, НЬВ, CaS, TfBD

III.-Потомки: 1. Со, О,- НЬВ, CaS, TfBB'

2. Аа, АЬ, О, НЬВ, CaS, TfBD

3. Аа, ЛЬ, СЬ, О, НЬВ, CaS, TfBD

4. Аа, АЬ, СЬ, Я, НЬВ, CaS, TfBB

5. Аа, Ве, R, libB, CaS, TfBD .

Рис.1.Применение физиологических маркеров при трансплантации эмбрионов Согласно предложенной схема подбора пар донор-реципиент с использованием групп крови и полиморфных белков (рис.1.), к высокопродуктивному донору подбирают барана-производителя с иным генотипом крови. Гетерозиготные по физиологическим маркерам потомки более жизнеспособны, процент плодотворного осеменения при этом выше и позволяет пол-чатл ЖИВОТНЫХ раЯЛИЧНОЙ кровности.

Контроль достоверности происхождения 34 ягнят, полученных

. - 18 -

трансплантации подтвердил кодоминантный тип наследования антигенов групп крови и вариантов полиморфных бел:сов от матерей-доноров и истинных отцов.

' 3.2.5. Пршзрка ейрздов-щишзводггаягЯ по качэстзу когонства о гзспользолалиэм трупп ирот. Проверка баранов-производителей по качеству потомства по постригу чистого волокна (табл. 6) проводилась по но-6. Оценка баранов-производителей по качеству потомства и'настригу мытой шерсти (кг) в совхозе "Победа" Будапештского района

I Индивидуальные) номера баранов Показатель| —--

I 5714 | 5903 | 54054 i 5972 | 35117

I-:-;—;--

По sceiiy потомству M±tn 2,18± 2,32± 2,50± 2,23* 2,20±.2,32+ 2,20± 2,31± 2,35± 2,26± 0,03 0,04 0,10 0,04 0,08 0,04 0,08 0,08 0,05 0,05 к М сверст. -0,14 +0,27 -0,12 -0,11 +0,09

td. -1,57 ' +2,51 -1,34 -0,97 +1,27

Лостоверн. Р<0,05

Кач-во Нейтральный Улучшатель Нейтральный Улучшатель Нейтральный' барана

По истшному потомству М±ш 2,Ш 2,35± 2,50± 2,28± 2,09± 2,34± 2,03± 2,37± 2,54± 2,20± 0,07 0,04 0,10 0,04 0,07 0,04 0,07 0,04 0,05 0,05 к М сверст. -0,21 +0,23 -0,25 -0,34 +0,34

td -2,61 +2,41 -3,10 -4,20 +4,81

Достоверн. Р<0,05 Р<0,05 Р<0,01 Р<0,001 ' Р<0,001

Кач-во Ухудшатель Улучшатель Ухудшатель Высоко дост.Высоко дост. барана ухудшатель улучшатель

минальному потомству и потомству, отцовство которого подтверждено генетическим методом. Из пяти баранов при оценке по номинальному потомству только один производитель оказался улучшателем (N 5908), остальные нейтральные. После соответствующей коррекции оценка качества баданов изменилась. Так, баран 5714 по всему потомству был нейтральным, а по подтсержденному-ухудшателем (Р<0,05), баран 35117 по номинальным потомкам оценен как нейтральный, а с учетом подтвержденного по группам крови потомства он оценен как высокодостоверный улучшатель. Два баране из нейтральных стали ухудшателями.По инструкции рекомендуется исполь-

встать нейтральных баранов для вольного докрытая маток по окончании ncityccTEGHHoro осеменения, фактически ке. докрытие булет проведено ухудшатэдями, а высоксдсстоверпый улучшатель 35117 не использовался бы в дальнейшем размножении.

3.3. Аллпдс^онд и гоягамсснпл структура различных порол сзец. Характеристики пород проводились с учетом производственной классификации по М.Ф.Иванову, отра*5£здей главной" направление продуктивности озец: тонкорунные, полутонкорунные и грубошерстные. Используя данные групп крови, аллелышх форм бедютз и ферментоз у ряда пород овец, объединенных родственными связями в то или иное направление, m стремились выяснить в какой мере они сохранили особенности своей генетической структуры.

3.3.1. Лпзэхс^епд геняорушвп пород.У овец кавказской породы с помощью реагентов 7-9 систем групп крови были определены частоты встречаемости различных антигенов, аллелей и генотипов(п-395).Исследования показали, что наибольшее распространение у породных овец имели фенотипы антигенов: Да, Bb, Вс, F26 , Pl.В-17, Bf, Bl, F3 , PLB-25/1, FLB-25/2, Са, Cb, F5 , Fo , ЫЬ, Da, R, F30 , F41 . Частота их варьировала от 38,2 до 98%.

А-система была представлена в основном антигеном Аа (52,7%). Другие антигены этой г.е системы АЬ и Fig имели более низкую частоту (21,5 и 26,0%), совсем отсутствовал антиген Fie • В целом встречаемость фактора Аа во всей исследуемой группе была в два раза вкие, чс.л фактора АЬ. Обычно антиген АЬ относительно равномерно распределялся среди популяций родительского поголовья и потомков.

По В-системе наибольшую частоту встречаемости имели антигены Bf (91,0%), Bb (84,7%), PLB-17 (74,0%), FLB-25/1 и PLB-25/2 (68,6%), F2e (60,0%). В С-системе антигены Cb (97,1%), F32 (94,0%), Fe (58,0%), Са (44,4%); в_М-системе - антиген Mb (98,0%). По D-системе - Da антиген (42,0%), по R-сцстеме - антиген R (44,4%), системе F30 - антиген F30 (91,0%), F41 - антиген F41 (60,0%).

Система трансферрина была представлена 14 фенотипами, 4 из которых гомогенные (АА, DD, BB, СС) и 10 гетерогенные.(АВ, АС, AD, АЕ, ВС, BD, ВЕ, CD, CE, DE), контролируемые 5 кодоминантными'аллелями (А, В, С, D, Е).При этом в локусе трансферрина преобладали аллели TfA(0,380) и TfD(0,479), а частоты аллелей Tfc и TfB были незначительными и составили соответственно 0,039 и 0, 094, частота TfE только 0,008.

В системе гемоглобина преобладает тип НЬВВ, в системе карбоангид-разы - тип CaSS, частота алл'еля НЬВ составила 0,864, НЬА - 0,136. Частота аллеля Cas - 0,987, a CaF - 0,013.

Полиморфизм арилэстеразы -сыворотки крови был представлен тремя фенотипами AesBB, AesBH, AesHH, контролируемые двумя аутосомными алле-

лями Аезв и АеБн с частотой Аеэв -0,531 и Аезн -0,469. Наиболее распространенным оказался гетерогенный тип сывороточной арилзстераз;: (АеаНБ-49,6%), тогда как гомогенные типы составили соответственно 215 (АезНН) и 29,4%(АезВВ).

