Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Эпизоотическая ситуация по респираторным болезням свиней в хозяйствах промышленного типа, этиология и клинико-экспериментальное обоснование применения новых средств их профилактики и терапии
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов
Автореферат диссертации по теме "Эпизоотическая ситуация по респираторным болезням свиней в хозяйствах промышленного типа, этиология и клинико-экспериментальное обоснование применения новых средств их профилактики и терапии"
005532361
САШНИНА ЛАРИСА ЮРЬЕВНА
На правах рукописи
Л
ЭПИЗООТИЧЕСКАЯ СИТУАЦИЯ ПО РЕСПИРАТОРНЫМ БОЛЕЗНЯМ СВИНЕЙ В ХОЗЯЙСТВАХ ПРОМЫШЛЕННОГО ТИПА, ЭТИОЛОГИЯ
И КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ НОВЫХ СРЕДСТВ ИХ ПРОФИЛАКТИКИ И ТЕРАПИИ
06.02.02. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук
2 9 АВГ 2013
Москва - 2013
005532361
Работа выполнена в Государственном научном учреждении «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии» Россельхозакадемии
Научный консультант:
доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН, Заслуженный деятель науки РФ Шахов Алексей Гаврилович
Официальные оппоненты:
Скворцов Владимир Николаевич, доктор ветеринарных наук, Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко, заведующий филиалом
Сидорчук Александр Андреевич, доктор ветеринарных наук, профессор, Лауреат премии Совета Министров СССР, Московская Государственная Академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И.Скрябина, заведующий кафедрой
Сухарев Олег Иванович, доктор ветеринарных наук, Лауреат Государственной премии РФ, Российский университет дружбы народов, профессор кафедры
Ведущая организация: ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» ВНИВИ
Защита диссертации состоится « т^ ¿^%2013 г. в
часов на заседании диссертационного совета Д 006.033.01 при ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени Я.Р. Коваленко Россельхозакадемии по адресу: 109428, Москва, Рязанский проспект, 24, к. 1, ВИЭВ, тел. (495) 970-03-69.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВИЭВ Россельхозакадемии
Автореферат разослан « £^¿2-2013г.
Ученый секретарь диссертационного совета
Ездакова И.Ю.
1.1. Актуальность темы. Для современных свиноводческих хозяйств промышленного типа характерны узкая специализация производства, использование высокопродуктивных пород, большая концентрация животных на ограниченных площадях, безвыгульное их выращивание (Н.В. Михайлов с со-авт., 2009; Н.С. Гегамян с соавт., 2011 и др.).
В таких условиях на фоне снижения уровня естественной резистентности организма и интенсивного накопления в среде обитания свиней патогенной и потенциально патогенной микрофлоры, вызванных даже незначительными нарушениями технологических и ветеринарно-санитарных правил, происходит возникновение и широкое распространение инфекционных болезней вирусной и бактериальной природы (А.Г.Шахов, 2002, 2005; A.A. Вербицкий с соавт., 2008; С .И. Прудников с соавт., 2008; А.Г.Шахов с соавт., 2008; Rose N. F. Modes, 2002; С.М. Evans et al., 2008; M. M. Andraud et al„ 2008).
Одной из трудно разрешимых проблем крупных свиноводческих хозяйств являются респираторные болезни, наносящие большой экономический ущерб (Н.Н.Андросик с соавт., 2005; B.C. Русалеев с соавт., 2006, 2009; А.В.Щербаков с соавт., 2009; Z. Pejsak et al., 2005; J.R. Herman et al., 2008; G.- Z. Tong et al., 2007; Y.Ma et al., 2009; J.Gillespie et al., 2010; C.H. Jager et al., 2012).
Многолетними исследованиями по их изучению установлена этиологическая и (или) патогенетическая роль вирусов (возбудителей гриппа, РРСС, болезни Ауески, цирковирусной, респираторной коронавирусной инфекций и др.), бактерий (микоплазм, бордетелл, пастерелл, гемофил, хламидий, стафило- и стрептококков и др.), возбудителей пневмоцистоза, аскаридоза и других инвазий (Б.Г. Орлянкин, 2002; В.В. Гусев с соавт., 2004; И.И. Стрельченя, 2004; С.А. Кукушкин с соавт., 2004, 2008; А.П. Медведев с соавт., 2006; Ю.Г. Кры-сенко с соавт., 2007; A.B. Потехин с соавт., 2007; B.C. Русалеев с соавт., 2007, 2008; A.B. Щербаков с соавт., 2007; Т.З. Байбиков, 2008; О.В. Прунтова с соавт., 2008; М.В. Челышева с соавт., 2009; J.G. Cho et al., 2006; K.L. Klinge et al., 2009; C. Kyriakis et al., 2009; D. Sreta et al., 2009; E. Auger et al., 2009).
Одной их эпизоотических особенностей респираторных болезней поросят в промышленных свиноводческих хозяйствах является их сложная этиология, которая, как правило, представлена ассоциацией различных возбудителей (И.Г.
Спиридонов с соавт, 2002; A.B. Щербаков с соавт., 2003; С.А. Кукушкин
авт., 2002, 2005; А.И. Ершов, 2004; A.B. Иванов с соавт., 2007; Б.Г. Орлянкин, 2005, 2009; M.L. Madsen et ah, 2006; J. Kim et al., 2003; J. Ellis et al., 2003; K. Kohnt, P. Huebert, 2006; P. Jiawattanaapong et al., 2010).
Для специфической профилактики инфекций, возбудители которых вызывают респираторную патологию у свиней, разработаны живые и инактивиро-ванные моно-, поливалентные и ассоциированные вакцины. Широко применяются вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней, цирко-вирусной инфекции, болезни Ауески, микоплазмоза, актинобациллезной плевропневмонии, гемофилеза, пастереллеза и других инфекций (A.M. Рахманов, H.A. Яременко, 2003; B.C. Русалеев с соавт., 2006; С.А. Кукушкин, 2009; A.A. Шевцов с соавт., 2012; Н.В. Лебедев с соавт., 2012; Е. Fano et al., 2007; М. Bandrick et al., 2008 и др.).
Для этиотропной терапии больных животных предложены антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны и другие средства (И.Ф. Кленова с соавт., 2004; О.П. Татарчук, 2004; Н.Г. Толкач, 2005; H.A. Шкиль с соавт., 2006; В.В. Палу-нина с соавт., 2007; Т.С. Кузнецова с соавт., 2007; А.Н. Гречухин с соавт., 2006; 2009; Н.П.Зуев с соавт., 2008; А.Ф. Овчеренко с соавт., 2008; С.И. Прудников с соавт., 2008; T.R. Shryock et al., 2002; М. Roselli et al., 2005; N.A. Evans, 2005; S. Yoshida et al., 2006).
Отмеченное в последние годы снижение эффективности химиотерапии и химиопрофилактики инфекционных болезней животных в результате селекции лекарственно-устойчивых, полирезистентных форм бактериальных возбудителей обусловлено длительным, часто необоснованным применением препаратов, явлениями иммуносупрессии и иммунодефицитов у животных (H.A. Костроми-тинов, 2001; Б.Т. Стегний, 2003; A.C. Вечеркин, 2004; Н.А.Лагуткин, 2006; Ю.Н. Федоров с соавт., 2006; М.А. Сидоров с соавт., 2006; О.П. Татарчук с соавт., 2006; Ю.Н. Федоров с соавт., 2007; Н.В. Данилевская, 2010; А.Г. Шахов с соавт., 2011; К. Kadles, 2004; A.J. Fuente et al., 2006; H. Kaspar, 2006; J. Wallann, 2006; M.T. Holden et al., 2009; H. Christensen, M. Bisgaard, 2010).
Для предупреждения развития и борьбы с антибиотикорезистентностью разрабатываются комбинированные антимикробные препараты, составляющие компоненты которых обладают различными механизмами действия на бактерии (Ю.Н. Федоров, 2005; Г.Е. Толяронок, 2006; О.П. Татарчук, 2007; В.Ф. Петрян-
кин с соавт., 2008; Л.Ю.Топурия с соавт., 2008; В. Энговатов с соавт., 2008; М.В. Островский, 2008; Л. Гоби, 2009; A.B. Гавриков, 2010 и др.).
В системе профилактики вирусных и бактериальных инфекций, возбудители которых вызывают респираторные болезни свиней, и (или) принимают участие в их развитии, перспективно сочетанное применение вакцин и химио-препаратов (А.Г. Шахов с соавт., 2006; Е.А. Зеленуха с соавт., 2007; Т.С. Кузнецова с соавт., 2008; Б.Г. Орлянкин, 2008; А.Н. Гречухин, 2010; М. Sjolund, Р. Wallgren, 2010).
1.2. Цель и задачи исследований. Цель исследований - изучение эпизоотической ситуации и этиологии респираторных болезней свиней в хозяйствах промышленного типа и клинико-экспериментальное обоснование применения новых средств их профилактики и терапии.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучить эпизоотическую ситуацию по респираторным болезням свиней в хозяйствах промышленного типа, занимающихся разведением обычных (конвенциональных) и со статусом SPF (СВИБ) животных.
2.Провести бактериологические, молекулярно-генетические, серологические исследования патологического материала от больных, убитых с диагностической целью и павших поросят для установления этиологической структуры респираторных болезней свиней.
3. Определить факторы, предрасполагающие возникновению и способствующие развитию и распространению респираторных болезней свиней.
4. Изучить возможность прогнозирования возникновения респираторной патологии с использованием показателей иммунного и биохимического статуса животных.
5. Изучить морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови у свиней с респираторной патологией.
6. Определить in vitro и in vivo антимикробную активность комплексных препаратов диоксиген, диоксинор, тилоколин и неантибиотического препарата цидисепт-о и изучить их влияние на ультраструктуру пастерелл, золотистого
стафилококка и эшерихий.
7. Изучить формирование резистентности микроорганизмов к диоксигену, диоксинору, тилоколину и составляющим компонентам, цидисепту-о и восстановление их чувствительности к препаратам.
8. Изучить лечебную эффективность диоксигена, диоксинора, тштоколина и цидисепта-о в отдельности и в сочетании с иммунокорригирующим препаратом липотон - АФ 500 при респираторных болезнях свиней.
9. Изучить эффективность специфической профилактики респираторных болезней свиней в отдельности и в сочетании с новыми антимикробными препаратами и их химиопрофилактики.
10. Определить экономическую эффективность применения диоксигена, диоксинора, тилоколина и цидисепта-о при респираторных болезнях свиней в отдельности и в сочетании с липотоном.
Исследования проведены в .2005-2012 годы в соответствии с государственными темами ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии по заданиям 08.04.01. «Разработать методы ранней диагностики, эффективные средства и способы профилактики и лечения массовых незаразных и вызываемых условно патогенными микроорганизмами заболеваний у молодняка высокопродуктивных живот-ных»(№гос. регистрации 15070.3666026906.06.8.001.2), 08.04.03. «Разработать новые высокоэффективные средства и методы повышения общей резистентности и иммунного статуса крупного рогатого скота, свиней и птиц (№ гос. регистрации 15070.3666026906.06.8.003.4).
1.3. Научная новизна. Впервые в сравнительном аспекте изучена эпизоотическая ситуация по респираторным болезням свиней в хозяйствах промышленного типа, занимающихся разведением обычных (конвенциональных) и со статусом SPF (СВИБ) животных, определены этиологическая структура болезней органов дыхания и наиболее значимые предрасполагающие и способствующие их развитию факторы, прогностическое значение показателей биохимического и иммунного статуса животных в возникновении и развитии респираторных болезней. Проведено изучение in vitro и in vivo антимикробной активности новых комплексных препаратов диоксинор, диоксиген, тилоколин и неантибиотического средства цидисепта-о, влияния их на ультраструктуру бактерий и дано клинико-экспериментальное обоснование применения препаратов для профилактики болезней органов дыхания и терапии больных животных. Изучена эффективность специфической профилактики респираторных болезней свиней в отдельности и в сочетании с разработанными средствами.
Установлены широкое распространение болезней органов дыхания у свиней на протяжении всего технологического цикла в хозяйствах, занимающихся
разведением обычных (конвенциональных) животных, благополучие или незначительное их распространение во вновь созданных и реконструированных хозяйствах, укомплектованных поголовьем со статусом БРР (СВИБ), полиэтио-логичность респираторных болезней, прогностическое значение нарушения метаболического статуса и иммунодефицитного состояния у животных в возникновении и развитии патологии, высокая антимикробная активность и широкий спектр антибактериального действия новых средств, морфофункциональные изменения у бактерий под влиянием их различных бактерицидных концентраций, высокая терапевтическая эффективность препаратов при респираторных болезнях бактериальной этиологии, особенно при применении их в сочетании с иммунокорригирующим средством липотон. Показана эффективность специфической профилактики респираторных болезней свиней в отдельности и в сочетании с химиопрепарами, а также экономическая эффективность при применении разработанных средств при терапии больных животных.
Научная новизна исследований подтверждена 3 патентами РФ:
- Патент на изобретение № 2351343 от 10 апреля 2009г. «Способ лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных»;
- Патент на изобретение № 2367414 от 20 сентября 2009г. «Способ лечения респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных»;
- Патент на изобретение № 2420271 от 10 июня 2011г. «Способ лечения респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных».
1.4. Практическая значимость и внедрение. Разработаны и внедрены в ветеринарную практику для терапии свиней при респираторных болезнях и их профилактики в критический период выращивания животных (перевод на до-ращивание) комплексные антимикробные препараты диоксинор, диоксиген, ти-локолин и неантибиотический препарат цидисепт-о.
Материалы диссертации вошли в разработанную нормативную документацию (НД), утвержденную Россельхознадзором МСХ РФ:
- препарат диоксинор - АФ (СТО 10590965 - 002 - 2006, инструкция №ПВР-2-1.7/01921 от 18. 04. 2007г.);
- препарат диоксиген - АФ (СТО 1059096 - 0009 -2008, инструкция №ПВР-2-1.8/02137 от 22. 05. 2008г.);
- препарат тилоколин - АФ (СТО 10590965 - 0030 - 2009, инструкция № ПВР - 2 - 6.9/02443 от 20. 04. 2009г.).
Разработаны и рекомендованы к изданию секцией «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии:
- «Методические рекомендации по оптимизации формирования коло-стрального иммунитета у новорожденных животных» (протокол № 3 от 16 октября 2009 года),
- «Методическое пособие по диагностике, профилактике и терапии респираторных болезней поросят» (протокол № 3 от 26 октября 2010 года), которое на выставке «Агроферма - 2012» признано лучшей научной разработкой и награждено дипломом.
1.5. Апробация работы. Материалы диссертации доложены и положительно оценены на ежегодных (2005-2012г.г.) отчетных конференциях ВНИВИПФиТ, на первом съезде ветеринарных фармакологов 21-23 июня, г. Воронеж, 2007; VI Московском международном конгрессе по болезням мелких домашних животных 21-23 апреля, г. Москва, 2007; Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях» 17-19 сентября, г. Воронеж, 2008; Международной научно-практической конференции «Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных», посвященной 100-летию со дня рождения профессора В.А. Акатова, 27-29 мая г. Воронеж, 2009; девятнадцатом заседании межвузовского координационного совета по свиноводству и международной научно-производственной конференции «Актуальные проблемы производства свинины в Российской Федерации» 23-24 апреля, пос, Персианов-ский, 2010; Международной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного производства» 20-22 января, г. Курск, 2010.
