Факторы неспецифической иммунологической резистентности слюны жвачных животных

Покровская, Екатерина Сергеевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Факторы неспецифической иммунологической резистентности слюны жвачных животных
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Факторы неспецифической иммунологической резистентности слюны жвачных животных"

005049198

На правах рукописи

ПОКРОВСКАЯ ЕКАТЕРИНА СЕРГЕЕВНА

ФАКТОРЫ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИММУНОЛОГИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ СЛЮНЫ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань - 2012

005049198

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Гильмутдинов Рустам Якубович

Официальные оппоненты: Садыков Нариман Султанович - заведующий

лабораторией по хранению и изучению штаммов особо опасных болезней ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», доктор ветеринарных наук, профессор Хаертынова Ильсияр Мансуровна-заведующая кафедрой инфекционных болезней ГОУ ДПО «Казанская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию», доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная

сельскохозяйственная академия имени П. А. Столыпина»

* <20

Защита диссертации состоится {Г» 2012 г. в « » часов на

заседании диссертационного совета Д - 220.012.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» по адресу: 420075, г. Казань, Научный городок - 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань)

Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещены на официальном сайте ВАК РФ http://www.mon.gov.ru/ и сайте ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ»: www.vnivi.ru

Автореферат разослан 2012 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, //

кандидат вет. наук О—- в.И. Степанов

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ 1.1 Актуальность темы. Технологии лабораторной диагностики регулярно пополняются новыми методиками, позволяющими выявлять на ранней стадии и в короткие сроки многие заболевания. В современной ветеринарной науке и практике при исследовании неспецифических факторов иммунитета ограничиваются, как правило, изучением сыворотки крови. Между тем, внимание ученых в последнее время привлекают, в качестве альтернативы, возможности использования слюны для экспресс-диагностики различных патологий (Денисов А.Б. и др., 2006 и др.), в частности ее иммунологические, биохимические, физические и другие свойства (Барер Г.М. и др., 2003; Bucki R. et al., 2004; Busamia В. et al., 2010).

Тем не менее, большинство известных в медицине методик получения слюны не нашли широкого применения в ветеринарной практике. Кроме того, изучение слюны животных осуществляется в значительно меньших объемах, причем зарубежными исследователями (Larmas М., Scheinin А., 1971; Stevens С., Hume I., 1995 и др.). Бактерицидные свойства слюны, несомненно, будут определяться состоянием оральной микрофлоры (качественный и количественный состав). При этом необходимым условием правильной оценки состояния полости рта и выявляемых в ней изменений является четкое представление о "норме".

Неспецифический иммунитет слюны обеспечивается лизоцимом, комплементом, пропердином, различными гликопротеинами, катионными антимикробными пептидами и т.д. (Мартынова В.А., Голосова Т.В., 1989; Smith D., Taubman М., 1992; Ahmad М. et al., 2004 и др.), исследования которых в данном аспекте немногочислены. Используемые в ветеринарии методики их определения изначально разработаны применительно к сыворотке крови человека, поэтому большинство вопросов реализации этого направления относительно слюны животных на сегодня не решены.

Большая часть исследований бактерицидной активности (БА) сыворотки крови проводится с использованием тест-культуры Е. coli (Красильников А.П., Романовская Т.Р., 1999; Crokaert F. et al., 1988 и др.), несмотря на констатацию

зависимости ее величины от вида, а также концентрации, фазы роста тест-кулыуры и длительности инкубирования проб (Максимлюк К.Н., Телишевская Я.Я., 1995; Саруханов В.Я., Исамов H.H., 2001; Малев A.A., 2009; Benge G., 1988; Igumbor Е., Osayande D., 2000). Влияние же перечисленных факторов на величину бактерицидной активности слюны животных на сегодня вообще не оценено.

Изучение у животных различных видов таких неспецифических факторов как лизоцим, комплемент, пропердин и др. является важным и актуальным в раскрытии механизмов естественной резистентности и иммунитета в целом. Слюна в качестве объекта этих исследований расширяет диагностические, превентивные и терапевтические возможности врачей.

1.2 Цель и задачи исследований. Целью работы являлось изучение методологических вопросов оценки неспецифических иммунологических показателей слюны у жвачных животных для повышения информативности путем минимизации влияния на них аналитических и преаналитических процедур.

В соответствии с указанной целью решались следующие задачи:

- сравнить эффекты растворов цитрата натрия (2 %), пилокарпина гидрохлорида (1 %) и прозерина (0,05 %) на слюноотделение жвачных животных;

- изучить качественный и количественный состав микрофлоры полости рта коров и овец;

- определить зависимость величины бактерицидной активности слюны от методических факторов (вида и концетрации тест-культуры, времени инкубирования проб, преаналитических процедур, сезона года);

- исследовать факторы неспецифического иммунитета слюны и сыворотки крови коров и овец в сравнительно-видовом аспекте;

- установить степень корреляции бактерицидной активности слюны жвачных с основными факторами неспецифического иммунитета (лизоцимом, комплементом и пропердином) и биохимическими показателями.

1.3 Научная новизна работы. Впервые показана возможность использования М. ¡увосЫкйсиз в качестве единой тест-культуры при параллельной оценке бактерицидной и лизоцимной активности слюны. Адаптирована применительно к слюне жвачных методика Л.С. Резниковой (1967) по определению комплементарной активности сыворотки крови. Выявлено влияние преаналитических процедур на величины бактерицидной и комплементарной активности слюны жвачных. Установлена степень корреляция бактерицидной активности слюны жвачных с основными факторами неспецифического иммунитета (лизоцимом, комплементом, пропердином) и биохимическими показателями. Определена скорость слюноотделения жвачных животных при воздействии фармакологических препаратов (цитрата натрия, пилокарпина гидрохлорида и прозерина).

1.4 Практическая значимость работы. Для оценки неспецифической иммунологической резистентности организма предлагается новый объект исследования - слюна.

Показана зависимость величины бактерицидной, комплементарной и лизоцимной активности, содержания пропердина слюны жвачных от видовых, сезонных и тендерных характеристик. Обоснована возможность использования М. 1узос1еМси8 для унификации методов параллельной оценки бактерицидной и лизоцимной активности. Выявлено влияние аналитических процедур (вида и концентрации тест-культуры микроба, длительности инкубации проб, предварительного центрифугирования и фильтрования) на величину бактерицидной активности слюны жвачных. Обнаружена связь факторов неспецифического иммунитета слюны с микробным пейзажем ротовой полости. Подготовлено методическое указание «Определение комплементарной активности слюны жвачных животных модифицированной методикой Л.С. Резниковой», утвержденное ректором ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», профессором Г.Ф. Кабировым (ноябрь, 2012 г.).

1.5 Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на III Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням

«Инфекционные болезни» (Москва, 2011) и научно-практических конференциях: «Научное обеспечение инновационного развития ветеринарной медицины и животноводства» (Казань, 2011); «Актуальные проблемы научного и кадрового обеспечения инновационного развития АПК» (Казань, 2012); «Научно-техническое творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях» (Москва, 2012); «Научное обеспечение устойчивого развития отраслей животноводства Российской Федерации» (Новочеркасск, 2012).

1.6 Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 5 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

1.7 Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Видовые, сезонные и тендерные различия в бактерицидной, лизоцимной, комплементарной активности и содержании пропердина в слюне жвачных. Модификация применительно к слюне жвачных методики Л.С. Резниковой (1967) по определению комплементарной активности сыворотки крови.

2. Зависимость величины бактерицидной активности слюны от вида используемой тест-культуры, ее концентрации, длительности инкубации проб, преаналитических процедур, а также от сезона года.

3. Степень корреляции бактерицидной активности слюны исследуемых животных с основными факторами неспецифического иммунитета и биохимическими показателями.

1.8 Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 165 страницах компьютерного текста, состоит из Введения, разделов «Обзор литературы», «Материалы и методы исследований», «Результаты собственных исследований и их обсуждение», а также Выводов, Практических предложений и Списка литературы. Работа содержит 24 таблицы, проиллюстрирована 28 рисунками. Список использованной литературы включает 310 библиографических источников, в том числе 217 на иностранном языке и 8 ссылок на интернет-сайт.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена на кафедре патологической физиологии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана» (г. Казань) в течение 2009-2012 гг.

Исследования проведены на клинически здоровых нестельных коровах черно-пестрой породы в возрасте 4-6 лет массой 300-400 кг (30 животных), содержавшихся на молочно-товарной ферме ООО «Серп и Молот», с. Шапши Высокогорского района РТ, благополучной по инфекционным заболеваниям, овцах породы прекос в возрасте 2-х лет массой 40-45 кг (по 10 животных разного пола), верблюдицах в возрасте 6-ти лет массой 500-600 кг (2 животных), содержавшихся в условиях МУБП «Казанский зооботсад», а также студентах-волонтерах в возрасте 23-25 лет массой 50-70 кг (5 человек). При изучении методов фармакологической стимуляции слюноотделения у жвачных животных использовались растворы цитрата натрия (2 %); пилокарпина гидрохлорида (1 %); прозерина (0,05 %). Сбор слюны для исследований проводили после активации секреции 1 %-ным раствором пилокарпина гидрохлорида в дозах 2,5 мл на овцу, по 15 мл на корову и верблюдицу.

Собранную слюну сразу замораживали, а после размораживания одну ее половину центрифугировали при 3 тыс. об./мин в течение 10 мин (одну часть надосадочной жидкости фильтровали через мембранные фильтры фирмы «Millipore» (США) диаметром пор 0,22 мкм, другую - нет), оставшуюся половину использовали нецентрифугированной. Кровь у животных получали из яремной вены стерильно специальными системами во флаконы емкостью 250 мл; у людей - из локтевой вены в вакуумные пробирки «Vacutainer», а слюну - по методике Т.Б. Андреевой (1965) методом сплевывания. Сыворотку крови получали по методике Н.И. Гурьянова (1992). После размораживания ее стерилизовали механически аналогично слюне.

При определении БА слюны и сыворотки крови жвачных по методике О.В. Смирновой, Т.А. Кузьминой (1966), согласно рекомендации A.A. Малева и др. (2009; 2011), использовали тест-культуры микроорганизмов, относящихся к разным группам по Граму: Е. coli (штамм М-7) и В. subtilis (штамм 83 ГКИ им.

JI.A. Тарасевича) и M. lysodeikticus (штамм 2665 ГКИ им. JI.A. Тарасевича) в концентрациях 1 млн. микробных клеток, 30 млн. микробных клеток и 1 млн. микробных клеток в 1 мл пробы соответственно. Продолжительность инкубации проб слюны составила 5, 5 и 3 ч; сыворотки крови - 5, 3 и 3 ч соответственно.

Лизоцимную активность слюны определяли по С.С. Киселю (1972), комплемента - по Л.С. Резниковой (1967), пропердина - по Г.С. Томилке, И.С. Старостиной (1984). Биохимические показатели (общий белок, аланинаминотрансфераза - АЛТ, аспартатаминотрансфераза - АСТ, креатинин, мочевина, щелочная фосфатаза, холестерин, глюкоза, общий билирубин, альбумин) слюны определяли на биохимическом анализаторе фирмы «Daytona» с использованием реактивов фирмы «Randox» (Англия).

При изучении микробного пейзажа ротовой полости жвачных бактериоскопическим и бактериологическим методами применяли: бактериологический набор (тампон на металлическом стержне в среде Amies с углем) фирмы «Himedia» (Индия); 5 %-ый кровяной агар; желточно-солевой агар; растительно-молочную среду; среду Эндо; сахарный бульон и колумбийский агар; среду Сабуро с полимиксином; набор коммерческих тест-систем MICRO-LA-TEST фирмы «PLIVA-Lachema Diagnostica» (Чешская республика); идентифика-ционные полоски ОКСИтест, ПИРАтест, ВПтест, ОНПтест; набор красок для простого и сложного методов окрашивания; иммерсионное масло.

Цифровой материал подвергался статистической обработке методами вариационной статистики (Плохинский Н.А., 1978) с вычислением средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (± m), коэффициента вариации (Cv), уровня достоверности (р) и коэффициента корреляции (г) с использованием программы Microsoft Excel.

Выражаю глубокую благодарность канд. биол. наук Малёву А.А., сотрудникам МУЗ «ГДЦ по ЛДИЗ» (г. Казань) за оказание помощи при выполнении данной работы.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Методы фармакологической стимуляции слюноотделения у жвачных животных

Примененный нами местно 2 %-ый раствор цитрата натрия не вызывал выраженного усиления секреции слюны у животных. Интенсивность и продолжительность саливации у овец после инъекции 5 мл на животное 1 %-ого раствора пилокарпина гидрохлорида составили 14 мл/мин и 3 ч; после инъекции 2,5 мл на животное - 9 мл/мин и 1 ч соответственно. После введения овцам 0,05 %-го раствора прозерина в дозе 10 мл на животное в период активации саливации (2 ч; 6,4 мл/мин) отмечали тахипноэ и незначительное истечение из носа; 5 мл на животное - усиления слюноотделения и изменений в общем состоянии не отмечалось. Выявив наибольшую эффективность раствора пилокарпина и сопоставимость дозовых его эффектов, данный раствор в дозе 15 мл на животное использовался для аналогичных исследований у коров и верблюдиц. При этом скорость саливации составляла 66 и 72 мл/мин соответственно, а усиление секреции слюны отмечалось в течение 1 часа.

3.2 Микрофлора ротовой полости жвачных

Симбиотическая микрофлора организма-хозяина является высоко информативным показателем состояния как организма в целом, так и полости рта в частности, формируя и влияя на их бактерицидные свойства. Микробный пейзаж ротовой полости жвачных представлен, в основном, грамположительными кокками. У коров чаще всего встречались транзиторные виды микробов, у овец - облигатные. Наименьшая обсемененность полости рта жвачных транзиторными микробами отмечалась в осеннее-зимний период. У овцематок чаще идентифицировались облигатные, у баранов - транзиторные грамположительные кокки, причем у последних видовой спектр микробов был разнообразнее.

33 Методологические аспекты изучения бактерицидной активности слюны жвачных

33.1 Бактерицидная активность слюны и сыворотки крови жвачных относительно различных видов тест-культур

Установлено, что величина бактерицидной активности слюны коров и овец при использовании тест-культур Е. coli, В. subtilis и М. lysodeikticus равнялась соответственно 59,8 и 51,6 %; 66,7 и 61,4 %; 69,6 и 64,9 %; сыворотки крови -соответственно 81,6 и 75,4 %; 42,1 и 35,8 %; 45,2 и 39,1 %.

При использовании В. subtilis и М. lysodeikticus бактерицидная активность слюны была выше, чем сыворотки крови: у коров на 36,9 и 35,1 %, у овец - на 41,7 и 39,8 % соответственно; при использовании Е. coli, наоборот, ниже у коров и овец на 26,7 и 31,6 % соответственно. В первом случае это можно объяснить преобладанием лизоцима и иных антибактериальных факторов, действующих против грамположительных микробов; во втором - невысокой активностью комплемента в слюне. Величина бактерицидной активности слюны при использовании культур В. subtilis и М. lysodeikticus была выше, чем при использовании культуры E.coli у коров на 10,3 и 14,1 %, у овец - на 16 и 20,5 % соответственно.

33.2 Влияние концентрации тест-культуры и длительности инкубирования проб на величину бактерицидной активности слюны и сыворотки крови жвачных

Результаты исследования бактерицидной активности размороженной фильтрованной слюны и сыворотки крови жвачных представлены в таблице 1.

Из таблицы 1 видно, что для слюны и сыворотки крови оптимальной являлась концентрация М. lysodeikticus и Е. coli в 1 млн. микробных клеток, В. subtilis - в 30 млн. микробных клеток в 1 мл пробы. Продолжительность инкубации проб слюны при использовании культур Е. coli и B.subtilis составляла 5 ч, М. lysodeikticus - 3 ч; сыворотки крови - с Е. coli - 5 ч, с В. subtilis и М. lysodeikticus - 3 ч.

Таблица 1 - Зависимость величины бактерицидной активности (%) слюны и сыворотки крови жвачных животных от концентрации тест-_микроба и длительности инкубирования проб._

Исследуемая жидкость Длительность инкубации, ч Концентрация тест-микроба, млн.бак. кл./ ли Вид животного Вид тест-микроба

Е. coli В. subtilis М. lysodcikticus

M±m Cv, % M±m Cv, % М±ш Cv, %

Сшона 3 30 Корова -75,6±8,5 22,6 12,8±2,2 34,7 12,2±3,2 52,1

Овца -84,3±5,2 12,3 7,4±2,3 49,2 7,9±1,7 42,9

1 Корова 14,8±2,3 30,5 100±0 0 68.9±1,5 4,3

Овца 9,6±2,3 47,8 100±0 0 63,5±1,4 4,5

4 30 Корова -39,7±5,0 25,2 33,2±2,5* 15,1 -7,2±1,7* 45,1

Овца -4б,8±6,8 29,1 28,4±2,0* 13,7 -13,3±3,2* 48,3 8,9

1 Корова 31,1±3,2 20,7 100±0 0 35,2±1,9*

Овца 27,5±2,7* 19,6 100±0 0 27,5±2,0* 9,4

5 30 Корова -13,1±3,3* 50,4 67,3±2,2* 6,6 -25,8±7,44* 57,6

Овца -16,6±3,0* 36,7 60,6±2,3* 7,1 -36,2±5,1* 28,0

1 Корова 55,4±2,3* 8,3 100±0 0 20,1±1,9* 10,5

Овца 50,6±2,2* 8,1 100±0 0 13,9±2,8* 21.5

Сыворотка крови 3 30 Корова -116,2±14,2 24,5 44,5±2,0 9,1 -14,5±4,5 61,5

Овца -149,7±20,5 27,4 34,6±2,5 15,5 -36,7±5,4 29,6

1 Корова 22,4±2,8 20,1 100±0 0 44,6±2,1 8,2

Овца 18,5±2,9 31,4 100±0 0 41,2±2,6 12,7

4 30 Корова -58,0±9,2 31,8 27,9±2,0* 14,3 -25,6±14,2**** 32,7

Овца -67,2±7,1* 21,1 20,9±2,8* 19,8 -69,5±6,3 18,2

1 Корова 46,3±3,0* 12,8 100±0 0 21,8±2,0 10,2

Овца 41,8±3,1* 13,5 Ю0±0 0 17,3±2,8* 32,7

5 30 Корова -12,4±4,3* 69,3 -7,6±1,9* 50,4 -78,7±4,4* 11,1

Овца -20,2±6,8* 66,6 -14,8±4,3* 68,5 -112,3±12,1*'**** 21,6

1 Корова 83,5±2,1* 5,1 100±0 0 14,3±2,7 19,8

Овца 72,3±2,3* 7,9 100±0 0 9,8±2,7* 55,9

примечание: *,**,"*,****-уровни достоверности, соответственно р <0,001; <0,01; <0,05 и <0,1-

333 Зависимость величины бактерицидной активности слюны коров и овец от преаналитических процедур

Слюна является неоднородной жидкостью, что, на наш взгляд, может сказаться на результатах нефелометрии и величине бактерицидной активности. Бактерицидная активность размороженной интактной слюны у коров и овец при использовании тест-культур Е. coli, В. subtilis и М. lysodeikticus составила соответственно 46,7 и 41,3 %; 53,5 и 47,6 %; 56,1 и 50,3 %; центрифугированной - соответственно 54,1 и 48,2 %; 59,3 и 54,5 %; 63,3 и 56,5 %; фильтрованной -соответственно 59,8 и 51,6 %; 66,7 и 61,4 %; 69,6 и 64,9 %. Продемонстрировано повышение величины бактерицидной активности слюны коров и овец и снижение ее вариабельности после проведения преаналитических процедур: центрифугирования и фильтрования (с использованием тест-культур Е. coli, В. subtilis и М. lysodeikticus у коров в среднем на 15,8 и 28; 10,8 и 24,7; 12,8 и 24 % соответственно; у овец - на 16,7 и 24,9; 14,5 и 28,9; 12,3 и 29 % соответственно). Фильтрование интактной слюны позволяет удалить посторонние микробы, способные вызывать прирост оптической плотности наряду с тест-микробом. 33.4 Сезонная вариабельность бактерицидной активности слюны и сыворотки крови жвачных животных

Результаты исследования сезонной вариабельности бактерицидной активности слюны и сыворотки крови коров и овец представлены в таблице 2.

Как следует из таблицы 2, максимальные значения бактерицидное™ слюны и сыворотки крови у коров и овец отмечались летом; что, предположительно, связано с интенсивной антигенной (бактериальной) нагрузкой на организм животного в этот период. Минимальные значения бактерицидности наблюдались весной и зимой. Вероятно, это определяется низкими температурами среды, губительными для большинства микробов; несбалансированностью рационов в данные периоды и гиподинамией животных.

Таблица 2 - Сезонная вариабельность бактерицидной активности (%) слюны и сыворотки крови жвачных животных

Исследуемая жидкость Сезон года Вид животного Вид тест-микроба

Е. coli В. subtilis М. lysodeikticus

M±m Cv ,% M±m Cv, % M±m Cv, %

Слюна Зима Корова 52,9±1,4* 7,9 56,4±0,9* 5,0 61,4±1,1* 5,6

Овца 43,8±1,0* 6,9 53,1±1,1* 5,9 56,0±0,8* 4,3

Весна Корова 50,1±1,1* 6,5 58,6±1,2* 6,1 64,2±1,0* 4,6

Овца 46,4±0,9* 6,0 52,6±1,1 6,2 61,6±1,1 5,2

Лето Корова 59,8±0,7 3,5 66,7±1,0 4,7 69,6± 1,3 3,2

Овца 51,6±0,9 5,5 61,4±0,8 3,9 64,9± 2,2 5,8

Осень Корова 56,4±1,1 5,8 62,8±1,2** 5,8 66,8±1,1 4,7

Овца 49,2±1,1**** 6,7 55,6±1,0* 5,5 58,4±1,0* 5,2

Сыворотка крови Зима Корова 76,0±1,0* 3,9 34,9±0,9* 7,9 37,7±0,9* 6,8

Овца 68,6±0,8* 3,6 27,9±1,0* 10,5 31,8±1,0* 9,2

Весна Корова 74,1±1,0* 4,1 37,6±1,2* 9,2 40,1±0,9* 6,3

Овца 70,7±1,1* 4,5 33,4±1,0 8,9 36,6±1,1**** 8,7

Лето Корова 81,6±0,9 3,5 42,1±1,3 9,0 45,2±2,1 9,9

Овца 75,4±0,7 2,6 35,8±1,1 9,3 39,1±2,3 11,3

Осень Корова 79,5±1,0**** 3,8 40,5±0,9**** 6,4 42,7±0,8 5,9

Овца 73,4±0,9 3,8 30,9±1,0* 10,0 34,2±0,9 8,1

Примечание: *, **, ***,**** - уровни достоверности, соответственно р <0,001; <0,01; <0,05 и <0,1.

3.4 Методологические аспекты изучения комплементарной активности слюны жвачных

Модифицирована применительно к слюне жвачных методика Л.С. Резниковой (1967) по определению комплементарной активности сыворотки крови путем замены стандартного ряда проб одной, куда вносится по 1 мл гемолитической системы и исследуемой жидкости. При этом величина комплементарной активности (% гемолиза) повысилась у слюны человека с 20,4 до 65,4; у коров - с 6,6 до 14,7; овец - с 5,7 до 12,3; у сыворотки крови человека с

85.6 до 165; коровы — с 9,4 до 31,6; овцы — с 8,4 до 28,7.

Нами установлена невысокая активность комплемента в слюне жвачных. Предположительно, это связано с низкой ионной силой слюны; наличием в ней главных гликопротеинов (кислые, богатые пролином, белки) и внеклеточных полимеров, затрудняющих доступ белков системы комплемента к клеточной стенке эритроцитов, а также пониженной способностью ^ М слюны

активировать комплемент и связывать его компоненты, исключающей повреждающее воздействие комплекса антиген-антитело на слизистые оболочки. Вероятно этим объясняется слабый фагоцитоз в полости рта.

Комплементарная активность интакгной слюны человека, коров и овец (89,3; 23,7 и 20,5 % гемолиза соответственно) была выше центрифугированной (65,4; 14,7 и 12,3% гемолиза соответственно) и фильтрованной (71,4; 16,8 и 14,2 % гемолиза соответственно) соответственно на 26,8 и 20,1 %; 38 и 29,1 %; 40 и

30.7 %. Это, на наш взгляд, связано с оседанием при центрифугировании деградированного муцина и других компонентов размороженной слюны, а также наличием в интактных образцах микробов, способных инактивировать комплемент путем адсорбции и выделения антикомплементарных веществ (Резникова Л.С., 1967).

3.5 Лизоцимная активность слюны и сыворотки крови коров и овец

Лизоцимная активность слюны и сыворотки крови коров (37,3 и 19,6 %) превышала таковую овец (26,6 и 15,6 %) в 1,4 и 1,3 раза соответственно. Максимальные ее значения у слюны и сыворотки крови коров наблюдались в летне-осенний (40,3 и 22,6 %), у овец - в весенне-летний (29,1 и 18,6 %) периоды.

Величина лизоцимной активности слюны превышала таковую сыворотки крови у коров - в 1,8 раза, у овец -1,6 раза.

3.6 Содержание пропердина в слюне и сыворотке крови коров и овец

Выявлено, что содержание пропердина в слюне и сыворотке крови у коров (110 и 473 мкг/мл) выше, чем у овец (66 и 269 мкг/мл) на 40 и 43,1 % соответственно. Количество пропердина в летне-осеннее время в слюне и сыворотке крови коров (133 и 495 мкг/мл) и овец (82,2 и 294 мкг/мл) было выше на 17,3 и 4,4 % соответственно, чем в зимне-весеннее. Концентрация пропердина в сыворотке крови превышала таковую в слюне у коров в 3,7; у овец - в 3,6 раза. Мы связываем это с нестойкостью пропердина, высокой концентрацией магния в слюне околоушных желез жвачных (McDougall Е., 1948). Вероятно, этим объясняется невысокая комплементарная активность слюны.

3.7 Половые различия в величине комплементарной, лизоцимной активности и содержании пропердина в слюне мелкого рогатого скота

Комплементарная активность и уровень пропердина в слюне у баранов (20,2 % гемолиза и 85,7 мкг/мл) была выше, чем у овцематок (17,8% гемолиза и 73,6 мкг/мл) в 1,1 и 1,2 раза соответственно, а лизоцимная активность наоборот, ниже в 1,1 раза (у самцов 28,4 %, у самок 30,7 %). На наш взгляд, это объясняется различием гормонального статуса самцов и самок (в первую очередь половыми гормонами).

3.8 Корреляция бактерицидной активности слюны жвачных с факторами неспецифического иммунитета и биохимическими показателями

Химический состав слюны, несомненно, влияет на ее бактерицидные свойства. Можно предположить разную степень участия лизоцима, комплемента, пропердина слюны жвачных в формировании ее бактерицидности.

При использовании в качестве тест-кулыуры Е. coli отмечалась достоверная (во всех случаях р<0,01) положительная корреляция в зимнее время у коров меяоду бактерицидной активностью слюны и АЛТ (г=0,23), креатинином (i=0,56); у овец - общим белком (г=0,41), креатинином (г=0,45), холестерином (г=0,23). В весеннее время у коров — глюкозой (г=0,51); у овец - общим белком (г=0,66), креатинином (г=0,59). В летнее время у коров - АЛТ (г=0,36), глюкозой

(і=0,41); у овец - холестерином (г=0,50), глюкозой (г=0,22). В осеннее время у коров - AJIT (г=0,28); у овец - общим белком (г=0,64), креатинином (г=0,66).

При использовании в качестве тест-культуры В. subtilis наблюдалась достоверная (во всех случаях р<0,01) положительная корреляция в зимнее время у коров между бактерицидной активностью слюны и общим белком (г=0,55), креатинином (г=0,69), холестерином (г=0,22); у овец - общим белком (г=0,44), креатинином (г=0,52), глюкозой (г=0,20). В весеннее время у коров -холестерином (г=0,39); у овец - общим белком (г=0,48), креатинином (г=0,73). В летнее время у коров — холестерином (і=0,33); у овец — креатинином (г=0,54). В осеннее время у коров - общим белком (г=0,73), холестерином (г=0,58), альбумином (г=0,43); у овец - общим белком (r=0,49), ACT (г=0,24), креатинином (1=0,48).

При использовании в качестве тест-культуры M.lysodeikticus выявлялась достоверная (во всех случаях р<0,01) положительная корреляция в зимнее время у коров между бактерицидной активностью слюны и общим белком (г=0,73), креатинином (г=0,62); у овец - общим белком (г=0,36), креатинином (г=0,56). В весеннее время у овец - общим белком (г=0,52), креатинином (г=0,76). В летнее время у коров - креатинином (г=0,37), глюкозой (г=0,70); у овец - AJIT (г=0,20), креатинином (г=0,66). В осеннее время у коров - креатинином (г=0,44), мочевиной (г=0,34), щелочной фосфатазой (г=0,59), холестерином (г=0,25), глюкозой (г=0,22), альбумином (г=0,55); у овец - общим белком (r=0,21), ACT (i=0,56), креатинином (г=0,56), холестерином (г=0,26).

Степень корреляции бактерицидной активности слюны коров и овец с основными факторами неспецифического иммунитета (лизоцимом, комплементом и пропердином) представлена в таблице 3.

Согласно таблицы 3, у коров бактерицидность слюны в большей степени обусловливалась активностью лизоцима (р<0,01; г=0,54) и комплемента (р<0,01; г=0,57), тогда как у овец, кроме того, и содержанием пропердина (р<0,01; г=0,42).

Таблица 3 - Степень корреляции бактерицидной активности слюны жвачных

с основными факторами неспецифического иммунитета

Вид животного Тест-культура Сезон Лизоцим Пропердин Комплемент

Зима 0,31 0,21 0,22

Е.соїі Весна 0,76 0,32 0,63

Лето -0,18 0,36 -0,03

Осень 0,60 -0,77 0,65

Зима 0,70 0,15 0,67

Корова В.виМНв Весна 0,34 0,27 0,39

Лето 0,05 -0,26 0,18

Осень 0,75 -0,46 0,55

Зима 0,78 0,02 0,79

М.іувосіеікйсиз Весна 0,53 0,19 0,50

Лето -0,26 0,28 -0,22

Осень -0,45 0,79 -0,61

Зима 0,59 0,56 0,72

Е. соП Весна 0,75 0,50* 0,52

Лето 0,03 0,37 0,57

Осень 0,72 0,61 0,74

Зима 0,62 0,57* 0,60

Овца В. виЬгіІІБ Весна 0,19 0,42* 0,64

Лето 0,58 0,68* 0,75

Осень 0,72 0,72 0,63

Зима 0,68 0,42* 0,72

МЛузоёеИсйсиэ Весна 0,40 0,58* 0,63

Лето 0,69 0,76 0,46

Осень 0,62 0,26 0,47

Примечание: уровень достоверности корреляции р<0,01; * - р>0,1

ВЫВОДЫ

1. Величины комплементарной, лизоцимной активности и содержание пропердина в слюне и сыворотке крови у коров были выше, чем у овец (на 16,3 и 9,2; 37,3 и 19,6; 40 и 43,1 % соответственно). Максимальные значения лизоцимной активности слюны и сыворотки крови коров наблюдались в летне-осенний; у овец - в весенне-летний периоды; содержание пропердина - в обоих случаях в летнее-осеннее время. Комплементарная активность и уровень пропердина в слюне самцов была выше на 11,9 и 14,1 % соответственно, а лизоцимная активность, наоборот, ниже на 7,5 %.

2. Модифицирована применительно к слюне жвачных методика JI.C. Резниковой (1967) по определению комплементарной активности сыворотки крови путем замены стандартного ряда проб одной, куда вносится по 1 мл гемолитической системы и исследуемой жидкости. При этом, процент гемолиза в образцах слюны коров и овец повышался на 55 и 54 % соответственно.

3. Обоснована возможность использования М. lysodeikticus при параллельной оценке бактерицидной и лизоцимной активностей для унификации методов их определения. Для повышения величины бактерицидной активности слюны и сыворотки крови установлены концентрации тест-культур (1 млн. микробных клеток в 1 мл пробы - для Е. coli и М. lysodeikticus; 30 млн. микробных клеток в 1 мл пробы - для В. subtilis) и продолжительность инкубирования проб (со слюной при использовании Е. coli и В. subtilis -5 ч, М. lysodeikticus - 3 ч; с сывороткой крови - с Е. coli - 5 ч, с В. subtilis и М. lysodeikticus - 3 ч).

4. Бактерицидная активность слюны для грамположительных тест-культур была выше, чем для грамотрицательных. Предварительные центрифугирование и фильтрование снижали комплементарную активность слюны коров и овец на 38-40 и 29-31 % соответственно, тогда как бактерицидная активность возрастала на 13-15 и 26-28 % соответственно.

5. Отмечен максимум бактерицидной активности летом и минимум -весной, зимой. Показана связь факторов неспецифического иммунитета слюны с микробным пейзажем ротовой полости, представленным, в основном, грамположительными кокками. У коров чаще встречались транзиторные виды микробов, у овец - облигатные. Наименьшая обсемененность полости рта жвачных транзиторными микробами наблюдалась в осенне-зимний период. У овцематок чаще идентифицировались облигатные, у баранов - транзиторные грамположигельные кокки и видовой спектр микробов у них был разнообразнее.

6. Установлена положительная корреляция (во всех случаях р<0,01) бактерицидной активности слюны жвачных с биохимическими показателями (общий белок, 1=0,43; аланинаминотрансфераза, г=0,23; холестерин, 1=0,26; креатинин, г=0,54 и глюкоза, г=0,32) и основными факторами неспецифического

иммунитета. У коров бактерицидность слюны в большей степени обусловливалась активностью лизоцима (р<0,01; 1=0,54) и комплемента (р<0,01; г=0,57), тогда как у овец, кроме того, и содержанием пропердина (р<0,01; г=0,42).

7. Выявлена высокая положительная корреляция (во всех случаях р<0,01) между бактерицидной активностью, ее составляющими слюны и сыворотки крови жвачных. У коров и овец она составляла для бактерицидной активности г=0,53 и г=0,49; для лизоцимной активности г=0,83 и г=0,51; для комплементарной активности г=0,73 и г=0,39; для пропердина г=0,61 и г=0,74.

8. 1 %-ый раствор пилокарпина гидрохлорида показал наибольший стимулирующий эффект на слюноотделение жвачных по сравнению с растворами прозерина (0,05 %) и цитрата натрия (2 %). Появление первых выраженных признаков активации слюноотделения не зависело от видовой принадлежности животного, отличия отмечались лишь в скорости слюноотделения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предлагается новый объект исследования неспецифической иммунологической резистентности у жвачных животных - слюна.

2. При определении бактерицидной активности слюны рекомендуется использовать тест-культуры микроорганизмов, относящихся к разным группам по Граму. При параллельной оценке бактерицидной и лизоцимной активности для унификации методов их определения предпочтительно применять в качестве грамположительной тест-культуры М. lysodeikticus. Нами предложена модификация гемолитического метода JI.C. Резниковой (1967) для определения комплементарной активности слюны.

3. Для повышения величины бактерицидной активности слюны вносить в 1 мл пробы по 1 млн. микробных клеток Е. coli и М. lysodeikticus; 30 млн. микробных клеток В. subtilis; инкубировать пробы со слюной 5; 3 и 5 ч соответственно. Варабельность величины бактерицидной активности слюны снижается с 11 % до 5 и 3 % соответственно центрифугированием при 3000 об./мин в течение 10 мин и мембранной фильтрацией (диаметр пор 0,22 мкм). Учитывать сезонную вариабельность величины бактерицидной активности

слюны и связь ее неспецифических факторов иммунитета с микробным пейзажем ротовой полости.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Малев, A.A. Роль концентрации и длительности инкубации тест-культуры при определении бактерицидной активности сыворотки крови / A.A. Малев, М.К. Махамат, Е.С. Покровская и др. // Инфекционные болезни: Материалы III Ежегодного Всероссийского Конгресса по инфекционным болезням. - Москва, 2011. - Т. 9. - С. 223.

2. Покровская, Е.С. Методологические аспекты получения слюны у сельскохозяйственных животных / Е.С. Покровская, A.A. Малев, Р.Я. Гильмутдинов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - 2011. - Т. 208. - С. 95-99.*

3. Покровская, Е.С. Сезонная вариабельность видового спектра микрофлоры ротовой полости крупного и межого рогатого скота / Е.С. Покровская, A.A. Малев, РЛ. Гильмутдинов и др. // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - 2012. -Т. 209.-С. 266-272*

4. Покровская, Е.С. Методологические аспекты исследования комплементарной активности слюны и сыворотки крови жвачных животных / Е.С. Покровская, A.A. Малев, Р.Я. Гильмутдинов и др. // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - 2012. - Т. 210. - С. 165-172*

5. Махамат, М.К. Бактерицидная активность слюны и сыворотки крови крупного и мелкого рогатого скота при гельминтозах / М.К. Махамат, Р.Я. Гильмутдинов, Е.С. Покровская // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - 2012. - Т. 211. - С. 99104*

6. Покровская, Е.С. Бактерицидная активность слюны и сыворотки крови жвачных животных по отношению к различным видам тест-культур / Е.С. Покровская, H.H. Хуснутдинов, Н.С. Караганова // Актуальные проблемы научного и кадрового обеспечения инновационного развития АПК: Сборник

статей научно-практической конференции. - Ученые записки Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - Казань, 2012. - Т. 212. - С. 123-127.

7. Покровская, Е.С. Влияние преаналитических процедур на величину бактерицидной активности слюны жвачных животных / Е.С. Покровская, Р.Я. Гильмутдинов, М.К. Махамат // Актуальные проблемы научного и кадрового обеспечения инновационного развития АПК: Сборник статей научно-практической конференции. - Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана. - Казань, 2012. - Т. 212. -С. 127-131.

8. Покровская, Е.С. Бактерицидные свойства слюны и сыворотки крови жвачных животных / Е.С. Покровская, М.К. Махамат // Научно-техническое творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях: сборник докладов IV Международной научно-практической конференции. -Москва, 2012. - С. 336-339.

9. Гильмутдинов, РЛ. Слюна - новый объект диагностических исследований у животных / РЛ. Гильмутдинов, A.B. Иванов, М.К. Махамат, Е.С. Покровская // Достижения науки и техники АПК. - 2012. - № 11.- С. 47-50.*

10. Покровская, Е.С. Сезонная вариабельность бактерицидной активности слюны и сыворотки крови коров и овец // Научное обеспечение устойчивого развития отраслей животноводства Российской Федерации: Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Новочеркасск, 2012. - С. 60-63.

* - публикации в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Покровская, Екатерина Сергеевна

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Физиология слюноотделения и его видовые особенности

1.2 Способы получения слюны

1.3 Свойства слюны у животных различных видов и человека

1.3.1 Физико-химические и биохимические.

1.3.2 Иммунологические

1.4 Бактериология ротовой полости

1.5 Методы изучения слюны

1.5.1 Методы изучения физико-химических и биохимических свойств

1.5.2 Методы изучения иммунологических свойств

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.1 Материалы исследований

2.1.2 Методы исследований

2.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1 Методы фармакологической стимуляции слюноотделения у жвачных животных

2.2.2 Микрофлора ротовой полости жвачных

2.2.2.1 Сезонная вариабельность видового спектра микрофлоры ротовой полости крупного и мелкого рогатого скота

2.2.2.2 Тендерные особенности микрофлоры слизистой оболочки ротовой полости мелкого рогатого скота

2.2.3 Методологические аспекты изучения бактерицидной активности слюны жвачных

2.2.3.1 Бактерицидная активность слюны и сыворотки крови жвачных относительно различных видов тест-культур

2.2.3.2 Влияние концентрации тест-культуры и длительности инкубирования проб на величину бактерицидной активности слюны и сыворотки крови жвачных

2.2.3.3 Зависимость величины бактерицидной активности слюны коров и овец от преаналитических процедур

2.2.3.4 Сезонная вариабельность бактерицидной активности слюны и сыворотки крови жвачных животных

2.2.4 Методологические аспекты изучения комплементарной активности слюны жвачных

2.2.4.1 Характеристики комплементарной активности слюны и сыворотки крови жвачных животных в норме

2.2.4.2 Зависимость величины комплементарной активности слюны жвачных от преаналитических процедур

2.2.5 Лизоцимная активность слюны и сыворотки крови жвачных

2.2.6 Содержание пропердина в слюне и сыворотке крови жвачных

2.2.7 Половые различия в величине комплементарной, лизоцимной активности и содержании пропердина в слюне мелкого рогатого скота

2.2.8 Корреляция бактерицидной активности слюны жвачных с основными факторами неспецифического иммунитета и биохимическими показателями

2.2.9 Корреляция бактерицидной активности, ее составляющих слюны и сыворотки крови жвачных

2.3 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИЙ

2.3.1 СПОСОБЫ АКТИВАЦИИ СЕКРЕЦИИ СМЕШАННОЙ СЛЮНЫ И ОРАЛЬНЫЙ МИКРОБНЫЙ ПЕЙЗАЖ ЖВАЧНЫХ

2.3.2 БАКТЕРИЦИДНАЯ, КОМПЛЕМЕНТАРНАЯ, ЛИЗОЦИМНАЯ АКТИВНОСТИ И СОДЕРЖАНИЕ ПРОПЕРДИНА В СЛЮНЕ ЖВАЧНЫХ

2.3.3 КОРРЕЛЯЦИЯ БАКТЕРИЦИДНОЙ АКТИВНОСТИ СЛЮНЫ С ОСНОВНЫМИ ФАКТОРАМИ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА И БИОХИМИЧЕСКИМИ ПОКАЗАТЕЛЯМИ

У КОРОВ И ОВЕЦ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Факторы неспецифической иммунологической резистентности слюны жвачных животных"

Актуальность темы. Технологии лабораторной диагностики регулярно пополняются новыми методиками, позволяющими выявлять на ранней стадии и в короткие сроки многие заболевания. В современной ветеринарной пауке и практике при исследовании неспецифических факторов иммунитета ограничиваются, как правило, изучением сыворотки крови. Между тем, внимание ученых в последнее время привлекают, в качестве альтернативы, возможности использования слюны для экспресс-диагностики различных патологий (Денисов А.Б. и др., 2006 и др.), в частности ее иммунологические, биохимические, физические и другие свойства (Барер Г.М. и др., 2003; Bucki R. et al., 2004; Busamia В. et al., 2010).

Большая часть исследований бактерицидной активности (БА) сыворотки крови проводится с использованием тест-культуры Е. coli (Красильников

А.П., Романовская T.P., 1999; Crokaert F. et al., 1988 и др.), несмотря на констатацию зависимости ее величины от вида, а также концентрации, фазы роста тест-культуры и длительности инкубирования проб (Максимюк K.M., Телишевская Л.Я., 1995; Саруханов В.Я., Исамов H.H., 2001; Малев A.A., 2009; Benge G., 1988; Igumbor Е., Osayande D., 2000). Влияние же перечисленных факторов на величину бактерицидной активности слюны животных на сегодня вообще не оценено.

Цель и задачи исследований. Целью работы являлось изучение методологических вопросов оценки неспецифических иммунологических показателей слюны у жвачных животных для повышения информативности путем минимизации влияния на них аналитических и преаналитических процедур.

В соответствии с указанной целью решались следующие задачи:

- изучить качественный и количественный состав микрофлоры полости рта коров и овец;

- определить зависимость величины бактерицидной активности слюны от методических факторов (вида и концетрации тест-культуры, времени инкубиро-вания проб, преаналитических процедур, сезона года);

Научная новизна работы. Впервые показана возможность использования М. ^эосЫкйсиз в качестве единой тест-культуры при параллельной оценке бактерицидной и лизоцимной активности слюны. Адаптирована применительно к слюне жвачных методика Л.С. Резниковой (1967) по определению комплементарной активности сыворотки крови. Выявлено влияние преаналитических процедур на величины бактерицидной и комплементарной активности слюны жвачных. Установлена степень корреляции бактерицидной активности слюны жвачных с основными факторами неспецифического иммунитета (лизоцимом, комплементом, пропердином) и биохимическими показателями. Определена скорость слюноотделения жвачных животных при воздействии фармакологических препаратов (цитрата натрия, пилокарпина гидрохлорида и прозерина).

Практическая значимость работы. Для оценки неспецифической иммунологической резистентности организма предлагается новый объект исследования - слюна.

Показана зависимость величины бактерицидной, комплементарной и лизоцимной активности, содержания пропердина слюны жвачных от видовых, сезонных и тендерных характеристик. Обоснована возможность использования М. 1у50Йе1к1лси8 для унификации методов параллельной оценки бактерицидной и лизоцимной активности. Выявлено влияние аналитических процедур (вида и концентрации тест-культуры микроба, длительности инкубации проб, предварительного центрифугирования и фильтрования) на величину бактерицидной активности слюны жвачных. Обнаружена связь факторов неспецифического иммунитета слюны с микробным пейзажем ротовой полости. Подготовлены методические рекомендации «Определение комплементарной активности слюны жвачных животных модифицированной методикой Л.С. Резниковой», утвержденное ректором ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», профессором Г.Ф. Кабировым (ноябрь, 2012 г.).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на III Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням «Инфекционные болезни» (Москва, 2011) и научно-практических конференциях: «Научное обеспечение инновационного развития ветеринарной медицины и животноводства» (Казань, 2011); «Актуальные проблемы научного и кадрового обеспечения инновационного развития АПК» (Казань, 2012); «Научно-техническое творчество молодежи - путь к обществу, основанному на знаниях» (Москва, 2012); «Научное обеспечение устойчивого развития отраслей животноводства Российской Федерации» (Новочеркасск, 2012).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, в том числе 5 - в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Видовые, сезонные и тендерные различия в бактерицидной, лизоцимной, комплементарной активности и содержании пропердина в слюне жвачных. Модификация применительно к слюне жвачных методики JI.C. Резниковой (1967) по определению комплементарной активности сыворотки крови.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 165 страницах компьютерного текста, состоит из Введения, разделов «Обзор литературы», «Материалы и методы исследований», «Результаты собственных исследований и их обсуждение», а также Выводов, Практических предложений и Списка литературы. Работа содержит 24 таблицы, проиллюстрирована 28 рисунками. Список использованной

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Покровская, Екатерина Сергеевна

выводы

5. Отмечен максимум бактерицидной активности летом и минимум - весной, зимой. Показана связь факторов неспецифического иммунитета слюны с микробным пейзажем ротовой полости, представленным, в основном, грамположительными кокками. У коров чаще встречались транзиторные виды микробов, у овец - облигатные. Наименьшая обсемененность полости рта жвачных транзиторными микробами наблюдалась в осенне-зимний период. У овцематок чаще идентифицировались облигатные, у баранов - транзиторные грамположительные кокки и видовой спектр микробов у них был разнообразнее.

6. Установлена положительная корреляция (во всех случаях р<0,01) бактерицидной активности слюны жвачных с биохимическими показателями (общий белок, г=0,43; аланинаминотрансфераза, г=0,23; холестерин, г=0,26; креатинин, г=0,54 и глюкоза, г=0,32) и основными факторами неспецифического иммунитета. У коров бактерицидность слюны в большей степени обусловливалась активностью лизоцима (р<0,01; г=0,54) и комплемента (р<0,01; г=0,57), тогда как у овец, кроме того, и содержанием пропердина (р<0,01; г=0,42).

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

2. При определении бактерицидной активности слюны рекомендуется использовать тест-культуры микроорганизмов, относящихся к разным группам по Граму. При параллельной оценке бактерицидной и лизоцимной активности для унификации методов их определения предпочтительно применять в качестве грамположительной тест-культуры М. lysodeikticus. Нами предложена модификация гемолитического метода Л.С. Резниковой (1967) для определения комплементарной активности слюны.

3. Для повышения величины бактерицидной активности слюны вносить в 1 мл пробы по 1 млн. микробных клеток Е. coli и М. lysodeikticus; 30 млн. микробных клеток В. subtilis; инкубировать пробы со слюной 5; 3 и 5 ч соответственно. Варабельность величины бактерицидной активности слюны снижается с11%до5иЗ% соответственно центрифугированием при 3000 об./мин в течение 10 мин и мембранной фильтрацией (диаметр пор 0,22 мкм). Учитывать сезонную вариабельность величины бактерицидной активности слюны и связь ее неспецифических факторов иммунитета с микробным пейзажем ротовой полости.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Покровская, Екатерина Сергеевна, Казань

1. Аглюлина, А.Р. Возрастная и сезонная изменчивость факторов неспецифической защиты организма телят из экологически неоднородных районов Оренбургской области / А.Р. Аглюлина, В.Л. Леуцкий // Вестник ОГУ. 2007. - № 9. - С. 173-177.

2. Андреева, Т.Б. Опыт изучения функции больших слюнных желез человека / Т.Б. Андреева // Стоматология. 1965. - № 2. - С. 39-43.

3. Ашкинази, В.И. Функциональная активность нейтрофилов ротовой полости человека: Автореф. дисс. . канд. биол. наук / В.И. Ашкинази. Н. Новгород, 1998.- 119 с.

4. Багдасаров, A.A. Пропердиновая система организма / A.A. Багдасаров, И.Л. Чертков, М.О. Раушенбах. М.: Медгиз, 1961. -216 с.

5. Барер, Г.М. Роль органических компонентов ротовой жидкости в образовании кристаллов при ее высушивании / Г.М. Барер, А.Б. Денисов, И.Н. Михалева // Рос. Стоматол. Журн. 2000. - № 1. - С. 4-6.

6. Барер, Г.М. Вариабельность кристаллических агрегатов ротовой жидкости в норме / Г.М. Барер, А.Б. Денисов, Т.М. Стурова // Рос. Стоматол. Журн. 2003. - № 1. - С. 33-35.

7. Больц, Д.Ф. Колориметрические (фотометрические) методы определения неметаллов / Д.Ф. Больц, Ч.Г. Льюк М., 1963. - 12 - 14 с.

8. Бондаренко, В. М. Симбиотические энтерококки и проблемы энтерококковой оппортунистической инфекции / В. М. Бондаренко, А. Н. Суворов. М., 2007. - С. 30.

9. Боровиков, О.В. Способ определения бактериостатической активности сыворотки крови в отношении стафилококков / О.В. Боровиков, A.M. Катханов // Лаб. Дело. 1985. - № 2. - С. 113-115.

10. Боровский, Е.В. Состав и свойства слюны в норме и при кариесе зубов: Метод. Рекомендации для субординаторов / Е.В. Боровский, Э.М. Кузьмина -М.: Медицина, 1980. 37 с.

11. Боровский, Е. В. Биология полости рта / Е. В. Боровский, В. К. Леонтьев. -М.: Медицина, 1991. С. 304.

12. Бухарин, О.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине / О.В. Бухарин, Н.В. Васильев. Томск: Изд-во Томского университета, 1974. -209с.

13. Бухарин, О.В. Микробные ингибиторы лизоцима / О.В. Бухарин, A.B. Валышев // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2006. -№4.-С. 8-13.

14. Быкова, И.А. Оценка функциональной активности нейтрофилов при патологии тканей пародонта: Методические рекомендации / И.А. Быкова, С.А. Кирюхина, В.А. Чумаченко М.: Медицина, 1984. - 10 с.

15. Вагнер, Г.Ф. Колориметрическое определение комплементарной энергии крови / Г.Ф. Вагнер // Лаб. дело. 1963. - № 1. - С. 44-46.

16. Васильев, Г.А. Радиосиалография при заболеваниях околоушных желез: методические рекомендации / Г.А. Васильев, Л.А. Юдин, И.Ф. Ромачева. М.: Медицина, 1974. - 14 с.

17. Васильев, В.И. Избранные лекции по клинической ревматологии / В.И. Васильев, М.В. Симонова, Т.Н. Сафонова — М.: Медицина, 2001. — С. 112— 131.

18. Волчецкий, А.Л Кристаллизация и кристаллография: Медико-биологические аспекты / А.Л. Волчецкий Архангельск: Изд-во Поморского гос. ун-та, 1999.- 190 с.

19. Гавриков, К.В. Физиология и патология слюнных желез: учебно-методическое пособие / К.В. Гавриков, В.Ф. Михальченко, Т.Н. Радышевская и др. Волгоград: ВолГМУ, 1998. - 14 с.

20. Голиков, А.Н. Физиология сельскохозяйственных животных / А.Н. Голиков, Н.У. Базанова, З.К. Кожебеков и др.- 2-е изд., перераб. и доп.- М.: Колос, 1980.-480 с.

21. Добряк, Т. А. Местные факторы защиты слизистых оболочек при бронхитах у детей раннего возраста: автореф. дис. . канд. мед. наук / Т.А. Добряк. Омск, 2000. - 24с.

22. Дорофейчук, В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом / В.Г. Дорофейчук // Лаб. Дело. 1968. - № 1. -С. 28-30.

23. Дубровина, Л.А. Микрокристаллизация смешанной слюны у детей при различной интенсивности кариеса зубов. Стоматологическая помощь. Сб. научн. Работ / Л.А. Дубровина Рига: РМИ, 1988. - 415 с.

24. Дуванова, Е.А. Формирование естественной резистентности и продуктивности овец различных генотипов: Автореф. дисс. . канд. с/х наук. / Е.А. Дуванова.- Воронеж, 2006. 141 с.

25. Блинов, Н.П. Рецептурный справочник для фельдшеров и медицинских сестер / Н.П. Елинов, Э. Г. Громова, Д.Н. Синев Л.: Медицина, 1986. - 369 с.

26. Закиров, И.И. Характеристика функциональной активности оральных нейтрофилов и гуморального иммунитета у детей с внебольничной пневмонией: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. / И.И. Закиров. Казань, 2007. - 138 с.

27. Зеленова, Е.Г. Микрофлора полостирта: норма и патология: Учебное пособие / Е.Г. Зеленова, М.И. Заславская, Е.В. Салина, С.П. Рассанов -Нижний Новгород: Издательство НГМА, 2004. 158с.

28. Ильиных, Е.И. Количественное определение содержания белка и муцина (гликопротеинов) в слюне / Е.И. Ильиных, Э.Н. Коробейникова // Клиническая лабораторная диагностика. 2001. - № 8. - С. 34-45.

29. Каракашов, A.B. Микрометоды в клинической лаборатории: монография / A.B. Каракашов, Е.П. Вичев София: Медицина и физкультура, 1968.-256 с.

30. Киселева, Е.А. Обоснование необходимости иммунокоррекции в комплексном лечении хронических воспалительных заболеваний пародонта / Е.А. Киселева, Е.А. Те // Медицина в Кузбассе. 2006. - № 1. - С. 13-18.

31. Кисель, С.С. Улучшенная турбидиметрическая методика определения активности лизоцима / С.С. Кисель // Здравоохранение Белоруссии. 1972. -№ 5. - С. 36-38.

32. Конвай, В.Д. Новая модификация определения фосфора в биологических объектах / В.Д. Конвай, В.К Леонтьев, В.П. Брызгалина // Материалы VI научн. конф. Хабаровского мед. ин-та. — Хабаровск, 1972—С.144-145.

33. Королева, О.И. Клиническое значение показателей функциональной активности нейтрофилов ротовой полости при различных вариантах бронхита у детей старшего школьного возраста: Автореф. дисс. . канд. мед. наук. /О.И. Королева. Казань, 2005. - 136 с.

34. Красильников, А.П. Микробиологический словарь-справочник / А.П. Кпасильников, Т.Р. Романовская. Минск: Асар, 1999. - 400 с.

35. Кудрина, Н.В. Система комплемента при бактериальных инфекциях / Н.В. Кудрина, H.H. Беседнова, Л.М. Вавилова // ЖМЭИ. 1997. - № 5. - С. 74-77.

36. Кукушкин, В. Л. Способ определения фагоцитарной активности нейтрофилов полости рта / В.Л. Кукушкин, И.С. Пинелис, Е.А. Кукушкина, М.А. Лутцева Патент Российской Федерации № 2093827. - 1997.

37. Курцин, И.Т. Механорецепторы желудка и работа пищеварительного аппарата / И.Т. Курцин М. — Л.: Изд-во Академии наук СССР, 1952. - 256 с.

38. Леонтьев, В.К. Биохимические методы исследования в клинической и экспериментальной стоматологии. Методическое пособие / В.К. Леонтьев,

39. Ю.А. Петрович Омск: Ом. гос. мед. ин-т им. М.И.Калинина, Моск. мед. стоматол. ин-т им. H.A. Семашко, 1976. - 49-93 с.

40. JTeyc, П.А. Клинико-экспериментальное исследование патогенеза, патогенетической консервативной терапии и профилактики кариеса зубов: Автореф. дис. . д-ра мед. наук / П.А. Леус М.: Моск. стоматол. ин-т им. H.A. Семашко, 1977.-29 с.

41. Леус, П.А. Смешанная слюна (состав, свойства, функции): Учеб.-метод. пособие / П.А. Леус, О.С. Троцкая, С.С. Лобко, Л.И. Палий Мн.: БГМУ, 2004. - 42 с.

42. Липунова, А. Е. Физиология пищеварения: учебное пособие / А. Е. Липунова — Белгород: Изд-во БелГУ, 2005. — 244 с.

43. Максимовский, 10. М. Вязкость ротовой жидкости и степень риска кариозной атаки / Ю. М. Максимовский, О. И. Харченко // Проблемы и перспективы науч. исслед. в теорет. и практ. медицине. 1980. - С. 40-41.

44. Максимюк, К.Н. Модификация метода определения бактерицидной активности сыворотки крови / H.H. Максимюк, Л.Я. Телишевская // Ветеринария. 1995. - № 2. - С. 35-36.

45. Малев, A.A. Бактерицидная активность сыворотки крови различных видов животных, ее диагностическая значимость: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. / A.A. Малев. Казань, 2009. - 131 с.

46. Мартынова, В.А. Состояние системы комплемента при инфекционных и неопластических процессах / В.А. Мартынова, Т.В. Голосова // Лаб. Дело. -1989. -№ 2. -С. 4-9.

47. Матусевич, В.Ф. Способы определения естественной резистентности организма животных / В.Ф. Матусевич и др. // Сб. науч. тр. Целиноградского СХИ: Естественная резистентность сельскохозяйственных животных. -Целиноград, 1971. Т.8. - Вып.Ю. - С. 8-19.

48. Маянский, А.Н. Взаимоотношения между естественной колонизацией и адгезией бактерий к буккальному эпителию / А.Н. Маянский, О.Н. Воробьева, Э.Ф. Малышева, Ю.В. Малышев // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1987. - № 2. - С. 18-20.

49. Мозгов, И.Е. Фармакология / И.Е. Мозгов. 8-е изд., перераб. и доп.- М.: Агропромиздат, 1985.- 416 с.

50. Московенко, Е.Д. Состояние местного иммунитета и его коррекция у больных туберкулезом и неспецифическими воспалительными заболеваниями легких детей и подростков: автореф. дис. . канд. мед. наук / Е.Д. Московенко. Киев, 1990. - 22с.

51. Мосолов, В.В. Протеолитические ферменты / В.В. Мосолов М.: Наука, 1971.-413 с.

52. Олиферук, Н.С. Новый метод определения бактерицидной активности биологических жидкостей с помощью лазерной проточной цитофлюориметрии / Н.С. Олиферук, A.C. Будихина, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2006. - № 4. - С. 249-252.

53. Парахонский, А.П. Оценка иммунного статуса при проведении эколого-гигиенического мониторинга населения / А.П. Парахонский // Успехи современного естествознания. 2006. - № 4. - С. 65.

54. Парлагашвили, ЮЛО. / Ю.Ю. Парлагашвили, О.Г. Михайловская // Мед. журн. Узбекистана. 1965. - № 1. - С. 57.

55. Плохинский, H.A. Математические методы в биологии / H.A. Плохинский. М.: МГУ. - 1978. - 226 с.

56. Плященко, С.И. Естественная резистентность организма животных / С.И. Плященко, В.Т. Сидоров.- Л.: Колос. Ленингр. отд-ние, 1979. 184 с.

57. Поздеев, O.K. Медицинская микробиология / O.K. Поздеев М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 768 с.

58. Понякина, И.Д. pH слюны и течение гальванических токов в тканях и жидкости полости рта / И.Д. Понякина, К.А. Лебедев, Ю.М. Максимовский, A.B. Митронин // Стоматология. 2009. - № 1. - С. 32-37.

59. Приказ Минздрава СССР № 535 «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений». -1985.

60. Рединова, Т.Л. Клинические методы исследования слюны при кариесе зубов. Методические рекомендации для субординаторов, интернов и врачей-стоматологов / Т.Л. Рединова, А.Р. Поздеев Ижевск, 1994. - 24с.

61. Резникова, Л.С. Комплемент и его значение в иммунологических реакциях / Л.С. Резникова М.: Медицина, 1967. - 272 с.

62. Робустова, Т. Г. Иммунный статус в полости рта: Методические рекомендации / Т. Г. Робустова, К. А. Лебедев, Ю. М. Максимовский М.: Наука, 1990.-32 с.

63. Ромачева, И.Ф. Заболевания и повреждения слюнных желез / И.Ф. Ромачева, Л.А. Юдин, В.В. Афанасьев, А.Н. Морозов М.: Медицина, 1987. -240 с.

64. Сазонова, И.М. Об оценке бактериолитической активности сыворотки крови / И.М. Сазонова//Лаб. дело. 1977. - № 7. - С. 418-420.

65. Сазонова, И.М. Бактериолитические свойства сыворотки крови у больных ревматизмом / И.М. Сазонова// Лаб. Дело. 1980. - № 6. - С. 362-365.

66. Саруханов, В.Я. Бактерицидные свойства крови различных видов сельскохозяйственных животных под влиянием голодания и облучения / В.Я. Саруханов, H.H. Исамов // Сельскохозяйственная биология. 2001. - № 2. - С. 80-82.

67. Сердюк, Г.Н. Иммуногенетические пути повышения эффективности селекционной работы при создании нового типа свиней / Г.Н.Сердюк, В.П.Клемин, Н.Б.Филипенко и др. // Бюл. ВНИИ разведения и генетики с.-х. животных. 1988. - № 104. - С. 19-22.

68. Слоним, A.A. Определение бактерицидной активности сыворотки крови и лимфы / A.A. Слоним, Ю.Д.Толчеев // Лаб. Дело. 1989. - № 7. - С. 65-66.

69. Смирнова, О.В. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии / О.В.Смирнова, Т.А. Кузьмина // ЖМЭИ. -1966.-№4.-С. 8-11.

70. Сторожук, П.Г. Определение активности лизоцима слюны / П.Г. Сторожук, В.В. Еричев, И.В. Сафарова //Клиническая лабораторная диагностика. 2000. - № 6. - С. 13-15.

71. Сторожук, П.Г. Ротовая полость и ее секреты как система антибактериальной и антирадикальной защиты организма / П.Г. Сторожук, И.М. Быков, В.В. Еричев и др. // Аллергология и иммунология. 2009. - № 3. - С. 350-357.

72. Сухоруков, A.M. Экспресс-метод определения лизоцима в биологических жидкостях / A.M. Сухоруков, Т.П. Журавлева, B.C. Цветков, Э.Г. Щербакова//Лаб.Дело. 1985. - № 7. - С. 412-420.

73. Тарасенко, Л.М. Биохимия органов полости рта / Л.М. Тарасенко, К.С. Непорада Полтава: видавництво «Полтава», 2008. - 70 с.

74. Томилка, Г.С. Модификация метода определения пропердина в сыворотке крови / Г.С. Томилка, И.С. Старостина // Лаб. Дело. 1986. - № 2. -С. 126-127.

75. Уголев, A.M. Пищеварение и его приспособительная эволюция / A.M. Уголев М.: Высшая школа, 1961. -306 с.

76. Ушаков, Р.В. Микрофлора полости рта и её значение в развитии стоматологических заболеваний / Р.В. Ушаков, В.Н. Царёв // Стоматология для всех. 1998. - № 34. - С. 22-26.

77. Филатова, Т.Н. Новости медицинской экологии / Т.Н. Филатова // Биология. 2002. - № 30. -С. 1-3.

78. Херман, М. Полупроводниковые сверхрешетки: Пер. с англ. / М. Херман М: Мир, 1989. - 240 с.

79. Хрусталева, И.В. Анатомия домашних животных / И.В. Хрусталева, Н.В. Михайлов, Я.И. Шнейберг и др. М.: Колос, 1994. - 704 с.

80. Шабалин, В.Н. Морфология биологических жидкостей человека / В.Н. Шабалин, С.Н. Шатохина М: Хризостом, 2001. - 303 с.

81. Шумский, A.B. Иммунопатогенетический подход в лечении воспалительных заболеваний полости рта / A.B. Шумский // Пародонтология. -2005.-№4.-С. 12- 15.

82. Яковлева, В.И. Способ количественного определения секрета мелких слюнных желез / В.И. Яковлева //Здравоохр. Белоруссии. 1980. - № 12. - С. 57.

83. Ahmad, M. Immunocytochemical localization of histatins in human salivary glands / M. Ahmad, M. Piludu, F. Oppenheim et al. // J. Histochem. Cytochem. -2004.-V. 52.-P. 361-370.

84. Allen, R. The estimation of phosphorus / R. Allen // Biochem. J. 1940. -V. 34.-P. 858-865.

85. Aluoch, A. Development of an oral biosensor for salivary amylase using a monodispersed silver for signal amplification / A. Aluoch, O. Sadik, G. Bedi // Anal. Biochem. 2005. - V. 340. - P. 136-144.

86. Anderson, D. Functional properties of nonhuman primate antibody to Porphyromonas gingivalis / D. Anderson, J. Ebersole, M. Novak // Infect. Immun. -1995.-V. 63.-P. 3245-3252.

87. Andoh, A. Molecular characterization of complement components (C3, C4, and factor B) in human saliva / A. Andoh, Y. Fujiyama, T. Kimura et al. // J. Clin. Immunol. 1997. - V. 17. - P. 404-407.

88. Arnold, R. Bactericidal activity of human lactoferrin: influence of physical conditions and metabolic state of target microorganisms / R. Arnold, J. Russell, W. Champion, M. Brewer et al. //Infect. Immun. 1981. - V.32. - P.655-660.

89. Arnold, R. Bactericidal activity of human lactoferrin: differentiation from the status of iron deprivation / R. Arnold, J. Russell, W. Champion, M. Brewer et al. // Infect. Immun. 1982. - V. 35. - P.792-799.

90. Ash, R. Stimulation of inhibition of reticulum contractions, rumination and parotid secretion from the forestomach of conscious sheep / R. Ash, R. Kay // J. Physiol. 1959.-V. 149.-P.43.

91. Aslam, M. Genetic diversity of Escherichia coli recovered from the oral cavity of beef cattle and their reladness to faecal Escherichia coli / M. Aslam, G. Greer, F. Nattres et al. // Lett. Appl. Microbiol. 2004. - V. 39. - P. 523-527.

92. Auerbach, P. Spit test to determine hydration status / P. Auerbach // Better Health Network.

93. Bailey, C. The digestion of hay administered to cows through rumen fistulas / C. Bailey, C. Balch//Brit. J. Nutr. 1961.-V. 15.-P. 183.

94. Bailey, C. Saliva secretion and its relation to feeding in cattle / C. Bailey, C. Balch//Brit. J.Nutr. 1961.-V. 15.-P. 383.

95. Bailey, C.Saliva secretion and its relation to feeding in cattle / C. Bailey, C. Balch // Brit. J. Nutr. 1961 b. - V. 15. - P. 371.

96. Beighton, D. Streptococcus macacae sp. nov. from dental plaque of monkeys (Macaca fascicularis) / D. Beighton, H. Hayday, R. Russell, R. Whiley // Int. J. Syst. Bacteriol. 1984. - V. 34. - P. 332-335.

97. Bals, R. Cathelicidins — a family of multifunctional antimicrobial peptides / R. Bals, J.Wilson // Cell Mol. Life Sci. 2003. - V. 60. - P. 711-720.

98. Benge, G. Bactericidal activity of human serum against strains of Klebsiella from different sources / G. Benge // J. Med. Microbiol. 1988. -V. 27. - P. 11-15.

99. Bergey, D. Bergey's manual of systematic bacteriology / D. Bergey Ed. Peter H. - Smeath, 1986. - V. 2.

100. Bhatsange, A. Assessment of periodontal health status in patients undergoing renal dialysis: A descriptive, cross-sectional study / A. Bhatsange, S. Patil // J. Indian Soc. Periodontal. 2012. - V. 16. - P. 37-42.

101. Bibby, B.The antibacterial action of hulman saliva / B. Bibby, O. Clough, M. Helu // J. Am. Dent. Asoc. 1938. - V. 25. - P. 1290-1302.

102. Block, P. A method of submaxillary saliva collection without cannulization / P. Block, S. Brottman // N.-Y. State Dent. J. 1962. - V. 28. - P. 116-118.

103. Boackle, R. The interaction of salivary secretions with the human complement system a model for the study of host defense systems on inflamedmucosal surfaces / R. Boackle // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1991. - V. 2. - P. 355-367.

104. Bobek, L. MUC7 20-mer: investigation of antimicrobial activity, secondary structure, and possible mechanism of antifungal action / L. Bobek, H. Situ // Antimicrob. Agents Chemother. 2003. - V.47. - P. 643-652.

105. Bourgault, A. First Isolation of Peptococcus indolicus from a Human Clinical Specimen / A. Bourgault, J. Rosenblatt // J. Clin. Microbiol. 1979. - V. 9. - P. 549550.

106. Boyer, E. Studies on the bacterial flora of the mouth and nose of the normal horse / E. Boyer // J. Bacteriol. 1919. - V. 4. - P. 61.

107. Bradford, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / M. Bradford // Anal. Biochem. 1976. - V. 72. - P. 248-254.

108. Braga, M. Comparison of the effects of pilocarpine and cevimeline on salivary flow / M. Braga, O. Tarzia, C. Bergamaschi et al. // Int. J. Dent. Hygiene. -2009.- V. 7.- P. 126-130.

109. Brandtzaeg, P. Molecular and cellular aspects of the secretory immunoglobulin system / P. Brandtzaeg // Acta Pathol. Microbiol. Immunol. Scand. 1995.-V. 103.-P. 1-19.

110. Brothers, J. An analysis of the enzyme activity of the conditioned salivary response in human subjects / J. Brothers, C. Warden // Science. 1950. - V. 112.-P. 751.

111. Brown, J. Studies on the chemistry of mixed human saliva /J. Brown, H. Wright, H. Limbacher // J. Dent. Res. 193 8. - V. 17. - P. 191.

112. Burgen, A. The physiology of salivary secretion / A. Burgen, N. Emmelin -London: Arnold, 1961.

113. Carlson, A. The relation of ptyalin concentration to the diet and to the rate of secretion of the saliva / A. Carlson, A. Crittenden // Am. J. Physiol. 1910. - V. 26. -P. 169-177.

114. Chauncey, H. Comparative enzyme activity of saliva from the sheep, hog, dog, rabbit, rat, and human / H. Chauncey, B. Henriques, J. Tanzer //Archives of Oral Biology 1963. - V. 8. - P. 615-627.

115. Chiamori, N. Determination of calcium in biologic material by chloranilate method / N. Chiamori, R. Henry // Proc. Soc. Exp. Med. 1958. - V. 97. - P.817-819.

116. Chibnall, A. The total nitrogen content of albumin and other protein / A. Chibnall, M. Rees, E. Williams // Biochem. J. 1943. - V. 37. - P. 354-359.

117. Chromek, M. The antimicrobial cathelicidin protects the urinary tract against invasive bacterial infection / M. Chromek, Z. Slamova, P. Bergman, L. Kovacs et al. //Nature Med. 2006. - V. 12. - P. 636-641.

118. Chrzaszez, T. Die amylase des speichels der rinder und pferde / T. Chrzaszez, Z. ScheehtlSwna // Biochem. J. 1930. - V. 219. - P. 30-50.

119. Cirio, A. Determination of parotid urea secretion in sheep by mean of ultrasonic flow probes and a multifactorial regression analysis / A. Cirio, F. Meot, M. Delignette-Muller, R. Boiven // J. Anim. Sci. 2000. - V. 78. - P. 471^176.

120. Clamp, J. The relationship between the immune system and mucus in the protection of mucous membranes / J. Clamp // Biochem. Soc. Trans. 1984. - V. 12.- P. 754-756.

121. Claycomb, C. A simple, rapid method for quantitative determination of salivary amylase / C. Claycomb, M. McChesney, M. Snyder // J. Dent. Res. 1956. -V.35.-P. 391-398.

122. Comline, R. Reflex contractions of the reticulum and rumen and parotid salivary secretion / R. Comline, D. Titchen // J. Physiol. 1957. - V. 139. - P.24-25.

123. Conway, E. Micro-diffusion analysis and volumetric error / E. Conway -London: C. Lockwood and Son Ltd., 1939. 306 pp.

124. Conway, E. Microdiffusion methods. Ammonia and urea using buffered absorbents (revised methods for ranges greater than lOmug. N) / E. Conway, E. O'malley // Biochem. J. 1942. - V. 36. - P. 655-661.

125. Dent, V. Actinomyces howellii, a new species from the dental plaque of dairy cattle / V. Dent, R. Williams // Int. J. Syst. Bacteriol. 1984 a. - V. 34. - P. 316-320.

126. Dent, V. Actinomyces denticolens sp. nov: a new species from the dental plaque of cattle / V. Dent, R. Williams // J. Appl. Bacteriol. 1984 b. - V. 56. - P. 183-192.

127. Dent, V. Actinomyces slackii sp. nov. from dental plaque of dairy cattle / V. Dent, R. Williams // Int. J. Syst. Bacteriol. 1986. - V. 36. - P. 392-395.

128. Denton, D. The study of sheep with permanent unilateral parotid fistula / D. Denton // Quart. J. Exp. Physiol. 1957. - V. 42. - P. 72-95.

129. Deslauriers, N. The Oral Immune System: Dynamics of Salivary Immunoglobulin Production in the Inbred Mouse / N. Deslauriers, M. Oudghiri, J. Seguin, L. Trudel // Immunological Investigations. 1986. - V. 15. - P. 339-349.

130. Dobson, A. The relation between the compositionof parotid saliva and mixed saliva in sheep during the induction of sodium deficiency / A. Dobson, R. Kay, I. McDonald//Res. Vet. Sci. 1960. - V.l. - P. 103-110.

131. Donoghue, H. Effect of the lactoperoxidase system on streptococcal acid production and growth / H. Donoghue, D. Hudson, C. Perrons // J. Dent Res. -1987.-V. 66.-P. 616-618.

132. Dura, W. Secretory component, 1-antitrypsin and lysozime in IgA deficient children. An immunohistochemical evaluation of intestinal mucosa / W. Dura, E. Bernatowska // Histopathol. 1984. - V. 8. - P. 747-754.

133. Dworkin, M. The Prokaryotes: Archaea. Bacteria: Firmicutes, Actinomycetes. A Handbook on the Biology of Bacteria. V. 3, 3rd Ed / M. Dworkin, S. Falkow, E. Rosenberg et al. -N.-Y.: Springer, 2006. 1185 pp.

134. Eckersall, P. A comparison of crossed Immunoelectrophoresis and crossed immunoelectrofocusing for the investigation of human salivary proteins / P. Eckersall, J. Beeley // Electrophoresis. 1980. - V. 1. - P. 62-67.

135. Elssner, A. A novel P2X7 receptor activator, the human cathelicidin-derived peptide LL37, induces IL-ip processing and release / A. Elssner, M. Duncan, M. Gavrilin et al. // J. Immunol. 2004. - V. 172. - P. 4987-4994.

136. Emmelin, N. 'Paralytic secretion' of saliva. An example of supersensitivity after denervation // N. Emmelin // Physiol. Rev. -1952. V. 32. - P. 21-46.

137. Emmelin, N. The sensitivity of submaxillary glands to chemical agents studied in cats under various conditions over long periods / N. Emmelin, A. Muren //Acta Physiol. Scand. 1952. - V. 26. - P. 221-231.

138. Emmelin, N. Effect of sympathetic denervation on the sensitivity of the submaxillary gland to stimulating agents / N. Emmelin, J. Engstrom // J. Physiol. -1960.-V. 153.-P. 9-16.

139. Feldman, S. The chromogranins: their roles in secretion from neuroendocrine cells and as markers for neuroendocrine neoplasia / S. Feldman, L. Eiden // Endocr. Pathol.-2003.-V. 14.-P. 3-23.

140. Fiddler, R. Collaborative study of modified method of analysis for nitrite in meat and meat products / R. Fiddler // J. AOAC. 1977. - V. 60. - P. 594-599.

141. Friedmana, M. Radioimmunoassay for the detection of virus-specific IgA antibodies in saliva / M. Friedmana //Journal of Immunological Methods. 1982. -V. 54.-P. 203-211.

142. Funakoshi, S. Antimicrobial effect of human serum IgA / S. Funakoshi, T. Doi, T. Nakajima, T. Suyama et al. // Microbiol. Immunol. 1982. - V. 26. - P. 227-239.

143. Geetha, C. Expression and anti-bacterial activity of human parotid secretory protein (PSP) / C. Geetha, V. Montpetit, C. Huang et al. // Biochem. Soc. Transactions. 2003. -V. 31. - P. 815-818.

144. Giacometti, A. In vitro activities of membrane-active peptides against Grampositive and Gram-negative aerobic bacteria / A. Giacometti, O. Cirioni, G. Greganti et al. //Antimicrob. Agents Chemother. 1998. - V. 42. - P. 3320-3324.

145. Goudswaard, J. Immunochemical determination of human lysozyme by laser nephelometry / J. Goudswaard, G. Virella // Clin. Chem. 1977. - V. 23. - P. 967970.

146. Griess, P. Bemerkungen zu der Abhandlung der HH. Weselky und Benedikt Ueber einige Azoverbindungen / P. Griess //Berichte der Deutschen chemischen Gesellschaft. 1879. - V. 12. - P. 426-428.

147. Grossman, C. The role of sex steroids in immune system regulation. In Bilateral Communication between the Endocrine and Immune Systems. Edited by Grossman C. / C. Grossman//N.-Y.: Springer-Verlag, 1995.-pp. 1-11.

148. Haigh, B. The bovine salivary proteins BSP30a and BSP30b are independently expressed BPI-like proteins with anti-Pseudomonas activity / B. Haigh //Mol. Immun. -2008. V. 45. -P. 1944-1951.

149. Hamada, S. Biology, immunology, and cariogenicity of Streptococcus mutans / S. Hamada, H. Slade // Microbiol. Rev. 1980. - V. 44. - P. 331-384.

150. Hancock, R. Cationic peptides: a new source of antibiotics / R. Hancock, R. Lehrer // Trends in Biotechnology. 1998. - V. 16. - P. 82-88.

151. Hancock, R. The role of cationic antimicrobial peptides in innate host defences / R. Hancock, G. Diamond // Trends Microbiol. 2000. - V. 8. - P. 402410.

152. Hancock, R. The role of antimicrobial peptides in animal defenses / R. Hancock, M. Scott//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. - V. 97. - P. 8856-8861.

153. Hannig, C. Characterisation of lysozyme activity in the in situ pellicle using a fluorimetric assay / C. Hannig, B. Spitzmuller, M. Hannig // Clinical Oral Investigations. -2009. V. 13.-P. 15-21.

154. Hart, B. Antibacterial properties of saliva: role in maternal periparturient grooming and in licking wounds / B. Hart, K. Powell // Physiol. Behav. 1990. - V. 48. - P. 383-386.

155. Hench, P. Apparatus for the determination of the salivary urea index / M. Hench, M. Aldrich// JAMA. 1924.-V. 82.-P. 1194-1195.

156. Hoek, K. Antibacterial activity of bovine lactoferrin derived peptides / K. Hoek, J. Milne, P. Grieve, D. Dionysius et al. // Antimicrob. Agents Chemother. -1997.-V. 41.-P. 54-59.

157. Howell, A. A filamentous microorganism isolated from periodontal plaque in hamsters. I. Isolation, morphology and general cultural characteristics / A. Howell //Sabouraudia. 1963.-V. 3.-P. 81-92.

158. Hurlimann J. In vitro synthesis of immunoglobulin-A by salivary glands from animals of different species / J. Hurlimann, H. Darling // J. Immunol. 1971. -V.21.-P. 101-111.

159. Igumbor, E. Bactericidal activity of human sera against Salmonella typhi and Salmonella paratyphi A, B, C / E. Igumbor, D. Osayande // East African med. J. -2000.-V. 77.-P. 676-680.

160. Isliker, H. Methods for the assay of properdin / H. Isliker, E. Linder // Vox Sanguinis. 1958. - V. 3. - P. 23-36.

161. Isogai, E. Oral flora of Mongrel and Beagle dogs with periodontal disease / E. Isogai, H. Isogai, H. Miura, K. Takano // Jpn. J. Vet. Sci. 1989. - V.51. - P. 110-118.

162. Ito, T. Relationship between antimicrobial protein levels in whole saliva and periodontitis / T. Ito, A. Komiya-Ito, T. Arataki, Y. Furuya et al. // J. Periodontol. -2008.-V. 79.-P. 316-322.

163. Jenzano, J. Factors influencing measurement of human salivary lysozyme in lysoplate and turbidimetric assays / J. Jenzano, S. Hogan, R. Lundblad / J. Clin. Microbiol. 1986. -V. 24. - P. 963-967.

164. Jordan, H. Periodontal lesions in hamsters and gnotobiotic rats infected with actinomyces of human origin / H. Jordan, P. Keyes, S. Bellack // J. Periodont. Res. 1972.-V. 7.-P. 21-28.

165. Kay, R. The rate of flow and composition of various salivary secretions in sheep and calves /R. Kay//J. Physiol. Land. 1960. - V. 150. - P. 515-537.

166. Kent, R. Humoral IgG antibodies to oral microbiota in a population at risk for root-surface caries / R. Kent, D. Smith, K. Joshipura, P. Soparkar et al. // J. Dent. Res. 1992.- V. 71. -P. 1399-1407.

167. Kerr, A. The physiological regulationof salivary secretion in man / A. Kerr -In: International series of monographs on oral biology. Oxford (UK): Pergamon Press, 1961. -24-38 p.

168. Kjeldahl, J. Neue methode zur bestimmung des stickstoffs in organischen korpern / J. Kjeldahl // Z. Anal. Chem. 1883. - V. 22. - P. 366-382.

169. Klein, J. Inhibition of glucosyltransferase by human salivary immunoglobulin A / J. Klein, M. Scholler, R. Frank // Infect. Immun. 1977. - V. 15.-P. 329-331.

170. Koczulla, R. An angiogenic role for the human peptide antibiotic LL-37/hCAP-18 / R. Koczulla, G. von Degenfeld, C. Kupatt et al. // J. Clin. Investig. -2003.-V. 111.-P. 1665-1672.

171. Kostlin, A. Zur chemie des ruhespeichels einzelner speicheldrusen / A. Kostlin, S. Rauch // Helvetica Med. Acta. 1957. - V. 24. - P. 600-621.

172. Krygier, G. Experimental gingivitis in Macaca speciosa monkeys: clinical, bacteriologic and histologic similarities to human gingivitis / G. Krygier, R. Genco, P. Mashimo, E. Hausmann // J. Periodontol. 1973. - V. 44. - P. 454-463.

173. Kudriavtsev, A. Physiology of the sheep. Collection of Papers, pp. 5-17. Quoted by V. K. Krasusky et al. / A. Kudriavtsev, S. Anurov // J. Physiol. U.S.S.R. 1932.-V. 28.-P. 372-383.

174. Kusy, R. Effect of salivary viscosity on frictional coefficients of orthodontic archwire bracket couples / R. Kusy, D. Schafer // J. Materials Sci: Materials in medicine. 1995. - V. 6. - P. 390-395.

175. Larmas, M. Studies on dog saliva. I. Some physico-chemical characteristics / M. Larmas, A. Scheinin //Acta Odont. Scand. 1971. - V. 29. - P. 205-214.

176. Lashley, K. Reflex secretion of the human parotid gland / K. Lashley // J. Exp Psychol. 1916.-V. 1.-P. 461-493.

177. Lee, M. Optical recognition of salivary proteins by use of molecularly imprinted poly(ethylene-co-vinyl alcohoi)/quantum dot composite nanoparticles M. Lee, Y. Chen, M. Ho, H. Lin // Anal, and Bioanal. Chem. 2010. - V. 394. - P. 1457-1466.

178. Lehner, T. Immunology of oral diseases, 3rd ed. / T. Lehner UK: Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1992.

179. Lehrer, R. Cathelicidins: a family of endogenous antimicrobial peptides / R. Lehrer, T. Ganz // Curr. Opin. Hematol. 2002. - V. 9. - P. 18-22.

180. Lepow, I. The properdin system and immunity. X. Characterization of partially purified human properdin /1. Lepow, L. Pillemer, M. Schoenberg et al. // J. Immunol. 1959. - V. 83. - P. 428^136.

181. Lewis, D. Blood-urea concentration in relation to protein utilization in the ruminant / D. Lewis // J. agric. Sci. 1957. - V. 48. - P. 438.

182. Li, X. Solution structures of human LL-37 fragments and NMR-based identification of a minimal membrane-targeting antimicrobial and anticancer region / X. Li, Y. Li, H. Han et al. // J. Am. Chem. Soc. 2006. - V. 128. - P. 5776-5785.

183. Loesche, W. Dental Caries. A treatable infection / W. Loesche Thomas, Springfield, 1982.

184. Loesche, W. The bacterial etiology of periodontal disease: the specific plaque hypothesis.: Clark JW (ed) Clinical Dentisry / W. Loesche Philadelphia: Harper and Row, 1987.

185. Loury, D. Canine cathelicidin (K9CATH): Gene cloning, expression, and biochemical activity of a novel pro-myeloid antimicrobial peptide / D. Loury, J. Embree, D. Steinberg // Oral Surg. Oral Med. Oral Pathol. 1999. - V. 87. - P. 544551.

186. Love, D. The obligate and facultatively anaerobic bacterial flora of the normal feline gingival margin / D. Love, R. Vekselstein, S. Collings // Vet. Microbiol. 1990. - V. 22. - P. 267-275.

187. Lowry, O. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O. Lowry et al. // J. Biol. Chem. 1951. -V. 193. - P. 265-275.

188. Lundberg, A. The electrophysiology of the submaxillary gland of the cat / A. Lundberg // Acta Physiol. Scand. 1955. - V. 35. - P. 1-25.

189. Luo, Z. Cross-sectional analysis of serum antibody to oral streptococcal antigens in children / Z. Luo, D. Smith, M. Taubman, W. King // J. Dent. Res. -1988.-V. 67.-P. 554-560.

190. Mach, J. Secretory IgA, A Major Immunoglobulin in Most Bovine External Secretions / J. Mach, J. Pahud // J. Immunol. 1971. - V. 106. - P. 552 -563.

191. Maeda, H. A new lysozyme assay based on fluorescence polarization or fluorescence intensity utilizing a fluorescent peptidoglycan substrate 1 / H. Maeda // J. Biochem. 1980. - V. 88. - P. 1185-1191.

192. Maekawa, M. Chewing activity, saliva production, and ruminal pH of primiparousand multiparous lactating dairy cows / M. Maekawa, K. Beauchemin, D. Christensen // J. Dairy Sci. 2002. - V. 85. - P. 1176-1182.

193. Mandel, I. The functions of saliva /1. Mandel // J. Dent. Res. 1987. - V. 66. - P. 623-627.

194. Mansson- Rahemtulla, B. Specific assays for peroxidases in human saliva / B. Mansson-Rahemtulla, D. Baldone, K. Pruitt, F. Rahemtulla //Arch. Oral Biol. -1986.-V. 31.-P. 661-668.

195. Mansson- Rahemtulla, B. Human salivary peroxidase and bovine lactoperoxidase are cross-reactive / B. Mansson-Rahemtulla, F. Rahemtulla, M. Humphreys-Beher //J. Dent. Res. 1990. - V. 69. - P. 1839-1846.

196. Marcotte, H. Oral Microbial Ecology and the Role of Salivary Immunoglobulin A / H. Marcotte, M. Lavoie // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. -V. 62. - P. 71-109.

197. McDonald, I. Studies on the metabolism of the sheep with special reference to the digestion of protein. Dissertation / I. McDonald UK: University of Cambridge, 1948.

198. McDougall, E. Studies on ruminant saliva. 1. The composition and output of sheep's saliva / E. McDougall // Bochem. J. 1948. - V. 43. - P. 99-109.

199. McGavin, M. Description of Staphylococcus serine protease (ssp) operon in Staphylococcus aureus and nonpolar inactivation of sspA-encoded serine protease / M. McGavin, K. Rice, R. Peralta, D. Bast et al. // Infect. Immun. 2001. - V. 69. -P. 159-169.

200. Meletiadis, J. Assessing in vitro combinations of antifungal drugs against yeasts and filamentous fungi: comparison of different drug interaction models / J. Meletiadis, P. Verweij, D. TeDorsthorst et al. // Med. Mycol. 2005. - V. 43. - P. 133-152.

201. Michetti, P. Monoclonal secretory immunoglobulin A protects mice against oral challenge with the invasive pathogen Salmonella typhimurium / P. Michetti, M. Mahan, J. Slauch, J. Mekalanos et al. // Infect. Immun. 1992. - V. 60. - P. 1786-1792.

202. Mintaa, J. Distribution and levels of properdin in human body fluids / J. Mintaa, P. Jezyka, I. Lepowa // Clin. Immun. and Immunopathol. V-. 5 .- 1976. - P. 84-90.

203. Mookherjee, N. Modulation of the TLR-mediated inflammatory response by the endogenous human host defense peptide LL-37 / N. Mookherjee, K. Brown, D. Bowdish et al. // J. Immunol. 2006. - V. 176. - P. 2455-2464.

204. Murakami, M. Postsecretory processing generates multiple cathelicidins for enhanced topical antimicrobial defense / M. Murakami, B. Lopez-Garcia, M. Braff et al. // J. Immunol. 2004. - V. 172. - P. 3070-3077.

205. Muratsu, K. Levels of salivary lysozyme, lactoperoxidase, and lactoferrin in diabetic hamsters / K. Muratsu, T. Morioka // Infect. Immun. 1985. - V. 48. - P. 389-394.

206. Murphy, G. A simple method of collecting saliva to determine the sodium status of cattle and sheep / G. Murphy, J. Connel // Australian Vet. J. 1970. - V. 46. - P. 593.

207. Navazesh, M. Measuring salivary flow: challenges and opportunities / M. Navazesh, S. Kumar // JADA. 2008. - V.139. - P. 35-40.

208. Nieuw Amerongen, A. Saliva the defender of the oral cavity / A. Nieuw Amerongen, E. Veerman // Oral Dis. - 2002. - V. 8. - P. 12-22.

209. Oona, C. A controlled quantitative study of parotid salivary secretory IgA-globulin in normal adults / C. Oona, J. Leea // Journal of Immunological Methods. 1972. - V.2.-P. 45-48.

210. Ostlund, S. Saliva and denture retention / S. Ostlund // J. Prosthet. Dent. -1960. -V. 10.-P. 658-663.

211. Oudhoff, M. The role of salivary histatin and the human cathelicidin LL-37 in wound healing and innate immunity / M. Oudhoff, B. Blaauboer, K. Nazmi, N. Scheres et al. // Biological Chemistry. 2010. - V. 391. - P. 541-548.

212. Paquette, D. Inhibition of experimental gingivitis in beagle dogs with topical salivary histatins / D. Paquette, G. Waters, V. Stefanidou et al. // J. Clin. Periodontol. 1997. - V. 24. - P. 216-222.

213. Park, W. Influences of animal mucins on lysozyme activity in solution and on hydroxyapatite surfaces / W. Park, J. Chung, Y. Kim, S. Chung et al. // Arch. Oral Biol. 2006. - V. 51. - P. 861-869.

214. Parra, M. Use of a time-resolved immunofluorometric assay for determination of canine C-reactive protein concentrations in whole blood / M. Parra, M. Tuomola, J. Cabezas-Herrera, J. Ceron // Am. J. Vet. Res. 2005. - V. 66.-P. 62-66.

215. Parry, J. Sensitive assays for viral antibodies in saliva: an alternative to tests on serum / J. Pariy, K. Periy, P. Mortimer //Lancet. 1987. - V. 2. - P. 72-75.

216. Patterson, J. Sympathetic and sympathomimetic stimulation of parotid salivary secretion in sheep / J. Patterson, D. Titchen // J. Physiol. 1975. - V. 252. -P. 58-59.

217. Payne, J. Selective effects of histidine-rich polypeptides on the aggregation and viability of Streptococcus mutans and Streptococcus sanguis / J. Payne, V. lacono, I. Crawford et al. // Oral Microbiol. Immunol. 1991. - V. 6. - P. 169-176.

218. Phillipson, A. Distension of the rumen and salivary secretion / A. Phillipson, C. Reid//Nature. 1958.- V. 181.-P. 1722-1723.

219. Phillipson, A. Bloat in cattle. XVI. Bovine saliva: The chemical composition of the parotid, submaxillary and residual secretions / A. Phillipson, J. Mangan // Ibid. 1959.-V. 2.-P. 990.

220. Piccione, G. Daily rhythm of salivary and serum urea concentration in sheep / G. Piccione, A. Foà, C. Bertolucci, G. Caola// J. Circadian Rhythms. 2006. - V. 4.-P. 16.

221. Pollock, J. Synergism of lysozyme, proteases and inorganic monovalent anions in the bacteriolysis of oral Streptococcus mutans GS5 / J. Pollock, H. Goodman, P. Elsey, V. Iacono // Arch. Oral Biol. 1983. - V. 28. - P. 865-873.

222. Pollock, J. Lysozyme protease-inorganic monovalent anion lysis of oral bacteria strains in buffers and stimulated whole saliva / J. Pollock, S. Lotardo, R. Gavai, B. Grossbard // J. Dent. Res. 1987. - V. 66. - P. 467^174.

223. Poth, E. A simplified technique for quantitative collection of salivary secretions of men / E. Poth // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1933. - V. 30. - P. 977.

224. Pratt, J. On the biology of B. fiisiformis / J. Pratt // J. Infect. Dis. 1937. - V. 41.-P. 461-466.

225. Prévôt, A. Les bactéries anaérobies / A. Prévôt, A. Turpin, P. Kaiser Paris: Dunod, 1967.-2188 pp.

226. Pringsheim, H. The secretion and activity of ptyalin / H. Pringsheim, H. Gorodiski // Biochem. J. 1923. - V. 140. - P. 175-178.

227. Rayan, G. A comparison of human and animal mouth flora / G. Rayan, D. Downard, S. Cahill, D. Flournoy // J. Okla. State. Med. Assoc. 1991. - V. 84. - P. 510-515.

228. Roberts, A. The effects of ethyleneglycol-tetra-acetic acid on bactericidal activity of human serum against E.coli / A. Roberts, R. Phillips // J. Med. Microbiol. 1981.-V. 14.-P. 195-203.

229. Robinovitch, M. Separation and identification of some of the protein components of rat parotid saliva / M. Robinovitch, L. Sreebny // Arch. Oral Biol. -1969. V. 14.-P. 935-949.

230. Rosenfeld, Y. Endotoxin (lipopolysaccharide) neutralization by innate immunity host-defense peptides. Peptide properties and plausible modes of action / Y. Rosenfeld, N. Papo, Y. Shai //J. Biol. Chem. 2006. - V. 281. - P. 1636-1643.

231. Rundegren, J. Bacteria-agglutinating characteristics of secretory Ig A and a salivary agglutinin / J. Rundegren, R. Arnold // Adv. Exp. Med. Biol. 1987. - V. 216.-P. 1005-1013.

232. Saglie, F. Bacterial invasion and its role in the pathogenesis of periodontal disease. In: Hamada S, Holt S., McGhee J. (eds) Periodonlal Diseuse: Pulhogenf; and Hosi Immune Responses / F. Saglie Tokyo: Quintessence, 1991. - 27-40 pp.

233. Sang, Y. Canine cathelicidin (K9CATH): gene cloning, expression, and biochemical activity of a novel pro-myeloid antimicrobial peptide / Y. Sang, M. Teresa Ortega, K. Rune, W. Xiau et al. // Dev. Comp. Immunol. 2007. - V. 31. -P. 1278-1296.

234. Sato, F. Immunohistochemical Localization of Chromogranin A in the Acinar Cells of Equine Salivary Glands Contrasts with Rodent Glands / F. Sato, T. Kanno, S. Nagasawa, N. Yanaihara et al. // Cells Tissues Organs. 2002. - V. 172. -P. 29-36

235. Schaller-Bals, S. Increased levels of antimicrobial peptides in tracheal aspirates of newborn infants during infection / S. Schaller-Bals, A. Schulze, R. Bals // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2002. - V. 165. - P.992-995.

236. Scheunert A., Trautmann A. Zum Studium der speichelsekretion. 2. (ber die Sekretion der parotis und mandibularis des schafes / A. Scheunert, A. Trautmann // Pfliwg. Arch. Ges. Physiol. -1921. V. 192. - P.33-69.

237. Scheunert, A. / A. Scheunert, F. Krzywanek, K. Zimmermann // Pjlug Arch. Ges. Physiol. 1929. - V. 223. - P. 472.

238. Schneyer, C. Effects of denervation on development of function and structure of immature rat parotid / C. Schneyer, H. Hall // Am. J. Physiol. 1967. - V. 212. -P. 871-876.

239. Schneyer, C. Growth pattern of postnatally developing rat parotid gland / C. Schneyer, H. Hall //Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1969. - V. 130. - P. 603-607.

240. Schneyer, C. Secretory Mechanisms of Salivary Glands / C. Schneyer, L. Schneyer N.- Y.: Academic Press, 1967.

241. Schneyer, L. Method for the collection of separate submaxillary and sublingual salivas in man / L. Schneyer // J. Dent. Res. 1955. - V. 34. - P. 257261.

242. Scicchitano, R. Origin of immunoglobulins in respiratory tract secretion and saliva of sheep / R. Scicchitano, R. Sheldrake, A. Husband // J. Immunol. 1986. -V. 58. - P. 315-321.

243. Scully, C. Opsonization, phagocytosis and killing of Streptococcus mutans by polymorphonuclear leukocytes, in relation to dental caries in the rhesus monkey (Macaca mulatta) / C. Scully, T. Lehner // Arch. Oral Biol. 1979. - V. 24. - P. 307-312.

244. Sendroy, J. Microdetermination of chloride in biological fluids, with solid silver iodate / J. Sendroy // J. Biol. Chem. 1937. - V. 120. - P. 405-417.

245. Shefer, S. Alimentary conditioned reflexes in dogs on activation and blockage of the cholinoreactive amygdaloid system / S. Shefer // J. Neurosci. Behav. Physiol. 1989. - V. 19. - P. 459-465.

246. Shern, R. A method for measuring the flow of saliva from the minor salivary glands / R. Shern, P. Fox, J. Cain, S. Li // J. Dent. Res. 1990. - V. 69. - P. 11461149.

247. Shillitoe, E. Immunoglobulins and complement in crevicular fluid, serum and saliva in man / E. Shillitoe, T. Lehner // Arch. Oral Biol. 1972. - V. 17. - P. 241247.

248. Shindler, J. Peroxidase from human cervical mucus. The isolation and characterisation / J. Shindler, R. Childs, W. Bardsley // Eur. J. Biochem. 1976. -V. 65.-P. 325-331.

249. Shugars, D. Endogenous mucosal antiviral factors of the oral cavity / D. Shugars //J. Infect. Dis. 1999. - V. 179. - Suppl. 3. - P. 431-435.

250. Slanetz, L. A systematic study of the Fusiform bacteria / L. Slanetz, L. Rettger // J. Bacteriol. 1933. - V. 26. - P. 599-621.

251. Smith, D. Ontogeny of immunity to oral microbiota in humans / D. Smith, M. Taubman // Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 1992.- V. 3.- P. 109-133.

252. Smith, D. Longitudinal association of salivary IgA antibody and initial mutans streptococcal infection in children / D. Smith, W. King, C. Imelmann, H. Akita et al. // J. Dent. Res. 1994. - V. 73. - P. 153.

253. Smith, P. Measurement of protein using bicinchoninic acid / P. Smith, R. Krohn, G. Hermanson, A. Mallia et al. // Anal. Biochem. 1985. - V. 150. - P. 7685.

254. Soell, M. Chromogranin A detection in saliva of type 2 diabetes patients / M. Soell, A. Feki, M. Hannig, H. Sano et al. // Bosnian J. Basic Med. Sci. 2010. - V. 10.-P. 2-8.

255. Souka, T, Agglutination of Streptococcus mutans serotype c but not inhibition of Porphyromonas gingivalis autoaggregation by human lactoferrin / T. Souka, J. Tenovuo, J. Rundegren // Arch. Oral Biol. 1993. - V. 38. - P. 227-232.

256. Spaulding, E. The Fusobacterium genus: II. Some observations on growth requirements and variation / E. Spaulding, L. Rettger // J. Bacteriol. 1937. - V. 34. -P. 549-563.

257. Spealman, C. The volume flow of resting salivary secretion / C. Spealman // Am. J. Physiol. 1943. - V. 139. - P. 225-229.

258. Stavrasky, G. The effect of barium chloride on the salivary secretion / G. Stavrasky // J. Pet. 1932. - V. 45. - P.53-64.

259. Stevens, C. Comparative physiology of the vertebrate digestive system. 2 rd Ed. / C. Stevens, I. Hume UK.: Cambridge University Press, 1995.

260. Stewart, W. Technique for cannulation of parotid salivary duct of sheep / W. Stewart, D. Stewart // J. Appl. Physiol. -1961. V. 16. - P. 203-204.

261. Stratton, C. Correlation of serum bactericidal activity with antimicrobial agent level and minimal bactericidal concentration / C. Stratton, M. Weinstein, B. Reller//J. Infect. Dis. 1982. - V. 145 (2). - P. 160-168.

262. Takada, K. Streptococcus orisuis sp. nov., isolated from the pig oral cavity / K. Takada, M. Hirasawa // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2007. - V. 57. - P. 12721275.

263. Taubman, M. Contemporary oral microbiology and immunology / M. Taubman, J. Slots Mosby Yearbook., 1992.

264. Tenovuo, J. Non-immunoglobulin defense factors in canine saliva and effects of a tooth gel containing antibacterial enzymes / J. Tenovuo, T. Illukka, T. Vaha-Vahe//J. Vet. Dent. 2000. - V. 17.-P. 136-140.

265. Thornton, D. Proteomic analysis of polymeric salivary mucins: no evidence for MUC19 in human saliva / D. Thornton, N. Khan, R. Mehrotra, M. Howard et al. // Glycobiology. 1999. - V. 9. - P. 293-302.

266. Vaerman, J. Studies on IgA immunoglobulins in man and animals / J. Vaerman- Sintal: Louvain., 1970.

267. Vaerman, J. Originand molecular size of immunoglobulin A in the mesenteric lymph of the dog / J. Vaerman, J. Heremans // J. Immunol. 1970. - V. 18.-P. 27.

268. Vaerman, J. Immunoglobulin A in the pig. I. Preliminary characterization of normal pig serum IgA / J. Vaerman, J. Heremans // Int. Arch. Allergy. 1970. - V. 38.-P. 561.

269. Van Kesteren, M. Studies on the antibacterial factors of human saliva / M. Van Kesteren, B. Bibby, G. Berry // J. Bact. 1942. - V. 43. - P. 573-83.

270. Van Palenstein Helderman, W. Lysozyme concentrations in the gingival crevice and at other oral sites in human subjects with and without gingivitis / Van Palenstein Helderman W. // Arch. Oral. Biol. 1976. - V. 21. - P. 251-255.

271. Van Slyke, D. The determination of gases in blood and other solutions / D. Van Slyke, F. Neil // J. Biol. Chem. 1924. - V. 6. - P. 523.

272. Vudhichamnong, K. The effect of secretory immunoglobulin A on the in vitro adherence of the yeast Candida albicans to human oral epithelial cells / K. Vudhichamnong, D. Walker, H. Ryley // Arch. Oral Biol. 1982. - V. 27. - P. 617621.

273. Wardlaw, A. The demonstration of the bactericidal activity of the properdin system / A. Wardlaw, L. Pillemer // Ann. N.-Y. Ac. Sci. 1956 a. - V. 66. - P. 244246.

274. Wenghoefer, M. Nuclear hBD-1 accumulation in malignant salivary gland tumours / M. Wenghoefer, A. Pantelis, H. Dommisch, W. Gotz et al. // BMC Cancer. 2008. - V. 8. - P. 290.

275. Wever, R. The peroxidation of thiocyanate catalysed by myeloperoxidase and lactoperoxidase / R. Wever, W. Kast, J. Kasinoedin, R. Boelens // Biochim. Biophys. Acta. 1982.-V. 709. - P. 212-219.

276. Whicher, J. Formulation of optimal conditions for an immunonephelometric assay / J. Whicher, C.Blow//Ann. Clin. Biochem.-1980.-V. 17.-P. 170-177.

277. Whiley, R. Current classification of the oral streptococci / R. Whiley, D. Beighton//Oral Microbiol. Immunol. 1998.-V. 13.-P. 195-216.

278. White, J. A comparison of the chemical composition of stimulated and resting saliva of caries-free and caries-susceptible children / J. White, R. Bunting // Am. J. Physiol. 1936. - V. 117. - P. 529-523.

279. Woods, J. Peptidic delta opioid receptor agonists produce antidepressant-like effects in the forced swim test and regulate BDNF mRNA expression in rats / J. Woods, M. Torregrossa, E. Jutkiewicz et al. //Brain Res. 2006. - V. 1069. - P. 172-181.

280. Yang, Y. Self perceived work related stress and the relation with salivary IgA and lysozyme among emergency department nurses / Y. Yang, D. Koh, V. Ng, C. Lee et al. // Occup. Environ. Med. 2002. - 59. - P. 836-841.

281. Yeo, G. The method of secretion of saliva "A manual of physiology" / G. Yeo London: P. Blakiston, Son and Co, 1889.

282. Zelezetsky, I. Evolution of the primate cathelicidin: correlation between structural variations and antimicrobial activity / I. Zelezetsky // J. Biol. Chem. -2006. V. 281. - P. 19861-19871.

283. Балабанов, В.И. Словарь нанотехнологических и связанных с нанотехнологиями терминов. Протеом / В.И. Балабанов, Г.Г. Борисенко, А.В. Братищев и др. // Электронный ресурс. URL: http://thesaurus.rusnano.com.

284. Библиотека врача-лаборанта. Электронный ресурс. URL: http:// www.clinlab.ru.

285. Википедия. Свободная энциклопедия. Электронный ресурс. URL: http:// ru.wikipedia.org.

286. Щербаков, Д.А. Стоматологический сайт доктора Щербакова / Д.А. Щербаков. Электронный ресурс. URL: http:// www.zubki.ru.

287. РИА Новости Сибирь Молодые иркутские ученые научились диагностировать болезни по рисунку кристаллов слюны. - 2004. Электронный ресурс. URL: http:// www.sibir.rian.ru.

288. Barrett, S. Herbal Crystallization Analysis / S. Barrett. 1998. Электронный ресурс. URL: http:// www.quackwatch.org.

289. Cunniffe, B. Effect of acute and chronic exercise on immunoendocrine response in professional rugby union / B. Cunniffe. 2009. Электронный ресурс. URL: http:// content.ebscohost.com.

290. Dan, J. Determination of saliva lysozyme with enzyme-linked rocket Immunoelectrophoresis / J. Dan, Z. Yan-qiu //Journal of Hubei College of traditional Chinese medicine. 2009. Электронный ресурс. URL: http:// en.cnki.com.cn. /)

Информация о работе

Покровская, Екатерина Сергеевна
кандидата биологических наук
Казань, 2012
ВАК 06.02.02

Диссертация

Факторы неспецифической иммунологической резистентности слюны жвачных животных - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы