Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Escherichia coli как вторичный этиологический фактор при сальмонеллезной и шигеллезной инфекциях у детей

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Escherichia coli как вторичный этиологический фактор при сальмонеллезной и шигеллезной инфекциях у детей"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МП РОССИИ ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

О 8 АВГ 1394

" На правах рукописи

ЧЕСНОКОВА Марина Геннадьевна

ESCHERICHIA COLI КАК ВТОРИЧНЫЙ ЭТИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКТОР ПРИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗНОЙ И ШИГЕЛЛЕЗНОЙ ИНФЕКЦИЯХ У ДЕТЕЙ

03.00.07 — Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ЧЕЛЯБИНСК — 1994

Работа выполнена на кафедре микробиологии Омского государственного медицинского института.

Научный руководите л ь:

доктор медицинских наук, профессор А. А. ОЬГОЛЬЦ.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор П. II. ДОЛГУШИН, доктор медицинских паук, профессор 3. Г. ГЛВПДУЛЛНН.

Ведущее учреждение, давшее заключение о научно-практической ценности работы:

Ленинградский санитарно-гигиенический медицинский институт МЗ РФ.

при Челябинском государственном медицинском институте по адресу: 454092, Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинского государственного медицинского института.

Защита диссертации состоится

в

часов на заседании специализированного совета К.084.04.03

Автореферат разослан

1994 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук

Н. И. ЖИГАЛОВА.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблем». Проблема острых килечных инфекций у детей порвых лет жизни остается исключительно актуальной дом практического здравоохранения. Занимая значительный удельный вес в структуре обвей инфекционной заболеваемости, они являются сдной из основных причин дотской смертности» По данным ВОЗ / A!<)h1erH,, 1984/ от диарейных заболеваний ежегодно погибает от 3 до 5 млн. детей в возрасте до 5 лот. Среди основных этиологических факторов острых китечшсс инфекций ведущео место занимают бактерии семейства btrktokack-Hdatae • Так, в Омской области за 1993 г. зарегистрировано 207 случаев заболевания сальмоиеллезами, 292 - бактериальной дизентерией я 243 - эиерихиозов. Наряду с этим было зарегистрировано еще 1329 случаев ОКИ неустановленной этиологии.

Проблема ОКИ бактериальной природы осложняется тем, что в патогенезе заболевания принимают участие на только известные возбудителя, но и определенные гиды из состава нормальной микрофлора, находящиеся с первыми в одной экологической нише. Отсюда взаимоотношения мевду случайными патогенами и резидентной микрофлорой могут носить прямо противоположный характер, что отразится иена биологических свойствах взаимодействующих популяций микроорганизмов. Поэтому для истинного понимания природы кишечных инфекций необходимы новые методические подходы, основанные на экологических принципах взаимоотношений в системе "возбудитель- яндиге/лая микрофлора-организм хозяина, которые позволят углубить научные анаши о роли и характере участия конкретного представителя нормальной микрофлоры & патогенезе кишечных инфекций /А.А.Обгольц, 1969/,

Многочисленные литературные данные свидетельству«« о судеотвекннх качественных я количественных изменениях в соо-тава нормальной микрофлоры кишечника при Дкарейннх заболеваниях /'Бондаренко В.И. о ооавт,, 1990» Петровская

1S84; 1990 ; Мнацаканов С.Т.с соавт. ,1983,1984,1989; Курцев В.М.,1969;Кудаай Д.Г. ДЭ69;Гизатулина С.С.с соавт., 1983;Безрукова Л.0.,1975;Голубева И.В., 1-Э67/.

Однако специальных комплексных исследований, касающихся механизмов участил в патогенезе кишечных инфекций определённых представителей нормальной шкрсхТшоры и возможных изменений их потенциала патогеняости в ходе инаекгдонного * процесса не проводилось.

Важное значение в этом плаке имеет: E.coli , которая оставаясь нормальным обитателем киаечшка человека , характеризуется относительной пластичностью вирулентных свойств.

Сред;! известных признаков вирулентности наибольшей интерес выэыгают эдгезивнне, гадиа?х>бтш »ан^их^зоцт/лше ,)ie-таболические свойства, определяющие достаточно полно этиологическую значимость условно-патогенных микроорганизмов в патогенезе диарейшх заболеваний. В свяяд с этим было предпринято , что при ОКИ возможно расщепление популяции Е.ссФ .колонлзирутацих кишечник больных детей, на штаммы о антагониетичесш-и и синерг;:дныш свойствами относительно основного возбудителя заболевания. В последнем случае оубпо- ' пуляция E.coli будет усиливать основной шфкционшй процесс, я качественно отличаться по набору факторов вирулентности, от штаммов, проявлявших антагонизм к основному патогену. Следовательно, вирулентные штаммы В. coli способны выступать в роли вторичного этиологического фактора в патогенезе острых кишечных забсяевашьЗ.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССТГОВАНИд. Цель исследований заключа-■ лась v установлении роли E.coli, колонизирующих кишечник, в иа-, тотекезв сааьионбляёзяой и пшгеллёзпоа инфекции у детей.

В соответствии о поставленной цель» былк определени Олёдующие задачи:

1. Выявить частоту я динамику распределения вирулентных штаммов в подудели E.coli, ^ркирущэЛся в клпечнике больных детей о сальнонеллеаной я иигеллёэной ин$екадями,

2. Установить степень взаимосвязи меаду наличием ьиру -

ЛвНТНЫХ факторов E.colí, колонизирующих кишечник больных детнй, и тяжестью клинического течети острых кишечных инфекций.