1.6. Публикации. По материалам диссертации опубликованы 41 научная работа, в том числе - 16 в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
1.7. Структура и объем работы. Работа изложена на 425 страницах и включает: введение, обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Диссертация проиллюстрирована 68 таблицами и 35рисунками. Список литературы включает 593 источника, в том числе 219 зарубежных авторов.
1.8. Личный вклад соискателя. Работа выполнена соискателем самостоятельно. В выполнении ее отдельных этапов принимали участие д.б.н. Г.А. Во-строилова, д.б.н., проф. М.И. Редкий, д.в.н. Ю.Н.Масьянов, д.в.н., проф. М.Н. Аргунов, д.в.н., проф. С.М. Сулейманов, д.в.н. Ю.Н.Бригадиров, к.б.н. В.И. Шушлебин, к.б.н. Ю.Н. Алехин, к.б.н. Г.А. Надточей (ГНУ ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко), за что автор приносит им искреннюю благодарность.
1.9. Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Эпизоотическая ситуация и этиология респираторных болезней свиней в
хозяйствах промышленного типа;
2. Антимикробная активность комплексных препаратов диоксинор, диок-сиген, тилоколин и неантибиотического препарата цидисепт-о и влияние их на ультраструктуру пастерелл, золотистого стафилококка и эшерихий;
3. Формирование резистентности у микроорганизмов к препаратам и восстановление их чувствительности;
4. Лечебная эффективность диоксинора, диоксигена, тилоколина и циди-септа-о при респираторных болезнях свиней в отдельности и в сочетании с им-мунокорегирующим препаратом липотон.
5. Эффективность специфической профилактики в отдельности и в сочетании с новыми антимикробными препаратами и химиопрофилактики респираторных болезней свиней.
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы
Изучение эпизоотической ситуации по респираторным болезням свиней проводили в промышленных хозяйствах, занимающихся разведением обычных (конвенциональных) и со статусом SPF (СВМБ) животных путем анализа ветеринарной отчетности хозяйств, при этом учитывали интенсивные показатели эпизоотического процесса (заболеваемость, смертность, вынужденный убой). В основу анализа были положены «Методические указания по эпизоотологическому исследованию» (Бакулов И.А. и др., 1982).
В проведении экспериментальных и научно-производственных исследований использовали: самцов и самок беспородных белых мышей (п=732), поросят (п= 4707).
Этиологическую структуру респираторных болезней изучали на основании эпизоотологического обследования хозяйств, результатов клинических, бактериологических, серологических и молекулярно-генетических исследований патологического материала от больных, убитых с диагностической целью и павших животных.
При клиническом исследовании у животных измеряли температуру тела, определяли частоту дыхания и пульса, наличие одышки, кашля, носовых истечений в соответствии с принятыми в клинической диагностике методами.
Бактериологические исследования проводили общепринятыми классическими методами согласно утвержденным наставлениям. Чувствительность выделенных бактерий к антибиотикам определяли методом бумажных дисков. Патогенность выделенных штаммов микроорганизмов определяли биопробой на белых мышах.
Молекулярно-генетические исследования выполняли методом ПНР с применением соответствующих утвержденных тест-систем (РРСС, ЦВС-2-НПО «Нарвак», хламидии - «Интерлабсервис», Москва), M.hyopneumoniae по модифицированной методике J. Carbon et al. (2000), H. parasuis по методике Simone Oliveira et al. (2001), A. pleuropneumoniae по методике Stine G. Jessing et al. (2003), амплификацию ДНК проводили в программируемом термостате «Терцик ТПЧ-ПЦР01». Для регистрации результатов ПЦР использовали метод электрофоретического разделения продуктов амплификации в агарозном геле с окрашиванием этидия бромидом.
Серологические исследования проводили методом ИФА согласно утвержденным методикам и наставлениям к соответствующим диагностическим наборам (антитела к вирусу РРСС, ЦВС-2 - НПО «Нарвак», P. multocida - ФГУ «ВНИИЗЖ», M. hyopneumoniae - «M.hyopneumoniae Test Kit» (IDEX США), хламидиям - «Хламидия - Ig G - антитела ИФА ВЕТ» ООО НПФ «Сиббиотест». Учет результатов иммуноферментного анализа осуществляли на спектрофотометре с вертикальным ходом луча «Униплан-ТМ».
Зоогигиенические и токсикологические показатели кормов, воды и воздуха оценивали согласно утвержденным методикам и ГОСТам.
Изучение антимикробной активности диоксинора, диоксигена, тилоколина, оптимального соотношения их действующих веществ и цидисепта-о проводили in vitro методом серийных разведений в соответствии с «Методическими указа-
ниями по отбору, испытаниям и оценке антивирусных и антибактериальных препаратов среди соединений различных химических классов» (Лагуткин H.A. и др., 2004).
Формирование резистентности у бактерий и антимикробную активность препаратов in vivo на моделях пастереллезной, сальмонеллезной, стафилококковой и эшерихиозной инфекций белых мышей изучали в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Фисенко В.П. и др., 2000).
Изучение воздействия препаратов на клетки P. multocida, Staph, aureus и Е. coli проводили на культурах в фазе логарифмического роста. Микроорганизмы выращивали в МПБ при загруженности в 500 тысяч м.к. на 1 мл среды в условиях усиленной аэрации. Препараты добавляли к 5-часовой культуре в минимальной и 4-х кратной бактерицидной концентрации. Образцы центрифугировали 10 минут при 3000 об/мин. Осадок 3 раза отмывали в физиологическом растворе, затем помещали на 1 час в 2,5% глутаровый альдегид на s-коллидиновом буфере, центрифугировали в течение 10 минут при 3000 об/мин, осадок отмывали 10% раствором сахарозы 5 раз по 20 минут. Постфиксацию проводили четырехокисью осмия. Фиксированный материал обезвоживали в восходящих концентрациях этилового спирта, после чего осадок помещали в смесь эпоновых смол.
Срезы получали на ультратоме LKB II1-8802A, контрастировали 2%-ным водным раствором уранил ацетата и цитратом свинца в течение 10 минут. Препараты просматривали на электронном микроскопе марки JEM-100 СХ II фирмы JEOL при ускоряющем напряжении 80 кВольт и разрешающей способности 3 ангстрема. Применяли инструментальное увеличение 10000-80000.
Изучение лечебной эффективности антимикробных препаратов в отдельности и в сочетании с иммуномодулятором (липотон - АФ 500) проводили на поросятах 1,5-2,5 месячного возраста в ОАО Агрофирма "Ливенское мясо" и ОАО Агрокомбинат «Николаевский». За подопытными животными вели ежедневные клинические наблюдения, учитывали количество выздоровевших поросят, прирост массы тела, сроки выздоровления, отсутствие или наличие падежа. До лечения и спустя 5 дней после назначения препаратов проводили морфологические и биохимические исследования крови и определяли показатели общей неспецифической резистентности.
Морфологический анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «АВХ Micros 60», биохимические исследования крови - на анализаторе «Hitachi-902» в соответствии с «Методическими рекомендациями по диагностике, терапии и профилактике нарушений обмена веществ у продуктивных животных» (Рецкий М.И. и др., 2005). Определение микроэлементов проводили на атомно-адсорбционном спектрофотометре - 6500.
Комплементарную (КАСК), бактерицидную (БАСК) и лизоцимную (ЛАСК) активность сыворотки крови, фагоцитарную активность лейкоцитов (ФАЛ), фагоцитарное число (ФЧ) и фагоцитарный индекс (ФИ) определяли в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных» (Шахов А.Г. и др., 2005). Количество Т-лимфоцитов, B-лимфоцитов, концентрацию иммуноглобулинов G, М и А классов определяли в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке и коррекции иммунного статуса животных» (Шахов А.Г. и др., 2005). Содержание малонового диальдегида (МДА) и средних молекул (ИЭИ), активность глутатионпероксидазы (ГПО), каталазы определяли в соответствии с «Методическим пособием по изучению процессов перекисного окисления ли-пидов и системы антиоксидантной защиты организма у животных» (Бузлама B.C. и др., 1997) на спектрофотометре «Specol-340».
Изучение эффективности специфической профилактики респираторных болезней свиней проводили в ОАО «Русская АПК» Липецкой области, эффективности ее в отдельности и в сочетании с химиопрепаратами и химиопрофи-лактики - в ООО «Центральное» Тамбовской области.
Статистическую обработку полученных результатов исследований проводили на ПК с использованием программ «Winstat 557» и «ExStat».
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. Анализ эпизоотической ситуации по респираторным болезням свиней
По официальной статистике болезни органов дыхания в подавляющем большинстве случаев относятся к незаразной патологии. По данным ФГБУ «Центр ветеринарии» МСХ РФ в 2007-2010 годы заболеваемость свиней незаразными болезнями в хозяйствах всех категорий Российской Федерации коле-
балась от 48,5 до 52,3%, среди которых доля респираторной патологии составила 31,7-43,8%. Из общей заболеваемости свиней респираторной патологией 83,4-89,5% приходится на молодняк. Падеж свиней из числа зарегистрированных больных незаразными болезнями был стабильно высоким (20,1-22,3%), в котором удельный вес болезней органов дыхания составил 14,0-21,6%, в том числе гибель поросят 15,5-22,0%. Вынужденный убой свиней от незаразных болезней составил 3,3-4,1%, при этом из всех заболевших животных количество убитых от респираторной патологии колебалось от 2,9 до 4,5%, в том числе молодняка 2,6-4,0%.
Проведенные исследования в ряде хозяйств промышленного типа Воронежской, Волгоградской, Липецкой и Орловской областей, занимающихся разведением обычных (конвенциональных) свиней в течение 20-30 лет и более, показали, что респираторные болезни регистрируются на протяжении всего технологического цикла получения и выращивания животных и они, как правило, инфекционного происхождения.
В общей заболеваемости поросят-сосунов респираторные болезни занимают значительный удельный вес в ООО «Агробизнес» (13,0-19,5%), ЗАО «Родина» (15,0-18,2%), ЗАО «Юдановские просторы» (21,1-30,2%) и ОАО «Комбинат мясной Калачеевский» (14,5-32,2%) Воронежской области. Практически во всех хозяйствах заболеваемость поросят респираторными болезнями в значительной степени увеличивается в период их доращивания и откорма, занимая ведущее место в общей патологии: ООО «Агробизнес» (52,8-62,7% и 56,864,4%), ЗАО «Родина» (40,2-52,1% и 12,0-40,4%), ЖСХА «Верхнекарачанская»
(58,2-82,2% и 25,9-69,1%).
Одной из основных причин падежа, вынужденного убоя и выбраковки поросят в период их доращивания и откорма являются респираторные болезни. Из общего отхода животных наиболее высокий падеж от заболеваний органов дыхания зарегистрирован в ООО «Агробизнес» (52,8-68,8% и 56,8-63,4%), ЗАО «Родина» (39,8-58,4% и 21,2-40,1%), ЖСХА «Верхнекарачанская» (34,1-71,9% на доращивании). Значительная часть переболевших животных выбраковывается (ООО «Агробизнес», ЗАО «Родина», ЗАО «9-Пятилетка»),
При анализе эпизоотической ситуации в ЗАО «Краснодонское» Волгоградской области, рассчитанном на выращивание 108 тыс. свиней в год, установлен высокий удельный вес респираторных болезней в общей патологии на
доращивании (71,9-96,2%) и откорме (46,9-57,5%). В структуре общего падежа животных отход поросят от них также был стабильно высоким (60,4-71,4% и 22,6-25,9%) (табл.1).
Таблица 1
Показатели респираторной патологии поросят в хозяйствах, занимающихся разведением (обычных) конвенциональных свиней
Наименование хозяйств % респираторной патологии в общей заболеваемости поросят % падежа поросят от респираторных болезней в общем отходе
в период подсоса на доращивании на откорме в период подсоса на доращивании на откорме
ООО «Агробизнес» 13,019,5 52,866,7 56,864,4 13,019,5 52,868,8 56,863,4
ЗАО «Родина» 15,018,2 40,252,1 12,040,4 14,418,6 39,858,4 7,540,1
ЗАО «Юда-новские просторы» 21,130,2 29,650,3 7,123,2 28,430,3 10,920,0 0-3,6
ЖСХА «Верхнека-рачанская» 1,223,9 58,282,2 25,969,1 0-26,8 34,171,9 0,969,7
ОАО «Комбинат Калачеевский» 14,522,2 23,639,2 9,255,6 26,330,7 25,435,2 21,4 50,1
ЗАО «9-я Пятилетка» 0 59,063,0 4,831,9 0 60,965,6 38,757,7
ООО «Вишневское» 2,2-2,8 57,170,5 71,681,6 0,72,0 55,070,5 59,974,9
ЗАО «Краснодонское» 0,780,95 71,996,2 46,957,5 11,424,5 60,471,4 22,625,9
ОАО «Ливенское мясо» 0,4-0,5 65,876,5 59,571,1 0 71,089,0 12,054,0
ОАО «Русская АПК» 0,4-2,2 34,566,9 39,744,5 1,114,8 28,961,5 31,336,1
Примечание: аналитические данные по хозяйствам ООО «Агробизнес», ЗАО «Родина», ОАО «Комбинат Калачеевский» ЗАО «9-я Пятилетка» за 2006-2009 годы, ЗАО «Юда-новские просторы» за 2007-2009 годы, ЖСХА «Верхнекарачанская», ООО «Вишневское», ЗАО «Краснодонское», ОАО «Ливенское мясо» и ОАО «Русская АПК» за 2004-2006 годы.
Проведенные исследования во вновь созданных и реконструированных специализированных хозяйствах (2008-2011гг.), занимающихся разведением свиней со статусом SPF (СВИБ), показали, что они или благополучны по респираторным болезням (ООО спецхоз «Вишневский» и ООО «Альфа» Воронежской области, ООО «Золотая Нива» Тамбовской области) или распространение их незначительное: в ООО «СГЦ» Воронежской области - заболеваемость поросят в подсосный период 2,5%, на доращивании 8,1% и откорме 3,2%, падеж соответственно 1,6; 0,6 и 0,2%, ООО «Центральное» Тамбовской области - заболеваемость на откорме 2,2-3,4%, падеж 0,17-0,27%.
2.2.2. Этиология респираторных болезней свиней
Этиология респираторных болезней поросят изучена в крупных свиноводческих хозяйствах: ЗАО «Краснодонское», ОАО Агрофирма «Ливенское мясо», ЗАО Агрокомбинат «Николаевский», ОАО «Русская АПК», ЖСХА «Верхнека-рачанская», ОАО «9-я пятилетка», ОАО «Вишневское», ООО «Золотая Нива», ООО «Центральное» с различной технологией и разным объемом производства.
Роль инфекционных патогенов
Проведенными исследованиями установлено, что ведущими возбудителями респираторных инфекций свиней во всех изученных неблагополучных хозяйствах являются микоплазмы (72,5%), цирковирус П типа (62,0%), вирус РРСС (42,7%), P. multocida (37,5%), S. cholerae suis (19,5%), в 71, 4 % хозяйств, кроме того A. pleuropneumoniae (12,4%); в 42,8% - Н. parasuis (10,5%); в 57,5% -хламидии (10,2%); в 71,4% - ассоциации Р. multocida и S. cholerae suis (9%), в 85,7% - Р. multocida и Strep, pneumoniae (10,5%), в 85,7% - P. multocida и A. pleuropneumoniae (7,5%) и в 57,1% хозяйств ассоциация P. multocida и Н. parasuis (6,4%). Во всех случаях вирусные инфекции осложнялись бактериальными возбудителями.
В 29,8% проб патологического материала изолированы ассоциации бактерий: P. multocida и S. cholerae suis (5,5-27,3%), P. multocida и Strep, spp. (7,318,2%), P. multocida и A. pleuropneumoniae (5,1-13,0%), P. multocida и H. parasuis (5,5-12,2%) (табл.2).
Таблица 2
Результаты бактериологических и молекулярно-генетических исследований патологического материала от свиней при респираторных болезнях__
Наименование хозяйств Возбудители
Вирус РРСС ЦВС-И Мико-плазмы Хла-мцции P. mul-tocida S. chol-erae suis H. parasuis A. pleuro-pneu-moniae P. multoci da+S. chol-erae suis P.muho-ridaf SUept pneumoniae P.multo-cidafH. parasuis P.multo cida+A. pleuro-pneu-moniae
ЗАО «Краснодонское» 23 11(47,8) 23 12 (52,2) 22 21 (95,5) 23 2 (8,7) 55 20 (36,4) 55 15 (27,3) 55 0 55 6 (10,9) 55 3 (5,5) 55 6 (10,9) 55 3 (5,5) 55 4(7,2)
ОАО «Ливен-ское мясо» 53 31 (58,5) 53 37 (69,8) 45 33 (73,3) 18 4 (22,2) 57 31 (54,4) 57 5 (8,8) 52 17 (29,8) 57 0 57 6 (10,5) 57 8 (14,0) 57 5 (8,8) 57 6 (10,5)
ОАО «Русская АПК» 25 6 (24,0) 25 И (68,0) 25 12 (52,2) 25 4 (16,0) 41 16 (39,0) 41 5 (12,2) 41 7 (17,1) 41 8 (19,5) 41 0 41 3 (7,3) 41 4 (9,7) 41 3 (7,3)
ЗАО «Николаевский» 30 5 (35,7) 30 22 (73,3) 30 23 (76,6) 24 2 (8,3) 41 11 (26,8) 41 8 (19,5) 41 4 (9,5) 41 10 (24,4) 41 9(21,9) 41 5 (12,2) 41 5 (12,2) 41 2 (8,3)
ЖСХА «Верх-некарачаиская» 11 6(54,6) 11 9(81,8) 11 8 (88,9) 11 0 11 2 (18,8) 11 1 (9,1) 11 0 11 0 11 3 (27,3) 11 2(18,2) Д 0 11 0
ОАО «9-я пятилетка» 10 2(20) 10 4(40) 10 7(70) 10 0 23 2 (8,7) 23 8 (34,8) 23 0 23 5 (21,7) 23 3 (13,0) 23 0 23 0 23 3 (13,0)
ОАО «Виш-невское» 6 5 (83,3) 6 3 (50,0) 6 4 (66,6) 6 Ö 39 18 (46,2) 39 10 (25,6) 39 0 39 4 (10,3) 39 0 39 4(10,3) 39 0 39 2(5,1)
Примечание: числитель-исследовано проб, знаменатель-положительно, количество%
В сыворотке крови больных поросят из всех хозяйств, занимающихся разведением обычных (конвенциональных) свиней, выявлены антитела к вирусу РРСС в 21,1-100,0%, цирковирусу II типа - 57,9-86,8% и пастереллам - в 26,3-100,0 % случаев. Кроме того установлена сероконверсия к микоплазмам в 45,9, 48,6 и 63,8% (ОАО «Ливенское мясо», ЗАО Агрокомбинат «Николаевский», ОАО «Русская АПК»), хламидиям в 40,0 и 65,8% (ЗАО «Краснодонское» и ОАО «Вишневское»), микоплазмам в 26,9; 26,3% и хламидиям в 30,8; 15,8% (ОАО «9-я пятилетка» и ЖСХА «Верхнекарачанская») проб соответственно.
У клинически здоровых поросят указанных хозяйств выявлены антитела к вирусу РРСС в 27,8-82,3%, цирковирусу II типа-27,8-58,3% и пастереллам-23,5-100,0% случаев. Кроме того, установлена сероконверсия к возбудителям мико-плазмоза у 38,9% животных в ОАО «Русская АПК» и 23,8% - в ЗАО Агрокомбинат «Николаевский», хламидиоза - у 23,8% в ЗАО «Краснодонское» и 8,3% в ОАО «9-я пятилетка». Наличие антител к возбудителям у клинически здоровых животных свидетельствует об их инфицированное™ и (или) скрытом переболевании.
Таким образом, в хозяйствах промышленного типа, занимающихся разведением обычных (конвенциональных) свиней, молекулярно-генетическими, бактериологическими и серологическими исследованиями установлено, что в возникновении и развитии респираторной патологии у свиней принимают участие вирус РРСС, цирковирус II типа, микоплазмы, хламидии, пастереллы, ге-мофилы и их ассоциации в различных сочетаниях.
В ООО «Золотая Нива», занимающегося разведением животных со статусом SPF (СВИБ), из патологического материала от животных, павших преимущественно от желудочно-кишечных болезней, выделены культуры Е. coli в 32,0%, S. cholerae suis в 16,0%, К. pneumoniae в 8,0% и S. typhimurium в 4,0% случаев. При молекулярно-генетическом исследовании легких от павших и убитых с диагностической целью поросят геномов возбудителей гемофилеза, актинобациллезной плевропневмонии, микоплазмоза, хламидиоза, пастерелле-за, РРСС и цирковироза не обнаружено, что свидетельствует о благополучии хозяйства по тестируемым инфекциям.
В аналогичном хозяйстве ООО «Центральное» в течение 3-х лет также не обнаруживали геномов микоплазм, гемофил, хламидий, пастерелл, вирусов РРСС и ЦВС - II, а после завоза племенного молодняка, по-видимому, из неблагополучного хозяйства в патологическом материале от павших поросят с ре-
спираторной патологией выявили геномы цирковируса II типа (41,7%) и мико-плазм (29,2%), выделены культуры P. multocida в 20,8%, S. cholerae suis в 28,5% и E.coli в 25,7% проб.
У клинически здоровых животных в ООО «Золотая Нива» установлено наличие антител к цирковирусу II типа в 56,2% случаев, свидетельствующее о его циркуляции у свиней.
Обнаружение у свиней ООО «Центральное» в 88,6% случаев антител к цирковирусу II типа и 6,8% проб к микоплазмам и их геномов в патологическом материале свидетельствует о циркуляции и участии этих возбудителей в респираторной патологии.
Антибиотикоустойчивость бактерий и ее этиологическое
значение
В работе использовано 727 культур микроорганизмов Р. multocida- 74, Strept. pneumoniae - 97, S. cholerae suis - 157, S. typhimurium - 90 и E. coli различных серовариантов - 309, выделенных при респираторных и желудочно-кишечных болезнях поросят. Микроорганизмы тестировали на чувствительность к 7 группам антибактериальных препаратов. Умеренно резистентные и резистентные микроорганизмы были объединены.
Уровень резистентности Р. multocida был высоким к ампициллину и ок-ситетрациклину и ниже к цефазолину, гентамицину, левомицетину и нитрофу-ранам, а наибольшая их чувствительность установлена к ципрофлоксацину.
Высокий уровень устойчивости Strept. pneumoniae выявлен к окситетра-циклину, несколько ниже он был к гентамицину, цефазолину, левомицетину, нитрофуранам и самый низкий - к ампициллину и ципрофлоксацину (табл.3).
Таблица 3
Частота резистентности ( %) бактерий к антимикробным препаратам
Культуры микроорганизмов Название препаратов
Ампициллин Окси-тетрациклин Гента-мицин Цефа-золин Ципро-флок-са-цин Лево-мице-тин Нитро-фура-ны
Р. multocida 52,0 66,5 40,0 39,2 26,5 42,5 39,7
Strept.pneumoniae 29,2 86,5 32,6 37,6 24,4 46,6 40,8
S.typhimurium 79,6 80,1 37,9 41,1 21,9 58,7 47,2
S. cholerae suis 80,4 83,2 43,8 48,3 25,9 68,3 57,8
E.coli 90,4 88,0 45,1 41,1 28,2 63,5 44,8
Выявлена высокая частота резистентности Е. coli, S. typhimurium и S. cholerae suis к ампициллину, окситетрациклину, несколько ниже к левомицети-ну и существенно ниже к гентамицину, нитрофуранам и цефазолину. Наибольшая их чувствительность установлена к ципрофлоксацину.
Таким образом, большинство выделенных культур были резистентны к окситетрациклину, ампициллину (кроме Strept. pneumoniae), гентамицину, цефазолину, левомицетину, нитрофуранам.
При анализе чувствительности микроорганизмов выявлена различная динамика развития резистентности к антибактериальным препаратам. Сформировавшаяся у микроорганизмов резистентность приводит к циркуляции среди поголовья антибиотикоустойчивых бактерий, являющихся потенциальными возбудителями респираторных и других болезней.
Факторы, предрасполагающие возникновению и способствующие развитию и распространению респираторных болезней свиней
В хозяйствах промышленного типа, занимающихся разведением обычных (конвенциональных) свиней, установлена повышенная бактериальная обсеме-ненность помещений для содержания животных всех технологических групп: превышение (норма 60-80 тыс.м.к. /м3) составляло в ЗАО «Краснодонское» в 4,5-6,8 раза; ОАО «Русская АПК» в 6,3-9,5; ООО «Вишневское» в 4,3-7,3; ОАО «Ливенское мясо» в 2,9-4,5 раза. Из воздуха помещений выделяли эшерихии различных серовариантов и сальмонеллы. Из нарушений параметров микроклимата регистрировали снижение температуры воздуха в помещениях в ЗАО «Краснодонское» на 8,7-9,3%, ОАО «Русская АПК» на 13,9-24,0%, ОАО «Ливенское мясо» на 5,6-13,6%, а в ООО «Вишневское», наоборот, повышение на 5,8-13,6%. В хозяйствах отмечали также снижение относительной влажности воздуха на 5,0-20,3%; 13,9-37,8%; 0-5,7% и 19,3-27,2%; скорости движения воздуха в 1,5; 1,4; 1,6-1,7 и 2 раза соответственно. Кроме того в воздухе секции для лактирующих свиноматок с поросятами 14-дневного возраста в ЗАО «Краснодонское» была выше допустимой нормы концентрация аммиака на 8,6%, в ООО «Вишневское» на 20,6%.
Корма по общей бактериальной обсемененности соответствовали требованиям ГОСТа, однако 80,0% комбикормов были контаминированы эшерихия-ми различных серовариантов, и в комбикормах для лактирующих свиноматок
(ОАО «Русская АПК») обнаружены плесневые грибы. Из воды, используемой для животных различных технологических групп, выделены эшерихии серова-риантов 0115, 020 и 0142 (ОАО «Русская АПК») и 0149, 0141, 0139 и 0127, а также Staph.saprophyticus (ЗАО «Краснодонское»),
При исследовании кормов и воды на наличие нитратов установлено их повышенное содержание в кормах («ЗАО Русская АПК» на 26,7-58,0%; ЗАО «Краснодонское» на 14,1-47,9%; ООО «Вишневское» на 12,5- 19,7%), в воде («ЗАО Русская АПК» на 26,7-46,0%; ЗАО «Краснодонское» на 14,1-90,7%; ОАО «Ливенское мясо» на 20,0%). Превышение ПДК по нитратам отмечено также в кормовой добавке «Hi Feed - 20%» и «Hi Feed - 15%» на 58,0%.
Исследованиями кормов и воды на содержание тяжелых металлов выявлены превышения ПДК по свинцу в кормах на 24,6-31,8% (ОАО «Русская АПК») и 18,5% (ООО «Вишневское»), в воде на 30,0% (ОАО «Ливенское мясо»), в кормах по кадмию на 43,4% (ООО «Вишневское») и в 1,5 раза (ОАО «Ливенское мясо»), по цинку в 1,4 раза (ОАО «Ливенское мясо»), железу в 1,7 раза (ООО «Вишневское») и 1,8 раза (ОАО «Ливенское мясо») и меди в 1,9-2,6 (ООО «Вишневское») и 1,6 раза (ОАО «Ливенское мясо»). В комбикормах СК-4, СК-6 обнаружен Т2-токсин в концентрации 0,05 мг/кг, не превышающий ПДК (ЗАО «Краснодонское»),
Таким образом, во всех указанных хозяйствах установлены нарушения температурно-влажностного режима, циркуляции воздуха, повышенная контаминация воздуха помещений, кормов и воды различными ксенобиотиками и микроорганизмами.
Многократными исследованиями крови у клинически здоровых животных всех возрастных групп в хозяйствах этого типа регистрировали пониженное содержание липидов (2,2-2,7г/л), глюкозы (2,2-3,5мМ/л), кальция (2,2-2,7мМ/л), витаминов А (0,33-0,74мкМ/л) и Е (4,6-5,1мкМ/л), повышение активности АлАТ (1,1-1,7мМ/лхч) и щелочной фосфатазы (1,2-1,9мМ/лхч), уровня мочевины (5,1-5,8 мг/л), фосфора (2,5-3,7мМ/л), свидетельствующие о нарушениях белкового, липидного, углеводного, минерального и витаминного обменов, функции печени. Переболевание значительной части поросят диареями сопровождалось снижением уровня естественной резистентности.
Следовательно, респираторные болезни в хозяйствах, укомплектованных обычными (конвенциональными) свиньями, являются типичными факторными
инфекциями, возникающими вследствие воздействия на животных присутствующих в среде обитания неблагоприятных факторов и носительства у них потенциально патогенных микроорганизмов и (или) контаминации ими внешней среды, которые выполняют роль разрешающего фактора.
Исследованиями, проведенными в ООО «Золотая Нива», установлено в 2-х пробах воды увеличение содержания железа до 1,9 и 15,6 мг/мл, превышающее ПДК в 6,5-52,0 раза, в комбикормах СК-3, СК-4, СК-5 и СК-6 обнаружен мико-токсин - зеараленон 0,01мг/кг, а в пробе СК-5 и Т-2-токсин-0,05 мг/кг в концентрациях, не превышающих ПДК, в 2-х пробах ячменя-токсин Т-2 в концентрации 0,015 и 0,245 мг/кг, что в 1,2 и 2,5 раза превышало ПДК.
