Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикологическая оценка "хлорофитовит" и обоснование его применения для птиц и кроликов

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологическая оценка "хлорофитовит" и обоснование его применения для птиц и кроликов"

На правах рукописи

ЗУХРАБОВА ЛИАНА МИРЗАБЕКОВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА «ХЛОРОФИТОВИТ» И ОБОСНОВАНИЕ ЕГО ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ПТИЦ И КРОЛИКОВ

06.02.03 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 9 АПР 2015

005567801

Казань — 2015

005567801

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Научный руководитель: Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор ветеринарных наук, профессор Алимов Азат Мнргаси.мович

Ежкова Асия Мазетдиновна - доктор биологических наук, заведующая отделом животноводства ФГБНУ «Татарский научно-исследовательский институт

агрохимии и почвоведения» Зиганшина Лилия Евгеньевна - доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой фундаментальной и

клинической фармакологии Института фундаментальной медицины и биологии ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет»

ФГБОУ ВПО «Московская

государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Защита диссертации состоится «16» июня 2015 года в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.012.01 ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, Казань, Научный городок-2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ». Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на официальном сайте ВАК РФ www.vak.ed-igov.ru , текст диссертации, автореферата, отзыв научного руководителя — на официальном сайте ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» www.vnivi.rf

Автореферат разослан «_»_2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, ~ кандидат ветеринарных наук _ ___ /В,И. Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Промышленное птицеводство, в том числе выращивание бройлеров - является ведущей отраслью агропромышленного комплекса и вносит значительный вклад в продовольственное обеспечение населения и восполнения мясного рынка за короткий промежуток времени. В последние годы производство птичьего мяса возрастает и составляет около 40 % в мясном балансе потребления населения, из которого на долю промышленного выращивания бройлеров приходится до 88 % [3;9].

В настоящее время особое внимание уделяют объему производимого птичьего мяса и улучшению качества продукции, что несомненно зависит от полноценного, сбалансированного кормления [5;7].

В связи с этим, для эффективного ведения животноводства, включая птицеводство, чрезвычайно важное значение имеет разработка недорогих и легкоусвояемых, экономически обоснованных и экологически безопасных природных кормовых добавок, в составе которых содержатся различные микроэлементы (цинк, медь, марганец и т.д.) [10].

Результаты исследований [1;2] показали, что препарат «Винивет», полученный на основе вторичных продуктов пчеловодства, безвреден и эффективен в качестве кормовой добавки для птиц.

Ряд авторов изучили антимикробные свойства прополиса, как одного из продуктов пчеловодства. Интерес к нему возрос после обнаружения стимулирующего действия прополиса на специфические и неспецифические факторы иммунитета [4;6;8].

Исходя из сказанного, применения биологически активной субстанции, полученной нами из вторичных продуктов пчеловодства и биомассы хлореллы («Хлорофитовит») представляет определенную актуальность и востребованность.

Степень разработанности темы. Нами проведены исследования по применению композиции кормовой добавки, созданной на основе вторичных продуктов пчеловодства и возобновляемой биомассы хлореллы. Учитывая

проблему дефицита белка и способность микроводоросли хлорелла к быстрому росту и накоплению биомассы (богатой протеином, витаминами, макро- и микроэлементами) - составление композиции препарата на основе вторичных продуктов пчеловодства и биомассы хлореллы представляет научно-практический интерес. Использование в птицеводстве кормовой добавки на основе продуктов пчеловодства достаточно широко изучено, но применение для этой цели биомассы хлореллы и комплексного препарата практически остается не изученным.

Цель и задачи исследований. Целью исследований явилась фармако-токсикологическая оценка комплексной кормовой добавки «Хлорофитовит», созданной на основе вторичных продуктов пчеловодства (перга восковой крошки) и биомассы хлореллы, а изучение ее токсичности и влияния на некоторые морфобиохимические показатели крови птиц и кроликов, на продуктивность и качество продукции, оценка эффективности применения ее в животноводстве.

Для достижения поставленных целей были выдвинуты следующие задачи:

- Изучение токсичности, кожно-резорбтивного, эмбриотоксического и тератогенного действия «Хлорофитовит»;

- Изучение влияния «Хлорофитовит» на морфобиохимические показатели крови птиц и кроликов;

- Определение влияния «Хлорофитовит» на сохранность кур, яйценоскость и на качество яиц кур-несушек;

- Определение влияния «Хлорофитовит» на обменные процессы, естественную резистентность, специфический иммунитет и на продуктивность цыплят-бройлеров;

- Оценка влияния кормовой добавки «Хлорофитовит» на качество мяса.