3. Оценить характер взаимоотношений между аутоштамчамя E.colí и возбудителями сальмонеллезов и шигвллэзов, при одновременном их изолировании из кишечника больных.

4. Раэсаботать мик ро б и о лог лч е стае критопта оценки этиологической роли E.colí , колонизиругоок кишачшгк больных,

в патогзнезе острых кишочнкх инфекций.

Научная крайняя. Впервые представлена характеристика вирулентных признаков, приобретаемых Е.ооВ , колонизирушдаи кишечник детой с ОКИ. Установлена потенциярувдая роль вирулентных штамм в E.coli в усилении основного инфекционного процесса при сальмонедлезах и тигеллазах. Разработаны микробиологические критерии оценки этиологической значимости E.colí, изолированных от детей с острыми кишечными инфекция- . мл в патогенезе заболеваний.

Практическая пенчость работы и внедрение полслешшх результатов.

' Теоретачеекое значение работы заключается в выявлении вторичной этиологической роли В.coli , колонизирующих кишечник больных детей о острыми кишечными инфекциями в патогенезе заболевания. Расширены знания о факторах вирулентности данного микроорганизма, п установлено их сходство о факторами вирулентности 'сальмонелл и шагелл. Полученные данные используются в процессе преподавания курсз медицинокой микробиологии при изучении тем: "Микробиологическая диагностика сальмонеллезов, шигеллезов, этержхиозов". /Акт вкедреняя * 146 от 10.02.1994 г/.

Практическое значение работы состоит в использовании практическими лабораториями методов изучения факторов вирулентности для оценки этиологической рол» условно-патогеянкх микроорганизмов при ОКИ. /Акт внедрения * 727 от 30.12.1993г/.

Разработаны методические рекомендации "По выявлении признаков вирулентности у В.coli при микробиологической днвг-

ностяке острых кишечных инфекций у детей" /Акт внедрения * 183 от 19.01.1934 г/.

Издано информационное письмо "Оценка приобретенной вирулентности у E.coli при острых кишечных инфекциях у детей" /Акт внедрения № 185 от 19.01.1994 г/.

Апробашн работы. Материалы диссертации долояенн иа П Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы микробиологии в некнфекцмонной клинике" /Барнаул, 1988 г./., на межкзфед-оальной конференции кафедр микробиологии и детских инфекций /май, 1994 г./.

Положения.внносимие на защиту;

1. При острых кишечных инфекциях у E.coli , колонизирующих кишечник больных детей, отмечается адаптационная изменчивость, направленная в сторону увеличения численности штаммов с выоаженнкми адгезивными, гидрофобными, антилизоцим-ными и метаболическими свойствами, усиливающими вирулентный

к перскстирующий потенциал указанных микроорганизмов.

2. Увеличение субпопуляции E.colf с наведенными признаками вирулентности в ходе развития ОКИ способствует потенцив-ровангаз инфекционного процесса, обусловленного патогенны)../ энтеробактерилми, а результате приобретений E.coli роли вторичного миологического фактора в патогенезе основного заболевания.

3. Клиническая тяжесть я продолжительность заболеваний находилась в прямой зависимости от степени выраженности вирулентных признаков и их многообразия у E.coli , выделенных os хетоЯ {Зольных острима кишечными инфекциями.

4» Взаимоотношения между E.coli я патогенными энтеро-бактерюши в мемонт их персистировангя в организме хозяина складываются в форме экологического конфликта мааду возбудителями диарейяых инфекций и резидентной микрофлорой, сопровождающегося качественным изменением последней.

Публикация. По материалам диооертишт опубликовано 7 работ.

, 06ь?м и структура диссертации. Работа изложена ка 204

страницах машинописного текста, иллюстрирована 60 таблицами п 21 рисунком.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы о материалах и методах исследований, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов. Библиография содержат 102 источника, из пих 88 отечественных и 94 иностранных.

Мате риалы я метода исследования,.

Б соответствии с целью и задачами исследования был собран и обобщен материал клинико-лебораторннх и микробиологических обследований 46 детей с шиголлеэом Зонче, 20 детей с шигеллезом Флекснера, 42 детей с саяьмонэдлезом, вызванным а3,entefif(eli's, и 7 детей с салылоноллезом, вызванным <S. tyirinmr-htm . Помимо этого было обследовано 65 детей с ОКИ неустановленной этиологии и 52 здоровых ребенка» Микробиологическое исследование испражнений осуществлялось в соответствии с общепринятыми методами. Забор материала производился у детей 0-2 лет о диагнозом ОКИ. Всего било выделено I4S6 штаммов E.ooli , из них от больных сальмонел-лезвми - 270, пгагеллеэаш - 335, ОКИ неустановленной этиологии - 328 и от здоровых детей - 503 штамма. Одновременно о Е.иой было изолировано и исследовано - 164 культуры сальмонелл. / xS.*»le*'&cfts - lZZ,<SJjf/>ifmurfUfTt 31/ и 240 культур шигелл / - 166,

Sh, sonnt ( - 72/, Основная часть исследований проводилась ,в лаборатории кафодры микробиологии Омского мединститута и на базе бактериологической лаборатории гор.больницы Л I -г.Омска.

