Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Фасциолез крупного рогатого скота в северо-западном регионе России

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Фасциолез крупного рогатого скота в северо-западном регионе России"

На правах рукописи

ОНУФРИЕНКО Марианна Эриковна

ФАСЦИОЛЕЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В СЕВЕРО-ЗАПАДНОМ РЕГИОНЕ РОССИИ

Специальности 03.00.19 - паразитология 16.00.04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

(

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Санкт-Петербург

2004

Работа выполнена в ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины», в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей.

Научные консультанты:

доктор ветеринарных наук, профессор Шустрова М.В.

доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, Соколов В.Д.

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Ятусевич А.И. доктор ветеринарных наук, профессор Даугалиева Э.Х. доктор ветеринарных наук, профессор Преображенский С.Н.

Ведущая организация - ФГОУ ВПО «Саратовский Государственный аграрный университет имени Н.И.Вавилова»

Защита диссертации состоится «у/ » октября. 2004 года в часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.03 при

ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, г. Санкт-Петерубрг, ул. Черниговская, 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская Государственная академия ветеринарной медицины»

Автореферат разослан <<_

2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Узюмова О.В.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Среди гельминтозов - сельскохозяйственных животных фасциолез является одним из экономически значимых и представляет часть экологической проблемы не только Российской Федерации, но и других регионов мира, где возрастает интенсивность вредоносного воздействия паразитических червей на природу.

Информация о широком распространении фасциолеза среди крупного рогатого скота и овец подробно представлена в работах отечественных и зарубежных исследователей (Н.В. Демидов, 1965; A.M. Сазанов, 1965 -1976; Ю.Ф. Петров и соавт., 1985, 1986, 1993, 2003; Х.С. Абдуллаев, 1995; В.В. Горохов и соавт., 1997; В.В. Горчаков, 1997; В.В. Сочнев и соавт., 1998; Ю.С. Докторов и соавт., 1999; А.В. Зубов, М.Ш. Акбаев, 2001; А.И. Ятусевич, ЯН. Андросик, 2001; D.A. Armstrong, 1982; F. Lucchese et al., 1996; M.S. Mas-Coma et al., 1999).

Распространение болезни обусловлено повсеместным расселением промежуточного хозяина фасциолы обыкновенной - моллюска малого прудовика, который является ведущим звеном в циркуляции трематод.

Сложившаяся эпизоотическая ситуация подтверждает необходимость проведения комплексных оздоровительных и профилактических мероприятий при фасциолезе животных.

Учеными установлено, что гельминтозы, в том числе и фасциолез, вызывают вторичные иммунодефициты, поэтому необходимо учитывать иммунный статус животных на момент их лечения (Э.Х. Даугалиева, В.В. Филиппов, 1991; Э.Х. Даугалиева, 2000) и разрабатывать иммунокоррегирующую терапию.

Своевременная и достоверная диагностика является важным звеном профилактики. Используемые в ветеринарной практике лабораторные методы исследований не позволяют объективно оценить эпизоотическую ситуацию. С помощью метода гельминтоовоскопии яйца фасциол выявляют в фекалиях 45-50% зараженных животных (Г.А. Котельников, 1984). В период миграции ювенильных форм фасциол установить диагноз с использованием общепринятых методов исследования не представляется возможным.

Практическое значение имеет разработка и применение иммунодиагностических тестов. В последнее время в России и за рубежом апробированы и используются для выявления гельминтозов серологические методы: РДПАГ, РИГА, ИФА, ПЦР.

В качестве иммунодиагностического теста для выявления животных, зараженных F. hepatica, сотрудниками ВИГИС (В.В. Клименко и соавт, 1997) предложена реакция диффузионной преципитации в агаровом геле (РДПАГ); метод рекомендуется использовать для распознавания острой формы фасциолеза. Таким образом, выполненные в этом направлении изыскания в России не многочисленны и на

рос. "аци

Не менее значимым для ветеринарии является аллергический метод диагностики. Длительно сохраняющаяся после переболевания в острой форме сенсибилизация тканей экскреторно-секреторными антигенами Fasciola hepatica обуславливает стимулирование клеточных, факторов иммунитета и подтверждает возможность применения внутрикожной аллергической пробы. В пользу использования аллергической диагностики при фасциолезе свидетельствует высокий уровень эозинофилии и в острый период.

Различные методы диагностики должны применяться планомерно и комплексно, а полученные результаты. эпизоотологического мониторинга необходимо рассматривать как важный этап оздоровительных и профилактических мероприятий.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является изучение эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота в северо - западном регионе России на примере Ленинградской и Новгородской областей, разработка иммунобиологических методов диагностики в комплексе мероприятий по проведению эпизоотологического мониторинга и совершенствование терапии при данном заболевании.

Для осуществления поставленной цели решались следующие задачи:

провести ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по фасциолезу крупного рогатого скота в северо - западном регионе Российской Федерации на примере Ленинградской и Новгородской областей;

- изучить роль возбудителя и источника возбудителя в эпизоотическом процессе при фасциолезе крупного рогатого скота;

- выявить влияние фасциол на иммунобиологическую реактивность и иммунный статус крупного рогатого скота, экспериментально и спонтанно зараженного гельминтами;

- разработать и установить возможность использования ИФА и РНГА для диагностики фасциолеза и- определить эффективность разработанных методов;

- провести сероэпизоотологические обследования крупного рогатого скота в хозяйствах северо - западного региона, выяснить показатели экстенсивности инвазии, чувствительность (информативность) ИФА и РНГА при острой и хронической формах фасциолеза;

- оптимизировать терапию и разработать иммунопрофилактику при фасциолезе крупного рогатого скота..

Научная новизна. Впервые:

детально изучены особенности эпизоотического процесса при фасциолезе • крупного рогатого скота в северо - западном регионе Российской: Федерации (распространение,. сезонная и возрастная динамика), особенности иммунитета и патогенеза;

- разработана серологическая и аллергическая диагностика фасциолеза крупного рогатого скота, которая применена на практике;

- разработаны параметры приготовления экскреторно - секреторных и соматических антигенов Fasciola hepatica для ИФА и РНГА, установлена возможность их применения для диагностики фасциолеза;

- предлагается оценивать положительные результаты серологического исследования коров, в печени которых не выявлены половозрелые фасциолы, как следствие клеточно - гуморального иммунного ответа, обусловленного продолжительной сенсибилизацией тканей животных экскреторно -секреторными антигенами Fasciola hepatica;

Сопоставление результатов серологического и послеубойного исследований крупного рогатого скота на фасциолез позволило установить четкую корреляцию.

Подано заявление о выдаче патента Российской Федерации на изобретение «Способ диагностики фасциолеза крупного рогатого скота». Регистрационный номер 2004109943.

Оптимизирована терапия и разработана иммунопрофилактика при фасциолезе крупного рогатого скота, предложены эффективные схемы лечения и профилактики с применением препаратов отечественного синтеза.

Практическое_значение. Эпизоотологический мониторинг

при фасциолезе (изучение динамики, интенсивности эпизоотического процесса и эпизоотологической географии) позволяет своевременно, на регламентированной основе осуществлять комплекс оздоровительных и лечебно - профилактических мероприятий.

Разработаны оптимальные параметры получения иммунореагентов для ИФА и РНГА с целью диагностики фасциолеза.

Получены данные, на основании которых можно устанавливать конкретные сроки и кратность диагностических исследований на фасциолез в осенний, зимний и весенний сезоны года. Эффективность лечебно -профилактических обработок следует выяснять на основании изучения динамики снижения титров антител к Fasciola hepatica после дегельминтизации животных. Важным является учет особенностей динамики эпизоотического процесса при фасциолезе в конкретном регионе Российской Федерации.

На основании исследований разработаны и внедрены в производство:

1.«Наставление по применению препарата альбен для дегельминтизации сельскохозяйственных животных, пушных зверей и кур» (утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 27.03.2002 №13-3-04/0385)

2.Методическое пособие «Прижизненная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2002 г).

3.Методическое пособие «Посмертная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2003 г).

4.Методические рекомендации «Современные методы диагностики фасциолеза крупного рогатого скота» (утверждены северо-западным научно-методическим центром РАСХН, 2004 г).

Научные разработки используются в учебном процессе на ветеринарных факультетах вузов Минсельхоза России и стран СНГ.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на следующих научных и научно-практических конференциях: 1 .Международной конференции, посвященной 125-летию академии (Казань, КГАВМ им.Н.Э.Баумана, 1998).

2.Ш международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины на Северном Кавказе» (Персиановский, 2000).

3.Международной межвузовской конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2001,2002,2003,2004).

4.ГУ международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2002).

5.Конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2003,2004)

6.XI Московском международном конгрессе (Москва, 2003).

7.Международной конференции и III съезде паразитологического общества при РАН «Проблемы современной паразитологии» (Петрозаводск, 2003).

8.II международном Конгрессе (Алматы, 2003)

9.Конференции аграрного факультета РУДН «Концепции, практика и перспективы современного земледелия» (Москва, 2003)

Ю.Конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПГАВМ (Санкт-Петербург, 2001,2002,2003,2004).

Основные положения, выносимые на защиту;

1. Эпизоотический процесс при фасциолезе крупного рогатого скота.

2. Особенности иммунитета и патогенеза при спонтанном фасциолезе.

3. Диагностика при фасциолезе крупного рогатого скота.

4. Терапия и иммунопрофилактика фасциолеза крупного рогатого скота.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 54 научные работы, в том числе монография.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 338 страницах машинописного текста, включает 62 таблицы, 34 рисунка, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих 3 раздела, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений. Список литературы включает 365 источников, из них 228 отечественных и 137 иностранных.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Обзор литературы включает 5 разделов, посвященных экономическому ущербу, распространению и особенностям эпизоотического процесса при фасциолезе, особенностям иммунитета при гельминтозах, патогенеза и иммунитета при фасциолезе, методам диагностики и комплексным лечебно-профилактическим мероприятиям при фасциолезе.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследований

Работа выполнена на кафедрах паразитологии им. В.Л. Якимова, фармакологии и токсикологии Санкт-Петербургской Государственной академии ветеринарной медицины, в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей, на областных мясокомбинатах и убойных пунктах. Научно-производственные, экспериментальные исследования осуществлены в течение 1996-2003 гг.

Проведен статистический учет данных ветеринарной отчетности и выполнены исследования на фасциолез 3875 голов крупного рогатого скота.

Для выяснения диагностической ценности иммуноферментного анализа и реакции непрямой гемагглютинации при фасциолезе исследовано 2650 сывороток крови крупного рогатого скота. При помощи внутрикожной аллергической пробы протестировано 1087 животных.

Всего проведено исследований: гельминтоовоскопических - 1973, гематологических и биохимических - 680, иммунологических - 575, серологических — 10276, послеубойных — 2950. В опытах по изучению фармакотоксикологических свойств использовали 160 белых мышей, 150 крыс.

В качестве материала для исследований использовали фекалии крупного рогатого скота, кровь и сыворотку крови, половозрелые фасциолы и юные формы Fasciola hepatica.

Моллюсков (Lymnaea truncatula) извлекали из биотопов, прилегающих к рекам Луга, Свирь и Ладожскому озеру. Определение плотности популяции, культивирование и компрессорное исследование моллюсков проводили по стандартной методике.

Использовали общепринятый гельминтоовоскопический метод последовательных промываний. Для определения интенсивности инвазии как относительного показателя (количество яиц фасциол в 1 г фекалий) применяли метод Фюллеборна.

Острую токсичность определяли по методу Кербера (1931), субхроническую токсичность по методу Лима (1961), изучение эмбриотоксического и тератогенного действия проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по изучению эмбриотоксического действия

фармакологических средств и влияния их на репродуктивную функцию», одобренных Фармкомитетом МЗ РФ (1992).

Гематологические и биохимические исследования выполняли по общепринятым методиками.

О неспецифической резистентности организма животных судили по титрам гетерофильной агглютининной (реакция Пауля-Буннеля в модификации Е.Ф. Чернушенко и Л.С. Когосовой (1978)), бактерицидной (по методике О.В. Смирновой, ГА. Кузьминой (1966)) и лизоцимной активности (по методу В.Г. Дорофейчика (1977)) сыворотки крови.

Определение фракции лимфоцитов проводили методом центрифугирования в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-верографин (S. Limatibue et al., 1978), содержание Т-лимфоцитов в периферической крови определяли по методу Jondal (1984), определение активных Т-лимфоцитов (ЕА-РОК) осуществляли по методу В.В. Меньшикова и соавт. (1987).

Идентификацию В-лимфоцитов осуществляли по методу Mendes (1970). При постановке реакции розеткообразования пользовались методическим подходом Д.К. Новикова и В.И. Новиковой (1979).

Определение активности макрофагов (НСТ-тест) проводили по методу A. Segal (1974) в модификации ВЛ. Шатрова и соавт. (1985).

Гистологические исследования образцов органов проводили по стандартным методикам. Площадь зон лимфоидных органов определяли с помощью окуляр-сетки по Г.Г. Автандилову (1973). Для установления на срезах площадей, занимаемых отдельными структурными компонентами лимфатического узла, селезенки, тимуса, а также для подсчета клеточных элементов применяли морфометрическую сетку А.А. Глаголева, усовершенствованную СБ. Стефановым (1974). Идентификацию клеточных элементов костного мозга проводили по атласам А.Г. Пьянникова (1953) и М.Г. Абрамова (1979).

Иммунодиагностические исследования проводили в РИГА и ИФА. Активность диагностикумов проверяли в РИГА с позитивной сывороткой от спонтанно зараженного крупного рогатого скота с титром антител не менее 1:640. Постановку РИГА осуществляли в панели микротитратора Такачи.

Постановку ИФА осуществляли на полистироловых планшетах отечественного производства (ВНИИЭМТ). Результаты реакции учитывали на основании фотометрического анализа при помощи прибора «Uniskan Sp».

При проведении аллергической диагностики в качестве аллергена использовали экскреторно-секреторные компоненты Fasciola hepatica, очищенные и фракционированные на цианбромактивированной сефарозе. Диагностический препарат в дозе 0,2 мл вводили внутрикожно, в область средней трети шеи с помощью безыгольного инъектора БИ-7.

При послеубойной диагностике проводили внешний осмотр печени. Осуществляли продольные разрезы по желчным ходам, отделяли строму печени, вскрывали желчный пузырь. При обнаружении до 5 экземпляров

фасциол в печени интенсивность инвазии оценивали как слабую, от 6 до 20 -среднюю, более 20 - высокую.

Статистическую обработку результатов исследования проводили по методу Н.А. Плохинского (1987).

Результаты исследований Часть 1. Эпизоотический процесс при фасциолезе крупного рогатого скота

Эпизоотический процесс при гельминтозах — это непрерывная цепь последовательного перехода возбудителя, благодаря присущему ему механизму передачи, от больного животного (источник возбудителя) к здоровому (восприимчивое животное), сопровождающегося возникновением, распространением и угасанием заболеваемости у последних в конкретных природно-климатических и хозяйственных условиях ведения животноводства (В.В. Филиппов, 1986).

В эпизоотическую цепь входит комплекс элементов и только его наличие позволяет возникать и развиваться эпизоотическому процессу. Элементы эпизоотической цепи в тесной взаимосвязи с условиями внешней среды порождают эпизоотический процесс и поддерживают его непрерывность на протяжении определенного времени. Элементами эпизоотической цепи являются: источник возбудителя гельминтоза, механизм передачи возбудителя, восприимчивое животное. При биогельминтозах, процесс развития возбудителя без промежуточного хозяина завершиться не может. В промежуточных хозяевах возбудитель развивается, изменяется и только тогда становится инвазионным для восприимчивого животного.

Источник возбудителя инвазии Распространение фасциолеза крупного рогатого скота в Ленинградской и Новгородской областях

При проведении ретроспективного статистического анализа результатов послеубойной ВСЭ на фасциолез в условиях областных мясокомбинатов Ленинградской и Новгородской областей (1992-2002 гг.) выяснены средние показатели экстенсивности инвазии: 7-16% в Ленинградской области и 9,4-22,5% в Новгородской области.

Мариты фасциол выявлены у 25041 животных в Ленинградской области (максимальный показатель ИИ - 68 экземпляров), и у 28020 животных в Новгородской области (максимальный показатель ИИ - 73 экземпляра). Трематоды по морфометрическим показателям определены как вид Fasciola hepatica. В партиях дегельминтизированных и выбракованных коров трематод в печени обнаружили в 2-5% случаев, у всех животных зарегистрированы характерные для фасциолеза патологические изменения.

Экстенсивность эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота максимальна в Выборгском (16,07%), Кингисеппском (19,46%), Кировском (16,15%) и Тихвинском (20,5%) районах Ленинградской области.

Высокий уровень эпизоотического процесса в данных районах обусловлен метеорологическими факторами, наличием благоприятных условий для развития промежуточных хозяев - моллюсков-лимнеид.

В Бокситогорском и Гатчинском районах зараженность фасциолами крупного рогатого скота составляет 13,5% и 6,83% соответственно. Менее высокая зараженность фасциолами крупного рогатого скота в Лужском районе (1,36%) объясняется регулярным проведением дегельминтизаций.

В Новгородской области до 80% были заражены животные в Любытинском и Демянском районах (79,8% и 79,7% соответственно), в Солецком и Старорусском районах экстенсивность инвазии составляла 45,43% и 45,12% соответственно. В хозяйствах Новгородского, Пестовского и Холмского районов экстенсивность фасциолезной инвазии колебалась от 1,5% до 2,2%.

При анализе, эпизоотической обстановки по фасциолезу крупного рогатого скота в северо-западном регионе установлена тенденция увеличения заболеваемости с пиками инвазии в 2000 - 2001 гг.

В целом, изменение экстенсивности эпизоотического процесса при фасциолезе в различных районах как Ленинградской, так и Новгородской областей характеризуется одновершинной кривой. Причем в годы с высокими показателями экстенсивности инвазии зарегистрирован максимальный уровень среднегодовых осадков (620 мм и более).

Механизм передачи

При изучении эпизоотического процесса при фасциолезе особое внимание следует уделять промежуточным хозяевам, интенсивности и экстенсивности их поражения личиночными стадиями паразита. Мы изучили основные характеристики промежуточных хозяев на примере АСХО «Котельской» Кингисеппского района Ленинградской области.

АСХО «Котельский» расположен в юго-западной части Ленинградской области. Средняя зимняя температура воздуха - -12°С, летняя - +19°С. Безморозных дней в году около 125. Район относится к зоне достаточного увлажнения со средним количеством осадков 570 мм, в том числе 300 мм за вегетационный период.

Ландшафт хозяйства характеризуется ровным рельефом местности. Большая часть сельскохозяйственных угодий располагается на заболоченных территориях. Пастбища и сенокосы находятся поблизости от реки Луга. Пастбища обильно увлажнены. Указанные факторы способствуют формированию и стабильному существованию на территории пастбищ большого числа биотопов моллюсков-лимнеид.

Изучение плотности популяции малых прудовиков на территории пастбищ АСХО «Котельский» в различные месяцы весенне-летнего сезона 2000-2001 гг. позволило установить следующие данные: май-июнь - 3-5 экз./м2, июль - 3-14 экз/м2, август - 4-11 экз./м2. Средние показатели плотности популяции моллюсков варьировали в зависимости от обследуемых участков.

По берегам стариц и заводей показатели плотности популяции моллюсков более высокие (5-14 экз/м2) по сравнению с таковым во временных небольших водоемах (1-4 экз/м2).

Зараженность малых прудовиков партенитами Fasciola hepatica в различные месяцы пастбищного периода варьирует от 3,1% в июне до 4,2% в июле и 7,9-15% в августе. При культивировании 395 моллюсков церкарии фасциол обнаружены у 47 (11,9%); компрессорным методом установлена зараженность редиями и церкариями 111 из 743 экземпляров (14,9%).

Таким образом, полученные данные объясняют высокий уровень эпизоотического процесса при фасциолезе в АСХО «Котельский».

Возрастная динамика фасциолеза крупного рогатого скота в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей Степень распространенности фасциолеза среди животных различных возрастных групп значительно варьирует. Статистические данные по результатам гельминтоовоскопии в Ленинградской и Новгородской областях свидетельствуют о наиболее высокой зараженности коров (33,8%); средние показатели ЭИ - у телок 18-20 месяцев (10,5%); молодняк до 12 месяцев инвазирован в незначительной степени (7,4%).

С возрастом животных интенсивность инвазии возрастает, что обусловлено продолжительностью жизни фасциол до 6 лет, периодическими реинвазиями в пастбищный период и использованием для дегельминтизации препаратов с невысокой экстенсэффективностью.

В северо-западном регионе установлены высокие показатели ИИ при фасциолезе у коров (ИИ - 60 экз.), средние - у телок 18-20 месяцев (ИИ -30-35 экз.) и низкие - у молодняка до 12 месяцев (ИИ- 1-2 экз.).

Сезонная динамика фасциолеза крупного рогатого скота в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей Изучение зараженности крупного рогатого скота фасциолами в различные сезоны года проводили на основании анализа ветеринарной отчетности Управлений ветеринарии Ленинградской и Новгородской областей и мясокомбинатов этих областей за 1992-2002 гг.

Ретроспективный анализ данных по ВСЭ туш и органов крупного рогатого скота позволил подтвердить немногочисленные результаты исследований по сезонной динамике фасциолеза в северо-западном регионе России. Особенностью эпизоотологии фасциолеза в вышеназванной зоне является постепенное увеличение экстенсивности инвазии в осенний период.

На основании результатов ВСЭ можно констатировать, что в хозяйствах северо-западного региона России пик фасциолезной инвазии наблюдается в ноябре-декабре, а в январе-апреле отмечается снижение экстенсивности зараженности. Последнее обеспечивается проведением дегельминтизации животных в зимний сезон. В начале пастбищного периода регистрируются незначительные показатели экстенсивности инвазии (около 2%).

Август и сентябрь характеризуются некоторым повышением заболеваемости фасциолезом (5-8%), что является результатом заражения животных в мае-июне через перезимовавших инвазированных моллюсков

Высокий уровень экстенсивности инвазии при фасциолезе в ноябре-декабре обусловлен заражением животных через инвазированных партеногенетическими стадиями Fasciola hepatica моллюсков генераций текущего года (ЭИ - 15-21%). Такая динамика эпизоотического процесса при фасциолезе является результатом использования в хозяйствах свободного выпаса животных и проведения нерегулярных дегельминтизаций. Высокая интенсивность эпизоотического процесса обусловлена также отсутствием повторных обработок неосвободившихся от гельминтов животных.

Таким образом, эпизоотический процесс при фасциолезе животных в условиях северо-западного региона практически непрерывен. Животные заражаются постоянно, что ведет к снижению уровня естественной резистентности. В связи с этим изучение иммунологического статуса животных при гельминтозах представляет теоретический и практический интерес, поскольку позволяет понять взаимоотношение в системе «паразит-хозяин».

Восприимчивое животное

Иммунный статус телят при экспериментальном фасциолезе Под опыт были взяты 10 телят 8-8,5 месячного возраста, которых раделили на 2 группы. Первую группу заразили адолескариями фасциол (500 экземпляров/животное), вторая группа составила незараженный контроль.

Динамика Т-лимфоцитов. Достоверная разница в общем количестве Т-лимфоцитов отмечена нами на 5 день после заражения. С 10 дня наблюдали снижение общего количества Т-лимфоцитов у подопытных телят. На 15 день после заражения продолжалось снижение Е-РОК в первой группе телят до 36,0+1,1%. С 30 дня констатировали тенденцию к увеличению общего количества Т-лимфацитов в опытной группе, на 60 день количество Е-РОК достигло 39,2+1,1%. Т-клетки у телят этой группы продолжали накапливаться и достигли уровня 40,2+1,2% при показаниях контроля 40,2+0,8%. К концу наблюдений на 120 день произошло резкое падение Т-клеточной популяции до уровня 32,2+0,4%, что было ниже контроля в 1,3 раза.

Динамика теофиллинрезистентных лимфоцитов. Фоновые значения Т-хелперов были в пределах 16,2+0,9 - 16,4+1,1% (первая и вторая группы, соответственно). На 5 и 10 дни после заражения количество Т-хелперов в крови телят первой группы снизилось до уровня 8,0+0,2% против 15,8+0,1% в контроле. Некоторую стабилизацию клеточной популяции в крови телят обеих групп отмечали на 15 день, но уже к 30 дню исследований количество Т-хелперов в крови телят опытной группы вновь упало с 745,9+65,4 кл/мкл до уровня 321,3+59,0 кл/мкл. К 90 дню в крови зараженных телят наметилось накопление клона Т-хелперов и числовые значения их приблизились к показателям контроля.

Динамика теофиллинчувствительных лимфоцитов. Изменение супрессорной активности Т-лимфоцитов отметили уже на 5 день опыта. Количество ТФЧ-РОК с 6,8+0,12% поднялось до уровня 14,4+0,4%. На 10 день количество Т-супрессоров снизилось, но было достоверно выше, чем у контрольных животных. Позднее у телят первой группы абсолютное количество ТФЧ-РОК увеличилось до 12,4+0,8% и продолжало расти вплоть до 90 дня опыта, и их количество составило 13,8+0,8% при показаниях контроля 5,2+0,4%. К 120 дню у зараженных телят резко изменилось количество Т-лимфоцитов и числовые значения снизились до 6,8+0,2%, что достоверно отличалось от показателей контроля - 6,4+0,8%.

Изменения индексов иммунорегуляции (ИИ). Анализ ИИ перед началом эксперимента находился в пределах 1,1±0,2 - 1,4+0,2. Через 5 дней зарегистрировано достоверное снижение ИИ в группе телят, получившей адолескарии Б.Иераиса. Он составил 0,4+0,09 при показаниях контрольной группы 1,2+0,09. К 60 дню опыта удалось обнаружить повторное достоверное снижение результатов в первой группе телят. Эта тенденция сохранилась и на 90 день эксперимента, где ИИ составил 0,3+0,02 при контрольном значении 1,2+0,1. К 120 дню значения ИИ в обеих группах выровнялись.

Динамика фагоцитарной активности макрофагов. Через 5 дней после заражения количество макрофагов составило 135,8+14,8 кл/мкл в первой группе и 92,6+3,2кл/мкл - во второй. На 10 день наблюдений отмечено увеличение количества макрофагов в зараженной группе животных до 212,4+17,6 кл/мкл, что было на 50% выше показателей контроля. Абсолютное количество макрофагов достоверно снизилось на 15 день до 95,5+1,3 кл/мкл. Затем у телят первой группы постепенно повышалось их содержание и на 60 день опыта составило 221,6+16,7 кл/мкл, что достоверно отличалось от контрольной группы, где показатель НСТ-теста находился на отметке 145,6+11,5 кл/мкл. К 90 дню отмечали вновь снижение макрофагов у телят первой группы до 113,2+1,7 кл/мкл, а к 120 дню - до 78,1+17,8 кл/мкл. У контрольных телят количество макрофагов было в пределах 156,9+24,0 кл/мкл.

Динамика В-лимфоцитов. После заражения телят культурой адолескариев Ра8сю1а Иераиса количество В-клеток в крови подопытной группы составило 28,4+0,4%, что в 1,9 раз превышало показатель контроля. Затем произошло резкое снижение количества В-лимфоцитов и на 10 день опыта числовые значения составили 23,1+0,7% в контроле и 23,2+0,3% в зараженной группе. Снижение уровня В-лимфоцитов в крови телят первой группы выявили на 30 и 60 дни эксперимента. К 90 дню показатель активности В-лимфоцитов в первой группе не отличался от такового в контроле. На 120 день эксперимента наблюдали повышение абсолютного количества ЕАС-РОК в группе зараженных телят до 27,4+0,1% при показаниях контроля 30,8+0,2%.

Динамика специфического иммунного ответа. Фоновые значения экстинкции (Д Е) в начале эксперимента находились в пределах 0,032+0,002 -0,027+0,002. Статистически значимое увеличение количества антител произошло после заражения телят. Накопление специфических антител

неуклонно росло. Хотя к 15 дню и произошло некоторое замедление их роста, уже на следующий день Д Е повысился до уровня 0,117+0,003, при показаниях контрольной группы 0,020+0,001. Увеличение коэффициента экстинкции продолжалось до 60 дня опыта, когда подъем Д Е достиг числового значения 0,184+0,01, при показаниях второй группы 0,033+0,003. На 90 день произошел спад специфической активности в крови зараженных телят, коэффициент экстинкции снизился в 1,1 раза, при этом уровень специфических АТ был выше на 27,3%, по сравнению с незараженным контролем. В дальнейшем коэффициент экстинкции продолжал снижаться и на 120 день наблюдений его уровень достиг отметки 0,148+0,13.

На основании полученных результатов можно констатировать, что экспериментальное заражение сопровождается угнетением общего количества Т-лимфоцитов на фоне увеличения Т-супрессоров и снижения Т-хелперов, подавлением пролиферации В-лимфоцитов, понижением функциональной активности нейтрофилов, макрофагов и гуморальных факторов неспецифической резистентности.

Таким образом, на основании полученных данных можно сделать вывод, что фасциолы вызывают иммуносупрессию.

Кинетика ферментов переамшшрования, щелочной фосфатазы, у-глютамилтранспептидазы и лаюпатдегидрогеназы у телят при экспериментальном фасциолезе

При изучении активности исследуемых энзимов в динамике развития фасциол было установлено, что в течение первых 30 суток активность ферментов переаминирования возрастала у животных подопытной группы.

Наибольший рост активности АсАТ и АлАТ был отмечен через 30 суток после заражения в первой группе животных. По истечении 60 суток у животных этой группы отмечено снижение АсАТ на 14% и повышение АлАТ в эти сроки на 11,3%. У животных контрольной группы активность АсАТ почти не изменилась, а АлАТ повысилась на 11,2%.

К 90 суткам у телят первой группы нарастала тенденция к снижению активности АсАТ. Однако в сравнении с исходными данными, АсАТ оставалась увеличенной в 1,34 раза. АлАТ была ниже уровня исходных данных в 1,09 раза.

Активность щелочной фосфатазы у телят первой группы к 30 суткам опыта возросла в 1,87 раза, к 60 суткам снизилась на 19,3% в сравнении с данными 30 суток. К 90 суткам ЩФ у телят первой группы, снизилась в 1,2 раза в сравнении с исходным уровнем. У животных контрольной группы активность ЩФ через 30,60 и 90 суток оставалась на уровне исходных данных.

Снижение активности АлАТ и ЩФ ниже уровня исходных данных у животных подопытной группы может быть объяснено теорией, усматривающей причины ферментативных сдвигов в нарушении проницаемости клеточных мембран и выходом энзимов в кровь.

Активность общей лактатдегидрогеназы у животных в подопытной группе увеличивалась на протяжении всего периода наблюдений. Мы установили, что коэффициент повышения общей ЛДГ у первой группы животных варьировал в пределах 1,16 - 1,35. Активность общей ЛДГ у животных первой группы возрастала на фоне увеличения активности ЛДГз, ЛДГ4, ЛДГ5 и снижения ЛДГ), ЛДГг- У телят второй группы главным образом за счет увеличения активности ЛДГ4 и ЛДГ5.

Проведенные нами исследования позволили выявить взаимосвязь между возрастанием активности исследуемых энзимов и циклом развития фасциол. Через 60 суток максимально возрастала у телят первой группы активность АлАТ. В эти сроки (декабрь) фасциолы достигали половой зрелости. В этой фазе, паразиты достигают наибольшей массы, выделяют большое количество метаболитов. Мы полагаем, что выделяемые гельминтами экскреты обладают гепатотропным действием, что и обуславливает повышение активности АлАТ.

Развитие фасциол сопровождаются нарушением биохимического гомеостаза у инвазированных животных. Вероятнее всего паразитирующие личинки и выделяемые ими продукты метаболизма являются для крупного рогатого скота раздражителями той силы, в результате которой способна развиваться неспецифическая реакция организма.

Таким образом, противоэпизоотические мероприятия при фасциолезе, по нашему мнению, должны основываться на знании биологических и экологических особенностей развития возбудителя, промежуточных хозяев, возникновении, течении и угасании эпизоотического процесса с учетом иммунологического статуса восприимчивых животных.

Часть 2. Противоэпизоотические мероприятия при фасциолезе животных Прижизненная диагностика фасциолеза Нами впервые разработаны тесты по изучению характера иммунного ответа при фасциолезе, проведены сравнительные исследования эффективности диагностических реакций: РНГА и ИФА, а также определена возможность их использования для сероэпизоотологических исследований. Параллельно изучена возможность применения аллергической диагностики.

Мы изучили параметры экскреторно-секреторного (ЭСФАг) и соматического (СФАг) антигенов фасциол. Максимально активны ЭСФАг. Оптимальное рабочее разведение ЭСФАг, используемое для сенсибилизации эритроцитов и контроля качества диагностикума в РНГА - 1:40. СФАг менее активны. Рабочий титр, используемый для сенсибилизации эритроцитов, составляет 1:5. Специфичность двух антигенов фасциол одинаково высока.

Специфичность фасциолезных антигенных препаратов и чувствительность (информативность) ИФА и РНГА Специфичность ЭСФАг и СФАг антигенов Fasciola hepatica изучали в РНГА с использованием следующих иммунореагентов: 1 .положительная

сыворотка крови крупного рогатого скота (антитела к F.hepatica) с рабочим титром 1:1280; 2.положительная сыворотка крови крупного рогатого скота (антитела к Paramphistomum sp.) с рабочим титром 1:400; 3.отрицательная на фасциолез и парамфистомоз сыворотка крови крупного рогатого скота; 4.несенсибилизированные антигенами эритроциты барана; 5.фосфатно-солевой буферный раствор (рН-7,2).

Результаты проведения экспериментальных исследований показывают, что положительная сыворотка крови к F.hepatica с гомологичными пробными образцами диагностикумов реагирует в титрах 1:640-1:3200, с положительными сыворотками к F.hepatica и Paramphistomum sp. в обратном варианте получены такие же результаты, с гетерологичным соматическим парамфистомным антигенным диагностикумом - 1:40-1:200 при положительном результате с гомологичной сывороткой- 1:320.

При оценке результатов отрицательных контролей зарегистрированы только отрицательные результаты. Контроль на спонтанную агглютинацию с несенсибилизированными эритроцитами барана показал отрицательный результат в разведениях сыворотки крови 1:20 и выше.

Так как выявлены перекрестные иммунологические реакции - 1:40-1:200 между Fasciola hepatica и Paramphistomum sp., диагностический титр РНГА при фасциолезе следует считать равным 1:160, а в ИФА - 1:400. При использовании установленного диагностического титра чувствительность и информативность иммунологических тестов не снижается.

Снижения активности антигенов не наблюдалось в течение 12-14 месяцев. Эритроцитарные диагностикумы, сохраняемые при температуре +4°С, показывали одинаковую чувствительность в течение 10 месяцев с момента приготовления. Через 16-18 месяцев чувствительность их снижалась на 50%.

Сравнительное изучение чувствительности антигенных фракций фасциол (ЭСФАг и СФАг) в ИФА и РНГА

Для осуществления этой задачи от иммунизированных растворимыми ЭСФАГ и СФАГ антигенами кроликов получены иммунные сыворотки. Иммунореагенты (растворимые антигенные фракции Fasciola hepatica, антигенные эритроцитарные диагностикумы, иммунные сыворотки, ^в) испытаны при помощи ИФА и РНГА в гомологичной системе.

Активность антител и выделенных из сывороток крови специфических иммуноглобулинов составляет: ЭСФАг - от 1:3200 до 1:10240 для ИФА и от 1:640 до 1:2560 для РНГА, СФАг- от 1:1600 до 1:3200 для ИФА и от 1:320 до 1:1280 для РНГА. Чувствительность иммунодиагностических тестов при фасциолезе на основании экспериментальных исследований - 100%.

Экспериментальные исследования показывают, что полученные иммунореагенты для ИФА и РНГА обладают высокой активностью, а иммунодиагностические тесты являются достаточно чувствительными. Чувствительность ИФА несколько выше, чем РНГА.

Сопоставление результатов серологического (ИФА и РНГА), гельминтоовоскопического и послеубойного исследований крупного рогатого скота на фасциолез в хозяйствах северо-западного региона При помощи ИФА и РНГА антитела к БазсЫа ИераИса выявлены у 29,8 -37,3% и 32,7 - 35,0% животных соответственно, а методом последовательных промываний яйца фасциол обнаружены в среднем только у 25,6 - 28,0%.

Таким образом, гельминтоовоскопический метод диагностики является недостаточно эффективным и позволяет выявлять 68% зараженных фасциолами животных.

С целью объективного представления об эффективности серологического тестирования (ИФА и РНГА) крупного рогатого скота на фасциолез проведено сопоставление показателей прижизненной и послеубойной диагностики.

Исследования выполнены в течение 1998-2001 гг. в хозяйствах северо-западного региона и на основании их можно осуществлять анализ эпизоотической обстановки по фасциолезу.

Среди коров положительно реагируют на фасциолез в ИФА 42,8%, в РНГА - 37,7%. Яйца фасциол в фекалиях обнаружены у 33,8%, патологические изменения, свойственные для фасциолеза, - у 8,9%. Результаты аналогичных исследований телок 18-20 месяцев и молодняка 6-12 месяцев следующие: 32,2,29,7, 10,5,2,7% и 21,6,17,3, 7,4,0% соответственно.

При послеубойном исследовании дегельминтизированных животных в июле патологические изменения в печени, свойственные фасциолезу, установлены у 4,7%, а в сентябре - ноябре - 15-38%.

Таким образом, использование РНГА и ИФА позволяет выявлять животных - носителей не только половозрелых, но и ювенильных форм фасциол. Необходимо регламентировать сроки и кратность серологического исследования на фасциолез как одного из основных (в перспективе) мероприятий общего комплексного плана оздоровления поголовья.

Результаты апробации ИФА и РНГА при фасциолезе крупного рогатого скота в хозяйствах северо-западного региона Исследования проведены в АОСХ «Котельский» Кингисеппского района Ленинградской области. Из 685 обследованных животных выявлено 185 серопозитивных, что составляет 27,0%.

Результаты серологического исследования полностью подтверждаются данными послеубойной экспертизы. Последнее свидетельствует о достоверности и эффективности серологических методов прижизненной диагностики (РНГА и ИФА) фасциолеза крупного рогатого скота.

Наличие общих антигенных эпитопов у юных мигрирующих форм и половозрелых фасциол позволяет с помощью иммунологических тестов устанавливать диагноз, как в острый, так и в хронический периоды болезни.

Изучение динамики эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота в АОСХ «Котельский» осуществляли в пастбищный период и осенью после дегельминтизации. Сыворотки крови крупного рогатого скота

тестировали на фасциолез при помощи РНГА. Скрининг осуществляли 1 раз в неделю с выборочным (20%) гельминтоовоскопическим обследованием стада.

Результаты исследований позволили установить динамику эпизоотического процесса и уровни специфических антител при фасциолезе. В июле антитела к Fasciola hepatica выявлены у 12,8% животных при среднем уровне титров антител в РНГА 1:160; в августе - у 14,3%, 1:320-1:640; в сентябре - у 23,5%, 1:320-1:2560; в октябре - у 28,1%, 1:320-1:2560; в ноябре -у 7,3%, 1:160-1:640.

Полученные данные подтверждают преимущественно один пик инвазии в конце лета и осенью. Большая часть популяции моллюсков, инвазированных партенитами фасциол, погибает в зимний период, поэтому первый пик инвазии в июле-августе - неинтенсивный.

В последующем на пастбищах при циркуляции возбудителя фасциолеза от дефинитивного хозяина к промежуточному и обратно интенсивность эпизоотического процесса постепенно повышается и достигает максимума в октябре (основной пик инвазии).

В острый период болезни (июль-август-сентябрь) уровень антител к Fasciola hepatica достаточно высокий - 1:320-1:2560; хроническая форма характеризуется снижением продукции антител - 1:160-1:640. Последнее обусловлено менее выраженной сенсибилизацией тканей животных экскреторно-секреторными антигенами половозрелых фасциол, незначительным количеством тканевых и циркулирующих антигенов мигрирующих юных форм Fasciola hepatica, а также иммунных комплексов. Общий показатель серопозитивности по стаду животных снижается и коррелирует с низким уровнем титров антител к фасциолам.

Аллергическая диагностика фасциолеза крупного рогатого скота

Аллерген - фасциолин вводили при помощи безыгольного инъектора внутрикожно в дозе 0,2 мл в область средней трети шеи. Учет результатов аллергической пробы осуществляли через 40-60 минут. Утолщение кожной складки на 5 мм и более оценивали как положительный результат на фасциолез.

Одновременно с аллергическим исследованием у животных брали кровь из яремной вены с целью последующего серологического скрининга.

Всего исследовано 758 голов крупного рогатого скота, из них 520 коров старше 4-х лет и 238 телок 18-20 месяцев. Обследование проводили в зимний и весенний сезоны, а также в пастбищный период и осенью до и после дегельминтизации.

Мы установили корреляцию результатов аллергической внутрикожной пробы и серологического исследования (ИФА) на фасциолез. Как в острый, так и хронический периоды болезни наблюдается соответствие результатов аллергической пробы и серологических исследований.

Хроническая форма фасциолеза диагностируется двумя вышеуказанными тестами с меньшей информативностью. Это обусловлено снижением интенсивности сенсибилизации тканей животных антигенами фасциол,

в первую очередь, ювенильных мигрирующих форм. Как следствие, отмечается уменьшение уровня специфических антител с предшествующим изменением активности взаимодействия иммунокомпетентных клеток.

Согласно данным, наиболее высокий уровень корреляции результатов аллергического и серологического исследований на фасциолез зарегистрирован в июле - 14 и 21%, в августе - 27 и 35%, т.е. в острый период болезни. Максимальное соответствие показателей гельминтоовоскопии, аллергического и серологического исследований отмечено в весенние и осенне-зимние месяцы (март - 4,6 и 9%; ноябрь-январь - 24,30 и 47%), т.е. в хронический период.

Интенсивная активация макрофагов, гистаминопродуцирующих клеток и аллергические процессы в тканях животных, индуцированные действием гистамина и высокой концентрацией в крови и тканях иммуноглобулинов ]^Е, наблюдаются преимущественно при острой форме фасциолеза.

Полученные результаты предполагают использование аллергического метода диагностики для выявления острой формы фасциолеза. Хронический фасциолез следует диагностировать комплексно - на основании сероэпизоотологического (РНГА и ИФА), копроовоскопического и периодических контрольных послеубойных исследований.

Часть 3. Терапия при фасциолезе крупного рогатого скота

В настоящее время существует целый ряд антгельминтиков, которые используются при фасциолезе. В связи с этим нами была проведена оценка фасциолоцидной активности некоторых препаратов при фасциолезе крупного рогатого скота: сантела, тетраксихола, дисалара, клозальбена и альбена - супер.

Вся работа по определению антгельмгаггной эффективности препаратов проведена в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей.

Эффективность сантела

Сантел - лекарственная форма клозантела, выпускают в виде 10%-го раствора для парентерального применения крупному рогатому скоту и в форме 7,5%-го раствора для перорального применения.

Установили, что сантел в дозах 5 мг/кг при внутримышечном введении и 10 мг/кг перорально проявил высокую эффективность при фасциолезе крупного рогатого скота (92,0% и 98,0%, соответственно).

Эффективность клозальбена

Клозальбен - комплексный препарат, содержащий по 50 мг альбендазола и клозантела, в качестве наполнителя используются цеолиты.

Установили, что клозальбен в дозе 40 мг/кг массы животного (перорально) обладает высокой антгельминтной эффективностью при фасциолезе крупного рогатого скота (99,1%).

Эффективность тетраксихола

Изучение антгельмигтной активности тетраксихола при фасциолезе крупного рогатого скота позволило установить его высокую эффективность.

Все леченые тетраксихолом животные (доза 0,2 г/кг по ДВ при однократном индивидуальном применении с кормом) полностью освободились от фасциол, о чем свидетельствовало отсутствие яиц трематод в их фекалиях, при этом эффективность лечения составила 92,9 % .

Эффективность дисалара 10%

Мы также установили антгельминтную активность дисалара (10% раствор, подкожное введение) при дегельминтизации. Эффективность препарата учитывали по результатам исследований проб фекалий животных подопытной и контрольной групп до и через 25 дней после введения.

Зараженность животных до лечения, по данным копроовосокпии, варьировала от 22,0+1,2 до 24,2+0,8 яиц в 1 г фекалий. Через 30 дней после лечения эффективность дисалара составила 97,2%.

Испытания эффективности сантела, клозальбена, тетраксихола и дисалара при фасциолезе

В феврале - марте 2001 года мы провели испытания эффективности антгельминтных препаратов в ранее установленных нами терапевтических дозах при фасциолезе крупного рогатого скота.

Сантел в дозе 10 мг/кг, клозальбен в дозе 40 мг/кг и тетраксихол в дозе 0,2 г/кг перорально показали 98,9% антгельминтный эффект при фасциолезе крупного рогатого скота. От применения дисалара получили 95,4% эффект. После дачи базового препарата - политрема в терапевтической дозе - получено 82,9% снижение количества яиц фасциол.

Все препараты хорошо переносились животными, не оказывали побочного действия. Инвазированность коров в контроле до и в конце опыта существенно не изменилась, составив соответственно 22,4+1,2 и 29,2+1,3 экз.

Считаем, что сантел, клозальбен, тетраксихол и дисалар могут использоваться в качестве антгельминтиков при фасциолезе крупного рогатого скота.

Фармако-токсикологические свойства альбена - супер

Мы изучили новую форму антгельминтика альбена - альбен-супер при фасциолезе крупного рогатого скота.

Препарат выпускается фирмой «Агроветзащита» (Россия), его особенностью является использование микронизированой формы альбендазола и введение трематодоцида, которые позволили повысить эффективность препарата при трематодозах.

Мы изучили ряд фармако-токсикологических и противопаразитарных свойств препарата.

Острая токсичность Острую токсичность альбена-супер определяли на белых мышах. Среднесмертельная доза при пероральном введении составила 11185 мг/кг, что дает основании отнести препарат к 4 классу опасности (ГОСТ 12.01.00776). ЛДюо составило 18565 мг/кг, ЛДо - 2190 мг/кг.

Кумулятивные свойства альбена-супер Кумулятивные свойства альбена-супер определяли на белых крысах. Суммарная доза альбена-супер, вызвавшая 50% гибель крыс составила 72750,2 мг/кг. Коэффициент кумуляции составил 6,2, что позволяет отнести альбен-супер к 4 классу веществ - со слабо выраженной кумуляцией.

Субхроническая токсичность Опыты по изучению хронической токсичности проводили на белых крысах. Животным в течение 8 недель вводили альбен-супер в дозах 1/10 и 1/100 Признаков токсикоза и гибели животных, не наблюдали, что дает основание говорить об отсутствии у препарата в указанных дозах эффекта кумуляции по токсическому признаку.

Альбен-супер не влиял на прирост массы тела животных. Гематологические показатели крыс, получавших альбен-супер, не отличались от данных животных в контроле.

Гематологические и биохимические показатели крови крупного рогатого скота при введении альбена - супер в разных дозах Влияние альбена - супер на организм крупного рогатого скота изучали на коровах. Животным различных групп задали индивидуально перорально альбен-супер в дозах соответственно 5 и 15 мг/кг по ДВ, то есть в терапевтической и в 3 раза увеличенной дозах.

Полученные результаты свидетельствуют, что альбен-супер в дозах 5 и 15 мг/кг не оказывает отрицательного влияния на общее состояние крупного рогатого скота. Показатели клинического статуса, гематологические и биохимические показатели животных подопытных групп в течение всего периода наблюдений были в пределах физиологической нормы и существенно не отличались от показателей контрольной группы.

Таким образом, препарат в дозах 5 и 15 мг/кг по ДВ не оказывает отрицательного влияния на гематологические и биохимические показатели.

Эмбриотропное действие альбена - супер Выяснение возможного эмбриотропного (эмбриотоксического и тератогенного) действия альбена-супер проводили на беременных самках белых крыс. При введении альбена-супер в дозе 10 мг/кг по ДВ (в 2 раза увеличенная терапевтическая доза) установлены эмбриотоксический и тератогенный эффекты, которые в большей степени проявляются в период

органогенеза и плацентации, что присуще препаратам из группы бензимидозов, однако, они меньше выражены, чем у альбена.

Альбен-супер вводимый беременным крысам в дозе 5 мг/кг (терапевтическая доза) ежедневно в течение всего эмбриогенеза и органогенеза не вызывал нарушений в течении беременности, а также при дальнейшем исследовании внутренних органов. Следовательно, альбен-супер в терапевтической дозе не обладает эмбриотропным действием.

Иммунотоксические свойства альбена-супер Влияние альбена-супер на клеточное звено иммунитета изучали по реакции гиперчувствительности замедленного типа. Было установлено, что альбен-супер не действует на Т-клеточное звено иммунитета, т.к. ИС как в опытной, так и контрольной группах был почти одинаков.

Изучение влияния альбена-супер на показатели Т-клеточного иммунитета проводили также по аутологичным розеткообразующим клеткам. Снижение аутологичных розеткообразующих клеток в первые 20 дней опыта указывает на тенденцию в изменении функциональной активности Т-лимфоцитов после введения альбена-супер.

Оценку влияния альбена-супер на В-клеточное звено иммунной системы проводили по изучению антителообразующих клеток в селезенке белых мышей. Установили, что альбен-супер не угнетает трансформацию В-лимфоцитов в селезенке.

Определение гемагглютининов в сыворотке крови животных после введения альбена-супер проводили на белых мышах. Учитывая влияние альбена-супер на М- и G-иммуноглобулины можно судить об отсутствии иммунодепрессивного действия альбена-супер на организм.

Определение остаточных количеств альбендазола в организме крупного рогатого скота, обработанных альбеном -супер Остаточные количества альбендазола и его метаболитов (сульфоксида и сульфона) после введения альбена-супер изучали на 15 выбракованных коровах, обработанных альбеном-супер в максимальной терапевтической дозе по ДВ - 10 мг/кг однократно, перорально.

Через сутки после введения альбена-супер альбендазол в неизмененном виде не обнаруживали в органах и тканях крупного рогатого скота, за исключением следовых количеств его в печени и почках. Наиболее высокая концентрация сульфоксида и сульфона установлена нами в печени (4,90+0,92 и 2,20+0,20 мг/кг), почках (2,04+0,2 и 1,10+0,10 мг/кг) и легких (1,60±0,12 и 0,60±0,02 мг/кг).

Через 5 дней и в последующие сутки после введения альбена-супер альбендазол не идентифицировали ни в одном из органов или тканей крупного рогатого скота. Сульфоксид и сульфон обнаруживали только в следовых количествах - менее 0,03 мг/кг в сердце, мозге, селезенке, мышечной ткани и крови, а наиболее высокая концентрация их отмечена в печени (0,62+0,02

и 0,20+0,01 мг/кг), почках (1,06+0,02 и 0,22+0,02 мг/кг), легких (0,32+0,02 и 0,05 мг/кг) и жировой ткани (сульфоксид 0,12+0,02 мг/кг).

Через 14 дней после введения альбена-супер альбендазол и его метаболиты не обнаруживались в органах и тканях крупного рогатого скота.

В первые 12 часов после дачи препарата альбендазол обнаруживали в молоке в форме субстанции альбендазола и его метаболитов: сульфоксида и сульфона. Через 24 часа и в последующее время в молоке находили препарат только в форме метаболитов, причем большую часть составлял сульфоксид. Максимальная концентрация препарата в молоке коров после введения альбена-супер установлена в первые 24 часа. Затем концентрация метаболитов постепенно уменьшалась и на 4-е сутки снизилась до уровня 0,04 мкг/см3. На 5-й день метаболитов альбендазола в молоке коров не обнаруживали.

Таким образом, мясо дегельминтизированного альбеном-супер крупного рогатого скота рекомендуется использовать для питания через 5 суток после дачи препарата. Срок ожидания для использования молока в пищу человеку составляет 4 дня.

Определение антгельминтной эффективности альбена-супер при фасциолезе крупного рогатого скота

В первом опыте использовали 30 голов молодняка, зараженного на 92% фасциолами. Из животных сформировали 3 группы: телятам 1 группы ввели препарат однократно, перорально в дозе 20 мг/кг (5 мг альбена-супер по ДВ), животным 2 группы - 20 мг/кг (10 мг по ДВ), телята 3 группы препарат не получали и служили контролем. При учете результатов через 45 дней по данным копроскопии эффект составил 99,5% против фасциол при применении альбена-супер в дозе 10 мг/кг.

В следующем опыте использовали 60 коров, спонтанно инвазированных фасциолами (по данным копроскопии). Из животных сформировали 3 равные группы. Животным 1 группы однократно перорально с небольшим количеством корма задавали альбен - супер в дозе 7,5 мг/кг по ДВ, 2 группы - 5 мг/кг по ДВ. Животные 3 группы служили контролем. По данным копроскопии эффективность применения альбена-супер составила 99,7% в дозе 7,5 мг/кг и 98,4% в дозе 5 мг/кг по ДВ против половозрелых фасциол.

По данным гельминтологического вскрытия трех голов крупного рогатого скота (по 1 из каждой группы) установили отсутствие фасциол после дегельминтизации альбеном-супер в дозе 7,5 мг/кг по ДВ, после лечения препаратом в дозе 5 мг/кг нашли 2 фасциолы, а у нелеченного животного выделили 21 фасциолу, т.е. эффективность альбена-супер в дозе 7,5 мг/кг составила почти 100%, в дозе 5 мг/кг - 95,7%.

В следующем опыте испытали эффективность альбена-супер против молодых форм фасциол. Использовали 32 головы молодняка крупного рогатого скота, выпасавшегося летом на неблагополучном по фасциолезу пастбище. В октябре 10 животным задавали альбен-супер в дозе 7,5 мг/кг по ДВ, другим 10-5 мг/кг препарата по ДВ, 12 оставшихся голов крупного

рогатого скота служили контролем. До лечения животные на 98,8% были заражены стронгилятами желудочно-кишечного тракта.

Результаты дегельминтизации учитывали в конце декабря и установили у животных в контроле яйца фасциол (в 1 г фекалий в среднем 22,4±2,1), яйца нематодир (44,2±1,3), яйца стронгилят других видов желудочно-кишечного тракта (184,4+20,5). Копроовоскопические исследования показали, что молодняк 1 группы был свободным от яиц гельминтов всех видов, во 2 группе находили яйца фасциол в количестве 11,2+0,4 у 2 телят из 10 животных, яйца нематодир и стронгилят желудочно-кишечного тракта находили у всех животных в единичных количествах.

В четвертом опыте, проведенном в марте, сравнили эффективность альбена-супер с альбеном (старая форма) на 40 коровах, выпасавшихся на пастбище, неблагополучном по фасциолезу. Животных разделили на 3 группы. Животным 1 группы однократно, перорально задали альбен-супер в дозе 5 мг/кг по ДВ, 2 группы - перорально задали альбен в дозе 10 мг/кг по ДВ. В качестве контроля служили 20 нелеченных животных.

Результаты учитывали через 45 дней по данным копроскопии и получили 92,4% эффект при фасциолезе у животных первой группы. Животные второй группы на 64,5% освободились от фасциол (3 головы выделяли единичные яйца фасциол). Животные в контроле остались зараженными, содержание яиц фасциол 22,4+1,4 в среднем на голову.

Проведенные экспериментальные исследования на крупном рогатом скоте показали, что альбен-супер в дозе 5 мг/кг по ДВ проявляет высокий терапевтический эффект против фасциол и губительно действует на нематод.

Далее мы испытали эффективность альбена-супер в производственных условиях в Новгородской и Ленинградской областях. Всего было продегельминтизировано 812 голов крупного рогатого скота.

В Новгородской области под опытами находилось 615 голов крупного рогатого скота массой 350-400 кг на 97% зараженного фасциолами и на 82% стронгилятами желудочно-кишечного тракта по данным копроовоскопии. 585 головам крупного рогатого скота задавали альбен-супер (5 мг/кг по ДВ); 30 голов препарат не получали и служили контролем.

При учете результатов эффективность составила 92,2% против фасциол и стронгилят желудочно-кишечного тракта.

В Ленинградской области провели опыт по оценке терапевтической эффективности альбена-супер при фасциолезе на 197 головах крупного рогатого скота, выпасавшегося на пастбище, неблагополучном по фасциолезу и не дегельминтизированных в течение 3 лет.

Из животных сформировали 2 группы: 1 группа - 190 голов; 7 голов препарат не получали и служили контролем. По данным копроскопии животные на 68% были заражены фасциолами и на 80% стронгилятами желудочно-кишечного тракта. Животных 1 группы дегельминтизировали альбеном-супер однократно, перорально с небольшим количеством корма в дозе 5 мг/кг по ДВ (20 г/400 кг).

Результаты учитывали через 35 дней после лечения и получили 94,4% эффект у животных первой группы против фасциол. Контрольные животные оставались зараженными и продолжали выделять яйца фасциол.

Иммунокоррегирующая терапия при фасциолезе крупного рогатого скота

По сообщениям многих авторов (Р.С. Щульц, Г.И. Диков, 1964, 1967, Э.Х. Даугалиева и соавт., 1986-2000) комплексная терапия при гельминтозах более эффективна, чем только дегельминтизация химиопрепаратами. В связи с этим мы изучили схему лечения фасциолеза крупного рогатого скота, в которую включили антгельминтик альбен-супер и иммуномодулятор иммунопаразитан. Определение показателей естественной резистентности, иммунного статуса у крупного рогатого скота, спонтанно зараженных фасциолами до и после лечения, позволило оценить иммунобиологическую реактивность зараженных животных.

В опыт взяли 20 голов крупного рогатого скота и разделили их на 4 группы: 1 - незараженный контроль, 2 - зараженный контроль, 3 группу животных продегельминтизировали альбеном-супер, 4 группе после дегельминтизации вводили трижды, внутримышечно с интервалом

7 дней иммунопаразитан в дозах 0,8; 1,2 и 1,8 мл на голову. Исследования проводили в течение 90 дней.

Исследования показателей Т- и В-систем иммунитета животных 2 группы выявили отличия их от уровня здоровых животных. Т-Е-РОК-лимфоциты в крови были ниже контрольного значения на 29%, в брыжеечном лимфатическом узле на 25% в селезенке - почти в 4 раза. Т-хелперы в крови были ниже контрольных показателей на 15%, в брыжеечном лимфоузле -на 14%, в селезенке - на 27%.

Параллельно с угнетением Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов и В-ЕАС-лимфоцитов у больных животных отмечали активизацию Т-супрессоров.

8 крови и лимфоузлах их количество было выше, по сравнению с уровнем здоровых животных.

Таким образом, при развитии фасциолеза гельминты сначала угнетают Т-систему иммунитета, активизируя В-систему, с последующим угнетением и В-системы. Об этом свидетельствует морфологический анализ площадей структурных компонентов лимфоидных органов, в которых выявлены соответствующие отклонения.

В лимфатическом узле эти изменения проявляются в виде уменьшения площадей лимфоузелков со светлыми центрами и без светлых центров, мякотных тяжей и паракортикальной зоны; в селезенке - в виде уменьшения площадей лимфоузелков без учета площади периваскулярных лимфоидных муфт и самих периваскулярных лимфоидных муфт; в тимусе - в виде уменьшения площади коркового вещества органа.

Следовательно, фасциолы вызывают глубокие иммунодефициты, о чём свидетельствуют нарушения параметров естественной резистентности,

содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов; В-ЕАС-лимфоцитов в крови, лимфатических узлах, селезёнке, тимусе, деструктивные изменения в лимфоидных органах.

Эти иммунные перестройки усложняются активизацией супрессорных реакций. Исследование миелограммы костного мозга показало значительное угнетение выработки клеток миелоидного ряда (палочко- и сегментоядерных нейтрофилов) при интенсивном повышении зозинофилов и угнетении клеток эритроидного и лимфоидного ряда. Возникающие вторичные иммунодефициты требуют контроля дегельминтизационных мероприятий и применения иммунокоррегирующей терапии.

Дегельминтизация альбеном-супер (3 группа животных) восстанавливала нарушенный иммунный баланс до показателей 1 группы. Все исследованные нами параметры иммунологического равновесия организма (факторы естественной резистентности, Т-Е-РОК-лимфоциты, Т-хелперы и В-ЕАС-лимфоциты в крови, лимфатических узлах, селезенке, тимусе), уровня иммуноморфологических перестроек в Т- и В-зависимых зонах лимфоидных органов, гистохимической реактивности Т- и В-лимфоцитов, состояния миелограммы имели достоверное повышение, по сравнению с их уровнем у больных фасциолезом животных.

Дегельминтизация животных альбеном-супер на фоне иммуностимуляции иммунопаразитаном (4 группа животных) при фасциолезе способствует повышению у животных факторов естественной резистентности, активизации реакции Т- и В- лимфоцитов в крови и лимфоидных органах: лимфатических узлах, селезенке, тимусе, вызывает иммуноморфологические перестройки в Т- и В- зависимых зонах лимфоидных органов, активизирует гистохимические реакции в Т- и В- лимфоцитах, усиливает в костном мозге продукцию клеток миелоидного и эритроидного ряда и лимфоидных клеток, устраняет эозинофилию и лейкоцитоз, то есть способствуют созданию в организме хорошего иммунного баланса, повышению продуктивности и сохранности молодняка.

Таким образом, иммунокоррегирующая терапия, стимулируя в организме животного биологически активные компоненты неспецифической резистентности, способствует нормализации физиологических функций, уменьшает токсическое и аллергизирующее действие гельминтов, оказывает положительное влияние на иммунный статус, нормализуя его показатели.

ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Анализ литературных данных и материалы собственных исследований показывают, что эпизоотический процесс при фасциолезе зависит от источника возбудителя, который при биогельминтозах разделен на звенья: первое звено -организм окончательного хозяина (крупный рогатый скот), второе - организм

промежуточного хозяина (моллюска), механизма передачи и восприимчивого животного.

Интенсивность эпизоотического процесса при фасциолезе зависит от климатических, метеорологических и антропогенных факторов. Климатические условия северо-западного района России характеризуются ежегодным преобладанием пасмурных дней в летний период, частыми и продолжительными дождями. В северо-западном районе РФ зимой инвазированные личиночными стадиями фасциол моллюски, в большинстве случаев погибают.

Природно-климатические условия равнинной зоны оптимальны для реализации основных свойств паразитарной системы, ведущим составным элементом которой является Fasciola hepatica. B.B. Горохов (2000) началом эпизоотического процесса при фасциолезе считает поступление яиц трематод на пастбища. Интенсивность эпизоотического процесса определяется наличием водоема, количеством осадков в летний сезон, присутствием на пастбищах промежуточных и дефинитивных хозяев (A.M. Атаев, 1991).

Изучение плотности популяции моллюсков - малых прудовиков на территории пастбищ АОСХ «Котельский» Кингисеппского района Ленинградской области в различные месяцы весенне-летнего сезона позволило установить минимальные показатели в мае-июне (3-5 экз./м2), средние -в июле (3-14 экз/м2) и августе (4-11 экз/м2). Численность моллюсков варьировала в зависимости от обследуемых пастбищных участков. По берегам стариц и заводей плотность популяции моллюсков более высокая (5-14 экз/м2) по сравнению с таковыми во временных небольших водоемах (1-4 экз./м2).

Зараженность малых прудовиков партенитами Fasciola hepatica в различные месяцы пастбищного периода варьирует от 3,1% в июне до 4,2% в июле и 7,9 - 15% в августе. При культивировании 395 моллюсков церкарии фасциол обнаружены у 47 (11,9%); компрессорным методом установлена зараженность редиями и церкариями 111 из 743 экземпляров (14,9%).

Как показали результаты исследований, экстенсивность эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота максимальна в Выборгском (16,07%), Кингисеппском (19,46%), Кировском (16,15%) и Тихвинском (20,5%) районах Ленинградской области. В Новгородской области до 80% были заражены животные в Демянском и Любытинском районах. В Солецком и Старорусском районах экстенсивность инвазии составляла 45,4+1,2%.

Изменение экстенсивности эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота в различных районах северо-западного региона за последние годы характеризуется одновершинной кривой.

Возрастная динамика фасциолеза характеризуется постепенным увеличением экстенсивности инвазии и объясняется ненапряженным иммунитетом животных. Статистические данные анализа результатов гельминтоовоскопических исследований свидетельствуют о наиболее высокой зараженности фасциолами коров (33,8%); средние показатели ЭИ - у телок

18-20 месяцев (10,5%); молодняк до 12 месяцев инвазирован в невысокой степени (7,4%). Наблюдаемая возрастная динамика при фасциолезе, согласуется с результатами полученными Х.С. Абдуллаевым (1995), который в Ивановской области выявил 100 % инвазированность коров Fasciola hepatica.

Ретроспективный анализ данных по ВСЭ туш и органов крупного рогатого скота на областных мясокомбинатах северо-западного региона позволил подтвердить результаты исследований ученых по сезонной динамике фасциолеза в северо-западном районе Российской Федерации (В.Л. Шекотуров, 1986; А.В. Зубов, М.Ш. Акбаев, 2001). Особенностью эпизоотологии фасциолеза в вышеназванной зоне является постепенное увеличение экстенсивности инвазии в осенний сезон года. В хозяйствах северо-запада пик фасциолезной инвазии наблюдается в ноябре-декабре (17,5-21%). В январе-мае и в июне-июле наблюдается снижение экстенсивности инвазии (1-2%).

Второй движущей силой эпизоотического процесса при фасциолезе служит механизм передачи возбудителя. Факторами передачи являются элементы «абиотической среды» - почва, растительность, вода, корма. Но болезнь развивается только тогда, когда гельминт попадает в восприимчивое животное. От состояния иммунобиологической реактивности животного часто зависит течение, распространение и исход заболевания.

Проведенные исследования по изучению влияния фасциол на организм животных показали также многообразие взаимоотношений между паразитом и хозяином. В связи с этим изучение общей резистентности организма и иммунологического статуса при гельминтозах дает возможность проводить не только этиотропную, но и патогенетическую терапию.

Гельминты в большинстве своем являются иммунодепрессантами. В литературе имеется ряд работ, подтверждающих способность гельминтов подавлять иммунные реакции хозяина гельминтозах (Е.С. Лейкина, 1981; А.С. Бессонов, РА Пенькова, 1984; И.А. Гаджиева, 1986; К.С. Балаян, 1987; И.С. Каныгина, 1989; Л.И. Глухова, 1992; Ю.А Ватников, 1993; К.Г. Курочкина 1991,1993,1996; Н. Khalil et al., 1981; D. Allan et al., 1981; V. Pashuk et al., 1982; Takai 1984; I.M. Roitt, 1991; С Jang et al., 1993; D. Camus et al., 1995).

При фасциолезе в начальный период заболевания развиваются нарушения иммунного баланса, а далее развиваются вторичные иммунодефициты.

Данное утверждение подтверждается результатами морфологических и гельминтологических исследований тканей и органов убойного скота. Вследствие этого у больных животных отмечается угнетение показателей естественной резистентности. Бактерицидная активность сыворотки крови к концу опытов были ниже контроля на 35,9%, лизоцимная - на 22,9%. Содержание эозинофилов превышало контрольный уровень в крови на 34,2%, в костном мозге - на 27,59%. Уровень эритроцитов и гемоглобина крови были ниже, чем в контроле соответственно на 3,8 млн/мкл, и на 6,9 г/%.

Исследования показателей Т- и В-систем иммунитета выявили глубокие отличия их от уровня здоровых животных. При развитии фасциолеза наблюдается последовательность включения и непосредственное участие

в иммунном процессе клеточной и всех факторов гуморальной защиты, что согласуется с литературными данными о развитии иммунных реакций при гельминтозах (Э.Х. Даугалиева, 1991; Р.Т. Маннапова, 1999).

При этом отмечается далеко неодназначная активность «феномена» Т- и В- систем иммунитета, участвующих в защитных реакциях организма. Являясь первичным чужеродным агентом, гельминты в большинстве своем угнетают Т-систему иммунитета, активизируя В-систему, с последующим угнетением и В-системы. Об этом свидетельствует морфологический анализ площадей структурных компонентов лимфоидных органов, в которых выявлены соответствующие отклонения. Они касаются прежде всего структур, имеющих в организме отношение к продукции Т- и В-лимфоцитов. В лимфатическом узле эти изменения проявляются в виде уменьшения площадей лимфоузелков со светлыми центрами и без светлых центров, мякотных тяжей и паракортикальной зоны; в селезенке - в виде уменьшения площадей лимфоузелков без учета площади периваскулярных лимфоидных муфт и самих периваскулярных лимфоидных муфт; в тимусе - в виде уменьшения площади коркового вещества органа.

Фасциолы угнетая Т- систему, начинают воздействие на всю иммунную систему, вначале активизируя, а затем подавляя и В-систему иммунитета. Фасциолез вызывает глубокие иммунодефициты, о чём свидетельствуют нарушения параметров естественной резистентности организма, содержания Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, В-ЕАС-лимфоцитов в крови, лимфатических узлах, селезёнке, тимусе, деструктивные изменения в лимфоидных органах. Эти иммунные патологии усложняются активизацией супрессорных реакций в организме. К окончанию эксперимента Т-супрессоры были выше контрольных показателей крови в 2,9 раза, в брыжеечном лимфатическом узле — в 2,69 раза.

Проанализировав результаты исследования, мы можем выделить ряд закономерностей развития иммунного ответа при фасциолезе, в осуществлении которых первостепенную роль играют регулярные Т-клеточные механизмы:

1. активация Т- и В-лимфоцитов в течение первой недели инвазии;

2. супрессия иммунокомпетентных клеток в течение первых двух недель после заражения, обусловленная предшествующим усилением Т-супрессорной активности;

3. вторичная активация Т- и В-лимфоцитов, повышение уровня специфических антител вследствие нарастания хелперной активности Т-системы;

4. вторичная индукция Т-супрессоров, приводящая к затуханию иммунного ответа.

Таким образом, согласно данным, полученным нами в эксперименте, в период миграции паразита и развития болезни при фасциолезе мы установили три фазы иммунного ответа: первая фаза приходится на период миграции паразитов в организме. Этот период мы квалифицируем как сдвиг «иммунного равновесия» в сторону усиления супрессорной активности и начало развития иммунопатологии. Вторая фаза приходится на период созревания паразита

в организме хозяина. Третья фаза развития иммунного ответа (усиление супрессорной активности Т-лимфоцитов) отражается на развитии гуморального иммунного ответа, когда происходит снижение количества В-лимфоцитов в крови животных и, как следствие, снижение антителопродукции.

Для развития иммунного ответа необходимо участие и взаимодействие не только антигенспецифических хелперных Т-клеток и В-клеток, но и иммунологически неспецифических макрофагов, играющих роль как в клеточном, так и в гуморальном иммунном ответе (Р.В. Петров, P.M. Хаитов, Р.И. Атауллаханов, 1983; I. M. Roit, 1991).

Поскольку в естественных условиях происходит перманентное заражение сельскохозяйственных животных на пастбище в течение довольно длительного времени (май-сентябрь), то можно предположить, что возникающие вторичные иммунодефициты требуют применения иммунокоррегирующей терапии.

Дегельминтизация альбеном-супер на фоне иммуностимуляции восстанавливали нарушенный иммунодефицит организма. Лизоцимная активность сыворотки крови дегельминтизированных животных к 90 дню была выше её уровня у больных животных- в 4,06 раза, бактерицидная - в 3,72 раза. Гематологические показатели приблизились к уровню контрольных здоровых животных, что свидетельствует о благоприятном исходе инвазии.

Т-лимфоциты в крови достигли максимума, превысив показатель контрольных животных - в 2,64 раза. Т-хелперы интенсивно повышались и достигли на 30 день показателей контроля. Уровень В-лимфоцитов достоверно повышался, реакция супрессоров в крови приблизилась к контрольному уровню. В брыжеечном лимфаузле животных, дегельминтизированных на фоне стимуляции, отмечали выраженное повышение Т-Е-РОК-лимфоцитов, Т-хелперов, В-ЕАС-лимфоцитов, которые к 60 дню были выше уровня больных животных соответственно в 3,81; 3,29 и в 2,88 раза. Т-супрессоры соответствовали контролю. Повышение количества Т-лимфоцитов и активность В-клеток следует считать благоприятным прогнозом.

Содержание относительного и абсолютного числа Т- и В- лимфоцитов в селезенке животных, которых дегельминтизировали на фоне иммуностимуляции, приблизились к контрольным показателям. Максимальную реакцию Т-лимфоцитов в тимусе животных данной группы регистрировали на 30 день. Содержание Т-лимфоцитов в тимусе было повышенно до конца исследований.

В лимфоидных органах развивались позитивные

иммуноморфологические реакции. Они выражались в виде расширения в них Т- и В-зависимых зон. Эти изменения в структурах лимфоидных органов развивались уже на ранних стадиях дегельминтизации и иммуностимуляции, постепенно и интенсивно нарастали, были продолжительным.

В селезенке животных данной группы к 60 дню значение площадей периваскулярных муфт превысило данные животных 2 группы в 2,58 раза, лимфоузелков без светлых центров в 3,73 раза. В тимусе максимальный

уровень площади коркового вещества превысил уровень больных животных в 2,06 раза и до конца опытов оставался на высоком физиологическом уровне.

Исходя из принятых современных научных теорий о роли тимуса в иммунном ответе (Р.В. Петров, 1981, 1983; В.А. Труфакин, 1984; З.Н. Кемилева, 1984) расширение коркового вещества тимуса является результатом активизации его иммунологических функций, направленных на дифференцировку лимфоцитов, индуцирование иммунокомпетентности, усиление контроля иммунологических функций других лимфоидных органов, способность иммуноцитов различать собственные и чужеродные антигены. Тимус непосредственно усиливая феномены клеточного иммунитета, косвенно взаимодействуя с другими системами, участвует в процессе антителообразования.

Иммунно-морфологические перестройки в лимфоидных органах касаются структур, имеющих непосредственное отношение к продукции Т- и В-лимфоцитов и свидетельствуют об иммунологических реациях в организме, направленных на стабилизацию клеточного и гуморального иммунитета.

В центральном органе иммуногенеза — костном мозге дегельминтизированных и имммуностимулированных животных содержание клеток миелоидного ряда повышалось на 23,2%. Процент эозинофилов к концу исследований понизился по сравнению с параметрами больных животных - в 26,28%, клетки эритроидного ряда увеличивались на 15,5%. Лимфоидные клетки приблизились к контролю, составив 5,56%.

Таким образом, данные показывают, что иммунная реакция организма является взаимосвязанной и охватывает все иммунные системы и органы, включая и органы иммунопоэза.

Согласно нашим данным, дегельминтизация животных альбеном-супер на фоне иммуностимуляции при фасциолезе крупного рогатого скота способствует повышению у животных факторов естественной резистентности, активизации реакций Т- и В- лимфоцитов в крови и лимфоидных органах: лимфатических узлах, селезенке, тимусе, вызывает иммуноморфологические перестройки в Т- и В- зависимых зонах лимфоидных органов, стимулирует гистохимические реакции в Т- и В- лимфоцитах лимфоидных органов, усиливает в костном мозге продукцию клеток миелоидного и эритроидного ряда и лимфоидных клеток, устраняет эозинофилию и лейкоцитоз, восстанавливает уровень эритроцитов и гемоглобина и способствуют созданию в организме хорошего иммунного баланса, повышению продуктивности и сохранности молодняка.

В последние годы резко возрос интерес к иммуностимулирующей терапии. Это вполне понятно, так как при большинстве заболеваний течение инвазионного или инфекционного процесса осложняется, а трудности терапии усугубляются, поскольку развиваются вторичные иммунодефициты.

Вышеназванные обстоятельства подтверждают потенциальную возможность предотвращения распространения фасциолеза. Несмотря на дегельминтизации крупного рогатого скота, тенденция высокой плотности

популяции половозрелых фасциол сохраняется. Важным является контроль клинического состояния, гематологического, биохимического и иммунологического статуса зараженных фасциолами животных.

При хроническом фасциолезе большинство гематологических показателей - в пределах нормативных. Исключением является выраженный лейкоцитоз (эозинофилия) и незначительный лимфоцитоз.

Анализ полученных данных свидетельствует преимущественно о компенсаторной фазе патологического процесса при острой форме фасциолеза и некоторой декомпенсации в хронический период. Патологические изменения в печени обуславливают увеличение уровня Ас АТ на 30-50%, что свидетельствует о разрушении гепатоцитов. В целом, при невысоких показателях интенсивности инвазии белковообразовательная

и дезинтоксикационная функции печени не нарушены.

Анализ работ по оздоровлению животных от основных гельминтозов в различных зонах страны показывает, что подходы к принципам и методам оздоровительных мероприятий постоянно совершенствуются. Они состоят из комплекса общепрофилактических, специальных и лечебных мероприятий (В.И. Колесников, 1995).

Изучив эпизоотический процесс при фасциолезе крупного рогатого скота в северо-западном регионе, мы продолжили свою работу по разработке противоэпизоотических мероприятий, включив следующие разделы: прижизненная диагностика и терапия при фасциолезе крупного рогатого скота

Одним из направлений совершенствования диагностики фасциолеза животных является разработка и апробация эффективных, достоверных иммунологических тестов, аллергической внутрикожной пробы.

При испытании экскреторно-секреторных и соматических антигенов Ра8сю1а Иераиса установлено, что наиболее активными и специфичными являются первые. Соматические антигены достаточно специфичны, но показывают меньшую активность с положительными сыворотками крови коров, зараженных фасциолами.

Сопоставление серологического, гельминтоовоскопического

и послеубойного исследований показало следующие результаты: при помощи ИФА и РНГА антитела к Р.Иерайса выявлены у 37,3% и 32,7% животных соответственно, а методом последовательных промываний яйца фасциол -в среднем у 25,6%. Таким образом, гельминтоовоскопический метод диагностики является недостаточно эффективным и позволяет выявлять 68% зараженных фасциолами животных.

Среди коров положительно реагируют на фасциолез в ИФА 42,8%, в РНГА - 37,7%. Яйца Р. Иераиса обнаружены в фекалиях у 33,8%, патизменения, свойственные для фасциолеза, - у 8,9% животных. Результаты аналогичных исследований телок и молодняка 6-12 месяцев следующие (соответственно): 32,2%, 29,7%, 10,5%, 2,7% и 21,6%, 17,3%, 7,4%, 0%.

У больных животных в ноябре-январе помимо половозрелых фасциол могут паразитировать ювенильные формы, на которые большинство

антгельминтных препаратов губительно не воздействуют. Неполовозрелые фасциолы могут находиться на разных стадиях развития (несколько реинвазий в конце лета и осенью), что затрудняет осуществление рациональных оздоровительных мероприятий.

Использование ИФА и РНГА позволяет выявлять животных - носителей не только половозрелых, но и ювенильных форм фасциол, мигрирующих в паренхиме печени. Необходимо регламентировать сроки и кратность серологического исследования на фасциолез как одного из основных (в перспективе) мероприятий комплексного плана оздоровления поголовья.

С целью определения диагностической ценности ИФА и РНГА в условиях северо-западного региона проведена широкая апробация. Установлена высокая информативность ИФА и РНГА при фасциолезе крупного рогатого скота. Результаты серологического исследования в большинстве случаев подтверждены данными послеубойной диагностики.

Наличие общих антигенных эпитопов у юных мигрирующих форм и половозрелых фасциол позволяет с помощью иммунологического теста устанавливать диагноз как в острый, так и в хронический периоды болезни.

Разработанные иммунореагенты можно с высокой эффективностью использовать для осуществления эпизоотологического мониторинга в популяциях спонтанно зараженных животных и определения сроков их дегельминтизации.

Изучение динамики эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота на примере АСХО «Котельский» Кингисеппского района Ленинградской области позволило установить следующие результаты. В июле антитела к ГазсЫа Иераиса выявлены у 12,8% животных при среднем уровне титров антител в РНГА 1:160; в августе — 14,3%, 1:320-1:640; в сентябре -23,5%, 1:320-1:2560; в октябре - 28,1%, 1:320-1:2560; в ноябре - 7,3%, 1:1601:640.

На пастбищах при циркуляции возбудителя фасциолеза от дефинитивного хозяина к промежуточному и обратно интенсивность эпизоотического процесса постепенно повышается (август-сентябрь) и достигает максимума в октябре (основной пик инвазии).

В острый период болезни (июль-август-сентябрь) уровень антител к Ра8сю1а Ьераиса достаточно высокий - 1:320-1:2560, 1:800-1:3200; хроническая форма характеризуется снижением продукции антител - 1:1601:640, 1:400-1:1600. Наблюдается менее выраженная сенсибилизация тканей животных экскреторно-секреторными антигенами половозрелых фасциол, незначительным количеством тканевых и циркулирующих антигенов мигрирующих ювенильных форм фасциол.

Уменьшение активности макрофагов приводит к понижению стимулирования факторов клеточного и гуморального иммунитета, плазматические клетки в меньшей степени вырабатывают антитела против Газсю1а Иераиса. Общий показатель серопозитивности по стаду животных снижается и коррелирует с низк

Для определения возможности использования для диагностики фасциолеза крупного рогатого скота аллергической внутрикожной пробы испытания диагностического препарата проведены на 758 животных в неблагополучных хозяйствах региона.

На основании полученных данных можно констатировать, что в острый период болезни наблюдается соответствие результатов аллергической пробы и серологических исследований. Хроническая форма фасциолеза диагностируется данными тестами с меньшей информативностью. В целом, это обусловлено снижением интенсивности сенсибилизации тканей антигенами фасциол и, в первую очередь, ювенильных мигрирующих форм.

Полученные результаты предполагают использование аллергического метода диагностики для выявления острой формы фасциолеза. Хронический фасциолез следует диагностировать комплексно - на основании серологического (ИФА и РНГА), копроовоскопического и периодических контрольных послеубойных исследований.

Сроки обработок животных против фасциолеза, а также регламентированный (по кратности и т.п.) контроль эффективности дегельминтизации следует осуществлять при помощи серологических тестов.

Следующий раздел противоэпизоотических мероприятий при фасциолезе - терапия. В последнее время на Российский рынок поступило большое количество различных антгельминтиков, рекомендованных при фасциолезе жвачных животных. Мы провели оценку антгельминтной активности ряда препаратов: сантел, тетраксихол, дисалар, клозальбен, уделив особое внимание изучению фармако-токсикологической характеристике альбена-супер.

Исследования показали, что сантел, клозальбен, тетраксихол и дисалар могут использоваться в качестве антгельминтиков при фасциолезе. Данные соединения являются высокоэффективными препаратами, действующими против половозрелых фасциол.

Мы изучили новую форму антгельминтного препарата альбен - альбен-супер при фасциолезе крупного рогатого скота. Препарат содержит микронизированую форму альбендазола и трематодоцид, которые позволили повысить эффективность препарата при трематодозах животных.

Т.П. Веселова (1973) предложила схему изучения фармакологических и токсикологических свойств новых антгельминтиков, которая включает: изучение параметров токсичности, кумуляции, эмбиотоксических и тератогенных свойств и остаточных количеств препарата.

Острую токсичность альбена-супер определяли на белых мышах. Среднесмертельная доза при пероралъном введении составила 11185 мг/кг. ЛДюо составила 18565 мг/кг, ЛДо - 2190 мг/кг. Кумулятивные свойства альбена-супер определяли на белых крысах. Суммарная доза альбена-супер, вызвавшая 50% гибель крыс составила 72750,2 мг/кг. Коэффициент кумуляции -6,2.

При изучении хронической токсичности на белых крысах у лабораторных животных эффект кумуляции по.токсическому признаку не установлен.

Влияние альбена-супер на организм крупного рогатого скота изучали на коровах. Животным различных групп задали индивидуально перорально альбен-супер в дозах 5 и 15 мг/кг по ДВ, то есть в терапевтической и в 3 раза увеличенной дозах. Препарат в изучаемых дозах не оказывает отрицательного влияния на организм коров.

Изучение эмбриотропного (эмбриотоксическое и тератогенное) действия альбена-супер проводили на беременных самках белых крыс. При введении альбена-супер в дозе 10 мг/кг по ДВ (в 2 раза увеличенная терапевтическая доза) установлены эмбриотоксический и тератогенный эффекты. Альбен-супер, вводимый беременным крысам в дозе 5 мг/кг (терапевтическая доза), ежедневно на протяжении всего эмбриогенеза и органогенеза не показал нарушений в течение беременности, а также при дальнейшем исследовании внутренних органов. Следовательно, альбен-супер в терапевтической дозе не обладает эмбриотоксическими и тератогенными свойствами для крыс.

Изучение иммунотоксических свойств альбена-супер позволило установить, что препарат в терапевтической дозе не вызывает иммуносупрессии Т- и В- клеточного званьев иммунитета.

Мы определили остаточные количества альбендазола и его основных метаболитов (сульфоксида и сульфона) в организме крупного рогатого скота, обработанных альбеном-супер в максимальной терапевтической дозе по ДВ -10 мг/кг однократно, перорально. Установили, что мясо дегельминтизированного альбеном-супер крупного рогатого скота рекомендуется использовать для питания через 5 суток после дачи препарата. Срок ожидания для использования молока в пищу человеку составляет 4 дня.

Таким образом, изучение токсических свойств альбена - супер позволило отнести данный препарат согласно ГОСТ 12.1.007-76 к 4 классу опасности.

Мы провели ряд опытов по определению антгельминтной эффективности препарата. Экспериментальные исследования показали, что альбен-супер в дозе 5 мг/кг по ДВ проявляет высокий терапевтический эффект против фасциол и губительно действует как на половозрелые, так и на юные формы фасциол.

Мы испытали эффективность альбена-супер в производственных условиях северо-западного региона. В Новгородской области под опытами находилось 615 голов крупного рогатого скота на 98,8% зараженного фасциолами и на 82% стронгилятами желудочно-кишечного тракта по данным копроовоскопии. При учете результатов получили 92,2% эффект против фасциол и стронгилят желудочно-кишечного тракта.

В Ленинградской области провели опыт по оценке терапевтической эффективности альбена-супер при фасциолезе на 197 головах крупного рогатого скота. По данным копроскогши животные на 68% были заражены фасциолами и на 80% стронгилятами желудочно-кишечного тракта. Животных дегельминтизировали перорально альбеном-супер однократно с небольшим количеством корма в дозе 5 мг/кг по ДВ. После лечения получили 94,4% эффект против фасциол.

Таким образом, проведенный анализ отечественной и зарубежной литературы, выполненные экспериментальные и лабораторные исследования показывают высокую актуальность изучения эпизоотологии фасциолеза, разработки иммунореагентов и диагностикумов для проведения сероэпизоотологического скрининга, а также методов терапии с применением иммуностимуляторов и антгельминтиков с высокой эффективностью.

ВЫВОДЫ

1. В северо - западном регионе России эпизоотический процесс при фасциолезе поддерживается постоянно, так как механизм передачи возбудителя восприимчивым животным всегда имеет место. Наиболее интенсивное развитие зарегистрировано в период с мая по октябрь.

2. На основании ветеринарной отчетности фасциолез у крупного рогатого скота зарегистрирован во всех районах северо-западного региона. Максимальные показатели экстенсивности инвазии установлены в Выборгском (16,0%), Кировском (16,1%), Кингисеппском (19,4%), и Тихвинском (20,5%) районах Ленинградской области, в Демянском и Любытинском (80,0%), Солецком и Старорусском (45,4%) районах Новгородской области.

3. Ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по фасциолезу крупного рогатого скота в районах Ленинградской и Новгородской областей за 1992-2002 годы позволил установить одновершинную кривую эпизоотического процесса с пиком в декабре-январе 2000-2001 г.г. (средние показатели ЭИ в 2000 г. - 19,4%, в 2001 г. - 31,6%).

4. Возрастная динамика при фасциолезе крупного рогатого скота характеризуется постепенным возрастанием зараженности: молодняк до 12 месяцев - 7,4%, телки 18—20 месяцев - 10,5%, коровы - 33,8%. Средние показатели интенсивности инвазии у животных различных половозрастных групп: коровы - 60, нетели и телки - 30 - 35, молодняк 10 - 12 месяцев -1-2. Сезонная динамика эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота такова: максимальные показатели экстенсивности инвазии (17,5 — 21,1%) - в октябре-ноябре-декабре, низкие ( 1,3 - 1,9% и 1,4 - 1,6% ) -зимой и весной, средние - в августе и сентябре (5,2 - 7,8%).

5. Интенсивность эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота более высокая в хозяйствах, пастбища которых расположены вблизи стариц, заводей, небольших водоемов с плотностью популяций моллюсков - лимнеид 5-14 экз/м2. Зараженность их партенитами составляет: июнь-3,1%, июль -4,2%, август- 15%.

6. Иммунный ответ на антигены фасциол характеризуется многообразием проявлений, обусловленных взаимодействием Т- и В- систем в кооперации с макрофагами. У крупного рогатого скота первичный иммунный ответ на фасциолезную инвазию имеет одинаковое течение и выражен в изменении показателей специфической и неспецифической резистентности хозяина.