Научная новизна. Впервые создана композиция новой кормовой

добавки «Хлорофитовит» на основе возобновляемых источников, в частности - вторичных продуктов пчеловодства (перга восковой крошки) и биомассы

хлореллы, доказана его безвредность на основании определения острой и хронической токсичности, кумулятивных, эмбриотоксических, тератогенных, аллергизирующих свойств. Установлено его благоприятное влияние на гематологические, биохимические, иммунобиологические показатели, а также на прирост живой массы птиц и кроликов.

Научно-практическая значимость. Для ветеринарной медицины, птицеводства и кролиководства разработана и предложена инновационная кормовая добавка «Хлорофитовит», способствующая активизации белкового и минерального обмена, повышению естественной резистентности, продуктивности и качества продукции, доказана его безвредность, биологическая и экономическая эффективность.

Результаты исследований используются в птицеводческом комплексе ООО «Эко-Индейка» (РТ), а также в учебном процессе на кафедрах фармакологии, терапии, физиологии, биологической и неорганической химии, кормления и технологии животноводства ФГБОУ ВПО КГАВМ.

Методология и методы исследования. Исследования посвящены созданию и изучению новой кормовой добавки «Хлорофитовит». Для изучения кормовой добавки проводили токсикологические, клинические исследования на лабораторных животных, птицах и кроликах, гематологические и биохимические анализы крови и определяли влияние добавки на продуктивность и качество продукции.

В опытах были использованы 246 белых крыс; 12 морских свинок; 15 кроликов; 100 кур-несушек и 150 цыплят-бройлеров.

Основные положения, выносимые на защиту.

- Разработанная из вторичного сырья пчеловодства и возобновляемых источников (хлореллы) - кормовая добавка «Хлорофитовит» содержит каротин, углеводы, протеин, жиры, амино- и нуклеиновые кислоты, витамины, макро- и микроэлементы в оптимальных соотношениях;

- «Хлорофитовит» не проявляет аллергизируюшего, токсического, тератогенного и эмбриотоксического действия, не оказывает негативного

влияния на состояние и структурное строение внутренних органов;

- Новая кормовая добавка оказывает выраженное положительное влияние на морфобиохимический состав крови, нормализует обмен веществ, способствует повышению естественной резистентности и иммунологической реактивности организма птиц и кроликов;

- Установлена оптимальная доза «Хлорофитовит» для применения в качестве кормовой добавки.

Степень достоверности и апробация результатов исследований. Основные положения диссертации доложены и одобрены на ежегодных научно-практических конференциях Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана (2011-2014 г); на всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений МСХ РФ по ПФО (2012 гг); Поволжском агропромышленном форуме (17-я международная специализированная выставка «Агрокомплекс: Интегро. Анимед. Фермер Поволжья; 14-я специализированная выставка «Волгапроэкспо» (2014,2015 гг.). Работа удостоена гранта МСХиП РТ в конкурсе «50 инновационных идей для РТ». Степень достоверности исследований подтверждена использованием современных методов и оборудования, методически правильной постановкой опытов, статистически значимого количества животных.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 5 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 139 страницах компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, заключение, выводы, практические рекомендации и список использованной литературы, включающий 262 источника, в том числе 41 зарубежных и приложения. Диссертация иллюстрирована 33 таблицами й 8 рисунками.

2 ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ 2.1 Материалы и методы исследований Работа выполнялась в 2010-2014 годы на кафедре биологической и неорганической химии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», производственные испытания проведены на птицеводческом комплексе ООО «Эко-Индейка» РТ. В качестве кормовой добавки использовали «Хлорофитовит», который представляет из себя порошкообразную массу зеленовато-коричневатого цвета, приготовленную на основе биомассы хлореллы рода Chloreella vulgaris и биологически активной субстанции, полученной из вторичных продуктов пчеловодства. Полученный препарат был подвергнут токсикологическим исследованиям (острая и хроническая токсичность), изучению эмбриотоксических свойств, аллергизирующего, кожно-резорбтивного, местного действия на кожу и слизистую оболочку глаз и эффективности в качестве кормовой добавки для кроликов и птиц. Определение в составе «Хлорофитовит» массовой доли отдельных химических элементов проводили методом атомно-абсорбционной спектроскопии, сырой протеин определяли по азоту - перегонкой по Кьелдалю, влагу и сухой остаток -высушиванием образцов и взвешиванием. Изучение состояния внутренних органов и скелета эмбрионов проводили по методу Wilson (1965).

Изучение эффективности применения «Хлорофитовит» проводили на кроликах, курах-несушках и цыплятах. Определение неорганического фосфора проводили по Кудрявцевой Л.А. (1991). Содержание кальция определяли трилонометрическим методом по Антонову Б.И. (1991).

