Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЭФФЕКТИВНОСТЬ НОВОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ОКСИКЛОЗАНИДА ПРИ ТРЕМАТОДОЗАХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЭФФЕКТИВНОСТЬ НОВОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ОКСИКЛОЗАНИДА ПРИ ТРЕМАТОДОЗАХ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ"

На правах рукописи

Морозова Анна Владюмровка

Фармако-токсикологические свойства и эффективность новой лекарственной формы оксиклоэанндя при трематояозах жвачных животных

03,00,19 - паразитология

16,00,04 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Москва-2007

Работа выполнена в отделе качества и стандартизации лекарственных средств для животных и биологически активных препаратов Федерального государственного учреждения Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, на базе ОПХ «Манихино» (ФГУ «ВГНКИ») Федеральной службы по ветеринарному и фнтосанитарному надзору (Россельхознадзор) Министерства сельского хозяйства Российской Федерации и животноводческих хозяйствах РФ.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Владислав Евгеньевич Абрамов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Тамара Самуиловна Новик (ВИГИС); доктор ветеринарных наук, профессор Герман Александрович Таланов (ВНИИВСГЭ РАСХН)

Ведущая организация Московская государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина (МГАВМиБ)

Защита диссертации состоится «14» ноября 2007 года в И0" часов на заседании диссертационного совета Д 006,011.01, при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии им К.И.Скрябина Россельхозакадемии (ГНУ ВИГИС Рос сельхозакадемии). Адрес: 117218, Москва, ул. Б, Черемушкинская, д.28.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС. Автореферат разослан « ^ » октября 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного соигт

доктор биологических наук й/С / _ В.К, Бережко

' ЛУГ /

-

1 .ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

t. 1.Астуалькость проблемы. Трематодозы жвачных животных широко распространены во всех регионах Российской Федерации, а также в других странах, и наносят значительный экономический ущерб.

Заражению фасциолами, ян кроне пнями и парамфистомами подвергаются жвачные животные всех возрастов, что является причиной резкого снижения продуктивности, а нередко и гибели животных (М.Ш.Акбаев, 1968; М.В. Якубовский, 1974; В.Ф. Никитин, 1978; Р.Г. Фаз лае в, 1987; Н.И. Кошеваров, 1997; С.Д. Дурдусов, Т.М. Лазарев, 1999; Р.Т. Сафиуллин, 2002 и другие).

Меры борьбы с трематод озам и крупного и мелкого рогатого скота включают в себя комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий, среди которых важную роль играет дегельминтизация. Для лечения и профилактики трематодозов предложено значительное количество антигельминтных средств, в том числе, сульфен, апьбендазол, оксиклозанид, рафоксанид, ацемидофен, гексихол, клорсулон, ивомек плюс, фасковерм, политрем, куприхол и другие препараты, относящиеся к разным классам химических соединений (Н-В. Демидов с соавт., 1971; А.И. Вишняускас, 1975; А.А. Salem et al., 1990; S. Trabolic, D. Zivanov, 1991; C.B. Березкина, 1992; Т.П. Веселова, с соавт., 1995; И.А. Архипов, 1976, 1997; В.Е. Абрамов с соавт., 1998; Д.Н. Шемяков, 1999 и другие).

Учитывая, что многие антигельмннтные средства, применяемые в

настоящее время, обладают побочным действием и имеют противопоказания

для применения, ветеринарные специалисты животноводческих хозяйств

нередко испытывают затруднения в выборе лекарственного препарата. Так,

ввиду продолжительного периода выведения остаточных количеств ряда

антигельминтных препаратов с молоком, запрещено их применение дойным

ЖИВОТНЫМ, МОЛОКО которых используют В ПИТ"РР1ГУ Tiontp; R rpain с ЭТИМ,

изыскание эффективных пП>ёзоп асйЫхЛ * - ™ий №ении антигельминтных

™ ен- К-А. Тимирязев^ Г

им u м И Жеяемова

№

средств для лечения и профилактики трематодозов жвачных, в том числе дойных животных, является актуальной проблемой в ветеринарии.

Высоко активным соединением в отношении трематод является оксиклозанид. Он хорошо переносится животными, не оказывает побочного действия и имеет кратковременный период выведения с молоком л актирующих животных, что дает основание для его использования в составе антигельминтных средств для дойною стада (R.M. Roy, S.S. Sukhla, 1971; J. Corba et al., 1976; II. Yoshimura et al., 19S5; J. Strakowa et at., 1985 и другие).

Важное значение для успешного проведения противопаразитарных лечсбно-профилактаческих мероприятий, наряду с созданием и внедрением новых препаратов, приобретает совершенствование существующих лекарственных форм. В последнее время наиболее широкое применение получили лекарственные формы для индивидуального использования. Преимущество таких лекарственных форм антигельминтных препаратов заключается в том, что дегельминтизации подвергаются все животные в стаде, точно рассчитывается терапевтическая доза, обеспечивающая максимальный атигельмлнтный эффект и отсутствие побочных явлений у животных, снижается риск загрязнения препаратом объектов внешней среды (И.А. Архипов, 1975; МБ. Мусаев, 1991).