Оценка адгезивных свойств E.eolf в возбудятелой острых кишечных инфекций осуществлялась о использование» реакции бактериальной гёмагглютивадии по DuguidJ.F. с соавт./1Эб6/ в модификации Обгольцв A.A. а соавт. /19ЙЗ/.

Гидрофобные свойства исследованных азолятов определяли по метолу Акатове А.К. о соавт. /1987/, ' .

Гемолитические свойства указанных яэолятов определялись по общепринято*^ Уогсду на ША с добавлением 1% кроличьих эритроцитов.

Метаболическая активность исследуемых культур энтеробак-' теряй оценивалась по способности связывать красителя - к рис- , талличаский фиолетовый /КЗ /, конго красный / КХ /, Романов-сксго-Гшзе / РГ /. Способность связывать краситель КФ изучалась по методу B/ta&'unSfi соавт. /1987 /. Способность связывать КК изучзлась нами по методу Поликарпова H.A. с соавт. /1985/ в модификации Григорьевой Л.В. с соавт./ I99J /. Исполь-.зованке красителя РГ осуществлялось по методике Грягорьевой 1.8. с соавт. / I9SI /.

Изучение антшинодимной активности проводилось по методике Бухарина О.В. с соавт» /1984 /.

Определение колициногенных свойств и чувствительности > к колздинам осуществляли по методике Лих о до д В.Г. с соавт, /ТЭ64 / а модифлкеции Обгольца A.A. с соавт. /1983 /. В качестве индикаторных и эталонных культур использовали Я.coli %0Wt B.coIiCa-18, Са-38, Са-42, Са-7, К-235 и Ciirebachr fnwtriif Са-31, подученные пэ ГИСК им.Я.А.Тарасевячз. Антнбиотикочувствительяость исследованных культур изучалось в соответствии с "Методическими указаниями по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом даф- ' фузии в агар с использованием дисков" /М., 1983 /.

Подученные результаты исследований обработаны статистическими методами /Ашарин Й.П., Воробьев A.A.. I9G2SS о использованием ЭВМ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

СОСТОЯНИЙ E.oolt , КШЮНИЗИРШЦИХ КИШЙЧШК ДЕТЕЙ ' ВОЛЬНЫХ ОСТРЫМИ КИЛЕЧНЫМИ ШЕКЦИЯМИ

В ходе исследований было установлено,. что популяция Е. /Colt , Азрыярувсцаяся в кишечнике детей больных острыми ки-авчтош инфекциями, качостзенно отличается от аналогичного вши, населотцет-о кишечник здогчвнх летай. Штамма E.oolt' , изолированные нэ ютзачняка детей о острыми кишечными инфох-. циямг, имея отклонен»! культуральных и биохимических свойств. В чзотноотн, сред« них встречался высюкаЯ удельный вое дакто-зоввгатявннх вариантов. Среди изолятов E.coli , выделенных от

8

детей с пигеллезной инфекцией, обнаружено значительное число штаммов с пониженной ферментативной активностью и отмечался низкий удельный вес подвижных штаммов.

Обычные эшерихии, выделенное в ассоциации с сальмонеллами и вигелвами, демонстпировали ряд признаков, определяющие вирулентные и яерсистируклив свойства условно-патогенных микроорганизмов. Причем независимо от этиологии го плечной инфекции прослеживалась одна и та se закономерность - увеличение штаммов E.coli , обладающих выраженными адгезивными, гидрофобными, антилизоцвмннмп свойствами и внеокой метаболической активностью.

Яри изучении в реакции бактериальной гемагглютинацни адгезивных свойств E.coli , выделенных от детей с ОКИ, показана, их сравнительно высокая адгезивная способность. При атом значительная часть штаммов характеризовалась маннозорезис-тентной гемагглютинацией (Рио. I).

Выраженная адгезивность подтверждалась их высокой гид-рофобиостью, изученной в тестэ солевой агрегации. По нашим данным среди E.coli , выделенных из исправлений больных детей вместе с шигеллами и сальмонелла?®, эти свойства наблюдались соответственно у 58,4$ и у 60,3? штаммов.

Высокий удельный вес гидрофобных культур В.coli отмечен и при ОКИ неустановленной этиологии /75,Ъ%/, в то время кзк среди Е.соК , выделенных от здоровых детей, таких штаммов было 44,9$.

Сравнительно высокая частота гидрофобных штаммов среди популяции E.coli , колонизипушой кишечник больных детей, отмечалась при кишзчннх инфекциях различной этиологии. Все это свидетельствует о том, что субпопуляция E.coli , формирущая-ся в кишечника на фоне воспалительного процесоа, отмечается структурными особенностями внешней мембраны.

При изучении метаболической активности E.coli , колонизирующей кишечник детей с ОКИ, установлено, что они в сравнении с аналогичными изолятами, выделенными от здоровых детей, обладают более высоким окислительно-восстановительным потенциалом.

зйргйнз Саги сшъксиэ/газ вига/газ СКИ нецпкзноблгннш

эшатогш

РИС. 7 Сравнительная характеристика гемагглютиниругащеи активности Е. соИ, быбеленных от батей с острыми кишечными инфекциями.

- суммарная гэмагглютинируютая активность; ШШШ - штамма, облагающие МКНА.