У овец кавказской породы наиболее полиморфными системами орались А-, В~, С-, ТГ-локусы, высокий уровень полиморфности отмечали I локусах R, Рзо , I, Аез, а низюй в М-, 0-, Са-, НЬ-системач. Рода встречались особи с аллелями Бь (0,001), Саг -0,013, отсутствовав гомозиготный генотип Сар /Сар, что,возможно, связано с нежиэнеспосоО-ностья таких животных. •

Популяционный анализ систем групп крови и полиморфных белков вс временной динамике, т.е. промежутком 10 лет показал наличие существенной разницы по некоторым антигенам и аллелям А-, В-, С-, р-, Я-, 1-, Толоку сов (табл. 7). По частоте таких антигенов как Аа, Вд, 0,1 и ал-лелю Т:ГС ОВ1Х-'. 1988 года несколько отличались от особей 1978 года и наоборот, у последних шроко были распространены факторы РЬВ-17, РЬВ-25/1, РЬВ-25/2, Са, Оа, И и ТЛ •

Полагаем такое изменение антигенных факторов в популяциях обеспечивается как дрейфом генов, адаптационными способностями животных с определенными генотипами.

Представляет большой интерес генетическое изучение аоканийснов породы, послузшвшя основой многих пород п том числе и кавказского Мериноса. Настоящее исследование .'проводили с помощью 20 аллелей 7. систем групп крови и 3 полиморфных систем.

В системах, где.выявили один-два фактора было установлено, чтс один антиген или аллель встречается чаще, чем второй. Так, антигош 7. Система групп крови и динамика некоторых частот антигенов и аллелей у овец кавказской породы во времени (через 10_лет)

Системы

1978 г.(п-205)

Анти-!

гены |-1-

1988 г. (П-190) |

Достоверность различия

I 4

Системы групп крови Аа 52,7 0,5268 62,6 .0,6263 АЬ -.21,5 0,2140 18,4 0,1842

отсутствует

1 1 2 1 3 I 4 1 5 1 6 | 7

в ВЬ / 84,9 0,8488 85,3 0,8526; Р-0,95,а.Г.-8;

Вс 32,2 0,3805 37,9 0,3790 Т-35,85

' Вс1 19,0 0,1902 32,1 0,3211 •

Ве 25,4 0,2537 31,1 0,3105

Ве 33,7 0,3366 30,5 . 0,3053

В1 49,3 0,4927 40,5 0,4053

РШ-17 74,2 0,7415 37,4 0,3737

РЬВ-25/1 68,8 0,6878 52,6 0,5263

РЬВ-25/2 68,8 0,6878 52,6 0,5263

с Са 44,4 ' 0,4439 29,0 0,2895 Р-0,95,с1.1Г.-1;

СЬ 97,1 0,9707 97,4 0,9737 Т-4.7Д

м Мл 13,1 0,1317 16,8 0,1684 отсутствует

Б Ба 42,0 0,4195 27,9 0,2790 отсутствует

R Я 44,4 0,4439 20,0 0,2000 Р-0,95,с1.Г .-1;

0 21,5 0,2146 42,6 0,4263 Т-31,85

I I 41,6 0,4156 62,6 0,6263 Р-0,95,с1.Г; 1 ' 58,4 0,5844 37,4 0,3737 Т-17,7

Полиморфные системы белков крови Са Саг 1,3 0,0130 н.т. н.т. отсутствует СаБ 98,7 0;9870

НЬ НЬА НЬВ • 13,6 86,а 0,1360 0,8640 11,7 88,3 0,1170 0,8830 Р-0,95,с1.Г .-1; Т-45,94

ТГ ТГА 38,0 0,3800 34,1 0,3410 . Р-0,95,с1.Г.-4;

тгв 9,4 0,0940 14,7 0,1470 Т-32,78

ТГС 3,9 0,0390 12,8 0,1280

т£.о 47,9 0,4790 37,2 0,3720

ТГЕ 0,8 0,0080 1,2 0,0120

Аеэ® Аезн 53,1 46,9 0,5310 0,4690 53,8 46,2 0,5380 0,4620 отсутствует

Аа, Ве, СЬ, О, I, аллели - Б", 1?, М~,НЬР встречались чаще, чем АЬ, ВЬ, Са. Я, [Я, М®, НЬА. у палиаллельных А-, В-. С-систем наибольше устанавливался "нулевой" аллель, а в локусе трансферрина как у кавказской породы-ТГА "и ТГ°. Среди погсхловья исследованных овец асканийской породы, разводимой в племзаводе "Аскания-Нрва" из 21 теоретически возможного фенотипа выявлено 21, контролируемые 6 аллелями:ТГ А, ТГВ, ТГС, ТГ°. ТГЕ, ТГ1.

Сопоставление действительного распределения генотипов с теоретически рассчитанным по Харди-Вайнбергу, показало хорошее соответствие по всей опытной популяции асканийских овец по А-, 0-, К-, 1-, М-, ТГ-, НЬ-локусам. Достоверное расхождение между ними свидетельствовало о нарушении генного равновесия в популяции по В-, С-, и АеБ-системам: Р<0,05 - Р<0,01.

Исследование животных кавказской,.киргизской и казахской пород по эритроцитарным антигенам выявило генетическое, сходство и различие между родственными группами тонкорунных овец. Сравнение общего состава факторов групп крови трех пород на трех уровнях их частоты: высокой (свыше 80%), средней (от 50 до 80%), низкой (от 5 до 50%) и редкой (ниже 5%), показывает сходство по. одним, различие - по другим антигенам. В системе А почти одинаковые (средний уровень) частоты по антигену Аа, а дифференцированное различие по антигену АЬ наблюдается между кавказской и киргизской, с одной стороны, и казахским мериносом - с другой.

В системе В групп крови эмпирическое сравнение антигенов трех пород показывает незначительное различие по большинству эритроцитарных факторов. Последовательность их расположения внутри тонкорунных пород: кавказская-киргизская-казахский меринос, а степень дифференциации между казахским мериносом и двумя другими породами была одинаковой, хотя кавказский меринос оказал наибольшее влияние на него исходя, из истории его создания. Аналогичная картина отмечается и по С-системе. Обратная картина наблюдалась по И и 0 антигенам Н-системы и I антигену. Число Ма антигена была максимальной у киргизской породы, а затем у кавказской и совершенно отсутствовал у казахского мериноса.