Учитывая вышесказанное, мы сочли целесообразным разработать и предложить для дегельминтизации крупного рогатого скотта и овец при трематодозах новую лекарственную форму оксиклозанида в виде суспензии для пероралыюго применения, которая отличается от аналогичных препаратов более высокой эффективностью,

1.2.Цель и задачи исследовании. Цель работы - разработать, изучить и внедрить в ветеринарную практику новую лекарственную форму оксиклозанида в виде суспензии для перорального применения, предназначенную для лечения и профилактики трематодозов овец и крупного рогатого скота.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи;

- обосновать состав и разработать новую лекарственную форму для перорального применения на основе оксиклозанида;

- изучить острую, субхроническую токсичность, кумулятивные, эмбриотоксические и тератогенные свойства Оксиклозанида суспензии 5% в опытах на лабораторных животных;

- исследовать влияние препарата иа клинические, гематологические и биохимические показатели крупного рогатого скота И овец при применении в терапевтической и повышенных дозах;

- изучить фармакохинетику оксиклозанида в крова крупного рогатого скота и овец после применения лекарственного средства с использованием метода ВЭЖХ с УФ-детектированием;

- установить сроки выведения остаточных количеств оксиклозанида из органов и тканей овец и крупного рогатого скота, в том числе с молоком дойных коров, после применения антигельмиытика в рекомендуемых дозах;

- определить трематодоцидную активность Оксиклозанида суспензии 5% в отношении имагинальных и преимагинальных фаз развития гельминтов;

- установить в условиях производства терапевтическую эффективность Оксиклозанида суспензии 5% при фасциолезе, парам фи стоматозе и дикроцелише крупного рогатого скота и овец;

- разработать проект Инструкции по применению Оксиклозанида суспензии 5% для дегельминтизации крупного рогатого скота и овец при трематодозах и представить его для утверждения в установленном порядке.

КЗ-Научная новизна. Впервые разработана новая лекарственная форма оксиклозанида отечественного производства - Оксиклозанида суспензия 5%, изучены ее фармако-токсикологические свойства, специфическая и терапевтическая эффективность при трематодозах овец и крупного рогатого скота. Установлены особенности распределения, накопления и сроки выведения оксиклозанида из организма крупного рогатого скота и овец после применения Оксиклозанида суспензии 5%. Доказана эффективность нового

препарата при трематолозах у жвачных и целесообразность его применения на дойном стаде.

1.4.Г1рактическа# значимость работы. Определены оптимальные терапевтические дозы для лечения фасциолеза крупного рогатого скота и овец и парамфистоматоза крупного рогатого скота.

Экспериментально обоснованы сроки убоя животных на мясо и использования в пищевых целях молока дойных коров после дегельминтизации предлагаемым лекарственным средством.

На основании проведенных исследований и обобщения полученных результатов разработан проект Инструкции по применению Оксиклозанида суспензии 5% для дегельминтизации жвачных, который представлен для согласования и утверждения в установленном порядке.

Предложено для применения в ветеринарии новое антигельминтное средство отечественного производства - Оксиклозанида суспензия 5%.

1.5. Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты изучения антигсльмиитной активности и терапевтической эффективности Оксиклозанида суспензии 5% при трсматодозах крупного рогатого скота и овец;

- характеристика фармако-токсикологических свойств препарата в опытах на лабораторных животных, крупном рогатом скоте и овцах;

- результаты изучения фармакокииетики оксиклозанида и определения сроков выведения остаточных количеств антигельминтика из органов и тканей овец и крупного рогатого, молока дойных коров скота после применения препарата;

- практические предложения но применению Оксиклозанида суспензии 5% для дегельминтизации крупного рогатого скота и овец при трематодозах,

1.6.Публикации. По теме диссертации опубликованы 6 научных работ, в том числе в источниках, рекомендованных ВАК России, 2 научные работы.

1.7.Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 143 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы и

собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и практических предложений.

Список литературы включает 80 отечественных и 96 иностранных источников. Работа иллюстрирована 51 таблицей.

¿.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1.Материалы и методы наследований

Работа выполнена в 2000-2006 гг. в отделе качества и стандартизации фармаколотческих лекарственных средств для животных и биологически активных препаратов, ОПХ «Манихино» (ФГУ «ВГНКИ»), животноводческих хозяйствах Рязанской области и Ставропольского края.

Объектом исследований служило разработанное нами антигельминтпое средство - Оксиклозанида суспензия 5%.

В опытах использовано 150 беспородных белых мышей обоего пола массой 18-20 г, 192 белых крыс массой 121-253 г, 155 овец, 119 бычков, 15 телок и 389 коров. Опытные серии антигельмннтного средства для производственных испытаний были изготовлены специалистами ООО «НВЦ «Агроветзащита», которым автор выражает искреннюю признательность за помощь и сотрудничество.

При разработке лекарственной формы оксиклозанида дня обеспечения ее гарантированного качества подбирали высокомолекулярные соединения, образующие раствор с высокой структурной вязкостью; максимально измельчали до пылевидной структуры порошок действующего вещества, что было необходимо для образования сольватиой оболочки на частицах, препятствующей елнпашпо действующего вещества.

