Фармакология и применение препарата клемацид при лечении кожно-мышечных инфицированных ран у лошадей

Околелова, Анастасия Исааковна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Фармакология и применение препарата клемацид при лечении кожно-мышечных инфицированных ран у лошадей
ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармакология и применение препарата клемацид при лечении кожно-мышечных инфицированных ран у лошадей"

На правах рукописи

ЛЯш/

ОКОЛЕЛОВА АНАСТАСИЯ ИСААКОВНА

ФАРМАКОЛОГИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕПАРАТА КЛЕМАЦИД ПРИ ЛЕЧЕНИИ КОЖНО-МЫШЕЧНЫХ ИНФИЦИРОВАННЫХ РАН У ЛОШАДЕЙ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.04 - ветеринарная хирургия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

1 2 МАЙ 2011

Краснодар - 2011

4846486

Работа выполнена на кафедре ветеринарного акушерства и хирургии ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Родин Игорь Алексеевич

Научный консультант: доктор ветеринарных наук,

член - корреспондент РАСХН Антипов Валерий Александрович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук

Богосьян Адам Аведисович

доктор ветеринарных наук Анников Вячеслав Васильевич

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Воронежский

государственный аграрный университет им. К.Д. Глинки»

Защита диссертации состоится « \Ь » ихСЛ- 20! 1 года в « 1200 » часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, РФ, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

Отзывы на автореферат просим высылать по адресу: 350044, РФ, г. Краснодар, ул. Калинина, 13.

Автореферат разослан « 12»Ccnp<2s\Z- 2011 года и размещён на сайте: http: // www.kubsau.ru

1. ОШЦЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность темы. Травматизм в спортивном коневодстве является одной из серьёзных проблем современной ветеринарии и наносит значительный экономический ущерб животноводству (К.И.1 Накалов, 1972: А.Ф.Бурдешок, 1976; И.С.Панько, 1982; В.А.Лукьяновский, 2003: Э.И.Веремей, В.А.Журба, 2004; R.K.astner. H.Schmidt. 2001).

Опыт борьбы с травматизмом животных и прежде всего с открытыми механическими повреждениями убедительно показал, что основная роль при этом отводится лекарственной терапии, позволяющей значительно снизить наносимый экономический ущерб. Для этого используют различные фармакологические средства. Наиболее широкое распространение из них на сегодняшний день получили мази и линименты на основе антибиотиков, сульфаниламидов, нитрофуранов. Однако их эффективность в последнее время значительно снизилась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности после многократного пассажирования и усиления их вирулентных свойств. Устойчивые формы возбудителей, в качестве новой биологической популяции циркулируют в природе и инфицируют животных, что существенно затрудняет их терапию (Г.Н.Васин, 1984; А.Н.Елисеев, 1993; Х.Амсриканов, 1999; И.НМяхнов, 2007; С.Д.Панасюк, 2007: D.Baggot, 1976; G.Rowlands ct.al. 1985; J.T.Sohrt. 2000; W.Kehler, T.Gerwing, 2004 и др.).

С рассматриваемых позиций значительный практический интерес представляют антисептические средства, содержащие в качестве действующих веществ соединения из группы поверхностно-активных веществ, в частности, четвертичные аммониевые соединения (ЧАС) (В.А. Антипов, И.С. Жолобова, 2004; ГШ. Яковенко, 2005).

Они обладают иным, чем антибиотики и сульфаниламиды механизмом действия на микробную клетку. Лекарственная устойчивость к ним развивается медленно и не достигает высоких пределов. Установлены выраженное лечебное и профилактическое действие поверхностно-активных веществ и экономическая обоснованность их применения при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных и птиц. Это делает разработку и внедрение новых лекарств из группы поверхностно-активных веществ, в частности, четвертичных аммониевых соединений актуальной научной проблемой. К числу таких средств, прежде всего, относят новые препараты: этоний, тионий, димеколии, бромбиоцид, обладающие ярко выраженными бактериостатическими и бактерицидными свойствами (И.И.Сидорчук, Е.И.Тищенко, 1979; В.А.Березовский, 1983; Е.Б.Иванова, 2000).

Настоящая работа посвяшена проведению исследований по разработке оптимальной лекарственной формы и определению режимов применения нового лечебного средства наружного применения при инфицированных кожно -мышечных ранах у лошадей. Данная тема является разделом общей тематики кафедр факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Кубанского го-

су дарственного аграрного университета но заданию 4.12 (№ госрсгистрации 01910049842).

1.2 Цель и задачи исследования. Основная цель настоящей работы состоит в том, чтобы на основе различных сторон этиопатогенеза открытых механических повреждений, усовершенствовать лечебно - профилактические мероприятия при кожно - мышечных ранах у лошадей, путём разработки нового лекарственного средства наружного применения. Исходя из цели исследования, были поставлены следующие основные задачи:

- уточнить некоторые аспекты патогенеза открытых механических повреждений, а также направления терапии указанной патологии у лошадей;

- разработать эффективный, экологически безвредный препарат для терапии инфицированных кожно - мышечных ран у лошадей;

- изучить основные токсикологические и фармакологические свойства клемацида:

- разработать и внедрить в практику животноводческих хозяйств новый метод лечения лошадей с открытыми механическими повреждениями.

1.3 Научная новизна. Проведена разработка, фармако-токсико-логическая оценка и научное обоснование применения мази при открытых механических повреждениях у лошадей в сравнительном аспекте с другими препаратами, применяемыми при инфицированных кожно - мышечных ранах. Разработана схема лечения при ранениях лошадей.

1.4 Практическая значимость. На основании проведенных исследований предложен новый эффективный препарат - клемацид для лечения инфицированных кожно - мышечных ран у лошадей путем наружного его применения.

1.5 Основные положения, выносимые на защиту.

- результаты морфологических и бактериологических исследований кожно -мышечных ран;

- результаты клинического проявления раневого процесса;

- разработка и фармако - токсикологическая оценка препарата клемацид для лечения инфицированных кожно - мышечных ран у лошадей:

- комплексный метод лечения лошадей с открытыми механическими повреждениями;

1.6 Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на научно - производственных конференциях профессорско -преподавательского сойтава Кубанского государственного аграрного университета (2007 - 2009 гг.), учёных советах факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ (2006 • 2009 гг,), на международной научно - практической конференции «Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней домашних животных» (г. Воронеж - 2006г.), на международной научно - практической конференции «Трансферт инновационных технологий в животноводстве» (г. Орёл -2008г.), на XIII московском международном ветеринарном конгрессе (г. Москва -20091.). на международной научно практической конференции посвященной 35 -летию факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар - 2009).

1.7 Публикации. Оснонные материалы диссертации опубликованы в четырёх научных статьях и бюллетене изобретений, в том числе в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК России - «Труды Кубанского государственного аграрного университета».

1.8 Структура и объём диссертационной работы. Диссертация изложена на 133 страницах машинописного текста в компьютерном варианте и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследований и их обсуждения, выводов, практических предложений, библиографического списка и приложений. Список литературы включает 137 источников, в том числе 24 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 31таблицей, 10 рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась на кафедре ветеринарного акушерства и хирургии Кубанского государственного аграрного университета в 2006 - 2009 гг. Морфологические исследования проводились на кафедре анатомии с/х животных Кубанского ГАУ при техническом содействии доцента В.М. Кравченко, фармако-токсикологические исследования проведены при участии доктора ветеринарных наук И.С. Кобы. Клиническую часть проводили на лошадях, принадлежащих учебно - опытному хозяйству «Кубань» и конюшне Прикубанского казачьего куреня г. Краснодара.

Анализируя причины, клиническую характеристику и лечение открытых механических повреждений у лошадей в указанных хозяйствах учитывали результаты ранее проводимых лечебно-профилактических мероприятий.

Для изучения распространения и клинического проявления инфицированных кожно - мы шечных ран у лошадей на двух конюшнях провели хирургическую диспансеризацию (по В.Н. Авророву, 1984) 512 лошадей.

Опыты проводили на животных будёновской и тракененской пород в возрасте 3-8 лет с массой тела от 350 до 550 кг клинически здоровых и с открытыми механическими повреждениями.

Для нахождения параметров острой токсичности препарата использовали метод Deichmann & Le Blanc (¡943), позволяющий использовать небольшое количество животных.

В опыте участвовало 18 крыс, которые были отобраны по методу пар-аналогов. Животным вводили определенную дозу препарата per os после чего за ними велось постоянное наблюдение.

Субхроническую токсичность определяли по методу Lim (1961). Изучение субхронической активности проводилось на 30 белых крысах подобранных по принципу пар-аналогов. Препарат задавался ежедневно в течение 28 дней в дозах от LD5B. Затем рассчитывали коэффициент кумуляции по формуле:

K(k)=LD5o (при многократном введении)/ LD;0 (при монократном введении).

Изучение аллергизирующего действия клемацида проводили путем воспроизведения местной аллергической реакции методом скарифицированного теста.

На первом этапе исследований в хозяйствах определяли общее состояние животных и формировали их по принципу аналогов в специальные группы. За животными осуществляли клинические наблюдения на всех стадиях выращивания. При этом особое внимание уделяли животным, у которых наблюдались открытые механические повреждения.

Для определения видового состава микрофлоры раневого отделяемого нами было исследовано 40 проб от раненых животных. Взятие проб проводили по методике H.H. Михайлова, М.А. Лучко и З.С. Коновой (1967). Для этого пробу над спиртовкой переносили в стерильные пробирки с физиологическим раствором (0,85%-ным водным раствором хлорида натрия). Пробы экссудата помещали в термос со льдом и в течение двух часов доставляли в лабораторию микробиолог ии Краснодарского НИВИ, где проводили исследования микрофлоры.

Влияние лечебного действия клемацида на свежие инфицированные раны у собак проводили в ветеринарной клинике «Айболит» г.Краснодара. Для этого обрабатывали раневую поверхность клемацидом.

Перед этим брали стерильным тампоном смыв с раневой поверхности. Затем проводили посевы на МПБ и МПА. Причем пробы брали у раненых животных в различных стадиях грануляции. При этом обращали внимание на время заживления ран, качество грануляционного процесса, и по какому натяжению происходит заживление. В качестве контрольного препарата использовали 5% линимент синтомицина.

Для определения видового состава микрофлоры в ране стерильным тампоном брали смыв. Пробу над пламенем спиртовки переносили в стерильные пробирки с физиологическим раствором (0,85%-ным водным раствором хлорида натрия). Затем проводили посевы на МПБ и МПА.

Из взятых проб делали посевы на МПБ, МПА, МПА с 5% дефибрини-рованной крови барана. МГ1А с 7,5% натрия хлорида, МПА с 1% глюкозой, среды Эндо, среду Сабуро, цветные среды Гиса. Чашки Петри с посевами помещали в термостат при +38°С для культивирования микроорганизмов.

Культуральные свойства определяли по внешнему виду колоний микроорганизмов, характеру роста на питательных средах. Учитывали форму колоний, размер, цвет, прозрачность, характер поверхности. При посевах на кровяной агар учитывали наличие или отсутствие зоны гемолиза.

Идентификацию проводили с учетом морфологических, культуральных и биохимических свойств микробов по общепринятым методикам (М.А. Сидоров, 1982).