Это проявляется в снижении пролиферативной и функциональной активности Т-лимфоцитов за счет увеличения Т-супрессоров и уменьшения Т-хелперов. Отмечено сохранение функциональной активности В-лимфоцитов, что выражается повышением концентрации специфических антител во все сроки исследования.

7. Для диагностики фасциолеза крупного рогатого скота установлена возможность применения иммуноферментного анализа (ИФА) и реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с экскреторно-секреторными (ЭСФАг) и соматическими (СФАг) антигенами Ра8сю1а Иераиса.

8. Аллергический метод диагностики фасциолеза крупного рогатого скота менее информативен, чем ИФА и РНГА и может использоваться как дополнительный для контроля эффективности дегельминтизации при острой форме.

9. Сантел в дозе 5 мг/кг по ДВ внутримышечно, клозальбен в дозе 40 мг/кг по ДВ перорально, тетраксихол в дозе 0,2 г/кг по ДВ перорально, дисалар 10% при подкожном введении проявили при фасциолезе крупного рогатого скота эффективность от 92 до 98,8%.

10. Альбен-супер - высокоэффективный антгельминтный препарат, действующий на половозрелых и неполовозрелых трематод, по степени токсичности относится к 4 классу опасности, не обладает эмбриотропным действием и аллергизирующими свойствами, выводится из организма в течение первых пяти дней.

11. Иммунокоррегирующая комплексная терапия (антгельминтик альбен-супер + иммуномодулятор иммунопаразитан), стимулируя в организме биологически активные компоненты неспецифической резистентности, способствует нормализации физиологических функций, уменьшает токсическое и аллергическое влияние гельминтов, оказывает положительное влияние на иммунный статус, нормализуя его показатели, обеспечивает 100% эффективность против фасциол и профилактирует новое заражение путем резкого снижения интенсивности инвазии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. После широкой апробации в хозяйствах Российской Федерации и утверждения нормативно - технической документации на диагностические наборы, серологические методы диагностики фасциолеза -ИФА и РНГА - рекомендуется использовать для сероэпизоотологического мониторинга.

2. Серологические исследования необходимо проводить в конце пастбищного периода (октябрь), затем после дегельминтизации (январь -апрель). В конце лета и осенью рекомендуется дегельминтизировать только положительно реагирующих в ИФА или РНГА животных. Контроль эффективности дегельминтизации следует осуществлять через 45 и 60 дней

комплексно с использованием серологического и аллергического методов диагностики. Первично положительно реагирующих в ИФА и РИГА животных обрабатывают антгельминтными препаратами, эффективными против ювенильных форм фасциол (альбен -супер). Вторично положительно реагирующих (через вышеуказанные сроки) необходимо дегельминтизировать повторно, используя антгельминтные препараты против половозрелых фасциол (сантел, дислар, тетраксихол, клозантел и др).

3. С целью осуществления достоверного эпизоотологического мониторинга острую форму фасциолеза рекомендуется диагностировать комплексно - на основании серологического (ИФА, РИГА) и аллергического исследований.

4. Для предотвращения клинического проявления фасциолеза крупного рогатого скота, передачи инвазии и дальнейшего распространения целесообразно применять иммунокоррегирующую терапию.

5. Научные разработки вошли в следующие нормативные документы:

«Наставление по применению препарата альбен для дегельминтизации сельскохозяйственных животных, пушных зверей и кур» (утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 27.03.2002 №13-304/0385).

- Методическое пособие «Прижизненная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2002 г).

- Методическое пособие «Посмертная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2003 г).

- Методические рекомендации «Современные методы диагностики фасциолеза крупного рогатого скота» (утверждены северо-западным научно-методическим центром РАСХН, 2004 г).

Заявление о выдаче патента Российской Федерации на изобретение «Способ диагностики фасциолеза крупного рогатого скота». Регистрационный номер 2004109943 от 7 апреля 2004 г.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

1.Онуфриенко М.Э. Возможности прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота// Мат-лы докл. межд. науч. конф., посвящ. 125 - летаю академии, КГАВМ им.НЭ.Баумана - Казань, 1998, с.74-75. 2.Онуфриенко М.Э. Динамика показателей естественной резистентности организма крови больных фасциолезом при дегельминтизации// Мат-лы Ш межд. конф. «Актуальные проблемы ветеринарной медицины на Северном Кавказе» - Персиановский, 2000, с.89-90.

З.Шустрова М.В., Онуфриенко М.Э. Иммунный статус организма при фасциолезе крупного рогатого скота// Сб. науч. трудов «Проблемы энтомологии и арахнологии» -Екатеринбург, 2001, с. 167-168. 4.Онуфриенко М.Э. Аллергическая диагностика и сероэпизоотологический

мониторинг при фасциолезе крупного рогатого скота// РАСХН, мат-лы 4-ой межд. науч-практ. конф. «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и вет.-сан. контроля с.-х. продукции» - МГУПБ - М, 2002, с.200-202. 5.Онуфриенко М.Э. Фагоцитарная активность лейкоцитов и ее коррекция при фасциолезе крупного рогатого скота// «Иммунологические, технологические, экономические факторы повышения производства продукции сельского хозяйства» - ВГНКИ - М.-Уфа, 2002, с. 237-239.

б.Онуфриенко М.Э. Возрастная и сезонная динамика фасциолеза крупного рогатого скота в хозяйствах Ленинградской области// М., Ветеринария, 2002, №12, с. 28-31.

7.Новиков В.П., Шустрова М.В., Пашкин П.И., Воронов А.Н., Онуфриенко М.Э., Кольцов И.В. Прижизненная диагностика гельминтозов животных// Методич. пособие - СПб, 2002,60 с.

8.Онуфриенко М.Э. Иммунный статус и естественная резистентность крупного рогатого скота, зараженного фасциолезом, на фоне введения альбена и дисалара// Ветеринарная практика - СПб, 2002, №2 (17), с. 17-19. 9.Онуфриенко М.Э. Переносимость альбена крупным рогатым скотом// Мат-лы науч. конф. проф.-преп. состава, науч. сотр. и аспир. СП6ТАВМ - СПб, 2003, с.78-79.

Ю.Онуфриенко М.Э., Новак М.Д. Эпизоотология фасциолеза крупного рогатого скота в Костромской области// РАСХН, Труды ВИГИС - М., 2003,

в.39, с. 174-187.

11.Онуфриенко М.Э., Енгашев СВ., Досжанова Г.Б. Шеронов С.Н., Арисов М.В. Производственные и комиссионные испытания альбена-П при фасциоллезе и парафистомозе крупного рогатого скота// РАСХН, мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС - М, 2003, с.306-307.

12.Онуфриенко М.Э. Диагностика фасциолеза крупного рогатого скота// М., Ветеринария, 2003, №3, с.30-34.

13.Онуфриенко М.Э. Динамика клеток костного мозга и их коррекция

при фасциолезе крупного рогатого скота// Мат-лы XI Моск. межд. вет.

конгресса- М., 2003, с.256-257.

14.Онуфренко М.Э. Изучение природных факторов при фасциолезе крупного рогатого скота// Мат-лы научн. конф. «Концепции, практика и перспективы современного земледелия», РУДЫ - М., 2003, с. 144-145. 15.Онуфриенко М.Э. Гематологические и биохимические показатели крови крыс и крупного рогатого скота на фоне введения альбена// Мат-лы Х1У межд. межвузов, науч-практ. конф. "Новые фармакологические средства в ветеринарии" - СПб, 2003, с.76-77.

1 б.Онуфриенко М.Э. Фасциолез крупного рогатого скота в северо - западном регионе России (эпизоотология, сероэпизоотологический мониторинг, аллергическая дианостика, иммунитет и иммунопрофилактика)// Монография -СПб, 2003,162 с.

П.Онуфриенко М.Э. Иммунный статус и пути его коррекции при фасциолезе

крупного рогатого скота// Мат-лы докл. межд. конф. и Ш съезда паразитология. об-ва РАН "Проблемы современной паразитологии" - СПб-Петрозаводск, 2003, с.42-44.

18.Онуфриенко М.Э., Енгашев СВ., Шустрова М.В., Кольцов И.В. Опыт борьбы с трематодозами крупного рогатого скота// Сб. науч. трудов "Актуальные проблемы ветеринарной медицины", СПГАВМ - СПб, 2003, с.79-81.

19.Новиков В.П., Шустрова М.В., Пашкин П.И., Воронов А.Н., Онуфриенко М.Э., Кольцов И.В. Посмертная диагностика гельминтозов животных// Методич. пособие - СПб, 2003, 76 с.

20.Онуфриенко М.Э. Диагностическая ценность послеубойной диагностики при фасциолезе крупного рогатого скота// Мат-лы межд. науч.-практ. конф. "Актуальные проблемы инвазионной, инфекционной и незаразной патологии животных" - Ставрополь, 2003, с.80-81.

21.Онуфриенко М.Э. Особенности иммунитета при спонтанном фасциолезе крупного рогатого скота// Мат-лы П межд. вет. конгресса - Алматы, 2003, с.92-93.

22.Онуфриенко М.Э. Эпизоотическая ситуация по фасциолезу крупного рогатого скота в Ленинградской области// М., Ветеринария, 2003, №10, с.32-34. 23 .Онуфриенко М.Э. Коррекция морфометрических показателей лимфатических узлов животных больных фасциолезом// Мат-лы докл. межд. науч. конф. "Инновации в науке и образовании", КГТУ - Калининград, 2003, с.99-100.

24.Онуфриенко М.Э., Соколов В.Д. Эмбриотоксические и тератогенные свойства альбена// Мат-лы науч. конф. проф.-препод. состава, науч. сотр. и аспир. СПбТАВМ - СПб, 2004, с.93-94.

25.Онуфриенко М.Э., Методы прижизненной диагностики фасциолеза крупного рогатого скота// РАСХН, Труды ВИГИС - М., 2004, в.40, с. 275-280. 26.Онуфриенко М.Э., Шустрова М.В. Современные методы диагностики фасциолеза крупного рогатого скота// РАСХН, Методич. рекомендации - СПб, 2004,20 с.

27.Онуфриенко М.Э. Иммунобиологическая реактивность крупного рогатого скота, экспериментально зараженных адолескариями фасциол// Мат-лы межд. конф., поев. 125-летию К.И.Скрябина ИП РАН - М., 2004, с.218-219. 28.Онуфриенко М.Э., Огородник С.Г. Оценка фасциолоидной активности сантела// Мат-лы II межд. межвуз. науч.-практ. конф. аспирантов и соискателей "Предпосылки и эксперимент в науке", СПГАВМ - СПб, 2004, с.33-34. 29.Онуфриенко М.Э. Гематологические и биохимические показатели при острой и хронической формах фасциолеза крупного рогатого скота// РАСХН, мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. - М., 2004, с.288-290.

Подписано в печать 25 августа 2004 г. Формат 60 х 84 1/16. Гарнитура «Tomes New Roman» Печать офсетная. Бумага офсетная № 1. Объем 2,5 пл. Тираж 100 экз. Заказ № 155

Отпечатано ООО «Репринт» Лицензия ПЛД №69-337 от 12.02.1999 г 198188, Санкт-Петербург, ул. Маршала Говорова, 8-А

04" 1 SV» / 5

Содержание диссертации, доктора ветеринарных наук, Онуфриенко, Марианна Эриковна

ВВЕДЕНИЕ.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Экономический ущерб, распространение и особенности эпизоотического процесса при фасциолезе.

1.2. Особенности иммунитета при гельминтозах.

1.3. Патогенез и иммунитет при фасциолезе.

1.4. Методы диагностики при фасциолезе животных и их модификации.

1.5. Комплексные лечебно - профилактические мероприятия при фасциолезе.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Эпизоотический процесс при фасциолезе крупного рогатого скота в северо - западном регионе РФ.

2.2.1.1. Источник возбудителя инвазии.

2.2.1.1.1. Распространение фасциолеза крупного рогатого скота 95 в Ленинградской и Новгородской областях.

2.2.1.1.2. Распространение фасциолеза крупного рогатого скота 102 на примере АОСХ «Котельский» Кингисеппского района Ленинградской области.

2.2.1.2. Механизм передачи.

2.2.1.2.1. Возрастная динамика фасциолеза крупного рогатого 107 скота в хозяйствах Ленинградской области

2.2.1.2.2. Возрастная динамика фасциолеза крупного рогатого 110 скота в хозяйствах Новгородской области

2.2.1.2.3. Сезонная динамика фасциолеза крупного рогатого 111 скота в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей

2.2.1.2.4. Сезонная динамика фасциолеза крупного рогатого скота в АОСХ Котельский Кингисеппского района.

2.2.1.3. Восприимчивое животное.

2.2.1.3.1. Иммунный статус телят при экспериментальном 117 фасциолезе.

2.2.1.3.2. Кинетика ферментов переаминирования, щелочной 130 фосфатазы, у- глютамилтранспептидазы и лактатдегидрогеназы у крупного рогатого скота, инвазированного фасциолами.

2.2.2. Противоэпизоотические мероприятия при фасциолезе 139 животных.

2.2.2.1. Прижизненная диагностика фасциолеза.

2.2.2.2. Специфичность фасциолезных антигенных препаратов 149 и чувствительность (информативность) в ИФА и РНГА.

2.2.2.3. Сравнительное изучение чувствительности антигенных 153 фракций фасциол (ЭСФАг и СФАг) в ИФА и РНГА.

2.2.2.4. Сопоставление результатов серологического (ИФА 155 и РНГА), гельминтологического и послеубойного исследований крупного рогатого скота на фасциолез в хозяйствах Ленинградской и Новгородской областей.

2.2.2.5. Аллергическая диагностика фасциолеза крупного 167 рогатого скота.'.

2.2.3. Терапия при фасциолезе крупного рогатого скота.

2.2.3.1. Эффективность сантела.

2.2.3.2. Эффективность клозальбена.

2.2.3.3. Эффективность тетраксихола.

2.2.3.4. Эффективность дисалара 10%

2.2.3.5. Испытания эффективности сантела, клозальбена, тетраксихола и дисалара при фасциолезе.

2.2.3.6. Эффективность альбена - супер

2.2.3.6.1. Токсикологические свойства альбена - супер.

2.2.3.6.2. Эмбриотропное действие (эмбриотоксические 186 и тератогенные свойства) альбена - супер.

2.2.3.6.3. Иммунотоксические свойства альбена - супер.

2.2.3.6.4. Определение остаточных количеств альбена - супер 195 (альбендазола) в организме крупного рогатого скота.

2.2.3.6.5. Определение антгельминтной эффективности альбена - 197 супер при фасциолезе крупного рогатого скота.

2.2.3.7. Иммунокоррегирующая терапия при фасциолезе 201 крупного рогатого скота.

2.3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ВЫВОДЫ.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Фасциолез крупного рогатого скота в северо-западном регионе России"

Актуальностьпроблемы. Среди гельминтозов сельскохозяйственных животных фасциолез. является одним из экономически значимых и представляет часть экологической проблемы не только Российской Федерации, но и других регионов мира, где возрастает интенсивность вредоносного воздействия паразитических червей на природу.

Информация о широком распространении фасциолеза среди крупного рогатого скота и овец подробно представлена в работах отечественных и зарубежных исследователей (Н.В.Демидов, 1965;

A.М.Сазанов, 1965 - 1976; Ю.Ф.Петров и соавт., 1985, 1986, 1993, 2003; Х.С.Абдуллаев, 1995; В.В.Горохов и соавт., 1997; В.В.Горчаков, 1997;

B.В.Сочнев и соавт., 1998; Ю.С.Докторов и соавт., 1999; А.В.Зубов, М.Ш.Акбаев, 2001; А.И.Ятусевич, Н.Н.Андросик, 2001; D.A.Armstrong, 1982; F.Lucchese et al., 1996; M.S.Mas-Coma et al., 1999).

Значительное распространение болезни обусловлено повсеместным расселением промежуточного хозяина фасциолы обыкновенной — моллюска малого прудовика, который является ведущим звеном в циркуляции трематод.

Сложившаяся эпизоотическая ситуация подтверждает необходимость проведения комплексных оздоровительных и профилактических мероприятий при фасциолезе животных.

Учеными установлено, что гельминтозы, в том числе и фасциолез, вызывают вторичные иммунодефициты, поэтому необходимо учитывать иммунный статус животных на момент их лечения (Э.Х.Даугалиева, В.В.Филиппов, 1991; Э.Х. Даугалиева, 2000).

Своевременная и достоверная диагностика является важным звеном профилактики. Используемые в ветеринарной практике лабораторные методы исследований не позволяют объективно оценить эпизоотическую ситуацию. С помощью метода последовательных промываний и различных модификаций гельминтоовоскопии яйца фасциол выявляют в фекалиях 45 -50 % зараженных животных (Г.А.Котельников, 1984).

В период миграции ювенильных форм фасциол установить диагноз с использованием общепринятых методов прижизненного исследования не представляется возможным. Поэтому практическое значение имеет разработка и применение иммунодиагностических тестов, которые весьма эффективны при диагностике фасциолеза.

В последние два десятилетия в Российской Федерации и за рубежом достаточно широко апробированы и используются для выявления трематодозов серологические методы: РДПАГ, РИГА, ИФА, ПЦР и др. При этом антигены приготавливают из различных компонентов трематод.

В качестве иммунодиагностического теста для выявления животных, зараженных Fasciola hepatica, сотрудниками ВИГИС (В.В.Клименко и соавт, 1997) предложена реакция диффузионной преципитации в агаровом геле (РДПАГ); метод рекомендуется использовать для распознавания острой формы фасциолеза.

Таким образом, выполненные в этом направлении изыскания в Российской Федерации не многочисленны и на практике не применяются.

На наш взгляд, следует уделять внимание разработке иммунодиагностических тестов на основе доступного и недорогого сырья с условием небольшой трудоемкости, простоты постановки, высокой информативности методов. Важно учитывать возможность адаптации получаемых диагностических препаратов для рутинных серологических методов, так как одной из задач является одновременное исследование на фасциолез большого количества животных за короткий период времени.

Не менее значимым для ветеринарной практики является аллергический метод диагностики фасциолеза. Длительно сохраняющаяся после переболевания в острой форме сенсибилизация тканей экскреторно — секреторными антигенами Fasciola hepatica обусловливает стимулирование клеточных факторов иммунитета, что подтверждает возможность применения внутрикожной аллергической пробы.

В пользу использования аллергической диагностики при фасциолезе свидетельствует высокий уровень эозинофилии и IgE в острый период.

Попытки отечественных исследователей получить отвечающий необходимым требованиям аллерген принесли разноречивые, но обнадеживающие результаты.

Методы серологической и аллергической диагностики должны применяться комплексно, планомерно в острый и хронический периоды фасциолеза, а полученные результаты эпизоотологического мониторинга необходимо рассматривать как важный этап оздоровительных и профилактических мероприятий.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является изучение эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота в северо - западном регионе России на примере Ленинградской и Новгородской областей, разработка иммунобиологических методов диагностики в комплексе мероприятий по проведению эпизоотологического мониторинга и совершенствование терапии при данном заболевании.

Для осуществления поставленной цели решались следующие задачи:

1.Провести ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по фасциолезу крупного рогатого скота в северо - западном регионе России на примере Ленинградской и Новгородской областей;

2.Изучить роль возбудителя и источника возбудителя в эпизоотическом процессе при фасциолезе крупного рогатого скота;

3.Выявить влияние фасциол на иммунобиологическую реактивность и иммунный статус крупного рогатого скота, экспериментально и спонтанно зараженного гельминтами;

4.Разработать и установить возможность использования ИФА и РНГА для диагностики фасциолеза и определить эффективность разработанных методов;

5.Провести сероэпизоотологические обследования крупного рогатого скота в хозяйствах северо — западного региона, выяснить показатели экстенсивности инвазии, чувствительность (информативность) ИФА и РНГА при острой и хронической формах фасциолеза; б.Оптимизировать терапию и разработать иммунопрофилактику при фасциолезе крупного рогатого скота.

Научная новизна. Впервые: -детально изучены особенности эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота в северо — западном регионе Российской Федерации (распространение, сезонная и возрастная динамика), особенности иммунитета и патогенеза;

-разработана серологическая и аллергическая диагностика фасциолеза крупного рогатого скота, которая применена на практике;

-разработаны параметры приготовления экскреторно - секреторных и соматических антигенов Fasciola hepatica для иммуноферментного анализа (ИФА) и реакции непрямой гемагллютинации (РНГА), установлена возможность их применения для диагностики фасциолеза;

-предлагается оценивать положительные результаты серологического исследования коров, в печени которых не выявлены половозрелые фасциолы, как следствие клеточно - гуморального иммунного ответа, обусловленного продолжительной сенсибилизацией тканей животных экскреторно - секреторными антигенами F. hepatica;

Сопоставление результатов серологического и послеубойного исследований крупного рогатого скота на фасциолез позволило установить четкую корреляцию.

Подано заявление о выдаче патента Российской Федерации на изобретение «Способ диагностики фасциолеза крупного рогатого скота». Регистрационный номер 2004109943 от 7 апреля 2004 г.

Оптимизирована терапия и разработана иммунопрофилактика при фасциолезе крупного рогатого скота, предложены эффективные схемы лечения и профилактики с применением отечественных препаратов.

Практическое значение. Эпизоотологический мониторинг при фасциолезе (изучение динамики, интенсивности эпизоотического процесса и эпизоотологической географии) позволяет своевременно, на регламентированной основе осуществлять комплекс оздоровительных и лечебно — профилактических мероприятий.

Разработаны оптимальные параметры получения иммунореагентов для ИФА и РИГА с целью диагностики фасциолеза.

Получены данные, на основании которых можно устанавливать конкретные сроки и кратность диагностических исследований на фасциолез в разиличные сезоны года. Эффективность лечебно -профилактических обработок следует выяснять на основании изучения динамики снижения титров антител к F. hepatica после дегельминтизации животных. Важным является учет особенностей динамики эпизоотического процесса при фасциолезе в конкретном регионе России.

На основании исследований разработаны и внедрены в производство:

1 .«Наставление по применению препарата альбен для дегельминтизации сельскохозяйственных животных, пушных зверей и кур» (утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 27.03.2002 №13-3-04/0385).

2.Методическое пособие «Прижизненная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2002 г).

3.Методическое пособие «Посмертная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2003 г).

4.Методические рекомендации «Современные методы диагностики фасциолеза крупного рогатого скота» (утверждены северо-западным научно-методическим центром РАСХН, 2004 г).