Лейкоформулу вычисляли подсчетом мазков крови, окрашенных по методу Романовского-Гимзе. Количество гемоглобина в пробах крови устанавливали с помощью гемометра Сали, а общее количество эритроцитов и лейкоцитов считали в камере Горяева.

Функциональную активность нейтрофилов крови определяли в НСТ-тесте в спонтанном и стимулированном вариантах по методике, описанной в

руководстве Козлкж A.JI. с соавт. (1987) в модификации Алимова A.M. с соавт. (1989). Содержание церулоплазмина проводили по методу Н. Ревина (1961).

2.2 Оптимизация технологии культивирования хлореллы в лабораторных условиях

По результатам исследований установили оптимальные условия для культивирования биомассы хлореллы:

1. Освещение, которое обеспечивалось газоразрядной натриевой лампой (ДНАТ, HHS).

2. Температура в помещении поддерживалась на уровне 26-28°С.

3. Использование дополнительных стимуляторов в виде аэрации, переремешивания и их сочетанного действия.

2.3 Изучение состава «Хлорофитовит»

Анализ состава «Хлорофитовит» свидетельствует о том, что обогащение «Винивет» (препарат созданный на основе вторичных продуктов пчеловодства) биомассой хлореллы способствовало увеличению содержания витаминов, в частности: ретинола на 246 ME, токоферола - на 20,2 мг, рибофлавина - на 140 мгк, сырого протеина - на 7,9 %, железа - на 17,4 мг/кг, марганца - на 4,7 мг/кг, фосфора - на 1,5г/кг, кальция - на 1,2 г/кг, а также аминного азота - на 1,4 мг/100мл.

«Хлорофитовит», полученный на основе препарата «Винивет», при обогащении биомассой хлореллы - по содержанию более насыщен необходимыми в кормлении сельскохозяйственных животных минеральными и органическими веществами, что делает его весьма ценной кормовой добавкой в животноводстве.

2.4 Изучение токсикологических свойств «Хлорофитовит» 2.4.1 Определение острой токсичности на лабораторных животных

Внутрижелудочное введение опытным крысам возрастающих доз «Хлорофитовит» (от 1,0 до 20 мл) не вызывало изменений клинических показателей относительно животных контрольной группы. После

трехкратного введения на 1-ые, 10-ые и 15-ые сут отклонений в физиологическом состоянии не наблюдалось. Все животные были активны, принимали корм и воду. Случаи летального исхода не выявлены. Видимых изменений в органах и тканях у опытных крыс при патологоанатомическом вскрытии не наблюдалось.

При длительном кормлении крыс кормом с включением «Хлорфитовит» 2-3 % от объема корма в клиническом статусе опытных животных отклонений не наблюдалось. Вскрытие подопытных крыс через 30 дней с начала опыта показало, что у опытных животных внутренние органы не отличались от таковых контрольной группы.

Исходя из вышеизложенного, можно заключить, что препарат не проявлял токсического действия на организм крыс и по классификации химических веществ по степени опасности относится к четвертому классу -незначительно опасных веществ.

2.4.2 Определение хронической токсичности на белых крысах

Изучение хронической токсичности проводили на 3 группах белых крыс (2 опытные, 1 контрольная). Пищевая возбудимость у животных опытных и контрольной группы не нарушалась. Средний прирост живой массы за 60 сут в первой группе, получавшей с кормом препарат «Хлорофитовит» 2 % от общего объема корма, составил 83,21 г (средне суточный 1,38 г) или 39 % от исходной массы, во второй группе, получавшей «Хлорофитовит» 3 % от общего объема корма - 67,15 г (среднесуточный 1,12 г) или 33 %, и у контрольной группы соответственно 52,01 г (среднесуточный прирост 0,87 г) или 28 % от исходной массы.

Гематологические исследования крови у всех животных на 30, 60 сут применения препарата указывали на повышение количества эритроцитов по отношению к контролю: увеличение количества эритроцитов в период эксперимента (30 и 60 сут) у крыс первой опытной группы произошло на 10,6% и 25 %, против аналогичных показателей у крыс второй опытной группы 8,2% и 22,3% соответственно, а увеличение лейкоцитов за данный

период было не значительным. У крыс первой опытной группы содержание гемоглобина на 30-ые и 60-ые сут эксперимента выросло на 15,9 % и 16,8 % соответственно, во второй группе — на 13,7 % и 16,1 % соответственно. У крыс контрольной группы изменения данных показателей были выражены тоже в сторону повышения, но эти изменения были недостоверными.