Патогенность изучали при внутрибрюшинном заражении белых мышей массой 16-18г I млрд взвесью микробных клеток в мл смытой с агаровой культуры в дозе 0,2-0,5мл (200-500млн микробных клеток).

Видовую принадлежность бактерий устанавливали, руководствуясь «Кратким

определителем бактерий Берги (1980)». грибов - согласно методике

H.А.Спесивпевой (1964).

Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводили на среде А1В путем наложения стандартных дисков с антибиотиками. Антибактериальные и антимикозные свойства нового препарата клемацид изучали луночным методом и последовательных серийных разведений в МПБ.

Для гистологического исследования у животных с открытыми механическими повреждениями (с использованием местного обезболивания) иссекали кусочки мягких тканей в месте перехода пораженной ткани в здоровую размером

I,0 х 1,5 х 2,0 см. Отобранный материал фиксировали в 10% нейтральном формалине в течение 3 дней. В дальнейшем зафиксированную ткань отмывали от фиксирующей жидкости в проточной воде в течение суток, проводили через спирты и хлороформ и заливали в парафин по общепринятой методике. Из задетого в парафин материала готовили срезы 5 - 6 мкм, которые наклеивали на предметные стёкла и окрашивали гематоксилином, эозином и пикроиндигокармином. Окраску гематоксилином и эозином проводили по общепринятой методике. Окраску пикроиндигокармином проводили но следующей схеме:

-парафиновые срезы, наклеенные на предметные стёкла, депарафинизировали в двух ксилолах (на 2-3 минуты в каждый);

-ксилол смывали последовательным погружением в 96% и 70% спирт (на 2-3 минуты в каждый);

-промывали стёкла в воде в течение 2-3 минут; -наносили на срез квасцовый гематоксилин на 1-2 минуты; -промывали стёкла в водопроводной воде (3-5 минут);

-выщелачивали срезы помещением их в щелочную воду (несколько капель нашатырного спирта на 100 мл воды) до посинения среза; -промывали стёкла в водопроводной воде (3-5 минут);

-помещали стекла в ёмкость с раствором пикроиндигокармина на 1-2 минуты; -промывали стёкла в водопроводной воде (3-5 минут);

-обезвоживали срез последовательным помещением в 70% и 90% спирт (на 3-5 минут в каждый):

-просветляли срез в карбол-ксилоле (3-5 .минут); -помещали в ксилол (3-5 минут); -заключали в канадский бальзам.

Изучение гистологических срезов производили с помощью бинокулярного микроскопа «Микмед» («Петролазер») с использованием окулярных насадок с увеличением на 15 и 10 и объективов с увеличением на 10, 20, 40.

При гематологических исследованиях определяли содержание гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов в 1 мкл крови и в окрашенных мазках определяли процентное соотношение разных форм лейкоцитов (лейкограмма).

Содержание гемоглобина в свежеполученпой крови определяли по методу Сали. Количество эритроцитов и лейкоцитов определяли при прямом подсчете в счетной камере с сеткой Горяева.

Лейкограмму выводили (11.3. Клечиков, 1967; А.А. Кудрявцев. 1974) на основании процентного соотношения различных форм лейкоцитов в мазке крови. Мазки готовили из свежегюлучсшюй крови, высушивали, фиксировали абсолютным метиловым спиртом и окрашивали по Романовскому-Гимза. Просматривали мазки при помощи светового микроскопа под иммерсионной системой (объектив х90, окуляр х10). Подсчитывали лейкоциты по методу Филипченко в разных частях мазка.

Кровь для биохимических исследований брали дважды —в первый раз при постановке животного на курацию, а второй - при выздоровлении животного.

Взятие крови проводили до утреннего кормления из ярёмной вены животного, предварительно шерсть животного в месте пункции выстригали, а кожу дезинфицировали 70° спиртом. После взятия, кровь на несколько часов оставляли в начале при комнатной температуре, а затем при температуре 2 - 4°С для отделения сыворотки. Сыворотку сливали и определяли следующие показатели:

1. Содержание общего белка и белковых фракций;

2. Содержание каротина.

Определение содержания общего белка проводили по методу Рейсса на рефрактометре ИРФ-22. Метод основан на определении светопреломляющей способности сыворотки крови в сравнении с дистиллированной водой.

Содержание белковых фракций (альбумины, а, р, у- глобулины) в сыворотке крови определяли методом Олла и Маккарда в модификации (Корнока,1980).

Содержание каротина определяли по экспресс-методу А.И. Дубровина (в модификации Б.Ф. Коромыслова и Л.А. Кудрявцевой, 1979). Вначале при помощи 96" этилового спирта и бензина осаждали белки сыворотки крови и разделяли ее на фракции. Уровень содержания каротина в верхнем, просветлённом, слое определяли при помощи ФЭК - М, с синим светофильтром.

Площадь раны измеряли на 3, 7, 14, 20-е сутки по методу планиметрического теста Л.Н. Поповой (1942), величину относительного уменьшения вычисляли по формуле В.С. Песчанского (1976): Бо^&х 100,

Бо

где Эо - начальная шюшадь раны, мм2, - её площадь в день измерения, мм2

Дополнительно исчисляли скорость заживления раны в сутки по формуле А. Е Троица (1984): У = 8о^81,

где Бо - начальная площадь раны, мм2,

51 - её плошадь в день измерения, мм2,

N - число дней лечения.

Для вычисления площади раневой поверхности применяли планшет, представляющий собой плотную целлофановую пластинку с сеткой из параллельных линий, с расстояниями между ними 0.5 см (В.Я. Кушнира, 1990). На рану накладывали стерильную целлофановую плёнку и обрисовывали её копгур. Под плёнку с контуром подкладывали планшет с сеткой и измеряли сумму длин

отрезков, расстояние между которыми составляло 1 см. Ошибка не превышает 0,5 -1%

Полученные экспериментальные данные были подвергнуты статистическому анализу по методике П.Л. Плохинского (1978).

Экономическую эффективность лечебно - профилактических мероприятий рассчитывали по «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (1997).

¿СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Изучение фт ико-химнчсских свойств и стабильности клемацила 3.1.1. Физико-химические свойства

Клемацид - препарат, в состав которого входит бромбиоцил -бис - четвертичное аммониевое соединение и медицинский клей БФ - 6. стойкий при хранении в обычных условиях в защищенном от света месте, не горюч, не пожароопасен. Не обладает токсичным и раздражающим действием в рекомендуемых для применения концентрациях.

Раствор клемацида в рекомендуемой концентрации (1%) безвреден и не вызывает раздражения при длительном применении.

Основным активно действующим компонетчзм клемацила является бромбиоцид - бис - четвертичное аммониевое соединение с температурой плавления 138°С - 142°С.

Препарат получают путём растворения кативного препарата в медицинском клее БФ - 6 в пропорции 1:100.

Физико-химические свойства клемацила должны соответствовать ТУ 00200670-232-05.

3.1.2. Изучение стабильности препарата клемацид

Опыты по изучению стабильности препарата проводили согласно «Временной инструкции по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основании м етода «ускоренного старения». (МВ СССР №42-2-82., 1983).

Перед началом опыта флаконы с клемацидом выдерживали 41 сутки в холодильном шкафу при температуре +5 - +10°С. Затем препарат подвергали «ускоренному старению» 15 суток в термостате при температуре 38°С.

Внешний вид и цвет определяли органолетггическим методом: 50 мл препарата наливали в колбу (К„-1-250-24/29 по ГОСТ 25336-82) и визуальио определяли внешний вид и цвет. Помещение, в котором проводятся органо-лептические испытания, а также посуда должны быть без посторонних запахов. Освещённость рабочих мест не должна быть менее 500 лк рассеянным светом люминесцентных ламп но ГОСТ6825-91.

Определение запаха проводили по ГОС Т 12576-89.

3.2. Токсические свойства препарата клсмацид 3.2.1. Изучение острой токсичности юс манила

Изучение острой токсичности проведено на белых мышах и крысах с использованием стерильного препарата клсмацид.

Постановку опытов осуществляли в соответствии с «Методическими рекомендациями по изучению общетоксического действия лекарственных средств». Для токсикологических исследований использовали здоровых половозрелых животных - белых мышей и крыс. Группы комплектовали с учётом пола и живой массы. Перед началом исследований животных выдержали на карантине в течение 12 дней, а перед введением препарата подвергали суточной депривации. Препарат изучали в 6 сериях опытов.

В первой серии опытов острая токсичность клемацида была испытана при пероральном способе введения препарата белым мышам. Было сформировано 6 групп животиых по 6 особей в каждой. Препараты вводили однократно, утром, в дозах 2,5; 5; 10; 15; 20; 25 мл /кг массы тела. В течение первых суток экспериме1гга вели непрерывное наблюдение.

Регу;1ярно фиксировали общее состояние животных, особенности их поведения, интенсивность и характер двигательной активности, наличие и характер судорог, координации движений, тонус скелетных мышц, реакцию на тактильные, болевые, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыхательных движеиий, ритм сердечных сокращений, состояние волосяного и кожного покрова, окраску слизистых оболочек, размер зрачка, положение хвоста, количество и консистенцию фекальных масс, частоту мочеиспускания и окраску мочи, потребление корма и воды, изменение массы тела.

В результате исследований установлено, что гибели животных при всех дозах за весь период наблюдения за животными на протяжении 14 дней не наблюдалось.

При введении препарата в дозах 0,05-0,3 мл (мышам) не обнаружено какого-либо токсического действия.

С увеличением дозы для мышей до 0.4 мл при внутреннем применении в течение 3-4 часов отмечались первичные клинические признаки интоксикации. Первичное клиническое проявление токсического действия клемацида проявлялось единичными тетаническими судорогами слабой степени, угнетением, снижением двигательной активности. Гибели животных не наблюдалось в течение всего периода наблюдения.

Во второй серии опытов острая токсичность клемацида была испытана при пероральном способе введения препарата белым крысам. Было сформировано 6 групп животных по 6 особей в каждой. Препараты вводили однократно, утром, в дозах 2,5; 5; 10; 15; 20; 25 мл /кг массы тела. В течение первых суток эксперимента вели непрерывное наблюдение.

При введении препарата в дозах 0,5-5,0 мл (крысам) не обнаружено какого-либо токсического действия.

В третьей и четвёртой серии опытов проведено изучение острой токсичности препарата клемацид при внутримышечном введении белым мышам и белым крысам в дозах 5; 10; 15; 20; 25; 30 мл /кг массы тела. Для этого было сформировано 6 групп животных, по 6 особей в каждой.

Установлено, что однократное применение препарата в максимально допустимых дозах не вызывает гибели белых мышей и крыс; при внутримышечном введении, клиническая картина отравления слабо выражена.

При внутримышечных инъекциях доза препарата вводилась дробно в несколько мест. В двух случаях инъекций клемацида в дозе 25 и 30 мл/кг у белых крыс на месте введения образозывался асептический абсцесс. Это следует учитывать при назначении препарата в режиме высоких доз.

Умеренная степень интоксикации, проявляемая соответственно для крыс в дозе 30 мл/кг массы тела и для мышей в дозе 20 мл/кг массы тела характеризовалась мышечным тетанусом, который через 40-60 мин сменялся общим угнетением. Выраженная клиника интоксикации наблюдалась у мышей в дозе 30 мл/кг. Множественные спастические сокращения мышц, непрекращающийся тетанус в течеиие 2-3 часов, напряжение брюшной стенки, в дальнейшем угнетение. Общее угнетение и снижение двигательной активности у животных в ответ на введение препарата сохранялось в течение 72 часов после приёма препарата.

Патоморфологическое изучение по окончании эксперимента не выявило нарушений в структурной организации внутренних органов.

В пятой серии опыта было сформировано 10 групп, по 6 животных в каждой, подобранных по принципу парных аналогов. Токсикометрическую оценку клемацида определяли при внутрибрюшинном введении белым крысам, в объёме 5,0 мл. Дозу препарата доводили до нужного объёма стерильным изотоническим раствором натрия хлорида. За животными опытных и контрольных групп проводили ежедневное клиническое наблюдение в течение 14 дней.

Особое внимание уделяли развитию признаков токсикоза, оценивали их тяжесть, продолжительность, время выздоровления или гибели животных.

Полученные данные позволили определить параметры острой токсичности клемацида. Для белых крыс МИД клемацида составляет 13,0 мл/кг, ЬЭ|6 - 14,5 мл/кг, Ы)50 - 16,54 мл/кг, Ы)84 - 19,8 мл/кг, ЬО,00 - 22,0 мл/кг.

В шестой серии токсикометрической оценки клемацида, препарат вводили впутрибрюшинно в объёме для белых мышей - 1,0 мл. Дозу препарата доводили до нужного объёма стерильным изотоническим раствором натрия хлорида. Было сформировано 10 групп белых мышей, по 6 особей в каждой. За животными опытных и контрольных групп проводили ежедневное клиническое наблюдение в течение 14 дней.

Полученные данные позволили определить параметры острой токсичности клемацида. Для белых мышей МИД клемацида составляет 12.0 мл/кг, Ь016-12,4 мл/кг. 1Х>50-14,8 мл/кг, - 17,9 мл/кг, Ь0,00-20,0 мл/кг.

Клинические признаки острого отравления клемацидом у лабораторных животных при внутрибрюшинном введении препарата сходны с предыдущими опытами.

11атолого-анатомическая картина вскрытия павших животных показала поражение лёгких, они гиперемированы, отёчны, сердце наполнено несвер-нувшейся кровыо. отмечается перикардит, в [рудной полости - геморрагический экссудат, печень увеличена, покрыта кровоизлияниями, селезёнка набухшая, переполнена кровыо, мелкие одиночные кровоизлияния на брыжейке. Патогистологическое исследование свидетельсвует о характерной клинике отравления: миокард, печень и селезёнка в состоянии белковой дистрофии, в почках паренхиматозный нефрит и эпителиальный некроз канальцев.

3.2.2. Изучение субхронической токсичности

Субхроническую токсичность изучали на 30 белых крысах, подобранных по методу пар-аналогов, в течение 28 дней. Препарат задавался ежедневно в дозах от иЭ50 (2025 мг/кг массы тела).

За животными велось ежедневное наблюдение, учитывали их общее состояние и аппетит. Также проводились морфологические исследования крови перед каждым повышением дозы препарата. Гибель животных регистрировали на 16, 18, 19. 20. 22, 24, 26, 27 сутки от начала опыта.

В 4-й период погибло 3,3% животных - 1 крыса, на 16-е сутки. В 5-й период погибло 20% животных - 2 крысы на 18-е сутки, 3 крысы на 19-е сутки, 1 крыса на 20-е сутки. В 6-й период погибло 10% крыс от общего числа крыс до начала опыта. 1 крыса погибла на 22-е сутки, 2 крысы на 24-е сутки. В 7-й период также погибло 10% животных, 2 крысы на 26-е сутки и 1 крыса на 27-е сутки.

ГО50 при многократном скармливании препарата равна суммарной дозе препарата за 1-5 периоды опыта (800+1200+1760+2720+4000) = 10480 мг/кг массы тела животного.

Коэффициент кумуляции (Кк) при многократном применении препарата клемацид рассчи тываем по формуле Кагана 10.С. и Станкевича В.В.(1964):

К(к)=ЬО50 хроническая/ ЬО50 острая К„=10480мг/кг: 2025мг= 5,18

Коэффициент кумуляции равен 5,18, что относит препарат к 4-ой группе -слабо выраженная степень кумуляции (по Л. И. Медведю, 1964).

3.2.3. Изучение аллергизирующего действия клемацида

Аллергенные свойства клемацида, изучали на 22 белых крысах массой 200 -220 г. В опытах были использованы животные обоих полов. Число животных в группах составляло по 11 особей.

Животным опытных групп на выстриженные участки кожи боковой поверхности, ближе к середине туловища, наносили по 0.5 мл клсмацида па площадь 5 см2, то ссть плотность нанесения препарата составляла 0,1 мл /см2. Вещество наносили на протяжении трёх недель по 6 раз в неделю. Первое тестирование путём нанесения клемацида в дозе в 5 раз превышающую сенсибилизирующую проводили после ¡0 аппликаций, затем - через 14 и 20 суток от начала аппликации. Реакцию кожи учитывали но шкале оценки проб (Суворов C.B., 1974). Животным контрольной группы применяли только разрешающие дозы.

В эксперименте установлено, что 20-ти кратная аппликация препарата не вызывает явлений сенсибилизации.

Экспериментальные данные свидетельствуют об отсутствии аллергенных свойств исследуемого препарата.

3.2.4. Эмбриотоксичсскнс п тератогенные свойства при применении

клемацида

Эмбриотоксические и тератогенные свойства клемацида изучали по методике А.П. Шицковой с соавт. (1977) на 12 самках белых крыс массой 180.02000 г. Фазу полового цикла устанавливав путём исследования вагинального содержимого. Первым днём беременности считали день обнаружения спермиев после подсадки самцов к самкам. Животные были разделены на три группы: контрольную и две опытные. Крысам первой опытной группы на пятый день беременности (период имплантации) и второй опытной группы на 10 день беременности (период органогенеза) наносили клемацид аппликационным способом в дозе 5 мл/кг массы тела.

Для выявления повреждающего действия препарата на плод половину самок убивали на 19-20 день беременности. Проводили осмотр матки, плацент и плодов, подсчитывали количество жёлтых тел беременности, оценивали равномерность расположения плодов в рогах матки. Раннюю и позднюю резорбцию, общую эмбриональную смертность, выживаемость подсчитывали по формулам, предложенным A.M. Малашенко и И.К. Егоровым (1977). В целях выявления патологии внутренних органов эмбрионов материал фиксировали в жидкости Боуэна и 70° спирте. Аномалии скелета выявляли по методу Даусона (1984).

Критериями оценки эмбриотоксического и тератогенного действия препарата служили показатели гибели зародышей на пред- и постимпланта-ционных стадиях развития (эмбрион&тьный эффект), наличие аномалий развития внутренних органов и скелета (тератогенный эффект), уровень плодовитости, масса зародышей.

Существенных различий в плодовитости крыс опытных и контрольной [-руин не установлено. Среднее количество плодов на самку в контрольной группе составило 9.7+0,5, а у крыс, получавших клемацид в дозе 5 мл/кг массы тела на 5 и 10 дни беременности 9,6+0,4 и 9,6+0,3 соответственно.

Крысята, рожденные от самок опытных групп, не отличались от крысят контрольных самок. Проведённые морфологические исследования показали

отсутствие аномалий развития внутренних органов и скелета плодов, рожденных от крыс опытных групп.

Таким образом, клемацид для накожных аппликаций в дозе 5 мл/кг массы тела не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия.

3.3 Фармакологические свойства препарата клемацид 3.3.1. Влияние клемацида па показатели красной крови

С целью определения вляния нового препарата клемацид на показатели красной крови было сформировано 3 группы животных по 6 голов в каждой. В первой (опытной) группе животным назначали клемацид однократно внутримышечно в дозе соответствующей 75 мг/кг массы тела. Во второй группе животным применяли клемацид в той же дозе, однократно путём накожной аппликации. Третья (контрольная) ipynria животных получала только обычный рацион. Крысы всех трёх групп находились в одинаковых условиях содержания и кормления. За животными вели ежедневные клинические наблюдения. На 5-й день после применения клемацида у всех крыс брали кровь для исследований, в которой исследовали показатели красной крови.

В результате проведённых исследований выявили, что применение клемацида белым крысам способствует повышению количества эритроцитов и повышения содержания в них гемоглобина. В первой опытной группе количество эритроцитов составило 7,3 х I012 /л, во второй опытной группе количество эритроцитов составило 7,2х1012 /л. При этом характерно повышенное содержание гемоглобина в крови, которое в опытных группах было достоверно выше контроля. Анализ цветного показателя также свидетельствует о благоприятном влиянии клемацида на красную кровь.

3.4 Изучение терапевтической эффективности препарата клемацид при лечении раненых животных 3.4.1. Изучение биологической активности клемацида

Антимикробные свойства клемацида проверяли при помощи следующих методов: диффузии в агар с использованием лунок и последовательных серийных разведений.

Изучение антимикробной активности клемацида проводили в сравнительном аспекте со следующими препаратами: йодинол, ривициклин, стрептомицин, левомицитин, цефазолин. Опыт проводили в пяти повторностях, используя клемацид выработанный в одной серии. В качестве тест-культур использовали одно-двухдневные полевые очищенные изоляты микроорганизмов, выделенные из раневого отделяемого лошадей с инфицированными кожно - мышечными ранами.

Новый препарат обладает выраженным бактериостатическим действием по отношению к культурам золотистого стафилококка (Staph, aureus), кишечной

палочки (Ii coli), протея вульгарного (Р. vulgaris), ), синегнойной палочки (Ps. aerugenosa).

Таким образом, культуры условно-патогенной микрофлоры оказались высоко чувствительны к клемациду и показали зону задержки роста в пределах ас 20,1 до 35,5 мм. что превосходит применяемые препараты: йодинол. ринициклин. стрептомицин, лсвомицетин, цефазолин.

При определении бактерицидной активности клемацида, в жидкой питательной среде делали его дробные (кратные) разведения в МИН. Ii бульон, содержащий препарат в убывающей концентрации (разведение от 1:2 до 1:256) вносили тест-культуры. Микробная нагрузка составляла 1млрд. микробных тел в 1мл. Пробирки с питательной средой инкубировали в термостате в течение 18-20 часов при температуре 37°С. Активность препарата определяли по интенсивности задержки роста и ингибиции микроорганизмов. За минимальную бактериостатическую концентрацию принимали (МБсК) - наименьшее количество препарата задерживающего рост колоний м икроорганюмов.

Клемацид обладает выраженным антимикробным действием в разведениях от 1:2 до 1:32 по отношению к культуре Staphylococcus aureus. МБцК. для Е. coli и Proteus v ulgaris составила 1:16, а МБсК - обнаружена при разведении препарата 1:32.

Таблица I - Чувствительность микроорганизмов к клемациду

Наименование Действие Разведение препарата

культур 1:2 1:4 | 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256

Staphylococcus бактериц. - - - - - + + +

aureus бактериост. - - - - + + f

Escherichia coli бактериц. _ - - - + + т +

бактериост. - - - + + +

Proteus vulgaris бактериц. - - + + г +

бактериост. - I - + + +

Примечание:" -" - отсутствие роста," +" - наличие роста.

Таким образом, клемацид обладает высокой антибактериальной активностью против основной условно-патогенной микрофлоры, являющейся одним ш этиологических факторов инфицированных ран.

С целью сравнения особенностей формирования устойчивых вариантов микроорганизмов, к клемациду, а также к широко используемым антибиотикам была проведена серия пассажей 4 тест-культур в присутствии левом ицетина.

При этом установлено, что формирование устойчивых вариантов условно-патогенных бактерий к этому антибиотику происходило уже к 10-му пассажу.

Только S.epidermidis к 15 пассажу проявлял некоторую чувствительность к антибиотику (зона задержки роста 3,4 мм против 23,i в I пассаже, для левом ицетина. Также Ii coli к 15 пассажу была чувствительна к левомицетину ( 4,6

мм против 22,4 мм в 1 пассаже). При этом S.aureas уже к 5 пассажу резко снижал уровень чувствительности к антибиотику и был устойчив к нему после 10 пассажа. Ьактерии кишечной группы (H.coIi) были отнесены к умеренно -чувствительным.

При изучении развития устойчивости этих же тест-культур к клемациду установлено, что культура P. vulgaris смогла выработать устойчивость к 20 пассажу, у всех других испытуемых микроорганизмов к этому времени чувствительность оставалась довольно высокой. Характерно, что начальные уровни чувствительности патогенных и условно-патогенных бактерий также были заметно выше, чем к антибиотику.

Не наблюдалось также и скачкообразного изменения чувствительности.

3.4.2. Определение противовоспалительного действия и влияния клемацида на регенеративные процессы

Для выяснения противовоспалительного действия было сформировано 4 группы лабораторных животных: но 3 морские свинки в каждой группе; из них 2 опытные и 2 контрольные группы.

Животным первой группы после депиляции в области спины наносили три капли ксилола (М.И. Кондрахин, Э.К. Шульц, 1972), спустя один час на обработанный ксилолом участок кожи диаметром 10 мм наносили 3-4 капли клемацида.

У животных второй опытной группы после депиляции в области спины вызывали термический ожог кожи диаметром 10 мм путем воздействия нагретого металлического предмета до 60-70°С и сразу же на поражённый участок кожи наносили несколько капель клемацида.

Животным 1 и 2 контрольных групп, экспериментальное воспаление вызывали также, как и у животных первой и второй опытной группы.

У животных первой опытной группы в течение первых суток отмечена легкая гиперемия без отёчности; на второй и последующие дни признаков воспаления кожи в зоне воздействия химическог о фактора не обнаруживали. В то же время у животных 1 ко!ггрольной группы в течение первых суток на местах химического воздействия на кожу выявляли гиперемию и отёчность, наиболее выраженную через 6-10 часов после раздражающего действия химического агента. На второй день отмечались более выраженные признаки воспаления в зоне поражения (гиперемия, отёчность. повышение местной температуры, болез ценность).

У животных второй опытной группы в течение первых суток после термического воздействия обнаруживали гиперемию кожи, незначительную отёчность в зоне поражения. К концу вторых суток признаки воспаления исчезли; на 3-5 день признаков дерматита не выявили. В то же время у животных 2 контрольной группы в течение первых 2-3 часов после воздействия термического фактора выявили гиперемию, болезненность, повышение местной температуры и отёк кожи на месте поражения. В течение последующих 12 часов воспалительные

явления прогрессировали, у одного животного появились серозные пузыри. Через сутки после ожога отмечали выраженный отек. В последующее время ■экссудативные явления спадали, на 3-5 дни в обожжённой области появились некротические участки с их отторжением к 6-8 дню.

Полученные данные позволяют сделать заключение о том. что препарат обладает выраженным противовоспалительным действием.

Изучение влияния клемапида па течение регенеративных процессов осуществляли в сравнительном аспекте модели экспериментально воспроизведённых инфицированных кожно-мышечнмх ран у 20 молодых белых крыс массой 80-100г, взятых из одних пометов и равномерно распределенных в опытную и контрольную группы. Им наносили кожно-мышечные раны без соблюдения правил асснгики. На спине всех животных тщательно выстригали участок 2x2 см. Затем трафаретом (острыми краями пробочного пробойника) намечали коотуры раны диаметром 10 мм и вырезали глазными ножницами лоскут кожи и мыши.

Десяти опытным крысам па раневую поверхность наносили клемацид, а 10 контрольным - 5% линимент синтомицина. После этого раны у контрольных животных покрывали марлевой салфеткой, поверх которой накладывали лоскут марли, и её края приклеивали к шерсти животного густым коллодием. Для более надёжной фиксации повязки ее укрепляли бинтом. Перевязки проводили каждый день. Опытным животным (накожная аппликация клемацида) повязка не применялась.

О ходе заживления экспериментальных ран судили по следующим показателям: время проявления грануляций в ране, закрытие дна раны грануляциями, качество грануляций, ход эпигслизадии, состояние тканей вокруг раны. Как показали наблюдения, у животных опытной группы заживление ран (выполнение их грануляцией, исчезновение гиперемии, отёчности и боли, эпигслизация с образованием рубца) наступало в среднем на 6 дней раньше, чем у животных кот-рольной группы.

Полученные данные позволяют сделать заключение о том, что клемацид благотворно влияет на регенеративные процессы, стимулируя их.

3.4.3. Лечебная эффективность клемацида приоткрытых механических повреждениях у лошадей

При изучении лечебного действия клемацида на случайные инфицированные раны у собак, под наблюдением находилось 32 больных животных с различными формами гнойных ран (нагноившиеся гематомы, флегмоны, постинъекционные абсцессы, послеоперационные раны, обширные посттравматические раны и др.). Из 32 больных собак с гнойными ранами 16 вошли в основную (опытную) и 16 в контрольную группы. Животным опытной группы на раневую поверхность наносили клемацид, а в контрольной использовали 3% раствор перекиси водорода и 5% линимент синтомицина.

У большинства больных (81,25%) собак отмечали явления выраженной в различной степени интоксикации, отмечались боли в области очага воспаления, иногда озноб, температура тела колебалась.

До начала лечения гнойные раны в основном характеризовались обильным гнойным отделяемым и обилием некротических тканей на стенках и дне раны. Кожа и подкожная клетчатка вокруг были отёчными, пальпаторно определялся болез ненны й инф ильтрат.

После полного очищения ран от гнойного налета обрабатывали рану клемацидом через день 1 раз в сутки, до появления сочных грануляций.

При оценке результатов лечения учитывали общее состояние животного, температуру тела, а со стороны раны - исчезновение отёка и гиперемии окружающих тканей, сроки очищения от гнойно-некротических масс, время появления грануляций и начала эпителизации.

В процессе лечения бактериологическая обсеменённость ран достоверно уменьшалась. После 1-2 применений клемацида обсеменённость гнойных ран снижалась. У 10-животных до лечения был проведён бактериологический контроль микрофлоры гнойных ран. При этом стафилококк (S.aureus) был обнаружен у 56,25% обследованных, причём в монокультуре - в 66,66%, а в сочетании с другими микроорганизмами - в 33,33% В остальных случаях высеяна кишечная палочка (Ecoli) - в 18,75% синегнойная палочка (Ps. aerugenosa) - в 12,5% протей (P. vulgaris) - 6,25% и в 6,25% случаев - стрептококк. На 3 сутки по мере образования грануляций и начала эпителизации в группе собак, лечившихся клемацидом патогенная микрофлора высеивалась из ран у 12,5% собак, а в контрольной - в 87,5% случаях.

Через 2-3 процедуры с применением клемацида у большинства больных собак нормализовалась температура тела, раны сравнительно быстро очистились от пюйно-некрогических масс, которые оставались лишь на небольших участках, у отдельных животных. У 68,75% собак в этот срок раневая поверхность была выполнена островками ярко-красных грануляций. Значительно уменьшились признаки воспаления в окружающих тканях: исчезла гиперемия кожи, уменьшился отек.

Наряду с общеклиническими признаками благоприятного течения раневого процесса у больных животных, снижалось количество лейкоцитов в крови до нормы, замедлялось СОЭ, снижалось количество лимфоцитов (таблица 2).

После 4-5 процедур раны характеризовались отсутствием признаков воспаления в окружающих тканях. Раневая поверхность на всём протяжении была выполнена ярко-красными мелко- и крупнозернистыми грануляциями. К 7-8 дню происходило полное заживление раны. В контрольной группе раны очищались от гнойно-некротических масс, только к 4-5 суткам заполнялась островками ярко-красной грануляции, только к 8-9 суткам, в это время значительно уменьшились признаки воспаления в окружающих тканях: исчезла гиперемия кожи, уменьшился огёк. На 8-9 сутки отмечалась положительная динамика показателей крови, характеризующих воспалительный процесс. К 10-11 суткам у животных происходила полное заживление раны.

Учитывая данные рекогносцировочных исследований были сформированы 2 группы животных (лошадей) по принципу пар аналогов. 1.5 каждую группу было включено по 15 голов лошадей со случайными инфицированными ранами (табл.3).

Лечение ран в группах проводилось комплексно с соблюдением правил асептики и антисептики. В 1-ой группе для лечения ран использовали препарат клемацид, во 2-ой - клефурин. У всех животных наблюдали характерные для ран признаки: отечность и гиперемия краёв раны и прилежащих тканей, повышение местной температуры, зияние, ярко выраженную болевую реакцию, наличие некротизированных тканей. При этом угнетения, повышения температуры тела.

Таблица 2 - Морфологические и биохимические показатели крови собак до и после лечения инфицированных ран

11осле лечения

1 Указатели Гемоглобин г/л До лечения 167+0,2! клемацид * 114+0,52 " 3% раствор перекиси водорода + 5% линимент синтомицина 124+0.151

Эритроциты млн/мкл 8,4=0,09 7.8+0,137 8,01+0.07

Лейкоциты тыс/мкл 12,6±0,056 8,86+0,105 9,9+0.08

Эозинофилы % 4,3+0,307 6,3+0,615 4,6+0,333

Лимфоциты % 55,8+2,34 35,1+1,744 38,3+0.3

Моноциты % Нейтрофилы палочкоялерные % 1,5±0,22 Г" ' 5,6+0,3 - 3,6+0,3 У, 2+0,3 1,6+0,3 3,3+0,4

Нейтрофилы сегментоядерные % 32,5+0,6 : 52,40+1,1 52,0+0,89

СОЗ 7,8+0,27 4,2+0,12 4,1+0,61

Общий белок г/л 76,1+0,33 65,2+0,126 71,3+0,1

Альбумины % 41,6+0,33 50,2+1,2 49,9+0,27

Глобулины % в ТОМ ЧИС.Х". 58,3+0,3 49,8+1,2 50,1+0.27

а-глобулины % Р-глобу:шны % у-глобулины % 10,9+0,74 25,6+0,33 21,8+0,42 13,6+0,19 23,2+0,217 13,0+1,238 10,9+0.12 24,8-0,006 14,4+0,26

потери аппетита не отмечали. В среднем размеры ран составляли: длина - 6,2 см, ширина - 3,5см, глубина - 1,5 см.

В каждой группе нанесению препарата предшествовали .механическая очистка и туалет раны. Клемацид и клефурин наносили аппликационным способом через каждые 48 ч.