Научные разработки используются в учебном процессе на ветеринарных факультетах вузов Минсельхоза России и стран СНГ.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены на следующих научных и научно-практических конференциях: 1 .Международной конференции, посвященной 125-летию академии (Казань, КГАВМ им.Н.Э.Баумана, 1998).

2.III международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины на Северном Кавказе» (Персиановский, 2000).

3.Международной межвузовской конференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2001, 2002, 2003, 2004). 4.1У международной конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции» (Москва, 2002).

5.Конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, ВИГИС, 2003, 2004)

6.XI Московский международный конгресс (Москва, 2003).

7.Международной конференции и III съезда паразитологического общества при РАН «Проблемы современной паразитологии» (Петрозаводск, 2003). 8.II международный Конгресс (Алматы, 2003)

9.Конференции аграрного факультета РУДН «Концепции, практика и перспективы современного земледелия» (Москва, 2003) Ю.Конференции профессорско-преподавательского состава, научных сотрудников и аспирантов СПГАВМ (Санкт-Петербург, 2001, 2002, 2003, 2004).

Основные положения, выносимые на защиту;

1. Эпизоотический процесс при фасциолезе крупного рогатого скота.

2. Особенности иммунитета и патогенеза при спонтанном фасциолезе.

3. Диагностика при фасциолезе крупного рогатого скота.

4. Терапия и иммунопрофилактика фасциолеза крупного рогатого скота.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 54 научные работы, в том числе монография.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 338 страницах машинописного текста, включает 62 таблицы, 34 рисунка, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих 3 раздела, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений. Список литературы включает 365 источников, из них 228 отечественных и 137 иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Онуфриенко, Марианна Эриковна

ВЫВОДЫ

1. В северо — западном регионе России эпизоотический процесс при фасциолезе поддерживается постоянно, так как механизм передачи возбудителя восприимчивым животным всегда имеет место. Наиболее интенсивное развитие зарегистрировано в период с мая по октябрь.

2. На основании ветеринарной отчетности фасциолез у крупного рогатого скота зарегистрирован во всех районах северо-западного региона. Максимальные показатели экстенсивности инвазии установлены в Выборгском (16%), Кировском (16,1%), Кингисеппском (19,4%), и Тихвинском (20,5%) районах Ленинградской области, в Демянском и Любытинском (80%), Солецком и Старорусском (45,4%) районах Новгородской области.

3. Ретроспективный анализ эпизоотической ситуации по фасциолезу крупного рогатого скота в районах Ленинградской и Новгородской областей за 1992-2002 годы позволил установить одновершинную кривую эпизоотического процесса с пиком в декабре - январе 2000 - 2001 годах (средние показатели ЭИ в 2000 г. - 19,4%, в 2001 г. -31,6%).

4. Возрастная динамика при фасциолезе крупного рогатого скота характеризуется постепенным возрастанием зараженности: молодняк до 12 месяцев - 7,4%, телки 18-20 месяцев - 10,5%, коровы - 33,8%. Средние показатели интенсивности инвазии у животных различных половозрастных групп: коровы — 60, нетели и телки - 30 - 35, молодняк 10-12 месяцев - 1 — 2. Сезонная динамика эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота такова: максимальные показатели экстенсивности инвазии (17,5 — 21,1%) — в октябре - ноябре — декабре, низкие ( 1,3 - 1,9% и 1,4 - 1,6% ) - зимой и весной, средние -в августе и сентябре (5,2 - 7,8%).

5. Интенсивность эпизоотического процесса при фасциолезе крупного рогатого скота более высокая в хозяйствах, пастбища которых расположены вблизи стариц, заводей, небольших водоемов с плотностью популяций моллюсков - лимнеид 5 - 14 экз./м2. Зараженность их партенитами составляет: июнь - 3,1%, июль — 4,2%, август - 15%.

6. Иммунный ответ на антигены фасциол характеризуется многообразием проявлений, обусловленных взаимодействием Т— и В-систем в кооперации с макрофагами. У крупного рогатого скота первичный иммунный ответ на фасциолезную инвазию имеет одинаковое течение и выражен в изменении показателей специфической и неспецифической резистентности хозяина. Это проявляется в снижении пролиферативной и функциональной активности Т— лимфоцитов за счет увеличения Т- супрессоров и уменьшения Т— хелперов. Отмечено сохранение функциональной активности В— лимфоцитов, что выражается повышением концентрации специфических антител во все сроки исследования.

7. Для диагностики фасциолеза крупного рогатого скота установлена возможность применения иммуноферментного анализа (ИФА) и реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) с экскреторно -секреторными (ЭСФАг) и соматическими (СФАг) антигенами Fasciola hepatica.

8. Аллергический метод диагностики фасциолеза крупного рогатого скота менее информативен, чем ИФА и РНГА и может использоваться как дополнительный для контроля эффективности дегельминтизации при острой форме.

9. Сантел в дозе 5 мг/кг по ДВ внутримышечно, клозальбен в дозе 40 мг/кг по ДВ перорально, тетраксихол в дозе 0,2 г/кг по ДВ перорально, дисалар 10% при подкожном введении проявили при фасциолезе крупного рогатого скота эффективность от 92 до 98,8%.

10. Альбен - супер — высокоэффективный антгельминтный препарат, действующий на половозрелых и неполовозрелых трематод, по степени токсичности относится к 4 классу опасности, не обладает эмбриотропным действием и аллергизирующими свойствами, выводится из организма в течение первых пяти дней.

11. Иммунокоррегирующая комплексная терапия (антгельминтик альбен — супер + иммуномодулятор иммунопаразитан), стимулируя в организме биологически активные компоненты неспецифической резистентности, способствует нормализации физиологических функций, уменьшает токсическое и аллергическое влияние гельминтов, оказывает положительное влияние на иммунный статус, нормализуя его показатели, обеспечивает 100% эффективность против фасциол и профилактирует новое заражение путем резкого снижения интенсивности инвазии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. После широкой апробации в хозяйствах Российской Федерации и утверждения нормативно — технической документации на диагностические наборы серологические методы диагностики фасциолеза - ИФА и РНГА рекомендуется использовать для сероэпизоотологического мониторинга.

2. Серологические исследования необходимо проводить в конце пастбищного периода (октябрь), затем после дегельминтизации (январь - апрель). В конце лета и осенью рекомендуется дегельминтизировать только положительно реагирующих в ИФА или РНГА животных. Контроль эффективности дегельминтизации следует осуществлять через 45 и 60 дней комплексно с использованием серологического и аллергического методов диагностики. Первично положительно реагирующих в ИФА и РНГА животных обрабатывают антгельминтными препаратами, эффективными против ювенильных форм фасциол (альбен -супер). Вторично положительно реагирующих (через вышеуказанные сроки) необходимо дегельминтизировать повторно, используя антгельминтные препараты против половозрелых фасциол (сантел, дислар, тетраксихол, клозантел и др).

3. С целью осуществления достоверного эпизоотологического мониторинга острую форму фасциолеза рекомендуется диагностировать комплексно - на основании серологического (ИФА, РНГА) и аллергического исследований.

4. Для предотвращения клинического проявления фасциолеза крупного рогатого скота, передачи инвазии и дальнейшего распространения целесообразно применять иммунокоррегирующую терапию.

5. Научные разработки автора вошли в следующие нормативные документы:

-«Наставление по применению препарата альбен для дегельминтизации сельскохозяйственных животных, пушных зверей и кур» (утверждено Департаментом ветеринарии МСХ РФ 27.03.2002 №13-3-04/0385).

-Методическое пособие «Прижизненная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2002 г).

-Методическое пособие «Посмертная диагностика гельминтозов животных» (утверждено Методическим советом СПГАВМ, 2003 г).

-Методические рекомендации «Современные методы диагностики фасциолеза крупного рогатого скота» (утверждены северо-западным научно-методическим центром РАСХН, 2004 г).

-Заявление о выдаче патента Российской Федерации на изобретение «Способ диагностики фасциолеза крупного рогатого скота». Регистрационный номер 2004109943 от 7 апреля 2004 г.

Библиография Диссертация по биологии, доктора ветеринарных наук, Онуфриенко, Марианна Эриковна, Санкт-Петербург

1. Абдулмагомедов С.А., Шахмалов В.М. К вопросу эпизоотологии трематодозов крупного рогатого скота в Дагестане // Мат-лы докл. науч. конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии», ВИГИС. — М. — 1997. -С.4.

2. Абрамов В.Е. Теоретическое обоснование создания новых препаративных форм альбендазола и клозантела для борьбы с эндо-и эктопаразитами сельскохозяйственных животных // Автореф. дисс. докт. вет. наук. С.-Петербург. - 1999. - 46 с.

3. Абрамов М. Г. "Атлас форменных элементов крови и тканей". -М., 1979.-127 с.

4. Азимов З.А. Обнаружение адолескариев фасциол // Ветеринария. 1985. -№4. - С.42.

5. Алиев А.А., Гаджиев Я.Г. Препараты против преимагинальных форм Fasciola gigantica // Ветеринария. 1983. - №4. - С.37.

6. Арутюнок Л.Д., Петросян Р.А. Экологические основы профилактики трематодозов жвачных // Ветеринария. 1992. — №12. — С.ЗО.

7. Архипов И.А. Проблемы и перспективы создания новых лекарственных форм антгельминтиков и эндэктоцидов для животных // Мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. М. - 1999. - С.14 - 16.

8. Ю.Архипов И. А., Веселова Т.П. Эффективность куприхола при трематодозах жвачных животных // Ветеринария. — 1992. — №3. — С.ЗО.

9. П.Архипов И.А., Меланич Н.М., Кошеваров Н.И. Эффективность антитрема при фасциолезе и парамфистомозе крупного рогатого скота // Ветеринария. 2001. - №2. - С.27 - 29.

10. Атаев A.M. Взаимоотношение фасциол и их хозяев в Юго-восточном регионе Северного Кавказа // Мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. — М. -2001.-С.16.-17.

11. Атаев A.M. Особенности эпизоотического процесса при фасциолезе животных // Ветеринария. — 1991. №10. - С.44 — 46.

12. Атаев A.M. Экологические основы терапии и профилактики фасциолеза животных // Ветеринария. 1994. -№11.- С.28.

13. Атаев A.M. Экономическая эффективность ветеринарных мероприятий при фасциолезе // Ветеринария. 1996. - №1. - С.26.

14. Атаев A.M., Адильханова Т.Х., Канаев М.С. Распространение и динамика фасциолеза крупного рогатого скота в равнинной зоне Дагестана // Сб. науч. трудов Дагестанского науч.-исслед. вет. института. Махачкала. - 1984. - В. 16 - С.40 -51.

15. Балаян К.С. Иммунобиологическая реактивность овец при желудочно кишечных стронгилятозах и пути ее повышения // Автореф. дисс. канд. вет. наук. -М., 1987. 19 с.

16. Бережко В.К. Иммунологическая реактивность, иммунодиагностика и иммунопрофилактика при гельминтозах. // Автореф. дисс. докт. биол. наук. М., 1994. - 38 с.

17. Ю.Бессонов А. С., Пенькова Р. А. "Иммунодепрессивные свойства трихинелл и способы их подавления" // Биохимия и физиология гельминтов и иммунитет при гельминтозах. М.: Наука, 1984. — Т. 32. — С. 15-20.

18. Беэр О.А., Ройтман В.А. Роль теоретической паразитологии в прикладных паразитологических исследованиях // Мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. М. - 2001. - С.32 - 34.

19. Беэр С.А. Механизмы толерантности и защиты, регулирующие взаимоотношения трематод и моллюсков // Мат-лы докл. науч. конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии». М. - 1997. - С.14 - 16.

20. Биттиров A.M., Сохроков З.А. Факторы становления пастбищных популяций фасциол // Ветеринарный вестник. М. — 1999. — №1. - С.118 - 120.

21. Благов Н.А., Барышев М.Д., Фирсов В.Н. // Мед. паразитология и паразитарные болезни. М., 1986. - С.55 - 58.

22. Болотников И. А., Соловьёв Ю. В. "Гематология птиц". — JL: «Наука», 1980.- 116 с.

23. Бочарова М.М., Галазов В.И. Распределение фасциолы обыкновенной в популяциях различных хозяев // Материалы докл. науч. конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии», ВИГИС. — М. — 1997а. С.27 — 29.

24. Буриев К.А. Динамика инвазированности моллюсков личиночными формами фасциол в хозяйствах Ферганской долины // Мат-лы науч. конф. «Возбудители и переносчики паразитов и меры борьбы с ними». Самарканд. - 1988. - С.43.

25. Бурик В.В. Влияние панакура на гельминтозы и иммунобиологические показатели организма свиней // Болезни сельскохозяйственных животных и борьба с ними на Дальнем Востоке и в Забайкалье. Благовещенск, 1982. - С.39 - 44.

26. Васильев B.C., Комар В.И. // Мед. паразитология и паразитарные болезни. М., 1985. - С.34 - 36.

27. Векслер X. М. "Принципы современных подходов к изучению иммунологического гомеостаза и их клинико-патогенное значение" // Сб. науч. трудов. Таллинн: Валгус. - 1981. - С. 13-18.

28. Веселова Т.П., Доронина М.В., Савченко Н.Н. Динамика накопления гексихола-С в фасциолах // Ветеринария. 1986. - № 12. — С.45.

29. Вишняускас А.Ю., Василевич Е.Н. Химиопрофилактика фасциолеза овец // Ветеринария. — 1983. №2. - С.46.

30. Вовченко Н. М. "Функциональное состояние В-системы иммунитета у кур при аскаридозе" // Бюлл. Всесоюз. ин-та гельминтологии им. Скрябина. М., 1981. - № 30. - С. 23 - 26.

31. ЗЗ.Волков А.Х. Методы и средства борьбы с ассоциативными инвазионными болезнями крупного рогатого скота // Автореф. дисс. докт. вет. наук. Иваново. - 2001. - 46 с.

32. Волков А.Х., Сафиуллин Р.Т. Гельминтозы крупного рогатого скота Республики Татарстан // Ветеринария. 2000. - №1. - С.ЗО -31.

33. Воробьева Е.И., Начева JI.B. Две концепции дегельминтизации при гельминтозах // Тез. докл. I науч. конф. Новосиб. отделения Паразитол. об-ва РАН «Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири». Новосибирск. - 1996. - С.27 - 29.

34. Гаджиев Я.Г. Распространение фасциолеза в зависимости от категории хозяйств// Мат-лы науч. конф. «Исследования по гельминтологии в Азербайджане». Баку. - 1984. - С.23 - 24.

35. Гаджиев Я.Г., Гараев В.Х. Урсовермит при фасциолезе овец // Ветеринария. 1986. - №2. - С.41.

36. Гариев Б.Г. Эпизоотология фасциолеза овец при отгонном животноводстве // Тез. докл. съезда Всесоюз. об-ва гельминтологов. — Тбилиси.-1986.-С.32.

37. Глухова Л.И. Современные проблемы иммунологии, биотехнологической и клеточной инженерии в ветеринарной медицине. Тез. докл Всес. конф. М., 1990. - С. 11.

38. Горохов В.В. К методологии мониторинга при паразитарных болезнях // Мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. — М. 2001. — С.66 - 68.

39. Горохов В.В. Фасциолез как экологическая проблема // Ветеринария. 2000. - №3. - С.8.

40. Горохов В.В. Эпизоотический процесс при фасциолезе // Ветеринария. 1986. - №6. - С.38.

41. Горохов В.В. Мониторинг паразитозов, нерешенные проблемы // Труды ВИГИС. М. - 2003. - В.39. - С.72 - 77.

42. Горохов В.В. Общие проблемы эпизоотологии гельминтозов // Мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. М. - 2003. - С. 125 - 127.

43. Горохов В.В., Войлок В.Н., Требоганова Н.В. Эпизоотическая ситуация по трематодозам в Московском регионе // Мат-лы науч. конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии», ВИГИС. М. - 1997. - С.43 - 45.

44. Горчаков В.В. Возможность ограничения численности малого прудовика в каналах мелиоративной сети // Тез. докл. съезда Всесоюз. об-ва гельминтологов. — Тбилиси. — 1986а. С.43 - 44.

45. Горчаков В.В. К прогнозированию фасциолеза в Нечерноземной зоне Российской Федерации // Тез. докл. Всерос. симп. «Роль гельминтол. школы в развитии паразитол.». — М. — 1997. — С. 15.

46. Горчаков В.В. Поиск комплексного подхода биологического ограничения численности малого прудовика // Тез. докл. съезда Всесоюз. об-ва гельминтологов. Тбилиси. - 19866. - С.37.

47. Горчаков В.В., Зайцев В.В., Разгулин С.Е., Романова В.Н. Испытание нового комплекса противофасциолезных мероприятий в Нижегородской области// Мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. М. - 2001 -С.68 - 70.

48. Дарченкова Н.Н. Использование карт районирования и структуры нозоареала в повышении эффективности борьбы с биогельминтозами // Мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. — М. 2001. — С.74.

49. Даугалиева Э. X. // Вестник сельхоз. науки. 1986. - № 1. -С.114-119.

50. Даугалиева Э. X. // Химиопрофилактика, патогенез и эпизоотология паразитозов сельхоз. животных. — Алма-Ата. 1981. — С.29-38.

51. Даугалиева Э. X., Курочкина К.Г., Аринкин А.В. "Особенности иммунитета при гельминтозах" // Ветеринария, 1996. № 7. — С.37 — 38.

52. Даугалиева Э. X., Филиппов В. В. Иммунный статус и пути его коррекции при гельминтозах сельскохозяйственных животных. — М., «Агропромиздат», 1991. - 190 с.

53. Даугалиева Э. X., Курочкина К. Г. // Докл. РАСХН. -М., 1995. № 2. -С.34 -37.

54. Даугалиева Э. X., Курочкина К. Г. "Иммунопрофилактика и иммунотерапия гельминтозов сельскохозяйственных животных" // Роль гельминтологической школы в развитии паразитологии: Матер. Всесоюз. симпозиума. М., 1997. — С. 18.

55. Даугалиева Э. X., Курочкина К. Г., Филиппов В.В., Кузнецов Ю.А., Атауллаханов Р.И., Некрасов А.В., Пучкова Н.Г. Профилактика диктиокаулезов жвачных // Применение биотехнологиив животноводстве, растениеводстве ветеринарной медицине — М., 1988. -С.87-89.

56. Дауталиева Э.Х. Особенности патогенеза и иммунологических сдвигов в организме животных при различных гельминтозах // Вопросы ветеринарной паразитологии в Казахстане. -Алма-Ата.: Кайнар, 1978. -Т.17.-С.71 -75.

57. Даугалиева Э.Х., Абрамов В.Е. Трихоцефалез и меры борьбы с ним // Листовка МСХ. М. - 1984. - 6с.

58. Даугалиева Э.Х., Балаян К.С. Профилактика желудочно -кишечных стронгилятозов овец путем коррекции иммунного статуса животных // Ветеринария. 1989. - № 7. - С.45 - 47.

59. Даугалиева Э.Х., Курочкина К.Г. Иммунопрофилактика гельминтозов сельскохозяйственных животных // Мат-лы науч. конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии», ВИГИС. М. - 1997. - С.50 -51.

60. Демидов Н.В. Гельминтозы животных. М., «Агропромиздат».- 1985.-236 с.

61. Ерхан Д.К., Кастравец И.З., Мошу Н.Я. Распространение моно-и микстинвазий фасциолеза и саркоцистоза у крупного рогатого скота в Молдавии // Мат-лы X конфер. украинского общества паразитологов. — Киев, «Наукова думка». 1986. - С. 199.

62. Ершов B.C. Механизмы иммунитета при гельминтозах сельскохозяйственных животных // Сельскохозяйственная биология. М.,1966. Вып. 1. № 5. - С.729 - 743.

63. Ершов B.C. Основные задачи в области иммунологии гельминтозов в XI пятилетке. // Труды гельминтологической лаборатории АН СССР. М., 1984. - Т.32. - С.8 - 14.

64. Ибрагим А. И., Ромашов В. А. "Опыты по применению белкового и белковополисахаридного антигенов для иммунизации кур против аскаридоза" // Профилактика и терапия болезней с-х жив-х. -Воронеж, 1994. С. 59 - 62.

65. Ибрагимов Д.С., Илюшечкин Ю.П., Разбицкий В.М. Эффективность кокцидиостатиков в зависимости от кормления птицы // Ветеринария. 1989. - № 10. - С. 37 - 39.

66. Исмагилов A.M. Коррекция иммунного статуса и естественного микробиоценоза кишечника при мелофагозе овец // Автореф. дисс. канд. вет. наук. Уфа - 1999. - 21 с.

67. Каныгина И.С. Изменение клеточных факторов иммунной системы при экспериментальном диктиокаулезе овец // Гельминтология сегодня: проблемы и перспективы. -Тез. докл.науч.конф. — М., 1989. — С. 149 -150.

68. Клименко В.В., Белозеров С.И. Диагностическая эффективность очищенного антигена протеиназы F.hepatica в иммуноферментной реакции при фасциолезе овец // Бюл. Всесоюз. инта гельминтологии. - 1986. - 44. - С.31-38.

69. Котельников Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. М., «Колос». - 1984. - С.19 - 21.

70. Кошелева М., Молчанов И., Афонин В. Фасциолез животных: лечение и профилактика // Животноводство России. 2001. - В.5. — С.42 -43.

71. Кузьмичев В.В. Динамика фагоцитарной активности нейтрофилов у овец при экспериментальном фасциолезе // Тез. докл. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы науки в сельскохозяйственном производстве», ИГСХА. Иваново. - 19976. -С. 190.

72. Кузьмичев В.В. Качество мяса животных при фасциолезе в зависимости от сроков инвазии и дегельминтизации // Мат-лы науч. конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии», ВИГИС. М. - 1997. - С.79 - 80.

73. Кузьмичев В.В. Сроки созревания мирацидиев фасциол в биотопах с различными уровнями минерализации воды // Тез. докл. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы наукив сельскохозяйственном производстве», ИГСХА. Иваново. - 1997в. -С.191.

74. Кульберг А.Я. Антииммуноглобулины. М., «Медицина». -1978.- 183 с.

75. Кульберг А.Я. Регуляция иммунного ответа. М., «Медицина». - 1986.-С.151.

76. Курочкина К.Г. Иммуностимулирующие свойства полисепта, аквафтема и аквалипола // Бюлл. Всеросс. ин-та гельминтол. М., — 1996.-Вып. 56.-С. 39-42.

77. Лейкина Е. С. "Явление гетерологичной иммуностимуляции и иммуносупрессии при смешанных инвазиях" // Паразитоценозы и ассоциативные болезни. М., - 1984. - С. 127 — 139.

78. Лейкина Е.С. Итоги и перспективы развития исследований по иммунологии эхинококкозов // Мед. паразитология и паразитарные болезни. М., - 1987. - С.З - 7.

79. Лейкина Е.С. Стимулирующее и супрессантное воздействие гельминтов на иммунный ответ хозяина к антителам других инфицирующих агентов // Работы по гельминтологии. М., - 1981. -С.104 - 111.

80. Лесков В.П. Лимфоциты, образующие розетки с аутологичными эритроцитами // Иммунология. -1984. № 6. — С.22 — 26.

81. Лизько Н. Н. // Антибиотики и медицинская биотехнология. — 1987.-№3.-С.238-240.

82. ЮЗ.Лизысо Н. Н. "Новые экспериментальные модели в микроэкологии" // Антибиотики и химиотерапия". 1989. - Т. 34. -№6.-С. 443-446.

83. Линник В.Я., Безнос Т.В. Влияние биостимулятора кватерина на эффективность дегельминтизаций мебендазолом животных, инвазированных опистархозами // Ветеринарная наука производству. — М., - 1986. - Т.24. - С.117-119.

84. Лобан К.М., Токмалев А.К., Стешакова В.Е., Кочубей Т.В.,Чамьян Г.А. О функциональном состоянии Т- и В- систем иммунитета больных анкилостомидозами и трихоцефалезом // Мед. паразитология и паразитарные болезни. М., 1986. - № 1. - С.56 - 59.

85. Лозовой В. П., Шергин С. М. "Структурно-функциональная организация иммунной системы" Новосибирск, - 1981. -226 с.

86. Мамыкова О.И. Концентрация циркулирующих иммунных комплексов при желудочно кишечных стронгилятозах овец и их динамика при специфической терапии // Труды ВИГИС — М., — 1992. — Т. 31.-С.83 -93.

87. Маннапова Р. Т. Иммунный статус и профилактика при аскариозно-сальмонеллёзном заболевании поросят // Труды ВИГИС -М.,-1997.-Т. 33.-С. 121-129.

88. ПО.Маннапова Р. Т. Иммунный статус при сальмонеллёзно -аскариозном заболевании поросят // Тр. Всеросс. науч. конф.

89. Маннапова Р. Т. Коррекция иммуногенеза при профилактике ассоциативного сальмонеллёзно аскариозного заболевания поросят // Ветеринария. - 1998. - № 1. - С. 34 - 36.

90. Маннапова Р. Т. Микроэкология кишечника и его коррекция при ассоциативном сальмонеллёзно аскариозном заболевании поросят // Тр. Всеросс. науч. конф. Актуальные вопросы медицинской паразитологии. - С.-Пб., - 1998. - С.148 - 152.

91. Маннапова Р. Т. Сочетанное действие препаратов прополиса и пчелиного яда на завершённость фагоцитоза // Успехи физиологических наук. 1994. - Вып. 3. - Т. 25. - С. 98.

92. Маннапова Р. Т., Панин А. Н., Бакиров А. Г. Коррекция микробиоценоза кишечника биологически активными продуктами пчеловодства"// Сб. статей. Уфа, - 1999. - С. 84 - 87.

93. Маркин А.В., Тихомирова Э.П., Доценко В.А., Хроменкова Е.П., Ширинян А.А. Диагностическая ценность эозинофилии при ассоциативных паразитоценозах // Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы экологии и терапии. М., - 1995. - С.98 - 100.

94. Мелехин Г. П., Гридин Н. Я. "Физиология домашней птицы". -М.: Колос,- 1977.-288 с.

95. Михайлова Е.П. Плазмоцитарная и эозинофильная реакция у поросят при аскаридозе // Бюлл. Всес. ин-та гельминтол. М., — 1975. - Вып.З — С.73 — 76.

96. Мовсесян С.О., Чубарян Ф.А. Экологические основы профилактики трематодозов животных // Ветеринария. 1991. — № 12. — С.30-31.

97. Мякин В.А. Комплексная терапия при фасциолезе крупного рогатого скота // Мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». М. - 2001. - С. 166 - 167.

98. Мякин В.А., Феоктистов В.Н., Семьяшов В.В., Рыбалов В.А., Бережков Э.В., Родионова О.В., Иванова Л.И., Парфенов А.И., Махнин В.П., Сабурин В.А., Шемякова С.А. Иммунотерапия крупного рогатого скота спонтанно зараженного фасциолами // Мат-лы науч. конф.

99. Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии». М. - 1997. - С.98 - 99.

100. Никитин В.Ф., Дурдусов С.Д., Тайчинов У.Г. Эпизоотологические особенности и условия возникновения паразитозов• мясного скота // Мат-лы науч. конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии». — М. — 1997.-С.103-104.

101. Новак М.Д., Кузьмичев В.В., Мозжухин С.В., Золоткова Т.С. Фасциолез крупного рогатого скота в Костромской области // В сб. науч. трудов «Экологическая паразитология», ИГСХА. — Иваново. 1998. — С.26-27.

102. Нурмухаметов Х.Г., Маннапова Р.Т., Абдуллин Ш.М. Влияние медиатрина на иммунологический статус организма овецпри мелофагозе // Проблемы зоотехнии и ветеринарной медицины. -Уфа.- 1996.-С.177-181.

103. Нурхаметов Х.Г., Абдуллин Ш.М. Влияние мелофагозной инвазии овец на Т— и В- систему иммунитета // Проблемы зоотехнии и ветеринарной медицины. Уфа. - 1996. - С. 175 - 177.

104. Панин А. Н., Маннапова Р. Т. Колонизационная резистентность кишечника при ассоциативных гельминтозах // Сб. стат. М. - Уфа, - 1999.-С. 13-15.

105. Петков А., Русев И. Эпизоотология, ранняя химиопрофилактика и химиотерапия фасциолеза овец // Сб. науч. трудов. Болг. - 1988. - № 9/10. - С.42 - 44.

106. Петров Р. В. Введение в неинфекционную иммунологию -Новосибирск: Наука, 1968. - С. 140 - 156.

107. Петров Р. В. Иммунология // М.: Медгиз. 1982. - 386 с.

108. Петров Р. В. Иммунология // М.: Медицина, 1987. 416 с.

109. Петров Р.В., Хаитов P.M. // Гомеостаз. М., 1976. - С. 191

110. Петров Р.В., Хаитов P.M., Атауллаханов Р.И. //л

111. Иммуногенетика и искусственные антигены М.: Медицин^. — 1983. — 254 с.

112. Петров Р.В., Чередеев А.Н., Ковальчук JI.H. Проблемы клинической иммунологии на современном этапе // Иммунология. — 1984.- №6.- С.9- 12.

113. Петров Р.В. Контроль и регуляция иммунного ответа // М., 1981.-312 с.

114. Петров Ю. Ф. Резистентность с/х животных // Сб. стат. ВНИИ животноводства. М., - 1988. - С. 34 - 36.

115. Петров Ю.Ф., Абалихин Б.Г. , Кузьмичев В.В. Борьба с фасциолезом и парамфистоматидозами в условиях мелиорации земель Центрального Нечерноземья РСФСР // Тезисы докладов национальной конференции. Иваново. - 1986. - С.73 - 74.

116. Петров Ю.Ф., Абалихин Б.Г. Эффективность различных систем противофасциолезных мероприятий // Мат-лы науч. конф. ИСХИ «Онтогенез, профилактика и лечение болезней с.-х. животных». — Иваново. 1993. - С.97 - 99.

117. Петров Ю.Ф., Кузьмичев В.В., Розовенко М.В., Михайлицин Ф.С. Эффективность тегалида крупнодисперсного, бромоксана и комбицина // Сб. науч. трудов «Паразитарные и ассоциированные болезни животных и их профилактика». Иваново. - 1997. - С.65 — 69.

118. Петров Ю.Ф., Сазанов A.M., Шестеринина Е. М. Рекомендации по профилактике фасциолеза в хозяйствах Нечерноземной зоны. М. — 1985. — С.5.

119. З.Полетаева О.Г. Критерии формирования иммунитета при аскаридозе и их использовании для диагностики этой инвазии // XVI Всес.съезд микробиологов и эпидемиологов. М., - 1977. - Ч.З. - С.269 -270.

120. Полетаева О.Г. О роли иммунологических исследований в эпидемиологии и профилактике гельминтозов // Роль гельминтологической школы в развитии паразитологии: Материалы Всеоросс. Симпозиума. М., - 1997. - С. 39.

121. Полетаева О.Г. Реакция непрямой гемагглютинации в диагностике ларвального аскаридоза И Мед. паразитология и паразитарные болезни. М., - 1983. - № 2. - С.40 - 43.

122. Полетаева О.Г. Современное состояние и проблемы иммунологии аскаридоза // Биохимия и физиология гельминтов и иммунитет при гельминтозах. М.: Наука, - 1984. - Т.32. - С. 108 —117.

123. Полетаева О.Г. Феномен образования В — лимфоцитами селезенки мышей, инвазированных личинками Ascaris suis // Мед. паразитология и паразитарные болезни. -М., 1978. - № 4. - С.34 - 38.

124. Полетаева О.П., Федоров Н.М. Определение классов иммуноглобулинов в сыворотке крови кроликов, экспериментально зараженных Ascaris sum // Мед. паразитология и паразитарные болезни. М., - 1972. - Т.11.-С.736 - 740.

125. Полуэктова П.Ф. Изучение иммуноглобулинов при экспериментальном фасциолезе овец И Труды Всесоюз. института гельминтологии. М. - 1983. - В.26. - С. 107 - 113.

126. Полуэктова П.Ф. Роль иммуноглобулинов Ig G1 и Ig G2 в реакции гиперчувствительности немедленного типа при фасциолезе // Сб. науч. трудов «Проблемы ветеринарной иммунологии». М. — 1985. -С.177— 180.

127. Полуэктова П.Ф. Сыворотчные иммуноглобулины у животных, инвазированных Fasciola hepatica // Тр. Всес.ин-та гельминтологии. М., 1978.-Т.24.-С.99- 105.

128. Пушкарев А.С. Действие дисалара на иммунобиологическую реактивность при фасциолезе крупного рогатого скота и овец // Ветеринария. 1999. - №1. - С.28 - 30.

129. Пушкарев А.С. Опыт лечения фасциолеза крупного рогатого скота // Сб. науч. трудов «Экологическая паразитология». Иваново. -19986.-С.32-33.

130. Пушкарев А.С. Патогенез при спонтанном фасциолезе крупного рогатого скота // В сб. науч. трудов «Экологическая паразитология». — Иваново. 1998а. - С.35 - 36.

131. Раисов Т.К., Садыков К.Б., Тимербеков Д.А., Озерецковская Н.Н. // Мед.Паразитология и паразитарные болезни. М., — 1985. — № 6. - С.14 - 17.

132. Рехвиашвили Э.И. Особенности иммунного статуса у крупного рогатого скота при спонтанном фасциолезе и дикроцелиозе // Сб. науч. трудов «Паразитарные и ассоциированные болезни животных и их профилактика». Иваново. - 1997а. - С.58 - 59.

133. Рехвиашвили Э.И. Применение полиоксидония для коррекции иммунной системы овец после дегельминтизации против фасциолеза // Сб. науч. трудов «Паразитарные и ассоциированные болезни животных и их профилактика». Иваново. - 19976. — С.60 - 61.

134. Рехвиашвили Э.И. Распределение отдельных видов трематод при смешенной инвазии крупного рогатого скота // Мат-лы докл. науч.конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. М. - 2001. - С.216 - 217.

135. Рехвиашвили Э.И. Эколого-эпизоотологический анализ трематодозов жвачных животных в условиях юга России // Сб. науч. трудов «Экологическая паразитология», — Иваново. — 1998. С.36 — 37.

136. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. — Минск, «Вышейшая школа». 1973. - 320 с.

137. Савицкий И.Г. Иммунобиологические и биохимические свойства антигенов Dicrocoellium lanceatum. // Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., - 1985.-19 с.

138. Садчиков С.Ю. Влияние F.hepatica на некоторые физиологические показатели коров при хроническом фасциолезе // Труды Моск. гос. акад. вет. мед. и биотехнол. М. - 1998. - С. 104 - 106.

139. Сазанов A.M. О таксономической структуре вида Fasciola hepatica L. // Мат-лы науч. конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии», ВИГИС. М. — 1997. -С.129 - 131.

140. Сазанов A.M. Стратегия и тактика дегельминтизации животных против фасциолеза // Мат-лы докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», ВИГИС. М. — 2001 — С.233 -235.

141. Сафиуллин Р.Т., Бурмистров Е.Н., Волков А.Х. Сантел — высокоэффективный препарат при паразитарных болезнях крупного рогатого скота // Ветеринария. — 1999. №5. - С.ЗЗ — 35.

142. Сафиуллин Р.Т., Вечеркин А.С. Эффективность левацида при фасциолезе коров и овец // Мат-лы науч. конф. «Актуальные вопросы теоретической и прикладной трематодологии и цестодологии», ВИГИС. М. - 1997. - С.140 - 141.

143. Сейсенов Б.С. Неспецифическая профилактика и терапия желудочно-кишечных стронгилятозов овец // Автореф. дисс. канд. вет. наук. М.,- 1994.- 19с.

144. Сивков Г.С., Домацкий В.Н., Федоров Ю.В., Листишенко А.А., Иванова А.А. Эпизоотология фасциолеза крупного рогатого скота в Тюменской области // Ветеринария. 2000. - №2. - С.28 - 29.

145. Сковронский Р.В., Угрин И.Н. Выявление биотопов малого прудовика // Ветеринария. 1984. - №6. - С.45.

146. Сочнев В.В., Аринкин А.В., Досжанов Б.Д. Система эпизоотического надзора и контроля при микстинвазиях // Н.Новгород. — 1998.-1998.- 162 с.

147. Субботин Т.Ф., Карелин С.Т. Эпизоотология, течение и лечение при фасциолезе овец // Ветеринария. — 1979. №8. - С.46.

148. Тернопольская Л.Д. Изменчивость F.hepatica L., 1758 у разных хозяев // Бюллетень Всесоюзного института гельминтологии имени К.И. Скрябина. 1984. - В.38. - С.47 - 51.

149. Труфакин В. А. Роль иммунной системы в патогенезе лимфопролиферативных заболеваний Новосибирск, - 1984. - С. 174.

150. Упырев А.В., Доценко В.А. Смешанные инвазии у больных энтеробиозом // Ассоциативные паразитарные болезни, проблемы, экология и терапия. М., - 1995. - С. 179 - 180.

151. Фазлаев Р.Г. Лиорхоз крупного рогатого скота в Южном Предуралье Башкирии (эпизоотология, вопросы патогенеза, профилактика и меры борьбы). Автореф. дисс. канд. вет. наук. — М., -1987.-20 с.

152. Фёдорова О.Е. Спорообразующие анаэробактерии — антагонисты патогенных энтеробактерий // Персистенция микроорганизмов. Куйбышев, - 1987. — С. 125-130.

153. Филиппов В.В. Эпизоотология гельминтозов животных. — М., «Колос». 1988.-227 с.

154. Хаитов P.M. Искусственные антигены и вакцины. // Мед.реф.журн., 1986.- № 6. - Разд.21С. 13 -23.

155. Чарыева Е.П. Оценка и стимулирование репаративных процессов при фасциолезе животных после применения антгельминтиков. // Дис. канд. биол. наук, М., — 1988. 243 с.

156. Чахава О. В. Гнотобиология. М., 1972. - 270 с.

157. Чахава О. В. Микробиологические и иммунологические основы гнотобиологии. М., - 1982. — 116 с.

158. Чахава О. В. Гнотобиология — учение о микрофлоре организма хозяина // Теоретические и практические проблемы гнотобиологии. М.: Агропромиздат, - 1986. - С. 14 - 19.

159. Чернуха В.К., Гапич А.А. Показатели Т- и В-лимфоцитов крови поросят при кишечных гельминтозах // Матер. X конф. Украинского об-ва паразитологов. — 1986,- Ч. 2. С.323.

160. Читиашвили Б.Г., Садатерашвили Ю.Ф., Зурабишвили Д.З., Нануашвили Л.Г. Фасциолоцидная активность препаратов ГЗ-048, ГЗ-042 // Ветеринария. 1998. - №4. - С.36 - 37.

161. Чобанян А.Г. Влияние эхинококкозной инвазии на зараженность фасциолами и дикроцелиумами рогатого скота // Тез. докл. Всесоюз. съезда паразитоценологов. Киев. — 1983. - С.367 - 368.

162. Шагимухаметов Р. Б. Влияние биологически активных продуктов пчеловодства на иммуноморфологические реакции тимуса при стрептококково-криптоспоридиозном заболевании телят // Сб. стат.- М. Уфа, 19996. - С. 57 - 59.

163. Шагимухаметов Р. Б. Влияние цветочной пыльцы и прополиса на иммуноморфологические реакции селезёнки при стрептококково-криптоспоридиозном заболевании телят // Сб. стат.- М. Уфа, 1999а. - С. 54 - 56.

164. Шагимухаметов Р. Б. Иммунный статус телят при стрептококкозах и его коррекция прополисом и цветочной пыльцой // Сб. стат. Москва. - Уфа, - 1999. - С. 55 - 58.

165. Шагимухаметов Р. Б., Маннапова Р. Т., Панин А. Н. Стимуляция Т- и В-систем иммунитета при стрептококкозе телят биологически активными продуктами пчеловодства. // Матер. II Междун. конф. по апитерапии. Уфа,- 2000. - С. 201 - 206.

166. Шакиев Е.Ш., Солдатченко A.M. Мероприятия при фасциолезе // Ветеринария. 1980. - №10. - С.36 - 38.

167. Шекотуров В.Л. Эпизоотология фасциолеза крупного рогатого скота в хозяйствах Вологодской области // Мат-лы науч. конф. «Профилактика и лечение болезней с.-х. животных». Вологда. - 1986. -С.31-32.

168. Шемяк6ва С.А. Антгельминтная эффективность тетраксихола при фасциолезе и влияние его на организм и продуктивность жвачных // Мат-лы науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями». М. - 1999а. - С.309.

169. Шемякова С. А. Иммунокоррегирующая терапия при фасциолезе крупного рогатого скота. — Автореф. дисс. канд. вет. наук. М. - 19996. - 26 с.

170. Шипшев Б.М. Эпизоотология фасциолеза жвачных животных в Кабардино-Балкарской республике и совершенствование мер борьбы с ним // Автореф. дисс. канд. вет. наук. Иваново. - 1998. - 23 с.

171. Шнайдмиллер А.Н., Исакова B.C. Некоторые показатели крови при экспериментальном эзофагостомозе свиней // Науч. тр. Омск. вет. ин-та,- 1973.- С.93-95.

172. Шульц Р.С. Гельминтозы овец и крупного рогатого скота. — М., «Сельхозгиз». 1959. - С. 178.

173. Яворский И.П. О заселении личинками фасциолы малых прудовиков и пастбищных биоценозов в западных областях УССР // Тез. докл. Всесоюз. съезда паразитоценологов. Киев. — 1983. - С.386 — 387.

174. Якубовский М.В. Ассоциативные гельминтозы у свиней в Белоруссии и опыт борьбы с ними // Паразитоценозы и ассоциативные болезни. Всесозн. акад. с.-х. наук. М., 1989, - С. 326 - 328.

175. Якубовский М.В. Кишечные нематодозы свиней. Эпизоотология, патогенез, меры борьбы и профилактика // Дис. д-ра вет. наук. Минск, - 1987. - 453 с.

176. Якубовский М.В., Мясцов Т.Я., Петренко. С.И. Иммуноглобулины при гельминтозах свиней // II съезд паразитологов: Тез. докл. ВОГ. М., - 1989. - С. 198 - 199.

177. Якубовский М.В., Мясцова М.Я., Петренко С.И. Иммуноглобулины при гельминтозах свиней // II съезд паразитологов: тез. докл. Киев, - 1983. - С. 387 - 388.

178. Якубовский М.В., Мясцова Т.Я. Влияние кишечных нематодозов на содержание Т— и В- розеткообразующих лимфоцитовв крови поросят // Мат-лы X конф. Украинского об-ва паразитологов,1986.- Ч. 2.- С. 387.

179. Янгуразова З.А. Взаимоотношение отдельных представителей аскаридов, оксиурат и микрофлоры в кишечном паразитоценозе хозяина в условиях экспериментального и спонтанного заражения. // Дис. канд. биол. наук. М., - 1979. - 136 с.

180. Янгуразова З.А. Экспериментальные данные по изучению. действия препаратов пиперазинового ряда на энтеробактерии животных // Тем. сб. ин-та. БСХИ. 1981.- С. 97-99.

181. Янгуразова З.А., Нурхаметов Х.Г. Экспериментальные данные по изучению влияния ассоциации микроорганизмов кишечника на зараженность животных гельминтозами // Борьба с инвазионными болезнями животных. Уфа,- 1976.— С. 67 —73.

182. Ященко Л. В. Иммунология в сельском хозяйстве // Аграрная наука. 1995. -№ 4. - С. 33 - 35.

183. Ятусевич А.И., Андросик Н.Н. Малоизученные инфекционные и инвазионные болезни домашних животных // Минск. 2001.- 156 с.

184. Abbas М.К., Altaif K.I. Studies on experimental ovine fascioliasis due to F.gigantica:gematological and serum protein changes // Helmintologia. 1990. - 27, №3. - P.173 - 182.

185. Alonso J.M.,Garcia M.J.A. Fascioliasis humana con presentation atipica у grave. Traitemento con triclabendasol // Enferm. infec. у microbiol. clin. 1998. - 16, №1. P.28 - 30.

186. Altaif K.I. Factors affeoting infectivity and development of larval stages of the liver fluke F.gigantica in the snails L. auricularia complex // Helmintologia. 1989. - 26, №3. - P.211 - 218.

187. Anon D. Hiver flukes cause economic losses // Idano Farmer Stockman. 1986. - 103, № 1. - P.7.

188. Antras V., Mage C., Collet J.P. Efficacite du Closantel injectable sur l'infestation naturelle des bovins par Fasciola hepatica // Rev. med. vet. — 1997. 148, -№10. -P.777 - 780.

189. Appleton. J. A, Mc. Gregor D.D. Characterization of the immune mediator of rapid expulsion of Trichinella spiralis in suckling rats // Immunology. 1987. - V.62. - N3, - P.477 - 484.

190. Armstrong D.A. The economic impact of fascioliasis // World congress on diseases of cattle. Amsterdam. 07-10.09.1982. H85-2057. Proceedings. - Vol.2. - 1982. - P.l 113 - 1117.

191. Ayadi A., Mani F., Said B.M. Etat actuelde la fasciolose en Tunisie // Bull. Soc. fr. parasitol. 1997. - 15, № 1. - P.27 - 32.

192. Ayadi A., Rachid B.M.S. Etudes epidemiologiques sur un foyer de distomatose a F.hepatica dans les oasis de Tozeur (Tunisie) // Bull. Soc. fr. parasitol. 1993. - 11, №2. - P.217 - 222.

193. Bach M., Bach J. Int. Immunopharmacol. 1983. - N 3. — P.296 - 377.

194. Baixench M.G., Magnaval J.F. Eosinophiles, IgE et helmintniases // Rev. med. vet (Fr.). 1993.- 144.- N12.- P.967-974.

195. Bardana E.K. Recent developments in immunomodulatory therapy // G. Allergy and Clin, immunol. 1985. - V. 75, - N 4. - P.423 - 436.

196. Barriga O.O. Immunomodulation by nematodes: a review // Vet. Parasitol. 1984. - V.14, - N 3/4. - P. 293 - 320.

197. Barrow P.A., Brooker B.E., Fuller R. and Newport M.J. // The attachment of bacteria to the gastric epithelium of the pig and its importance in the microecology of the intestine. // J. Appl. Bacterid., 1980, - P.147.

198. Barta O.M., Stewart T.B., Shatter G.M. Ascaris suum infection in pigs sensitizes lymphocytes but suppresses their responsiven // Veter. Parasitol.- 1986.- V.21,N1.- P.25-36.

199. Basten A. Cell Communication // 1983. Ch 2. - P.59 - 62.

200. Basten A., Miller J. // Cell Communication. 1974. - Ch 9.1. P.241.

201. Batte E. A rewiew and update of swine parasite control // J. Amer. Veter. Med. Assn. 1977. V. 170. - N 3. - P.343 - 344.

202. Benkova M.N., Boroskova A.O., Berezko V.K. Dynamika a distribucia T- a B-dependentnych lymfocytov v lymfoidnych organoch morciat pri experimentalney ascaridoze // Vet. Med. 1984. R. 29. - C.l. — P.39-46.

203. Boerseme I.H., Borgsteede F.H.M., Eysker M. Prevalence of benzimidazole resistance of nematodes in sheep in the Hetherlands // Res. in veter. Sc. 1987.- 43. Nr. 1.- P.18-21.

204. Boroskova L., Benkova M., Alexander R. Zweny poctu T- a B-lymfocytov v krvi prasiat po experimentalney askaridoze // Vet. Med. 1982. R. 27.- C.12. P.741 - 746.

205. Bossaert K., Alonso M.J.M. Identificationet caracterisation partielle d'une gene de F.hepatica d'interet diagnostique potential // Ann. med. vet. -2000. 144, №3. -P.l65 - 171.

206. Bulgin M.S., Anderson B.C., Hall R.F., Lang B.Z. Serum gamma glutamyl-transpeptidase activity in cattle with induced fascioliasis // Rec. in veter. Sc. 1984. - 37, - №2. - P. 167 - 171.

207. Butterworth A.V. Cell midi - a ted damage to helminthes // Adv. Parasitol. - 1984. - V.23. -P.143 - 235.

208. Cadel S., Barbier D., Duhamel C. A propos de 18 cas de fasciolose humaine recenses en Normandie 1994 1995 // Bull. Soc. fi*. parasitol. -1996.-14,- №1. -P.39-43.

209. Capron A., Dessaint I., Camns D. // Biochemistry of hostparasite relationships. Amsterdam, - 1976. - P.263.

210. Capron A., Dessaint Jean-Paul. Immunologic aspects of schistosomiasis // Annu. Rev. Med.: Select. Top. Clin. Sci. V. 43. Palo Alto (Calif).- 1992.- P.209-218.

211. Carlier Y. F.hepatica // Rev.Assoc. Beige technol. lab. 1993. -20,- №4. -P.211 —212.

212. Cartner E.M. Lewamisole angmetation of PPD induced lymphocyte proliferation // S. Afr. Med. J. - 1981. - V. 53. - N 4. - P. 109 -110.

213. Cawdery M.J.H. Review of he economic importans of fascioliasis in sheep and cattle // Irish veter. news. 1984. - №9. - P. 14 - 22.

214. Chiper N., Lordanova P. Effect of constant magnetic field on the development of Fasciola hepatica in the snail host // Докл. Бълг. АН. — 1994. -47,- №10.-P.l 11-113.

215. Czaplicki С., De Keyser H. A propos d'une enzootie de distomatose porcine // Ann. Med. Veter. 1984. - 128, №3. - P.221 - 224.

216. Dreyfuss G., Vignoles P., Rondelaud D., Vareille-Morel C. Fasciola hepatica: Characteristics of infection in Lymnaea truncatula in relation to the number of miracidia at exposure // Exp. Parasitol. 1999. -92, №1.- P.19-23.

217. Esteban M.M., Garcia V.Z. Aislamiento e identification in situ de antigenos de F. hepatica // Vet. Med. 1994. - 25, №3. - P.267 - 271.

218. Euzeby G.P. Proprietes immunostimulantes du levamisole. Note 2. Applications en medecine veterinarie et effects secondaires // Rev. Med. Veter.- 1986.- V.137,- N70.- P.499-520.

219. Faubert G., Janner C. // Immunol. 1975. - V. 28, - N 6. -P.1041 - 1050.

220. Faubert G.M. // Proc. of the Pouth int. Conf. on Trichinellosis, 1982.- Poland. P.163- 167.

221. Faubert G.M. Antigenic character of parasitic organisms. III. Parasite products in the regulation of the immune response // Rev. Adv. Parasitol Proc. 4 Int. Congr. Parasitol. ICOPA. Warszawa. 1981. - S.604 -608.

222. Faubert G.M. Immunodepression in trichinellosis. In aspect of Parasitology // Ints. of Parasitol. of Mc Jill Univ., 1982. - P.91 - 102.

223. Fuentes M.V., Valero M.A., Bargues M.D., Esteban J.G., Angles R., Mas-Coma S. Analysis of climatic data and forecast indices for human fascioliasis at very high altitude // Ann. Trop. Med. and Parasitol. 1999. -№8. — P.835 - 850.

224. Gomes C., Blanco J.R. Biliary aspiration after administration of intra venous cholecystokinin for the diagnosis of hepatobiliary Fascioliasis // Clin. Infec. Diseases. 1998. - №4. - P. 1009 - 1010.

225. Grandall G.A., Grandall R.B. Ascaris suum: immunisuppresion in mice during acute infection // Exp. parasitol. 1976. - V. 40. - N 3. -P.71-74.

226. Gross R. The eosinophilis of lejkocytes // In the Chysiology and Pathology. N.V. 1972. - P.l -45.

227. Gu Youfang, Mao Xinzhi, Shen Yonglin, Gonzalez-Gallego J. Nanjing nongye daxue xuebao // J. Nanjing Agr. Univ. 2000. - №4. -P.77 - 80.

228. Gundlach J.L., Kowski S. Immunologiczne aspekty fasciolozy owiec // Med. weter. 1985.- №4. - P. 199 - 201.

229. Gundlach J.L., Kowski S. Zmiany poziomu wybranych skladnikow mineralnych surowicach cielat v przebiegu doswiadczalnej inwazji i superinwazji F.hepatica // Med. Veter. 1988. -№3. - P.160 - 165.

230. Guobadia E.E., Fagbemi B.O. Time-course analysis of antibody response by EITB and ELISA before and after chemotherapy in sheep infected with F.gigantica // Vet. Parasitol. 1995. - №3. - P.247 - 253.

231. Gupta S.P., Trivedi K.K. Effect of Ascaris suum infection on blood nicture of rabbit in relation to the production of immunity II Zool. Anz. -1981.- Vol. 206. N 3-4. — P.246 — 251.

232. Hanna R.E.B., Trudgett A.G. F.hepatica: development of monoclonal antibodies against somatic antigens and their characterization by ultrastructural localization of antibody binding // J.Helmintol. 1988. - 62, №1.- P.15-28.

233. Haroun E.M., Gadin H. Stadies on naturally-occuring ovine fascioliasis in the Sudan// J. Helminthol. 1986. - №1. - P.47 - 53.

234. Hernandez S., Martinez-Cruz M.S. Experimental fasciolosis in goats: clinical pathology and humoral response // 6th Eur. Multicolloq. Parasitol. Programme and Abstr. The Hague. - 1992. - P.221.

235. Hillyer G.V., Sanchez Z. Immunodiagnosis of bovine fascioliasis by enzyme-linked immunosorbent assay and immunoprecipitation methods // J. Parasitol. 1985. - 71, №4. - P.449 - 454.

236. Hillyer G.V., Serrano A. Fractionation of F.hepatica tegument antigens and their application to the serodiagnosis of experimental fascioliasis by the enzymelinced immunosorbent assay // J.Helminthol. -1986.-№3. P.173-178.

237. Hoover R.S., Lincolus D., Hall R.F., Wescott R. Seasonal transmission of F.hepatica to cattle in northwestern United States // J. Am. Veter. Med. Assn. 1984. - №6. - P.695 - 698.

238. John J.L. Nematodes and the spleen: an immunological reldtiont hip // Experientia. 1994. - N 1. - C. 15 - 22.

239. Kagan G., Maddison S.E. Immunology of parasites. General aspects // Immunol. Hum. Infec. Pt. 2. New York. London. 1982. -P.315 - 325.

240. Kawano J., Yamomoto H.A simplified method for preparation of antigens of Japanese Fasciola sp. for double immunodiffusion // Japan J. Veter.Sc. 1985. -№4. - P.611 - 616.

241. Kodama K. Fascioliasis humanus: fasciolas of bitionoli and prasikvanteli. Kansenshogaku zasshi // J. Jap. Assoc. Infec. Diseases. 1997. -№1. - P.1162 — 1167.

242. Larramendy R., Pedroso M. Deteccion de anticuerpos a F.hepatica en terneros infestados experimente // Rev. Salud. anim. 1985. - №2. - S.131 -140.

243. Larramendy R., Pedroso M. Evaluacion immunologica reacciones cruzadas de un antigeno de F.hepatica con otros helmintos gastrointestinales del bovino // Rev. Salud. Anim. 1984. - №3. - S.373 - 382.

244. Leon M. T. "Lactic acid bacteria.» // Understanding the Microorganism: Biotechnology in the Feed Industry. 1992. - P.151 - 163.

245. Lucchese F., Tribouley I., Lejoly-Boisseau H. La distomatose humaine a Fasciola hepatica de la France // Bull. Soc. Fr. parasitol. 1996. -№1.- P.47-56.

246. Mage С. Frequence de F.hepatica influence des periodes d'examens coproscopiques et de la conduite de paturage selon la climatologue // Rev. Med. Veter. 1989. - №44. - P.297 - 301.

247. Mage C., Rondelaud D. Reflexions sur la prevention de la fasciolose en France // Doss. Elevage. 1983. - №2. - P.21 - 30.

248. Mage C., Thibault D. Nouvelles donnes sur les hotes intermediares de F.hepatica // Rev. Med. veter. 1989. - №2. - P. 129 - 133.

249. Maingi N., Mathenge S.N. Acute fatal fascioliasis in sheep in kinangop distrinct of Kenya // Bull. Anim. Health and Prod. Afr. 1995. -№1.-P.21-27.

250. Malone J.B., Loyacano A.F., Hugh-Jones M.E., Corcum K.C. A three-year study on sesonal transmission and control of F.hepatica of cattle in Louisiana // Prevent. Veter. Med. 1984. - №2. - P.131 - 141.

251. Malone J.B., Todd J. Diagnosis of fasciola infections by detection of antigens in feces or intestinal content // Board of Supervisors of Louisiana state University and Agricutural and Mechanical college. 1997. - №7, P.253.

252. Mannstadt M., Sing A., Leitritz L., Brenner-Maucher K., Bogner J. Conservative management of biliary obstruction due to Fasciola hepatica // Clin. Infec. Diseases. 2000. - №5. - P.1301 - 1303.

253. Marrero C.A.R., Santiago N. Evaluation of immunodiagnostic antigens in the excretory-secretory products of F.hepatica // J. Parasitol. -1988. №4. - P.646 — 652.

254. Mas-Coma M.S., Esteban J.G., Bargues M.D. Epidemiology of human fascioliasis: A review and proposed new classification // Bull. World health Organ. 1999. - №4. - P.340 - 346.

255. McGroarty J. A., Hawthorn L. A. and Reid G. Anti-tumor activity of lactobacilli in vitro. // Microbios. Lett. 1988. - Vol. 39. - P. 105 - 112.

256. Mohapatra G., Gupta., Sen P. // Ind. J. med. Res. 1988. - V. 88. - P.308 - 312.

257. Morilla A.C., Paniagua R.Comparison of dot enzyme- linced immunosorbent assay (DOT-ELISA), PHT, and TIA in the diagnosis of natural of experimental F.hepatica infections in sheep // Veter. Parasitol. -1989.-№3.-P.197-203.

258. Nogami H. Влияние левамизола на клетки супрессоры в смешанной культуре // Okayama igakkaizassi. — 1980. — V. 92. — Р.393 -405.

259. Pashuk V., Gusov A. // In Trichinellosis: Proc. of the 5 th Intern. Congr. on trichinellosis, Mexica. 1980. - P. 193 - 197.

260. Pelaez M.P, Sampaio S. Etude des antigenes et anticorps circulants dans la fasciolose animale par les techniques d'immunoelectrodiffusion et de micro-ELISA // Bull. Acad. Veter. Fr. 1988. - №2. - P. 155 - 164.

261. Pfister K. Role of Ig E in fascioliasis // Prev. Veter. Med. 1984. -№1-4. -P.359 -370.

262. Pfister К., Davean С. Partial purifcation of somatic and excretory-secretory products of adult F.hepatica and their application for the serodiagnosis of experimental and natural fascioliasis using an ELISA // Res. inveter. Sc.-1984.-№l.-P.39-43.

263. Raddington J.J., Leiol R.W. The susceptility of the goat to F.hepatica infections // Veter.Parasitol. 1986. - №2. - P.145 - 150.

264. Rapic D., Dzakula W. Efficacy of triclobendasole against F.hepatica in naturally infected sheep // Veter. Arh. 1984. - №1. - P. 13 -18.

265. Reed M.B., Spithill T.W., Stugnell R.A., Panaccio M. F.hepatica: stage-specific expression of novel gene sequences as identified by differential display // Exp. Parasitol. 1998. - №2. - P. 169 - 179.

266. Rholes M.B., Keralis M.B., Staudinger L.A. Immune responses of swine to oral inoculation with embryonated eggs of Ascaris suum // Am. J. Vet. Res. 1982. - Vol. 43. - P. 178 - 183.

267. Rogers L.A. The inhibiting effect of Streptococcus lactis on Lactobacillus bulgaricus. // J. Bacterid., 1928, - P.309 - 321.

268. Rondelaud D., Vignoles P., Dreyfuss G. Fasciola hepatica Linne: Les caracteristiques de Г infestation chez Lymnaea truncatula Muller en relation avec son age lors de l'exposition // Bull. Soc. fr. parasitol. — 1997. -№32.-P. 177-184.

269. Roth R. R., James W. D. //J. Animal Sci. 1988. -P.135-148.

270. Ruiz-Navarette M.A., Morilla A. Characterisation of somatic and excretory-secretory antigens of adult flukes recognized by infected scheep // Rev. latinoamer. microbiol. 1993. - №3. - P. 301 - 307.

271. Said В., Dorchies P. Fasciolose ovine: etude de l'anemie et de la proteinemie an cours d'une infestation naturelle et apres traitement // Rev. Med. Veter. 1986. - №8-9. - P.611 - 615.

272. Salma A.R.M., O'Reilly K.L., Malone J.B. Evaluation of diagnostic monoclonal antibody-based capture enzyme-linced immunosorbent assay for detection of a 26 to 28 kd F.hepatica coproantigen in cattle // Amer. J. Vet. Res. 1998. - №5. - P.533 - 537.

273. Samani F., Mahmoud O.M. Serum enzyme activity and bilirubin concentration in sheep experimentally infected with F. gigantica // J. сотр. Pathol. 1985. - №4. - P.499 - 503.

274. Santiago N., Hillyer G.V.Antibody profiles by EITB and ELISA of cattle and sheep infected with F.hepatica // J. Parasitol. 1988. - №5. -P.810-818.

275. Saxena R., Aruna Fandor V.K. // Asian congress of parasitology, Abstr.- Bombey, 23-26 February. 1978.- P.70.

276. Scheldrake R.F., Husband A.J. Transport of serum IgA into bile of sheep infected with F.hepatica // Veter. Immunopathol. 1988. - 18, №1. -P.29-39.

277. Schnaper M.W., Aune T.M. Supression of immune responsis to shup erythrocytes by the lymphokine soluble immune response suppressor (SIRS) in vivo // J. Immunol. 1986. - V. 137. - N 7. - P.863 - 867. ,

278. Schwacha H., Kenchel M. F.gigantica in the common bile duct: Diagnosis by ERCP // Endoscopy. 1996. - №3. - P.323.

279. Senola H. Changes in agar-gel precipitating antibody titer and clinicobiochemicall findinggs on dairly cows naturally infected with Fasciola sp. // J. Japan veter. Med. Assn. 1985. - №1. - P.21 - 26.

280. Sexton J.L., Wilce M.C.J. Vaccination of sheep against F.hepatica with glutation-S-transferase: identification and mapping of antibody epitopes on a three-sedimentional model of the antigen // J. Immunol. 1994. — №4. — P.1961- 1872.

281. Shimizu A., Hirooka S. Precipitin response of rabbits infected with F.sp. after treatment with rafoxanide // Sc. Rep. Fac. Agr. Kobe Univ. 1985.- №2. P.559- 562.

282. Sinclair I.J., Wassal D.A. Serodiagnosis of F.hepatica infection in cattle // 4 Intern. Simp, of veterinary laboratory diagnosticans. Amsterdam.- 1986. P.88 - 94.

283. Smith G., Grenfell B.T. The influence of water temperature and pH on the survival of F.hepatica miracidia // Parasitology. 1984. - №1. -P.97-104.

284. Soulsby E. Cell mediated immunity in parasitic infections // J. Parasitol. 1979. - Vol. 56. - N 4. - P.534 - 547.

285. Soulsby E., Khoury P. // 3 int. Cong. Parasitol., Munchen, -1974, P.278-283.

286. Soulsby G.L. Immunological unresponsivenese of the neonatal ruminant to gastrointestinal helminths // Isot. and Radiat. Parasitol. Vienna. -1981.- P. 101-108.

287. Stavric S., Gleeson Т. M., Blanchfield B. and Pivnick H. Competitive exclusion isolated from newly hatched chicks by mixture of pure bacterial cultures isolated from fecal and fecal contents of adult birds // J. Food Prot. 1985. - Vol. 48. - P. 778.

288. Vesely L., Birei J., Cobra J. Blood count in lambs with subclinical fasciolosis // 6th Eur. Multicolloq. Parasitol., The Hague, Sept. 7-11, 1992. -Programme and Abstr. The Hague. - 1992. - P.220.

289. Waller P.I. Antihelmintic resistance and future for roundworm control // Veter Parasitol. 1987. - Nr. 2. - P. 177 - 191.

290. Wang В., Chen L., Мао X. Cellmediated immunological reaction by water buffalos and goats infected with F.hepatica // Chin. J. Vet. Sci. -1998. №6. - P.566 - 568.

291. Wang K., Xu L., Gao D., Peng M. Connection of infection by F.hepatica to number of mastocytes in mucose of bileary ducts by ruminants // Xiumu shouyi Xuebao. — Acta vet. et zootech. scin. 1996. — №3. — P.265 - 268.

292. Watanabe К., Hasegawa M. An outbreac of intrauterine infection with Fasciola sp. in cattle // J. Japan Veter .Med. Assn. 1988. - №10. -P.714-719.

293. Wedrychowicz H., Turner K., Pfister K. Local antibodij responses in the bile and faeces of sheep infected with Fasciola hepatice // Res. in vet. Sc. 1984. Vol. 37. - N 1. - P.44 - 51.

294. Wedrychowiec H., Turner K. Local antibody responses in the bile and faeces of sheep infected with F.hepatica // Res. in veter. Sc. 1984. - 36, №1. - P.44 - 51.

295. Wendy I. Muir, Bryden W. L. & Husband A. J. "Intraperitoneal immunization promotes local intestinal immunity in chickens". // J. Avian Pathology. 1995. - Vol. 24. - # 4. - P. 679 - 691.

296. Wescott R.B., Farrell C.J., Shen D.T. Diagnosis of naturally occuring F.hepatica infections in cattle with an enzyme-linced immunosorbent assay//Am. J. Veter. Res. 1984. -№1. - P. 178 - 179.

297. Wijffels G.L., Salvatore L., Dosen M. Vaccination of sheep with purified cysteine proteinases of F.hepatica decreases worm recundity // Exp.Parasitol. 1994. - №2. - P.132 - 148.

298. Wyckoff J.H., Bradley R.E. An optimized enzyme-linked immunosorbent assay for quantitative diagnosis of bovine fascioliasis // J. Parasitol. 1986. - №3. - P.439 - 444. •

299. Wyckoff J.H., Bradley R.E. Diagnosis of F. hepatica infection in beef calves by plasma enzyme analysis // Am. J. Veter. Res. 1985. - №5. — P.1015- 1019.

300. Zhang X., Sun R. Simultaneosus diagnostic of chistosomosis and fascioliasis by cattle and sheep with dot enzyme-linced immunosorbent assay (DOT-ELISA) with antigen SPA// Zhonguo shouyi xuebao. Chin. J. Vet.Sci. - 1999. - №3. - P.273 - 274.

301. Zimmerman G.L., Clark C.R.B. Separation of parasite antigens by molecular exclusion anion exchange, and chromatofocusing utilizing FPLC protein fraction systems // Veter. Parasitol. 1986. - №1-3. - P.217 - 228.

302. Zimmerman G.L., Nelson M.J. Diagnosis of ovine fascioliasis by a dot enzyme-linked immunosorbent assay: A rapid micro-diagnostic technique // Am. J. Veter. Res. 1985. - №7. - P.1513 - 1515.339lb