При биохимическом исследовании сывороток крови поросят групп дора-щивания и откорма выявлено пониженное содержание липидов (на 12,7-16,4%), цинка (на 6,8-8,3%), железа (на 14,0-16,1%), увеличение концентрации фосфора (на 12,4 - 17,2%), активности щелочной фосфатазы (в 1,9 - 2,0 раза) и АлАТ (в 2,2-2,3 раза).
При биохимическом исследовании сывороток крови свиней в ООО «Центральное» выявлено пониженное содержание липидов (1,9-2,6 г/л) у животных всех групп, витамина Е у супоросных, лактирующих свиноматок и поросят группы доращивания, витамина А у ремонтных свинок и хряков, увеличение концентрации фосфора на 25,0% и активности щелочной фосфатазы на 27,3% у поросят группы доращивания.
Таким образом, в хозяйствах, укомплектованных животными со статусом СВИБ, выявлено наличие микотоксинов в кормах, у свиней отмечено нарушение функции печени, липидного обмена, кальциево-фосфорного отношения, обмена макро- и микроэлементов, однако при отсутствии циркуляции основных вирусных и бактериальных патогенов респираторная патология не зарегистрирована или распространение ее было незначительным.
2.2.3. Прогнозирование возникновения и развития респираторной патологии у поросят
Исследования проведены в ОАО Агрофирма «Ливенское мясо». Для опыта было подобрано 20 клинически здоровых животных 35 дневного возраста, от которых взяли кровь для проведения морфологических, биохимических и иммунологических исследований.
За животными вели клинические наблюдения и при повторном исследовании их в возрасте 70 дней разделили на две группы: первая - поросята, оставшиеся здоровыми (п=11), вторая - животные с клиническими признаками респираторной патологии (п=9).
У предрасположенных к заболеванию поросят выявлено повышенное содержание лейкоцитов на 11,4%, лимфоцитов на 5,7%, эозинофилов на 18,3%, в сыворотке крови были ниже содержание липидов на 7,6% и цинка на 8,8% и более высокий (на 16,9%) уровень МДА в крови.
У них же отмечено более низкое (на 10,9%) относительное количество Т-лимфоцитов. Отличительной особенностью их иммунного статуса являлось отсутствие у большинства животных теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов (с супрессорной активностью), о чем свидетельствовало наличие у них более высокого соотношения Ттфр/Ттфч-13,9, чем у клинически здоровых поросят-3,59. У них же наблюдалось пониженное процентное содержание В-лимфоцитов. У всех животных отмечены приблизительно равные концентрации в крови и ^А. Однако у впоследствии заболевших поросят наблюдалось высокое (на 38,5%) содержание в крови ^М, более низкие уровни ФАЛ и общей гемолитической активности комплемента и, наоборот, высокие значения -ФЧ и ФИ.
У заболевших поросят в 70 дневном возрасте отмечено повышение количества лейкоцитов на 22,0%, эозинофилов на 36,4%, что отражает наличие воспалительного процесса. У них же уровень у-глобулинов был на 22,0% выше, что сочеталось с увеличением содержания основных классов иммуноглобулинов в крови.
Респираторная патология у поросят сопровождалась интенсификацией процессов пероксидного окисления липидов, о чем свидетельствовали более высокие уровни МДА (в 1,2 раза) и молекулярных пептидов (на 30,0%) в крови, активность каталазы на 22,3% и глутатионпероксидазы на 31,3%.
У заболевших поросят отмечено достоверное увеличение относительного и абсолютного числа Т-клеток на 15,8%, преимущественно за счет Т-супрессоров. У животных обеих групп наблюдали практически одинаковое относительное и абсолютное содержание в крови В-лимфоцитов. При этом уровни 1§М и ^А в крови больных поросят превышали таковые у здоровых, соответственно - на 12,1; 15,2 и 17,7%.
Таким образом, одними из прогностических показателей, указывающих на развитие респираторной патологии у поросят, являются нарушение метаболического статуса, в частности интенсификация процессов ПОЛ и иммунноде-фицитное состояние животных, проявляющееся у них низкими показателями клеточных и гуморальных звеньев иммунитета еще до возникновения нозоло-гически дифференцируемой патологии.
2.2.4. Морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови у поросят с респираторной патологией
У больных поросят разных возрастов регистрировали повышение содержания лейкоцитов на 15,3-20,0%, эозинофилов на 21,7-32,8%, снижение уровня общего белка на 11,2-14,6%, глюкозы в 1,4 раза, низкое кальциево-фосфорное отношение (0,74:1-1,16:1) при повышенном содержании фосфора (в 1,3-1,9 раза) и высокой активности щелочной фосфатазы (в 1,4-3,2 раза), а также ферментов переаминирования (АсАТ в 1,8-2,1 и АлАТ в 1,4-3,2 раза).
Уменьшение количества общих липидов (2,18-2,84 г/л) в сыворотке крови у больных животных связано с активацией процессов пероксидного окисления, о чем свидетельствовало увеличение содержания малонового диальдегида (1,48-2,73 мМ/л) в 1,7-2,8 раза и повышение уровня эндогенной интоксикации (20,5-30,9 усл. ед.) на 37,2-42,1% .
У них также выявлено повышение концентрации а-глобулинов на 5,7 -11,1%, р- и у- глобулинов на 21,0-24,8 % и 25,0-26,1 % и снижение количества альбуминов на 26,8-36,8 %, увеличение комплементарной активности сыворотки крови до 9,36-13,2 % гем, фагоцитарной активности лейкоцитов до 90,0-93,2 %, ФЧ на 11,5-15,8% и ФИ на 7,2-17,1%, БАСК до 89,8-93,7 %, ЛАСК на 4,5-23,8% и уровней иммуноглобулинов М на 26,4-48,1% и в на 7,0-29,3%.
Проведенными исследованиями установлено, что возникновение и развитие респираторных болезней у поросят сопровождается нарушением обмена веществ, характеризующимся снижением содержания белков, липидов и выраженной остеодистрофией, функциональной недостаточностью печени, повышением содержания токсических продуктов пероксидного окисления липидов и уровня эндогенной интоксикации, активацией иммунного статуса животных.
2.2.5. Клинико-экспериментальное обоснование применения новых химпотерапевтических препаратов для профилактики респираторных
болезней и терапии
Комплексный препарат диоксинор
Препарат включает действующие вещества норфлоксацин и диоксидин в количественном соотношении (масса %) 5,0:1,0 и полимерную основу. Минимальные бактериостатические концентрации препарата составили для A. pleu-ropneumoniae и Н. parasuis 0,78 и 1,56 мкг/мл, Staphylococcus spp. и Streptococcus spp. - 0,78 -1,56 мкг/мл, P. multocida - 0,39-1,56 мкг/мл, E. coli и Salmonella spp. 0,39-0,78 мкг/мл.
Влияние бактерицидных концентраций диоксинора на ультраструктуру клеток пастерелл, золотистого стафилококка и эшерпхий
Клетки пастерелл (контроль) имели складчатую неровную поверхность, образованную трехслойной клеточной стенкой, отделенной периплазмой от более гладкой цитоплазматической мембраны. Цитоплазма гомогенная, заполнена электронно-плотным гранулярным компонентом. Рибосомальный аппарат выражен. Нуклеоид занимал значительную центральную часть клетки и был представлен рыхлой осмиофобной структурой (рис. 1а).
Клетки золотистого стафилококка обладали свойственной грамположи-тельным микроорганизмам клеточной стенкой с гладкой поверхностью и выраженным внутренним электронно-плотным слоем. Цитоплазматическая мембрана представляла собой одноконтурную структуру, плотно прилегающую к клеточной стенке. Цитоплазма заполнена мелкогранулярным компонентом. Ядерный материал локализовался в центре клетки и обнаруживался в виде светлых зон (рис. 1 б).
а Ув. 60000 б Уе. 50000 в Уе. 50000
Рис. 1 Контрольные клетки пастерелл (а), золотистого стафилококка (б) и эшерихий (в). КС - клеточная стенка, ЦПМ - цитоплазматическая мембрана, Р - рибосомы, МС - мезосо-малъные структуры, Ц - цитоплазма, Н - нуклеоид.
Клетки эшерихий имели типичную для грамотрицательных бактерий трехслойную клеточную стенку с наружным бимолекулярным липидо-протеиновым слоем, придающим ей волнистую поверхность. Слои клеточной стенки, пери плазматическое пространство и цитоплазматическая мембрана четко видны и дифференцированы. Цитоплазма гомогенна, нуклеоид хорошо просматривался и занимал большую часть цитоплазмы (рис.1 в).
Клетки пастерелл под влиянием диоксинора в минимальной бактерицидной концентрации увеличивались в размерах, принимали овальную или вытянутую палочковидную форму. Клеточная стенка истончалась, слои ее не дифференцировались. Цитоплазматическая мембрана была фрагментирована, в местах повреждения клеточной стенки ее не обнаруживали. Цитоплазма приобретала гомогенный вид и была представлена электронно-плотным мелкозернистым компонентом. Нуклеоид и рибосомальный аппарат не дифференцировались. В цитоплазме и зоне нуклеоида выявляли электронно-прозрачные участки лизиса (рис.2а).
В клетках золотистого стафилококка происходило утолщение клеточной стенки, разрыхление внешнего слоя. Цитоплазматическую мембрану выявляли не на всем протяжении. В местах утолщения клеточной стенки обнаруживали периплазматическое пространство. Цитоплазма приобретала гомогенный вид и имела неоднородную электронную плотность. В ней выявляли небольшие ограниченные светлые участки средней электронной плотности, расположенные по периферии клеток. Нуклеоид и рибосомальный аппарат слабо дифференцировались. У делящихся клеток в местах образования септ нарушалось формирова-
ние клеточной стенки и цитоплазматической мембраны. Разделившиеся клетки не расходились и образовывали скопления (рис.26).
Эшерихии под влиянием минимальной бактерицидной концентрации ди-оксинора удлинялись. Клеточная стенка истончалась, теряла трехслойную структуру, на полюсах клеток отмечали разрыхление ее наружного слоя. Цитоплазм атическую мембрану выявляли не на всем протяжении. Цитоплазма приобретала неоднородную электронно-оптическую плотность с мелкозернистой структурой. В ней обнаруживали электронно-прозрачные участки лизиса. Нук-леоид становился гомогенным и был менее электронно-плотным. Границы между нуклеоидом и цитоплазмой слабо просматривались. Рибосомальный аппарат не дифференцировался (рис.2в).
Рис. 2. Структурные изменения под воздействием диоксинора в клетках пастерелл (а), стафилококков (6), эшерихии (в). КС - клеточная стенка, ЦПМ - цитоплазматическая мембрана, Ц - цитоплазма, Н - нуклеоид, МС - мезосомальные структуры, С-септа, ПП - пе-риплазматическое пространство. ЭПУ - электронно-прозрачные участки, ОВ - осмиофшь-ные включения, Л - лизис.
Диоксинор в четырехкратной бактерицидной концентрации вызывал более выраженные изменения ультраструктуры пастерелл, золотистого стафилококка и эшерихий.
Формирование устойчивости бактерий к диоксинору и восстановление их чувствительности к препарату
а У в. -40000.
б У в. - 45000.
в Ув. -40000.
Минимальные бактериостатические концентрации диоксинора, составившие для Р. multocida В14 - 0,78мкг/мл, Staph. aureus 209 Р - 1,56 мкг/мл, S. cholerae suis и Е. coli 866 - 0,39 мкг/мл, после 20 пассажей в отношении пасте-
релл не изменились, стафилококков (3,12 мкг/мл), эшерихий и сальмонелл (0,78 мкг/мл) увеличились в 2 раза, 30 - повысились в 4 раза для пастерелл (3,12 мкг/мл), стафилококков (6,25 мкг/мл), эшерихий и сальмонелл (1,56 мкг/мл) и через 40 пассажей в отношении эшерихий и сальмонелл - в 8 раз (3,12 мкг/мл).
Коэффициент резистентности пастерелл и стафилококков к диоксинору составил 4, эшерихий и сальмонелл - 8; к диоксидину у пастерелл - 4, стафилококков и сальмонелл - 8, эшерихий -16, к норфлоксацину - у пастерелл, сальмонелл и эшерихий 4 и стафилококков -2.
МБсК диоксинора в отношении бактерий с сформировавшейся резистентностью, составившие для P. multocida В14 - 3,12 мкг/мл, Staph, aureus 209 Р - 6,25 мкг/мл, Е. coli 866 и S. cholerae suis - 3,12 мкг/мл, снизились в отношении пастерелл и стафилококков через 40 пассажей в 2 (1,56 и 3,12 мкг/мл соответственно), после 50 - в 4 раза (0,78 и 1,56 мкг/мл); для эшерихий и сальмонелл после 40 пассажей - в 2 раза (1,56 мкг/мл), 50 - в 4 раза (0,78 мкг/мл) и через 60 - в 8 раз (0,39 мкг/мл), достигнув исходных значений.
Профилактическая и терапевтическая эффективность днокспнора при экспериментальных инфекциях
Антимикробная активность препарата in vivo была изучена при инфекциях белых мышей, вызванных Р. multocida (200 тыс.м.к.), Staph, aureus 209Р (5 млн. м.к.), S. cholerae suis (2 млн. м. к.) и Е. coli 866 (2,5 млн.м.к.).
Проведенными исследованиями установлено, что эффективность диоксинора при профилактике сальмонеллёзной и эшерихиозной инфекций составила 75,0%, стафилококковой и пастереллезной 68,8%. Суммарная продолжительность жизни белых мышей составила: - 130, - 125 и 136 дней соответственно. Терапевтическая эффективность препарата составила: при сальмонеллезной, пастереллезной и эшерихиозной инфекциях - 87,5%, стафилококковой - 81,3%. Суммарная продолжительность жизни белых мышей составила: - 146, - 150, -145 и 141 день и в контроле - 43, 38, 41 и 35 дней соответственно.
Терапевтическая эффективность диоксинора
Клинические испытания терапевтической эффективности диоксинора проводили в ЗАО Агрокомбинат «Николаевский».
Для опыта было подобрано две группы больных поросят в возрасте 65-70 дней. Животным первой группы (п=35) применяли диоксинор в дозе 0,1 мл/кг массы тела, второй (п=31) - энрофлон 5% в дозе 0,1 мл/кг внутримышечно один раз в сутки в течение 10 дней.
Лечебная эффективность диоксинора составила 88,5%, энрофлона 5% -80,6%, выздоровление поросят при этом наступало на 8 и 9 дни.
После лечения диоксинором у животных отмечали снижение количества лейкоцитов на 14,7%, эозинофилов на 36,5%, палочкоядерных нейтрофилов в 2,7 раза, повышение содержания сегментоядерных нейтрофилов на 13,6%, альбуминов на 9,5%, уменьшение количества а-глобулинов на 13,5% и у-глобулинов на 13,1%, уровня МДА в 1,5 раза, молекул средней массы на 18,2% и активности ГПО на 29,7%, БАСК на 3,7%, КАСК - на 16,3% и клеточных факторов защиты - ФЧ - на 15,3%, ФИ - на 23,9%.
Таким образом, применение диоксинора обеспечивает выраженный терапевтический эффект, проявляющийся тенденцией к нормализации морфологических, биохимических и иммунологических показателей крови.
Терапевтическая эффективность днокспнора при применении его в сочетании с липотоном
Клинические испытания терапевтической эффективности препаратов проводили в ЗАО Агрокомбинат «Николаевский».
Для опыта подобрано две группы больных поросят в возрасте 45-55 дней. Животным первой группы (п=26) в течение 10 дней один раз в сутки применяли диоксинор внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг массы тела, второй (п=22) -диоксинор по аналогичной схеме и липотон в дозе 0,075 мл/кг внутримышечно на 1, 3, 5 и 7-й дни лечения.
Применение диоксинора в отдельности обеспечило выздоровление 81,8% животных, в сочетании с липотоном - 90,9%. Клиническое выздоровление животных наступало на 8 и 7 дни соответственно.
После лечения у поросят отмечено снижение количества лейкоцитов на 14,4% и 27,5%, лимфоцитов на 25,1% и 18,7% и увеличение содержания моноцитов в 9,3 и 4,8 раза соответственно, повышение активности аспартатамино-трансферазы на 6,4% и концентрации холестерина на 21% у животных первой группы, что обусловлено действием антимикробного препарата на печень. У
поросят второй группы происходило их уменьшение на 21,9% и 11,2% соответственно и гамма-глутамилтрансферазы на 7,9%. У последних отмечено снижение интенсивности процессов ПОЛ, проявляющееся уменьшением содержания МДА на 25,3%. У животных обеих групп выявлено снижение активности ГПО на 29,4 % и 35,0%, индекса эндогенной интоксикации на 11,2% и 53,9%, повышение активности каталазы на 65,9% и 35,3%, количества альбуминов на 9,4 и 27,4% и уменьшение содержания а-глобулинов на 5,6 и 28,9%, у-глобулинов на 11,8 и 18,0%, ФАЛ на 10,2 и 6,9%, ФЧ на 8,9 и 10,7%, ФИ на 7,0 и 5,7%, БАСК на 28,8 и 28,2%, КАСК на 44,9 и 48,4%, ЛАСК на 28,0 и 67,4% соответственно.
Таким образом, антибактериальная терапия в сочетании с липотоном способствовала стабилизации функционирования печени, снижала цитотоксиче-ский эффект диоксинора на ее клетки, в значительной степени нормализовала показатели, отражающие состояние системы ПОЛ-АОЗ, что указывает на гепа-то- и мембранопротекторные свойства липотона.
Комплексный препарат диоксиген
В состав диоксигена входят гентамицина сульфат и диоксидин в количественном соотношении (масса %) 4,0:1,0 и полимерная основа. Минимальные бактериостатические концентрации препарата составили для стафилококков и стрептококков 0,39-0,78 мкг/мл, пастерелл и гемофил - 0,78-3,12 мкг/мл, эше-рихий и сальмонелл - 3,12-6,25 мкг/мл.
Влияние бактерицидных концентраций препарата на ультраструктуру клеток пастерелл, золотистого стафилококка и эшерихий
Пастереллы под воздействием МБцК диоксигена принимали вытянутую, овальную или неправильную форму. Трехслойную структуру клеточной стенки обнаруживали не на всем протяжении. Цитоплазматическая мембрана дифференцировалась не на всем протяжении, в местах повреждения клеточной стенки ее не обнаруживали. Цитоплазма имела неоднородную электронно-оптическую плотность. В ней располагались разреженные участки средней электронной плотности. Нуклеоид дифференцировался слабо, в нем обнаруживали обширные электронно-прозрачные зоны с мелкой зернистостью (рис.За).
Клетки стафилококка под влиянием диоксигена незначительно увеличивались, происходило набухание внутреннего плотного слоя клеточной стенки и несимметричное ее утолщение. Цитоплазматическая мембрана выявлялась не на всем протяжении и просматривалась как одноконтурная структура. Цитоплазма имела различную электронно-оптическую плотность. Ядерный материал не дифференцировался. Рибосомальный аппарат не выявляли (рис.Зб).
А
/
ж
а У«. - 50000 б У в. - 50000 « У в.- 45000
Рис. 3. Структурные изменения под воздействием диоксигена в клетках пастерелл (а), стафилококков (6), эшерихий (в). КС - клеточная стенка, ЦПМ - цитоплазматическая мембрана, Ц- цитоплазма, Н - нуклеоид. МС - мезосомальные структуры, ЭПУ - электронно-прозрачные участки, ОВ - осмиофильные включения.
У эшерихий под влиянием диоксигена клеточная стенка теряла волнистость и четкость границ слоев. Цитоплазматическая мембрана просматривалась не на всем протяжении, на полюсах клетки происходило увеличение пе-риплазматического пространства с образованием разреженных полостей. Цитоплазма имела неоднородную оптическую плотность, вблизи цитоплазматиче-ской мембраны выявляли осмиофильные включения. Нуклеоид слабо дифференцировался (рис. Зв).
Высокая концентрация препарата (4 МБцК) вызывала более выраженную деструкцию всех бактерий.
Формирование устойчивости бактерий к диоксигену и восстановление их чувствительности к препарату
МБсК диоксигена, составившие для Р. multocida В14, Е. coli 866 и S. cholerae suis 3,12 мкг/мл, Staph. aureus 209 Р - 0,39 мкг/мл, увеличились в отношении пастерелл после 30 пассажей в 4 раза (12,5 мкг/мл), стафилококков через 10
пассажей - в 2 (0,78мкг/мл), 30 - в 16 (6,25 мкг/мл) и через 40 - в 32 (12,5 мкг/мл) раза; эшерихий и сальмонелл через 10 пассажей - в 2 раза (6,25 мкг/мл), 30 - в 8 (25,0 мкг/мл) и через 40 пассажей - в 16 (50,0 мкг/мл) раз. Коэффициент резистентности к диоксигену у пастерелл составил 4, стафилококков - 32, эшерихий и сальмонелл - 16; к диоксидину у пастерелл - 4, стафилококков и сальмонелл -8, эшерихий -16, к гентамицину - у пастерелл - 8, стафилококков - 128, сальмонелл и эшерихий - 64.
МБсК препарата в отношении бактерий с приобретенной резистентностью, составившие для P. multocida В14 и Staph, aureus 209Р - 12,5 мкг/мл, Е. coli 866 и S. cholerae suis -50,0 мкг/мл, снизились в отношении пастерелл после 40 пассажей в 2 (6,25 мкг/мл) и через 60 в 4 (3,12 мкг/мл) раза; стафилококков после 30 пассажей в 2 (6,25 мкг/мл), 40 - в 16 (0,78 мкг/мл) и через 50 пассажей в 32 раза (0,39 мкг/мл); для сальмонелл после 40 пассажей в 2 (25,0 мкг/мл), 60 -в 8 (6,25 мкг/мл) и через 80 пассажей в 16 (3,12 мкг/мл) раз и эшерихий после 40 пассажей в 2 (25,0 мкг/мл), 60 - в 4 (12,5 мкг/мл), через 70 и 80 пассажей в 8 (6,25 мкг/мл) и 16 (3,12мкг/мл) раз, достигнув исходных величин.
Профилактическая и терапевтическая эффективность диоксигена при экспериментальных иифекцнях
Антимикробная активность диоксигена in vivo изучена на белых мышах, экспериментально зараженных культурами P. multocida В 651 (200 тыс. м.к.), Staph, aureus 209Р (5 млн.м.к.), S. cholerae suis (2,5 млн. м.к.) и Е. coli 866 (2,5 млн. м.к.).
Эффективность препарата при профилактике стафилококковой инфекции составила 80,0%, сальмонеллезной и пастереллезной - 66,7%, и эшерихиозной 60,0%. Суммарная продолжительность жизни белых мышей составила: 131, 120, 117 и 109 дней соответственно. Применение препарата с терапевтической целью обеспечило сохранность животных при стафилококковой инфекции в 93,3%, пастереллезной и сальмонеллезной инфекциях в 80,0% и эшерихиозной - в 73,3% случаев. Суммарная продолжительность жизни белых мышей составила 146, - 140, - 141 и 124 дня, в контроле 50, 37, 40 и 34 дней соответственно.
Изучение эффективности диоксигена при лечении больных пневмонией поросят проведено в ОАО Агрофирма «Ливенское мясо».
Опыт проведен на поросятах 65-ти дневного возраста, которых с учетом общего состояния и тяжести заболевания разделили на 2 группы.
Поросятам опытной группы (п=93) применяли диоксиген 0,1 мл/кг массы тела внутримышечно 2 раза в сутки, контрольной (п=96) - энрофлокс 5% внутримышечно 0,1 мл/ кг массы тела 1 раз в сутки в течение 10 дней.
Терапевтическая эффективность диоксигена составила 81,3%, энрофлокса 5% - 76,0%. Животные выздоравливали на 8 и 9 дни при среднесуточном приросте массы тела 289±4,1г и 272±3,2г соответственно.
После лечения диоксигеном у животных отмечали снижение количества эозинофилов на 33,3%, палочкоядерных нейтрофилов в 2,4 раза, повышение содержания моноцитов на 14,0%, общего белка в сыворотке крови на 20,6%, альбуминов на 17,1%, уменьшение количества а-глобулинов на 17,1%, у-глобулинов - 13,1%, МДА в 1,5 раза, молекул средней массы на 26,6 %, ФЧ на 18,2% и ФИ на 18,6 и 16,9%.
Терапевтическая эффективность диоксигена при применении его в сочетании с липотоном
Клинические испытания терапевтической эффективности препаратов проводили в ЗАО Агрокомбинат «Николаевский».
Для опыта было подобрано две группы больных поросят в возрасте 45-55 дней. Животным первой группы (п=12) в течение 10 дней 2 раза в сутки применяли диоксиген внутримышечно в дозе 0,1 мл/кг массы тела, второй (п=13) -диоксиген по аналогичной схеме и липотон в дозе 0,075 мл/кг внутримышечно на 1, 3, 5 и 7-й дни лечения.
Применение диоксигена в отдельности обеспечило выздоровление 75,0 %, в сочетании с липотоном - 84,6% животных. Клиническое выздоровление поросят наступало на 8 и 7 дни соответственно.
После лечения у животных обеих групп отмечали снижение содержания лейкоцитов на 10,7 и 23,7%, лимфоцитов на 19,7 и 18,0% и увеличение количества моноцитов в 9,3 и 4,8 раза, свидетельствующие о затухании воспаления и
выздоровлении, а также уменьшение активности аспартатаминотрансферазы на 21,5 и 31,5%, гамма-глутамилтрансферазы - на 28,2 и 51,5% и уровня молекул средней массы в 1,8 и 1,3 раза, повышение содержания альбуминов на 11,3 и 25,9%, снижение уровня а-глобулинов на 14,2 и 21,7%, у-глобулинов на 3,4 и 19,7% и общих иммуноглобулинов на 5,7 и 20,6%, БАСК сыворотки крови на 21,4 и 24,7%, ФАЛ, ФЧ, ФИ и увеличение ЛАСК, особенно у поросят второй группы (на 31,2%).
Таким образом, применение диоксигена в сочетании с липотоном обеспечивает более выраженный терапевтический эффект, при этом уменьшалось токсическое действие антимикробного препарата, что проявлялось в нормализации биохимических показателей крови, а более выраженное снижение напряженности факторов неспецифической клеточной и гуморальной защиты свидетельствовало об иммуномодулирующих свойствах липотона.
Комплексный препарат тилоколип
В состав препарата входят действующие вещества: колистин и тилозин в количественном соотношении (масса %) 5,0:5,0 и полимерная основа. Минимальные бактериостатические концентрации препарата составили в отношении стафилококков 0,78-1,56 мкг/мл, стрептококков - 1,56-3,12; пастерелл - 0,390,78; гемофил - 0,78-1,56; эшерихий - 0,19-3,12 и сальмонелл - 0,39-3,12 мкг/мл.
Влияние различных бактерицидных концентраций препарата на ультраструктуру пастерелл, золотистого стафилококка н эшерихий
Пастереллы под влиянием минимальной бактерицидной концентрации тилоколина принимали более вытянутую форму. Клеточная стенка утолщалась. На ее поверхности отмечали появление рыхлого материала, который являлся частью наружного слоя. Трехслойную структуру клеточной стенки и цито-плазматическую мембрану обнаруживали не на всем протяжении. Цитоплазма имела неоднородную электронно-оптическую плотность. Ядерный материал выявлялся слабо (рис.4а).
а Ув.-36000 б Уе. - 36000 в Ув.-29000
Рис.4. Клетки пастерелл (а), стафилококков (б) и эшерихий (в) под воздействием тилоколина. КС - клеточная стенка, ЦПМ - цитоплазматическая мембрана, MC - мезосомальные структуры, Ц - цитоплазма, Н - нуклеоид, Р - рибосомы, ПП - периплазматическое пространство, ИКС- лизис клеточной стенки, OB - осмиофильные включения, Л - лизис.
В клетках стафилококков под влиянием препарата происходило утолщение стенки. Клетки незначительно увеличивались в размерах. Цитоплазматиче-ская мембрана выявлялась не на всем протяжении. Содержимое цитоплазмы было представлено дисперсным веществом неоднородной электронно-оптической плотности. Ядерный материал дифференцировался слабо. Рибосо-мальные гранулы не выявляли (рис.46).
Клетки эшерихий под воздействием тилоколина увеличивались в размере. Клеточная стенка теряла четкие границы слоев, цитоплазматическая мембрана в некоторых местах не обнаруживалась. На полюсах ряда клеток наблюдали расслоение внешней оболочки с появлением на поверхности компонентов клеточной стенки, у отдельных - частичный лизис всей мембраны с выходом содержимого цитоплазмы в межклеточное пространство (рис.4в).
Высокая концентрация тилоколина (4МБцК) вызывала более выраженные деструктивные изменения в ультраструктуре всех бактерий.
Формирование устойчивости бактерий к тилоколину и восстановление их чувствительности к препарату
МБсК тилоколина, составившие для P. multocida и S. cholerae suis - 0,39 мкг/мл, Staph, aureus 209Р - 0,78 мкг/мл и Е. coli 866 - 0,19 мкг/мл, увеличились
в отношении пастерелл после 10 пассажей в 2 и 20 - в 8 раз (коэффициент резистентности - 8), золотистого стафилококка в 2 и 4 раза и через 30 пассажей - в 8 раз (коэффициент резистентности - 8), эшерихий и сальмонелл в 16, 32 и 64 раза (коэффициент резистентности - 64) соответственно.
Повышения резистентности микроорганизмов к колистину не установлено, а коэффициент устойчивости их к тилозину составил у пастерелл > 256, стафилококков > 4102, эшерихий и сальмонелл >2051.
МБсК препарата снизились в отношении пастерелл через 10 пассажей на средах без тилоколина в 2 и после 20 - в 8 раз, стафилококков через 20 пассажей - в 2 раза, 30-в4и60-в8 раз, сальмонелл после 10 - в 2 раза, 20 - в 4, 40 - в 8, 60 - в 32 и через 70 пассажей - в 64 раза, эшерихий после 10 в 2 раза, 40 - в 4, 60 -в 8, 70- в 16 и через 80 пассажей - в 64 раза, достигнув исходных значений.
Приобретенная устойчивость к тилоколину у всех микроорганизмов была нестабильной. Восстановление чувствительности до исходного уровня происходило у пастерелл через 20, у остальных микроорганизмов после 60-80 пассажей.
Профилактическая н терапевтическая эффективность тилоколина при экспериментальных инфекцнях
Антимикробная активность препарата in vivo была изучена при инфекциях белых мышей, вызванных P. multocida (150 тыс.м.к.), Staph, aureus 209Р (5 млн. м.к.), S. cholerae suis (2 млн.м.к.) и Е. coli 866 (4 млн.м.к.).
Применение тилоколина с профилактической целью предупреждало развитие стафилококковой инфекции в 75,0%, сальмонеллезной и пастереллезной в 68,8% и эшерихиозной - в 62,5% случаев. Суммарная продолжительность жизни белых мышей при профилактике экспериментальных инфекций составила: -132, - 129, - 128 и - 126 дней соответственно. Применение тилоколина с лечебной целью обеспечило сохранность животных при стафилококковой, сальмонеллезной и пастереллезной инфекциях в 87,5%, эшерихиозной - в 81,3% случаев. Суммарная продолжительность жизни белых мышей составила: - 147, -146, - 146 и - 142 дня, в контроле - 44, 40 и 39 дней соответственно.
Опыт проведен в ОАО Агрофирма «Ливенское мясо» на больных поросятах 40-45 дневного возраста, которых разделили на 2 группы с учетом их общего состояния и тяжести заболевания.
Поросятам опытной группы (п=30) применяли тилоколин внутримышечно в дозе 0,075 мл/кг массы тела, группы сравнения (п=29) - байтрил внутримышечно - 0,05 мл/кг массы тела 1 раз в сутки в течение 10 дней.
Лечебная эффективность тилоколина составила 93,3%, байтрила-86,2%. Поросята выздоравливали на 7 день лечения, среднесуточный прирост массы тела составил 150 г и 140г соответственно.
У животных опытной группы отмечено повышение уровня общего белка на 18,1%, альбуминов на 15,6%, снижение содержания а - глобулинов на 19,0% и молекул средней массы на 10,4%. У них же отмечали увеличение ФЧ и ФИ -на 23,8 и 14,3% и повышение КАСК - на 28,0%.
Терапевтическая эффективность тнлоколина при применении его в сочетании с липотоном
Клинические испытания терапевтической эффективности препаратов проведены в ОАО Агрофирма «Ливенское мясо».
Опыт проведен на поросятах 2,5-месячного возраста. Животным первой группы (п=16) применяли внутримышечно тилоколин в дозе 0,075 мл/кг массы тела 1 раз в сутки в течение 10 дней, второй (п=14) - тилоколин по аналогичной схеме и липотон в дозе 0,075 мл/кг массы тела внутримышечно 1 раз в сутки на 1, 3, 5 и 7 дни опыта.
Терапевтическая эффективность тилоколина составила 87,5% и в сочетании с липотоном - 92,8%. Выздоровление наступало на 7,7 и 7-й день соответственно при среднесуточном приросте массы тела 290± 8,2 г. и 304±5,1 г.
При применении тилоколина в сочетании с липотоном у поросят отмечено снижение количества лейкоцитов на 12,9% и эозинофилов на 35,5%, а также лимфоцитов на 17,5% (1 группа) и 16,0% (2 группа), повышение содержания сегментоядерных нейтрофилов соответственно на 12,5 и 25,7% и моноцитов в 1,5 раза (1 группа), альбуминов на 17,0 и 6,1%, уменьшение количества а-глобулинов на 33,5 и 13,1%, у-глобулинов на 4,1% и 9,1%, уровня МДА на
фоне снижения активности каталазы на 6,0 и 8,0% и селензависимой ГПО на 25,5 и 20,4%. У всех поросят увеличилось относительное количество Т-лимфоцитов на 8,5 и 17,6%, а у животных 1 -й группы - относительный уровень В-клеток - на 22,9 %, 2-й - не изменился. Содержание IgG в крови соответственно увеличилось - на 19,1% и снизилось на 11,5%. Отмечено снижение БАСК на 3,7% и 6,2%, КАСК - на 6,3 и 16,3%, ЛАСК - на 15,0 и 20,0%, ФАЛ -на 8,6 и 7,4%, ФЧ - на 36,6 и 21,3%, ФИ - на 30,9 и 14,2% соответственно.
Таким образом, применение тилоколина, особенно в сочетании с липото-ном обеспечивает высокий терапевтический эффект, проявляющийся нормализацией клеточного состава крови, протеинограммы, оптимизацией показателей, отражающих состояние системы ПОЛ-АОЗ, а также клеточного и гуморального звеньев общей неспецифической резистентности организма.
Неантибиотический препарат цидисепт-о
Цидисепт-о - препарат для орального применения, содержащий в своем составе 0,2% альдегида циминаля (пара-нитро-а-хлоркоричный альдегид). МБсК препарата составили в отношении пастерелл и гемофил 6,25-12,5 мкг/мл, стафилококков и стрептококков - 3,12- 6,25 мкг/мл, эшерихий и сальмонелл 12,5 мкг/мл - 25,0 мкг/мл.
Влияние различных ба1сгерицидных концентраций препарата на ультраструктуру клеток пастерелл, золотистого стафилококка
и эшерихий
Большинство клеток пастерелл под влиянием цидисепта-о в минимальной бактерицидной концентрации увеличивалось в размерах и принимало овальную или вытянутую палочковидную форму. Пастереллы различались по форме, размерам и электронной плотности, характеризовались истонченной клеточной стенкой и сглаженностью контуров ее наружной мембраны. Цитоплазматиче-ская мембрана обнаруживалась не на всем протяжении. Цитоплазма была гомогенной, неоднородной электронно-оптической плотности. Нуклеоид слабо дифференцировался. У значительного числа клеток обнаруживали ограниченные участки лизиса (рис.5а).
а Ун. - 29000 б У в. - 36000 в Уе. - 36000
Рис.5 Клетки пастерелл (а), золотистого стафилококка (б) и эшерихий (в) под воздействием цидисепта-о. КС - клеточная стенка, ЦПМ - цитоплазматическая мембрана. Ц- цитоплазма, МС - мезосомальные структуры, Ц - цитоплазма, Н - нуклеоид, Р - рибосомы, С -септа, ОВ - осмиофильные включения, Л -лизис, ЛН - лизис нуклеоида, ЛЦ- лизис цитоплазмы, ЛКС - лизис клеточной стенки.
Стафилококки под влиянием цидисепта-о приобретали слегка вытянутую форму. Клеточная стенка утолщалась, слои были слабо дифференцированы. Цитоплазматическая мембрана выявлялась не на всем протяжении и просматривалась как одноконтурная структура. На измененных участках клеточной стенки ее не обнаруживали. В местах образования септ слои клеточной стенки и цитоплазматическую мембрану не выявляли. Цитоплазма имела неоднородную электронно-оптическую плотность с трудно различимым нуклеоидом и электронно-плотными включениями. Рибосомальные структуры не дифференцировались (рис.56).
Эшерихии под воздействием цидисепта-о значительно увеличивались в размере. Клеточная стенка заметно утолщалась за счет разрыхления наружного слоя, который образовывал неравномерные выступы. Ее слои теряли четкость границ и дифференциацию. Цитоплазматическую мембрану выявляли не на всем протяжении, наблюдали участки частичного лизиса и отслоения от цитоплазмы. Цитоплазма приобретала зернистый вид неоднородной электронно-оптической плотности. В клетках терялась четкость границ между нуклеоидом и цитоплазмой. Рибосомальные комплексы не дифференцировались. Процессы деления нарушались, в местах перетяжки между делящимися клетками клеточная стенка не образовывалась (рис.5в).
Высокая концентрация препарата (4МБцК) приводила к более существенным деструктивным изменениям в клетках пастерелл, золотистого стафилококка и эшерихий.
Формирование устойчивости бактерий к цидисепту-о и восстановление их чувствительности к препарату
МБсК цидисепта-о, составившие для Staph, aureus 209Р - 1,56 мкг/мл, Р. multocida, Е. coli 866 - 12,5 мкг/мл и S. cholerae suis - 25,0 мкг/мл, увеличились в отношении пастерелл и золотистого стафилококка после 10 пассажей в 4 (50,0 и 6,25 мкг/мл) и 20 - в 8 раз (100 и 12,5 мкг/мл), сальмонелл после 10 пассажей - в 4 (100 мкг/мл) и эшерихий в 8 раз (100 мкг/мл). Коэффициент резистентности эшерихий, стафилококков и пастерелл составил 8, сальмонелл - 4.
МБсК препарата снизились в отношении эшерихий и пастерелл через 20 пассажей на средах без цидисепта-о в 2, 40 - в 4 и 70 в 8 раз; сальмонелл после 20 пассажей в 2 и 40 - в 4 раза и стафилококков после 40 пассажей в 2 и 50 - в 8 раз, достигнув исходных уровней.
Профилактическая и терапевтическая эффективность цндпсепта-о при экспериментальных инфекциях
Антимикробная активность цидисепта-о in vivo изучена при инфекциях белых мышей, вызванных Р. multocida (200 тыс.м.к.), Staph.aureus 209Р (5 млн. м.к.), S. cholerae suis (2 млн.м.к.) и Е. coli (3 млн.м.к.).
Эффективность цидисепта-о при профилактике сальмонеллезной и эшерихиозной инфекций составила 64,3%, стафилококковой и пастереллезной -57,1%. Суммарная продолжительность жизни белых мышей составила: - 130, -119, - 106 и 106 дней соответственно.
Лечебная эффективность цидисепта-о при эшерихиозной инфекции составила 85,7%, сальмонеллезной и стафилококковой - 78,5 и пастереллезной -71,4 %. Продолжительность жизни белых мышей составила -136, - 137, 131 и 118 дней, в контроле - 40, 38, 42 и 46 дней соответственно.
В ОАО Агрофирма «Ливенское мясо» было подобрано 65 поросят 40-45-дневного возраста, которых разделили на 2 группы с учетом общего состояния и тяжести заболевания.
Поросятам опытной группы (п=35) применяли внутрь цидисепт-о из расчета 0,5 мл/кг массы тела, второй (п=30) - энрофлокс - 2 мл на животное 1 раз в сутки в течение 10 дней.
Терапевтический эффект цидисепта-о составил 80,0%, энрофлокса -83,3 %. Выздоровление животных наступало на 8-й день.
После лечения у поросят опытной группы отмечены повышение содержания моноцитов на 25,0%, сегментоядерных нейтрофилов на 9,9%, общего белка на 12,1%, обеих групп - снижение количества а-глобулинов на 15,6 и 11,4%, увеличение уровня у-глобулинов на 11,1 и 7,5% до величины физиологических показателей. После лечения цидисептом-о у животных существенно повысились КАСК на 15,0%, ФЧ и ФИ - на 49,2 и 41,3%, снизилась ЛАСК на 7,2%.
Терапевтическая эффективность цидисепта-о при применении его в сочетании с липотоном
Клинические испытания препаратов проведены в ОАО Агрофирма «Ливенское мясо» на 24 больных животных 2-х месячного возраста.
Поросятам первой группы (п=14) применяли цидисеггт-о перорально в дозе 0, 5 мл/кг массы тела 1 раз в сутки, второй (п=12) - цидисепт-о по аналогичной схеме и липотон в дозе - 0, 075 мл/ кг массы тела внутримышечно 1 раз в 2 дня. Лечение проводили в течение 10 дней.
Терапевтический эффект цидисепта-о в отдельности составил 85,7%, в сочетании с липотоном 91,7%. Выздоровление животных наступало на 8 и 7 дни соответственно.
После лечения у поросят обеих групп, особенно у животных второй группы, отмечено снижение количества лейкоцитов на 13,0 и 16,8%, а-глобулинов на 21,5%, у-глобулинов на 8,7% и повышение уровня альбуминов на 4,8 и 17,7%, а также снижение интенсивности процессов ПОЛ, проявляющееся уменьшением содержания МДА на 19,6 и 24,3% и явлений эндогенной интоксикации на 3,9 и 6,2%, увеличение относительного уровня Т-клеток соответ-
ственно - на 2,9 и 12,7%, у первых из них также B-клеток на 32,3% при тенденции к снижению их у животных 2-й группы, что отразилось на уменьшении уровней IgG в крови - на 5,6% и 22,1%, снижении БАСК - на 11,7 и 9,25%, ЛАСК - на 10,2 и 37,7%, ФЧ - на 11,7 и 26,9%, ФИ - на 11,4 и 22,9%, у поросят 2-й группы кроме того и ФАЛ - на 4,8%.
Таким образом, цидисепт-о, особенно в сочетании с липотоном, обладает выраженным терапевтическим эффектом, проявляющимся тенденцией к нормализации морфологических, биохимических и иммунологических показателей крови.
Проведенные исследования свидетельствуют о необходимости включения в комплекс терапевтических мероприятий при респираторных болезнях поросят антибактериальных средств в сочетании с препаратами, нормализующими морфологические и биохимические показатели крови и обладающими иммуно-модулирукяцим действием.
2.2.6. Профилактика респираторных болезней свиней
Специфическая профилактика бактериальных респираторных инфекций свиней
Изучение эффективности специфической профилактики респираторных болезней бактериальной этиологии проведено в ОАО «Русская АПК».
Из патологического материала от убитых с диагностической целью больных пневмонией поросят выделены Р. multocida (39,1%), А. pleuropneumoniae (8,6%), Н. parasuis (17,4%), S. cholerae suis (30,4%), из пораженных легких выявлены геномы вируса РРСС (24,3%), цирковируса И типа (72,2%), микоплазм (48,8%), хламидий (48,2%).
Опыт проведен на 3 группах поросят. Для иммунизации животных использовали вакцины, антигенный состав которых частично или максимально соответствовал таковому у полевых изолятов, участвующих в возникновении и (или) развитии патологии.
Животных первой группы (п=2387) в возрасте 12 и 20 дней иммунизировали против пастереллёза, гемофиллёза и сальмонеллёза, второй (п=2320) - на 7 и 21 дни против микоплазмоза, 12 и 21 дни - против сальмонеллёза и 40 и 54 дни - против пастереллёза, третьей группы (п=2277) - на 7 и 21 дни против ми-
коплазмоза, 21 и 50 дни - против сальмонеллёза, 30 и 50 дни - против пастерел-лёза и гемофиллёза.
За животными в течение всего периода доращивания и откорма проводили клинический осмотр, учитывали заболеваемость респираторной патологией, вынужденный убой и падеж. При послеубойном осмотре на мясокомбинате определяли частоту поражения легких.
У значительной части поросят всех групп в период доращивания и откорма регистрировали респираторную патологию: в первой группе заболело 835 голов (35,0%), второй - 440 (19,0%) и в третьей - 319 (14,0%).
Падёж и вынужденный убой от респираторных болезней составили в первой группе 36 (1,5%) и 81 (3,4%), второй - 17 (0,73%) и 32 (1,4%) и в третьей группе - 18 (0,79%) и 30 (1,3%) животных.
При послеубойном осмотре патологию легких выявили в первой группе в 30,1%, второй - в 16,3 и в третьей - 11,9% случаев.
Проведенными исследованиями установлено, что иммунизация поросят против пастереллеза, гемофилеза и сальмонеллеза (первая группа), возбудители которых являются вторичными патогенами респираторного тракта, в незначительной степени предупреждала возникновение патологии (заболеваемость составила 35%, при среднем показателе 42,2%). Вакцинация животных против инфекций (вторая группа), возбудители которых относят к основному (М. Ьу-орпеитотае) и вторичным (пастереллы, сальмонеллы) патогенам, обеспечивала более выраженный профилактический эффект (заболеваемость составила 19,0%). Наиболее низкую заболеваемость (14,0%) регистрировали в третьей группе животных, для иммунизации которых использовали биопрепараты, антигенный состав которых максимально соответствовал таковому у полевых бактериальных изолятов.
Профилактика респираторных болезней свиней с применением биопрепаратов в сочетании с антимикробнылш средствами и химиопрофилактика
Изучение эффективности иммунизации поросят против респираторных болезней в отдельности и в сочетании с антимикробными препаратами, их хи-миопрофилактики проведено в ООО «Центральное». Заболеваемость животных на доращивании и откорме составляла 20-30%. Из патологического материала
от павших и вынужденно убитых поросят с респираторной патологией выделяли P.multocida (20,8%) и S. cholerae suis (25,7%), в пораженных легких обнаружены геномы ЦВС II типа (41,7%) и М. hyopneumoniae (29,2%).
Опыт проведен на 6 группах животных. Поросят-сосунов 1-й (п=112), 2-й (п=109) и 3-й (п=348) групп в возрасте 18-21 день иммунизировали против цир-ковирусной инфекции вакциной «Порцилис PCV» и микоплазмоза - «М+РАС» фирма «Intervet» и после перевода в 28-30 дневном возрасте на доращивание им в течение 5 дней 1раз в сутки применяли соответственно тилоколин-о в дозе 0,5г/10кг массы тела, цидисепт-о 0,5 мл/кг массы тела и доксициклин согласно наставлению.
В этот же корпус для доращивания переведены поросята 4-ой (п=110), 5-ой (п=117) и 6-ой (п=403) групп такого же возраста, которые не были вакцинированы против указанных инфекций, но по аналогичной схеме обработаны тилоколином-о, цидисептом-о и доксициклином соответственно.
За животными в период доращивания (60 дней) проводили клиническое наблюдение, учитывали заболеваемость и падеж от болезней органов дыхания.
Наиболее высокий эффект при профилактике респираторных болезней поросят на доращивании достигнут при проведении иммунизации их против цирковироза и микоплазмоза в сочетании с применением в критический период (перевод на доращивание) антимикробных препаратов тилоколина-о (97,4%) и цидисепта-о (96,3%), несколько ниже (91,4%) он был при обработке вакцинированных животных доксициклином.
Химиопрофилактика респираторных болезней поросят с использованием тилоколина-о (92,7%), цидисепта-о (89,8%) и доксициклина (90,1%) по эффективности уступала комплексному применению био- и химиопрепаратов.
Выводы:
1. В хозяйствах промышленного типа, занимающихся разведением обычных (конвенциональных) свиней в течение 20-30 лет и более, респираторные болезни, как правило, инфекционной этиологии, регистрируются на протяжении всего технологического цикла. Наиболее высокие заболеваемость, падеж и вынужденный убой регистрируются в период их доращивания и откорма, удельный вес которых в общей патологии составляет более 50%.
Вновь созданные и реконструированные хозяйства, укомплектованные свиньями со статусом SPF (СВИБ), благополучны по респираторной патологии или распространение её незначительное (менее 8,0%).
2. Ведущими возбудителями респираторных инфекций свиней во всех изученных неблагополучных хозяйствах являются микоплазмы (72,5%), цирко-вирус II типа (62,0%), вирус РРСС (42,7%), P. multocida (37,5%), S. cholerae suis (19,5%), в 71, 4 % хозяйств, кроме того A. pleuropneumoniae (12,4%); в 42,8% -Н. parasuis (10,5%); в 57,5% - хламидии (10,2%); в 71,4% - ассоциации P. multocida и S. cholerae suis (9%), в 85,7% - Р. multocida и Strep, pneumoniae (10,5%), в 85,7% - P. multocida и A. pleuropneumoniae (7,5%) и в 57,1% хозяйств ассоциация P. multocida и Н. parasuis (6,4%). Во всех случаях вирусные инфекции осложнялись бактериальными возбудителями. В 29,8% проб патологического материала изолированы ассоциации бактерий: P. multocida и S. cholerae suis (5,5-27,3%), P. multocida и Strep, spp. (7,3-18,2%), P. multocida и A. pleuropneumoniae (5,1-13,0%), P. multocida и H. parasuis (5,5-12,2%).
В легких павших и убитых с диагностической целью поросят из хозяйств, укомплектованных животными со статусом SPF, возбудителей РРСС, циркови-роза, микоплазмоза, актинобациллезной плевропневмонии, хламидиоза, пасте-реллеза и гемофилеза не выявлено.
3. У выделенных бактерий при респираторных и желудочно-кишечных болезнях поросят установлена высокая частота резистентности к широко применяемым в ветеринарной практике препаратам: у пастерелл к ампициллину (52,0%), окситетрациклину (66,5%), гентамицину (40,0%), цефазолину (39,2%), ципрофлоксацину (26,5%), левомицетину (42,5%) и нитрофуранам (39,7%), стрептококков - 29,2%; 86,5; 32,6; 37,6; 24,4; 46,6 и 48,8%; сальмонелл - 80,4%; 83,2; 43,8; 48,3; 25,9; 68,3 и 57,8%, эшерихий - 90,4%; 88,0; 45,1; 41,1; 28,2; 63,5 и 44,8% соответственно. Сформировавшаяся у микроорганизмов резистентность приводит к циркуляции среди поголовья антибиотикоустойчивых бактерий, являющихся потенциальными возбудителями болезней.
4. Возникновению и развитию респираторных болезней у свиней способствуют повышенная бактериальная обсемененность воздуха помещений для содержания животных всех технологических групп, нарушения температурно-влажностного режима, контаминация кормов и воды энтеропатогенными эше-
рихиями и превышение в них ПДК по нитратам и солям тяжелых металлов, нарушения биохимического и иммунного статуса, переболевание диареей.
5. Наиболее информативными показателями для прогнозирования респираторных болезней у поросят являются иммунодефицитное состояние животных, проявляющееся у них низкими показателями клеточных и гуморальных звеньев иммунитета еще до возникновения нозологически дифференцируемой патологии, и интенсификация процессов ПОЛ, сопровождающаяся избыточным накоплением токсических продуктов, оказывающих угнетающее действие на молекулярную структуру циркулирующих в организме неспецифических гуморальных факторов иммунитета.
6. Развитие клинических признаков респираторной патологии у поросят сопровождается повышением содержания в крови лейкоцитов на 15,3-20,0%, эозинофилов на 21,7-32,8%, нарушением обмена веществ, характеризующимся снижением количества общего белка на 11,2-14,6% и изменением его протеино-граммы, проявляющимся уменьшением содержания альбуминов на 26,8-36,8% и увеличением уровня а-глобулинов на 5,7-11,1%, Р- и у- глобулинов на 21,024,8% и 25,0-26,1% соответственно, снижением количества глюкозы более чем в 2 раза, липидов и выраженной остеодистрофией, функциональной недостаточностью печени, повышением содержания токсических продуктов пероксид-ного окисления липидов в 1,7-2,8 раза и уровня эндогенной интоксикации на 37,2-42,1%, активацией гуморальных и клеточных показателей общей резистентности и иммунного статуса.
7. Комплексный препарат диоксинор, содержащий норфлоксацин и диок-сидин в количественном соотношении (масса %) 5,0:1,0 и полимерную основу, обладает высокой активностью и широким спектром антимикробного действия за счет синергизма составляющих компонентов.
7.1. Минимальные бактериостатические концентрации препарата составили в отношении A. pleuropneumoniae 1,56 мкг/мл; Н. parasuis - 0,78; Staphylococcus spp. - 1,56; Streptococcus spp.- 0,78-1,56; P. multocida - 0,39-1,56; E. coli -0,39 и Salmonella spp. - 0,78 мкг/мл.
7.2. Ультраструктурные изменения в клетках пастерелл, золотистого стафилококка и эшерихий под влиянием бактерицидных концентраций диоксино-ра обусловлены воздействием диоксидина на клеточную стенку, нарушающим ее компактность и повышающим проницаемость, и синергидным эффектом ди-
оксидина и норфлоксацина, обладающих различными механизмами действия, на генетический аппарат клетки, проявляющимся нарушением процессов деления бактериальных клеток.
7.3. Резистентность микроорганизмов к диоксинору развивается медленно и характеризуется низким коэффициентом: у эшерихий и сальмонелл 8, пасте-релл и стафилококков - 4. Приобретенная устойчивость к препарату нестабильна и восстановление чувствительности пастерелл и золотистого стафилококка происходит через 50, эшерихий и сальмонелл - 60 пассажей.
7.4. Диоксинор обладает выраженной терапевтической эффективностью при экспериментальных инфекциях белых мышей, вызванных P. multocida, S. cholerae suis и Е. coli (87,5%) и Staph, aureus (81,3%), респираторных болезнях свиней бактериальной этиологии (81,8-87,1%). Высокая (90,9%) лечебная эффективность препарата при использовании его в сочетании с иммуномодули-рующим средством - липотон, сопровождается выраженной тенденцией к нормализации морфологических и иммунологических показателей крови, стабилизацией функционирования печени, снижением цитотоксического действия ди-оксинора на её клетки.
8. Комплексный препарат диоксиген, содержащий гентамицина сульфат и диоксидин в количественном соотношении (масса %) 4,0:1,0 и полимерную основу, обладает высокой антимикробной активностью и широким диапазоном действия.
8.1. Минимальные ингибирующие концентрации препарата составили в отношенга стафилококков и стрептококков 0,39-0,78 мкг/мл, пастерелл и ге-мофил - 0,78-3,12, эшерихий и сальмонелл - 3,12-6,25 мкг/мл.
8.2. Ультраструктурные и функциональные изменения в клетках пастерелл, золотистого стафилококка и эшерихий под влиянием бактерицидных концентраций диоксигена обусловлены воздействием диоксидина на клеточную стенку бактерий, нарушающим ее компактность и повышающим проницаемость, гентамицина на цитоплазматическую мембрану, разрушающим ее, и си-нергидным эффектом обоих веществ на генетический аппарат, проявляющимся нарушением процессов деления бактериальных клеток, синтеза белка микробной клетки, развитием необратимых структурных изменений в цитоплазме и нуклеоиде.
8.3. Формирование устойчивости бактерий к препарату происходит медленно и не достигает высокого уровня: коэффициент резистентности у пасте-релл 4, эшерихий и сальмонелл - 16 и у золотистого стафилококка - 32. Восстановление чувствительности к препарату до исходного уровня происходит у па-стерелл - через 60 пассажей, золотистого стафилококка после 50, эшерихий и сальмонелл - 80 пассажей.
8.4. Диоксиген обладает выраженной лечебной эффективностью при экспериментальных инфекциях белых мышей: пастереллезной и сальмонеллезной - 80,0%, стафилококковой - 93,3% и эшерихиозной - 73,3%, респираторных болезнях свиней бактериальной этиологии 75,0-81,3%. Применение препарата в сочетании с липотоном обеспечивает более высокий терапевтический эффект (84,6%), проявляющийся нормализацией биохимических и иммунологических показателей крови, уменьшением токсического эффекта антимикробного препарата.
9. Комплексный препарат тилоколин, содержащий колистин и тилозин в количественном соотношении (масса %) 5,0:5,0 и полимерную основу, обладает высокой активностью и широким спектром антимикробного действия.
9.1. Минимальные бактериостатические концентрации препарата составили в отношении пастерелл 0,39-0,78 мкг/мл, гемофил - 0,78-1,56, стафилококков - 0,78-1,56, стрептококков - 1,56 -3,12, сальмонелл - 0,39 - 3,12 и эшерихий -0,19 - 3,12 мкг/мл.
9.2. Ультраструкгурные изменения в клетках пастерелл, золотистого стафилококка и эшерихий под влиянием тилоколина обусловлены воздействием колистина на цитоплазматическую мембрану, нарушая ее организацию, целостность и повышая проницаемость для внутри- и внеклеточных компонентов, ти-лозина, блокирующего белковый синтез, и синергидным эффектом одновременно действующих обоих компонентов на разные структуры бактериальных клеток.
9.3. Развитие устойчивости микроорганизмов к тилоколину за счет колистина происходит медленно и не достигает высокого уровня: коэффициент резистентности у пастерелл и золотистого стафилококка равен 8, сальмонелл и эшерихий - 64. Восстановление чувствительности к препарату до исходного уровня происходит у пастерелл через 20, золотистого стафилококка, сальмонелл и эшерихий после 60, 70 и 80 пассажей соответственно.
9.4. Тилоколин обладает выраженной лечебной эффективностью при экспериментальных пастереллезной, сальмонеллезной, стафилококковой - (87,5%) и эшерихиозной (81,3%) инфекциях белых мышей, респираторных болезнях свиней бактериальной этиологии (86,7-91,7%). Применение тилоколина в сочетании с липотоном обеспечивает клиническое выздоровление животных в 92,8% случаев, проявляющееся нормализацией клеточного состава крови, про-теинограммы, общей неспецифической резистентности организма.
10. Неантибиотический препарат цидисепт-о, содержащий в своем составе 0,2% альдегида циминаля, обладает относительно высокой антимикробной активностью.
10.1. Минимальная ингибирующая концентрация препарата в отношении пастерелл и гемофил составила 6,25-12,5 мкг/мл, стафилококков и стрептококков - 3,12- 6,25, эшерихий и сальмонелл - 12,5-25,0 мкг/мл.
10.2. Изменения в ультраструктуре пастерелл, золотистого стафилококка и эшерихий под влиянием бактерицидных концентраций цидисепта-о обусловлены действующим веществом препарата циминаля, который за счет окислительного воздействия приводит к выраженным повреждениям всех компонентов бактерий, подавляя процессы деления клеток и вызывая их гибель.
10.3. Формирование устойчивости бактерий к цидисепту-о происходит медленно и не достигает высокого уровня: коэффициент резистентности у пастерелл, золотистого стафилококка и эшерихий - 8, сальмонелл -4. Восстановление чувствительности сальмонелл и золотистого стафилококка происходит через 40 и 50, пастерелл и эшерихий после 70 пассажей соответственно.
10.4. Лечебная эффективность цидисепта-о при экспериментальных инфекциях белых мышей составила: пастереллезной 71,4%, сальмонеллезной и стафилококковой 78,5% и эшерихиозной 85,7%, при респираторных болезнях поросят бактериальной этиологии - 83,3- 85,7%. Применение препарата в сочетании с липотоном обеспечивает более высокий терапевтический эффект (91,7%), сопровождающийся выраженной тенденцией к нормализации морфологических и биохимических показателей крови, гуморальных и клеточных факторов неспецифической защиты.
11. Специфическая профилактика респираторных болезней свиней обеспечивает высокий эффект при использовании биопрепаратов, антигены которых соответствуют таковым ведущих возбудителей инфекций. Применение ан-
тимикробных средств в критический период выращивания поросят (перевод на доращивание) на фоне специфической профилактики инфекций, вызываемых первичными (основными) возбудителями, снижает заболеваемость и повышает сохранность животных. Химиопрофилактика по эффективности уступает специфической профилактике.
Практические предложения
Результаты научных исследований вошли в нормативную документацию (НД), утвержденную Россельхознадзором МСХ РФ:
1. Препарат диоксинор - АФ (СТО 10590965 - 002 - 2006, инструкция № ПВР - 2 - 1.7/01921 от 18. 04. 2007г.);
2. Препарат диоксиген - АФ (СТО 1059096 - 0009 -2008, инструкция № ПВР-2- 1.8/02137 от22. 05.2008г.);
3. Препарат тилоколин - АФ (СТО 10590965 - 0030 - 2009, инструкция № ПВР - 2 - 6.9 / 02443 от 20. 04. 2009г.).
Разработаны и рекомендованы к изданию секцией «Патология, фармакология и терапия» Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии:
- «Методические рекомендации по оптимизации формирования коло-стрального иммунитета у новорожденных животных» (протокол № 3 от 16 октября 2009 года),
- «Методическое пособие по диагностике, профилактике и терапии респираторных болезней поросят» (протокол № 3 от 26 октября 2010 года).
Список опубликованных работ по теме диссертации.
1. Этиологическая структура заразных болезней телят и поросят в Центральном регионе России / А.Г.Шахов, А.И. Ануфриев, С.И. Першина, Л.Ю. Сашнина и др. // Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях. Материалы междунар. науч.-практич. конференции. - Воронеж.- 2000,- С.239-241.
2. Комплексная экологически безопасная система ветеринарной защиты здоровья животных. Шахов А.Г., B.C. Бузлама, В.Т. Самохин и др. М.:ФГНУ «Росинформагротех». 2000.- С. 297
3.Антимикробная активность диоксинора/А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, А.И. Никулин и др.//Первый съезд ветеринарных фармакологов России: Материалы съезда. - Воронеж. - 2007. - С. 661 - 663.
4. Антимикробная активность комплексного препарата диоксиген / А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, Г.А. Востроилова и др.//Первый съезд ветеринарных фармакологов России: Материалы съезда. - Воронеж. - 2007. - С. 658 - 660.
5.Лечебная эффективность диоксинора при респираторной патологии по-росят/А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, А.И. Никулин и др.//Первый съезд ветеринарных фармакологов России. Материалы съезда. - Воронеж. - 2007. - С. 663 -666.
б.Этиологическая структура массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят в крупных специализированных свиноводческих хозяйствах/ А.Г. Шахов, Ю.Н. Бригадиров, Л.Ю. Сашнина, М.И. Лебе-дев//Проблемы инфекционной патологии свиней. Материалы секции 15-й Московского международного Ветеринарного конгресса по болезням мелких домашних животных, 21-23 сентября 2007.- Москва, 2007.- С. 51-55.
7. Этиологическая структура массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят в крупных специализированных хозяйствах / А.Г. Шахов, Ю.Н. Бригадиров, Л.Ю. Сашнина, М.И. Лебедев //Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Материалы междунар. науч.-практич. конференции. - Воронеж: изд-во «Истоки», 2008. - С. 275 - 279.
8.*Этиология респираторных болезней поросят в промышленных свиноводческих хозяйствах и меры их профилактики /А. Шахов, Л. Сашнина, М. Лебедев и др.// Свиноводство. - 2008. - №5. - С. 26 - 28.
9. Иммунный статус поросят при респираторной патологии после лечения диоксинором/А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, А.И. Никулин, М.И. Лебедев // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Материалы междунар. науч.-практич. конференции. - Воронеж: изд-во «Истоки», 2008. - С. 233 - 236.
10.Специфическая профилактика респираторных болезней свиней бактериальной этиологии/ А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, М.И. Лебедев, А.И. Никулин// Ветеринарная практика - 2008.- №3 (42).- С.52-55.
11. Косенко Ю.Н. Антибиотикочувствительность возбудителей кишечных инфекций сельскохозяйственных животных / Ю.Н. Косенко, Г.А. Востроилова, Л.Ю.Сашнина //Актуальные проблемы ветеринарной медицины. Материалы междунар. науч.-практич. конференции, посвященной 125-летию ветеринарии Курской области.- Курск.-2008,- С.206-208.
12.*Влияние состояния иммунного статуса на возникновение и развитие респираторных болезней свиней / А.Г. Шахов, М.И. Редкий, Ю.Н. Масьянов, Л.Ю. Сашнина и др.// Доклады РАСХН. - 2009.-№4.-С. 55-58.
13.*Роль иммунного и метаболического статуса в возникновении желудочно-кишечных заболеваний поросят/ Ю.Н.Бригадиров, Б.Т.Артемов, П.Е.Лаврищев, А.Г.Шахов, М.И.Редкий, Ю.Н. Масьянов, Л.Ю. Сашнина, В.И. Шушлебин // Вестник РАСХН,- 2009.-№4.-С.65-67.
14. Сашнина Л.Ю. Антимикробная активность цидисепта-о/Л.Ю. Сашнина, A.C. Стребков, Ю.Н. Косенко // Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных. Материалы междунар. науч.-практич. конференции: посвященной 100-летию со дня рождения профессора В.А. Акатова,- Воронеж.-2009.-С.329-331.
15. Сашнина Л.Ю. Эффективность цидисепта-о при экспериментальных инфекциях белых мышей /Л.Ю. Сашнина, A.C. Стребков, Ю.Н. Косенко // Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных. Материалы междунар. науч.-практич. конференции: посвященной 100-летию со дня рождения профессора В.А. Акатова,- Воронеж.-2009.-С.331-334.
16. Сашнина Л.Ю.Терапевтическая эффективность цидисепта-о при респираторных болезнях поросят бактериальной этиологии/Л.Ю. Сашнина, М.И. Лебедев, A.C. Стребков // Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных. Материалы междунар. науч.-практич. конференции: посвященной 100-летию со дня рождения профессора В.А. Акатова,- Воронеж.-2009.-С.327-329.
17. Методические рекомендации по оптимизации формирования коло-стрального иммунитета у новорожденных животных.- Воронеж.-2009.- 42с.
18. Методическое пособие по диагностике, профилактике и терапии респираторных болезней поросят.- Воронеж,- 2010,- 62с.
19.*Роль метаболического статуса в возникновении и развитии респираторных заболеваний поросят / А.Г.Шахов, М.И.Рецкий, Л.Ю. Сашнина и др.// Вестник РАСХН,- 2010.-№2.-С.59-62.
20. Этиологическая структура массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят в крупных специализированных хозяйствах/ А.Г.
Шахов, Ю.Н. Бригадиров, Л.Ю. Сашнина, М.И. Лебедев, //Практик. - 2010. -№1.-С.42-45.
21. Сашнина Л.Ю. Эффективность тилоколина при экспериментальных инфекциях белых мышей/ Л.Ю. Сашнина, C.B. Сычев// Научное обеспечение агропромышленного производства. Материалы междунар. науч.-практич. конференции. - Курск,- 2010.- С.60-62.
22. Сашнина Л.Ю. Терапевтическая эффективность тилоколина при респираторных болезнях поросят бактериальной этиологии/ Л.Ю. Сашнина, C.B. Сычев//Научное обеспечение агропромышленного производства. Материалы междунар. науч.-практич. конференции. - Курск,- 2010.- С.67-69.
23. Сашнина Л.Ю. Антимикробная активность тилоколина/ Л.Ю. Сашнина, C.B. Сычев//Научное обеспечение агропромышленного производства. Материалы междунар. науч.-практич. конференции. - Курск,- 2010,- С.69-71.
24. Сашнина Л.Ю. Адаптация микроорганизмов к цидисепту-о/ Л.Ю. Сашнина, С.А. Стребков//Актуальные проблемы производства свинины в Российской Федерации. Материалы девятнадцатого заседания межвузовского координационного совета по свиноводству и международной науч.-практ. конференции.- пос. Персиановский,- 2010,- С.170-172.
25. Сашнина Л.Ю.Формирование устойчивости микроорганизмов к тило-колину/ Л.Ю. Сашнина, C.B. Сычев//Актуальные проблемы производства свинины в Российской Федерации. Материалы девятнадцатого заседания межвузовского координационного совета по свиноводству и международной науч.-практ. конференции,- пос. Персиановский.- 2010.- С. 172-174.
26.*Investigation of the Resistance of Bacterial Pathogens of Gastrointestinal and Respiratory Diseases of Piglets to Antimicrobial drugs / A.G. Shakhov, L.Yu.Sashnina, M.I.Lebedev and E.V. Lebedeva // Russian Agricultural Sciences.-2011, Vol.37, No. 2. pp. 179-181. (Исследования резистентности бактериальных возбудителей желудочно-кишечных и респираторных болезней поросят к антимикробным препаратам / А. Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, М.И. Лебедев, Е.В. Лебедева // Доклады РАСХН.- 2011.- №2.-С.53-55).
27.* Антимикробная активность тилоколина/ Г. А. Востроилова, В.И.Беляев, Л.Ю. Сашнина и др.// Ветеринария.-2011 ,-№4.-С.50-53.
28.*Влияние бактерицидных концентраций тилоколина и цидисепта-о на ультраструктуру иастерелл/ А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина и др.// Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии.- 2011 .-№1.- С.38-42.
29.*Shakhov A.G.YItrastructural Changes in Staphylococcus aureus Cell under the Effect of Bactericidal Concentrations of Tylocolin and Cidycept-O / A.G. Shakhov, L.Yu.Sashnina, D.V. Fedosov et al.// Russian Agricultural Sciences.- 2011, Vol.37, No. 6. pp. 524-528. (Шахов А.Г. Ультраструктурные изменения в клетках золотистого стафилококка под воздействием бактерицидных концентраций тилоколина и цидисепта-о/ А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, Д.В. Федосов и др.//Доклады РАСХН,- 2011.- №6.-С.51-55).
30.*Шахов А.Г. Применение липотона для повышения терапевтической эффективности диоксигена при респираторных болезнях поросят/ А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, Д.В. Федосов//Ветеринарный врач- 2011 .-№6.-С.14-18.
31.*Лечебная эффективность цидисепта-о в сочетании с липотоном при респираторных болезнях поросят/ А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, A.C. Стребков и др.//Вестник РАСХН,- 2012.- №2,- С.69-12.
32.* Сашнина Л.Ю. Развитие устойчивости и восстановление чувствительности бактерий к комплексному препарату диоксиген/ Л.Ю. Сашнина// Ветеринарная патология.-2012.-Т. 40 вып. 2.-С.59-63.
33.*Терапевтическая эффективность тилоколина в сочетании с липотоном при респираторных болезнях поросят /А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, М.И. Рецкий и др. //Актуальные вопросы ветеринарной биологии .- 2012.-№1(13).-С.58-66.
34.*А.Г. Шахов Повышение терапевтической эффективности диоксинора при респираторных болезнях поросят при использовании в сочетании его с липотоном/ А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, Д.В. Федосов//Достижения науки и техники АПК - 2012.-№1.-С.37-40.
35.* Сашнина Л.Ю. Формирование резистентности бактерий к комплексному антимикробному препарату диоксинор/ Л.Ю. Сашнина// Достижения науки и техники АПК - 2012.-№1.-С.54-57.
36. Шахов А.Г. Морфофункциональные изменения у эшерихий, пастерелл и золотистого стафилококка под влиянием бактерицидных концентраций комплексного антимикробного препарата диоксиген/ А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, Д.В. Федосов//Ветеринария сегодня- 2012.-№1(4).-С.18-23.
37.The Effect of Antimicrobial Drugs Tylocolinum, Tetragold and Cidisept-o on Escherichia coli Ultrastructure/ A.G. Shakhov, D.V. Fedosov, L.Y. Sashnina & O.V. Kazimirov// Sustainable Agriculture Research.- 2013,- Vol.2.- No.3.- P.65-75.
38.* Шахов А.Г. Изменения ультраструктуры золотистого стафилококка, эшерихий и иастерелл под воздействием антимикробного препарата диокси-нор/ А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, Д.В. Федосов// Вестник РАСХН - 2013.-№3.-С.65-69.
39. Патент 2351343 С1 Россия, МПК51 А61К 31/7076, А61К 31/498 Способ лечения сальмонеллеза у молодняка сельскохозяйственных животных/ Шабу-нин С.В., Востроилова Г.А., Ческидова Л.В., Шахов А.Г., Бригадиров Ю.Н., Сашнина Л.Ю., Михайлов А.А., Лаврищев П.Е.; ГНУ ВНИВИПФиТ РАСХН. -Заявл. 25.10.07; опубл. 10.04.09. - Бюл. №10,- 8с.
40. Патент 2367414 С1 Россия, МПК51 А61К 31/100, А61К 31/7036 Способ лечения респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных / Шабунин С.В., Востроилова Г.А., Ческидова Л.В., Шахов А.Г., Бригадиров Ю.Н., Сашнина Л.Ю., Михайлов А.А., Лаврищев П.Е., Иванов М.А.; ГНУ ВНИВИПФиТ РАСХН. - Заявл. 25.05.08; опубл. 20.09.09,- Бюл. №26,- 9с.
41. Патент 2420271С1 Россия, МПК51 А61К 31/00, А61Р 11/00 Способ лечения респираторных болезней молодняка сельскохозяйственных животных / Шабунин С.В., Шахов А.Г., Востроилова Г.А., Сашнина Л.Ю., Косенко Ю.М., Стребков А.С.; ГНУ ВНИВИПФиТ РАСХН. - Заявл. 12.11.09; опубл. 10.06.11г.-Бюл. №16.-8с.
ИЗДАТЕЛЬСТВО «ИСТОКИ»
394026, г. Воронеж, ул. Солнечная, 33 Телефон/факс (473) 239-55-54 E-mail: istoki-vrn@mail.ru
Подписано в печать 14.06.2013 г. Формат 60x80 1/16. Гарнитура «Times New Roman» Печать офсетная. Бумага офсетная. Объем 2,0 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 498.
Отпечатано в соответствии с качеством предоставленного орипшал-макета.
ТИПОГРАФИЯ «ИСТОКИ» 394026, г. Воронеж, ул. Солнечная, 33 Телефон/факс (473) 239-55-56
-
Сашнина, Лариса Юрьевна
-
доктора ветеринарных наук
-
Воронеж, 2013
-
ВАК 06.02.02
- Комплексная профилактика респираторных болезней свиней с применением вакцины, аллогенной иммунной сыворотки и антибактериальных препаратов
- Роль гемофилезного полисерозита в респираторной патологии свиней
- Эпизоотологический мониторинг и лечебно-реабилитационные мероприятия при аскариозе свиней
- Эпизоотологический надзор при нематодозах свиней в промышленном свиноводстве
- Антимикробная активность и лечебная эффективность тилоколина при бактериальных инфекциях органов дыхания поросят