При наблюдении за ранеными лошадьми лечебную эффективность препаратов определяли но показателям: уменьшение отёчности тканей и гиперемии. появление 1-рануляций и начало эпителизации, снижение болевой реакции.

В результате курации были получены следующие данные: ко времени второй обработки ран в 1-ой опытной труппе отмечалось наличие диффузно расположенных по всей поверхности раны очажков, светло-желтого цвета, вязкой консистенции; уменьшение размеров раны; гиперемия и отёчность прилежащих тканей, менее выраженная болевая реакция.

Таблица 3 - Действие клемацида и клефурина на раневой процесс у лошадей

1 клемацид 15 | 9-11 3-4 6-8 11-13

! клефурин 15 1 12-14 3-5 9-11 | 13-16

Во 2-ой группе, в этот же период - диффузные очажки размером с просяное зерно, светло-жёлтого цвета, вязкой консистенции; уменьшение размеров ран; присутствие отёчности, гиперемии и болезненности.

Па 7 день лечения раны, обрабатываемые клемацидом были заполнены ярко-красной крупнозернистой грануляционной тканью, гиперемия отсутствовала, отёчность и болезненность незначительные; в ранах, подвергающихся лечению клефурином - островки ярко-красных грануляций, незначительная гиперемия, отёчность, болевая реакция.

На 10 день курации в 1-ой группе раневая поверхность заполнена крупнозернистой, розово-красной, плотной грануляционной тканью, болевая реакция, признаки воспаления прилежащих тканей и их отёк не регистрировались, значительное уменьшение размеров ран. Во 2-ой группе подобную картину наблюдали лишь на 12-16 день.

При дальнейшем наблюдении было установлено, что в первой группе животных полное рубцевание происходило на 13, а во второй - па 16 день.

В результате исследования было определено, что при лечении ран эффективность действия препарата клемацид выше, чем у клефурина: в 1-ой группе животных полное заживление ран наступало на 13 день, признаки воспаления и отёка исчезали наЗ дня раньше, чем во 2-ой группе.

3.4.4. Исследование морфологических изменений в тканях раненых животных при воздействии препарата клемацид

При визуальном исследовании у подопытных животных обеих групп раны носили характер рваных, инфицированных, гнойно-некротических. Вне зависимости от места их локализации, они представляли собой глубокие нарушения целостности кожи и подлежащих тканей. Размер их в среднем составлял 6.2 см длины, 3,5 см ширины, 1.5 см глубины. Края ран были неровными, припухшими и пропитанными кровыо с гнойным экссудатом. В раневом канале ран находились остатки некротизированных тканей и волос вперемешку с гнойным

экссудатом. Ткань, расположенная по периферии ран была покрыта гнойным экссудатом, гипсрсмированная, отёчная и болезненная при пальпации.

При патогистологическом исследовании ран до лечения клемацидом определяли альтеративные процессы, которые охватывали все структуры кожи и подлежащих тканей. Среди процессов альтерации преобладали некротические процессы. При этом вокруг и внутри некротической субстанции локализовывались гнойные инфильтраты, состоящие из распавшихся нейтрофильных лейкоцитов. По периферии гнойных инфильтратов определялись, в небольшом количестве, полибласты, нейтрофильные лейкоциты и лимфоциты. Кровеносные сосуды вокруг очагов инфильтратов были гиперемированными.

При патогистологическом исследовании ран до лечения клефурином. также определяли гнойно-некротические процессы всех поверхностных и подлежащих структур. По периферии таких участков выявляли молодые клетки соединительной ткани - полибласты, лимфатические клетки и лейкоциты.

При патогистологическом исследовании заживление ран происходило по вторичному натяжению путём репаративной регенерации, которая характеризовалась замещением дефекта вначале на грануляционную, а затем на зрелую соединительную ткань. В заживлении ран животных первой и второй группы хорошо определились три морфологических периода: формирование грануляционной ткани, формирование фиброзной соединительной ткани, формирование рубцовой соединительной ткани. Однако в первой и второй 1-руппс эти периоды имели различное временное значение.

Гак, у животных первой группы, период формирования грануляционной соединительной ткани происходил в течение шести дней с начала лечения. В начале регенерационного процесса в грануляте преобладали различного размера капилляры, заполненные кровью, эндотелиальные и лимфатические клетки, и полибласты. Затем к концу этого периода большая часть капилляров была дифференцирована в артерии и вены, а количество соединительнотканных клеток увеличивалось. При этом в пролиферате преобладали эпителиоидкые клетки и фибробласты. Количество соединительнотканиых волокон и фиброцитов было не большим.

Второй период - формирования фиброзной соединительной ткани, происходил с шестого по девятый день от начала лечения. При этом фиброзная соединительная ткань в своём составе имела большое количество хорошо дифференцированных вен и артерий, и соединительнотканных клеток, среди которых преобладали фибробласты и фиброциты. Между этими клетками хорошо выявлялись параллельно расположенные пучки соединительнотканных волокон.

Третий период - формирования рубцовой соединительной ткани, проходил с девятого по пятнадцатый день от момента лечения. Зрелая соединительная ткань состояла из большого количества пучков соединительнотканных волокон и небольшого количества фиброцитов.

Дифференцировки эпидермиса кожи и подлежащих под ним тканей, сальных и потовых желез, волосяных луковиц мы не определяли.

При патогистологическом исследовании ран животных второй группы первый период - формирования грануляционной соединительной ткани, протекал в течение девяти дней с момента лечения. В начале, гранулят состоял из множественных капилляров и большого количества полибласгов, эпигелиоидных и эндотелиальных клеток, среди которых выявлялись одиночные лейкоциты и плазматические клетки. К концу данного периода регенерации происходила дифференцировка капилляров на различного диаметра вены и артерии. Количество волокон соединительной ткани и фиброцитов было незначительным.

Второй период регенерации протекал с шестого по двенадцатый день и морфологически характеризовался образованием фиброзной соединительной ткани. Вначале в её составе преобладали артерии, вены и молодые клетки соединительной ткани. Затем происходило увеличение количества дифференцированных клеток и пучков соединительнотканных волокон.

Третий период протекал с двенадцатого по восемнадцатый день лечения и морфологически характеризовался образованием рубцовой соединительной ткани.

Рубцовая соединительная ткань состояла из дифференцированных клеток соединительной ткани - фиброцитов и параллельно расположенных пучков сое д и н ител ь ноткан н ы х в о локон.

Дифференцировка эпидермиса кожи, а также подлежащих под ним тканей, сальных и потовых желез, волосяных луковиц не происходила.

Исходя из полученных результатов патоморфологического исследования ран нами установлено, что препарат клемацид обладает более выраженным регеиерационным действием, чем препарат клефурин. Процесс регенерации у животных обеих групп, носил характер репаративного и протекал в три морфологических периода, отличавшихся по времени. У животных первой группы период формирования грануляционной соединительной ткани происходил с первого по шестой дни с момента лечения; второй период формирования фиброзной соединительной ткани происходил с шестого по девятый день лечения; третий период формирования рубцовой соединительной ткани происходил с девятого по двенадцатый день. У животных второй группы период формирования грануляционной соединительной ткани происходил с первого по девятый дни лечения; второй период формирования фиброзной соединительной ткани происходил с девятого по двенадцатый день лечения; третий период формирования рубцовой соединительной ткани происходил с двенадцатого по восемнадцатый день лечения.

4. ВЫВОДЫ

1. Разработан и апробирован препарат, для лечения инфицированных ран у лошадей, на основе четвертичного аммониевого соединения - клемацид, технология его получения и основные физико-химические свойства характеризуются заданными качественными и количественными показателями.

2. При изучении биологической активности клемацида установлено, что препарат обладает выраженными антимикробными свойствами по отношению к

основным возбудителям раневой инфекции: кишечной палочке (H.coli). золотистому стафилококку (S.aureus). стрептококку. протею (Р. vulgaris) и др.

Клемацид обладает выраженным бактерицидным и бактериостатическим действием в разведениях от 1:2 до 1:32 но отношению к культуре Staphylococcus aureus. МКцК, для f:\ coli и Proteus vulgaris составила 1:16, а МКсК - обнаружена при разведении препарата 1:32.

Клемацид обладал достаточно высокой антимикробной активностью, которая проявлялась по отношению к Staphylococcus aureus - зона задержки роста составила 20,6 мм, а для К. coli - 24,0 мм.

При изучении развития устойчивости было определено, что к клемациду кишечная палочка Е. coli смогла выработать устойчивость к 20 пассажу, у всех других испытуемых штаммов к этому времени чувствительность оставалась довольно высокой.

3. При определении острой токсичности установили, что клемацид в дозе 16,54 мл / кг массы тела - является средне смертельной дозой при однократном введении (LD55) для белых крыс. Доза 22 мл/кг массы тела является для данного вида лабораторных животных абсолютно смертельной (LD|0o).

Коэффициент кумуляции Кк = 5,18. Следовательно, клемацид относится к 3 классу опасности (умеренно токсичные вещества), со слабо выраженной степенью кумуляции.

При применении клемацида у раненых животных не наблюдается существенных отклонений гематологического статуса от физиологической нормы.

4. Использование клемацида для лечения инфицированных ран у лошадей аппликационным методом снижает количество дней лечения на 3-4 дня в сравнении с клефурином. Полное заживление раны у опытных животных происходило к 14 - 1 6 дням.

5. Очищение раны от гнойно-некротических масс происходило - на 1 -2 дня раньше, эпителизация - на 2 - 3 дня быстрее. Через 2 -3 процедуры с применением клемацида у больных лошадей нормализуется температура тела. У 70% животных после 4-5 процедур отсутствуют признаки воспаления в окружающих тканях.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Ветеринарной хирургической практике рекомендуется новый, эффективный препарат - клемацид для лечения инфицированных ран у лошадей.

Применение препарата регламентируется Наставлением по применению препарата - клемацид от 21.07.2009 г., утверждённым в установленном порядке.

Производство опытных партий клемацида осуществляется на кафедре ветеринарного акушерства и хирургии Кубанского государственного aipapiioro университета.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Околелова, А.И. Применение препарата «Клемацил» при открытых механических повреждениях у лошадей / Родин И.А., Околелова А.И. И Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: ветеринарные науки, №1 ч.1. -Краснодар, 2009 г. - С.336-338.

2. Мовян, А.И. Некоторые способы нетрадиционной терапии при спортивном травматизме у лошадей / Родин И.А., Мовян А.И. , Шихина С.Н. // Материалы Международной конференции. - Орёл, 2008г. - С.164-167.

3. Мовян, А.И. Применение клемацида в хирургической практике / Родин И.А., Коба И.С., Мовян А.И., Шихина С.Н. // Материалы Международной научно-практической конференции. - Воронеж, 2006г.- С.238-239.

4. Мовян, А.И. К совершенствованию лечебных мероприятий при травматизме у лошадей / Родин И.А., Коба И.С., Мовян А.И., Шихина С.Н. // Ветеринария Кубани №6. - Краснодар, 2007г.- С.4-5.

5. Мовян, А.И. Способ лечения инфицированных ран у животных / Родин И.А., Коба И.С., Мовян, А.И., Шихина С.Н. // Патент на изобретение № 2383333. Бюллетень №7 10.03.2010 г. Москва, 2010.

Подписано в печать 12.04.2011г. Бумага офсетная Печ. л. 1

Тираж 100 экз.__

Формат 60x84 1/16 Офсетная печать Заказ № 267

Отпечатано в типографии КубГАУ 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Околелова, Анастасия Исааковна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Этиопатогенез раневого процесса и современные подходы к лечению инфицированных ран.

1.2 Поверхностно-активные соли четвертичного аммония и их использование в ветеринарии и медицине.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1 Изучение физико - химических свойств и стабильности клемацида.

3.1.1 Физико-химические свойства.

3.1.2 Изучение стабильности препарата клемацид.

3.2 Токсические свойства препарата клемацид.

3.2.1 Изучение острой токсичности клемацида.

3.2.2 Изучение субхронической токсичности.

3.2.3 Местнораздражающее и кожно - резорбтивное действие препарата.

3.2.4 Изучение аллергизирующего действия клемацида.

3.2.5 Эмбриотоксические и тератогенные свойства при применении клемацида.

3.2.6 Изучение иммунотоксичности при применении клемацида.

3.3 Фармакологические свойства препарата клемацид.

3.3.1 Влияние клемацида на показатели красной крови.

3.3.2 Изучение влияния клемацида на показатели обмена веществ.

3.3.3 Влияние клемацида на функции органов и систем организма.

3.4 Изучение терапевтической эффективности препарата клемацид при лечении раненых животных.

3.4.1 Изучение биологической активности клемацида.

3.4.2 Определение противовоспалительного действия и влияние клемацида на регенеративные процессы.

3.4.3 Лечебная эффективность клемацида при открытых механических повреждениях у лошадей.

3.4.4 Исследование морфологических изменений в тканях раненых животных при воздействии препарата клемацид.

3.4.5 Экономическая эффективность результатов исследований.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

5. ВЫВОДЫ.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Фармакология и применение препарата клемацид при лечении кожно-мышечных инфицированных ран у лошадей"

1.1 Актуальность темы. Травматизм в спортивном коневодстве является одной из серьёзных проблем современной ветеринарии и наносит значительный экономический ущерб животноводству (К.И.Шакалов, 1972; А.Ф.Бурденюк, 1976; И.С.Панько, 1982; В.А.Лукьяновский, 2003; У

Э.И.Веремей, В.А.Журба, 2004; Я.КазШег, Е.БсЫшсИ:, 2001).

Опыт борьбы с травматизмом животных, и, прежде всего с открытыми механическими повреждениями, убедительно показал, что основная роль при этом отводится лекарственной терапии, позволяющей значительно снизить наносимый экономический ущерб. Для этого используют различные фармакологические средства. Наиболее широкое распространение из них на сегодняшний день получили мази и линименты на основе антибиотиков, сульфаниламидов, нитрофуранов. Однако их эффективность в последнее время значительно снизилась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности после многократного пас-сажирования и усиления их вирулентных свойств. Устойчивые формы возбудителей, в качестве новой биологической популяции циркулируют в природе и инфицируют животных, что существенно затрудняет их терапию (Г.Н.Васин, 1984; А.Н.Елисеев, 1993; Х.Американов,1999; И.Н.Мяхнов,2007; С.Д.Панасюк, 2007; D.Baggot, 1976; О.КхткпсЬ ег а1. 1985; 1.Т.8оЫ, 2000; \V.Kehler, Т.Сег\ут& 2004 и др.).

Они обладают иным, чем антибиотики и сульфаниламиды механизмом действия на микробную клетку. Лекарственная устойчивость к ним развивается медленно и не достигает высоких пределов. Установлены выраженное лечебное и профилактическое действие поверхностно-активных веществ и экономическая обоснованность их применения при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных и птиц. Это делает разработку и внедрение новых лекарств из группы поверхностно-активных веществ, в частности четвертичных аммониевых соединений актуальной научной проблемой. К числу таких средств, прежде всего, относят новые препараты: этоний, тионий, димеколин, бромбиоцид, обладающие ярко выраженными бактериостатическими и бактерицидными свойствами (И.И.Сидорчук, Е.И.Тищенко, 1979; В.А.Березовский, 1983; Е.Б.Иванова, 2000).

Настоящая работа посвящена проведению исследований по разработке оптимальной лекарственной формы и определению режимов применения нового лечебного средства наружного применения при инфицированных кожно - мышечных ранах у лошадей. Данная тема является разделом общей тематики кафедр факультета ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Кубанского государственного аграрного университета по заданию 4.12 (№ госрегистрации 01910049842).

- изучить основные токсикологические и фармакологические свойства клемацида;

1.3 Научная новизна. Проведена разработка, фармако-токсикологическая оценка и научное обоснование применения мази при открытых механических повреждениях у лошадей в сравнительном аспекте с другими препаратами, применяемыми при инфицированных кожно -мышечных ранах. Разработана схема лечения при ранениях лошадей.

1.4 Практическая значимость. На основании проведенных исследований предложен новый эффективный препарат - клемацид для лечения инфицированных кожно - мышечных ран у лошадей путём наружного его применения.

1.5 Основные положения, выносимые на защиту.

- результаты морфологических и бактериологических исследований кожно -мышечных ран;

- результаты клинического проявления раневого процесса;

- разработка и фармако - токсикологическая оценка препарата клемацид для лечения инфицированных кожно - мышечных ран у лошадей;

- комплексный метод лечения лошадей с открытыми механическими повреждениями;

1.6 Апробация работы. Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на научно - производственных конференциях профессорско -преподавательского состава Кубанского государственного аграрного университета (2007 - 2009 гг.), учёных советах факультета ветеринарной медицины Кубанского ГАУ (2006 - 2009 гг.), на международной научно - практической конференции «Актуальные проблемы диагностики, терапии и профилактики болезней домашних животных» (г. Воронеж - 2006г.), на международной научно - практической конференции «Трансферт инновационных технологий в животноводстве» (г. Орёл - 2008г.), на XIII московском международном ветеринарном конгрессе (г. Москва - 2009г.), на международной научно практической конференции, посвящённой 35 - летию факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного университета (г. Краснодар 2009 г.)

1.7 Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в четырёх научных статьях и бюллетене изобретений, в том числе в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК России - «Труды Кубанского государственного аграрного университета».

Заключение Диссертация по теме "Звероводство и охотоведение", Околелова, Анастасия Исааковна

5. ВЫВОДЫ

2. При изучении биологической активности клемацида установлено, что препарат обладает выраженными антимикробными свойствами по отношению к основным возбудителям раневой инфекции: кишечной палочке (E.coli), золотистому стафилококку^, aureus), стрептококку, протею (P.vulgaris) и др.

Клемацид обладает выраженным бактерицидным и бактериостатическим действием в разведениях от 1:2 до 1:32 по отношению к культуре Staphylococcus aureus. МБцК, для Е. coli и Proteus vulgaris составила 1:16, а МБсК - обнаружена при разведении препарата 1:32.

Клемацид обладал достаточно высокой антимикробной активностью, которая проявлялась по отношению к Staphylococcus aureus - зона задержки роста составила 20,6 мм, а для Е. coli -24,0 мм.

3. При определении острой токсичности установили, что клемацид в дозе 16,54 мл / кг массы тела - является среднесмертельной дозой при однократном введении (LD50) для белых крыс. Доза 22 мл/кг массы тела является для данного вида лабораторных животных абсолютно смертельной (LDioo).

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Производство опытных партий клемацида осуществляется на кафедре ветеринарного акушерства и хирургии Кубанского государственного аграрного университета.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Околелова, Анастасия Исааковна, Краснодар

1. Абрамзон А.Ф. Развитие устойчивости к декамину и декаметоксину у стафилококков и дифтерийной палочки. // VI съезд украинского микробиологического общества: Тезисы докладов. К.: Наукова думка, .1981. - с. 148.

2. Алесенко A.B., Красильников В.А., Бойков П.Я. Фосфолипиды как структурные элементы ядерного матрикса // Докл. АН. СССР-1982.-Т.262.- №3.3. с. 730-733.

3. Бабенко H.A. Регуляция активности сфингомиелиназы и фосфолипазы плазматических мембран клеток печени крыс разного возраста // Биохимия.-1991.-Т.56.- вып.2.- с.346-353.

4. Бабенко H.A. Направленное изменение жирнокислотного спектра липидов ядерных структур и функциональное состояние клеточного генома // Укр. биохим. журнал. -1986. -Т. 58. №3: -с. 40-47.

5. Байдан Л.Б. Исследование действия некоторых ПАВ на нервно-мышечную передачу: Автореф. дисс. канд. биолог, наук. К. 1976.-21с.

6. Барилян И.Р., Калиновская Л.П., Писько Г.Т., "Влияние этония на внутриутробное развитие крыс" // Фармакология и токсикология, 1978, 40, №2,с-219-221.

7. Барилян И.Р., Сагло В.И., Писько Г.Т. Исследования генотиличности этония и некоторых его производных // Журнал фармакология и токсикология -М., 1998. с.-11.

8. Берги Краткий определитель бактерий, 1980.

9. Березовский В.А. Биологическая роль и механизмы действия поверхностно-активных веществ // В кн.: Сурфактанты легкого в норме и патологии. — Киев, 1983. с. 5-19.

10. Березовский В.А., Клочкова Н.Г., Водоросли камчатского шельфа: Распространение, биология, химический состав/, РАН.ДВО.Камч.ин-т экологии и природопользования. Владивосток: Дальнаука, 1983.- с. 154.

11. Бузлома B.C., Востроилова Г.А., Мещеряков Н.П. "Фармакокинетика ло-модена" //Ветеринария, 1998.- №11 .- с.39-41

12. Бурлуцкий И.Д.; Карапетян Г.Б.; Лозинский М.О. "Новое средство для лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных" //Профилактика инфекционных болезней животных в Узбекистане, 1984, с. 8-12

13. Василенко JI. П. , Писарева М. И., Сиворцевич Е.Г. Влияние ПАВ на Na-, К-АТФазу из почек морской свинки. // Цитология. -1980.- №1. с. 44-51.

14. Видении В.Н., Широбокова М.М. "Примененние поверхностно активных антисептиков для профилактии раневой инфекции у КРС" // Современные проблемы профилактики и терапии незаразных болезней с.-х. животных и птиц в нечерноземной зоне// 1983,с. 19-23.

15. Воскобойник В.Ф., Шайхаманов.М.Х, Шарапов Н.Е Экономическая эффективность аэрозолей этония при лечении больных бронхопневмонией животных. Организация и экономика вет. мероприятий. Казань, 1988, с. 21-24.

16. Ганиткевич Я.В.Влияние поверхностно-активных веществ на физиологические процессы и поверхностные явления в животном организме // VII Международный конгресс по ПАВ. Труды. Секция Д. Москва, 1978. - с.203-217

17. Ганиткевич Я.В. Поверхностно-активные вещества микробного происхождения //Биотехнология. 1988. - T.IV. - № 5. - с. 54-63.

18. Ганиткевич Я.В.Физиологическая роль поверхностно-активных веществ. Всес. Симпозиум. Тезисы докладов. Черновцы, 1978.- с. 132.

19. Гительзон И.И., Терсков И. А. Исследование функционального состояния эритрона методом эритрограмм // Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. Красноярск, I960.- с.85-99.

