Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Эпизоотология и совершенствование средств и методов лечения урогенитального микоплазмоза собак

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Эпизоотология и совершенствование средств и методов лечения урогенитального микоплазмоза собак"

На правах рукописи

ЛАЗАРЕВА МАРИНА ВИКТОРОВНА

ЭПИЗООТОЛОГИЯ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СРЕДСТВ И МЕТОДОВ ЛЕЧЕНИЯ УРОГЕНИТАЛЬНОГО МИКОПЛАЗМОЗА СОБАК

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 ч ОКТ 2015

Новосибирск - 2015

005563213

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Новосибирский государственный аграрный университет»

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Шкиль Николай Алексеевич

Официальные оппоненты: Красиков Александр Пантелеевич,

доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет им. П. А. Столыпина», профессор кафедры ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней;

Щербаков Павел Николаевич,

доктор ветеринарных наук, доцент, ФГБОУ ВПО «Уральская государственная академия ветеринарной медицины», заведующий кафедрой инфекционных болезней

Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный

аграрный университет»

Л / \ ' / 2.

Защита состоится « ¿дО 15 г. вчасов на заседании диссерта-

ционного совета Д 006.045.01, созданного на базе ФГБНУ «Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока» по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский р-н, п. Краснообск, а/я 8; тел./факс (383)348-44-62, E-mail: dis.ievsidv@list.ru

С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке и на сайте ИЭВСиДВ: www.ievsidv.ru: автореферат размещен на сайте ВАК РФ: www.vak2.ed.gov.ru

Автореферат разослан « ¿у^-г 2015 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, Стеблева

канд. ветеринар, наук, доц. Галина Михайловна

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Болезни репродуктивной системы мелких домашних животных составляют около 20% от общего числа заболеваний, причем за последние годы частота встречаемости заболеваний половых органов увеличивается (Н.С. Емельянова, 2005). Одними из часто встречающихся акушерско-гинекологических заболеваний у животных являются эндометриты.

Вопросы этиопатогенеза эндометритов остаются до настоящего времени дискуссионными. Существует, в частности, мнение (В.Э. Аллен, 2006), что микрофлора в патогенезе эндометрита существенной роли не играет. Другие же авторы, напротив, решающую роль отводят интрацервикальной экзогенной микробной контаминации полости матки (Н.И. Осипова, 2006; А.В. Шафикова, 2006; Н.С. Емельянова, 2007; Н.В. Гарнцева, 2009).

На фоне выявления при бактериологическом исследовании биоматериала из урогенитального тракта собак микроорганизмов родов Micrococcus, Staphylococcus, Streptococcus, Proteus, Pseudomonas, Esherichia значительно участились случаи заболеваний микоплазменной этиологии, имеющих как клинически выраженное, так и бессимптомное течение, с нередкими рецидивами, способствующими появлению различных осложнений (А.П. Красиков, 2005; С.А. Пензурова, 2012).

Высокую распространенность микоплазм в популяции животных отмечают многие исследователи (Я.Р. Коваленко, 1980; Г.Ф. Коромыслов, 1987; Н.Н. Новикова, 2002; Е.В. Медова, 2004; А.П. Красиков, 2005; Н.И. Осипова, 2006; В.В. Сочнев, 2006; О.М. Параева, 2007; Н.В. Литвинов, 2008 и др.).

Однако, несмотря на актуальность проблемы, диагностика урогенитального микоплазмоза собак в ряде регионов, в том числе в г. Новосибирске, остается недостаточной. Практический ветеринарный опыт довольно часто показывает низкую эффективность лечения собак при урогенитальных инфекциях, что можно объяснить недостаточной изученностью микробиоценозов их урогенитального тракта.

Известно, что микоплазмозная инфекция характерна для животных с ослабленным иммунитетом и иммуносупрессией. При правильном подборе антибиотиков болезнь можно подавить, но антибиотикотерапия, приводящая к исчезновению ее клинических признаков, не всегда способствует элиминации возбудителя из организма, а лишь обеспечивает переход острой формы заболевания в латентную (Г.М. Бондаренко, 2013).

В связи с отсутствием у микоплазм клеточной стенки, ряд антибактериальных препаратов неактивен в отношении их. Микоплазмы абсолютно нечувствительны к цефалоспоринам и пенициллинам. В отношении микоплазм неактивны рифампин, полимиксин, гликопептиды и сульфаниламиды (С.Г. Брагина, 2001; Е.Н. Падейская, 2004).

Однако, некоторые имеющиеся в литературе данные об устойчивости микоплазм к антибиотикам носят противоречивый характер. С одной стороны, тетрациклины, фторхинолоны и макролиды в опытах in vitro оказывают выра-

женное ингибирующее действие на клетки микоплазм, с другой — применение этих же антибиотиков для лечения животных при микоплазмозах часто оказывается малоэффективным: микоплазмы по сравнению с другими микроорганизмами особенно быстро приобретают устойчивость и угнетают иммунную систему (О.Г. Карпухина, 2004).

В этой связи вызывают интерес исследования по изучению возможности излечения животных от микоплазмозов гомеопатическими препаратами. В отличие от антибиотикотерапии, при гомеотерапии исчезновение симптомов может рассматриваться как обнадеживающий признак, ибо излечение при этом способе достигается исключительно посредством настройки иммунной системы против возбудителя, то есть, предполагает эффективный иммунный ответ (В.Н. Бочкарев, 2006). Однако, следует заметить, что фиброзные новообразования в пораженных микоплазмами тканях препятствуют проникновению в них не только антибиотиков, но и всяких других достаточно массивных молекул, в том числе, и молекул специфических иммуноглобулинов, реализующих гуморальный противомикоплазменный иммунитет, который, собственно, и запускается посредством гомеотерапии (В.А. Крамарский, 2004; М.Б. Славецкая, 2006; Н.А. Кочуева, 2007; Л.А. Луткова, 2009).

Степень разработанности темы. В настоящее время проблеме урогени-тального микоплазмоза животных уделено большое внимание. Современная научная информация, представленная монографическими изданиями: «Семейство микоплазм и Л-формы бактерий» (В.Д. Тимаков, Г.Я. Каган, 1967), «Ми-коплазмозы животных» (Я.Р. Коваленко, 1976; Г.А. Трошева, 1982; С.Н. Борх-сениус, 2002) свидетельствует о широком распространении микоплазм в природе, подчеркивает их значение в патологии людей и животных. Вместе с тем обзор научной литературы показывает, что многие вопросы этиологии, патогенеза и диагностики различных патологических процессов, связанных с микоплазмами, остаются не решенными, что оставляет микоплазмозы в числе актуальных проблем современной патологии животных, требующих дальнейшего изучения.

Несмотря на большое разнообразие ветеринарных препаратов для лечения и профилактики болезней животных, не всегда удается подобрать эффективный препарат для лечения животных с заболеваниями органов мочеполовой системы. Поэтому разработка и внедрение в практику лечения животных гомеопатических препаратов, является актуальной задачей (В.А. Дроздник, 2009).

Цель и задачи исследования. Целью исследования является изучение клинико-эпизоотологических и микробиологических особенностей проявления урогенитальной инфекции с участием микоплазм у собак в условиях г. Новосибирска и разработка эффективных средств и методов лечения.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Выявить клинико-эпизоотологические особенности проявления болезней с поражением репродуктивной системы у собак в условиях г. Новосибирска.

2. Изучить микробиоценоз урогенитального тракта собак при эндометритах, определить чувствительность выявленных микроорганизмов к различным антибактериальным препаратам.

3. Определить уровень носительства у собак микоплазм, уреаплазм.

4. Оценить влияние различных гомеопатических средств на показатели опсонофагоцитарной реакции (ОФР) нейтрофилов in vitro и на основе полученных результатов обосновать состав их рациональной композиции в качестве гомеопатического препарата, обеспечивающего активизацию иммунитета.

5. Изучить эффективность схем лечения собак при урогенитальном мико-плазмозе собак с использованием гомеопатического препарата.

Научная новизна. Впервые изучено распространение хронического эндометрита среди собак, содержащихся в питомниках и принадлежащих частным владельцам г. Новосибирска, определена этиологическая роль микоплазм и уреоплазм.

Установлено in vitro влияние на показатели опсонофагоцитарной реакции нейтрофилов животных различных гомеопатических средств; на этой основе обоснована их рациональная композиция в качестве препарата Оваринин, обеспечивающего активацию иммунитета. Изучены токсикологические характеристики гомеопатического препарата Оваринин.

Доказана эффективность сочетанного применения антибактериального и гомеопатического препаратов для лечения собак при урогенитальном мико-плазмозе.

Получен патент РФ «Способ лечения урогенитального микоплазмоза собак» № 2557955 (заявка № 2014131218 от 28.07.2014 г.).

Теоретическая и практическая значимость. Выявлен высокий уровень носительства среди собак микоплазм и уреаплазм, взаимосвязанного с клиническими признаками эндометритов.

Доказаны роль гомеопатического препарата Оваринин в активации иммунитета, отсутствие его токсичности, эффективность его использования в схеме лечения собак при урогенитальном микоплазмозе.

Результаты исследований внедрены в питомнике «Зональный центр кинологической службы ГУ МВД России по Новосибирской области» и в ветеринарной клинике «Болезни мелких домашних животных» Новосибирского государственного аграрного университета.

Результаты исследований используются в учебном процессе на факультете ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет», на кафедре анатомии, физиологии и микробиологии ФГБОУ ВПО «Иркутская государственная сельскохозяйственная академия», на кафедре микробиологии, эпизоотологии, паразитологии и ветсанэкспертизы ФГБОУ ВПО «Алтайский государственный аграрный университет», на кафедре ветеринарной микробиологии, инфекционных и инвазионных болезней ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина.

Методология и методы исследования. Проведен анализ специальной литературы по проблеме урогенитального микоплазмоза собак, представленной

в отечественных и зарубежных источниках. В работе использованы клинические, микробиологические, токсикологические, гематологические методы исследований. По результатам исследований предложена рациональная схема лечения собак при урогенитальном микоплазмозе. Материалы исследований обработаны методом вариационной статистики с определением критерия достоверности по Стьюденту (Г.Ф. Лакин, 1990). Статистическую обработку данных производили в программе Microsoft Office Excel 2010.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Результаты изучения клинико-эпизоотологических и микробиологических особенностей проявления урогенитальной инфекции с участием мико-плазм у собак.

2. Влияние различных гомеопатических средств на показатели опсоно-фагоцитарной реакции (ОФР) нейтрофилов in vitro, обоснование состава их рациональной композиции в качестве безвредного гомеопатического препарата Оваринина, обеспечивающего активацию иммунитета.

3. Терапевтическая эффективность сочетанного применения антибактериального и гомеопатического препаратов при урогенитальном микоплазмозе у собак.

Степень достоверности и апробация работы. Достоверность результатов подтверждается объемом микробиологических исследований, проведенных с 2011 по 2014 г., а также статистической обработкой данных. Исследования подтверждены актами о проделанных работах.

Основные материалы работы доложены и обсуждены на XII Сибирской ветеринарной конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (г.Новосибирск, 2013), Всероссийской научно-практической конференции «Молодежь в Аграрной науке и образовании - инновационный потенциал будущего» (г. Новосибирск, 2013), заседаниях научно-методического совета факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет» в 2011-2014 гг.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, в том числе 3 - в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ (Вестник НГАУ, Вестник Ульяновской ГСХА им. П.А. Столыпина).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 121 странице компьютерного текста и включает в себя введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Работа содержит 21 таблицу и иллюстрирована 10 рисунками. Список литературы включает 206 источников, в том числе 165 отечественных и 41 иностранных авторов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы

Работа выполнена в 2011-2014 гг. на кафедре эпизоотологии и микробиологии факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Новосибирский госу-

дарственный аграрный университет». Отдельные исследования проведены в ГНУ «Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока» Россельхозакадемии, в лаборатории молекулярной диагностики НГАУ, в Новосибирской межобластной ветеринарной лаборатории, в клинике «Болезни мелких домашних животных» НГАУ, в питомниках г. Новосибирска: ФГБУ «Государственное опытное охотничье хозяйство» по разведению собак «Кубовое», ООО «Кинологический центр СПАС-001», «ЗЦКС ГУ МВД России по Новосибирской области».

Объектом исследования служили собаки различных пород и возрастов в количестве 309 голов, из них 80 голов, содержащиеся в питомниках г. Новосибирска и 229 голов, принадлежащие частным владельцам. Среди исследуемых собак были 32 кобеля и 277 сук. С симптомами болезней репродуктивной системы наблюдалось 185 собак (суки), без клинических симптомов — 124 собаки. Материалом исследования служили препуциальная и вагинальная слизи, полученные путем соскоба, а также пробы крови от исследуемых животных.

Клинический осмотр 309 собак проводили по общепринятой методике. При сборе анамнеза уделяли внимание рациону питания собак, моциону, времени возникновения заболевания и возможной его связи с периодом полового цикла, стрессовым ситуациям, изменениям стереотипа жизни, предшествующим назначениям гормональных препаратов (особенно эстрогенов и гестаге-нов). Температуру тела измеряли термометром ректально. При пальпации выявляли болезненные участки матки. При оценке клинического проявления болезни учитывали характер выделений из влагалища (внешний вид, запах, наличие примесей крови, гноя), особенности полового акта при его наличии (продолжительность, полноценность, болезненность).

Забор проб слизи осуществляли у 165 собак с помощью ложки Фолькма-на. Материал помещали в стерильные пробирки, в 1,0 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Забор крови проводили, используя вакуумные пробирки Improvacuter для in vitro диагностики.