Острую токсичность Оксиклозанидз суспензии 5% изучали на лабораторных животных обоего пола: 110 беспородных белых мышах массой 18-20 г и 36 белых крысах массой 195-228 г. Суспензию вводили в желудок с помощью металлического зонда с оливой: белым мышам в дозах 2575 -6180мг/кг, белым крысам - 1547 - 4023 мг/кг однократно или дробно с интервалом 30 мин в 2-3 приема. Наблюдение за животными проводили в

течение 14 суток: учитывали количество погибших животных, характер и степень токсического действия, рассчитывали основные токсикологические параметры (ЛДр, ЛД^, ЛД50, ЛДи, ЛДюо). Обработку цифровых данных проводили но Миллеру-Тсйтнеру (М.Л. Беленький, 1963; A.A. Ступников, 1975), оценку степени опасности лекарственного средства - согласно ГОСТ 12.1.007-76.

Кумулятивные свойства Оксиклочанида суспензии $% изучали методом U.C. Правдина (1947) на 40 белых мышах с начальной массой 18-20 г. Опытных животных но принципу аналогов разделили на 2 группы. Мышам опытной группы ежедневно в течение 30 дней вводили в желудок суспензию в дозе I/J0 от ДД50, установленной в остром опыте (442,7 мг/кг массы животного). Животным контрольной группы в эти же сроки вводили 2% водный раствор крахмального клейстера в равном объеме. На 31 сутки эксперимента мышам обеих групп ввели суспензию в дозе, равной ЛД50 и провели учет и сопоставление количества павших животных в опытной и контрольной группе. Увеличение числа погибших мышей в опытной группе, по сравнению с контрольной, свидетельствует о наличии кумулятивных свойств, уменьшение - о явлении привыкания.

Су<5хрр;>нчесуую токсичность Оксиклозанида суспензии 5% оценивали на крысах-самках с исходной массой 121-128 г, которым ежедневно в течение 20 суток вводили в желудок препарат в дозах, соответствующих 1/5; 1Л0 и 1/20 ЛД50, установленной в остром опыте (590; 295 и 147,5 мг/кг). Каждая группа крыс состояла из 10 особей. Животным контрольной группы вводили равный объем 2% раствора крахмального клейстера. Морфологический и биохимический анализы крови крыс проводили по общепринятым методикам до введения препарата, на 7, 14 и 20 сутки эксперимента. В эти же сроки исследований проводили измерение массы животных. О состоянии гемопоэза судили по количеству эритроцитов, лейкоцитов, лейкограмме и содержанию гемоглобина. При определении биохимических показателей использовали сыворотку крови крыс. Активность аланинаминотрансферазы и

аспартатамннотрансферазы, пировии оградную кислоту определяли на биохимическом анализаторе по соответствующим методикам.

Функциональное состояние почек оценивали по показателям суточного диуреза, содержанию мочевины и белка в моче общепринятыми методами.

В конце опыта крыс декапитировали и определяли относительную массу внутренних органов.

Для выявления возможного гепатотоксического действия Окснклозанида суспензии 5% провели опыты на 36 крысах-самцах, которых распределили на опытную и контрольную группы. Животным опытной группы препарат вводили в дозе 25 мг/кг (по ДВ) массы животного. Через 1,5; 3 и 6 ч крысам обеих групп вводили внутрибрюшинно гексенал в дозе 80 мг/кг в обьеме 1 мл свежеприготовленного раствора на 100 г массы животного. Продолжительность сна учитывали в минутах от момента развития бокового положения до первых попыток крыс изменить положение («спиной вверх»). Сокращение длительности сна указывает на индукцию, а увеличение - на ингибирование микросомальных монооксигеназ печени.

Для определения массового коэффициента печени на 1,3 и 7 сутки белых крыс опытной и контрольной групп декапитировали, вскрывали брюшную полость и извлекали печень. Печень взвешивали и вычисляли массовый коэффициент по формуле: Мк = масса органа, г : масса тела, кг

Полученные результаты обрабатывали по методу Фишера-Стъюдента (ВЛО. Урбах, 1963).

Эмбриотоксические и тератогенные свойства препарата оценивали в соответствии с Методическими рекомендациями по проведению исследований в гельминтологии (ВАСХНИЛ, 1983) и Методическими указаниями по тестированию тератогенной активности химических веществ (А.П.Дыбан и др., 1986). Эксперименты провели на 80 крысах-самках массой 198 - 253 г с установленным сроком начала беременности, которых разделили на 8 групп. Окснклозанида суспензию 5% вводили крысам виутрнжелудочно через зонд в дозе 25 мг/кг массы животного (по ДВ) по следующей схеме: с 1

по 7 сутки беременности (ежедневно); с 8 по 14 (ежедневно), с 15 по 17 (ежедневно) и с 1 по 19 сутки беременности (ежедневно). Контрольным животным вводили дистиллированную воду в равном объеме. Учет результатов эксперимента проводили после умерщвления крыс на 20 сутки беременности. При вскрытии самок в яичниках подсчитывали количество резорбций, желтых тел, в матке - число мест имплантации, живых и погибших плодов. Оценивали анатомическое строение плодов, определяли массу и размеры плодов. Осматривали, измеряли и взвешивали плаценту.