Результаты биохимического анализа крови показали, что увеличение содержания глюкозы в крови животных первой и второй опытных групп, за период эксперимента составило 31,3% и 27,1% соответственно, при этом данный показатель оставался в пределах физиологической нормы. У контрольных крыс концентрация глюкозы в крови за данный период повысилась на 12,9%. Содержание белка в сыворотке крови крыс первой опытной группы на 30-ые сут увеличилось на 6,02% и на 60-ые сут - на 10,8% , во 2-ой группе на 3,2 % на 30-ые сут и 8,9 % на 60-ые сут; против показателей крыс контрольной группы, где наблюдалась тенденция к снижению данного показателя. Содержание фракции альбуминов, а-глобулинов у животных опытных групп имело тенденцию к увеличению, против аналогичных показателей контрольных животных. Из результатов исследования активности ферментов в крови белых крыс следует, что активность АЛТ в первой и во второй опытной группе увеличивалась к 30 сут на 3,8 % и 3,23 %, а к 60 сут соответственно на 7,7 % и 5,8 %. У контрольных крыс активность данного фермента в крови находилась в пределах 38,2-38,3 Ед/л и существенно не изменилась.

Таким образом, анализ результатов проведенных исследований указывает на то, что препарат «Хлорофитовит» в объеме 2 % (первая группа) от состава рациона является нетоксичным и оказывает благоприятное влияние на общее состояние, гемопоэз, морфобиохимические показатели крови, углеводный и белковый обмен, и способствует повышению живой массы.

2.5 Определение раздражающего, кожно-резорбтивного действия и

кумулятивных свойств Однократные и повторные аппликации экстракта препарата «Хлорофитовит» на выстриженную кожу кроликов показали: отсутствие отечности, пальпация на данном участке кожи абсолютно безболезненна, характерный цвет кожи и внешнее состояние кожного покрова после экспозиции препарата не отличалось от контрольного в течение всего периода наблюдения. При определении местного действия экстракта препарата на слизистую оболочку глаза установлено: через 5-10 мин после нанесения препарата, отмечалось незначительное слезотечение, которое исчезало по прошествии 1-2 часов. Коэффициент кумуляции составил 8,3, который по классификации химических веществ по степени кумуляции определяется как слабовыраженный и свидетельствует о развитии повышенной резистентности к препарату «Хлорофитовит».

2.6 Изучение эмбриотоксическнх и тератогенных свойств на белых

крысах

Введение «Хлорофитовит» в дозе 1/20 от максимально вводимой не вызывает существенного изменения количества желтых тел в яичниках и оказывает благоприятное влияние на количество мест имплантации.

Анализ результатов исследований показал, что «Хлорофитовит» в дозе 1/20 от максимально вводимой дозы (20 г/кг) не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.

2.7 Определение аллергизирующих свойств За подопытными морскими свинками наблюдали в течение 6 ч после инъекции гистамина. В опытной (животные получали корм с добавкой 2 % «Хлорофитовит» в течение 14 дней) и контрольной (корм без добавления «Хлорофитовит») группах пали по 3 морские свинки. В течение эксперимента выявили начало гистаминового шока у морских свинок контрольной группы - 18,3 ± 0,9 мин, в опытной группе - 18,6 ± 0,5 минут. Летальный исход подопытных животных (опытная и контрольная) наступил

через 54-67 мин, а у выживших морских свинок клинические признаки шока исчезли через 180-234 мин после введения гистамина. Полученные результаты аналогичности проявления признаков гистаминового шока у опытной и контрольной группы морских свинок указывают на отсутствие аллергизирующего действия «Хлорофитовит».

2.8 Результаты применения «Хлорофитовит» курам-несушкам Как показали результаты исследований, количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, общего белка, кальция, неорганического фосфора, каротина варьировало в пределах физиологической нормы, при этом у опытных кур (получавших 2% «Хлорофитовит») все показатели были относительно выше, по сравнению с контролем. Лизоцимная активность у опытной группы была выше на 17,7 %. Индекс активации нейтрофилов в спонтанном НТС-тесте был выше на 16,3 %, а индекс активности нейтрофилов в стимулированном НСТ-тесте - на 15,1 %.

У кур опытной группы яйценоскость была выше, чем в контрольной группе птиц за весь период эксперимента и составила 80,2% против 66,2% контрольных кур. Средняя масса яиц опытной группы кур составила 55,4 г, в контрольной группе 52,1 грамма. Исследования по определению содержания в них витаминов (А, Д, Е, В2 и тиамин) указывали на их более высокое содержание в яйцах, полученных от кур опытной группы.

Таким образом, проведенными исследованиями установлено положительное влияние «Хлорофитовит» на организм кур продуктивного возраста, который, стабилизируя обмен веществ и повышая резистентность, способствовал увеличению их продуктивности.

2.9 Результаты применения «Хлорофитовит» цыплятам Были сформированы 3 группы животных по 50 птиц в каждой. 1-я группа получала биомассу хлореллы - 2% от общего объема корма, 2-я группа - 2 % «Хлорофитовит» от общей массы корма, 3-я группа - контроль. Гематологические исследования крови подопытных цыплят показали благоприятное влияние «Хлорофитовит» на состояние гемопоэза, на что

указывало достоверное повышение эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов.

Морфологические исследования крови подопытных цыплят показали, что отличия в количестве базофилов, эозинофилов юных и палочкоядерных нейтрофилов и моноцитов опытных и контрольных групп были незначительными. Количество лимфоцитов было выше в 1 и 2-ой опытной группах на 3,6 % и 3,8 %, по сравнению с контролем. Результаты исследований некоторых биохимических параметров крови показали благоприятное влияние «Хлорофитовнт» и на обменные процессы, на что указывало достоверное повышение содержание общего белка, каротина, общего кальция и неорганического фосфора во второй опытной группе. Данная кормовая добавка не оказывает повреждающее влияние на состояние печени, о чем свидетельствуют результаты исследований в крови ACT, АЛТ, общего и прямого билирубина, показатели которых меняются при нарушении функции данного органа.

За период опытов среднесуточный прирост у первой группы цыплят составил 32,8 г, во второй - 33,5 г, в контроле - 26,1 грамма (табл. 1).

Таблица 1 - Динамика живой массы цыплят-бройлеров в период

эксперимента (п=50)

Группа птиц В начале эксперимента 12 сут 30 суточный возраст 42 суточный возраст Абсолютный прирост, г Среднесуточный прирост, г

Средняя живая масса, г

1-опытная 319,0±6,5 1095+10,5 1699±11,2 1380±4,95 32,8

2- опытная 318,0±7,6 1090±8,6 1728+6,83 1410±5,24 33,5

3-контроль 318+5,9 936,0110,3 1416±9,71 1098±7,51 26,1

При ветеринарно-санитарной экспертизе все тушки цыплят опытных групп по показателям упитанности соответствовали первой категории (ГОСТ - 25 391-82). При осмотре печенн у цыплят контрольной группы установлены некоторые характерные признаки жировой дистрофии (острые края, мягкая консистенция, бледно-желтый цвет), в отличие от печени опытных групп, у

которых печень упругой консистенции, темно-бурого цвета.

Бактериоскопией в мазках мышечной ткани грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы не обнаружены. Наличие жировой дистрофии печени контрольной группы кур свидетельствует о недостаточной сбалансированности рациона, что в определенной степени повлияло на качество мяса, на что указывает оценка мяса цыплят контрольной группы по вкусовым качествам на 4,4 балла, по сравнению цыплятами 1-ой опытной группы (4,5 баллов) и цыплятами второй опытной группы (4,7 балла).

Таким образом, проведенными исследованиями установлено положительное влияние «Хлорофитовит» на гематологические, морфологические и некоторые биохимические показатели крови, что свидетельствует об интенсификации процессов гемапоэза и обмена веществ в организме опытных цыплят и способствует повышению энергии роста.

2.10 Результаты применения «Хлорофитовит» кроликам

Опыты были проведены на 3 группах кроликов по 5 голов в каждой. Первая опытная группа получала биомассу хлореллы 2 % от общей массы корма, вторая группа - 2% «Хлорофитовит» от общей массы корма, третья группа - контрольная. Исследования опытных кроликов показали благоприятное влияние «Хлорофитовит» на гематологические и морфологические показатели крови.

Морфологические исследования крови подопытных кроликов указали на незначительные отличия в количестве базофилов, эозинофилов юных и палочкоядерных нейтрофилов и моноцитов, а количество лимфоцитов, у кроликов опытных групп в конце эксперимента было выше, по сравнению с контролем на 1,2 % (1-я группа), и 3,2 % (вторая группа) соответственно. Содержание общего белка в крови у подопытных кроликов, за период эксперимента в первой группе достоверно повысилось на 6,8 %, а второй — на 8 %. У кроликов контрольной группы концентрация общего белка, за данный период, увеличилась всего на 3,7 %.

«Хлорофитовит» оказывал положительное влияние и на минеральный

обмен, на что указывало достоверное повышение в крови некоторых микроэлементов: цинка - на 13,3%, меди - на 8,1% и кобальта - на 2,05% в первой опытной группе; цинка на 16,6%; меди - на 8,5% и кобальта - на 3,1% во второй опытной группе, что значительно выше, чем у животных контрольной группы.

«Хлорофитовит» оказывает благоприятное влияние на факторы защитных сил организма. В частности, число В-лимфоцнтов в сыворотке крови подопытных кроликов за период эксперимента достоверно повысилось на 26,3% - 39,4% и Т-лимфоцитов - на 6,2% - 9,5% в 1-ой и во 2-ой группе соответственно. Достоверно повысилась лизоцимная активность, показатели фагоцитарного индекса, фагоцитарной активности и фагоцитарного числа. У контрольных кроликов данные показатели находились на уровне фоновых показателей или изменения были незначительными.

Результаты, полученные при определении прироста живой массы кроликов, отражены в табллице 2 и указывают на наилучший прирост во 2-й опытной группе.

Таблица 2 - Динамика массы тела кроликов в период эксперимента (п=5)

Группа В начале эксперимента Через 30 дней Через 60 дней Абсолют, прирост, г Сред.суг прирост, г

Средняя живая масса, г

1-опытная 1580,5±7,6 2528,6±8,6 2905+6,83 1325±5,24 22,1

2- опытная 1632±6,5 2510±10,5 2985±11,2 1353±4,95 22,5

3- контроль 1624±5,9 2421±10,3 2815±9,71 1191+7,51 19,8

2.11 Микроструктура отдельных органов кроликов после применения кормовой добавки «Хлорофитовит» 2.11.1 Микроструктура печени

У кроликов, получавших биомассу хлореллы из расчета 2% от общей

массы корма, проявляется большая однородность клеток паренхимы, наблюдалось ослабление признаков нарушения гемоциркуляции, белкового и жирового гепатоза (рис1). У кроликов, получавших в составе рациона кормовую добавку «Хлорофитовит» из расчета 2% от общей массы корма, в печени наблюдали обширные участки паренхим с полным отсутствием признаков нарушения обмена веществ, проявляющееся существенным снижением выраженности их проявления как в паренхиматозных, так и мезенхимальных структурах органа (рис. 2). Отмечалось восстановление внутриорганной гемоциркуляции в микроциркуляторном русле. Происходило замедление и прекращение склеротических изменений в мезенхиме органа.

Рис.1. Гистокаргина печени кролика, получавшего биомассу хлореллы, Рис.2. Гистокартина печени кролика, получавшего 2 % от объема корма. Окраска гематоксилином и зеоином. X 420 «Хлорофитовит» 2 % от общей массы корма.

Окраска гематоксилином н эозином. Х420

2.11.2 Микроструктура тощего отдела кишечника

У кроликов, получавших биомассу хлореллы из расчета 2% от общей массы корма, рисунок гистологического строения органа был выражен (рис. 3). Апикальная область ворсинок представляла участок с преимущественным скоплением эпителиоцитов, которые содержали в цитоплазме многочисленные секреторные гранулы. При этом полностью сохранялась структура цитолеммы. В эпителий кишечных крипт, по сравнению с таковыми у контрольных животных, заметно увеличилось содержание

столбчатых клеток, хотя большинство из них оставались небольшими по величине, с ядрами, содержащими конденсированный хроматин. Гистологические изменения в кишечнике кроликов, получавших в составе рациона «Хлорофитовит» из расчета 2% от общей массы корма отличались выраженным рисунком строения (рис.4). Кишечные крипты у этих животных отличались протяженностью. Эпителиальный слой ворсинок сохранялся на всем протяжении, в том числе в апикальной области. В соединительнотканной основе ворсинок содержались также малые и средние лимфоциты, единичные плазмобласты и макрофаги, располагавшиеся между стенками умерено наполненных гемо- и лимфокапилляров.

В отличие от кроликов предыдущих групп гладкомышечные клетки, окружающие эти сосуды, были хорошо обозначенными интенсивной оксифильной окраской цитоплазмы.

Изменения в гистологической структуре селезенки животных, получавших в составе рациона биомассы хлореллы из расчета 2% от общей массы корма, были хорошо выражены (рис.5).

Рис.3. Гистокартина тощей кишки кролика получавшего биомассу хлореллы 2 % от обшей массы корма Окраска гематоксилином и эозином. Х420

Рис.4. Гнстокартина тощей кишки кролика, получавшего «Хлорофитовит» 2 % от общего объема корма. Окраска гематоксилином и эозином X 420.

2.11.3 Микроструктура селезенки

Рис.5. Гистокартина селезенки кролика, получавшего биомассу Рнс.6. Селезенка кролика, получавшего «Хлорофигоаит»

хлореллы 2 % от общего объема корма. Окраска гематоксилином 2 % от общего объема корма. Окраска гематоксилином и

и эозином. X 220. эозином. X 220

По всей поверхности срезов органа располагались многочисленные лимфатические узелки, различающиеся по величине и плотности клеточного состава. Заметно увеличилось содержание лимфатических узелков, имеющих обозначенные центры размножения. Обнаруженные изменения в селезенке соответствовали умеренной активизации лимф пролиферативных процессов, сопровождаемых сохранением пониженного уровня выработки тромбоцитов. Изменения гистологической структуры селезёнки кроликов, получавших кормовую добавку «Хлорофитовит» из расчета 2% от общей массы корма, хорошо обозначены, вследствие наличия многочисленных, не больших по величине и крупных лимфатических узелков, на умеренного полнокровия красной пульпы органа (рис.6). Следует отметить практическое исчезновение признаков повышенной проницаемости стенки и проявлений мукоидного набухания, столь часто обнаруживаемых у контрольных животных.

2.11.4 Микроструктура почек Почки кроликов, после применения биомассы хлореллы (2% от общего количества корма) - отличались неравномерным сохранением рисунка гистологического строения органа (рис. 7). В эпителии канальцев коркового веществе органа заметно ослабли проявления необратимых нарушений обмена веществ, что способствовало частичному восстановлению ее

проходимости, благодаря чему в большинстве почечных телец в значительной степени ослабли проявления отека полости капсулы, восстанавливались профили просветов капилляров увеличивалось содержание и объем клеток мезангиума. Рисунок гистологического строения в структуре почек, после применения кормовой добавки «Хлорофитовит» из расчета 2% от общего количества корма, был хорошо выраженным (рис. 8). В клубочках исчезли явления отека полости капсулы, вследствие чего, капилляры приобрели умеренное расширение. Вследствие заметного улучшения кровотока в перитубальных капиллярах, исчезновения препятствий к канальцевой сети практически исчезли признаки отека полости капсулы клубочков.

Рис.7. Гистокартина почки кролика, получавшего биомассу хлореллы вобъеме2% отобщей массы корма. Окраска гематоксилином и эозином. Х420

Рис.8. Гистокартина почки кролика, получавшего «Хлорофитовит» в объеме 2 !й от общей массы корма. Окраска гематоксилином и эозином. Х420

Отмеченные изменения в почках отражали резкое ослабление проявлений белкового тубулонефроза, атрофии эпителия канальцев, восстановлением проницаемости канальцевой сети. Улучшалась внутриорганная гемоциркуляция в сосудах как с максимальным, так и минимальным кровяным давлением.

3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 1. «Хлорофитовит» - это комплексная кормовая добавка, приготовленная на основе биомассы хлорелл рода Chloreella vulgaris и

вторичных продуктов пчеловодства. В ее состав входят: углеводы, протеин, аминокислоты, витамины и минеральные вещества: кальций, калий, железо, фосфор, марганец, медь, цинк, молибден, кобальт.

2. В опытах на лабораторных животных (белые крысы, кролики, морские свинки) установлено, что «Хлорофитовит» относится к нетоксичным препаратам, не проявляет местнораздражающее, аллергезнрующее, тератогенное и эмбриотоксическое действия.

3. При включении «Хлорофитовит» 2 % к общей массе корма у крыс, цыплят-бройлеров, кроликов - нормализуются обменные процессы, усиливается прирост живой массы.

4. Включение кормовой добавки «Хлорофитовит» в состав корма кур-несушек 2 % к общей массе корма способствует ускорению начала яйцекладки, увеличению яйценоскости, а также повышению сохранности птицы, массы яиц и улучшению их качества.

5. Органолептические и вкусовые качества мяса цыплят, кроликов, получавших кормовую добавку «Хлорофитовит», соответствовали ГОСТу 7269-79 и несколько превосходили показатели контрольной группы (на 0,3 балла).

6. Включение в состав 2 % «Хлорофитовит» к общей массе корма кур, цыплят-бройлеров, кроликов способствует повышению естественной резистентности, в частности лизоцимной активности, функциональной активности нейтрофилов в спонтанном и стимулированном НСТ-тестах, а также улучшает морфобиохимнческий состав крови.

7. Микроструктурные изменения в печени, почках, селезенке и кишечнике кроликов, получавших в составе рациона кормовую добавку «Хлорофитовит», были значительно лучше, по сравнению с контрольными животными и характеризовались улучшением внутриорганной гемоциркуляции и полным отсутствием признаков нарушения обмена веществ.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для применения в практике птицеводства и кролиководства рекомендуется препарат «Хлорофитовит», в оптимальной дозе - 2 % от массы корма.

2. На основании проведенных исследований препарата «Хлорофитовит» разработано рационализаторское предложение, которое рассмотрено и утверждено научно-техническим советом ФГБОУ ВПО «Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» (протокол 2 от 10 декабря 2014 г).

5. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ахметова, Л.Т. «Винивет» - эффективная кормовая добавка в птицеводстве / Л.Т. Ахметова, Ж.Ж. Сибгатуллин, A.M. Алимов, М.Ш. Алиев и др. // Комбикорма. - 2012. - №5. - С.34-37.

2. Ахметова, Л.Т. Применение кормовой добавки «Винивет» в птицеводстве / Л.Т.Ахметова, Д.Н.Ефимов, А.М.Алимов и др. // Сельскохозяйственная биология. - 2012. - №6. - С.83-86.

3. Ахметов, М.Г. Научное обеспечение инновационного развития птицеводства РФ: опыт, проблемы и пути решения на примере республики Татарстан / М.Г.Ахметов // Матер. Всеросс. научно-производ. конф. по птицеводству. -Казань, 2010. -213с.

4. Барсков, A.A. Изучение бактерицидных свойств прополиса, собранного в разных географических зонах в отношении стафилококков / A.A. Барсков, М.М. Назипов // Ученые записки КГАВМ им. Н.Э.Баумана. Казань, 1958. - Т.70. - С. 45-52.

5. Бессарабов, Б.Ф. Птицеводство и технология производства яиц и мяса птицы / Б.Ф.Бессарабов, Э.И.Бондарев, Т.А.Столляр // Учебник. 2-е изд. -СПб.: "Лань", 2005.-35 с.

6. Бударкова, Э.Л. Влияние прополиса на антигенные и иммуногенные

свойства столбнячного анатоксина. // Автореферат на соиск.уч.степ.канд.вет.наук., Казань 1972, -С. 15.

7. Калашников, А.П. Прошлое, настоящее и будущее науки в кормлении с/х животных/ А.П. Калашников// Зоотехния. - 2008,- №6. - С.28-24.

8. Кивапкина, В.П. Влияние препаратов прополиса на естественную резистентность кроликов /В.П. Кивалкина, С.Ш. Турсуналиев// Апитерапия. Биология и технология продуктов пчеловодства. Днепропетровск, 1988. -4.2. - С.101-104.

9. Фисинин, В.И. Состояние и развитие отечественного и зарубежного птицеводства. / В.И.Фисиснин // Материалы Всероссийской научно-производ. конф. по птицеводству. Казань. - 2010.- С. 3-8.

10. Фисинин, В.И. Оценка кормовой добавки «Орегостим» / В.И. Фисинин, И.М. Егоров, Б .В. Авдонин // Птицеводство. - 2010. - №8. - С. 18-19.

6.СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зухрабова, Л.М. Определение токсичности «Хлорофитовит» на лабораторных животных / Л.М.Зухрабова, А.М Алимов // «Ветеринарный врач». - 2013. -№3. - С. 12-16.

2. Зухрабова, Л.М. Результаты определения острой токсичности «Хлорофитовит» / Л.М.Зухрабова // Матер, научно-практ. конф. «Современные проблемы анатомии, гистологии и эмбриологии животных». Казань. - 2014. - С. 81-82.

3. Зухрабова, Л.М Токсикологическая характеристика «Хлорофитовит». / Л.М Зухрабова // Материалы научно-практической конференции «Научные исследования молодых ученых — сельскому хозяйству России». Казань. -2014. - С. 53-55.

4. Зухрабова, Л.М Оптимизация биотехнологии выращивания хлореллы в лабораторных условиях / Л.М. Зухрабова, A.M. Галиева, // «Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э.Баумана».- 2014. - Том 217 - С. 99-102.

5. Зухрабова, Л.М. Применение суспензии хлореллы и «Хлорофитовит» цыплятам / Л.М Зухрабова. A.M. Алимов // «Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии». - 2014. - № 1. - С. 25-27.

Отпечатано в ООО «Печатный двор», г. Казань, ул. Журналистов, 2А, оф.022

Тел: 295-30-36,564-77-41,564-77-51. Лицензия ПД№7-0215 от 01.11.2001 г Выдана Поволжским межрегиональным территориальным управлением МПТР РФ. Подписано в печать 13.04.2015г. Печл. 1,5 Заказ М К-7482. Тираж 80 экз. Формат 60x841/16. Бумага офсетная. Печать - ризография.