Генетический анализ эритроцитарных антигенов и полиморфных белков родителей и потомков у трех анализируемых "пород позволил определить аллели, контролирующие наследственные сочетания антигенных факторов в грушах крови. '....-

Исходя из результатов по сумме 7 локусов, средние данные индексов генетического сходства между парой кавказасая-киргизская составили -г-0,962; кавказская-казахский меринос -г-0,956; .киргизская-казахсккй. меринос - г-0,977. Больше различий и точности в значениях эти данные имели с учетом 30 аллелей 10 полиморфных систем: пара кавказская-кир-

гизская породы -г-0,596, кавказская-асканийская -г-0,б81,а киргизс-|?ая-асканийская -г-0,424. То различие, что отмечается по полученным данным, ш связываем с процессом австрализавди, условиями среды и содержания.

Исследования по 7 системам групп крови и 3 локусам полиморфных Зелков показали нарушение генетического равновесия, у кавказской поро-?ы по В- и С-системам (Ех2-48,1; d.f.-З; Р<0,001 и £х2-130; d.f.-2; 3<0,001), киргизской-В-системе (Ех2-11,1; d.f.-l; Р<0,001), асканийс-сой, такке как у 1савказской породы-В-н С-локусам (Ех2-6,5; d.f.-2; '<0,05 и £х2-10,4; d.f.-l; Р<0,01) и арилэстеразе (Ех2-8,5; d.f.-l; 3<0,01) я у всех га счет избытка гетерозигот.

Генетическая структура определяет изменчивость и-управляет адап-:ациониыми механизма»,«!, позволяя каждой популяции приспосабливаться к 'словиям внешней среды- Нарушения адаптивной генетической структуры и ■ровня генетической изменчивости может привести к ухудшению состояния шуляций или даже к их распаду, что мы видим на примере рамбулье. Что ;е касается испанских и кавказских мериносов,то популяции этих овец а\ще большие в Испании и СНГ.

Учитывая общность происхождения этих овец мы провели сравнитель-уа характеристику по 8 полиморфным локусам крови для установления ге-етической дивергенции между ними. За основу были взяты результаты по амбулье и испанское мериносу (Nguyen Т.е. et.al.,1992) и полученные ами данные по кавказской породе.

Рачбулье, маленькое и закрытое стадо овец, произошедшее от ис-энских мериносов, заметно отличается от его родительской популяции и эвказской породы. Все фенотипы и аллели отмечавшиеся у рамбулье выяв-мись у испанских и кавказских мериносов а те, которые отсутствовали французских овец встречались у двух других пород с частотой от 0,040 э 0,584. Фиксация отдельных аллелей и потеря других у рамбулье была эказателем реальных эволюционных изменений благодаря случайному гене-тсесксму дрейфу в этом небольшом и закрытом стаде овец. Сравнение ис-1нской и кавказской пород показало отсутствие у первой Bh к I1 алле-;й, говорящей о высокой консадвдированности.более древней популяции.

еще, или редкие аллели являются частью генотипа исследуемой породы ш принесена одной популяцией в другую. Анализ происхождения овец не-гщих такие аллели как 1 показывает, что эти гены являются своеобразии метчиками стад основателей. Аллель i с высокой частотой у аска-йской и кавказской пород является своеобразной породной характерис-кой и соответствует историческому доказательству о связях двух дан-к пород и их отличии от рамбулье и испанского мериноса.

. Относительно видения генетического дрейфа как эффективного приема я наблюдаемой генетической дивергенции, мн провели сравнительную ха-

рактеристику по всем 8 полиморфным локусам.Как и ожидалось все II а тигенов, обнаруженные у рамбулье (т.е. Аа, ВЬ, Вс1, Са, СЬ, Оа, МЬ, . О, Рзо и I) были также представлены у испанского и кавказского мерин сов, тогда как три фактора (АЬ, ВЬ и Ма), которые отмечались у испан ких и кавказских мериносов и дополнительно еще I, установленный толы у кавказской породы не выявлялись у рамбулье. По большинству антиген* между тремя популяциями обнаружены высокодостоверные различия. Зде< же следует отметить некоторые особенности: Мь и Р30 аллели выявляют* у овец рамбулье, но отличаются от частот их встречаемости у кавказец породы и испанского мериноса. Особого внимания "заслуживают А-,В-,С-локусы, поскольку многие аллели (АЬ,ВЬЬ .В^.В" и С") отсут< твуют у рамбулье, тогда как они встречаются у двух остальных пород частотой от 0,001 до 0,300. •

Отмечено превалирование частоты встречаемости НЬА (0,698)над Н1 (0,303) у рамбулье и обратное у кавказской и испанской пород (НЬ® пр< валировал над НЬА). По траксферриновому локусу у кавказской породы испанского мериноса выявлялись все пять известных аллел< (Т5 А, ТГв, Т(с, Т£ТГЕ), тогда как у рамбулье только три аш^ (ТГА,ТР°,ТГЕ,). Результаты по группам кроеи дополняются данныни элек: рофореза: низкий уровень генетического полиморфизма у рамбулье I сравнению с испанскими и северокавказскими овцами (21 против 30 и I аллелей по 11 локусам). •

3.3.2. Аллелофоад полутонкорушшх пород.Каждая порода животш характеризуется индивидуальной, ей только свойственной частотой марке ров. Учитывая это, наш были изучены ряд полутонкорунных пород: щ гайская, . остфризская, тексельская, североказахская кроссбредная I группам крови и полиморфным системам белков.

У цигайских овец на основе семейного анализа в системах А, В, групп крови выявлено по четыре аллеля, в системах 0, {?, М, I - по дг аллеля.

Отличительной особенностью этой популяции является высокая чаете та встречаемости генотипов Аа/а и (0,428 и 0,208) и низкая кое центрация генотипов а3*3'6 и А®57" (0,006). По частоте высокой встреча емости аллелей прежде всего нужно назвать'Аа и А" (0,582 и 0,314) низ(сой была частота А®13 аллеля, впервые выявленная среди всех исследс ванных пород и помесей.

В В- системе цигая наиболее встречаемым оказался генотип Вь/ (0,572), а среди аллелей Вь (0,692) и В" (0,208). В С-системе у ци гайских овец превалировали аллели Сь (0,717), С3 (0,145) и С" (0,107) из генотипов-Сь/ь (0,554).В 0- системе у исследуемой породы превалиро вали генотипы Па/а, (0,541 и 0,277) и аллель-Оа (0,579). И-систе ма в исследованной популяции была представлена Нг и гг генотипам

(0,390), а распределение аллелей выглядело таким образом: Я (0,415) и г (0,585). В 1-системе превалировали гомо- и гетерозиготный генотипы II (0,497) и И (0,409), а частоты I и 1 аялеля составляли соответственно. 0,701 и 0,299. По М-системе наиболее часто встречаемым оказались генотип М®7"" (0,4718) и аллель М" (0.6160). А всего по цигайской породе было установлено 38 генотипов и 20 аллелей 7 систем, групп крови.