Возможный тератогенный эффект препарата исследовали вначале визуально - во время вскрытия беременных самок. Затем часть плодов (2/3 от общего числа плодов в опыте) фиксировали в 95% этиловом спирте для последующей оценки состояния костной системы по методу Даусуна. Остальные плоды опускали в жидкость Боуэна для микроанатомического анализа внутренних органов по методу Вильсона, модифицированному А,П. Дыбаном. Измерение длины центров окостенения скелета (лопаточная, плечевая, локтевая, лучевая, бедре1тая, большая и малая берцовые) проводили под бинокулярной лупой МБС-1 с помощью окуляр микрометра.

Цифровые данные подвергали статистической обработке с определением критерия Стыодента. Устанавливали достоверность различий между исследуемыми показателями у погомстпа опытных и контрольных 1-рупп животных.

Фа рма коки нетику оксиклозанида в крови и его остаточные количества в органах и тканях, а также молоке изучали в опытах на 20 овцах (массой от 35 до 39 кг), 20 бычках (массой от 95 до 106 кг), 3 дойных коровах (массой 430460 кг), которым вводили препарат однократно перорально овцам и крупному рогатому скоту, соответственно, 10 и 15 мг/кг (по ДВ) массы животного. У овец из яремной вены брали пробы крови до введения, а также через 0,5; 1; 3; 6; 9; 12; 15; 18; 24 и 36 часов после введения препарата. У бычков - через 0,5; 1; 2; 4; 8; 19; 24 и 36 часа после введения препарата. Пробы молока отбирали у дойных коров после применения антигельминтика через 3; б; 10; 24 и 36 часа.

Для определения остатков оксиклозанида в органах и тканях овец убивали на I; 2; 7; ]2 и 13 сутки, бычков - на 7; 12 и 15 сутки после перорального введения Оксиклозанида суспензии 5% животным. Определение концентрации оксиклозанида в плазме крови, органах и тканях овец и бычков, а также в молоке коров, проводили методом высокоэффективной жидкостной хромотографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектированием с использованием адаптированной нами методики. Предел детектирования составил 100-200 нг/г.

Переносимость и влияние Оксиклозанида суспензии 5% на клинические, гематологические и биохимические показатели сельскохозяйственных животных Оксиклозанида суспензии 5% изучали на 15 овцах и 15 бычках, которым препарат вводила в терапевтических дозах (по ДВ), соответственно, 10 мг/кг и 15 мг/кг и в повышенных дозах - 40 мг/кг и 45 мг/кг массы животных. Клинические исследования и отбор проб крови и мочи проводили в утренние часы до кормления животных. Морфологический и биохимический анализ крови и мочи проводили ио общепринятым методикам, а также на биохимических анализаторах марок <<$тсЬгоп-4» ,«Ьуа5уз», «ЕЬАМ-Апа1у2ег4145»

Трематодонидную активность и терапевтическую эффективность препарата при фасциолезс, парамфистоматозе и дикроцелиозе крупного рогатого скота и овец изучали на базе животноводческих хозяйств Рязанской области и Ставропольского края.

В целях установления оптимальной терапевтической дозы при фасциолезе крупного рогатого скота по принципу аналогов было сформировано 4 группы бычков разного возраста по 13-14 толов в каждой, спонтанно ин Базированных Разс1о1а Ьера11са. Животным 1; 2 и 3 опытных групп препарат вводили индивидуально перорально в дозах, соответственно, 10,0; 12,5 и 15,0 мг/кг по ДВ, что соответствовало 2,0; 2,5 и 3,0 мл суспензии на 10 кг массы животного. Антигельминтную эффективность учитывали по результатам исследований проб фекалий животных всех групп до и через 20

суток после введения препарата. Пробы фекалий бычков исследовали методом флотации с использованием счетной камеры ВИГИС. Расчет антигельмшггной эффективности препарата проводили но типу «контрольный тест» согласно Руководству Всемирной Ассоциации за прогресс ветеринарной паразитологии (1,В.\Уоо<Ыа1., 1995).

Активность препарата против фасциол разного возраста изучали в опыте на двух группах (по 5 голов) коров, спонтанно инБазированных фасциолами. Животным опытной группы Окснклозанида суспензию 5% ввели однократно перорально в дозе 12,5 мг/кг массы по ДВ. Контрольные животные препарат не получали. Эффективность дегельминтизации рассчитывали по результатам гельминтологического вскрытия печени коров после их убоя через 17 суток после введения препарата. Расчет эффективности аитигельмшггного средства проводили отдельно в отношении молодых и взрослых фасциол.

Производственные испытания эффективности Окснклозанида суспензии 5% провели в хозяйствах Рязанской области: ТОО «Родина», СПК «Ахматово» и ТОО «им. Ленина» па 346 головах крупного рогатого скота, спонтанно инвазироваиных фасциолами. Препарат применяли однократно индивидуально в дозе 12,5 мг/кг массы но ДВ, из расчета 2,5 мл суспензии на 10 кг массы животного. Антигсльминтиую эффективность суспензии устанавливали на основании результатов количественных конроовоскопических исследований фекалий у всех животных до и через 25 суток после применения препарата. Пробы фекалий животных исследовали методом флотации (комбинированный раствор хлорида цннка и аммиачной селитры) с использованием счетной камеры ВИГИС. Расчет эффективности препарата проводили по типу «критический тест».