Колонии E.colf , изолированные от больных детей, ектяв-неа связывали красители Романовского-!'чмаа л конго красный. При этом культуры Б.coli , выделенные от большое о сальмонел-лезной инфекцией, вызванной ¿.fyf>fu'mttt*'um более активно связывали краситель РГ, чем сам возбудитель. В тоже время культуры зшерихий, выделенные от больных детей слабее связывали кристаллический фиолетовый, чем шигехте и сальмонеллы,

В процессе галечной инфекции у E.coli наблпдаотся усиленно к других признаков вирулентности, в частности, что проявлялось повышением юс антилиэоцишой активности. Примечательно, что уровень их антилкзоцишой активности был таякм же как у сальмонелл и шигелл. Отмечено динамичное увеличение штаммов E.coli с антилязошшними свойстве!,® по мере РАЗВИТИЯ острых кишечных инфекций, в результате чего онижаэтея роль лизодима в системе местной защиты. Причем наиболее часто антилазоцгояше штаммы встречались среда E.coIJ, изол^иро-вэнных от детей о сальмонеллезом и больных ОКИ неустановленной этиологии. В целом, средний показатель антилиэоцимной активности у E.coli, полученных от Сольных ОКИ, был существенно выше, чем у E.coli , выделенных от здоровых детей.

Аналогичная закономерность отмечена я для шиголл и оаль-монелл при сравнение их антилизоцимной активности о таковой у E.coli , выделенных от здоровых детей.

Среди культур Я.coli, выделенных при ОКИ, встречалось ' сравнительно мало штаммов о гемолитическими свойствами. Исключение составили культуры B.ool« , полученные от больных ши-геллезом Флекснера, ореда которых процент штаммов с гемолитическими свойствами был болев высоким , чем среда E.ool» от здоровых детей.

Важное значение в патогенезе кишечных инфекций имеет характер биоцонотвчеокях отношений между нормальными обитателями кипечюгка и патогенными зятвробактерюши, В овяэк о этим особый интерес представляло изучение йааиыонаправлеипой колищшогенностя моаду B.coli и шигелламя и сальмонелла«, выделенными одновременно яз аспрекввкид вольннх детьй. йсолч-

дованив полазало, чте E.oolt , изолированны« от детой с

ОКИ обладали неоднозначной колициногенной активностью в отношении яигзлл и сальмонелл. Вместе с тем среди E.colf , вы- , деленных от больных шягечлезом, отмечено 33,6* штаммов, проявлявших колициногенную активность относительно индикаторной культуры ROW, тогда эк среди Е.соЬ' , полученных от здоровых дэтей указанным свойством обладало 73,2$ штаммов.

Напротив, среди эшерихий, выделенных вместе с сальмо-- неллами колшданогенность к культуре ROif обнаружена только у 57,0$ штаммов.

Ич этого следует, что при сальмопеллезях процесс отбора колэдлногекних штаммов E.coli существенно подавлен в сравнение с аналогичным явлением у здоровых детей и больных шигаллезами.

Изучение колициночувотвительности эшерихий, изолированных от детей о ОКИ, показало, что наиболее часто чувствительность к типовым колицинам проявляли изоллты кишечных палочек, полученные от детей с сальмоне^лезной инфекцией /83,3$ штаммов/. Среди E.coli , выделенных от детей больных шигеллезами и при ОКИ неустановленной этиологии, чувствительностью к типовым колицинам обладало меньшее количество штаммов, чем среди E.col» , колонизирующих кишечник здоровых детей.

Спектр чувствительности к различным эталонным колицинам у E.coli , выделенных от детей о ОКИ, отличался существенным разнообразием в зависимости от типа колицина и происхождения иэодятов. Так, удельный вес поликолициночувствительяых штаммов среди культур E.ooli , полученных от детей о сальмо-нелйезоы, был значительно маньше, чем'Среди E.ooli , выделенных от здоровых детей. Первые чаще проявляли чувотвительпооть '' к колицинам типов V , Е + I, в вторые - к типам К и К

Эшерихии, изолированные вместе с шигеллами, демонстрировали наиболэт чаото чувствительность к колицинам типов V , к. К, В. Среди E.cofi , выделенных от детей о ОКИ неустановленной этиологии, встречалось сравнительно больше штаммов, чувствительных к колицинам тиса А я V.

Резистентность к антибиотикам Б,coli , населяюадас кишеч-

Н7ТК дет2.1 больных Old. мог'.ет'определить н их косвенную по-тогсга'ость, В результате нейтрализации пнт,:б;:отлпсг,, кг.пглп-лзккых против основных возбудителей. Изодлты В.coli , получение от больных ОХИ, харгктерязгва.глсь пзпболымй сэзпс-тснтностъп к тстрпцглллпу, vaна/кцит/ н корбенициялику, тогда аак S.coli , рндололкые ст здоровых доте?., были^больгзЯ степени устойчивы к полимекскну и тетрациклину.

Характерно, что среди 57 льтур E.coli , получошшх от детей с 0KI5 встроилось бельки штаммов с кножестзош;ой дз-кпрствпкно?. устойчивости» чем среди культур E.coli , зидо-^и-г.иг. от здоровых ДОТСЙ.

тбкюз образом, ретультатн иасих исследований сяидетолз-стсувт о тем, что популяция Е.соГГ, форггаругсцачея а кдзоч-няко боглпух CJui, качественно отличается от аналогичных !,'?:крооргаиг.змоз, насолякзих юппочняк здоровых дотйЯ.

Зги различия ассоциируются с увеличением з пепудяцгга ".coli , это,wob с пирстешнэш вирулонгншля я перенстиру:-

cboíctbwh. При зтем псзэл^сл'о от зтиолеглл клчзчноЯ инфекция просло-изаотся одна и та se закоишсрпость - фзр-уаровтагг суйловуляшш 5,coli , .облйдегззй тпграяегопэа asro-зивпгст, гядрофзбныуи, оп7илпзепкм:па.а сбойствоул и внеской нотаболглесхоЗ активность». Приобротенчо ".coli , колепизи-pyr-toe кг.сечнкк детой с ОКИ, статуса услотто-патогепных !.т".росрга;п!Э''ов, отрицается на характере течения основного инфекционного процесса, который при брстает более тяхолуя КД21ГЭТ5СКуЯ iopL^r..

ЕЮЛОГЙЧТСКАЛ ХАРАКТЕРИСТИКА САЛН.5СНШ И ВЗТЗЛЛ, ВУЛ2ЛЕНШ ОТ ДСТЕЯ С ОСТРАЯ КИШЕЧНЫМИ

В пгтасссо взапкоасГст.пия возбудителя о какрооргакиз-угм порасм? пглпйдлс.ткт зночктсльнйя роль в реализации пз-тогрггрого потенциала, как на начальном, ток и ка поздних степях инфекционного процесса.

В срязк с этзгм исследсп'ыио состояния бкологглоскях п гирулакгких споГ.стэ копкротных ста?етоз возбудителей пзлгтчт-

ся необходимым условием оценки их патсх-энности. Изученные • нами в ходе выделения и идентификации культуры сальмонелл и шигелл имели типичные культуральные, биохимичоские и антигенные свойства, характерные для соответствующих видов энтеро-бактерий. В то же время среди культур сальмонелл и шязгалл, изолированных от детей с ОКИ, встречалось значительно меньше гемагтлютипиругацих штаммов в сравнение с E.coli, выделенными от здоровых детей. Так, удельный вес штаммов 2. en}uikela , S.lyfchimuH'um и Sli.Sc/intt , Sh. fit r/reu' , обладавших гемаг-глвтинирущей активностью относительно эритроцитов человека I (0) группы крови составил соответственно 2,3£, 3,2%, 8,3?, 5,9i. С эритроцитами П (А) группы крови человека адгезивные свойства были установлены только у S(tJlwio4 в 3,05 случаев. Относительно эритроцитов морской свинки адгезивные свойства отмечались только у Sh.{ltffrt*r -4,2$ случаев я у

Sfi- Sentit.' - 2,1% случаев. Однако среди штаммов шигелл отмечалось больше штаммов, демонстрировавших мапнозорезистент-ную гемагглятияаци», чем среди E.coli' , полученных от здоровых детей.

При исследовании гидрофобной активности возбудителей ОКИ было установлено, сравнительно слабое проявление этого признака как у сальмонелл, так и у шигелл. Вместе с тем штаммы Sit. UttHir"! к ¿hsorr/ttt характеризовались более высокой степенью гкдрофобностн, чем сальмонеллы. Так, оредя культур SL HtthtM z . Sptrttt соответственно,

8,9 и 97!? штаммов обладало высокой степень» гипрофобнооти, тогда как среди культур S. ея/tM'h'cfis а S. {-уфпчт'цт

тадовую демонстрировали, соответственно, только 3,8 я 6,5)S ттамыоз.

В ходе изучения метаболической актявностя сальмонелл и пятый установлено, что колонии ,

S. lyplnmurium , язолированнна от детой о сальмонвллезоы активнее связывали краситель Ж 21,8 г 25,8? штаммов. Такой за активностью в . отношения ука"аяного красителя обладали колонаи <i%. fhtneri я Sk ¿опт! , среди которых адсорбция КК выявлена s 32,1 я 26,4* случаях.

В сравнении с сальмонеллами я шигеллами колонии B.colí, изолированные от здоровых детей (контрольная группа) менее активно связывали красители.

Такта образом, способность значительной части возбудителей ОКИ связывать красители, свидетельствует''о их высокой метаболической активности, что по данным некоторых авторов / dhaduM- Л </«*/( 1987), Berk^ff HAMfijit) / коррелирует в определенной мере с наличием влазмид, присутствие которых в своя очередь усиливает вирулентность энтеиобак-теряй.

Исследование антилизоцимной активности сальмонелл й зигелл, выделенных от детей с ОКИ, показало, что частота распространения я уровень антилизоцяшой активности среди возбудителей была значительно выше, чзм среди E.ooI;' , изолированных от здоровых детей. Так, среди культур «/•

п'ит антзлизоцимная актсзность наблюдалась у 100% штаммов. Среди культур ai! etrftn'b'dfs , &kffutten'

, <SL:otim¡ указанный фактор вирулентности встречался соответственно, у 95,5, 94,0 z 91.Sí аггашоэ. Характерно, что Sk Sofrnet обладали более высокой средней величиной антилизоцямной активностя - 6,5 мкг в сравнение с другими возбудителями.

■ Таким образом, изучение а:5Тиллзоцимнкх свойотв у сал-~ монелл л яглгелл показало широкое распространение данного признака среди популяций возбудитал i СдИ, что определяет их способность к длительной пероястэшши а организме хозяина.

Оценка кэлталногенных свойств сальмонелл я аигеяя, выделенных от больных детей, покгэала, что этшы S.tnhr-cUt/fs, С. fyjblii'mitHtm , ¿>Lfhr*tH' обладала сравнительно низкой калшшногеяность» относительно ишд-каторной культуры A0W в сравнение а Е.соВ , полученными от здоровых детей. Особенно высокий удельный вео /79,2Í/ колишгаогенных аггаиюв, вчявлен срога <SA.Sc/rnti' «

При изучении коляциногенностя сальмонелл х шигелл относительно аутояггаммов Е.соП , выделенных одновременно с

указанным» возбудителями, било оСн/к'/.'/.-шо 12,3% колли'ногоп-иых птсммов сподк S. tybiitttt/t-ium и 26, К" ътоммоз

С рот,! <5/;. fits';; ем . Клинические ИЗОЛЯТЫ •S.e.lier-t'A'cfi'S л £fi. Sennit' вообще не проявлял/. кол/ду.нсгспшсс свойств П ОТИОШПЛПИ ауТОШТЗТМОЯ К.coll' .

Культуры J.f/r hn-hiiis '( характеризовались сраонитольно чувствительность?; к

эталонным колицинам. Нолпоточувствительность данных штаммов оказалась ни.т.ч, чем у E.coti, выделенных от ззорэнэте лото!!.

. Пси определении спектра колицяночуиств/.тсльнзсгя яоэ-будптелвй установлено, чте наибольшая чувствительность • у

<$. eiiiir-i'li'di'i огмочалаоь к коляичу типа U + I -/7G.5/V И к колицнну 33 /50,Г^ птше.'оп/.

Ютнячоокне птам.ш S.fyfJiimitM'ttm обладали с пологи чпкм спектром чувотвительнести, хотя удольпи:! вое тгвет-внтольних штаммов бил нико /соответственно К КОЛЛП'ЛНУ типа Е + I - М,о к типу В - 39,1%. Сродл культур -Д

наибольшая чувствительность отмутлчеь к ко линял а м типов Y и В /соохвотстБолнс 8-5,9 и 70.пта:-т.<оп/, а таете к колилкну типа Г - 60,С^ ытакмов. Культур-;

о/, tciinti характеризовались наибольшей чувстг.итсль-ност>лэ к колицинам типа Е + I /91,7>/, типа '/ /85,62/ л типа F / tnra?,?,:oa..

Полученные данш;е позволяет рлесматрявать колицкногеп-пь'о свойства возбудителей 0101 одпя.! из экологических факторов, обсапачивапиих порсистоншвс патогенных энтерэбактарпй в связи с селективными проимуиэстваки в борьба за сстрпне-кяо Б;ща в услозиях биоценоза ютоишка.

. Изучепио антпбистгкоустоЯчявости с ролл сальмонелл и пиго.кл показало, что иослодовешшс изолятн ¡юошт отчетливо внрсаеннул резистентность п определенным антибиотикам. Культуры Cn/i^i'/i'tJi'S обладала наибольшей устойчивость» к нолимокскну М, тетрациклину. С ради ытаммоп SJuphfrn-ji^urrt отмачеллсь л но г. к л л рззистонтнооть к тотряциклгигр, ка пенициллину п полимокскну J.'. Культура ¿'/г. fhy/игГ огчязались

наиболее устойчивыми к карбенициллгог/, поли-чвксину М, кана-мицину и хлорам^ениколу, кзоляты Л soft tili - к хлорам-фенкколу, канашэдику, тетрз^кличу,. карбенишштну.

Выраженная лолиразкстентность возбудителей ОКИ к широко применяемым антибиотикам затрудняет осуществлениэ эффективной антибяотикотерапии в клинике детских инфекций.

ВЫРАЖЕННОСТЬ ПРИЗНАКОВ ВИРУЛЕНТНОСТИ В ПОПУШЦЩ Е.соИ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ХАРАКТЕРА КЛИНИЧЕСКОГО ТЕЧЕНИЯ ОСТРЫ): КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ

Сравнительная оценка адгезивной активности Е.соЬ" , выделенных от детей о ОКИ при различной клинической форма показала, что удельный вес штаммов E.colí , способных вызы- . вать РТА, возрастал гто мере нарастания клинической тяжести ОКИ (Рис. 2). При этом установлено, что у детей больных сальмонеллезом и шигеллезом тякалой формы чаща, чем у детей с легкой и средне-тяжелой формами, выделялись штаммы E.colí с мани0Ь°езистентной гемагглитинзцией /МВДА /. Так, среди E.colí , выделон1ШХ от детей о тяжелыми формами сальмонеллезов и шигеллезов удельный вес таких ппашов составил, соответственно, 52,6$ и 59,356, при средне-тяжелых формах ОКИ штаммы E.colí , вызывающие маннозорэзистентную гемагглютинацив, встречались соотвототвенно, у 21,5 и 28,92 штаммов, а от больных о легкими формами такие штаммы встречались соответственно, в 5,6 а 21,4Í случаев.

Полученные данные свидетельствуют об ,акт;ашзащт адаптационных процессов выживания популяции нормальной макрофлоры в ходе кишечной инфекции. Более высокая адгезивная активность кишечных палочек, выделенных от детей с тяжелыми формами ОКИ, может быть компенсаторной реакцией оо стороны E.colí на резкое изменение экологического равновесия в кишечной биоценозе.