Анализ соответствия фактического ожидаемому распределению генотипов по 10 системам показал, если в локусах М, I, ТГ ,НЬ генетическое равновесие сохраняется, то в остальных оно нарушено (Р<0,05-Р<0,001) из-за существенного недостатка гетерозигот.

Наибольшее распространение в исследованной группе у тексельских овец имели I,; ВЬ, СЬ, Ма, 1?, Оа, 0 (от 0,14 до 0,99), "антигены П-У групп по предложенной нами классификации. По А-системе отмечается характерная деталь для некоторых короткохвостых пород овец-низкая встречаемость антигенов Аа и АЬ (0,08 и 0).Отсюда наиболее высокая частота встречаемости из генотипов гомозиготы А-/~ (0.963) и низкая-гетерози-готы А®7" (0,031), только один случай был с гомозиготой А®'® (0,006). Из аллелей чаде всего выявлялся А" (0,978) и редко А® (0,022).

По В-системе отмечалась низкая встречаемость антигенов ВЬ, Вс1, 3?, В1. обратная картинанаблгдалась в отношении частоты встречаемости антигена Ве. Всего было выявлено 36 генотипов и 13 аллелей.

Генетический анализ С-сйстемы проводили с использованием двух ан-гисывороток (айтй-Са и анти-СЬ). В результате было выявлено 0 геноти-юв и 4 аллели! .Из них; наиболее часто встречаемыми генотипами оказа-гось СЬ/".С~/~,Сь/ъ.из аллелей

По М-системе наиболее часто выявляемым генотипом оказался [0,4),-реже всего;отмечался М~/- (0,275).Встречаемость аллелей М® и М~ > исследованной популяции была почти одинаковой.

По 0-системе у тексельских овец из трех известных генотипов чаще швлялась'гомози^та О"'!'" (0,713), а из аллелей-0" (0,828).

У.текселей по Р-системе преобладала , встречаемость антигена й .0,58) над О (0,41); тогда как по аллелям было наоборот, частота г ге-а составила 0,'666, а -0,344. Из генотипов чаще всего отмечался гг -.488. ', л^.'. Л,; .' •'•'.■■. ;•■

У тексельских овец.низкой была встречаемость'1 антигена (0,01) и оответствеино высокой частота I антигена (0,99). Из генотипов наибо-ее часто выявляемым оказался II (0,745). Нарушение генетического рав-овесия отмечалось в. С-, М-, Б-, ^системах (Р<0,05-Р<0,001) и было бусловлено за счет'избытка, гомозиготных генотипов.

. Известно, , чем' выше степень гомозиготности, тем меньше число зф-ективных аллелей (На) в локусах и тем значительнее уменьшается гене-

-готическое разнообразие в популяции. Самая низкая эффективность была пс Л- и 1-системам -1,035 и 1,310; затем 0—1,398; 1,802; И Ы—1,969. Наиболее высокая степень .эффективных аллелей отмечена в локусах -Е (3,849) и С (2,355), что соответствует полученным данным при характеристике каждой системы групп крови овец., В системах А, В, С, 0 отмечалась повышенная частота встречаемости "нулевой" аллели, признак, подтверждающий высокий уровень селекционной работы. ..По всем система.! групп крови выявлено 27 аллелей, а генотипов-55.

У текрельских овец показано только 6 возможных типов трансферрина (АВ, АС, ВВ, ВО, ВС, СС), кодируемых аллелями:ТГАД£В,ТГ0-,ТГС'. В изученной нами популяции не было обнаружено особей с ТС1'- аллелью. Частоты встречаемости (в%) типов трансферрина в убывающем порядке распределялись следующим образом: СС (40,5), ВС (39,6), ВВ, (10,8), АВ (5;4), АС и ВО (1,8). У тексельской породы определено 5'типов' преальбумнна из б, контролируемые тремя аллелями - Рг5', Ргр,'Рг°."Фенотип ГГ у исследованных овец нами не установлен. '' ■'.••. > ". '..'

У обследованных овец преобладал ..тип гаптоглобина, БВ .(71,4) и только у 28,6% был АВ, отсутствовал тип АА: гаатрглобина.Из трех.''тцпоз зстеразы на долю фенотипа АА было 2,7%, Аа-29,3% и .маг-;скма>ыюе число на аа-80,01%. Нарушение генетического равновесия отмечали по тралефзр-рину и преальбумину: Р< 0,05 и Р< 0,001. -V, ; ■ , -с-.'•• , / ...

Анализ гомозиготкости в.целом по популяции тэксельских озец 'ползал, что доля особей, гомозиготных.по преальбумину-была невысока к составила 20,5%, а по остальным она оказалась-. В1шо:...-'траксфоррину 51,4%, гаптоглобину - 71,4%, эстеразе- 73,8%.: В об?;ем' наблэцгзкый уровень гомозиготности по аллелям II локусоз'.текселей- составил. 0,579,говорящий о высокой степени консолидации ото;": породы'. . .. -' ,'..'■■' Проведенные исследования показали, -'что овцы'.тексельской породи с разной степенью гетерозиготности имеют различия по молочной продуктивности (табл.8). . . •' ..";■' ■.■';' 'У*'..'::',"' ' -' У'У 8.Зависимость молочной продуктивности (кг) .от. степени гетерозиготности у тексельских овец (по 10 маркирующем система*.!)

Исследуемое время ¡Больше. 3-х | .Меньше 3-х Достоверность ' -";У.

|гетерозигот|гетерозигот | различия

I на особь | на особь ' | - - ,■■ У'У'у.

___I_:_1_ ,-' '. '_:_;'".' -—.—;—''.■■' "',,''•."■'.,';■

1.Подсосный период 104,010,63 - . 72,73*0.79. ' Р<0,001

2.3а период лакта- ', , .,'' . . •■-:''.

ции после отбивки • 111,9±0,2 7?,98±0,2 Р<0,001

3.Товарная часть мо- ^ -'.-.• У ч ■ '.■:. \ ■ •

.пока после отбивки 7*7б±0,62 - б,23±0,78 Р<0,001 :

- - 27 -

■ Среди овец данной породы достоверно (Р<0,001) высокую продуктив-:ость имели особи с наличием более трех гетерозиготных генотипов на дну голову (выше 4.0Z уровнем гетерозиготности). При этом не отмечена злзисимссть между молочной продуктивностью и сочетанием каких-либо щкретных аллелей исследованных систем.

На основе статистического анализа собранного материала, мы пришли : выводу об отсутствии определенной зависимости между какими-либо ан-'игеннши факторами или аллелями белков и изученными признаками: живая :асса, настриг шерсти, длина шерсти у овцематок, полом родившихся яг-!ят, живой массой ягненка при рождении, числом ягнят в помете,а также лпзоЯ массой ягнят в 2, 4, б месяцев и длиной их шерсти.

В сыворотке крови овец остфризской породы было определено 12 тагов трансфсррина,'-кодируемых пятью аллельными генами (TfA,TfB,Tfc,TfD, Тр), впервые установлен полиморфизм, Gc-б'елка и сс-макроглобулина. Оточена какспмалъпая встречаемость'фенотипов с 6cSS (0,826) и ApFF по м,1а'фоглобулину (0,877) (Табл.9).

Сопоставление наблюдаемых с, теоретически ожидаемыми числами жи-ютных определенного фенотипа в пределах каждой системы показало у гстфрнзоз отсутствие нарупенного генетического равновесия по A-,M-,D-, Tf-, Ар-локусам (Р>0,05), но оно наблюдалось по в-, C-, R-,Es-,Gc-!!!стемам (Р<0,01-Р<0,001).Причем по B-и С-системам за счет избытка ге-:ороз'пгот, тогда' как по остальным лис/сам - за счет избытка гомозигот.

По большинству- генетических характеристик не было установлено на-тчие достоверных, различий между особями раз чих поколений по частотам 5ллзлей, генотипов л антигенов» 51 все же сравнение частот у трех гене-ззгий показали значительные'изменения по фенотипам d,g,bd, и аллелями \ и В трансферрина, особенно, медду I и III генерациями в некоторых :лучеях меляу I п II, или I и III поколениями. Различия по частотам шелей Gc-беяка и -ftriккроглобулина между I и 111 поколениями соста-пш! 1,7-1,8 раза.

Сразпеш:® попудаций трех'поколений остфризских овец по в-локусу, гр^'.с.^ерр'лгу, Ее-б елку и а- мгкроглобулину показало, что индекс ходс-га'а по 3-леку су мелду поколениями. I и II составил 0,956, а между I и 111-0,325 п. II и II1-0,832. Аналогично близкие данные были получены и ю остальным системам. # ".

Из поколения п поколение идет нарастание двух аллелей Tfc и TfD. 1ля двух известных европейских пород (тексель и остфриз) была -характерна высокая встречаемость Tfc (соответственно 0,613 и 0,737), тогда од для мериносовых популяций TfA и TfD аллели.

: Таким образом,. проведенные исследования позволили устано: ,;ть не голько различие в аллелофонде трех групп животных, но и в целом пока-

9. Характеристика трех генераций остфризских озец по полиморфным системам крови

Анализируемые |1 генерация!II генерация!III генерация

фенотипы и аллели II I

В- системы .1 .......,1...... -,..,.,. 1

- 0,2727 0,2540 0,4500

Ь 0,0546 0,1270 0,0625

д ■ 0,1818 0,1270 0,0500

& 0,1818 0,1746 0,0375

е 0,1273 . 0,1429 0,1750

Ы 0,0546 0,0000 . 0,0250

Ье 0,0000 0,0318 0,0500

Ье 0,0182 0,0318 0,0375

0,036-; 0,0159 0,0000

¿0 0,0182 0,0318 0,0125

' сЗде 0,0182 0,0000 0,0125

Во 0,0364 0,0635 0,025 •

Ьс1д - - 0,05

Ьее - - 0,0125

Трансферрина

А 0,1364 0,0546 0,0500

В 0,0318 0,0727 0,0188

С 0,7182 0,7182 0,7625

.0 0,0181 0,0818 0,1125

Р 0,0455 0,0727 0,0562

ее - белка

Б 0,8690 0,6594 0,9239

Р 0,1310 0,1405 0,0761

«- макроглобулша •• ■

? 0,9302 0,8750 0,9615

Б 0.0698 . 0,1250 . 0,0385

аать определенную внутреннюю дифференциацию. Продолжительное и целенаправленное ведение селекции на ограниченном поголовье, а таким являются небольшие стада остфризской. тексельской пород,тем специфичнее оказывается аллрлофонд маркирующих систем.

В 284 образцах крови североказахской породы нами было определено

типов трансферрина у овцематок, 13гу ягнят и только 8 типов у бара-в-производителей.Наибольшее распространение в целом по всей исследо-иной популяции получили животные с фенотипами трансферрина ДБ 7,1%), АС (13,8%), АА (10,8%), СС и ЮС (9,7%). Редко встречались житные с гомозиготами, в формировании, которых участвовали аллели Р и В ,44-8,70). А всего у изученных овец типы трансферрина контролирова-:ь пятью аллельными генами: ТГА,ТГ°,Т1Г1:>,Т£'С,ТГ1\ Частота встречае-зти у северокззахских кроссбредов встречается редко, как у ост-13СЩ1Х овец, отсутствовал аллель трансферрина Е ¡сак у всех полутон-)унных овец.Особый интерес вызывает раскладка остальных четырех шсферриновых аллелей. Как у мериносов кроссбредные овцы характери-1ались наличием высокой частоты ТГА и ТГ° аллелей. Почти с такой же ¡тотой встречался и Т1ГС, что является характерным для большинства опейских полутонкорунных пород, повышенная частота ТГВ аллеля гово-о присутствии определенной "доли кровности" местных грубошерстных ероказахских овец. Словом, у кроссбредных овец комбинируютс аллели иносов, длинношерстных пород и местньк популяций мелкого рогатого та. ,

Сравнение ожидаемых' и наблюдаемых чисел конкретных генотипов всей таы выявило нарушение .генетического равновесия по трансферриновому /су 'за счет избытка гетерозигот при одновременном недостатке гомо-этных животных по ТГР и И® аллелями (х2 -30,6, сЗ.Г. 3; Р<0,001).

У.овец, североказахских кроссбредов было установлено два аллеля в 'се астеразы (еза и ¿б3) и три генотипа (еза/а,е5а/а,еза/а). По ло-' эстеразы высокую частоту распространения у всех половозрастных га овец получил аллель, е5а, что'способствовало большей встречаемос-i-породе фенотипов:ез АА (73,68-77,68%), еэ Аа (14,28-18,90%). При ¡нении фактического с ожидаемы,! распределением генотипов эстеразы установлено' ■ 'нарушение генетического равновесия за счет избытка зигот (х2-40,с1.Г.-I; , Р<0,001).Расчеты средней гетерозиготности залш высот! его уровень по трансферрину' (0,66), чем по эстеразе

В 'популяции северокааахских овец были также определены ряд эрит-гердых антигеновотносящихся к 7, генетическим системам групп кро-обусловлепныэ 20 аллель нши генами . Из 29 фактических генотипов,, злее распространенными вТГ-, В-, С- системам оказались гетероаи-. , тогда как в шести остальных превалировали гомозиготы. Анализ генетической структуры у овец из с-за "Волгодоновский" по зтемам групп крови и белков показывает, что ожидаемый уровень го-'отности (Са) по локусам А, В, С, Б был выше фактического (Н), оби картина отмечалась.по.I?-, 1-, ТГ-, Еэ- системам. Тесты гетеро-гности (Т.Г.) по трем системам (А, В, С) соответственно составили

- GO -

+0,2, -и1,03 и +3,68, что говорит о наблюдаемом избытке гетерозигот. Игу 4i ние соответствия фактического ожидаемому распределению генотипов в локусах групп крови и полиморфных белков показали о наличии генетического равновесия в D-, M-, R-, и I-системах, и его отсутствие из-за недостатка или избытка гетерозигот в других (Р<0,01-Р<0,001). Число эффективно действующих аллелей (Na) по исследованным нами локу-сам было меньше предельной величины, за исключением системы трансфер-рчна (4,174).

Распределение частот ачлелей и генотипов, а также уровня гетеро-зиготности у потомков не носило промежуточного характера между распределением у родителей, а в большинстве случаев повторяли частоты либо матерей, либо отцов, что свидетельствует о влияний процессов отбора в раннем онтогенезе (презиготический отбор, эмбриональная смертность, отход ягнят в молочный период).

3.3.3. Аялеяс^оад грубошерсгнш: пород озец. Анализ генетической структуры романовской породы в сравнении с готландскими и тексельскими овцами показал, что романовская порода ближе всего по некоторым системам (A, fi, i, Es) расположена к текселью, которая также отличается высокой плодовитостью, скороспелостью. Общим для трех пород была высокая частота Tf'c аллеля.

Однако, несмотря на определенное сходство как с тексельской овцой, так и с другими породами по ряду генетических- локусов, романовская порода обладает некоторыми характерными особенностями, отличающими ее от других исследованных пород овец. Система А- отсутствие антигенов Дг и Ab, ас учетом данных полиморфных систем, низкая концентрация ад-.галя НЬВ.Система М- высокая частота встречаемости антигена Ma (0,875), ■1то характерно для грубошерстных овец и два часто встречающихся аллеля - Tfc, TfD и ярко выраженный полиморфизм по альбумину.

Перечисленные особенности могут служить породной характеристикой романовской породы,овец и свидетельствуют об уникальности данной породы не только на уровне морфологических признаков, но и на уровне генетической структуры.

С помощью F-статистик Райта и G-статистик Ней определили популя-циоиную структуру у каракульских овец.Величины Fis находятся в пределах о а1 -0,024 по трансферрину до 0,008 по гемоглобину, составляя в среднем-0, ¡^1. Отрицательное значение- Fis указывает на избыток 15,1% гетерозигот в среднем по всей популяции каракульских овец. .

Коэффициент Fit равнялся, в среднем -0,044,- что указывает также иа 4,4% избыток гетерозигот у каракульских пород в целом. Показатель гюдразделешюсти -Fsx для всех атлелей подсчитывался как средневзве-иепаыл . j всем исследованным популяциям и варьировал по всем локусед ог 0,003.. ГЛлч) до 0,199 (НЬ).

Среднее значение Fst по трем локусам составила 11; 7%. Это говорит э том, что 88,3% всей изменчивости находится внутри популяций каракульской ' овцы й только 11,7% приходится на межлопуляционную именчи-вость.

Другой показатель, позволяющий оценить подразделенность популяций -Gst эквивалентный параметру Fst равнялся 0,651. Полученные мочения 7ST и 6st говорят об отсутствии значительной подразделенносги между эазличными популяциями каракульских овец, за исключением черного и серого каракуля.

Показатель Fst дает возможность определить не только пеличину юдразделенности популяций, но и оценить уровень генного потока (Nem), поскольку, как было показано еще в свое время Райтом, Fst связан с fem. Исходя из полученных данных, Nem оказался наибольшим у черного каракуля и составил в среднем 119,3, затем у серого каракуля 114,1 и меньше всего этот показатель был у сурхандарьинского 2,0 и юракал-1акского сура 2,2. Таким образом, исходя из полученных данных, следу-5Т, что популяция каракульских овец, в особенности черный ч серый 5ольше обмениваются генетическим материалом и вследствие этого имеют :ходные генофонды.

Проведенная- кластеризация покачала о близости друг др. ту кара-сульских овец (0,146), промежуточной была дистанция (D) эдильбаевской юроды как от каракульских овец (0,446), так и от южноказахского мери-юса (0,779).

Столь малое значение D, установленное нами для популяций кара-сульских овец, говорит об их генетической близости и свидетельствует в юльзу сделанного ранее предположения о существовании единого генофон-ia в исследованной части каракулеводческого ареала.

3.3.4. Внутренняя и межпородная дифференциация овец на основе >асчета генетических расстояний. Генетическую' оценку овец трех продуктивных направлений проводили с использованием 7 систем групп крови. В ноге было показано 50 аллелей 7 систем групп крови, при этом, 20 ал-юлей оказались общими для всех исследованных популяций овец. Возмож-ю, данные гены соответствующих локусов в эволюционном плане являются 5олее консервативными для вида Ovis, большинства пород овец. Наиболее 'етерогенной, как оказалось является B-система, в ней выявлено наи-5ольшее количество аллелей (35) (табл.10).

Наименьшая средняя степень гоыозиготности (0,477) была выявлена у юканийской породы, а максимальная-у каракалпакского сура (0,641).

В наших исследованиях ■ получена интересная закономерность по Ма штигену. У овец кавказской породы, у которых тонкорунная шерсть, уро-зень Ма антигена составил 13,2%, у полутонкорунных-цигайской- 62 ост-Ещзской- 66 и текселя-.74%. Что касается овец с грубой шерстью: рома-

- 32 -'•..

10. Общая характеристика аллелей 7 систем групп крови различных пород и помесных овец

Локус|

Обозначение аллелей

I Число аллелей

А . а1,аг(а),Ь,аЬ,-В Ь,с1,д,е2(е),сЗд,ед,Ье2,Ьс1,е2с1,

йег!, 1, Ы, еег!, Ье£1, <11, ег!. №. (N1,

. 35

Ь,Ьд,е1е2,Ьад1,д1^де1е2,Ь<11е1е2,

4 .. 3 3 2 2

Итого: , 50

новской, молдавской и узбекской популяции каракульской породы, то уровень антигена Ма соответственно был 87, 5, 90 и' 9.6,4%, высокая она была и у каракалпакского сура (93,3%), Отсюда, чем грубее шерсть у овец, тем выше встречаемость антигена Мз.Есть предположение, что это связано с различиями в селекционной направленности при разведении тошгорунньк, полутонкорунных и грубошерстных овец по их' верстным качествам.Малая частота Мл антигена в популяциях мершЬсовых овец может быть следствием положительной связи низкой концентраций аллеля, калия в эритроцитах крови чЬК-тип) с какими-то шерстньш качествами, по которым ведется селекция в тонкорунном овцеводстве. :/ •

Вычисление показателей дистанции(0) проводили на персональном компьютере 1ВМ РС по программам."Генетические расстояния"на.основании суммарных частот антигенов 7 систем групп крови(рис.2). Анализ 18 различных пород и ряда помесей (п-2205) показал о возможности применения/ генетических маркеров 7 систем групп крови для выяснения филогенети- ' ческой связи между ними.По результатам, все исследованные породы и помеси овец располагаются в двух больших кластера*. В первой-каракуль-ские овцы: черный сур из Узбекистана и каракалпакский сур из Шимкент-ской области, формирующие свой отдельный кластер". В другой части данного большого кластера расположились асканййская и кавказская породы, замыкающиеся в собственный кластер и отделенные от другой группы, цигайской породы и -0 х Ц, образующие свой кластер.

Другой большой кластер был представлен в основном европейскими породами и рядом помесей различной кровности по остфризской породе, которые в будущем составят костяк .полутонкорунной многоплодной породы

Н -1 }

II генерация остФризов

I. ' генерация сстфризов

III генерация остфризов Рз - помеси в себе

Рг - ДхОхОхЦ —1

Ра - Ц х О -1 |

Рг - ЦхОхЦхо —! - |

Н I-!

остфризская, 1985Г. —1 |—| | !

Р1 - о X т -1 | I I

романовская —I |—1 I I

тексель

североказахасая кросс-бредная.порода

Та - о х Ц

цигайская . . —1 I

асканийская —I !—1

кавказская каракалпакский сур

каракуль узбекский —1 Рис.2. Дендрограмма кластеров анализируемых пород и помесных овец

овец в Республике Молдова.

Из исходных родительских пород, Гэ (помеси в себе) оказались ближе к остфризским овцам, чем к цигайской породе. Эти данные соответствуют направленности породообразовательного процесса, предусмотренного схемой при соэдании новой породной группы. А в целом анализ 18 популяций показал неслучайный характер распространения частот антигенных характеристик, отнесенных нами к различным продуктивным направлениям по хозяйственной классификации. Полученные материалы свидетельствуют о несходстве популяций по группам крови, различающихся по их генеалогии и подтверждают правильность существующих представлений о родственных связях исследованных популяций. Аналогичные результаты были получены прй использовании полиморфизма ДНК. Вместе с тем, при исследовании генетической дифференциации современных пород и помесных животных оказывается. что овцы как вид чрезвычайно однородны. В тоже же время, гене-

тические различия между разными популяциями овец проявляются настолько отчетливо,что по ним можно судить о некоторых передвижениях популяций в доисторические времена. Это однако, ае исключает и того, что генетическая эволюция овец и даже коз обусловлена не развитием их как-биологических видов, а социальной историей становления человечества.

Исследования показали, что аллели 7 систем групп крови и полиморфные системы трансферрина, эстераэы, преальбумина, Gc-белка и других белковых систем можно эффективно использовать при оценке у овец генетической изменчивости в породах и при выявлении их родственных связей (мониторинг в пространстве), изучение ряда поколений (мониторинг во времени в разных стадах и группах животных).

У пород, близких по происхождению, сходных аллелей было больше (асканийскал и кавказская), если же между породами в прошлом и были родственные исторические связи, то в силу изоляции, селекционной работы одинаковых аллелей с близкой их частотой, у них стало немного. Например, такими являются овцы кавказской породы, испанского мериноса и рамбулье, которые достоверно различались ме:,щу собой по всем И локу-сам. Аналогичные различия по физиологическим маркера;.! наблюдались и мекду другими породами овец. Наглядно эти различия отражает коэффициент генетического сходства, вычисленный как гю антигенам, так и по аллелям нескольких вместе взятых систем крови у трех генераций остфризс-ких овец, а также между кавказской и киргизской породами и 1сазахским мериносом.

Результаты анализа показали, что в '14 изученных нами породах овец чаще всего нарушения отмечали у 10, причем это наблюдалось по боль-щрт'ству изученных локусов. Следовательно это говорит о том, что селекционный процесс влияет определенны},! образом на динамику аллелей, .на reí.этическую структуру той или иной популяции. Это четко видно по большинству тонкорунных овец, наиболее изученных по группа;! крови и полиморфным системам белков крови. Анализ расщепления генотипов показал достоверный недостаток теоретически ожидаемых гетероэигот в породах асканийская и кавказская по В- и С-системам (Р<0,05-Р<0,001). Что же касается цигайских и тексельских овец, то у них в большинстве систем нарушения были связаны с избытком гомозигот (Р<0,05 - Р<0,001), 116 остфризам и североказахским кроссбредам нзддаекил генетического равновесия были связаны с одной стороны избытком гетероэигот ( В- и С- сиг-темы групп крови) (Р<0,01 - Р<0,001),. а с другой стороны, наоборот, избытком гомозигот по другим системам (R, Es, .Se, , D, М) (Р<0,01 -Р<0,001).При.ина изменения генетической структуры популяции может быть следствием длительного использования гомозиготных производителей, инбридинга (тексель, остфризская и цигайская породы) 'иди влиянием -применяемой системы племенной работы (североказахская кроссбредная порода).

Анализ генетической структуры популяций изученных пород еыяеил ловышешшй уровень наблюдаемой гомозиготности диаллельных локусоэ, зл исключением арилэстеразь;. Эта тенденция особенно была зачетна и в ряде сложных систем (А, В, С) некоторых пород.

вывод и

1. Получены и изучены диагностикумы,выявляющие антигены 7 систем групп крови овец и 28 эритроцитарных'факторов коз.Из них 14 овечьих соответствуют Международным стандартам, 5 антисывороток выявляют новые антигены и составляют подтипы антигенов Аа,. Bd.Be, Da, Мл, приготовлено три новых реагента с номерными обозначениями (Midi,Mido,ММз).

2. При подборе пар донор-реципиент с целью получения специфических ап-тисывороток целесообразно использовать разнополых и разношерстных овец старше одного года. Применение реиммунизации, неспецифических стимуляторов (адъювант Фрейнда, стабилизированная лимфа, судьфознн) повышает иммунологическую реактивность продуцента и увеличивает эффективность проводимых иммунизации в 2-3 раза.

3. С учетом иммуногенности эритроцитарные антигены разделены на 5 классов:! - сильные (Аа, Ab, ВЬ, Са). 2 - средние (Bd, Be, Bl, Cb). 3-слабые (Bg.'Be, Da, Ma, Be). 4 - антигены, выявляемые естественней!! антителами (R,0). 5 - "ареактиЕные" антигены (1,1). При составлении плана иммунизации численность пар (донор-реципиент) для получения реагентов к слабым и средним классам антигенов следует увеличить в 4-6 раз в сравнении с численностью пар к сильным днтигенам.

4. Показано, что при межпородной иммунизации овец эритроцита;;и крови наиболее выраженная реакция отмечается со стороны тиреоидной и адре-наповой систем. Приведенные материалы исследований констатируют гипотезу о том,что Ir-гены, контролирующие силу иммунного ответа оказались не сцепленными с генами групп кроги и полиморфных систем бе-

,л ков.

5. Проведение сравнительного анализа реагента четырех видов на донорских стадах овец и коз позволило установить эквивалентность ■■эритроцитарных антигенов R и Са овец и R и 0г-20 у коз, а также R овец и коз с J скота и яка.Все это позволило говорить об общности двух систем R и С у оеец и коз и одной J - у четырех еидов жвачных (скота, яка, овец и коз).Не установлена такая общность по лимфоцитарнш антигенам I класса OLA, CLA и BoLA на основе реагентов крупного рогатого скота.

6. Исследование фенотияического становления антигенов групп крови и полиморфных белков в ентогенезе овец показачо, что необходимо избегать ранних генетических маркировок у ягнят в течение первых двух

месяцев после рождения.

7. Генетический контроль достоверности происхождения овец по физиологическим маркерам является основным и объективны!.! средством проверки соответствия родословных. Для раскрытия полной ситуации о состоянии опемешшх записей достаточно анализа крови у 20-30% молодняка в больших отарач (600-800 овцематок),от 30 до 50%- в небольших стадах (200-500 голов). Количество недостоверный записей приходится в основном на ложное отцовство. Суммарная разрешающая способность использованных систем составила от 82,5 до 96,8%.

8. Широкая апробация генетического метода при контроле достоверности происхождения ягнят показала, что целесообразно его проводить не только для проверки родословных, но и при оценке баранов-производителей по качеству потомства, трансплантации эмбрионов, установлений моно- и диэиготных ягнят, купле-предано производителей.

9. В отличие от крупного рогатого скота, рождение монозигоишх, химерных близнецов среди овец различных' пород крайне редкое явление. У овец с многоплодным окотом нам удалось обнаружить ыонозиготиых ягнят в 8 случаях из 231 двойкевих и тройневых потомков(0,0-1%).

10.По полиморфным системам крови у 18 различных пород и помесных овец установлено 60 аллелей. Наименьший уровень средней степени гоиозй-готности отмечался у аеканийской породы (0,477), , а максимальный -; у каракалпакского сура (0,641).

11.Методом геномной дактилоскопии установлены генотипические особенности ДНК полиморфизма у пород овец различной продуктивной направленности. Полученные материалы подтверждают ранее установленные закономерности взаимоотношений пород с использованием других физиологических маркеров.

йраоткездшэ предвзгайкя ' О целью широкого внедрения в овцеводство методов генетачеасэго анализа на основе физиологических маркеров осуществлены следующие. мероприятия : ."''.'

- организовано изготовление сывороток-реагентов ддр. определения групп крови овец и коэ;при подборе пар. донор-рецишвнт с цельэ получения as-тисывороток целесообразно использовать разнополых и рагнопородшх овец старше одного года. Применение реиымунизации, кеспэцкфичеазк стимуляторов (адъювант Фрейнда, стабилизированная лкифа, сулафоени) • аовшшт иммунологнч >скую реактивность продуцента и увеличивает »¡К^ютлаюсть проводимых иммунизаций в 2-3 раза; ; . .

т, сформировано эталонное по группам крови донорское поголовье овец,' создан Банк сывороток-реагентов(ТУ-46-12-38-84 от 05.09.84 г.); •

- на основе применения Банка реагентов разработаны способы проведения

проверки родословных, оценки баранов-производителей по качеству потомства, трансплантации эмбрионов, определения изменений частот аллелей-во времени у различных генераций и пород овец;

- систематически осуществляется участие з международных сравнительных испытаниях диагностикумов, что обеспечивает проверку, качества получен ных реагентов и сравнение с эталонными международными стандартами;

- проводится поиск новых полиморфных систем, пригодных для использования в качестве физиологических маркеров.

Список осмсзшк опубликопплшк работ

I. Марзанов И.С. Иммунологические методы исследования и их использование в практике овцеводства//Актуальные проблемы развития агропромышленного комплекса: Тез. дога. краев. науч. - практич. конф. молодых-ученых. Ставрополь.-1983.-С.141-144.

2. Казайовский С.А..Анфиногенова'Т.А.,Марзанов н,С. Системы групп крови у овец кавказской породы//Цитология и генетика.-1985.-N6.-С.446 -452.

3. Сухова Н.О..Марзанов Н.С..Гафаров Р.Г. и др.Получение изоиммунных сывороток к. эритроцитам крсзи овец//Докл.ВАСХНИЛ.-1988.-Н 1.-С.32-35. _ ' .

4. Марзанов Н.С. .Люцканов П.И.Группоспецифические факторы крови овоц и их использование в селекционно-племенной работе//Известия АН МССР. Серия биол.и химич. наук.-1989.-1J 5.-С.42-45.

5. Люцканов П.И. .Марзаноз Н.С.-,Бабенко В.Ф, Проверка бараков по качеству потомства//Зоотехния. -1390.-W5.-С.39-40.

6. Марзанов Н.С..Силантьев д.Н..Люцканов П.И. ^Характеристика генетических связей меэду различными породами и помесями овец//Цитолог"я и генетика. -1930.- Н 5.-С.42-44.

7. Марзанов.Н.С., Люцканов П.И. Характеристика породы тексель по системам групп крови озец//Докл.ВАСХНИЛ.-1990.-N11.-С.38-41.

в. Марзанов Н.С..Люцканов П.И. Группы крови в селекционной работе с о:-:&ми//Зоотехния.-1991.-N1.-С. 21-24.

9. Марзанов Н.С.Иммунология и .иммуногенетика овец и коз.-Кишинев:Шти-

-инца.-1991.-238 с.(Монография). 10. Бабенко В.Ф., Бузу И.А., Марзанов Н.С. и др.Рекомендации по технологии производства продукции овцеводства в Республике Молдова// Ш10 "Тевит".-Кишинев:Моддагроинформреклгма.-1992.-85 с.

II. Марзанов Н.С. .Люцканов П.И. ,Имбаев С.М. и др. Антигены групп кров--, у коз оренбургской породы/ZI Мездунар.конф.по частной генетике с.-х.животных:Тез.докл.-Аскания^Нова.-1993.-1 с.

к ьочаж 31.01.94г.

ï'.jvl'.; íüo экз.

Заказ 550 Объем 12.0 уч.--кзд.л.

EHUIILíE

Информация о работе

Марзанов, Нурбий Сафарбиевич
доктора биологических наук
Дубровицы, 1994
ВАК 03.00.13

Автореферат

Похожие работы