Испытание Окснклозанида суспензии 5% при нарамфистомозе крупного рогатого скота провели в ТОО «Родина» иа 30 спонтанно ннвазированных коровах, которых разделили на 3 равноценные группы. Окснклозанида суспензию 5% вводили животным однократно индивидуально в дозах (по ДВ): коровам 1 группы - 12,5 мг/кг, из расчета 2,5 мл суспензии на 10 кг

массы животного; коровам 2 группы - 15,0 мг/кг, из расчета 3,0 мл суспензии на 10 кг массы животного. Контрольным животным препарат не применяли. Эффективность дегельминтизации рассчитывали по типу «контрольный тест» на 15 сутки.

Активность Оксиклозанида суспензии 5% в отношении РагатрЫзШшшп сет разного возраста определяли на 15 выбракованных телках, спонтанно нн Базирован н ых пара м фистомами, которых разделили на 3 группы. Суспензию вводили индивидуально перорально однократно в дозах (по ДВ): телкам 1 группы - 12,5 мг/кг, из расчета 2,5 мл суспензии на 10 кг массы животного; телкам 2 группы - 15,0 мг/кг, из расчета 3,0 мл суспензии на 10 кг массы животного. 3-я группа животных служила контролем и антигельминтик не получала. Эффективность препарата оценивали по результатам г ел ьм интоло! ических вскрытий тонкого отдела кишечника и лреджелудков после убоя телок через 17 суток после дегельминтизации. Обнаруженных парамфистом подсчитывали с учетом их возраста. Расчет эффективности проводили отдельно против молодых и взрослых парамфистом по типу «контрольный тест».

При фасциолезе овец испытание Оксиклозанида суспензии 5% провели в Ставропольском крае на 60 овцематках, спонтанно инвазнро ванных Раэао1а Ьеранса, которых разделили на 4 группы. Животным 1, 2 и 3 опытных трупп препарат вводили пероралыго однократно в дозах, соответственно, 7,5; 10,0 и 12,5 мг/кг по ДВ. 4-я группа являлась контрольной и препарат не получала. Эффективность аптигельминтика оценивали после дегельминтизации по результатам копрологи чсски х исследований через 7 суток и гельминтологического вскрытия печени у 3 овец из каждой группы, убитых через 13 суток после лечения.

Изучение эффективности Оксиклозанида суспензии 5% при дикроцелиозе овец провели на 60 овцематках, спонтанно инвазированных ГЯсгосоеПит 1апсеаШш, которых разделили на 4 группы, Животным 1, 2 и 3 опытной группы суспензию ввели однократно перорально в дозе 10, 12,5 и 15 мг/кг(по

и

ДВ), соответственно. Животные контрольной группы препарат не получали. Эффективность дегельминтизации оценивали по результатам копроовоскопическкх исследований до и через 20 суток после дегельминтизации овцематок,

2.2. Результаты исследован и И

В результате проведенных исследований разработана Оксиклозанида суспензия 5%, представляющая собой белую с сероватым оттенком жидкость с высокой структурной вязкостью, содержащая в качестве действующего вещества субстанцию оксиклозанида - 5%, желатин - 0,3%. лактозу - 20%, твин-80 - 10%, консерванты нипазол - 0,1%, нипагин - 0,2% и воду дистиллированную - до 100%.

2.2.1. Токсикологические исследования.

В результате изучения острой токсичности Оксиклозанида суспензии 5% на лабораторных животных (табл. 1) установлено, что в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 лекарственное средство относится к 3 классу опасности -«вещества умеренно опасные»: ЛДю при введении в желудок белым мышам составила 4427,7 мг/кг и белым крысам - 2950,0 мг/кг.

Таблица 1

Параметры острой токсичности Оксиклозанида суспензии 5% при введении в желудок белым мышам и крысам

Вид животных Показатель, мг/кг массы животного

лд> лд,< ЛДк, ЛДм ЛДюо

Мыши 2575 3605 4427,7 (4217,0-4638,4) 5047 6180

Крысы 1547 2500 2950,0 (2638.6-3264,0) 3600 4023

В процессе изучения кумулятивных свойств при ежедневном в течение 30 суток введении Оксиклозанида суспензии 5 % опытным мышам в дозе 1/10 от ЛДм) и последующем введении разрешающей дозы антигельмннтика опытным и контрольным животным, гибель мышей в опытной группе была сопоставима с контрольной, что косвенно свидетельствует об отсутствии у препарата кумулятивных свойств.

В субхроническом эксперименте на белых крысах при ежедневном в течение 20 суток введении препарата в дозах 1/5; 1/10 и 1/20 от ЛДад, гибели животных, достоверных изменений в клиническом состоянии и динамике прироста массы тела, а также в гематологических и биохимических показателях у подопытных животных не выявлено (Р>0,05).

При оценке детоксипирующсй функции печени (табл. 2) статистически достоверное увеличение продолжительности гексе! ¡ал оного сна было установлено через 3 часа после введения препарата в дозе 25 мг/хг (по ДВ), восстановление антитоксической функции печени выявлено через 6 часов.

Таблица 2

Влияние Оксиклозаннда суспензии 5% на антитоксическую

Период поело введения препарата, час Длительность гексе! талового сна, мин Р

Опытная группа Контрольная группа

1,5 27,2+0,8 24,4+1,3 ¿0,05

3 29,8+2,3 23,6+1,7 <0,05

б 26,0+2,7 24,2+1,2 >0,05

Таблица 3

Влияние Оксиклозаннда суспензии 5% па массовый коэффициент ____печени крыс_______

Вводимая доза Период после Массовый 1

препарата, мг/кг введения коэффициент Р

(по ДВ) препарата, сутки печени

25 1 ЗЙ,2(Ж),64 <0,05

25 3 31,! 3+0,39 >0,05

■ 25 7 32,34+0,31 >0,05

контроль I 33,40+1,52 -

контроль 3 33,00+1,34 -

контроль 7 32,25+0,96 -

Увеличение относительной массы печени у животных опытной группы было установлено через 1 сутки после введения препарата, через 7 суток указанный показатель у подопытных крыс не отличался от показателя животных контрольных групп (табл. 3).

Полученные результаты свидетельствует о том, что изменения носят кратковременный, обратимый и функциональный характер.

Препарат не оказал отрицательного влияния на функциональное состояние почек в дозе 1/5 от ЛД», о чем свидетельствует отсутствие достоверных различий в опытной и контрольной групп по показателям суточного диуреза, уровня мочевины в моче, которые составили соответственно, 6,4 мл и 6,7 мл в сутки; 17,2 моль/л и 17, 4 моль/л, а также относительной массы почек 8,6 г и 8,4 г.

На основании оценки общего состояния и поведения крыс, динамики прироста массы тела, гематологических, биохимических показателей и значений относительной массы внутренних органов, можно констатировать, что Оксиклозанида суспензия 5% при введении в течение 20 суток в дозах 1/5, 1/10 и 1/20 от ЛД» не оказывает токсического влияния на организм опытных животных.

Результаты изучения эмбриотропных свойств Оксиклозанида суспензии 5% показали, что при внутрижелудочном введении самкам крыс в различные периоды беременности, а также на всем протяжении беременности, лекарственное средство в дозе 25 мг/кг по ДВ не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия па плоды самок.

Так, при введении препарата с 1 но 7; 8-14; 15-17 сутки беременности общая эмбриональная смертность составила, соответственно, 17,92+1,12%; 15,53+1,29%; 638+1,50% против контрольных значений 17,52+1,36%; 17,62+1,35% и 16,92+1,50% (1>>0,05). При введении препарата в течение всей беременности общая эмбриональная смертность составила 16,53+1,00% против 17,68+0,89% в контроле (Р>0,05). При внешнем осмотре плодов и на сериях сегментарных разрезов случаев уродств, аномалий развития

внутренних органов не выявлено. При изучении скелета плодов аномалии и деформации костей отсутствовали.

Полученные данные позволяют сделать заключение, что Окснклозанида суспензия 5% хорошо переносится жвачными животными, в терапевтических дозах не вызывает изменений в физиологическом состоянии, клинических, гематологических и биохимических показателях.

При введении препарата овцам в 4-кратной терапевтической дозе у отдельных животных отмечено кратковременное угнетенное состояние и диарея, исчезающие на 4-5 сугки без применения средств этиотропной и патогенетической терапии.

При введении препарата крупному рогатому скоту в дозе, превышающей терапевтическую в 3 раза, гибели животных, клинических признаков интоксикации, за исключением достоверного повышения частоты сокращений рубца, а также достоверных изменений » гематолога чес ких показателях не отмечено. Биохимическими исследованиями выявлено достоверное снижение активности амилазы, повышение активности аланинаминотрансферазы, концентрации общего билирубина, прямого билирубина и креатинина на 1-3 сутки после введения препарата. Восстановление указанных показателей до физиологической нормы для данного вида животного происходило на 5 сутки.

2.2.2,Фарма кокннети ческие и сел едо вини я

Исследования, проведенные методом ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектированием (нижний предел определения 100-200 нг/г), показали, что оксиклозаннд быстро всасывается в желудочно-кишечном тракте и уже через 30 минут попадает в кровь. Максимальная концентрация окснклозанида в плазме крови овец отмечена через 3 часа после введения препарата и составила 2,147+0,054 мкг/мл, минимальная (0,390+0,096) - через 24 часа (график 1).

В плазме крови крупного рогатого скота оксиклозанид в максимальной концентрации - 2,538+0,2 мкг/мл обнаруживали через 2 часа после введения препарата. Затем содержание его постепенно снижалось и через 8 часов

уменьшилось почти в 2 раза и составило 1,214+0,075 мкг/мл (график 2). При исследовании проб плазмы крови овец и крупного рогатого скота через 36 часов оксиклозанид не обнаруживали. Существенных отличий в фармакокинетике оксиклозанида в организме крупного рогатого скота и овец нами не выявлено.

График 1

Фармакокнветик: а оксинпозаиида мкг/мл в плазме к роим овец

часы

График 2

фармакокин«тика оксиклозанида и плазме крови крупного рогатого скота

мкг/мл

О 10 20 ЗО 40

часы

В течение 1 - 7 суток оксиклозанид установлен практически во всех органах и тканях, как у овец, так и бычков.

На 12 сутки оксиклозанид выявили лишь у отдельных животных в печени, почках и мышцах 0,42-0,47; 0,52 и 0,30 - 0,47 мкг/г, соответственно, у овец и 0,29 - 0,30; 0,39 И 0,25 мкг/г - у крупного рогатого скота.

На 13 сутки во всех исследованных образцах, полученных от овец, оксиклозанид не выявлен.

На 15 сутки во всех исследованных образцах от бычков оксиклозанид не выявлен (табл. 5).

Таблица 4

Остаточные количества оксиклозанида в органах и тканях овец после однократного пероралыюго введения Оксиклозанида суспензии 5% __в дозе 10 мг/кг ДВ____

Срок после введения препарата Концентрация оксиклозанида, мкг/г

печень почки мышцы сердце легкие

I сутки 0,66 -2,01 0,51 -0,78 <0,2 <0,2 <0,2

2 суток 1,98-3,39 1,31 -2,76 0,30' 0,24* 0,37"

7 суток 0,38 - 0,71 0,62-1,19 0,35 - 0,50 0,24 - 0,29 0,24*

12 суток 0,42 - 0,47 0,52* 0,30 - 0,47 <0,2 <0,2

13 суток <0,2 <0,1 <0,2 <0,2 <0,2

у 1 животного в группе

Таблица 5

Остаточные количества оксиклозанида в органах и тканях крупного

рогатого скота после однократного перорального введения _ Оксиклозанида суспензии 5% в дозе 15 мг/кг ДВ__

Срок после введения препарата, Концентрация оксиклозанида, мкг/г

печен г» почки мышцы ! сердце легкие

7 суток 0,44 - 0,78 0,54 - 0,81 0,31* <0,2 <0,2

12 суток 0,29 - 0,30 0,39* 0,25" <0,2 <0,2

15 суток <0,2 <0,1 <0,2 <0,2 <0,2

-у 1 животного в группе

В молоке л актирующих коров после перорального введения Оксиклозанида суспензии 5% в дозе 15 мг/кг но ДВ концентрация оксиклозанида через 10 часов после дегельминтизации составила 0,635 -0,758 мкг/мл, Через 36 часов остаточные количества оксиклозанида в молоке не обнаружены.

Таким образом, экспериментально обоснованный срок предубойной выдержки овец составляет 13 суток и крупного рогатого скота - 15 суток; срок «ожидания» для использования в пищевых целях молока дойных коров - 36 часов после дегельминтизации.

2.2.3. Терапевтическая эффективность

Изучение трематодоцидной активности и терапевтической эффективности Оксиклозанида суспензии 5% показало, что при фасциолезе крупного рогатого скота препарат в дозах (по ДВ) 10,0; 12,5 и 15 мг/кг массы животного обеспечивает терапевтическую эффективность в 90,0%, 98,0%, 100% случаев, а при фасциолезе овец в дозах 7,5; 10,0 и 12,5 мг/кг, соответственно, 91,0%; 983% и 100%.

При гельминтологическом вскрытии печени было установлено, что трематодоцидная активность препарата против взрослых фасциол значительно выше, чем против неполовозрелых гельминтов; эффективность против преимагинальных фаз развития гельминта в дозе 12,5 мг/кг составила - 78,6%, а против имагипальных - 98,4 %.

Испытание Оксиклозанида суспензии 5% в производственных условиях при фасциолезе показало высокую антигельминтную эффективность препарата (98,1-99,1%) при его однократном применении крупному рогатому скоту 8 дозе 2,5 мл на 10 кг и овцам в дозе 2,0 мл на 10 кг массы животного (12,5мг/кги 10,0 мг/кг по ДВ, соответственно).

При хроническом парамфистоматозе крупного рогатого скота по результатам копроскопии («контрольный тест»), терапевтическая эффективность препарата в дозах 12,5 и 15,0 мг/кг (по ДВ) составила, соответственно, 70,8% и 96,9%.

При гельминтологическом вскрытии печени эффективность лекарственного средства в дозе 15,0 мг/кг против молодых парамфимостом выявлена в 40,9% случаев, против взрослых значительно выше - 95,7%.

При дикроцелиозе овец антигельминтиос средство оказалось недостаточно эффективным. В дозе 15,0 мг/кг по ДВ обеспечивало в «контрольном тесте» эффективность равную 72,1%, в «критическом тесте»-72,4%.

Таким образом, результаты изучения эффективности в производственных условиях позволяют считать, что разработанное антигельминтное средство на

основе оксиклозанида может быть использовано для дегельминтизации крупного рогатого скота и овец при фасциолсзе и крупного рогатого скота при парамфистоматозс.

Результаты проведенных исследований по разработке лекарственной формы оксиклозанида, изучению фармако-токсикологических свойств и терапевтической эффективности были использованы при разработке проекта Инструкции по применению Оксиклозанида суспензии 5% для дегельминтизации жвачных животных при трематодозах.

З.ВЫНОДЫ

1. Разработана новая лекарственная форма аитигельмиптиого препарата на основе оксиклозанида, обеспечивающая высокую терапевтическую эффективность при трематодозах крупного рогатого скота И овец -Оксиклозанида суспензия 5%.

2. Лекарственное средство по параметрам острой токсичности, согласно ГОСТ 12.1.007-76, относится к 3 классу опасности - «вещества умеренно опасные» (ДД50 Для белых мышей при введении в желудок составляет 4427,7 мг/кг и для белых крыс - 2950,0 мг/кг массы животного); не обладает кумулятивными свойствами.