20. Гудзь О.В. Тенденции развития дезинфектологии в Украине // Провизор. -1998.-№6.-с.1-10.

21. Гудзь О.В., Писько Г.Т. Взаимодействие антибиотиков с поверхностно-активными веществами // Врачебное дело. -1983. №11.- с. 103-108.

22. Гудзь О.В., Писько Г.Т. Зависимость между строением катиона и биологической активностью катионных ПАВ // Фармакология и токсикология. -1980.-Т. 43.- №5.- с. 628-631.

23. Гудзь О.В., Овчинников В.Г., Писько Г.Т. "Противомикробные свойства поверхностно-активных антисептических средств."// Ж. Микробиология, 1987,47, №2, с. 82-85

24. Гудзь О.В., Писько Г.Т. Влияние этония на процесс дегидрирования метаболитов цикла трикарбоновых кислот культурами клетки Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa. // Микробиол. журн. 1983, т. 47, № 2. — с. 60-63.

25. Гудзь О.В., Писько Г.Т. Молекулярные аспекты действия поверхностно-активных веществ на микроорганизмы. // Фармакология и токсикология: Рес-публ. междувед. сборник. К.: Здоров'я, 1980. - с. 106-111

26. Даниленко B.JI. Гигиенические вопросы нормирования производных четвертичных аммониевых соединений в связи с санитарной охраной водных ресурсов. // Проблемы санитарной охраны водоемов: Сборник тезисов докладов конференции. Пермь, 1988.- с. 134-135

27. Денисенко В.П. Обоснование режимов применения ПАВ для дезинфекции в лечебных учреждениях. // Дезинфекция и стерилизация. Перспективы развития: Материалы Всесоюзной научной конференции. Волгоград, 1972,-с. 35-34

28. Денисенко В.П., Руди В. П. Гигиена применения синтетических моющих средств. К.: Здоров'я, 1975. - с. 142.

29. Джардемалиев Ж.К., Омирулы С., Полимбетова Н.С. Перспективы развития биотехнологии в Республике Казахстан. Журнал "Биотехнология. Теория и практика"- № 1, 1980.

30. Джохадзе Д.И. Биохимические особенности клеточных ядер различных тканей. Тбилиси.: Мецниереба, 1977, - с. 176.

31. Жилвинский А.Д. Аспекты эпизоотологии и борьбы с энзоотической бронхопневмонией телят // Тез. докл. науч. конф. Талинн, 1984. - с. 17-19.

32. Жолобова И.С, Антипов В.А., Зафириди А.Г. Методические рекомендации по применению натрия гипохлорита в ветеринарной практике. Кубанский ГАУ, 2004, с. 30.

33. Евтушенко А.Ф., Гуменюк В.И "Экономическа эффективность противо-эпизоотических мероприятий при смешанных инфекциях в специализированных хозяйствах" // Организация и экономика вет. мероприятий в промышленном животноводстве, 1987, с. 50-52.

34. Иванова Е.Б Новое современное средство «Велтолен». Дезинфекц. дело. 1997, №2; с. 27 — 29.

35. Иванова Е.Б "Современные отечественные универсальные дезинфицирующие средства, кожные антисептики и дезинфицирующие салфетки серии BEJIT на основе ЧАС."// Дезинфекц. дело. 2000, №2; с. 30-34.

36. Иноземцев В.П., Талер Б.Г. Профилактика незаразных болезней в современных условиях // Ветеринария, 1996; № 10, с. 3-8 .

37. Кавкало Д.Н. Клинико- патологоанатомические аспекты диагностики сепсиса //Врач и дело, №4; 1984.

38. Климнюк СИ. Изучение свойств стафилококков при культивировании на среде с дезоксихолевой кислотой // Микробиологический журнал.-1979. -Т.41.- №1,- с. 59-63.

39. Ковтуняк H.A., Бордяковская Л.Г. Влияние этония на содержание РНК и ДНК и активность РНК и ДНК-азы в печени белых крыс. //Фармакология и токсикология. -1972. -Т. 35. -№1. с. 44-46.

40. Коромыслов Г.Ф. , Полоз Д. Д. "Фармакологическая характеристика перспективных химеотерапевтических препаратов" // ВИЭВ, 1985; Т.63,- с. 3-7. s

41. Костромитинов H.A. "Применение этонита при паратифе" // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными и экзот.болезнями животных. Покров, 1998, - с. 283-284.

42. Котельникова Н.Е., Зайкина H.A., Панарин Е.Ф., Сун Дзе. Модификация микрокристаллической целлюлозы поверхностно-активными антисептиками и антибактериальные свойства полученных соединений // Химико- фармацевтический журнал. -1998.-Т.32.-№3.- с. 29-31.

43. Красильников А.П. Справочник по антисептике. Минск. "Вышайшая школа", 1995, с. 367.

44. Крылов Ю.Ф., Бобырев В.М., Фармакология, М., 1999, с. 249-263.

45. Кугер В.И. Приобретение резистентности стафилококками к этонию и некоторым антибиотикам // Микробиологический журнал.-1970.- №4.-с.502505. '

46. Ленинджер А. Биохимия М.: Мир, 1974.- с. 251-252.

47. Лигирда В.Д. Влияние этония на метаболическую активность лейкоцитов периферической крови: Тез. докл. IV съезда фармакологов Украины. Тер-нополь. 1981.- с. 87-88.

48. Лиманов В.Е., Эпштеин А.Е., Свитова И.Р., Цвирова И.М. "Синтез и бактерицидная активность катионных и амфолитных ПАВ"//14 менделеевскийсъезд по общей и прикладной химии/ Реф. Докл., 1989 с.456.

49. Литвин В.П."Этоний в ветеринарной практике"// Ветеринария, 1985; Т.З, с. 59-60

50. Ляпунов H.A., Башура Г.С., Чернобай Ю.В. К вопросу о взаимосвязи бактериостатических и коллоидно-мицелярных свойств // Фармацевт. Журн. -1983.-№1.- с. 54-56.

51. Ляпунов H.A., Бобылева Л.Г., Иванов Л.В. Исследование катионных ПАВ солей алкиламидопропилдиметилбензиламмония // Фармация. -1984. -Т.ЗЗ.-№4. - с. 13-17.

52. Макаренко Е.Ф. "Эффективность лечебно-профилактических обработок телят при парагриппе-3" // Тезисы докладов республиканской научно-практической конференции "Ветеринарные проблемы промышленного животноводства". Белая Церковь, 1985; с. 53

53. Методика определения экономической эффективности ветеринарных мероприятием., 1997.- с. 37.

54. Манукало С.А., Антипов В.А. Препараты содержащие йод-полимеры в ветеринарии. / Материалы четвертой региональной научно-практической конференции молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» Краснодар, 2002; с. 200.

55. Мартиросян Г.Е., Зильфан A.B. "К вопросу бактерицидной активности нового соединения из класса четвертичных солей аммония " // Журнал Экс-перементальная и клиническая медицина / Ереван, 1985; с.9.

56. Мещишен И.Ф., Писько Г.Т. Влияние этония, тиония и додецония на активность глутатион трансферазы в печени и крови. Деп. В Укр. НИИНТИ 9.04.90, №623. Ук90. -К.-11с.

57. Михайлова H.H. Применение клеевых повязок, Киев, 2003, с.115.

58. Мозгов И.Е. Фармакология. М. Агропромиздат, 1985, с. 416.

59. Монаковой К.П. Загрязнение водоемов поверхностно-активными веществами. М.: Медицина, 1964. - с. 15-30, 34-48.

60. Мосин В.В.Новое в методике новокаиновой блокады у животных // Ветеринария ,1975; №1, с.56-59

61. Муртазин Б.Ф. Условно-патогенная микрофлора при эндометрите //Ветеринария.-1971.-№8.- с. 83-85.

62. Никитин В.Н., Бабенко H.A., Попова Л.Я. Возрастные особенности обмена жирнокислотных компонентов ядерных фосфолипидов // Биохимия. -1986.Т. 51.-Вып. 10. -с.1714-1717.

63. Нисембаум Г.Д., Окунь И.М., Аузерихо Г.Д. Структурные перестройки мембран, индуцируемые антисептиками // Биофизика. -1976.-Т.21. -Вып.2.-с.271-275.

64. Оганесян A.C. Связывание димеркумарона, фубромегана и кватерина с альбуминами сыворотки крови // Журн. эксперим. клинич. медиц. -1987. -Т.27. -№3. -с.260-262.

65. Орешкин А.С, Пономарев В.В. Профилактика и терапия при пневмога-строэнтеритах //Ветеринария, 2001; № 2, С 12-13

66. Павлова И.Б., Самойленко И.И. Исследование механизмов инактивации бактерий при воздействии катионного поверхностно-активного вещества // Антибиотики и медицинская биотехнология.-1985.-№ 3 .-с. 182-184.

67. Павлюк И.М., Остапович М.В. Влияние ПАВ на физиологические процессы в организме животных: Тез. докл. XI Всесоюз. конф. по ПАВ и сырью для их производства. -Волгодонск. -1984. с.302-303 .

68. Павлюк И.М. Мембранный потенциал гладких мышц тонкого кишечника при инкубации с препаратами поверхностно-активных веществ // XI съезд Укр. физиол. об-ва: Тез. докл.-Днепропетровск. -1982,-с.314-315.

69. Павлюк И.М. Биологический статус организма поросят при профилактике гипотрофии препаратами четвертичных аммониевых соединений: Авто-реф. дисс. д-ра биол. наук.- Воронеж, 1992.-36с.

70. Павлюк И.М.; Денисенко В.П.; Чаусов Н.К.; Иващук И.С Этоний как стимулятор роста и продуктивности свиней // Свиноводство, 1987; Т. 43, с. 64-67

71. Павлюк И.М.; Карпяк В.Г. Влияние этония на некоторые показатели крови и рост подсосных поросят-гипотрофиков // Науч.-техн. бюл. Укр. НИИ физиологии и биохимии с.-х. животных, 1989; Т. 11, с. 47-50

72. Палунина B.B, Применение аэрозоля додецония при бронхопневмонии поросят // Ветеринария, 2003; № 7, с. 37-38.

73. Писько Г.Т. Обоснование теории направленного синтеза антимикробных веществ в рядах четвертичных аммониевых соединений. // Тезисы докладов V съезда фармакологов Украинской ССР. Запорожье, 1985. - с. 126.

74. Писько Г.Т., Этоний // Врач и дело //, 1977 №3, с. 4-9.

75. Писько Г.Т., Гудзь О.В., Влияние четвертичных аммониевых соединений на функциональное состояние цитоплазматической мембраны Escherichia coli. II Микробиол. журн. 1981, т. 50, № 3. - с. 75-78.

76. Писько Г.Т., Денисенко В.П., Гудзь О.В. Зависимость между строением катиона и биологической активностью катиониых поверхностно-активных веществ. // Фармакол. и токсикол.- 1972, № 5. — с. 210-215.

77. Писько Г.Т., Смирнова Н.А„ Тарасенко B.C. Противомикробные свойства поверхностно-активных антисептических средств производных полиме-тилендиамина. //Микробиол. журн.-1987, №9.- с. 82-83.