При изучении гидрофобных свойств вшерихий, выделенных от больных ОКИ установлена связь этого признака о тяжеотм» клинического течения вяболеванип. Установлено, чво при

Легкая

К/ШШКАЯ ФОРМА Ш

Сребне-пгаелая Тяжелая

и

Сальмонеллезная иьфекиия

Шигеллезная инфекция

,, ОКИ неустанабленной этиологии

ЗДОРОВЫЕ ¿04

I

РИС.г АЗгезибные сбойстба Е. coli при ОКИ различной клинической формы. I- АЗгезибные штаммы Е coli СXI

тяжелой' я сродне-тяжчлой формах ОКИ возрастая удельный зос гадоофобнкх штаммов E.coli , достигая при тяжелой форма сальмонеллезов и лагеляезов, соответственно 90,9 и 94,4$ культур. Сравнительная характеристика степени выраженности гидрофобных свойств E.colí , изолированных от детей с ОКИ различной клинической тяжпсти, показал*», что при средне-тяжелой и тяжелой формах заболевания чаша выделяются штаммы с высокой гидрофобностьв. При сальмонеллезах удельный вео таких штампов составил соответственно 16,9 и 54,5%, а при шигеллезах - 21,6. и 63,9%. Наоборот, при легкой форме ОКИ преобладали штаммы E.coli с низкой гидрофобно/г активность®, либо с полным еэ отсутствие?*. Удельный вес агашов о высокой гидрофобностью составил при сальмонеллозах легкой тяжести -2,9%, а при шигеллезах - 15,0%,

Исследование метаболической активности Б.col»в зявяси~ мости от тяяестя ОКИ показало, что их метаболическая активность существенно возрастала по мере нарастания гялести клинического течения сальмонеллезов я пигояяезов. о чем свидетельствовала частота связывания колониями E.coli соответствующих красителей. Особенно резкое увеличение метаболической активности E.coli отмечено пра тягллкх формах сальмонелле зов и шинеллвзов.

Удельный вес культур E.coli , колонии которых связывали красители, составил соответственно, 86,4 я 86,l%t для красителя Романовского -Гимзо - 22,7 и II.1%, п дон к рентзля конго красного - 68,2 и 69,4^«,

Метаболическая активность птаглмов E.coli, выделанных от детой с ОКИ неустановленной этиологии характеризовалась показателями, соответствующими уровню, отмеченному при средне-тяжелых формах сальмонеллззов я шигеллезов.

Таким образом, представленные данные свидетельствуют о прямой завиеямостя Тякестя ОКИ от степени метаболической актквноотн E.coli, колояизаругадих кишечник больных детей.

Исо лсд овеяно антшгазоцимной активности у E.coli, выделенных от детей с ОКИ различной клинической тяздотн показало, что указанный признак широко распространен среди популяции E.coli, колонизирующих кишечник больных детей.

19

Tax, среди E.coli, изолированных от больных с сальмонелле з ом и шигеллазом, антилизоцимпал активность обнаружена соответственно у 95,9 и 87,Ъ% штампов, причем наяболео выраженной она была у E.coli , выделенных от детей средне-тяжелой и тяжелой формами заболевания.

Высокий уровень антилизоцимной активности /94,2$ штаммов/ был установлен среди E.coli, выделенных от детей с ОКИ неустановленной этиологии.

Характеристика антнлизоцямной активности E.coli, изолированных от детей с ОКИ различной тяжести показала, что дан»:!! признак встречался наиболее часто среди E.coli , полученных от больных с тяжелыми формами сальмонеллэзо и ши-геллеза. При. легкой форме 'указанных инфекций E.coli с ан-тилизоцимной активностью /6-10 мкг / встречалась соответственно в 16,1 и 26,7£ случаев, тогда как пря средне-тяно-лой форме удельный вес таких культур составил соответственно, 75,4 н 74,Ii?. При тяжелой форме ОКИ число штаммов E.coli с высокой активностью доотигало соответственно, 95,2 и 91, Среди эшерихий, выделенных от детей с ОКИ неустановленной этиологии /средне-тяжелая форма/ штаммы о высоким уровнем антклизоцимноЯ активности встречались в 67,35? случаев.

Таким образом, в процессе ОКИ наряду с возбудителем, обладающим высокой аятилизоцимной активностью, параллельпо увеличивается популяция S.ooli характеризующаяся таким ко уровнем ентилиэоцимной активности. Пря этом наблюдается прямая зависимость тяжести заболевания от частоты распространения уровня антклизоцимноЯ активности E.coli, колонизирующих кишечник больных ОКИ.

Изучение колиценогенной активности культур E.coli, выделенных от детей с острыми кишечными инфекциями в начало и я конце заболевания, показало, изменчивость данного свойства у отдельных штаммов в процессе развития заболевания . {Рве. 3). Так, среди E.coli, выделенных от детей о тигеллозами в начале заболевания, удельный вес штаммов, обладавших колициногенностью относительно индикаторной культуры поправлялся 27,8$, тогда как среди штаммов, йзо-

tE _ рУ.

90 8D

Я

60 50 . 40 3D 20 ■о 5

РИС.

Г!

!

i t "" ! f.

1 2 Колишногенноапь Е. colt быбеланных ош öemsü с острыми

кишечными инфекциями 6 начале и б конш заболевания. Р - грешит штаммоб Е. coll кояиииногенных относительно иноика-шорной культуры ROW Ъ начале С13 и 6 конш С2) заболевания. И- Е. coli при сальманеллеэах,* ИЗ - Е. сой при шигеллезах; ВЯ- Е. coli при ОКИ неуапанобленной этиологии: СП - Е. coli зЗоробых Затей

дарованных от этих ке больных в конце заболевания - 55,8$.

При изучении изменчивости колициногенных свойств у E.oolf и шигедд, выделанных от больных с шгеллезами в начале и конце заболевания, установлено - постепенное увеличение колициногенных ганмов Е.colt в ходе инфекционного процесса независимо от этиологии.

Частоте колициногенных культур среда ShJUxntr* , Sk SCnnti оставалась неизменной.

Интересно, что процент колициногенных штаммов E.coli , выделенных от детей.о сальмонеляезоь;, также как к удельный вес колициногенных штаммов <$. вц(-е/ч'Ши ( £, (yjbh'/пигч'ит ке изменялся в ходе заболевания.

Однако среди культур E.coli, полученных от датей о ОКИ неустановленной этиологии в начало заболевания частота ко-лициногбшшх штаммов была более высокой, чем в конце /44,2 и 30,2? соответственно/.

Выявленная нестабильность проявления колицчногенностн у E.coli , выделенных от детей с шигеллезами, свидетельствует об изменении в ходе заболевания антагонистической активности популяции E.oolf, колонизирующих кшючнкк яете£ пра ботрых кишечных инфекциях.

ВЫВОДЫ

1. Пря острых кишечных инфекциях у детей наблюдается селекция вирулентной субпопуляции F..colt , характеризующейся выраженными адгезивными, гидрофобными, антилй^оцимнымя и метаболическими свойствами.

2. Тяжесть клинического течения ОКИ находилась п прямой зависимости от частоты выделения из кишечника больных детей штаммов E.coli с выявленными вирулентными признаками.

3. Антагонистическая активность E.coli , выделенных

от больных ОКИ в ассоциации о основными возбудителями, характеризовалась высокой частотой среди них колициногенных оутоотаммов /86,0$ / к шигеллам и сравнительно низким уровнем таких аутоштеммов /12,6$/ к сальмонеллам. Кслициноген-ность относительно индикаторной культура среди E.col« , изолированных из кишечника детей с икгвллэзом, сальмонеллезго ■ и здоровых детей встречалась соответственно у 83,6, 57,0 и 73, <3? иташов.

4. Выявлена нестабильность проявления колициногенноЗ активности Е.соЬ' в ходе инфекционного процесса при ОКИ. Культуры E.coli , выделенные при шигеллезе, характеризовались выпаженным снижением колицияогенностя в начале заболевания .

5. Культуры S.coli , колонизирующие кетпечник бсльчых ОКИ, в отличие от E.coli, выделенных от здоровых детей, характеризовались более выраженной полирезистентностью к антибиотикам. При' еьтибиотикотерапии ОКИ происходит нарастание числя полирезистентных итг -мов E.coli .

6. Увеличение в ходе тфекпионного процесса субпопуляции E.coli с наведенной вирулэитностыз позволяет предположить ее участие в патогенезе ОКИ в качестве вторичного этиологического фвктора.

7. При микробиологической диагностике кишечных ив^экциЯ необходимо наряду о выделением и идентафикяцией основных возбудителей параллельно оценивать и вирулентность E.coli, гслоназируюакх кишечник больных о цельп определения ее потвн-циирухцей роли в патогенезе заболевания.

23

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью установления этиологической роли Е.соЬ'в патогенезе тигеллэзной и сальмонеллезной инфекций необходимо определение вирулентных свойств (гидрофобнасти, екти-лизоцимной и метаболической активности) 7 эшерихий, выделенных одновременно с основными возбудителями ОКИ.

2. Обнаружение в составе популяции E.coli , выделенных от больных ОКИ вирулентных штаммов позволяет более точно выбрать этиотропну» терапию заболевания.

3. Обнаружение в испражнениях детой с диарейными заболеваниями штаммов E.coli с выраженными факторами вирулентности ( повышенная адгезивность, метаболическая активность, способность разрушать дизоцим) можут служить косвенным доказательством шиголлоза или сальмонеллеза при тркцатель-ном бактериологическом результате исследования на патогенных: эятеробактерш! или в случае невозможности их выделения*

4. Для определения клинически и эпидемиологически значимых отадоов энтеробактериЭ, включая E.coli , необходима индивидуальная оценка факторов вирулентности каадого выделенного штамме данных микроорганизмов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Чеснокова М.Г., Обгольц A.A. Сопряженность биологических свойств у E.col» , колонизирующих кишечник новорожденных в период их пребывания в роддоме. - Москва, 1988. С. 239-240.

2. Чеснокова М.Г. Антилязоцимная активность E.coli при саль.чонеллезной и ¡гаголтезной инфекциях у, дэтей. - Омск,

' 1993. С. 71-74.

3. Чеснокова М.Г., Обгольц A.A. Антиичтерфероновая активность E.coli при острых кишечных инфекциях у детей. -Омок, 1993. С. 75-79.

4. Чеснокова М.Г., Обгольц A.A., Филатова Д.В. Опенка вирулентности E.coli , выделенных у детей о острыми кишечными инфекциями. - Омск, 1993. С. 80-84.

5. Чесноковз М.Г.,,Обгольц A.A. Факторы вирулентности E.coli при острых кишечных инфекциях у детей. - Омск, 1994.

С. I2I-I24.

6. Чесноковв М.Г. Сравнительная характеристика антилизоцим-ной активнооти E.ooli , выделенных от детей больных острыми кишечными инфекциями. - Омск, 1994. С. 125-128.

7. Чеснокова М.Г. Особенности биологических свойств E.ooli , колонизирующих кишечник детей при острых кишечных инфекциях. - Омск, 1994. С. I29-I3I.