3. Препарат в дозах 1/20, 1/10 и 1/5 от Л Дм при введении крысам в течение 20 суток, не вызывает гибели животных, достоверных изменений в приросте массы тела, относительной массе внутренних органон, гематологических и биохимических показателях, а также необратимых функциональных нарушений печени.

4. Антигельминтное средство в дозе 25 мг/кг но ДВ не обладает эмбриотоксическими и тератогеиными свойствами при ежедневном введет щи крысам на протяжении всей беременности, а также в критические периоды эмбриогенеза.

5. Оксиклозанида суспензия 5% хорошо переносится жвачными, в терапевтических дозах не вызывает изменений в физиологическом сос тоянии, клинических, 1-емаггологических и биохимических показателях.

При введении препарата крупному рогатому скоту в дозе, превышающей терапевтическую в 3,6 раза, отмечено кратковременное и обратимое повышение активности аланннаминотраясферазы, концентрации билирубина и креатинина.

6. При изучении фармакокннетикн препарата установлено отсутствие существенных отличий в динамике изменения концентрации оксиклозанида в сыворотке крови мелкого и крупного рогатого скота.

7. Установлено, что после однократного перорального введения препарата в дозах овцам 10 мг/кг и крупному рогатому скоту 15 мг/кг остаточные количества оксиклозанида обнаруживали в органах и тканях животных через 12 суток.

Через 13 суток у овец и через 15 суток у крупного рогатого скота во всех исследованных образцах оксиклозанид не обнаруживали.

Рекомендуемый срок предубойной выдержки овец составляет 13 суток и крупного рогатого скота - 15 суток после дегельминтизации.

8. Установлено, что остаточные количества оксиклозанида в молоке обнаруживаются в течение 24 часов после обработки коров.

Через 36 часов оксиклозанид в молоке не выявляли. Рекомендуемый срок «ожидания» для использования в пищу молока после дегельминтизации дойных коров составляет 36 часа.

Оксиклозанида суспензия 5% обладает выраженной антш ельминтной активностью в отношении половозрелых фасциол - Facióla hepatica, паразитирующих у крупного рогатого скота и овец, в дозах (по ДВ) 12,5 и 10,0 мг/кг массы, соответственно, и против половозрелых парамфистом -Paramphistomum cervi - в дозе 15 мг/кг массы животного.

Против преимагинальных фаз развития трематод, а также половозрелых дикроцелий препарат менее активен: эффективность составила при применении суспензии в дозе 12,5 мг/кг против молодых фасциол - 78,6%; в дозе 15 мг/кг против молодых парамфистом - 40,9% и против половозрелых дикроцелий - 72,1%,

10. Результаты производственных испытаний подтвердили нысокую терапевтическую эффективность Оксиююзанида суспензии 5% при хроническом фасциолезе крупного рогатого скота и овец, соответственно, в дозах (по ДВ) 12,5 мг/кг и 10 мг/кг, а также при хроническом парам фи стоматозе крупного рогатого скота - в дозе 15 мг/кг массы животного. Терапевтическая эффективность дегельминтизации составляет' при фасциолезе крупного рогатого скота и овец 98,1-99,1% и 98,2-98,3%, при нарамфистоматозе крупного рогатого скота - 95,7-96,9%,

4.ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. В результате проведенных исследований разработана, изучена и предложена для использования в ветеринарной практике новая лекарственная форма оксиклозанида для перорапыюго применения - Оксиклозанида суспензия 5%.

2. Результат исследований нашли «пражение в разработанном проекте Инструкции по применению Оксиююзанида суспензии 5% для дегельминтизации крупного рогатого скота и овец при трематодозах, представленной для согласования и утверждения в установленном порядке.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Морозова A.B. Изучение острой токсичности суспензии оксиклозанида // Матер. III междунар. межвуз. науч.- практ. конф. аспирантов и соискателей «Предпосылки и эксперимент в пауке»,- С.-Петербург, акад. вст. мед. - 2005.-С. 39 -40.

2. Морозова A.B. Влияние суспензии оксиклозанида па антитоксическую функцию и весовой коэффициент // Матер, докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями»,- ВИГИС,- М.,2005.-Вып.6,- С. 236 -237.

3. Морозова A.B. Антиге льми нтная эффективность суспензии оксиклозанида при фасциолезе крупного рогатого скота // Матер, докл. пауч.

конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями».- ВИГИС.-М., 2006,- Вып. 7,- С. 253- 254.

4. Морозова Л.В. Фармакокинетика оксиклозанида в организме крупного рогатого скота // Матер, докл. науч. конф. «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями»,- ВИГИС.-М., 2006.- Вып.7.- С. 252 -252.

5. Морозова A.B., Кошсваров Н.И. Антигельмннтная эффективность суспензии оксиклозанида при фасциолезе крупного рогатого // Труды ВНГИС. - М.,2006. - Т.42. - С. 202-209.

6. Морозова A.B. Терапевтическая эффективность 5% суспензии оксиклозанида при трематодозах жвачных // Научно- практический журнал последипломного образования «Ветеринарная практика» - 2007.- №.2.- (37). -С. 33 -35.

ГНУ ВНИИВСГЭ, 2007 г., Москва, Звенигородское шоссе, д. 5, Заказ 251/4, тираж 100 экз.