Для выявления микоплазм и уреаплазм в материале из урогенитального тракта использовали прямой микробиологический посев на специальные селективные жидкие питательные среды: «Среда для индикации уреаплазм»; «Среда для индикации аргининферментирующих микоплазм»и «Среда для индикации глюкозоферментирующих микоплазм» (производство НИИ природно-очаговых инфекций г. Омск).

Для микроскопического исследования проб готовили нативные препараты, которые в дальнейшем окрашивали по Граму. Морфологию микроорганизмов изучали с помощью светового микроскопа при 1000 кратном увеличении.

Биохимический анализ крови проводили в лаборатории ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии, используя биохимический анализатор «StatFax 1904+» ISO 9001 (Awarenes, США) с использованием биохимических наборов «Spinre-act» ISO 9001 (Испания). При биохимическом исследовании крови определяли показатели белка, креатинина, ACT, АЛТ, билирубина, мочевины.

Морфологический анализ крови проводили в лаборатории ГНУ ИЭВ-СиДВ Россельхозакадемии, используя гематологический анализатор «Mindray ВС-2800 Vet».

ПЦР-диагностику 100 проб вагинальной слизи проводили в лаборатории молекулярной диагностики. Были использованы тест-системы для выявления возбудителей микоплазмоза методом полимеразной цепной реакции ПЦР-комплект МИК-КОМ (Москва), комплект реагентов для выделения ДНК из клинического материала «АмплиПрайм ДНК-сорб-В». В работе применялся классический метод ПЦР с детекцией в агарозном геле.

Учет результатов проводили электрофоретическим методом по наличию или отсутствию на электрофореграмме специфической полосы амплифициро-ванной ДНК, начиная с результатов амплификации положительных и отрицательных контролей. В качестве отрицательного контроля (К-) вместо ДНК-пробы вносили в пробирку 10 мкл ДНК-буфера, в качестве положительного контроля (К+) вносили в пробирку 10 мкл ДНК микоплазмы.

Исследование чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам проводили методом диффузии в агар с использованием стандартных дисков в соответствии с методическими указаниями «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам» (2004).

Оценку влияния гомеопатических средств на опсонофагоцитарную реакцию (ОФР) нейтрофилов in vitro проводили согласно методике «Оценка естественной резистентности сельскохозяйственных животных» (2003), включающей изучение фагоцитирущей активности нейтрофилов (ФА), фагоцитарного числа (ФЧ), фагоцитарного индекса (ФИ). Для исследований были использованы готовые формы лекарственных веществ (ГОСТ 7060-79) производство ООО «ГМСЦ» г. Новосибирск.

В экспериментах использовали фармокопейные разведения веществ, применяемых в сверхнизких концентрациях: D3 - 10° г/мл; С6 - 10"'2 г/мл; С12 - 10"24 г/мл.

Для изучения влияния гомеопатических лекарственных средств на показатели ОФР нейтрофилов in vitro использовали лейкоцитарную взвесь в объеме 1мл, к которой добавляли 0,25 мл препаратов Sepia С6, Thuja D3, Thuja С12, Secale cornutum С6, Platina С6, Lilium tigrinum С12, Creosotum C30, а также композицию из различных гомеопатических средств (Оваринин). Разработанный в ГНУ ИЭВСиДВ образец гомеопатического препарата Оваринин для лечения акушерско-гинекологических заболеваний животных содержит стерильные водные растворы Apis mellifelica С12, Pulsatilla pratensis С30, Sulfur С200, Sepia C6, Creazotum C30, Lachesis C12, взятые в равных соотношениях.

Пробирки помещали в термостат на 3 часа при Т = 37°С. Затем вносили взвесь микробных тел референтного штамма Staphylococcus albus № 182 по 0,25 мл, содержащую 1 млрд. КОЕ/ 1 мл. Пробирки помещали в термостат на 1 час при Т = 37°С. После инкубации мазки крови фиксировали в течение 3 мин. и окрашивали в течение 10 мин. фиксатором-красителем эозин-метиленовый синий по Май-Грюнвальду. В контрольных группах были исполь-

зованы индифферентные вещества - лактоза и 0,85%-ый водный раствор NaCl. Первая контрольная группа включала в себя 1 крупинку, вторая контрольная группа - 0,85%-ый водный раствор NaCl, третья контрольная группа - плацебо-контроль.

Изучение острой токсичности препарата Оваринин проводили на 100 белых мышах и 24 крысах, пирогенные свойства и местное действие препарата на слизистые оболочки (конъюнктиву) определяли на 6 кроликах, а реактогенные свойства препарата - на 10 морских свинках согласно рекомендации ГФ XI вып.2 (1986); «Методическим рекомендациям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» ВГНКИ (1988).

Эффективность различных схем лечения изучали на собаках с клиническими признаками эндометритов и положительными результатами лабораторных исследований на микоплазмоз, уреаплазмоз. Животные были разделены на 3 группы по 10 собак в возрасте от 2 до 6 лет в каждой. Одна группа контрольная, в которой проводили лечение по общепринятой схеме, две группы опытные.

Рацион кормления собак опытных и контрольной групп состоял из готовых кормов производства «Royal Canin». Кормление проводилось 2 раза в день. Суточные дозы кормления составляли для собак массой от 10 кг до 25 кг 400500 г корма, для собак массой более 25 кг - 500-600 г корма, для собак массой более 45 кг - до 1000 г корма. Содержание клеточное, в зимнее время использовалась подстилка.

Лечение животных контрольной группы проводили антибактериальным препаратом Энроксил, который вводили подкожно в дозе 0,1 мл на 1 кг массы ежедневно в течение 7 дней.

Лечение собак 1-й опытной группы проводили, используя антибактериальный препарат Энроксил и гомеопатический препарат Оваринин. Энроксил вводили подкожно в дозе 0,1 мл на 1 кг массы ежедневно в течение 7 дней, а Оваринин - внутримышечно в дозе 0,01 мл на 1 кг массы 1 раз в 4 дня.

Лечение 2-й опытной группы животных проводили, используя Энроксил и гомеопатический препарат Оваринин, но Оваринин вводили в дозе 0,1 мл на 1 кг массы 1 раз в 4 дня.

Об эффективности лечения судили по исчезновению клинических симптомов болезни, по результатам гематологического исследования крови и по результатам бактериологических и молекулярно-биологических исследований степени элиминации микоплазм и уреаплазм в исследуемых пробах.

Материалы исследования обработаны методом вариационной статистики с определением критерия достоверности по Стьюденту (Г.Ф. Лакин, 1990). Статистическую обработку данных проводили в программе Microsoft Office Excel 2010.

2.2 Результаты собственных исследований

2.2.1 Распространение урогенитальной инфекции у собак в условиях города Новосибирска

2.2.1.1 Клинико-эпизоотологические особенности проявления урогенитальной инфекции у собак

При клиническом исследовании 309 собак, среди которых 80 собак содержались в питомниках и 229 собак принадлежали частным владельцам, нами выявлено 185 собак (59,9%) с клиническими признаками эндометрита и бесплодия. Из них 164 собаки (71,6%) принадлежали частным владельцам, 21 собака, что составило 26,3%, содержались в питомниках.

Отмечена породная частота встречаемости заболеваний с клиническими признаками эндометритов. Наиболее часто отмечались эндометриты у русских спаниелей - 27 (14,6%), пекинесов - 16 (8,6%), йоркширских терьеров - 16 (8,6%), немецких овчарок - 15 (8,1%), беспородных - 15 (8,1%). Реже Лабрадор ретривер - 10 (5,4%), кавказская овчарка - 9 (4,9%), лайка - 7 (3,9%), стаф-фордширский терьер - 6 (3,2%). Частота встречаемости у других пород составила от 0,5% до 2,6 %.

Возраст собак, у которых были выявлены признаки эндометритов, составил от 9 мес. до 10 лет. При этом количество собак в возрасте до 1 года составило 15,2%, от 2 до 6 лет - 68,9%, от 7 до 8 лет - 15,9%. Данные результаты свидетельствуют о более частой встречаемости болезни в репродуктивном возрасте собак, используемых в разведении.

Эпизоотическое проявление заболеваний с клиническими признаками урогенитальной инфекции у 185 собак отмечалось круглогодично с подъемами в марте и сентябре (рисунок 1).

25

Л

20 ..................................у..........\

15 ^ _ ____ Среднемесячный 15 .............--УРОВвНЬ

в<_1--\

\5 — -Сезонное

5 .................................................................................................................................................................................................................................проявление

О

заболеваемости

заболеваний собак

Л/ ^ ^ ^ //VVV"

Рисунок 1

— Сезонность проявления заболеваний у собак с поражением уроге-нитального тракта 10

При среднемесячном уровне заболеваемости в 15,4±1,2 голов собак в марте отмечается 155,8% и в сентябре - 116,9% к среднемесячному уровню проявления болезни. Мы считаем, что это связано с персистенцией возбудителей болезни в организме собак и проявлением болезни в результате воздействия таких факторов, как течение половых циклов собак и неблагоприятное воздействие погодных условий.

2.2.1.2 Микробиоценоз урогеннтального тракта собак при эндометритах

Нами был изучен микробиоценоз урогеннтального тракта собак с клиническими признаками эндометрита и бесплодия. У 185 собак были отобраны 144 пробы урогенитальной слизи, из которых было выделено 179 изолятов микроорганизмов, причем только в 14 пробах, что составляет 9,7%, рост условно-патогенной микрофлоры отсутствовал. Лабораторные исследования показали, что наиболее часто выделяли представителей рода Staphylococcus (59,22%), в том числе St. epidermidis (24,6%), St. aureus (18,4%), St. saprophytics (7,8%), St. intermedius (4,5%). Выявлены были микроорганизмы рода энтеробактерий: Е. coîi (10,1%), P. mirabilis (8,4%), P. vulgaris (4,5%), , Ps. aeruginosa (2,2%). Следует отметить, что энтерококки были представлены тремя видами: Entero-coccus faecalis (5,6%), Enterococcus faecium (2,8%), Enterococcus cloacae (1,1%).

Монокультуры условно-патогенной микрофлоры изолировали в 57,6% случаев, ассоциации двух микроорганизмов - в 22,2%, ассоциации трех микроорганизмов — в 9,03% случаев. Ассоциации четырех и более условно-патогенных микроорганизмов выявляли только в 0,7% случаев.

Монокультуры были представлены в основном микроорганизмами рода Staphylococcus. Ассоциации, состоящие из стафилококков и энтеробактерий, обнаруживали в 36,8% случаев, стафилококков и энтерококков - в 33,3%, энтеробактерий и энтерококков - в 19,4%. Ассоциации трех микроорганизмов состояли из стафилококков, энтерококков и энтеробактерий.

Высокая чувствительность микроорганизмов выявлена к энрофлоксацину (от 11,11% до 75,0%), ципрофлоксацину (от 33,33% до 72,3%) и гентамицину (от 51,85 до 75,0%).

Анализируя проявление чувствительности отдельных видов микроорганизмов, можно отметить, что микроорганизмы рода Staphylococcus spp. обладали высокой чувствительностью к энрофлоксацину (> 21 мм), ципрофлоксацину (> 21 мм), рифампицину (> 20 мм), оксациллину (> 18 мм) и гентамицину (> 15 мм). Менее чувствительны Staphylococcus spp. к (3-лактамным антибиотикам, тетрациклинам, макролидам. St. saprophyticus резистентен к цефуроксиму и доксициклину.

Микроорганизмы родов Esherichia, Proteus проявили высокую чувствительность к энрофлоксацину (> 18 мм), ципрофлоксацину (> 21 мм), цефуроксиму (> 18 мм), гентамицину (> 15 мм), за исключением P. vulgaris, который к ципрофлоксацину и цефуроксиму проявил промежуточную чувствительность. Proteus spp. проявили резистентность к оксациллину, доксициклину и рифампицину. Микроорганизмы рода Enterococcus spp. проявили чувствительность ко

всем группам антибактериальных препаратов, за исключением цефуроксима, к которому они проявили резистентность.

Таким образом, фторхинолоны проявляют наивысшую активность в отношении микроорганизмов родов Staphylococcus spp., Enterococcus spp, E. coll

В связи с тем, что ветеринарные лаборатории г. Новосибирска не проводят исследования на микоплазмоз и уреаплазмоз, выявить наличие микоплазм и уреаплазм в данных пробах не представилось возможным.

2.2.1.3 Микробиологическое исследование биоматериала собак на микоплазмоз

При микробиологическом исследовании урогенитальной слизи 145 собак, 80 из которых содержались в питомниках, 65 — принадлежали частным владельцам, микоплазмы изолированы в 81 пробе, что составило 55,9% (таблица 1). Среди проб от собак, содержащихся в питомниках, были положительны 56,3% проб, а от собак, принадлежащих частным владельцам, положительно на микоплазмоз реагировали 55,4% проб.

Таблица 1 — Результаты микробиологических исследований на микоплазмоз и __уреаплазмоз собак__

№ п/ п Тип содержания Количество, гол. Количество инфицированных Микоплазмы Уреа-плазмы

гол. % аргинин-ферментирующий глюкозо-ферментирующий

гол. % гол. % гол. %

1 питомники 80 45 56,3 10 22,2 27 60,0 27 60,0

2 питомник №1 28 21 75,0 10 47,6 19 90,5 9 42,9

3 питомник №2 14 4 28,6 - - - - 4 100

4 питомник №3 38 20 52,6 - - 8 40,0 14 70,0

5 частное влад. 65 36 55,4 11 30,6 15 41,7 11 30,6

ВСЕГО 145 81 55,9 21 25,9 42 51,9 38 46,9

Необходимо отметить, что в питомнике № 1, где собаки содержались в вольерах группами по 3-5 голов, был более высокий уровень выявления микоплазм (75,0%). В питомнике № 2 собаки содержались в индивидуальных отсеках, что по-видимому, снизило процент обнаружения микоплазм до 28,6%. В питомнике № 3 собаки содержались в индивидуальных отсеках, но в процессе служебной деятельности имели контакты друг с другом, в связи с этим выявлена высокая степень передачи возбудителя и микоплазмо-носительство у 52,6% животных. Высокий уровень обнаружения микоплазм (55,4%) среди собак, принадлежащих частным владельцам, свидетельствует о бесконтрольных вязках и нарушениях правил санитарного содержания их.

В 9 пробах (11,1%) были выявлены как аргининферментирующие, так и глюкозоферментирующие микоплазмы, в 33 пробах - только глюкозофермен-

тирующие (40,7% от общего числа инфицированных), в 12 пробах (14,8%) -только аргининферментирующие.

Уреаплазмы обнаружены в 38 пробах (46,9%), причем в 10 пробах (12,3%) были выявлены как микоплазмы, так и уреаплазмы. В 28 пробах -только уреаплазма, что составило 34,6% от общего числа инфицированных. Таким образом, у собак установлено одновременное носительство разных типов микоплазм.

Среди собак различных пород наибольший процент инфицированных животных (77,8%) приходился на породы терьеров (керри-блю терьер, бультерьер, русский черный терьер), на породы лаек (75%) и овчарок (немецкая, восточно-европейская, южно-русская, среднеазиатская) -61,8%.

Возраст собак, в урогенитальных пробах от которых были обнаружены микоплазмы, в 31 случае (68,9%) составлял 2 года и старше, в 8 случаях (17,8%) - от 6 месяцев до 2 лет и в 6 случаях (13,3%)- щенки до 3-х месячного возраста.

При бактериологическом исследовании урогенитальной слизи от 28 собак носителей микоплазм, 14 из которых содержались в питомниках, 14 - принадлежали частным владельцам, была изучена микрофлора урогениталыюго тракта. Из 28 проб урогенитальной слизи наряду с микоплазмами были выявлены микроорганизмы родов Staphylococcus spp., Enterococcus spp., Proteus spp., E. coli (таблица 2).

Таблица 2 - Частота ассоциаций микоплазм с другими микроорганизмами

Группа микроорганизмов Staphylococcus spp. Enterococ cus spp. Proteus spp. E. coli Mycopla sma spp. Ureapla sma spp.

Mycoplasma spp. 24 (85,7) 9(32.1) 7 (25,0) 8(28,6) 10(35,7)

Ureaplasma spp. 10 (35,7) 2(7,1) 3 (10,7) 4(14,3) 10(35,7) -

Примечание: в скобках даны значения в процентах

Наиболее часто (85,7%) выделяли микроорганизмы рода Staphylococcus, микроорганизмы родов Enterococcus выявили в 32,1% случаев, Е. coli - в 28,6%, Proteus - в 25% случаев. Микроорганизмы рода Ureaplasma чаще выявлялись в ассоциациях с микроорганизмами родов Mycoplasma spp. и Staphylococcus spp (35,7%).

Ассоциации микроорганизмов Mycoplasma spp. + Staphylococcus spp. + E. coli были выявлены в 8 случаях (28,6%), Mycoplasma spp. + Staphylococcus spp. + Enterococcus spp. - в 6 случаях (21,4%), Mycoplasma spp. + Staphylococcus spp. + Proteus spp. - в 5 случаях (17,9%). В 4 случаях (14,3%) были выявлены ассоциации двух микроорганизмов: Mycoplasma spp. + Staphylococcus spp. Ассоциации четырех микроорганизмов: Mycoplasma spp. + Staphylococcus spp. + Enterococcus spp. + Proteus spp. - в одном случае (3,6%).

Таким образом, в результате проведенных исследований выявили, что при наличии в организме животного микоплазменной инфекции начинает активизироваться и другая условно патогенная микрофлора.

2.2.1.4 Индикация микоплазм из биоматернала от собак методом ПЦР

Исследование 70 проб урогениталыюй слизи собак различных пород методом полимеразной цепной реакции (таблица 3) выявило наличие генома микоплазм в 47 случаях, что составило 67,1%.

Таблица 3 - Результаты ПЦР исследований на микоплазмоз собак

№ п/п Тип содержания Кол-во проб Кол-во положительных

проб %

1 Питомник № 1 37 19 51,4

2 Питомник № 2 13 9 69,2

3 Частное владение 20 19 95

Всего 70 47 67,1

Возраст собак, в пробах от которых были выделены нуклеиновые кислоты микоплазм, в 41 случае составил 2 года и старше (87,2 %), в 6 случаях -1 год (12,8%).

При сравнении методов индикации микоплазм отмечено, что при бактериальном методе исследования на жидких селективных средах частота выявления микоплазм составила 55,9%, а при исследовании методом ПЦР 67,1%, что на 11,2% больше. Наиболее чувствительным оказался метод ПЦР.

2.2.2 Терапия при урогеннтальном микоплазмозе собак с применением антибактериального и гомеопатического препаратов

2.2.2.1 Оценка влияния гомеопатических средств на опсонофагоцнтарную реакцию (ОФР) нейтрофилов

Гомеопатические лекарственные средства оказывают разнонаправленное влияние на показатели клеточного иммунитета (таблица 4).

Таблица 4 - Показатели ОФР нейтрофилов после контакта с гомеопатическими лекарственными веществами относительно группы 1 с лактозой, %_

№ п/п Название препарата и степень разведения Показатель ОФР

ФА ФЧ ФИ

1 Sepia С6 2,19 492,62 506,31

2 Thuja С12 1,32 472,13 480,18

3 Thuja D3 - 1,32 538,52 533,78

4 Secale cornutum С6 0,44 579,09 582,88

5 Platinum С6 -3,07 192,62 264,41

6 Lilium tigrinum С12 7,89 300,0 332,43

7 Creosotum C30 9,65 475,41 532,43

8 Оваринин 9,65 997,95 1106,76

В контрольных группах были использованы индифферентные вещества -лактоза и 0,85%-ный водный раствор NaCl. Проведенные исследования показали выраженный ингибирующий эффект NaCl на показатели клеточного иммунитета (ФА, ФЧ, ФИ) относительно контрольной группы плацебо-контроль на 7,20%, 27,35%, 32,23% соответственно.

Результаты исследования показали, что гомеопатические препараты оказывают выраженное стимулирующее влияние на показатели ФЧ и ФИ, которые отражают фагоцитарную активность нейтрофилов.

Выявленные закономерности отмечают, что наименьшие показатели клеточного иммунитета (ФА, ФЧ, ФИ) установлены у Platinum С6, ФЧ и ФИ -у Lilium tigrinum С12.

Наиболее высокие показатели ОФР отмечены у комплексного препарата Оваринин, который включает Apis mellifelica С12; Pulsatilla pratensis С30; Sulfur С200; Sepia C6; Creazotum C30; Lachesis С12. Оваринин характеризуется ростом показателей ФА - на 9,65%, ФЧ - на 997,95%, ФИ - на 1106,76% относительно группы контроля 1 с лактозой.

2.2.2.2 Оценка токсических характеристик препарата Оваринин

Исследование острой токсичности препарата Оваринин проводили на 100 беспородных белых мышах весом 19-21 г и 24 белых беспородных крысах весом 180-200 г. Мышам препараты вводили внутрибрюшинно в дозе 50 мл/кг, в желудок - в дозе 25 мл/кг. Крысам внутрибрюшинно препараты вводили в дозе 25 мл/кг, в желудок препараты вводили в дозе 15 мл/кг. При изучении острой токсичности препарата Оваринин изменений в клинической картине и гибели лабораторных животных не наблюдали.

Изучение пирогенных свойств проводили на 6 здоровых кроликах породы шиншилла, массой 3-3,5 кг. Препарат вводили в ушную вену в дозе 10 мл/кг, в течение 2 минут, подогретый до 37°С. Сумма повышений температуры в опытной группе у 3 кроликов составила 0,8°С, что ниже допустимой нормы. Данные исследования показывают, что препарат Оваринин является непирогенным.

Исследование местно-раздражающего действия препарата Оваринин проводили на 10 клинически здоровых морских свинках массой 250-300 г методом эпикутанных аппликаций на боковой поверхности туловища. Каких-либо изменений в состоянии кожного покрова животных, в том числе покраснений, отека, через 12, 24, 48 часов не отмечали. Не наблюдали также проявления беспокойства в поведении подопытных животных, что свидетельствует о том, что препарат при многократном нанесении на кожу не вызывает раздражения.

Изучение местного действия препарата Оваринин на слизистые оболочки (конъюнктиву) проводили на 6 здоровых кроликах. В конъюнктивальный мешок кроликов вводили глазной пипеткой по 1-2 капли препарата Оваринин однократно. Реакцию учитывали через 15 минут и спустя 24, 48, 72 часа по внешнему виду конъюнктивы и по реакции склеры. В течение всего срока наблюде-

ния патологических изменений не наблюдалось. Препарат Оваринин не обладает раздражающим эффектом при воздействии на слизистые оболочки.

2.2.2.3 Клинико-терапевтическая эффективность различных схем лечения собак при урогенитальном микоплазмозе

При разработке оптимальной схемы лечения собак с урогенитальным синдромом (эндометрит), вызванным микоплазмами, использованы собаки породы овчарка в возрасте от 2 до 6 лет, разделенные по принципу аналогов на три группы (2 опытные и контрольную) по 10 голов в каждой. Критериями включения в группы исследования было: общее состояние и тяжесть проявления заболевания, положительные лабораторные исследования на микоплазмоз. Животные находились в одинаковых условиях содержания и кормления.

Во время лечения за животными ежедневно проводили клиническое наблюдение, учитывая течение заболевания и сроки выздоровления. В результате проведения различных схем лечения был оценен клинико-терапевтический эффект. Оценку эффективности проводили по исчезновению клинических симптомов болезни (таблица 5).

Таблица 5 - Клинико-терапевтический эффект при различных схемах лечения

№ Схема лечения

п/п Показатель энроксил энроксил + оваринин 0,01 мл/кг энроксил + оваринин 0,1 мл/кг

1 Кол-во собак, гол. 10 10 10

2 Выздоровело, гол. (%) 9 (90,0) 9 (90,0) 10(100,0)

3 Осталось больными, гол. (%) 1 (10,0) 1 (10,0) -

4 Сроки выздоровления, сутки 8,3 ± 0,3 7,1 ±0,3* 6,1 ±0,3***

5 Терапевтическая эффективность, % 90,0 90,0 100,0

Примечание: *Р < 0,05, **Р < 0,01, ***Р < 0,001

Во 2-й опытной группе при сочетанном применении Энроксила и Овари-нина в дозе 0,1 мл/кг улучшение общего состояния наблюдалось уже через 34 дня от начала лечения. На 5-й день лечения отмечалось заметное улучшение аппетита, снижение температуры тела до нормальной, исчезновение гнойного экссудата. Клиническое выздоровление наблюдалось у 100% собак, сроки выздоровления составили 6,1 ±0,3 суток.

Таким образом, использование в схеме лечения антибактериального препарата Энроксил и гомеопатического препарата Оваринин в дозе 0,1 мл/кг при лечении урогенитального синдрома (эндометрит) с участием микоплазм, повысило эффективность лечения на 10%, способствовало сокращению срока лечения на 2,2 суток (26,5%) по сравнению с монотерапией антибактериальным препаратом. Репродуктивная функция выздоровевших животных восстановилась в 85,7%.

2.2.2.4 Влияние схем лечения на гематологические показатели

В результате гематологического исследования крови собак контрольной и опытных групп выявлено, что число лейкоцитов до начала лечения было повышено у всех подопытных групп. В контрольной группе после проведенного лечения количество лейкоцитов снизилось с 15,46±0,72х109/л до 12,26±1,15х109/л (на 20,7%); в 1-й опытной группе - с 17,34±0,67х109/л до 13,04±0,29x10% (на 24,8%) (Р<0,001); во 2-й опытной группе количество лейкоцитов снизилось после лечения с 18,06±0,60х109/л до 10,08±0,12х109/л (на 44,2%) (Р < 0,001).

Определение количества эритроцитов показало увеличение их в контрольной группе с 7,29±0,26х1012/л до 7,98±0,24х10|2/л (на 0,69 х 1012/л) после проведенного лечения, в 1-й опытной группе количество эритроцитов увеличилось с 7,19±0,24х1012/л до 7,91±0,1 1х1012/л (на 0,72 х 1012/л), во 2-й опытной группе количество эритроцитов увеличилось с 7,12±0,20х1012/л до 8,03±0,1 1x1 0|2/л (на 0,91 х 1012/л) (Р < 0,05).

Увеличение уровня гемоглобина в контрольной группе произошло на 15,5 г/л (10,3 %), в 1-й опытной группе - на 17,7 г/л (11,7%), во 2-й опытной группе гемоглобин после проведенного лечения увеличился на 24,7 г/л (16,8%).

Таким образом, исследование морфологического состава крови собак показало более эффективные результаты применения схемы лечения во 2-й опытной группе, где наблюдали достоверное увеличение эритроцитов на 0,91 х 10 /л, повышение уровня гемоглобина на 24,7 г/л (16,8 %), снижение лейкоцитов на 44,2%.

2.2.2.5 Влияние схем лечения на биохимические показатели крови

Биохимическими исследованиями сыворотки крови было установлено, что у собак с урогенитальным микоплазмозом наблюдались изменения таких показателей, как белок, креатинин, мочевина, билирубин. Показатели аланина-минотрансферазы (AJTT) и аспартатаминотрансферазы (ACT) находились в пределах физиологической нормы.

В контрольной группе после проведенного лечения у собак наблюдалось понижение содержания белка с 82,6±2,71 г/л до 67,9±4,72 г/л (на 17,8%), креа-тинина - с 251,9±23,8 мкмоль/л до 153,3±20,28 мкмоль/л (на 39,1%) (Р < 0,05), мочевины - с 13,34±0,36 мкмоль/л до 7,91±0,44 мкмоль/л (на 40,7%) (Р < 0,001). Концентрация билирубина снизилась с 9,14±0,19 мкмоль/л до 5,58 ±1,72 мкмоль/л (на 38,9%) (Р < 0,001).

В 1-й опытной группе после проведенного лечения у собак наблюдалось понижение содержания белка с 81,3±4,44 г/л до 64,8±2,85 г/л (на 20,3%) (Р < 0,05), креатинина-с 247,39±21,04 мкмоль/л до 128,06±7,77 мкмоль/л (на 48,2%) (Р < 0,001), мочевины - с 12,07±0,40 мкмоль/л до 5,94±0,41 мкмоль/л (на 50,8%) (Р < 0,001), билирубина - с 8,22±0,66 мкмоль/л до 4,79±0,34 мкмоль/л (на 41,7%) (Р < 0,01).

Во 2-й опытной группе у собак после проведенного лечения наблюдалось понижение общего белка с 84,8±3,57 г/л до 62,2± 1,27 г/л (на 26,7%), креатинина

17

- с 255,02±14,4б мкмоль/л до 118,8±2,86 мкмоль/л (на 53,4%), мочевины -с 13,13±0,39 мкмоль/л до 5,42±0,25 мкмоль/л (на 58,7%), билирубина -с 8,72±0,35 мкмоль/л до 4,65±0,22 мкмоль/л (на 46,7%) (Р < 0,001).

Таким образом, выявленные изменения биохимических показателей крови при урогенитальных микоплазмозах свидетельствуют о влиянии микоплазм не только на местные процессы в репродуктивных органах, но и на общее состояние организма с изменениями со стороны жизненно важных органов, таких как печень, почки.

Включение в схему лечения Оваринина способствовало нормализации биохимических показателей, что может свидетельствовать о противовоспалительном действии препарата.

2.2.2.6 Контроль эффективности различных схем лечения собак микробиологическими и молекулярно-биологическими исследованиями

При микробиологическом исследовании урогенитальной слизи собак через 3 месяца после проведения лечения использовали микробиологический посев на селективные среды и метод полимеразной цепной реакции для выявления генома микоплазм (таблица 6).

Таблица 6 - Результаты микробиологического исследования урогенитальной _слизи собак подопытных групп_

Микроорганизмы До лечения, гол. / % После лечения, гол. / %

микробиол. посев ПЦР микробиол. посев ПЦР

Контрольная группа (п = 10)

Mycoplasma spp. 10/ 100 10/ 100 5/50 7/70

Ureaplasma spp. 8/ 80 - 3/37,5 -

1-я опытная группа (n = 10)

Mycoplasma spp. 8/80 I 10/ 100 2/ 20 3/30

Ureaplasma spp. 7/70 1 - 1/ 14,3 -

2-я опытная группа (n = 10)

Mycoplasma spp. 9/ 90 10/ 100 1/ 10 1/10

Ureaplasma spp. 7/70 - 0 -

Примечание: «-» - исследование не проводилось

При микробиологическом посеве на селективные среды урогенитальной слизи от собак контрольной группы микоплазмы были выявлены в 5 пробах (50%), при ПЦР исследовании геном микоплазм — в 7 пробах (70%). Уреаплаз-мы при микробиологическом посеве были выявлены в 3 пробах (37,5%), т.е. процент элиминации микроорганизмов составил 62,5%. Ассоциации микоплаз-ма + уреаплазма сохранились в 3 случаях.

Сопоставив данные терапевтического эффекта и результатов микробиологического исследования контрольной группы, у оставшейся одной больной собаки (10%) сохранились ассоциации микоплазма + уреаплазма. Из 9 клинически выздоровевших собак (90%) полная элиминация микроорганизмов с исчезновением клинических признаков эндометрита наблюдалась у 3 собак

18

(33,3%). У 4 собак (44,4%) были выявлены только микоплазмы, у 2 собак (22,2%) - ассоциации микоплазма + уреаплазма. Таким образом, в 70% случаях микроорганизмы проявили устойчивость к проводимой терапии, что требует корректировки схемы и повторного проведения лечения.

В 1-й опытной группе после проведенного лечения микоплазмы выделены методом микробиологического посева на жидкие селективные среды в 20%, геном микоплазм методом ПЦР выявлен в 30%. Уреаплазмы были выявлены в одной пробе (14,3%), эффективность лечения составила 85,7%. Ассоциация микоплазма + уреаплазма сохранилась в одном случае у собаки с клиническими признаками эндометрита. Из 9 клинически выздоровевших собак (90%), у 2 собак были выявлены микоплазмы в виде моноинфекции. Полная элиминация микроорганизмов с исчезновением клинических признаков эндометрита наблюдалась у 7 собак (70%). Таким образом, в 30% случаях наблюдалось пер-систирование микоплазм в организме, что указывает на недостаточную эффективность лечения.

Исследование урогенитальной слизи от животных 2-й опытной группы после проведенного лечения показало снижение выявления микоплазм на 90%, уреаплазм - на 100%. Из всех клинически выздоровевших собак, у одной собаки (10%) была выявлена микоплазма микробиологическим и молекулярно-биологическим методами исследования при исчезновении клинических признаков эндометрита. Полная элиминация микроорганизмов с исчезновением клинических признаков эндометрита наблюдалась у 9 собак (90%).

Сочетание методов ПЦР и микробиологического посева представляется нам эффективным при проведении контроля лечения урогенитальной мико-плазменной инфекции (рисунок 2).

Рисунок 2 - Результаты микробиологического исследования урогенитальной слизи собак после применения различных схем лечения

Таким образом, анализируя результаты микробиологического исследования урогенитальной слизи собак после применения различных схем лечения, отмечено, что самой эффективной оказалась схема с применением антибактериального препарата фторхинолонового ряда Энроксил в сочетании с гомеопатическим препаратом Оваринин в дозе 0,1 мл/кг.

2.2.2.7 Испытание разработанной схемы лечения при мнкоплазмозе собак с применением энроксила и овариннна в производственных условиях

Терапевтическую эффективность разработанной схемы лечения с применением препаратов Энроксил и Оваринин при эндометритах изучали в клинике «Болезни мелких домашних животных» НГАУ на 70 собаках.

Собакам опытной группы для лечения применяли Энроксил подкожно в дозе 0,1 мл/кг 1 раз в сутки ежедневно, 7 дней и Оваринин внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг 1 раз в 4 дня.

Собак контрольной группы лечили традиционными средствами. Традиционная схема включала препараты Кобактан, Оксилат, Гамавит.

Проведенные исследования показали, что препараты Энроксил и Оваринин обладают высокой терапевтической эффективностью при лечении собак, больных эндометритом, вызванным микоплазмами.

В контрольной группе выздоровление наступило у 88,6% собак за 8.8±0,2 суток. В опытной группе выздоровление наступило у 97,1 % собак за 6,3±0,2 суток.

Таким образом, терапевтическая эффективность испытуемых препаратов в клинике выше средств традиционной терапии на 8,5%. При этом сроки выздоровления сокращаются на 2,5 суток (28,4%).

3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ литературы и собственные исследования свидетельствуют о том, что заболеваемость урогенитальным микоплазмозом у собак широко распространена. Поэтому необходимо проводить мониторинг носительства животными микоплазм в урогенитальном тракте и совершенствовать методы лечения.

Таким образом, проведенные исследования позволили прийти к следующим выводам:

1. При клинико-эпизоотологическом исследовании выявлено 59,9% собак с клиническими признаками эндометрита, при этом 68,9% из них составляли собаки возраста от 2 до 6 лет. Наиболее часто встречались эндометриты у русских спаниелей - 27 (14,6%), пекинесов - 16 (8,6%), йоркширских терьеров — 16 (8,6%), немецких овчарок - 15 (8,1%). Эпизоотическое проявление инфекционных болезней различной этиологии отмечалось круглогодично с подъемами в марте и сентябре.

2. При микробиологическом исследовании урогенитальной слизи от собак при хроническом эндометрите изолированы микроорганизмы рода Staphylococcus (59,22%), Enterococcus spp. (13,9%), Е. coli (10,1%), P. mirabilis (8,4%), P. vulgaris (4,5%), Ps. aeruginosa (2,2%), Enterobacter sp. (1,1%), которые выяв-

лялись в ассоциациях друг с другом. При определении чувствительности микроорганизмов к антибиотикам выявили наибольший процент - к фторхиноло-нам: энрофлоксацину (75,0%), ципрофлоксацину (72,3%). Низкую чувствительность микроорганизмы проявили к (3-лактамным антибиотикам (27,7%), тетра-циклинам (19,8%). Резистентность микроорганизмы проявили к оксациллину, цефуроксиму, доксициклину.

3. Микробиологическое исследование биоматериала от собак показало высокий уровень носительства микоплазм и уреаплазм. Частота выявления ми-коплазм и уреаплазм методом посева на жидкие селективные среды составила 55,9% (из них микроорганизмы рода Mycoplasma spp. - 77,8%, микроорганизмы рода Ureaplasma spp. - 46,9%). Частота выявления генома микоплазм методом ПЦР составила 67,1%, что на 11,2% больше, чем при исследовании микробиологическим методом. Дополнительно с микоплазмами были выявлены ассоциации микроорганизмов Mycoplasma spp. + Staphylococcus spp. + E. coli в 28,6%) случаев, Mycoplasma spp. + Staphylococcus spp. + Enterococcus spp. - в 21,4% случаев, Mycoplasma spp. + Staphylococcus spp. + Proteus spp. - в 17,9% случаев.

4. Результаты изучения влияния различных гомеопатических средств на показатели опсонофагоцитарной реакции (ОФР) нейтрофилов in vitro показали, что максимальный эффект активации клеточного иммунитета, характеризующийся ростом показателей ФА - на 9,65%, ФЧ - на 997,95%, ФИ - на 1106,76%, наблюдался в случае использования их рациональной композиии в виде комплексного гомеопатического препарата Оваринин. Препарат оказался безвредным для животных.

5. Применение схемы лечения с препаратами Энроксил и Оваринин в дозе 0,1 мл/кг вызвало увеличение эритроцитов на 0,91 х 1012/л, гемоглобина - на 24,7 г/л, снижение количества лейкоцитов на 7,9 х 109/л. Биохимическими исследованиями установлено понижение общего белка на 22,6 г/л, креатинина -на 136,2 мкмоль/л, мочевины - на 7,7 мкмоль/л, билирубина - на 4,1 мкмоль/л.

6. Исследование урогенитальной слизи после проведенного сочетанного лечения препаратами Энроксил и Оваринин выявило полную элиминацию микоплазм с исчезновением клинических признаков эндометрита у 90% подвергнутых лечению собак. При этом количество случаев выявленных микоплазм снизилось до 10%, частота выявления уреаплазм - до 0% (у животных контрольной группы, где использовали только Энроксил, эти показатели были на уровне 70% и 37,5%) соответственно).

7. За счет сочетанного использования у собак при урогенитальном синдроме (эндометрит) с участием микоплазм препаратов Энроксил и Оваринин (по сравнению с монотерапией антибактериальным препаратом) лечебный эффект повысился на 10%, сроки лечения собак сократились на 2,2 дня, репродуктивные функции восстановились в 85,7% случаев, что на 63,5% выше, чем в контрольной группе (где Оваринин не применяли). При этом число щенков в пометах у животных, подвергнутых лечению Оваринином, составило 7,3±0,2 голов, что на 32,7% больше, чем в контрольной группе.

В результате разработаны и предложены практические рекомендации:

1. При проведении племенной работы у собак в питомниках и у частных владельцев необходим мониторинг носительства животными микоплазм и уреаплазм в урогенитальном тракте.

2. Полученные в результате научных исследований данные целесообразно использовать в учебном процессе при изучении микробиологии, эпизоотологии, болезней мелких домашних животных.

3. При урогенитальном микоплазмозе у собак рекомендуем сочетанное применение антибактериального препарата Энроксил в дозе 0,1 мл/кг ежедневно в течение 7 дней и гомеопатического препарата Оваринин в дозе 0,1 мл/кг 1 раз в 4 дня.

4. При лечении урогенитального микоплазмоза у собак руководствоваться методическими рекомендациями «Урогенитальный микоплазмоз у собак», утвержденными ученым советом факультета ветеринарной медицины (протокол № 5 от 13.04.2015 г.).

4 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Лазарева, М.В. Индикация микоплазм из урогенитального тракта собак / М.В. Лазарева, H.A. Шкиль, H.H. Шкиль // Вестник Новосибирского государственного аграрного университета. -2013. -№ 4(29). - С. 77-80.

2. Лазарева, М. В. Микробиоценоз урогенитального тракта собак при эндометритах / М.В. Лазарева, H.A. Шкиль, И.В. Наумкин, О.Н. Ларина // Вестник Новосибирского государственного аграрного университета. -2014.-№3(32).-С. 95-98.

3. Лазарева, М.В. Токсикологические свойства гомеопатического препарата Оваринин / М.В. Лазарева, Е.В. Филатова, H.H. Шкиль // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. — 2014.-№4(28).-С. 78-82.

4. Лазарева, М.В. Терапевтическая эффективность сочетанного применения Оварина и Энроксила при лечении микоплазмоза собак / М.В. Лазарева, H.A. Шкиль, H.H. Шкиль // Наука, инновации и бизнес в АПК: материалы конференции. - Новосибирск, 2013. - С. 128-130.

5. Лазарева, М.В. Распространение смешанной хламидийно-микоплазменной урогенитальной инфекции и моноинфекций у собак / М.В. Лазарева, H.A. Шкиль, H.H. Шкиль // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы XII Сибирской ветеринарной конференции. - Новосибирск, 2013.-С. 35-36.