78. Писько Г.Т., Тимошенко JI.B. Применение этония для профилактики и лечения гнойно-воспалительных заболеваний // Методические рекомендации.- К.: Минздрав УССР, 1973, с. 20.

79. Писько Г.Т. Этоний // Врачебное дело.-1977.-№ 3.- с. 4-9.

80. Писько Г.Т., Коломоец М.Ю., Мещишен И.Ф., Василюк В.Н. Перекисное окисление липидов и роль некоторых четвертичных аммониевых соединений в нормализации этого процесса // Врачебное дело. -1998. № 3. - с. 52- 56.

81. Плохииский H.A. Математические методы в биологии. М., 1978.

82. Полоз Д.Д.; Вострикова В.Н., Трушуле М.А.; Лукевиц Э.Я. Химиотерапия респираторных заболеваний ягнят // Бюл. ВИЭВ, 1986; Т. 62, с. 34-36.

83. Потопальский А.И., Лозюк Л.В. Обоснование режимов применения ПАВ для дезинфекции в лечебных учреждениях. // Дезинфекция и стерилизация. Перспективы развития: Материалы Всесоюзной научной конференции.-Волгоград, 1996.- с. 34-35.

84. Радбиль О.С, Алексеев В. Ф. Современные методы диагностики в клинической гастроэнтерологии. — М.: Медицина, 1991. — с. 68.

85. Рудзит Э.А., Ермаченко В.А. Сравнение антимикробных свойств катамина АБ и роккала и их действие на мембранные системы бактерий // Антибиотики.-1981. -№11.- с.847-852.

86. Рыбальченко В.К., Лукошко С.А., Островская Г.В. Поверхностно-активные свойства диметилэтаноламина и его влияние на экто-АТФ-азную активность плазматических мембран // Бюлл. эксперим. биол. и мед.-1991.-№ 2.- С. 157-159.

87. Семенов Б.С, Видении В.Н., Антонова В.Н., Соколов В.И., "Влияние это-ния и катапола на заживление экспериментальных, инфицированных ран у крупного рогатого скота" Хирургическая патология животных, 1988,-с.79-81.

88. Сидоров М.А., Лаврентьев Н.И., Субботин В.В., Логинов И.А., Скородумов Д.И. Эффективность вакцинации против гемофилёзной плевропневмонии свиней // Ветеринария, 1991, № 4, с. 25-27.

89. Сидоров М.А., Мицаев Ш.Ш., Скородумов Д.И. Патогенность Н.р1еигорпситошае для животных // Ветеринария, 1982, №11, с. 39-41.

90. Сидоров М.А., Скородумов Д.И., Столяренко В.Т., Субботин В,В. Специфическая профилактика гемофилёзного полисерозита поросят // ВАСХ-НИЛ, НТЦ. Научно-технический информационный сборник. Москва, 1991, вып. 9.

91. Сидорчук И. И.,Тищегосо Е.И. Влияние этония на патогенные стафилококки // Новые лекарственные препараты. Экспрес-информ. ВНИИМИ, 1979г. №2.-с. 21-25.

92. Слипченко С.Н. Разработка новых методов и средств профилактики и лечения острого послеродового и посттрансплантационного гнойно-катарального эндометрита у коров// дисс. раб. Воронеж, 1994.

93. Скопинская С.Н. Действие катионных ПАВ на цитоплазматические мембраны Streptococcus faecalis: Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1983. - с. 24.

94. Солошенко В.Ф., Онуфриев В.П., Совершенствование мер борьбы с острыми респираторными заболеваниями молодняка крупного рогатого скота в хозяйствах промышленного типа. Болезни парнокопытных животных в условиях Украины, 1987, с. 4-9.

95. Сумарока М.В., Антонюк Л.П., Игнатов В.В. Характеристика фосфолипидного состава мембран бактерий Azospirillum brasilense // Микробиология. -1998. — c.l83.

96. Турова А.Д., Сапожникова Э.Н. Лекарственные растения СССР и их применение. М. Медицина, 1984,- с. 288.

97. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э. Основы биохимии -М.: Мир, 1981. Т.2. -773 с.

98. Уколова Е.М.; Сидоров И.В.; Костромитинов Н.А Терапевтическая эффективность этонита при сальмонеллезе //Соврем, аспекты диагностики, профилактики и лечения инфекц.и инваз. болезней животных. -М., 1998, с. 47-53.

99. Фадеева Л.Л., Холецкая Э.В. и д.р О свойствах асепура. // Ветеринария.-1995, №10, с.42-44.

100. Филиппов H.H. "К вопросу о применении поверхностно активных антисептиков для профилактики раневой инфекции у крупного рогатого скота" Сб. науч.тр. Ленинградский ветеринарный институт, 1985 Т. 82,- с. 115-118.

101. Харченко В.Т., Златкина А.Р. Абдоминальная боль, методы лечения // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии, 1977, Т. 11, № 12.

102. Хомин СП. Применение антимикробных препаратов. // Матер.Х1 науч. конф. по фармакологии и токсикологии. 1976.4.1 М,- с. 48

103. Чернявская М.А., Павлова И.В. Структурно-функциональное изменение клеток и сферопластов эшерихий при воздействии катионного ПАВ // ЖМЭИ. -1983.-№2.-с. 62-66.

104. Чернявская М. А., Медяник И.А., Чекаль В.Н. Гигиена применения синтетических моющих средств. К.: Здоров'я, 1983. - с. 142.

105. Чернявская М.А., Павлова И.Б. Структорно-функциональные изменения клеток сферопластов эшерихий при воздействии катионного поверхностно-активного вещества. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиол. 1984, №2. -с. 62-66.

106. Чулков А.К. Эффективность фармакологических средств при терапии колибактериоза новорожденных телят//Бюл. ВИЭВ, 1983; Т.52,- с. 27-29.

107. Шипилов B.C., Шишков В.П. и др., Послеродовая стимуляция половой функции у коров. Киев.: Урожай, 1988. с. 184.

108. Харкевич Д.А. Фармакология. М. Геотар Медицина. 1999, с. 486-494.

109. Юсфина Э., Леонтьева 3. Механизмы действия поверхностно-активных веществ // Физиологическая роль поверхностно-активных веществ: Тез. докл. Всесоюзн. симп.- Черновцы, 1975. с.119-120.

110. Azhar S., Mohan R. Ribonuclease activity of Entamoela histolitica // Infections und Hyg. -1975/ Vol. 23. - №2. - p. 270-278.

111. Bragadin M. Mitochondrial hionergetics as affected by cationie detergents // Arch Environ Contain and Toxicol.-1993.-Vol.30.- p. 280-284.

112. Brown M., Comlinson E. Sensitivity of Pseudomonas aeruginosa envelope mutants to alkylbenzylmethyl ammonium chlorides // J. Fharm. Sei. -1979. -Vol.68. №12.- p. 146-149.

113. Canepa F. Mechanism of Ganglion Blocking activity by Methonium chains //Nature.-1962. -Vol.195. №4841.- p. 573-575.

114. Corrett J.B., Shockman G.D. Cellular lysis of Streptococcus faecalis induced withtriton 100.//J.Bast.-1978.-Vol.56.-№l.-p. 153-160.

115. Daltrey D.C., Hugo W.B. The effect of some antibacteral agents on proton fuse across the membrane of Clostridium welchil // Pharm, and Pharmacol.-1974.-Vol.26, № 12.-p. 99.

116. Florence A.T., Cillan G.N., Biological implication of the use of surfactants in medicines and the biphasicx effect of surfactants in biological systems // Pestic. Sci.-1974.-Vol.6, №4. p. 429-439.

117. Grape R., Zschutsch U., Preuber E. Wechselwirkung homologer Quartcrnarer trimethyl-alkyl-ammonium-hologenide (tinna-halogenide) mit lipidmembranen // Studia Biophys.-1977.-Vol.66, №1. p. 31 -46.

118. Gwozdzinski K., Bartosz G., Leiko W. Effect of gaumia radiotion on the transport of electrolyte spinlabels across the human erythrocyte membrane // Studia Biophys.-1982.-Vol, №2. p. 141- 145.

119. Helenius A., Simons K. Solubilization of membranes hy detergents // Bio-chim. biophys. acta.-1975.-Vol.415. p. 29-79.

120. Hughes R. , Millbum P., Williams R. Molecular weight as a Factor in the Exeretion of Monoguaternary Ammonium Cations in the Bile of the Rak, Rabbit and Guinea pig // Biochem.J.-1973.-Vo 1.136, №4. p. 967-978.

121. Jshikowa H., Shimizu T. Depression B-lymphocytes by mastitis and treatment with Levamisole // J. Dairy Sei.-1983.-Vol.66, №3. p. 555-561.

122. Lambeit P., Smith A. Antimicrobial action of docecyldiet-hamolamininduced membrane damage in E.coli // Microbies.-1976.-Vol. 17, №6162. p. 191-202.

123. Makoto S., Hidaka I. Effect of deoxyeholate on smoothsurface membranes // J. Exp. Med.-1972.-Vol.107. p. 149-157.

124. Mlynarcik D., Lasko J., Devinsky F. Antimicrobial affect of biequaternari ammonium derived from 1,3 propandiamine. Experimentia. 1979,35(8): p. 10441045.

125. Pankey J.W., Eberhart R.J., Cuming A.L. "Uptake om postmilking teat antisepsis"// J. Dairy Sc, 1984; T.67. № 6, p. 1336-1353.

126. Pavez L.C. "El control del sindrime descargas vaginales" // Ind. Porcina, 1987; T. 7. №5,-p. 24-25.

127. Ramsey J.D., Lewis R.W., Hadfield N.A., Botham P.A., Hyghes L.A. Evaluation of reconstituted skin model /skinr/ in the prediction of surfactant-induced skin irritacy // ATLA.-1996. Vol.24. - p. 278.

128. Roper C, Howes D., Blain G., Williams F. Prediction of the percutaneous penetration and metabolism of dodecylde-cacthoxylatein rats using in vitro models //Arch. Toxicol.-1995.-Vol.69, №9. p. 649-654.

129. Somogyi J. et al. Activity and structurae changesin Mg+- dependent and (Na+ + K+ ) activated adenosine triphosphatase prepared from rat brain followind detergent treatment // Acta, biochim. bioohys. Acad. Scihung. -1969. -№4. - p. 219-236.

130. Stewart G.A., Philpot W.N. "Efficacy of a quaternary ammonium teat dip for preventing intramammary infection"// J. Dairy Sei, 1982, 65, №5, p. 878-880. 135.Tamura Bokun, et a "Antibad and antifungal" Agents,sap.- 1989 -17, №7, p. 319-326.

131. Vanini G., Maxes N., Giori P. et.al. Antifundal properties of cose pyrasolyl aikyl sulfides. Electron microseopie evidence of two dermatophytes and Kandida albicans //Mycopathclogia.-1981.-Vol.74, №1. p. 14.

132. Veronese M, Barzaghi D. Antibacterial property of a new disinfectant sterlane. Boll. Chem. Farm. 1977, 116(9): p. 539 546.

Информация о работе

Околелова, Анастасия Исааковна
кандидата ветеринарных наук
Краснодар, 2011
ВАК 06.02.03

Диссертация

Фармакология и применение препарата клемацид при лечении кожно-мышечных инфицированных ран у лошадей - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы